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CN113121573A - 嘌呤衍生物及其在医药上的应用 - Google Patents

嘌呤衍生物及其在医药上的应用 Download PDF

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CN113121573A
CN113121573A CN202011615924.4A CN202011615924A CN113121573A CN 113121573 A CN113121573 A CN 113121573A CN 202011615924 A CN202011615924 A CN 202011615924A CN 113121573 A CN113121573 A CN 113121573A
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CN
China
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methyl
chloro
amino
purin
dihydro
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CN202011615924.4A
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魏用刚
许学珍
楚洪柱
何吕学
雷飞全
何阳
苏桂转
王美微
刘兵
孙毅
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Chengdu Baiyu Pharmaceutical Co Ltd
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Chengdu Baiyu Pharmaceutical Co Ltd
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Abstract

本申请公开了三唑衍生物及其在医药上的应用，具体而言涉及如通式(I)所示的嘧啶衍生物，或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，包含其的药物组合物以及本发明化合物或组合物在制备DNA‑PK抑制剂领域的用途，其中，通式(I)中各取代基的定义与说明书的定义相同

Description

嘌呤衍生物及其在医药上的应用
技术领域
本申请涉及通式(I)所示的嘌呤衍生物，或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其药物组合物以及在制备DNA-PK抑制剂的用途。
背景技术
DNA依赖的蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase，DNA-PK)是由Ku70/Ku80异二聚体和DNA依赖的蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)构成的DNA-PK酶复合物。该酶复合物需要在DNA参与下才能被激活发挥出相应的功能(George et al.,2019)。作为一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，DNA-PK属于PIKK(phosphatidylinositol 3-kinase-related kinase)家族成员，它不仅在修复细胞内DNA双链断裂(double-strand breaks；DSBs)和细胞DNA重组或抗体DNA重排(V(D)J重组)过程中具有重要作用，还参与染色体修饰、转录调节、端粒维持等生理过程。
在正常生理过程中，多种因素可能导致DNA发生DSBs：如体细胞DNA重组过程中DSBs常常作为中间产物出现，这一生理过程对所有脊椎动物的功能性免疫系统的形成十分重要；DNA复制中复制叉遇到受损的碱基，也可能造成单链或双链断裂；DNA也可能因为正常代谢过程中活性氧(reactive oxygen species；ROS)的攻击而产生DSBs(Cannan&Pederson,2016)。此外，还有多种外源性因素也可能导致DSBs，如电离辐射(Ionizingradiation，IR)和化疗试剂(如拓扑异构酶II抑制剂)等(George et al.,2019)。如果DSBs未被修复或者错误地修复，将会产生突变和/或染色体畸变，最终导致细胞死亡。为了应对DSBs带来的危害，真核细胞已进化出多种机制来修复受损的DNA以维持细胞的活力和基因组的稳定性。在真核细胞中，最主要的DNA修复方式是非同源末端连接(non-homologousend-joining，NHEJ)。这种直接将断裂DNA连接起来的方式并不需要有同源DNA片段参与，可以发生在细胞周期的任何阶段。NHEJ是由DNA-PK介导的需要多种蛋白与信号通路共同参与的动态过程，基本过程如下：(1)Ku70/Ku80异二聚体识别并结合至双链DNA断裂末端；(2)募集DNA-PKcs、XRCC4-DNA连接酶IV复合体等蛋白至DNA断裂双链的两侧；(3)DNA-PKcs自身磷酸化，激活自身的激酶活性；(4)DNA-PKcs作为粘合剂连接断裂DNA的两端，防止核酸外切酶对DNA的降解作用；(5)对DNA进行加工以移除断裂处的不可连接末端或其他损伤形式；(6)XRCC4-DNA连接酶IV复合体修复DNA末端(某些情况下，在连接之前可能还需要DNA聚合酶来合成新的末端)。当DNA-PKcs发生磷酸化后，可诱导蛋白构象发生改变，调节NHEJ过程中多种蛋白的活性(如Artemis、Ku70、Ku80、DNA ligase)，这对DNA修复过程至关重要。因此，磷酸化的DNA-PKcs(pDNA-PKcs)常常作为细胞DSBs的标志物。
已有研究表明，DNA-PK活性与多种肿瘤的发生发展有关：如黑色素瘤中的DNA-PKcs可以促进血管再生和肿瘤的转移；多发性骨髓瘤中的DNA-PKcs表达量显著上调；放疗耐受的甲状腺肿瘤中的Ku蛋白的含量明显增加(Ihara,Ashizawa,Shichijo,&Kudo,2019)。因此，可以考虑将DNA-PK抑制剂与引起DNA损伤的抗肿瘤疗法(如IR、化疗试剂等)联用来提高效果。DNA-PK抑制剂的使用在一定程度上会干扰正常细胞的DNA修复功能，然而正常细胞体内还存在多种DNA修复途径作为补充，而肿瘤细胞面临强大的DNA复制压力且缺乏有效的DNA修复方式。通过抑制肿瘤细胞DNA-PK的活性能够提高其他抗肿瘤药物对肿瘤细胞的杀伤效果。
经多年研究，目前已经发现了多个DNA-PK抑制剂。最早发现具有DNA-PK激酶抑制活性的化合物是一种真菌代谢产物——Wortmannin，IC50(DNA-PK)约15nM，该化合物同时在p53蛋白的乙酰化和磷酸化过程中也发挥着重要作用(Sarkaria et al.,1998)；之后报道的槲皮素衍生物LY294002也具有DNA-PK抑制活性(Maira,Stauffer,Schnell,&Garcia-Echeverria,2009)；后来基于LY294002结构又研发了NU7026、NU7441等新一代DNA-PK抑制剂。虽然已经证实了这些化合物对肿瘤细胞有着良好的杀伤效果，但它们存在高毒性、选择性差等问题而无法进入临床开发(Maira et al.,2009)。还曾报道过其他DNA-PK抑制剂，如OK1035、SU11752、PP121、KU-0060648等小分子化合物，但这些化合物同样存在对DNA-PK特异性较低等缺陷(George et al.,2019)。所以，目前仍然需要开发高活性、高特异性、低毒性的DNA-PK抑制剂，以更好满足临床需求。
发明内容
本申请的一个或多个实施方式提供了嘌呤衍生物，或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其药物组合物以及其在制备DNA-PK抑制剂中的用途。
在本申请的一个或多个实施方式中，化合物对DNA-PK具有高抑制活性和/或高选择性，且能够作为化疗和放疗增敏剂有效治疗癌症，改善现有技术的疗效，同时降低毒副作用。
本发明的一个或多个实施方式提供给了通式(I)所示的化合物，或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶：
Figure BDA0002876667980000021
其中：
R1选自H、-OH、氰基、卤素、-NH2、C1-6烷基或者C1-6烷氧基，所述的C1-6烷基任选进一步被1-3个选自D或者卤素的取代基所取代；
R2选自H或者C1-6烷基；
R3选自C1-6烷基、C3-12碳环基、C3杂环基、C4-12杂环基、-C1-6亚烷基-C3-12碳环基、-C1-6亚烷基-C3杂环基或者-C1-6亚烷基-C4-12杂环基，所述的C3杂环基和C4-12杂环基包含1至3个选自N、O或者S的杂原子，所述的C1-6烷基、C3-12碳环基、C3杂环基和C4-12杂环基、C1-6亚烷基任选进一步被1个或者多个选自-OH、羧基、卤素、氰基、＝O、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-NRa1Ra2、-C(＝O)OC1-6烷基、-C(＝O)NRa1Ra2、C3-12环烷基、C3杂环烷基、C4-12杂环烷基、C6-12芳基或者C5-12杂芳基的取代基所取代；且所述取代基中的所述的C1-6烷基、C1-6杂烷基、C2-6烯基或者C2-6炔基任选进一步被1个或者多个选自-OH、羧基、氰基、卤素、-O-Ra1、-NRa1Ra2、C3-12环烷基、C3杂环烷基、C4-12杂环烷基、C6-12芳基或者C5-12杂芳基的取代基所取代；
条件是：当R3为环己基时，所述的环己基至少被一个氰基取代；且R3不为四氢呋喃基或者氧杂环己基；或者，条件是：R3不为环己基、四氢呋喃基或者氧杂环己基；
Ra1、Ra2各自独立地选自H、C1-6烷基、-C(＝O)Ra3或者-C(＝O)NRa4Ra5，其中所述的C1-6烷基任选进一步被1个或者多个选自OH、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C6-12芳基、C5-12杂芳基、C3-12环烷基、C3杂环烷基或者C4-12杂环烷基的取代基所取代；
Ra3选自C1-6烷基、C1-6烷氧基或者C6-12芳基；
Ra4、Ra5各自独立地选自H或者C1-6烷基；或者Ra4与Ra5及N原子形成3至8元杂环，所述的3至8元杂环包含1个至4个选自N、O或者S的杂原子；
p选自0、1、2或者3；
任选地，通式(I)可以任选被1个或者多个D原子取代。
本申请的一个或多个实施方式提供了化合物，或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中该化合物选自通式(II)所示的化合物：
Figure BDA0002876667980000031
其中：
R1选自卤素或者C1-6烷基，所述的C1-6烷基任选进一步被1-3个选自D或者卤素的取代基所取代；
R3选自C1-6烷基、C3-12碳环基、C3杂环基、C4-12杂环基、-C1-6亚烷基-C3-12碳环基、-C1-6亚烷基-C3杂环基或者-C1-6亚烷基-C4-12杂环基，所述的C3杂环基和C4-12杂环基包含1至3个选自N、O或者S的杂原子，所述的C1-6烷基、C3-12碳环基、C3杂环基和C4-12杂环基、C1-6亚烷基任选进一步被1个或者多个选自-OH、羧基、卤素、氰基、＝O、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-NRa1Ra2、-C(＝O)OC1-6烷基、-C(＝O)NRa1Ra2、C3-12环烷基、C3杂环烷基、C4-12杂环烷基、C6-12芳基或者C5-12杂芳基的取代基所取代；且所述取代基中的所述的C1-6烷基、C1-6杂烷基、C2-6烯基或者C2-6炔基任选进一步被1个或者多个选自-OH、羧基、氰基、卤素、-O-Ra1、-NRa1Ra2、C3-12环烷基、C3杂环烷基、C4-12杂环烷基、C6-12芳基或者C5-12杂芳基的取代基所取代；
条件是：当R3为环己基时，所述的环己基至少被一个氰基取代；且R3不为四氢呋喃基或者氧杂环己基；或者，条件是：R3不为环己基、四氢呋喃基或者氧杂环己基；
Ra1、Ra2各自独立地选自H、C1-6烷基、-C(＝O)Ra3或者-C(＝O)NRa4Ra5，其中所述的C1-6烷基任选进一步被1个或者多个选自OH、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C6-12芳基、C5-12杂芳基、C3-12环烷基、C3杂环烷基或者C4-12杂环烷基的取代基所取代；
Ra3选自C1-6烷基、C1-6烷氧基或者C6-12芳基；
Ra4、Ra5各自独立地选自H或者C1-6烷基；或者Ra4与Ra5及N原子形成3至8元杂环，所述的3至8元杂环包含1个至4个选自N、O或者S的杂原子；
p选自0、1、2或者3。
本申请的一个或多个实施方式提供了(I)或者(II)化合物，或者其立体异构体、溶剂化物、代谢产物、前药、氘代物、药学上可接受的盐或共晶，其中：
R1选自卤素或者C1-4烷基，所述的C1-6烷基任选进一步被1-3个选自D或者卤素的取代基所取代；
R3选自C1-4烷基、C3-8碳环基、C4-8杂环基、-C1-2亚烷基-C3-8碳环基或者-C1-2亚烷基-C4-8杂环基，所述的C4-8杂环基包含1至3个选自N或者O的杂原子，所述的C1-4烷基、C3-8碳环基和C4-8杂环基、C1-2亚烷基任选进一步被1个或者多个选自-OH、卤素、＝O、氰基或者C1-4烷基的取代基所取代；且所述取代基中的所述的C1-4烷基任选进一步被1个或者多个选自-OH、氰基或者卤素的取代基所取代；条件是：当R3为环己基时，所述的环己基至少被一个氰基取代；且R3不为四氢呋喃基或者氧杂环己基；或者，条件是：R3不为环己基、四氢呋喃基或者氧杂环己基；
p选自1。
本申请的一个或多个实施方式提供了化合物，或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中该化合物选自但不限于以下结构：
Figure BDA0002876667980000041
Figure BDA0002876667980000051
Figure BDA0002876667980000052
或者
Figure BDA0002876667980000053
本申请的一个或多个实施方式提供制备本发明所述化合物中间体，所述的中间体包括但不限于：
Figure BDA0002876667980000054
Figure BDA0002876667980000055
或者
Figure BDA0002876667980000056
本申请的一个或多个实施方式提供药物组合物，所述药物组合物包括：
(1)所述的本发明化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶；
(2)任选的一种或者多种其他活性成分；以及
(3)药学上可接受的载体和/或赋形剂。
本申请的一个或多个实施方式提供上文所述的药物组合物或者上述本发明化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
本申请的一个或多个实施方式提供上文所述的药物组合物或者上述本发明化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶在制备DNA-PK抑制剂中的用途。
本申请一个或多个实施方式提供了作为药物使用的本申请的化合物。
本申请一个或多个实施方式提供了作为DNA-PK抑制剂使用的本申请的化合物。
本申请一个或多个实施方式提供了在治疗、预防或抑制癌症的方法中使用的本申请的化合物。
本申请一个或多个实施方式提供了在抑制DNA-PK的方法中使用的本申请的化合物。
本申请一个或多个实施方式提供了治疗、预防或抑制癌症的方法，其包括向有需要的对象施用本申请的化合物。
本申请一个或多个实施方式提供了抑制DNA-PK的方法，其包括向有需要的对象施用本申请的化合物。
除非有相反的陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或F、Cl、Br、I均包括它们的同位素情况，及本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫或氮任选进一步被一个或多个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括12C、13C和14C，氢的同位素包括氕(H)、氘(D，又叫重氢)、氚(T，又叫超重氢)，氧的同位素包括16O、17O和18O，硫的同位素包括32S、33S、34S和36S，氮的同位素包括14N和15N，氟的同位素包括17F和19F，氯的同位素包括35Cl和37Cl，溴的同位素包括79Br和81Br。
“烷基”是指1至20个碳原子的直链或支链饱和脂肪族烃基，优选为1至8个(例如1、2、3、4、5、6、7、8个)碳原子的烷基，更优选为1至6个碳原子的烷基，进一步优选为1至4个碳原子的烷基。非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、新丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基及其各种支链异构体；当烷基被取代基时，可以任选进一步被1个或者多个取代基所取代。
“烷氧基”是指烷基中至少1个碳原子被氧原子取代所形成的基团。非限制性实施例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基、环丙氧基和环丁氧基。所述的烷基定义与上文所述的“烷基”定义相同。
“烯基”是指包含1至10个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个)碳-碳双键，由2至20个碳原子组成的直链或者支链不饱和脂肪族烃基，优选2至12个(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个)碳原子的烯基，更优选2至8个碳原子的烯基，进一步优选2至6个碳原子的烯基。非限制性实施例包括乙烯基、丙烯-2-基、丁烯-2-基、丁烯-2-基、戊烯-2-基、戊烯-4-基、己烯-2-基、己烯-3基、庚烯-2-基、庚烯-3-基、庚烯-4-基、辛烯-3-基、壬烯-3-基、癸烯-4-基和十一烯-3-基。所述的烯基可以任选进一步被1个或者多个取代基所取代。
“炔基”是指包含1至10个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个)碳-碳叁键，由2至20个碳原子组成的直链或者支链不饱和脂肪族烃基，优选2至12个(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个)碳原子的炔基，更优选2至8个碳原子的炔基，进一步优选2至6个碳原子的炔基。非限制性实施例包括乙炔基、丙炔-1-基、丙炔-2-基、丁炔-1-基、丁炔-2-基、丁炔-3-基、3,3-二甲基丁炔-2-基、戊炔-1-基、戊炔-2-基、己炔-1-基、1-庚炔-1-基、庚炔-3-基、庚炔-4-基、辛炔-3-基、壬炔-3-基、癸炔-4-基、十一炔-3-基、十二炔-4-基。所述的炔基可以任选进一步被1至多个取代基所取代。
“芳基”是指是指取代的或未取代的芳香环，其可以是5至8元(例如5、6、7、8元)的单环、5至12元(例如5、6、7、8、9、10、11、12元)双环或者10至15元(例如10、11、12、13、14、15元)三环体系，其可以是桥环或者螺环，非限制性实施例包括苯基、萘基。所述的芳基可以任选进一步被1个或者多个取代基所取代。
“杂芳基”是指取代的或未取代的芳香环，其可以是3至8元(例如3、4、5、6、7、8元)的单环、5至12元(例如5、6、7、8、9、10、11、12元)双环或者10至15元(例如10、11、12、13、14、15元)三环体系，且包含1至6个(例如1、2、3、4、5、6个)选自N、O或S的杂原子，优选5至8元杂芳基，杂芳基的环中选择性取代的1至4个(例如1、2、3、4个)N、S可被氧化成各种氧化态。杂环基可以连接在杂原子或者碳原子上，杂芳基可以是桥环或者螺环，非限制性实施例包括环吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、哌啶基苯并咪唑基、苯并吡啶基、吡咯并吡啶基。杂芳基任选进一步被1个或多个取代基所取代。
“碳环基”或“碳环”是指饱和或者不饱和的芳香环或者非芳香环。当为芳香环时，其定义与上文“芳基”的定义相同；当为非芳香环时，其可以是3至10元(例如3、4、5、6、7、8、9、10元)的单环、4至12元(例如4、5、6、7、8、9、10、11、12元)双环或者10至15元(例如10、11、12、13、14、15元)三环体系，可以是桥环或者螺环，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊基-1-烯基、1-环戊基-2-烯基、1-环戊基-3-烯基、环己基、1-环己基-2-烯基、1-环己基-3-烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基、
Figure BDA0002876667980000071
Figure BDA0002876667980000072
所述的“碳环基”或“碳环”任选进一步被1个或者多个取代基所取代。
“杂环基”或“杂环”是指饱和或不饱和的芳香性杂环或者非芳香性杂环，当为芳香性杂环时，其定义与上文“杂芳基”定义相同；当为非芳香性杂环时，其可以是3至10元(例如3、4、5、6、7、8、9、10元)的单环、4至12元(例如4、5、6、7、8、9、10、11、12元)双环或者10至15元(例如10、11、12、13、14、15元)三环体系，且包含1至4个(例如1、2、3、4个)选自N、O或S的杂原子，优选3至8元杂环基。“杂环基”或“杂环”的环中选择性取代的1至4个(例如1、2、3、4个)N、S可被氧化成各种氧化态；“杂环基”或“杂环”可以连接在杂原子或者碳原子上；“杂环基”或“杂环”可以为桥环或者螺环。“杂环基”或“杂环”的非限制性实施例包括环氧乙基、环氧丙基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、硫杂环丁基、1,3-二氧戊环基、1,4-二氧戊环基、1,3-二氧六环基、氮杂环庚基、氧杂环庚基、硫杂环庚基、氧氮杂卓基、二氮杂卓基、硫氮杂卓基、吡啶基、哌啶基、高哌啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、哌嗪基、高哌嗪基、咪唑基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、噻噁烷基、1,3-二噻烷基、二氢呋喃基、二噻戊环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、四氢吡咯基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢吡喃基、苯并咪唑基、苯并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并二氢呋喃基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧杂环己基、1,3-二氧戊基、吡唑啉基、二噻烷基、二噻茂烷基、二氢噻吩基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、氮杂双环[2.2.2]己基、3H-吲哚基喹嗪基、N-吡啶基尿素、1,1-二氧硫代吗啉基、氮杂二环[3.2.1]辛烷基、氮杂二环[5.2.0]壬烷基、氧杂三环[5.3.1.1]十二烷基、氮杂金刚烷基和氧杂螺[3.3]庚烷基。所述的“杂环基”或“杂环”可以任选进一步被1个或者多个取代基所取代。
“环烷基”是指饱和的环烃基，其环可以为3至10元(例如3、4、5、6、7、8、9、10元)的单环、4至12元(例如4、5、6、7、8、9、10、11、12元)双环或者10至20元(例如4、5、6、7、8、9、10、11、12元)多环体系，环碳原子优选3至10个碳原子，进一步优选3至8个碳原子。“环烷基”非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、1,5-环辛二烯基、1,4-环己二烯基和环庚三烯基等。当环烷基被取代时，可以任选进一步被1个或者多个取代基所取代。
“杂环烷基”是指取代的或未取代的饱和非芳香环基，其可以是3至8元(例如3、4、5、6、7、8元)的单环、4至12元(例如4、5、6、7、8、9、10、11、12元)双环或者10至15元(例如10、11、12、13、14、15元)三环体系，且包含1、2或3个选自N、O或S的杂原子，优选3至8元杂环基。“杂环烷基”的环中选择性取代的N、S可被氧化成各种氧化态；“杂环烷基”可以连接在杂原子或者碳原子上；“杂环烷基”可以为桥环或者螺环。“杂环烷基”非限制性实施例包括环氧乙基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、1,3-二氧戊环基、1,4-二氧戊环基、1,3-二氧六环基、氮杂环庚基、哌啶基、哌叮基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二噻烷基、四氢呋喃基、四氢吡咯基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢吡喃基、氮杂二环[3.2.1]辛烷基、氮杂二环[5.2.0]壬烷基、氧杂三环[5.3.1.1]十二烷基、氮杂金刚烷基和氧杂螺[3.3]庚烷基。
当上文所述的“烷基”、“烷氧基”、“烯基”、“炔基”、“芳基”、“杂芳基”、“碳环基”、“碳环”、“杂环基”、“杂环”、“环烷基”、“杂环烷基”或者“杂环基”被取代时，可以任选进一步被0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或者10个选自F、Cl、Br、I、羟基、巯基、硝基、氰基、氨基、C1-6烷基氨基、＝O、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、-NRq4Rq5、＝NRq6、-C(＝O)OC1-6烷基、-OC(＝O)C1-6烷基、-C(＝O)NRq4Rq5、C3-12环烷基、C3杂环烷基C4-12杂环烷基、C6-12芳基、C5-12杂芳基、-C(＝O)OC6-12芳基、-OC(＝O)C6-12芳基、-OC(＝O)C5-12杂芳基、-C(＝O)OC5-12杂芳基、-OC(＝O)C3杂环烷基、-OC(＝O)C4-12杂环烷基、-C(＝O)OC3杂环烷基、-C(＝O)OC4-12杂环烷基、-OC(＝O)C3-12环烷基、-C(＝O)OC3-12环烷基、-NHC(＝O)C3杂环烷基、-NHC(＝O)C4-12杂环烷基、-NHC(＝O)C6-12芳基、-NHC(＝O)C5-12杂芳基、-NHC(＝O)C3-12环烷基、-NHC(＝O)C2-6烯基或者-NHC(＝O)C2-6炔基的取代基所取代，且其中所述的取代基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-12环烷基、C3杂环烷基、C4-12杂环烷基、C6-12芳基、C5-12杂芳基、-NHC(＝O)C6-12芳基、-NHC(＝O)C5-12杂芳基、-NHC(＝O)C3杂环烷基、-NHC(＝O)C4-12杂环烷基或者-NHC(＝O)C3-12环烷基任选进一步被1至3个选自OH、F、Cl、Br、I、C1-6烷基、C1-6烷氧基、-NRq4Rq5或者＝O的取代基所取代；Rq1选自C1-6烷基、C1-6烷氧基或者C6-12芳基；Rq2、Rq3选自H或者C1-6烷基；其中，Rq4、Rq5选自H、C1-6烷基、-NH(C＝NRq1)NRq2Rq3、-S(＝O)2NRq2Rq3、-C(＝O)Rq1或者-C(＝O)NRq2Rq3，其中所述的C1-6烷基任选进一步被1个或者多个选自OH、F、Cl、Br、I、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C6-12芳基、C5-12杂芳基、C3-12环烷基、C3杂环烷基或者C4-12杂环烷基的取代基所取代；或者Rq4与Rq5及N原子形成一个3至8元杂环，所述的杂环可以包含1个或者多个选自N、O或者S的杂原子。
“药学上可接受的盐”或者“其药学上可接受的盐”是指本发明化合物保持游离酸或者游离碱的生物有效性和特性，且所述的游离酸通过与无毒的无机碱或者有机碱，所述的游离碱通过与无毒的无机酸或者有机酸反应获得的盐。
“药物组合物”是指一种或多种本发明所述化合物、其药学上可接受的盐或前药和其它化学组分形成的混合物，其中，“其它化学组分”是指药学上可接受的载体、赋形剂和/或一种或多种其它治疗剂。
“载体”是指不会对生物体产生明显刺激且不会消除所给予化合物的生物活性和特性的材料。
“赋形剂”是指加入到药物组合物中以促进化合物给药的惰性物质。非限制性实施例包括碳酸钙、磷酸钙、糖、淀粉、纤维素衍生物(包括微晶纤维素)、明胶、植物油、聚乙二醇类、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。
“前药”是指可经体内代谢转化为具有生物活性的本发明化合物。本发明的前药通过修饰本发明化合物中的氨基或者羧基来制备，该修饰可以通过常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。当本发明的前药被施予哺乳动物个体时，前药被割裂形成游离的氨基或者羧基。
“共晶”是指活性药物成分(API)和共晶形成物(CCF)在氢键或其他非共价键的作用下结合而成的晶体，其中API和CCF的纯态在室温下均为固体，并且各组分间存在固定的化学计量比。共晶是一种多组分晶体，既包含两种中性固体之间形成的二元共晶，也包含中性固体与盐或溶剂化物形成的多元共晶。
“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。
“任选”或“任选地”或“选择性的”或“选择性地”是指随后所述的事件或状况可以但未必发生，该描述包括其中发生该事件或状况的情况及其中未发生的情况。例如，“任选地被烷基取代的杂环基”是指该烷基可以但未必存在，该描述包括其中杂环基被烷基取代的情况，及其中杂环基未被烷基取代的情况。
具体实施方式
以下实施例详细说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围包括但是不限于此。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或(和)质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用(Bruker Avance III 400和Bruker Avance 300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)；
MS的测定用(Agilent 6120B(ESI)和Agilent 6120B(APCI))；
HPLC的测定使用Agilent 1260DAD高压液相色谱仪(Zorbax SB-C18 100×4.6mm,3.5μM)；
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm-0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm-0.5mm；
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200-300目硅胶为载体；
本发明的己知起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于泰坦科技、安耐吉化学、上海德默、成都科龙化工、韶远化学科技、百灵威科技等公司；
氮气氛是指反应瓶连接约1L容积的氮气气球；
氢气氛是指反应瓶连接约1L容积的氢气气球；
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次；
实施例中无特殊说明，反应在氮气氛下进行；
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液；
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，室温最适宜的反应温度，为20℃-30℃；
DCM：二氯甲烷；
EA：乙酸乙酯；
HCl：盐酸；
THF：四氢呋喃；
DMF：N,N-二甲基甲酰胺；
PE:石油醚；
TLC:薄层色谱；
SFC：超临界流体色谱法；
NCS：N-氯代丁二酰亚胺；
Pd(dppf)Cl2：[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯；
DMSO：二甲基亚砜；
DTT：二硫苏糖醇；
ATP：三磷酸腺苷；
DNA：脱氧核糖核苷酸；
IC50：是指DNA-PK激酶的活性受到50％抑制时化合物的浓度。
实施例
实施例1
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-(氧杂环丁-3-基甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物1)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-(oxetan-3-ylmethyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000101
第一步：
2-氯-4-((氧杂环丁-3-基甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(1b)
ethyl 2-chloro-4-((oxetan-3-ylmethyl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(5g,22.6mmol)、碳酸钾(6.2g,44.8mmol)溶解于乙腈(20mL)，在0℃下加入3-氨甲基氧杂环丁烷(1.9g，22.6mmol)，在室温搅拌20h。TLC监测至反应完全，加水30mL，用乙酸乙酯60mL萃取三次，饱和盐水洗一次，浓缩有机相，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝10:1～1:10)，得到标题化合物，2-氯-4-((氧杂环丁-3-基甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯1b(白色固体，3.3g，产率63％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.66(t,1H),8.60(s,1H),4.62(q,2H),4.37-4.27(m,4H),3.75(d,2H),3.26-3.19(m,1H),1.30(t,3H)。
第二步：
2-氯-4-((氧杂环丁-3-基甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸(1c)
2-chloro-4-((oxetan-3-ylmethyl)amino)pyrimidine-5-carboxylic acid
2-氯-4-((氧杂环丁-3-基甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯1b(3.3g,12.1mmol)溶解于四氢呋喃10mL，水5mL中，加入氢氧化锂(582mg,24.2mmol)，室温搅拌1h。TLC监测至反应完全，旋干四氢呋喃，调pH为4-5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝10/1)洗两次，过滤、干燥得到标题化合物，2-氯-4-((氧杂环丁-3-基甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸1c(白色固体，2.4g，产率82％)，直接进行下一步实验。
第三步：
2-氯-9-(氧杂环丁-3-基甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(1d)
2-chloro-9-(oxetan-3-ylmethyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-4-((氧杂环丁-3-基甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸1c(1.3g,5.3mmol)溶解于二甲基乙酰胺(20mL)，加入三乙胺(585mg,5.8mmol)、叠氮磷酸二苯酯(1.6g,5.8mmol)，室温搅拌1h，随后逐步升温至120℃,搅拌1.5h。TLC监测至反应完全，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝5:1～1:10)，得到标题化合物，2-氯-9-(氧杂环丁-3-基甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮1d(白色固体，780mg，产率35％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.13(s,1H),4.63(q,2H),4.39(t,2H),4.08(d,2H),3.46-3.15(m,3H)。
第四步：
2-氯-7-甲基-9-(氧杂环丁-3-基甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(1e)
2-chloro-7-methyl-9-(oxetan-3-ylmethyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(氧杂环丁-3-基甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮1d(800mg，3.3mmol)溶解于二甲基甲酰胺(10mL)，在0℃下加入硫酸二甲酯(420mg，3.3mmol)和碳酸铯(1.5g,4.8mmol)，0℃搅拌1h。TLC监测至反应完全，随后加10mL水，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，有固体析出，过滤得到标题化合物,2-氯-7-甲基-9-(氧杂环丁-3-基甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮1e(白色固体，423mg，产率63％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.33(s,1H),4.62(t,2H),4.40(t,2H),4.12(d,2H),3.36(s,3H),2.25(d,1H)。
第五步：
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-(氧杂环丁-3-基甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物1)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-(oxetan-3-ylmethyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(3-氨甲基氧杂环丁烷)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮1e(423mg，1.6mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基胺(132mg，0.3mmol)、碳酸铯(1g,1.2mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(146mg，0.16mmol),2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘(200mg，0.32mmol)溶解于二氧六环，氮气保护并换气，在100℃搅拌4h。TLC监测至反应完全，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷:甲醇(v/v)＝30/1)，得到标题化合物，7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-(氧杂环丁-3-基甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮化合物1(白色固体，12.6mg，产率3.2％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ9.13(s,1H),8.70(s,1H),8.38(s,1H),8.08(s,1H),7.71(s,1H),4.62(q,2H),4.41(t,2H),4.05(d,2H),3.35-3.30(m,4H),2.38(s,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝367.10[M+1]。
实施例2
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-((3-甲基氧杂环丁-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物2)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-((3-methyloxetan-3-yl)methyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000121
第一步：
2-氯-4-((3-甲基-氧杂-3-基甲基)-氨基)-嘧啶-5-羧酸乙酯(2a)
ethyl 2-chloro-4-[(3-methyl-oxetan-3-ylmethyl)-amino]-pyrimidine-5-carboxylic
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(5.0g,22.62mmol)、(碳-3-甲基氧杂环丁-3-基)甲胺(2.29g,22.62mmol)溶解于乙腈(600mL)，搅拌,分多次加入碳酸钾(4.69g,33.93mmol)，在室温搅拌4h。TLC监测至反应完毕后过滤，滤渣用乙酸乙酯(300mL)清洗，将滤液浓缩得粗品，粗品通过柱分离提纯(正己烷:乙酸乙酯(v/v)＝5:1)，得到标题化合物,2-氯-4-((3-甲基-氧杂-3-基甲基)-氨基)-嘧啶-5-羧酸乙酯2a(白色固体，3.8g，产率77.4％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.68(d,1H),8.63(s,1H),4.44(d,2H),4.33-4.29(m,2H),4.23(d,2H),3.69(d,2H),1.31(t,3H),1.26(s,3H)。
第二步：
2-氯-4-(((3-甲基-氧杂-3-基甲基)-氨基)-嘧啶-5-羧酸(2b)
2-chloro-4-(((3-methyloxetan-3-yl)methyl)amino)pyrimidine-5-carboxylic acid
将2-氯-4-((3-甲基-氧杂-3-基甲基)-氨基)-嘧啶-5-羧酸乙酯2a(3.8g，13.30mmol)溶解于四氢呋喃(20mL)，水(20mL)中，加入氢氧化锂(636.9mg,20.60mmol)，室温搅拌1h。TLC监测至反应完全，浓缩除去四氢呋喃，用6N盐酸调pH为5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚洗两次，收集固体得到标题化合物，2-氯-4-[((3-甲基-氧杂-3-基甲基)-氨基]-嘧啶-5-羧酸2b(白色固体，3.0g,产率87.54％)，直接进行下一步实验。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.87(t,1H),8.59(s,1H),4.43(d,2H),4.23(d,2H),3.68(d,2H),1.26(s,3H)。
第三步：
2-氯-9-(3-甲基-氧杂环丁-3-基甲基)-7,9-二氢嘌呤-8-酮(2c)
2-chloro-9-(3-methyl-oxetan-3-ylmethyl)-7,9-dihydro-purin-8-one
将2-氯-4-((3-甲基-氧杂-3-基甲基)-氨基)-嘧啶-5-羧酸2b(3.0g，58.21mmol)溶解于二甲基乙酰胺(40mL)，加入三乙胺(1.18g,11.64mmol)、叠氮磷酸二苯酯(3.2g,11.64mmol)，随后逐步升温至120℃搅拌1h。TLC监测至反应完全，将反应液倒入冰水中，过滤收集固体，用水洗3次，真空浓缩干燥得标题化合物，2-氯-9-(3-甲基-氧杂环丁-3-基甲基)-7,9-二氢嘌呤-8-酮2c(白色固体，2.0g，产率67.45％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ11.70(s,1H),8.15(s,1H),4.62(d,2H),4.22(d,2H),3.99(s,2H),1.23(s,3H)。
第四步：
2-氯-7-甲基-9-((3-甲基氧杂环丁-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(2d)
2-chloro-7-methyl-9-((3-methyloxetan-3-yl)methyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(3-甲基-氧杂环丁-3-基甲基)-7,9-二氢嘌呤-8-酮2c(1g，3.93mmol)溶解于二甲基甲酰胺(20mL)，在0℃下加入硫酸二甲酯(495mg，3.93mmol)和碳酸铯(1.92g,5.89mmol)，0℃搅拌1h。TLC监测至反应结束，将反应液倒入冰水中，有固体析出，过滤、收集固体得到标题化合物，2-氯-7-甲基-9-((3-甲基氧杂环丁-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮2d(白色固体，0.6g，产率56.87％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.40(d,1H),4.65(d,2H),4.25(d,2H),4.06(s,2H),3.41(s,3H),1.27(s,3H)。
第五步：
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-((3-甲基氧杂环丁-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物2)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-((3-methyloxetan-3-yl)methyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-7-甲基-9-(((3-甲基氧杂环丁-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮2d(0.6g，2.23mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基胺(297mg，2.01mmol)、碳酸铯(1.45g,4.46mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(204mg，0.2mmol)和2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘(277mg，0.4mmol)溶解于二氧六环，氮气保护并换气，在100℃搅拌1h。TLC监测至反应结束，将反应液倒入冰水中，收集固体，将固体用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷:甲醇(v/v)＝30/1)，得到标题化合物，7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-((3-甲基氧杂环丁-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮化合物2(白色固体，0.15g，产率17.66％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ9.08(s,1H),8.66(s,1H),8.37(s,1H),8.11(s,1H),7.70(s,1H),4.61(d,2H),4.17(d,2H),3.93(s,2H),3.35(s,2H),2.36(s,3H),1.22(s,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝381.10[M+1]。
实施例3
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-((四氢呋喃-2-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物3)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-((tetrahydrofuran-2-yl)methyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000131
Figure BDA0002876667980000141
第一步：
2-氯-4-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(3a)
ethyl 2-chloro-4-(((tetrahydrofuran-2-yl)methyl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(5g,22.6mmol)、碳酸钾(6.2g,44.8mmol)溶解于乙腈(20mL)，在0℃下加入碳-(四氢呋喃-2-基)甲胺(2.3g，22.6mmol)，在室温搅拌20h。TLC监测至反应结束，加水30mL，用乙酸乙酯60mL萃取三次，有机层用饱和食盐水洗一次，用无水硫酸钠干燥，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯，(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝10:1)，得到标题化合物，2-氯-4-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯3a(白色固体，4.7g，产率87％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.62(s,1H),8.57(s,1H),4.33-4.28(m,2H),4.04-4.01(m,1H),3.82-3.77(m,1H),3.68-3.58(m,1H),3.47-3.42(m,1H),1.96-1.81(m,2H),1.59-1.54(m,1H),1.32-1.29(m,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝286.20[M+1]。
第二步：
2-氯-4-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸(3b)
2-chloro-4-(((tetrahydrofuran-2-yl)methyl)amino)pyrimidine-5-carboxylic acid
将2-氯-4-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯3a(4.7g,16.4mmol)溶解于四氢呋喃10mL，水5mL中，加入氢氧化锂(788mg,32.8mmol)，室温搅拌1h。TLC监测至反应结束，四氢呋喃旋干，调pH为4-5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝10/1)洗两次，浓缩得到标题化合物，2-氯-4-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸3b(白色固体，3.8g,产率83％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ13.75(s,1H),8.74(t,1H),8.58(s,1H),4.40-4.01(m,1H),3.82-3.76(m,1H),3.69-3.58(m,2H),3.46-3.40(m,1H),1.95-1.90(m,1H),1.86-1.81(m,1H),1.58-1.53(m,1H)。
LC-MS m/z(ESI)＝259.20[M+1]。
第三步：
2-氯-9-((四氢呋喃-2-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(3c)
2-chloro-9-((tetrahydrofuran-2-yl)methyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-4-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸3b(3.8g，14.7mmol)溶解于二甲基乙酰胺(20mL)，加入三乙胺(1.8g，17.6mmol)、叠氮磷酸二苯酯(4.4g，16.2mmol)，随后逐步升温至120℃，搅拌1.5h。浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯，(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝5:1～1:10)，得到标题化合物，2-氯-9-((四氢呋喃-2-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮3c(白色固体，1.3g，产率46％)。
LC-MS m/z(ESI)＝255.20[M+1]。
第四步：
2-氯-7-甲基-9-((四氢呋喃-2-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(3d)
2-chloro-7-methyl-9-((tetrahydrofuran-2-yl)methyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-((四氢呋喃-2-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮3c(1.3g，5.1mmol)溶解于二甲基甲酰胺(10mL)，在0℃下加入硫酸二甲酯(644mg，5.1mmol)和碳酸铯(2.5g,7.6mmol)，0℃搅拌1h。TLC监测至反应结束，随后加入10mL水，有固体析出，过滤得到标题化合物，2-氯-7-甲基-9-((四氢呋喃-2-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮3d(白色固体，600mg，产率45％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.35(s,1H),4.24-4.20(m,1H),3.90-3.85(m,1H),3.79-3.73(m,2H),3.60(q,1H),3.37(s,3H),1.95-1.77(m,3H),1.70-1.63(m,1H)。
LC-MS m/z(ESI)＝268.20[M+1]。
第五步：
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-((四氢呋喃-2-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物3)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-((tetrahydrofuran-2-yl)methyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-7-甲基-9-((四氢呋喃-2-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮3d(200mg，0.7mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基胺(105mg，0.7mmol)、碳酸铯(456mg,1.4mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦-3,6-二甲氧基-2’,4’,6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯基-2-基)钯(II)(63.4mg，0.07mmol)溶解于二氧六环(3mL)，氮气保护并换气，在100℃搅拌4h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝30/1)，得到标题化合物，7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-((四氢呋喃-2-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮化合物3(白色固体，30mg，产率31％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ9.15(s,1H),8.67(s,1H),8.36(s,1H),8.09(s,1H),7.69(s,1H),4.27-4.22(m,3H),3.84-3.67(m,3H),3.62-3.57(m,1H),2.38(s,3H),1.94-1.77(m,3H),1.69-1.62(m,1H)。
LC-MS m/z(ESI)＝381.20[M+1]。
实施例4
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-((四氢呋喃-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物4)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-((tetrahydrofuran-3-yl)methyl)-7，9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000151
第一步：
2-氯-4-(((四氢呋喃-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(4a)
ethyl 2-chloro-4-(((tetrahydrofuran-3-yl)methyl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(5g,22.6mmol)、碳酸钾(6.2g,44.8mmol)溶解于乙腈(20mL)，在0℃下加入(四氢呋喃-3-基)甲胺(2.3g,22.6mmol)，在室温搅拌20h。TLC监测至反应结束，加水30mL，用乙酸乙酯60mL萃取三次，有机层用饱和食盐水洗一次，用无水硫酸钠干燥，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯，(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝10:1)，得到标题化合物，2-氯-4-(((四氢呋喃-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯4a(白色固体，4.4g,产率85％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.61-8.58(m,2H),4.31(q,2H),3.78-3.73(m,1H),3.69-3.58(m,2H),3.48-3.44(m,3H),2.57-2.53(m,1H),1.98-1.91(m,1H),1.62-1.58(m,1H),1.31(t,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝286.20[M+1]。
第二步：
2-氯-4-(((四氢呋喃-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸(4b)
2-chloro-4-(((tetrahydrofuran-3-yl)methyl)amino)pyrimidine-5-carboxylic acid
将2-氯-4-(((四氢呋喃-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯4a(4.4g,15.3mmol)溶解于四氢呋喃10mL，水5mL中，加入氢氧化锂(736mg,30.6mmol)，室温搅拌1h。TLC监测至反应结束，四氢呋喃旋干，调pH为4-5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝10/1)洗两次，浓缩得到标题化合物，2-氯-4-(((四氢呋喃-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸4b(白色固体，3.4g,产率80％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ13.75(s,1H),8.75(s,1H),8.57(s,1H),3.78-3.73(m,3H),3.47-3.43(m,3H),2.58-2.52(m,1H),1.98-1.89(m,3H),1.63-1.55(m,1H)。
LC-MS m/z(ESI)＝259.20[M+1]。
第三步：
2-氯-9-((四氢呋喃-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(4c)
2-chloro-9-((tetrahydrofuran-3-yl)methyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-4-((四氢呋喃-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸4b(3.4g，13.0mmol)溶解于二甲基乙酰胺(20mL)，加入三乙胺(1.58g,13mmol)、叠氮磷酸二苯酯(3.6g,13mmol)，随后逐步升温至120℃，搅拌1.5h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯，(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝5:1～1:10)，得到标题化合物，2-氯-9-((四氢呋喃-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮4c(白色固体，1.46g，产率50％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ11.65(s,1H),8.14(s,1H),3.80-3.74(m,3H),3.66-3.57(m,2H),3.52-3.49(m,1H),2.73-2.69(m,1H),1.98-1.89(m,1H),1.67-1.60(m,1H)。
LC-MS m/z(ESI)＝255.20[M+1]。
第四步：
2-氯-7-甲基-9-((四氢呋喃-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(4d)
2-chloro-7-methyl-9-((tetrahydrofuran-3-yl)methyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-((四氢呋喃-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮4c(1.6g，5.2mmol)溶解于二甲基甲酰胺(10mL)，在0℃下加入硫酸二甲酯(663mg，5.2mmol)和碳酸铯(2.4g,7.7mmol)，0℃搅拌1h。TLC监测至反应结束，随后加入10mL水，有固体析出，过滤得到标题化合物，2-氯-7-甲基-9-((四氢呋喃-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮4d(白色固体，1.2g，产率80％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.35(s,1H),3.81-3.75(m,3H),3.65-3.57(m,2H),3.52-3.49(m,1H),3.37(s,3H),2.73-2.70(m,1H),1.96-1.91(m,1H),1.67-1.61(m,1H)。
LC-MS m/z(ESI)＝268.20[M+1]。
第五步：
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-((四氢呋喃-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物4)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-((tetrahydrofuran-3-yl)methyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-((四氢呋喃-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮4d(200mg，0.7mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基胺(105mg，0.7mmol)、碳酸铯(456mg，1.4mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦-3,6-二甲氧基-2’,4’,6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯基-2-基)钯(II)(CAS：1470372-59-8)(63.4mg，0.07mmol)溶解于二氧六环(3mL)，氮气保护并换气，在100℃搅拌4h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝30/1)，得到标题化合物7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-((四氢呋喃-3-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮化合物4(白色固体，30mg，产率31％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ9.14(s,1H),8.69(s,1H),8.37(s,1H),8.09(s,1H),7.70(s,1H),3.78-3.72(m,3H),3.66-3.57(m,2H),3.53-3.50(m,1H),3.32(s,3H),2.79-2.72(m,1H),2.38(s,3H),1.96-1.87(m,1H),1.69-1.60(m,1H)。
LC-MS m/z(ESI)＝381.20[M+1]。
实施例5
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物5)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-((tetrahydro-2H-pyran-4-yl)methyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000171
第一步：
2-氯-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)氨基]嘧啶-5-羧酸乙酯(5a)
ethyl 2-chloro-4-(((tetrahydro-2H-pyran-4-yl)methyl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(5g,22.6mmol)、碳酸钾(6.2g,44.8mmol)溶解于乙腈(20mL)，在0℃下加入碳-(四氢吡喃-4-基)-甲胺(2.6g,22.6mmol)，在室温搅拌20h。TLC监测至反应结束，加水30mL，用乙酸乙酯60mL萃取三次，有机层用饱和食盐水洗一次，用无水硫酸钠干燥，浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯，(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝10:1)，得到标题化合物，2-氯-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)氨基]嘧啶-5-羧酸乙酯5a(白色固体，3.6g,产率70％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.60(s,1H),8.54(t,1H),4.31(q,2H),3.84(dd,2H),3.38(t,2H),3.29-3.23(m,2H),1.87-1.82(m,1H),1.55(dd,2H),1.30(t,3H),1.25-1.17(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝301.20[M+1]。
第二步：
2-氯-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸(5b)
2-chloro-4-(((tetrahydro-2H-pyran-4-yl)methyl)amino)pyrimidine-5-carboxylic acid将2-氯-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)氨基]嘧啶-5-羧酸乙酯5a(4.6g,15.3mmol)溶解于四氢呋喃10mL，水5mL中，加入氢氧化锂(736mg,30.6mmol)，室温搅拌1h。TLC监测至反应结束，四氢呋喃旋干，调PH为4-5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝10/1)洗两次，浓缩得到标题化合物，2-氯-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸5b(白色固体，4.0g，产率83％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ13.72(s,1H),8.71(s,1H),8.56(s,1H),3.84(dd,2H),3.37(t,2H),3.29-3.23(m,2H),1.87-1.80(m,1H),1.54(dd,2H),1.26-1.17(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝273.20[M+1]。
第三步：
2-氯-9-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(5c)
2-chloro-9-((tetrahydro-2H-pyran-4-yl)methyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)嘧啶-5-羧酸5b(4g，14.6mmol)溶解于二甲基乙酰胺(20mL)，加入三乙胺(2.9g,29mmol)、叠氮磷酸二苯酯(5.2g,19mmol)，随后逐步升温至120℃，搅拌1.5h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯，(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝5:1～1:10)，得到标题化合物，2-氯-9-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮5c(白色固体，1.46g，产率50％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ11.63(s,1H),8.13(s,1H),3.81(dd,2H),3.66(d,2H),3.25-3.15(m,2H),2.07-2.00(m,1H),1.50(dd,2H),1.29-1.21(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝269.20[M+1]。
第四步：
2-氯-7-甲基-9-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(5d)
2-chloro-7-methyl-9-((tetrahydro-2H-pyran-4-yl)methyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮5c(1.4g，5.4mmol)溶解于二甲基甲酰胺(10mL)，在0℃下加入硫酸二甲酯(688mg，5.4mmol)和碳酸铯(2.6g,8.0mmol)，0℃搅拌1h。TLC监测至反应结束，随后加入10mL水，有固体析出，过滤得到标题化合物，2-氯-7-甲基-9-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮5d(白色固体，1.2g，产率80％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.34(s,1H),3.81(dd,2H),3.70(d,2H),3.36(s,3H),3.25-3.19(m,2H),2.07-2.00(m,1H),1.51(dd,2H),1.29-1.19(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝283.20[M+1]。
第五步：
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物5)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-((tetrahydro-2H-pyran-4-yl)methyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-7-甲基-9-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮5d(200mg，0.7mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基胺(105mg，0.7mmol)、碳酸铯(456mg,1.4mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦-3,6-二甲氧基-2’,4’,6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯基-2-基)钯(II)(63.4mg，0.07mmol)溶解于二氧六环(3mL)，氮气保护并换气，在100℃搅拌4h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝30/1)，得到标题化合物，7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮化合物5(白色固体，12.6mg，产率3.2％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ9.23(s,1H),9.21(s,1H),8.51(s,1H),8.12(s,1H),7.79(s,1H),3.84-3.81(m,2H),3.65(d,2H),3.32(s,3H),3.26-3.20(m,2H),2.40(s,3H),2.10-2.04(m,1H),1.50(d,2H),1.28-1.17(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝395.20[M+1]。
实施例6
9-(3-羟基环戊基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-
8H-嘌呤-8-酮(化合物6)
9-(3-hydroxycyclopentyl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000191
第一步：
(3-羟基环戊基)氨基甲酸叔丁酯(6b)
tert-butyl(3-oxocyclopentyl)carbamate
将(3-氧代环戊基)氨基甲酸叔丁酯6a(10g，50.19mmol)溶解于60mL THF中，冰浴下缓慢加入硼氢化钠(2.85g，75.28mmol)。3h后，TLC监测到反应结束。缓慢加入饱和NaCl溶液至没有气泡出现，加入EA进行萃取，收集有机相，旋蒸除去有机溶剂，得到标题化合物，(3-羟基环戊基)氨基甲酸叔丁酯6b(黄色油状液体，10.10g，产率99％)。
LC-MS m/z(ESI)＝202.20[M+1]。
第二步：
3-氨基环戊烷-1-醇盐酸盐(6c)
3-aminocyclopentan-1-ol hydrochloride
将(3-羟基环戊基)氨基甲酸叔丁酯6b(10.10g，50.18mmol)加入于20mL 1,4-二氧六环溶液中，常温搅拌至完全溶解，将反应液置于冰浴下，缓慢加入4M的盐酸-1,4二氧六环溶液(8.75g，239.87mmol)，继续搅拌，出现少量固体，2h后，TLC监测反应结束，过滤并浓缩得到标题化合物，3-氨基环戊烷-1-醇盐酸盐6c(黑色油状液体，6.91g，产率100％)。
LC-MS m/z(ESI)＝138.10[M+1]。
第三步：
2-氯-4-((3-羟基环戊基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(6d)
ethyl 2-chloro-4-((3-hydroxycyclopentyl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将3-氨基环戊烷-1-醇盐酸盐6c(6.91g，50.22mmol)和2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯(13.32g，60.26mmol)加入75mL ACN中，常温搅拌至2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯溶解后，冰浴下，缓慢加入碳酸钾(17.35g，125.54mmol)。常温搅拌10h后，反应完全，过滤反应液，收集有机相，用EA(3*100mL)萃取，收集并浓缩有机相，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1/1)。得到标题化合物，2-氯-4-((3-羟基环戊基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯6d(黄色油状液体，7.78g，产率54.2％)。
LC-MS m/z(ESI)＝286.10[M+1]。
第四步：
2-氯-4-((3-羟基环戊基)氨基)嘧啶-5-羧酸(6e)
2-chloro-4-((3-hydroxycyclopentyl)amino)pyrimidine-5-carboxylic acid
将2-氯-4-((3-羟基环戊基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯6d(7.78g，27.23mmol)溶于50mL THF中，将氢氧化锂(1.3g，54.46mmol)溶于50mL水中，冰浴下，将氢氧化锂水溶液缓慢加入THF溶液中，出现浑浊，2h后，TLC监测反应结束，THF旋干，加入盐酸溶液调节pH至4，过滤收集固体，滤液加入EA(3*50mL)萃取。将有机相于滤渣混合浓缩，得到标题化合物，2-氯-4-((3-羟基环戊基)氨基)嘧啶-5-羧酸6e(淡黄色固体，6.78g，产率96％)。
LC-MS m/z(ESI)＝258.10[M+1]。
第五步：
2-氯-9-(3-羟基环戊基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(6f)
2-chloro-9-(3-hydroxycyclopentyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
冰浴下，将2-氯-4-((3-羟基环戊基)氨基)嘧啶-5-羧酸6e(6.0g，23.29mmol)溶解于60mL DMAc中，缓慢加入叠氮磷酸二苯酯(6.41g，23.29mmol),然后缓慢加入三乙胺(2.36g，23.29mmol)。常温搅拌1h后，90℃油浴加热5h，TLC监测反应结束，将反应液滴入200mL水中，析出固体，加入EA(3*100mL)萃取，收集有机相，用饱和氯化铵溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到标题化合物，2-氯-9-(3-羟基环戊基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮6f(黄色油状液体，5.47g，产率92％)，。
LC-MS m/z(ESI)＝255.10[M+1]。
第六步：
2-氯-9-(3-羟基环戊基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(6g)
2-chloro-9-(3-hydroxycyclopentyl)-7-methyl-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(3-羟基环戊基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮6f(2.5g，9.82mmol)和碳酸铯(4.16g，12.76mmol)溶于40mL DMF中，冰浴搅拌10min后，缓慢加入硫酸二甲酯(1.24g，9.82mmol)，1h后，TLC监测反应完全。向反应液中加入100mL水，析出固体，加入EA(3*50mL)进行萃取，用饱和食盐水洗涤有机相，收集有机相并浓缩，将残留物进行柱层析纯化，得到标题化合物，2-氯-9-(3-羟基环戊基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮6g(橙色固体，900mg，产率34％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(s,1H),4.90(d,1H),4.71–4.62(m,1H),4.16–4.08(m,1H),3.35(s,3H),2.29–2.23(m,1H),2.17–2.10(m,2H),1.92–1.77(m,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝269.10[M+1]。
第七步：
9-(3-羟基环戊基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物6)
9-(3-hydroxycyclopentyl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(3-羟基环戊基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮6g(300mg，1.12mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(165mg，1.12mmol)、碳酸铯(727mg，2.23mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦-3,6-二甲氧基-2’,4’,6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯基-2-基)钯(II)(101mg，0.11mmol)溶解于1,4-二氧六环(5mL)，氮气保护换气，在110℃搅拌4.5h，TLC监测至反应结束。浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20/1)，并经过Pre-HPLC得到标题化合物，9-(3-羟基环戊基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物6，即化合物6-1和化合物6-2)，两个白色固体，化合物6-1(69mg，产率16％，RT＝5.15min，dr＝99.11％)，化合物6-2(48mg，产率11％，RT＝5.53min，dr＝99.04％)，Pre-HPLC(OZ),流动相:CO2/异丙醇＝70/30；柱温:35℃；柱压:80bar；流速:1mL/min；检测器信号通道:220nm@4nm；二极管阵列检测器波长:200～400nm。
化合物6-1：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.10(s,1H),8.64(s,1H),8.38(s,1H),8.10(s,1H),7.70(s,1H),4.97–4.89(m,1H),4.58(d,1H),4.23(s,1H),3.29(s,3H),2.38(s,3H),2.33–2.31(m,1H),2.14–2.06(m,2H),1.81–1.76(m,1H),1.49–1.46(m,1H),0.86–0.82(m,1H)。
化合物6-2：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.10(s,1H),8.64(s,1H),8.38(s,1H),8.10(s,1H),7.70(s,1H),4.97–4.89(m,1H),4.58(d,1H),4.24(s,1H),3.29(s,3H),2.38(s,3H),2.31–2.24(m,1H),2.05–1.99(m,2H),1.81–1.76(m,1H),1.50–1.44(m,1H),0.86–0.82(m,1H)。
LC-MS m/z(ESI)＝383.40[M+1]。
实施例7
1-甲基-4-(7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-碳腈(化合物7)
1-methyl-4-(7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)cyclohexane-1-carbonitrile
Figure BDA0002876667980000211
Figure BDA0002876667980000221
第一步：
1-甲基-4-氧代环己烷-1-碳腈(7b)
2-1-methyl-4-oxocyclohexane-1-carbonitrile
将1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-碳腈7a(5.00g,29.9mmol)溶于THF(60mL)中，0℃下缓慢滴加双三氟甲烷磺酰亚胺锂(9.87mL,34.38mmol)搅拌反应，1h后缓慢加入碘甲烷(4.24g,29.9mmol)再搅拌反应1h。TLC监测至反应结束，用饱和氯化铵溶液以及溴水和乙酸乙酯萃取2次，无水硫酸镁干燥，过滤浓缩有机层得中间体8-甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-碳腈，再加入THF(60mL)溶解，反应液中加入3M HCl(60mL)，加热至50℃反应5h。TLC监测至反应结束，冷却至室温后用3M NaOH调节pH值至7-8，加入二氯甲烷萃取3次，无水硫酸钠干燥，浓缩有机相得标题化合物，1-甲基-4-氧代环己烷-1-碳腈7b(黄色液体，3.48g，产率84.84％)。
LC-MS m/z(ESI)＝138.10[M+1]。
第二步：
4-氨基-1-甲基环己烷-1-碳腈(7c)
4-amino-1-methylcyclohexane-1-carbonitrile
将1-甲基-4-氧代环己烷-1-碳腈7b(3.48g，25.37mmol)溶于无水甲醇(50mL)中，常温搅拌下加入甲酸铵(16.00g,253.70mmol)反应4h，再加入氰基硼氢化钠(1.88g,30.44mmol)搅拌反应3h，TLC监测至反应结束，加入2N HCl调节pH值至1-2搅拌反应0.5小时后加入乙酸乙酯萃取2次，再用2N NaOH溶液调节pH值至10左右，二氯甲烷萃取3次，无水硫酸镁干燥，浓缩有机相得标题化合物，4-氨基-1-甲基环己烷-1-碳腈7c(淡黄色液体，2.80g，产率79.85％)。
LC-MS m/z(ESI)＝139.10[M+1]。
第三步：
2-氯-4-((4-氰基-4-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(7d)
ethyl 2-chloro-4-((4-cyano-4-methylcyclohexyl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯-5-嘧啶甲酸乙酯1a(6.72g,30.39mmol)溶于乙腈(30mL)中，0℃搅拌下加入碳酸钾(8.40g，60.78mmol)，再缓慢滴加4-氨基-1-甲基环己烷-1-碳腈7c(2.80g，20.26mmol)的乙腈溶液(10mL)搅拌反应1h，TLC监测至反应结束，硅藻土过滤后用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝20:1)纯化得标题化合物，2-氯-4-((4-氰基-4-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯7d(白色固体，2.63g，产率40.22％)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.68(d,1H),4.38(p,2H),2.23–1.82(m,4H),1.79–1.49(m,6H),1.46–1.36(m,6H)。
LC-MS m/z(ESI)＝323.10[M+1]。
第四步：
2-氯-4-((4-氰基-4-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸(7e)
2-chloro-4-((4-cyano-4-methylcyclohexyl)amino)pyrimidine-5-carboxylicacid
将2-氯-4-((4-氰基-4-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯7d(2.63g，8.15mmol)溶解于四氢呋喃/水(20mL/10mL)中，加入氢氧化锂一水合物(1.00g，24.45mmol)，常温搅拌反应2h，TLC监测至反应结束，浓缩蒸发掉四氢呋喃后加入2N HCl调节pH至3-4左右，有白色固体析出，过滤，滤饼用水以及石油醚/乙酸乙酯(v/v＝10/1)洗两次得标题化合物，2-氯-4-((4-氰基-4-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸7e(白色固体，2.20g，产率91.59％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.75(s,1H),8.59(s,1H),8.52(d,1H),3.97(m,1H),2.06–1.92(m,4H),1.63–1.47(m,4H),1.35(s,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝295.10[M+1]。
第五步：
4-(2-氯-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基环己烷-1-碳腈(7f)
4-(2-chloro-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)-1-methylcyclohexane-1-carbonitrile
将2-氯-4-((4-氰基-4-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸7e(2.20g，7.46mmol)用N,N-二甲基乙酰胺(15mL)溶解，常温搅拌下加入三乙胺(1.04mL,7.46mmol)和叠氮磷酸二苯酯(1.61mL,7.46mmol)反应2h后，升温至110℃回流反应2.5h。TLC监测至反应结束，加入水和乙酸乙酯萃取3次，浓缩有机层硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝80/1)，得到标题化合物，4-(2-氯-8-氧代-8,9-二氢-7h-嘌呤-9-基)-1-甲基环己烷-1-碳腈7f(白色固体，0.9g，产率41.35％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(s,1H),8.13(s,1H),4.31–4.20(m,1H),2.45–2.33(m,2H),2.01–1.94(m,4H),1.71–1.64(m,2H),1.49(s,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝292.10[M+1]。
第六步：
4-(2-氯-7-甲基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基环己烷-1-碳腈(7g)
4-(2-chloro-7-methyl-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)-1-methylcyclohexane-1-carbonitrile
将4-(2-氯-8-氧代-8,9-二氢-7h-嘌呤-9-基)-1-甲基环己烷-1-碳腈7f(0.90g,3.08mmol)用N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶解，0℃搅拌下加入硫酸二甲酯(0.29mL,3.08mmol)和碳酸铯(1.51g,4.62mmol)反应2h。TLC监测至反应结束，把反应液缓慢滴加到冰水中搅拌，析出白色固体，用水和石油醚洗3次过滤得到标题化合物4-(2-氯-7-甲基-8-氧代-8,9-二氢-7h-嘌呤-9-基)-1-甲基环己烷-1-碳腈7g(白色固体，0.85g，产率90.26％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(s,1H),4.35–4.20(m,1H),3.36(s,3H),2.48–2.31(m,2H),2.06–1.95(m,3H),1.83–1.76(m,1H),1.71–1.57(m,2H),1.48(s,1H),1.36(s,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝306.10[M+1]。
第七步：
1-甲基-4-(7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-碳腈(化合物7-1和化合物7-2)
1-methyl-4-(7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)cyclohexane-1-carbonitrile
将4-(2-氯-7-甲基-8-氧代-8,9-二氢-7h-嘌呤-9-基)-1-甲基环己烷-1-碳腈7g(0.15g,0.49mmol)用1,4-二氧六环(12mL)溶解，常温搅拌下加入7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(0.11g,0.73mmol)、碳酸铯(0.24g,0.73mmol)、BrettPhos-G3-Pd(0.05g,0.04mmol)，氮气保护并换气，升温至110℃回流反应4h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝30/1)，得标题化合物7(即化合物7-1和化合物7-2)，两个白色固体，化合物7-1(19mg，产率9.26％(结构猜测)RT＝5.068min，dr％:99.85％)、化合物7-2(28mg，产率13.64％(结构猜测)RT＝5.900min，DR％:dr％：99.38％)。Pre-HPLC(OZ),流动相:CO2/(50％异丙醇/乙腈溶液中加入0.3％二乙胺)＝60/40；柱温:35℃；柱压:80bar；流速:1mL/min；检测器信号通道:215nm@4.8nm；二极管阵列检测器波长:200～400nm。
化合物7-11H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(s,1H),8.73(s,1H),8.40(s,1H),8.11(s,1H),7.73(s,1H),4.19–4.10(m,1H),3.29(s,3H),2.32(s,3H),2.29–2.20(m,2H),1.90–1.75(m,4H),1.58–1.50(m,2H),0.84(s,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝418.20[M+1]。
化合物7-21H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.06(s,1H),8.54(s,1H),8.34(s,1H),8.09(s,1H),7.67(s,1H),4.22–4.13(m,1H),3.30(s,3H),2.47–2.41(m,2H),2.36(s,3H),2.03–1.95(m,2H),1.80–1.73(m,2H),1.55–1.45(m,2H),1.33(s,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝418.20[M+1]。
实施例8
反-4-(7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-6基)氨基)-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-腈(化合物8)
trans-4-(7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)cyclohexane-1-carbonitrile
Figure BDA0002876667980000241
Figure BDA0002876667980000251
第一步：
叔丁基(反-4-氨甲酰环己基)氨基甲酸酯(8b)
tert-butyl(trans-4-carbamoylcyclohexyl)carbamate
反-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己烷-1-羧酸8a(5.0g,20.5mmol)、O-(7-氮杂苯并三氮唑基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(9.4g,24.7mmol)溶解于二氯甲烷(15mL)，在0℃下搅拌20min，加入N,N二异丙基乙胺(10.5g,82mmol)及氯化铵(3.3g,61.5mmol)，在室温搅拌4h。TLC监测至反应结束，向反应液中加入水10mL，分离有机相，饱和盐水洗一次，用无水硫酸钠干燥并用硅胶拌样，用正相过柱仪过出产物，浓缩得到标题化合物叔丁基(反-4-氨甲酰环己基)氨基甲酸酯8b(白色固体，4.4g,产率83％)。
LC-MS m/z(ESI)＝243.30[M+1]。
第二步：
叔丁基(反-4-氰基环己基)氨基甲酸酯(8c)
tert-butyl(trans-4-cyanocyclohexyl)carbamate
叔丁基(反-4-氨甲酰环己基)氨基甲酸酯8b(4.4g,18.0mmol)溶解于70mL吡啶中，冰浴降温，然后将三氯氧磷(7.7mL)滴加进反应液中，冰浴搅拌1h。TLC监测反应完全，在冰浴下加入水20mL，用乙酸乙酯萃取4次，然后用酸水洗有机相7次，最后用饱和盐水洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干得到化合物叔丁基(反-4-氰基环己基)氨基甲酸酯8c(黄色固体，1.2g,产率30％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ6.80(m,1H),3.24-3.22(m,1H),2.63-2.55(m,1H),1.99-1.95(m,2H),1.77-1.73(m,2H),1.56-1.46(m,2H),1.36(s,9H),1.21-1.11(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝225.30[M+1]。
第三步：
反-4-氨基环己烷-1-碳腈(8d)
trans-4-aminocyclohexane-1-carbonitrile
将叔丁基(反-4-氰基环己基)氨基甲酸酯8c(1.2g，9.6mmol)溶解于盐酸乙酸乙酯溶液中(20mL)，加热至45℃，搅拌2h。TLC监测至反应结束，有白色固体析出，浓缩干燥得到标题化合物反-4-氨基环己烷-1-碳腈8d(白色固体，660mg，产率60％)。
LC-MS m/z(ESI)＝125.30[M+1]。
第四步：
2-氯-4-(反-4-氰基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(8e)
ethyl 2-chloro-4-(trans-4-cyanocyclohexyl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(1.4g,5.35mmol)、碳酸钾(1.4g,10.7mmol)溶解于乙腈(10mL)，在0℃下加入反-4-氨基环己烷-1-碳腈8d(660mg,5.35mmol)，在室温搅拌20h。TLC监测至反应结束，向反应液中加入水和乙酸乙酯萃取三次，饱和盐水洗一次，用无水硫酸钠干燥并用硅胶柱色谱分离(正己烷/乙酸乙酯(v/v)＝10:1)纯化，得到标题化合物2-氯-4-(反-4-氰基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯8e(白色固体，810mg，产率62％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.62(s,1H),8.27(d,1H),4.30(q,2H),4.04-3.96(m,1H),4.04-3.67(m,1H),2.76-2.70(m,1H),2.04-2.00(m,2H),1.96-1.92(m,2H),1.72-1.62(m,2H),1.47-1.37(m,2H),1.30(t,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝310.20[M+1]。
第五步：
2-氯-4-((反-4-氰基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸(8f)
2-chloro-4-((trans-4-cyanocyclohexyl)amino)pyrimidine-5-carboxylicacide
将2-氯-4-((反-4-氰基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯8e(810mg,2.6mmol)溶解于四氢呋喃/水(4mL/4mL)中，加入氢氧化锂(247mg,5.2mmol)，室温搅拌1h。TLC监测至反应结束，旋干四氢呋喃，调pH至4-5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝10/1)洗两次，浓缩得到标题化合物2-氯-4-((反-4-氰基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸8f(白色固体，790mg，产率86％)
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.58(s,1H),8.49(d,1H),4.01-3.87(m,1H),2.76-2.71(m,1H),2.03-1.93(m,4H),1.72-1.63(m,2H),1.44-1.35(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝282.30[M+1]。
第六步：
反-4-(2-氯-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-碳腈(8g)
trans-4-(2-chloro-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)cyclohexane-1-carbonitrile
将2-氯-4-(反-4-氰基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸8f(730mg，2.6mmol)溶解于二甲基乙酰胺(10mL)，加入三乙胺(263mg,2.6mmol)、叠氮磷酸二苯酯(715mg,2.6mmol)，随后逐步升温至110℃,搅拌1.5h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:10)，得到标题化合物反-4-(2-氯-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-碳腈8g(白色固体，553mg，产率68％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ11.63(s,1H),8.12(s,1H),4.23-4.16(m,1H),2.78-2.72(m,1H),2.25-2.12(m,4H),1.82-1.68(m,4H)。
LC-MS m/z(ESI)＝278.30[M+1]。
第七步：
反-4-(2-氯-7-甲基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-碳腈(8h)
trans-4-(2-chloro-7-methyl-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)cyclohexane-1-carbonitrile
将反-4-(2-氯-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-碳腈8g(553mg，2mmol)溶解于二甲基甲酰胺(5mL)，在0℃下加入硫酸二甲酯(252mg，2mmol)和碳酸铯(977mg,3mmol)，0℃搅拌30min。TLC监测至反应结束，向反应液中加入水10mL，有固体析出，过滤得到标题化合物反-4-(2-氯-7-甲基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-碳腈8h(黄色固体，420mg，产率72％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.34(s，1H)，4.28-4.21(m，1H)，2.79-2.72(m，1H)，2.22-2.13(m,4H),1.82-1.70(m,4H)。
LC-MS m/z(ESI)＝292.30[M+1]。
第八步：
反-4-(7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-6基)氨基)-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-腈(化合物8)
trans-4-(7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)cyclohexane-1-carbonitrile
将反-4-(2-氯-7-甲基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-腈8h(200mg，0.68mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(101mg，0.68mmol)、碳酸铯(391mg,1.2mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦-3,6-二甲氧基-2’,4’,6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯基-2-基)钯(II)(62mg，0.068mmol)溶解于二氧六环3mL中，氮气保护并换气，在110℃搅拌4h，经TLC监测反应完全，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝60/1)，并通过Pre-HPLC得到标题化合物，反-4-(7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-6基)氨基)-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-腈化合物8(白色固体，57mg，产率20.2％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ9.22(s,1H),8.65(s,1H),8.38(s,1H),8.11(s,1H),7.72(s,1H),4.25-4.19(m,1H),3.30(s,3H),2.67-2.61(m,1H),2.41(s,3H),2.32-2.24(m,2H),2.15-2.12(m,2H),1.82-1.79(m,2H),1.73-1.64(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝404.20[M+1]。
实施例9
顺-4-(7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-6基)氨基)-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-腈(化合物9)
cis-4-(7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)cyclohexane-1-carbonitrile
Figure BDA0002876667980000271
Figure BDA0002876667980000281
第一步：
叔丁基(顺-4-氨甲酰环己基)氨基甲酸酯(9b)
tert-butyl(cis-4-carbamoylcyclohexyl)carbamate
顺-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己烷-1-羧酸9a(5.0g,20.5mmol)、O-(7-氮杂苯并三氮唑基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(9.4g,24.7mmol)溶解于二氯甲烷(15mL)，在0℃下搅拌20min，加入N,N二异丙基乙胺(10.5g,82mmol)及氯化铵(3.3g,61.5mmol)，在室温搅拌4h。TLC监测至反应结束，向反应液中加入水10mL，分离有机相，饱和盐水洗一次，用无水硫酸钠干燥并用硅胶拌样，用正相过柱仪过出产物，浓缩得到标题化合物叔丁基(顺-4-氨甲酰环己基)氨基甲酸酯9b(白色固体，3.5g,产率71％)。
LC-MS m/z(ESI)＝243.30[M+1]。
第二步：
叔丁基(顺-4-氰基环己基)氨基甲酸酯(9c)
tert-butyl(cis-4-cyanocyclohexyl)carbamate
叔丁基(顺-4-氨甲酰环己基)氨基甲酸酯9b(3.5g,14.4mmol)溶解于70mL吡啶中，冰浴降温，然后将三氯氧磷(7.7mL)滴加进反应液中，冰浴搅拌1h。TLC监测反应完全，在冰浴下加入水20mL，用乙酸乙酯萃取4次，然后用酸水洗有机相7次，最后用饱和盐水洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干得到化合物叔丁基(顺-4-氰基环己基)氨基甲酸酯9c(黄色固体，1.5g,产率36％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ6.90(d,1H),3.27-3.25(m,1H),3.01-2.99(m,1H),1.86-1.81(m,2H),1.71-1.67(m,2H),1.62-1.54(m,2H),1.43-1.40(m,1H),1.37(s,3H),1.34-1.32(m,1H)。
LC-MS m/z(ESI)＝225.30[M+1]。
第三步：
顺-4-氨基环己烷-1-碳腈(9d)
cis-4-aminocyclohexane-1-carbonitrile
将叔丁基(反-4-氰基环己基)氨基甲酸酯9c(1.5g，6.7mmol)溶解于盐酸乙酸乙酯溶液中(20mL)，加热至45℃，搅拌2h。TLC监测至反应结束，有白色固体析出，浓缩干燥得到标题化合物顺-4-氨基环己烷-1-碳腈9d(白色固体，1g，产率90％)。
LC-MS m/z(ESI)＝125.30[M+1]。
第四步：
2-氯-4-(顺-4-氰基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(9e)
ethyl 2-chloro-4-(cis-4-cyanocyclohexyl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(1.48g,6.7mmol)、碳酸钾(1.38g,10mmol)溶解于乙腈(10mL)，在0℃下加入顺-4-氨基环己烷-1-碳腈9d(1g,6.7mmol)，在室温搅拌20h。TLC监测至反应结束，向反应液中加入水和乙酸乙酯萃取三次，饱和盐水洗一次，用无水硫酸钠干燥并用硅胶柱色谱分离(正己烷/乙酸乙酯(v/v)＝10:1)纯化，得到标题化合物2-氯-4-(顺-4-氰基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯9e(白色固体，589mg，产率60％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.63(s,1H),8.38(d,1H),4.35-4.29(m,2H),4.07-3.99(m,1H),3.11-3.09(m,1H),1.92-1.73(m,6H),1,63-1.54(m,2H),1.47(t,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝310.20[M+1]。
第五步：
2-氯-4-((顺-4-氰基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸(9f)
2-chloro-4-((cis-4-cyanocyclohexyl)amino)pyrimidine-5-carboxylicacide
将2-氯-4-((顺-4-氰基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯9e(589mg,1.9mmol)溶解于四氢呋喃/水(4mL/4mL)中，加入氢氧化锂(160mg,3.8mmol)，室温搅拌1h。TLC监测至反应结束，旋干四氢呋喃，调pH至4-5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝10/1)洗两次，浓缩得到标题化合物2-氯-4-((顺-4-氰基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸9f(白色固体，490mg，产率86％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ13.83(s,1H),8.62-8.60(d,2H),4.05-3.98(m,1H),3.10(t,1H),1.94-1.73(m,6H),1.60-1.56(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝282.30[M+1]。
第六步：
顺-4-(2-氯-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-碳腈(9g)
cis-4-(2-chloro-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)cyclohexane-1-carbonitrile
将2-氯-4-(顺-4-氰基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸9f(490mg，1.75mmol)溶解于二甲基乙酰胺(10mL)，加入三乙胺(176mg,1.75mmol)、叠氮磷酸二苯酯(481mg,1.75mmol)，随后逐步升温至110℃,搅拌1.5h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:10)，得到标题化合物顺-4-(2-氯-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-碳腈9g(白色固体，436mg，产率68％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ11.64(s,1H),8.13(s,1H),4.23-4.16(m,1H),3.22-3.16(m,1H),2.44-2.39(m,2H),2.00(d,2H),1.79-1.72(m,4H)。
LC-MS m/z(ESI)＝278.30[M+1]。
第七步：
顺-4-(2-氯-7-甲基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-碳腈(9h)
cis-4-(2-chloro-7-methyl-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)cyclohexane-1-carbonitrile
将顺-4-(2-氯-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-碳腈9g(1.6g，5.77mmol)溶解于二甲基甲酰胺(10mL)，在0℃下加入硫酸二甲酯(728mg，5.77mmol)和碳酸铯(2.8g,8.65mmol)，0℃搅拌30min。TLC监测至反应结束，向反应液中加入水10mL，有固体析出，过滤得到标题化合物顺-4-(2-氯-7-甲基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-碳腈9h(黄色固体，1.25g，产率75％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.35(s,1H),4.28-4.19(m,1H),3.34(s,3H),3.23-3.17(m,1H),2.46-2.39(m,2H),2.00(d,2H),1.80-1.73(m,4H)。LC-MS m/z(ESI)＝292.30[M+1]第七步：
顺-4-(7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-6基)氨基)-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-腈(化合物9)
cis-4-(7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)cyclohexane-1-carbonitrile
将顺-4-(2-氯-7-甲基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-腈9h(200mg，0.68mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(101mg，0.68mmol)、碳酸铯(391mg,1.2mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦-3,6-二甲氧基-2’,4’,6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯基-2-基)钯(II)(62mg，0.068mmol)溶解于二氧六环3mL中，氮气保护并换气，在110℃搅拌4h。浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝60/1)，并通过Pre-HPLC得到标题化合物顺-4-(7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-6基)氨基)-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)环己烷-1-腈化合物9(白色固体,131mg，产率41.2％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ9.08(s,1H),8.57(s,1H),8.34(s,1H),8.09(s,1H),7.67(s,1H),4.23-4.15(m,1H),3.30(s,3H),3.14(s,1H),2.51-2.49(m,2H),2.36(s,3H),1.98(d,2H),1.76(d,2H),1.71-1.66(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝404.20[M+1]。
实施例10
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-(1-甲基哌啶-4-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物10)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-(1-methylpiperidin-4-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000301
第一步：
4-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯(10b)
ethyl 4-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)amino)-2-chloropyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(5g,22.6mmol)、碳酸钾(6.2g,45.2mmol)溶解于乙腈(20mL)，在0℃下加入(4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯10a(4.5g,22.6mmol)，在室温搅拌20h,TLC监测至反应完全，加水30mL，用乙酸乙酯60mL萃取三次，饱和盐水洗一次，用无水硫酸钠干燥后，经硅胶柱色谱分离提纯(正己烷:乙酸乙酯＝10:1)，得到标题化合物，4-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯10b(白色固体,8.2g,产率95％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.63(s,1H),8.32(d,1H),4.33-4.28(m,2H),4.17-4.14(m,1H),3.85(d,2H),2.94(s,2H),1.88-1.80(m,2H),1.51-1.44(m,2H),1.41(s,9H),1.32-1.29(m,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝385.10[M+1]。
第二步：
4-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸(10c)
4-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)amino)-2-chloropyrimidine-5-carboxylic acid
将4-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯10b(8.2g，21.3mmol)溶解于四氢呋喃10mL，水5mL中，加入氢氧化锂(1.8g,42.7mmol)，室温搅拌1h,TLC监测至反应完全，四氢呋喃旋干，调pH为4-5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝10/1)洗两次，浓缩得到标题化合物，4-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸10c(白色固体,7g，产率86％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.59(s,1H),8.54(d,1H),4.20-4.10(m,1H),3.87-3.84(m,2H),2.96(s,3H),1.91-1.73(m,3H),1.41(s,9H)。
LC-MS m/z(ESI)＝357.10[M+1]。
第三步
4-(2-氯-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(10d)
tert-butyl 4-(2-chloro-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)piperidine-1-carboxylate
将4-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸10c(7g，19.6mmol)溶解于二甲基乙酰胺(10mL)，加入三乙胺(1.96g,19.6mmol)、叠氮磷酸二苯酯(5.4g,19.6mmol)，随后逐步升温至110℃，搅拌1.5h，TLC监测至反应完全，浓缩反应液，经硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝5:1～1:10)，得到标题化合物，4-(2-氯-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯10d(白色固体,6.4g，产率87％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.14(s,1H),4.41-4.33(m,1H),4.06(d,2H),2.88(s,2H),2.30-2.20(m,2H),1.84-1.71(m,2H),1.43(s,9H)。
LC-MS m/z(ESI)＝354.10[M+1]。
第四步
4-(2-氯-7-甲基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(10e)
tert-butyl4-(2-chloro-7-methyl-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)piperidine-1-carboxylate
将4-(2-氯-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯10d(6.4g，18.1mmol)溶解于二甲基甲酰胺(10mL)，在0℃下加入硫酸二甲酯(2.28g，18.1mmol)和碳酸铯(8.5g,27.1mmol)，0℃搅拌30min，TLC监测至反应完全，随后加入30mL水，有固体析出，过滤得到标题化合物，4-(2-氯-7-甲基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯10e(白色固体，5.4g，产率79％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.36(s,1H),4.46-4.37(m,1H),4.05(d,2H),3.35(s,3H),2.87(s,2H),2.33-2.19(m,2H),1.74-1.72(m,2H),1.43(s,9H)。
LC-MS m/z(ESI)＝368.10[M+1]。
第五步
2-氯-7-甲基-9-(哌啶-4-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(10f)
2-chloro-7-methyl-9-(piperidin-4-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将4-(2-氯-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯10e(2g，5.4mmol)加入到100mL单口瓶中，然后常温加入盐酸乙酸乙酯溶液2M(10mL)，常温搅拌4h，TLC监测至反应完全，浓缩反应液，得到标题化合物，2-氯-7-甲基-9-(哌啶-4-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的盐酸盐10f(白色固体，1.4g，产率91％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.39(s,1H),6.42(s,1H),4.59-4.53(m,1H),3.39(s,2H),3.36(s,3H),3.16-3.04(m,2H),2.62-2.50(m,2H),2.07-1.93(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝268.10[M+1]。
第六步：
2-氯-7-甲基-9-(1-甲基哌啶-4-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(10g)
2-chloro-7-methyl-9-(1-methylpiperidin-4-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-7-甲基-9-(哌啶-4-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮10f(1.4g,5.4mmol)溶解于甲醇(20mL)，加入4A分子筛100mg，然后加入多聚甲醛(783mg,27mmol)，在室温搅拌6h,然后加入氰基硼氢化钠(1g,16.2mmol)，TLC监测至反应完全，过滤并浓缩得到标题化合物，2-氯-7-甲基-9-(1-甲基哌啶-4-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮10g(白色固体，600mg,产率62％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ8.35(s,1H),4.21-4.13(m,1H),3.35(s,3H),2.92(d,2H),2.45-2.41(m,2H),2.23(s,3H),2.09-2.03(m,2H),1.70-1.67(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝282.10[M+1]。
第七步：
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-(1-甲基哌啶-4-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物10)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-(1-methylpiperidin-4-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-7-甲基-9-(1-甲基哌啶-4-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮10g(150mg，0.53mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(79mg，0.53mmol)、碳酸铯(518mg,1.59mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦-3,6-二甲氧基-2’,4’,6'-三异丙基-1,1'-联苯))2'-氨基-1,1'-联苯基-2-基)钯(II)(48mg，0.053mmol)溶解于二氧六环(3mL)，氮气保护并换气，在100℃搅拌4h。TLC监测至反应完全，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20/1)，并经过Pre-HPLC得到标题化合物，7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-(1-甲基哌啶-4-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮化合物10(白色固体，20mg,产率18％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ9.23(s,1H),8.33(s,1H),8.29(s,1H),8.12(s,1H),7.69(s,1H),4.53-4.33(m,1H),3.50(d,2H),2.86-2.77(m,4H),2.43(s,3H),1.99(d,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝394.20[M+1]。
实施例11
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-(哌啶-4-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物11)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-(piperidin-4-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000321
Figure BDA0002876667980000331
第一步：
叔丁基4-(7-甲基-2-(((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-8-氧代-7,8-二氢-
9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-甲酸(11a)
tert-butyl4-(7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)piperidine-1-carboxylate
将4-(2-氯-7-甲基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯10e(200mg，0.54mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(148mg，0.54mmol)、碳酸铯(528mg,1.62mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦-3,6-二甲氧基-2’,4’,6'-三异丙基-1,1'-联苯))2'-氨基-1,1'-联苯基-2-基)钯(II)(50mg，0.054mmol)溶解于二氧六环(3mL)，氮气保护并换气，在100℃搅拌4h。TLC监测至反应完全，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯)二氯甲烷/甲醇(v/v)＝60/1)，得到标题化合物，叔丁基4-(7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-6基)氨基)-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-甲酸11a(白色固体，120mg,产率62％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ9.08(s,1H),8.57(s,1H),8.36(s,1H),8.08(s,1H),7.69-7.68(m,1H),4.38-4.30(m,1H),4.06-4.10(m,2H),3.29(s,3H),2.81(s,2H),2.40(s,3H),2.37-2.31(m,2H),1.75-1.72(m,2H),1.39(s,9H)。
LC-MS m/z(ESI)＝480.20[M+1]。
第二步：
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-(哌啶-4-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物11)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-(piperidin-4-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将叔丁基4-(7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-6基)氨基)-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-甲酸11a(120mg，0.25mmol)加入到50mL单口瓶中，2M盐酸乙酸乙酯(10mL)加入其中，常温搅拌4h。TLC监测至反应完全，浓缩反应液，残留物经Pre-HPLC得到标题化合物，7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-(哌啶-4-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮化合物11(白色固体，32mg,产率23％)。
1H NMR(400MHz DMSO)δ9.20(s,1H),8.62(s,1H),8.37(s,1H),8.09(s,1H),7.70(s,1H),4.30-4.22(m,1H),3.30(s,3H),3.10-3.07(m,2H),2.67-2.58(m,2H),2.41(s,3H),2.38-2.32(m,2H),1.69-1.65(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝380.20[M+1]。
实施例12
9-(反-3-羟基环丁基)-7-甲基-2-(((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物12)
9-(trans-3-hydroxycyclobutyl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000341
第一步：
2-氯-4-((反-3-羟基环丁基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(12a)
ethyl 2-chloro-4-((trans-3-hydroxycyclobutyl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将(反-3-氨基环丁烷-1-醇盐酸盐(3.00g,34.48mmol)溶于乙腈(25mL)中，0℃搅拌下加入碳酸钾(14.30g,103.45mmol)、2,4-二氯-5-嘧啶甲酸乙酯1a(11.43g,51.72mmol)，升温至常温搅拌反应1h，TLC监测至反应结束，硅藻土过滤后用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:1)纯化得标题化合物2-氯-4-((反-3-羟基环丁基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(12a)(白色固体，2.9g，产率30.95％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(s,1H),8.48(d,1H),5.17-5.11(m,1H),4.61–4.51(m,1H),4.36–4.27(m,3H),2.32-2.20(m,4H),1.32(t,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝272.00[M+1]。
第二步：
4-((反-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)环丁基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯(12b)
ethyl 4-((trans-3-((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)cyclobutyl)amino)-2-chloropyrimidine-5-carboxylate
将2-氯-4-((反-3-羟基环丁基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯12a(3.10g,11.41mmol)溶解于二氯甲烷(20mL)中，加入叔丁基二苯基氯硅烷(4.45mL,17.11mmol)、咪唑(1.94g,28.52mmol)，氮气保护并换气，常温搅拌反应2h，TLC监测至反应结束，硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝10:1)纯化得标题化合物4-(反-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)环丁基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯(12b)(无色液体，4.18g，产率64.26％)。
LC-MS m/z(ESI)＝510.20[M+1]。
第三步：
4-((反-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)环丁基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸(12c)
4-((trans-3-((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)cyclobutyl)amino)-2-chloropyrimidine-5-carboxylic acid
将4-((反-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)环丁基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯12b(4.18g,8.19mmol)溶解于四氢呋喃/水(30mL/15mL)中，加入氢氧化锂一水合物(1.03g,24.58mmol)，常温搅拌反应2h，TLC监测至反应结束，浓缩蒸发掉四氢呋喃后加入2N HCl调节pH至3-4，加水和乙酸乙酯萃取两次，浓缩有机层用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)纯化得标题化合物4-((反-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)环丁基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸(12c)(白色固体，3.87g，产率97.97％)。
LC-MS m/z(ESI)＝482.20[M+1]。
第四步：
9-(反-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)环丁基)-2-氯-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(12d)
9-(trans-3-((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)cyclobutyl)-2-chloro-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将4-(反-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)环丁基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸12c(3.87g,8.03mmol)用N,N-二甲基乙酰胺(38mL)溶解，常温搅拌下加入三乙胺(1.11mL,8.03mmol)和叠氮磷酸二苯酯(1.73mL,8.03mmol)反应2h后，升温至110℃回流反应2.5h。TLC监测至反应结束，反应液中加水、乙酸乙酯进行萃取，浓缩有机层用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)纯化得标题化合物9-(反-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)环丁基)-2-氯-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(12d)(白色固体，1.81g，产率47.06％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.59(s,1H),8.09(s,1H),7.65–7.62(m,2H),7.62–7.60(m,2H),7.47-7.39(m,6H),5.05–4.97(m,1H),4.96–4.89(m,1H),2.98-2.84(m,2H),2.54-2.46(m,2H),1.02(s,9H)。
LC-MS m/z(ESI)＝479.20[M+1]。
第五步：
9-(反-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)环丁基)-2-氯-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(12e)
9-(trans-3-((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)cyclobutyl)-2-chloro-7-methyl-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将9-(反-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)环丁基)-2-氯-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮12d(1.81g,3.78mmol)用N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶解，0℃搅拌下加入硫酸二甲酯(0.36mL,3.78mmol)和碳酸铯(2.47g,7.57mmol)反应2h。TLC监测至反应结束，把反应液缓慢滴加到冰水中搅拌，加入乙酸乙酯进行萃取，浓缩有机层经硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝3:1)纯化得标题化合物9-(反-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)环丁基)-2-氯-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(12e)(白色固体，1.80g，产率96.62％)。
LC-MS m/z(ESI)＝493.20[M+1]。
第六步：
9-(反-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)环丁基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(12f)
9-(trans-3-((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)cyclobutyl)-7-methyl-2-((7-methyl-
[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将9-(反-3-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)环丁基)-2-氯-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮12e(200mg，0.41mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(123mg，0.82mmol)、碳酸铯(264mg，0.82mmol)和Brettphos G3 Pd(37mg，0.041mmol)加入干燥的反应瓶，N2置换三次，然加入干燥的1,4-二氧六环(1mL)，在110℃下反应5h。冷却至室温，过滤，浓缩滤液，得到粗品(12f)，未经纯化直接投下一步。
第七步：
9-(反-3-羟基环丁基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物12)
9-(trans-3-hydroxycyclobutyl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将第六步所得粗品12f用1,4-二氧六环(5mL)溶解，然后滴加浓盐酸(1mL)，室温反应2小时。TLC监测至反应结束，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至7左右，加入二氯甲烷萃取三次，合并有机相，浓缩，使用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v＝40:1))纯化，得到标题化合物9-((反-3-羟基环丁基)-7-甲基-2-((6-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物12)(白色固体，54mg，产率36.23％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.89(s,1H),8.24(s,1H),7.97(s,1H),7.22(s,1H),6.61(s,1H),,4.40–4.33(m,1H),3.25(s,3H),3.11(t,2H),3.02-2.92(m,2H),2.19-2.13(m,2H),2.12(s,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝368.10[M+1]。
实施例13
9-(顺-3-羟基环丁基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物13)
9-(cis-3-hydroxycyclobutyl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000361
第一步：
2-氯-4-((顺-3-羟基环丁基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(13a)
ethyl 2-chloro-4-((cis-3-hydroxycyclobutyl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将(1s,3s)-3-氨基环丁烷-1-醇盐酸盐(3.00g,34.48mmol)溶于乙腈(25mL)中，0℃搅拌下加入碳酸钾(14.30g,103.45mmol)、2,4-二氯-5-嘧啶甲酸乙酯1a(11.43g,51.72mmol)，升温至常温搅拌反应1h，TLC监测至反应结束，硅藻土过滤后用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:1)纯化得标题化合物2-氯-4-((顺-3-羟基环丁基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(13a)(白色固体，3.3g，产率32.91％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60(s,1H),8.41(d,1H),4.96(s,1H),4.31(q,2H),4.08–3.97(m,1H),3.94–3.84(m,1H),2.71-2.63(m,2H),1.88–1.80(m,2H),1.33–1.29(m,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝272.00[M+1]。
第二步：
2-氯-4-((顺-3-羟基环丁基)氨基)嘧啶-5-羧酸(13b)
2-chloro-4-((cis-3-hydroxycyclobutyl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将2-氯-4-((1s,3s)-3-羟基环丁基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯13a(3.30g,12.14mmol)溶解于四氢呋喃/水(30mL/15mL)中，加入氢氧化锂一水合物(1.53g,36.44mmol)，常温搅拌反应2h，TLC监测至反应结束，浓缩蒸发掉四氢呋喃后加入2N HCl调节pH至3-4左右，有白色固体析出，过滤，滤饼用水以及石油醚/乙酸乙酯(v/v＝10/1)洗两次得标题化合物2-氯-4-((顺-3-羟基环丁基)氨基)嘧啶-5-羧酸(13b)(白色固体，2.44g，产率82.45％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(d,1H),8.57(s,1H),4.43-4.20(m,1H),4.07–3.96(m,1H),3.93–3.83(m,1H),2.72-2.63(m,2H),1.87–1.77(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝244.00[M+1]。
第三步：
2-氯-9-(顺-3-羟基环丁基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(13c)
2-chloro-9-(cis-3-hydroxycyclobutyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-4-(((1s,3s)-3-羟基环丁基)氨基)嘧啶-5-羧酸13b(2.44g,10.01mmol)用N,N-二甲基乙酰胺(20mL)溶解，常温搅拌下加入三乙胺(1.39mL,10.01mmol)和叠氮磷酸二苯酯(2.16mL,10.01mmol)反应2h，升温至110℃回流反应2.5h。TLC监测至反应结束，反应液中加水、二氯甲烷进行萃取，浓缩有机层得标题化合物2-氯-9-(顺-3-羟基环丁基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(13c)(白色固体，0.90g，产率37.35％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.59(s,1H),8.12(s,1H),4.31–4.20(m,1H),4.00-3.92(m,1H),3.80-3.54(m,1H),2.83–2.73(m,2H),2.58–2.51(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝241.00[M+1]。
第四步：
2-氯-9-(顺-3-羟基环丁基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(13d)
2-chloro-9-(cis-3-hydroxycyclobutyl)-7-methyl-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-((1s,3s)-3-羟基环丁基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮13c(0.70g,1.25mmol)用N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶解，0℃搅拌下加入硫酸二甲酯(0.28mL,1.25mmol)和碳酸铯(1.42g,4.36mmol)反应2h。TLC监测至反应结束，把反应液缓慢滴加到冰水中搅拌，加入乙酸乙酯进行萃取，浓缩有机层经硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)纯化得标题化合物2-氯-9-(顺-3-羟基环丁基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(13d)(白色固体，0.32g，产率41.20％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.33(s,1H),5.31(d,1H),4.34–4.23(m,1H),4.02-3.91(m,1H),3.34(s,3H),2.81-2.72(m,2H),2.58–2.51(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝255.00[M+1]。
第五步：
9-(顺-3-羟基环丁基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物13)
9-(cis-3-hydroxycyclobutyl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-((1s,3s)-3-羟基环丁基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮13d(50mg，0.20mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(59mg，0.40mmol)、碳酸铯(128mg,0.4mmol)和Brettphos G3 Pd(19mg，0.020mmol)加入干燥的反应管，N2置换三次，然后加入干燥的1,4-二氧六环(1mL)，在110℃下反应5h。TLC监测至反应结束，冷却至室温，使用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v＝40:1))纯化，得到标题化合物9-((1s，3s)-3-羟基环丁基)-7-甲基-2-((6-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物13)(浅黄色固体，22 mg，产率30.50％)。
1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.65(s,1H),8.14(s,1H),7.95(s,1H),7.26(s,1H),3.94-3.88(m,1H),3.25(s,3H),3.13(t,2H),2.82–2.73(m,2H),2.54-2.44(m,2H),2.12(s,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝368.10[M+1]。
实施例14
9-(3-羟基双环[3.2.1]辛基-8-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物14)
9-(3-hydroxybicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000381
第一步：
8-氨基双环[3.2.1]辛基-3-酮盐酸盐(14b)
8-aminobicyclo[3.2.1]octan-3-one hydrochloride
将3-氧代双环[3.2.1]辛-8-基)氨基甲酸叔丁酯14a(1.0g,4.18mmol)溶于4N盐酸二氧六环(40mL)，室温反应1h。TLC监测反应结束，直接将反应液浓缩至干，得目标化合物8-氨基双环[3.2.1]octan-3-one盐酸盐14b(白色固体，730mg,产率99.42％)。
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,2H),3.36(m,2H),2.80-2.77(m,2H),2.16-2.13(m,2H),1.87-1.85(m,2H),1.43-1.42(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝176.20[M+1]。
第二步：
2-氯-4-((3-氧双环[3.2.1]辛-8-基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(14c)
ethyl 2-chloro-4-((3-oxobicyclo[3.2.1]octan-8-yl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(1.38g,6.26mmol),8-氨基双环[3.2.1]辛基-3-酮盐酸盐14b(730mg,4.17mmol)，碳酸钾(1.73g,12.52mmol)溶于乙腈(20mL)，反应液在室温反应16h。TLC监测反应结束，过滤，并用少量乙腈清洗固体，将滤液合并后浓缩，粗品经柱层析分离(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)后得标题化合物2-氯-4-((3-氧双环[3.2.1]辛-8-基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯14c(白色固体,1.0g,产率74.01％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.86(d,2H),8.68(s,1H),4.36-4.30(q,2H),4.20-4.16(m,1H),2.66-2.65(m,2H),2.56-2.55(m,2H),2.21-2.17(m,2H),1.97-1.93(m,2H),1.53-1.33(m,2H),1.31(t,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝324.10[M+1]。
第三步：
2-氯-4-((3--3-氧双环[3.2.1]辛-8-基)氨基]嘧啶-5-羧酸(14d)
2-chloro-4-((3-oxobicyclo[3.2.1]octan-8-yl)amino)pyrimidine-5-carboxylic acid
将2-氯-4-((3-氧双环[3.2.1]辛-8-基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯14c(1.0g，3.09mmol)溶解于四氢呋喃20mL,水20mlL中,加入氢氧化锂(259mg,6.18mmol)，室温搅拌1h。TLC监测反应完全，浓缩除去四氢呋喃，用2N盐酸调pH为5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚洗两次，搜集固体得到标题化合物2-氯-4-((3-3-氧双环[3.2.1]octan-8-yl)
氨基]嘧啶-5-羧酸14d(白色固体,800mg,产率87.59％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.93(s,1H),9.20(d,2H),8.64(s,1H),4.20-4.16(m,1H),2.66-2.64(m,2H),2.54-2.53(m,2H),2.21-2.16(m,2H),1.96-1.93(m,2H),1.53-1.47(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝296.10[M+1]。
第四步：
2-氯-9-(3-氧代双环[3.2.1]辛-8-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(14e)
2-chloro-9-(3-oxobicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-4-((3-3-氧双环[3.2.1]辛-8-基)氨基)嘧啶-5-羧酸14d(800mg,2.71mmol)溶解于二甲基乙酰胺(20mL)，加入三乙胺(0.37mL,2.7mmol)、叠氮磷酸二苯酯(0.58mL,2.7mmol),随后逐步升温至90℃,搅拌2h。TLC监测反应完毕，将反应液倒入冰水中，过滤搜集固体，水洗3次，真空浓缩干燥得标题化合物2-氯-9-(3-氧代双环[3.2.1]辛-8-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮14e(白色固体,630mg,产率94.71％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.66(s,1H),8.13(s,1H),4.01-3.99(m,1H),3.65-3.64(m,2H),2.66-2.61(m,2H),2.12-2.08(m,2H),1.89-1.86(m,2H),1.54-1.49(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝293.00[M+l]。
第五步：
2-氯-7-甲基-9-(3-氧代双环[3.2.1]辛-8-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(14f)
2-chloro-7-methyl-9-(3-oxobicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(3-氧代双环[3.2.1]辛-8-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮14e(630mg，2.15mmol)溶解于二甲基甲酰胺(10mL)，在0℃下加入硫酸二甲酯(0.2mL，2.15mmol)和碳酸铯(1.4g,4.3mmol)，0℃搅拌1h。TLC监测反应结束，将反应液倒入冰水中，有固体析出，过滤、搜集固体得到标题化合物2-氯-7-甲基-9-(3-氧代双环[3.2.1]辛-8-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮14f(白色固体，490mg，产率74.22％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(s,1H),4.03-4.01(m,1H),3.66-3.65(m,2H),3.36(s,3H),2.65-2.59(m,2H),2.13-2.08(m,2H),1.89-1.87(m,2H),1.55-1.50(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝307.10[M+l]。
第六步：
2-氯-9-(3-羟基双环[3.2.1]辛-8-基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(14g)
2-chloro-9-(3-hydroxybicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-7-methyl-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-7-甲基-9-(3-氧代双环[3.2.1]辛-8-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮14f(490mg，1.6mmol)溶解于四氢呋喃(30mL)和甲醇(30mL)，在0℃下加入硼氢化钠(181.30mg，4.79mmol)。TLC监测反应结束，将反应液倒入冰水中，有固体析出，过滤、搜集固体得到标题化合物2-氯-9-(3-羟基双环[3.2.1]辛-8-基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮14g(白色固体，380mg，产率77.04％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(s,1H),4.28-4.20(m,1H),3.74-3.66(m,2H),3.45-3.43(m,2H),3.37(s,3H),2.14-2.07(m,1H),1.74-1.50(m,5H),1.28-1.22(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝309.10[M+l]。
第七步：
9-(3-羟基双环[3.2.1]辛基-8-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物14)
9-(3-hydroxybicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(3-羟基双环[3.2.1]正辛-8-基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮14g(100mg，0.32mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(97mg，0.64mmol)碳酸铯(228mg，0.64mmol)和Brettphos G3 Pd(29mg，0.032mmol)加入干燥的反应管，氮气置换三次，然后加入1,4-二氧六环(2mL)，在110℃下反应5h。将反应液浓缩，使用硅胶柱色谱分离纯化(DCM:MeOH＝20:1)，得到标题化合物，9-(3-羟基双环[3.2.1]辛-8-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮化合物14(白色固体，50mg，产率37.16％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.03(s,1H),8.57(d,1H),8.37(s,1H),8.09(d,1H),7.69(s,1H),4.30(d,1H),3.75–3.64(m,1H),3.54(d,2H),3.30(s,3H),2.38(s,3H),1.69–1.40(m,6H),1.30(t,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝421.20[M+1]。
实施例15
9-(3-羟基-3-甲基环己基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物15)
9-(3-hydroxy-3-methylcyclohexyl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000401
第一步：
叔丁基(3-羟基-3-甲基环己基)氨基甲酸酯(15b)
tert-butyl(3-hydroxy-3-methylcyclohexyl)carbamate
将叔丁基(3-氧代环己基)氨基甲酸酯15a(5.00g,23.4mmol)溶解于四氢呋喃(80mL)在-78℃下预冷，然后经45min缓慢滴加1.6M甲基锂-乙醚溶液(61.5mL,98.28mmol)，反应液在-78℃下搅拌反应1h后加入剩余1.6M甲基锂-乙醚溶液(61.5mL,98.28mmol)，再在-78℃搅拌反应1h。TLC监测至反应结束，加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，再加入水和乙酸乙酯萃取，浓缩有机层用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝8:1)纯化得标题化合物叔丁基(3-羟基-3-甲基环己基)氨基甲酸酯15b(白色固体，2.07g，产率38.53％)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.30(s,1H),3.68(s,1H),1.90(d,3H),1.67(q,1H),1.59–1.48(m,2H),1.37(s,9H),1.19–1.12(m,4H),1.06(t,1H),0.96–0.84(m,1H)。
LC-MS m/z(ESI)＝230.20[M+1]。
第二步：
3-氨基-1-甲基环己烷-1-醇盐酸盐(15c)
3-amino-1-methylcyclohexan-1-ol hydrochloride
将叔丁基(3-羟基-3-甲基环己基)氨基甲酸酯15b(2.07g,9.03mmol)用4M氯化氢-1,4-二氧六环(10mL)溶解，常温搅拌反应。TLC监测至反应结束，浓缩蒸发掉1,4-二氧六环溶液得标题化合物3-氨基-1-甲基环己烷-1-醇盐酸盐15c(淡黄色固体，粗品，1.49g,产率99.60％)。
LC-MS m/z(ESI)＝130.20[M+1]。
第三步：
2-氯-4-((3-羟基-3-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(15d)
ethyl 2-chloro-4-((3-hydroxy-3-methylcyclohexyl)amino)pyrimidine-5-carboxyl-ate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(2.99g,13.54mmol)、3-氨基-1-甲基环己烷-1-醇盐酸盐15c(1.49g,9.03mmol)溶解于乙腈(20mL)，搅拌加入碳酸钾(3.74g,27.08mmol)，在室温搅拌4h。TLC监测至反应结束，浓缩通过柱分离提纯(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝4:1)得标题化合物2-氯-4-((3-羟基-3-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯15d(白色固体，2.23g，产率78.74％)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.57(s,1H),8.19(d,1H),4.43–4.32(m,1H),4.27(q,2H),2.07–1.95(m,2H),1.83–1.69(m,2H),1.64–1.56(m,2H),1.31(t,4H),1.26(d,1H),1.21(s,3H),1.10–1.05(m,1H)。
LC-MS m/z(ESI)＝314.10[M+1]。
第四步：
2-氯-4-((3-羟基-3-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸(15e)
2-chloro-4-((3-hydroxy-3-methylcyclohexyl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将2-氯-4-((3-羟基-3-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯15d(2.23g,7.11mmol)溶解于四氢呋喃/水(15mL/15mL)中，加入氢氧化锂(895mg,21.32mmol)，室温搅拌1h。TLC监测至反应结束，浓缩除去四氢呋喃，用2N盐酸调pH至3-4，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚洗两次，搜集固体得到标题化合物2-氯-4-((3-羟基-3-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸15e(白色固体，1.6g，产率78.79％)。
LC-MS m/z(ESI)＝286.10[M+1]。
第五步：
2-氯-9-(3-羟基-3-甲基环己基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(15f)
2-chloro-9-(3-hydroxy-3-methylcyclohexyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-4-((3-羟基-3-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸29d(1.38g,4.83mmol)溶解于二甲基乙酰胺(20mL)，加入三乙胺(0.67mL,4.83mmol)、叠氮磷酸二苯酯(1.04mL,4.83mmol),随后逐步升温至90℃搅拌2h。TLC监测至反应结束，将反应液倒入冰水中,过滤搜集固体,水洗3次,真空浓缩干燥得到目标化合物2-氯-9-(3-羟基-3-甲基环己基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮15f(白色固体，1.35g，产率98.86％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.60(s,1H),8.10(s,1H),4.62-4.54(m,1H),4.35(s,1H),2.19(t,1H),2.10-1.99(m,1H),1.70-1.53(m,5H),1.30-1.22(m,1H),1.16(s,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝283.10[M+1]。
第六步：
2-氯-9-(3-羟基-3-甲基环己基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(15g)
2-chloro-9-(3-hydroxy-3-methylcyclohexyl)-7-methyl-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(3-羟基-3-甲基环己基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮15f(1.35g，4.77mmol)溶解于二甲基甲酰胺(10mL)，在0℃下加入硫酸二甲酯(0.45mL，4.77mmol)和碳酸铯(1.56g,4.77mmol)，搅拌反应1h。TLC监测至反应结束，将反应液倒入冰水中，有固体析出，过滤、搜集固体得到标题化合物2-氯-9-(3-羟基-3-甲基环己基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮15g(白色固体，873mg，产率61.61％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34(s,1H),4.66-4.58(m,1H),4.37(s,1H),3.35(s,3H),2.20(t,1H),2.11-2.00(m,1H),1.72-1.54(m,5H),1.32-1.24(m,1H),1.17(s,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝297.10[M+1]。
第七步：
9-(3-羟基-3-甲基环己基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物15)
9-(3-hydroxy-3-methylcyclohexyl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(3-羟基-3-甲基环己基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮15g(200mg，0.67mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(200mg，1.34mmol)碳酸铯(473mg，1.34mmol)和Brettphos G3 Pd(61mg，0.067mmol)加入干燥的反应管，氮气置换三次，然后加入1,4-二氧六环(2mL)，在110℃下反应5h。将反应液浓缩，使用硅胶柱色谱分离纯化(DCM:MeOH＝20:1)，得到标题化合物，9-(3-羟基-3-甲基环己基)-7-甲基-2-((-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮化合物15(浅黄色固体，200mg，产率73.08％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.15(s,1H),8.65(s,1H),8.37(s,1H),8.09(s,1H),7.70(d,1H),4.61-4.53(m,1H),4.27(s,1H),3.29(s,3H),2.39(d,3H),2.27(t,1H),2.06–1.93(m,1H),1.76–1.45(m,5H),1.23-1.15(m,1H),1.10(s,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝409.20[M+1]。
实施例16
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-(2-氧螺环[3.3]庚-6-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物16)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-(2-oxaspiro[3.3]heptan-6-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000421
Figure BDA0002876667980000431
第一步：
4-((2-氧杂螺[3.3]庚-6-6基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯(16a)
ethyl 4-((2-oxaspiro[3.3]heptan-6-yl)amino)-2-chloropyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(4.43g,20.05mmol),2-氧杂螺[3.3]庚-6-胺盐酸盐(2.0g,13.37mmol),碳酸钾(5.54g，40.10mmol)溶于乙腈(60mL)，反应液在室温反应16h。TLC监测反应结束，过滤，并用少量乙腈清洗固体，将滤液合并后浓缩，粗品经柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)后得目标化合4-((2-氧杂螺[3.3]庚-6-6基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯16a(白色固体,3.0g,产率75.38％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60(s,1H),8.47(d,1H),4.63(s,2H),4.49(s,2H),4.39-4.33(m,1H),4.30-4.27(q,2H),2.66-2.61(m,2H),2.31-2.26(m,2H),1.30(t,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝298.10[M+1]。
第二步：
4-((2-氧杂螺[3.3]庚-6-6基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸(16b)
4-((2-oxaspiro[3.3]heptan-6-yl)amino)-2-chloropyrimidine-5-carboxylicacid
将4-((2-氧杂螺[3.3]庚-6-6基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯16a(3.0g，10.08mmol)溶解于四氢呋喃/水(30mL/30mL)中,加入氢氧化锂(845mg,20.15mmol)，室温搅拌1h。TLC监测至反应结束，浓缩除去四氢呋喃，用2N盐酸调pH为5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚洗两次，搜集固体得到标题化合物4-((2-氧杂螺[3.3]庚-6-6基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸16b(白色固体,1.8g,产率66.24％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.76(s,1H),8.64(d,1H),8.57(s,1H),4.64(s,2H),4.49(s,2H),4.40-4.30(m,1H),2.67-2.61(m,2H),2.28-2.23(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝270.20[M+1]。
第三步：
2-氯-9-(2-氧杂螺[3.3]庚-6-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(16c)
2-chloro-9-(2-oxaspiro[3.3]heptan-6-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将4-((2-氧杂螺[3.3]庚-6-6基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸16b(1.8g,6.67mmol)溶解于二甲基乙酰胺(40mL)，加入三乙胺(0.92mL,6.67mmol)、叠氮磷酸二苯酯(1.4mL,6.67mmol),随后逐步升温至90℃搅拌反应2h。TLC监测至反应结束，将反应液倒入冰水中,过滤搜集固体,水洗3次,真空浓缩干燥得2-氯-9-(2-氧杂螺[3.3]庚-6-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮16c(白色固体,1.3g,产率73.03％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.61(s,1H),8.11(s,1H),4.71-4.63(m,5H),3.02-2.94(m,2H),2.69-2.66(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝267.10[M+1]。
第四步：
2-氯-7-甲基-9-(2-氧杂螺[3.3]庚-6-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(16d)
2-chloro-7-methyl-9-(2-oxaspiro[3.3]heptan-6-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(2-氧杂螺[3.3]庚-6-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮16c(1.3g，4.87mmol)溶解于二甲基甲酰胺(10mL)，在0℃下加入硫酸二甲酯(0.46mL，4.87mmol)和碳酸铯(3.18g,9.75mmol)，搅拌反应1h。TLC监测至反应结束，将反应液倒入冰水中，有固体析出，过滤、搜集固体得到标题化合物2-氯-7-甲基-9-(2-氧杂螺[3.3]庚-6-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮16d(白色固体,875mg,产率63.94％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(s,1H),4.76-4.69(m,1H),4.66-4.63(m,4H),3.33(s,3H),3.01-2.95(m,2H),2.71-2.66(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝281.10[M+1]。
第五步：
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-(2-氧螺环[3.3]庚-6-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物16)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-(2-oxaspiro[3.3]heptan-6-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-7-甲基-9-(2-氧杂螺[3.3]庚基-6-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮16d(200mg，0.71mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(212mg，1.42mmol)碳酸铯(502mg，1.42mmol)和Brettphos G3 Pd(65mg，0.071mmol)加入干燥的反应管，氮气置换三次，然后加入1,4-二氧六环(2mL)，在110℃下反应5h。将反应液浓缩，使用硅胶柱色谱分离纯化(DCM:MeOH＝20:1)，得到标题化合物，7-甲基-2-(((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-(2-氧螺环[3.3]庚-6-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮化合物16(白色固体，160mg，产率57.42％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.05(s,1H),8.65(s,1H),8.39(s,1H),8.11(s,1H),7.73(s,1H),4.60(d,3H),4.16(s,2H),3.27(s,3H),2.97–2.91(m,2H),2.56–2.51(m,2H),2.36(d,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝393.10[M+1]。
实施例17
9-(6-羟基螺[3.3]庚-2-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物17)
9-(6-hydroxyspiro[3.3]heptan-2-yl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000441
Figure BDA0002876667980000451
第一步：
6-氨基螺[3.3]庚烷-2-醇盐酸盐(17b)
6-aminospiro[3.3]heptan-2-ol hydrochloride
将叔丁基(6-羟基螺[3.3]庚烷-2-基)氨基甲酸酯17a(2g,8.80mmol)用4M氯化氢-1,4-二氧六环(15mL)溶解，常温搅拌反应2h。TLC监测至反应结束，浓缩蒸发掉1,4-二氧六环溶液得标题化合物6-氨基螺[3.3]庚烷-2-醇盐酸盐17b(淡黄色固体，粗品，1.44g,产率100％)。
LC-MS m/z(ESI)＝163.10[M+1]。
第二步：
2-氯-4-((6-羟基螺[3.3]庚-2-基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(17c)
ethyl 2-chloro-4-((3-hydroxy-3-methylcyclohexyl)amino)pyrimidine-5-carboxyl-ate将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(2.92g,13.20mmol)、6-氨基螺[3.3]庚烷-2-醇盐酸盐17b(1.44g,8.80mmol)溶解于乙腈(20mL)，搅拌加入碳酸钾(3.65g,26.40mmol)，在室温搅拌4h。TLC监测至反应结束，浓缩通过柱分离提纯(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝4:1)得标题化合物2-氯-4-((3-羟基-3-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯17c(白色固体g，1.36g，产率49.57％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59(s,1H),8.43(d,1H),4.91(s,1H),4.44–4.34(m,1H),4.31(q,2H),4.02–3.93(m,1H),2.43–2.35(m,2H),2.34–2.27(m,1H),2.23–2.16(m,1H),2.07–1.99(m,2H),1.90–1.80(m,2H),1.31(t,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝312.10[M+1]。
第三步：
2-氯-4-((6-羟基螺[3.3]庚-2-基)氨基)嘧啶-5-羧酸(17d)
2-chloro-4-((6-hydroxyspiro[3.3]heptan-2-yl)amino)pyrimidine-5-carboxylic acid
将2-氯-4-((6-羟基螺[3.3]庚-2-基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯17c(1.0g，3.21mmol)溶解于四氢呋喃10mL，水10mL中，加入氢氧化锂(269mg,6.42mmol)，室温搅拌1个小时。TLC监测至反应完全，浓缩除去四氢呋喃，用2N盐酸调pH为5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚洗两次，搜集固体得到标题化合物2-氯-4-((6-羟基螺[3.3]庚-2-基)氨基)嘧啶-5-羧酸17d(760mg,白色固体,产率83.52％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.75(s,1H),8.62(d,1H),8.56(s,1H),4.90(s,1H),4.42-4.32(m,1H),4.00-3.93(m,1H),2.42-2.35(m,2H),2.33-2.27(m,1H),2.22-2.16(m,1H),2.02-1.97(m,2H),1.88-1.80(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝284.10[M+1]。
第四步：
2-氯-9-(6-羟基螺[3.3]庚烷-2-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(17e)
2-chloro-9-(6-hydroxyspiro[3.3]heptan-2-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-4-((6-羟基螺[3.3]庚-2-基)氨基)嘧啶-5-羧酸17d(760mg,2.68mmol)溶解于二甲基乙酰胺(10mL)，加入三乙胺(0.37mL,2.68mmol)、叠氮磷酸二苯酯(0.57mL,2.68mmol)，随后逐步升温至90℃搅拌2小时。TLC监测至反应完毕，将反应液倒入冰水中，过滤搜集固体,水洗3次，真空浓缩干燥得到标题化合物2-氯-9-(6-羟基螺[3.3]庚烷-2-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮17e(580mg,白色固体,产率77.13％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.60(s,1H),8.10(s,1H),4.96(d,1H),4.70-4.60(m,1H),2.92-2.87(m,2H),2.46-2.43(m,2H),2.32-2.21(m,3H),1.92-1.87(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝281.10[M+1]。
第五步：
2-氯-9-(6-羟基螺[3.3]庚烷-2-基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(17f)
2-chloro-9-(6-hydroxyspiro[3.3]heptan-2-yl)-7-methyl-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(6-羟基螺[3.3]庚烷-2-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮17e(580mg，2.07mmol)溶解于二甲基甲酰胺(5mL)，0℃下加入硫酸二甲酯(260mg，2.07mmol)和碳酸铯(1.3g,4.13mmol)搅拌反应1小时。TLC监测至反应结束，将反应液倒入冰水中，有固体析出，过滤搜集固体得到标题化合物2-氯-9-(6-羟基螺[3.3]庚烷-2-基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮17f(380mg，白色固体，产率62.40％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.33(s,1H),4.97(d,1H),4.70-4.66(m,1H),4.05-3.96(m,1H),3.33(s,3H),2.95-2.87(m,2H),2.51-2.43(m,1H),2.31-2.25(m,3H),1.93-1.87(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝295.10[M+1]。
第六步：
9-(6-羟基螺[3.3]庚-2-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物17)
9-(6-hydroxyspiro[3.3]heptan-2-yl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(6-羟基螺[3.3]庚-2-基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮17f(140mg，0.47mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(142mg，0.94mmol)碳酸铯(335mg，0.94mmol)和Brettphos G3 Pd(43mg，0.047mmol)加入干燥的反应管，氮气置换三次，然后加入1,4-二氧六环(2mL)，在110℃下反应5h。将反应液浓缩，使用硅胶柱色谱分离纯化(DCM:MeOH＝20:1)，得到标题化合物，9-(6-羟基螺[3.3]庚-2-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮化合物17(白色固体，110mg，产率57.57％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.05(s,1H),8.67(s,1H),8.37(s,1H),8.09(s,1H),7.71(s,1H),4.90(d,1H),4.65-4.56(m,1H),3.93-3.84(m,1H),3.27(s,3H),2.87-2.79(m,2H),2.37(s,4H),2.20-2.05(m,2H),1.86-1.78(m,2H),1.64-1.59(m,1H)。
LC-MS m/z(ESI)＝407.20[M+1]。
实施例18
9-(8-氧杂双环[3.2.1]辛基-3-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物18)
9-(8-oxabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000471
第一步：
8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-酮肟(18b)
8-oxabicyclo[3.2.1]octan-3-one oxime
将8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-酮18a(1.4g，11.1mmol)、盐酸羟胺(925mg,13.3mmol)和碳酸钾(3.1g,22.2mmol)溶解于乙醇/水(10mL/5mL)混合溶剂中，在80℃下反应2h。TLC监测至反应结束，向反应液中加水淬灭，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到标题化合物，8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-酮肟18b(淡黄色固体,1.56g，产率100％)。
LC-MS m/z(ESI)＝142.10[M+1]。
第二步：
8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-胺(18c)
8-oxabicyclo[3.2.1]octan-3-amine
将8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-酮肟18b(1.5 g，10.64mmol)溶解于甲醇(30mL)中，室温下加入六水氯化镍(2.53g，10.64mmol)，在室温下反应0.5h。将反应液冷却至-30℃，缓慢添加硼氢化钠(6.0g，159.6mmol)，添加完毕缓慢升至室温反应过夜；TLC监测至反应结束，向反应液中加水淬灭，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到标题化合物，8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-胺18c(淡黄色油状物,639mg，产率45％)。
LC-MS m/z(ESI)＝128.20[M+1]。
第三步：
4-((8-氧杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯(18d)
ethyl 4-((8-oxabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)amino)-2-chloropyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(1.1g，5.03mmol)、碳酸钾(1.74g，12.58mmol)溶解于乙腈(20mL)，在0℃下加入8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-胺18c(639mg，5.03mmol)，在室温下搅拌20h。TLC监测至反应结束，向反应液中加水30mL，有固体析出，过滤并用水洗3次，浓缩得到标题化合物，4-((8-氧杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯18d(白色固体,1.01g，产率64.3％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.91(d,1H),8.64(s,1H),4.38–4.31(m,4H),4.30–4.24(m,1H),2.20–2.08(m,2H),2.02–1.90(m,4H),1.66(d,2H),1.32(t,3H)。
第四步：
4-((8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸(18e)
4-((8-oxabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)amino)-2-chloropyrimidine-5-carboxylic acid
将4-((8-氧杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯(1.0g，3.21mmol)18d溶解于四氢呋喃10mL，水5mL中，加入氢氧化锂(308mg，12.83mmol)，室温下搅拌1h。TLC监测至反应结束，将四氢呋喃旋干，用2N HCl调pH至4-5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝10/1)洗两次，浓缩得到标题化合物，4-((8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸18e(白色固体,808mg，产率87.9％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.83(s,1H),9.17(d,1H),8.59(s,1H),4.32(s,2H),4.29–4.22(m,1H),2.17–2.07(m,2H),2.00–1.89(m,4H),1.65(d,2H)。
第五步：
9-(8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基)-2-氯-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(18f)
9-(8-oxabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-2-chloro-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将4-((8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸18e(808mg，2.85mmol)溶解于二甲基乙酰胺(20mL)中，加入三乙胺(288mg，2.85mmol)、叠氮磷酸二苯酯(784mg，2.85mmol)，随后逐步升温至120℃，搅拌1.5h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝5:1～1:10)，得到标题化合物，9-(8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基)-2-氯-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮18f(白色固体,653mg，产率71％)。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.64(s,1H),8.12(s,1H),4.47–4.44(m,2H),4.42–4.40(m,1H),2.28–2.20(m,2H),2.07–2.01(m,2H),1.96–1.90(m,2H),1.81–1.75(m,2H)。
第六步：
9-(8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基)-2-氯-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(18g)
9-(8-oxabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-2-chloro-7-methyl-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将9-(8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基)-2-氯-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮18f(653mg，2.33mmol)溶解于二甲基甲酰胺(10mL)中，在0℃下加入硫酸二甲酯(293mg，2.33mmol)和碳酸铯(1.52g,4.65mmol)，在0℃下搅拌1h。TLC监测至反应结束，随后加入10mL水，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得到标题化合物，9-(8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基)-2-氯-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮18g(白色固体,533mg，产率81.6％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.36–8.34(m,1H),4.51-4.47(m,2H),4.45–4.42(m,1H),3.34(s,3H),2.31–2.22(m,2H),2.07–1.98(m,2H),1.98–1.90(m,2H),1.79(t,2H)。第七步：
9-(8-氧杂双环[3.2.1]辛基-3-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物18)
9-(8-oxabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将9-(8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基)-2-氯-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮18g(100mg，0.34mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(51mg，0.34mmol)、碳酸铯(221mg,0.68mmol)、Brettphos Pd G3(31mg，0.034mmol)溶解于二氧六环中，氮气保护并换气，在100℃下搅拌4h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝30/1)，得到标题化合物9-(8-氧杂双环[3.2.1]辛基-3-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮化合物18(白色固体，41mg，产率28.9％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.01(s,1H),8.70(s,1H),8.39(s,1H),8.11(s,1H),7.74(s,1H),4.41–4.27(m,3H),3.29(s,3H),2.34(s,3H),2.17–2.07(m,2H),1.91(t,2H),1.62(s,2H),1.28(d,2H)。
实施例19
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-(2-氧杂螺[3.5]壬基-7-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物19)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-(2-oxaspiro[3.5]nonan-7-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000491
Figure BDA0002876667980000492
第一步：
2-氧杂螺[3.5]壬-7-酮肟(19b)
2-oxaspiro[3.5]nonan-7-one oxime
将19a(1.5g,10.7mmol)、盐酸羟胺(744mg,10.7mmol)和碳酸钾(2.95g,21.4mmol)溶解于乙醇/水(10mL/5mL)混合溶剂中，在80℃下反应2小时，TLC监测至反应结束，向反应液中加水淬灭，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥、过滤浓缩得到标题化合物，2-氧杂螺[3.5]壬-7-酮肟19b(淡黄色固体,1.45g，产率89％)。
第二步：
2-氧杂螺[3.5]壬-7-胺(19c)
2-oxaspiro[3.5]nonan-7-amine
将2-氧杂螺[3.5]壬-7-酮肟19b(1.45g，9.34mmol)溶解于甲醇(30mL)中，室温下加入六水氯化镍(2.22g，9.34mmol)，在室温下反应0.5h后，将反应液冷却至-30℃，缓慢添加硼氢化钠(5.3g，140.1mmol)，添加完毕缓慢升至室温反应过夜。TLC监测至反应结束，向反应液中加水淬灭，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥、过滤浓缩得到标题化合物，2-氧杂螺[3.5]壬-7-胺19c(淡黄色油状物,481mg，产率37.6％)。
第三步：
4-((2-氧杂螺[3.5]壬-7-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯(19d)
ethyl 4-((2-oxaspiro[3.5]nonan-7-yl)amino)-2-chloropyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(753mg，3.41mmol)、碳酸钾(940mg，6.81mmol)溶解于乙腈(20mL)，在0℃下加入2-氧杂螺[3.5]壬-7-胺19c(481mg，3.41mmol)，在室温下搅拌20h。TLC监测至反应结束，向反应液中加水30mL，有固体析出，过滤并用水洗3次，浓缩得到标题化合物，4-((2-氧杂螺[3.5]壬-7-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯19d(白色固体,640mg，产率57.6％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.61(s,1H),8.29(d,1H),4.34–4.29(m,4H),4.24(s,2H),3.98–3.89(m,1H),2.05–1.92(m,2H),1.86–1.75(m,2H),1.65–1.56(m,2H),1.45–1.35(m,2H),1.34–1.27(m,3H)。
第四步：
4-((2-氧杂螺[3.5]壬基-7-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸(19e)
4-((2-oxaspiro[3.5]nonan-7-yl)amino)-2-chloropyrimidine-5-carboxylicacid
将乙基4-((2-氧杂螺[3.5]壬-7-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯19d(640mg，1.96mmol)溶解于四氢呋喃10mL，水5mL中，加入氢氧化锂(189mg，7.86mmol)，室温下搅拌1h。TLC监测至反应结束，将四氢呋喃旋干，调pH为4-5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝10/1)洗两次，浓缩得到标题化合物，4-((2-氧杂螺[3.5]壬基-7-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸19e(白色固体,518mg，产率88.5％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.74(s,1H),8.57(s,1H),8.48(d,1H),4.32(s,2H),4.24(s,2H),3.97–3.84(m,1H),1.99(d,2H),1.86–1.76(m,2H),1.66–1.54(m,2H),1.42–1.26(m,2H)。
第五步：
2-氯-9-(2-氧杂螺[3.5]壬-7-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(19f)
2-chloro-9-(2-oxaspiro[3.5]nonan-7-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将4-((2-氧杂螺[3.5]壬基-7-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸19e(518mg，1.74mmol)溶解于二甲基乙酰胺(20mL)中，加入三乙胺(175mg，1.74mmol)、叠氮磷酸二苯酯(479mg，1.74mmol)，随后逐步升温至120℃，搅拌1.5h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝5:1～1:10)，得到标题化合物，2-氯-9-(2-氧杂螺[3.5]壬-7-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮19f(白色固体,353mg，产率72.8％)。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.61(s,1H),8.11(s,1H),4.41(s,2H),4.24(s,2H),4.15–4.08(m,1H),2.24–2.08(m,4H),1.69(d,2H),1.64–1.51(m,2H)。
第六步：
2-氯-7-甲基-9-(2-氧杂螺[3.5]壬-7-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(19g)
2-chloro-7-methyl-9-(2-oxaspiro[3.5]nonan-7-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(2-氧杂螺[3.5]壬-7-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮19f(353mg，1.18mmol)溶解于二甲基甲酰胺(10mL)中，在0℃下加入硫酸二甲酯(150mg，1.18mmol)和碳酸铯(464mg,3.36mmol)，在0℃下搅拌1h。TLC监测至反应结束，随后加入10mL水，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，有固体析出，过滤得到标题化合物，2-氯-7-甲基-9-(2-氧杂螺[3.5]壬-7-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮19g(白色固体,313mg，产率85.5％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.34(s,1H),4.41(s,2H),4.25(s,2H),4.22–4.08(m,1H),3.34(s,3H),2.22–2.05(m,4H),1.69(d,2H),1.64–1.50(m,2H)。
第七步：
7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-9-(2-氧杂螺[3.5]壬基-7-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物19)
7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-9-(2-oxaspiro[3.5]nonan-7-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-7-甲基-9-(2-氧杂螺[3.5]壬-7-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮19g(60mg，0.194mmol)、7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(29mg，0.194mmol)、碳酸铯(127mg，0.39mmol)、Brettphos Pd G3(17mg，0.019mmol)溶解于二氧六环中，氮气保护并换气，在100℃下搅拌4h。浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝30/1)，得到标题化合物9-(8-氧杂双环[3.2.1]辛基-3-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮化合物19(白色固体，38mg，产率44.7％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.99(s,1H),8.66(s,1H),8.38(s,1H),8.10(s,1H),7.73(s,1H),4.15(s,2H),4.05(s,1H),3.92(s,2H),3.29(s,3H),2.34(s,3H),2.09–2.00(m,4H),1.63–1.56(m,2H),1.51–1.44(m,2H)。
实施例20
9-(6-(羟甲基)螺[3.3]庚-2-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物20)
9-(6-(hydroxymethyl)spiro[3.3]heptan-2-yl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000511
Figure BDA0002876667980000512
第一步：
(6-氨基螺[3.3]庚烷-2-基)甲醇(20b)
(6-aminospiro[3.3]heptan-2-yl)methanol
将6-氨基螺[3.3]庚烷-2-羧酸甲酯20a(2.0g,11.8mmol)溶于四氢呋喃(15mL)中，混合液降温至0℃，缓慢滴加1N的四氢铝锂溶液(23.6mL，1mol/L的四氢呋喃溶液)，滴加完成后，缓慢升温至室温搅拌2h。TLC监测至反应结束，加入甲醇淬灭反应，减压浓缩蒸发掉溶剂，加入乙腈(50mL)打浆过滤，滤液旋干得到标题化合物(6-氨基螺[3.3]庚烷-2-基)甲醇20b(白色固体,1.3g,产率77.8％)。
LC-MS m/z(ESI)＝142.10[M+1]。
第二步：
2-氯-4-((6-(羟甲基)螺[3.3]庚烷-2-基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(20c)
ethyl 2-chloro-4-((6-(hydroxymethyl)spiro[3.3]heptan-2-yl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(2.03g,9.19mmol)，(6-氨基螺[3.3]庚烷-2-基)甲醇20b(1.3g,9.19mmol)，碳酸钾(1.27g,9.19mmol)溶于乙腈(25mL)中，室温搅拌反应16h。TLC监测至反应结束，滤液浓缩经硅胶柱色谱分离提纯(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝1:1)纯化得到标题化合物2-氯-4-((6-(羟甲基)螺[3.3]庚烷-2-基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯20c(白色固体，1.56g,产率52.2％)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.65(s,1H),8.54(d,1H),4.59–4.48(m,1H),4.35(q,2H),3.59(dd,2H),2.66–2.58(m,1H),2.51–2.38(m,2H),2.27–2.19(m,1H),2.11–2.04(m,2H),2.03–1.91(m,2H),1.91–1.85(m,1H),1.84–1.76(m,1H),1.39(t,3H)。
LCMS m/z(ESI)＝326.10[M+1]。
第三步：
2-氯-4-((6-(羟甲基)螺[3.3]庚烷-2-基)氨基)嘧啶-5-羧酸(20d)
2-chloro-4-((6-(hydroxymethyl)spiro[3.3]heptan-2-yl)amino)pyrimidine-5-carboxylic acid
将2-氯-4-((6-(羟甲基)螺[3.3]庚烷-2-基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯20c(1.07g,3.28mmol)溶解于四氢呋喃/水(10mL/10mL)中，加入氢氧化锂一水合物(0.41g,9.85mmol)，常温搅拌反应1h。TLC监测至反应结束，浓缩蒸发掉四氢呋喃后加入2N HCl调节pH至3-4，有白色固体析出，过滤，滤饼用水以及石油醚/乙酸乙酯(v/v＝10/1)洗两次得标题化合物2-氯-4-((6-(羟甲基)螺[3.3]庚烷-2-基)氨基)嘧啶-5-羧酸20d(白色固体，918mg，产率93.88％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.69(s,1H),9.67(d,1H),8.35(s,1H),4.42–4.31(m,1H),3.30(s,1H),2.55–2.46(m,3H),2.40–2.31(m,1H),2.28–2.19(m,1H),2.10–2.00(m,2H),2.00–1.91(m,2H),1.83–1.69(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝298.10[M+1]。
第四步：
2-氯-9-(6-(羟甲基)螺[3.3]庚烷-2-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(20e)
2-chloro-9-(6-(hydroxymethyl)spiro[3.3]heptan-2-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-4-((6-(羟甲基)螺[3.3]庚烷-2-基)氨基)嘧啶-5-羧酸20d(0.91g,3.06mmol)用N,N-二甲基乙酰胺(12mL)溶解，常温搅拌下加入三乙胺(0.42mL,3.06mmol)和叠氮磷酸二苯酯(0.66mL,10.01mmol)反应2h，升温至110℃回流反应2.5h。TLC监测至反应结束，反应液中加水和乙酸乙酯进行萃取，浓缩有机层经硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)纯化得标题化合物2-氯-9-(6-(羟甲基)螺[3.3]庚烷-2-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮20e(白色固体，516mg，产率57.28％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.60(s,1H),8.11(s,1H),4.68–4.57(m,1H),4.46(t,1H),3.37–3.32(m,2H),2.95–2.81(m,2H),2.42–2.35(m,1H),2.32–2.19(m,2H),2.19–2.12(m,1H),2.06–1.98(m,1H),1.89–1.77(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝295.10[M+1]。
第五步：
2-氯-9-(6-(羟甲基)螺[3.3]庚烷-2-基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(20f)
2-chloro-9-(6-(hydroxymethyl)spiro[3.3]heptan-2-yl)-7-methyl-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(6-(羟甲基)螺[3.3]庚烷-2-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮20e(516mg,1.75mmol)用N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶解，0℃搅拌下加入硫酸二甲酯(0.17mL,1.75mmol)和碳酸铯(1.14g,3.50mmol)反应1h。TLC监测至反应结束，把反应液缓慢滴加到冰水中搅拌，加入乙酸乙酯进行萃取，浓缩有机层得标题化合物2-氯-9-(6-(羟甲基)螺[3.3]庚烷-2-基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮20f(白色固体，470mg，产率86.95％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.33(s,1H),4.71–4.60(m,1H),4.10–3.96(m,2H),3.35(s,1H),3.33(s,3H),2.93–2.81(m,2H),2.44–2.36(m,1H),2.32–2.21(m,2H),2.20–2.13(m,1H),2.07–1.99(m,1H),1.89–1.78(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝309.10[M+1]。
第六步：
9-(6-(羟甲基)螺[3.3]庚-2-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物20)
9-(6-(hydroxymethyl)spiro[3.3]heptan-2-yl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(6-(羟甲基)螺[3.3]庚烷-2-基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮20f(100mg,0.32mmol)用1,4-二氧六环(6mL)溶解，常温搅拌下加入7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(72mg,0.49mmol)、碳酸铯(158mg,0.49mmol)、BrettPhos-G3-Pd(29mg,0.032mmol)，氮气保护并换气，随后升温至110℃回流反应4h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)得标题化合物化合物20(白色固体，60mg，产率44.59％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.05(s,1H),8.66(s,1H),8.36(s,1H),8.09(s,1H),7.71(s,1H),4.66–4.54(m,1H),4.40(t,1H),3.29–3.23(m,5H),2.85–2.77(m,2H),2.37(s,3H),2.30–2.22(m,1H),2.19–2.12(m,1H),2.12–2.04(m,2H),1.81–1.74(m,1H),1.66–1.59(m,1H),1.49–1.42(m,1H)。
LC-MS m/z(ESI)＝421.20[M+1]。
实施例21
9-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物21)
9-(3-(hydroxymethyl)bicyclo[1.1.1]pentan-1-yl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000531
Figure BDA0002876667980000532
第一步：
(3-氨基双环[1.1.1]戊烷-1-基)甲醇(21b)
(3-aminobicyclo[1.1.1]pentan-1-yl)methanol
将原料3-(叔丁氧羰基)氨基)二环[1.1.1]戊烷-1-羧酸21a(2.0g,8.80mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，再加入三氟甲酸(10mL)，室温搅拌2h。TLC监测至反应结束，减压旋干溶剂，将得到浅黄色固体溶于四氢呋喃(15mL)中，混合液降温至0℃，缓慢滴加1N的四氢铝锂溶液(16.6mL，1mol/L的四氢呋喃溶液)，滴加完成后，缓慢升温至室温搅拌2h，反应完成后，加入甲醇淬灭反应，减压旋干溶剂，再加入乙腈(50mL)打浆，过滤旋干滤液得到标题化合物(3-氨基双环[1.1.1]戊烷-1-基)甲醇21b(白色固体，890mg，产率89.4％)。
LCMS m/z(ESI)＝114.10[M+1]。
第二步：
2-氯-4-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)氨基嘧啶-5-羧酸乙酯(21c)
ethyl 2-chloro-4-((3-(hydroxymethyl)bicyclo[1.1.1]pentan-1-yl)amino)-pyrimi-dine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(1.74g,7.86mmol),(3-氨基双环[1.1.1]戊烷-1-基)甲醇21b(890mg,7.86mmol)，碳酸钾(1.08g,7.86mmol)溶于乙腈(15mL)，反应液在室温反应16h。TLC监测反应结束，过滤，并用少量乙腈清洗固体，将滤液合并后浓缩，粗品经硅胶柱色谱分离(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)纯化得标题化合物2-氯-4-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)氨基嘧啶-5-羧酸乙酯21c(淡黄色固体，1.11g，产率50.0％)。
LCMS m/z(ESI)＝284.10[M+1]。
第三步：
2-氯-4-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)氨基嘧啶-5-羧酸(21d)
2-chloro-4-((3-(hydroxymethyl)bicyclo[1.1.1]pentan-1-yl)amino)-pyrimidine-5-carboxylate
将2-氯-4-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)氨基嘧啶-5-羧酸乙酯21c(1.11g,3.73mmol)溶解于四氢呋喃/水(10mL/10mL)中，加入氢氧化锂一水合物(0.47g,11.18mmol)，常温搅拌反应1h。TLC监测至反应结束，浓缩蒸发掉四氢呋喃后加入2N HCl调节pH至3-4左右，有白色固体析出，过滤，滤饼用水以及石油醚/乙酸乙酯(v/v＝10/1)洗两次得标题化合物2-氯-4-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)氨基嘧啶-5-羧酸21d(白色固体，534mg，产率53.11％)。
LC-MS m/z(ESI)＝270.10[M+1]。
第四步：
2-氯-9-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(21e)
2-chloro-9-(3-(hydroxymethyl)bicyclo[1.1.1]pentan-1-yl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-4-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)氨基嘧啶-5-羧酸21d(0.50g,1.85mmol)用N,N-二甲基乙酰胺(12mL)溶解，常温搅拌下加入三乙胺(0.40mL,1.85mmol)和叠氮磷酸二苯酯(0.26mL,1.85mmol)反应2h，升温至110℃回流反应2.5h。TLC监测至反应结束，反应液中加水和乙酸乙酯进行萃取，浓缩有机层经硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)纯化得标题化合物2-氯-9-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮21e(白色固体，183mg，产率37.09％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.58(s,1H),8.10(s,1H),4.66(t,1H),3.54(d,2H),2.24(s,6H)。
LCMS m/z(ESI)＝267.10[M+1]。
第五步：
2-氯-9-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(21f)
2-chloro-9-(3-(hydroxymethyl)bicyclo[1.1.1]pentan-1-yl)-7-methyl-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮21e(180mg,0.67mmol)用N,N-二甲基甲酰胺(4mL)溶解，0℃搅拌下加入硫酸二甲酯(64μL,0.67mmol)和碳酸铯(440mg,1.35mmol)反应1h。TLC监测至反应结束，把反应液缓慢滴加到冰水中搅拌，加入乙酸乙酯进行萃取，浓缩有机层经硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)纯化得标题化合物2-氯-9-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮21f(白色固体，80mg，产率42.54％)。
LC-MS m/z(ESI)＝281.10[M+1]。
第六步：
9-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物21)
9-(3-(hydroxymethyl)bicyclo[1.1.1]pentan-1-yl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)-7-甲基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮21f(80mg,0.28mmol)用1,4-二氧六环(6mL)溶解，常温搅拌下加入7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(63mg,0.43mmol)、碳酸铯(139mg,0.43mmol)、BrettPhos-G3-Pd(26mg,0.028mmol)，氮气保护并换气，随后升温至110℃回流反应4h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)得标题化合物9-(3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮化合物21(白色固体，35mg，产率31.85％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.14(s,1H),8.61(s,1H),8.37(s,1H),8.09(s,1H),7.70(s,1H),4.65(t,1H),3.50(d,2H),3.26(s,3H),2.39(s,3H),2.20(s,6H)。
LC-MS m/z(ESI)＝393.20[M+1]。
实施例22：
9-(4,4-二氟环己基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(化合物22)
9-(4,4-difluorocyclohexyl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
Figure BDA0002876667980000551
Figure BDA0002876667980000561
第一步：
2-氯-4-((4,4-二氟环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(22a)
ethyl-2-chloro-4-((4,4-difluorocyclohexyl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(6.5g,29.41mmol)、4,4-二氟环己-1-胺盐酸盐(5.0g,29.41mmol)溶解于乙腈(100mL)，常温搅拌下加入碳酸钾(10.16g,73.52mmol)反应4h。TLC监测至反应完毕后过滤，滤渣用乙酸乙酯清洗，将滤液浓缩通过硅胶柱色谱分离提纯(正己烷/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得标题化合物2-氯-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯22a(白色固体，8.0g，产率85.10％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.85(s,1H),8.11(d,1H),4.34-4.25(m,2H),4.21-4.10(m,1H),2.11-1.91(m,6H),1.71-1.57(m,2H),1.23(t,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝320.10[M+l]。
第二步：
2-氯-4-((4,4-二氟环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸(22b)
2-chloro-4-((4,4-difluorocyclohexyl)amino)pyrimidine-5-carboxylicacid
将2-氯-4-((4,4-二氟环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯22a(4g，12.47mmol)溶解于四氢呋喃/水(50ml/50ml)中，加入氢氧化锂(597.22mg,24.94mmol)，室温搅拌1h。TLC监测至反应完全，旋干四氢呋喃，用2N盐酸调pH为5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚洗两次，搜集固体得到标题化合物2-氯-4-((4,4-二氟环己基)氨基)嘧啶-5-羧酸22b(白色固体，3.4g，产率91.53％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.79(s,1H),8.60(s,1H),8.55(d,1H),4.22-4.06(m,1H),2.12-1.89(m,6H),1.72-1.56(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝292.00[M+l]。
第三步：
2-氯-9-(4,4-二氟环己基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(22c)
2-chloro-9-(4,4-difluorocyclohexyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)嘧啶-5-羧酸22b(3.34g,11.45mmol)溶解于二甲基乙酰胺(50ml)，加入三乙胺(1.6mL,11.45mmol)、叠氮磷酸二苯酯(1.22mL,11.45mmol),随后逐步升温至120℃,搅拌1.5h。TLC监测反应完毕，将反应液倒入冰水中，过滤搜集固体，水洗3次，真空浓缩干燥得标题化合物2-氯-9-(4,4-二氟环己基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮22c(白色固体，2.2g，产率78.5％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.66(s,1H),8.13(s,1H),4.46-4.36(m,1H),2.17-1.94(m,6H),1.87-1.80(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝289.10[M+l]。
第四步：
2-氯-7-甲基-9-(4,4-二氟环己基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(22d)
2-chloro-9-(4,4-difluorocyclohexyl)-7-methyl-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-9-(4,4-二氟环己基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮22c(2.62g，9.08mmol)溶解于二甲基甲酰胺(50mL)，在0℃下加入硫酸二甲酯(1.14g，9.08mmol)和碳酸铯(4.44g,13.61mmol)，0℃搅拌1h。TLC监测反应结束，将反应液倒入冰水中，有固体析出，过滤、搜集固体得到标题化合物2-氯-7-甲基-9-(4,4-二氟环己基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮22d(白色固体，2.2g，产率80％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(s,1H),4.55-4.39(m,1H),3.33(s,3H),2.21-2.01(m,6H),1.90-1.79(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝303.10[M+l]。
第五步：
9-(4,4-二氟环己基)-7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮
9-(4,4-difluorocyclohexyl)-7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one
将2-氯-7-甲基-9-(4,4-二氟环己基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮22d(150mg,0.50mmol)用1,4-二氧六环(6mL)溶解，常温搅拌下加入7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(73mg,0.50mmol)、碳酸铯(323mg,0.99mmol)、甲烷磺酸(2-二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(45mg，0.05mmol)，氮气保护并换气，随后升温至110℃回流反应4h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)得标题化合物化合物22(白色固体，30mg，产率15％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.02(s,1H),8.65(s,1H),8.37(s,1H),8.08(s,1H),7.69(s,1H),4.40–4.32(m,1H),3.30(s,3H),2.36(s,3H),2.11–1.93(m,6H),1.82–1.77(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝415.20[M+l]。
实施例23：
4-(7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)-8-氧代7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基双环[2.2.2]辛烷-1-腈(化合物23)
4-(7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)bicyclo[2.2.2]octane-1-carbonitrile
Figure BDA0002876667980000571
Figure BDA0002876667980000581
第一步：
4-氨基甲酰基双环[2.2.2]辛烷-1-甲酸甲酯(23b)
methyl 4-carbamoylbicyclo[2.2.2]octane-1-carboxylate
将4-(甲氧羰基)双环[2.2.2]辛烷-1-羧酸23a(10.0g，47.12mmol)溶解于无水二氯甲烷(200mL)，冰浴下加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(18.81g,49.47mmol),保持温度反应30min，加入N,N-二异丙基乙胺(24.62mL,141.35mmol),随后缓慢多次加入氯化铵固体(3.78g,70.67mmol)。反应逐步恢复至室温并过夜反应。TLC监测反应结束，反应液直接用0.5N盐酸溶液100mL，分液后有机相依次用水和饱和食盐水各100mL，干燥，浓缩后得目标化合物4-氨基甲酰基双环[2.2.2]辛烷-1-甲酸甲酯23b(白色固体，21g，粗品)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.94(s,1H),6.73(s,1H),3.57(s,3H),1.72-1.63(m,12H)。
LC-MS m/z(ESI)＝212.10[M+1]。
第二步：
4-氰基双环[2.2.2]辛烷-1-羧酸甲酯(23c)
methyl 4-cyanobicyclo[2.2.2]octane-1-carboxylate
将4-氨基甲酰基双环[2.2.2]辛烷-1-甲酸甲酯23b(21g,99.40mmol)溶于二氯甲烷(200mL),冰浴加入吡啶(16.02mL,198.81mmol),三氟乙酸酐(21.00ml,149.10mmol),保持温度继续反应1h。TLC监测反应结束，直接将反应液过滤，滤饼用100ml二氯甲烷清洗，合并有机相，随后用1N盐酸溶液，水，饱和食盐水各100mL，干燥，浓缩后经柱层析分离后得目标产物4-氰基双环[2.2.2]辛烷-1-羧酸甲酯23c(白色固体,5.3g,60mg,两步产率58.21％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3-d6)δ3.66(s,3H),1.98-1.94(m,6H),1.86-1.82(m,6H)。
LC-MS m/z(ESI)＝194.10[M+1]。
第三步：
4-氰基双环[2.2.2]辛烷-1-羧酸(23d)
4-cyanobicyclo[2.2.2]octane-1-carboxylic acid
将4-氰基双环[2.2.2]辛烷-1-羧酸甲酯23c(5.3g，27.43mmol)溶解于四氢呋喃50ml，水50mL中，加入氢氧化锂(1.73g,41.14mmol)，室温搅拌1h。TLC监测反应完全，浓缩除去四氢呋喃，用2N盐酸调pH为5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚洗两次，搜集固体得到标题化合物4-氰基双环[2.2.2]辛烷-1-羧酸23d(白色固体，5.0g，粗品)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.23(s,1H),1.89-1.85(m,6H),1.72-1.68(m,6H)。
LC-MS m/z(ESI)＝180.10[M+1]。
第四步：
4-氨基双环[2.2.2]辛烷-1-腈盐酸盐(23e)
4-aminobicyclo[2.2.2]octane-1-carbonitrile hydrochloride
将4-氰基双环[2.2.2]辛烷-1-羧酸23d(5.0g,27.90mmol)溶于甲苯(60mL)中，冰浴加入叠氮磷酸二苯酯(6.01mL,27.90mmol)和三乙胺(3.88mL,27.90mmol),将反应液室温搅拌1h后升温至90度继续反应3h。TLC监测至反应结束，冷却至室温，缓慢倒入100mL 1N盐酸溶液，出现大量固体，过滤，收集固体，且用乙酸乙酯(150mL)打浆，真空干燥得标题化合物4-氨基双环[2.2.2]辛烷-1-腈盐酸盐23e(白色固体，7.3g，粗品)。
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ8.45(s,2H),2.01–1.97(m,6H),1.81-1.76(m,6H)。
LC-MS m/z(ESI)＝151.20[M+1]。
第五步：
2-氯-4-((4-氰基双环[2.2.2]辛烷-1-基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(23f)
ethyl 2-chloro-4-((4-cyanobicyclo[2.2.2]octan-1-yl)amino)pyrimidine-5-carboxylate
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯1a(8.74g,39.53mmol),4-氨基双环[2.2.2]辛烷-1-腈盐酸盐23e(7.38g,39.53mmol,60％纯度),碳酸钾(21.85g,158.13mmol)溶于乙腈(200mL)，反应液在室温反应16h。TLC监测反应结束，过滤，并用少量乙腈清洗固体，将滤液合并后浓缩，粗品经硅胶柱色谱分离(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)后得标题化合物2-氯-4-((4-氰基双环[2.2.2]辛烷-1-基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯23f(白色固体，4.0g，产率30.23％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.63(s,1H),8.29(s,1H),4.30(q,2H),2.10–2.00(m,12H),1.30(t,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝335.10[M+1]。
第六步：
2-氯-4-((4-氰基双环[2.2.2]辛烷-1-基)氨基)嘧啶-5-羧酸(23g)
2-chloro-4-((4-cyanobicyclo[2.2.2]octan-1-yl)amino)pyrimidine-5-carboxylic acid
将2-氯-4-((4-氰基双环[2.2.2]辛烷-1-基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯23f(4g，11.95mmol)溶解于四氢呋喃50mL，水50mL中，加入氢氧化锂(1.01g,23.90mmol)，室温搅拌1h。TLC监测反应完全，浓缩除去四氢呋喃，用2N盐酸调pH为5，有白色固体析出，过滤，滤饼用石油醚洗两次，搜集固体得到标题化合物2-氯-4-((4-氰基双环[2.2.2]辛烷-1-基)氨基)嘧啶-5-羧酸23g(3.6g,白色固体,产率98.23％)，直接进行下一步实验。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.85(s,1H),8.59(s,1H),8.56(s,1H),2.07–1.98(m,12H)。
LCMS m/z(ESI)＝307.10[M+l]。
第七步：
4-(2-氯-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)双环[2.2.2]辛烷-1-腈(23h)
4-(2-chloro-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)bicyclo[2.2.2]octane-1-carbonitrile
将2-氯-4-((4-氰基双环[2.2.2]辛烷-1-基)氨基)嘧啶-5-羧酸23g(3.8g,12.39mmol)溶解于二甲基乙酰胺(50mL)，加入三乙胺(1.72mL,12.39mmol)、叠氮磷酸二苯酯(2.67mL,12.39mmol),随后逐步升温至120℃,搅拌1.5h。TLC监测反应完毕，将反应液倒入冰水中,过滤搜集固体,水洗3次，真空浓缩干燥得4-(2-氯-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)双环[2.2.2]辛烷-1-腈23h(3.3g，白色固体,产率87.7％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.61(s,1H),8.09(s,1H),2.48–2.40(m,6H),2.09–2.03(m,6H)。
LC-MS m/z(ESI)＝304.20[M+l]。
第八步：
4-(2-氯-7-甲基-8-氧代7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)双环[2.2.2]辛烷-1-腈(23i)
4-(2-chloro-7-methyl-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)bicyclo[2.2.2]octane-1-carbonitrile
将4-(2-氯-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)双环[2.2.2]辛烷-1-腈23h(3.3g，11.43mmol)溶解于二甲基甲酰胺(50mL)，在0℃下加入硫酸二甲酯(1.44g，11.43mmol)和碳酸铯(5.59g,17.15mmol)，0度搅拌1h。TLC监测反应结束，将反应液倒入冰水中，有固体析出，过滤、搜集固体得到标题化合物4-(2-氯-7-甲基-8-氧代7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)双环[2.2.2]辛烷-1-腈23i(3.1g，白色固体,产率89.59％)。
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ8.33(s,1H),3.29(s,3H),2.48–2.41(m,6H),2.10–2.04(m,6H)。
LC-MS m/z(ESI)＝318.20[M+l]。
第九步：
4-(7-甲基-2-((7-甲基-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶-6-基)氨基)8-氧代7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)双环[2.2.2]辛烷-1-腈
4-(7-methyl-2-((7-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)amino)-8-oxo-7,8-dihydro-9H-purin-9-yl)bicyclo[2.2.2]octane-1-carbonitrile
将4-(2-氯-7-甲基-8-氧代7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)双环[2.2.2]辛烷-1-腈23i(150mg,0.47mmol)用1,4-二氧六环(10mL)溶解，常温搅拌下加入7-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-胺(70mg,0.47mmol)、碳酸铯(307mg,0.94mmol)、甲烷磺酸(2-二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(43mg，0.047mmol)，氮气保护并换气，随后升温至110℃回流反应4h。TLC监测至反应结束，浓缩反应液，残留物用硅胶柱色谱分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)得标题化合物化合物23(白色固体，60mg，产率29.60％)。
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ9.13(s,1H),8.61(s,1H),8.39(s,1H),8.09(s,1H),7.71(s,1H),3.24(s,3H),2.42-2.46(m,6H),2.39(s,3H),1.98-2.02(m,6H)。
LC-MS m/z(ESI)＝430.20[M+l]。
生物学试验
1、DNA-PK激酶抑制试验
通过DNA-PK激酶检测试剂盒(DNA-PK kinase assay kit)(购买自Promega公司，货号：V4107，批号：0000366495)检测化合物对DNA-PK激酶的抑制活性。利用化学发光对结果进行定量，具体实验方案如下：
i.按照试剂盒说明书构建不同浓度ADP-荧光标准曲线；
ii.于384孔白色板中制备5μL反应体系，每孔中分别加入1μL化合物(分别设定浓度梯度1μM、200nM、40nM、8nM、1.6nM、0.32nM、0.064nM、0.013nM)、20units DNA-PK激酶、0.2μg/μL底物、10μg/μL DNA、50μM ATP、1％DMSO；
iii.混匀，离心(1000rpm，30s)，37℃孵育60min；
iv.加入5μL ADP-GloTM Reagent终止反应，混匀，离心(1000rpm，30s)，室温孵育40min；
v.加入10μLKinase Detection Reagent，震荡混匀，离心(1000rpm，30s)，室温孵育30min；
vi.利用酶标仪(Thermo fisher，Varioskan LUX)测定荧光值。利用GraphPadPris m 8进行IC50的计算，结果如表1所示。
表1本发明化合物DNA-PK激酶抑制活性
化合物编号 IC<sub>50</sub>(nM)
1 C
2 B
3 B
4 B
5 C
6-1 B
6-2 B
7-1 A
7-2 A
8 A
9 A
11 C
12 B
13 B
14 B
15 C
16 B
17 B
18 B
19 B
20 B
21 C
22 B
23 B
对照例 D
注：对照例为参考J.Med.Chem(2020),63(7),3461-3471化合物3，对照例按照其制备方法制备得到。
0<A≤1nM；
1nM<B≤5nM；
5nM<C≤50nM；
50nM<D≤100nM；
100nM<E。
结论：结果表明，与对照例相比，本发明化合物对DNA-PK激酶具有更显著的抑制效果。
2、增殖抑制实验
2.1、实验材料
A549细胞(购自ATCC)、Doxorubicin hydrochloride(多柔比星，购自上海陶素生化科技有限公司，货号：T1020)、DMEM(10％FBS)培养基、96孔白板、细胞活力检测试剂盒(购自Promega，货号：G9241)。
2.2、实验步骤
A549细胞重悬后进行计数，铺96孔板，500个/孔(80μL)；过夜培养。
配置10×药物浓度梯度(1：5)：初始浓度为100μM，用培养基1：5倍比稀释为20μM、4μM、800nM、160nM、32nM、6.4nM、1.3nM(终浓度10μM、2μM、0.4μM、80nM、16nM、3.2nM、0.64nM、0.13nM)。
3.每孔中加入10μL待测化合物，每个浓度梯度做2个重复，设置单药组(待测化合物或者Doxorubicin)、联用组、培养基对照组：
单药组：加入待测化合物(终浓度10μM、2μM、0.4μM、80nM、16nM、3.2nM、0.64nM、0.13nM)，或者只加入doxorubicin(终浓度10μM、2μM、0.4μM、80nM、16nM、3.2nM、0.64nM、0.13nM)，37℃温箱继续培养120h；
联用组：加入待测化合物(终浓度10μM、2μM、0.4μM、80nM、16nM、3.2nM、0.64nM、0.13nM)，37℃温箱孵育1h后，每孔再加入10nM Doxorubicin(10μL/孔)，37℃温箱继续培养120h；
对照组：加入20μL培养基，37℃温箱继续培养120h。
4.取出细胞培养板，加入细胞培养液等体积的检测液(100μL培养基，加入100μL检测液)。
5.震板机上震动2min，裂解细胞。
6.室温放置10min，使信号稳定。
7.酶标仪(Thermo fisher；Varioskan LUX)测定化学发光值。
结论：本发明化合物与Doxorubicin联用对A549细胞具有更显著增殖抑制作用，且细胞毒性降低。
3、移植瘤抑制实验
3.1实验材料：A549细胞(购自ATCC)；Doxorubicin脂质体(Dox)(Lipo Doxorubicin，商品名“里葆多”，购自上海复旦张江生物医药股份有限公司)；6周龄雌性裸鼠(体重18-20g)(北京维通利华实验动物技术有限公司)，每组10只鼠。
3.2Doxorubicin与待筛选化合物联用对A549移植瘤的抑制效果测定：
3.2.1收集处于生长对数期的A549细胞，预冷PBS洗2次后备用；
3.2.2Balb/c裸小鼠实验室环境适应3天，于右肋部皮下接种A549细胞，接种细胞量为5×106/只，待肿瘤生长至200mm3左右时进行药效实验；
3.2.3将成功长瘤的小鼠进行随机分组，设置单独Doxorubicin(Dox)组、待测化合物和Dox联用组、对照组(Vehicle)，给药21天；小鼠灌胃给药(i.g.)，每日2次(BID，给药体积5mL/kg；溶剂为5％DMSO+30％2-羟丙基-β-环糊精)。早上灌胃给药1h后，由尾静脉注射Lipo Doxorubicin(2.5mg/kg)；每周1次(QW，给药体积5mL/kg；)；
3.2.4每周称量2次小鼠体重，并同时测定肿瘤体积：肿瘤体积(V)计算公式为：V＝1/2×L长×L短 2,并计算抑瘤率，抑瘤率(％)＝(D21肿瘤体积(Vehicle)-D21肿瘤体积(给药组))/D21肿瘤体积(Vehicle)×100；
3.2.5给药21天后，分离肿瘤并称重，并计算体重变化率，体重变化率(％)＝(D21体重-D0体重)/D0体重×100。
结论：实验结果表明，本发明化合物与Doxorubicin联用均显著提高Doxorubicin的肿瘤抑制效果，且不会引起明显的体重减轻。
本发明说明书对具体实施方案进行了详细描述，本领域技术人员应认识到，上述实施方案是示例性的，不能理解为对本发明的限制，对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，通过对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰获得技术方案也落在本发明的权利要求书的保护范围内。

Claims (8)

1.通式(I)所示的化合物，或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶：
Figure FDA0002876667970000011
其中：
R1选自H、-OH、氰基、卤素、-NH2、C1-6烷基或者C1-6烷氧基，所述的C1-6烷基任选进一步被1-3个选自D或者卤素的取代基所取代；
R2选自H或者C1-6烷基；
R3选自C1-6烷基、C3-12碳环基、C3杂环基、C4-12杂环基、-C1-6亚烷基-C3-12碳环基、-C1-6亚烷基-C3杂环基或者-C1-6亚烷基-C4-12杂环基，所述的C3杂环基和C4-12杂环基包含1至3个选自N、O或者S的杂原子，所述的C1-6烷基、C3-12碳环基、C3杂环基和C4-12杂环基、C1-6亚烷基任选进一步被1个或者多个选自-OH、羧基、卤素、氰基、＝O、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-NRa1Ra2、-C(＝O)OC1-6烷基、-C(＝O)NRa1Ra2、C3-12环烷基、C3杂环烷基、C4-12杂环烷基、C6-12芳基或者C5-12杂芳基的取代基所取代；且所述取代基中的所述的C1-6烷基、C1-6杂烷基、C2-6烯基或者C2-6炔基任选进一步被1个或者多个选自-OH、羧基、氰基、卤素、-O-Ra1、-NRa1Ra2、C3-12环烷基、C3杂环烷基、C4-12杂环烷基、C6-12芳基或者C5-12杂芳基的取代基所取代；
条件是：当R3为环己基时，所述的环己基至少被一个氰基取代；且R3不为四氢呋喃基或者氧杂环己基；
Ra1、Ra2各自独立地选自H、C1-6烷基、-C(＝O)Ra3或者-C(＝O)NRa4Ra5，其中所述的C1-6烷基任选进一步被1个或者多个选自OH、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C6-12芳基、C5-12杂芳基、C3-12环烷基、C3杂环烷基、或者C4-12杂环烷基的取代基所取代；
Ra3选自C1-6烷基、C1-6烷氧基或者C6-12芳基；
Ra4、Ra5各自独立地选自H或者C1-6烷基；或者Ra4与Ra5及N原子形成3至8元杂环，所述的3至8元杂环包含1个至4个选自N、O或者S的杂原子；
p选自0、1、2或者3；
任选地，通式(I)被1个或者多个D原子取代。
2.根据权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中该化合物选自通式(II)所示的化合物：
Figure FDA0002876667970000012
其中：
R1选自卤素或者C1-6烷基，所述的C1-6烷基任选进一步被1-3个选自D或者卤素的取代基所取代；
R3选自C1-6烷基、C3-12碳环基、C3杂环基、C4-12杂环基、-C1-6亚烷基-C3-12碳环基、-C1-6亚烷基-C3杂环基或者-C1-6亚烷基-C4-12杂环基，所述的C3杂环基和C4-12杂环基包含1至3个选自N、O或者S的杂原子，所述的C1-6烷基、C3-12碳环基、C3杂环基和C4-12杂环基、C1-6亚烷基任选进一步被1个或者多个选自-OH、羧基、卤素、氰基、＝O、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-NRa1Ra2、-C(＝O)OC1-6烷基、-C(＝O)NRa1Ra2、C3-12环烷基、C3杂环烷基、C4-12杂环烷基、C6-12芳基或者C5-12杂芳基的取代基所取代；且所述取代基中的所述的C1-6烷基、C1-6杂烷基、C2-6烯基或者C2-6炔基任选进一步被1个或者多个选自-OH、羧基、氰基、卤素、-O-Ra1、-NRa1Ra2、C3-12环烷基、C3杂环烷基、C4-12杂环烷基、C6-12芳基或者C5-12杂芳基的取代基所取代；
条件是：当R3为环己基时，所述的环己基至少被一个氰基取代；且R3不为四氢呋喃基或者氧杂环己基；
Ra1、Ra2各自独立地选自H、C1-6烷基、-C(＝O)Ra3或者-C(＝O)NRa4Ra5，其中所述的C1-6烷基任选进一步被1个或者多个选自OH、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C6-12芳基、C5-12杂芳基、C3-12环烷基、C3杂环烷基或者C4-12杂环烷基的取代基所取代；
Ra3选自C1-6烷基、C1-6烷氧基或者C6-12芳基；
Ra4、Ra5各自独立地选自H或者C1-6烷基；或者Ra4与Ra5及N原子形成3至8元杂环，所述的3至8元杂环包含1个至4个选自N、O或者S的杂原子；
p选自0、1、2或者3。
3.根据权利要求2所述的化合物，或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中：
R1选自卤素或者C1-4烷基，所述的C1-6烷基任选进一步被1-3个选自D或者卤素的取代基所取代；
R3选自C1-4烷基、C3-8碳环基、C4-8杂环基、-C1-2亚烷基-C3-8碳环基或者-C1-2亚烷基-C4-8杂环基，所述的C4-8杂环基包含1至3个选自N或者O的杂原子，所述的C1-4烷基、C3-8碳环基和C4-8杂环基、C1-2亚烷基任选进一步被1个或者多个选自-OH、卤素、＝O、氰基或者C1-4烷基的取代基所取代；且所述取代基中的所述的C1-4烷基任选进一步被1个或者多个选自-OH、氰基或者卤素的取代基所取代；条件是：当R3为环己基时，所述的环己基至少被一个氰基取代；且R3不为四氢呋喃基或者氧杂环己基；
p选自1。
4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物，或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中该化合物选自以下结构之一：
Figure FDA0002876667970000021
Figure FDA0002876667970000031
Figure FDA0002876667970000032
或者
Figure FDA0002876667970000033
5.制备权利要求1-4任一项所述的化合物的中间体，所述的中间体选自：
Figure FDA0002876667970000034
Figure FDA0002876667970000041
Figure FDA0002876667970000042
或者
Figure FDA0002876667970000043
6.药物组合物，所述药物组合物包括：
(1)权利要求1至5中任一项所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶；
(2)任选的一种或者多种其他活性成分；以及
(3)药学上可接受的载体和/或赋形剂。
7.权利要求1-4中任一项所述的化合物、或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶或者权利要求6所述的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
8.权利要求1-4中任一项所述的化合物、或者其立体异构体、溶剂化物、前药、氘代物、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶或者权利要求6所述的药物组合物在制备DNA-PK抑制剂中的用途。
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