CN1674918A

CN1674918A - 利用脱氢表雄酮甾体及抗毒蕈碱药物治疗呼吸道疾病及肺病的组合物、制剂和试剂盒

Info

Publication number: CN1674918A
Application number: CNA038193000A
Authority: CN
Inventors: J·W·奈斯; C·B·罗宾森
Original assignee: Epigenesis Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Epigenesis Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2002-06-12
Filing date: 2003-06-12
Publication date: 2005-09-28
Also published as: JP2006504666A; IL165093A0; WO2004014293A3; EP1511500A2; MXPA04012410A; WO2004014293A2; EP1511500A4; CA2487399A1; AU2003276837A2; KR20060011783A; BR0311747A; AU2003276837A1; AU2003276837B2; CN101700247A

Abstract

本发明涉及一种药用或兽用组合物，该组合物包含非糖皮质激素类固醇和/或其盐，以及抗毒蕈碱(抗胆碱能)药物和/或其药用或兽用盐。该组合物以各种制剂以及试剂盒的形式提供。本发明的产物可用于预防和治疗各种呼吸道疾病、肺病及恶性肿瘤。

Description

利用脱氢表雄酮甾体及抗毒蕈碱药物治疗呼吸道疾病及肺病的组合物、制剂和试剂盒

发明背景

其他相关申请

本申请是PCT申请No.PCT/US02/12552(EPI-0449)的后续申请，题目为“利用脱氢表雄酮甾体和/或泛醌及支气管扩张药物治疗呼吸道及肺病的组合物、制剂和试剂盒”，申请日为2002年8月22日，该申请的基础是Jonathan W.Nyce.的美国临时申请60\286,139，申请日是2001年8月24日。

发明领域

本发明涉及含有化学式(I)、(II)、(III)和(IV)的脱氢表雄酮和/或其盐以及抗毒蕈碱受体药物和/或其盐的组合物和制剂，该组合物和制剂还可以含有其他生物活性剂和制剂成分。该产物通常用于治疗呼吸道和肺病，以及其他疾病如COPD、气喘、变应性鼻炎等。

背景说明

呼吸道疾病在普通人群中是极其常见的，并且在某些人种中更多，如非洲裔美国人。在某些情况下伴随感染，这就使肺的状况更加恶化。某些疾病如慢性梗阻性肺病(COPD)、哮喘、变应性鼻炎以及急性呼吸道窘迫综合征(ARDS)，包括孕妇和早产儿的RDS在工业化国家中是很常见的，单单在美国就需要极高的医疗费用。最近这些疾病的传播率、发病率及致死率以令人担忧的速度增加。尽管如此，对这些疾病发病原因的了解还很少。COPD的特征是气流阻塞，一般是由慢性支气管炎、肺气肿或二者共同引起的。肺气肿的特征是远至终末细支气管的气腔异常不可逆扩张，同时伴随气腔壁破坏，但是无明显的纤维化。慢性支气管炎的特征是至少在连续的两年内每年至少有3个月出现慢性咳嗽、痰液增多，同时排除其他引起咳嗽的原因。COPD主要影响中老年人，在全球来说都是发病率和死亡率的主要原因之一。在美国大约有1千4百万人受其影响，是引起死亡的第四位疾病，自从1982年以来其发病率和死亡率已经上升了41％，1966年到1985年之间年龄校正死亡率上升71％。而在同一时期其他原因引起的年龄校正死亡率却是下降的(22％)，心血管疾病引起的死亡率下降45％。但是COPD是可以预防的，假设其主要的发病原因是吸烟。这种疾病在一生都不吸烟的人群中是很少见的。其他的可能因素包括气管的过度反应或超敏反应、周围的空气污染以及变态反应。COPD的气流阻塞在持续吸烟的人群中通常是进行性加重的，结果导致早期失能，寿命缩短。停止吸烟可反转肺功能的下降，使其恢复到不吸烟者的水平。许多COPD患者在其剩余的岁月中长期服用药物治疗，药物的剂量不断增加，并且在病情恶化时服用药物更多。现有的COPD治疗剂可以达到短期效果而不是长期效果，可以阻止疾病的进展，例如服用抗胆碱能药物、β2肾上腺能拮抗剂以及口服的类固醇药物。但是抗胆碱能药物和β2肾上腺素能激动剂都不是对所有的受试者都有效，二者联合使用时也不是。茶碱类药物的副作用及需要不断的监测限制了这类药物的应用。现在没有证据表明抗胆碱能药物可以阻止肺功能的下降，黏液溶解剂可以减缓恶化的速度，但是却可能对肺功能产生毒性效应。β2肾上腺素能激动剂、口服皮质甾体及抗生素的长期毒性还没有评价，到目前为止还没有发现其他的药物可以影响疾病的进展或存活时间。因此，目前可用的减缓COPD症状、防止恶化、保持良好肺功能以及改善受试者生活质量的药物还很少。

哮喘的特征是千变万化的，但大多数都有不可逆的气道阻塞症状。这一过程与肺部感染有关，在某些情况下与肺部的变态反应也有关系。许多病人会出现急性发作，被称为“哮喘发作”，而其他的病人会遭受慢性疾病的折磨。哮喘在某些情况下可能会因为吸入超敏物质的抗原而发作。这种疾病一般被称为“外源性哮喘”。其他哮喘对疾病具有内在的易感性，因此被称为“内源性哮喘”，包括不同原因引起的哮喘，如腺苷受体介导的哮喘、Ig-E介导的免疫反应引起的变态反应性哮喘等。所有的哮喘都有下列一组症状：支气管收缩、肺部感染和/或肺表面活性物质减少。支气管扩张剂和抗炎药物是目前所常用的哮喘治疗剂。皮质甾体是最常见的抗炎药物，由于具有很大的副作用，现在一般不再用于临床。更重要的是现在可用的大多数哮喘治疗剂对一小部分病人几乎没有效果。

急性呼吸道窘迫综合征(ARDS)或强直肺、休克肺、泵肺和充血性肺膨胀不全被认为是由于肺内液体积聚进而导致肺变硬而引起的。这种疾病一般是由于各种原因导致肺损伤而在48小时内形成的，如创伤、头部损伤、休克、败血症、重复输血、药物疗法、肺栓塞、重症肺炎、烟雾吸入、放射、高原、近乎溺死等。

一般来说，ARDS是作为急症发生的，可能由其他直接或间接导致血管向肺内渗漏液体的疾病而引起。ARDS时肺的扩张能力急遽下降，对肺的气囊、基质或内皮造成严重损伤。ARDS最常见的症状是吃力地快速呼吸、鼻翼煽动、组织缺氧导致的皮肤、嘴唇和指甲发绀、呼吸困难、焦虑、紧张、不安、关节强直、疼痛和瞬间的呼吸停滞。在某些情况下ARDS与其他疾病有关，如急性骨髓性白血病、用阿糖胞苷治疗后发生的急性肿瘤溶解综合征(ATLS)。但是，ARDS通常与创伤性损伤、重症血液感染如败血病或其他系统疾病、高剂量的放射治疗、化疗、导致多器官衰竭的炎症反应以及许多濒临死亡的情况有关。早产儿的肺发育不完全，因而胎儿在发育过程中处于缺氧状态。另外，肺表面活性物质是维持正常呼吸的一种关键物质，在生命的早期阶段分泌的量还不足。但是，早产儿通常过量表达腺苷A₁受体和/或低表达腺苷A_2a受体，因此对呼吸问题十分敏感，包括支气管收缩、肺感染和ARDS等。早产儿发生呼吸道窘迫综合征(RDS)时就是个非常严重的问题。发生RDS的早产儿现在一般用通气、输氧和给予表面活性剂治疗。发生RDS的早产儿即使存活下来通常也会有支气管发育不良(BPD)，也叫早产儿慢性肺病，常常是致命的。

尽管常常被误诊，但是有五分之一的美国人患有变应性鼻炎，各个年龄段都会发生，每年的医疗费用估计需要40到100亿美元。症状包括鼻充血、流涕、打喷嚏、鼻痒，以及眼睛发痒、流泪及红肿。变应性鼻炎受试者经过一段时间以后常常会发生鼻窦炎、中耳炎伴积液及鼻息肉病，还可能使哮喘发作。鼻炎还常常导致情绪和认知障碍、疲劳及易激惹。变应性鼻炎一般是由于IgE与鼻内的变态反应原结合产生化学介质，诱导细胞反应和神经刺激，引发炎症反应。肥大细胞脱粒释放出的活性介质与各种细胞、血管和粘液腺相互作用，从而导致典型的鼻炎症状。鼻内的大多数早期和晚期反应都发生在变态反应原致敏后。但是晚期反应也见于慢性变应性鼻炎，伴随粘液分泌过多和鼻腔堵塞。重复接触可导致针对一种或多种变态反应原的过敏反应，并且可以激发对非特异性刺激的过敏反应，如冷空气和刺激气味。非变应性鼻炎也可被感染所诱导，如病毒感染，一般发生在阿司匹林依赖的病人身上，也可能因怀孕、甲状腺功能低下以及接触职业因素或药物而发病。NARES综合征是一种与鼻内分泌物的嗜酸性粒细胞有关的非变应性鼻炎，好发于中年人，伴随味觉的丢失。通常建议用生理盐水改善鼻塞、喷嚏及粘膜刺激或干燥症状，减轻粘膜萎缩，去除形成外皮的粘膜或增厚的粘膜，而且无任何副作用，尤其对孕妇来说可以作为首选的方法。如果在鼻内滴皮质甾体前立即使用，生理盐水还有助于防止局部刺激。抗组胺药物通常作为首选治疗方案。特菲那定和阿司咪唑是两种非镇定类抗组胺药物，但是这两种药物可能导致室性心律失常，即Torsades de Points，通常与其他的药物如酮康唑和红霉素相互作用或者引发心脏问题。到面前为止，另一种非镇定类抗组胺药，氯雷他定，和西替利嗪还没有发现与严重的心血管副作用有关，西替利嗪最常见的副作用是嗜睡。例如，克敏能(Claritin)可有效减轻一小部分病人的喷嚏、流涕及鼻、眼、腭的骚痒症状，尽管它还没被批准可用于这些适应症或哮喘。抗组胺药通常与解充血药联合使用以减轻鼻塞症状。拟交感神经药物可作为血管收缩剂和解充血药使用，三种最常用的解充血药是伪麻黄碱、N-去甲麻黄碱和苯福林。但是这些药物可导致血压升高、心悸、心悸亢进、烦躁、失眠和头疼。抗胆碱能药物，如色甘酸钠(Cromolyn)可用于治疗有明显鼻漏的病人或某些特殊的病例，如“味觉鼻炎”，后者常常与摄入辛辣的食物有关，这种药物已被用于治疗普通感冒。局部或鼻内喷雾皮质甾体，如二丙酸倍氯米松(Vancenase)有时也可有效治疗鼻炎，特别是治疗鼻塞、喷嚏和流涕症状。局部使用类固醇药物一般要比用色甘酸钠有效，尤其是治疗NARES时，但是其副作用却限制了其应用，因此只临时用于那些有严重症状的受试者。免疫治疗虽然能取得明显的疗效，特别是利用药物产生封闭抗体，改变细胞的组胺释放，降低IgE时，但是免疫治疗费用高，使用不方便。现在可用的治疗方法，如普萘洛尔、异博定和腺苷也有助于减轻症状。异博定是最常用的，但是它也有严重的缺陷，因为它可引起或恶化全身的低血压、导致充血性心力衰竭、迟缓性心律失常和心室纤颤。另外，异博定易于透过胎盘，可引起胎儿心博徐缓、心脏传导阻滞、收缩抑制和低血压。腺苷与异博定相比有几个优点，如起效快、副作用消失快、理论上的安全性以及可能无胎盘透过，但是也不能给予所有的受试者。肺纤维化、间质性肺病(ILD)或间质性肺纤维化包括超过130种的慢性肺病，通过损伤肺组织、在肺泡壁产生炎症、肺间质(肺泡之间的组织)结瘢或纤维化，使肺硬化而损伤肺，因此而得名。发作期呼吸停止是这类疾病的第一症状，也可能出现干咳。通常症状和X光透视都无法准确区分不同类型的肺纤维化。某些肺纤维化的病人是知道发病原因的，而某些病人的病因是未知的或特发的。这种疾病的进程一般无法预测。其进展包括肺组织增厚和硬化、炎症和呼吸困难。某些受试者需要吸氧作为治疗的一部分。

癌症是我们这个时代最常见的和最可怕的疾病之一。通常是不同上皮来源的正常细胞癌变的结果。癌症和其他类型恶性肿瘤的两个最主要损伤特征是不可控生长和向宿主远端位置的转移，特别是人类宿主。而这些远端转移往往对宿主造成致命的后果，因为原发癌通常可以通过手术切除。目前癌症的治疗主要依赖于手术、放疗和系统治疗，如化疗、不同的免疫刺激药物和方法、温热疗法和全身放射性同位素标记的单克隆抗体、免疫毒素和化疗药物治疗。

类固醇激素是对细胞分化、内环境稳定和形态发生具有重要作用的化学信息分子。这些结构不同的分子具有相似的作用模式。效应分子透过细胞膜与靶细胞核上的特异性高亲和力受体结合。效应分子与受体的这种相互作用可使受体活化，然后与靶基因的调节区相互作用，调节特异基因簇的转录速度。配基一旦结合，受体就能产生快速而持久的反应。类固醇激素通过两种基本的机制发挥作用：基因组机制和非基因组机制。经典的基因组机制是由特异性的细胞内受体介导的，而非基因组机制的初级靶位是细胞膜。许多临床症状似乎是通过非基因组途径介导的。另外，类固醇激素和其他因子的细胞膜效应可作用于细胞内的受体系统，诱导或抑制类固醇和受体特异性的基因组效应。这些信号通路可在接受某种药物治疗的病人体内产生意外的激素或抗激素效应。类固醇激素受体是一个大的核转录因子家族的成员，可通过与同源的类固醇配基、特异性DNA增强子序列(类固醇反应元件)以及基础转录结构结合来调节基因的表达。不论激素处于何种状态，类固醇激素受体大都位于核内，虽然也有相当数量的未结合配基的受体存在于靶细胞的胞浆内。大多数类固醇激素受体是磷蛋白，配基结合后可进一步被磷酸化。磷酸化在受体活动中的作用是复杂的，不同的类固醇激素受体具有不同的作用。但是磷酸化和/或去磷酸化被认为是调节类固醇激素受体转录活性的关键事件。类固醇激素受体的活性受细胞核内受体数目的影响，这种活性是通过受体转录和翻译的速率以及受体的蛋白水解来调节的。受体的调节分为自身调节和外源调节。某些类固醇激素受体可与特异性蛋白酶抑制因子结合，具有蛋白酶活性。某些类固醇激素受体有两种或多种亚型，不同的亚型对于转录有不同的效应。受体亚型是同一基因的不同翻译或转录产物。孕酮受体的A亚型是PR亚型B的截短形式，二者来自同一基因，但是它不仅能抑制增强PR-B活性的基因，也能抑制其他类固醇受体的基因。受体在激素结合前作为一部分与其他多个伴随组分组成复合体，伴随组分的作用在于维持受体处于类固醇激素结合状态。激素结合以后，复合体解离，受体与染色质上的类固醇反应元件结合。激素对基因表达的调节包括DNA结合受体与其他序列特异性转录因子以及普通转录因子的相互作用，部分是由共激活因子和共抑制因子介导的。特定启动子/增强子区上反式调节元件的特异性排列以及核小体内DNA序列的组织结构决定了受体相互作用的网络。最终的结果是转录被诱导还是被抑制取决于这些相互作用的性质。

脱氢表雄酮(DHEA)是一种天然的类固醇激素，是由肾上腺皮质分泌的，具有明显的化学保护特性。流行病学研究表明DHEA内源性表达水平低可导致发生某些种类肿瘤的危险性增加，如绝经后妇女的乳腺癌和男女的膀胱癌。DHEA和DHEA类似物如DHEA-S抑制肿瘤发生的能力被认为是来自于其对葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PDH)活性的抑制。DHEA、3β-羟基雄-5-烯-17-酮或脱氢表雄甾酮是一种17-酮类固醇，在量上来说是哺乳动物体内的一种主要的肾上腺皮质激素。在临床上，DHEA已被系统地或局部地用于治疗干癣、痛风和高脂血症，以及给予冠状动脉栓塞后的病人。已有证据表明DHEA还具有增强抗肿瘤的效应，欧洲已在临床上与雌激素联合使用以治疗绝经期症状和狂躁悒郁症、精神分裂症和阿耳茨海默病。临床上已经用40mg/kg/天的DHEA治疗晚期癌症和多发性硬化症。DHEA的副作用有中度的雄激素效应、多毛症以及性欲增强，但是可以通过监测剂量和/或利用其类似物来克服。DHEA可皮下注射给药，也可口服给药，以及作为感染治疗的补充。DHEA也是增强哺乳动物免疫反应的多种药物的代谢前体。DHEA具有双向调节性：当转化成雄烯二醇、雄-5-烯-3β，17β-二醇(βAED)、雄烯三醇或雄-5-烯-3β，7β，17β-三醇(βAET)时可以作为免疫调节剂。由于其在转化成βAED或βAET之前对细胞增殖具有淋巴细胞毒性效应和抑制效应，因此被认为其超级免疫增强活性来自于它可以转化成更多的代谢产物。在三种呼吸道疾病动物(小鼠、兔、非人灵长类动物)模型内硫酸脱氢表雄酮(DHEA-S)已被证明可有效减轻嗜酸性粒细胞增多症和中性粒细胞增多症，改善其顺应性和耐受性。有试验证明慢性持续性哮喘主要是由中性粒细胞引起的疾病(Gibson等，(20--？))，COPD早已被证实与中性粒细胞有关，变应性鼻炎受试者体内也可观察到中性粒细胞的增多。但是某些接受药理适宜剂量的肾上腺皮质激素的受试者却有传染性疾病增加的迹象。G6PDH是己糖环腺苷一磷酸通路的限速酶，是细胞内核糖-5-磷酸和NADPH的主要来源。核糖-5-磷酸是合成RNA和DNA所需要的核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸合成的必须底物。NADPH也是核酸生物合成和羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG CoA还原酶)合成的辅助因子。HMG CoA还原酶是比较特殊的，1mol的产物甲醛戊酸产生需要2mol的NADPH。因此HMG CoA还原酶对DHEA介导的NADPH耗竭是十分敏感的，DHEA处理的细胞内甲醛戊酸的含量迅速降低。甲醛戊酸是DNA合成所必须的，它可以HMG CoA类似的方式将人源细胞阻滞在G1期。

由于G6PDH产生的甲羟戊酸作用于某些细胞过程如蛋白的异戊二烯化和多萜醇的合成，是糖蛋白生物合成的前体，因此DHEA可通过耗竭甲羟戊酸、进而抑制蛋白的异戊二烯化和糖蛋白的合成来抑制肿瘤的发生。甲醛戊酸是胆固醇合成的中心前体，也是各种非固醇化合物合成的中心前体，参与蛋白的翻译后修饰过程，如焦磷酸法尼酯和牦牛儿酰焦磷酸；多萜醇是糖蛋白合成所必须的，糖蛋白参与细胞-细胞通讯和细胞结构的组成。

吸入性抗毒蕈碱药物根据说明书的建议可选择作为治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的药物。在一项长期临床研究中，异丙托溴铵不仅可以松弛呼吸道平滑肌，还有其他重要的效应，如减轻COPD的发作程度。在一个III期临床试验中，新一代的抗毒蕈碱药物噻托溴铵，每日吸入一次可保持超过24小时的稳定的支气管舒张，治疗的持续期超过1年。另外，与安慰剂相比，甚至与异丙托溴铵相比，噻托溴铵都可以明显改善呼吸困难、减轻COPD的发作程度、减少因哮喘发作而住院的次数、缩短住院的时间以及改善与健康有关的生活质量。慢性效应如住院率的降低通常有利于抗炎作用而不是有症状的支气管扩张。呼吸道24小时的明显稳定可避免呼吸道出现偶尔的闭合波动，以免随后还需要从新使其开放，这些可以解释噻托溴铵的治疗效果。前炎症胆碱能药物的抗毒蕈碱效应的抑制作用也可能发生，即抑制上皮细胞释放5-HETE、抑制肺泡巨噬细胞释放具有趋化活性的中性粒细胞和嗜酸性红细胞。抗毒蕈碱药物对于COPD的治疗具有实质的价值。

现在已有多种方法可用于呼吸道疾病的治疗，虽然这些方法都有缺陷。其中有糖皮质激素、白三烯抑制剂、抗胆碱能药物、抗组胺药、吸氧治疗、茶碱以及粘液溶解剂。尽管糖皮质激素的副作用已有许多报道，但它是使用最广泛的。目前可用的药物都有一部分病例无效，并且在治疗哮喘时也不是全部有效。现在还没有一种治疗方法可以治疗多种其他呼吸道疾病。茶碱是治疗哮喘的一种重要药物，是一种已知的腺苷受体拮抗剂。也有报道表明选择性的腺苷A1受体拮抗剂8-环戊基-1，3-二丙基黄嘌呤(DPCPX)和反义寡核苷酸可抑制变态反应兔体内腺苷介导的支气管收缩、炎症和支气管超敏反应。糖皮质激素的例子是氯地米松和皮质激素21-磺基丙酸盐。支气管扩张剂的例子是一种比较老的β2肾上腺素能激动剂如沙丁胺醇，以及一种比较新的β2肾上腺素能激动剂如沙美特罗。一般来说，当每日吸入或口服糖皮质激素时，确实可以减轻炎症反应。另外，β2肾上腺素能激动剂也可减轻支气管收缩症状。一般来说糖皮质激素对急性发作是无效的，而支气管扩张剂可用于处理急性事件，如哮喘的急性发作。现在来说，多数哮喘病人需要每日使用两类药物，糖皮质激素用于控制肺部感染，支气管扩张剂用于减轻支气管收缩症状。最近，据说利用一种糖皮质激素丙酸氟替卡松联合β2肾上腺素能激动剂制成一种制剂可有效治疗哮喘。但是，糖皮质激素具有很大的副作用，尤其是长期使用时，尽管它有一定的疗效，因此长期使用是不合适的，尤其对于儿童来说。

现在显然迫切需要找到一种新的有效的方法来治疗目前无法治疗的呼吸道疾病、肺病和癌症或者至少有效并且无目前药物的副作用的方法。这种疾病影响呼吸道，特别是肺和肺通道，包括呼吸困难、支气管收缩、肺部感染和变态反应、表面活性物质耗竭或低分泌、COPD、哮喘、变应性鼻炎等。另外也迫切需要找到一种预防和治疗方法，该方法只需要少量的活性剂，因而比较便宜而且副作用较轻。

发明概述

本发明涉及包含第一活性剂和第二活性剂的组合物、制剂和治疗方法，其中第一活性剂包含化学式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的脱氢表雄酮和/或其盐，第二活性物质包含抗毒蕈碱药物和/或其盐，另外还可以添加其他活性物质，包括其他类型的抗感染药物、支气管扩张药物以及制剂组分。这种组合物和制剂可用于治疗肺和呼吸道疾病，以及其他疾病如慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘、变应性鼻炎以及与支气管收缩、肺部感染和/或变态反应以及肺表面活性物质改变有关的其他疾病。本发明的附图作为本发明说明书的一部分，可进一步解释下面所讨论的本发明的某些方面。

附图简述

图1说明了DHEA对HT-29SF细胞的抑制效应。

图2a和2b说明了DHEA对HT-29SF细胞的细胞周期分布的影响。

图3a和3b说明了DHEA诱导的HT-29细胞的生长抑制的反转。

图4a、4b、4c和4d说明了DHEA诱导的HT-29SF细胞的G1期阻滞的反转。

优选实施方式的详细说明

本发明起源于发明者期望改善已有的呼吸和肺病以及其他影响肺病变的治疗方法。本发明可有效治疗多种呼吸和肺病，不论其病因如何，是否是由于吸入烟草成分、其他物质或变态反应原、类固醇激素治疗、腺苷或腺苷受体代谢或合成异常以及其他任何原因引起的。本发明提供了一种治疗呼吸和肺病以及不论发病机制的疾病的组合物、制剂和方法。本发明的产物特别适用于治疗疾病如慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘、变应性鼻炎、囊性纤维化(CF)、dispnea、肺气肿、喘鸣、肺性高血压、肺纤维化、气道反应过度、腺苷或腺苷受体水平升高，特别是那些与传染性疾病、肺感染和/或变态反应、表面活性物质耗竭、慢性支气管炎、支气管收缩、呼吸困难、肺气道阻塞或不畅、用于心功能的腺苷检测、肺部血管收缩、呼吸不畅、急性呼吸窘迫综合征(婴儿RDS)、疼痛、肺表面活性物质减少、慢性支气管炎等有关的疾病。

现在可用的减轻COPD症状、防止恶化、保持良好肺功能以及改善日常活动和生活质量的方法很少。抗胆碱能药物通常可达到短期的支气管扩张效应，减轻某些COPD患者的症状，但是单独使用这些药物无法改善长期的预后，即使通过吸入使用这些药物。大多数COPD患者至少都有一定程度的呼吸道阻塞，这种阻塞通过单独给予异丙托溴铵就可以得到部分缓解。“肺健康研究”发现男性和女性吸烟者的肺活量测定都显示有早期COPD迹象。在一个5年的临床研究中比较了3种治疗方法，结果发现异丙托溴铵对抑制受试者肺有效换气体积下降的效果不明显，而停止吸烟可使肺有效换气体积的下降减缓。单独给予异丙托溴铵时需要的剂量很大，以这种剂量治疗会产生严重的副作用，如心血管症状、低血压、皮疹以及尿潴留。短效和长效吸入性β2肾上腺素能激动剂可达到短期的支气管扩张效应，减轻COPD患者的某些症状，但是对疾病的进展无明显的维持效应。短效β2肾上腺素能激动剂可改善COPD患者的症状，如增强其运动能力、产生一定程度的支气管扩张效应，甚至可以增加某些重症受试者的肺功能。较新出现的长效吸入性β2肾上腺素能激动剂的最大疗效与短效β2肾上腺素能激动剂相似。研究发现沙美特罗可改善症状、提高生活质量，但是其对肺功能的影响很小或者没有。但是，哮喘受试者使用β2肾上腺素能激动剂可能导致死亡的风险增加、哮喘控制的恶化、肺功能进一步下降。与只进行基本的治疗相比，持续使用支气管扩张药物异丙托溴铵或非诺特罗治疗哮喘或COPD可能导致肺功能的急遽下降，说明这些药物不适于维持治疗。另一方面，β2肾上腺素能激动剂最常见的即时副作用是心室纤颤，在高剂量时可引起血浆钾离子浓度下降、心律失常、动脉氧分压降低。β2肾上腺素能激动剂与抗胆碱能药物联合使用与单个药物相比支气管扩张效应稍微提高。标准剂量的β2肾上腺素能激动剂加上异丙托溴铵使用90天后，与单个药物相比，对稳定的COPD患者的疗效可达到某种程度的提高。研究发现抗胆碱能药物与β2肾上腺素能激动剂相比可使COPD患者产生更大的支气管扩张效应。异丙托溴铵与抗胆碱能药物联合给予未进行支气管扩张剂治疗的受试者时与β2肾上腺素能激动剂联合使用相比对受试者肺有效通气量的改善效果更明显，即使抗胆碱能药物还有一些残存效应。整体来说，β2肾上腺素能激动剂发生副作用的几率要比抗胆碱能药物高，如心室纤颤和心律失常。茶碱对COPD患者有一点支气管扩张效应，但是也有一些常见的副作用，并且其治疗范围较小，血药浓度为15-20mg/l时才能达到理想的疗效。副作用包括恶心、腹泻、头疼、易激惹、癫痫发作和心律失常，这些副作用一般出现在高血药浓度时，但是许多受试者在治疗范围时也可以发生。茶碱的剂量必须根据受试者的吸烟习惯、感染情况以及其他治疗措施使用情况作个体化的调整，这将是很麻烦的。虽然茶碱被认为在治疗哮喘时有抗炎症作用，特别是低剂量时，但是对于COPD来说还没有报道，尽管其支气管扩张短期效应与安慰剂相比有显著差异。口服皮质甾体可使某些稳定的COPD患者的基本有效肺活量得以提高，但是系统使用皮质甾体已发现是有害的，至少可导致一定程度的骨质疏松和明显的糖尿病症状。长期口服皮质甾体可用于治疗COPD，但是必须权衡其疗效和副作用。研究发现吸入性皮质甾体对组胺引起的呼吸道超敏反应无实质的短期效应，但是对肺功能有小的长期效应，即对原支气管扩张剂的有效肺活量有影响。氟替卡松治疗COPD患者可明显缓解中度和重度发作(不是轻微发作)，对肺功能和6分钟步行距离有一个小的但是有统计学意义的改善。口服氢化泼尼松、吸入氯地米松或者二者联合使用对COPD患者没有疗效，但是口服皮质甾体可改善肺功能。粘液溶解剂对哮喘发作的频率和发作持续时间有中等程度的疗效，但是对肺功能有毒副作用。另外，N-乙酰半胱氨酸和其他粘液溶解剂对重症COPD(有效换气体积＜50％)受试者都没有明显的疗效，尽管有迹象表明可使发作的频率下降。N-乙酰半胱氨酸有胃肠道副作用。血氧不足性COPD和充血性心衰受试者长期进行吸氧治疗在第一个500天内对死亡率没有影响，但是其后男性的存活率增加，一直可以维持到第二个5年。然而女性在整个研究期间吸氧都可以使死亡率降低。血氧不足性COPD患者(预测有效换气体积＜70％)连续吸氧治疗19.3年可使死亡的风险全面降低。但是到目前为止只发现改变生活方式、停止吸烟和长期吸氧治疗(对于血氧不足者来说)可改变COPD的长期病程。大约有一千四百万美国人患有慢性阻塞性肺疾病(COPD)，在美国是第四位的致死原因，直接或间接的医疗费用约65亿美元[1，2]。其通常的进程是肺功能缓慢恶化、呼吸停止逐渐增多。COPD的年龄校正死亡率从1967年到1987年上升了71％，10年死亡率约为50％。支气管扩张剂是COPD患者治疗的一个依靠。正确使用这些药物可增加通气量，减轻COPD患者的呼吸困难。受试者通常会感觉症状减轻、生活质量得到改善。目前所用的治疗COPD的支气管扩张药物有几类，每一类都有其特定的临床疗效：抗胆碱能药物、短效β2激动剂、抗胆碱能药物和短效β2激动剂联合使用、长效β2激动剂以及甲基黄嘌呤。抗胆碱能药物如异丙托溴铵已经和其他支气管扩张药物一起被用于COPD的治疗。异丙托溴铵是第四代抗胆碱能支气管扩张剂，通常用于治疗阻塞性肺病。尽管异丙托溴铵通常不被作为一线药物来治疗慢性哮喘，但是在医院急诊科通常用它作为辅助药物治疗急性哮喘的发作。

ARDS最常见的症状是吃力的、快速呼吸、鼻翼煽动、组织缺氧导致的皮肤、嘴唇、指甲发绀、呼吸困难、焦虑、紧张、不安、关节僵硬、疼痛和瞬时的呼吸停止。在下面的段落中将描述某些特殊的疾病及其现有的治疗方法，并加以讨论。ARDS目前只能通过症状体征来诊断，如通过听诊器胸部听诊可听到异常的有症状的呼吸音，然后通过胸透和测定动脉气血流量比率来确定。在某些情况下，ARDS是与其他疾病相关的，如急性髓性白血病、用阿糖胞苷治疗后出现的急性肿瘤溶解综合征(ATLS)等。但是，ARDS通常与创伤性损伤、重症血液感染如败血病或其他系统疾病、高剂量的放射治疗、化疗、导致多器官衰竭的炎症反应以及许多濒临死亡的情况有关。早产儿的肺发育不完全，因而胎儿在发育过程中处于缺氧状态。另外，肺表面活性物质是维持正常呼吸的一种关键物质，在生命的早期阶段分泌的量还不足。但是，早产儿通常过量表达腺苷A₁受体和/或低表达腺苷A_2a受体，因此对呼吸问题十分敏感，包括支气管收缩、肺感染和ARDS等。早产儿发生呼吸道窘迫综合征(RDS)时就是个非常严重的问题。发生RDS的早产儿现在一般用通气、输氧和给予表面活性剂治疗。发生RDS的早产儿即使存活下来通常也会有支气管发育不良(BPD)，也叫早产儿慢性肺病，常常是致命的。

鼻炎可以是季节性的，也可以是常年的，可以是变态反应性的，也可以是非变态反应性的。非变应性鼻炎可被感染所诱导，如病毒感染或者与鼻息肉有关，一般发生在阿司匹林依赖的病人身上，也可能因怀孕、甲状腺功能低下以及接触职业因素或药物而发病。所谓的NARES综合征是一种与鼻内分泌物的嗜酸性粒细胞有关的非变应性鼻炎，好发于中年人，伴随味觉的丢失。通常建议用生理盐水改善鼻塞、喷嚏及粘膜刺激或干燥症状，减轻粘膜萎缩，去除形成外皮的粘膜或增厚的粘膜，而且无任何副作用，尤其对孕妇来说可以作为首选的方法。如果在鼻内滴皮质甾体前立即使用，生理盐水还有助于防止局部刺激。当胆碱能通路被刺激时就会产生典型的分泌物进而产生神经刺激信号，这种分泌物可通过其颗粒组成来鉴定。在变态反应和上呼吸道感染中也有增加血管通透性的其他分泌物，肥大细胞的脱粒释放出活性介质与各种细胞、血管和粘液腺相互作用，从而导致典型的鼻炎症状。鼻内的大多数早期和晚期反应都发生在接触变态反应原后。晚期反应见于慢性变应性鼻炎，粘液分泌过多和粘膜充血是最常见的症状。一旦被激发，在重复接触变态反应原后可导致对刺激的阈值降低，因此产生对一种或多种变态反应原的过敏反应。受试者还可能变得对非特异性刺激的过敏，如冷空气和刺激气味。受试者自己使用生理盐水可改善鼻塞、喷嚏及充血症状，通常无任何副作用，尤其对孕妇来说可以作为首选的方法。生理盐水喷雾通常可用于减轻与各种鼻状况有关的粘膜刺激或干燥症状，减轻粘膜萎缩，去除形成外皮的粘膜或增厚的粘膜。如果在鼻内滴皮质甾体前立即使用，生理盐水喷雾还有助于防止药物诱导的局部刺激。抗组胺药物如特菲那定和阿司咪唑是两种非镇定类抗组胺药物，也可用于治疗这类疾病，但是这两种药物可能导致室性心律失常，即Torsades de Points，通常与其他的药物如酮康唑和红霉素相互作用或者引发心脏问题。到面前为止，另一种非镇定类抗组胺药，氯雷他定，和西替利嗪还没有发现与QT间隔或严重的心血管副作用有关。但是西替利嗪可导致嗜睡，临床应用不广泛。非镇定类抗组胺药如克敏能可有效减轻一小部分病人的喷嚏、流涕及鼻、眼、腭的骚痒症状，尽管它还没有检测用于治疗哮喘或其他更特殊的疾病。另外，特非那定、氯雷他定和阿司咪唑具有非常温和的支气管扩张效应，可减轻支气管对组胺的过敏反应，防止由运动和抗原引起的支气管痉挛。但是达到这些效果所需要的剂量要比目前所推荐的剂量高。镇定类抗组胺药物有助于改善夜间的睡眠情况，但是如果白天服用却会导致瞌睡、慵懒。抗组胺药一般与减充血剂合用以帮助减轻鼻塞症状。拟交感神经药物可作为血管收缩剂和减充血药使用。三种最常用的减充血药是伪麻黄碱、N-去甲麻黄碱和苯福林。但是这些药物可导致血压升高、心悸、心悸亢进、烦躁、失眠和头疼。苯丙醇胺可与咖啡因相互作用，当摄入相当于2到3杯咖啡的咖啡因时就可以使血压明显升高。另外，药物如伪麻黄碱可导致儿童活动过度。但是局部使用减充血剂的效果只能维持一个有限的时间，因为过度使用与鼻扩张反弹有关。

抗胆碱能药物可用于治疗严重鼻漏或某些特殊疾病如“味觉性鼻炎”的病人。味觉性鼻炎通常是由于摄入辛辣食物引起的，抗胆碱能药物对普通感冒也有一定疗效。例如，色甘酸钠如果以鼻内喷雾的形式作为预防用药，则可以减轻喷嚏、流涕和鼻痒症状，阻断早期和晚期过敏反应，但是可产生喷嚏、瞬间头痛，甚至会导致鼻内烧灼感。局部使用皮质甾体，如二丙酸倍氯米松有时也可有效治疗鼻炎，特别是治疗鼻塞、喷嚏和流涕症状。但是由于制剂的不同皮质甾体也可能导致易激惹、激动、烧灼感或喷嚏。有时也会发生局部出血和中隔穿孔，特别是不当使用气溶胶时。局部使用类固醇药物一般要比用色甘酸钠有效，尤其是治疗NARES时，也可以减轻鼻炎的某些症状。但是其副作用却限制了其应用，因此只临时用于那些有严重症状的受试者。这些药物有时也用于收缩鼻息肉，特别是当无法进行局部治疗时。免疫治疗虽然能取得明显的疗效，特别对于那些对其他治疗剂产生副作用时，但是免疫治疗费用高，使用不方便。所谓的封闭抗体以及改变细胞组胺释放的因子，最终都会导致IgE降低，并且伴随其他多种有利的生理改变。这种效应对于IgE介导的疾病是有用的，如中耳炎复发的特异反应性病人的过敏反应。但是对于变应性鼻炎受试者来说流涕不仅仅是令人讨厌的。常常会使生活质量下降，还可能导致严重的精神不安，包括心里上的问题。目前鼻炎大多用普萘洛尔、异博定和腺苷治疗，这些药物都经过FDA批准用于急性终止室上性心动过速(SVT)。本发明的非糖皮质激素据信基本没有现在所使用的那些类固醇激素所具有的有害效应。

尽管肺纤维化和其他间质性肺病(ILD)的进程和症状是千变万化的，但是它们都会影响肺功能。炎症侵润到细支气管(小的气道)的壁时被称为细支气管炎，当炎症侵润到肺泡(气囊)的壁和气腔时被称为肺泡炎，但炎症侵润到肺的小血管(毛细血管)时被称为脉管炎。炎症可能痊愈，但也可能导致肺组织的永久性损伤，后者被称为肺纤维化。肺组织的这种纤维化或瘢痕会导致肺呼吸和携氧能力的永久性丢失，瘢痕的数量决定了失能的水平，因为气囊和肺组织之间的以及气囊和肺毛细血管周围的结瘢组织会造成阻塞。当阻塞发生时，通常利用吸氧来帮助改善呼吸。肺纤维化可由下列职业或环境因素引起或采取这样的形式，如接触石棉、硅和金属粉尘、细菌和动物粉尘、气体和烟雾、石棉肺和硅肺、导致肺结瘢的感染，其中结核病是一个典型的例子，结缔组织或胶原病如类风湿性关节炎、系统性硬化病以及系统性红斑狼疮、特发的肺纤维化，以及不常见的遗传性/家族性肺纤维化或某种药物引起的肺纤维化。许多疾病是根据与其相关的职业来命名，如谷物工人肺、蘑菇工人尘肺、蔗尘肺、去污剂工人肺、枫树皮工尘肺、麦芽工尘肺、红椒工人肺以及养鸟人肺。“特发的”(未知原因的)肺纤维化(IPF)是指在排除了所有其他原因引起的间质性肺病后而命名的，据说可能由病毒性疾病和变态反应或环境因素(包括吸烟)而引起。细菌和其他微生物不被认为是引起IPF的原因。另外还有家族性疾病，已知的如家族性特发肺纤维化，其主要症状是呼吸急促，这种疾病难以进行诊断，因为所有肺病都有这种症状。呼吸急促首先出现在运动时，最后即使在休息时也会出现呼吸急促。其他的症状包括干咳(无痰)以及杵状指。糖皮质激素通常用于治疗肺纤维化的炎症反应，但其结果是不确定的。然而其他药物一般不会使用，除非确定类固醇药物无效时。当诊断明确后糖皮质激素可与其他治疗配合使用，如重症受试者进行氧疗。肺纤维化受试者通常建议注射流感疫苗和肺炎球菌性肺炎疫苗来预防感染，更普及一点所有肺病受试者都被建议注射疫苗。肺纤维化的治疗和处理通常需要进行肺活检以判断受试者对糖皮质激素或其他免疫抑制剂可能出现的无法预测的反应。肺移植有时可以作为重症肺纤维化和其他肺病受试者的最后选择。

肺纤维化也可由其他特殊的疾病引起，如结节病，这种疾病的发病原因未明，其特征是形成肉芽肿或大面积的炎症细胞。这种疾病可攻击各种器官，最常攻击的是肺，一般在进行胸透时发现双肺中央淋巴结增大或肺组织增厚而得以诊断。对于大多数病人来说结节病是一个小问题，症状包括干咳、呼吸急促、轻微胸痛、疲劳、虚弱和体重减轻，这些症状不常出现，并且最后不用治疗也可以停止。对另外一些病人来说可能是一种致残疾病。组织细胞增生症X也与肺纤维化有关，似乎是从细支气管或肺的小气道及其相连的动脉和静脉开始的，通常起始于细支气管的破坏以及小血管的狭窄和损伤。这种疾病的症状包括干咳(无痰)、发作时呼吸停止以及胸痛，也可能导致肺的慢性失功。一般采用糖皮质激素疗法，虽然还没有证据表明这种疗法是有效的。组织细胞增生症X与吸烟和某些工种如矿工有关，可能是由小颗粒物质引起的，如吸入粉尘或石棉纤维损伤肺，特别是小气道和肺泡，导致瘢痕(纤维化)。从事农业的人也可能受某些特殊有机物质的影响，如发霉的干草，引起肺的变态反应，被称为“农民肺”，也可导致肺的纤维化。石棉肺和硅肺是两种职业肺病，其发生的原因是清楚的。石棉肺是由于小的针状石棉颗粒吸入肺内导致肺结瘢或肺纤维化而形成的，还可能导致肺癌。硅肺是一种由于吸入游离结晶硅粉尘而引起的粉尘病，各种类型的提取矿石，如金矿石、铅矿石、锌矿石、铜矿石、铁矿石、无烟煤(硬煤)以及某些烟煤(软煤)的采矿活动都可以产生这种结晶硅粉尘。在铸造厂、磨岩厂、隧道、喷沙、水泥开凿、花岗岩雕刻以及瓷器制造工作的工人也会接触到硅。大的硅颗粒在上呼吸道沉淀下来，但是一些细小的硅颗粒被携带到肺泡内，导致肺的纤维化。单独使用糖皮质激素或者药物联合治疗以及肺移植是目前正在进行试验的三种治疗方法，但是到目前为止还没有发现治疗这种疾病的好方法。本发明首次为这类病人以及其他呼吸和肺病受试者提供了有效的治疗方法。

中性粒细胞性炎症作为慢性顽固性哮喘的一种重要致病因素正在获得越来越多的重视，并且常常与致死性哮喘有关。中性粒细胞性炎症也被认为是COPD的主要成分。目前所有的类固醇药物都不能减轻中性粒细胞性炎症反应，事实上可能通过延迟中性粒细胞的调亡来发挥作用。DHEA-S显示在三种不同类型的人哮喘动物模型中都有疗效：变态反应家兔、变态反应小鼠以及变态反应灵长类动物。这些效果包括降低变态反应原激发后所产生的早期和晚期反应的强度，明显减轻嗜酸性粒细胞和中性粒细胞炎症反应。研究发现DHEA-S减轻嗜酸性粒细胞炎症反应的效果与普米克类似，减轻中性粒细胞炎症反应的效果远远超过普米克。对于嗜酸性粒细胞炎症反应的减轻效果来说，DHEA-S至少与普米克(Pulmicort)相似，而减轻中性粒细胞炎症反应的效果远远超过普米克。在多种动物模型中发现有明显效果的哮喘治疗方法很少。DHEA和DHEA-S是天然的类固醇激素，见于男性和女性的各种组织内。因此吸入低剂量的本发明的类固醇激素可以很好耐受。事实上已有许多资料表明了DHEA-S在人体内的安全性，其中包括孕妇，即使通过其他给药途径，如口服给药。本发明的甾体化合物与糖皮质激素的作用机制不同；这些化合物不活化糖皮质激素受体。其已经被证明的一个效应是降低肺内的腺苷，考虑到腺苷在肺炎反应中的作用，以及哮喘受试者的肺内腺苷过量自分泌的事实可以发现这是一个很关键的特性。由于本发明的类固醇发挥作用的机制不同，因此可以预见不会出现任何糖皮质激素所具有的典型副作用，如粘膜炎、皮肤增厚、exopthalmia、骨生长减缓(儿童)或/和骨矿化(成年人)。临床前毒理学研究表明在狗体内剂量即使高达2mg/kg/天，在大鼠体内剂量即使达到1mg/kg/天也没有达到最大耐受剂量。这种剂量已经远远超出了治疗哮喘或COPD患者所需要的临床剂量。

本发明的类固醇在治疗呼吸道疾病中的应用见于Nyce的美国专利No.6,087,351的描述。那个专利涉及利用类固醇吸入性制剂治疗与腺苷水平改变有关的疾病，如哮喘。现在市场上还没有一种类固醇能解决哮喘和COPD疾病过程中关键的中性粒细胞炎症反应的问题。本发明的类固醇是第一种能同时抑制嗜酸性粒细胞炎症反应和中性粒细胞炎症反应的类固醇。给予受体的是第一活性剂和第二活性剂，其中第一活性剂选自脱氢表雄酮、其类似物或其药用或兽用盐，第二活性剂选自抗毒蕈碱药物，该药物单独使用或与下列物质联合使用：抗组胺药、反义寡核苷酸、白三烯抑制剂、茶碱、β2肾上腺素能药物和/或黏液溶解剂等。第一和第二组分以能有效抑制、延缓或控制所治疗疾病症状的治疗剂量或预防剂量给药，特别是那些与肺血管收缩、支气管收缩、肺炎反应、肺变态反应、肺组织改变、免疫细胞如中性粒细胞和嗜酸性粒细胞积聚、纤维化、癌组织病变等有关的疾病。比较特殊的是在一个实施方式中，本发明的药用或兽用组合物包含的第一活性剂选自具有下列化学式的非糖皮质激素甾体：

其中虚线表示单键或双键；R是氢或卤素；5位上的H以α或β构型出现或是含有两种构型的外消旋混合物的化学式I的化合物；且R¹是氢或SO₂OM，其中M选自H、Na、硫酸脑苷脂和磷脂

其中R²和R³可以是相同或不同的直链或支链(C₁-C₁₄)烷基或葡糖苷酸

在化学式(I)的化合物中，R优选卤素，即溴、氯或氟，R是H，存在双键，在化学式(I)化合物的一个优选实施方式中优选的化学式(I)化合物是16-α-氟表雄甾酮，R是H，R₁是SO₂OM，M是硫酸脑苷脂基团，存在双键，更优选的化学式(I)化合物是脱氢形式的具有下面化学式(II)结构的脱氢表雄酮硫酸钠(DHEA-S·2H₂O)：

在另外一个实施方式中，非糖皮质激素类固醇具有下面的化学式III和IV：

非糖皮质激素类固醇的化学式

其中R1，R2，R3，R4，R5，R7，R8，R9，R10，R12，R13，R14和R19分别是H，OR，卤素，(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷氧基，R5和R11分别是OH，SH，H，卤素，药用酯，药用硫酯，药用醚，药用硫醚，药用无机酯，药用单糖、双糖或寡糖，螺旋环氧己烷，spirothirane，-OSO2R20，-OPOR20R21或(C1-C10)烷基，R5和R6合在一起是＝O，R10和R11合在一起是＝O；(1)当R16是C(O)OR22时，R15是H，卤素，(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷氧基，(2)当R16是卤素、OH或(C1-C10)烷基时，R15是H、卤素、OH或(C1-C10)烷基，(3)当R16是OH时，R15是H、卤素、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烯基、(C1-C10)炔基、甲酰基、(C1-C10)烷酰基或环氧基，(4)当R16是H时，R15是OR、SH、H、卤素、药用酯、药用硫酯、药用醚、药用硫醚、药用无机酯，药用单糖、双糖或寡糖、螺旋环氧己烷、spirothirane、-OSO2R20、-OPOR20R21，或者R15和R16合在一起为＝O；(1)当R6是H、OR、卤素、(C1-C10)烷基或-C(O)OR22时，R17和R18分别是H、-OH、卤素、(C1-C10)烷基或-(C1-C10)烷氧基，(2)当R15和R16合在一起是＝O时，R17和R18分别是H、(C1-C10)烷基氨基、((C1-C10)烷基)n氨基(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、羟基-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基、(卤素)m(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷酰基、甲酰基、(C1-C10)烷酯基或(C1-C10)烷酰氧基，(3)R17和R18合在一起是＝O；(4)R17或R18与其相连的碳原子形成含0或1个氧原子的3-6元环；或者(5)R15和R17与其相连的碳原子合在一起形成环氧环；R20和R21分别是OH、药用酯或药用醚；R22是H、(卤素)m(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷基；n是0、1或2；m是1、2或3；或其药用或兽用盐。

在另外一个实施方式中，类固醇是具有化学式V的化合物：

或其药用或兽用盐；其中R1是A-CH(OH)-C-(O)-，A是H或(C1-C22)烷基、烯基或炔基，其中每一个都可被一个或多个(C1-C4)烷基、卤素、HO或苯基取代，苯基可被一个或多个卤素、HO、CH₃或CH₃O取代。

化学式I位置5上的氢原子可存在于α或β构型中，DHEA化合物还可以两种构型化合物的混合物的形式来提供。上面对含有化学式I的化合物的说明包括DHEA，但是并不排出其他化合物，其中R和R¹分别都是H，含有双键；16α溴表雄酮，其中R是Br，R¹是H，含有双键；16α氟表雄酮，其中R是F，R¹是H，含有双键；本胆烷醇酮，其中R和R¹分别都是H，不含双键；以及硫酸脱氢表雄酮，其中R是H，R¹是SO₂OM，M是上面所定义的and M是硫酸脑苷脂基团，不含双键。但是也可以是其他化合物。含化学式I的其他优选化合物中R是卤素，即溴、氯或氟，其中R¹是氢，存在双键。含化学式I的最优选化合物是16α氟表雄酮。其他的优选化合物有DHEA和DHEA盐，如硫酸盐(DHEA-S)。最优选的组合物和治疗方法包含DHEA-S和异丙托溴铵，其他的包含DHEA-S和噻托溴铵。可以相信的是不论口服、局部或通过呼吸道给药，非糖皮质激素类固醇和抗毒蕈碱药物可以互相促进对方的抗炎症效应。其他优选的组合包括含有上述化学式的DHEA类似物与一种或多种抗毒蕈碱药物的组合。其他适用于本发明的DHEA类似物及其衍生物有含化学式(III)的非糖皮质激素类固醇

或含化学式(IV)的非糖皮质激素类固醇

其中R1，R2，R3，R4，R5，R7，R8，R9，R10，R12，R13，R14和R19分别是H，OR，卤素，(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷氧基，R5和R11分别是OH，SH，H，卤素，药用酯，药用硫酯，药用醚，药用硫醚，药用无机酯，药用单糖、双糖或寡糖，螺旋环氧己烷，spirothirane，-OSO2R20，-OPOR20R21或(C1-C10)烷基，R5和R6合在一起是＝O，R10和R11合在一起是＝O；(1)当R16是C(O)OR22时，R15是H，卤素，(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷氧基，(2)当R16是卤素、OH或(C1-C10)烷基时，R15是H、卤素、OH或(C1-C10)烷基，(3)当R16是OH时，R15是H、卤素、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烯基、(C1-C10)炔基、甲酰基、(C1-C10)烷酰基或环氧基，(4)当R16是H时，R15是OR、SH、H、卤素、药用酯、药用硫酯、药用醚、药用硫醚、药用无机酯，药用单糖、双糖或寡糖、螺旋环氧己烷、spirothirane、-OSO2R20、-OPOR20R21，或者R15和R16合在一起为＝O；(1)当R6是H、OR、卤素、(C1-C10)烷基或-C(O)OR22时，R17和R18分别是H、-OH、卤素、(C1-C10)烷基或-(C1-C10)烷氧基，(2)当R15和R16合在一起是＝O时，R17和R18分别是H、(C1-C10)烷基氨基、((C1-C10)烷基)n氨基(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、羟基-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基、(卤素)m(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷酰基、甲酰基、(C1-C10)烷酯基或(C1-C10)烷酰氧基，(3)R17和R18合在一起是＝O；(4)R17或R18与其相连的碳原子形成含0或1个氧原子的3-6元环；或者(5)R15和R17与其相连的碳原子合在一起形成环氧环；R20和R21分别是OH、药用酯或药用醚；R22是H、(卤素)m(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷基；n是0、1或2；m是1、2或3；或其药用或兽用盐。对于含化学式(III)和(IV)的非糖皮质激素类固醇来说，优选的化合物其中R15和R16合在一起是＝O，其他优选的化合物其中R5是OH，R5是-OSO2R20，R20是H。

一般来说，非糖皮质激素类固醇如含化学式(I)、(II)、(III)和(IV)的那些化合物、其衍生物及其盐给药的剂量为每公斤体重约0.05、0.1、1、5、20、100、500、1000、1500、1800、2500、3000、3600mg。但是根据病人的情况其他剂量也是合适的。含化学式I、III和IV的第一活性剂可根据已知的方法或根据已知的方法稍加改动进行制备，这是本领域技术人员所熟知的。参见美国专利No.4,956,355；英国专利No.2,240,472；EPO专利申请No.429；187，PCT专利文献No.WO 91/04030；美国专利No.5,859,000；Abou-Gharbia等，J.Pharm.Sci.70：1154-1157(1981)；MerckIndex Monograph No.7710(第11版，1989)等。脱氢表雄酮及其盐是与第二组分如异丙托溴铵一起给药的，另外还可添加含化学式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)的非糖皮质激素类固醇和/或其他生物活性成分，各组分可单独给药，也可同时给药，彼此独立或位于同一组合物中。在大多数情况下剂型采用同时给药的方式或者位于同一组合物中或者彼此独立但每天一次给药。其他生物活性剂优选目前治疗哮喘、COPD、变应性鼻炎所用的任何处方药。其中包括β2肾上腺素能激动剂如麻黄素、异丙肾上腺素、乙基异丙肾上腺素、肾上腺素、奥西那林、特布他林、非诺特罗、丙卡特罗、舒喘灵、沙丁胺醇、吡布特罗、福莫特罗、biloterol、班布特罗、沙美特罗、舒利迭等；其他抗胆碱能药物；抗组胺药物；腺苷A1、A2b和A3受体阻断剂如反义寡核苷酸等；腺苷A2a激动剂；以及糖皮质激素。术语“同时给药”用于本文中是指抗炎症类固醇或其盐与抗毒蕈碱药物同时给药(优选用常用的药用载体将二者制成同一制剂)或者在同一个疗程内在不同的时间给药。在既需要用DHEA又需要用抗毒蕈碱药物的情况下，二者给药的时间要足够近或者同时给药以增强其抗炎效果。抗毒蕈碱药物与非糖皮质激素类固醇或其盐可以用药用载体分别制备成独立的制剂或者与第二活性剂一起制成制剂。非糖皮质激素类固醇、其盐和抗毒蕈碱药物可全身给药、局部用药或者直接置于受试者的呼吸道内。组合物可通过本发明所述的技术以及本领域技术人员所熟知的其他技术制备成制剂。

一般来说，抗毒蕈碱药物以治疗量治疗靶疾病，和/或以有效量减轻或抑制受试者肺的不良症状，根据受试者病情的不同、所用的其他药物、所选择的剂型以及给药途径的不同剂量也不同。抗毒蕈碱药物的使用剂量通常都是本领域所熟知的。但是这些剂量可以降低，如果医生了解需要与本发明的脱氢表雄酮联合给药。当然，正如本领域技术人员所熟知的，根据受试者状况、所用的其他药物以及给药途径也可采用其他剂量。抗毒蕈碱能受体药物可每天给药一次或多次。用于治疗呼吸道疾病、肺病和恶性肿瘤的非糖皮质激素类固醇、抗毒蕈碱药物以及其他添加的药物、腺苷受体或其他靶位的反义寡核苷酸、下面所列的其他药物可以药物本身的形式或以上述药用盐的形式给药，都被称为“活性化合物或药物”。活性化合物或其盐可以如下面所讨论的通过全身给药，也可以局部给药。

抗毒蕈碱药物的例子有异丙托溴铵、噻托溴铵、托文特以及本领域所熟知的其他药物。最近Yahgmurov的一篇文章报道用托文特治疗后可增强COPD患者大、中支气管的气道传导率，改善肺功能。而对于支气管哮喘病人来说，该药物对气道阻力有一些影响，对小的支气管的效果更明显。在同一篇文章中报道了慢性阻塞性肺疾病(COPD)受试者通过吸入托文特进行治疗的病例，结果发现通过血液和支气管肺泡罐(BAL)中的吞噬细胞可降低活性氧的产生。另外还发现没有出现对过氧化脂质氧化作用(PLO)的抑制，这可能是由于残存的“呼吸爆发”现象。单独用托文特治疗BA病人时，与COPD病人不同的是可导致PLO的降低，但只出现在BAL内。据报道治疗后血清钙的水平出现变化，但没有统计学意义。参见B.H.Yahgmurov，PulmonologyJournal，Russian Pneumologycal Scientific Society，Ministry Public Healthof Russian Federation Vol.6(4)(1996)。另外，同一位作者评价了托文特对肥大细胞释放组胺影响，组胺释放是支气管痉挛起始链条中的一环。作者将托文特与溴化异阿托品(异丙托溴铵)和阿托品做了比较，结果发现细胞与托文特共孵育5分钟可使组胺释放被抑制47％，而安慰剂和阿托品或溴化异阿托品却没有这种效果。肥大细胞释放组胺是由胞浆钙离子浓度的突然增加引起的。托文特(56.3％)和溴化异阿托品(28％)可使被动钙离子摄取的速度下降，而阿托品无此作用。因此，与溴化异阿托品和阿托品不同，托文特可通过降低细胞膜对钙离子的通透性来抑制组胺的分泌。抗毒蕈碱药物外的其他支气管扩张剂有泛醌、糖皮质激素以及β2肾上腺素能受体激动剂。白三烯类药物包括zyflo(一种平喘药)，一种5-脂加氧酶(5-LO)的抑制剂，扎鲁司特(Accolate^)，孟鲁司特(Singulair^)以及本领域所熟知的其他药物。在一个为期6个月的临床试验中，包括每日吸入β激动剂的轻度到中度哮喘受试者，结果发现与安慰剂相比zyflo可改善肺功能，降低需要服用类固醇激素防止哮喘发作的受试者的百分率。整体来讲，zyflo治疗的受试者需要类固醇激素急救的比例只有7％，而安慰剂为18.7％，下降了62％。用zyflo治疗的受试者也减少了其使用吸入性β激动剂的量，在试验结束时zyflo治疗组β激动剂的使用量为每日1.77片，低于基线31％，而安慰剂组下降0.22片。白三烯受体拮抗剂(LTRAs)可抑制半胱氨基白三烯的效应，后者是一大群哮喘化学介质中的三种。几种类型的细胞都可以释放白三烯，引起支气管收缩和炎症反应。半胱氨基白三烯是阿司匹林敏感哮喘受试者(特征是慢性重症哮喘、鼻息肉以及阿司匹林诱导的支气管痉挛)最重要的介质。LTRAs可竞争性抑制支气管平滑肌及其他组织上的白三烯受体。β2肾上腺素能激动剂的例子包括麻黄素、异丙肾上腺素、乙基异丙肾上腺素、肾上腺素、奥西那林、特布他林、非诺特罗、丙卡特罗、舒喘灵、沙美特罗、吡布特罗、福莫特罗、biloterol、班布特罗、沙丁胺醇、舒利迭等。糖皮质激素的例子有氯地米松、皮质激素21-磺基丙酸盐、(16α)-16，17-亚烷基二(氧代)-3-芳基孕-2，4-三烯-20-酮((16α)-16，17-alkylidene bis(oxy)-3-arylpregna-2，4-trien-20-one)、氢化可的松酯、丙氯孕酮硫代特戊酸盐(CTP)、氢化可的松、地塞米松三甲基乙酸盐、德新宁碱的磺酸烷、α-羟基氢化泼尼松、18，18-二氟类固醇、制备17α-羟基皮质醇21-磷酸盐、至少在17α位和21位上具有未保护羟基的21磷酸皮质醇、16α-甲基化的δ-17(20)-皮质醇、21-(L-维生素C-2-磷酰基)氢化可的松、21-(L-维生素C-2-磷酰基)曲安西龙及其生理盐等。这些药物中的一些药物疗效较短，但与非糖皮质激素类固醇联合使用可达到短期和长期疗效。

抗毒蕈碱药物和非糖皮质激素类固醇每日使用的剂量要根据整个治疗方案、所用的药物、剂型、给药途径及病人的状况来确定。抗毒蕈碱药物和抗炎药物是本领域所熟知的，并且都已经上市。实施例16到26描述了根据本发明所制备的雾化制剂，可通过一个装置喷入呼吸道内或鼻内或通过吸入给药。对于肺内给药来说，优选脂质制剂。对于其他生物活性剂来说，FDA都规定了作为人们日常摄入的生物活性添加剂的推荐量，如维生素和矿物质。但是对于治疗特殊的疾病或改善受试者的免疫反应来说可以使用高出几百甚至几千倍的量。多数情况下药典所推荐的剂量范围都是很宽的，医生可以从中得到指导。本发明所描述的典型药物的量位于目前日常服用所推荐的剂量范围内，也可以低于或高于这一水平。治疗一般从低剂量的抗毒蕈碱药物配合非糖皮质激素类固醇开始，另外还可以添加适量的糖皮质激素或其他生物活性剂，然后逐渐增加每个受试者的剂量。但是较高和较低的剂量，包括初始剂量都应该在本发明所定义的范围之内。在开始治疗时每种药物的治疗都应该下调，然后逐渐增加到受试者需要的足够剂量。如果可能，推荐使用每日一次的剂量以维持药物稳定的血药浓度。本发明所用的第一、第二或其他组分优选的范围要根据给药途径和剂型的不同而有所变化，本领域的技术人员可根据已知的方法和组分进行选择和制备。活性化合物可以单次剂量(每日一次)或多次剂量(每日数次)的方式给药。预防和治疗呼吸道疾病和恶性肿瘤的组合物和方法可用于治疗成年人、儿童和婴儿，也可用于治疗患上述疾病的非人动物。虽然本发明主要关注的是治疗人的疾病，但是也可作为兽用药治疗其他哺乳动物，如狗、猫以及大型家畜和野生动物。因此，这种治疗有助于受试者形成良好的生活方式。根据本发明给予药物如非糖皮质激素类固醇可减轻炎症和支气管收缩，另外给予抗毒蕈碱药物还可以在短期内改善受试者的呼吸状况。

可与本发明的组合物联合应用或与本发明的方法结合使用的其他药物包括各种能给予人和动物的治疗剂的一种或多种。适宜的药物种类有镇痛药、经前治疗药、绝经药、抗衰老药、抗焦虑药、情感障碍药、抗抑郁药、抗双相情感药、抗精神分裂药、抗癌药、生物碱、血压控制药、激素、抗炎药、肌肉松弛剂、类固醇、催眠药、抗局部缺血药、抗心律失常药、避孕药、维生素、矿物质、安定药、神经递质调节剂、创伤治愈药、抗血管形成药、细胞因子、生长因子、抗肿瘤转移药、抗酸药、抗组胺药、抗菌药、抗病毒药、防毒气药、食欲抑制剂、防晒剂、润滑剂、皮肤降温药、放射性磷光或荧光对照诊断剂或成像剂、性欲改变药、胆汁酸、缓泻剂、抗腹泻药、皮肤更新剂、生发剂、止痛药、经前治疗药、抗绝经药如激素等、抗老化药、抗焦虑药、伤害感受剂、情感障碍药、抗抑郁药、抗双相情感药、抗精神分裂药、抗癌药、生物碱、血压控制药、激素、抗炎药、用于治疗和预防与疼痛和炎症反应有关的疾病的其他药物，如关节炎、烧伤、创伤、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、炎性肠病如节段性回肠炎和溃疡性结肠炎、自身免疫疾病如红斑狼疮、肌肉松弛药、类固醇、催眠药、抗局部缺血药、抗心律失常药、避孕药、维生素、矿物质、安定药、神经递质调节剂、创伤和烧伤治愈药、抗血管形成药、细胞因子、生长因子、抗肿瘤转移药、抗酸药、抗组胺药、抗菌药、抗病毒药、防毒气药、防再灌注损伤药、食欲抑制剂、防晒剂、润滑剂、皮肤降温药、放射性磷光或荧光对照诊断剂或成像剂、性欲改变药、胆汁酸、缓泻剂、抗腹泻药、皮肤更新剂、生发剂等。

激素包括雄性激素和雌性激素，如结合型雌激素、孕酮、雄酮及其类似物、甲状腺素和糖皮质激素，性欲改变药包括万艾可(Viagra)和其他NO水平调节剂，止痛药包括OTC药物如布洛芬、oruda、萘普生钠和acetaminofen，以及控制使用的药物如吗啡和可待因，抗抑郁药有三环抗抑郁剂、MAO抑制剂和肾上腺素，γ氨基丁酸(GABA)、多巴胺和5-羟色胺升高药如百忧解(Prozac)、Amytryptilin、安非他酮(Wellbutrin)和舍曲林，皮肤更新药有全反维生素A酸，生发剂有Rogaine、抗炎药有非甾体抗炎药(NSAIDS)和类固醇，催眠药有褪黑激素和睡眠诱导药如安定，细胞保护剂，抗局部缺血药和头部损伤药如依那多林等。不同类药物的例子见下面所列出的。止痛药的例子有对乙酰氨基酚、Anilerdine、阿司匹林、丁丙诺啡、Butabital、Butorpphanol、胆碱水杨酸酯、可待因、地佐辛、二氯芬酸、二氟苯水杨酸、双氢可待因、Elcatoninin、依托度酸、非诺洛芬、二氢可待因酮、氢吗啡酮、布洛芬、酮洛芬、酮咯酸、左啡诺、水杨酸镁、甲氯芬那酸、甲芬那酸、度冷丁、美沙酮、左甲硫拉嗪、吗啡、纳布啡、萘普生、鸦片、氧可酮、二氢羟吗啡酮、喷他佐辛、苯巴比妥、丙氧芬、双水杨酯、水杨酸钠、曲马朵以及上述之外的其他麻醉止痛剂。见Mosby’s Physician’s GenRx。抗焦虑药包括阿普唑伦、溴西泮、丁螺环酮、甲氨二氮卓、氯美扎酮、氯氮卓、安定、哈拉西泮、羟嗪、Ketaszolam、氯羟去甲安定、氨甲丙二酯、去甲羟安定和普拉西泮等。与精神抑制有关的抗焦虑药有甲氨二氮卓、阿米替林、洛沙平、马普替林和羟哌氯丙嗪等。抗炎药的例子有非风湿症的阿司匹林、胆碱水杨酸酯、二氯芬酸、二氟苯水杨酸、依托度酸、非诺洛芬、氟喹氨苯酯、氟布洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、水杨酸镁、甲氯灭酸盐、甲芬那酸、萘美酮、萘普生、噁丙嗪、保泰松、吡罗昔康、双水杨酯、水杨酸钠、舒林酸、替诺昔康、噻洛芬酸、托美丁。眼科抗炎药的例子有二氯芬酸、氟布洛芬、吲哚美辛、酮咯酸、利美索龙(通常用于手术后的治疗)。用于非感染性鼻内给药的抗炎药的例子有Beclomethaxone、普米克、地塞米松、氟尼缩松、曲安西龙等。催眠药(抗失眠/睡眠诱导剂)是指那些能治疗失眠的药物，包括阿普唑伦、溴西泮、安定、苯海拉明、多西拉敏、舒乐安定、氟西泮、哈拉西泮、凯他唑仑、氯羟去甲安定、硝基安定、普拉西泮、夸西泮、替马西泮、三唑仑、唑吡旦和Sopiclone等。镇静剂的例子有苯海拉明、羟嗪、左甲硫拉嗪、异丙嗪、普鲁泊福、褪黑色素、异丁嗪等。用于治疗癫痫小发作和震颤等疾病的镇静剂有盐酸阿米替林、甲氨二氮卓、异戊巴比妥、司可巴比妥、烯丙异丙巴比妥、仲丁比妥、Ethchiorvynol、格鲁米特、L-色氨酸、甲苯比妥、甲己炔巴比妥钠、盐酸咪达唑仑、去甲羟安定、戊巴比妥钠、苯巴比妥、司可巴比妥钠、硫戊巴比妥钠等。用于治疗头部创伤(脑损伤/局部缺血)的药物包括盐酸依那多林(如治疗严重的头部损伤、毒瘾发作、Warner Lambert)。细胞保护剂和绝经期及绝经期症状治疗剂的例子有麦角胺、颠茄生物碱和苯巴比妥。治疗绝经期血管舒缩症状的药物有可乐定、妊马雌酮和甲羟孕酮、雌二醇、环戊丙酸雌二醇、戊酸雌二醇、雌激素、妊马雌酮、酯化的雌酮、硫酸雌酮哌嗪和炔雌醇。治疗月经前综合征(PMS)的药物有孕酮、孕激素、促性腺激素释放激素、口服避孕药、达那唑、Luprolide Acetate和维生素B6。情绪和精神疾病治疗剂包括三环类抗抑郁药如盐酸阿米替林(Elavil)、盐酸阿米替林、羟哌氯丙嗪(Triavil)和盐酸多塞平(Sinequan)。镇静剂、抗抑郁药和抗焦虑药的例子有安定(Valium)、氯羟去甲安定(Ativan)、阿普唑仑(Xanax)，SSRI(选择性5-羟色胺重摄取抑制剂)、盐酸氟西汀(Prozac)、Sertaline HCl(Zoloft)、盐酸帕罗西汀(Paxil)、氟伏沙明马来酸盐(Luvox)、盐酸顽发克星(Effexor)、5-羟色胺、5-羟色胺激动剂(Fenfluramine)和其他OTC药物。治疗偏头痛的药物有Imitrex(琥珀酸舒马普曲坦注射剂)等。

本发明的活性剂在组合物中所含的剂量范围是很宽的。例如，组合物中所包含的活性剂的量可以是约占组合物的0.001％、1％、2％、5％、10％、20％、40％、90％、98％、99.999％。当组合物中另外加入上述与活性剂的活性有重叠的其他药物时可以适当调整每种药物的含量。另外，活性化合物的剂量要根据受试者年龄、体重和病情的不同而有所变化。治疗可以从小剂量开始，即本发明的第一活性剂开始用低于最佳剂量的量，最先使用的药物应该是非糖皮质激素类固醇或抗毒蕈碱药物，以及上面所讨论的其他活性剂。第二活性剂也可以此办理，直到达到理想的水平。反之亦然，例如在使用多种维生素和/或矿物质的情况下，受试者首先服用这些药物稳定在预期的水平上，然后再使用第一活性化合物。剂量可以增加直到达到预期的和/或理想的效果。一般来说，活性剂使用的浓度优选能产生有效的结果而不会引起任何过度有害的或有毒的副作用，可以单个单位剂量给药，如果需要也可以方便的亚单位剂量在每日的适宜时间内多次给药。第二治疗或诊断药物可以本领域所熟知的能有效地达到目的的剂量给药。如果第二药物与主药的活性有重叠，其中一种药物或者两种药物的剂量应该加以调整以获得预期的效果而不会因为超出剂量范围而出现过度的副作用。因此，当组合物中添加其他止痛药和抗炎症药时，所用的剂量应该是本领域所熟知的达到其预期目的的量或者比其单独使用时较低的剂量。药用盐应该是可用于药理学的、药物学的或兽医学的盐，可以制备成碱金属或碱土金属盐的形式，如钠盐、钾盐或钙盐。有机盐和酯也适用于本发明。活性化合物优选以药用或兽用组合物的形式给药，包括全身给药制剂和局部用药制剂。其中优选的制剂应该是适于吸入的或者适于呼吸道给药、口腔给药、口服、直肠给药、阴道给药、鼻内给药、肺内给药、眼内给药、眼部用药、腔内给药、气管内给药、器官内给药、局部用药(包括口腔、舌下、真皮和眼内)、胃肠外给药(包括皮下、真皮下、肌肉、静脉和动脉注射)以及跨真皮给药，可以是缓释的、植入的以及肠衣包被的等。组合物适于制备成单个或多个单位剂量的形式，以及制成块状，可用药学领域所熟知的任何方法制备。这些不同制剂的实际制备和组合方法都是本领域所熟知的，无需在此详细描述。活性化合物可以每日一次或多次。本发明的组合物也可以试剂盒的形式提供，其中活性剂可以制成制剂的形式，也可以与其他组分一起分别提供，试剂盒内还包括剂型和使用方法的说明书。试剂盒还可以包含其他药物，如本专利描述的那些药物，当通过胃肠外途径给药时，可与载体一起装到独立的容器中，载体应当是无菌的。本发明的组合物还可以以冻干的形式提供，分装在不同的无菌容器内以便于在注射前加入脂质载体。见美国专利No.4,956,355；英国专利No.2,240,472；EPO专利申请No.429,187；PCT专利WO 91/04030；Mortensen，S.A.等，Int.J.Tiss.Reac.XII(3)：155-162(1990)；Greenberg，S.等，J.Clin.Pharm.30：596-608(1990)；Folkers，K等，P.N.A.S.(USA)87：8931-8934(1990)，相关的制备方法和化合物比例已被上述参考文献纳入。

适于呼吸道、鼻内、肺内和吸入给药的制剂是优选的，局部给药制剂、口服制剂和胃肠外给药制剂也是优选的。所有的制备方法都包括将活性化合物加入与其相关的载体的步骤，载体包含一种或多种辅助组分。一般来说，制剂的制备方法是将活性化合物均匀地与其相关的液体载体或精确分割的固体载体混合，如果需要再将产物塑型成所需的制剂。

适于口服给药的组合物可以包含在单个的单位中，如硬胶囊、扁胶囊、菱形或片剂，每种剂型都含有预定剂量的活性化合物；粉末或颗粒；水或非水液体制成的溶液或悬液；水包油或油包水乳剂。这种组合物可通过任何适宜的药学方法制备，其中包括将活性化合物与适宜载体混合的步骤。一般来说，本发明的组合物是通过将活性化合物与液体载体或精确分隔的固体载体均匀混合而制备的，如果需要再将所得到的混合物塑成不同的形状。例如，片剂可通过将含活性化合物的粉末或颗粒压缩或浇铸而制备，粉末或颗粒中还可以添加一种或多种辅助成分。压缩的片剂可通过将不流动的化合物如粉末或颗粒形式的化合物在合适的机器中压制而成，粉末或颗粒中还可以混以粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂和/或表面活性剂/分散剂。浇铸片剂可通过将惰性液体粘合剂湿润的粉末状化合物在合适的机器中铸造而成。糖浆可通过将活性化合物加入到浓缩的糖，如蔗糖水溶液中来制备，其中还可以添加其他的辅助成分。这种辅助成分包括调味品、合适的防腐剂、使糖保持结晶状态的物质以及增加其他成分溶解度的物质如多羟基乙醇，例如甘油和山梨醇。适于口服的组合物还可以包被本领域熟知的肠衣以防止组合物在胃内分解，使之在小肠内释放。适于口内或舌下含服的组合物包括含活性化合物的锭剂，其中含有调味品，通常是用蔗糖、阿拉伯胶或黄蓍胶，用惰性辅料如凝胶剂和甘油或者蔗糖和阿拉伯胶将化合物混合制备成含片。

适于通过胃肠外途径给药的组合物包括活性化合物的无菌水注射液或非水注射液，制剂优选与受体血液等渗。这些制剂可以含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和使组合物与受体血液等渗的溶质。水或非水无菌悬液含有悬浮的药物和增稠剂。组合物可置于单剂量或多剂量的容器中，例如封口的安瓿和小玻璃瓶内，也可以冻干粉的形式储存，在使用前添加无菌液体载体，如盐水或注射用水。即时的注射溶液和悬液可用上述的无菌粉末、颗粒或片剂制备。

鼻内喷雾或滴加的制剂由活性化合物的纯化水溶液组成，其中还含有防腐剂和等渗剂。这种制剂最好将pH和渗透压调整到与鼻粘膜相同的程度。

适于直肠或阴道内给药的制剂可采用栓剂的形式，添加合适的载体如可可脂或氢化脂肪或氢化脂肪酸。

眼用制剂可通过与鼻内喷雾制剂相似的方法制备，只是要将其pH和渗透压调整到与眼睛相匹配的程度。眼制剂一般用粘性载体制备，如油等，这是本领域所熟知的，这样可以很容易地滴到眼内而不会流出。

适于皮肤局部使用的组合物最好采用软膏剂、霜剂、洗剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂的形式。可用的载体包括凡士林、羊毛脂、聚乙烯甘油、乙醇、真皮穿透增强剂以及上述两种或多种载体的混合物。适于真皮穿透给药的组合物可采用能与应用部位表皮紧密接触的单个皮贴的形式以延长接触的时间。适于真皮穿透给药的组合物还可以通过离子等渗的方式给药，参见Pharmaceutical Research3：318(1986)，这种形式一般还要采用活性化合物缓冲水溶液。局部制剂含有溶于或悬于一种或多种介质中的活性化合物，如矿物油、石油、聚羟基乙醇或其他适用于局部药用制剂的介质。化妆品可采用固体或液体分形式，以便于在受试者的皮肤上扩散，其中包括粉底、粉饼、防晒品、美黑剂(self-tanning)和防晒乳或防晒油。这些制剂还可以选择性地添加本领域熟知的其他化妆品成分。这些制剂的例子有洗剂、霜剂、油和其他软膏剂，如含遮光剂和其他保护性成分的防晒剂、面部护理液和清洁剂、香波、护发素和护肤素，大多数都是本领域所熟知的并且已商品化。另外，添加其他辅助成分也是可以的，见下页，辅助成分可选自稀释剂、缓冲液、调味剂、着色剂和香味剂、粘合剂、分解质、表面活性剂、增稠剂、润滑剂、乳化剂、表面活性物质、润滑液、防腐剂(包括抗氧化剂)等。本领域所熟知的其他成分也可以使用。

本文所描述的活性化合物可通过任意合适的方式吸入、呼吸、鼻内给药或肺内滴注(进入肺内)到受体的呼吸系统内，优选通过制备含粉末状或液体鼻内、肺内、可呼吸或可吸入颗粒的气雾剂或喷雾剂来给药。含活性化合物的可吸入颗粒可被受试者吸入，即通过吸入或鼻内喷雾或通过滴注到呼吸道或肺内给予受试者。按照本发明，制剂可含有可吸入液体或固体活性化合物颗粒，其中包括大小足够小到可穿过口腔和咽喉进入支气管和肺泡的可吸入颗粒。一般来说，颗粒的大小约为0.05、0.1、0.5、1、2、4、6、8、10微米。优选约0.5微米到小于约5微米的可吸入颗粒。气雾剂或喷雾剂中不能吸入的颗粒沉淀在咽喉中被吞咽下去。因此气雾剂中不能吸入的颗粒越少越好。对于鼻内喷雾或肺内滴注来说，优选的颗粒尺寸约为8、10、20、25到35、50、100、150、250、500微米，以便于滞留在鼻腔内或者滴注和直接沉淀到肺内。液体制剂可以喷到呼吸道(鼻)和肺内，特别是用于新生儿和婴儿时。

制备气雾剂所用的活性化合物的液体药用组合物可通过将活性化合物与稳定的载体相混合而制备，如无热原的无菌水。含活性化合物的微米级可吸入颗粒的固体颗粒组合物的制备是用研钵和杵将干燥的活性化合物磨碎，然后将磨碎的组合物过400目的筛子以打碎或分离出较大的团块。由活性化合物组成的固体颗粒组合物还可以含有分散剂以促进气雾剂的形成。适宜的分散剂是乳糖，乳糖可与活性化合物以合适的比例混合，如按1∶1的重量比混合。含活性化合物的液滴气雾剂可通过任何适当的方式制备，如用喷雾器，见美国专利No.4,501,729。喷雾器有商品化的装置，该装置是使压缩气，一般为空气或氧气加速通过一个狭窄的口或者通过超声震动将活性成分的溶液或悬液变成治疗性的气雾。用在喷雾器中的适宜组合物包含以液体载体稀释溶解的活性剂，活性剂占组合物的40％w/w以上，但是载体的含量优选20％w/w以下，载体一般为水或稀释的乙醇水溶液，最好通过加入氯化钠使其与体液等渗。如果组合物不是无菌的，可以加入防腐成分，如甲基羟基苯甲酸盐、抗氧化剂、调味剂、挥发油、缓冲剂和表面活性剂。含活性化合物的固体颗粒气雾剂同样也可以用任何固体颗粒药用气雾剂发生器制备。气雾剂发生器可以将固体颗粒药物制备成可吸入的颗粒药剂，以适于人体给药的速率产生一定体积的含预定剂量药物的气雾剂。这种气雾剂发生器的例子包括压力定量气雾剂和吹入器。

现在对本发明已经作了普遍的描述，通过参考某些特殊的实施例可以更好地理解本发明，因此本文所包含的实施例用于解释本发明，除非特别指出，这些实施例并不意味着对本发明或其实施方式作出限定。

实施例

在下列的实施例中，DHEA代表脱氢表雄酮，s代表秒，mg代表毫克，kg代表千克，kw代表千瓦，Mhz代表兆赫，nmol代表纳摩尔。

实施例1和2：亚叶酸和DHEA对腺苷水平的体内效应

年轻雄性Fischer344大鼠(120克)通过管饲法喂服溶于羧甲纤维素中的脱氢表雄酮(300mg/kg)或甲基睾丸素(40mg/kg)，每日一次，持续14天。亚叶酸(50mg/kg)通过腹腔注射给药，每日一次，持续14天。在第15天时，通过颅内微波脉冲(1.33kw，2450MHZ，6.5s)处死动物，这种处理可以立即将所有的脑组织变性，阻止腺苷的进一步代谢。取出心脏，在液氮中快速冷冻10s。肝脏和肺整体取出，在液氮内快速冷冻30s。然后将脑组织切片。提取组织内的腺苷，使之衍生成1，N6-亚乙基腺嘌呤，并按照Clark和Dar的方法利用荧光光谱测定法用高效液相色谱(HPLC)进行分析(J.of Neuroscience Methods 25：243(1988))。这些试验的结果总结在下面的表1中。结果用平均值±SEM表示，κ代表与对照组比较时p＜0.05，ψ代表与DHEA或甲基睾丸素处理组相比p＜0.05。

表1：DHEA、δ-1-甲基睾丸素和亚叶酸对大鼠各种组织中腺苷水平的体内效应

处理方法	细胞内腺苷(nmols/mg蛋白质)
	细胞内腺苷(nmols/mg蛋白质)				心	肝	肺	脑
	对照DHEA(300mg/kg)甲基睾丸素(40mg/kg)甲基睾丸素(120mg/kg)亚叶酸(50mg/kg)DHEA(300mg/kg)+亚叶酸(50mg/kg)甲基睾丸素(120mg/kg)+亚叶酸(50mg/kg)	10.6±0.6(n＝12)6.7±0.5(n＝12)8.3±1.0(n＝6)6.0±0.4(n＝6)12.4±2.1(n＝5)11.1±0.6(n＝5)9.1±0.4(n＝6)	14.5±1.0(n＝12)16.4±1.4(n＝12)16.5±0.9(n＝6)5.1±0.5(n＝6)16.4±2.4(n＝5)18.8±1.5(n＝5)N.D.	3.1±0.2(n＝6)2.3±0.3(n＝6)N.D.N.D.N.D.N.D.N.D.	心	肝	肺	脑	0.5±0.04(n＝12)0.19±0.01(n＝12)0.42±0.06(n＝6)0.32±0.03(n＝6)0.72±0.09(n＝5)0.55±0.09(n＝5)0.60±0.06(n＝6)
N.D.＝未确定

这些试验的结果说明大鼠每日一次给予DHEA或甲基睾丸素，给予两周后可使多个器官内的腺苷耗竭。耗竭最严重的是在脑(DHEA处理耗竭60％，高剂量的甲基睾丸素处理耗竭34％)和心脏(DHEA处理耗竭37％，高剂量的甲基睾丸素处理耗竭22％)内。再添加亚叶酸可完全消除类固醇介导的腺苷耗竭。单独给予亚叶酸可使所有试验的器官内腺苷水平升高。

实施例3：试验模型的制备

细胞培养物HT-29SF细胞是HY-29细胞(ATCC，Rockville，Md.)的一个亚系，可在完全定义的无血清的PC-1培养基(Ventrex，Portland，Me.)内生长。培养细胞在这种培养基中培养，培养温度为37℃(含5％CO₂的湿润空气中)。细胞长满时用胰酶/EDTA(Gibco，Grand Island，N.Y.)消化后传代，每24小时换一次培养基。在这种培养条件下，HT-27SF细胞处于对数生长期时倍增的时间为24小时。

实施例4：流式细胞术

将细胞接种到60mm培养皿中，每种细胞接种两份，每个培养皿接种10⁵个细胞。细胞培养物内加入0、25、50或200μM DHEA用于分析细胞周期的分布。细胞培养物内加入0或25μM DHEA用于分析DHEA对细胞周期的影响。培养基中添加MVA、CH、RN、MVA和CH或MVA、CH和RN或什么都不添加。分别于0、24、48、74小时后用胰酶消化，固定并用Bauer等，Cancer Res.，46，3173-3178(1986)描述的方法染色。简言之，离心收集细胞，重悬到冷磷酸盐缓冲液中。细胞用70％的乙醇固定，洗涤，然后在重悬到冷磷酸盐缓冲液中。然后加入1ml低渗染色液[50μg/ml碘化丙啶(Sigma Chemical Co.)，20μg/ml RNA酶A(Boehringer Mannheim，Indianapolis，Ind.)，30μg/ml聚乙二醇，0.1％ Triton X-100，溶于5mM柠檬酸盐缓冲液中]，室温下静置10分钟，然后加入1ml等渗染色液[碘化丙啶，聚乙二醇，Triton X-100，溶于0.4M氯化钠溶液中]，用装备有脉冲幅度/脉冲区域双分辨率的流式细胞仪(Becton Dickinson Immunocytometry Systems，加利福尼亚，圣何塞)进行分析。校正好荧光束后进行分析，每个样品最少分析2×10⁴个细胞，1024个通道中每个通道内荧光强度增强的细胞总数用s代表，所得到的直方图用Cellfit分析程序(Becton Dickinson)进行分析。

实施例5：DHEA对细胞生长的影响

细胞接种到30mm培养皿中，每种细胞接种4个培养皿，每个培养皿接种25000细胞。2天后加入0、12.5、25、50或200μM DHEA。1、24、48和72小时后用Coulter计数仪(Z型；Coulter Electronics，Inc.Hialeah，Fla.)进行细胞计数。DHEA(AKZO，瑞士，巴塞尔)溶于二甲基亚砜中，过滤除菌，储存于-20℃备用。

图1显示的是DHEA对HT-29细胞生长的抑制。点代表细胞数，横条代表SEM。

每个数据点代表4个复孔，试验重复三次。SEM横条不明显的地方说明SEM比符号还要小。与对照组相比，加入12.5μM DHEA后72小时、25或50μM DHEA后48小时、200μM DHEA后24小时可使细胞数减少，说明DHEA可以时间依赖的方式和剂量依赖的方式抑制细胞的生长。

实施例6：DHEA对细胞周期的影响

为了检验DHEA对细胞周期分布的影响，接种HT-29SF细胞(10⁵细胞/60mm培养皿)，48小时后用0、25、50或200μM DHEA处理。图2显示的是DHEA对HT-29SF细胞周期分布的影响。24、48和72小时后收获细胞，用乙醇固定，然后用碘化丙啶染色，通过流式细胞仪分析DNA含量/细胞。用Cellfit细胞周期分析程序计算处于G₁、S和G₂M期的细胞百分数。为了区分S期用四角形标记。两次测定得到的数据用典型直方图显示。试验重复三次。

25或50μM DHEA处理后的最初24小时内细胞培养物中的细胞周期分布没有变化，但是随着处理时间的延长，处于S期的细胞比例逐渐减少，处于G1、S和G₂M期的细胞百分数用Cellfit细胞周期分析程序计算。为了区分S期用四角形标记。两次测定得到的数据用典型直方图显示。试验重复三次。25或50μM DHEA处理后的最初24小时内细胞培养物中的细胞周期分布没有变化，但是随着处理时间的延长，处于S期的细胞比例逐渐减少，处于G1期的细胞百分数在处理后72小时增加。处于G₂M期的细胞在处理后48小时有一个瞬时的明显增加。用200μM DHEA处理所得到的结果类似，在处理后24小时处于S期的细胞比例开始减少，并且一直持续到试验结束。这说明可以时间依赖的方式和剂量依赖的方式将HT-29SF阻断在G1期。

实施例7：DHEA介导的细胞生长和细胞周期效应的反转

DHEA介导的生长抑制的反转。细胞按上述方法接种，2天后用含0或25μM DHEA的培养基培养，培养基中添加甲羟戊酸(″MVA″；mM)、鲨烯(SQ；80μM)、胆固醇(CH；15μg/ml)、MVA+CH、核糖核苷(RN；尿嘧啶核苷、胞嘧啶核苷、腺苷和鸟嘌呤核苷，终浓度为30μM)、脱氧核糖核苷(DN；胸腺嘧啶核苷、脱氧胞苷、脱氧腺苷和脱氧鸟苷，终浓度为20μM)、RN+DN、MVA+CH+RN或不添加上述物质的培养基。所有化合物都购自Sigma Chemical Co.(St.Louis，Mo.)。胆固醇在使用前用乙醇即时溶解。结果显示在不含DHEA时即使RN和DN达到最大浓度对细胞的生长也没有影响。

图3显示的是DHEA诱导的HT-29SF细胞生长抑制的反转。在A中，培养基内添加了2μM MVA、80μM SQ、15μg/ml CH或MVA+CH或者不添加上述物质(CON)。在B中，培养基添加了RN的混合物，其中含30μM的尿嘧啶核苷、胞嘧啶核苷、腺苷和鸟嘌呤核苷；或者DN的混合物，其中含20μM的胸腺嘧啶核苷、脱氧胞苷、脱氧腺苷和脱氧鸟苷；RN+DN；或MVA+CH+RN。分别于处理前或处理后48小时进行细胞计数，细胞的生长计算为48小时处理期间内细胞数目的增加值。柱形代表未处理对照的细胞生长百分数；横条代表SEM。未处理对照组的细胞数目增加值是173，370″6518。每个数据点代表了四次独立试验中四个重复培养皿所得到的数据平均值。统计学分析采用斯氏t检验，与对照组相比κ代表p＜0.01；ψ代表p＜0.001。在无DHEA的条件下加入上述物质对细胞的生长没有影响。

在这些条件下，DHEA诱导的生长抑制可被MVA或MVA+CH部分克服。单独加入SQ或CH没有这种效应。这说明DHEA的细胞增殖抑制活性部分是由内源性甲醛戊酸的缺失造成的，内源性甲醛戊酸的缺失可导致对胆固醇通路中早期即时生物合成的抑制，这是细胞生长所必须的。而且，加入RN或RN+DN后可使其生长得到部分恢复，但是加入DN没有这种效果，说明甲醛戊酸和核苷酸池的耗竭参与DHEA诱导的生长抑制作用。但是加入这些物质，包括联合加入MVA、CH和RN也不能完全克服DHEA的生长抑制效应，说明DHEA具有细胞毒效应或者可能有其他的生化通路参与其中。

实施例8：DHEA对细胞周期效应的反转

HT-29SF细胞用25μM DHEA和其他化合物如MVA、CH或RN处理以检测其阻断DHEA介导的细胞周期特异性效应的能力。在处理后48和72小时通过流式细胞术分析细胞周期分布。图4显示的使DHEA诱导的HT-29SF细胞周期停滞的反转情况。细胞接种(10⁵细胞/60mm培养皿)后48小时用0或25μM DHEA处理。培养基添加2μMMVA；15μg/ml CH；含30μM尿嘧啶核苷、胞嘧啶核苷、腺苷和尿嘌呤核苷的RN混合物；MVA+CH；或MVA+CH+RN或不添加任何物质。48或72小时后收获细胞，用乙醇固定，碘化丙啶染色，流式细胞仪分析每个细胞内的DNA含量。用Cellfit细胞周期分析程序计算处于G₁、S和G₂M期细胞的百分数。为了区分S期用四角形标记。两次测定得到的数据用典型直方图显示。试验重复2次。在无DHEA的条件下加入上述物质对细胞周期的分布没有影响。

随着处理时间的延长，DHEA可逐渐降低处于S期的细胞的比例。加入MVA后的48小时内可部分阻止这种效应，但是72小时后这种效应消失，加入MVA+CH72小时也能部分阻止S期细胞的减少，说明在延长接触时间时MVA和CH都是细胞生长所需要的。加入MVA、CH和RN可明显使细胞生长得以恢复，但是还是无法恢复到未处理的对照组的S期细胞比例。单独加入CH或RN后48或72小时都没有什么效果。从形态学上来看，加入DHEA后细胞变成圆形，这种变化只需在培养基内加入MVA就可以阻止(数据未列出)。图4中所显示的DHEA处理后72小时的某些DNA直方图也说明存在DNA含量明显减少的细胞亚群。由于HT-29细胞系是已知的含各种数目染色体的细胞群(68-72；ATCC)，因此它代表了一个含减少染色体的亚群。

实施例9：结论

上述实施例证明用已知可耗竭内源性甲醛戊酸的DHEA浓度处理人结肠癌细胞系HT-29SF可使细胞的生长受到抑制，并且导致G1停滞，加入MVA到培养基内可部分阻止这种效应。DHEA所产生的对蛋白异戊二烯化的效应在许多方面与特异性3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A还原酶抑制剂如洛伐他丁和抗帕丁所观察到的效应类似。但是，DHEA并不是直接抑制甲醛戊酸的生物合成，而是以多效性的方式发挥其对细胞周期和细胞生长的影响，这种方式涉及核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸的生物合成，还可以有其他因素参与。

实施例10：异丙托溴铵0.03％(IB)和倍氯米松二丙酸酯的比较

33个非变应性常年性鼻炎(NAPR)儿童和113个变应性常年性鼻炎(APR)受试者随机分成两组，分别进行为期6个月的IB或BDP治疗，试验为单盲多中心临床试验，其中医生不知道使用哪种治疗。在每次珍视时受试者和医生都要记录症状如鼻溢液、鼻充血和喷嚏的控制情况。在治疗开始或治疗6个月时受试者还要填写生活质量调查表。研究结果表明，治疗6个月后与治疗开始时相比两种治疗方式都可以明显改善受试者的鼻溢液、鼻充血和喷嚏症状(p＜0.05)。BDP对喷嚏的控制效果要鼻IB好(p＜0.05)。在给予IB的受试者中，不同的珍视时间点得到的结果是对鼻溢液的控制从61％到73％，对鼻充血的控制从43％到60％，对喷嚏的控制从39％到43％。BDP的结果是对鼻溢液的控制从68％到78％，对鼻充血的控制从55％到72％，对喷嚏的控制从54％到68％。对生活质量的评价结果显示两种药物都可以显著降低由于鼻溢液而造成的对日常活动的干扰和对情绪的影响，与基线相比p＜0.05。两种药物都可以被很好地耐受，IB引起的鼻出血和易激惹比BDP低。异丙托溴铵用于控制鼻溢液和鼻溢液造成的对上学、做作业的精力集中程度及睡眠的干扰是安全的、有效的。异丙托溴铵对鼻溢液的控制效果与BDP相似，对鼻充血的效果要稍好于BDP。受试者和医生都更认可BDP对喷嚏的控制效果。Milgrom等，Ann.Allergy Asthma Immunol.83(2)：105-11(1999。在实施例11到16中，微粉化的DHEA和微粉化的抗毒蕈碱药物(如羟基萘甲酸盐)以下面所给出的比例，以干粉的形式或者分散到少量稳定剂、二辛基磺基琥珀酸二钠、卵磷脂、油酸甘油酯或脱水山梨醇三油酸酯/三氯氟甲烷溶液中，然后再悬浮到含大量三氯氟甲烷溶液的容器中。所得到的悬液再用适当的混合系统进一步混匀，如高切变混合器、超声混合器或微液滴混合器，直到形成极其细小的分散体。然后在适宜的填充设备内不断循环，这种设备可以冷填充或压力填充二氯二氟甲烷。悬液还可以在适宜的冷却的稳定剂三氯氟甲烷/二氯二氟甲烷中制备。

实施例11：异丙托溴铵用于治疗成人和儿童急性哮喘发作

下面总结的是异丙托溴铵的生理作用及其作为抗胆碱能支气管扩张剂的应用。对现有的随机临床试验及两个中间分析(meta-analyses)所得到的结果加以总结以确定吸入性β2激动剂再添加吸入性的异丙托溴铵是否能有效地治疗儿童和成人的急性哮喘发作。现在已经有一些随机对照临床试验报道评价了异丙托溴铵和现有的β2激动剂对成人急性哮喘发作的效果。10个临床试验报道了1377例成人哮喘，将得到的结果进行中间分析(meta-analysis)，所用的方法为加权平均法。与只接受β2激动剂而不加异丙托溴铵的受试者相比，雾化的异丙托溴铵/β2激动剂联合治疗可使1秒的用力呼吸量提高7.3％(95％置信区间(CI)，3.8-10.9％)，呼吸流量峰值提高22.1％(95％CI，11.0-33.2％)。三个临床试验中所报道的成人入院数据(n＝1064)表明使用异丙托溴铵住院的相对风险为0.80(95％CI，0.61-1.06)。同样，儿科哮喘发作的随机对照研究及儿科哮喘受试者的中间分析(meta-analysis)结果表明β2激动剂联合异丙托溴铵治疗可改善肺功能，降低住院率，特别是对哮喘重症发作的儿童来说。

与β2激动剂联合应用时，成人和儿科研究都没有报道由异丙托溴铵引起的严重副作用。

总之，当异丙托溴铵与β2激动剂联合使用以治疗急性哮喘发作时可以使气道阻塞得到温和的具有统计学意义的改善。对于儿科哮喘发作来说，使用异丙托溴铵也可以起到一定的临床疗效。但是对于成人来说其结果还不是十分明确。利用异丙托溴铵/β2激动剂联合治疗急性哮喘发作已被推荐使用，因为添加异丙托溴铵显示有一定的生理效果，并且无副作用。Aaron S.D.，J.Asthma 38(7)：521-30(2001)。

实施例12：噻托溴铵对COPD患者的疗效*

噻托溴铵是一种新的长效抗胆碱能药物，与异丙托溴铵一样，也是四铵衍生物。它与毒蕈碱受体有很高的亲和力，但是从M(1)和M(3)毒蕈碱受体上解离的速度非常缓慢。药理学研究表明该药物具有抗胆碱能激动剂的保护性效应，可以阻断胆碱能激动剂对动物和人呼吸道上胆碱能神经的刺激。在一个II期临床研究中，吸入单剂量的噻托溴铵可在哮喘和慢性阻塞性肺疾病(COPD)受试者中产生支气管扩张效应和支气管保护效应，这种效应可持续24小时。在III期临床研究中，每日一次吸入的噻托溴铵对于COPD患者来说是一种有效的支气管扩张剂，可显著改善肺功能，减轻受试者的症状，其效果比每日四次使用异丙托溴铵更显著。药物可被很好耐受，所观察到的副作用只有口干，发生率约为10％。因此，抗胆碱能药物可作为治疗COPD的支气管扩张剂，未来噻托溴铵可能会成为应用最广泛的治疗COPD的支气管扩张剂。

*Barnes，P.J.，Expert Opin.Investing.Drugs 10(4)：733(2001)。

实施例13：异丙托溴铵和沙丁胺醇对COPD患者的疗效

为了确定异丙托溴铵和沙丁胺醇联合治疗COPD患者的效果是否比单独的异丙托溴铵或沙丁胺醇治疗的效果更好，或者是否能产生更协调的肺功能检验(PFT)反应率。试验设计：追溯检索有关最近完成的为期3个月的随机双盲平行多中心III期临床试验的两个综述。设定：门诊病人。病人：稳定的COPD患者，共1067例。治疗方案：异丙托溴铵(36mg qid)，沙丁胺醇碱(180mg qid)或等量的异丙托溴铵和硫酸沙丁胺醇(分别为42mg和240mg qid)。检测方法及结果：用与基线值相比FEV1增加12％或15％来分析PFT反应率，分别于各试验的1、29、57和85天检测各组受试者。不论用FEV1增加12％还是15％来定义阳性反应，等价的异丙托溴铵和硫酸沙丁胺醇联合治疗的效果都超过单个药物的治疗效果(p＜0.05；所有的比较都在30分钟内完成)。另外，在起始PFT期间接受异丙托溴铵和硫酸沙丁胺醇联合治疗的受试者有超过80％的FEV1增加都为15％或更高，并且这种效果可在开始检测后持续3个月。结论：利用异丙托溴铵和硫酸沙丁胺醇联合治疗COPD患者所得到的PFT可逆性要超过单个药物。

*Dorinsky等，Chest115(4)：966-71(1999)。

实施例14：抗毒蕈碱药物：对COPD和变应性鼻炎的疗效

治疗呼吸道疾病的抗毒蕈碱药物可作为一种有效的支气管扩张剂用于治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)，也可以作为一种抗分泌药物用于治疗水性鼻溢液(变应性鼻炎)。本发明的制剂只限于异丙托溴铵，是一种安全有效的呼吸道疾病治疗方法。通过肺活量测定法已经证明异丙托溴铵是一种有效的支气管扩张剂，不论是单独使用还是与沙丁胺醇联合使用。有证据表明抗胆碱能药物可影响COPD的其他重要方面，如动力性充气过度。

*小Witek，T.J.，Respir.Case Clin.N.Am 5(4)：521-36(1999)。

实施例16：压力定量气雾剂

活性剂每次激发的量

异丙托溴铵 25.0μg

DHEA 400mg

稳定剂 5.0μg

溶剂1 23.70mg

溶剂2 61.25mg

实施例17：压力定量气雾剂

活性剂每次激发的量

异丙托溴铵 25.0μg

DHEA-S 400mg

稳定剂 7.5μg

溶剂1 23.67mg

溶剂2 61.25mg

实施例18：压力定量气雾剂

活性剂每次激发的量

异丙托溴铵 25.0μg

DHEA 400.0mg

稳定剂 15.0μg

溶剂1 23.56mg

溶剂2 61.25mg

实施例19：压力定量气雾剂

活性剂每次激发的量

异丙托溴铵 25.0μg

DHEA-S 400.0mg

稳定剂 15.0μg

溶剂1 23.56mg

溶剂2 61.25mg

在下面的实施例20-23中，活性剂被微粉化，并与乳糖按上面所给的比例润湿成块。混合物填充到硬明胶胶囊或药筒中或装入特制的双箔泡状包装(Rotadisks泡状包装，使用吸入器如Rotahaler吸入器(Glaxo^)来施用Glaxo^吸入器，或用Diskhaler吸入器来输递泡状包装(Glaxo^)。

实施例20：压力定量干粉制剂

活性剂每个药筒或每个泡的含量

异丙托溴铵 72.5μg

DHEA 1.00mg

乳糖Ph.Eur. 12.5或25.0mg

实施例21：压力定量干粉制剂

活性剂每个药筒或每个泡的含量

异丙托溴铵 72.5μg

DHEA-S 1mg

乳糖Ph.Eur. 12.5或25.0mg

实施例22：压力定量干粉制剂

活性剂每个药筒或每个泡的含量

噻托溴铵 72.5μg

DHEA 1mg

乳糖Ph.Eur. 12.5或25.0mg

实施例23：压力定量干粉制剂

活性剂每个药筒或每个泡的含量

噻托溴铵 72.5μg

DHEA-S 1mg

乳糖Ph.Eur. 12.5或25.0mg

实施例24：DHEA-S对肺功能和炎症的影响

本研究以尘螨致敏的短尾猴为模型，检测用DHEA-S治疗变态反应原诱导的早期反应5天时的效果。在治疗前一周测定的数据为基线参数。在试验的1到5天内，每天1次用一个覆盖在鼻子和嘴上的面罩通过喷雾(Pari LC+)将DHEA-S(5mg/ml，2ml雾)或等量的盐水给予动物。在第3天给药后几小时利用变态反应原激发动物并测定肺功能，变态反应原激发后48小时收集支气管-肺泡灌洗剂。本试验包括6只动物，使用交叉设计，两次研究之间至少间隔4周。DHEA-S治疗可使动物的疾病状态出现下列变化：

早期反应期间的肺顺应性得到改善。见图4.3.1.1。与盐水相比，用DHEA-S治疗可使变态反应原激发后的呼吸道顺应性下降的幅度减少87％。DHEA-S治疗组在变态反应原激发后的顺应性的变化所对应的曲线下总面积为-49±116，而盐水对照组为-394±127，p＝0.035。早期反应期间的肺阻力得到改善。见图4.3.1.2。与盐水相比，用DHEA-S治疗可使变态反应原激发后的呼吸道阻力增加的幅度减少90％。DHEA-S治疗组在变态反应原激发后肺阻力的变化所对应的曲线下总面积为54±90，而盐水对照组为564±266，p＝0.045。与盐水相比，变态反应原激发后48小时用DHEA-S治疗可使BALF内的嗜酸性粒细胞百分率下降约57％，p＝0.012。见图4.3.1.3。另外，与盐水相比，变态反应原激发后48小时用DHEA-S治疗可使BALF内的中性粒细胞百分率下降约42％，p＝0.008。见图4.3.1.3。

这些结果说明雾化的DHEA-S可减轻炎症反应，阻止由变态反应原所诱导的肺功能的下降。

(A)基础变态反应

变态反应原诱导的免疫反应

变态反应原气雾剂给予动物后48小时，尘螨可诱导BAL液中的嗜酸性粒细胞比例上升。盐水对照组的嗜酸性粒细胞比例从0.25％±0.17％升高到4.8％±1.4％(p＝0.018)，说明变态反应原可诱导嗜酸性粒细胞迁移到呼吸道内。

对变态反应原的肺功能反应

盐水处理后给予动物变态反应原可诱导明显的早期反应，1∶100稀释的尘螨可使顺应性平均下降30％，肺阻力增加50％。这些数据说明本试验的动物接触相关抗原后可产生呼吸道炎症反应，肺功能发生改变。

(B)DHEA-S对肺功能的影响

尘螨诱导的早期反应

对呼吸道阻塞的效应通过测定变态反应原激发后动力学顺应性的变化来确定。变态反应原激发后15分钟监测变态反应的短尾猴，测定值对时间作图。动力学顺应性的变化用与变态反应原激发前所记录的动物起始数值相比顺应性变化的百分率来表示。用曲线下面积(AUC)来计算变态反应原和/或治疗所出现的变化，AUC单位定义为变化百分数×分钟。与盐水相比，用DHEA-S治疗可使变态反应原激发后的呼吸道顺应性下降的幅度减少87％。盐水对照组的总AUC为-394±127，而DHEA-S治疗组为-49±116，p＝0.035。见图4.3.1.1；4.3.1.2。载体治疗动物与DHEA-S治疗动物总AUC的差异用斯氏配对t-检验来确定是否有统计学意义，结果p＝0.035。同样，与盐水相比，用DHEA-S治疗可使变态反应原激发后的呼吸道阻力增加的幅度减少90％。盐水治疗组呼吸道阻力的AUC明显大于DHEA-S治疗组(564±266对54±90单位)(p＝0.045)。

(C)DHEA-S对炎症反应的影响

BALF细胞计数

变态反应原激发后48小时DHEA-S可使迁移到BALF内的白细胞总数减少。见图4.3.1.3。盐水治疗组的白细胞数从31.4×10⁴/ml升高到54.9×10⁴/ml，而DHEA-S治疗组白细胞数从34.5×10⁴/ml升高到39.4×10⁴/ml。变态反应原激发后盐水治疗组嗜酸性粒细胞百分率升高，而DHEA-S治疗组的嗜酸性粒细胞数在变态反应原激发前后没有明显变化。见图4.3.1.3。与盐水治疗(4.3±1.7×10⁴/ml)相比，DHEA-S治疗(1.6±0.8×10⁴/ml)可使变态反应原激发后的嗜酸性粒细胞数(细胞/ml)的增加降低约64％，但是二者的差异没有统计学意义。变态反应原激发后，盐水对照组BALF内的中性粒细胞明显升高，p＝0.037。DHEA-S治疗可使中性粒细胞内流量达到与变态反应原激发前无明显差别的水平。见图4.3.1.3。盐水对照组中性粒细胞的绝对值(细胞/ml)从22.0±10.3×10⁴/ml，而DHEA-S治疗组中性粒细胞的绝对值仅升高到9.7±2.2×10⁴/ml。

结论

本试验的结果说明DHEA-S可使变态反应性短尾猴在吸入变态反应原后炎症反应减轻。嗜酸性粒细胞炎症反应和中性粒细胞内流量受到抑制。同时证明了对变态反应原的早期反应也受到抑制。这些结果与变态反应性兔模型所得到的数据一致。

实施例25：DHEA-S对变态反应原诱导的呼吸道阻塞和肺炎反应的影响

本试验以尘螨致敏的兔为模型确定7天的DHEA-S治疗对变态反应原诱导的支气管高反应(BHR)、早晚期反应和肺炎反应的影响。首先确定基线BHR和炎症反应。在接下来的时间内用未处理的兔进行变态反应原接种、肺功能检测和BALF。变态反应原激发后24小时测定组胺敏感性。兔进行试验3周后从新确定其基线值。在接下来的几周内，每日1次用气管内粉末注射器通过支气管导管将DHEA-S(5mg/天)注射到麻醉的兔体内。在最后一次治疗后第8天和第24天用变态反应原激发兔，按照上述方法测定肺功能和BALF。在变态反应原激发后第9天和第24天，给予动物组织胺。由于药物在使用前未进行粉末化处理因此到达肺深部的药物只是给药剂量的一部分。本试验包括4只动物，试验用交叉设计。用DHEA-S处理可使动物的疾病状态发生变化，具体变化描述在下面的自然段中。

在早期和晚期反应期间肺的顺应性得以改善。见图4.3.2.1。与单独用变态反应原处理相比，EPI-12312治疗可使呼吸道顺应性降低的幅度减少86％。DHEA-S处理组中变态反应原激发后顺应性的变化所对应的曲线下总面积为-20±23，而对照组为-146±29，p＝0.036。早期和晚期反应期间肺阻力得以改善。见图4.3.2.1。与单独用变态反应原处理相比，EPI-12312治疗可使变态反应原激发后的呼吸道阻力升高的幅度减少54％。DHEA-S处理组中变态反应原激发后的肺阻力的变化所对应的曲线下总面积为495±341，而对照组为1069±243，二者没有达到统计学意义上的差异，因为少数动物出现较大的偏差。另外，尘螨激发后侵润到BAL液中的细胞出现与DHEA-S相关的温和变化。最后，变态反应原激发后24小时可观察到嗜酸性粒细胞的轻微抑制，在激发15分钟(10.2×10⁴对1.3×10⁴细胞/ml)和6小时(43.8×10⁴对32.2×10⁴细胞/ml)时中性粒细胞出现明显抑制。另外，DHEA-S治疗组在变态反应原激发后24小时组胺反应有下降的趋势。

这些结果说明以粉末的形式给予DHEA-S可减轻花粉诱导的炎症反应和肺功能的下降。

(A)基础变态反应

变态反应原诱导的炎症反应

变态反应原气雾剂给予动物后6小时尘螨可诱导BAL液中的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和巨噬细胞的比例明显升高。盐水对照组的嗜酸性粒细胞比例在尘螨激发6小时后从不到0.2％升高到6％，说明变态反应原可诱导嗜酸性粒细胞迁移到呼吸道内。

肺功能

腺苷的PC₄₀在四只动物中的范围为0.55-4.56mg/ml，平均值为2.5mg/ml。在载体对照组中，尘螨激发后早期反应期间的最大顺应性与盐水相比下降45％，晚期反应期间的最大顺应性与盐水相比下降28％。尘螨激发后在早期反应和晚期反应期间的最大气道阻力分别增加234％和290％。这些数据证明本试验的动物对雾化的腺苷是敏感的，接触相关抗原后可产生呼吸道炎症反应，肺功能发生改变。

(B)DHEA-S对肺功能的影响

尘螨对顺应性的影响

对呼吸道阻塞的影响效果用变态反应原激发后的动力学顺应性和肺总阻力的变化来评价。兔接触变态反应原后6小时开始监测，测定值对时间作图。动力学顺应性的变化用与变态反应原激发前所记录的动物起始数值相比顺应性变化的百分率来表示。用曲线下面积(AUC)来计算变态反应原激发和/或治疗所出现的变化，AUC单位定义为变化百分数×小时。与单独使用变态反应原相比，用DHEA-S治疗可使接触变态反应原后的呼吸道顺应性下降的幅度减少86％。单独给予变态反应原后总AUC是-146单位，而用DHEA-S处理的动物为-20单位。载体和DHEA-S处理动物的总AUC的差异用斯氏配对t-检验进行统计学分析，p＝0.036。同样，与单独使用变态反应原相比，用DHEA-S治疗可使变态反应原激发后的呼吸道阻力上升的幅度减少54％。单独给予变态反应原和DHEA-S治疗后早期反应期间AUC的差异是有统计学意义的，经配对t检验分析后得到p＝0.023。用配对t检验发现载体组和药物治疗组之间的AUC差异在晚期反应期间是有统计学意义的。

尘螨对肺阻力和组胺反应的影响

动物接触尘螨气雾剂后6小时给予DHEA-S可使呼吸道阻力的变化减弱超过200％。对照组对治疗组的总AUC是1069对495。但是，由于有少数动物测得的数据偏差较大，所以没有达到有统计学意义的程度。DHEA-S治疗可改变对组胺高反应的变化趋势。盐水处理组的组胺反应比DHEA-S治疗组高并且变化更大。

(C)DHEA-S对炎症反应的影响

BALF细胞计数

DHEA-S处理可使迁移到BAL液中的炎症细胞数减少。与对照组相比，DHEA-S处理组的动物在变态反应原激发后24小时BALF内的嗜酸性粒细胞数目(2.0×10⁴/ml对3.2×10⁴/ml)和巨噬细胞数目(17.8×l0⁴/ml对24.1×10⁴/ml)都减少。尘螨激发后15分钟中性粒细胞(1.3×10⁴/ml对10.2×10⁴/ml)和巨噬细胞(19.4×10⁴/ml对29.6×10⁴/ml)也都减少。这种减少可以持续到6小时那个时间点，但是这时减少的幅度不很明显。应该注意的是尘螨激发后24小时这个时间点是DHEA-S治疗后48小时。

结论

尽管早期反应和晚期反应都被显著抑制，抑制范围在50％到93％之间，但是只有早期反应有统计学意义。在尘螨激发前给予DHEA-S可明显改善肺的顺应性和肺阻力，对组胺反应有轻微的影响。尘螨激发后炎症细胞有减少的趋势，包括嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和巨噬细胞。如果使用微粉化的制剂可能能得到更好的结果，因为微粉化的制剂可确保药物到达肺的深处。

实施例26：DHEA-S对变态反应原诱导的呼吸道阻塞和肺炎反应的影响

本试验以尘螨致敏的兔为模型确定7天的DHEA-S治疗对变态反应原诱导的支气管高反应(BHR)、早晚期反应和肺炎反应的影响。首先确定基线BHR和炎症反应。在第1到7天，每日一次通过覆盖在鼻子和嘴上的儿科面罩将DHEA-S(5mg/ml，2ml气雾剂)或等量的载体给予动物。在最后一次治疗后第8天和第24天使兔接触变态反应原，测定肺功能和BALF。在变态反应原激发后第9天和第24天，给予动物组织胺，取出动物肺进行组织学分析。本试验包括5只动物，试验用交叉设计。两次研究之间间隔3周，肺脏仅在第二次研究期间被取出。用DHEA-S处理可使动物的疾病状态发生变化，具体变化描述在下面的自然段中。

在早期和晚期反应期间肺的顺应性得以改善。见图4.3.3.1。与载体处理组相比，DHEA-S治疗可使变态反应原激发后的呼吸道顺应性降低的幅度减少62％。DHEA-S处理组中变态反应原激发后的顺应性的变化所对应的曲线下总面积为+38±27，而对照组为-99±11，p＝0.02。DHEA-S还可以使迁移到BAL液中的炎症细胞数下降68％(图4.3.3.2)。与载体对照组相比，DHEA-S处理组的动物在变态反应原激发后6小时BALF内的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和巨噬细胞分别减少52％、69％和68％，p＜0.01。气道壁的炎症减轻。见本专利的附图4.3.3.3到4.3.3.6。兽医病理学家在不知道如何分组的情况下进行病理学检测，结果发现DHEA-S治疗可减少血管和支气管上的炎症细胞数，支气管相关的淋巴组织过度增生情况和上皮腐烂情况减轻。这些结果说DHEA-S气雾剂可减轻炎症反应，降低由于变态反应原激发而导致的肺功能下降。

(A)基础变态反应

变态反应原诱导的炎症反应

变态反应原气雾剂给予动物后6小时尘螨可诱导BAL液中的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和巨噬细胞的数目明显升高。盐水对照组的嗜酸性粒细胞比例在尘螨激发6小时后从不到0.2％升高到6％，说明变态反应原可诱导嗜酸性粒细胞迁移到呼吸道内。

肺功能

腺苷的PC₄₀在5只动物中的范围为2.0-8.4mg/ml，平均值为4.5mg/ml。在载体对照组中，尘螨激发后早期反应期间的最大顺应性与盐水相比下降32％，晚期反应期间的最大顺应性与盐水相比下降21％。尘螨激发后在早期反应和晚期反应期间的最大气道阻力分别增加64％和82％。这些数据证明本试验的动物对雾化的腺苷是敏感的，接触相关抗原后可产生呼吸道炎症反应，肺功能发生改变。

(B)DHEA-S对肺功能的影响

尘螨对顺应性的影响

对呼吸道阻塞的影响效果用变态反应原激发后的动力学顺应性和肺总阻力的变化来评价。兔接触变态反应原后6小时开始监测，测定值对时间作图。动力学顺应性的变化用与变态反应原激发前所记录的动物起始数值相比顺应性变化的百分率来表示。用曲线下面积(AUC)来计算变态反应原激发和/或治疗所出现的变化，AUC单位定义为变化百分数×小时。与载体处理组相比，用DHEA-S治疗可使变态反应原激发后的呼吸道顺应性下降的幅度减少62％。单独给予变态反应原后总AUC是-99单位，而用DHEA-S处理的动物为+38单位。载体和DHEA-S处理动物的总AUC的差异用斯氏配对t-检验进行统计学分析，p＝0.022。同样，单独给予载体和DHEA-S治疗后晚期反应期间总AUC的差异是有统计学意义的，经配对t检验分析后得到p＝0.012。用配对t检验发现载体组和药物治疗组之间的AUC差异在早期反应期间是有统计学意义的。但是趋势分析配合多项式模型分析重复测量的结果发现载体对照组和药物治疗组早期反应期间顺应性曲线的形状是不同的，p＜0.04。

尘螨诱导的肺阻力和组胺反应

动物接触尘螨气雾剂后6小时给予DHEA-S对呼吸道阻力的变化没有影响。对照组对治疗组的总AUC是315对377。在本试验中DHEA-S对肺阻力没有影响。这可能是由于变态反应性兔模型的特殊性，该模型的设计用于研究顺应性或交叉设计。需要指出的是目前所用的类固醇药物在相同的情况下用于治疗哮喘或COPD时可能也无法降低变态反应原诱导的肺阻力的增加。同样，DHEA-S治疗也不能改善对组胺的高反应。对照组动物和DHEA-S处理组动物的PC₅₀分别为0.84mg/ml和0.86mg/ml。应当指出的是组胺反应的测定是在DHEA-S治疗后48小时进行的。

(C)DHEA-S对炎症反应的影响

BALF细胞计数

DHEA-S处理可使迁移到BAL液中的炎症细胞数减少。与对照组相比，DHEA-S处理组的动物在变态反应原激发后6小时BALF内的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和巨噬细胞数目都减少，通过ANOVA和Fisher检验LSD得到p＜0.01。尘螨激发后6小时从载体对照组和药物处理组动物得到的BAL液含有嗜酸性粒细胞分别为8×10⁴/ml和4×10⁴/ml，中性粒细胞分别为94×10⁴/ml和29×10⁴/ml，巨噬细胞分别为37×10⁴/ml和12×10⁴/ml。尘螨激发后24小时效果没有明显变化。应该注意的是尘螨激发后24小时这个时间点是DHEA-S治疗后48小时。

组织学检测

通过组织学检测评价对间质性炎症的效应。兽医病理学家在不知道分组的情况下分析hemotoxylin和伊红染色的切片。切片用0到4的分数来评价炎症反应的情况，0代表没有发现炎症反应，4代表严重的炎症反应。DHEA-S处理组动物来源的肺组织切片炎症反应较轻。DHEA-S处理肺组织切片的所有下列参数得分都低于载体对照组：呼吸道和血管上的炎症细胞，支气管相关淋巴组织增生和支气管炎/细支气管炎。支气管炎/细支气管炎包含气管的剥脱和上皮内炎症细胞侵润。与肺泡相关的参数没有一致的趋势。

DHEA-S对血清和BAL DHEA及DHEA-S水平的影响

经DHEA-S治疗后血清内的DHEA和DHEA-S的浓度没有明显变化。DHEA-S治疗前血清样品内的DHEA和DHEA-S浓度分别为0.9ng/ml和4.7μg/dl。经过7天的每日一次的治疗后24小时DHEA和DHEA-S的浓度分别为1.1ng/ml和4.9μg/dl。BAL液体内检测不到DHEA-S。DHA的浓度可以检测到，但是与药物治疗的关系不明显。

DHEA-S效应的观察

动物通过面罩进行7天的DHEA-S治疗后比载体治疗动物更耐受肺功能检测和组胺激发。有确切的证据表明动物经上述治疗后可以更快地恢复正常功能。没有迹象显示DHEA-S治疗动物在接受组胺和尘螨后会出现鼻充血现象。

结论

呼吸道阻力和顺应性分别是显示近呼吸道和远端肺功能的指标。但是两个参数不是完全独立的，其测量值受呼吸频率和潮气量的影响。因此，早期和晚期反应期间DHEA-S对顺应性的改善说明了其主要效应是通过增加远端肺膨胀的能力来减轻哮喘发作期间的呼吸负担。

实施例27：吸入性DHEA-S、Pulmicort^和盐水对变态反应原诱导的呼吸道阻塞和炎症反应的影响

下面的试验利用尘螨致敏的兔模型比较了DHEA-S和Pulmicort^(普米克吸入悬液)对变态反应原诱导的对组胺的支气管高反应(BHR)的效果。本试验包括18只动物，分为3个治疗组：盐水治疗组、DHEA-S治疗组和Pulmicort治疗组。动物每天一次，连续5天通过覆盖在鼻子和嘴上的面罩吸入药物。治疗剂分别为每天10mg DHEA-S(5mg/ml)、每天0.5mg Pulmicort(0.5mg/2ml，注：这是人用的标准剂量)和盐水(2ml)。在第4天使动物接触尘螨，6小时和30小时后检测呼吸道炎症的发展情况。尘螨激发后30小时评价组胺敏感性(第5天)，取出肺进行组织学检测。得到如下结果：

1-与Pulmicort相比，DHEA-S可使BALF内的细胞数在变态反应原激发后6小时减少62％(图4.3.4.1)。

2-变态反应原激发后6小时DHEA-S就可以使嗜酸性粒细胞数目降低，而Pulmicort在变态反应原激发后24小时使嗜酸性粒细胞数目降低(图4.3.4.1)。

3-与Pulmicort相比，DHEA-S可使BALF内的中性粒细胞数目在变态反应原激发后6小时降低91％(图4.3.4.1)。

4-与Pulmicort相比，在变态反应原激发后6小时DHEA-S可使上皮脱落症状减轻54％(图4.3.4.1)。

5-DHEA-S和Pulmicort都可以使组胺反应曲线从未接触变态反应原时的起始值开始下降(图4.3.4.2)。

6-与盐水相比，DHEA-S和Pulmicort可以降低辅壁的产生，减轻支气管坏死、增加单核细胞、巨噬细胞增生，但是只有对辅壁的效应是有统计学意义的。

这些结果说明DHEA-S和Pulmicort都可以减轻由变态反应原激发引起的炎症反应和肺功能的下降。另外，本试验中变态反应原激发24小时后DHEA-S在降低组胺反应和减轻炎症的组织学症状方面和Pulmicort的效果是相似的，但是在变态反应原激发后6小时其减少炎症细胞，特别是中性粒细胞的效应要比Pulmicort好。DHEA-S和Pulmicort所影响的细胞类型以及反应的过程不同说明这两种药物具有不同的作用机制。

(A)基础变态反应

变态反应原诱导的炎症反应

分析全部数据(即所有组的数据)发现动物变态反应原激发后6小时和24小时嗜酸性粒细胞数明显升高(p＝0.046和0.001)。嗜酸性粒细胞的比例也从尘螨激发前的低于0.1％升高到尘螨激发后的3％，说明变态反应原可诱导嗜酸性粒细胞迁移到呼吸道内。

肺功能

从盐水对照组的组胺剂量-反应曲线上可以看出尘螨激发后肺阻力曲线向上弯曲(图4.3.4.2)。这说明尘螨激发可使这些动物的支气管高反应增强。这些数据证明了本试验的动物接触相关抗原后可产生呼吸道炎症反应，肺功能发生改变。

(B)DHEA-S和Pulmicort对炎症反应的影响

变应原诱导的炎症

变态反应原激发后6小时，盐水对照组和Pulmicort处理组的动物BALF内细胞总数与变态反应原激发前的数值相比都有明显升高，而DHEA-S处理组的动物未出现这种情况。见图4.3.4.1。变态反应原激发后6小时，DHEA-S处理组的动物BALF内嗜酸性粒细胞数比盐水对照组和Pulmicort处理组低。见图4.3.4.1。但是，由于盐水对照组的数据变异性较大，并且样本数目较少，因此这种差异在统计学上没有意义。尘螨激发后24小时，盐水对照组和DHEA-S处理组的动物BALF内嗜酸性粒细胞数与尘螨激发前相比都明显升高。DHEA-S处理的动物在变态反应原激发后6小时和24小时其BALF内的中性粒细胞都没有出现变态反应原诱导的升高，与单独接触变态反应原的动物(盐水对照组)明显相反。与盐水对照组不同的是，Pulmicort处理的动物在变态反应原激发后24小时灌洗剂中的嗜酸性粒细胞数也没有明显增加(尘螨激发前的数值为0.01±0.01×10⁴嗜酸性粒细胞/ml，Pulmicort处理组和盐水对照组在尘螨激发后24小时的数值分别为0.7±0.3×10⁴和1.5±0.7嗜酸性粒细胞/ml)。另外，Pulmicort处理组在尘螨激发后6小时其中性粒细胞的数量与盐水对照组和DHEA-S处理组相比明显增加，p＜0.05。这些数据和以前的结果显示在图4.3.4.1中。

组织学分析

肺切片的组织学分析结果表明各组动物的肺组织都有中度的炎症反应。各组的单核细胞巨噬细胞增生、炎症细胞侵润的呼吸道和血管、肺炎、支气管相关的淋巴组织增生、中隔水肿、出血、肺泡水肿及支气管炎/细支气管炎症状没有明显区别，虽然Pulmicort处理组和DHEA-S处理组的单核细胞巨噬细胞增生症状似乎稍重，支气管炎症状稍轻。盐水对照组的辅壁明显增高，说明炎症细胞大量粘附于内皮上，产生组织侵润。

(c)DHEA-S和Pulmicort对肺功能的影响

通过对低剂量组胺(最高到0.625mg/ml)的阻力反应的分析发现Pulmicort或DHEA-S处理的动物反应性比盐水处理组的动物低。如图4.3.4.2所示，盐水对照组的组胺剂量-反应曲线上可以看出尘螨激发后阻力曲线向上弯曲。曲线下面积增加17.42，这意味着动物在变态反应原激发后变得对组胺更敏感。DHEA-S处理组和Pulmicort处理组的组胺-反应曲线向下弯曲。二者的曲线下面积的变化分别是-4.52和-6.70。这说明用DHEA-S或Pulmicort处理的动物在变态反应原激发后对组胺的敏感性降低。

结论

这些数据与上述DHEA-S可抑制变态反应原诱导的嗜酸性粒细胞和中性粒细胞炎症反应的结果一致。DHEA-S所产生的效应与Pulmicort所产生的效应是不同的。与Pulmicort不同的是DHEA-S可引起中性粒细胞炎症反应的明显减轻。另外，与Pulmicort相比，DHEA-S的抗炎效应在较早的时间点是最大的。DHEA-S和Pulmicort在尘螨激发后24小时对支气管高反应的效应是一样的。这些结果说明DHEA-S不仅具有糖皮质激素类固醇的标准特性(如抑制变态反应原诱导的嗜酸性粒细胞增多的能力)，还具有一些糖皮质激素类固醇所没有的特性。特别是DHEA-S具有抑制嗜酸性粒细胞炎症反应的能力，这个独特的性质使DHEA-S与糖皮质激素相比在治疗哮喘和COPD时效果更好。

实施例28：DHEA-S对支气管高反应和炎症反应的影响

本试验利用豚草致敏的小鼠模型证明在小鼠接触乙酰甲胆碱后DHEA-S降低支气管高反应的能力。将小鼠分为两组，在0、4和11天时分别用豚草变态反应原(美洲豚草)致敏，两只通过腹膜内注射，一只通过鼻内给药。第三组小鼠给予盐水作为非变应性对照组。在接下来的两天里，治疗组动物用整体体积描记器系统(BuxcoElectronics，Inc.，Sharon，CT)和DeVilbiss超声雾化器给予DHEA-S气雾剂(5mg/ml悬液，溶于盐水中，2ml气雾剂)。最后一次给药后24小时，给予小鼠更高浓度的乙酰甲胆碱以确定支气管高反应，然后灌洗呼吸系统以确定BAL液内的细胞群的相对变化。DHEA-S处理可使动物的疾病状态发生如下变化：

(1)在乙酰甲胆碱激发前2天给予DHEA-S可使支气管高反应显著减弱。DHEA-S处理后乙酰甲胆碱反应曲线的曲线下面积减少46％。

(2)在乙酰甲胆碱激发前24小时给予DHEA-S可使中性粒细胞显著降低(DHEA-S处理组和单独豚草组的数值分别为3.2％和13.8％)，细胞群的组成从变态反应状态向未接触变态反应原的小鼠所具有的状态转化。

(A)DHEA-S对肺功能的影响

非变应性盐水对照组小鼠接触乙酰甲胆碱后暂停增加(enhanced pause)(Penh—呼吸道阻塞指数)的变化最小，反应曲线的曲线下面积为2646.8。在所试验的乙酰甲胆碱剂量范围内，只给予豚草的动物Penh值的增加与剂量相关，平均曲线下面积为7488.8。这说明致敏过程可使支气管高反应程度增加。接触乙酰甲胆碱前2天给予DHEA-S治疗可使支气管高反应程度明显降低，平均曲线下面积为4038.0。这些结果显示在图4.3.5.1中。

(B)DHEA-S对炎症反应的影响

在乙酰甲胆碱激发后非变应性盐水对照组和变态反应性豚草组动物的细胞群组成差异明显。与盐水对照组相比，豚草致敏可导致嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的比例显著增高(p＜0.05)。在接种前24小时用DHEA-S治疗变态反应小鼠可使细胞群的组成从变态反应模式向非变态反应小鼠所具有的模式转化。与单独用豚草致敏的小鼠相比，DHEA-S治疗组的小鼠嗜酸性粒细胞的比例也明显减少(3.2％对13.8％，p＜0.05)。这些结果显示在图4.3.5.2中。

结论

本试验的数据表明DHEA-S治疗可使豚草致敏的小鼠对乙酰甲胆碱的支气管高反应程度降低。BAL内的炎症细胞比例，尤其是嗜酸性粒细胞和中性粒细胞比例在接触乙酰甲胆碱后马上降低，p＜0.05。

实施例29：DHEA-S无毒性效应

已经用初步的试验评价了吸入性DHEA-S气雾剂产生急性毒性的可能性。通过吸入的方法给予DHEA-S即使达到最大剂量时在大鼠或狗体内也不会产生任何呼吸道副作用，这种最大剂量是指基于溶解度和暴露时间决定的最大给药剂量。两种动物都没有达到最大耐受剂量。其他现象在性质上是轻微的，在后面的报告中有详细描述。因此，水溶液的气雾化是可行的，但是由于无法达到足够的安全性来支持临床试验，所以还没有实际用于临床。

上述实施例只是用于说明本发明，而不是意味着对本发明作出限制。本发明是由下列权利要求以及其中所包含的等效权利要求来定义的。

Claims

1.一种药用组合物，该组合物包括药用或兽用载体和有效量的治疗呼吸道疾病、肺病或肿瘤的第一和第二活性剂，

(a)第一活性剂选自具有下列化学式的非糖皮质激素类固醇：

或者具有化学式(V)的化合物

或其药用或兽用盐；其中R1是A-CH(OH)-C-(O)-，A是H或(C1-C22)烷基、烯基或炔基，其中每一个都可被一个或多个(C1-C4)烷基、卤素、HO或苯基取代，苯基可被一个或多个卤素、HO、CH₃或CH₃O取代；

或是具有如下化学式的非糖皮质激素类固醇

或

其中R1，R2，R3，R4，R5，R7，R8，R9，R10，R12，R13，R14和R19分另是H，OR，卤素，(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷氧基，R5和R11分别是OH，SH，H，卤素，药用酯，药用硫酯，药用醚，药用硫醚，药用无机酯，药用单糖、双糖或寡糖，螺旋环氧己烷，spirothirane，-OSO2R20，-OPOR20R21或(C1-C10)烷基，R5和R6合在一起是＝O，R10和R11合在一起是＝O；(1)当R16是C(O)OR22时，R15是H，卤素，(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷氧基，(2)当R16是卤素、OH或(C1-C10)烷基时，R15是H、卤素、OH或(C1-C10)烷基，(3)当R16是OH时，R15是H、卤素、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烯基、(C1-C10)炔基、甲酰基、(C1-C10)烷酰基或环氧基，(4)当R16是H时，R15是OR、SH、H、卤素、药用酯、药用硫酯、药用醚、药用硫醚、药用无机酯，药用单糖、双糖或寡糖、螺旋环氧己烷、spirothirane、-OSO2R20、-OPOR20R21，或者R15和R16合在一起为＝O；(1)当R6是H、OR、卤素、(C1-C10)烷基或-C(O)OR22时，R17和R18分别是H、-OH、卤素、(C1-C10)烷基或-(C1-C10)烷氧基，(2)当R15和R16合在一起是＝O时，R17和R18分别是H、(C1-C10)烷基氨基、((C1-C10)烷基)n氨基(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、羟基-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基、(卤素)m(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷酰基、甲酰基、(C1-C10)烷酯基或(C1-C10)烷酰氧基，(3)R17和R18合在一起是＝O；(4)R17或R18与其相连的碳原子形成含0或1个氧原子的3-6元环；或者(5)R15和R17与其相连的碳原子合在一起形成环氧环；R20和R21分别是OH、药用酯或药用醚；R22是H、(卤素)m(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷基；n是0、1或2；m是1、2或3；或其药用或兽用盐；以及

(b)含抗毒蕈碱受体药物和/或其药用或兽用盐的第二活性剂。

2.如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗毒蕈碱药物包含异丙托溴铵和/或其药用或兽用盐。

3.如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗毒蕈碱药物包含噻托溴铵和/或其药用或兽用盐。

4.如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗毒蕈碱药物包含异丙托溴铵及噻托溴铵和/或其药用或兽用盐。

5.如权利要求1所述的组合物，该组合物含有约0.01％到99.9％w/w的第一和第二活性剂和/或其药用或兽用盐。

6.如权利要求5所述的组合物，该组合物含有约1％到20％w/w的第一和第二活性剂和/或其药用或兽用盐。

7.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有化学式(I)的非糖皮质激素类固醇，其中R和R¹都是H、虚线代表双键，或含有脱氢表雄酮和/或其药用或兽用盐。

8.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有化学式(I)的非糖皮质激素类固醇，其中R是Br，R¹是H，虚线代表双键，或含有16-α-溴表雄酮和/或其药用或兽用盐。

9.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有化学式(I)的非糖皮质激素类固醇，其中R是F，R¹是H，虚线代表双键，或含有16-α-氟表雄酮和/或其药用或兽用盐。

10.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有化学式(I)的非糖皮质激素类固醇，其中R和R¹都是H，虚线代表双键，或含有本胆烷醇酮和/或其药用或兽用盐。

11.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有化学式(I)的非糖皮质激素类固醇，其中R是H，R¹是SO₂OM，M是上面所定义的硫脑苷脂基团，虚线代表单键，或含有硫酸脱氢表雄酮和/或其药用或兽用盐。

12.如权利要求1所述的组合物，其中，所述化合物具有化学式(I)，R是选自Br、Cl或F的卤素，R¹是H，虚线代表双键，和/或其药用或兽用盐。

13.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有化学式(I)的非糖皮质激素类固醇，该类固醇是16-α-氟表雄酮或16-α-溴表雄酮和/或其药用或兽用盐。

14.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有化学式(III)的化合物，其中R¹⁵和R¹⁶合在一起＝O，和/或其药用或兽用盐。

15.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有化学式(III)或(IV)的非糖皮质激素类固醇，其中R⁵是H、OH或OSO₂R₂₀，和/或其药用或兽用盐。

16.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有化学式(V)的非糖皮质激素类固醇和/或其药用或兽用盐；其中R1是A-CH(OH)-C-(O)-，A是H或(C1-C22)烷基、烯基或炔基，其中每一个都可被一个或多个(C1-C4)烷基、卤素、HO或苯基取代，苯基可被一个或多个卤素、HO、CH₃或CH₃O取代，和/或其药用或兽用盐。

17.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有化学式(V)的非糖皮质激素类固醇，其中R¹是2-羟基乙酰基；2-羟基丙酰基；2-甲基-2-羟基丙酰基；2-羟基丁酰基；2-羟基戊酰基；2-羟基壬酰基；2-羟基癸酰基；2-羟基辛酰基；2-羟基十二烷酰基；2-羟基十四烷酰基；2-羟基十六酰基；2-羟基十八酰基；2-羟基二十酰基；2-羟苯基-2-羟基乙酰基；2，2-二苯基-2-羟基乙酰基；3-苯基-2-羟基丙酰基；2-苯基-2-甲基-2-羟基乙酰基；2-(4’-氯苯基)-2-羟基乙酰基；2-(4’-羟基-3’-甲氧苯基-2-羟基乙酰基；3-(2’-羟苯基)-2-羟基丙酰基；3-(4’-羟苯基)-2-羟苯基乙酰基；或2-(3’，4’-二羟苯基)-2-羟基乙酰基。

18.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有化学式(II)的化合物(DHEA-S)，和/或其药用或兽用盐。

19.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有DHEA，和/或其药用或兽用盐。

20.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第二活性剂含有DHEA和化学式(II)的化合物(DHEA-S)，和/或其药用或兽用盐。

21.如权利要求1所述的组合物，该组合物还含有非抗毒蕈碱受体药物的抗胆碱能药物。

22.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有化学式(II)的化合物(DHEA-S)，第二活性剂含有异丙托溴铵，和/或其药用或兽用盐。

23.如权利要求1所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有化学式(II)的化合物(DHEA-S)，第二活性剂含有噻托溴铵，和/或其药用或兽用盐。

24.如权利要求1所述的组合物，该组合物还含有其他治疗剂或生物活性剂，防腐剂，抗氧化剂，调味剂，挥发油，缓冲剂，分散剂或表面活性剂。

25.如权利要求24所述的组合物，其中，所述其他治疗剂或生物活性剂选自镇痛药、经前治疗药、绝经药、抗衰老药、抗焦虑药、情感障碍药、抗抑郁药、抗双相情感药、抗精神分裂药、抗癌药、生物碱、血压控制药、激素、抗炎药、肌肉松弛剂、类固醇、催眠药、抗局部缺血药、抗心律失常药、避孕药、维生素、矿物质、安定药、神经递质调节剂、创伤治愈药、抗血管形成药、细胞因子、生长因子、抗肿瘤转移药、抗酸药、抗组胺药、抗菌药、抗病毒药、防毒气药、食欲抑制剂、防晒剂、润滑剂、皮肤降温药、放射性磷光或荧光对照诊断剂或成像剂、性欲改变药、胆汁酸、缓泻剂、抗腹泻药、皮肤更新剂、生发剂、止痛药、经前治疗药、抗绝经药、激素、抗老化药、抗焦虑药、伤害感受剂、情感障碍药、抗抑郁药、抗双相情感药、抗精神分裂药、抗癌药、生物碱、血压控制药、激素、抗炎药、关节炎、烧伤、创伤、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、炎性肠病如节段性回肠炎和溃疡性结肠炎、自身免疫疾病、红斑狼疮、肌肉松弛药、类固醇、催眠药、抗局部缺血药、抗心律失常药、避孕药、维生素、矿物质、安定药、神经递质调节剂、创伤和烧伤治愈药、抗血管形成药、细胞因子、生长因子、抗肿瘤转移药、抗酸药、抗组胺药、抗菌药、抗病毒药、防毒气药、防再灌注损伤药、食欲抑制剂、防晒剂、润滑剂、皮肤降温药、放射性磷光或荧光对照诊断剂或成像剂、性欲改变药、胆汁酸、缓泻剂、抗腹泻药、皮肤更新剂或生发剂。

26.如权利要求1所述的组合物，该组合物是全身或局部制剂，其中的载体包括气态的、固态的或液态的载体。

27.如权利要求26所述的制剂，该制剂是口服、鼻内给药、可吸入、局部用药、胃肠外或经皮给药的制剂。

28.如权利要求27所述的制剂，该制剂选自口服制剂、口内给药制剂、肺内给药制剂、可呼吸的制剂、可吸入的制剂、鼻内给药的制剂、直肠给药制剂、子宫内给药的制剂、阴道内给药的制剂、肿瘤内给药的制剂、颅内给药的制剂、皮下给药的制剂、血管内给药的制剂、舌下给药的制剂、静脉内制剂、髓鞘内给药的制剂、经皮给药的制剂、真皮内给药的制剂、腔内给药的制剂、可植入的制剂、离子透入制剂、眼内给药的制剂、眼制剂、关节内给药的制剂、耳制剂、静脉内给药的制剂、腺内给药的制剂、器官内给药的制剂、淋巴管内给药的制剂、缓释制剂或肠衣包被制剂。

29.如权利要求27所述的制剂，该制剂是口服制剂，制剂还可以包被肠衣。

30.如权利要求28所述的口服制剂，该制剂可以是胶囊剂、扁囊剂、锭剂、片剂、粉末剂、颗粒剂、溶液剂、悬液剂或乳剂。

31.如权利要求27所述的制剂，该制剂是溶液剂、悬液剂或乳剂，液体可以是水或非水溶液、悬液，或水包油或油包水的乳剂。

32.如权利要求27所述的制剂，该制剂是口内给药的制剂或舌下给药的制剂。

33.如权利要求27所述的制剂，该制剂是胃肠外给药的制剂。

34.如权利要求33所述的胃肠外给药的制剂，该制剂是注射剂。

35.如权利要求27所述的制剂，该制剂是局部用药的制剂。

36.如权利要求35所述的制剂，该制剂选自软膏剂、霜剂、洗剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油；还可以含有选自凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、乙醇或经皮增强剂的载体。

37.如权利要求27所述的制剂，该制剂是经皮给药的制剂。

38.如权利要求37所述的经皮给药的制剂，该制剂是皮贴。

39.如权利要求37所述的经皮给药的制剂，该制剂是离子透入制剂。

40.如权利要求39所述的离子透入制剂，该制剂选自离子透入溶液剂、悬液剂或乳剂，还可以包含缓冲剂。

41.如权利要求27所述的制剂，该制剂是鼻内给药的制剂、可吸入的制剂、可呼吸的制剂、肺内给药的制剂或气管内给药的制剂。

42.如权利要求41所述的鼻内给药的制剂、可吸入的制剂、可呼吸的制剂、肺内给药的制剂或气管内给药的制剂，该制剂是含有液体或固体粉末状颗粒的气雾剂或喷雾剂。

43.如权利要求41所述的可吸入或可呼吸的制剂，该制剂含有的颗粒直径基本上约为0.05到10μ。

44.如权利要求43所述的可吸入或可呼吸的制剂，该制剂含有的颗粒直径基本上约为0.1到5μ。

45.如权利要求44所述的可吸入或可呼吸的制剂，该制剂含有的颗粒直径基本上约为1到5μ。

46.如权利要求41所述的鼻内给药的制剂、肺内给药的制剂或气管内给药的制剂，该制剂含有的颗粒直径基本上约为10到100μm。

47.如权利要求45所述的鼻内给药的制剂、肺内给药的制剂或气管内给药的制剂，该制剂含有的颗粒直径基本上约为20到50μm。

48.如权利要求1所述的组合物，该组合物是块状形式或单剂量或多剂量形式。

49.如权利要求48所述的单剂量或多剂量形式的组合物，该组合物装在密封的安瓿、玻璃瓶、药筒或泡内。

50.如权利要求1所述的组合物，该组合物是冷冻干燥的或冻干的。

51.一种试剂盒，该试剂盒包含一种给药装置和权利要求41所述的制剂。

52.如权利要求51所述的试剂盒，其中，所述给药装置包括气雾或喷雾发生器。

53.如权利要求52所述的试剂盒，其中，所述气雾发生器包括吸入器。

54.如权利要求53所述的试剂盒，其中，所述吸入器可释放预定量的制剂。

55.如权利要求53所述的试剂盒，其中，所述吸入器包括喷雾器或吹入器。

56.如权利要求51所述的试剂盒，其中，所述给药装置包括压缩吸入器，所述制剂包括水或非水溶液、悬液、或水包油或油包水的乳剂。

57.如权利要求51所述的试剂盒，其中，所述制剂装在胶囊、药筒或泡内，可以是可穿透的或可打开的胶囊、药筒或泡。

58.如权利要求51所述的试剂盒，其中，所述给药装置是可以加压的，其操作需要推进杆的辅助。

59.一种在由此需要的受试者中治疗呼吸道疾病、肺病或恶性肿瘤的方法，其症状有慢性阻塞性肺疾病(COPD)，囊性纤维化(CF)，哮喘，dispnea，肺气肿，哮鸣，肺动脉高压，肺纤维化，呼吸道超敏，腺苷或腺苷受体水平升高，腺苷超敏，传染性疾病，肺支气管阻塞，呼吸道炎症或变态反应，肺表面活性物质耗竭，慢性支气管炎，支气管阻塞，呼吸困难，肺气道阻塞或梗阻，用于心功能的腺苷测试，肺血管收缩，呼吸障碍，急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，给予升高腺苷或腺苷水平的药物，婴儿呼吸窘迫综合征(婴儿RDS)，疼痛，变应性鼻炎，癌症或慢性支气管炎，所述方法包括同时或分别给予由此需要的受试者预防或治疗有效量的如权利要求1所述的第一和第二活性剂。

60.如权利要求59所述的方法，其中，所述第一活性剂包含化学式(I)、(III)或(IV)的非糖皮质激素类固醇或其盐，给药剂量约为每天每千克体重0.05-2000mg。

61.如权利要求60所述的方法，其中，所述第一活性剂包含化学式(I)、(III)或(IV)的非糖皮质激素类固醇或其盐，给药剂量约为每天每千克体重1-500mg。

62.如权利要求61所述的方法，其中，所述第一活性剂包含化学式(I)、(III)或(IV)的非糖皮质激素类固醇或其盐，给药剂量约为每天每千克体重2-100mg。

63.如权利要求59所述的方法，其中，所述第一活性剂包含DHEA或其盐，给药剂量约为每天每千克体重2-200mg，和/或DHEA-S或其盐，给药剂量约为每天每千克体重1-150mg。

64.如权利要求63所述的方法，其中，所述异丙托溴铵的给药剂量约为每天每千克体重？-？mg。

65.如权利要求64所述的方法，其中，所述噻托溴铵的给药剂量约为每天每千克体重？-？mg。

66.如权利要求59所述的方法，其中，所述呼吸道疾病或肺病与传染性疾病、呼吸道变态反应或表面活性物质耗竭有关。

67.如权利要求59所述的方法，其中，所述疾病包括COPD。

68.如权利要求59所述的方法，其中，所述疾病包括哮喘。

69.如权利要求59所述的方法，其中，所述疾病包括RDS。

70.如权利要求59所述的方法，其中，所述疾病包括变应性鼻炎。

71.如权利要求59所述的方法，其中，所述疾病包括肺纤维化。

72.如权利要求59所述的方法，其中，所述疾病包括气管收缩，哮鸣，呼吸困难或缺氧。

73.如权利要求59所述的方法，其中，所述呼吸道疾病和肺病包括囊性纤维化。

74.如权利要求59所述的方法，其中，所述呼吸道疾病和肺病包括肺气肿。

75.如权利要求59所述的方法，其中，所述呼吸道疾病和肺病包括呼吸困难。

76.如权利要求59所述的组合物，其中，所述第一活性剂含有DHEA和/或化学式(II)的化合物(DHEA-S)，第二活性剂含有抗毒蕈碱药物，和/或其药用或兽用盐。

77.如权利要求59所述的方法，其中，所述受试者是人或非人动物。

78.如权利要求59所述的方法，该方法还包括给予受试者下列β-肾上腺素能激动剂：麻黄素、异丙肾上腺素、乙基异丙肾上腺素、肾上腺素、奥西那林、特布他林、非诺特罗、丙卡特罗、舒喘灵、沙丁胺醇、吡布特罗、福莫特罗、biloterol、班布特罗、沙美特罗或舒利迭。

79.如权利要求59所述的方法，其中，所述第一活性剂包含DHEA和/或其药用或兽用盐，给药剂量约为每天每千克体重2-200mg；第二活性剂包含异丙托溴铵，给药剂量为治疗剂量。

80.如权利要求59所述的方法，其中，所述呼吸道疾病包括支气管收缩，肺炎或变态反应，肺表面活性物质减少或DHEA或DHEA-S水平降低。

81.如权利要求59所述的方法，该方法是预防方法或治疗方法。

82.如权利要求59所述的方法，其中，所述第一活性剂包含化学式(II)的化合物(DHEA-S)和/或其药用或兽用盐，给药剂量约为每天每千克体重1-150mg；第二活性剂包含噻托溴铵，给药剂量为约为？-？μg/天。

83.如权利要求59所述的方法，其中，所述第一和第二活性剂通过局部或全身给药。

84.如权利要求83所述的方法，其中，所述第一活性剂通过口服、鼻、肺内或通过吸入或呼吸进入呼吸道内给药，第二活性剂通过口服、鼻内、肺内或通过吸入或呼吸进入呼吸道内给药。

85.如权利要求59所述的方法，其中，所述第一和第二活性剂通过吸入或呼吸进入呼吸道、肺内给药、鼻内给药、口服给药、口内给药、直肠给药、阴道内给药、肿瘤或纤维瘤内给药、胃肠外给药、舌下给药、经皮给药、局部给药、离子透入给药、腔内给药、植入给药、舌下给药、眼给药、耳给药、关节内给药、淋巴管内给药、可以是缓释的或持续释放的或者是肠衣包被的。

86.如权利要求85所述的方法，其中，所述药物通过鼻内给药、肺内给药或通过吸入或进入呼吸道。

87.如权利要求86所述的方法，其中，所述药物以溶液或粉末气雾剂或喷雾的形式给药，其粒度基本上约为0.05-10μm。

88.如权利要求86所述的方法，其中，所述药物以溶液或粉末气雾剂或喷雾的形式给药，其粒度基本上约为10-50μm。

89.如权利要求59所述的方法，其中，所述第一和第二药剂在同一组合物中给药。

90.如权利要求89所述的方法，其中，所述第一和第二药剂通过鼻内给药、肺内给药、或通过吸入或呼吸进入呼吸道。

91.如权利要求89所述的方法，其中，所述第一和第二药剂通过口服给药。

92.如权利要求59所述的方法，其中，所述第一和第二药剂在不同组合物中给药。

93.如权利要求92所述的方法，其中，所述第一药剂通过鼻内给药、肺内给药、或通过吸入或呼吸进入呼吸道，第二药剂通过口服给药。

94.如权利要求92所述的方法，其中，所述第一药剂通过口服给药，第二药剂通过鼻内给药、肺内给药、或通过吸入或呼吸进入呼吸道。