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CN1325473C - 吖糖衍生物和以其为有效成分的药剂 - Google Patents

吖糖衍生物和以其为有效成分的药剂 Download PDF

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CN1325473C
CN1325473C CNB038150190A CN03815019A CN1325473C CN 1325473 C CN1325473 C CN 1325473C CN B038150190 A CNB038150190 A CN B038150190A CN 03815019 A CN03815019 A CN 03815019A CN 1325473 C CN1325473 C CN 1325473C
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Abstract

本发明涉及一种新型的吖糖衍生物以及将其作为有效成分的药剂。该药剂能用于角质化细胞繁殖性疾病的治疗。

Description

吖糖衍生物和以其为有效成分的药剂
技术领域
本发明涉及具有吖糖构造的新型氧肟酸化合物，具体涉及以下述通式(A)或通式(I)表示的吖糖衍生物和其药学上可接受的盐，以及以其为有效成分的药剂，
Figure C0381501900031
式(A)中，Ar表示p位可有取代基的苯基，式(I)中，R1表示氢原子、卤原子、羟基、氨基、C1～C8烷基、苯基、苯氧基、C1～C8烷氧基或异烯丙氧基，且上述C1～C8烷氧基也可由C1～C4烷氧基或C1～C4烷基硫代基取代。
本发明进一步涉及可有效用作上述化合物(A)的制造用中间体的下式(IIA)或(IIB)所示化合物，
式中Ar表示p位可有取代基的苯基，CO-R2表示氧肟酸等价体，OR3表示羟基等价体。
背景技术
为实现与金属原子的高配位能力，人们开发出了很多氧肟酸化合物，以用作金属酶抑制剂。以前，在这类用途中，肽类化合物是主流(例如WO94/02447、WO90/05719号公报)，而最近，公开了很多局部构造中有磺酰胺的化合物，例如欧洲专利公开公报(EP1081137)中所揭示的具有与本发明化合物共通的N-磺酰哌啶-2-氧肟酸构造的化合物用作聚集蛋白聚糖分解酶抑制剂的内容。
作为抑制目标的金属酶中，除胶原酶、基质裂解素和白明胶酶等MMP(WO90/05716)之外，在医药品开发方面，引人瞩目的是TNF-α生成酶(WO94/10990)和Fas配位体溶解酶(WO97/09066)等。
已知，EGF族生长因子，可利用金属酶使来自于前体的膜结合蛋白溶解，形成可溶性配位体而与受容体结合的方式，其中，在HB-EGF的情况下，该溶解过程在角质化细胞的繁殖中具有重要功能(WO01/70269)。该公报中揭示了具有四氢化异喹啉骨架的氧肟酸衍生物抑制HB-EGF的溶解酶，而做为角质化细胞繁殖性疾病的有效治疗剂的内容。
发明内容
本发明的目的在于提供新型角质化细胞繁殖性疾病的治疗剂。
本发明人等在深入研究后，结果发现，由上述通式(A)所示具有吖糖构造的氧肟酸化合物能抑制HB-EGF的溶解，有望用作角质化细胞繁殖性疾病的治疗剂，从而完成本发明。
下面，对本发明进行详细说明。
附图说明
图1为实施例4的化合物的肥厚抑制效果示意图。
图2为实施例4的化合物的角质化细胞的再上皮化率(％)抑制效果示意图。
具体实施方式
本发明涉及以通式(A)
Figure C0381501900051
表示的化合物或其药学上可接受的盐所构成的。式中，Ar表示p位可有取代基的苯基。在本发明中，取代基的具体例可举出卤原子、羟基、氨基、C1～C8烷基、苯基、苯氧基、C1～C8烷氧基或异烯丙氧基等，且上述C1～C8烷氧基也可由C1～C4烷氧基或C1～C4烷基硫代基取代，特别优选为甲氧基、2-乙氧乙氧基或苯氧基。
本发明化合物(A)可以通过化合物(IIA)或(IIB)
根据下示方法制得。式中Ar表示在p位可有取代基的苯基，CO-R2表示氧肟酸等价体，OR3表示羟基等价体。
在本发明中，取代基的具体例同上所述，可举出卤原子、羟基、氨基、C1～C8烷基、苯基、苯氧基、C1～C8烷氧基或异烯丙氧基等，且上述C1～C8烷氧基也可由C1～C4烷氧基或C1～C4烷基硫代基取代。
氧肟酸等价体除表示一价原子团-CONHOH本身之外，还表示可根据常规方法通过化学变换转变为该原子团-CONHOH的官能团，R2的具体例可举出比如甲氧基、乙氧基或苄氧氨基等。该苄氧氨基可很容易由羧酸和苄氧胺的缩合反应引入，在氧肟酸等价体中，除羧基之外，还包括易于转变成羧基的各种酯。因此，用各种羧基保护基保护的羧酸所包括的具体例可举出，R2除为上述甲氧基、乙氧基、苄氧氨基之外，还有苄氧基、叔丁氧基等。
羟基等价体除羟基本身之外，还包括根据常规方法容易通过化学变换转变为羟基的官能团，R3除意味着氢原子之外，还意味着乙酰基、苄基、叔丁基、四氢吡喃基及其它醇保护基。
而特别适宜用作化合物(IIA)或(IIB)的是以下式(IIIA)或(IIIB)表示的化合物，
Figure C0381501900061
式中R1表示氢原子、卤原子、羟基、氨基、C1～C8烷基、苯基、苯氧基、C1～C8烷氧基或异烯丙氧基，且该C1～C8烷氧基可由C1～C4烷氧基或C1～C4烷基硫代基取代，R4表示氢原子或乙酰基，R5表示苄氧氨基、苄氧基、甲氧基或乙氧基。
通式(A)包含由下式
Figure C0381501900062
所示的所有立体异构体或其混合物，特别优选为(Id)。
同样，化合物(IIA)或(IIB)以及化合物(IIIA)或(IIIB)也包含了各自对应的8种立体异构体或其混合物。下述说明所用略语和记号的含义如下。
Ac：乙酰基；AcOCs：乙酸铯；Bn：苄基；DEAD：偶氮二羧酸二乙酯；DIEA：二异丙基乙胺；DMF：N，N-二甲基甲酰胺；DMP：2，2-二甲氧基丙烷；DMAP：4-二甲基氨基吡啶；DCC：二环己基碳化二亚胺；WSC：1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐；HOBt：1-羟基-1H-苯并三唑；HPLC：高速液体色谱；THF：四氢呋喃；TBAF：四丁基氟化铵的1.0MTHF溶液；Pd/C：钯-碳；Pd(OH)2/C：氢氧化钯-碳；PPh3：三苯基膦；NaOMe：甲醇钠；NH2OBn：苄基羟胺盐酸盐；18-Crown-6：18-冠-6；MsCl：甲磺酰氯；Tf2O：三氟甲烷磺酸酐。
本发明的化合物(A)可由下示方法制成。
1.化合物(I)的立体异构体(Ie)以及(Ig)的制造：
立体异构体(Ie)以及(Ig)可如下式(流程1)所示，
流程1
对由D-或L-苏糖醇和甘氨酸衍生物反应而得的化合物(IV)[TetrahedronLetters，Vol.38，No.46，8009-8012(1997)参照]进行脱保护，以进行闭环反应，得到前体(IIIA-1)，然后进行脱保护和官能团的化学变换而制得。式中，TBDMS表示叔丁基二甲基硅烷基。R1同上所述。
首先，将化合物(IV)[Tetrahedron Letters，Vol.38，No.46，8009-8012(1997)参照]的一级羟基保护基(TBDMS)脱保护，得到化合物(V)。反应通常是在THF等惰性溶剂中加入TBAF，在0℃～室温下搅拌0分～2小时。
然后，由光延反应使化合物(V)闭环，得到化合物(IIIA-1)。可在例如THF等惰性溶剂中加入三苯基膦及DEAD，在0℃～室温下搅拌30分～4小时进行反应。这时，由于可得到来自化合物(IIIA-1)的苄氧羰基α位不对称碳的表异构化的混合物，故能根据需要，由HPLC或其它各种色谱分离精制化合物(IIIA-1)，以供下一级反应。或以混合物形式直接将化合物(IIIA-1)供给下一级反应，也可在任意阶段进行分离精制。
所得前体(IIIA-1)可由苄氧羰基变换成苄氧氨羰基后分别进行脱保护衍生成目的物(Ie)或(Ig)。
首先，由氢化分解切断除去化合物(IIIA-1)的苄酯部位，然后与苄羟胺缩合得到化合物(IIIA-2)。氢化分解通常是在乙酸乙酯、甲醇等低级醇或1，4-二噁烷中，根据需要还可加水，在10％钯-碳、20％氢氧化钯-碳或铂等的催化下，在氢气流下或加压下，于室温～60℃的温度下搅拌1～5小时的条件下进行。继而，缩合通常在DCC或WSC等缩合剂以及根据需要添加的HOBt等缩合助剂的存在下，在0℃～室温下搅拌2～24小时进行。供给反应的摩尔比为，以羧酸为1摩尔，苄基羟胺为0.8～1.5摩尔，缩合剂为1.0～1.5摩尔，缩合助剂为1.0～1.5摩尔。
然后，可通过切除化合物(IIIA-2)的各保护基得到目的物。即，可按照通常的方法分别切除乙酰基、丙酮化合物基以及苄基。例如，脱乙酰基化反应通常是在甲醇等低级醇中加入28％的NaOMe，在0℃～室温下搅拌1～6小时的条件下进行。丙酮化合物基的切除可在例如甲醇等的溶剂中，在阳离子交换树脂的存在下，根据需要还可加水，在室温～50℃的条件下进行2～24小时的反应而完成。苄基的切除可同上所述，利用氢化分解进行。
在流程1中，为得到立体异构体(Ie)，可使用化合物(IV)的(3S、4S、5R)体化合物(IVe)，而为得到立体异构体(Ig)，可使用化合物(IV)的(3R、4R、5S)体化合物(IVg)，(位置编号以己酸为基准)。而化合物(IVe)和(IVg)可分别由L-苏糖醇和D-苏糖醇与甘氨酸衍生物的反应物衍生而得。
2.化合物(I)的立体异构体(If)以及(Ih)的制造：
立体异构体(If)以及(Ih)如下式(流程2)所示，
流程2
Figure C0381501900091
用丙酮化合物基对各立体异构体(Ie)或(Ig)的3位和4位的羟基保护后，使5位的羟基立体反转而制得(位置编号以哌啶环为基准)。另外，式中THP表示四氢吡喃基，R1同上所述。
首先，切除可如流程1所示化合物(IIIA-1)一样合成的化合物(IIIA-3)的保护基(四氢吡喃基和丙酮化合物基)，得到化合物(VI)。反应如利用上述丙酮化合物基切断时所用的使用阳离子交换树脂的方法，就可一次性切除两个保护基。
然后，使化合物(VI)生成丙酮化合物，得到化合物(IIIB-1)。反应可在例如DMF等惰性溶剂中，在对甲苯磺酸一水合物或樟脑-10-磺酸等酸催化剂的存在下，添加5～15倍量的DMP，在室温～80℃下反应2～24小时的条件下进行。
然后使化合物(IIIB-1)的羟基变成三氟甲磺酸基，再由SN2亲核取代反应引发立体反转，得到化合物(IIIB-2)。调制三氟甲基磺酸体的反应通常是在二氯甲烷等溶剂中，并在三乙胺或吡啶等碱的存在下，在-60℃～0℃下，添加三氟甲磺酸酐，并在该温度下搅拌30分钟～2小时的条件下进行。此时所得的三氟甲基磺酸体在反应结束后无需特别精制，而可马上供给后续反应，也可由硅胶柱色谱等精制后马上供给后续反应。而SN2亲核取代反应可在例如乙腈等溶剂中，在18-冠-6的存在下，添加乙酸铯，在0℃～室温下搅拌1～24小时的条件下进行。
然后利用氢化分解切除化合物(IIIB-2)的苄酯部位，再与苄基羟胺缩合，得到化合物(IIIB-3)。再以任意顺序切除(IIIB-3)的各保护基，即乙酰基、丙酮化合物基和苄基，即可得到目的物(If)或(Ih)。反应条件与上述流程1的条件相同。
3.化合物(I)的立体异构体(Ia)、(Ib)、(Ic)以及(Id)的制造：
立体异构体(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)可经例如下式流程3制得。其中，R1含义同上所述。
首先，还原化合物(VII)[Synthesis，No.9，1305-1309(2000)参照]的迭氮基后，使之与烯丙基磺酰氯(VIII)反应，得到化合物(IX)。迭氮基的还原可在例如乙酸乙酯、低级醇或1，4-二噁烷中，根据需要还可加水，在10％钯-碳、20％氢氧化钯-碳或铂等的催化下，在氢气流或加压下，在室温～60℃的条件下进行。随后的与烯丙基磺酰氯(VIII)的反应是在DMF等惰性溶剂中，在DMAP等碱的存在下，在通常0℃～室温下搅拌1～24小时的条件下进行。
然后，选择性切除化合物(IX)末端的丙酮化合物基。反应可在例如阳离子交换树脂的存在下，在甲醇等溶剂中，根据需要还可加水，在室温～50℃下搅拌5小时～4天的条件下进行。也可通过在乙腈中用氯化铈七水合物与草酸在室温条件下搅拌0.5～2小时而得到目的物(X)。
然后，有选择地将化合物(X)的一级羟基变换成甲磺酰基。反应在例如二氯甲烷等溶剂中，在三乙胺或DIEA等碱的存在下，用0.95～1.05摩尔甲磺酰氯，优选在-60℃～-20℃的低温下搅拌30分～5小时的条件下进行，而得到目的化合物(XI)。
然后由化合物(XI)的分子内闭环反应得到化合物(IIIB-4)。反应通常在DMF等惰性溶剂中，在碳酸钾或三乙胺等碱的存在下，在室温～100℃，优选为40～60℃下反应1～5小时的条件下得到目的化合物(IIIB-4)。
然后，使化合物(IIIB-4)的酯部位利用加碱水解变成相应的羧酸，通常不精制地与苄基羟胺缩合得到化合物(IIIB-5)。加碱水解通常是在甲醇等低级醇中，使用氢氧化钠或氢氧化锂水溶液，优选为调配1当量水溶液，在0～60℃下搅拌1～5小时。然后切除丙酮化合物基和苄基，得到化合物(Ia)、(Ib)、(Ic)或(Id)。该反应可按照流程1或流程2的反应进行。
在流程3中，为得到立体异构体(Ia)、立体异构体(Ib)、立体异构体(Ic)、立体异构体(Id)可分别使用化合物(VII)的(3R、4S、5S)体化合物(VIIa)、化合物(VII)的(3S、4R、5S)体化合物(VIIb)、化合物(VII)的(3S、4R、5R)体化合物(VIIc)、化合物(VII)的(3R、4S、5R)体化合物(VIId)(位置编号以己酸为基准)。而化合物(VIIa)、化合物(VIIb)、化合物(VIIc)、化合物(VIId)可分别由L-古洛糖-1，4-内酯、L-葡萄糖-1，5-内酯、D-古洛糖-1，4-内酯、D-甘露糖-1，4-内酯调制[Synthesis，9，1305-1309(2000)]。
4.化合物(I)的立体异构体(Id)的另一种制造方法：
立体异构体(Id)可按照下式流程4，在保护立体异构体(Ia)的3位及4位羟基后，使其5位的羟基立体反转而制得(位置编号以哌啶环为基准)。式中R1和上述意义相同。
首先，使化合物(IIIB-6)[流程3的化合物(IIIB-5)之一]的游离羟基立体反转，得到化合物(IIIB-7)。具体而言，使该羟基变成三氟甲磺酸基，然后利用乙酰氧离子进行SN2亲核取代反应。反应条件同流程2所述。
然后，以任意顺序切除(IIIB-7)的各保护基，即乙酰基、丙酮化合物基和苄基，就可得到目的物(Id)。反应条件和流程1相同。
这些化合物可以口服或非口服形式向患者给药。口服剂型除片剂、颗粒剂、粉剂、细粒剂、硬胶囊等固体制剂之外，还包括浆液剂、软胶囊等液剂。这些制剂可根据常规方法制得。例如片剂、颗粒剂、粉剂或细粒剂可由上述化合物或其药学上可接受的盐与例如乳糖、淀粉、结晶纤维素、硬脂酸镁、羟丙基纤维素、滑石等常用医药添加物混合制得，硬胶囊剂是通过将上述细粒剂或粉剂填充到适当的胶囊中制得。而浆液剂是通过使上述化合物或其药学上可接受的盐溶于或悬浊于含白糖、羧基纤维素等的水溶液中而制得。软胶囊剂是通过将上述化合物或其药学上可接受的盐溶于或悬浮于植物油、油性乳剂、二醇等脂质赋形剂中，再填充于软胶囊中而制成。
非口服剂形除注射剂之外，还有软膏、擦拭药水、霜剂等外用剂，直肠栓、阴道栓等栓剂，喷雾剂等经鼻给药剂等。这些制剂可由常规方法制得，例如注射剂可通过将上述化合物或其药学上可接受的盐溶于或乳化于生理食盐水或植物油、油性乳剂、二醇等脂质赋形剂中，在无菌状态下封入安瓿或药剂小瓶而制得。软膏剂则是在凡士林、石蜡、甘油等基剂中加入上述化合物或其药学上可接受的盐，并根据需要加入乳化剂、保存剂等，利用常规方法制得。
本发明的药剂给药量因剂形，患者年龄、性别、体重或症状而异，通常，有效成分以0.1～600mg/kg体重/日、优选为10～200mg/kg体重/日为适量，以一日一次或分2～4次进行给药。
试验例1
1.试验化合物
化合物a：实施例2；化合物b：实施例3；化合物c：实施例4；化合物d：实施例1；化合物e：实施例5。
2.试验方法
使用表达HB-EGF与来自人体胎盘的碱性磷酸酶(AP)的融合蛋白的人体纤维肉瘤(fibrosarcoma HT-1080)转染子，进行下述试验。
用胰蛋白酶-EDTA处理培养后的该转染子，使用MEM培养基(不含酚红、含10％FCS，下同)调制每1ml有1.0×105个细胞浓度的细胞浮游液。将该细胞浮游液以每孔0.2ml植入96孔培养皿，在37℃的CO2培养箱内培养一晚。吸除培养上清液，用磷酸缓冲生理盐水以每孔0.2ml的用量洗净，然后以每孔0.1ml的用量，加入试验化合物溶液[用DMSO稀释1mM或0.1mM的二甲亚砜(DMSO)溶液，再用MEM培养基稀释至100倍，调成所需浓度]，在37℃的CO2培养箱内预处理30分钟。吸除培养上清液，以每孔0.2ml加入与预处理相同浓度的含试验化合物的TPA溶液(将120μM的DMSO溶液在MEM培养基内稀释至60nM)，用37℃的CO2培养箱培养60分钟。并仅以在MEM培养基中进行预处理，且不含试验化合物TPA溶液作为培养后产物的对照。
将取自各孔的0.1ml培养上清液和用作背景的0.1ml的MEM培养基本身分别放入新的96孔培养皿，封盖后，在65℃下培养10分钟，使存在于MEM培养基和细胞中的内源性AP钝化。在各孔中加入0.1ml基质溶液(在即将使用之前用0.01％氯化镁/1M二乙醇胺将预先调制的磷酸对硝基苯100mg/ml的水溶液稀释100倍调制而成)，遮光，在室温条件下培养120分钟。用微量板读数器测定各孔的405nm吸光度，然后，以仅MEM培养基的背景的吸光度与作为对照的仅加入TPA的培养上清液的吸光度之差为100％，求得表示试验化合物的50％吸光度的浓度，作为试验化合物的IC50(μM)。
3.试验结果
试验结果如表1表示
表1
    试验化合物     IC50(μM)
    化合物a     0.61
    化合物b     0.45
    化合物c     0.35
    化合物d     1.6
    化合物e     0.34
试验例2
1.试验化合物：化合物c(实施例4)
2.试验方法
将BALB/c类雄性实验鼠背部去毛，再将TPA丙酮溶液10μL(0.1mM)涂布约1cm2的面积。对于给药群，将试验化合物溶于丙酮并涂布TPA后，在5分钟、24及48小时后，在TPA涂布部位上涂布20μL的液量。对于非给药群，仅涂布TPA。另外，以不涂布TPA丙酮溶液、而是涂布纯丙酮的群为对照群。
涂布TPA的72小时后，使实验鼠死亡，剥离其皮肤组织，用福尔马林固定，然后沿中心线将TPA溶液或丙酮涂布部位的中央部切开，按照一般方法制作石蜡包切片。脱石蜡后，用苏木精-曙红将标本染色，在显微镜下测量表皮厚度。
将涂布了TPA和试验化合物的群(给药群)的表皮厚度与非给药群及对照群的数据作比较，测试试验化合物的增生抑制效果。
3.试验结果
图1表示试验结果。图1中，纵轴数字表示表皮厚度(μm)。分别以TPA(-)的柱图表示对照群的表皮厚度，以TPA柱图表是非给药群。1、10及100的各柱图分别表示投放1、10及100(μg/部位)试验化合物时的表皮厚度。并根据Dunnett法测定给药群相对于非给药群的有效差，用*或**表示结果(*：p＜0.05，**：p＜0.01)。纵向棒表示标准误差。
试验例3
1.试验化合物：化合物c(实施例4)
2.试验方法
依照Tsuboi等人的方法(Tsuboi et al.，J.Dermatol.，19，673-675(1992)制作创伤治愈标本。除去BALB/c类雄性试验鼠背部的毛，用活体检测用打孔机在背部皮肤上打出2个直径6mm的圆孔。对于给药群，将试验化合物悬浮于1.5％羧甲基纤维素钠/0.01M磷酸缓冲溶液(溶剂)中，用50μL/部位的液量进行手术，然后于次日开始的7天内1日1次地反复涂在各创口。手术后8日，使试验鼠死亡，摘除包括创伤部位的皮肤组织，以10％中性缓冲福尔马林溶液固定1日，相对于中心线垂直地切开创伤中央部位，按照常规方法制作石蜡切片。脱石蜡后，根据使用抗角蛋白抗体的免疫组织化学染色法将角质化细胞染色。对角质化细胞的再上皮化的测量是用图像解析系统执行，测量创伤部的长度(mm)和角质化细胞的再上皮化(mm)。按照下式算出各动物的角质化细胞的再上皮化率(％)。
2.试验结果
图2表示试验结果。图2中，纵轴数字表示角质化细胞的再上皮化率(％)。黑色的4根柱图表表示给药群的角质化细胞的再上皮化率，最下端的数字为试验化合物的给药量(μg/部位)。对照的柱图表示对照群的角质化细胞的再上皮化率。并根据Dunnett法测定给药群相对于对照群的有效差，用**表示结果(**：p＜0.01)。纵向棒表示标准误差。
下面举出实施例具体说明本发明。而实施例6～9所示中间体可如实施例1～5所述同样地衍生为最终化合物(I)。
实施例1
(2R，3S，4R，5S)-3，4，5-三羟基-1-(4’-甲氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羟酰胺的制造
(1)(3S，4’S，5’R)-3-乙酸基-3-[5’-(叔丁基二甲基硅烷氧甲基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-2-(4”-甲氧基苯磺酰氨基)-丙酸苄酯：
Figure C0381501900161
将已知化合物(IVa)，即通式(IV)中R1是甲氧基、3位的乙酸基为羟基的化合物20.0g溶于80mL吡啶，加入乙酸酐40mL，在室温下搅拌3小时。再加入甲醇20mL，搅拌5分钟后减压浓缩溶剂。将所得残渣溶于乙酸乙酯300mL，用2.5％柠檬酸(×2)及水洗涤后，以硫酸镁干燥有机层，减压蒸溜去除溶剂。用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶环己烷＝1∶5→1∶4)精制所得残渣，得到标记化合物浆液16.2g。
1H-NMR(CDCl3)δ：0.07(s)，0.10(s)，0.85-1.0(m)，1.2-1.4(m)，1.44(s)，1.96(s)，2.07(s)，3.5-4.0(m)，4.1-4.2(m)，4.40(dd，J＝1.9，10.7Hz)，4.48(dd，J＝2.6，8.9Hz)，4.8-5.3(m)，5.56(d，J＝9.0Hz)，6.8-6.9(m)，7.1-7.45(m)，7.7-7.8(m)
(2)(2R，3S，4’S，5’S)-3-乙酸基-3-[5’-羟甲基-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-2-(4’-甲氧基苯磺酰氨基)-丙酸苄酯：
将上述(1)的化合物16.0g溶于200mL的THF中，添加乙酸4.06g，在冰冷搅拌条件下加入67.2mL的TBAF，在室温下搅拌1.5小时。然后在反应液中加入乙酸乙酯300mL，用水及饱和食盐水洗净后，用硫酸镁干燥，并减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶环己烷＝1∶3→1∶2→1∶1→3∶2→2∶1)进行精制，得到标记化合物浆液4.17g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.22(s，3H)，1.36(s，3H)，2.07(s，3H)，3.5-3.7(m，1H)，3.75-3.9(m，1H)，3.86(s，3H)，3.9-4.2(m，2H)，4.47(dd，1H，J＝2.7，8.9Hz)，4.90(d，1H，J＝12.2Hz)，5.09(d，1H，J＝12.2Hz)，5.14(dd，1 H，J＝2.6，8.8Hz)，5.55(d，1H，J＝8.8Hz)，6.89(d，2H，J＝8.9Hz)，7.2-7.4(m，5H)，7.73(d，2H，J＝8.9Hz)
(3)(3aS，6R，7S，7aS)-7-乙酸基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸苄酯：
Figure C0381501900172
将上述(2)的化合物4.1g溶于50mL的THF，加入三苯基膦3.0g，冰冷后添加2.0g的DEAD，室温搅拌40分钟。然后在反应液中加入乙酸乙酯150mL，用饱和食盐水洗净后，加硫酸镁干燥，减压蒸溜去除溶剂。所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3)精制，得到浆液状标记化合物2.7g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.35(s，3H)，1.41(s，3H)，2.13(s，3H)，3.15(dd，1H，J＝11.1，11.9Hz)，3.27(dd，1H，J＝2.5，9.3Hz)，3.86(s，3H)，3.9-4.0(m，1H)，4.15-4.25(m，1H)，5.12(d，1H，J＝12.0Hz)，5.18(d，1H，J＝12.0Hz)，5.2-5.25(m，1H)，5.81(t，1H，J＝2.5Hz)，6.88(d，2H，J＝9.0Hz)，7.25-7.4(m，5H)，7.71(d，2H，J＝9.0Hz)
(4)(3aS，6R，7S，7aS)-7-乙酸基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸苄氧酰胺：
将上述(3)的化合物2.7g溶于50mL乙酸乙酯，添加270mg的10％Pd/C，氢气环境下室温搅拌1小时。然后滤去催化剂，减压条件下浓缩滤液。将所得残渣溶于30mL的DMF，添加1.3g的WSC和913mg的HOBt。再添加苄基羟胺盐酸盐1.08g及DIEA873mg，室温搅拌3小时。而后添加WSC299mg、HOBt211mg、苄基羟胺盐酸盐248mg及DIEA202mg搅拌45分钟。再向反应液中添加乙酸乙酯200mL，用0.5当量盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液及饱和食盐水洗净后，用硫酸镁干燥并减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3→1∶2→2∶3)精制，得到浆液状标记化合物2.08g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.37(s，3H)，1.41(s，3H)，1.88(s，3H)，3.0-3.2(m，1H)，3.5-3.7(m，2H)，3.89(s，3H)，4.2-4.3(m，1H)，4.73(bs，1H)，4.89(d，1H，J＝11Hz)，4.96(d，1H，J＝11Hz)，5.71(t，1H，J＝2.1 Hz)，6.98(d，1H，J＝9.0Hz)，7.42(s，5H)，7.71(d，2H，J＝9.0Hz)
(5)(3aS，6R，7S，7aS)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸苄氧酰胺：
Figure C0381501900182
将上述(4)的化合物1.85g溶于甲醇25ml，添加668mg的28％NaOMe，室温搅拌2小时。再加入334mg的28％NaOMe，室温搅拌3小时，然后向反应液中加入乙酸乙酯150mL，用0.5当量盐酸及饱和食盐水洗净。用硫酸镁干燥有机层，减压蒸溜去除溶剂后，将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶环己烷＝2∶3)精制，得到浆液状标记化合物1.36g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.32(s，3H)，1.39(s，3H)，3.02(dd，1H，J＝10.9，12.8Hz)，3.3-3.55(m，2H)，3.88(s，3H)，4.07(dd，1H，J＝4.1，12.8Hz)，4.75-5.05(m，4H)，6.96(d，2H，J＝9.1Hz)，7.3-7.5(m，5H)，7.80(d，2H，J＝9.1Hz)，9.17(s，1H)
(6)(2R，3S，4R，5S)-3，4，5-三羟基-1-(4’-甲氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸苄氧酰胺：
将上述(5)的化合物1.1g溶于甲醇25mL，加入阳离子交换树脂Muromac 3.0g，室温下搅拌一夜。再滤去不溶物，减压浓缩滤液。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(三氯甲烷∶甲醇＝20∶1)精制，得到浆液状标记化合物974mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.16(d，1H，J＝5.0Hz)，3.4-3.7(m，2H)，3.8 1(s，3H)，4.27(d，1H，J＝2.1 Hz)，4.68(s，2H)，4.86(d，1H，J＝5.4Hz)，4.94(d，1H，J＝4.5Hz)，5.05(d，1H，J＝3.8Hz)，7.07(d，2H，J＝8.9Hz)，7.25-7.5(m，5H)，7.71(d，2H，J＝8.9Hz)，11.5(s，1H)
(7)(2R，3S，4R，5S)-3，4，5-三羟基-1-(4’-甲氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羟酰胺：
将上述(6)的化合物316mg溶于甲醇25mL，添加40mg的10％Pd/C，在氢气环境下室温搅拌2小时。再滤去催化剂，减压浓缩滤液，得到无色粉末状标记化合物242mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.25-3.7(m，5H)，3.83(s，3H)，4.34(d，1H，J＝2.0Hz)，4.7-5.2(m，3H)，7.05(d，2H，J＝8.9Hz)，7.72(d，2H，J＝8.9Hz)，8.88(s，1H)，10.86(s，1H).
TOF-Mass：385(M+Na)
实施例2
(2R，3R，4R，5S)-3，4，5-三羟基-1-(4’-甲氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羟酰胺的制造
(1)(2R，4’S，4”S，5’R)-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯：
将已知化合物(2R，4’S，4”S，5’R)-迭氮-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯18.7g溶于乙酸乙酯180mL，加入3.0g的10％Pd/C，在氢气加压下室温搅拌4小时。然后滤去催化剂，减压浓缩滤液。将所得残渣溶于160mL的DMF，加入8.7g的DMAP及对甲氧基苯磺酰氯14.7g，室温搅拌12小时。然后在反应液中加入乙酸乙酯500mL，用1当量盐酸、水及饱和食盐水依次洗净，再以硫酸镁干燥有机层，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3)精制，得到浆液状标记化合物22.0g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.37(s，3H)，1.39(s，3H)，1.42(s，3H)，1.43(s，3H)，3.56(s，3H)，3.86(s，3H)，3.85-4.3(m，6H)，5.36(d，1H，J＝10.1Hz)，6.96(d，2H，J＝9.0Hz)，7.76(d，2H，J＝9.0Hz)
(2)(1”S，2R，4’R，5’S)-[5’-(1”，2”-二羟乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯：
将上述(1)的化合物18.9g溶于90％甲醇水溶液450mL，加入阳离子交换树脂Muromac 16.1g，室温搅拌3日。再滤去不溶物，减压浓缩滤液。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3→三氯甲烷∶甲醇＝40∶1)精制，得到标记化合物10.5g，回收原料6.9g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.37(s，3H)，1.42(s，3H)，3.56(s，3H)，3.7-3.8(m，3H)，3.86(s，3H)，3.99(dd，1H，J＝1.6，9.7Hz)，4.20(dd，1H，J＝2.0，8.4Hz)，4.39(dd，1H，J＝1.7，8.4Hz)，5.53(d，1H，J＝9.8Hz)，6.95(d，2H，J＝9.0Hz)，7.75(d，2H，J＝9.0Hz).
(3)(1”R，2R，4’R，5’S)-[5’-(1”-羟基-2”-甲磺酰氧乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯：
将上述(2)的化合物3.3g溶于二氯甲烷50mL，加入三乙胺1.11mL，在-40℃下冷却后，缓慢滴加甲磺酰氯0.62mL/二氯甲烷3mL，在该温度下搅拌50分钟。再用饱和食盐水洗净反应液，以硫酸镁干燥有机层，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶2→2∶3→1∶1)精制，得到标记化合物1.74g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.38(s，3H)，1.43(s，3H)，2.60(d，1H，J＝8.0Hz)，3.14(s，3H)，3.58(s，3H)，3.87(s，3H)，3.95-4.1(m，2H)，4.25-4.5(m，4H)，5.42(d，1H，J＝9.6Hz)，6.97(d，2H，J＝9.0Hz)，7.76(d，2H，J＝9.0Hz)
(4)(3aR，4R，7S，7aR)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸甲酯：
将上述(3)的化合物4.6g溶于150mL的DMF，加入碳酸钾1.54g，在45℃下搅拌1.5小时。再向反应液中添加乙酸乙酯300mL，用水(×2)及饱和食盐水洗净，以硫酸镁干燥有机层，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3→1∶1)精制，得到浆液状标记化合物3.1g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.35(s，3H)，1.45(s，3H)，2.41(d，1H，J＝4.1Hz)，3.25(dd，1H，J＝9.6，12.0Hz)，3.58(s，3H)，3.5-3.65(m，1H)，3.7-3.8(m，1H)，3.88(s，3H)，3.9-4.2(m，2H)，5.06(d，1H，J＝6.1Hz)，6.98(d，2H，J＝9.0Hz)，7.70(d，2H，J＝9.0Hz).
(5)(3aS，6R，7R，7aS)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[ 1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸苄氧基酰胺的制造：
(5-1)(3aS，6R，7R，7aS)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸甲酯：
将上述(4)的化合物780mg溶于甲醇15mL，加入阳离子交换树脂Muromac 5.0g，室温下搅拌6.5小时。然后滤去不溶物，减压浓缩滤液。所得残渣用30mL的DMF溶解，加入1.8g的DMP和20mg的对甲苯磺酸一水合物，在室温下搅拌5小时，50℃下搅拌1小时。再向反应液中加入乙酸乙酯150mL，用饱和碳酸氢钠水溶液、水及饱和食盐水依次洗净，再以硫酸镁干燥，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3→1∶1)精制，得到标记化合物和上述(4)的化合物的混合物620mg。
(5-2)(3aS，6R，7R，7aS)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸苄氧基酰胺：
将上述(5-1)的混合物620mg溶于甲醇30mL，加入1当量氢氧化钠水溶液8.5mL，室温搅拌5小时。然后在反应液中加入水50mL，用醚洗净，以10％柠檬酸水溶液使水层呈酸性，用乙酸乙酯萃取。用水及饱和食盐水洗净有机层后，用硫酸镁干燥，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣溶于30mL的DMF，加入431mg的WSC和344mg的HOBt。继而加入苄羟胺盐酸盐359mg及291mg的DIEA，室温搅拌一夜。再向反应叶中加入乙酸乙酯100mL，用10％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、水及饱和食盐水依次洗净，再以硫酸镁干燥，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶环己烷＝2∶3→1∶1)精制后，过滤取得析出固体，得到标记化合物98mg。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.36(s，3H)，1.41(s，3H)，2.9-3.2(m，2H)，3.55-3.75(m，2H)，3.88(s，3H)，4.1-4.25(m，2H)，4.68(d，1H，J＝4.3Hz)，6.98(d，2H，J＝9.0Hz)，7.73(d，2H，J＝9.0Hz)，9.1(s，1H).
(6)(2R，3R，4R，5S)-3，4，5-三羟基-1-(4’-甲氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸苄氧酰胺的制造：
将上述(5-2)的化合物100mg溶于1，4-二噁烷/甲醇5-15mL的混合溶液，加入阳离子交换树脂Muromac 2.5g，室温搅拌14小时。再滤去不溶物，减压浓缩滤液。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(三氯甲烷∶甲醇＝20∶1→10∶1)精制，得到标记化合物88mg。
1H-NMR(DMSO-d6+D2O)δ：3.0-3.25(m，1H)，3.28(dd，1H，J＝6.7，9.4Hz)，3.41(t，1H，J＝11.1Hz)，3.81(s，3H)，4.17(d，1H，J＝6.8Hz)，4.49(d，1H，J＝10.6Hz)，4.57(d，1H，J＝10.6Hz)，7.07(d，2H，J＝8.9Hz)，7.25-7.45(m，5H)，7.67(d，2H，J＝8.9Hz)
(7)(2R，3R，4R，5S)-3，4，5-三羟基-1-(4’-甲氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羟酰胺：
将上述(6)的化合物88mg溶于甲醇12mL，加入20mg的10％Pd/C，氢气环境下室温搅拌2小时。再滤去催化剂，减压浓缩滤液后，将所得残渣冻结干燥，得到无色非晶质标记化合物60mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.0-3.7(m，5H)，3.84(s，3H)，4.20(d，1H，J＝5.3Hz)，7.09(d，2H，J＝9.0Hz)，7.67(d，2H，J＝9.0Hz)，8.82(bs，1H)，10.67(s，1H)
TOF-Mass：385(M+Na)，401(M+K)
实施例3
(2R，3R，4R，5S)-1-(4’-乙氧乙氧基-苯磺酰)-3，4，5-三羟基-哌啶-2-羧酸羟酰胺的制造
(1)(2R，4’S，4”S，5’R)-[4-(乙氧乙氧基)苯磺酰氨基]-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯：
将已知化合物(2R，4’S，4”S，5R)-迭氮基-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯30.6g溶于乙酸乙酯360mL，加入5.3g的10％Pd/C，在氢气加压条件下室温搅拌4小时。再滤去催化剂，减压浓缩滤液。将所得残渣溶于180mL的DMF，加入14.2g的DMAP，在冰冷搅拌下添加对乙氧乙氧基苯磺酰氯26.3g，室温搅拌2小时。再向反应液中加入乙酸乙酯500mL，用1当量盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、水及饱和食盐水依次洗净后，以硫酸镁干燥有机层，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝35∶65→2∶3)精制，得到浆液状标记化合物35.5g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.25(t，3H，J＝7.0Hz)，1.37(s，3H)，1.39(s，3H)，1.43(s，3H)，1.44(s，3H)，3.57(s，3H)，3.61(q，2H，J＝7.0Hz)，3.75-3.85(m，2H)，3.85-4.0(m，2H)，4.05-4.3(m，6H)，5.36(d，1H，J＝10.0Hz)，6.99(d，2H，J＝9.0Hz)，7.75(d，2H，J＝9.0Hz)。
(2)(1”S，2R，4’R，5’S)-[5’-(1”，2”-二羟乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-[4-(乙氧乙氧基)苯磺酰氨基]-乙酸甲酯的制造：
将上述(1)的化合物35.1g溶于90％甲醇水溶液800mL，加入阳离子交换树脂Muromac 29.8g，室温搅拌4日。再滤去不溶物，减压浓缩滤液。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3→1∶1→三氯甲烷∶甲醇＝25∶1)精制，得到标记化合物18.2g，回收原料8.0g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.25(t，3H，J＝7.0Hz)，1.38(s，3H)，1.47(s，3H)，2.3(bs，1H)，2.66(d，1H，J＝6.7Hz)，3.5-3.7(m，5H)，3.7-3.85(m，5H)，3.97(d，1H，J＝8.4Hz)，4.1-4.25(m，3H)，4.40(dd，1H，J＝1.7，8.5Hz)，5.46(d，1H，J＝9.5Hz)，6.99(d，2H，J＝9.0Hz)，7.75(d，2H，J＝9.0Hz)。
(3)(1”R，2R，4’R，5’S)-[4-(乙氧乙氧基)苯磺酰氨基]-[5’-(1”-羟基-2”-甲磺酰氧乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-乙酸甲酯：
将上述(2)的化合物18.2g溶于二氯甲烷300mL，加入三乙胺4.25g，在-60℃下冷却后，缓慢滴加甲磺酰氯4.59g/二氯甲烷30mL，在该温度下搅拌50分钟。再用饱和食盐水洗净反应液，以硫酸镁干燥有机层后，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶环己烷＝2∶3→1∶1→3∶2)精制，得到标记化合物13.0g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.25(t，3H，J＝7.0Hz)，1.38(s，3H)，1.43(s，3H)，2.60(d，1H，J＝8.0Hz)，3.14(s，3H)，3.58(q，2H，J＝7.1Hz)，3.75-3.85(m，2H)，3.96(dd，1H，J＝1.7，9.5Hz)，3.9-4.4(m，8H)，5.43(d，1H，J＝9.5Hz)，6.99(d，2H，J＝9.0Hz)，7.75(d，2H，J＝9.0Hz)
(4)(3aR，4R，7S，7aR)-5-(4’-乙氧乙氧基-苯磺酰)-7-羟基-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸甲酯：
Figure C0381501900262
将上述(3)的化合物10.4g溶于200mL的DMF，加入碳酸钾3.1g，在50℃下搅拌1小时。然后向反应液中加入乙酸乙酯500mL，用水(×2)及饱和食盐水洗净，以硫酸镁干燥有机层后，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3→1∶1)精制，得到浆液状标记化合物7.3g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.25(t，3H，J＝7.0Hz)，1.35(s，3H)，1.45(s，3H)，3.25(dd，1H，J＝9.7，12.1Hz)，3.5-3.85(m，9H)，3.85-4.25(m，4H)，5.05(d，1H，J＝6.1Hz)，6.99(d，2H，J＝9.0Hz)，7.69(d，2H，J＝9.0Hz).
(5)(3aS，6R，7R，7aS)-5-(4’-乙氧乙氧基-苯磺酰)-7-羟基-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸苄氧酰胺的制造：
(5-1)(3aS，6R，7R，7aS)-5-(4-乙氧乙氧基-苯磺酰)-7-羟基-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸甲酯：
将上述(4)的化合物2.0g溶于甲醇35mL，加入阳离子交换树脂Muromac 8.0g，室温搅拌一夜。再滤去不溶物，减压浓缩滤液。将所得残渣溶于15mL的DMF，加入2.7g的DMP及对甲苯磺酸一水合物10mg，室温搅拌一夜后，在50℃下搅拌1小时。再向反应液中加入乙酸乙酯150mL，用饱和碳酸氢钠水溶液、水及饱和食盐水依次洗净，以硫酸镁干燥，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3→1∶1)精制，得到标记化合物和上述(4)的化合物的混合物817mg。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.25(t，J＝7.1Hz)，1.26(t，J＝7.2Hz)，1.35(s)，1.43(s)，1.45(s)，3.07(d，J＝5.8Hz)，3.25(dd，J＝9.7，12.0Hz)，3.55(s)，3.58(s)，3.6-3.8(m)，3.8-4.25(m)，4.95(d，J＝6.6Hz)，5.05(d，J＝6.1Hz)，7.0(d，2H，J＝9.0Hz)，7.69(d，2H，J＝9.0Hz).
(5-2)(3aS，6R，7R，7aS)-5-(4’-乙氧乙氧基-苯磺酰)-7-羟基-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸苄氧基酰胺：
将上述(5-1)的混合物817mg溶于甲醇/1，4-二噁烷5-15mL的混合溶剂，加入1当量氢氧化钠水溶液5mL，室温搅拌1小时20分钟。再用5％柠檬酸水溶液中和后以乙酸乙酯萃取。用水及饱和食盐水洗净有机层后，以硫酸镁干燥并减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣溶于10mL的DMF，添加238mg的WSC及190mg的HOBt。继续添加苄羟胺盐酸盐198mg及160mg的DIEA，室温搅拌一夜。再向反应液中加入乙酸乙酯100mL，用10％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、水及饱和食盐水依次洗净后，以硫酸镁干燥并减压蒸溜去除溶剂。在所得残渣中加入乙醚/乙酸乙酯(5∶1)，滤取析出的固体，得到标记化合物98mg。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.25(t，J＝7.0Hz)，1.36(s，3H)，1.40(s，3H)，2.9-3.2(m，2H)，3.5-3.7(m，4H)，3.75-3.85(m，2H)，4.1-4.25(m，4H)，4.68(d，1H，J＝4.2Hz)，4.88(d，1H，J＝11.0Hz)，4.94(d，1H，J＝11.0Hz)，7.01(d，2H，J＝9.0Hz)，7.4(s，5H)，7.71(d，2H，J＝9.0Hz)，9.10(s，1H).
(6)(2R，3R，4R，5S)-1-(4’-乙氧乙氧基-苯磺酰)-3，4，5-三羟基-哌啶-2-羧酸苄氧基酰胺的制造：
将上述(5-2)的化合物溶于甲醇130mL，加入阳离子交换树脂Muromac 23.4g，室温搅拌一夜。再滤去不溶物，减压浓缩滤液。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(三氯甲烷∶甲醇＝20∶1→1 0∶1)精制，得到标记化合物4.3g。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：1.1(t，3H，J＝7.0Hz)，3.0-3.2(m，1H)，3.25-3.3(m，1H)，3.35-3.75(m，7H)，4.54(d，1H，J＝10.6Hz)，4.61(d，1H，J＝10.6Hz)，4.98(d，1H，J＝4.7Hz)，5.13(d，1H，J＝4.7Hz)，5.44(d，1H，J＝4.6Hz)，7.11(d，2H，J＝8.9Hz)，7.35(s，5H)，7.69(d，2H，J＝8.9Hz)，11.31(s，1H)
(7)(2R，3R，4R，5S)-1’-(4’-乙氧乙氧基-苯磺酰)-3，4，5-三羟基-哌啶-2-羧酸羟胺：
Figure C0381501900282
将上述(6)的化合物1.66g溶于甲醇70mL，加入350mg的10％Pd/C，在氢气环境中，在40℃下搅拌1小时。再滤去催化剂并减压浓缩滤液。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(三氯甲烷∶甲醇＝10∶1→5∶1)精制，得到无色粉末状标记化合物815mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：1.13(t，3H，J＝7.0Hz)，3.0-3.3(m，3H)，3.50(q，2H，J＝7.0Hz)，3.35-3.7(m，2H)，3.7-3.75(m，2H)，4.1-4.25(m，3H)，4.90(d，1H，J＝4.9Hz)，5.07(d，1H，J＝4.7Hz)，5.35(d，1H，J＝4.5Hz)，7.09(d，2H，J＝8.9Hz)，7.66(d，2H，J＝8.9Hz)，8.82(d，1H，J＝1.95Hz)，10.67(d，1H，J＝1.95Hz)
TOF-Mass：443(M+Na)，459(M+K).
[α]D4.0°[c＝0.1，MeOH]
实施例4
(2R，3R，4R，5S)-3，4，5-三羟基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羟酰胺的制造
(1)(2R，4’S，4”S，5’R)-(4-苯氧基苯磺酰氨基)-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯：
Figure C0381501900291
将已知化合物(2R，4’S，4”S，5’R)-迭氮-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯22.4g溶于乙酸乙酯200mL，加入2.2g的10％Pd/C，在氢气加压下室温搅拌4.5小时。再滤去催化剂并减压浓缩滤液。将所得残渣溶于250mL的DMF，加入10.4g的DMAP，再加入对苯氧基苯磺酰氯20.0g，室温搅拌2.5小时。再向反应液中加入乙酸乙酯500mL，用1当量盐酸、水及饱和食盐水依次洗净后，以硫酸镁干燥有机层并减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3→1∶2)精制，得到浆液状标记化合物30.1g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.39(s，3H)，1.40(s，3H)，1.44(s，3H)，1.45(s，3H)，3.62(s，3H)，3.9-4.3(m，6H)，5.39(d，1H，J＝10.1Hz)，7.0-7.15(m，4H)，7.2-7.3(m，1H)，7.3-7.5(m，2H)，7.79(d，2H，J＝9.1Hz).
(2)(1”S，2R，4’R，5’S)-[5’-(1”，2”-二羟乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-(4-苯氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯：
将上述(1)的化合物19.4g溶于乙腈230mL，加入氯化铈(III)七水合物27.7g及草酸167mg，室温搅拌30分钟。再加入碳酸钠进行中和，然后滤去不溶物并用乙酸乙酯洗净。滤液和洗液一起进行减压浓缩后，所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶1→3∶2→2∶1)精制，得到标记化合物8.8g，回收原料7.9g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.40(s，3H)，2.15-2.25(m，1H)，2.61(d，1H，J＝8.0Hz)，3.63(s，3H)，3.7-3.85(m，3H)，4.00(dd，1H，J＝1.7，9.8Hz)，4.23(dd，1H，J＝2.4，8.4Hz)，4.43(dd，1H，J＝1.7，8.5Hz)，5.46(d，1H，J＝9.8 Hz)，7.0-7.15(m，4H)，7.2-7.3(m，1H)，7.35-7.5(m，2H)，7.78(d，2H，J＝8.9Hz).
(3)(1”R，2R，4’R，5’S)-[5’-(1”-羟基-2”-甲磺酰氧乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-(4-苯氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯的制造：
Figure C0381501900302
将上述(2)的化合物20.0g溶于二氯甲烷180mL，加入三乙胺4.47g，在-40℃下冷却后，缓慢滴加甲磺酰氯4.80g/二氯甲烷40mL，在该温度下搅拌40分钟。然后用水及饱和碳酸氢钠水溶液洗净反应液，用硫酸镁干燥有机层并减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3→1∶2→1∶1)精制，得到标记化合物14.1g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.39(s，3H)，1.44(s，3H)，2.57(d，1H，J＝7.9Hz)，3.13(s，3H)，3.61(s，3H)，3.9-4.1(m，2H)，4.2-4.5(m，4H)，5.44(d，1H，J＝9.5Hz)，6.95-7.15(m，4H)，7.15-7.35(m，1H)，7.35-7.5(m，2H)，7.77(d，2H，J＝9.0Hz).
(4)(3aR，4R，7S，7aR)-7-羟基-2，2-二甲基-5-(4’-苯氧基苯磺酰)-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸甲酯：
将上述(3)的化合物17.5g溶于300mL的DMF，加入碳酸钾5.2g，在50℃下搅拌1小时20分钟。再向反应液中加入乙酸乙酯500mL，用水及饱和食盐水(×3)洗净，以硫酸镁干燥有机层后减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3)精制，得到浆液状标记化合物11.4g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.37(s，3H)，1.47(s，3H)，2.20(d，1H，J＝4.1Hz)，3.28(dd，1H，J＝9.5，11.9Hz)，3.55-3.6(m，1H)，3.74(t，1H，J＝9.2Hz)，3.9-4.2(m，3H)，5.08(d，1H，J＝6Hz)，7.0-7.2(m，4H)，7.2-7.3(m，1H)，7.35-7.5(m，2H)，7.73(d，2H，J＝9.0Hz).
(5)(3aS，6R，7R，7aS)-7-羟基-2，2-二甲基-5-(4’-苯氧基苯磺酰)-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸苄氧基酰胺的制造：
(5-1)(3aS，6R，7R，7aS)-7-羟基-2，2-二甲基-5-(4’-苯氧基苯磺酰)-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸甲酯：
将上述(4)的化合物11.4g溶于甲醇150mL，加入阳离子交换树脂Muromac 25.0g，室温搅拌一夜。在滤去不溶物后减压浓缩滤液。将析出的固体溶于200mL的DMF，加入20.8g的DMP及对甲苯磺酸一水合物450mg，室温搅拌一夜后再于50℃搅拌2小时。再向反应液中加入碳酸氢钠，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3)精制，得到标记化合物和上述(4)的化合物的混合物6.5g。
(5-2)(3aS，6R，7R，7aS)-7-羟基-2，2-二甲基-5-(4’-苯氧基苯磺酰)-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸苄氧基酰胺：
将上述(5-1)的混合物12.7g溶于甲醇/1，4二噁烷30-150mL的混合溶剂，加入1当量氢氧化钠水溶液30mL，室温搅拌1小时。再向反应液中加入1当量盐酸，然后用乙酸乙酯萃取。以水及饱和食盐水洗净有机层后，用硫酸镁干燥并减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣溶于260mL的DMF，加入10.3g的WSC及8.3g的HOBt。再加入苄基羟胺盐酸盐8.6g及7.0g的DIEA，室温搅拌一夜。再向反应液中加入乙酸乙酯500mL，用10％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、水及饱和食盐水依次洗净后，以硫酸镁干燥有机层并减压蒸溜去除溶剂。向所得残渣中添加乙醚/乙酸乙酯(5∶1)，滤取析出的固体，得到标记化合物1.28g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.40(s，3H)，1.43(s，3H)，3.0-3.25(m，2H)，3.6-3.8(m，2H)，4.02(d，1H，J＝7.9Hz)，4.1 7(dd，1H，J＝3.9，11.4Hz)，4.71(d，1H，J＝5.1Hz)，4.89(d，1H，J＝11.1Hz)，4.95(d，1H，J＝11.3Hz)，7.0-7.15(m，3H)，7.25-7.3(m，3H)，7.35-7.5(m，6H)，7.74(d，2H，J＝9.0Hz)，9.07(s，1H)
(6)(2R，3R，4R，5S)-3，4，5-三羟基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸苄氧基酰胺的制造：
Figure C0381501900321
将上述(5-2)的化合物1.5g溶于甲醇30mL，加入阳离子交换树脂Muromac 3.4g，室温搅拌一夜。再滤去不溶物，减压浓缩滤液。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(三氯甲烷∶甲醇＝20∶1→10∶1)精制，得到标记化合物1.1g。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.1-3.25(m，1H)，3.35-3.5(m，3H)，4.19(d，1H，J＝6.8Hz)，4.53(d，1H，J＝10.5Hz)，4.61(d，1H，J＝10.5Hz)，5.01(d，1H，J＝4.9Hz)，5.17(d，1H，J＝4.8Hz)，5.49(d，1H，J＝4.6Hz)，7.0-7.15(m，4H)，7.15-7.3(m，1H)，7.3-7.5(m，7H)，7.75(d，2H，J＝8.9Hz)，11.32(s，1H).
(7)(2R，3R，4R，5S)-3，4，5-三羟基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羟酰胺：
Figure C0381501900331
将上述(6)的化合物1.68g溶于甲醇70mL，加入350mg的10％Pd/C，在氢气环境中，在40℃下搅拌2小时。再滤去催化剂，减压浓缩滤液。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(三氯甲烷∶甲醇＝20∶1→9∶1→4∶1)精制，得到无色粉末状标记化合物951mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.0-3.7(m，5H)，4.20(d，1H，J＝6.7Hz)，4.93(d，1H，J＝4.9Hz)，5.11(d，1H，J＝4.7Hz)，5.39(d，1H，J＝4.5Hz)，7.0-7.25(m，4H)，7.25-7.35(m，1H)，7.4-7.55(m，2H)，7.73(d，2H，J＝9.0Hz)，8.83(d，1H，J＝1.9Hz)，10.66(d，1H，J＝1.9Hz).
TOF-Mass：447(M+Na)，463(M+K)
[α]D5.9°(c＝0.1，MeOH)
实施例5
(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羟基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羟酰胺的制造：
(1)(2R，4’S，4”R，5’R)-(4-苯氧基苯磺酰氨基)-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯：
Figure C0381501900341
将已知化合物(2R，4’S，4”R，5’R)-迭氮-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯30.1g溶于乙酸乙酯300mL，加入4.3g的10％Pd/C，在加压氢气环境下，在40℃下搅拌4小时。再滤去催化剂，减压浓缩滤液。将所得残渣溶于390mL的DMF，加入18.1g的DMAP及对苯氧基苯磺酰氯34.5g，室温搅拌一夜。再向反应液中加入乙酸乙酯700mL，用1当量盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、水及饱和食盐水依次洗净后，以硫酸镁干燥有机层并减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3→2∶3)精制，得到标记化合物38.3g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.33(s，3H)，1.37(s，3H)，1.40(s，3H)，1.48(s，3H)，3.57(s，3H)，3.85-4.3(m，6H)，5.46(d，1H，J＝10.5Hz)，6.95-7.1(m，4H)，7.15-7.3(m，1H)，7.35-7.5(m，2H)，7.7-7.85(m，2H)
(2)(1”R，2R，4’R，5’S)-[5’-(1”，2”-二羟乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-(4-苯氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯：
Figure C0381501900342
将上述(1)的化合物25.8g溶于乙腈300mL，加入氯化铈(III)七水合物36.9g及草酸223mg，室温搅拌70分钟。再加入碳酸钠中和，然后滤去不溶物，用乙酸乙酯洗净。将滤液和洗液一起减压浓缩，然后将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶3→3∶1)精制，得到标记化合物16.0g，回收原料7.0g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.35(s，3H)，1.42(s，3H)，2.61(bs，1H)，3.61(s，3H)，3.65-3.95(m，3H)，4.05-4.25(m，1H)，4.25-4.4(m，2H)，5.46(d，1H，J＝8.6Hz)，6.95-7.1(m，4H)，7.15-7.3(m，1H)，7.3-7.5(m，2H)，7.7-7.85(m，2H)
(3)(1”R，2R，4’R，5’S)-[5’-(1”-羟基-2”-甲磺酰氧乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-(4-苯氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯：
将按上述(2)所得化合物25.0g溶于二氯甲烷430mL，加入三乙胺5.79g，冷却至-40℃后，缓慢滴加甲磺酰氯6.25g/二氯甲烷20mL，并在该温度下搅拌1小时。再用水洗净反应液，以硫酸镁干燥有机层后，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶环己烷＝35∶65→2∶3→1∶1)精制，得到标记化合物13.5g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.34(s，3H)，1.41(s，3H)，2.91(d，1H，J＝6.5Hz)，3.13(s，3H)，3.61(s，3H)，3.85-4.0(m，1H)，4.05-4.28(m，2H)，4.28-4.4(m，2H)，4.54(dd，1H，J＝2.5，11.1Hz)，5.47(d，1H，J＝9.5Hz)，6.95-7.1(m，4H)，7.15-7.3(m，1H)，7.35-7.5(m，2H)，7.7-7.85(m，2H)
(4))(3aR，4R，7R，7aR)-7-羟基-2，2-二甲基-5-(4’-苯氧基苯磺酰)-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸甲酯：
Figure C0381501900352
将上述(3)的化合物13.5g溶于320mL的DMF，加入碳酸钾4.0g，在45℃下搅拌1小时10分钟。再向反应液中加入乙酸乙酯500mL，以水及饱和食盐水(×2)洗净，用硫酸镁干燥有机层后，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶环己烷＝2∶3)精制，得到标记化合物10.3g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.35(s，3H)，1.44(s，3H)，2.23(s，1H)，3.65(s，3H)，3.65-3.75(m，1H)，3.82(dd，1H，J＝2.5，9.8Hz)，4.0-4.2(m，2H)，4.3-4.4(m，1H)，5.05(d，1H，J＝6.3Hz)，6.95-7.1(m，4H)，7.15-7.25(m，1H)，7.3 5-7.45(m，2H)，7.7-7.8(m，2H)
(5)(3aR，4R，7R，7aR)-7-羟基-2，2-二甲基-5-(4’-苯氧基苯磺酰)-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸苄氧基酰胺：
Figure C0381501900361
将上述(4)的化合物10.2g溶于甲醇/1，4-二噁烷30-150mL的混合溶剂，加入1当量氢氧化钠55mL，室温搅拌1小时10分钟。再向反应液中加入5％柠檬酸水溶液中和，然后用乙酸乙酯萃取。用水及饱和食盐水洗净有机层，再以硫酸镁干燥减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣溶于200mL的DMF，加入5.48g的WSC及3.86g的HOBt，再加入含苄羟胺盐酸盐4.56g及3.70g的DIEA的50mL的DMF溶液，室温搅拌2小时30分钟。再向反应液中加入乙酸乙酯500mL，以0.5当量盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、水及饱和食盐水依次洗净，再用硫酸镁干燥有机层减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶环己烷＝1∶1)精制，得到无色粉末的标记化合物8.9g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.28(s，3H)，1.42(s，3H)，2.39(s，1H)，3.39(d，1H，J＝14.5Hz)，3.61(d，1H，J＝9.1Hz)，4.05-4.25(m，1H)，4.28(s，1H)，4.83(d，1H，J＝11.2Hz)，4.92(d，1H，J＝11.2Hz)，5.07(d，1H，J＝5.4Hz)，6.95-7.1(m，4H)，7.1 5-7.25(m，1H)，7.3-7.5(m，7H)，7.8-7.9(m，2H)，8.94(s，1H).
(6)(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羟基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸苄氧基酰胺：
Figure C0381501900371
将上述(5)的化合物8.68g溶于甲醇350mL，加入阳离子交换树脂Muromac 19.0g，室温搅拌一夜。再滤去不溶物并减压浓缩滤液。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(三氯甲烷∶甲醇＝1∶0→30∶1→20∶1→10∶1)精制，得到无色粉末状标记化合物7.35g。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.65-3.90(m，5H)，4.15(d，1H，J＝6.1Hz)，4.52(d，1H，J＝10.5Hz)，4.59(d，1H，J＝10.5Hz)，4.65-4.75(m，2H)，5.26(d，1H，J＝4.3Hz)，6.95-7.1(m，4H)，7.15-7.25(m，1H)，7.3-7.45(m，7H)，7.78(d，2H，J＝8.8Hz)，11.2(s，1H).
(7)(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羟基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羟酰胺：
将上述(6)的化合物6.0g溶于甲醇180mL，加入1.3g的10％Pd/C，在氢气环境下，在45℃下搅拌2小时30分钟。再滤去催化剂并减压浓缩滤液。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(三氯甲烷∶甲醇＝20∶1→10∶1→5∶1)精制，得到无色粉末状标记化合物3.76g。
熔点：103.5-112℃
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.5-3.95(m，5H)，4.13(d，1H，J＝6.5Hz)，4.5 5-4.7(m，2H)，5.16(d，1H，J＝4.3Hz)，7.04(d，2H，J＝8.8Hz)，7.14(d，2H，J＝7.6Hz)，7.25(t，1H，J＝7.3Hz)，7.4-7.55(m，2H)，7.78(d，2H，J＝8.8Hz)，8.76(s，1H)，10.56(s，1H).
TOF-Mass：425(M+H)，447(M+Na)，453(M+K)
[α]D36°(c＝0.1，MeOH)
实施例6
(3aS，4R，7R，7aR)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸羟酰胺的制造
(1)(3S，4’S，5’R)-3-[5’-(叔丁基二甲基硅烷羟甲基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-2-(4”-甲氧苯磺酰氨基)-3-(四氢吡喃氧)-丙酸苄酯：
将通式(IV)中R1是甲氧基，3位的乙酸基是羟基的已知化合物(IVa)21g溶于二氯甲烷150mL，加入二氢吡喃5.79g和对甲苯磺酸一水合物200mg，室温搅拌2.5小时。再向反应液中加入三氯甲烷50mL，用饱和食盐水洗净，然后以硫酸镁干燥减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶7→1∶6→1∶5→1∶4)精制，得到浆液状标记化合物16.7g。
1H-NMR(CDCl3)δ：0.01-0.06(m)，0.8-1.0(m)，1.2-1.8(m)，3.0-3.25(m)，3.5-4.2(m)，4.2-4.65(m)，4.8-5.15(m)，5.37(d，J＝10.7Hz)，5.49(d，J＝8.6Hz)，5.54(d，J＝9.9Hz)，6.60(d，J＝10.5Hz)，6.8-6.95(m)，7.2-7.4(m)，7.7-7.85(m).
(2)(3S，4’S，5’S)-3-[5’-羟甲基-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-2-(4”-甲氧基苯磺酰氨基)-3-(四氢吡喃氧)-丙酸苄酯：
Figure C0381501900391
将上述(1)的化合物16.7g溶于200mL的THF，加入乙酸3.9g及64.8mL的TBAF，室温搅拌一夜。再减压浓缩反应液，并加入乙酸乙酯100mL，水洗后用硫酸镁干燥，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶环己烷＝1∶1→2∶1)精制，得到浆液状标记化合物12.9g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.1-1.6(m)，3.0-3.3(m)，3.5-4.0(m)，4.0-4.25(m)，4.25-4.65(m)，4.9-5.2(m)，5.37(d，J＝10.8Hz)，5.49(d，J＝8.1Hz)，5.57(d，J＝9.8Hz)，6.57(d，J＝10.4Hz)，6.8-7.0(m)，7.2-7.4(m)，7.7-7.85(m)
(3)(3aS，6R，7S，7as)-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-7-(四氢吡喃氧)-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-6-羧酸苄酯：
将上述(2)的化合物12.8g溶于200mL的THF，加入三苯基膦13.9g及8.95g的DEAD，室温搅拌1.25小时。再向反应液中加入乙酸乙酯150mL，水洗后用硫酸镁干燥并减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶环己烷＝1∶3)精制，得到浆液状标记化合物10.7g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.2-1.5(m，6H)，1.5-2.0(m，6H)，3.15-3.3(m，2H)，3.5-3.7(m，1H)，3.75-4.2(m，3H)，3.86(s，3H)，4.75-4.85(m，1H)，4.9-4.95(m，1H)，5.0-5.3(m，3H)，6.8-6.95(m，2H)，7.25-7.5(m，5H)，7.7-7.9(m，2H).
(4)(2R，3S，4R，5S)-3，4，5-三羟基-1-(4’-甲氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸苄酯：
将上述(3)的化合物10.6g溶于甲醇110mL，加入阳离子交换树脂Muromac 50g，室温搅拌一夜。再滤去不溶物，减压浓缩滤液。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(三氯甲烷∶甲醇＝50∶1→30∶1→10∶1)精制，得到浆液状标记化合物7.4g。
1H-NMR(CDCl3)δ：2.95(t，1H，J＝1 1.1Hz)，3.3-3.6(m，2H)，3.7-4.0(m，4H)，3.82(s，3H)，4.53(bs，1H)，4.9-5.2(m，3H)，6.82(d，2H，J＝8.9Hz)，7.2-7.4(m，5H)，7.73(d，2H，J＝8.9Hz).
(5)(3aS，4R，7S，7aR)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸苄酯：
Figure C0381501900402
将上述(4)的化合物7.4g溶于80mL的DMF，加入17.6g的DMP及对甲苯磺酸一水合物70mg，室温搅拌一夜后，在60℃下搅拌1.5小时。再向反应液中加入乙酸乙酯150mL，用饱和碳酸氢钠水溶液及饱和食盐水(×3)洗净，以硫酸镁干燥有机层，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶环己烷＝1∶3→1∶2→1∶1)精制，得到浆液状标记化合物6.3g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.77(s，3H)，1.28(s，3H)，3.03(d，1H，J＝6.3Hz)，3.30(dd，1H，J＝3.1，12.1Hz)，3.3-3.5(m，1H)，3.75-3.85(m，1H)，3.86(s，3H)，4.08(dd，1H，J＝2.0，5.7Hz)，4.73(dd，1H，J＝1.8，6.8Hz)，4.96(d，1H，J＝1.8Hz)，5.19(d，1H，J＝12.2Hz)，5.26(d，1H，J＝12.2Hz)，6.92(d，2H，J＝9.0Hz)，7.4(s，5H)，7.78(d，2H，J＝9.0Hz).
(6)(3aS，4R，7R，7aR)-7-乙酸基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸苄酯：
Figure C0381501900411
将上述(5)的化合物4.1g溶于二氯甲烷/吡啶60-10mL，在-20℃下搅拌，加入三氟甲磺酸酐2.89mL，并在该温度下搅拌30分钟。再向反应液中加入三氯甲烷50mL，以1当量盐酸及食盐水洗净后，用硫酸镁干燥，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶1)精制，所得化合物溶于乙腈60mL，加入乙酸铯1.77g及3.05g的18-冠-6，室温搅拌2小时。再向反应液中加入乙酸乙酯100mL，用饱和食盐水洗净后，用硫酸镁干燥，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶柱色谱(乙酸乙酯∶环己烷＝1∶4→1∶3)精制，得到浆液状标记化合物791mg。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.18(s，3H)，1.33(s，3H)，1.93(s，3H)，3.26(dd，1H，J＝5.9，12.5Hz)，3.67(dd，1H，J＝4.3，13.0Hz)，3.87(s，3H)，4.15-4.25(m，1H)，4.8-4.9(m，2H)，5.14(d，1H，J＝1.8Hz)，5.23(d，1H，J＝12.4Hz)，5.28(d，1H，J＝12.4Hz)，6.93(d，2H，J＝9.0Hz)，7.3-7.5(m，5H)，7.84(d，2H，J＝9.0Hz).
(7)(3aS，4R，7R，7aR)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸苄氧基酰胺：
Figure C0381501900412
将上述(6)的化合物730mg溶于甲醇10mL，加入132mg的28％NaOMe，室温搅拌1小时。再加入132mL的28％NaOMe，室温搅拌1小时，然后向反应液中加入乙酸乙酯100mL，用1当量盐酸及饱和食盐水洗净。用硫酸镁干燥有机层，减压蒸溜去除溶剂后，将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶1)精制，得到非晶质标记合物587mg。
1H-NMR(CDCl3)δ：0.93(s，3H)，1.23(s，3H)，3.10(dd，1H，J＝2.4，11.8Hz)，3.29(d，1H，J＝6.6Hz)，3.45-3.55(m，1H)，3.7-3.8(m，1H)，3.90(s，3H)，4.1-4.2(m，1H)，4.6(d，1H，J＝2Hz)，4.74(dd，1H，J＝2.0，7.3Hz)，4.99(s，2H)，7.01(d，2H，J＝9Hz)，7.35-7.55(m，5H)，7.77(d，2H，J＝9Hz)，9.36(s，1H).
(8)(3aS，4R，7R，7aR)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸羟酰胺：
将上述(7)的化合物278mg溶于乙酸乙酯15mL，加入38mg的10％Pd/C，在氢气环境下室温搅拌2小时。再滤去催化剂并减压浓缩滤液。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(三氯甲烷∶甲醇＝50∶1→30∶1→10∶1)精制后，冻结干燥，得到无色非晶质标记化合物205mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：0.99(s，3H)，1.18(s，3H)，3.20(dd，1H，J＝2.1，10.8Hz)，3.25-3.45(m，2H)，3.80(s，3H)，3.92(t，1H，J＝5.3Hz)，4.28(d，1H，J＝6.2Hz)，4.53(s，1H)，5.92(d，1H，J＝6.6Hz)，7.14(d，2H，J＝9.0Hz)，7.75(d，2H，J＝9.0Hz)，9.28(s，1H)，11.12(s，1H).
TOF-Mass：425(M+Na)，441(M+K)
实施例7
(3aR，4R，7R，7aR)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸苄氧基酰胺的制造
(1)(3aR，4R，7S，7aR)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸羟酰胺：
将实施例2(4)的化合物1.5g溶于甲醇30mL，加入1当量氢氧化钠水溶液9.5mL，室温搅拌1小时。再追加氢氧化钠水溶液4mL及1，4-二噁烷4mL，搅拌1小时。再向反应液中加水50mL，用乙醚洗净，然后以10％柠檬酸水溶液使水层呈酸性，用乙酸乙酯萃取。用水及饱和食盐水洗净后，以硫酸镁干燥，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣溶于35mL的DMF，加入932mg的WSC及744mg的HOBt。继而加入苄羟胺盐酸盐776mg及628mg的DIEA，室温搅拌一夜。再向反应液中加入乙酸乙酯150mL，用10％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、水及饱和食盐水依次洗净后，以硫酸镁干燥有机层，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶环己烷＝2∶3→1∶1)精制，得到标记化合物910mg。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.23(s，3H)，1.42(s，3H)，2.35(d，1H，J＝4.6Hz)，2.9(dd，1H，J＝9.8，12.1Hz)，3.4-3.55(m，1H)，3.59(dd，1H，J＝5.6，9.6Hz)，3.75-4.0(m，2H)，3.87(s，3H)，4.1(d，1H，J＝14.3Hz)，4.14(d，1H，J＝14.3Hz)，5.04(d，1H，J＝5.2Hz)，6.98(d，2H，J＝9.0Hz)，7.38(s，5H)，7.85(d，2H，J＝9.0Hz)，8.97(s，1H).
(2)(3aR，4R，7R，7aR)-7-乙酸基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸苄氧基酰胺：
Figure C0381501900432
(2-1)(3aR，4R，7S，7aR)-三氟甲磺酸[4-苄氧基氨甲酰-5-(4’甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-7-基]酯：
将上述(1)的化合物1.0g溶于吡啶10mL，在-20℃下，搅拌加入三氟甲磺酸酐0.4mL，在该温度下搅拌2小时。再向反应液中加入乙酸乙酯50mL，用稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液及食盐水依次洗净，再以硫酸镁干燥，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3→1∶2)精制，得到标记化合物670mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：1.18(s，3H)，1.41(s，3H)，3.82(s，3H)，3.75-3.85(m，2H)，4.23(d，1H，J＝5.4，12Hz)，4.33(t，1H，J＝9Hz)，4.56(d，1H，J＝12Hz)，4.62(d，1H，J＝6Hz)，4.67(d，1H，J＝12Hz)，5.3-5.35(m，1H)，7.1-7.2(m，2H)，7.3-7.5(m，5H)，7.75-7.8(m，2H)，11.67(s，1H)
(2-2)(3aR，4R，7R，7aR)-7-乙酸基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸苄氧基酰胺：
将上述(2-1)的化合物670mg溶于乙腈30mL，加入乙酸铯0.5g及1.4g的18-冠-6，室温搅拌16小时。再向反应液中加入乙酸乙酯100mL，用稀盐酸、饱和碳酸氧钠水溶液及饱和食盐水依次洗净，以硫酸镁干燥，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3→1∶1)精制，得到标记化合物161mg。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：1.26(s，3H)，1.33(s，3H)，3.82(s，3H)，3.75-3.95(m，3H)，4.24(dd，1H，J＝3，10.2Hz)，4.63(d，1H，J＝10.8Hz)，4.72(d，1H，J＝10.8Hz)，4.75(d，1H，J＝6.6Hz)，5.35-5.4(m，1H)，7.1-7.2(m，2H)，7.3-7.45(m，5H)，7.7-7.75(m，2H)，11.55(s，1H).
(3)(3aR，4R，7R，7aR)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸苄氧基酰胺：
将上述(2-2)的化合物100mg溶于甲醇2mL，加入28％甲醇钠18mg，室温搅拌2小时。再加入阳离子交换树脂中和，滤去不溶物，减压浓缩滤液。将所得残渣用硅胶柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶2→1∶1→2∶1)精制，得到标记化合物(69mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.43(s，3H)，1.53(s，3H)，3.36(d，1H，J＝14.4Hz)，3.5-3.65(m，1H)，3.86(s，3H)，3.8-3.9(m，2H)，4.1-4.2(m，1H)，4.27(bs，1H)，4.86(d，1H，J＝11.4Hz)，4.93(d，1H，J＝11.4Hz)，5.08(bs，1H)，6.9-7.0(m，2H)，7.3-7.4(m，5H)，7.8-7.9(m，2H)，8.88(s，1H).
实施例8
(3aS，4R，7S，7aS)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸甲酯的制造
(1)(2R，4’R，4”S，5’S)-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯：
Figure C0381501900451
用已知化合物[(2R，4’S，4”R，5’S)-迭氮-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯11.7g按照实施例2(1)一样反应，制得无色固体状标记化合物11.9g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.28(s，3H)，1.33(s，3H)，1.36(s，3H)，1.46(s，3H)，3.55(s，3H)，3.87(s，3H)，3.8-4.0(m，3H)，4.05-4.25(m，3H)，5.58(d，1H，J＝7.9Hz)，6.95(d，2H，J＝8.9Hz)，7.78(d，2H，J＝8.9Hz).
(2)(1”S，2R，4’S，5’R)-[5’-(1”，2”-二羟乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯：
Figure C0381501900452
用上述(1)的化合物14.7g按照实施例2(2)一样反应，制得标记化合物7.1g，回收原料4.3g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.32(s，3H)，1.36(s，3H)，1.9(bs，1H)，3.54(s，3H)，3.65-3.8(m，2H)，3.86(s，3H)，3.8-4.05(m，1H)，4.12(d，1H，J＝5.8Hz)，4.25-4.34(m，1H)，6.97(d，2H，J＝9.0Hz)，7.79(d，2H，J＝9.0Hz).
(3)(1”R，2R，4’S，5’R)-[5’-(1”-羟基-2”-甲磺酰氧乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯：
用上述(2)的化合物7.06g按照实施例2(3)一样反应，制得标记化合物2.6g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.30(s，3H)，1.35(s，3H)，3.12(s，3H)，3.57(s，3H)，3.87(s，3H)，3.9-4.0(m，2H)，4.0-4.2(m，1H)，4.2-4.35(m，2H)，4.45-4.55(m，1H)，6.98(d，2H，J＝9.0Hz)，7.78(d，2H，J＝9.0Hz).
(4)(3aS，4R，7S，7aS)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸甲酯：
Figure C0381501900462
用上述(3)的化合物2.47g按照实施例2(4)一样反应，制得浆液状标记化合物1.01g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.44(s，3H)，1.46(s，3H)，2.375(d，1H，J＝1.4Hz)，3.23(dd，1H，J＝5.1，14.7Hz)，3.46(dd，1H，J＝4.5，9.8Hz)，3.75(s，3H)，3.8-3.9(m，1H)，3.88(s，3H)，4.1-4.2(m，1H)，4.35-4.4(m，1H)，4.41(d，1H，J＝8.7Hz)，6.99(d，2H，J＝9.0Hz)，7.80(d，2H，J＝9.0Hz)
实施例9
(3aS，4R，7R，7aS)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸苄氧基酰胺的制造
(1)(2S，4’S，4”R，5’R)-乙酸基-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯：
Figure C0381501900471
将化合物[(2R，4’S，4”R，5’R)-羟基-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯30g(Helvetica.Chimica Acta，Vol.71，609-618项(1988)参照)溶于二氯甲烷/吡啶350-39mL，在-20℃下，搅拌加入三氟甲磺酸酐/二氯甲烷20-10mL，在该温度下搅拌1小时。再向反应液中加入三氯甲烷50mL，水洗后用硫酸镁干燥，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3)精制而得的化合物再溶于乙腈130mL，加入乙酸铯4.89g及8.45g的18-冠-6，在室温下搅拌1小时。再向反应液中加入乙酸乙酯200mL，用水及饱和食盐水洗净后，以硫酸镁干燥，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3)精制，得到浆液状标记化合物9.0g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.41(s，3H)，1.46(s，3H)，1.47(s，3H)，1.48(s，3H)，2.24(s，3H)，3.83(s，3H)，3.93(dd，1H，J＝6.7，8.4Hz)，4.05-4.2(m，2H)，4.5-4.65(m，1H)，4.50(dd，1H，J＝5.3，7.8Hz)，5.16(d，1H，J＝3.1Hz)
(2)(2S，4’S，4”R，5’R)-羟基-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯：
Figure C0381501900481
将上述(1)的化合物9.0g溶于甲醇45mL，加入2.61mL的28％NaOMe，室温搅拌3小时40分钟。再向反应液中加入乙酸乙酯200mL，用1当量盐酸及饱和食盐水洗净。以硫酸镁干燥有机层，减压蒸溜去除溶剂后，将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3→3∶7)精制，得到浆液状标记化合物3.0g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.41(s，3H)，1.42(s，3H)，1.43(s，3H)，2.0-2.15(m，1H)，3.7-4.0(m，3H)，3.81(s，3H)，4.0-4.15(m，1H)，4.38(dd，1H，J＝5.3，7.5Hz)
(3)(2R，4’R，4”R，5’S)-迭氮-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯：
将上述(2)的化合物3.0g溶于二氯甲烷/吡啶50-4mL，在-30℃下搅拌，加入三氟甲磺酸酐2.0mL，在该温度下搅拌1小时。再向反应液中加入三氯甲烷50mL，用1当量盐酸及饱和食盐水洗净。以硫酸镁干燥有机层，减压蒸溜去除溶剂，将所得残渣溶于30mL的DMF，加入迭氮化钠1.21g，室温搅拌2.5小时。再向反应液中加入乙酸乙酯50mL，用1当量盐酸及饱和食盐水洗净后，以硫酸镁干燥，减压蒸溜去除溶剂。将所得残渣用硅胶中压柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3)精制，得到浆液状标记化合物2.89g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.37(s，3H)，1.43(s，6H)，1.44(s，3H)，3.83(s，3H)，3.85-3.95(m，1H)，4.0-4.23(m，5H)，4.40(dd，1H，J＝4.8，7.2Hz)
(4)(2R，4’R，4”R，5’S)-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-(2’，2’，2”，2”-四甲基-[4’，4”]二[[1，3]二氧戊环]-5’-基)-乙酸甲酯：
Figure C0381501900491
用上述(3)的化合物18.8g按照实施例2(1)一样反应，制得无色固体状标记化合物27.4g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.32(s，3H)，1.378(s，3H)，1.382(s，3H)，1.44(s，3H)，3.50(s，3H)，3.87(s，3H)，3.85-4.10(m，5H)，4.20-4.25(m，1H)，5.3 8(d，1H，J＝9.5Hz)，6.97(d，2H，J＝9.0Hz)，7.76(d，2H，J＝9.0Hz).
(5)(1”R，2R，4’S，5’R)-[5’-(1”，2”-二羟乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯：
用上述(4)的化合物19.8g按照实施例4(2)一样反应，制得标记化合物11.6g，回收原料2.6g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.35(s，3H)，1.38(s，3H)，3.49(s，3H)，3.7-3.8(m，3H)，3.86(s，3H)，3.85-4.25(m，3H)，6.97(d，2H，J＝9.0Hz)，7.76(d，2H，J＝9.0Hz)
(6)(1”S，2R，4’S，5’R)-[5’-(1”-羟基-2”-甲磺酰氧乙基)-2’，2’-二甲基-[1，3]二氧戊环-4’-基]-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-乙酸甲酯：
Figure C0381501900501
用上述(5)的化合物11.1g按照实施例2(3)一样反应，制得标记化合物7.6g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.35(s，3H)，1.39(s，3H)，2.71(d，1H，J＝8.0Hz)，3.13(s，3H)，3.51(s，3H)，3.87(s，3H)，3.9-4.4(m，6H)，5.60(d，1H，J＝9.9Hz)，6.98(d，2H，J＝9.0Hz)，7.77(d，2H，J＝9.0Hz)
(7)(3aS，4R，7R，7aS)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸甲酯：
用上述(6)的化合物(7.5g)按照实施例2(4)一样反应，制得浆液状标记化合物6.05g。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.44(s，6H)，2.74(d，1H，J＝7.2Hz)，3.26(dd，1H，J＝2.8，14.9Hz)，3.45-3.75(m，3H)，3.80(s，3H)，3.88(s，3H)，3.95-4.1(m，1H)，4.33(d，1H，J＝8.9Hz)，6.99(d，2H，J＝9.0Hz)，7.84(d，2H，J＝9.0Hz).
(8)(3aS，4R，7R，7aS)-7-羟基-5-(4’-甲氧基苯磺酰)-2，2-二甲基-六氢-[1，3]二噁茂[4，5-c]吡啶-4-羧酸苄氧基酰胺：
用上述(7)的化合物350mg按照实施例7(1)一样反应，制得标记化合物114mg。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.35(s，3H)，1.41(s，3H)，2.57(d，1H，J＝7.7Hz)，3.32(dd，1H，J＝7.3，10.2Hz)，3.48(d，1H，J＝2.8Hz)，3.87(s，3H)，3.85(dd，1H，J＝8.8，10.3Hz)，3.9-4.0(m，1H)，4.27(d，1H，J＝8.5Hz)，4.93(d，1H，J＝11.0Hz)，4.99(d，1H，J＝10.9Hz)，6.99(d，2H，J＝9.0Hz)，7.3-7.5(m，5H)，7.84(d，2H，J＝9.0Hz)，8.86(s，1H)
实施例10
药片的制造
如下所述，制得每片中含100mg实施例5的(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羟基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羟酰胺(化合物e)的药片。
配方
成分              配量
主药(化合物e)    100重量份
玉米淀粉         46重量份
微晶纤维素       98重量份
羟丙基纤维素     2重量份
硬脂酸镁         4重量份
操作
将主药、玉米淀粉及微晶纤维素混合，加入溶于50重量份水中的羟丙基纤维素并充分捏合。将该捏合物通过筛子，制成颗粒并干燥，然后在所得颗粒中混入硬脂酸镁，制得1片250mg的药片。
实施例11
制造颗粒剂
如下所述，制得含实施例5的(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羟基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羟酰胺(化合物e)的颗粒剂。
配方
成分                 配量
主药(化合物e)        200重量份
乳糖                 185重量份
玉米淀粉             109重量份
羟丙基纤维素         6重量份
操作
将主药、乳糖和玉米淀粉混合，向该混合物中加入溶于120重量份水中的羟丙基纤维素，并充分捏合。将该捏合物通过20目筛子，制成颗粒，干燥整粒，制得500mg中含主药200mg的颗粒剂。
实施例12
胶囊剂的制造
如下所述，制得每个胶囊中含100mg实施例5的(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羟基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羟酰胺(化合物e)的胶囊剂。
配方
成分              配量
主药(化合物e)    100重量份
乳糖             35重量份
玉米淀粉         60重量份
硬脂酸镁         5重量份
操作
将上述各成分充分混合，将该混合粉末200mg充填于胶囊中，得到胶囊剂。
实施例13
注射剂的制造
在实施例5的0.5重量份(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羟基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羟酰胺(化合物e)和5重量份山梨糖醇的混合物中加入注射用蒸馏水，将混合物溶解，并配成100重量份，用膜滤器过滤该水溶液。将滤液以每次5g充填于经氮气置换的安瓿内，封盖后，在120℃下进行15分钟的杀菌处理，得到一安瓿中含25mg化合物(e)的注射剂。
实施例14
软膏剂的制造
将实施例5的(2R，3R，4R，5R)-3，4，5-三羟基-1-(4’-苯氧基苯磺酰)-哌啶-2-羧酸羟酰胺(化合物e)1.0重量份和丁基苯甲酸0.1重量份分散于5.0重量份的轻质流动石蜡中，在乳钵中粉碎后，用200目筛筛选。将该粉末与流动石蜡5.0重量份混合，然后加入经约60℃加热的凝胶化烃88.9重量份中，均匀分散，制得油性软膏。
产业实用性
本发明的药剂可抑制因12-O-十四酰基佛波醇-13-乙酸酯(下文简称为TPA)的刺激性而导致的由HB-EGF细胞膜的游离(参照试验例1)。并可抑制试验鼠背部涂布TPA后的表皮增生的结果，抑制试验鼠皮肤创伤模型中的角化细胞的再上皮化(参照试验例2，3)。在使用试验鼠的这些实验中，未观察到重危副作用，所以，本发明的药剂可作为有效的角化细胞增殖抑制剂。

Claims (2)

1.一种由下述通式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐：
式中，R1表示氢原子、卤原子、羟基、氨基、C1～C8烷基、苯基、苯氧基、C1～C8烷氧基或异烯丙氧基，该C1～C8烷氧基可被C1～C4烷氧基或C1～C4烷基硫代基取代。
2.将权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分的角质化细胞繁殖抑制剂。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1081137A1 (en) * 1999-08-12 2001-03-07 Pfizer Products Inc. Selective inhibitors of aggrecanase in osteoarthritis treatment
WO2001070269A1 (fr) * 2000-03-24 2001-09-27 Akzo Nobel N.V. Inhibiteurs de la croissance des keratinocytes et derives d'acide hydroxamique
US6329397B1 (en) * 1998-08-12 2001-12-11 Pfizer Hydroxy pipecolate hydroxamic acid derivatives
EP3500012A1 (en) * 2016-08-08 2019-06-19 Sony Corporation Communication device, communication method, and program

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0350012A3 (en) * 1988-07-08 1990-09-05 Meiji Seika Kaisha Ltd. Antiviral composition
US20060058350A1 (en) 2002-12-26 2006-03-16 Carna Biosciences, Inc. Alkynyl-substituted azasugar derivative and drug containing the same as the active ingredient

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6329397B1 (en) * 1998-08-12 2001-12-11 Pfizer Hydroxy pipecolate hydroxamic acid derivatives
EP1081137A1 (en) * 1999-08-12 2001-03-07 Pfizer Products Inc. Selective inhibitors of aggrecanase in osteoarthritis treatment
WO2001070269A1 (fr) * 2000-03-24 2001-09-27 Akzo Nobel N.V. Inhibiteurs de la croissance des keratinocytes et derives d'acide hydroxamique
EP3500012A1 (en) * 2016-08-08 2019-06-19 Sony Corporation Communication device, communication method, and program

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A Short Synthesis of Polyhydroxylated Piperidines by AldolReaction of Chelated Amino Acid Ester Enolates Uli Kazmaier,Roland Grandel,European Journal of Organic Chemistry,No.9 1998 *

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