CN113597432B - 抗EpCAM抗体及其应用 - Google Patents

Abstract

提供了一种抗EpCAM抗体及其抗原结合片段，以及其作为抗癌药物的用途，尤其在制备用于治疗EpCAM阳性疾病或病症的药物中的用途。

Description

抗EpCAM抗体及其应用

技术领域

本公开涉及抗体药物领域。具体地本公开涉及抗EpCAM抗体及其应用。

背景技术

这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然地构成现有技术。

EpCAM(CD326)是I型跨膜糖蛋白，作为上皮细胞的特异性细胞粘附分子。它还涉及到其他一些过程，包括细胞迁移，增殖，分化等。EpCAM是最早应用单克隆抗体技术鉴定出的肿瘤相关抗原之一，它以多聚体的形式广泛表达于上皮组织表面，介导钙非依赖性细胞间同型黏附功能，据此可归入粘附分子家族。EpCAM还具备粘附分子家族的其他特性，参与包括细胞与基质的相互作用、迁移、细胞分化、形态、细胞周期调节、信号传导、代谢等多种过程。同时，EpCAM在多种上皮来源的肿瘤中呈过表达，提示其与肿瘤密切相关。病理研究发现，EpCAM不同程度的表达于腺癌中，包括结直肠癌、胃腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺腺癌、前列腺癌、胰腺癌以及肝细胞癌和视网膜母细胞瘤。多项研究已证实EpCAM的表达与乳腺癌和结肠癌细胞的增殖、周期分布、转移有关。单特异性抗EpCAM单克隆抗体(MAB)，例如单抗17-1A(glaxowellcome，Centocor)，被批准用于结直肠癌的辅助治疗。本公开提供了一种亲和力好，并适用于诊断和治疗的抗EpCAM抗体。

发明内容

本公开提供一种抗EpCAM抗体。

在一些实施方案中，如前所述抗EpCAM抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：

i)所述重链可变区包含与如SEQ ID NO：5所示的重链可变区相同序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含与如SEQ ID NO：6所示的轻链可变区相同序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或

ii)所述重链可变区包含与如SEQ ID NO：9所示的重链可变区相同序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含与如SEQ ID NO：10所示的轻链可变区相同序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

在一些实施方案中，如前所述抗EpCAM抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：

iii)所述重链可变区包含分别如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含分别如SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQID NO：16所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或

iv)所述重链可变区包含分别如SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：19所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含分别如SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21和SEQID NO：22所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

在一些实施方案中，如前所述抗EpCAM抗体，其中所述抗EpCAM抗体是人抗体。

在一些实施方案中，如前所述抗EpCAM抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：

(v)所述重链可变区与具有SEQ ID NO：5中所示氨基酸序列的重链可变区有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性，和所述轻链可变区与具有SEQ IDNO：6中所示氨基酸序列的轻链可变区有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性；

(vi)所述重链可变区与具有SEQ ID NO：7所示氨基酸序列的重链可变区有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性，和所述轻链可变区与具有SEQ IDNO：8所示氨基酸序列的轻链可变区有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性；或

(vii)所述重链可变区与具有SEQ ID NO：9所示氨基酸序列的重链可变区有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性，和所述轻链可变区与具有SEQ IDNO：10所示氨基酸序列的轻链可变区有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性。

在一些实施方案中，如前所述抗EpCAM抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：

(v-1)所述重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：5具有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性，和所述轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ IDNO：6具有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性；

(vi-1)所述重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：7具有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性，和所述轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ IDNO：8具有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性；或

(vii-1)所述重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：9具有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性，和所述轻链可变区，其氨基酸序列与SEQID NO：10具有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性。在一些实施方案中，如前所述抗EpCAM抗体，其中：

(viii)所述重链可变区序列如SEQ ID NO：5所示，和所述轻链可变区序列如SEQID NO：6所示；

(ix)所述重链可变区序列如SEQ ID NO：7所示，和所述轻链可变区序列如SEQ IDNO：8所示；或

(x)所述重链可变区序列如SEQ ID NO：9所示，和所述轻链可变区序列如SEQ IDNO：10所示。

在一些实施方案中，如前所述抗EpCAM抗体，所述重链可变区的CDR和轻链可变区的CDR是采用Kabat编号规则定义的。

在一些实施方案中，如前所述抗EpCAM抗体，其中所述抗体进一步包含抗体恒定区；优选地，所述抗体恒定区的重链恒定区选自人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定区及其常规变体，所述抗体恒定区的轻链恒定区选自人抗体κ和λ链恒定区及其常规变体；最优选地，所述抗体包含：与具有SEQ ID NO：23所示的重链具有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的重链，和与具有SEQ ID NO：24所示的轻链有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的轻链；或

与具有SEQ ID NO：25所示的重链具有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的重链，和/或与具有SEQ ID NO：26所示的轻链有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的轻链；或

与具有SEQ ID NO：27所示的重链具有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的重链，和/或与具有SEQ ID NO：28所示的轻链有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的轻链。

在一些实施方案中，如前所述抗EpCAM抗体，其中所述抗EpCAM抗体包含：

(d)如SEQ ID NO：23所示的重链和如SEQ ID NO：24所示的轻链；

(e)如SEQ ID NO：25所示的重链和如SEQ ID NO：26所示的轻链；或

(f)如SEQ ID NO：27所示的重链和如SEQ ID NO：28所示的轻链。

在一些实施方案中，如前所述抗EpCAM抗体，所述抗体与前述的抗EpCAM抗体或其抗原结合片段竞争性结合人EpCAM。

在一些实施方案中，如前所述抗EpCAM抗体，所述抗EpCAM抗体是全长抗体或抗原结合片段，所述抗原结合片段选自Fab、Fab′、F(ab′)2、scFv、dsFv、ds-scFv、二聚体、微型抗体、双功能抗体、双特异性抗体片段、多聚体，以及其任何组合。

本公开的另一方面还提供一种核酸分子，其编码如前所述的抗EpCAM抗体。

本公开的另一方面还提供一种表达载体，其包含如前所述的核酸分子。

本公开的另一方面还提供一种宿主细胞，其包含如前所述的核酸分子或如前所述的表达载体，优选所述细胞为细菌细胞、真菌细胞、昆虫动物细胞或哺乳动物细胞。

本公开的另一方面还提供一种免疫偶联物，其为由根据如前所述的抗EpCAM抗体与效应分子偶联形成的免疫偶联物；所述效应分子选自放射性同位素、抗肿瘤剂、免疫调节剂、生物反应修饰剂、凝集素、细胞毒性药物、发色团、荧光团、化学发光化合物、酶、金属离子，以及其任何组合。

在一些实施方案中，本公开提供一种如前所述的EpCAM抗体的制备方法。

在一些实施方案中，本公开提供一种如前所述的EpCAM免疫偶联物的制备方法。

在一些实施方案中，本公开提供一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据如前所述的抗EpCAM抗体，或根据如前所述的核酸分子，或如前所述的免疫偶联物，以及一种或更多种药学上可接受的载体、稀释剂、缓冲剂或赋形剂。

在一些实施方案中，本公开提供一种用于免疫检测或测定EpCAM的方法，所述方法包括使用如前所述的抗EpCAM抗体或免疫偶联物的步骤。示例性的，所述方法是在体内或体外进行的。示例性的，所述步骤包括在允许如前所述的抗EpCAM抗体或免疫偶联物和EpCAM之间形成复合物的条件下，将待测样品与如前所述的抗EpCAM抗体或免疫偶联物接触。

在一些实施方案中，本公开提供如前所述的抗EpCAM抗体或免疫偶联物在制备免疫检测人EpCAM的试剂中的用途。

在一些实施方案中，本公开提供一种用于免疫检测或测定EpCAM的如前所述的抗EpCAM抗体或免疫偶联物。

在一些实施方案中，本公开提供一种试剂盒，其包含根据如前所述的抗EpCAM抗体或免疫偶联物。

在一些实施方案中，本公开提供一种诊断与EpCAM相关的疾病的方法，所述方法包括使用如前所述的抗EpCAM抗体、如前所述的免疫偶联物或如前所述的试剂盒的步骤。示例性的，所述方法是在体内或体外进行的。示例性的，所述步骤包括在允许如前所述的抗EpCAM抗体或免疫偶联物和EpCAM之间形成复合物的条件下，将待测样品与如前所述的抗EpCAM抗体或免疫偶联物接触。

在一些实施方案中，本公开提供如前所述的抗EpCAM抗体，或如前所述的核酸分子，或如前所述的免疫偶联物或如前所述的药物组合物在制备用于治疗癌症或肿瘤的药物中的用途，其中所述癌症或肿瘤优选为EpCAM阳性癌症或恶性肿瘤，更优选为头和颈鳞状细胞癌、头和颈癌、脑癌、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、中枢神经系统癌、神经内分泌肿瘤、咽喉癌、鼻咽癌、食管癌、甲状腺癌、恶性胸膜间皮瘤、肺癌、乳腺癌、肝癌、肝细胞瘤、肝细胞癌、肝胆癌、胰腺癌、胃癌、胃肠道癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、皮肤癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、骨癌、软骨肉瘤、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、骨髓异常增生综合征、骨髓增生性肿瘤、鳞状细胞癌、尤因氏肉瘤、全身性轻链淀粉样变性和梅克尔细胞癌；

在一些实施方案中，所述淋巴瘤选自：何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、弥漫性大B-细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、原发性纵隔大B-细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、富含T-细胞/组织细胞的大B-细胞淋巴瘤和淋巴浆细胞性淋巴瘤；所述肺癌选自：非小细胞肺癌和小细胞肺癌；所述白血病选自：慢性髓细胞样白血病、急性髓细胞样白血病、淋巴细胞白血病、成淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和髓样细胞白血病。

在一些实施方案中，本公开提供一种治疗与EpCAM相关的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的如前所述的抗EpCAM抗体，或如前所述的核酸分子，或如前所述的免疫偶联物或如前所述的药物组合物，其中所述疾病优选为癌症或肿瘤；更优选为EpCAM阳性癌症或恶性肿瘤，更优选选自：头和颈鳞状细胞癌、头和颈癌、脑癌、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、中枢神经系统癌、神经内分泌肿瘤、咽喉癌、鼻咽癌、食管癌、甲状腺癌、恶性胸膜间皮瘤、肺癌、乳腺癌、肝癌、肝细胞瘤、肝细胞癌、肝胆癌、胰腺癌、胃癌、胃肠道癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、皮肤癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、骨癌、软骨肉瘤、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、骨髓异常增生综合征、骨髓增生性肿瘤、鳞状细胞癌、尤因氏肉瘤、全身性轻链淀粉样变性和梅克尔细胞癌。更优选的，所述淋巴瘤选自：何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、弥漫性大B-细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、原发性纵隔大B-细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、富含T-细胞/组织细胞的大B-细胞淋巴瘤和淋巴浆细胞性淋巴瘤，所述肺癌选自：非小细胞肺癌和小细胞肺癌，所述白血病选自：慢性髓细胞样白血病、急性髓细胞样白血病、淋巴细胞白血病、成淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和髓样细胞白血病。在一些实施方案中，所述治疗有效量为单位剂量的组合物中含有0.1-3000mg或1-1000mg如前所述的抗EpCAM抗体或如前所述的免疫偶联物。

在一些实施方案中，本公开提供一种用于治疗与EpCAM相关的疾病如前所述的抗EpCAM抗体，或如前所述的核酸分子，或如前所述的免疫偶联物或如前所述的药物组合物，其中所述疾病优选为癌症或肿瘤；更优选的EpCAM阳性癌症或恶性肿瘤，更优选选自：头和颈鳞状细胞癌、头和颈癌、脑癌、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、中枢神经系统癌、神经内分泌肿瘤、咽喉癌、鼻咽癌、食管癌、甲状腺癌、恶性胸膜间皮瘤、肺癌、乳腺癌、肝癌、肝细胞瘤、肝细胞癌、肝胆癌、胰腺癌、胃癌、胃肠道癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、皮肤癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、骨癌、软骨肉瘤、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、骨髓异常增生综合征、骨髓增生性肿瘤、鳞状细胞癌、尤因氏肉瘤、全身性轻链淀粉样变性和梅克尔细胞癌。更优选的，所述淋巴瘤选自：何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、弥漫性大B-细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、原发性纵隔大B-细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、富含T-细胞/组织细胞的大B-细胞淋巴瘤和淋巴浆细胞性淋巴瘤，所述肺癌选自：非小细胞肺癌和小细胞肺癌，所述白血病选自：慢性髓细胞样白血病、急性髓细胞样白血病、淋巴细胞白血病、成淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和髓样细胞白血病。

在一些实施方案中，所述癌症为胃癌、食道癌、肺癌、胰腺癌。

在一些实施方案中，如前所述抗体、免疫偶联物可以在EpCAM高表达、中表达、低表达的如前所述癌症中发挥治疗作用。

本公开提供的EpCAM抗体及免疫偶联物具有与细胞表面抗原良好的亲和力，良好的细胞内吞效率和肿瘤抑制效率，以及肿瘤细胞的定位和显示作用，并且具有更宽的药物应用窗口和良好的安全性，适于临床诊断和治疗的药物应用。

附图说明

图1A至图1C：不同物种EpCAM抗原与三种抗体的结合实验。其中图1A是抗体与人EpCAM的结合实验；图1B是抗体与小鼠EpCAM结合实验；图1C是抗体与猴EpCAM结合实验。

图2：三种抗体与人EpCAM在细胞水平的结合实验。图2A是h1905的细胞水平结合实验；图2B是h1906的细胞水平结合实验；图2C是h1907的细胞水平结合实验。

发明详述

术语(定义)

为了更容易理解本公开，以下具体定义了某些技术和科学术语。除非在本文中另有明确定义，本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本公开所属领域的一般技术人员通常理解的含义。

本公开所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.biol.chem，243，p3558(1968)中所述。

EpCAM(CD326)(上皮细胞粘附分子)，是I型跨膜糖蛋白，作为上皮细胞的特异性细胞粘附分子，它还涉及到其他一些过程，包括细胞迁移，增殖，分化等。EpCAM是最早应用单克隆抗体技术鉴定出的肿瘤相关抗原之一，它以多聚体的形式广泛表达于上皮组织表面，介导钙非依赖性细胞间同型黏附功能，据此可归入粘附分子家族。EpCAM还具备粘附分子家族的其他特性，参与包括细胞与基质的相互作用、迁移、细胞分化、形态、细胞周期调节、信号传导、代谢等多种过程。同时，EpCAM在多种上皮来源的肿瘤中呈过表达，提示其与肿瘤密切相关。病理研究显示，EpCAM不同程度的表达于腺癌中，包括结直肠癌、胃腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺腺癌、前列腺癌、胰腺癌以及肝细胞癌和视网膜母细胞瘤。

EpCAM广泛的肿瘤分布：

肿瘤	EpCAM阳性率	肿瘤	EpCAM阳性率
				卵巢癌	88-100％	乳腺癌	90％
胃癌	98％	子宫内膜癌	91-96％
				结肠癌	99％	肺癌	87％
胰腺癌	96％	前列腺癌	98％

免疫偶联物

在一些实施方案中，提供了免疫偶联物。在一些实施方案中，本文所公开的免疫偶联物可以是附接至效应分子的抗体，其中这种抗体包含重链和轻链。在一些实施方案中，抗体可以是抗体片段，诸如Fab、Fab′、F(ab′)2、scFv、dsFv、ds-scFv、二聚体、微型抗体、双功能抗体、双特异性抗体片段、多聚体，以及其任何组合。

在本文所描述的实施方案中，效应分子可以是放射性同位素、抗肿瘤剂、免疫调节剂、生物反应修饰剂、凝集素、细胞毒性药物、发色团、荧光团、化学发光化合物、酶、金属离子，以及其任何组合。

本公开所描述的抗体或抗体片段可以通过任何方式偶联至效应分子。举例来说，抗体或抗体片段可以通过化学或重组方式附接至毒素。制备融合物或偶联物的化学方式在本领域中是已知的并且可以用于制备免疫偶联物。用于偶联抗体或抗体片段和毒素的方法必须能够连接抗体与毒素而不会干扰抗体或抗体片段结合至标靶分子的能力。

术语“细胞毒性药物”是指抑制或防止细胞的功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。包括毒素、化疗药物等能用于肿瘤细胞杀伤的化合物。

术语“毒素”是指能够对细胞的生长或增殖产生有害效果的任何物质，可以是来自细菌、真菌、植物或动物的小分子毒素及其衍生物，包括喜树碱类衍生物如伊沙替康，美登木素生物碱及其衍生物(CN101573384)如DM1、DM3、DM4，auristatin F(AF)及其衍生物，如MMAF、MMAE、3024(WO 2016/127790 A1，化合物7)，白喉毒素、外毒素、蓖麻毒蛋白(ricin)A链、相思豆毒蛋白(abrin)A链、modeccin、α-帚曲霉素(sarcin)、油桐(Aleutites fordii)毒蛋白、香石竹(dianthin)毒蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)毒蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Momordica charantia)抑制物、麻疯树毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制物、白树毒蛋白(gelonin)、丝林霉素(mitogellin)局限曲霉素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依诺霉素(enomycin)和单端孢菌素(trichothecenes)。

术语“化疗药物”是可用于治疗肿瘤的化学化合物。该定义还包括起调节、降低、阻断或抑制可促进癌生长的激素效果作用的抗激素剂，且常常是系统或全身治疗的形式。它们自身可以是激素。化疗药物实例包括烷化剂，如噻替哌(thiotepa)；环磷酰胺(cyclosphamide)(CYTOXANTM)；烷基磺酸脂如白消安(busulfan)，英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶(aziridine)如苯并多巴(benaodopa)，卡波醌(carboquone)，美妥替哌(meturedopa)和尿烷亚胺(uredopa)；氮丙啶和methylamelamine包括六甲蜜胺(altretamine)，三亚胺嗪(triethylenemelamine)，三亚乙基磷酰胺，三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；氮芥(nitrogen mustards)如苯丁酸氮芥，萘氮芥，胆磷酰胺(cholophosphamide)，雌氮芥(estramustine)，异环磷酰胺(ifosfamide)，氮芥(mechlorethamine)，盐酸氧氮芥；左旋苯丙氨酸氮芥(melphalan)，新氮芥(novembichin)，胆甾醇苯乙酸氮芥，松龙苯芥(prednimustine)，曲磷胺(trofosfamide)，尿嘧啶氮芥；亚硝基脲(nitrosureas)如亚硝基脲氮芥(carmustine)，氯脲菌素(chlorozotocin)，福莫司汀(fotemustine)，洛莫司汀(lomustine)，尼莫司汀(nimustine)，雷莫司汀(ranimustine)；抗生素如阿克拉霉素，放线菌素，authramycin，重氮丝氨酸，博来霉素，放线菌素C(cactinomycin)，加利车霉素(calicheamicin)，carabicin，洋红霉素(chromomycin)，嗜癌素(carzinophilin)，色霉素，放线菌素D，柔红菌素(daunorubicin)，地托比星(detorubicin)，6-重氮-5-氧-L-正亮氨酸，阿霉素(doxorubicin)，表阿霉素(epirubicin)，依索比星(esorubicin)，伊达比星(idarubicin)，发波霉素(marcellomycin)，丝裂霉素，霉酚酸，诺加霉素(nogalamycin)，橄榄霉素(olivomycin)，培洛霉素(peplomycin)，potfiromycin，嘌呤霉素，三铁阿霉素(quelamycin)，罗多比星(rodorubicin)，链黑菌素；链脲霉素(streptozocin)，杀结核菌素，乌苯美司(ubenimex)，净司他丁(zinostatin)，佐柔比星(zorubicin)；抗代谢药如氨甲蝶吟，5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物如二甲叶酸(denopterin)，氨甲蝶呤，蝶罗呤，三甲曲沙(trimetrexate)；喋吟类似物氟达拉滨(fludarabine)，6-巯基蝶呤，硫咪蝶呤，硫鸟蝶呤；嘧啶类似物如安西他滨(ancitabine)，阿扎胞苷(azacitidine)，6-氮尿苷，卡莫氟(carmofur)，阿糖胞苷，双脱氧尿苷，去氟氧尿苷(doxitluridine)，依诺他滨(enocitabine)，氟尿苷，5-FU；雄激素类如二甲睾酮(calusterone)，丙酸甲雄烷酮(dromostanolong propionate)，环硫雄醇(epitiostanol)，美雄氨(mepitiostane)，睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类如氨鲁米特(aminoglutethimide)，米托坦(mitotane)，曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂如frolinic acid；醋葡内脂；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(biasntrene)；依达曲沙(edatraxate)；defofamine；秋水仙胺；地吖醌(diaziquone)；elfomithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；硝呋旦(nitracrine)；喷司他丁(pintostatin)；phenamet；吡柔比星(pirarubicin)；鬼臼树酸(podophyllinicacid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；

雷佐生(razoxane)；西索菲兰(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2，2′，2″-三氯二乙胺(trichlorrotriethylamine)；乌拉坦(urethan)；长春碱酰胺；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇；哌溴烷坑(pipobroman)；gacytosine；阿拉伯糖苷(″Ara-C″)；环磷酰胺；三胺硫磷(thiotepa)；紫杉烷，如紫杉醇(

Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，NJ)和docetaxel(

Rhone-Poulenc Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥；吉西他滨(gemcitabine)；6-硫代鸟嘌呤；巯基嘌呤；氨甲蝶呤；铂类似物如顺铂和卡铂；长春花碱；铂；依托泊甙(etoposide)(VP-16)；异环磷航胶；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞宾(vinorelbine)；新霉酰胺(navelbine)；novantrone；替尼泊甙(teniposide)；柔红霉素；氨基蝶呤；xeloda；伊拜磷酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；维甲酸esperamicins；capecitabine；以及上述任何物质的可药用盐，酸或衍生物。此定义还包括能调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素制剂，如抗雌激素制剂包括他莫昔芬(tamoxifen)，雷洛昔芬(raloxifene)，芳香酶抑制剂4(5)-咪唑，4-羟基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene)，keoxifene，LY117018，onapristone，和托瑞米芬(Fareston)；和抗雄激素制剂如氟他氨(flutamide)，尼鲁米特(nilutamide)，bicalutamide，亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)；和上述任何物质的可药用盐，酸或衍生物。

在一个实施方案中，抗体和毒素都是蛋白质并且可以使用本领域中熟知的技术偶联。存在本领域中所公开的数百种交联剂，其可以偶联两种蛋白质。交联剂一般基于在抗体或毒素上可用或插入的反应官能团来选择。另外，如果不存在反应基团，那么可以使用光可活化交联剂。在某些情况下，可能需要在抗体与毒素之间包括间隔子。本领域中已知的交联剂包括同型双功能剂：戊二醛、二甲基己二亚酰胺化物和双(重氮基联苯胺)，以及异型双功能剂：间马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺和磺基-间马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺。

可以用于使效应分子偶合至抗体片段的交联剂包括例如TPCH(S-(2-硫代吡啶基)-L-半胱氨酸酰肼)和TPMPH(S-(2-硫代吡啶基)巯基-丙酰肼)。TPCH和TPMPH在先前已经通过温和高碘酸盐处理而氧化的糖蛋白的碳水化合物部分反应，由此在交联剂的酰肼部分与高碘酸盐产生的醛之间形成腙键。异型双功能交联剂GMBS(N-(γ-马来酰亚胺基丁酰氧基)-琥珀酰亚胺)和SMCC(琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺基-甲基)环己烷)与伯胺反应，由此将马来酰亚胺基引入组分上。这个马来酰亚胺基随后可以与另一种组分上的可以由交联剂引入的硫氢基反应，由此在组分之间形成稳定的硫醚键。如果组分之间的位阻干扰任一种组分的活性，那么可以使用交联剂，将长的间隔臂引入组分之间，诸如3-(2-吡啶基二硫基)丙酸n-琥珀酰亚胺酯(SPDP)。因此，存在许多适合的交联剂，其可以被使用并且各自取决于其对最佳免疫偶联物产量的影响来选择。

本公开所述的“抗体”指免疫球蛋白，全长抗体是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。免疫球蛋白重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，故其抗原性也不同。据此，可将免疫球蛋白分为五类，或称为免疫球蛋白的同种型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相应的重链分别为μ链、δ链、γ链、α链、和ε链。同一类Ig根据其铰链区氨基酸组成和重链二硫键的数目和位置的差别，又可分为不同的亚类，如IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。轻链通过恒定区的不同分为κ链或λ链。五类Ig中每类Ig都可以有κ链或λ链。

抗体重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，为可变区(Fv区)；靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，为恒定区。可变区包括3个高变区(HVR)和4个序列相对保守的骨架区(FR)。3个高变区决定抗体的特异性，又称为互补性决定区(CDR)。每条轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)由3个CDR区4个FR区组成，从氨基端到羧基端依次排列的顺序为：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。轻链的3个CDR区指LCDR1、LCDR2、和LCDR3；重链的3个CDR区指HCDR1、HCDR2和HCDR3。

本公开“抗体”除包括全长抗体外，还包括能结合抗原的抗原结合片段。

本公开的抗体包括人抗体。

术语“鼠源抗体”在本公开中为根据本领域知识和技能制备的针对人EpCAM的单克隆抗体。制备时用EpCAM抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。在本公开一个优选的实施方案中，所述的鼠源抗EpCAM抗体或其抗原结合片段，可进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链恒定区，或进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3或其变体的重链恒定区。

术语“嵌合抗体(chimeric antibody)”，是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体，要先建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从鼠杂交瘤细胞中克隆可变区基因，再根据需要克隆人抗体的恒定区基因，将鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入表达载体中，最后在真核系统或原核系统中表达嵌合抗体分子。在本公开一个优选的实施方案中，所述的EpCAM嵌合抗体的抗体轻链进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链恒定区。所述的EpCAM嵌合抗体的抗体重链进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链恒定区，优选包含人源IgG1、IgG2或IgG4重链恒定区，或者使用氨基酸突变(例如L234A和/或L235A突变，和/或S228P突变)的IgG1、IgG2或IgG4变体。

术语“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)，是指将鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体框架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量鼠蛋白成分，从而诱导的异源性反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库(在因特网www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可获得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991 Sequences ofProteins of Immunological Interest，第5版中找到。为避免免疫原性下降的同时，引起的活性下降，可对所述的人抗体可变区框架序列进行最少反向突变或回复突变，以保持活性。本公开的人源化抗体也包括进一步由酵母菌展示对CDR进行亲和力成熟突变后的人源化抗体。

术语“人抗体”与“人源抗体”可以互换使用，是指有一或多个可变区和恒定区来源于人免疫球蛋白序列。其中一个优选的方式是所有的可变区和恒定区均来自于人免疫球蛋白序列，即“完全人源抗体”或“全人抗体”。这些抗体可以通过多种方式制备获得，包括通过噬菌体展示技术，从人PBMC、脾脏、淋巴结组织分离B细胞，构建天然单链噬菌体人抗体库，或者通过免疫可表达人抗体轻重链的转基因小鼠，筛选获得的抗体。本公开的人抗体还包括在人抗体基础上经过一个或更多个氨基酸的突变获得的仍结合目标抗原的抗体。

由于抗原的接触残基，CDR的移植可由于与抗原接触的构架残基而导致产生的抗体或其抗原结合片段对抗原的亲和力减弱。此类相互作用可以可能是体细胞高度突变的结果。因此，可能仍然需要将此类供体构架氨基酸移植至人源化抗体的构架。来自非人抗体或其抗原结合片段的参与抗原结合的氨基酸残基可通过检查动物单克隆抗体可变区序列和结构来鉴定。CDR供体构架中与种系不同的各残基可被认为是相关的。如果不能确定最接近的种系，那么可将序列与亚类共有序列或具有高相似性百分数的动物抗体序列的共有序列相比较。稀有构架残基被认为可能是体细胞高度突变的结果，从而在结合中起着重要作用。

本公开中所述人抗体重链恒定区和人抗体轻链恒定区的“常规变体”是指现有技术已公开的来源于人的不改变抗体可变区结构和功能的重链恒定区或轻链恒定区的变体，示例性变体包括对重链恒定区进行定点改造和氨基酸替换的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重链恒定区变体，具体替换如现有技术已知的YTE突变，L234A和/或L235A突变，S228P突变，和/或获得knob-into-hole结构的突变(使得抗体重链具有knob-Fc和hole-Fc组合)，这些突变已被证实使得抗体具有新的性能，但不改变抗体可变区的功能。

术语“全长抗体”、“完整抗体”、“完全抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用，指基本上完整形式的抗体，与下文定义的抗原结合片段相区分。该术语特别指轻链和重链包含恒定区的抗体。本公开“抗体”包含“全长抗体”及其抗原结合片段。

在一些实施方案中，本公开的全长抗体包括由轻链可变区与轻链恒定区连接和重链可变区与重链恒定区连接后所形成的全长抗体。本领域技术人员可以根据实际需要选择不同的抗体来源的轻链恒定区、重链恒定区，例如人抗体来源的轻链恒定区和重链恒定区。

术语“抗原结合片段”或“功能片段”是指抗体的保持特异性结合抗原(例如，EpCAM)的能力的一个或更多个片段。已显示可利用全长抗体的片段来进行抗体的抗原结合功能。术语“抗原结合片段”中包含的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab′)2片段，包含通过铰链区上的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段，(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VH和VL结构域组成的Fv片段；(v)dsFv，由VH和VL经链间二硫键形成的稳定的抗原结合片段；(vi)包含scFv、dsFv、Fab等片段的双抗体、双特异性抗体和多特异性抗体。此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由分开的基因编码，但可使用重组方法，通过合成的接头连接它们，从而使得其能够产生为其中VL和VH区配对形成单价分子的单个蛋白质链(称为单链Fv(scFv)；参见，例如，Bird等人(1988)Science242：423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci USA85：5879-5883)。此类单链抗体也包括在术语抗体的“抗原结合片段”中。使用本领域技术人员已知的常规技术获得此类抗体片段，并且以与对于完整抗体的方式相同的方式就功用性筛选片段。可通过重组DNA技术或通过酶促或化学断裂完整免疫球蛋白来产生抗原结合部分。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型)，IgA1，IgA2，IgD，IgE或IgM抗体。

Fab是通过用蛋白酶木瓜蛋白酶(切割H链的224位的氨基酸残基)处理IgG抗体分子所获得的片段中的具有约50，000的分子量并具有抗原结合活性的抗体片段，其中H链N端侧的约一半和整个L链通过二硫键结合在一起。

F(ab′)2是通过用酶胃蛋白酶消化IgG铰链区中两个二硫键的下方部分而获得的分子量为约100，000并具有抗原结合活性并包含在铰链位置相连的两个Fab区的抗体片段。

Fab′是通过切割上述F(ab′)2的铰链区的二硫键而获得的分子量为约50，000并具有抗原结合活性的抗体片段。本公开的Fab′可以通过用还原剂例如二硫苏糖醇处理本公开的特异性识别EpCAM并与胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合的F(ab′)2来生产。

此外，可以通过将编码抗体的Fab′片段的DNA插入到原核生物表达载体或真核生物表达载体中并将载体导入到原核生物或真核生物中以表达Fab′来生产所述Fab′。

术语“单链抗体”、“单链Fv”或“scFv”意指包含通过接头连接的抗体重链可变结构域(或区域；VH)和抗体轻链可变结构域(或区域；VL)的分子。此类scFv分子可具有一般结构：NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。合适的现有技术接头由重复的GGGGS氨基酸序列或其变体组成，例如使用1-4个重复的变体(Holliger等人(1993)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：6444-6448)。可用于本公开的其他接头由Alfthan等人(1995)，Protein Eng.8：725-731，Choi等人(2001)，Eur.J.Immunol.31：94-106，Hu等人(1996)，Cancer Res.56：3055-3061，Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293：41-56和Roovers等人(2001)，Cancer Immunol.描述。

双抗体是其中scFv或Fab被二聚体化的抗体片段，是具有二价抗原结合活性的抗体片段。在二价抗原结合活性中，两个抗原可以是相同或不同的。

双特异性抗体和多特异性抗体是指能同时结合两个或多个抗原或抗原决定簇的抗体，其中包含能结合EpCAM的scFv或Fab片段。

本公开的双抗体可以通过以下步骤来生产：获得本公开的特异性识别人EpCAM并与胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合的单克隆抗体的VH和VL的编码cDNA，构建编码scFv的DNA以使肽接头的氨基酸序列长度为8个残基或更少，将所述DNA插入到原核生物表达载体或真核生物表达载体中，然后将所述表达载体导入到原核生物或真核生物中以表达双抗体。

dsFv是通过将其中每个VH和VL中的一个氨基酸残基被半胱氨酸残基取代的多肽经由半胱氨酸残基之间的二硫键相连而获得的。可以按照已知方法(ProteinEngineering，7，697(1994))基于抗体的三维结构预测来选择被半胱氨酸残基取代的氨基酸残基。

本公开的全长抗体或抗原结合片段可以通过以下步骤来生产：获得本公开的特异性识别人EpCAM并与胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合的抗体的编码cDNA，构建编码dsFv的DNA，将所述DNA插入到原核生物表达载体或真核生物表达载体中，然后将所述表达载体导入到原核生物或真核生物中以表达dsFv。

术语“氨基酸差异”或“氨基酸突变”是指相较于原蛋白质或多肽，变体蛋白质或多肽存在氨基酸的改变或突变，包括在原蛋白质或多肽的基础上发生1个、2个、3个或更多个氨基酸的插入、缺失或替换。

术语“抗体框架”或“FR区”，是指可变结构域VL或VH的一部分，其用作该可变结构域的抗原结合环(CDR)的支架。从本质上讲，其是不具有CDR的可变结构域。

术语“互补决定区”、“CDR”或“高变区”是指抗体的可变结构域内主要促成抗原结合的6个高变区之一。通常，每个重链可变区中存在三个CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，每个轻链可变区中存在三个CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。可以使用各种公知方案中的任何一种来确定CDR的氨基酸序列边界，包括“Kabat”编号规则(参见Kabat等(1991)，“Sequences ofProteins of Immunological Interest”，第5版，Public Health Service，NationalInstitutes of Health，Bethesda，MD)、“Chothia”编号规则(参见Al-Lazikani等人，(1997)JMB 273：927-948)和ImMunoGenTics(IMGT)编号规则(Lefranc M.P.，Immunologist，7，132-136(1999)；Lefranc，M.P.等，Dev.Comp.Immunol.，27，55-77(2003)等。例如，对于经典格式，遵循Kabat规则，所述重链可变域(VH)中的CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；轻链可变域(VL)中的CDR氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。遵循Chothia规则，VH中的CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；并且VL中的氨基酸残基编号为26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。通过组合Kabat和Chothia两者的CDR定义，CDR由人VH中的氨基酸残基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)和人VL中的氨基酸残基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)构成。遵循IMGT规则，VH中的CDR氨基酸残基编号大致为26-35(CDR1)、51-57(CDR2)和93-102(CDR3)，VL中的CDR氨基酸残基编号大致为27-32(CDR1)、50-52(CDR2)和89-97(CDR3)。遵循IMGT规则，抗体的CDR区可以使用程序IMGT/DomainGap Align确定。除非另有说明，本公开实施例涉及的抗体可变区和CDR序列均适用“Kabat”编号规则。

术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗原上免疫球蛋白或抗体特异性结合的部位(例如，EpCAM分子上的特定部位)。表位通常以独特的空间构象包括至少3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个连续或非连续的氨基酸。参见，例如，Epitope Mapping Protocols inMethods in Molecular B iology，第66卷，G.E.Morris，Ed.(1996)。

术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结合”是指抗体对预先确定的抗原上的表位的结合。通常，抗体以大约小于10-8M，例如大约小于10-9M、10-10M、10-11M、10-12M或更小的亲和力(KD)结合。

术语“KD”是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数。通常，本公开的抗体以小于大约10-7M，例如小于大约10-8M或10-9M的解离平衡常数(KD)结合EpCAM，例如，在本公开中抗体与细胞表面抗原的亲和力采用FACS法测定KD值。

当术语“竞争”用于竞争相同表位的抗原结合蛋白(例如中和抗原结合蛋白或中和抗体)的情况中时，意指在抗原结合蛋白之间竞争，其通过以下测定法来测定：在所述测定法中，待检测的抗原结合蛋白(例如抗体或其免疫学功能片段)防止或抑制(例如降低)参考抗原结合蛋白(例如配体或参考抗体)与共同抗原(例如EpCAM抗原或其片段)的特异性结合。众多类型的竞争性结合测定可用于确定一种抗原结合蛋白是否与另一种竞争，这些测定例如：固相直接或间接放射免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见例如Stahli等，1983，Methodsin Enzymology 9：242-253)；固相直接生物素-亲和素EIA(参见例如Kirkland等，1986，J.Immunol.137：3614-3619)、固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见例如Harlow和Lane，1988，Antibodies，A Laboratory Manual(抗体，实验室手册)，Cold Spring Harbor Press)；用I-125标记物的固相直接标记RIA(参见例如Morel等，1988，Molec.Immunol.25：7-15)；固相直接生物素-亲和素EIA(参见例如Cheung，等，1990，Virology176：546-552)；和直接标记的RIA(Moldenhauer等，1990，Scand.J.Immunol.32：77-82)。通常所述测定法涉及使用结合荷有未标记的检测抗原结合蛋白及标记的参考抗原结合蛋白任一种的固态表面或细胞的纯化的抗原。通过测量在所测抗原结合蛋白存在下结合固态表面或细胞的标记的量来测量竞争性抑制。通常所测抗原结合蛋白过量存在。由竞争性测定(竞争抗原结合蛋白)鉴定的抗原结合蛋白包括：结合与参考抗原结合蛋白同一表位的抗原结合蛋白；和结合充分接近参考抗原结合蛋白的结合表位的邻近表位的抗原结合蛋白，所述两个表位在空间上互相妨碍发生结合。在本文实施例中提供关于用于测定竞争性结合的方法的其它详细资料。通常当竞争的抗原结合蛋白过量存在时，其将抑制(例如降低)至少40-45％、45-50％、50-55％、55-60％、60-65％、65-70％、70-75％或75％或更多参考抗原结合蛋白与共同抗原的特异性结合。在某些情况下，结合被抑制至少80-85％、85-90％、90-95％、95-97％或97％或更多。

本文中使用的术语“核酸分子”是指DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链的，优选是双链DNA或单链mRNA或修饰的mRNA。当将核酸与另一个核酸序列置于功能关系中时，核酸是“有效连接的”。例如，如果启动子或增强子影响编码序列的转录，那么启动子或增强子有效地连接至所述编码序列。

氨基酸序列“同一性”指在比对氨基酸序列及必要时引入间隙，以达成最大序列同一性百分比，且不将任何保守性取代视为序列同一性的一部分，第一序列中与第二序列中的氨基酸残基同一的氨基酸残基的百分比。为测定氨基酸序列同一性百分比的目的，比对可以通过属于本领域技术的范围内的多种方式来实现，例如使用公开可得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可确定适用于测量比对的参数，包括在所比较的序列全长上达成最大比对所需的任何算法。

术语“表达载体”是指能够运输已与其连接的另一个核酸的核酸分子。在一个实施方案中，载体是“质粒”，其是指可将另外的DNA区段连接至其中的环状双链DNA环。在另一个实施方案中，载体是病毒载体，其中可将另外的DNA区段连接至病毒基因组中。本文中公开的载体能够在已引入它们的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌的复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)或可在引入宿主细胞后整合入宿主细胞的基因组，从而随宿主基因组一起复制(例如，非附加型哺乳动物载体)。

现有技术中熟知生产和纯化抗体和抗原结合片段的方法，如冷泉港的抗体实验技术指南，5-8章和15章。例如，鼠可以用人EpCAM或其片段免疫，所得到的抗体能被复性、纯化，并且可以用常规的方法进行氨基酸测序。抗原结合片段同样可以用常规方法制备。发明所述的抗体或抗原结合片段用基因工程方法在非人源的CDR区加上一个或更多个人源FR区。人FR种系序列可以通过比对IMGT人类抗体可变区种系基因数据库和MOE软件，从ImMunoGeneTics(IMGT)的网站http：//imgt.cines.fr得到，或者从免疫球蛋白杂志，2001ISBN012441351上获得。

术语“宿主细胞”是指已向其中引入了表达载体的细胞。宿主细胞可包括细菌、微生物、植物或动物细胞。易于转化的细菌包括肠杆菌科(enterobacteriaceae)的成员，例如大肠杆菌(Escherichia coli)或沙门氏菌(Salmonella)的菌株；芽孢杆菌科(Bacillaceae)例如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；肺炎球菌(Pneumococcus)；链球菌(Streptococcus)和流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)。适当的微生物包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和毕赤酵母(Pichia pastoris)。适当的动物宿主细胞系包括CHO(中国仓鼠卵巢细胞系)、293细胞和NS0细胞。

本公开工程化的抗体或抗原结合片段可用常规方法制备和纯化。比如，编码重链和轻链的cDNA序列，可以克隆并重组至GS表达载体。重组的免疫球蛋白表达载体可以稳定地转染CHO细胞。作为一种更推荐的现有技术，哺乳动物类表达系统会导致抗体的糖基化，特别是在Fc区的高度保守N端位点。通过表达与人EpCAM特异性结合的抗体得到稳定的克隆。阳性的克隆在生物反应器的无血清培养基中扩大培养以生产抗体。分泌了抗体的培养液可以用常规技术纯化。比如，用含调整过的缓冲液的A或G Sepharose FF柱进行纯化。洗去非特异性结合的组分。再用pH梯度法洗脱结合的抗体，用SDS-PAGE检测抗体片段，收集。抗体可用常规方法进行过滤浓缩。可溶的混合物和多聚体，也可以用常规方法去除，比如分子筛、离子交换。得到的产物需立即冷冻，如-70℃，或者冻干。

“施用”、“给予”和“处理”，在其应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，是指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体的接触。“施用”、“给予”和“处理”可以指例如治疗、药物代谢动力学、诊断、研究和实验方法。细胞的处理包括试剂与细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中所述流体与细胞接触。“施用”、“给予”和“处理”还意指通过试剂、诊断、结合组合物或通过另一种细胞体外和离体处理例如细胞。“处理”，在其应用于人、兽医学或研究受试者时，是指治疗处理、预防或预防性措施，研究和诊断应用。

“治疗”意指给予患者内用或外用治疗剂，例如包含本公开的任一种结合化合物的组合物，所述患者具有一种或多种疾病症状，而已知所述治疗剂对这些症状具有治疗作用。通常，在受治疗患者或群体中以有效缓解一种或多种疾病症状的量给予治疗剂，以诱导这类症状退化或抑制这类症状发展到任何临床右测量的程度。有效缓解任何具体疾病症状的治疗剂的量(也称作“治疗有效量”)可根据多种因素变化，例如患者的疾病状态、年龄和体重，以及药物在患者产生需要疗效的能力。通过医生或其它专业卫生保健人士通常用于评价该症状的严重性或进展状况的任何临床检测方法，可评价疾病症状是否已被减轻。尽管本公开的实施方案(例如治疗方法或制品)在缓解每个目标疾病症状方面可能无效，但是根据本领域已知的任何统计学检验方法如Student t检验、卡方检验、依据Mann和Whitney的U检验、Kruskal-Wallis检验(H检验)、Jonckheere-Terpstra检验和Wilcoxon检验确定，其在统计学显著数目的患者中应当减轻目标疾病症状。

“保守修饰”或“保守置换或取代”是指具有类似特征(例如电荷、侧链大小、疏水性/亲水性、主链构象和刚性等)的其它氨基酸置换蛋白中的氨基酸，使得可频繁进行改变而不改变蛋白的生物学活性。本领域技术人员知晓，一般而言，多肽的非必需区域中的单个氨基酸置换基本上不改变生物学活性(参见例如Watson等(1987)Molecular Biology ofthe Gene，The Benjamin/Cummings Pub.Co.，第224页，(第4版))。另外，结构或功能类似的氨基酸的置换不大可能破环生物学活性。示例性保守取代于下表“示例性氨基酸保守取代”中陈述。

示例性氨基酸保守取代

原始残基	保守取代
		Ala(A)	Gly；Ser
Arg(R)	Lys；His
		Asn(N)	Gln；His；Asp
Asp(D)	Glu；Asn
		Cys(C)	Ser；Ala；Val
Gln(Q)	Asn；Glu
		Glu(E)	Asp；Gln
Gly(G)	Ala
		His(H)	Asn；Gln
Ile(I)	Leu；Val
		Leu(L)	Ile；Val
Lys(K)	Arg；His
		Met(M)	Leu；Ile；Tyr
Phe(F)	Tyr；Met；Leu
		Pro(P)	Ala
Ser(S)	Thr
		Thr(T)	Ser
Trp(W)	Tyr；Phe
		Tyr(Y)	Trp；Phe
Val(V)	Ile；Leu

“有效量”或“有效剂量”指指获得任一种或多种有益的或所需的治疗结果所必需的药物、化合物或药物组合物的量。对于预防用途，有益的或所需的结果包括消除或降低风险、减轻严重性或延迟病症的发作，包括病症、其并发症和在病症的发展过程中呈现的中间病理表型的生物化学、组织学和/或行为症状。对于治疗应用，有益的或所需的结果包括临床结果，诸如减少各种本公开靶抗原相关病症的发病率或改善所述病症的一个或更多个症状，减少治疗病症所需的其它药剂的剂量，增强另一种药剂的疗效，和/或延缓患者的本公开靶抗原相关病症的进展。

“外源性”指根据情况在生物、细胞或人体外产生的物质。“内源性”指根据情况在细胞、生物或人体内产生的物质。

本文使用的表述“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可互换使用，并且所有这类名称都包括后代。因此，单词“转化体”和“转化细胞”包括原代受试细胞和由其衍生的培养物，而不考虑转移数目。还应当理解的是，由于故意或非有意的突变，所有后代在DNA含量方面不可能精确相同。包括具有与最初转化细胞中筛选的相同的功能或生物学活性的突变后代。在意指不同名称的情况下，其由上下文清楚可见。

本文使用的“聚合酶链式反应”或“PCR”是指其中微量的特定部分的核酸、RNA和/或DNA如在例如美国专利号4,683,195中所述扩增的程序或技术。一般来说，需要获得来自目标区域末端或之外的序列信息，使得可以设计寡核苷酸引物；这些引物在序列方面与待扩增模板的对应链相同或相似。2个引物的5’末端核苷酸可以与待扩增材料的末端一致。PCR可用于扩增特定的RNA序列、来自总基因组DNA的特定DNA序列和由总细胞RNA转录的cDNA、噬菌体或质粒序列等。一般参见Mullis等(1987)Cold Spring HarborSymp.Ouant.Biol.51：263；Erlich编辑，(1989)PCR TECHNOLOGY(Stockton Press，N.Y.)。本文使用的PCR被视为用于扩增核酸测试样品的核酸聚合酶反应法的一个实例，但不是唯一的实例，所述方法包括使用作为引物的已知核酸和核酸聚合酶，以扩增或产生核酸的特定部分。

“分离的”指纯化状态，并且在这种情况下意味着在指定的分子基本上不含其他生物分子，例如核酸、蛋白质、脂质、碳水化合物或其他材料，例如细胞碎片和生长培养基。通常，术语“分离的”并不意图指完全不存在这些材料或不存在水、缓冲液或盐，除非它们以显著干扰如本文所述的化合物的实验或治疗用途的量存在。

“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，所述其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

术语“药学上可接受的载体”指适合用于制剂中用于递送抗体或抗原结合片段的任何无活性物质。载体可以是抗粘附剂、粘合剂、包衣、崩解剂、充填剂或稀释剂、防腐剂(如抗氧化剂、抗菌剂或抗真菌剂)、增甜剂、吸收延迟剂、润湿剂、乳化剂、缓冲剂等。合适的药学上可接受的载体的示例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)右旋糖、植物油(例如橄榄油)、盐水、缓冲液、缓冲的盐水和等渗剂例如糖、多元醇、山梨糖醇和氯化钠。

此外，本公开包括用于治疗与目标抗原(例如EpCAM)阳性细胞相关的疾病的药剂，所述药剂包含本公开的抗EpCAM抗体或其抗原结合片段作为活性成分。

本公开中与EpCAM相关的疾病没有限制，只要它是与EpCAM相关的疾病即可，例如利用本公开的分子诱导的治疗反应可通过结合人类EpCAM，然后阻遏EpCAM与其配体的结合，或杀伤过表达EpCAM的肿瘤细胞。因此，当处于适于治疗应用的制备物和制剂中时，本公开的分子对这样一些人是非常有用的，他们患有肿瘤或癌症，优选黑色素瘤、结肠癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、肠癌、肾癌、非小细胞肺癌、膀胱癌等。

此外，本公开涉及用于免疫检测或测定目标抗原(例如EpCAM)的方法、用于免疫检测或测定目标抗原(例如EpCAM)的试剂、用于免疫检测或测定表达目标抗原(例如EpCAM)的细胞的方法和用于诊断与目标抗原(例如EpCAM)阳性细胞相关的疾病的诊断剂，其包含本公开的特异性识别目标抗原(例如人EpCAM)并与胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合的抗体或抗体片段作为活性成分。

在本公开中，用于检测或测定目标抗原(例如EpCAM)的量的方法可以是任何已知方法。例如，它包括免疫检测或测定方法。

免疫检测或测定方法是使用标记的抗原或抗体检测或测定抗体量或抗原量的方法。免疫检测或测定方法的实例包括放射性物质标记的免疫抗体方法(RIA)、酶免疫测定法(EIA或ELISA)、荧光免疫测定法(FIA)、发光免疫测定法、蛋白质免疫印迹法、物理化学方法等。

上述与EpCAM阳性细胞相关的疾病可以通过用本公开的抗体或抗体片段检测或测定表达EpCAM的细胞来诊断。

为了检测表达多肽的细胞，可以使用已知的免疫检测方法，并优选使用免疫沉淀法、荧光细胞染色法、免疫组织染色法等。此外，可以使用利用FMAT8100HTS系统(AppliedBiosystem)的荧光抗体染色法等。

在本公开中，对用于检测或测定目标抗原(例如EpCAM)的活体样品没有特别限制，只要它具有包含表达目标抗原(例如EpCAM)的细胞的可能性即可，例如组织细胞、血液、血浆、血清、胰液、尿液、粪便、组织液或培养液。

根据所需的诊断方法，含有本公开的单克隆抗体或其抗体片段的诊断剂还可以含有用于执行抗原-抗体反应的试剂或用于检测反应的试剂。用于执行抗原-抗体反应的试剂包括缓冲剂、盐等。用于检测的试剂包括通常用于免疫检测或测定方法的试剂，例如识别所述单克隆抗体、其抗体片段或其结合物的标记的第二抗体和与所述标记对应的底物等。

在以上说明书中提出了本公开一种或多种实施方式的细节。虽然可使用与本文所述类似或相同的任何方法和材料来实施或测试本发明，但是以下描述优选的方法和材料。通过说明书和权利要求书，本发明的其他特点、目的和优点将是显而易见的。在说明书和权利要求书中，除非上下文中有清楚的另外指明，单数形式包括复数指代物的情况。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语都具有本发明所属领域普通技术人员所理解的一般含义。说明书中引用的所有专利和出版物都通过引用纳入。提出以下实施例是为了更全面地说明本发明的优选实施方式。这些实施例不应以任何方式理解为限制本发明的范围，本发明的范围由权利要求书限定。

具体实施方式

实施例

实施例1.EpCAM抗原及检测用蛋白的制备

EpCAM抗原设计

以SEQ ID NO：1所示人EpCAM作为本公开EpCAM的模板，设计本公开涉及的抗原及检测用蛋白的氨基酸序列。以下EpCAM抗原未特殊说明的均指人EpCAM。

人EpCAM全长蛋白：EpCAM(NP_002345.2，SEQ ID NO：1)：

鼠EpCAM全长蛋白氨基酸序列(NP_032558.2，SEQ ID NO：2)

筛选及检测用人EpCAM抗原(huEpCAM，SEQ ID NO：3)，序列如下：

注释：斜体部分为His-tag标记。

筛选及检测用鼠EpCAM抗原(mEpCAM，SEQ ID NO：4)，序列如下：

筛选及检测用食蟹猴EpCAM抗原(cynoEpCAM，SEQ ID NO：29)

实施例2.特异性结合人EpCAM的阳性序列的筛选

利用人PBMC、脾脏、淋巴结组织分离B细胞，并提取RNA，构建天然单链噬菌体抗体库(库容3.2×10¹⁰)。将构建的天然单链噬菌体抗体文库经过包装形成噬菌体颗粒后，采用液相法进行淘筛，噬菌体与生物素化的EpCAM液相结合，再采用链霉亲和素磁珠分离。为了获得与人EpCAM结合的阳性序列，采用生物素化的人EpCAM进行淘筛，挑取500个单克隆菌落包装成噬菌体单链抗体，用于噬菌体ELISA测试。分别测试单克隆噬菌体与人EpCAM和鼠EpCAM的结合活性：ELISA板上分别包被1μg/ml人EpCAM或鼠EpCAM以及1％BSA，加入1∶1封闭缓冲液稀释的噬菌体上清，最后用抗M13HRP检测；检测OD450值，筛选结合力强的分子，得到多个特异性序列。

实施例3.完整单克隆抗体的构建

噬菌体库筛选得到的多个特异性序列构建完整抗体后通过ELISA结合实验及多项实验确定其中3个性能优异的抗体，分别是h1905、h1906和h1907。对其完整单克隆抗体构建的过程如下：

根据测序得到的单链抗体序列，设计引物PCR搭建各单链抗体序列的VH/VK/VL基因片段。获得h1905、h1906和h1907的重轻链可变区。

>h1905重链可变区(SEQ ID NO：5)

>h1905轻链可变区(SEQ ID NO：6)

>h1906重链可变区(SEQ ID NO：7)

>h1906轻链可变区(SEQ ID NO：8)

>h1907重链可变区(SEQ ID NO：9)

>h1907轻链可变区(SEQ ID NO：10)

其中各抗体轻重链中CDR序列(根据Kabat规则确定的CDR)如表1所示。

表1各重链及轻链CDR序列

抗体可变区再与恒定区基因(CH1-FC/CL)片段进行同源重组，构建完整抗体VH-CH1-FC/VL-CL。

构建的完整抗体h1905、h1906和h1907序列如下：

全人抗体h1905：

h1905重链：(SEQ ID NO：23)

h1905轻链(SEQ ID NO：24)

全人抗体h1906

h1906重链：(SEQ ID NO：25)

h1906轻链：(SEQ ID NO：26)

全人抗体h1907

h1907重链：(SEQ ID NO：27)

h1907轻链：(SEQ ID NO：28)

实施例4.全人抗体的表达与纯化

分别表达抗体轻链和重链的质粒以1.5∶1的比例转染HEK293E细胞，6天后收集表达上清，高速离心去除杂质，用Protein A柱进行纯化。用PBS冲洗柱子，至A280读数降至基线。用pH3.0-pH3.5的酸性洗脱液洗脱目的蛋白，用1M Tris-HCl，pH 8.0-9.0中和。洗脱样品适当浓缩后，利用PBS平衡好的凝胶层析Superdex200(GE)进一步纯化，以去除聚体，收集单体峰，分装备用。

以下用测试方法验证本发明抗体性能及有益效果。

测试例1：ELISA结合实验

ELISA实验被用来检测上皮细胞粘附分子抗体和上皮细胞粘附分子蛋白的结合特性。将重组上皮细胞粘附分子蛋白按100ng/孔加入96孔高结合板(Corning，3590)中，4℃过夜结合后，用PBST缓冲液(pH 7.4 PBS含0.05％Tween-20)洗板3次后，加入用PBS稀释的5％脱脂牛奶(光明脱脂奶粉)封闭液200μl/孔，37℃孵育箱孵育2.5小时或4℃放置过夜(16-18小时)进行封闭。封闭结束后，弃去封闭液，并用PBST缓冲液洗板3次后，加入50μl/孔用样品稀释液(pH7.4 PBS含1％脱脂奶)稀释的不同浓度待测抗体，放于37℃孵育箱孵育2小时。孵育结束后用PBST洗板5次，加入100μl/孔用样品稀释液稀释的HRP标记的羊抗人二抗(Jackson Immuno Research，109-035-003)，37℃孵育1小时。用PBST洗板6次后，加入50μl/孔TMB显色底物(KPL，52-00-03)，于室温孵育10-15min，加入50μl/孔1M H₂SO₄终止反应，用MD VersaMaxTM酶标仪在450nm处读取吸收值，计算上皮细胞粘附分子抗体对上皮细胞粘附分子蛋白的结合EC50和Emax值。结果见图1A至图1C和表2。

表2抗体与不同EpCAM的结合活性

测试例2：基于FACS的结合试验

将表达上皮细胞粘附分子的细胞MCF-7(ATCC)、A431(ATCC)用FACS缓冲液(2％胎牛血清(Gibco，10099141)pH7.4 PBS(Sigma，P4417-100TAB))制备成1×10⁶/ml的细胞悬液，100μl/孔加入96孔圆底板(Corning，3795)中。离心去除上清后加入50μl/孔用FACS缓冲液稀释的不同浓度待测上皮细胞粘附分子抗体，放于4℃冰箱中避光孵育1小时。以FACS缓冲液300g离心洗涤3次后，加入工作浓度的Alexa Fluor 488山羊抗人IgG(H+L)(invitrogen，A-11013)，放于4℃冰箱中避光孵育40分钟。以FACS缓冲液300g离心洗涤3次后，在BD FACSCantoII流式细胞仪上检测几何平均数荧光强度，计算上皮细胞粘附分子抗体对表达上皮细胞粘附分子的细胞的结合能力。

结果如图2A至图2C所示，结果显示三种抗体均与表达EpCAM的细胞具有良好的结合能力。

序列表

<110> 江苏恒瑞医药股份有限公司

上海恒瑞医药有限公司

<120> 抗EpCAM抗体及其应用

<160> 29

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 314

<212> PRT

<213> 人

<220>

<221> PEPTIDE

<223> 人EpCAM

<400> 1

Met Ala Pro Pro Gln Val Leu Ala Phe Gly Leu Leu Leu Ala Ala Ala

1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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115 120 125

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130 135 140

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Asp Pro Lys Phe Ile Thr Ser Ile Leu Tyr Glu Asn Asn Val Ile Thr

180 185 190

Ile Asp Leu Val Gln Asn Ser Ser Gln Lys Thr Gln Asn Asp Val Asp

195 200 205

Ile Ala Asp Val Ala Tyr Tyr Phe Glu Lys Asp Val Lys Gly Glu Ser

210 215 220

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225 230 235 240

Asp Leu Asp Pro Gly Gln Thr Leu Ile Tyr Tyr Val Asp Glu Lys Ala

245 250 255

Pro Glu Phe Ser Met Gln Gly Leu Lys Ala Gly Val Ile Ala Val Ile

260 265 270

Val Val Val Val Ile Ala Val Val Ala Gly Ile Val Val Leu Val Ile

275 280 285

Ser Arg Lys Lys Arg Met Ala Lys Tyr Glu Lys Ala Glu Ile Lys Glu

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Met Gly Glu Met His Arg Glu Leu Asn Ala

305 310

<210> 2

<211> 315

<212> PRT

<213> 鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<223> 鼠EpCAM

<400> 2

Met Ala Gly Pro Gln Ala Leu Ala Phe Gly Leu Leu Leu Ala Val Val

1 5 10 15

Thr Ala Thr Leu Ala Ala Ala Gln Arg Asp Cys Val Cys Asp Asn Tyr

20 25 30

Lys Leu Ala Thr Ser Cys Ser Leu Asn Glu Tyr Gly Glu Cys Gln Cys

35 40 45

Thr Ser Tyr Gly Thr Gln Asn Thr Val Ile Cys Ser Lys Leu Ala Ser

50 55 60

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65 70 75 80

Arg Ile Lys Pro Glu Gly Ala Ile Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr Asp

85 90 95

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100 105 110

Thr Ala Thr Cys Trp Cys Val Asn Thr Ala Gly Val Arg Arg Thr Asp

115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

Ile Asp Leu Met Gln Asn Ser Ser Gln Lys Thr Gln Asp Asp Val Asp

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210 215 220

Leu Phe His Ser Ser Lys Ser Met Asp Leu Arg Val Asn Gly Glu Pro

225 230 235 240

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<210> 3

<211> 320

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> PEPTIDE

<223> 人EpCAM抗原

<400> 3

Met Ala Pro Pro Gln Val Leu Ala Phe Gly Leu Leu Leu Ala Ala Ala

1 5 10 15

Thr Ala Thr Phe Ala Ala Ala Gln Glu Glu Cys Val Cys Glu Asn Tyr

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Lys Leu Ala Val Asn Cys Phe Val Asn Asn Asn Arg Gln Cys Gln Cys

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Val Val Val Val Ile Ala Val Val Ala Gly Ile Val Val Leu Val Ile

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Ser Arg Lys Lys Arg Met Ala Lys Tyr Glu Lys Ala Glu Ile Lys Glu

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Met Gly Glu Met His Arg Glu Leu Asn Ala His His His His His His

305 310 315 320

<210> 4

<211> 321

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> PEPTIDE

<223> 鼠EpCAM抗原

<400> 4

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1 5 10 15

Thr Ala Thr Leu Ala Ala Ala Gln Arg Asp Cys Val Cys Asp Asn Tyr

20 25 30

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Thr Ala Thr Cys Trp Cys Val Asn Thr Ala Gly Val Arg Arg Thr Asp

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Ile Ile Glu Leu Lys His Lys Glu Arg Glu Ser Pro Tyr Asp His Gln

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165 170 175

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Ile Ala Asp Val Ala Tyr Tyr Phe Glu Lys Asp Val Lys Gly Glu Ser

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Glu Met Gly Glu Ile His Arg Glu Leu Asn Ala His His His His His

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His

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

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<223> h1905重链可变区

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> h1906重链可变区

<400> 7

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1 5 10 15

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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<221> DOMAIN

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<220>

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Gly Val Ala Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala Leu Ile Tyr Trp Asp Ala Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val

65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala His Arg Pro His Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Phe Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 10

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> h1907轻链可变区

<400> 10

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Arg Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln His Arg Pro Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Ser Gly Val Ser Arg Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ile Asn Trp Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 11

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> h1905 HCDR1

<400> 11

Ser Tyr Asp Ile Asn

1 5

<210> 12

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> h1905 HCDR2

<400> 12

Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

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<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> h1905 HCDR3

<400> 13

Gly Val Val Val Val Val Ala Ala Thr Arg Gly His Tyr Tyr Tyr Tyr

1 5 10 15

Tyr Gly Met Asp Val

20

<210> 14

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> h1905 LCDR1

<400> 14

Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Lys Tyr Leu Asn

1 5 10

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> h1905 LCDR2

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Ser Ala Ser His Leu Gln Thr

1 5

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> h1905 LCDR3

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Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr

1 5

<210> 17

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> h1907 HCDR1

<400> 17

Thr Ser Gly Val Ala

1 5

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<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> h1907 HCDR2

<400> 18

Leu Ile Tyr Trp Asp Ala Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 19

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> h1907 HCDR3

<400> 19

Arg Pro His Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 20

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> h1907 LCDR1

<400> 20

Arg Ala Ser Gln Asn Ile Arg Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 21

<211> 7

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> h1907 LCDR2

<400> 21

Gly Val Ser Arg Leu Gln Asn

1 5

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> h1907 LCDR3

<400> 22

Gln Gln Ser Tyr Ile Asn Trp Thr

1 5

<210> 23

<211> 460

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> CHAIN

<223> h1905重链

<400> 23

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Val Val Val Val Val Ala Ala Thr Arg Gly His Tyr Tyr

100 105 110

Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val

115 120 125

Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser

130 135 140

Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys

145 150 155 160

Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu

165 170 175

Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu

180 185 190

Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr

195 200 205

Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val

210 215 220

Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

225 230 235 240

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

245 250 255

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

260 265 270

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

275 280 285

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

290 295 300

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

305 310 315 320

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

325 330 335

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

340 345 350

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

355 360 365

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

370 375 380

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

385 390 395 400

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

405 410 415

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

420 425 430

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

435 440 445

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455 460

<210> 24

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> CHAIN

<223> h1905轻链

<400> 24

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Met Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Lys Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Phe Ser Ala Ser His Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 25

<211> 460

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> CHAIN

<223> h1906重链

<400> 25

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Val Val Val Val Val Ala Ala Thr Arg Gly His Tyr Tyr

100 105 110

Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val

115 120 125

Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser

130 135 140

Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys

145 150 155 160

Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu

165 170 175

Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu

180 185 190

Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr

195 200 205

Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val

210 215 220

Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

225 230 235 240

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

245 250 255

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

260 265 270

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

275 280 285

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

290 295 300

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

305 310 315 320

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

325 330 335

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

340 345 350

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

355 360 365

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

370 375 380

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

385 390 395 400

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

405 410 415

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

420 425 430

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

435 440 445

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455 460

<210> 26

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> CHAIN

<223> h1906轻链

<400> 26

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Met Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Lys Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Phe Ser Ala Ser His Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 27

<211> 453

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> CHAIN

<223> h1907重链

<400> 27

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln

1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Val Ala Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala Leu Ile Tyr Trp Asp Ala Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val

65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala His Arg Pro His Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Phe Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

165 170 175

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

195 200 205

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

210 215 220

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

260 265 270

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

275 280 285

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

325 330 335

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

340 345 350

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

370 375 380

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

385 390 395 400

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

405 410 415

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

420 425 430

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Ser Pro Gly Lys

450

<210> 28

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> CHAIN

<223> h1907轻链

<400> 28

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Arg Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln His Arg Pro Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Ser Gly Val Ser Arg Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ile Asn Trp Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 29

<211> 252

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> PEPTIDE

<223> 食蟹猴EpCAM抗原

<400> 29

Met Lys Ala Glu Met Asn Gly Ser Lys Leu Gly Arg Arg Ala Lys Pro

1 5 10 15

Glu Gly Ala Leu Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr Asp Pro Asp Cys Asp

20 25 30

Glu Ser Gly Leu Phe Lys Ala Lys Gln Cys Asn Gly Thr Ser Thr Cys

35 40 45

Trp Cys Val Asn Thr Ala Gly Val Arg Arg Thr Asp Lys Asp Thr Glu

50 55 60

Ile Thr Cys Ser Glu Arg Val Arg Thr Tyr Trp Ile Ile Ile Glu Leu

65 70 75 80

Lys His Lys Ala Arg Glu Lys Pro Tyr Asp Val Gln Ser Leu Arg Thr

85 90 95

Ala Leu Glu Glu Ala Ile Lys Thr Arg Tyr Gln Leu Asp Pro Lys Phe

100 105 110

Ile Thr Asn Ile Leu Tyr Glu Asp Asn Val Ile Thr Ile Asp Leu Val

115 120 125

Gln Asn Ser Ser Gln Lys Thr Gln Asn Asp Val Asp Ile Ala Asp Val

130 135 140

Ala Tyr Tyr Phe Glu Lys Asp Val Lys Gly Glu Ser Leu Phe His Ser

145 150 155 160

Lys Lys Met Asp Leu Arg Val Asn Gly Glu Gln Leu Asp Leu Asp Pro

165 170 175

Gly Gln Thr Leu Ile Tyr Tyr Val Asp Glu Lys Ala Pro Glu Phe Ser

180 185 190

Met Gln Gly Leu Lys Ala Gly Val Ile Ala Val Ile Val Val Val Val

195 200 205

Ile Ala Ile Val Ala Gly Ile Val Val Leu Val Ile Ser Arg Lys Lys

210 215 220

Arg Met Ala Lys Tyr Glu Lys Ala Glu Ile Lys Glu Met Gly Glu Ile

225 230 235 240

His Arg Glu Leu Asn Ala His His His His His His

245 250

Claims (18)

1. 一种抗EpCAM抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：

iii）所述重链可变区包含分别如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含分别如SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ IDNO：16所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或

iv）所述重链可变区包含分别如SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：19所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含分别如SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21和SEQ IDNO：22所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

2.根据权利要求1所述的抗EpCAM抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：

v）所述重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：5具有至少90%的序列同一性，和所述轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：6具有至少90%的序列同一性；

vi）所述重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：7具有至少90%的序列同一性，和所述轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：8具有至少90%的序列同一性；或

vii）所述重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：9具有至少90%的序列同一性，和所述轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：10具有至少90%的序列同一性。

3.根据权利要求2所述的抗EpCAM抗体，其包含如下所示的重链可变区和轻链可变区：

viii）所述重链可变区如SEQ ID NO：5所示，和所述轻链可变区如SEQ ID NO：6所示；

ix）所述重链可变区如SEQ ID NO：7所示，和所述轻链可变区如SEQ ID NO：8所示；或

x）所述重链可变区如SEQ ID NO：9所示，和所述轻链可变区如SEQ ID NO：10所示。

4.根据权利要求1至3项中任一项所述的抗EpCAM抗体，其中所述抗EpCAM抗体进一步包含重链恒定区和轻链恒定区。

5.根据权利要求4所述的抗EpCAM抗体，其中所述重链恒定区选自人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定区，和所述轻链恒定区选自人κ和λ链恒定区。

6.根据权利要求5所述的抗EpCAM抗体，其中所述抗EpCAM抗体包含：

a）与SEQ ID NO：23具有至少90%序列同一性的重链，和与SEQ ID NO：24具有至少90%序列同一性的轻链；

b）与SEQ ID NO：25具有至少90%同一性的重链，和与SEQ ID NO：26具有至少90%序列同一性的轻链；或

c）与SEQ ID NO：27具有至少90%同一性的重链，和与SEQ ID NO：28具有至少90%序列同一性的轻链。

7.根据权利要求6所述的抗EpCAM抗体，其中所述抗EpCAM抗体包含：

d）如SEQ ID NO：23所示的重链和如SEQ ID NO：24所示的轻链；

e）如SEQ ID NO：25所示的重链和如SEQ ID NO：26所示的轻链；或

f）如SEQ ID NO：27所示的重链和如SEQ ID NO：28所示的轻链。

8.一种核酸分子，其编码权利要求1至7项中任一项所述的抗EpCAM抗体。

9.一种宿主细胞，其包含如权利要求8所述的核酸分子。

10.一种免疫偶联物，其为由根据权利要求1至7项中任一项所述的抗EpCAM抗体与效应分子偶联形成的免疫偶联物；所述效应分子选自放射性同位素、抗肿瘤剂、免疫调节剂、生物反应修饰剂、凝集素、细胞毒性药物、发色团、荧光团、化学发光化合物、酶、金属离子，以及其任何组合。

11.根据权利要求10所述的免疫偶联物，其中所述效应分子为抗肿瘤剂或细胞毒性药物。

12.一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据权利要求11所述的免疫偶联物，以及一种或更多种药学上可接受的载体、稀释剂、缓冲剂或赋形剂。

13.一种试剂盒，其包含根据权利要求1至7项中任一项所述的抗EpCAM抗体或权利要求10或11所述的免疫偶联物。

14.权利要求11所述的免疫偶联物在制备治疗与EpCAM相关的疾病的药物中的用途，包括向受试者施用治疗有效量的权利要求11所述的免疫偶联物，其中所述疾病为肿瘤。

15.根据权利要求14所述的用途，所述疾病选自：头和颈癌、中枢神经系统癌、咽喉癌、食管癌、甲状腺癌、恶性胸膜间皮瘤、肺癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、肾癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、骨癌、鳞状细胞癌、尤因氏肉瘤、全身性轻链淀粉样变性和梅克尔细胞癌。

16.根据权利要求15所述的用途，所述淋巴瘤选自：何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、弥漫性大B-细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、原发性纵隔大B-细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、富含T-细胞/组织细胞的大B-细胞淋巴瘤和淋巴浆细胞性淋巴瘤；所述肺癌选自：非小细胞肺癌和小细胞肺癌；所述白血病选自：淋巴细胞白血病、成淋巴细胞性白血病和髓样细胞白血病。

17.根据权利要求14所述的用途，所述疾病选自：头和颈鳞状细胞癌、脑癌、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、神经内分泌肿瘤、肝胆癌、胃癌、结肠癌、透明细胞肾细胞癌、骨髓瘤、慢性髓细胞样白血病、急性髓细胞样白血病、慢性淋巴细胞性白血病和急性成淋巴细胞性白血病。

18.根据权利要求14所述的用途，所述疾病选自：鼻咽癌、皮肤癌、软骨肉瘤、结肠直肠癌、多发性骨髓瘤和骨髓异常增生综合征。

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