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CN113454119A - 抗btla抗体 - Google Patents

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CN113454119A
CN113454119A CN201980092337.0A CN201980092337A CN113454119A CN 113454119 A CN113454119 A CN 113454119A CN 201980092337 A CN201980092337 A CN 201980092337A CN 113454119 A CN113454119 A CN 113454119A
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seq
amino acid
antibody
antigen
binding fragment
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Application number
CN201980092337.0A
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西蒙·约翰·戴维斯
理查德·约翰·科纳尔
克里斯多佛·道格拉斯·帕卢赫
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Milo Biology Co ltd
Oxford University Innovation Ltd
Original Assignee
Milo Biology Co ltd
Oxford University Innovation Ltd
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Publication date
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Abstract

本发明总体上涉及与人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)结合的抗体或抗原结合片段及其用途。更具体地，本发明涉及结合人BTLA并调节其活性的激动性抗体，以及它们在治疗炎性、自身免疫性和增殖性疾病和病症中的用途。

Description

抗BTLA抗体
交叉引用
本申请要求2018年12月17日提交的第1820554.2号英国申请的权益，该英国申请通过引用整体并入本文。
技术领域
本发明总体上涉及与人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)结合的抗体或抗原结合片段及其用途。更具体地，本发明涉及结合人BTLA并调节其活性的激动性抗体，以及它们在治疗炎性、自身免疫性和增殖性疾病和病症中的用途。
背景技术
免疫系统必须在病原体或危险突变细胞的破坏与健康自体组织和无害共生体的耐受性之间达到平衡。为了促进这种平衡，免疫细胞的活性受到来自使细胞适应其环境的多种刺激性和抑制性受体的信号整合的影响。这些表面表达的受体为免疫应答的治疗性调节呈现有吸引力的靶点。许多人类疾病由免疫系统的异常或不需要的激活引起，包括自身免疫性疾病、移植排斥和移植物抗宿主病。能够通过抑制性受体诱导信号传导的激动剂可以抑制这些不需要的免疫应答。
B和T淋巴细胞衰减子(BTLA；也称为CD272)是CD28受体家族的抑制性成员，该家族还包括CD28、CTLA-4、ICOS和PD-1(Watanabe等人,Nat Immunol.4:670-679,2003)。它在整个免疫系统中广泛表达于髓样和淋巴样细胞上(Han等人,J Immunol.172:5931-9,2004)。在其配体疱疹病毒进入介体(HVEM)接合后，BTLA将磷酸酶SHP-1和SHP-2募集到其胞质域(Sedy等人,Nat Immunol.6:90-8,2005)，进而抑制激活受体的信号级联。缺乏完整BTLA基因的小鼠在体外表现出过度增殖的B和T细胞应答，免疫后对DNP-KLH的滴度更高，对EAE的敏感性增加(Watanabe等人,Nat.Immunol,4:670-679,2003)。如果直到老年才观察到，BTLA敲除小鼠自发地产生自身抗体，自身免疫性肝炎样疾病和炎性细胞浸润多个器官(Oya等人,Arthritis Rheum 58:2498-2510,2008)。这一证据表明，BTLA抑制性受体在维持免疫稳态和抑制自身免疫方面起至关重要的作用。此外，HVEM-BTLA信号传导参与粘膜炎症和感染免疫的调节(Shui等人,J Leukoc Biol.89:517-523,2011)。
非常需要能够调节BTLA功能以抑制自身免疫性疾病背景下的自身反应性淋巴细胞的治疗剂。
先前已经表明，与小鼠BTLA结合的单克隆抗体可以充当激动剂，通过受体诱导信号传导以抑制免疫细胞应答。在激动剂抗BTLA抗体(mAb)的存在下，抗CD3和抗CD28激活的T细胞显示出减少的IL-2产生和增殖(Kreig等人,J.Immunol.,175,6420-6472,2005)。
此外，已经表明抗小鼠BTLA激动剂抗体可以改善移植物抗宿主病鼠模型中的疾病(Sakoda等人,Blood.117:2506-2514；Albring等人,JExp Med.207:2551-9,2010)。已经表明靶向人BTLA受体的激动剂抗体可以离体抑制T细胞应答(参见Otsuki等人,BiochemBiophys Res Commun 344:1121-7,2006；和WO2011/014438)，但尚未转化为临床应用。
本领域需要发现能够调节BTLA的新的有用的药剂，如抗体或抗原结合抗体片段。
发明内容
本发明涉及具有一种或多种所需性质的抗人BTLA激动剂抗体或其抗体片段，所述性质包括高结合亲和力、高激动剂效力、高激动剂功效、良好的药代动力学和在人类受试者中的低抗原性。本发明还涉及本发明的抗体或抗体片段在治疗疾病中的用途。
根据本发明的第一方面，提供了一种分离的特异性结合BTLA的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体具有在选自11.5.1、2.8.6、12F11、14D4、15B6、15C6、16E1、16F10、16H2、1H6、21C7、24H7、26B1、26F3、27G9、3A9、3E8、4B1、4D3、4D5、4E8、4H4、6G8、7A1、8B4、8C4、6.2和831的抗体中存在的具有至少一个互补决定区(CDR)的重链和/或轻链，如表1所确定和本文所描述。
根据本发明的第二方面，提供了一种分离的核酸，其包含编码本发明第一方面的分离抗体或其抗原结合片段的重链多肽或轻链多肽的核苷酸序列。
根据本发明的第三方面，提供了一种包含本发明第二方面的核酸的载体。
根据本发明的第四方面，提供了一种包含根据本发明第二方面的核酸序列或根据本发明第三方面的载体的宿主细胞。
根据本发明的第五方面，提供了一种产生根据本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括以下步骤：在用于产生所述抗体或其抗原结合片段的条件下培养本发明第四方面的宿主细胞，以及任选地分离和/或纯化所述抗体或其抗原结合片段。
根据本发明的第六方面，提供了一种药物组合物，其包含药学上可接受的载体和治疗有效量的本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段，或由本发明第五方面产生的抗体或其抗原结合片段。
根据本发明的第七方面，提供了一种制备药物组合物的方法，该方法包括将根据本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段，或根据第五方面产生的抗体或其抗原结合片段配制为包含至少一种附加组分的组合物。在特定实施方案中，所述至少一种附加组分是药学上可接受的赋形剂。
根据本发明的第八方面，提供了一种治疗患者的BTLA相关疾病的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段或本发明第六方面的药物组合物。
具体实施方式
本发明人已鉴定出针对BTLA的特别强的激动剂抗体，预计其在抑制T细胞应答方面比当前的抗体更有效，因此在治疗免疫介导的病症中特别有用。
除非上下文另有明确规定，否则如本说明书和所附权利要求书中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指示物。因此，例如，提及“一个分子”任选地包括两个或更多个这样的分子的组合，等等。
应当理解，在本文中用语言“包含”描述方面的任何情况下，还提供了以“由……组成”和/或“基本上由……组成”描述的其他类似方面。
应当理解，除非上下文另有明确规定，否则本文描述的各个实施方案的一个、一些或全部性质可以应用于任何方面。此外，各个实施方案可以组合起来形成本发明的其他实施方案。本发明的这些和其他方面对于本领域技术人员来说将变得显而易见。本发明的这些和其他实施方案通过以下详细描述进一步描述。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语均具有与本公开相关领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。例如，Concise Dictionary of Biomedicine andMolecular Biology,Juo,Pei-Show,第2版,2002,CRC Press；The Dictionary of Celland Molecular Biology,第3版,1999,Academic Press；和Oxford Dictionary ofBiochemistry and Molecular Biology,修订版,2000,Oxford University Press，为普通技术人员提供了本公开中使用的许多术语的通用词典。
如本文所用的术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的通常误差范围。本文提及“约”某个值或参数包括(并描述)涉及该值或参数本身的实施方案。
在此氨基酸可以由其通常已知的三字母符号或由IUPAC-IUB生物化学命名委员会(IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission)推荐的单字母符号来表示。同样，核苷酸也可以由其通常被接受的单字母代码来表示。
除非另有说明，否则抗体的可变域、CDR和框架区(FR)中的氨基酸编号遵循Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版.Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991)所述的Kabat定义。
术语“B和T淋巴细胞衰减子”和“BTLA”可互换使用，除非上下文另有说明，否则是指蛋白质或基因(或编码全部或部分BTLA的其他核酸)。人BTLA序列包括所有人类同种型和变体形式。全长人BTLA的代表性实例在Genbank中公开，登录号为：AJ717664.1。人BTLA的另一个代表性多肽序列在SEQ ID NO:23中公开，其与AJ717664.1中的序列仅在两个天然变体单核苷酸多态性上不同。尽管存在等位基因变异，但人BTLA多肽序列通常与SEQ ID NO:23中的人BTLA具有至少90％的序列同一性(如至少95％、96％、97％、98％、99％或100％)。
Genbank中公开了全长食蟹猴(cyno)BTLA的代表性实例，登录号为：XP_005548224。食蟹猴BTLA的参考多肽序列在SEQ ID NO:24中公开。食蟹猴BTLA多肽序列通常与SEQ ID NO:24中公开的食蟹猴BTLA具有至少90％的序列同一性(如至少95％、96％、97％、98％、99％或100％)。
术语序列同一性是本领域公知的。对于本发明而言，当确定靶序列是否满足定义的限度(例如90％同一性)时，如果使用BLAST(基本局部比对搜索工具)算法(参见Altschul等人J Mol Biol 215:403-410,1990)或Smith-Waterman算法(参见Smith和Waterman.JMol.Biol.147:195-197,1981)将其鉴定为满足定义的限度，则认为其满足定义的限度。
抗体和抗体的抗原结合片段
抗体是免疫球蛋白分子，其能够通过位于免疫球蛋白分子的可变域中的至少一个抗原识别位点与诸如蛋白质、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质或前述的组合等靶标特异性结合。特别地，如本文所用的，术语“抗体”包括完整的多克隆抗体、完整的单克隆抗体、由至少两种完整抗体生成的多特异性抗体如双特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体和其他任何修饰的包含抗原识别位点的免疫球蛋白分子，只要所述抗体表现出所需的生物活性即可。
如本文所用的术语“抗体”是指与抗原特异性结合的免疫球蛋白分子，并且包括可能有功能或可能没有功能的FcR结合位点。
如本文所用的，BTLA激动剂抗体(或抗体片段)是指能与BTLA结合并增强其对T和/或B细胞的共抑制信号的抗体(或抗体片段)。
抗原结合位点是指分子中与全部或部分靶抗原结合的部分。在抗体分子中，它可以被称为抗体的抗原结合位点，并且包括抗体中与全部或部分靶抗原特异性结合的部分。当抗原很大时，抗体可能仅与抗原的特定部分结合，该部分被称为表位。抗体的抗原结合位点可由一个或多个抗体可变域提供。优选地，抗体的抗原结合位点包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)。
本发明还包括包含抗原结合位点的抗体片段。因此，当提及抗体时，术语“其抗原结合片段”是指抗体片段，如Fab、Fab'、F(ab')2、双抗体、Fv片段和单链Fv(scFv)突变体，它们具有抗原识别位点，因而具有与抗原结合的能力。抗原结合免疫球蛋白(抗体)片段是本领域公知的。这样的片段不需要具有功能性Fc受体结合位点。
如本文所用的，术语“本发明的抗体片段分子”、“抗体片段”和“其抗原结合片段”在本文中可互换使用。
如本文所用的术语“BTLA结合分子”是指能够与BTLA结合的抗体及其结合片段。
有五种主要的免疫球蛋白类别(即同种型)：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且其中若干个可被进一步分为亚类(亚型)，例如，IgG1、lgG2、lgG3、lgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定区分别被称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是公知的。除非上下文的限制另有规定，否则本发明的抗体可以来自这些类别或亚类的抗体之一。对应于不同抗体类别的重链恒定域一般分别用相应的小写希腊字母α、δ、ε、γ和μ来表示。来自任何脊椎动物物种的抗体的轻链，基于其恒定域的氨基酸序列，可以归为两种截然不同的类型(称为κ(kappa)和λ(lambda))之一。
“天然抗体”通常是约150,000道尔顿的异四聚体Y形糖蛋白，由两个相同的轻(L)链和两个相同的重(H)链组成。每条轻链通过一个共价二硫键连接到重链上，而二硫键的数目随着不同免疫球蛋白同种型的重链而有所不同。每条重链和轻链也具有规律间隔的链内二硫键。每条重链在一个末端具有可变域(VH)，随后是多个恒定域。每条轻链在一个末端具有可变域(VL)且在另一末端具有恒定域；轻链的恒定域与重链的第一个恒定域对齐，而轻链可变域与重链的可变域对齐。特定氨基酸残基被认为形成轻链与重链可变域之间的界面。每条重链包含一个可变域(VH)和恒定区，在IgG、IgA和IgD抗体的情况下，恒定区包含三个结构域，分别被称为CH1、CH2和CH3(IgM和IgE具有第四个结构域——CH4)。在IgG、IgA和IgD类别中，CH1和CH2结构域被柔性铰链区隔开，该柔性铰链区是可变长度(在各种IgG亚类中为约10个至约60个氨基酸)的富含脯氨酸和半胱氨酸的区段。轻链和重链中的可变域都通过约12个或更多个氨基酸的“J”区与恒定域连接，并且重链还具有约10个额外氨基酸的“D”区。每种类别的抗体进一步包含由成对的半胱氨酸残基形成的链间和链内二硫键。重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)可以各自进一步细分为超变区，被称为CDR，其中散布有更保守的区域，被称为框架区(FR)。每个VH和VL包含三个CDR和四个FR，从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq))的结合。
本发明的抗体或其抗原结合片段可以来自任何动物种，包括鼠、大鼠、人或其他任何来源(包括嵌合或人源化抗体)。在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段是单克隆的，例如单克隆抗体。在一些实施方案中，该抗体或其抗原结合片段是人或人源化抗体或其抗原结合片段。非人抗体或其抗原结合片段可以通过降低其在人体内的免疫原性的重组方法进行人源化。
本发明的抗体或其抗原结合片段可以使用公知的方法来鉴定。例如，该抗原结合部分可能已使用噬菌体展示或其他抗原结合选择或淘选方法进行选择。这样的抗原结合部分然后可以并入抗体框架中(例如与例如IgG1或IgG4分子的恒定区和铰链区融合)。
如本文所用的术语“单克隆抗体”(“mAb”)是指从基本上均质的抗体群体中获得的抗体，例如，除了可能少量存在的可能的突变，例如天然发生的突变外，构成该群体的各个抗体是相同的。因此，修饰语“单克隆”将抗体或其片段的特性指示为不是离散抗体或抗原结合片段的混合物。mAb是高度特异性的，其针对单个抗原位点/表位。
mAb可以通过杂交瘤、重组、转基因或本领域技术人员已知的其他技术产生。例如，根据本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段可以通过由Kohler和Milstein(Nature 256:495,1975)首先描述的杂交瘤方法制备，或者可以通过如美国专利4,816,567和6,331,415描述的重组DNA方法制备。例如，还可以使用Clackson等人,Nature 1991；352:624-628和Marks等人,J.Mol.Biol.1991；222:581-597中描述的技术从噬菌体抗体文库中分离“单克隆抗体”。
术语单克隆也可归于本发明抗体的抗原结合片段。它仅仅意味着该分子以单个克隆形式产生或存在。
“人”抗体(HuMAb)是指具有以下可变区的抗体，在该可变区中，框架区和CDR区均来源于人种系免疫球蛋白序列。此外，如果抗体含有恒定区，则该恒定区也来源于人种系免疫球蛋白序列。人抗体可以包括并非由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如在体外通过随机或位点特异性诱变或在体内通过体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用的，术语“人抗体”并非旨在包括其中来源于另一哺乳动物种如小鼠的种系的CDR序列已移植到人框架序列上的抗体。
可以通过向转基因动物施用免疫原/抗原来制备人抗体，该转基因动物已经被修饰为响应于抗原攻击产生完整的人抗体或具有人可变区的完整抗体，但其内源基因座已被禁用，例如经免疫的异种小鼠(xenomice)(参见，例如，关于XENOMOUSE(商标)技术的美国专利6,075,181和6,150,584)。另见，例如，Li等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103:3557-3562,2006)，其涉及通过人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体。此类动物一般包含全部或部分人免疫球蛋白基因座，这些基因座代替内源免疫球蛋白基因座，或者存在于染色体外或随机整合到动物的染色体中。在这类转基因小鼠中，内源免疫球蛋白基因座通常已被灭活。关于从转基因动物获得人抗体的方法的综述，请参见Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。另见，例如，描述XENOMOUSETM技术的美国专利6,075,181和6,150,584；描述HUMABTM技术的美国专利5,770,429；描述K-MMOUSETM技术的美国专利7,041,870，和描述VELOCIMOUSETM技术的公开号为US2007/0061900的美国专利申请。来自由此类动物生成的完整抗体的人可变区可以被进一步修饰，例如通过与不同的人恒定区组合。
还可以通过基于杂交瘤的方法制备人抗体。已经描述了用于产生人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系。(参见，例如，Kozbor,J.Immunol,133:3001(1984)；Brodeur等人,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,pp.51-63(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；和Boerner等人,J.Immunol.,147:86(1991))。通过人B细胞杂交瘤技术生成的人抗体也描述于Li等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)中。其他方法包括，例如，美国专利7,189,826(描述从杂交瘤细胞系产生单克隆人IgM抗体)和Ni,Xiandai Mianyixue,26:265-268(2006)(描述人-人杂交瘤)中描述的方法。人杂交瘤技术(三源杂交瘤(Trioma)技术)也描述于Vollmers和Brandlein,Histology and Histopathology,20:927-937(2005)以及Vollmers和Brandlein,Methodsand Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27:185-91(2005)中。
术语“人”抗体和“完全人”抗体同义使用。人抗体的该定义特别排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
如本文所用的，“人源化抗体”是指其中非人抗体的CDR外的一些、大部分或全部氨基酸被来源于人免疫球蛋白的相应氨基酸替换的抗体。在一些实施方案中，人源化抗体是人免疫球蛋白(接受体抗体)，其中来自接受体的CDR的残基被具有所需特异性、亲和力和能力的来自非人物种(供体抗体)如小鼠、大鼠或兔的CDR的残基替换。人源化抗体可包含在接受体抗体中和输入的CDR或框架序列中均未发现但被包括以进一步改进并优化抗体性能的残基。在抗体的人源化形式的一个实施方案中，CDR外的一些、大部分或全部氨基酸已被来自人免疫球蛋白的氨基酸替换，而一个或多个CDR区内的一些、大部分或全部氨基酸未改变。氨基酸的小添加、缺失、插入、置换或修饰是允许的，前提是它们不会消除抗体与特定抗原结合的能力。“人源化”抗体保留了与原始抗体相似的抗原特异性。通常，人源化抗体将包含基本上全部至少一个、通常两个可变域，其中全部或基本上全部高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，并且全部或基本上全部FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选地还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，一般是人免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定区的至少一部分。关于进一步的细节，参见，例如，Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature332:323-329(1988)；Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。另见，例如，Vaswani和Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions 23:1035-1038(1995)；Hurle和Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)；以及美国专利6,982,321和7,087,409。
如本文所用的，“工程化抗体”是指这样的抗体，其可以是人源化抗体，其中特定残基已被替换为其他残基，以减少不利影响或性质。这样的替换可以在CD结构域内。例如，如本文所述(参见实施例21)，人源化抗体3E8的CDRH2用N57Q置换修饰以去除脱酰胺潜力，并用K63S置换修饰以降低预测的免疫原性。
“嵌合抗体”是指可变区来源于一个物种而恒定区来源于另一个物种的抗体，例如可变区来源于小鼠抗体而恒定区来源于人抗体的抗体，反之亦然。该术语还包括包含来自一个物种的一个个体(例如第一小鼠)的可变区和来自同一物种的另一个个体(例如第二小鼠)的恒定区的抗体。术语“抗原(Ag)”是指用于对免疫活性脊椎动物进行免疫以产生识别Ag的抗体(Ab)或筛查表达文库(例如噬菌体、酵母或核糖体展示文库等)的分子实体。在本文中，Ag被更广泛地命名，通常旨在包括被Ab特异性识别的靶分子，因此包括在用于产生Ab的免疫过程或用于选择Ab的文库筛查中使用的分子的部分或模拟物。
“双特异性”或“双功能性”抗体是具有两个不同重/轻链对和两个不同结合位点的人工杂合抗体。传统上，双特异性抗体的重组产生是基于两个免疫球蛋白重链-轻链对的共表达，其中两条重链具有不同的特异性(Milstein和Cuello,Nature,305:537-539(1983))。制备双特异性抗体的方法在本领域技术人员的能力范围内。例如，双特异性抗体可通过包括杂交瘤的融合或Fab'片段的连接在内的多种方法产生。参见，例如，Songsivilai等人,(1990)Clin.Exp.Immunol.79:315-321，Kostelny等人,(1992)J Immunol.148:1547-1553。另外，双特异性抗体可以形成为“双抗体”(Holliger等人,(1993)PNAS USA 90:6444-6448)或“Janusins”(Traunecker等人,(1991)EMBO J.10:3655-3659和Traunecker等人,(1992)Int.J.Cancer Suppl.7:51-52)。
通常，术语“表位”是指抗体特异性结合的抗原区域或部分，即与抗体物理接触的区域或部分。因此，术语“表位”是指能够在抗体的一个或多个抗原结合区被抗体识别并结合的分子部分。通常，表位是在抗体或其抗原结合部分(Ab)与其相应抗原之间的分子相互作用的背景下定义的。表位通常由分子的表面分组如氨基酸或糖侧链组成，并具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。在一些实施方案中，表位可以是蛋白质表位。蛋白质表位可以是线性的或构象的。在线性表位中，蛋白质与相互作用分子(如抗体)之间的所有相互作用点都沿着蛋白质的一级氨基酸序列线性发生。“非线性表位”或“构象表位”包含抗原性蛋白质内的非连续多肽(或氨基酸)，对该表位具有特异性的抗体与之结合。如本文所用的术语“抗原表位”被定义为抗体可以特异性结合的抗原的一部分，如通过本领域公知的任何方法确定的，例如通过常规免疫测定确定的。
与表位“特异性结合”的抗体是本领域公知的术语，并且确定这类特异性结合的方法也是本领域公知的。如果与其他细胞、蛋白质或物质相比，分子与特定细胞、蛋白质或物质的反应或缔合更频繁、更快速、持续时间更长和/或亲和力更高，则称该分子表现出“特异性结合”。
多种测定形式可用来选择特异性结合目的分子的抗体或肽。例如，固相ELISA免疫测定、免疫沉淀、BiacoreTM(GE Healthcare，Piscataway，NJ)、KinExA、荧光激活细胞分选(FACS)、OctetTM(ForteBio,Inc.，Menlo Park，CA)和Western印迹分析属于可用于鉴定与抗原或受体或其配体结合部分特异性反应的抗体的许多测定，所述抗体与同源配体或结合配偶体特异性结合。通常，特异性或选择性反应将是背景信号或噪声的至少两倍，更通常是背景的10倍以上，甚至更通常是背景的50倍以上，更通常是背景的100倍以上，更通常是背景的500倍以上，更通常是背景的1000倍以上，甚至更通常是背景的10,000倍以上。此外，当平衡解离常数(KD或KD，在本文中可互换使用)<7nM时，抗体被称为“特异性结合”抗原。
根据本发明的第一方面，提供了一种分离的特异性结合BTLA的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体具有在选自11.5.1、2.8.6、12F11、14D4、15B6、15C6、16E1、16F10、16H2、1H6、21C7、24H7、26B1、26F3、27G9、3A9、3E8、4B1、4D3、4D5、4E8、4H4、6G8、7A1、8B4、8C4、6.2和831的抗体中存在的具有至少一个CDR的重链和/或轻链，如表1中所公开和本文所描述。在一个实施方案中，该抗体或其抗原结合片段与其天然配体HVEM竞争结合BTLA。在另一个实施方案中，该抗体或其抗原结合片段不干扰HVEM的结合。
在另外的实施方案中，所述分离的结合人BTLA的抗体选自11.5.1和2.8.6，其中该抗体特异性结合BTLA并通过受体诱导信号传导。
如表1中所公开和本文所描述的，所谓选自11.5.1、2.8.6、12F11、14D4、15B6、15C6、16E1、16F10、16H2、1H6、21C7、24H7、26B1、26F3、27G9、3A9、3E8、4B1、4D3、4D5、4E8、4H4、6G8、7A1、8B4、8C4、6.2和831的抗体，是指包含来自表1公开的任何抗体(鼠、人源化或人源化/工程化的)的一个或多个，例如VH CDR 1、2和3，或者VL CDR 1、2和3，或者VH CDR1、2和3以及VL CDR 1、2和3的任何抗体或其抗原结合片段。
根据本发明第一方面的变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个VH CDR，该VH CDR具有如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或SEQ IDNO:9中任一个所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，如0、1、2或3个氨基酸修饰。在某些实施方案中，该氨基酸修饰包括但不限于氨基酸置换、添加、缺失或化学修饰，与未修饰的氨基酸序列相比，不消除修饰的氨基酸序列的抗体结合亲和力或T细胞抑制作用。
根据本发明第一方面的变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个VH CDR，该VH CDR具有如SEQ ID NO:193、SEQ ID NO:194或SEQ ID NO:195中任一个所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，CDRH2具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，并且CDRH3具有如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1具有如SEQ ID NO:193所示的氨基酸序列，CDRH2具有如SEQ ID NO:194所示的氨基酸序列，并且CDRH3具有如SEQ ID NO:195所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个VL CDR，该VL CDR具有如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQID NO:12所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰。
根据本发明第一方面的变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个VL CDR，该VL CDR具有如SEQ ID NO:196、SEQ ID NO:197或SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1具有如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，CDRL2具有如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，并且CDRL3具有如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1具有如SEQ ID NO:196所示的氨基酸序列，CDRL2具有如SEQ ID NO:197所示的氨基酸序列，并且CDRL3具有如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，CDRH2具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，并且CDRH3具有如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1具有如SEQID NO:10所示的氨基酸序列，CDRL2具有如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，并且CDRL3具有如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1具有如SEQ ID NO:193所示的氨基酸序列，CDRH2具有如SEQ ID NO:194所示的氨基酸序列，并且CDRH3具有如SEQ ID NO:195所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1具有如SEQ ID NO:196所示的氨基酸序列，CDRL2具有如SEQ ID NO:197所示的氨基酸序列，并且CDRL3具有如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个VH CDR，该VH CDR具有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:3所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个VH CDR，该VH CDR具有如SEQ ID NO:199、SEQ ID NO:200或SEQ ID NO:201所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰。
根据本发明第一方面的变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，CDRH2具有如SEQID NO:2所示的氨基酸序列，并且CDRH3具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1具有如SEQ ID NO:199所示的氨基酸序列，CDRH2具有如SEQ ID NO:200所示的氨基酸序列，并且CDRH3具有如SEQ ID NO:201所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个VL CDR，该VL CDR具有如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ IDNO:6所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个VL CDR，该VL CDR具有如SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203或SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，CDRL2具有如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，并且CDRL3具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1具有如SEQ ID NO:202所示的氨基酸序列，CDRL2具有如SEQ ID NO:203所示的氨基酸序列，并且CDRL3具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，CDRH2具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，并且CDRH3具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1具有如SEQID NO:4所示的氨基酸序列，CDRL2具有如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，并且CDRL3具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1具有如SEQ ID NO:199所示的氨基酸序列，CDRH2具有如SEQ ID NO:200所示的氨基酸序列，并且CDRH3具有如SEQ ID NO:201所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1具有如SEQ ID NO:202所示的氨基酸序列，CDRL2具有如SEQ ID NO:203所示的氨基酸序列，并且CDRL3具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个VH CDR，该VH CDR具有如下所示的氨基酸序列：(1)SEQID NO:31、32或33，具有0至3个氨基酸修饰；(2)SEQ ID NO:37、38或39，具有0至3个氨基酸修饰；(3)SEQ ID NO:43、44或45，具有0至3个氨基酸修饰；(4)SEQ ID NO:43、56或57，具有0至3个氨基酸修饰；(5)SEQ ID NO:61、62或63，具有0至3个氨基酸修饰；(6)SEQ ID NO:31、32或69，具有0至3个氨基酸修饰；(7)SEQ ID NO:73、74或75，具有0至3个氨基酸修饰；(8)SEQ ID NO:79、80或81，具有0至3个氨基酸修饰；(9)SEQ ID NO:85、86或87，具有0至3个氨基酸修饰；(10)SEQ ID NO:61、92或93，具有0至3个氨基酸修饰；(11)SEQ ID NO:97、98或99，具有0至3个氨基酸修饰；(12)SEQ ID NO:103、104或105，具有0至3个氨基酸修饰；(13)SEQ ID NO:109、110或111，具有0至3个氨基酸修饰；(14)SEQ ID NO:85、110或117，具有0至3个氨基酸修饰；(15)SEQ ID NO:121、122或123，具有0至3个氨基酸修饰；(16)SEQ ID NO:127、128或129，具有0至3个氨基酸修饰；(17)SEQ ID NO:133、134或135，具有0至3个氨基酸修饰；(18)SEQ ID NO:139、140或141，具有0至3个氨基酸修饰；(19)SEQ ID NO:145、146或147，具有0至3个氨基酸修饰；(20)SEQ ID NO:31、32或33，具有0至3个氨基酸修饰；(21)SEQID NO:31、32或159，具有0至3个氨基酸修饰；(22)SEQ ID NO:169、170或171，具有0至3个氨基酸修饰；(23)SEQ ID NO:61、62或63，具有0至3个氨基酸修饰；(24)SEQ ID NO:31、182或183，具有0至3个氨基酸修饰；(25)SEQ ID NO:187、188或189，具有0至3个氨基酸修饰；(26)SEQ ID NO:193、194或195，具有0至3个氨基酸修饰；(27)SEQ ID NO:199、200或201，具有0至3个氨基酸修饰；(28)SEQ ID NO:205、206或207，具有0至3个氨基酸修饰；(29)SEQ IDNO:211、212或213，具有0至3个氨基酸修饰；(30)SEQ ID NO:127、386或129，具有0至3个氨基酸修饰；(33)SEQ ID NO:205、206或207，具有0至3个氨基酸修饰；(34)SEQ ID NO:127、388或129，具有0至3个氨基酸修饰；或(35)SEQ ID NO:205、387或207，具有0至3个氨基酸修饰。
根据本发明第一方面的变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1、CDRH2、CDRH3具有如下所示的氨基酸序列：(1)分别是SEQID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33；(2)分别是SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38和SEQID NO:39；(3)分别是SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45；(4)分别是SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57；(5)分别是SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63；(6)分别是SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:69；(7)分别是SEQ ID NO:73、SEQID NO:74和SEQ ID NO:75；(8)分别是SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81；(9)分别是SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87；(10)分别是SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93；(11)分别是SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99；(12)分别是SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104和SEQ ID NO:105；(13)分别是SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:110和SEQ ID NO:111；(14)分别是SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:110和SEQ ID NO:117；(15)分别是SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:122和SEQ ID NO:123；(16)分别是SEQ ID NO:127、SEQ IDNO:128和SEQ ID NO:129；(17)分别是SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:134和SEQ ID NO:135；(18)分别是SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:141；(19)分别是SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146和SEQ ID NO:147；(20)分别是SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33；(21)分别是SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:159；(22)分别是SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:170和SEQ ID NO:171；(23)分别是SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ IDNO:63；(24)分别是SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:182和SEQ ID NO:183；(25)分别是SEQ IDNO:187、SEQ ID NO:188和SEQ ID NO:189；(26)分别是SEQ ID NO:193、SEQ ID NO:194和SEQ ID NO:195；(27)分别是SEQ ID NO:199、SEQ ID NO:200和SEQ ID NO:201；(28)分别是SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206和SEQ ID NO:207；(29)分别是SEQ ID NO:211、212和213；(30)分别是SEQ ID NO:127、386和129；(31)分别是SEQ ID NO:205、206和207；(32)分别是SEQ ID NO:127、388和129；或者(33)分别是SEQ ID NO:205、387和207，其中0至3个氨基酸修饰可存在于任何CDR/SEQ ID NO:中。
根据本发明第一方面的变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个VL CDR，该VL CDR具有如下所示的氨基酸序列：(1)SEQ IDNO:34、35或36；(2)SEQ ID NO:40、41或42；(3)SEQ ID NO:46、47或48；(4)SEQ ID NO:58、59或60；(5)SEQ ID NO:64、65或66；(6)SEQ ID NO:34、35或72；(7)SEQ ID NO:76、47或78；(8)SEQ ID NO:82、83或84；(9)SEQ ID NO:88、89或90；(10)SEQ ID NO:94、95或96；(11)SEQ IDNO:100、101或102；(12)SEQ ID NO:64、107或108；(13)SEQ ID NO:88、89或114；(14)SEQ IDNO:124、125或126；(15)SEQ ID NO:34、35或36；(16)SEQ ID NO:136、137或138；(17)SEQ IDNO:142、143或144；(18)SEQ ID NO:148、149或150；(19)SEQ ID NO:136、137或162；(20)SEQID NO:34、35或36；(21)SEQ ID NO:172、173或174；(22)SEQ ID NO:64、65或180；(23)SEQID NO:136、137或186；(24)SEQ ID NO:190、191或192；(25)SEQ ID NO:196、197或12；(26)SEQ ID NO:202、203或6；(27)SEQ ID NO:142、209或210；或者(28)SEQ ID NO:214、35或216；(29)SEQ ID NO:10、11或12；(30)SEQ ID NO:4、5或6；或者(31)SEQ ID NO:142、143或210，其中0至3个氨基酸修饰可存在于任何CDR/SEQ ID NO:中。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3具有如下所示的氨基酸序列：(1)分别是SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；(2)分别是SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42；(3)分别是SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48；(4)分别是SEQID NO:58、SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60；(5)分别是SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQID NO:66；(6)分别是SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:72；(7)分别是SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:78；(8)分别是SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84；(9)分别是SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:90；(10)分别是SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:96；(11)分别是SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:102；(12)分别是SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:108；(13)分别是SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:114；(14)分别是SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:125和SEQ IDNO:126；(15)分别是SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；(16)分别是SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:138；(17)分别是SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143和SEQID NO:144；(18)分别是SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:150；(19)分别是SEQID NO:136、SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:162；(20)分别是SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；(21)分别是SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:173和SEQ ID NO:174；(22)分别是SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:180；(23)分别是SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:186；(24)分别是SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:191和SEQ ID NO:192；(25)分别是SEQ ID NO:196、SEQ ID NO:197和SEQ ID NO:12；(26)分别是SEQ ID NO:202、SEQID NO:203和SEQ ID NO:6；(27)分别是SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:209和SEQ ID NO:210；(28)分别是SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:216；(29)分别是SEQ ID NO:10、11或12；(30)分别是SEQ ID NO:4、5或6；或者(31)分别是SEQ ID NO:142、143或210，其中0至3个氨基酸修饰可存在于任何CDR/SEQ ID NO:中。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，并且所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中(1)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ IDNO:33所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；(2)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列；(3)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；(4)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59和SEQID NO:60所示的氨基酸序列；(5)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:61、SEQ IDNO:62和SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列；(6)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列；(7)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列；(8)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:82、SEQID NO:83和SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列；(9)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ IDNO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列；(10)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列；(11)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列；(12)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104和SEQ ID NO:105所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列；(13)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:110和SEQ ID NO:111所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:114所示的氨基酸序列；(14)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:110和SEQ IDNO:117所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:88、SEQ IDNO:89和SEQ ID NO:114所示的氨基酸序列；(15)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ IDNO:121、SEQ ID NO:122和SEQ ID NO:123所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:125和SEQ ID NO:126所示的氨基酸序列；(16)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128和SEQ ID NO:129所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；(17)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:134和SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:138所示的氨基酸序列；(18)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:141所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:144所示的氨基酸序列；(19)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146和SEQ ID NO:147所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149和SEQID NO:150所示的氨基酸序列；(20)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:31、SEQ IDNO:32和SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ IDNO:148、SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:150所示的氨基酸序列；(21)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:159所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:162所示的氨基酸序列；(22)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:170和SEQ ID NO:171所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:173和SEQ ID NO:174所示的氨基酸序列；(23)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:180所示的氨基酸序列；(24)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:182和SEQ ID NO:183所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:186所示的氨基酸序列；(25)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:188和SEQ IDNO:189所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:190、SEQ IDNO:191和SEQ ID NO:192所示的氨基酸序列；(26)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ IDNO:193、SEQ ID NO:194和SEQ ID NO:195所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:196、SEQ ID NO:197和SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；(27)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:199、SEQ ID NO:200和SEQ ID NO:201所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203和SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；(28)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206和SEQ ID NO:207所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:209和SEQ ID NO:210所示的氨基酸序列；(29)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212和SEQ ID NO:213所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:216所示的氨基酸序列；(30)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:386和SEQ ID NO:129所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ IDNO:36所示的氨基酸序列；(31)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206和SEQ ID NO:207所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:209和SEQ ID NO:210所示的氨基酸序列；(32)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:388和SEQ ID NO:129所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；(33)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:387和SEQ ID NO:207所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:209和SEQ ID NO:210所示的氨基酸序列；或者(34)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:387和SEQ ID NO:207所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:210所示的氨基酸序列；其中0至3个氨基酸修饰可存在于任何CDR/SEQ ID NO:中。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含：(1)至少一个具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32或SEQ IDNO:33所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35或SEQ IDNO:36所示氨基酸序列的VL CDR；(2)至少一个具有如SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38或SEQID NO:39所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41或SEQID NO:42所示氨基酸序列的VL CDR；(3)至少一个具有如SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:48所示氨基酸序列的VL CDR；(4)至少一个具有如SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:57所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:58、SEQ IDNO:59或SEQ ID NO:60所示氨基酸序列的VL CDR；(5)至少一个具有如SEQ ID NO:61、SEQID NO:62或SEQ ID NO:63所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:64、SEQID NO:65或SEQ ID NO:66所示氨基酸序列的VL CDR；(6)至少一个具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:69所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:72所示氨基酸序列的VL CDR；(7)至少一个具有如SEQ IDNO:73、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:78所示氨基酸序列的VL CDR；(8)至少一个具有如SEQID NO:79、SEQ ID NO:80或SEQ ID NO:81所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQID NO:82、SEQ ID NO:83或SEQ ID NO:84所示氨基酸序列的VL CDR；(9)至少一个具有如SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:90所示氨基酸序列的VL CDR；(10)至少一个具有如SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:92或SEQ ID NO:93所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:96所示氨基酸序列的VL CDR；(11)至少一个具有如SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98或SEQ ID NO:99所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:101或SEQ ID NO:102所示氨基酸序列的VLCDR；(12)至少一个具有如SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:105所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:107或SEQ ID NO:108所示氨基酸序列的VL CDR；(13)至少一个具有如SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:110或SEQ ID NO:111所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:114所示氨基酸序列的VL CDR；(14)至少一个具有如SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:110或SEQ IDNO:117所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89或SEQID NO:114所示氨基酸序列的VL CDR；(15)至少一个具有如SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:122或SEQ ID NO:123所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:124、SEQ IDNO:125或SEQ ID NO:126所示氨基酸序列的VL CDR；(16)至少一个具有如SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128或SEQ ID NO:129所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:36所示氨基酸序列的VL CDR；(17)至少一个具有如SEQ IDNO:133、SEQ ID NO:134或SEQ ID NO:135所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQID NO:136、SEQ ID NO:137或SEQ ID NO:138所示氨基酸序列的VL CDR；(18)至少一个具有如SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:140或SEQ ID NO:141所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143或SEQ ID NO:144所示氨基酸序列的VL CDR；(19)至少一个具有如SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146或SEQ ID NO:147所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150所示氨基酸序列的VLCDR；(20)至少一个具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:33所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150所示氨基酸序列的VL CDR；(21)至少一个具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:159所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137或SEQ ID NO:162所示氨基酸序列的VL CDR；(22)至少一个具有如SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:170或SEQ ID NO:171所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:173或SEQ IDNO:174所示氨基酸序列的VL CDR；(23)至少一个具有如SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62或SEQID NO:63所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQID NO:180所示氨基酸序列的VL CDR；(24)至少一个具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:182或SEQ ID NO:183所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:136、SEQ IDNO:137或SEQ ID NO:186所示氨基酸序列的VL CDR；(25)至少一个具有如SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:188或SEQ ID NO:189所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:192所示氨基酸序列的VL CDR；(26)至少一个具有如SEQID NO:193、SEQ ID NO:194或SEQ ID NO:195所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:196、SEQ ID NO:197或SEQ ID NO:12所示氨基酸序列的VL CDR；(27)至少一个具有如SEQ ID NO:199、SEQ ID NO:200或SEQ ID NO:201所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203或SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的VL CDR；(28)至少一个具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207所示氨基酸序列的VHCDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:209或SEQ ID NO:210所示氨基酸序列的VL CDR；(29)至少一个具有如SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212或SEQ ID NO:213所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:216所示氨基酸序列的VL CDR；(30)至少一个具有如SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:386或SEQ ID NO:129所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35或SEQ IDNO:36所示氨基酸序列的VL CDR；(31)至少一个具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:209或SEQ ID NO:210所示氨基酸序列的VL CDR；(32)至少一个具有如SEQ ID NO:127、SEQID NO:388或SEQ ID NO:129所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:36所示氨基酸序列的VL CDR；(33)至少一个具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:387或SEQ ID NO:207所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ IDNO:142、SEQ ID NO:209或SEQ ID NO:210所示氨基酸序列的VL CDR；或者(34)至少一个具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:387或SEQ ID NO:207所示氨基酸序列的VH CDR，和至少一个具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143或SEQ ID NO:210所示氨基酸序列的VL CDR；其中0至3个氨基酸修饰可存在于任何CDR/SEQ ID NO:中.
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％序列同一性的序列。在其他实施方案中，该重链可变区包含与SEQ ID NO:17或21所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
对于本文公开的任何涉及至少90％序列同一性的实施方案，应当理解，这包括90％至100％的任何序列同一性，即至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％和100％。
在其他实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:301、302、303、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、324、306、326、327、330、331、13、17、21、382、384、389、390和378所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在其他实施方案中，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:301、302、303、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、324、306、326、327、330、331、13、17、21、382、384、389、390和378所示的氨基酸序列，其中具有至多10个修饰，如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸修饰。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％序列同一性的序列。在其他实施方案中，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:15或19所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在其他实施方案中，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:351、352、353、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、366、367、368、369、370、372、351、374、375、376、377、380,381、14、15、19、383、385或378所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中：(1)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或者(2)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中：(1)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:301所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:351所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(2)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:302所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:352所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(3)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:303所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:353所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(4)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:305所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:355所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(5)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:306所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:356所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(6)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:307所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:357所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(7)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ IDNO:308所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:358所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(8)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:309所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:359所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(9)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:310所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:360所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(10)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:311所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQID NO:361所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(11)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:312所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:362所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(12)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:313所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:363所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(13)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:314所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:364所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(14)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:315所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:364所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(15)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQID NO:316所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:366所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(16)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:317所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:367所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(17)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:318所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:368所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(18)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:319所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:369所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(19)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:320所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQID NO:370所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(20)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:321所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:370所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(21)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:322所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:372所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(22)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:324所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:374所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(23)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:306所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:375所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(24)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQID NO:326所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:376所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(25)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:327所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:377所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(26)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(27)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(28)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:330所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ IDNO:380所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(29)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:331所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:381所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(30)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:382所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:383所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(31)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:384所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:385所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(32)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:389所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:383所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(33)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ IDNO:390所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:385所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或者(34)所述重链包含重链链可变区，该重链可变区包含与SEQ ID NO:390所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:378所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:301所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:351所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:302所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:352所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:303所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:353所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:305所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:355所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:306所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:356所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:307所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:357所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:308所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:358所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:309所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:359所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:310所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:360所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:311所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:361所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:312所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:362所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:313所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:363所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:314所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:364所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:315所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:364所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:316所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:366所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:317所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:367所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:318所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:368所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:319所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:369所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:320所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:370所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:321所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:370所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:322所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:372所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:324所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:374所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:306所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:375所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:326所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:376所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:327所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:377所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:330所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:380所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:331所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:381所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:382所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:383所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:384所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:385所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:389所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:383所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:390所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:385所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:390所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:378所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在其他实施方案中，所述重链可变区多肽与SEQ ID NO:13中公开的序列具有至少92％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。
在其他实施方案中，所述重链可变区多肽与SEQ ID NO:17中公开的序列具有至少92％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。
在其他实施方案中，所述重链可变区多肽与SEQ ID NO:21中公开的序列具有至少92％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。
在其他实施方案中，所述重链可变区多肽与SEQ ID NO:301、302、303、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、324、306、326、327、330、331、382、384、389或390中公开的序列具有至少92％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。
在其他实施方案中，所述轻链可变区多肽与SEQ ID NO:14中公开的序列具有至少92％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。
在其他实施方案中，所述轻链可变区多肽与SEQ ID NO:15中公开的序列具有至少92％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。
在其他实施方案中，所述轻链可变区多肽与SEQ ID NO:19中公开的序列具有至少92％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。
在其他实施方案中，所述轻链可变区多肽与SEQ ID NO:351、352、353、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、364、366、367、368、369、370、372、374、375、376、377、380、381、383、385或378中公开的序列具有至少92％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。
根据本发明第一方面的另一个变化，提供了一种分离的抗体或其抗原结合片段，其具有如表1所示的任何抗体克隆的初级VH结构域、初级VL结构域、CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3。在某些实施方案中，本文提供了选自如表1所示的抗体克隆的分离的抗体。
表1.示例性BTLA激动性抗体
Figure BDA0003216039430000411
Figure BDA0003216039430000421
在特定实施方案中，重链或轻链还包含恒定区。如果分子是全长IgG型抗体分子，则重链可包含三个恒定域。
在某些实施方案中，分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段对于与人BTLA结合表现出至多约10x10-9M的KD。在某些实施方案中，分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段对于与人BTLA结合表现出至多约4x10-9M的KD。在某些实施方案中，分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段对于与人BTLA结合表现出至多约1x10-9M的KD。
在某些实施方案中，本发明的分离的抗体(例如，人源化的)在37℃下以不超过约10nM(1x10-8M)的KD结合人BTLA；适当地不超过约1nM；更适当地是其中抗体在37℃下的KD值不超过约500pM(5xl0-10M)、200pM、100pM、50pM、20pM、10pM、5pM乃至2pM的实施方案。在上下文中使用的术语“约”是指+/-10％。
在某些实施方案中，本发明的分离的抗体(例如，人源化的)在37℃下以至少1.0x105(1/Ms)的缔合速率结合人BTLA。在某些实施方案中，本发明的分离的抗体(例如，人源化的)在37℃下以至少2.0x105(1/Ms)、3.0x105(1/Ms)、4.0x105(1/Ms)、5.0x105(1/Ms)、6.0x105(1/Ms)或7.0x105(1/Ms)的缔合速率结合人BTLA。
在某些实施方案中，本发明的分离的抗体(例如，人源化的)在37℃下以不超过或小于1.0x10-3(1/s)的解离速率结合人BTLA。在某些实施方案中，本发明的分离的抗体(例如，人源化的)在37℃下以不超过或小于3.0x10-4(1/s)的解离速率结合人BTLA。在某些实施方案中，本发明的分离的抗体(例如，人源化的)在37℃下以不超过或小于2.0x10-4(1/s)或1.0x10-4(1/s)的解离速率结合人BTLA。
在本发明第一方面的特定实施方案中，本文提供了分离的激动性抗体或其抗原结合片段，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，其以小于10nM的KD特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)，并且其中如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体以小于20nM的KD结合食蟹猴BTLA；如使用例如实施例4中描述的方法，例如通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如使用例如实施例9中描述的方法，例如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以至少5.0x105(1/Ms)的缔合速率结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于3.0x10-4(1/s)的解离速率结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以3.0x10-4(1/s)至1.0x10-3(1/s)的解离速率结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。在一些实施方案中，如使用例如实施例5中描述的方法，通过突变受体的X射线晶体学或通过流式细胞术所确定的，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自Y39、K41、R42、Q43、E45和S47的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D35、T78、K81、S121和L123的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合人BTLA的残基H68。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自N65和A64的人BTLA的残基。
表征本发明的抗体或其抗原结合片段的性质的方法是本领域公知的。实施例2中描述了在37℃下使用表面等离子体共振(SPR)确定结合特异性的合适的方法。实施例4中描述了用于确定所测试的抗体/其片段是否抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)结合的合适的方法；这也采用表面等离子体共振(SPR)。用于确定所测试的抗体/其片段是否在体外抑制T细胞增殖的合适的方法是混合淋巴细胞反应试验，例如实施例9中所描述的试验。用于确定抗体/其片段与BTLA的结合位点的合适的方法可以利用突变受体的X射线晶体学或流式细胞术，例如通过实施例5中描述的方法。
在本发明第一方面的特定实施方案中，本文提供了分离的激动性抗体或其抗原结合片段，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，其以至少5.0x105(1/Ms)的缔合速率特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)，其中如使用例如实施例4中描述的方法，例如通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且其中如使用例如实施例9中描述的方法，例如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，所述抗体在体外抑制T细胞的增殖。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于3.0x10-4(1/s)的解离速率结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于10nM的KD结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于20nM的KD结合食蟹猴BTLA。在一些实施方案中，如使用例如实施例5中描述的方法，通过突变受体的X射线晶体学或通过流式细胞术所确定的，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自Y39、K41、R42、Q43、E45和S47的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D35、T78、K81、S121和L123的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合人BTLA的残基H68。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自N65和A64的人BTLA的残基。
在本发明第一方面的特定实施方案中，本文提供了分离的激动性抗体或其抗原结合片段，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，其以3.0x10-4(1/s)至1.0x10-3(1/s)的解离速率特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)，其中如使用例如实施例4中描述的方法，例如通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且其中如使用例如实施例9中描述的方法，例如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，所述抗体在体外抑制T细胞的增殖。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于10nM的KD结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于20nM的KD结合食蟹猴B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以至少5.0x105(1/Ms)的缔合速率结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。在一些实施方案中，如使用例如实施例5中描述的方法，通过突变受体的X射线晶体学或通过流式细胞术所确定的，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自Y39、K41、R42、Q43、E45和S47的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D35、T78、K81、S121和L123的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合人BTLA的残基H68。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自N65和A64的人BTLA的残基。
在本发明第一方面的特定实施方案中，本文提供了分离的激动性抗体或其抗原结合片段，各自如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，其以小于1.0x10-3(1/s)的解离速率和至少5.0x105(1/Ms)的缔合速率特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)，其中如使用例如实施例4中描述的方法，例如通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且其中如使用例如实施例9中描述的方法，例如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，所述抗体在体外抑制T细胞的增殖。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于10nM的KD结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于20nM的KD结合食蟹猴BTLA。在一些实施方案中，如使用例如实施例5中描述的方法，通过突变受体的X射线晶体学或通过流式细胞术所确定的，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自Y39、K41、R42、Q43、E45和S47的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D35、T78、K81、S121和L123的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合人BTLA的残基H68。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自N65和A64的人BTLA的残基。
在本发明第一方面的特定实施方案中，本文提供了分离的激动性抗体或其抗原结合片段，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，其以小于2nM的KD特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)，其中如使用例如实施例4中描述的方法，通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如使用例如实施例9中描述的方法，例如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于1.0x106(1/Ms)的缔合速率结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于1.0x10-3(1/s)的解离速率结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于10nM的KD结合食蟹猴B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。在一些实施方案中，如使用例如实施例5中描述的方法，通过突变受体的X射线晶体学或通过流式细胞术所确定的，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自Y39、K41、R42、Q43、E45和S47的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D35、T78、K81、S121和L123的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合人BTLA的残基H68。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自N65和A64的人BTLA的残基。
在本发明第一方面的特定实施方案中，本文提供了分离的激动性抗体或其抗原结合片段，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，其以小于1x10-3(1/s)的解离速率特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)，其中如使用例如实施例4中描述的方法，通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如使用例如实施例9中描述的方法，例如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于10nM的KD结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于2nM的KD结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。在一些实施方案中，如使用例如实施例5中描述的方法，通过突变受体的X射线晶体学或通过流式细胞术所确定的，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自Y39、K41、R42、Q43、E45和S47的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D35、T78、K81、S121和L123的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合人BTLA的残基H68。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自N65和A64的人BTLA的残基。
在本发明第一方面的特定实施方案中，本文提供了分离的特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)的激动性抗体或其抗原结合片段，其中如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体以至少5nM的KD结合食蟹猴BTLA；并且其中如使用例如实施例4中描述的方法，通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如使用例如实施例9中描述的方法，例如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。在一些实施方案中，如使用例如实施例5中描述的方法，通过突变受体的X射线晶体学或通过流式细胞术所确定的，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自Y39、K41、R42、Q43、E45和S47的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D35、T78、K81、S121和L123的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合人BTLA的残基H68。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自N65和A64的人BTLA的残基。
在本发明第一方面的特定实施方案中，本文提供了分离的特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)的激动性抗体或其抗原结合片段，其中如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体以至少50nM的KD结合食蟹猴BTLA；并且其中如使用例如实施例4中描述的方法，通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如使用例如实施例9中描述的方法，例如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。在一些实施方案中，如使用例如实施例5中描述的方法，通过突变受体的X射线晶体学或通过流式细胞术所确定的，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自Y39、K41、R42、Q43、E45和S47的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D35、T78、K81、S121和L123的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合人BTLA的残基H68。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自N65和A64的人BTLA的残基。
在本发明第一方面的特定实施方案中，本文提供了分离的激动性抗体或其抗原结合片段，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，其以1400nM至3500nM的KD特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)；并且其中如使用例如实施例4中描述的方法，通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如使用例如实施例9中描述的方法，例如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以至少2.0x105(1/Ms)的缔合速率结合人BTLA。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于10.0x10-1(1/s)的解离速率结合人BTLA。在一些实施方案中，如使用例如实施例5中描述的方法，通过突变受体的X射线晶体学或通过流式细胞术所确定的，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自Y39、K41、R42、Q43、E45和S47的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D35、T78、K81、S121和L123的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合人BTLA的残基H68。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自N65和A64的人BTLA的残基。
在本发明第一方面的特定实施方案中，本文提供了分离的激动性抗体或其抗原结合片段，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，其以1.7x105(1/Ms)至2.5x105(1/Ms)的缔合速率特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)；并且其中如使用例如实施例4中描述的方法，通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如使用例如实施例9中描述的方法，例如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于3.0x10-1(1/s)的解离速率结合人BTLA。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以3.0x10-1(1/s)至5.0x10-1(1/s)的解离速率结合人BTLA。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以至少150nM的KD结合人BTLA。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以150nM至1500nM的KD结合人BTLA。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段与阻断286抗体的结合的表位结合。在一些实施方案中，如使用例如实施例5中描述的方法，通过突变受体的X射线晶体学或通过流式细胞术所确定的，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自Y39、K41、R42、Q43、E45和S47的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D35、T78、K81、S121和L123的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合人BTLA的残基H68。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自N65和A64的人BTLA的残基。
在本发明第一方面的特定实施方案中，本文提供了分离的激动性抗体或其抗原结合片段，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，其以40nM至1200nM的KD特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)；并且其中如使用例如实施例4中描述的方法，通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如使用例如实施例9中描述的方法，例如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以至少1.0x105(1/Ms)的缔合速率结合人BTLA。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以1.0x105(1/Ms)至10x105(1/Ms)的缔合速率结合人BTLA。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于6.0x10-1(1/s)的解离速率结合人BTLA。在一些实施方案中，如使用例如实施例2中描述的方法，在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以6.0x10-1(1/s)至10.0x10-2(1/s)的解离速率结合人BTLA。在一些实施方案中，如使用例如实施例5中描述的方法，通过突变受体的X射线晶体学或通过流式细胞术所确定的，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自Y39、K41、R42、Q43、E45和S47的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自D35、T78、K81、S121和L123的人BTLA的残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合人BTLA的残基H68。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合选自N65和A64的人BTLA的残基。
在某些实施方案中，特异性结合人BTLA的本发明的分离的抗体或其抗原结合片段增加BTLA活性和/或通过受体的信号传导。
在特定实施方案中，本发明的抗体选自：人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、多特异性抗体(如双特异性抗体)。
在特定实施方案中，本发明的抗原结合片段选自：scFv、sc(Fv)2、dsFv、Fab、Fab'、(Fab')2和双抗体。
在特定实施方案中，形成抗原结合片段的重链和轻链分子通过柔性连接体连接。有许多常用的柔性连接体，并且连接体的选择可由本领域技术人员进行。
连接scFv VH和VL结构域的肽连接体将一个可变区结构域的羧基末端连接到另一个可变域的氨基末端，而不会显著损害VH-VL配对和抗原结合位点的保真度。肽连接体的长度可以从10到25个氨基酸不等，通常但不总是由亲水性氨基酸如甘氨酸(G)和丝氨酸(S)组成。连接体可以是在天然多结构域蛋白质中发现的连接体(例如参见Argos P.J MolBiol.211:943-958,1990；和Heringa G.Protein Eng.15:871-879,2002)，或其修改形式。
常用的柔性连接体具有主要由一段Gly和Ser残基组成的序列(“GS”连接体)。最广泛使用的柔性连接体的示例是序列(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n。通过调整拷贝数“n”，可以改变该GS连接体的长度，以实现功能性结构域的适当分离，或保持必要的结构域间相互作用。通常，(GGGGS)3肽用作scFv肽连接体(Leith等人,Int.J.Oncol.24:765–771,2004；Holiger等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444–6448,1993)。该15个氨基酸的连接体序列[称为(GGGGS)3连接体]在可从Amersham商购获得的重组噬菌体抗体系统(RPAS试剂盒)中使用。其他几种连接体也已用于创建scFV分子(例如KESGSVSSEQLAQFRSLD和EGKSSGSGSESKST；Bird等人,Science 242:432-426,1988)。
发明人已经定位了有效的2.8.6和11.5.1激动剂和本文公开的其他抗体所结合的BTLA上的表位。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106、E92、Y39、K41、R42、Q43、E45、S47、D35、T78、K81、S121、L123、H68、N65、A64的人BTLA的残基。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106、E92的人BTLA的残基。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106、E92的人BTLA的至少两个残基。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92的人BTLA的至少三个残基。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92的人BTLA的至少五个残基。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合选自D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92的人BTLA的所有残基。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合选自Y39、K41、R42、Q43、E45和S47的人BTLA的残基。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合选自Y39、K41、R42、Q43、E45和S47的人BTLA的至少两个残基。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合选自Y39、K41、R42、Q43、E45和S47的人BTLA的所有残基。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合选自D35、T78、K81、S121和L123的人BTLA的残基。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合选自D35、T78、K81、S121和L123的人BTLA的至少两个残基。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合人BTLA的残基H68。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合选自N65和A64的人BTLA的残基。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合人BTLA的N65和A64残基两者。
残基的编号，如K41，是指第41位的氨基酸(K；赖氨酸)；其中编号是指SEQ ID NO:23中公开的人BTLA多肽中的位置。
在特定实施方案中，本发明的抗体是IgG1、IgG2或IgG4抗体。在特定实施方案中，该抗体是鼠或人抗体。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段是人源化抗体。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段是完全人抗体。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段充当通过BTLA受体诱导信号传导的激动剂。
本发明的抗体(或其抗原结合片段段)是特别有效的激动剂。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的EC50不超过1nM。
本发明的激动剂抗体(或其抗原结合片段)具有特别高的功效。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段将T细胞增殖抑制至少20％，适当地至少30％，更适当地至少40％。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段将T细胞IFN-γ产生抑制至少50％，适当地至少75％，更适当地至少95％，如例如通过体外混合淋巴细胞反应中的上清液的ELISA所测量的。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段将T细胞IL-2产生抑制至少50％，适当地至少75％，更适当地至少95％，如例如通过体外混合淋巴细胞反应中的上清液的ELISA所测量的。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段将T细胞IL-17产生抑制至少50％，适当地至少75％，更适当地至少95％，如例如通过体外混合淋巴细胞反应中的上清液的ELISA所测量的。
在特定实施方案中，使用如实施例12中描述的方法，本发明的抗体或其抗原结合片段将鼠GVHD模型中的死亡率降低至少50％，适当地至少75％，更适当地至少95％。
在特定实施方案中，使用如实施例11中描述的方法，本发明的抗体或其抗原结合片段将鼠T细胞结肠炎模型中的体重减轻减少至少50％，适当地至少75％，更适当地至少95％。
在特定实施方案中，使用如实施例11中描述的方法，本发明的抗体或其抗原结合片段将鼠T细胞结肠炎模型中的结肠炎症减轻至少50％，适当地至少75％，更适当地至少95％。
在某些方面，本发明还涉及包含本文所述的任何抗体或其抗原结合片段的VL结构域或VH结构域的分离多肽。
在特定实施方案中，所述分离的多肽包含如SEQ ID NO:13或14所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的序列。
核酸分子
本发明的抗体或其抗原结合片段将由核酸编码。该抗体或其抗原结合片段可以由单个核酸分子编码，或者它可以由两个或更多个核酸分子编码。例如，因为抗原结合位点通常由重链可变多肽区和轻链可变多肽区组合在一起形成，所以这两个可变(重链和轻链)多肽区可以由单独的核酸分子编码。或者，例如，在ScFv的情况下，它们可以由相同的核酸分子编码。
根据本发明的第二方面，提供了一种或多种编码根据本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段的核酸分子。
本领域技术人员能够从编码本发明抗体或其抗原结合片段的多肽的一级氨基酸序列确定编码多肽的合适的核苷酸序列，并且，如果需要，确定密码子优化的序列(例如参见Mauro和Chappell.Trends Mol Med.20(11):604-613,2014).
如本文所用的，当提及本发明的前述方面，例如“根据本发明第一(或第二等)方面”时，应理解为还涵盖所述方面的任何列举的变化(例如第一(或第二等)方面的变化)。
根据本发明第二方面的变化，提供了一种分离的核酸，其包含编码本发明的重链可变区多肽或轻链可变区多肽的核苷酸序列。本发明的重链可变多肽或轻链可变多肽是指包括构成抗原结合位点的一部分的氨基酸的单个多肽链。当然，所述多肽也可以包含其他结构域，如恒定域、铰链区和Fc区，例如包含一个或多个Fc受体结合位点的区域。
根据本发明第二方面的另一个变化，提供了一种分离的核酸，其包含一个或多个编码能够形成本发明抗体或抗原结合片段的多肽的核苷酸序列。在特定实施方案中，所述多肽还可包含其他结构域，如恒定域、铰链区和Fc区，例如包含一个或多个Fc受体结合位点的区域。
核酸分子之一可以仅编码包含抗体或其片段的VL结构域的多肽。核酸分子之一可以仅编码包含抗体或其片段的VH结构域的多肽。然而，核酸分子也可以编码含有能够形成本发明抗体或其抗体片段的多肽序列的VH和VL结构域。
编码本发明的抗体或其抗原结合片段的核酸分子，例如根据本发明的第一方面，可以是载体(如质粒载体、粘粒载体或病毒载体，或人工染色体)或者可以是该载体的一部分，该载体可包含其他功能区(元件)，如一个或多个启动子、一个或多个复制起点、一个或多个选择标记以及一个或多个通常在表达载体中发现的其他元件。编码蛋白质(包括抗体)的核酸的克隆和表达已经完善，并且在本领域技术人员的技术范围内。
根据本发明的第三方面，提供了一种包含本发明第二方面的核酸的载体。在特定实施方案中，该载体是质粒载体、粘粒载体、病毒载体或人工染色体。
本发明的核酸，包括包含编码能够形成本发明抗体或其抗原结合片段的多肽的核苷酸序列的载体核酸，可以是纯化/分离的形式。
分离/纯化的编码本发明抗体或其抗原结合片段的核酸将不含或基本上不含与其天然缔合的物质，例如在其天然环境或制备它们的环境(例如细胞培养物)——当这种制备通过体外或体内实施的重组DNA技术进行时——中发现的其他蛋白质或核酸。
在特定实施方案中，本发明的核酸是大于80％，如大于90％、大于95％、大于97％和大于99％纯的。
因此，根据本发明第三方面的另一个变化，提供了一种包含编码本发明的重链可变多肽或轻链可变多肽的核酸或核苷酸序列的载体。在特定的实施方案中，该载体包含编码重链和轻链可变区的核酸。在特定实施方案中，所述多肽还可包含其他结构域，如恒定域、铰链区和Fc区，例如包含一个或多个Fc受体结合位点的区域。
本发明的核酸和/或载体可以被引入宿主细胞中。该引入可采用任何可用的技术。对于真核细胞，合适的技术可包括磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖、电穿孔、脂质体介导的转染，以及使用逆转录病毒或其他病毒例如牛痘病毒或对于昆虫细胞使用杆状病毒的转导。在宿主细胞，特别是真核细胞中引入核酸可以使用病毒系统或基于质粒的系统。质粒系统可以附加型地保持，或者可以并入宿主细胞或人工染色体中。并入可以通过在单个或多个基因座处随机或靶向整合一个或多个拷贝来完成。对于细菌细胞，合适的技术可包括氯化钙转化、电穿孔和使用噬菌体的转染。
在一个实施方案中，本发明的核酸整合到宿主细胞的基因组(例如染色体)中。可按照标准技术通过包含促进与基因组重组的序列来促进整合。
宿主细胞
本发明的另一方面提供了一种包含本文公开的核酸的宿主细胞。这样的宿主细胞可以在体外并且可以在培养中。
宿主细胞可以来自任何物种，如细菌或酵母，但合适地，宿主细胞是哺乳动物细胞，如人细胞或啮齿动物细胞，例如HEK293T细胞或CHO-K1细胞。
因此，根据本发明的第四方面，提供了一种包含根据本发明第二方面的核酸序列或根据本发明第三方面的载体的宿主细胞。
可以处理宿主细胞，以便例如通过在用于表达编码核酸的条件下培养宿主细胞，引起或允许本发明蛋白质从核酸表达。表达产物的纯化可以通过本领域技术人员已知的方法实现。
因此，本发明的核酸，包括包含编码能够形成本发明抗体或其抗原结合片段的多肽的核苷酸序列的载体核酸，可以存在于分离的宿主细胞中。宿主细胞通常是宿主细胞克隆群体的一部分。如本文所用的，提及宿主细胞还包括所述细胞的克隆群体。克隆群体是从单个亲本宿主细胞生长出来的群体。宿主细胞可以来自任何合适的生物体。合适的宿主细胞包括细菌、真菌或哺乳动物细胞。
宿主细胞可用于辅助扩增载体核酸(例如采用质粒)，或者其可充当表达形成BTLA抗体或其抗原结合片段的本发明多肽的生物工厂。用于扩增载体核酸的合适的宿主可以是细菌或真菌细胞，如大肠杆菌细胞或酿酒酵母细胞。用于表达本发明蛋白质(即构成本发明的人BTLA结合抗体或其抗原结合片段的多肽)的合适的宿主是哺乳动物细胞，如HEK293T或CHO-K1细胞。在特定的实施方案中，宿主细胞是哺乳动物细胞，如HEK293T或CHO-K1细胞。
多种宿主表达载体系统可用于表达本文所述的BTLA结合分子(参见例如美国专利5,807,715)。例如，哺乳动物细胞如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)与载体如来自人巨细胞病毒的主要中早期基因启动子元件一起是CEA蛋白的有效表达系统(Foecking等人,Gene,45:101,1986；和Cockett等人,Bio/Technology,8:2(1990))。不同的宿主细胞具有蛋白质和基因产物的翻译后加工和修饰的特征性和特定机制。可以选择适当的细胞系或宿主系统，以确保对本公开的蛋白质的正确修饰和加工。为此，可以使用具有用于初级转录物的正确加工、基因产物的糖基化和磷酸化的细胞机制的真核宿主细胞。这类哺乳动物宿主细胞包括但不限于CHO、HEK、VERY、BHK、Hela、COS、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O和T47D、NS0、CRL7O3O以及HsS78Bst细胞。
抗体的产生
根据本发明的第五方面，提供了一种产生根据本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括以下步骤：在用于产生所述抗体或其抗原结合片段的条件下培养本发明第四方面的宿主细胞，以及任选地分离和/或纯化所述抗体或其抗原结合片段。
根据本发明第五方面的变化，提供了一种产生与人BTLA结合的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括以下步骤：在用于产生所述抗体或其抗原结合片段的条件下培养宿主细胞，该宿主细胞包含编码形成与人BTLA结合的抗体或其抗原结合片段的多肽的核酸，任选地进一步包括分离/纯化所述抗体或其抗原结合片段。
所谓分离/纯化的是指本发明的抗体或其抗原结合片段或者构成这些分子的多肽将不含或基本上不含与其天然缔合的物质，例如在其天然环境或制备它们的环境(例如细胞培养物)——当这种制备通过体外或体内实施的重组DNA技术进行时——中发现的其他蛋白质或核酸。
根据本发明第五方面的变化，提供了一种制备特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括以下步骤：
a)提供包含一个或多个编码重链可变域和轻链可变域的氨基酸序列的核酸分子的宿主细胞，所述核酸分子当表达时能够组合以产生人BTLA结合分子；
b)培养表达所编码的氨基酸序列的宿主细胞；以及c)分离所述抗体或抗原结合片段分子。
所述一个或多个核酸分子是上文描述的编码能够形成特异性结合人BTLA的本发明抗体或其抗原结合片段的多肽的那些核酸分子。
在特定实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：i)包含以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，CDRH2具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，并且CDRH3具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；以及
ii)包含以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1具有如SEQID NO:4所示的氨基酸序列，CDRL2具有如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，并且CDRL3具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
在特定实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：i)包含以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，CDRH2具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，并且CDRH3具有如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列；以及
ii)包含以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1具有如SEQID NO:10所示的氨基酸序列，CDRL2具有如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，并且CDRL3具有如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
在特定实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
i)重链可变区，其包含SEQ ID NO:13中公开的氨基酸序列，或与其具有至少90％序列同一性的序列；以及
ii)轻链可变区，其包含SEQ ID NO:14中公开的氨基酸序列，或与其具有至少90％序列同一性的序列。
在多个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，并且所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中(1)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ IDNO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；(2)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列；(3)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；(4)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:43、SEQID NO:56和SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ IDNO:58、SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列；(5)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列；(6)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列；(7)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:76、SEQID NO:47和SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列；(8)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ IDNO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列；(9)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列；(10)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列；(11)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:97、SEQID NO:98和SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ IDNO:100、SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列；(12)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104和SEQ ID NO:105所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列；(13)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:110和SEQ ID NO:111所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:114所示的氨基酸序列；(14)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:85、SEQID NO:110和SEQ ID NO:117所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQID NO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:114所示的氨基酸序列；(15)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:122和SEQ ID NO:123所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:125和SEQ ID NO:126所示的氨基酸序列；(16)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128和SEQ ID NO:129所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；(17)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:134和SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:138所示的氨基酸序列；(18)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:141所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:144所示的氨基酸序列；(19)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146和SEQID NO:147所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:148、SEQID NO:149和SEQ ID NO:150所示的氨基酸序列；(20)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:150所示的氨基酸序列；(21)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:159所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:162所示的氨基酸序列；(22)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:170和SEQ ID NO:171所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:173和SEQ ID NO:174所示的氨基酸序列；(23)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:180所示的氨基酸序列；(24)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:182和SEQ ID NO:183所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137和SEQ IDNO:186所示的氨基酸序列；(25)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:187、SEQ IDNO:188和SEQ ID NO:189所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ IDNO:190、SEQ ID NO:191和SEQ ID NO:192所示的氨基酸序列；(26)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:193、SEQ ID NO:194和SEQ ID NO:195所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:196、SEQ ID NO:197和SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；(27)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:199、SEQ ID NO:200和SEQ ID NO:201所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203和SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；(28)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206和SEQ ID NO:207所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:209和SEQ ID NO:210所示的氨基酸序列；(29)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212和SEQ ID NO:213所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:216所示的氨基酸序列；(30)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:386和SEQ IDNO:129所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ IDNO:35和SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；(31)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206和SEQ ID NO:207所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:209和SEQ ID NO:210所示的氨基酸序列；(32)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:388和SEQ ID NO:129所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；(33)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:387和SEQ ID NO:207所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:209和SEQ ID NO:210所示的氨基酸序列；or(34)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:387和SEQ ID NO:207所示的氨基酸序列，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:210所示的氨基酸序列；其中0至3个氨基酸修饰可存在于任何CDR/SEQ ID NO:中
用于产生本发明的抗体或其抗原结合片段并纯化所述分子的条件是本领域公知的。
解决该问题的一种方式是制备能够表达本发明的抗体或其片段的细胞克隆群体，并将这些细胞在合适的生长培养基中在有利于细胞群体扩充/生长和目的蛋白质表达的温度下培养一段时间。如果目的蛋白质(例如本发明的抗体)在宿主细胞内表达，则可以裂解细胞(例如使用温和的去污剂或超声处理)以将细胞的内容物(因此目的蛋白质)释放到周围的介质(其可以是培养基或在其中重构细胞的另一种介质)中，然后对该介质进行纯化过程。如果目的蛋白质(例如本发明的抗体)分泌到生长培养基中，则对培养基进行纯化过程。抗体纯化通常涉及使用确立的方法从例如培养基中或从杂交瘤细胞系的培养上清液中分离抗体，所述方法通常涉及色谱法(例如，使用亲和色谱法、阴离子和/或阳离子交换色谱法、大小排阻色谱法或其他分离技术)，以从不需要的宿主衍生的蛋白质和其他细胞污染物(例如核酸、碳水化合物等)中分离目的蛋白质。纯化的蛋白质也可以经历病毒灭活步骤。最后，例如可以将纯化的目的蛋白质冻干或配制以备储存、运输和后续使用。优选地，目的蛋白质(例如本发明的抗体或其抗原结合片段)在表达或细胞裂解后基本上不含最初存在于培养基中的污染蛋白质。
在某些实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段是至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％纯的。
本发明的蛋白质(本发明的抗体或其抗原结合片段)可以被配制成合适的组合物。
组合物
虽然BTLA结合分子可以单独施用，但在某些实施方案中，施用是药物组合物的施用，其中BTLA结合分子与至少一种药学上可接受的赋形剂一起配制。该赋形剂可以是合适的药物载体溶质。此类载体是本领域公知的，包括磷酸盐缓冲盐水溶液、水、脂质体、各种类型的润湿剂、无菌溶液等。包含这类载体的组合物可以通过众所周知的常规方法配制。这些药物组合物可以以合适的剂量施用于受试者。剂量方案将由主治医师和临床因素决定。
根据本发明的第六方面，提供了一种药物组合物，其包含药学上可接受的赋形剂和治疗有效量的本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段，或通过本发明第五方面产生的抗体或其抗原结合片段。在特定实施方案中，该组合物包含磷酸盐缓冲盐水。
“药物组合物”是指这样的制品，其形式使得活性成分的生物活性是有效的，并且不包含对施用该制剂的受试者具有不可接受的毒性的附加组分。药物组合物将包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。本文中的术语赋形剂是指任何添加剂，如填充剂、增溶剂、载体、媒介物、添加剂等。
药物组合物可包含一种或多种药学上可接受的赋形剂，包括例如水、离子交换剂、蛋白质、缓冲物质和盐。也可以存在防腐剂和其他添加剂。该赋形剂可以是溶剂或分散介质。用于本文公开的治疗方法的合适的制剂描述于Remington's PharmaceuticalSciences第16版,Osol,A.Ed.(1980)。
“药学上可接受的”赋形剂是可以合理地施用于受试哺乳动物，以提供所用活性成分的有效剂量的那些赋形剂。本发明的药物组合物通过将组合物与可选的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(Remington'sPharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.Ed.(1980))混合而以冻干制剂或水溶液的形式制备以供储存。可接受的赋形剂在所用剂量和浓度下对接受者是无毒的，并且包括缓冲液，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如，Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂如TWEEN(TM)、PLURONICS(TM)或聚乙二醇(PEG)。冻干的HER2抗体制剂在WO 97/04801中描述。
用于体内给药的药物组合物必须是无菌的。这可以通过穿过无菌过滤膜过滤而容易地实现。
BTLA结合部分分子，例如抗体，或其抗原结合片段的给药途径可以是，例如，口服、肠胃外、吸入或局部。如本文所用的术语肠胃外包括，例如，静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、皮下、直肠或阴道给药。
用于肠胃外给药的药物组合物包括无菌水溶液或非水溶液，和悬浮液。非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇和可注射有机酯如油酸乙酯。水性载体包括水、水溶液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。肠胃外媒介物包括氯化钠溶液、林格氏(Ringers’)右旋糖、右旋糖和氯化钠、乳酸林格氏液或不挥发油。静脉内媒介物包括流体和营养补充剂、电解质补充剂(如基于林格氏右旋糖的那些)，等等。
注射用组合物可以用本领域已知的医疗装置来施用。例如，采用皮下注射针。还可以使用无针注射装置，例如在美国专利6620135和5312335中公开的那些。
用于口服给药的药物组合物可以是片剂、胶囊、粉末、液体或半固体形式。片剂可包含固体载体，如明胶或佐剂。液体药物组合物通常包含液体载体，如水、石油、动物或植物油、矿物油或合成油。需要时，可以包括生理盐水溶液、右旋糖或其他糖溶液，或二醇类，如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。
本发明的抗体或其抗原结合片段可以根据分子的物理化学性质和递送途径配制成液体、半固体或固体形式。制剂可包含赋形剂或赋形剂的组合，例如：糖、氨基酸和表面活性剂。液体制剂可具有宽范围的抗体浓度和pH。例如，固体制剂可以通过冻干、喷雾干燥或通过超临界流体技术的干燥来生产。
药物组合物可以作为单剂量、多剂量或在确定的时间段内输注施用。还可以调整剂量方案以提供最佳的所需反应(例如治疗或预防反应)。特别地，肠胃外制剂可以是单次团注剂量、输注或加载团注剂量，然后是一个或多个维持剂量。这些组合物可以以特定的固定或可变间隔施用，例如每天一次，或“按需”施用。
剂量
治疗上有效的BTLA结合分子或含有这类分子的药物制剂的量可以通过标准临床技术，例如通过剂量范围确定临床试验来确定。另外，可以任选地利用体外试验来帮助确定最佳剂量范围。将在制剂中使用的确切剂量还将取决于给药途径以及疾病或病症的严重性，并应根据医师的判断和每个患者的情况来确定。可以由得自体外或动物模型测试系统的剂量-响应曲线外推得出有效剂量。待施用的组合物的剂量可由技术人员结合标准剂量响应研究来确定，而无需过度实验。在作出这些决定时要考虑的相关情况包括待治疗的一种或多种病况，待施用的组合物的选择，个体患者的年龄、体重和反应，以及患者症状的严重程度。例如，实际患者体重可用于计算待施用的以毫升(mL)为单位的制剂剂量。可能没有向下调整到“理想”重量。在这样的情况下，可以通过以下公式计算适当的剂量：
剂量(ml.)＝[患者体重(kg)x剂量水平(mg/kg)/药物浓度(mg/mL)]
用于治疗如本文所述的BTLA相关疾病或病症的药物组合物的治疗有效剂量根据许多不同的因素而不同，包括给药方式、靶位点、患者的生理状态、患者的体重、患者的性别、患者的年龄、患者是人还是动物、所施用的其他药物，以及治疗是预防性的还是治疗性的。治疗有效剂量可能是从临床试验中确定的，可由主治医生使用治疗指南来确定。通常，患者是人，但也可以治疗非人类哺乳动物。可以使用本领域技术人员已知的常规方法滴定治疗剂量，以优化安全性和功效。
在各个实施方案中，所述BTLA结合分子以约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg或约20mg/kg的浓度施用。
本发明的药物组合物可以单独施用，或根据待治疗的病况同时或依次与其他治疗联合施用。这样的组合可能与其他免疫抑制剂组合，例如选自：皮质类固醇、环孢菌素、硫唑嘌呤、柳氮磺吡啶、甲氨蝶呤、霉酚酸酯、他克莫司和芬戈莫德，或其他生物制剂，如英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab)、乌司奴单抗(ustekinumab)、托珠单抗(tocilizumab)和利妥昔单抗(rituximab)。
根据本发明的第七方面，提供了一种制备药物组合物的方法，该方法包括将根据本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段，或根据本发明第五方面产生的抗体或其抗原结合片段配制为包含至少一种附加组分的组合物。在特定实施方案中，所述至少一种附加组分是药学上可接受的赋形剂。
试剂盒
此外，产品(例如BTLA结合分子或其药物组合物)可以以试剂盒的形式包装并销售。此类制品可具有标签或包装插页，指示关于产品的说明以及产品用于治疗患有或易患疾病或病症的受试者的适当用途。
因此，根据本发明的一个方面，提供了包含根据本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段或根据本发明第六方面的药物组合物的试剂盒。合适地，这样的试剂盒包括包含使用说明书的包装插页。
治疗/医学用途
本发明的抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物可用于治疗，通常用作药物。
在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物可用于治疗或预防有需要的受试者的任何疾病或病况。
BTLA参与下调免疫应答，并且有许多疾病或病况可以通过抑制宿主T细胞和/或B细胞来治疗(例如，参见Crawford&Wherry.Editorial:Therapeutic potential oftargeting BTLA.J Leukocyte Biol.86:5-8,2009)。可受益于抗BTLA激动剂治疗的疾病或病况在本文中称为“BTLA相关疾病”。BTLA相关疾病包括炎性或自身免疫性疾病，以及过度免疫细胞增殖的病症。
可用本发明的BTLA结合分子治疗的具体BTLA相关疾病包括：Addison病、变态反应、斑秃、肌萎缩侧索硬化、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、哮喘(包括变应性哮喘)、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性多内分泌综合征、Behcet病、大疱性类天疱疮、脑型疟疾、慢性炎性脱髓鞘性多神经病、乳糜泻、克罗恩病、库欣综合征、皮肌炎、1型糖尿病、嗜酸性肉芽肿病伴多血管炎、移植物抗宿主病、格雷夫斯病、格林-巴利综合征、桥本甲状腺炎、化脓性汗腺炎、炎性纤维化(例如硬皮病、肺纤维化和肝硬化)、幼年型关节炎、川崎病、白血病、淋巴瘤、淋巴增生性病症、多发性硬化、重症肌无力、骨髓瘤、视神经脊髓炎、天疱疮、多肌炎、原发性胆汁性胆管炎、原发性硬化性胆管炎、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、结节病、舍格伦综合征、系统性红斑狼疮、Takayasu动脉炎、颞动脉炎、移植排斥、横贯性脊髓炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎、白癜风和Vogt-Koyanagi-Harada病。
根据本发明的第八方面，提供了用于治疗的根据本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段或根据本发明第六方面的药物组合物。
在特定实施方案中，所述治疗是BTLA相关疾病的治疗或预防。
在特定实施方案中，BTLA相关疾病是由受试者中BTLA的表达和/或活性降低引起的疾病。特别地，以T或B细胞的存在或活性为特征的任何疾病或病症可以用本发明的BTLA激动剂抗体或抗原结合片段来治疗。
在一个实施方案中，BTLA相关疾病是炎性疾病(例如类风湿性关节炎)、自身免疫性疾病或病症(如移植物抗宿主)或增殖性疾病或病症(如癌症)。
在特定实施方案中，所述治疗是炎性或自身免疫性疾病以及过度免疫细胞增殖的病症的治疗或预防。
根据本发明第八方面的变化，提供了一种治疗有需要的患者的方法，其包括向该患者施用根据本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段或者根据本发明第六方面的药物组合物。在特定实施方案中，需要治疗或待治疗的患者患有(或正在罹患)BTLA相关疾病。在特定实施方案中，需要治疗或待治疗的患者患有(或正在罹患)炎性疾病、自身免疫性疾病或过度免疫细胞增殖的病症。
在特定的实施方案中，将根据本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段或根据本发明第六方面的药物组合物以药学上可接受的量施用于有需要的患者。
在该方面的变化中，提供了根据本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段或根据本发明第六方面的药物组合物，其在治疗有需要的患者的方法中使用。在特定的实施方案中，该方法用于治疗或预防BTLA相关疾病。在特定的实施方案中，该方法用于治疗或预防炎性或自身免疫性疾病，以及过度免疫细胞增殖的病症。
在该方面的进一步变化中，提供了根据本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段或根据本发明第六方面的药物组合物在制备用于治疗有需要的患者的药物中的用途。
在一个实施方案中，所述治疗用于治疗BTLA相关疾病。适当地，BTLA相关疾病是炎性疾病(如哮喘)、自身免疫性疾病或病症(如类风湿性关节炎)或免疫增生性疾病或病症(如淋巴瘤)。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物用于抑制T细胞和/或B细胞。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物用于治疗或预防有需要的受试者的疾病或病况，所述疾病或病况选自：Addison病、变态反应、斑秃、肌萎缩侧索硬化、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、哮喘(包括变应性哮喘)、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性多内分泌综合征、Behcet病、大疱性类天疱疮、脑型疟疾、慢性炎性脱髓鞘性多神经病、乳糜泻、克罗恩病、库欣综合征、皮肌炎、1型糖尿病、嗜酸性肉芽肿病伴多血管炎、移植物抗宿主病(GVHD)、格雷夫斯病、格林-巴利综合征、桥本甲状腺炎、化脓性汗腺炎、炎性纤维化(例如硬皮病、肺纤维化和肝硬化)、幼年型关节炎、川崎病、白血病、淋巴瘤、淋巴增生性病症、多发性硬化(MS)、重症肌无力、骨髓瘤、视神经脊髓炎、天疱疮、多肌炎、原发性胆汁性胆管炎、原发性硬化性胆管炎、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、结节病、舍格伦综合征、系统性红斑狼疮、Takayasu动脉炎、颞动脉炎、移植排斥、横贯性脊髓炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎、白癜风和Vogt-Koyanagi-Harada病。
在特定实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物用于治疗或预防有需要的受试者的疾病或病况，所述疾病或病况选自：GVHD、结肠炎、类风湿性关节炎、银屑病和MS。在一个实施方案中，所述免疫增生性疾病是癌症。合适地，该癌症是白血病或淋巴瘤。
在另一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物用于预防或治疗移植排斥。
在另一个实施方案中，本发明涉及移植物抗宿主病的预防或治疗。
在另一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物用于治疗类风湿性关节炎。
在其他实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物用于治疗糖尿病，如1型糖尿病。
在另一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物用于治疗银屑病。
在另一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物用于治疗多发性硬化。
在另一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段或包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物用于治疗结肠炎。
术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以改善患者症状或达到所需生物学结果(例如，对于癌症，肿瘤细胞死亡增加、肿瘤大小减小、无进展生存期或总生存期延长等)的药物的剂量或量。如本文别处所公开的，有效量通常将通过广泛的人类临床研究来评估。
在本申请的整篇说明书和权利要求书中，词语“包含”和“含有”及其变化形式是指“包括但不限于”，并且它们并非旨在(也不)排除其他部分、添加剂、组分、整数或步骤。在本申请的整篇说明书和权利要求书中，除非上下文另有要求，否则单数包括复数。特别是，在使用不定冠词的情况下，除非上下文另有要求，否则该描述应被理解为考虑复数和单数。
结合本发明的特定方面、实施方案或实例描述的特征、整数、特性、化合物、化学部分或基团应被理解为适用于本文所述的其他任何方面、实施方案或实例，除非与其不相容。本说明书(包括任何所附权利要求、摘要和附图)中公开的所有特征，和/或所公开的任何方法或过程的所有步骤，都可以以任意组合的方式组合，但这类特征和/或步骤中的至少一些相互排斥的组合除外。本发明不限于任何前述实施方案的细节。本发明扩展到本说明书(包括任何随附的权利要求书、摘要和附图)中公开的任何新颖的一个特征或任何新颖的特征组合，或如此公开的任何方法或过程的任何新颖的一个步骤或任何新颖的步骤组合。
读者的注意力集中在与本申请相关说明书同时提交或在此之前提交的所有论文和文件，对本说明书而言这些论文和文件是公开的以供公众查阅，并且所有这些论文和文件的内容均通过引用并入本文。
现在将参考以下非限制性实施例和附图进一步描述本发明。
附图说明
图1
抗体与可溶性和细胞表达形式的人和食蟹猴BTLA的结合。(a)以高于固定化抗BTLA抗体的浓度注射的可溶性单体人BTLA胞外域的表面等离子体共振(SPR)结合曲线；图形显示了减去参考和空白后的SPR信号。(b)与人或食蟹猴BTLA的结合的缔合和解离速率，如使用BiaEvaluation软件通过曲线拟合计算的。(c)与同种型对照抗体相比，抗体2.8.6与表达人BTLA或食蟹猴BTLA的Jurkat细胞系的结合。(d)抗体与转染的细胞系结合的EC50，如使用GraphPad Prism软件通过非线性曲线拟合计算的。
图2
(a)通过SPR评估抗BTLA抗体对配体结合的阻断。将人BTLA胞外域固定在传感器芯片上。注射人HVEM以确认结合，然后使其完全解离。然后注射饱和浓度的抗BTLA抗体，然后立即第二次注射HVEM。(b)注射抗体后HVEM的平衡结合被表示为相对于抗体注射前HVEM结合的百分比。用克隆11.5.1对BTLA进行饱和阻断了配体的后续结合，而用克隆2.8.6饱和则没有阻断。
图3
抗BTLA抗体的表位作图。(a)用也表达GFP的双顺反子载体中的BTLA构建体转染的HEK293T细胞，用Pacific Blue缀合的抗BTLA抗体进行染色。克隆11.5.1与用野生型受体转染的细胞结合(左)，但不与用具有Y39R突变的BTLA转染的细胞结合(右)。(b)对于克隆2.8.6和11.5.1，与每个BTLA突变构建体的结合被表示为相对于与野生型受体结合的百分比。(c)选择性消除克隆11.5.1结合的突变Y39R和K41E被定位到人BTLA的晶体结构上(黑色残基)。对配体HVEM结合至关重要的残基以灰色突出显示。
图4
(a)与克隆2.8.6的Fab'片段复合的人BTLA胞外域的晶体结构。包埋在界面处的BTLA上的残基以黑色突出显示。(b)相对于HVEM结合位点(灰色残基)显示了抗体2.8.6的表位(黑色残基)。
图5
(a)在人源化BTLA小鼠中产生嵌合BTLA基因的策略。将从外显子2起点到外显子3终点的一段人基因组DNA插入到小鼠基因座中，替换从外显子2起点到外显子4终点的小鼠序列。小鼠外显子2起点和小鼠外显子4终点处的外显子-内含子连接处的序列保持完整，以确保正确剪接。
图6
(a)用于在体内评估抗BTLA抗体的T细胞转移试验的方案。将人源化和野生型OVA特异性CD4 T细胞的混合物注射到接受小鼠中。第二天用明矾中的卵白蛋白免疫小鼠，以激活转移的细胞，并在24小时后给予抗人BTLA抗体或同种型对照。初始细胞转移后8天，通过流式细胞术评估脾脏中转移群体中人源化细胞与野生型细胞之比。(b)克隆11.5.1和2.8.6(较小程度)均降低了人源化细胞相对于到野生型的扩充。图形显示了来自两个(对于11.5.1)或三个(对于2.8.6)重复实验的汇总数据。
图7
在体外混合淋巴细胞反应中，抗BTLA克隆2.8.6对CD4 T细胞增殖的影响。来自人源化C57BL/6小鼠的T细胞用CellTraceViolet染色，并在抗BTLA抗体或同种型对照的存在下添加到丝裂霉素C处理的Balb/c刺激细胞中。96小时后，评估人源化CD4细胞的增殖，并将其相对于不存在抗体时的增殖进行归一化。克隆2.8.6以0.029nM的IC50抑制人源化细胞的增殖，并具有42％增殖抑制的最大作用。
图8
(a)克隆2.8.6在T细胞结肠炎模型中的作用。向RAG敲除接受小鼠注射来自人源化BTLA小鼠的CD45RBhiCD25-CD4+T细胞，并在第7、21和35天用200μg 2.8.6或同种型对照抗体处理。同种型对照处理的小鼠从3周起逐渐体重减轻，而2.8.6处理的小鼠未受影响。(b)在细胞转移后8周，处理结肠以提取固有层淋巴细胞，并计算每根结肠提取的炎性细胞的总数。同型对照处理的小鼠比2.8.6治疗的小鼠具有明显更多的浸润免疫细胞。(c)计算结肠重量与长度之比作为炎症和增厚的标志。2.8.6治疗阻止了在同种型对照处理的小鼠中观察到的重量与长度之比的增加。
图9
(a)BTLA抗体在GVHD的亲本-F1模型中的作用。将来自人源化BTLA小鼠的C57BL/6脾细胞和骨髓细胞注射到CB6F1接受小鼠中，然后用抗BTLA抗体或同种型对照处理。未经治疗的小鼠出现临床GVHD，伴有渐进性体重减轻、皮炎和腹泻，并在达到预先指定的人道终点时退出。2.8.6和11.5.1抗体治疗的小鼠相对未受影响，存活率与用同基因细胞重建的对照小鼠相当。(b)在细胞转移后5周，小鼠退出，并计算结肠重量与长度之比作为肠道炎症的标志。2.8.6和11.5.1治疗阻止了在未治疗的小鼠中观察到的结肠增厚。
图10
(a)D265A突变的克隆11.5.1在体内T细胞转移试验中的作用。这种不结合Fc受体的突变抗体不再抑制人源化BTLA细胞的增殖，而是由于受体阻断导致增殖增强。(b)D265A突变的11.5.1抗体在混合淋巴细胞反应中不再抑制T细胞增殖。
图11
抗BTLA抗体不固定补体。在20μg/ml BTLA抗体、同种型对照或阳性对照(消耗性CD20抗体)的存在下，将来自人源化BTLA小鼠的脾细胞与10％兔补体在37℃下孵育1小时。抗CD20抗体消耗了大部分B细胞，证实了兔补体的活性，但BTLA抗体不消耗B或T细胞，即使这两个群体均为BTLA染色阳性。
图12
抗BTLA抗体不引起抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。来自人源化BTLA小鼠的脾细胞在20μg/ml BTLA抗体、同种型对照或阳性对照(消耗性CD20抗体)的存在下，在37℃下孵育24小时。抗CD20抗体通过诱导混合物中效应细胞引起的ADCC消耗了大部分B细胞，但BTLA抗体不消耗B或T细胞，即使这两个群体均为BTLA染色阳性。
图13
抗BTLA抗体不在体内消耗B或T细胞。向人源化BTLA小鼠注射200μg的2.8.6抗体。在24小时时，收集脾脏和骨髓，并通过流式细胞术评估细胞群体。2.8.6不消耗脾脏中的B或T细胞或影响骨髓中不同B细胞前体群体的频率。
图14
与来自注射同种型对照抗体的小鼠的细胞上的BTLA表达水平相比，与抗体2.8.6或11.5.1在体内孵育6天后，来自人源化小鼠的B细胞或CD4+T细胞上的BTLA表达水平。
实施例
在以下实施例中，显示抗体11.5.1和2.8.6以高亲和力结合人BTLA。使用表达人受体的转基因小鼠，表明在与BTLA结合后，这些抗体在体外和体内抑制T细胞应答，并且能够改善炎性肠病和移植物抗宿主病小鼠模型中的疾病。虽然这些激动剂效应依赖于Fc受体结合，但这些抗体不会通过细胞毒性导致表达BTLA的细胞的消耗，也不会诱导受体下调。
实施例1.抗BTLA抗体的生成和测序
识别人免疫细胞受体BTLA的抗体由BioGenes GmbH通过用人BTLA的胞外区(BTLAK31-R151)免疫小鼠而生成。来自经免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0-Ag14骨髓瘤细胞融合，并通过上清液的ELISA结合稀释克隆，针对与人BTLA的反应性选择所得到的杂交瘤。使用Rapid Mouse Isotyping Kit(RayBiotech)从杂交瘤上清液中对抗体进行同种型分析。发现克隆2.8.6和11.5.1产生的抗体都是IgG1k。
为了对免疫球蛋白可变域进行测序，使用TRIzol试剂(ThermoFisher)，按照制造商的说明，从杂交瘤中提取RNA。使用对重链第一恒定域或轻链恒定域具有特异性的引物和Super Script II逆转录酶(Invitrogen)，按照制造商的说明，对RNA进行逆转录，以产生cDNA。
然后如前所述(Tiller等人,J Immunol Methods.350:183-193,2009)，使用靶向免疫球蛋白基因座保守区的引物进行PCR，并对PCR产物进行测序。在一些情况下，来自融合骨髓瘤细胞系的大量非功能性kappa轻链cDNA使功能性轻链的鉴定变得复杂，为了解决这个问题，采用了先前描述的技术，添加过量的对非功能性链CDR3具有特异性的引物，以强制截断异常链产物(Yuan等人,J Immunol Methods.294:39553-61,2005)。
使用NCBI IgBlast工具评估可变域序列，以确定CDR的位置。
实施例2.与可溶性人和食蟹猴BTLA的结合
本发明的BTLA激动剂抗体(2.8.6和11.5.1)对人或食蟹猴BTLA的结合亲和力和动力学使用Biacore T200(GE Healthcare)通过表面等离子体共振来确定。使用小鼠抗体捕获试剂盒(GE Healthcare)用多克隆抗小鼠IgG包被Series S CM5 Sensor Chip(GEHealthcare)。然后将抗BTLA抗体捕获到生物传感器表面上，并在参考通道中捕获阴性对照抗体(克隆Mopc21；Biolegend)。然后在单循环动力学分析中，在37℃下，将各种浓度的单体可溶性人BTLA胞外域(BTLAK31-R151)(来自SEQ ID NO:23)或可溶性食蟹猴BTLA胞外域(BTLAK31-R151)(来自SEQ ID NO:24)注射到缓冲液10mM Hepes，150mM NaCl，0.005％v/v表面活性剂P20，pH 7.4(HBS-P)中的固定化抗体上(图1a)。在减去参考和空白后，使用BiaEvaluation软件(GE Healthcare)拟合缔合和解离速率，并计算解离常数(图1b)。克隆2.8.6以0.65nM的KD结合人BTLA，并以7.89nM的KD结合食蟹猴BTLA。克隆11.5.1以0.75nM的KD结合人BTLA，并以0.99nM的KD结合食蟹猴BTLA。在仅针对人BTLA的单独实验中，克隆2.8.6以0.37nM的KD结合人BTLA，而克隆11.5.1以0.53nM的KD结合人BTLA。
实施例3.与细胞上的BTLA的结合
通过流式细胞术评估本发明的BTLA激动剂抗体(2.8.6和11.5.1)结合在细胞表面上表达的人或食蟹猴BTLA的能力。使用慢病毒转染系统在Jurkat T细胞系中表达全长人或食蟹猴BTLA。将每孔1x105个细胞接种在96孔U型底板中。从90μg/ml的浓度开始，通过在FACS缓冲液(PBS，2％FCS，0.05％叠氮化钠)中的1/3系列稀释，以12个浓度评估BTLA抗体相对于mIgG1同种型对照(克隆MOPC-21，Biolegend#400165)的结合。通过添加Fc阻断剂(Biolegend#101319)阻止非特异性抗体结合。抗体与细胞在冰上孵育30分钟，然后用FACS缓冲液洗涤细胞两次，之后用AF647缀合的抗mIgG1第二抗体(Biolegend#406618)染色。第二抗体在冰上孵育30分钟，然后洗涤细胞并重悬在FACS缓冲液中用于在流式细胞仪上进行分析。针对每个浓度绘制第二抗体的几何平均荧光强度，并使用GraphPad Prism软件通过非线性曲线拟合计算受体结合的EC50。克隆11.5.1以0.016nM的EC50结合表达人BTLA的细胞，并以0.0057nM的EC50结合表达食蟹猴BTLA的细胞。克隆2.8.6以0.085nM的EC50结合表达人BTLA的细胞，并以0.16nM的EC50结合表达食蟹猴BTLA的细胞(图1c-d)。
实施例4.与天然配体HVEM竞争结合BTLA
使用Biacor eT200(GE Healthcare)，通过表面等离子体共振来评估本发明的BTLA激动剂抗体(2.8.6和11.5.1)阻断天然配体与BTLA结合的能力。使用胺偶合，将人BTLA胞外域(BTLA31K-151R)共价偶联至CM5传感器芯片上。然后将与小鼠IgG1 Fc融合的人HVEM胞外域在37℃下注射到HBS-P缓冲液中的固定化hBTLA上，并使其完全解离。然后注射饱和量的抗BTLA抗体(2.8.6或11.5.1)，然后立即第二次注射与初始注射浓度相同的人HVEM-mFc(图2a)。BTLA用抗体饱和后的平衡HVEM结合(以共振单位表示)被表示为相对于抗体注射前的结合的百分比(图2b)。如果用抗体饱和后的HVEM结合大于抗体注射前的结合的90％，则认为该抗体是非阻断性的。
实施例5.抗体11.5.1在人BTLA上的结合表位
通过流式细胞术评估与在细胞表面上表达的受体的一组单残基突变体的结合，来确定抗体11.5.1在人BTLA上的功能表位。将编码BTLA的人胞外区与鼠CD28的跨膜区和胞内区的构建体克隆到双顺反子哺乳动物表达载体pGFP2-n2(BioSignal Packard Ltd)中，该载体还编码GFP。使用“剧烈(drastic)”诱变方法(Davis等人Proc Natl Acad Sci USA.95,5490-4(1998))制备了有一个氨基酸不同的突变构建体。使用Genejuice转染试剂(Novagen；6μl/孔)将质粒(2μg/孔)转染到6孔板中的HEK-293T细胞中。每个实验都包括模拟和非转染对照。在48小时收获细胞，并在PBS、0.05％叠氮化物、2％FCS(FACS缓冲液)中，在活/死标记物旁边，用10μg/ml荧光染料缀合的抗BTLA抗体在4℃下染色1小时。将细胞洗涤、沉淀并重悬于200μl FACS缓冲液中，之后在BD FACSCanto流式细胞仪上进行分析。对GFP阳性(转染的)活细胞进行门控，并分析抗BTLA抗体的结合(克隆11.5.1的结合分析的示例在图3a中示出)。对于每个突变体，抗BTLA抗体与经转染细胞的结合的几何平均值被表示为相对于与野生型受体的结合的百分比(图3b)。对一组抗BTLA抗体进行了评估，并将消除所有抗体的结合的任何突变排除在分析之外，假设此类突变会导致蛋白质折叠或表达的剧烈变化，而不是表明抗体表位。突变Y39R和K41E完全消除了抗体11.5.1的结合，而不影响2.8.6的结合。这些突变在图3c中被定位到人BTLA晶体结构(Compaan等人,J BiolChem.280:39553-61,2005)上(黑色残基)，指示11.5.1的结合表位。HVEM结合所需的残基(Gln37、Arg42、Pro59、His127；来自专利公开号WO2017004213)也以灰色定位到该结构上，表明11.5.1与非常靠近HVEM结合位点的表位结合。
实施例6.与人BTLA复合的2.8.6的Fab'片段的晶体结构
通过解析与人BTLA胞外域复合的抗体Fab的晶体结构，确定抗体2.8.6在人BTLA上的结构表位。将抗体2.8.6的重链和轻链可变域克隆到pOPINVH和pOPINVL表达载体(Addgene)中，这些载体分别编码小鼠IgG1重链的第一个恒定域(带有6x组氨酸标签)和小鼠Ig kappa链的恒定域。将这些载体瞬时共转染到HEK293T细胞中以产生抗BTLA2.8.6的Fab'片段,后者通过Ni-NTA纯化进行纯化。将人BTLA Ig-V组域(BTLAS33-D135)克隆到pGMT7载体中，并在BL21(DE3)pLysS大肠杆菌细胞(Novagen)中表达以产生包涵体。通过超声处理从细胞沉淀物中分离包涵体，并用含有0.5％TritonX-100的洗涤液反复洗涤。将纯化的BTLA包涵体溶解在含有6M盐酸胍的变性剂溶液中。溶解的蛋白质溶液在重折叠缓冲液[0.1MTris-HCl(pH8.0)，0.6M L-精氨酸，2mM乙二胺四乙酸，3.73mM胱胺，和6.73mM半胱胺]中缓慢稀释至最终蛋白质浓度为1–2μM，然后在4℃下搅拌48小时。然后用VIVA FLOW50系统(Sartorius)浓缩BTLA的重折叠混合物。BTLA通过在Superdex75柱(GE Healthcare)上的凝胶过滤进行纯化。
将纯化的BTLA和Fab'混合并通过大小排阻色谱法纯化为复合物。通过悬滴蒸气扩散法，在293°K下，在0.2M乙酸钙、0.1M咪唑pH8.0、10％(w/v)PEG 8000中获得适合数据收集的晶体。最终数据集在Photon Factory收集，并使用BTLA(PDB ID；2AW2链A)和抗PD1-Fab(PDB ID：5GGS链C、D)的结构作为搜索探针，通过分子置换确定结构。
BTLA上与抗体2.8.6的界面处的残基是A50、G51、D52、P53、E83、D84、R85、Q86、E103、P104、V105、L106、P107、N108、D135。
实施例7.人源化BTLA小鼠的开发
为了提供在小鼠模型中评估抗人BTLA抗体的平台，开发了C57Bl/6小鼠的敲入品系，其表达BTLA与人胞外区和鼠跨膜区和信号区的嵌合形式。将从外显子2起点到外显子3终点的一段人基因组DNA插入到小鼠基因座中，替换从外显子2起点到外显子4终点的小鼠序列。小鼠外显子2起点与小鼠外显子4终点处的外显子-内含子连接处的序列保持完整，以确保正确剪接(图5)。
实施例8.抗原特异性T细胞增殖的体内抑制
使用灵敏的T细胞转移试验来评估本发明的BTLA激动剂抗体(2.8.6和11.5.1)在体内抑制抗原特异性T细胞增殖的能力(图6a)。在该试验中，将5x105个T细胞转移到非转基因C57BL/6接受者中，所述T细胞包含纯化的卵白蛋白(OVA)特异性OTII(TCR转基因的)CD4+T细胞的混合物，这些细胞来自表达纯合人BTLA(hBTLA)的小鼠和来自表达野生型鼠BTLA受体的OT-II小鼠(The Jackson Laboratory)。使用CD45.2(相对于CD45.1)同种异型标志物将转移的细胞与宿主细胞区分开。野生型供体细胞还在人泛素C启动子的控制下表达绿色荧光蛋白，以便通过流式细胞术将它们与人源化供体细胞区分开来。在T细胞转移后的第二天，在与100μl注射明矾(ThermoFisher)混合的100μlPBS中，用100μg卵白蛋白(Sigma-Aldrich)对接受小鼠进行免疫，以诱导T细胞的扩充。第二天，向小鼠腹膜内给予200μg抗体。T细胞初始转移后8天，通过流式细胞术测定脾脏中表达人源化BTLA的T细胞和野生型OVA特异性T细胞的比例。通过这种方式，可以追踪结合抗人BTLA抗体的人源化细胞相对于不结合抗人BTLA抗体的野生型对照的扩充或减少。相对于野生型对照，抗体2.8.6和11.5.1均导致人源化BTLA细胞的扩充减少，表明它们通过抑制性BTLA受体诱导信号传导，从而导致T细胞增殖减少(图6b)。
实施例9.在混合淋巴细胞反应中T细胞增殖的抑制
使用混合淋巴细胞反应(MLR)评估本发明的BTLA激动剂抗体(2.8.6和11.5.1)在体外抑制来自人源化小鼠的原代T细胞的增殖的能力。来自Balb/c小鼠的脾细胞在37℃下用丝裂霉素C处理30分钟，然后洗涤并用作刺激细胞。通过使用磁激活细胞分选(MojosortMouse CD3T细胞分离试剂盒，Biolegend#480023)的阴性选择，从人源化BTLA小鼠的脾脏中纯化T细胞，并用CellTrace Violet Cell Proliferation Kit(ThermoFisher)染色，以用作响应细胞。每孔4x105个刺激细胞和2x105个响应细胞与各种浓度的抗BTLA或同种型对照抗体(克隆MOPC-21，Biolegend#400165)在96孔U型底板中混合。从1μg/ml的浓度开始评估抗体的系列1/3稀释，总共10个浓度。还以1μg/ml将多克隆抗mHVEM抗体(R&D systems#AF2516)添加到所有孔中，以阻断通过BTLA途径的任何基线信号，并增强激动剂抗体的作用。96小时后，通过流式细胞术评估响应细胞中CellTrace Violet的稀释度，作为增殖的标志。将存在抗BTLA抗体或同种型对照时的增殖与不存在抗体时的增殖进行比较。对CD4+和CD8+群体进行门控，并分别分析。抗体2.8.6和11.5.1都降低了表达人BTLA的T细胞的增殖，表明它们通过人BTLA受体诱导抑制性信号传导。克隆2.8.6以0.029nM的IC50抑制CD4 T细胞，并具有42％增殖抑制的最大作用(图7)。克隆11.5.1以0.016nM的IC50抑制CD4 T细胞，具有33％增殖抑制的最大作用。
实施例10.在人BTLA或食蟹猴BTLA转染的Jurkat T细胞系中NFkB信号传导的抑制
使用BTLA转染的报告T细胞系评估本发明的BTLA激动剂抗体(2.8.6和11.5.1)抑制NFkB信号传导的能力。使用表达盒稳定转染的Jurkat T细胞系作为NFkB信号传导的报告细胞系，该表达盒包括最小CMV启动子(mCMV)-GFP盒(Source BioSciences#TR850A-1)上游的NF-κB响应转录元件。使用慢病毒转染系统在该报告细胞系中表达全长人或食蟹猴BTLA。将这些细胞与刺激细胞系混合，该刺激细胞系由在其表面上表达抗CD3 ScFv构建体的bw5147细胞组成，如Leitner等人J Immunol Methods.2010Oct 31；362(1-2):131-41所述。该刺激细胞系也用鼠FcγRIIB转染以提供Fc受体用于呈递激动剂BTLA抗体。在不同浓度的BTLA抗体或同种型对照(克隆MOPC-21，Biolegend#400165)的存在下，每孔5x104个报告细胞与5x104个刺激细胞在96孔U型底板中混合。在37℃下孵育24小时后，将细胞沉淀，并用活力染料(Zombie Aqua,Biolegend#423101)和小鼠CD45抗体(Pe-Cy7缀合的克隆104，Biolegend#109830)进行染色以用于流式细胞术，以分离刺激细胞(鼠)与响应(人)细胞。对每个抗体浓度评估GFP表达的几何平均值，并相对于不存在抗体时的GFP表达进地归一化。克隆2.8.6以0.06nM的IC50抑制人BTLA转染的细胞，并以0.22nM的IC50抑制食蟹猴BTLA转染的细胞。克隆11.5.1以0.033nM的IC50抑制人BTLA转染的细胞，并以0.14nM的IC50抑制食蟹猴BTLA转染的细胞。
实施例11.用抗体2.8.6治疗T细胞驱动的小鼠结肠炎模型
使用人源化小鼠评估BTLA激动剂抗体2.8.6改善T细胞驱动的结肠炎模型的能力。这种T细胞转移模型以前曾被描述为炎性肠病的小鼠模型(Ostanin等人,Am J PhysiolGastrointest Liver Physiol.296:G135-46,2009)。从人源化BTLA小鼠的脾脏和淋巴结中分选的CD45RBhiCD25-CD4+T细胞以每只小鼠5x105个细胞的剂量腹膜内注射到Rag1 KO接受者(Rag1tm1Mom；The Jackson Laboratory)中。转移的T细胞导致炎性结肠炎，大约3周后发生，并导致腹泻和体重减轻。未接受转移的T细胞的Rag1 KO笼子对应动物用作非患病对照。在T细胞转移后的第7、21和35天，将200μg的2.8.6或同种型对照抗体腹膜内注射给接受小鼠。所有小鼠都定期称重，并在第8周称重并测量结肠，并通过对提取的固有层白细胞的组织学以及细胞计数和流式细胞分析评估炎性浸润。抗体2.8.6防止体重减轻(图8a)并显著减少结肠的炎性浸润(图8b)。患病小鼠的结肠炎症导致结肠重量:长度比增加，这在2.8.6治疗的小鼠中未见到(图8c)。
实施例12.移植物抗宿主病(GVHD)小鼠模型的治疗
在GVHD的非致死性亲本-F1模型中评估抗BTLA激动剂抗体的作用。从人源化BTLA供体小鼠(C57BL/6背景；H2b)中收集骨髓细胞(BMC)和脾细胞。将2x107个BMC和107个脾细胞静脉内注射到已经接受了9Gy全身照射的致命辐射的CB6F1(H2b/d)接受者中。用同基因BMC和脾细胞重建的受辐射的CB6F1小鼠作为非患病对照。免疫细胞转移当天，向小鼠腹膜内注射200μg抗BTLA抗体或同种型对照。定期对小鼠称重，并通过计算相对体重减轻和临床观察来监测GVHD。在免疫细胞转移后5周或当它们达到人道终点(包括前14天相对于初始体重的体重减轻>20％，或其他任何时间体重减轻>15％)时，小鼠退出。在死亡时对结肠进行称重和测量，并计算结肠重量:长度比作为结肠炎症的标志，这是GVHD的突出的临床特征。抗体2.8.6和11.5.1均显著减少体重减轻，导致存活率增加(图9a)，并防止结肠炎症(图9b)。
实施例13.抗体11.5.1的激动剂活性依赖于Fc受体结合
抗体11.5.1被重组表达为含有D265A突变的mIgG1k，该突变先前已被描述为显著降低Fc受体结合(Clynes等人,Nat Med.6:443-446,2000)。在实施例8中描述的T细胞转移试验中评估了这种突变抗体。亲本11.5.1抗体抑制人源化T细胞的增殖，因为其净效应是BTLA受体的激动作用。然而，FcR-无效D265A突变导致人源化T细胞增殖增强，提示FcR-无效突变消除了抗体的激动作用，只留下受体阻断的作用(图10a)。
D265A突变的11.5.1抗体也在实施例9中描述的体外MLR试验中进行了评估。同样，亲本11.5.1抗体抑制了人源化T细胞的增殖，因为其净效应是BTLA受体的激动作用。FcR-无效D265A突变消除了抗体的激动作用，因此该抗体在该试验中没有显示效果(图10b)。由于HVEM被阻断(通过添加多克隆抗HVEM抗体)，因此FcR无效11.5.1抗体在该试验中没有增强人源化细胞的增殖，因此没有基线信号传导通过将要被BTLA阻断抗体阻断的途径。
实施例14.抗体2.8.6和11.5.1在体外不固定补体
来自人源化小鼠的脾细胞与10％幼兔补体(BioRad)和抗BTLA抗体(或同种型对照或阳性对照消耗性抗CD20抗体；来自Biolegend的克隆SA271G2)以20μg/ml的在37℃下孵育15分钟℃。抗CD20抗体消耗了大部分B220+B细胞，而抗BTLA抗体不消耗B220+或CD4+细胞(图11)，即使这两个群体均为BTLA染色阳性。
实施例15.抗体2.8.6和11.5.1在体外不诱导ADCC
来自人源化小鼠的全脾细胞(包括髓样效应细胞)与20μg/ml的抗BTLA抗体(或同种型对照或消耗性抗CD20抗体SA271G2)在37℃下孵育24小时。抗CD20抗体消耗了大部分B220+细胞，而抗BTLA抗体不消耗B220+或CD4+细胞(图12)，即使这两个群体均为BTLA染色阳性。
实施例16.抗体2.8.6和11.5.1在体内不消耗表达BTLA的细胞
向人源化BTLA小鼠腹膜内注射200μg抗BTLA抗体或同种型对照。在24小时时收获脾脏，并通过流式细胞术鉴定不同细胞群体的频率。抗BTLA抗体对脾脏中B细胞或T细胞的频率或绝对数或骨髓中B细胞前体的数止没有影响(图13)。
实施例17.抗体2.8.6和11.5.1在体内稳定免疫细胞上BTLA的表达
向人源化小鼠腹膜内注射10mg/kg抗体2.8.6或11.5.1。注射后六天，人道处死小鼠，收获脾脏并加工成单细胞悬液，用于流式细胞术评估。细胞用抗体混合物染色，以鉴别免疫细胞亚群，并用荧光缀合的抗BTLA抗体染色，该抗体的表位与注射的抗体是非竞争性的。将与抗BTLA抗体在体内孵育后BTLA染色的几何平均值相对于与同种型对照孵育后BTLA染色(使用相同的染色抗体)的几何平均值进行归一化。与注射同种型对照的小鼠相比，来自注射了克隆2.8.6或11.5.1的小鼠的B细胞和CD4 T细胞上的BTLA表达显著更高(图14)。这表明克隆2.8.6和11.5.1在体内稳定细胞表面上BTLA的表达，而不是诱导受体下调，如现有技术中使用其他BTLA抗体所观察到的(M.-L.del Rio等人/Immunobiology 215(2010)570–578)。对于免疫抑制的目的，稳定受体表达的激动剂抗体的优势在于，与下调抗体相比，能够延长高水平的通过该途径的抑制性信号传导。
实施例18.动物模型中的耐受性和副作用
在使用抗体2.8.6或11.5.1的任何动物研究中均未发现耐受性问题或副作用。
实施例19.抗体2.8.6的人源化
抗体2.8.6通过CDR移植到同源人种系框架区(参见SEQ ID NO:13-14)上进行人源化。IGHV2-5*08用于重链，IGKV3-11*01用于轻链。人源化后，通过SPR评估与BTLA的结合。人源化2.8.6以0.73nM的KD与单体BTLA结合。
实施例20.示例性BTLA抗体的表征
除了2.8.6和11.5.1之外，本实施例中还描述了本文提供的示例性mIgG1 BTLA抗体的表征。评价了表1中列出的各种克隆对BTLA的结合亲和力和淋巴细胞的抑制效率(表2)。对于每种抗体，根据实施例2中描述的方法测量结合人BTLA的缔合速率(“on rate”)和解离速率(“off rate”)，以及结合人或食蟹猴BTLA的KD，拟合单一浓度的BTLA胞外域的注射曲线。还在10μg/ml的单一浓度下评价了单个抗体对T细胞的抑制效率。根据实施例9中描述的方法对每种单独的抗体进行MLR试验(两次生物学重复，如表3所示)；根据下述方法进行抗CD3试验(两次生物学重复，表3)；并且根据实施例10中描述的方法确定每种抗体对人BTLA转染的Jurkat T细胞系中NFkB信号传导的抑制(表3)。对于每种示例性抗体，在各种体外刺激试验中，T细胞相对于同种型对照的平均抑制被计算为所有测定结果的抑制百分比的平均值(表2和表3)。
如下评估BTLA激动剂抗体抑制抗CD3和抗CD28诱导的T细胞活化的能力。将来自人源化BTLA小鼠的脾细胞加工成单细胞悬液，并用ACK缓冲液处理以裂解红细胞。细胞用CFSE(Biolegend目录号423801)染色以允许追踪细胞增殖。将每孔2x105个细胞接种于96孔U型底板中，其中含有浓度各自为50ng/ml的可溶性抗CD3抗体(克隆145.2C11；Biolegend#100339)和抗CD28(克隆37.51；Biolegend#102115)，以及浓度为10μg/ml的可溶性抗BTLA抗体或同种型对照。72小时后，通过流式细胞术分析细胞以评估增殖(“抗CD3/CD28(CD4 T细胞增殖)”)，并通过表面表达的活化标志物的染色评估T细胞活化(“抗CD3/CD28(CD69+CD4T细胞)”)。对于每种BTLA抗体，计算与同种型对照抗体相比的抑制百分比。
此外，对于每种BTLA抗体，根据实施例4中描述的方法评估它们的配体阻断能力，例如，与HVEM竞争结合BTLA的能力，对于超过90％的HVEM-BTLA结合的抑制，结果显示为“是”，而对于小于10％的HVEM-BTLA结合的抑制，显示为“否”。每种BTLA抗体的功能表位也根据实施例5中描述的方法来确定。表2中的“表位”列总结了每种单独的BTLA抗体所结合的表位组。抗体2.8.6、6.2、831、16H2、7A1、16F10、6G8、3E8、4E8、15C6、12F11、10B1、15B6、4D3、16E1、4D5和3A9均与第一表位(在表中称为“表位1”)结合，该表位包含至少一个选自以下列表的关键残基：D52、P53、E55、E57、E83、Q86、E103、L106和E92。与表位1结合的抗体不与配体HVEM竞争结合BTLA。抗体11.5.1、14D4、1H6、8C4、27G9、26F3均与不同的第二表位(“表位2”)结合，该表位包含至少一个选自以下列表的关键残基：Y39、K41、R42、Q43、E45和S47。与表位2结合的抗体与配体HVEM竞争结合BTLA。抗体26B1与第三表位(“表位3”)结合，该表位包含至少一个选自以下列表的关键残基：D35、T78、K81、S121和L123。与表位3结合的抗体与配体HVEM竞争结合BTLA。抗体24H7、4B1、8B4、4H4均与包含关键残基H68的不同的第四表位(“表位4”)结合。与表位4结合的抗体不与配体HVEM竞争结合BTLA。抗体21C7与不同的第五表位(“表位5”)结合，该表位包含至少一个选自以下列表的关键残基：N65和A64。与表位5结合的抗体不与配体HVEM竞争结合BTLA。
实施例21.BTLA抗体3E8和6.2的人源化和CDR工程化
3E8和6.2的可变域通过种系化(germlining)到同源人种系框架区(Seq IDNo.382–385)中进行人源化。对于3E8，选择的接受体框架是对于重链的VH1-1-08和JH6以及对于轻链的VK3-L6和JK2。对于6.2，选择的接受体框架是对于重链的VH3-3-21和JH6以及对于轻链的VK2-A19和JK4。
有时可以替换抗体CDR中的某些残基以去除不需要的特征而不显著影响靶标结合。人源化抗体6.2的CDRH2用D54E和N56Q置换进行修饰(Seq ID No.387)，以去除脱酰胺潜力(6.2的工程化人源化VH序列在Seq ID No.390中给出)。类似地，如通过Lonza的Epibase分析所确定的，人源化抗体3E8的CDRH2用N57Q置换进行修饰(Seq ID No.388)，以去除脱酰胺潜力，并用K63S置换进行修饰，以降低预测的免疫原性(3E8的工程人源化VH序列在SeqID No.389中给出)。
表2.示例性抗体的结合亲和力和抑制作用的表征
Figure BDA0003216039430000881
Figure BDA0003216039430000891
表3.示例性抗体的抑制作用测定结果
Figure BDA0003216039430000892
Figure BDA0003216039430000901
序列表
SEQ ID NO:1
GDSITSAY
SEQ ID NO:2
ISYSGST
SEQ ID NO:3
ARSHYYGYYFDY
SEQ ID NO:4
ETIDSYGDSL
SEQ ID NO:5
RAS
SEQ ID NO:6
QQTDEDPYT
SEQ ID NO:7
GFSLTTYG
SEQ ID NO:8
MWPGGRT
SEQ ID NO:9
VRGDYEYDYYAMDY
SEQ ID NO:10
SSVSY
SEQ ID NO:11
ATS
SEQ ID NO:12
HQWSSNPYT
SEQ ID NO:13–人源化抗体2.8.6VH区
QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTVSGFSLTTYGVHWIRQPPGKALEWLGVMWPGGRTSYNPSLKSRLTITKDNSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCVRGDYEYDYYAMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:14-人源化抗体2.8.6VL区
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVSYMHWYQQKPGQAPRPLIYATSNRATGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCHQWSSNPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:15–小鼠Ab 2.8.6VL区
QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYMHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPAR FSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCHQWSSNPYTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:16
caaattgttctctcccagtctccagcaatcctgtctgcatctccaggggagaaggtcacaatgacttgcagggccagttcaagtgtaagttacatgcactggtaccagcagaagccaggatcctcccccaaaccctggatttatgccacatccaacctggcttctggagtccctgctcgcttcagtggcagtgggtctgggacctcttactctctcacaatcagcagaatggaggctgaagatgctgccacttattactgccaccagtggagtagtaacccgtacacgttcggaggggggaccaagctggaaataaaac
SEQ ID NO:17＝小鼠Ab 2.8.6VH区
QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTTYGVHWVRQSPGKGLEWLGVMWPGGRTSYNPAPMSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAMYYCVRGDYEYDYYAMDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO:18
caggtgcagctgaaggagtctggacctggcctggtggcgccctcacagagcctgtccatcacttgcactgtctctgggttttcattaaccacctatggtgtacactgggttcgccagtctccaggaaagggtctggagtggctgggagtaatgtggcctggtggaagaacaagttataatccggctcccatgtccagactgagcatcagcaaagacaactccaagagccaagttttcttaaaaatgaacagtctgcaaactgatgacacggccatgtactactgtgtcagaggggactatgaatacgattactatgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcag
SEQ ID NO:19–小鼠Ab 11.5.1VL区
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASETIDSYGDSLMHWYQQKAGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQTDEDPYTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:20
gacattgtgctgacccaatctccagcttctttggctgtgtctctagggcagagggccaccatatcctgcagagccagtgaaactattgatagttatggcgatagtttaatgcactggtaccagcagaaagcaggacagccacccaaactcctcatctatcgtgcatccaacctagaatctgggatccctgccaggttcagtggcagtgggtctcggacagacttcaccctcaccattaatcctgtggaggctgatgatgttgcaacctattactgtcagcaaactgatgaggatccgtacacgttcggaggggggaccaagctggaaataaaa
SEQ ID NO:21–小鼠Ab 11.5.1VH区
EVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCSVTGDSITSAYWNWIRKFPGNKLEYMGYISYSGSTYFNPSLKSRISITRNTSKNQYYLQLNSVTTEDTATYYCARSHYYGYYFDYWGHGTTLTVSS
SEQ ID NO:22
gaggtgcagcttcaggagtcaggacctagcctcgtgaaaccttctcagactctgtccctcacctgttctgtcactggcgactccatcaccagtgcttactggaactggatccggaaattcccagggaataaacttgagtacatggggtacataagctacagtggtagcacttacttcaatccatctctcaaaagtcgaatctccatcactcgaaacacatccaagaaccagtactacctgcagttgaattctgtgactactgaggacacagccacatattactgtgcaagatctcattactacggctactactttgactactggggccatggcaccactctcacagtctcctca
SEQ ID NO:23–人(智人(Homo sapiens))BTLA多肽。位置1-30是信号序列，31-151是胞外区，152-178是跨膜区，而179至结束是胞内区
MKTLPAMLGTGKLFWVFFLIPYLDIWNIHGKESCDVQLYIKRQSEHSILAGDPFELECPVKYCANRPHVTWCKLNGTTCVKLEDRQTSWKEEKNISFFILHFEPVLPNDNGSYRCSANFQSNLIESHSTTLYVTDVKSASERPSKDEMASRPWLLYRLLPLGGLPLLITTCFCLFCCLRRHQGKQNELSDTAGREINLVDAHLKSEQTEASTRQNSQVLLSETGIYDNDPDLCFRMQEGS EVYSNPCLEENKPGIVYASLNHSVIGPNSRLARNVKEAPTEYASICVRS
SEQ ID NO:24–食蟹猴(Macaca fascicularis)BTLA多肽。
MKTLPAMLGSGRLFWVVFLIPYLDIWNIHGKESCDVQLYIKRQSYHSIFAGDPFKLECPVKYCAHRPQVTWCKLNGTTCVKLEGRHTSWKQEKNLSFFILHFEPVLPSDNGSYRCSANFLSAIIESHSTTLYVTDVKSASERPSKDEMASRPWLLYSLLPLGGLPLLITTCFCLFCFLRRHQGKQNELSDTTGREITLVDVPFKSEQTEASTRQNSQVLLSETGIYDNEPDFCFRMQEGSEVYSNPCLEENKPGIIYASLNHSIIGLNSRQARNVKEAPTEYASICVRS
表4.示例性CDR序列
Figure BDA0003216039430000931
Figure BDA0003216039430000941
Figure BDA0003216039430000951
表5.示例性一级VH和VL序列
Figure BDA0003216039430000952
Figure BDA0003216039430000961
Figure BDA0003216039430000971
Figure BDA0003216039430000981
序列表
<110> 牛津大学科技创新有限公司
米罗生物有限公司
<120> 抗BTLA抗体
<130> P266301WO
<150> GB1820554.2
<151> 2018-12-17
<160> 390
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 1
Gly Asp Ser Ile Thr Ser Ala Tyr
1 5
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 2
Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 3
<211> 12
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 3
Ala Arg Ser His Tyr Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 4
Glu Thr Ile Asp Ser Tyr Gly Asp Ser Leu
1 5 10
<210> 5
<211> 3
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 5
Arg Ala Ser
1
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 6
Gln Gln Thr Asp Glu Asp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 7
Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr Gly
1 5
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 8
Met Trp Pro Gly Gly Arg Thr
1 5
<210> 9
<211> 14
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 9
Val Arg Gly Asp Tyr Glu Tyr Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 10
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 10
Ser Ser Val Ser Tyr
1 5
<210> 11
<211> 3
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 11
Ala Thr Ser
1
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 12
His Gln Trp Ser Ser Asn Pro Tyr Thr
1 5
<210> 13
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化抗体2.8.6 VH区
<400> 13
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Met Trp Pro Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Val Leu
65 70 75 80
Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Val
85 90 95
Arg Gly Asp Tyr Glu Tyr Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化抗体2.8.6 VL区
<400> 14
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Pro Leu Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Ser Asn Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 15
<211> 106
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 15
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Ser Asn Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 16
<211> 319
<212> DNA
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 16
caaattgttc tctcccagtc tccagcaatc ctgtctgcat ctccagggga gaaggtcaca 60
atgacttgca gggccagttc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagccagga 120
tcctccccca aaccctggat ttatgccaca tccaacctgg cttctggagt ccctgctcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagaat ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattactg ccaccagtgg agtagtaacc cgtacacgtt cggagggggg 300
accaagctgg aaataaaac 319
<210> 17
<211> 120
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 17
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Met Trp Pro Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Asn Pro Ala Pro Met
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Val
85 90 95
Arg Gly Asp Tyr Glu Tyr Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 18
<211> 361
<212> DNA
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 18
caggtgcagc tgaaggagtc tggacctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60
acttgcactg tctctgggtt ttcattaacc acctatggtg tacactgggt tcgccagtct 120
ccaggaaagg gtctggagtg gctgggagta atgtggcctg gtggaagaac aagttataat 180
ccggctccca tgtccagact gagcatcagc aaagacaact ccaagagcca agttttctta 240
aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacacg gccatgtact actgtgtcag aggggactat 300
gaatacgatt actatgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360
g 361
<210> 19
<211> 111
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 19
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Thr Ile Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asp Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asp
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 20
<211> 333
<212> DNA
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 20
gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60
atatcctgca gagccagtga aactattgat agttatggcg atagtttaat gcactggtac 120
cagcagaaag caggacagcc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaatct 180
gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctcggacag acttcaccct caccattaat 240
cctgtggagg ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcagc aaactgatga ggatccgtac 300
acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaa 333
<210> 21
<211> 118
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 21
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Ala
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Phe Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asn Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ser His Tyr Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 22
<211> 354
<212> DNA
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 22
gaggtgcagc ttcaggagtc aggacctagc ctcgtgaaac cttctcagac tctgtccctc 60
acctgttctg tcactggcga ctccatcacc agtgcttact ggaactggat ccggaaattc 120
ccagggaata aacttgagta catggggtac ataagctaca gtggtagcac ttacttcaat 180
ccatctctca aaagtcgaat ctccatcact cgaaacacat ccaagaacca gtactacctg 240
cagttgaatt ctgtgactac tgaggacaca gccacatatt actgtgcaag atctcattac 300
tacggctact actttgacta ctggggccat ggcaccactc tcacagtctc ctca 354
<210> 23
<211> 289
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(30)
<223> 信号序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31)..(151)
<223> 胞外区
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (152)..(178)
<223> 跨膜区
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (179)..(289)
<223> 胞内区
<400> 23
Met Lys Thr Leu Pro Ala Met Leu Gly Thr Gly Lys Leu Phe Trp Val
1 5 10 15
Phe Phe Leu Ile Pro Tyr Leu Asp Ile Trp Asn Ile His Gly Lys Glu
20 25 30
Ser Cys Asp Val Gln Leu Tyr Ile Lys Arg Gln Ser Glu His Ser Ile
35 40 45
Leu Ala Gly Asp Pro Phe Glu Leu Glu Cys Pro Val Lys Tyr Cys Ala
50 55 60
Asn Arg Pro His Val Thr Trp Cys Lys Leu Asn Gly Thr Thr Cys Val
65 70 75 80
Lys Leu Glu Asp Arg Gln Thr Ser Trp Lys Glu Glu Lys Asn Ile Ser
85 90 95
Phe Phe Ile Leu His Phe Glu Pro Val Leu Pro Asn Asp Asn Gly Ser
100 105 110
Tyr Arg Cys Ser Ala Asn Phe Gln Ser Asn Leu Ile Glu Ser His Ser
115 120 125
Thr Thr Leu Tyr Val Thr Asp Val Lys Ser Ala Ser Glu Arg Pro Ser
130 135 140
Lys Asp Glu Met Ala Ser Arg Pro Trp Leu Leu Tyr Arg Leu Leu Pro
145 150 155 160
Leu Gly Gly Leu Pro Leu Leu Ile Thr Thr Cys Phe Cys Leu Phe Cys
165 170 175
Cys Leu Arg Arg His Gln Gly Lys Gln Asn Glu Leu Ser Asp Thr Ala
180 185 190
Gly Arg Glu Ile Asn Leu Val Asp Ala His Leu Lys Ser Glu Gln Thr
195 200 205
Glu Ala Ser Thr Arg Gln Asn Ser Gln Val Leu Leu Ser Glu Thr Gly
210 215 220
Ile Tyr Asp Asn Asp Pro Asp Leu Cys Phe Arg Met Gln Glu Gly Ser
225 230 235 240
Glu Val Tyr Ser Asn Pro Cys Leu Glu Glu Asn Lys Pro Gly Ile Val
245 250 255
Tyr Ala Ser Leu Asn His Ser Val Ile Gly Pro Asn Ser Arg Leu Ala
260 265 270
Arg Asn Val Lys Glu Ala Pro Thr Glu Tyr Ala Ser Ile Cys Val Arg
275 280 285
Ser
<210> 24
<211> 289
<212> PRT
<213> 食蟹猴（Macaca fascicularis）
<400> 24
Met Lys Thr Leu Pro Ala Met Leu Gly Ser Gly Arg Leu Phe Trp Val
1 5 10 15
Val Phe Leu Ile Pro Tyr Leu Asp Ile Trp Asn Ile His Gly Lys Glu
20 25 30
Ser Cys Asp Val Gln Leu Tyr Ile Lys Arg Gln Ser Tyr His Ser Ile
35 40 45
Phe Ala Gly Asp Pro Phe Lys Leu Glu Cys Pro Val Lys Tyr Cys Ala
50 55 60
His Arg Pro Gln Val Thr Trp Cys Lys Leu Asn Gly Thr Thr Cys Val
65 70 75 80
Lys Leu Glu Gly Arg His Thr Ser Trp Lys Gln Glu Lys Asn Leu Ser
85 90 95
Phe Phe Ile Leu His Phe Glu Pro Val Leu Pro Ser Asp Asn Gly Ser
100 105 110
Tyr Arg Cys Ser Ala Asn Phe Leu Ser Ala Ile Ile Glu Ser His Ser
115 120 125
Thr Thr Leu Tyr Val Thr Asp Val Lys Ser Ala Ser Glu Arg Pro Ser
130 135 140
Lys Asp Glu Met Ala Ser Arg Pro Trp Leu Leu Tyr Ser Leu Leu Pro
145 150 155 160
Leu Gly Gly Leu Pro Leu Leu Ile Thr Thr Cys Phe Cys Leu Phe Cys
165 170 175
Phe Leu Arg Arg His Gln Gly Lys Gln Asn Glu Leu Ser Asp Thr Thr
180 185 190
Gly Arg Glu Ile Thr Leu Val Asp Val Pro Phe Lys Ser Glu Gln Thr
195 200 205
Glu Ala Ser Thr Arg Gln Asn Ser Gln Val Leu Leu Ser Glu Thr Gly
210 215 220
Ile Tyr Asp Asn Glu Pro Asp Phe Cys Phe Arg Met Gln Glu Gly Ser
225 230 235 240
Glu Val Tyr Ser Asn Pro Cys Leu Glu Glu Asn Lys Pro Gly Ile Ile
245 250 255
Tyr Ala Ser Leu Asn His Ser Ile Ile Gly Leu Asn Ser Arg Gln Ala
260 265 270
Arg Asn Val Lys Glu Ala Pro Thr Glu Tyr Ala Ser Ile Cys Val Arg
275 280 285
Ser
<210> 25
<400> 25
000
<210> 26
<400> 26
000
<210> 27
<400> 27
000
<210> 28
<400> 28
000
<210> 29
<400> 29
000
<210> 30
<400> 30
000
<210> 31
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 31
Ser Tyr Gly Ile Ser
1 5
<210> 32
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 32
Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 33
Asn Tyr Gly Ser Ser Tyr Pro Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 34
<211> 12
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 34
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His
1 5 10
<210> 35
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 35
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 36
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 36
Gln Gln Trp Ser Gly Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 37
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 37
Asp Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 38
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 38
Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 39
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 39
Trp Arg Gln Leu Arg Ser Asp Tyr
1 5
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 40
Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 41
Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp
1 5
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 42
Gln Gln Leu Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 43
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 43
Ser Tyr Trp Met His
1 5
<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 44
Met Ile His Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 45
<211> 12
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 45
Glu Gly Tyr Tyr Gly Ser Glu Gly Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 46
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 46
Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Ile His
1 5 10
<210> 47
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 47
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 48
His Gln Arg Ser Thr Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 49
<400> 49
000
<210> 50
<400> 50
000
<210> 51
<400> 51
000
<210> 52
<400> 52
000
<210> 53
<400> 53
000
<210> 54
<400> 54
000
<210> 55
<400> 55
000
<210> 56
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 56
Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 57
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 57
Lys Arg Gly Gly Leu Gly Asp Tyr
1 5
<210> 58
<211> 15
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 58
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 59
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 59
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 60
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 60
Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Tyr Thr
1 5
<210> 61
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 61
Ser Ser Trp Met Asn
1 5
<210> 62
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 62
Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 63
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 63
Arg Gly Tyr Gly Tyr Leu Ala Tyr
1 5
<210> 64
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 64
Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 65
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 65
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr
1 5
<210> 66
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 66
Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 67
<400> 67
000
<210> 68
<400> 68
000
<210> 69
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 69
Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 70
<400> 70
000
<210> 71
<400> 71
000
<210> 72
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 72
Gln Gln Trp Ser Gly Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 73
<211> 6
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 73
Ser Gly Tyr Tyr Trp Asn
1 5
<210> 74
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 74
Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn
1 5 10 15
<210> 75
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 75
Ile Tyr Gly Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 76
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 76
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His
1 5 10
<210> 77
<400> 77
000
<210> 78
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 78
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 79
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 79
Asp Tyr Tyr Met Ile
1 5
<210> 80
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 80
Asn Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 81
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 81
Gly Gly Leu Arg Pro Leu Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 82
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 82
Lys Ala Ser Glu Asn Val Asp Thr Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 83
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 83
Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr
1 5
<210> 84
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 84
Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 85
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 85
Asn Thr Tyr Met His
1 5
<210> 86
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 86
Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 87
<211> 12
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 87
Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser Gln His Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 88
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 88
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 89
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 89
Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser
1 5
<210> 90
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 90
Trp Gln Asp Thr His Phe Pro Gln Thr
1 5
<210> 91
<400> 91
000
<210> 92
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 92
Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Ala Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 93
<211> 15
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 93
Glu Gly His Tyr Tyr Gly Ser Gly Tyr Arg Trp Tyr Leu Asp Val
1 5 10 15
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 94
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 95
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 95
Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 96
Gln His Phe Arg Gly Ala Pro Phe Thr
1 5
<210> 97
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 97
Asp Tyr Glu Ile His
1 5
<210> 98
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 98
Pro Ile Asp Pro Asp Thr Gly Asn Thr Ala Tyr Asn Gln Asn Leu Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 99
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 99
Gly Gly Tyr Asp Ser Asp Trp Gly Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 100
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 100
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Phe
1 5 10 15
<210> 101
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 101
Arg Met Ser Asp Leu Ala Ser
1 5
<210> 102
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 102
Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 103
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 103
Asp Tyr Tyr Leu Asn
1 5
<210> 104
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 104
Leu Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Gly Ser Ser Cys Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 105
<211> 6
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 105
Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 106
<400> 106
000
<210> 107
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 107
Trp Ala Ser Thr Arg His Thr
1 5
<210> 108
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 108
Gln Gln His Tyr Ile Ile Pro Tyr Met
1 5
<210> 109
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 109
Asn Thr Tyr Met Tyr
1 5
<210> 110
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 110
Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 111
<211> 12
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 111
Leu Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Asp Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 112
<400> 112
000
<210> 113
<400> 113
000
<210> 114
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 114
Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Gln Thr
1 5
<210> 115
<400> 115
000
<210> 116
<400> 116
000
<210> 117
<211> 12
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 117
Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser Gln Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 118
<400> 118
000
<210> 119
<400> 119
000
<210> 120
<400> 120
000
<210> 121
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 121
Asp Tyr Tyr Ile Asn
1 5
<210> 122
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 122
Arg Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 123
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 123
Gly Tyr Gly Asn Ser Asp Tyr
1 5
<210> 124
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 124
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Arg Ile His
1 5 10
<210> 125
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 125
Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
1 5
<210> 126
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 126
Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 127
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 127
Ser Tyr Ala Ile Arg
1 5
<210> 128
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 128
Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Asn Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 129
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 129
Ser Gly Gly Ala Ser Tyr Thr Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 130
<400> 130
000
<210> 131
<400> 131
000
<210> 132
<400> 132
000
<210> 133
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 133
Ser Tyr Gly Leu Ile
1 5
<210> 134
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 134
Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Trp Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 135
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 135
Arg Arg Gly Thr Gly Asp Gly Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 136
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 136
Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 137
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 137
Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser
1 5
<210> 138
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 138
Gln Gln Tyr Ile Glu Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 139
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 139
Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 140
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 140
Tyr Ile Tyr Pro Asn Asn Gly Gly Asn Gly Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 141
<211> 13
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 141
Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Leu Arg Leu Thr Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 142
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 142
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 143
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 143
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 144
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 144
Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 145
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 145
Thr Tyr Gly Val Ser
1 5
<210> 146
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 146
Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 147
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 147
Val Thr Thr Ile Leu His Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 148
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 148
Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Gly Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 149
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 149
Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser
1 5
<210> 150
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 150
Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 151
<400> 151
000
<210> 152
<400> 152
000
<210> 153
<400> 153
000
<210> 154
<400> 154
000
<210> 155
<400> 155
000
<210> 156
<400> 156
000
<210> 157
<400> 157
000
<210> 158
<400> 158
000
<210> 159
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 159
Arg Arg Gly Ala Gly Asp Gly Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 160
<400> 160
000
<210> 161
<400> 161
000
<210> 162
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 162
Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 163
<400> 163
000
<210> 164
<400> 164
000
<210> 165
<400> 165
000
<210> 166
<400> 166
000
<210> 167
<400> 167
000
<210> 168
<400> 168
000
<210> 169
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 169
Asp His Thr Ile His
1 5
<210> 170
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 170
Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 171
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 171
Ser Asn Trp Asn Phe Asp Tyr
1 5
<210> 172
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 172
Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 173
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 173
Trp Ala Ser Thr Arg Arg Thr
1 5
<210> 174
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 174
Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 175
<400> 175
000
<210> 176
<400> 176
000
<210> 177
<400> 177
000
<210> 178
<400> 178
000
<210> 179
<400> 179
000
<210> 180
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 180
Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr
1 5
<210> 181
<400> 181
000
<210> 182
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 182
Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 183
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 183
Arg Ile Ser Ser Gly Ser Gly Val Asp Tyr
1 5 10
<210> 184
<400> 184
000
<210> 185
<400> 185
000
<210> 186
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 186
Gln Gln Tyr Ser Glu Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 187
<211> 6
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 187
Ser Gly Tyr Asp Trp His
1 5
<210> 188
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 188
Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 189
<211> 12
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 189
Gly Thr Pro Val Val Ala Glu Asp Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 190
<211> 14
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 190
Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn
1 5 10
<210> 191
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 191
Ala Thr Asn Asn Arg Ala Pro
1 5
<210> 192
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 192
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Leu Val
1 5
<210> 193
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 193
Thr Tyr Gly Val His
1 5
<210> 194
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 194
Val Met Trp Pro Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Asn Pro Ala Pro Met Ser
1 5 10 15
<210> 195
<211> 12
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 195
Gly Asp Tyr Glu Tyr Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 196
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 196
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His
1 5 10
<210> 197
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 197
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 198
<400> 198
000
<210> 199
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 199
Ser Ala Tyr Trp Asn
1 5
<210> 200
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 200
Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Phe Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 201
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 201
Ser His Tyr Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 202
<211> 15
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 202
Arg Ala Ser Glu Thr Ile Asp Ser Tyr Gly Asp Ser Leu Met His
1 5 10 15
<210> 203
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 203
Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 204
<400> 204
000
<210> 205
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 205
Ser Tyr Gly Met Ser
1 5
<210> 206
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 206
Ser Ile Arg Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 207
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 207
Gly Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr
1 5 10
<210> 208
<400> 208
000
<210> 209
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 209
Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser
1 5
<210> 210
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 210
Gln Gln Tyr Tyr Asn Tyr Leu Thr
1 5
<210> 211
<211> 6
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 211
Ser Gly Tyr Ser Trp His
1 5
<210> 212
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 212
Tyr Ile His Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 213
<211> 12
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 213
Gly Pro His Arg Tyr Asp Gly Val Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 214
<211> 12
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 214
Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Ser Asn Tyr Leu His
1 5 10
<210> 215
<400> 215
000
<210> 216
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 216
Gln Gln Gly Thr Asn Ile Pro Leu Thr
1 5
<210> 217
<400> 217
000
<210> 218
<400> 218
000
<210> 219
<400> 219
000
<210> 220
<400> 220
000
<210> 221
<400> 221
000
<210> 222
<400> 222
000
<210> 223
<400> 223
000
<210> 224
<400> 224
000
<210> 225
<400> 225
000
<210> 226
<400> 226
000
<210> 227
<400> 227
000
<210> 228
<400> 228
000
<210> 229
<400> 229
000
<210> 230
<400> 230
000
<210> 231
<400> 231
000
<210> 232
<400> 232
000
<210> 233
<400> 233
000
<210> 234
<400> 234
000
<210> 235
<400> 235
000
<210> 236
<400> 236
000
<210> 237
<400> 237
000
<210> 238
<400> 238
000
<210> 239
<400> 239
000
<210> 240
<400> 240
000
<210> 241
<400> 241
000
<210> 242
<400> 242
000
<210> 243
<400> 243
000
<210> 244
<400> 244
000
<210> 245
<400> 245
000
<210> 246
<400> 246
000
<210> 247
<400> 247
000
<210> 248
<400> 248
000
<210> 249
<400> 249
000
<210> 250
<400> 250
000
<210> 251
<400> 251
000
<210> 252
<400> 252
000
<210> 253
<400> 253
000
<210> 254
<400> 254
000
<210> 255
<400> 255
000
<210> 256
<400> 256
000
<210> 257
<400> 257
000
<210> 258
<400> 258
000
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<400> 259
000
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000
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<400> 261
000
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<400> 262
000
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<400> 294
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<400> 295
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<400> 296
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<400> 297
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<400> 298
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<400> 299
000
<210> 300
<400> 300
000
<210> 301
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 301
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Tyr Gly Ser Ser Tyr Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 302
<211> 117
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 302
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Arg Gln Leu Arg Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 303
<211> 121
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 303
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Arg Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile His Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr His Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Ser Glu Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 304
<400> 304
000
<210> 305
<211> 117
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 305
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Arg Gly Gly Leu Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 306
<211> 117
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 306
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Tyr Gly Tyr Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 307
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 307
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 308
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 308
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
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Ala Ser Ile Tyr Gly Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 309
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 309
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ile Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gly Leu Pro Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Arg Pro Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 310
<211> 121
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 310
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Val Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asn Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Val Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Leu Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser Gln His Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 311
<211> 124
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 311
Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Lys Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Ala Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Gly Glu Gly His Tyr Tyr Gly Ser Gly Tyr Arg Trp Tyr Leu Asp
100 105 110
Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 312
<211> 120
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 312
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Glu Ile His Trp Val Lys Gln Thr Leu Val His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Pro Ile Asp Pro Asp Thr Gly Asn Thr Ala Tyr Asn Gln Asn Leu
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Ile Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Gly Tyr Asp Ser Asp Trp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 313
<211> 115
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 313
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Gly Ser Ser Cys Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 314
<211> 121
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 314
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Val Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asn Thr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Leu Leu Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 315
<211> 121
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 315
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Val Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asn Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Leu Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser Gln Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 316
<211> 116
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 316
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Glu Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Gly Asn Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 317
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 317
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Arg Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Gly Ala Ser Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 318
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 318
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Leu Ile Trp Leu Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Trp Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Phe
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Gly Thr Gly Asp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ile Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 319
<211> 122
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 319
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Asn Asn Gly Gly Asn Gly Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ile Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Leu Arg Leu Thr Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 320
<211> 120
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 320
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Val Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Pro Val Thr Thr Ile Leu His Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 321
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 321
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Tyr Gly Ser Ser Tyr Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 322
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 322
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Gly Ala Gly Asp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 323
<400> 323
000
<210> 324
<211> 116
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 324
Gln Asp Gln Leu Gln Gln Ser Asp Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His
20 25 30
Thr Ile His Trp Met Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ser Ser Asn Trp Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 325
<400> 325
000
<210> 326
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 326
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ile Ser Ser Gly Ser Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 327
<211> 121
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 327
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Met Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Asp Trp His Trp Ile Arg His Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr His Asp Thr Ser Lys Asn His Phe Phe
65 70 75 80
Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Pro Val Val Ala Glu Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 328
<400> 328
000
<210> 329
<400> 329
000
<210> 330
<211> 118
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 330
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ile Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Arg Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Thr
85 90 95
Arg Gly Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 331
<211> 121
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 331
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Pro His Arg Tyr Asp Gly Val Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 332
<400> 332
000
<210> 333
<400> 333
000
<210> 334
<400> 334
000
<210> 335
<400> 335
000
<210> 336
<400> 336
000
<210> 337
<400> 337
000
<210> 338
<400> 338
000
<210> 339
<400> 339
000
<210> 340
<400> 340
000
<210> 341
<400> 341
000
<210> 342
<400> 342
000
<210> 343
<400> 343
000
<210> 344
<400> 344
000
<210> 345
<400> 345
000
<210> 346
<400> 346
000
<210> 347
<400> 347
000
<210> 348
<400> 348
000
<210> 349
<400> 349
000
<210> 350
<400> 350
000
<210> 351
<211> 108
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 351
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ala Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Pro Leu
35 40 45
Ile His Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 352
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 352
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Gln Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Ser Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Lys Phe Ser Phe Lys Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 353
<211> 106
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 353
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Thr Tyr Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 354
<400> 354
000
<210> 355
<211> 111
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 355
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 356
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 356
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 357
<211> 108
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 357
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ala Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Pro Leu
35 40 45
Ile His Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 358
<211> 106
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 358
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 359
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 359
Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Met Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Ile
100 105
<210> 360
<211> 112
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 360
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Asp
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 361
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 361
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Arg Gly Ala Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 362
<211> 112
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 362
Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Thr Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu Phe Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln His
85 90 95
Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 363
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 363
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ile Leu Asn Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Ile Pro Tyr
85 90 95
Met Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 364
<211> 112
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 364
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 365
<400> 365
000
<210> 366
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 366
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Arg
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 367
<211> 108
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 367
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ala Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Pro Leu
35 40 45
Ile His Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 368
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 368
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ile Glu Leu Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 369
<211> 113
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 369
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 370
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 370
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Gly Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Arg Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 371
<400> 371
000
<210> 372
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 372
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 373
<400> 373
000
<210> 374
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 374
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Arg Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 375
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 375
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 376
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 376
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Glu Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 377
<211> 110
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 377
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Ser Thr Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Ala Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
His Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 378
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 工程化人源化6.2 VL
<400> 378
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys
65 70 75 80
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asn Tyr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 379
<400> 379
000
<210> 380
<211> 112
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 380
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Pro Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Ile Ser Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asn Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asn Tyr Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 381
<211> 108
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 381
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Thr Met Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Ile Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Phe Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Gly Thr Met Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Thr Asn Ile Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 382
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化3E8 VH
<400> 382
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Arg Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Gly Ala Ser Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 383
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化3E8 VL
<400> 383
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Pro Leu
35 40 45
Ile His Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 384
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化6.2 VH
<400> 384
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Arg Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
85 90 95
Arg Gly Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 385
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化6.2 VL
<400> 385
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys
65 70 75 80
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asn Tyr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 386
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 386
Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 387
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 387
Ser Ile Arg Ser Glu Gly Gln Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 388
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 388
Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Gln Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 389
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 工程化人源化3E8 VH
<400> 389
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Arg Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Gln Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Gly Ala Ser Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 390
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 工程化人源化6.2 VH 2nd
<400> 390
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Arg Ser Glu Gly Gln Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
85 90 95
Arg Gly Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115

Claims (95)

1.一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个VH CDR，该VH CDR具有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9中任一个所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰。
2.一种分离的结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个VH CDR，该VHCDR具有如SEQ ID NO:31、32、33、37、38、39、43、44、45、56、57、61、62、63、69、73、74、75、79、80、81、85、86、87、92、93、97、98、99、103、104、105、109、110、111、117、121、122、123、127、128、129、133、134、135、139、140、141、145、146、147、159、169、170、171、182、183、187、188、189、193、194、195、199、200、201、205、206、207、211、212、213、386、387和388中任一个所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰。
3.一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个VL CDR，该VL CDR具有如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
4.一种分离的特异性结合人BTLA的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个VL CDR，该VL CDR具有如SEQ ID NO:34、35、36、40、41、42、46、47、48、58、59、60、64、65、66、72、76、78、82、83、84、88、89、90、94、95、96、100、101、102、107、108、114、124、125、126、136、137、138、142、143、144、148、149、150、162、172、173、174、180、186、190、191、192、196、197、202、203、209、210、214或216所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰。
5.一种分离的特异性结合B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)的人抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中(i)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；或者(ii)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰。
6.一种分离的特异性结合B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)的人抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1、CDRH2、CDRH3具有如下所示的氨基酸序列：(1)SEQ ID NO:31、32或33，具有0至3个氨基酸修饰；(2)SEQ ID NO:37、38或39，具有0至3个氨基酸修饰；(3)SEQ ID NO:43、44或45，具有0至3个氨基酸修饰；(4)SEQ ID NO:43、56或57，具有0至3个氨基酸修饰；(5)SEQ ID NO:61、62或63，具有0至3个氨基酸修饰；(6)SEQ ID NO:31、32或69，具有0至3个氨基酸修饰；(7)SEQ ID NO:73、74或75，具有0至3个氨基酸修饰；(8)SEQ ID NO:79、80或81，具有0至3个氨基酸修饰；(9)SEQ ID NO:85、86或87，具有0至3个氨基酸修饰；(10)SEQID NO:61、92或93，具有0至3个氨基酸修饰；(11)SEQ ID NO:97、98或99，具有0至3个氨基酸修饰；(12)SEQ ID NO:103、104或105，具有0至3个氨基酸修饰；(13)SEQ ID NO:109、110或111，具有0至3个氨基酸修饰；(14)SEQ ID NO:85、110或117，具有0至3个氨基酸修饰；(15)SEQ ID NO:121、122或123，具有0至3个氨基酸修饰；(16)SEQ ID NO:127、128或129，具有0至3个氨基酸修饰；(17)SEQ ID NO:133、134或135，具有0至3个氨基酸修饰；(18)SEQ IDNO:139、140或141，具有0至3个氨基酸修饰；(19)SEQ ID NO:145、146或147，具有0至3个氨基酸修饰；(20)SEQ ID NO:31、32或33，具有0至3个氨基酸修饰；(21)SEQ ID NO:31、32或159，具有0至3个氨基酸修饰；(22)SEQ ID NO:169、170或171，具有0至3个氨基酸修饰；(23)SEQ ID NO:61、62或63，具有0至3个氨基酸修饰；(24)SEQ ID NO:31、182或183，具有0至3个氨基酸修饰；(25)SEQ ID NO:187、188或189，具有0至3个氨基酸修饰；(26)SEQ ID NO:193、194或195，具有0至3个氨基酸修饰；(27)SEQ ID NO:199、200或201，具有0至3个氨基酸修饰；(28)SEQ ID NO:205、206或207，具有0至3个氨基酸修饰；(29)SEQ ID NO:211、212或213，具有0至3个氨基酸修饰；(30)SEQ ID NO:127、386或129，具有0至3个氨基酸修饰；(33)SEQ ID NO:205、206或207，具有0至3个氨基酸修饰；(34)SEQ ID NO:127、388或129，具有0至3个氨基酸修饰；或(35)SEQ ID NO:205、387或207，具有0至3个氨基酸修饰。
7.一种分离的特异性结合BTLA的人抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中(i)CDRL1、CDRL2、CDRL3分别具有如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；或者(ii)CDRL1、CDRL2、CDRL3分别具有如SEQ ID NO:10、11、12所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰。
8.一种分离的特异性结合BTLA的人抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3具有如下所示的氨基酸序列：(1)分别是SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36，具有0至3个氨基酸修饰；(2)分别是SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42，具有0至3个氨基酸修饰；(3)分别是SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48，具有0至3个氨基酸修饰；(4)分别是SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60，具有0至3个氨基酸修饰；(5)分别是SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66，具有0至3个氨基酸修饰；(6)分别是SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:72，具有0至3个氨基酸修饰；(7)分别是SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:78，具有0至3个氨基酸修饰；(8)分别是SEQID NO:82、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84，具有0至3个氨基酸修饰；(9)分别是SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:90，具有0至3个氨基酸修饰；(10)分别是SEQ ID NO:94、SEQID NO:95和SEQ ID NO:96，具有0至3个氨基酸修饰；(11)分别是SEQ ID NO:100、SEQ IDNO:101和SEQ ID NO:102，具有0至3个氨基酸修饰；(12)分别是SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:108，具有0至3个氨基酸修饰；(13)分别是SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:114，具有0至3个氨基酸修饰；(14)分别是SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:125和SEQID NO:126，具有0至3个氨基酸修饰；(15)分别是SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ IDNO:36，具有0至3个氨基酸修饰；(16)分别是SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:138，具有0至3个氨基酸修饰；(17)分别是SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:144，具有0至3个氨基酸修饰；(18)分别是SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:150，具有0至3个氨基酸修饰；(19)分别是SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:162，具有0至3个氨基酸修饰；(20)分别是SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36，具有0至3个氨基酸修饰；(21)分别是SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:173和SEQ ID NO:174，具有0至3个氨基酸修饰；(22)分别是SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:180，具有0至3个氨基酸修饰；(23)分别是SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:186，具有0至3个氨基酸修饰；(24)分别是SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:191和SEQ ID NO:192，具有0至3个氨基酸修饰；(25)分别是SEQ ID NO:196、SEQ ID NO:197和SEQ ID NO:12，具有0至3个氨基酸修饰；(26)分别是SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203和SEQ ID NO:6，具有0至3个氨基酸修饰；(27)分别是SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:209和SEQ ID NO:210，具有0至3个氨基酸修饰；(28)分别是SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:216，具有0至3个氨基酸修饰；(29)分别是SEQ ID NO:10、11或12，具有0至3个氨基酸修饰；(30)分别是SEQ ID NO:4、5或6，具有0至3个氨基酸修饰；或者(31)分别是SEQ ID NO:142、143或210，具有0至3个氨基酸修饰。
9.一种分离的特异性结合BTLA的人抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1具有如SEQID NO:1所示的氨基酸序列，CDRH2具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，并且CDRH3具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，CDRL2具有如SEQID NO:5所示的氨基酸序列，并且CDRL3具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
10.一种分离的特异性结合BTLA的人抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRH1具有如SEQID NO:7所示的氨基酸序列，CDRH2具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，并且CDRH3具有如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含含有以下三个CDR的轻链可变区：CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1具有如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，CDRL2具有如SEQID NO:11所示的氨基酸序列，并且CDRL3具有如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
11.一种分离的特异性结合BTLA的人抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含含有以下三个CDR的重链可变区：CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中(1)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(2)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQ IDNO:42所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(3)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(4)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:43、SEQ IDNO:56和SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(5)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQID NO:63所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(6)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(7)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(8)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3具有如SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列，分别具有0至3个氨基酸修饰；(9)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(10)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:61、SEQID NO:92和SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(11)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98和SEQID NO:99所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(12)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104和SEQ ID NO:105所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQID NO:64、SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(13)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:110和SEQ ID NO:111所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:114所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(14)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:110和SEQ ID NO:117所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:114所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(15)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:122和SEQ ID NO:123所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:124、SEQ IDNO:125和SEQ ID NO:126所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(16)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128和SEQ ID NO:129所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(17)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:134和SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137和SEQ IDNO:138所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(18)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:141所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:144所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(19)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ IDNO:145、SEQ ID NO:146和SEQ ID NO:147所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:150所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(20)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:150所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(21)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:31、SEQ IDNO:32和SEQ ID NO:159所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:162所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(22)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:170和SEQ ID NO:171所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:173和SEQ ID NO:174所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(23)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ IDNO:63所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:180所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(24)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:182和SEQ ID NO:183所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ IDNO:136、SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:186所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(25)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:188和SEQ ID NO:189所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:191和SEQ ID NO:192所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(26)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:193、SEQ ID NO:194和SEQ ID NO:195所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:196、SEQ IDNO:197和SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(27)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:199、SEQ ID NO:200和SEQ ID NO:201所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203和SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(28)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206和SEQ ID NO:207所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:209和SEQID NO:210所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(29)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212和SEQ ID NO:213所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:216所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(30)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQID NO:127、SEQ ID NO:386和SEQ ID NO:129所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(31)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206和SEQ ID NO:207所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:209和SEQ ID NO:210所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(32)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:127、SEQ IDNO:388和SEQ ID NO:129所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；(33)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:387和SEQ ID NO:207所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:209和SEQ ID NO:210所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰；或者(34)CDRH1、CDRH2、CDRH3分别具有如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:387和SEQID NO:207所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰，并且CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有如SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:210所示的氨基酸序列，具有0至3个氨基酸修饰。
12.一种分离的特异性结合BTLA的人抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的序列。
13.一种分离的特异性结合BTLA的人抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的序列。
14.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且其中所述抗体与BTLA特异性结合。
15.一种分离的特异性结合BTLA的人抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:17或21所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的序列。
16.一种分离的特异性结合BTLA的人抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:15、19所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的序列。
17.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中：(1)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；或者(2)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，并且其中所述抗体与BTLA特异性结合。
18.一种分离的特异性结合BTLA的人抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:301、302、303、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、324、326、327、330、331、382、384、389或390所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的序列。
19.一种分离的特异性结合BTLA的人抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:351、352、353、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、366、367、368、369、370、372、374、375、376、377、378、380、381、383或385所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的序列。
20.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中：(1)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:301所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:351所示的氨基酸序列；(2)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:302所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:352所示的氨基酸序列；(3)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:303所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:353所示的氨基酸序列；(4)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:305所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:355所示的氨基酸序列；(5)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:306所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:356所示的氨基酸序列；(6)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:307所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:357所示的氨基酸序列；(7)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:308所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:358所示的氨基酸序列；(8)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:309所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:359所示的氨基酸序列；(9)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQID NO:310所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:360所示的氨基酸序列；(10)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:311所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:361所示的氨基酸序列；(11)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:312所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:362所示的氨基酸序列；(12)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:313所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:363所示的氨基酸序列；(13)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:314所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:364所示的氨基酸序列；(14)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:315所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:364所示的氨基酸序列；(15)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:316所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:366所示的氨基酸序列；(16)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:317所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:367所示的氨基酸序列；(17)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:318所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:368所示的氨基酸序列；(18)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:319所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:369所示的氨基酸序列；(19)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:320所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:370所示的氨基酸序列；(20)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:321所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:370所示的氨基酸序列；(21)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:322所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:372所示的氨基酸序列；(22)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:324所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:374所示的氨基酸序列；(23)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:306所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:375所示的氨基酸序列；(24)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:326所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:376所示的氨基酸序列；(25)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:327所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ IDNO:377所示的氨基酸序列；(26)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ IDNO:17所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；(27)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列；(29)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:330所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:380所示的氨基酸序列；(30)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:331所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:381所示的氨基酸序列；并且其中所述抗体与BTLA特异性结合；(31)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:382所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:383所示的氨基酸序列；(32)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:384所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:385所示的氨基酸序列；(33)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:389所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:383所示的氨基酸序列；(34)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:390所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:385所示的氨基酸序列；或者(35)所述重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:390所示的氨基酸序列，并且所述轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:378所示的氨基酸序列，并且其中所述抗体与BTLA结合。
21.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链或轻链还包含恒定区。
22.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链和轻链通过柔性连接体连接以形成单链抗体。
23.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其结合选自A50、G51、D52、P53、E83、D84、R85、Q86、E103、P104、V105、L106、P107、N108、D135的BTLA残基。
24.根据权利要求23所述的抗体或其抗原结合片段，其结合选自Y39和/或K41的BTLA残基。
25.根据权利要求23或24所述的抗体或其抗原结合片段，其结合选自Y39和K41的BTLA残基。
26.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其为IgG1、IgG2或IgG4抗体。
27.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其选自：人抗体、人源化抗体、嵌合抗体和多特异性抗体(如双特异性抗体)。
28.根据权利要求1至26中任一项所述的抗原结合片段，其选自：scFv、sc(Fv)2、dsFv、Fab、Fab'、(Fab')2和双抗体。
29.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其为单克隆的。
30.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段激动在免疫细胞表面上表达的人BTLA，其中所述免疫细胞任选地是T细胞。
31.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中相对于未被所述抗体或其抗原结合片段结合的相当的免疫细胞，所述抗体或其抗原结合片段与在免疫细胞表面上表达的人BTLA的结合降低所述细胞的增殖，并且其中所述细胞任选地是T细胞。
32.根据权利要求31所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞增殖的降低是通过实施例8或实施例9中描述的试验来测量的。
33.根据权利要求31所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞增殖的降低是在体外或体内测量的。
34.根据权利要求31-33中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞增殖的降低为至少约10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％。
35.根据权利要求31-33中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞增殖的降低为约10％至50％、10％至40％、10％至30％、10％至20％、10％至15％、20％至50％、20％至40％或20％至30％。
36.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含与Fc受体结合的结构域。
37.根据权利要求36所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述Fc受体在免疫细胞表面上表达。
38.根据权利要求37所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫细胞是抗原呈递细胞。
39.根据权利要求38所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原呈递细胞是树突细胞、巨噬细胞、单核细胞或嗜中性粒细胞。
40.根据权利要求36-39中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与在T细胞表面上表达的人BTLA结合。
41.根据权利要求40所述的抗体或其抗原结合片段，其中与在所述免疫细胞表面上表达的所述Fc受体的所述结合以及所述抗体或其抗原结合片段与在所述T细胞表面上的人BTLA的所述结合导致所述免疫细胞的细胞表面和所述T细胞的细胞表面在
Figure FDA0003216039420000161
或
Figure FDA0003216039420000162
以内。
42.根据权利要求40所述的抗体或其抗原结合片段，其中与在所述免疫细胞表面上表达的所述Fc受体的所述结合以及所述抗体或其抗原结合片段与在所述T细胞表面上的人BTLA的所述结合导致所述免疫细胞的细胞表面和所述T细胞的细胞表面在
Figure FDA0003216039420000163
至
Figure FDA0003216039420000164
至
Figure FDA0003216039420000165
Figure FDA0003216039420000166
至
Figure FDA0003216039420000167
至
Figure FDA0003216039420000168
或
Figure FDA0003216039420000169
至
Figure FDA00032160394200001610
以内。
43.根据权利要求36-42中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述Fc受体是FcγRIIB。
44.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中相对于未被所述抗体或其抗原结合片段结合的相当的免疫细胞，所述抗体或其抗原结合片段与在免疫细胞表面上表达的人BTLA的结合降低所述免疫细胞的NFκB信号传导，并且其中所述免疫细胞任选地是T细胞。
45.根据权利要求44所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫细胞的NFκB信号传导的所述降低是通过实施例10中描述的试验来测量的。
46.根据权利要求44或45所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫细胞的NFκB信号传导的所述降低为至少约10％、15％、20％、25％、30％或40％。
47.根据权利要求44或45所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫细胞的NFκB信号传导的所述降低为约10％至40％、10％至30％、10％至20％、20％至40％或20％至30％。
48.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与在免疫细胞表面上表达的人BTLA的结合降低所述人BTLA的胞质域的去磷酸化。
49.根据权利要求48所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述去磷酸化由在所述免疫细胞表面上表达的CD45介导。
50.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中各自如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于10nM的KD特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)，并且其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体以小于20nM的KD结合食蟹猴BTLA；不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。
51.根据权利要求50所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段在37℃下以至少5.0x105(1/Ms)的缔合速率结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。
52.根据权利要求50或51所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段在37℃下以小于3.0x10-4(1/s)的解离速率结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。
53.根据权利要求50至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以3.0x10-4(1/s)至1.0x10-3(1/s)的解离速率结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。
54.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以至少5.0x105(1/Ms)的缔合速率特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)，其中所述抗体不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且其中如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，所述抗体在体外抑制T细胞的增殖。
55.根据权利要求54所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以小于3.0x10-4(1/s)的解离速率结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。
56.根据权利要求54或55所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于10nM的KD结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。
57.根据权利要求54至56中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于20nM的KD结合食蟹猴BTLA。
58.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以3.0x10-4(1/Ms)至1.0x10-3(1/Ms)的解离速率特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)，其中所述抗体不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且其中如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，所述抗体在体外抑制T细胞的增殖。
59.根据权利要求58所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于10nM的KD结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。
60.根据权利要求58或59所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于20nM的KD结合食蟹猴BTLA。
61.根据权利要求58至60中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以至少5.0x105(1/Ms)的缔合速率结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。
62.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中各自如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以小于1.0x10-3(1/Ms)的解离速率和至少5.0x105(1/Ms)的缔合速率特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)，其中所述抗体不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且其中如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，所述抗体在体外抑制T细胞的增殖。
63.根据权利要求62所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于10nM的KD结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。
64.根据权利要求62或63所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于20nM的KD结合食蟹猴BTLA。
65.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于2nM的KD特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)，其中所述抗体抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。
66.根据权利要求65所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于1.0x106(1/Ms)的缔合速率结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。
67.根据权利要求65或66所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于1.0x10-3(1/s)的解离速率结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。
68.根据权利要求65至67中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于10nM的KD结合食蟹猴B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。
69.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以小于1x10-3(1/s)的解离速率特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)，其中所述抗体抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。
70.根据权利要求69所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于10nM的KD结合食蟹猴B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。
71.根据权利要求69或70所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体或其抗原结合片段以小于2nM的KD结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)。
72.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体以至少5nM的KD结合食蟹猴BTLA；并且其中所述抗体抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。
73.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所确定的，所述抗体以至少50nM的KD结合食蟹猴BTLA；并且其中所述抗体不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。
74.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以1400nM至3500nM的KD特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)；并且其中所述抗体不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。
75.根据权利要求74所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以至少2.0x105(1/Ms)的缔合速率结合人BTLA。
76.根据权利要求74或75所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以小于10.0x10-1(1/s)的解离速率结合人BTLA。
77.根据权利要求74至76中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与阻断抗体4H4结合的表位结合。
78.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以1.7x105(1/Ms)至2.5x105(1/Ms)的缔合速率特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)；并且其中所述抗体不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。
79.根据权利要求78所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以小于3.0x10-1(1/s)的解离速率结合人BTLA。
80.根据权利要求78或79所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以3.0x10-1(1/s)至5.0x10-1(1/s)的解离速率结合人BTLA。
81.根据权利要求78至80中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以至少150nM的KD结合人BTLA。
82.根据权利要求78至81中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以150nM至1500nM的KD结合人BTLA。
83.根据权利要求78至82中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与阻断286抗体结合的表位结合。
84.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以40nM至1200nM的KD特异性结合人B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)；并且其中所述抗体不抑制BTLA与疱疹病毒进入介体(HVEM)的结合；并且如通过混合淋巴细胞反应试验所确定的，在体外抑制T细胞的增殖。
85.根据权利要求84所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以至少1.0x105(1/Ms)的缔合速率结合人BTLA。
86.根据权利要求84或85所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以1.0x105(1/Ms)至10x105(1/Ms)的缔合速率结合人BTLA。
87.根据权利要求84至86中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以小于6.0x10-1(1/s)的解离速率结合人BTLA。
88.根据权利要求84至87中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中如在37℃下通过表面等离子体共振(SPR)所测量的，所述抗体或其抗原结合片段以6.0x10-1(1/s)至10.0x10-2(1/s)的解离速率结合人BTLA。
89.一种分离的核酸，其包含一个或多个核苷酸序列，所述核苷酸序列编码能够形成根据权利要求1至88中任一项所述的抗体或抗原结合片段的多肽。
90.一种宿主细胞，其包含根据权利要求89所述的核酸序列。
91.一种产生能与BTLA结合的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括以下步骤：在用于产生所述抗体或其抗原结合片段的条件下培养权利要求90的宿主细胞，任选地进一步包括分离和/或纯化所述抗体或其抗原结合片段。
92.一种制备特异性结合BTLA的人抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括以下步骤：
1)提供包含一个或多个编码重链和轻链氨基酸序列的核酸分子的宿主细胞，所述核酸分子当表达时能够组合起来以产生抗体或抗原结合分子；
2)培养表达所编码的氨基酸序列的宿主细胞；以及
3)分离权利要求1至88中任一项的抗体或抗原结合分子。
93.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1至88中任一项的抗体或其抗原结合片段以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
94.根据权利要求1至88中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，或根据权利要求93所述的药物组合物，其用于治疗。
95.根据权利要求1至88中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，或根据权利要求93所述的药物组合物，其用于治疗或预防炎性或自身免疫性疾病以及过度免疫细胞增殖的病症。
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