CN112409486B - 一种抗cd40抗体及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种特异性结合CD40的抗体或其抗原结合部分,属于抗体技术领域。所述抗体或其抗原结合部分的重链可变区CDR‑H1、CDR‑H2、CDR‑H3和轻链可变区CDR‑L1、CDR‑L2、CDR‑L3分别包括SEQ ID NO.3‑8所示的氨基酸序列。本发明的抗CD40抗体具有极高的亲和力和特异性,在相关研究和应用领域有巨大的潜力和优势,另外,其与CD40结合,可以形成类似CD40L‑CD40配受体的复合物,从而启动信号通路,促进B细胞增殖,还可刺激B细胞类别转换,分化成浆细胞。
Description
技术领域
本发明属于抗体领域,具体地,涉及一种抗CD40抗体及其应用。
背景技术
CD40与CD40L互为受配体,CD40是一种相对分子质量为48KD的在免疫系统的B细胞和专门抗原呈递细胞表面以及许多非造血细胞类型和癌细胞中表达的Ⅰ型膜糖蛋白,属于神经生长因子受体/肿瘤坏死因子受体超家族成员。CD40前体含有297个氨基酸,N端为20个氨基酸的信号肽,胞外区有193个氨基酸,跨膜区有22个氨基酸,胞内区有62个氨基酸。其中胞外区的193个氨基酸构成4个富含半胱氨酸的结构域,在铰链区的71个氨基酸中含有9个丝氨酸和7个苏氨酸,是潜在的糖基化位点。CD40的糖基化程度较高,糖基化后的相对分子量可高达40KD~50KD。
CD40L与CD40分子结合后,能使膜CD40分子交联和配基化,继而使CD40分子多聚化,构成CD40信号传导的结构基础和始动因素。通过CD40传导信号活化的NF-κB可激活磷酸络氨酸激酶(PTK)和丝氨酸/素氨酸激酶,这是CD40介导的B细胞活化的关键步骤。B细胞表面的CD40与CD40L结合后,可导致非受体型酪氨酸激酶(JAK3)和信号转导及转录激活因子3(STAT3)的络氨酸磷酸化,从而激活这两个信号转导分子。而JAK3-STAT3信号途径和TRAF信号转导途径,包括TNF受体相关因子2(TRAF2)介导的NF-κb和TRAF3的活化,协同参与了免疫球蛋白的类别转换。表达在CD4+T细胞表面的CD40L与未致敏的B细胞表面的CD40分子结合后,通过上述信号通路传递给B细胞中必要的活化信号,从而启动B细胞的增殖,类别转换以及分化成浆细胞。
CD40不但在正常的免疫细胞上表达,还可以在许多恶性细胞上表达。例如,CD40在以下疾病中过表达:B系NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、多毛细胞白血病(HCL)、霍奇金病、多发性骨髓瘤以及膀胱癌、肾癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、肺癌、鼻咽癌、恶性黑色素瘤等。
因此,开发CD40抗体有助于包括肿瘤在内的相关疾病治疗的辅助诊断。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗CD40抗体及其应用,为此,本发明采用的技术方案如下:
本发明第一方面提供一种抗CD40的抗体或其抗原结合部分,其重链可变区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3和轻链可变区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3分别包括SEQ ID NO:3-8所示的氨基酸序列。
在本发明的一些实施方案中,所述抗原结合部分选自Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段和单域抗体。
在本发明的一些实施方案中,重链可变区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3和轻链可变区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3分别由SEQ ID NO:3-8所示的氨基酸序组成。
本发明的第二方面提供编码本发明第一方面任一所述抗体或其抗原结合部分的基因,编码重链的基因包括SEQ ID NO.1所示核苷酸序列,编码轻链的基因包括SEQ IDNO.2所示核苷酸序列。
本发明的第三方面提供一种表达载体,包括本发明第二方面所述的基因。在本发明的一些实施方案中,所述载体为原核表达载体或真核表达载体。
本发明的第四方面提供一种宿主细胞,其含有本发明第三方面所述的表达载体。
在一些实施方案中,所述载体为原核表达载体,所述宿主细胞为原核细胞,如大肠杆菌。在另一些实施方案中,所述载体为真核表达载体,所述宿主细胞为真核细胞。
本发明第五方面提供本发明第一方面所述的抗体或其抗原结合部分在制备用于检测CD40蛋白的试剂盒中的应用。
在一些实施方案中,检测CD40蛋白的方法选自酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法和流式细胞法。
本发明第六方面提供一种用于检测CD40蛋白的试剂盒,包括本发明第一方面所述的抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中,所述试剂盒适用于选自酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法和流式细胞法的检测方法。
本发明第七方面提供本发明第一方面所述的抗体或其抗原结合部分在制备用于促进B细胞增殖的试剂盒中的应用。
本发明第七方面提供一种用于促进B细胞增殖的试剂盒,包括本发明第一方面所述的抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中,撰述抗体或其抗原结合部分能够与CD40结合,形成类似CD40L-CD40配受体的复合物,从而启动信号通路,促进B细胞增殖。进一步,还可刺激B细胞类别转换,分化成浆细胞。
本发明的有益效果
相对于现有技术,本发明具有以下有效效果:
本发明的抗CD40的兔单克隆抗体具有极高的特异性,解离平衡常数KD=2.47×10-11,在相关研究和应用领域有巨大的潜力和优势,比如应用于以CD40为靶点的治疗方案的伴随诊断中。
本发明的抗CD40的兔单克隆抗体与CD40结合,可以形成类似CD40L-CD40配受体结合,从而启动信号通路,促进B细胞增殖。进一步,还可刺激B细胞类别转换,分化成浆细胞。
附图说明
图1示出了本发明抗CD40抗体可促进B细胞增殖。A:对照组,B:实验组。
图2示出了利用抗CD40兔单克隆抗体通过酶联免疫吸附法检测CD40重组蛋白的结果。
图3示出了利用抗CD40兔单克隆抗体通过蛋白质印迹法检测CD40重组蛋白的结果。泳道1:1:500,泳道2:1:1000,泳道3:1:2000,泳道4:1:4000,泳道5:1:8000,泳道6:1:16000,泳道7:1:32000,tublin:微管蛋白。
图4示出了利用抗CD40兔单克隆抗体检测Raji细胞CD40蛋白的流式细胞检测结果。左侧峰为加入兔同型对照的Raji细胞荧光强度峰,右侧峰为加入了抗CD40兔单克隆抗体的Raji细胞荧光强度峰。
图5示出了抗CD40兔单克隆抗体与CD40L竞争结合CD40的ELISA曲线。
具体实施方式
为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。
实施例
以下例子在此用于示范本发明的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白,下述例子中披露的技术代表发明人发现的可以用于实施本发明的技术,因此可以视为实施本发明的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白,这里所公开的特定实施例可以做很多修改,仍然能得到相同的或者类似的结果,而非背离本发明的精神或范围。
除非另有定义,所有在此使用的技术和科学的术语,和本发明所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同,在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。
那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的发明的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。
下述实施例中,包含人CD40蛋白的胞外结构域特异的重组蛋白序列为:UniProtKB-P25942,aa21-aa150,委托近岸蛋白质科技有限公司合成。
下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的仪器设备,如无特殊说明,均为实验室常规仪器设备;下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明,均为自常规生化试剂商店购买得到的。
实施例1抗CD40单克隆抗体及其制备
以包含人CD40蛋白的胞外结构域特异的重组蛋白为免疫原对实验兔进行背部皮下注射免疫。取实验兔血并分离外周血单核细胞(PBMC),标记并筛选PBMC中的B细胞,获取表达抗CD40抗体的B细胞遗传信息进行扩增重组,筛选符合要求的遗传信息装载入载体后转染载体细胞,载体细胞培养分泌的抗体经过纯化后获得单克隆抗体。
具体步骤如下:
1.合成包含人CD40蛋白的胞外结构域特异重组蛋白(Novoprotein)。
2.免疫原与佐剂等体积混合后背部皮下注射实验兔进行免疫。每次免疫使用0.1mg免疫原,共免疫4次。
3.第4次免疫后取实验兔血分离血清,使用10μg/mL CD40重组蛋白包被,第二天5%脱脂奶封闭60min,清洗3次,实验兔血清从1:100开始按照4倍倍比稀释孵育60min,清洗3次,加入HRP羊抗兔二抗孵育60min,清洗3次,加入TMB显色液孵育15min后终止显色反应,在酶标仪上读取OD450吸光值,读值高于0.5血清合格
4.血清值合格的实验兔采抗凝血20mL,加入20mL淋巴细胞分离液1500RPM离心30min,去除第一层血浆后,吸取第二层淋巴细胞。
5.分离的淋巴细胞于生物素交联的CD40重组蛋白孵育5min后再于抗生物素磁珠继续孵育15min,使用磁力架吸附并洗脱杂细胞,清洗3次后收集特异性淋巴细胞计数。
6.按照5个细胞/孔进行有限稀释,将淋巴细胞接种至96孔板培养。
7.3天后吸取50μL上清进行ELISA检测。使用10μg/mL CD40重组蛋白包被,第二天5%脱脂奶封闭60min,清洗3次,加入淋巴细胞培养上清孵育60min,清洗3次,加入HRP羊抗兔二抗(Jackson ImmunoResearch,111-035-144)孵育60min,清洗3次,加入TMB显色液孵育15min后终止显色反应,在酶标仪上读取OD450吸光值,读值高于0.5上清合格。
8.将上清合格孔内的淋巴细胞裂解提取总RNA,以其中的mRNA为模板,使用引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得阳性B细胞克隆抗体的H链和L链基因。
H链基因序列:(SEQ ID NO.1)
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGGAGCAGCTGGAGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCAAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTGTCCTTCAGTAACAAGTACGTGATGTCCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGCATACATTGTTATTGGCAGTAGTGGTAGTAGTGCTACCACTTACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCGAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCAAAAAGATATAGTAGTAGTAGTGGTTATTATAGATCATTTAACTTGTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGGCAACCTAAGGCTCCATCAGTCTTCCCACTGGCCCCCTGCTGCGGGGACACACCCAGCTCCACGGTGACCCTGGGCTGCCTGGTCAAAGGGTACCTCCCGGAGCCAGTGACCGTGACCTGGAACTCGGGCACCCTCACCAATGGGGTACGCACCTTCCCGTCCGTCCGGCAGTCCTCAGGCCTCTACTCGCTGAGCAGCGTGGTGAGCGTGACCTCAAGCAGCCAGCCCGTCACCTGCAACGTGGCCCACCCAGCCACCAACACCAAAGTGGACAAGACCGTTGCGCCCTCGACATGCAGCAAGCCCACGTGCCCACCCCCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCACGCACCCCCGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGATGACCCCGAGGTGCAGTTCACATGGTACATAAACAACGAGCAGGTGCGCACCGCCCGGCCGCCGCTACGGGAGCAGCAGTTCAACAGCACGATCCGCGTGGTCAGCACCCTCCCCATCGCGCACCAGGACTGGCTGAGGGGCAAGGAGTTCAAGTGCAAAGTCCACAACAAGGCACTCCCGGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAGAGGGCAGCCCCTGGAGCCGAAGGTCTACACCATGGGCCCTCCCCGGGAGGAGCTGAGCAGCAGGTCGGTCAGCCTGACCTGCATGATCAACGGCTTCTACCCTTCCGACATCTCGGTGGAGTGGGAGAAGAACGGGAAGGCAGAGGACAACTACAAGACCACGCCGGCCGTGCTGGACAGCGACGGCTCCTACTTCCTCTACAGCAAGCTCTCAGTGCCCACGAGTGAGTGGCAGCGGGGCGACGTCTTCACCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCTTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCCATCTCCCGCTCTCCGGGTAAATGA
L链基因序列:(SEQ ID NO.2)
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCTCAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAACTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCGGTCCAGTCCGAGTGTTTATAATAACAACTACTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTATTATACATCCACTCTGTCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCACTTATGATGGTAGACGTGTTGACTATGCTACCTTCGGCGGGGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAGGTGATCCAGTTGCACCTACTGTCCTCATCTTCCCACCAGCTGCTGATCAGGTGGCAACTGGAACAGTCACCATCGTGTGTGTGGCGAATAAATACTTTCCCGATGTCACCGTCACCTGGGAGGTGGATGGCACCACCCAAACAACTGGCATCGAGAACAGTAAAACACCGCAGAATTCTGCAGATTGTACCTACAACCTCAGCAGCACTCTGACACTGACCAGCACACAGTACAACAGCCACAAAGAGTACACCTGCAAGGTGACCCAGGGCACGACCTCAGTCGTCCAGAGCTTCAATAGGGGTGACTGTTAG
9.将H链和L链基因连接到载体上并转入大肠杆菌中,提取其质粒后转入293细胞内表达得到抗CD40单克隆抗体。
经分析,该抗CD40单克隆抗体的重链可变区CDR-H1、CDR-H3、CDR-H3和轻链可变区CDR-L1、CDR-L3、CDR-L3的氨基酸序列如下:
(1)CDR-H1氨基酸序列包括:SYAMN(SEQ ID NO:3)。
(2)CDR-H2氨基酸序列包括:YINIDSRAYYASWAKG(SEQ ID NO:4)。
(3)CDR-H3氨基酸序列包括;GVSGSDYVTTL(SEQ ID NO:5)。
(4)CDR-L1氨基酸序列包括:QASQSVDRNNDLA(SEQ ID NO:6)。
(5)CDR-L2氨基酸序列包括:FASKLAS(SEQ ID NO:7)。
(6)CDR-L3氨基酸序列包括:LGVYYGAGWDDV(SEQ ID NO:8)。
实施例2抗CD40兔单克隆抗体解离平衡常数测定
1.CD40重组蛋白100ng/mL,包被酶标板,用封膜封板,4℃过夜。
2.次日,将酶标板至于洗板机上,用PBST洗板3次后,每孔加入BSA封闭液封闭酶标板,置于30℃,恒温摇床震荡封闭约1h。
3.将实施例1制备的抗CD40兔单克隆抗体4倍倍比稀释至9个梯度,分别为1000ng/mL、250ng/mL、62.5ng/mL、15.625ng/mL、3.906ng/mL、0.977ng/mL、0.244ng/mL、0.061ng/mL,0.0153ng/mL每孔加入50μL置于30℃,恒温摇床震荡孵育约1h。
4.将酶标板至于洗板机上,用PBST洗板3次
5.每孔加50μL HRP偶联的羊抗兔IgG二抗(Jackson ImmunoResearch,111-035-144),置于30℃,恒温摇床震荡孵育约45min。
6.将酶标板至于洗板机上,用PBST洗板3次
7.每孔加50μLTMB底物显色液,置于30℃,恒温摇床震荡避光显色约15min
8.加50μL H2SO4终止液终止反应,约5min后于酶标仪上读取OD450吸光值。酶标仪根据下述公式自动计算解离平衡常数:
[RL]/[R]=1/(1+KD/[L])
注:[R]:CD40重组蛋白包被浓度;
[L]:CD40兔单克隆抗体浓度;
[RL]:CD40重组蛋白和CD40兔单克隆抗体复合物浓度;
KD:[L]相对于[R]的KD值即亲和力,为对应浓度下[L]的EC50值。
结果显示,抗CD40兔单克隆抗体与CD40重组蛋白的解离平衡常数为KD=2.47×10-11,表明实施例1制备的抗CD40兔单克隆抗体与CD40重组蛋白具有较高的结合能力。
实施例3抗CD40兔单克隆抗体在促进B细胞增殖中的应用
实验兔外周抗凝血,使用淋巴细胞分离液(密度梯度法)分离外周血中的淋巴细胞。
将淋巴细胞以3个细胞/孔进行有限稀释接种至10块96孔板中培养。10块96孔板分为实验(板1~5)和对照(板6~10)两组,其中实验组添加2μg/mL实施例1制备的抗CD40兔单克隆抗体,对照组不添加。
4天后,对照组B细胞在显微镜下观察均已凋亡,成团聚集,未形成克隆(图1A);加入抗CD40兔单克隆抗体的实验组约有38%孔可见B细胞增殖形成克隆(图1B)。
由此可知,抗CD40兔单克隆抗体会与淋巴细胞表面CD40结合,形成类似以CD40L配受体结合的方式,从而开启CD40-CD40L信号通路,刺激B细胞转化为浆细胞,并增殖。
实施例4利用抗CD40兔单克隆抗体通过酶联免疫吸附法检测CD40重组蛋白
1.使用10μg/mL CD40重组蛋白包被酶标板,用封膜封板,4℃过夜。
2.次日,将酶标板至于洗板机上,用PBST洗板3次后,每孔加入脱脂奶或BSA封闭液封闭酶标板,置于30℃,恒温摇床震荡封闭约1h。
3.将实施例1制备的抗CD40兔单克隆抗体预稀释至8个梯度,分别为1000ng/mL、250ng/mL、62.5ng/mL、15.625ng/mL、3.906ng/mL、0.977ng/mL、0.244ng/mL、0.061ng/mL,每孔加入50μL置于30℃,恒温摇床震荡孵育约1h。
4.洗板后,每孔加50μL HRP偶联的羊抗兔IgG二抗(Jackson ImmunoResearch,111-035-144),置于30℃,恒温摇床震荡孵育约45min。
5.洗板后,每孔加50μL TMB底物显色液,置于30℃,恒温摇床震荡避光显色约15min。
6.加50μL H2SO4终止液终止反应,约5~30min后于酶标仪上读取吸光值。
结果如图2所示,可见各个稀释度间读值明显差异,证明抗体能与CD40重组蛋白特异性结合。
实施例5利用抗CD40兔单克隆抗体通过蛋白质印迹法检测CD40重组蛋白
1.用CD40重组蛋白裂解液制胶并电泳转至PVDF膜。
2.5%脱脂奶封闭60min。
3.清洗并在第1泳道加入100ng/mL实施例1制备的抗CD40兔单克隆抗体,在2~7泳道分别加入2倍倍比稀释的抗CD40兔单克隆抗体孵育60min。
4.清洗,加入羊抗兔HRP二抗(Thermo Scientific,31460)孵育60min。
5.清洗后滴加2mL ECL显影液,室温显影5min后在成像仪中曝光60秒,拍摄图片。
结果如图3所示,42KD的特异性位置条带的强度随着抗体稀释度变大而变弱,由此可证明该抗CD40兔单克隆抗可特异性识别CD40重组蛋白。
实施例6利用抗CD40兔单克隆抗体检测Raji细胞CD40蛋白
1.取Raji细胞,用PBS清洗细胞后,1500rpm。4℃离心5min后,调整细胞密度为3M/mL。
2.按照1M细胞加入100μL 4%多聚甲醛固定液,轻轻混匀。室温条件下固定细胞约10min。
3.加入PBS,1500rpm,离心5min后弃上清,离心管底细胞用1mL PBS重悬后,再加入10mL PBS清洗细胞后,1500rpm,离心5min。
4.取3个洁净的1.5mL离心管,每管中加入100μL 3M/mL的Raji细胞,即每管含0.3M个Raji细胞,离心后弃上清,其中一管加入100μL PBS作为阴性对照,其中一管加入100μL1:100实施例1制备的抗CD40兔单克隆抗体,另一管加入100μL 5μg/mL兔同型IgG,室温条件下孵育约1h。
5.清洗细胞,每管加入100μL 1:200稀释的FITC二抗,室温孵育40min。
6.清洗细胞,每管加入200μL PBS上流式细胞仪检测各管细胞的荧光强度。
结果如图4所示,左侧峰为加入兔同型对照的Raji细胞荧光强度峰,右侧峰为加入了抗CD40兔单克隆抗体的Raji细胞荧光强度峰。可见抗CD40兔单克隆抗体与Raji细胞表面CD40蛋白特异性结合后,荧光强度峰与对照相比产生了明显位移。
实施例7抗CD40兔单克隆抗体与CD40L竞争CD40 ELISA曲线
1.CD40重组蛋白0.1μg/mL,包被酶标板,用封膜封板,4℃过夜。
2.次日,将酶标板至于洗板机上,用PBST洗板3次后,每孔加入BSA封闭液封闭酶标板,置于30℃,恒温摇床震荡封闭约1h。
3.将实施例1制备的抗CD40兔单克隆抗体预调整至1000ng/mL起始浓度,随后在稀释版上做倍比稀释,共10个梯度,准备CD40L重组蛋白(Novoprotein,C011)稀释至20ng/mL。取50μL CD40兔单克隆抗体,50μL CD40L重组蛋白于另一洁净稀释板上混匀后,置于30℃、100rpm恒温摇床,孵育约30min。
4.洗酶标板后,每孔加入50μL步骤3中的混合物,置于30℃,恒温摇床震荡孵育约1h。
5.洗板后,每孔加50μL HRP偶联的羊抗兔IgG二抗,置于30℃,恒温摇床震荡孵育约45min。
6.洗板后,每孔加50μLTMB底物显色液,置于30℃,恒温摇床震荡避光显色约15min。
7.加50μL H2SO4终止液终止反应,约5~30min后于酶标仪上读取吸光值。
结果如图5和所示,可见各个稀释度间读值明显差异,证明抗CD40兔单克隆抗体能与CD40特异性结合,并且其结合位点与CD40-CD40L配受体结合的位点可发生竞争。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解,在阅读了本发明的上述讲授内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 杭州百凌生物科技有限公司
<120> 一种抗CD40抗体及其应用
<130> AJ2010209
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1410
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60
gagcagctgg aggagtccgg gggagacctg gtcaagcctg agggatccct gacactcacc 120
tgcacagcct ctggattgtc cttcagtaac aagtacgtga tgtcctgggt ccgccaggct 180
ccagggaagg ggctggagtg gatcgcatac attgttattg gcagtagtgg tagtagtgct 240
accacttact acgcgacctg ggcgaaaggc cgattcacca tctccaaaac ctcgtcgacc 300
acggtgactc tgcgaatgac cagtctgaca gccgcggaca cggccaccta tttctgtgca 360
aaaagatata gtagtagtag tggttattat agatcattta acttgtgggg cccaggcacc 420
ctggtcaccg tctcctcagg gcaacctaag gctccatcag tcttcccact ggccccctgc 480
tgcggggaca cacccagctc cacggtgacc ctgggctgcc tggtcaaagg gtacctcccg 540
gagccagtga ccgtgacctg gaactcgggc accctcacca atggggtacg caccttcccg 600
tccgtccggc agtcctcagg cctctactcg ctgagcagcg tggtgagcgt gacctcaagc 660
agccagcccg tcacctgcaa cgtggcccac ccagccacca acaccaaagt ggacaagacc 720
gttgcgccct cgacatgcag caagcccacg tgcccacccc ctgaactcct ggggggaccg 780
tctgtcttca tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcacg cacccccgag 840
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccag gatgaccccg aggtgcagtt cacatggtac 900
ataaacaacg agcaggtgcg caccgcccgg ccgccgctac gggagcagca gttcaacagc 960
acgatccgcg tggtcagcac cctccccatc gcgcaccagg actggctgag gggcaaggag 1020
ttcaagtgca aagtccacaa caaggcactc ccggccccca tcgagaaaac catctccaaa 1080
gccagagggc agcccctgga gccgaaggtc tacaccatgg gccctccccg ggaggagctg 1140
agcagcaggt cggtcagcct gacctgcatg atcaacggct tctacccttc cgacatctcg 1200
gtggagtggg agaagaacgg gaaggcagag gacaactaca agaccacgcc ggccgtgctg 1260
gacagcgacg gctcctactt cctctacagc aagctctcag tgcccacgag tgagtggcag 1320
cggggcgacg tcttcacctg ctccgtgatg cacgaggcct tgcacaacca ctacacgcag 1380
aagtccatct cccgctctcc gggtaaatga 1410
<210> 2
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60
acatttgctc aagtgctgac ccagactcca tcctccgtgt ctgcaactgt gggaggcaca 120
gtcaccatca attgccggtc cagtccgagt gtttataata acaactactt agcctggttt 180
cagcagaaac cagggcagcc tcccaagcgc ctgatctatt atacatccac tctgtcatct 240
ggggtctcat cgcggttcaa aggcagtgga tctgggacag agttcactct caccatcagc 300
gacgtgcagt gtgacgatgc tgccacttac tactgtctag gcacttatga tggtagacgt 360
gttgactatg ctaccttcgg cggggggacc gaggtggtgg tcaaaggtga tccagttgca 420
cctactgtcc tcatcttccc accagctgct gatcaggtgg caactggaac agtcaccatc 480
gtgtgtgtgg cgaataaata ctttcccgat gtcaccgtca cctgggaggt ggatggcacc 540
acccaaacaa ctggcatcga gaacagtaaa acaccgcaga attctgcaga ttgtacctac 600
aacctcagca gcactctgac actgaccagc acacagtaca acagccacaa agagtacacc 660
tgcaaggtga cccagggcac gacctcagtc gtccagagct tcaatagggg tgactgttag 720
<210> 3
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Ser Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Tyr Ile Asn Ile Asp Ser Arg Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Gly Val Ser Gly Ser Asp Tyr Val Thr Thr Leu
1 5 10
<210> 6
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Gln Ala Ser Gln Ser Val Asp Arg Asn Asn Asp Leu Ala
1 5 10
<210> 7
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Phe Ala Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 8
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Leu Gly Val Tyr Tyr Gly Ala Gly Trp Asp Asp Val
1 5 10
Claims (10)
1.一种抗CD40的抗体或其抗原结合部分,其特征在于,其重链可变区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3和轻链可变区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3-8所示。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分,其特征在于,所述抗原结合部分选自Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段。
3.编码权利要求1或2所述抗体或其抗原结合部分的基因,其特征在于,编码重链的基因包括SEQ ID NO.1所示核苷酸序列,编码轻链的基因包括SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。
4.一种表达载体,其特征在于,包括权利要求3所述的基因。
5.一种宿主细胞,其特征在于,含有权利要求4所述的表达载体。
6.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分在制备用于检测CD40蛋白的试剂盒中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,检测CD40蛋白的方法选自酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法和流式细胞法。
8.一种用于检测CD40蛋白的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分。
9.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分在制备用于促进B细胞增殖的试剂盒中的应用。
10.一种用于促进B细胞增殖的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分。
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