CN113881607A - 一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物抗菌剂技术领域，且公开了一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法，包括以下步骤：S1：菌种活化，收集挑选优良菌种，按照不同保藏温度的保藏期限定期将菌种放入活化桶中进行活化；S2：培养基培养，把活化有的菌种放在液体培养基中培养，在液体培养基中培养时首选选择基础培养基，然后对基础培养基进行营养强化后使用；S3：离心收集菌体。本发明能够有效防治NE，提高饲料转化率的生物抗菌制剂，通过与噬菌体cocktail的联用，为动物的生态健康养殖提供新的途径，能够建立基于噬菌体及益生菌的生物防控体系，制定合理的抗菌联用方案，减少抗生素使用，防止耐药菌的产生，建立可持续性动物福利。
Description
技术领域
本发明涉及生物抗菌剂技术领域，具体为一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法。
背景技术
细菌耐药是大健康下的关注热点，如何减少抗生素，有效控制细菌病都将势在必行，噬菌体因其特异而不易产生抗性等优势，必将是生物源抗菌药物的首选，通过本项目的实施，能够有效的将耐药性Cp进行比对，获取更多的耐药相关信息，从而为全面解决家禽养殖模式下产生的耐药问题提供支撑，在此基础上开发出能够高效抵御Cp的噬菌体产品用于NE的防治，目前在世界范围内为首例，为全球大健康的发展提供可持续发展方案。
目前尚未有噬菌体产品上市销售，而且对噬菌体不能有效应用，传统抗生素随时间出现衰减，不够高效和持久，不能满足人们的要求，因此提出一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法，解决了对噬菌体不能有效应用，传统抗生素随时间出现衰减，不够高效和持久，不能满足人们的要求的问题。
(二)技术方案
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法，包括以下步骤：
S1：菌种活化，收集挑选优良菌种，按照不同保藏温度的保藏期限定期将菌种放入活化桶中进行活化；
S2：培养基培养，把活化有的菌种放在液体培养基中培养，在液体培养基中培养时首选选择基础培养基，然后对基础培养基进行营养强化后使用；
S3：离心收集菌体，在培养基培养后对其进行离心处理，然后收集菌体；
S4：制备悬浮液，把离心后的菌体加入混合罐中，然后加入保护剂，制备悬浮液；
S5：分装，把制备的悬浮液进行分装，分装时对包装瓶进行紫外线杀菌处理；
S6：冷冻干燥，把分装后的物料放入冷冻室内冷冻干燥；
S7：建立模型，建立噬菌体cocktail及益生菌制剂的动物模型，进行临床试验及评估；
S8：试验，将噬菌体cocktail及益生菌制剂联合应用于规模化禽养殖场NE的预防和治疗，评价其抗菌效果及防治NE的保护性效果。
作为本发明再进一步的方案，所述S1中通过宏基因组分析禽NE的病原菌群数据信息，分析家禽养殖中Cp菌群特征及致病特性。
进一步的，所述S2中基础培养基为NB液体培养基，在对基础培养基进行营养强化时加入40ml质量分数为0.85％的生理盐水，置于22-36℃培养5-18小时。
在前述方案的基础上，所述S3中离心时转速为800-1800r/min，离心时间为2-4分钟。
进一步的，所述S4中数显加入菌体，然后置于70-80℃，浓度为2-6％的碱溶液中，然后用去离子水和酸溶液反复冲洗，然后置于打浆机内，形成乳浊液；然后置于离心机内，获得悬浮液。
在前述方案的基础上，所述S4中针对病原特征获得Cp特异性噬菌体及益生菌，研发能够对抗Cp中主要致病型别的噬菌体cocktail及益生菌保健制剂。
本发明再进一步的方案，所述S6中进行冷冻时温度为-280-0℃，冷冻时实时监控冷冻室中的湿度。
进一步的，所述S8中进行应用时收集数据，然后进行统计评估，统计时对数据进行过滤，除去严重偏离指数线的数据，提高数据的参考性。
(三)有益效果
与现有技术相比，本发明提供了一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法，具备以下有益效果：
1、本发明通过与益生菌联用建立雏鸡肠道微生物屏障，获得能够有效防治NE，提高饲料转化率的生物抗菌制剂，通过与噬菌体cocktail的联用，为动物的生态健康养殖提供新的途径。
2、本发明中，通过动物模型临床实验及规模化养殖场的应用，能够加快研制针对Cp的商品化噬菌体抗菌制剂及益生菌保健产品速度，建立基于噬菌体及益生菌的生物防控体系，制定合理的抗菌联用方案，减少抗生素使用，防止耐药菌的产生，建立可持续性动物福利。
3、本发明中，通过对培养基的加强能够提高培养基中的菌种的活性，提高培养效果。
4、本发明中，逐步将噬菌体cocktail及益生菌开发成为商品化联用的抗菌制剂进行NE的防治，减少抗生素使用避免耐药菌的产生，加强动物福利，减少因NE引发的经济损失，保障动物健康。
附图说明
图1为本发明提出的一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法的流程结构示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
参照图1，一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法，包括以下步骤：
S1：菌种活化，收集挑选优良菌种，按照不同保藏温度的保藏期限定期将菌种放入活化桶中进行活化；
S2：培养基培养，把活化有的菌种放在液体培养基中培养，在液体培养基中培养时首选选择基础培养基，然后对基础培养基进行营养强化后使用；
S3：离心收集菌体，在培养基培养后对其进行离心处理，然后收集菌体；
S4：制备悬浮液，把离心后的菌体加入混合罐中，然后加入保护剂，制备悬浮液；
S5：分装，把制备的悬浮液进行分装，分装时对包装瓶进行紫外线杀菌处理；
S6：冷冻干燥，把分装后的物料放入冷冻室内冷冻干燥；
S7：建立模型，建立噬菌体cocktail及益生菌制剂的动物模型，进行临床试验及评估，通过与益生菌联用建立雏鸡肠道微生物屏障，获得能够有效防治NE，提高饲料转化率的生物抗菌制剂，通过与噬菌体cocktail的联用，为动物的生态健康养殖提供新的途径；
S8：试验，将噬菌体cocktail及益生菌制剂联合应用于规模化禽养殖场NE的预防和治疗，评价其抗菌效果及防治NE的保护性效果，通过动物模型临床实验及规模化养殖场的应用，能够加快研制针对Cp的商品化噬菌体抗菌制剂及益生菌保健产品速度，建立基于噬菌体及益生菌的生物防控体系，制定合理的抗菌联用方案，减少抗生素使用，防止耐药菌的产生，建立可持续性动物福利。
本发明的S1中通过宏基因组分析禽NE的病原菌群数据信息，分析家禽养殖中Cp菌群特征及致病特性，S2中基础培养基为NB液体培养基，在对基础培养基进行营养强化时加入40ml质量分数为0.85％的生理盐水，置于26℃培养8小时，通过对培养基的加强能够提高培养基中的菌种的活性，提高培养效果，S3中离心时转速为1800r/min，离心时间为4分钟，S4中数显加入菌体，然后置于80℃，浓度为6％的碱溶液中，然后用去离子水和酸溶液反复冲洗，然后置于打浆机内，形成乳浊液；然后置于离心机内，获得悬浮液。
尤其的，S4中针对病原特征获得Cp特异性噬菌体及益生菌，研发能够对抗Cp中主要致病型别的噬菌体cocktail及益生菌保健制剂，逐步将噬菌体cocktail及益生菌开发成为商品化联用的抗菌制剂进行NE的防治，减少抗生素使用避免耐药菌的产生，加强动物福利，减少因NE引发的经济损失，保障动物健康,S6中进行冷冻时温度为-280℃，冷冻时实时监控冷冻室中的湿度，S8中进行应用时收集数据，然后进行统计评估，统计时对数据进行过滤，除去严重偏离指数线的数据，提高数据的参考性。
实施例2
参照图1，一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法，包括以下步骤：
S1：菌种活化，收集挑选优良菌种，按照不同保藏温度的保藏期限定期将菌种放入活化桶中进行活化；
S2：培养基培养，把活化有的菌种放在液体培养基中培养，在液体培养基中培养时首选选择基础培养基，然后对基础培养基进行营养强化后使用；
S3：离心收集菌体，在培养基培养后对其进行离心处理，然后收集菌体；
S4：制备悬浮液，把离心后的菌体加入混合罐中，然后加入保护剂，制备悬浮液；
S5：分装，把制备的悬浮液进行分装，分装时对包装瓶进行紫外线杀菌处理；
S6：冷冻干燥，把分装后的物料放入冷冻室内冷冻干燥；
S7：建立模型，建立噬菌体cocktail及益生菌制剂的动物模型，进行临床试验及评估，通过与益生菌联用建立雏鸡肠道微生物屏障，获得能够有效防治NE，提高饲料转化率的生物抗菌制剂，通过与噬菌体cocktail的联用，为动物的生态健康养殖提供新的途径；
S8：试验，将噬菌体cocktail及益生菌制剂联合应用于规模化禽养殖场NE的预防和治疗，评价其抗菌效果及防治NE的保护性效果，通过动物模型临床实验及规模化养殖场的应用，能够加快研制针对Cp的商品化噬菌体抗菌制剂及益生菌保健产品速度，建立基于噬菌体及益生菌的生物防控体系，制定合理的抗菌联用方案，减少抗生素使用，防止耐药菌的产生，建立可持续性动物福利。
本发明的S1中通过宏基因组分析禽NE的病原菌群数据信息，分析家禽养殖中Cp菌群特征及致病特性，S2中基础培养基为NB液体培养基，在对基础培养基进行营养强化时加入40ml质量分数为0.85％的生理盐水，置于26℃培养9小时，通过对培养基的加强能够提高培养基中的菌种的活性，提高培养效果，S3中离心时转速为1200r/min，离心时间为3分钟，S4中数显加入菌体，然后置于80℃，浓度为6％的碱溶液中，然后用去离子水和酸溶液反复冲洗，然后置于打浆机内，形成乳浊液；然后置于离心机内，获得悬浮液。
尤其的，S4中针对病原特征获得Cp特异性噬菌体及益生菌，研发能够对抗Cp中主要致病型别的噬菌体cocktail及益生菌保健制剂，逐步将噬菌体cocktail及益生菌开发成为商品化联用的抗菌制剂进行NE的防治，减少抗生素使用避免耐药菌的产生，加强动物福利，减少因NE引发的经济损失，保障动物健康,S6中进行冷冻时温度为-180℃，冷冻时实时监控冷冻室中的湿度，S8中进行应用时收集数据，然后进行统计评估，统计时对数据进行过滤，除去严重偏离指数线的数据，提高数据的参考性。
在该文中的描述中，需要说明的是，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (8)
1.一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：菌种活化，收集挑选优良菌种，按照不同保藏温度的保藏期限定期将菌种放入活化桶中进行活化；
S2：培养基培养，把活化有的菌种放在液体培养基中培养，在液体培养基中培养时首选选择基础培养基，然后对基础培养基进行营养强化后使用；
S3：离心收集菌体，在培养基培养后对其进行离心处理，然后收集菌体；
S4：制备悬浮液，把离心后的菌体加入混合罐中，然后加入保护剂，制备悬浮液；
S5：分装，把制备的悬浮液进行分装，分装时对包装瓶进行紫外线杀菌处理；
S6：冷冻干燥，把分装后的物料放入冷冻室内冷冻干燥；
S7：建立模型，建立噬菌体cocktail及益生菌制剂的动物模型，进行临床试验及评估；
S8：试验，将噬菌体cocktail及益生菌制剂联合应用于规模化禽养殖场NE的预防和治疗，评价其抗菌效果及防治NE的保护性效果。
2.根据权利要求1所述的一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法，其特征在于，所述S1中通过宏基因组分析禽NE的病原菌群数据信息，分析家禽养殖中Cp菌群特征及致病特性。
3.根据权利要求1所述的一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法，其特征在于，所述S2中基础培养基为NB液体培养基，在对基础培养基进行营养强化时加入40ml质量分数为0.85％的生理盐水，置于22-36℃培养5-18小时。
4.根据权利要求3所述的一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法，其特征在于，所述S3中离心时转速为800-1800r/min，离心时间为2-4分钟。
5.根据权利要求1所述的一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法，其特征在于，所述S4中数显加入菌体，然后置于70-80℃，浓度为2-6％的碱溶液中，然后用去离子水和酸溶液反复冲洗，然后置于打浆机内，形成乳浊液；然后置于离心机内，获得悬浮液。
6.根据权利要求5所述的一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法，其特征在于，所述S4中针对病原特征获得Cp特异性噬菌体及益生菌，研发能够对抗Cp中主要致病型别的噬菌体cocktail及益生菌保健制剂。
7.根据权利要求1所述的一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法，其特征在于，所述S6中进行冷冻时温度为-280-0℃，冷冻时实时监控冷冻室中的湿度。
8.根据权利要求1所述的一种防治禽产气荚膜梭菌的研发方法，其特征在于，所述S8中进行应用时收集数据，然后进行统计评估，统计时对数据进行过滤，除去严重偏离指数线的数据，提高数据的参考性。
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