CN111936498B

CN111936498B - N-(3-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)苯甲酰胺衍生物

Info

Publication number: CN111936498B
Application number: CN201980021910.9A
Authority: CN
Inventors: L·阿里斯塔; C·黑巴赫; G·J·霍林沃思; P·霍尔策; P·伊巴奇-韦斯; J·洛伯; R·马绍尔; N·施密德伯格; A·伍尔佩蒂; T·佐勒
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2018-03-26
Filing date: 2019-03-22
Publication date: 2024-04-16
Anticipated expiration: 2039-03-22
Also published as: CN111936498A; JP2021519278A; US20240158399A1; EP3774804A1; US20210002285A1; JP2023089009A; US11613543B2; EP4166557A1; JP7252973B2; WO2019186343A1; CN118754858A; AR115017A1

Abstract

本发明涉及具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述取代基如说明书中所定义；涉及所述化合物制备中的中间体；涉及包含所述化合物的药物组合物；并且涉及所述化合物在疾病治疗中的用途。

Description

N-(3-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)苯甲酰胺衍生物

技术领域

本发明涉及N-(3-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)苯甲酰胺衍生物、涉及它们的制备、涉及包含它们的药物组合物以及涉及它们在治疗由布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase)介导的病症、疾病和障碍中的用途。

背景技术

布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)是B细胞受体(BCR)信号传导的关键节点，并且是癌症中的重要靶标。许多癌症和淋巴瘤表达BTK并依赖于BTK功能，并且肿瘤浸润性B细胞中的BCR信号传导也与实体癌的促肿瘤微环境有关(J.A.Burger和A.Wiestner,Nat Rev Cancer[癌症自然评论]2018,18,148)。使用抑制剂，特别是通过半胱氨酸-481不可逆地结合BTK的抑制剂对BTK进行药理学阻断是一种既定策略，其中BTK是分子依鲁替尼的主要靶标(J.A.Burger和J.J.Buggy,Leukemia and Lymphoma[白血病和淋巴瘤]2013,54,2385)，该分子适用于治疗多种癌症(C-S Lee等人,J.Oncol.Pharm.Practice[肿瘤学药学实践杂志]2016,22,92-104.V.Kaur&A.Swami,Ann.Hematol.2017,96,1175)，以及也是分子阿卡替尼的主要靶标，该分子适用于治疗至少接受过一种在先的治疗的套细胞淋巴瘤患者(Wang M等人,Lancet[柳叶刀]2018,391,期号10121,659-667)。

BTK在自身免疫疾病中也起着至关重要的作用。缺乏BTK的小鼠在类风湿性关节炎(L.Jansson和R.Holmdahl,Clinical and experimental immunology[临床与实验免疫学]1993,94,459；L.E.Nyhoff等人,Arthritis Rheumatol.[关节炎与风湿病]2016,68,1856)、系统性红斑狼疮(Steinberg,B.J.等人,J.Clin.Invest.[临床研究杂志]1982,70,587-597)以及过敏性疾病和过敏反应(Hata,D.等人,J.Exp.Med.[实验医学杂志]1998,187,1235-1247)的标准临床前模型中受到保护，因此对BTK进行药理学阻断可能对免疫障碍的治疗有用。

鉴于上述情况，BTK的调节剂可用于治疗增生性障碍(例如癌症)和免疫(例如自身免疫)障碍。

仍然需要新的药物来治疗BTK依赖性疾病，特别是那些对现有药物有抗药性或应答差的药物。

被设计用于通过诱导其降解来减少或去除BTK蛋白的分子(以下称为“BTK降解剂”)可以有效治疗一系列BTK介导的疾病，例如增生性障碍(例如癌症)和免疫障碍。此外，BTK降解剂在对不可逆的BTK抑制剂(与BTK共价结合)具有抗性的情况下可以是有效的。抗性可以通过例如半胱氨酸-481突变成丝氨酸(或其他氨基酸取代)而产生。

BTK降解剂的潜在适应症包括但不限于造血源性癌症，例如霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、移植后淋巴组织增生性障碍、毛细胞白血病、组织细胞性和树突状肿瘤以及B细胞肿瘤，如慢性淋巴细胞白血病(CLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、华氏巨球蛋白血症、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、里氏综合征、和前体B淋巴母细胞淋巴瘤、原发性和继发性的多发性骨髓瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾脏边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、淋巴结外边缘区B细胞淋巴瘤、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、和急性成淋巴细胞性白血病。

BTK降解剂的潜在适应症还包括但不限于自身免疫障碍，例如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、过敏性疾病、过敏反应和炎性病症。此外，BTK降解剂的潜在适应症包括慢性移植物抗宿主病(cGvHD)和免疫球蛋白轻链淀粉样变性(AL)。

作为潜在的治疗方法，诱导蛋白质靶标降解的原理已在例如C.M.Crews,2018,J.Med.Chem.[药物化学杂志],61(2),403-404及其引用的参考文献中进行描述。在WO2016/169989的第12页中描述了掺入依鲁替尼亚结构作为BTK结合部分的BTK降解剂分子，并且该分子掺入了E3连接酶IAP结合部分，用于将靶蛋白募集到E3泛素连接酶IAP进行降解。两种其他BTK降解剂分子(其掺入两个结构上不同的部分作为BTK结合组分)描述于Huang等人,2018,Cell Chemical Biology[细胞化学生物学]25,88-99中。该出版物中描述的分子掺入免疫调节性酰亚胺药物(IMiD)部分(泊马度胺)，用于将BTK募集到包含小脑蛋白(CRBN)的E3连接酶复合物中，用于泛素化和随后的降解。在Huang等人中也描述了基于混杂的激酶粘合剂的分子(TL12-186)，该粘合剂降解包括BTK在内的多个靶标，并且据报道还降解包括锌指DNA结合蛋白IKZF1(Ikaros)在内的某些非激酶靶标。已知IKZF1和相关蛋白IKZF3(Aiolos)被泊马度胺和来那度胺降解(J.等人2014,Science[科学]343,301-305；Petzold等人,Nature[自然]2016,532,127-130；Bjorklund等人,2015,BloodCancer Journal[血液癌症杂志],5,e354；Lu等人,2014,Science[科学],343,305-309；Gandhi等人,2014,Br.J.Haematol.[英国血液学杂志]164,811-821)。

发明内容

本发明提供了如下文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。具有式(I)的化合物是BTK降解剂，并且因此潜在地可用于治疗由BTK介导的病症、疾病和障碍。

在本发明的一个方面，提供了具有式(I)的化合物，

其中：

R¹、R^1a、R²和R^2a在每次出现时独立地选自H和F；

R⁶是H或F；

R⁷选自H、F、Cl、-CH₃、-OCH₃和-OCH₂CH₃；

X¹是具有式(A)或(B)的基团：

其中，

*X^1a选自*-(CH₂)_1-3-和*-CH₂C(CH₃)₂-，其中该*表示该X^1a基团与式(I)中的苯基环的附接点；

*X^1b选自*-O-、*-OCH₂-和*-CH₂O-，其中该*表示该X^1b基团与式(I)中的苯基环的附接点；

X^2a选自式(C)、(D)、(E)、(F)和(G)：

其中**表示与X^1a的附接点；

X^2b选自式(E1)和(F1)：

其中**表示与X^1b的附接点；

X⁵是CH或N；

X⁶是CH或N；

R³是H或-CH₃；

R⁴是H或-CH₂OH；

R⁵是H或-CH₂OH；

Z不存在或是*-(CH₂)_2-3NH-，其中*表示式(C)中的Z与N原子的附接点；

Z¹选自*-O-、*-C(O)-、*-(CH₂)_1-3-、*-(CH₂)₂O-和*-CH₂CH(CH₂OH)O-，其中*表示式(E)和式(E1)中的Z¹与X⁵的附接点；

Z^2a不存在或是-NH(CH₂)₄-**；

Z^2b是-(CH₂)_3-4NH(CH₂)₂-**；

Z³不存在或是**-(CH₂)₄NH-，其中Z^2a和Z³并非同时不存在；并且

其中Z^2a、Z^2b和Z³中的每个中的**表示与式(F)和(F1)中的相应N原子的附接点；

q是0或1；并且

n和p独立地是0或1；并且

其中(i)当式(E)或式(E1)中的Z¹是*-O-时，则X⁵和X⁶不是N，并且(ii)当式(E)或式(E1)中的Z¹是*-(CH₂)₂-O-或*-CH₂CH(CH₂OH)O-时，则X⁶不是N；

或其药学上可接受的盐。

本发明涉及新颖的具有式(I)的N-(3-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)苯甲酰胺化合物，其导致布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)降解。这些化合物被设计用于通过将BTK(包括BTK突变体，特别是赋予对BTK抑制剂特别是不可逆BTK抑制剂如依鲁替尼的抗药性的BTK突变体)募集到E3连接酶来诱导BTK降解，从而促使BTK泛素化以及其随后被蛋白酶体降解。本发明的化合物包含与新颖的配体结合的新颖的BTK结合结构域部分，该新颖的配体与E3连接酶小脑蛋白(CRBN)结合。

因此，本发明的化合物因此可能潜在地可用于治疗一系列疾病和障碍，包括增生性和自身免疫疾病，特别是由BTK介导的障碍和疾病，包括其中已经产生抗性的那些，例如通过半胱氨酸-481突变为丝氨酸(或其他氨基酸取代)。本发明的化合物还可以显示出对BTK降解的选择性(相较于其他蛋白，特别是其他酪氨酸激酶蛋白和/或(非酪氨酸激酶)IKZF蛋白家族，如IKZF1和/或IKZF3，已显示它们被IMiD(例如沙利度胺、来那度胺和泊马度胺)以及由上文提到的蛋白质降解分子TL12-186降解)。本发明的化合物还可相对于其他脱靶蛋白质如离子通道和G蛋白偶联受体(GPCR)表现出激酶选择性和/或选择性。

因此认为具有式(I)的化合物，包括其药学上可接受的盐，适用于治疗由BTK介导的病症、疾病和障碍，尤其是增殖性病症、疾病和障碍例如癌症，特别是造血系统癌症，包括B细胞肿瘤，如慢性淋巴细胞白血病(CLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、华氏巨球蛋白血症、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、里氏综合征、和前体B淋巴母细胞淋巴瘤、原发性和继发性的多发性骨髓瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾脏边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、淋巴结外边缘区B细胞淋巴瘤、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、和急性成淋巴细胞性白血病。

在另一方面，本发明提供了具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗、预防或改善BTK介导的病症、疾病或障碍的方法中使用。

在另一方面，本发明提供如下组合物，这些组合物包含(例如治疗有效量的)具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体。

在另一方面，本发明提供如下组合，该组合包含(例如治疗有效量的)具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种治疗活性剂。

具体实施方式

本文描述了本发明的各种实施例。应认识到，每个实施例中指定的特征可以与其他指定特征组合以提供本发明的进一步的实施例。本文还描述了本发明的各种(列举的)实施例。

取代基的定义可应用于具有式(I)、(I’)、(I”)、(I”’)和(Ia)的化合物(如果适用)。

取代基的定义可应用于最终产物以及相应的中间体。

本发明因此提供具有式(I)的化合物：

其中：

R¹、R^1a、R²和R^2a在每次出现时独立地选自H和F；

R⁶是H或F；

R⁷选自H、F、Cl、-CH₃、-OCH₃和-OCH₂CH₃；

X¹是具有式(A)或(B)的基团：

其中，

X^2a选自式(C)、(D)、(E)、(F)和(G)：

其中**表示与X^1a的附接点；

X^2b选自式(E1)和(F1)：

其中**表示与X^1b的附接点；

X⁵是CH或N；

X⁶是CH或N；

R³是H或-CH₃；

R⁴是H或-CH₂OH；

R⁵是H或-CH₂OH；

Z^2a不存在或是-NH(CH₂)₄-**；

Z^2b是-(CH₂)_3-4NH(CH₂)₂-**；

q是0或1；并且

n和p独立地是0或1；并且

或其药学上可接受的盐。

除非另有指明，否则术语“本发明的化合物”是指具有式(I)的化合物、具有其子式的化合物及示例化合物、及其盐，以及所有的立体异构体(包括非对映异构体和对映异构体)、旋转异构体、互变异构体和同位素标记的化合物(包括氘取代物)以及固有形成的部分。

除非另有说明，否则本发明中使用的表达具有以下含义：

如本文所使用的，术语-(CH₂)_1-3-是指(特别是)仅由碳和氢原子组成的直链烃链双基团，该基团中不含有不饱和，具有从1至3个碳原子，并且通过单键附接至各末端处的分子的其余部分。在这类基团的特定位置附接至分子其余部分的末端可以用指示符号*或**表示。掺入类似术语例如-(CH₂)₂O-、-(CH₂)_2-3NH-、-(CH₂)_3-4NH(CH₂)₂-和-(CH₂)₄NH-的基团应据此理解。

列举的实施例：

实施例1.一种如上所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

实施例2.根据实施例1所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹是H。

实施例3.根据实施例1或2所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^1a是F。

实施例4.根据实施例1至3中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R²是H。

实施例5.根据实施例1至4中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^2a是F。

实施例6.根据实施例1至5中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁶是H。

实施例7.根据实施例1至6中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁷选自F、-CH₃和-OCH₃。

实施例8.根据实施例1至7中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁷是F。

实施例9.根据实施例1至7中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁷是-CH₃。

实施例10.根据实施例1至7中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁷是-OCH₃。

实施例11.根据实施例1至10中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中X¹是具有式(A)的基团：

实施例12.根据实施例11所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中*X^1a是*-(CH₂)_1-3-。

实施例13.根据实施例12所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中*X^1a选自*-CH₂-和*-(CH₂)₂-。

实施例14.根据实施例11至13中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中X^2a选自式(C)、(E)和(F)：

实施例15.根据实施例14所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中X^2a选自式(C)和(E)：

实施例16.根据实施例1至15中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁴是H。

实施例17.根据实施例1至16中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁵是H。

实施例18.根据实施例1至17中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中q是1。

实施例19.根据实施例1至18中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中n和p均为1。

实施例20.根据实施例1至19中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z不存在。

实施例21.根据实施例1至20中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中X⁵和X⁶均为CH。

实施例22.根据实施例1至20中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中X⁵和X⁶均为N。

实施例23.根据实施例1至21中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z¹是*-O-。

实施例24.根据实施例22所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z¹是*-(CH₂)₂-。

实施例25.根据实施例1至24中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z^2a是-NH(CH₂)₄-**。

实施例26.根据实施例13所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z^2a是-NH(CH₂)₄-**。

实施例27.根据实施例1至26中任一项所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z³不存在。

实施例28.根据实施例1所述的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z³不存在。

实施例29.一种具有式(Ia)的化合物

其中，

R⁶是H或F；

R⁷选自H、F、Cl、-CH₃、-OCH₃和-OCH₂CH₃；

X¹是具有式(A)或(B)的基团：

其中，

*X^1a选自*-(CH₂)_1-3-和*-CH₂C(CH₃)₂-，其中该*表示该X^1a基团与式(Ia)中的苯基环的附接点；

*X^1b选自*-O-、*-OCH₂-和*-CH₂O-，其中该*表示该X^1b基团与式(Ia)中的苯基环的附接点；

X^2a选自式(C)、(D)、(E)、(F)和(G)：

其中**表示与X^1a的附接点；

X^2b选自式(E1)和(F1)：

其中**表示与X^1b的附接点；

X⁵是CH或N；

X⁶是CH或N；

R³是H或-CH₃；

R⁴是H或-CH₂OH；

R⁵是H或-CH₂OH；

Z^2a不存在或是-NH(CH₂)₄-**；

Z^2b是-(CH₂)_3-4NH(CH₂)₂-**；

Z³不存在或是**-(CH₂)₄NH-，其中Z^2a和Z³并非同时不存在；以及其中Z^2a、Z^2b和Z³中的每个中的**表示与式(F)和(F1)中的相应N原子的附接点；

q是0或1；并且

n和p独立地是0或1；并且

或其药学上可接受的盐。

实施例30.根据实施例1至10中任一项所述的具有式(I)的化合物或根据实施例29所述的具有式(Ia)的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，

X¹选自：

其中*表示与式(I)中的苯基环的附接点；

或其药学上可接受的盐。

实施例31.根据实施例29或实施例30所述的具有式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁴是H。

实施例32.根据实施例29至31中任一项所述的具有式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁵是H。

实施例33.根据实施例29至32中任一项所述的具有式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中q是1。

实施例34.根据实施例29至33中任一项所述的具有式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中n是1。

实施例35.根据实施例29至34中任一项所述的具有式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中p是1。

实施例36.根据实施例29至35所述的具有式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z不存在。

实施例37.根据实施例29至36中任一项所述的具有式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中X⁵和X⁶均为CH。

实施例38.根据实施例29至36中任一项所述的具有式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中X⁵和X⁶均为N。

实施例39.根据实施例29至38中任一项所述的具有式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z¹选自*-O-和*-(CH₂)_1-3-。

实施例40.根据实施例39所述的具有式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z¹选自*-O-和*-(CH₂)₂-。

实施例41.根据实施例1至10中任一项所述的具有式(I)的化合物或根据实施例29所述的具有式(Ia)的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，

X¹选自：

其中*表示式(I)或式(Ia)中与苯基环附接的原子。

实施例42.根据实施例41所述的具有式(I)或(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中，

X¹选自：

其中*表示式(I)或(Ia)中与苯基环附接的原子。

实施例43.根据实施例41或42所述的具有式(I)或(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z¹是-O-并且X⁵和X⁶均为CH。

实施例44.根据实施例41或42所述的具有式(I)或(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z¹是-(CH₂)₂-并且X⁵和X⁶均为N。

实施例45.根据实施例41至44中任一项所述的具有式(I)或(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁴和R⁵均为H。

实施例46.根据实施例41至45中任一项所述的具有式(I)或(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中n、p和q各自为1。

实施例47.根据实施例41至46中任一项所述的具有式(I)或(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z不存在。

实施例48.根据实施例1至10、29和30中任一项所述的具有式(I)或(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中，

X¹选自：

其中*表示式(I)或(Ia)中与苯基环附接的原子。

实施例49.根据实施例48所述的具有式(I)或(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，其中X¹选自：

其中*表示式(I)或(Ia)中与苯基环附接的原子。

实施例50.一种具有式(I)或(Ia)的化合物，其中该化合物是

外消旋-N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-7-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

(R)-N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-7-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

(S)-N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-7-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-乙氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(((1-(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(2-(4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(3-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)丙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(((1-(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((1-(3-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)丙基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((4-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((4-(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

外消旋-N-(3-(6-(4-((1-(2-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)-3-羟基丙基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((1-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-甲基丙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(((1-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((4-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-羰基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

外消旋-N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-1-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

(S)-N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-1-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

(R)-N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-1-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((4-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺基)丁基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-N-(5-((4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氨基)戊基)-N,4-二甲基苯甲酰胺、

5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-N-(5-((4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氨基)戊基)-4-甲基苯甲酰胺、

3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-N-(5-((4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氨基)戊基)-N,4-二甲基苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((4-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(2-(4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((8-(2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺基)乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-2-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(4-((2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙基)氨基)丁氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((4-(2-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰胺基)乙基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((1-(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((4-(2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺基)乙基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(((4-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)丁基)氨基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((((1s,4s)-4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)环己基)氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-N-(5-((4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氨基)戊基)-N-甲基苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((1-(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((9-(2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺基)乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((3-((2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙基)氨基)丙氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(((1r,4r)-4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)环己基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((4-(3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰胺基)丙基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((8-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-2-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((1-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((2-(2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺基)乙基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((2-(2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺基)乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-(((1s,4s)-4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)环己基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((((1r,4r)-4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)环己基)氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺、

N-(3-(6-(4-((9-(3-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰胺基)丙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺或

N-(3-(6-(4-((1-(2-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺，

或其药学上可接受的盐。

实施例51.一种具有式(I)或(Ia)的化合物，其中该化合物是

N-(3-(6-(4-(((4-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)丁基)氨基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺和

或其药学上可接受的盐。

实施例52.所述的化合物N-(3-(6-(4-((4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺，

或其药学上可接受的盐。

实施例53.所述的化合物N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺，

或其药学上可接受的盐。

实施例54.所述的化合物N-(3-(6-(4-(2-(4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺，

或其药学上可接受的盐。

实施例55.所述的化合物N-(3-(6-(4-((4-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺，

或其药学上可接受的盐。

实施例56.所述的化合物N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺，

或其药学上可接受的盐。

实施例57.所述的化合物N-(3-(6-(4-(2-(4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺，

或其药学上可接受的盐。

实施例58.所述的化合物N-(3-(6-(4-(((4-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)丁基)氨基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺，

或其药学上可接受的盐。

实施例59.所述的化合物N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺，

或其药学上可接受的盐。

根据起始材料和程序的选择，所述化合物可以呈可能的立体异构体形式或作为其混合物(例如作为纯的光学异构体或作为立体异构体混合物，如外消旋体和非对映异构体混合物)存在，这取决于不对称碳原子的数目。本发明意在包括所有此类可能的立体异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯的形式。光学活性(R)-和(S)-立体异构体可以使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术拆分。如果化合物含有双键，则取代基可以是E或Z构型。如果化合物含有二取代的环烷基，则环烷基取代基可以具有顺式或反式构型。也包括所有互变异构形式。

具有式(I)或(Ia)的化合物可以各种互变异构形式存在。本发明包括具有式(I)或(Ia)的化合物的所有互变异构形式。例如，具有式(I)的化合物可以根据式(I’)和(I”)的互变异构形式存在，因此：

其中R¹、R^1a、R²、R^2a、X¹、R⁶和R⁷是如根据式(I)或(Ia)所定义的。

如本文所使用的，术语“盐(salt或salts)”是指本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别地包括“药学上可接受的盐”。

术语“药学上可接受的盐”是指保留本发明化合物的生物有效性和特性，并且典型地不是生物学上或其他方面不希望的盐。由于氨基和/或羧基或与其类似的基团的存在，本发明的化合物能够形成酸盐和/或碱盐。

本发明的药学上可接受的盐可以通过常规的化学方法从碱或酸部分合成。通常，此类盐可以通过将这些化合物的游离酸形式与化学计算量的适当碱反应来制备或者通过将这些化合物的游离碱形式与化学计算量的适当酸反应来制备。此类反应典型地在水或有机溶剂或两者的混合物中进行。通常，在可行的情况下，希望使用非水性介质，如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇、乙腈或四氢呋喃。另外的合适的盐的列表可见于例如：“Remington'sPharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学]”,第20版,马克出版公司(Mack PublishingCompany),宾夕法尼亚州伊斯顿(Easton,Pa.),(1985)中；以及Stahl和Wermuth的“Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use[药用盐手册：特性、选择和使用]”(威利-VCH出版社(Wiley-VCH),韦因海姆德国,2002)中。

当在同一分子中存在碱性基团和酸性基团两者时，本发明的化合物还可以形成内盐，例如两性离子分子。

由于本发明的化合物包含至少一个碱性基团例如氨基基团，因此这些化合物特别适用于形成酸加成盐。

可以用无机酸和有机酸形成药学上可接受的酸加成盐。

可以衍生出盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。

可以衍生出盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。

可以用无机碱和有机碱形成药学上可接受的碱加成盐。

可以衍生出盐的无机碱包括例如铵盐和来自元素周期表第I至XII列的金属。在某些实施例中，盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别合适的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。

可以衍生出盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺；取代的胺，包括天然存在的取代的胺；环胺；碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、苄星、胆碱盐、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。

在另一个方面，本发明提供了呈以下形式的本发明的化合物：乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐(chlortheophyllonate)、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八烷酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三苯乙酸盐(trifenatate)、三氟乙酸盐或昔萘酸盐形式。

本文给出的任何式还旨在表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有由本文给出的式表示的结构，除了一个或多个原子被具有所选原子质量或质量数的原子代替。可以掺入本发明化合物中的同位素包括例如氢的同位素。

在本发明的另一个方面，提供了具有式(I”’)的化合物：

其中R¹、R^1a、R²、R^2a、R⁶是如针对式(I)或(Ia)所定义的，R⁷是-C(R¹⁰)₃、-OC(R¹⁰)₃或-OC(R¹⁰)₂C(R¹⁰)₃，并且X¹选自：

其中每个R⁸、R⁹和R¹⁰在每次出现时独立地选自H或氘，并且符号#表示所示的被H取代的位置，这些位置可以在每次出现时独立地被H或氘取代。

掺入某些同位素，特别是氘(即²H或D)可提供更高代谢稳定性导致的某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或减少的剂量要求或治疗指数或耐受性的改善。应理解，在此上下文中的氘被认为是具有式(I)和(Ia)的化合物的取代基。氘的浓度可以由同位素富集因子来定义。如本文所使用的术语“同位素富集因子”意指指定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。如果本发明化合物中的取代基指示氘，则此类化合物具有针对每个指定的氘原子的同位素富集因子为至少3500(在每个指定的氘原子上52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)或至少6633.3(99.5％氘掺入)。应当理解，术语“同位素富集因子”可以与针对氘所描述的相同方式应用于任何同位素。

可以掺入本发明的化合物的同位素的其他实例包括氢、碳、氮、氧、氟和氯的同位素，诸如分别是³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸F、³⁵S、³⁶Cl和¹²⁵I。因此，应当理解，本发明包括掺入任何上述同位素中一种或多种的化合物，包括例如放射性同位素，例如³H和¹⁴C，或其中掺入非放射性同位素例如²H和¹³C的那些。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究(用¹⁴C)、反应动力学研究(用例如²H或³H)、检测或成像技术(例如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定)，或用于患者的放射性治疗。特别地，¹⁸F标记的化合物对于PET或SPECT研究可能是特别理想的。同位素标记的具有式(I)的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实例中所述的那些类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替未标记的先前使用的试剂来制备。

如本文所使用的，术语“药物组合物”是指呈适用于口服或肠胃外施用的形式的本发明化合物或其药学上可接受的盐以及至少一种药学上可接受的载体。

如本文所使用的，术语“药学上可接受的载体”是指可用于制备或使用药物组合物的物质，并且包括例如合适的稀释剂、溶剂、分散介质、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂、等渗剂、缓冲剂、乳化剂、吸收延迟剂、盐、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、润湿剂、甜味剂、矫味剂、染料以及它们的组合，如本领域技术人员已知的(参见例如Remington'sPharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学],第18版马克出版公司(Mack PrintingCompany),1990,第1289至1329页)。

本发明化合物的术语“治疗有效量”是指将引起受试者的生物学或医学反应(例如酶或蛋白质活性的降低或抑制)或改善症状，减轻病症，减慢或延迟疾病进展，或预防疾病等的本发明化合物的量。在一个实施例中，术语“治疗有效量”是指本发明的化合物的如下量，当施用于受试者时该量有效地(1)至少部分缓解、预防和/或改善(i)通过BTK介导的、或(ii)与BTK活性相关的、或(iii)以BTK的活性(正常或异常)为特征的病症或障碍或疾病：或(2)降低或抑制BTK的活性；或(3)减少或抑制BTK的表达。例如，可以通过降解BTK来减少BTK的数量来实现这些效果。在另一个实施例中，术语“治疗有效量”是指本发明化合物的如下量，所述量当被施用至细胞、或组织、或非细胞生物材料、或介质时有效地至少部分降低或抑制BTK活性；或至少部分降低或抑制BTK的表达，例如通过降解BTK。

如本文所使用的，术语“受试者”是指灵长类动物(例如，人(男性或女性))、狗、兔、豚鼠、猪、大鼠和小鼠。在某些实施例中，受试者是灵长类动物。在实施例中，受试者是人。

如本文所使用的，术语“抑制(inhibition或inhibiting)”是指减少或抑制给定的病症、症状或障碍、或疾病，或在生物活性或过程的基线活性方面的显著降低。

如本文所使用的，术语“降解(degrades、degrading或degradation)”是指细胞蛋白酶体系统将靶蛋白例如BTK部分或全部降解至降低或消除BTK的生物学活性(特别是异常活性)的程度。降解可以通过介导E3连接酶，特别是包含蛋白质小脑蛋白的E3连接酶复合物来实现。如本文所使用的，术语“调节BTK活性(modulation of BTK activity或modulatingBTK activity)”是指改变，尤其是降低、抑制或消除BTK活性。这可以通过降解BTK来实现。可以通过将用本发明的化合物处理后剩余的BTK的量与用本发明的化合物处理之前测得的存在的初始BTK的量或水平进行比较来测量降解的BTK的量。在实施例中，与初始水平相比，至少约30％的BTK被降解。在实施例中，与初始水平相比，至少约40％的BTK被降解。在实施例中，与初始水平相比，至少约50％的BTK被降解。在实施例中，与初始水平相比，至少约60％的BTK被降解。在实施例中，与初始水平相比，至少约70％的BTK被降解。在实施例中，与初始水平相比，至少约80％的BTK被降解。在实施例中，与初始水平相比，至少约90％的BTK被降解。在实施例中，与初始水平相比，至少约95％的BTK被降解。在实施例中，与初始水平相比，超过95％的BTK被降解。在实施例中，与初始水平相比，至少约99％的BTK被降解。

在实施例中，与初始水平相比，BTK的降解量为从约30％至约99％。在实施例中，与初始水平相比，BTK的降解量为从约40％至约99％。在实施例中，与初始水平相比，BTK的降解量为从约50％至约99％。在实施例中，与初始水平相比，BTK的降解量为从约60％至约99％。在实施例中，与初始水平相比，BTK的降解量为从约70％至约99％。在实施例中，与初始水平相比，BTK的降解量为从约80％至约99％。在实施例中，与初始水平相比，BTK的降解量为从约90％至约99％。在实施例中，与初始水平相比，BTK的降解量为从约95％至约99％。在实施例中，与初始水平相比，BTK的降解量为从约90％至约95％。

如本文所使用的，术语“对BTK的选择性”是指，例如，本发明的化合物优先于另一种或多种蛋白质降解BTK，或相较于其更大程度上降解BTK。

如本文所使用的，术语任何疾病或障碍的“治疗(treat、treating或treatment)”是指缓解或减轻疾病或障碍(即，减慢或阻止疾病或其至少一种临床症状的发展)；或者减轻或改善与所述疾病或障碍相关联的至少一种物理参数或生物标志物，包括针对患者可能无法辨别的那些物理参数或生物标志物。

如本文所使用的，术语任何疾病或障碍的“预防(prevent，preventing或prevention)”是指疾病或障碍的预防性治疗；或延迟疾病或障碍的发作或进展

如本文所使用的，如果受试者将在生物学上、在医学上或在生活质量上从治疗中受益，则此类受试者是“需要”此类治疗的。

如本文所使用的，术语“一个/种(a，an)”，“所述(the)”以及在本发明的上下文中使用的类似术语(特别是在权利要求的上下文中)应被解释为涵盖单数和复数两者，本文中除非另外指示或与上下文明显相矛盾。

在本文描述的所有方法能够以任何合适的顺序进行，除非本文中另外指示或另外与上下文明显矛盾。本文提供的任何和所有实例或示例性语言(如“例如(such as或forexample)”)的使用仅旨在更好地说明本发明，而不对另外要求保护的本发明范围做出限制。

本发明的一种或多种化合物的任何非对称原子(例如，碳等)可以以外消旋或对映异构体富集的形式存在，例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型。在某些实施例中，每个非对称原子在(R)-或(S)-构型中具有至少50％对映异构体过量、至少60％对映异构体过量、至少70％对映异构体过量、至少80％对映异构体过量、至少90％对映异构体过量、至少95％对映异构体过量、或至少99％对映异构体过量。如果可能，在具有不饱和双键的原子上的取代基可以以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。

因此，如本文所使用的，本发明的化合物可以呈可能的立体异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物之一的形式，例如，作为基本上纯的几何(顺式或反式)立体异构体、非对映异构体、光学异构体(对映体)、外消旋体或其混合物。

可以基于组分的物理化学差异，例如通过色谱法和/或分级结晶法将任何所得的立体异构体混合物分离成纯的或基本上纯的几何或光学异构体、非对映异构体、外消旋体。

可以通过已知方法将任何所得的本发明化合物或中间体的外消旋体拆分成旋光对映体，例如通过将用光学活性酸或碱获得的其非对映异构体盐进行分离，并释放出光学活性的酸性或碱性化合物。特别地，因此可以采用碱性部分将本发明的化合物拆分成其光学对映体，例如通过用光学活性酸形成的盐的分级结晶，所述光学活性酸例如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、二-O,O'-对甲苯酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸。本发明的外消旋化合物或外消旋中间体还可以通过手性色谱法(例如，使用手性吸附剂的高压液相色谱法(HPLC))拆分。

本申请的化合物可以使用可商购获得的起始材料、文献中已知的化合物，或由容易制备的中间体，通过采用本领域技术人员已知的、或根据本文的传授内容对熟练化学家将显而易见的标准合成方法和程序，以有机合成领域技术人员熟知的多种方法制备。对于所有实例，根据如例如在Protective Groups in Organic Synthesis[有机合成中的保护基团],第3版,约翰威利父子出版社:纽约,1999或Protecting Groups[保护基团],第3版,Thieme出版社,斯图加特,2004中描述的标准课本知识，可以应用潜在的替代性正交保护基团策略。本领域技术人员将认识到本文披露的化合物中是否存在立体中心。

可以根据以下方案合成本发明的化合物。可以以各种方式组装化合物，使用相关的反应程序以模块化的方式建立最终分子，以允许不同的反应顺序。几种反应类型对于制备这些化合物特别有用。本发明的所有化合物均含有酰胺官能团，该酰胺官能团通常是在溶剂(例如DMF或DMA)中使用偶联剂(例如HATU或HBTU)和碱(例如DIPEA或NMM)，通过胺和羧酸之间的酰胺偶联反应形成的。或者，可以首先将羧酸转化为其五氟苯酚酯。这允许随后在碱例如TEA的存在下在溶剂例如DMF中与胺容易地反应以形成酰胺。含有碳-氮键的本发明化合物通常可以使用从胺和醛或酮开始的还原胺化反应来制备。在诸如THF和MeOH的溶剂混合物中，使用诸如NaBH₃CN、ZnCl₂和TEA的条件进行反应。碳-氮键也可以通过胺与合适的含有离去基团的反应伴侣，通常在碱(例如TEA)存在下在溶剂(例如THF)中进行亲核取代反应而形成，该离去基团例如烷基卤代物或甲磺酸烷基酯。含有醚的化合物也可以通过亲核取代反应来制备，在这种情况下，是通过使醇与含有离去基团的合适的伴侣(例如苄基卤化物)在碱(例如TEA)存在下在溶剂(例如THF)中反应。制备含有醚的本发明化合物的另一种通常有用的方法是光延反应(Mitsunobu reaction)。在该反应中，苯酚和另一种醇在膦(例如三苯基膦)和偶氮二羧酸酯(例如偶氮二羧酸二乙酯或偶氮二甲酸二异丙酯)的存在下在溶剂(例如THF)中反应。用于合成本发明化合物的另一种高度有用的反应是钯(Pd)催化的将两个芳族基团连接在一起的交叉偶联反应。特别有用的是在溶剂混合物(例如二噁烷/水)中使用催化剂(例如PdCl₂(dppf))和碱(例如Na₂CO₃或Cs₂CO₃)在芳香族卤化物与芳香族硼酸或酯之间进行铃木偶联反应。

具体而言，可以如方案1所示制备具有式(I)的化合物，其中R¹、R^1a、R²、R^2a、X¹、R⁶、R⁷、X^1a和X^2a如先前所定义。M定义为H或保护基团，例如-SO₂Ph或-SEM，并且LG定义为离去基团，例如甲磺酸酯(OMs)。

因此，可以在溶剂(例如DMF或DMA)中使用偶联剂(例如HATU)和碱(例如DIPEA或NMM)，通过胺和羧酸之间的酰胺偶联形成，从具有式(II)的化合物和具有式(III)的化合物制备具有式(I)的化合物。可替代地，可以通过在溶剂如DMF中用TEA处理，通过具有式(II)的胺与酸的五氟苯基酯(IIIa)之间的酰胺偶联来制备具有式(I)的化合物。具有式(II)的化合物可以由具有式(IV)的化合物制备。对于其中M是保护基团例如-SO₂Ph的具有式(IV)化合物，可以在溶剂混合物(例如DMSO、THF和水)中使用碱(例如NaOH)来完成脱保护，当M为-SEM保护基团时，可利用在溶剂如DCM中使用酸如TFA进行的脱保护，并可能与随后的胺脱保护步骤结合。在溶剂例如DCM中使用酸(例如TFA)进一步对叔丁氧基羰基(Boc)基团进行脱保护，得到具有式(II)的化合物。

方案1

具有式(IV)的化合物可以通过在溶剂混合物(例如DMF和ACN)中使用碱(例如K₂CO₃)，例如在亲核取代反应中，使具有式(V)的化合物与具有式(VI)的化合物反应来提供。可替代地，具有式(IV)的化合物可以通过在溶剂混合物(例如THF和MeOH)中，在使用NaBH₃CN、ZnCl₂和TEA的条件下，例如在还原胺化反应中，使具有式(VII)的化合物与具有式(VI)的化合物反应来提供。

可以根据方案2制备具有式(V)的化合物，其中R¹、R^1a、R²、R^2a、X^1a、M和LG如先前所定义。基团-B(OR^x)₂定义了硼酸或硼酸酯官能团(包括环状硼酸酯，例如频哪醇硼酸酯)。因此，Pd催化的偶联，例如在溶剂混合物(例如二噁烷/水)中使用催化剂(例如PdCl₂(dppf))和碱(例如Cs₂CO₃)在具有式(VIII)的化合物和具有式(IX)的化合物之间进行铃木反应，然后在第二步中将与X^1a连接的醇官能团转化为离去基团LG，例如在溶剂(如THF)中使用Ms₂O和TEA进行甲磺酰化，得到具有式(V)的化合物。具有式(VIII)的化合物可以通过Pd催化的偶联来制备，例如在溶剂混合物(例如二噁烷/水)中使用催化剂(例如PdCl₂(dppf))和碱(例如Cs₂CO₃)在具有式(X)的化合物与具有式(XI)的化合物之间进行铃木反应。

方案2

通过类比，可以根据方案3制备具有式(VII)的化合物，其中R¹、R^1a、R²、R^2a、M、LG和-B(OR^x)₂如先前所定义。

因此，Pd催化的偶联，例如在溶剂混合物(例如二噁烷/水)中使用催化剂(例如PdCl₂(dppf))和碱(例如Cs₂CO₃)在具有式(XII)的化合物与具有式(IX)的化合物之间进行铃木反应，得到具有式(VII)的化合物。具有式(XII)的化合物还可以通过Pd催化的偶联来制备，例如在溶剂混合物(例如二噁烷/水)中使用催化剂(例如PdCl₂(dppf))和碱(例如Cs₂CO₃)在具有式(X)的化合物与具有式(XIII)的化合物之间进行铃木反应。

方案3

具有式(II)的化合物也可以根据方案4制备。因此，例如，当M为H时，在溶剂混合物(例如THF和MeOH)中，使用条件(例如NaBH₃CN、ZnCl₂和TEA)，使具有式(XIV)和(XV)的化合物之间进行还原胺化，然后在溶剂例如DCM中，用酸(例如TFA)对胺进行脱保护，得到具有式(II)的化合物。从具有式(VII)的化合物开始，通过相似序列制备具有式(XIV)的化合物，其在溶剂混合物(例如THF和MeOH)中，使用条件(例如NaBH₃CN、ZnCl₂和TEA)，可与N-(叔丁氧基羰基)哌嗪进行还原胺化，然后在溶剂例如DCM中，用酸(例如TFA)对胺进行脱保护，以得到(XIV)。

方案4

具有式(IV)的化合物可以根据方案5，在溶剂混合物(例如二噁烷/水)中使用Pd催化的偶联，例如铃木反应，使用催化剂(例如PdCl₂(dppf))和碱(例如Cs₂CO₃)通过与具有式(IX)的化合物反应从具有式(XVI)的化合物制备。反之具有式(XVI)的化合物也可以在溶剂混合物(例如二噁烷/水)中使用催化剂(例如PdCl₂(dppf))和碱(例如Cs₂CO₃)，通过Pd催化的偶联，例如与具有式(X)的化合物进行铃木反应从具有式(XVII)的化合物制备。

方案5

具有式(XVII)的化合物可以如方案6所示通过在诸如二噁烷的溶剂中使用硼酸酯二聚体(例如双(频哪醇)二硼)，Pd催化剂如PdCl₂(dppf)和诸如KOAc的碱从化合物(XVIII)开始通过卤素-硼交换反应制备。例如当式(XIX)中的Hal和LG均为溴时，在溶剂(如乙腈)中使用诸如K₂CO₃的碱，可以使用亲核取代反应从化合物(XIX)和(VI)获得其中Hal表示卤素的化合物(XVIII)。

某些具有式(XVII)的化合物也可以通过2步法从具有式(XI)的化合物获得：首先将羟基基团转化为离去基团，例如甲磺酸酯，然后与具有式(VI)的化合物进行亲核取代反应。类型(XI)的化合物可以使用卤素硼交换反应衍生自类型(XIXa)的化合物。

式(XVIIIa)描述的化合物(XVIII)的特定子集可以由卤代苯基乙酸衍生物(XX)和具有式(VI)的化合物通过两步法进行合成，包括在溶剂(例如DMF或DMA)中使用偶联剂(例如HATU)和碱(例如DIPEA或NMM)进行酰胺偶联反应，然后在溶剂(例如THF)中在催化剂(例如ZrCl₄)存在下添加格氏试剂(Grignard reagent)(例如MeMgBr)。化合物(XVIIIa)可通过卤素-硼交换以类似于针对化合物(XVIII)所述的转化方式转化为化合物(XVII)。

方案6

可以根据方案7，在溶剂混合物(例如THF和MeOH)中使用例如NaBH₃CN、ZnCl₂和TEA，使用还原胺化偶联，由具有式(XXI)的化合物和具有式(VIIa)的化合物(其中M＝H的化合物类型(VII)的一个具体实施例)制备具有式(I)的化合物。可替代地，具有式(I)的化合物可以通过在溶剂混合物(例如DMF和ACN)中使用碱(例如K₂CO₃)，在亲核取代反应中，使具有式(Va)的化合物(其中M＝H的化合物类型(V)的一个具体实施例)与具有式(XXI)的化合物反应来制备。

方案7

在溶剂如DMF或DMA中，使用偶联剂(例如HATU)和碱(例如DIPEA或NMM)通过酰胺偶联反应，由具有式(VI)的化合物和具有式(III)的化合物合成具有式(XXI)的化合物，然后在溶剂例如DCM中使用酸(例如TFA)使胺的叔丁氧羰基(Boc)基团脱保护。

其中Z不存在的具有式(I)的化合物可以通过在诸如THF和MeOH的溶剂混合物中，使用例如NaBH₃CN、ZnCl₂和TEA，在还原胺化偶联中使具有式(XXII)的化合物与具有式(XXIII)的化合物反应来制备，其中Z、R¹、R^1a、R²、R^2a、X^1a、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、n、p和q如先前所定义。通过类比，根据方案8，化合物(XXIV)和(XXIII)可以在相似的条件下反应以提供具有式(I)的化合物。

方案8

具有式(XVI)的化合物可以根据方案9，在溶剂混合物(例如二噁烷/水)中使用Pd催化的偶联，例如铃木反应，使用催化剂(例如PdCl₂(dppf))和碱(例如Cs₂CO₃)，从具有式(X)的化合物和具有式(XXV)的化合物合成。

方案9

具有式(XXV)的化合物可以使用多种方法在前述反应条件下制备。例如，在方案10中，从常见的硼酸/酯起始材料(XXVIII)开始，使用具有结构(XXIX)的化合物进行光延反应，然后脱保护，得到具有式(XXVI)的中间体，该中间体随后可以与具有式(XXVII)的化合物进行亲核取代以提供具有式(XXV)的化合物。在某些情况下，(XXVIII)与具有式(XXX)的化合物进行光延反应可以直接得到(XXV)。

方案10

具有式(XXV)的化合物可以由常见的起始材料4-溴苄基溴(XXXI)合成。在这些情况下，如方案11所示，在溶剂(例如THF)中使用碱(例如叔丁醇钾)与化合物(XXX)进行亲核取代反应，然后使用上述条件进行卤素-硼交换可直接产生(XXV)。在其他情况下，与化合物(XXXII)进行亲核取代反应，然后进行卤素-硼交换和Boc脱保护，得到新的中间体(XXXIII)，该中间体可以在与前述那些相似的反应条件下在进一步的亲核取代反应中与类型(XXVII)的化合物反应，从而产生(XXV)。

方案11

对于本领域技术人员熟知的是，在产生相似的化合物的同时，反应序列的顺序经常可以改变。方案12显示了使用与已经描述的那些相似的方法来构建具有式(IV)的化合物的替代方法。因此，在溶剂混合物(例如二噁烷/水)中使用催化剂(例如PdCl₂(dppf))和碱(例如Cs₂CO₃)，使用化合物(X)和(XXVIII)进行Pd催化的偶联，例如铃木反应生成中间体(XXXIV)，该中间体可以与具有式(XXXII)的化合物进行光延反应以提供中间体(XXXV)。然后化合物(XXXV)可以进一步进行铃木偶联，这次与具有式(IX)化合物和随后的脱保护序列，得到具有式(XXXVI)的化合物。具有式(XXXVI)的化合物可以与具有式(XXXVII)的化合物进行还原胺化，得到具有式(IV)的化合物。

方案12

具有式(XXXVI)的化合物还可以与具有式(XXXVIII)的化合物进行还原胺化，得到具有式(IV)的化合物。在这种情况下，如方案13所示，可以产生两种产物(其中Q为H或Q为CH₂OH)。其中Q为H的化合物(IV)可以替代地使用掩蔽的醛(XXXIX)代替(XXXVIII)来制备。

方案13

方案14显示了提供具有式(IV)的化合物的更多方法。因此，具有式(XL)的中间体可以通过例如化合物(XXVIII)和(XXIX)之间的光延反应产生。可替代地，(XL)可以通过两步来制备，即，在具有式(XXXI)和(XXXII)的化合物之间进行亲核取代，然后进行卤素-硼交换反应。中间体(XL)在Pd催化的偶联反应中与具有式(X)的化合物反应得到具有式(XLI)的化合物，该化合物可以与具有式(IX)的化合物进行进一步Pd催化的偶联，然后脱保护得到具有式(XLII)的化合物。化合物(XLII)可以与具有式(XXXVII)的化合物进行还原胺化反应以提供(IV)。

方案14

具有式(I)的化合物可以如方案15中所示由具有式(XLIV)的中间体制备，该中间体本身可以通过与方案14中的化合物(XL)的直接类似方法来制备。因此，中间体(XLIV)衍生自与(XLIII)组合的(XXVIII)或(XXXI)。然后化合物(XLIV)经历两个Pd催化的偶联反应和脱保护序列以提供(XLV)。化合物(XLV)可以在还原胺化反应中与具有式(XLVI)的化合物反应，以提供(I)。使用与N-(2-羟基乙基)哌嗪的酰胺偶联反应，然后使用例如草酰氯和DMSO进行氧化反应如斯文氧化反应(Swern oxidation)，然后添加在溶剂(如DCM)中的TEA，从具有式(III)的化合物制备化合物(XLVI)。

方案15

具有式(III)的二氢尿嘧啶分子可通过在加热至约120℃的乙酸中使用尿素环化具有式(XLVII)的分子来制备。通常在约100℃的温度下，通过在丙烯酸中加热(方案16)，进而由相应的苯胺衍生物(XLVIII)合成化合物(XLVII)。具有式(IIIa)的化合物可以由具有式(III)的化合物通过在碱例如DIPEA的存在下在溶剂例如DMF中与五氟苯基-2,2,2-三氟乙酸酯反应来合成。

方案16

具有式(IX)的化合物可以根据方案17在溶剂例如DMF或DMA中使用偶联剂(例如HATU)和碱(例如DIPEA或NMM)在具有式(XLIX)和(L)的化合物之间进行酰胺偶联反应来制备。

方案17

实验部分详细提供了使用上述一般方法具体制备中间体和实例。

在另外的实施例中，提供了根据式(III)的化合物或其盐，

其中R⁶选自H和F；并且R⁷选自H、F、Cl、-CH₃、-OCH₃和-OCH₂CH₃。

在其他实施例中，提供了根据式(IIIa)的化合物或其盐，

在其他实施例中，提供了根据式(XXIa)的化合物或其盐，

在另外的实施例中，提供了选自下组的化合物或其盐，该组由以下组成：

3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸：

3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酸：

3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酸：

3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-乙氧基苯甲酸：

叔丁基9-(4-溴苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯：

5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸：

4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸：

五氟苯基3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸酯：

和1-(2-甲氧基-5-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮：

这些实施例的化合物可用于制备本发明的化合物。

本发明进一步包括本发明方法的任何变型，其中将可在其任何阶段获得的中间体用作起始材料并且进行其余步骤，或其中起始材料在反应条件下原位形成，或其中将反应组分以其盐或光学纯的材料的形式使用。根据本领域技术人员通常已知的方法，本发明的化合物和中间体也可以彼此转化，例如通过还原、氧化和/或所得化合物的其他官能化和/或通过裂解任选存在的任何一种或多种保护基团或接头部分，并回收如此获得的化合物。

在另一方面，本发明提供了药物组合物，该药物组合物包含本发明化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。

在另一方面，本发明提供了药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。

在另外的实施例中，组合物包含至少两种药学上可接受的载体，例如本文所述的那些。药物组合物可以配制用于特定的施用途径，例如口服施用、肠胃外施用(例如通过注射、输注、透皮或局部施用)，和直肠施用。局部施用也可以涉及吸入或鼻内应用。本发明的药物组合物可以以固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒、粉末或栓剂)、或以液体形式(包括但不限于溶液、悬浮液或乳液)制成。片剂可以根据本领域已知的方法进行薄膜包衣或肠溶包衣。

典型地，药物组合物是包含活性成分及以下中的一种或多种的片剂或明胶胶囊：

a)稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素和/或甘氨酸；

b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬酯酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；就片剂而言还包含

c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯基吡咯烷酮；如果希望

d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐，或泡腾混合物；以及

e)吸附剂、着色剂、风味剂和甜味剂。

具有式(I)或(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐表现出有价值的药理性质，例如调节BTK活性，例如通过充当BTK降解剂。这一点可以体外确定，例如在细胞中，通过使用如本文所述的过表达BTK或BTK C481S突变体融合蛋白的工程化细胞系，用于荧光读数，以及在表达内源性BTK的细胞系中。本发明化合物的药理作用也可以体内确定，例如，通过将本发明化合物施用至患有肿瘤例如TMD8肿瘤的动物(如小鼠)，并测量给药该化合物后肿瘤组织中BTK的减少和肿瘤体积的减小。因此，具有式(I)或(Ia)的化合物可用于治疗由BTK介导的疾病。

具有式(I)或(Ia)的化合物可用于研究由BTK介导的疾病，例如作为工具化合物。

游离形式或药学上可接受的盐形式的本发明化合物可用于预防或治疗癌症，例如选自实体瘤癌和造血系统癌症的癌症。

实体瘤癌的实例包括中枢神经系统癌症、脑癌、乳腺癌、头颈癌、肺癌；食管和食管胃连接部癌、胃癌、结直肠癌、直肠癌、肛门癌、肝胆癌、胰腺癌、非黑素瘤皮肤癌、黑素瘤、肾癌、前列腺癌、膀胱癌、子宫癌、宫颈癌、卵巢癌、骨癌、神经内分泌癌、间皮瘤癌、睾丸癌、胸腺瘤和胸腺癌以及甲状腺癌。

造血系统癌症的实例包括B细胞肿瘤(包括罕见的B细胞恶性肿瘤)、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、移植后淋巴组织增生性障碍、毛细胞白血病、组织细胞性和树突状肿瘤。

B细胞肿瘤的实例包括慢性淋巴细胞白血病(CLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、华氏巨球蛋白血症、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、里氏综合征、和前体B淋巴母细胞淋巴瘤、原发性和继发性的多发性骨髓瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾脏边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、淋巴结外边缘区B细胞淋巴瘤、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、和急性成淋巴细胞性白血病。

在具体实施例中，癌症选自慢性淋巴细胞白血病(CLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)和华氏巨球蛋白血症。

在另外的实施例中，癌症是慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

在另一个实施例中，癌症是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。

本发明的化合物可以特别地应用于治疗其中癌症(例如CLL、DLBCL、MCL、SLL和华氏巨球蛋白血症)已获得对依鲁替尼的抗性的受试者，例如在其中已经通过以下方式产生抗性的癌症中：半胱氨酸-481突变为丝氨酸(即突变C481S)。这样的受试者可能例如已经用依鲁替尼治疗或正在继续用依鲁替尼治疗，并且其中受试者的应答降低或对依鲁替尼的治疗不再应答。因此，本发明的化合物可以有益地用于治疗对依鲁替尼具有抗药性的癌症，尤其是对依鲁替尼具有抗药性的CLL、DLBCL、MCL、SLL和华氏巨球蛋白血症，特别是对依鲁替尼具有抗药性的CLL。

在另一个实施例中，游离形式或药学上可接受的盐形式的本发明化合物可用于预防或治疗自身免疫障碍、炎性障碍、过敏性疾病、过敏反应、过敏性哮喘和气道疾病，以及用于移植。例如，游离形式或药学上可接受的盐形式的本发明化合物可用于预防或治疗哮喘；慢性阻塞性肺病(COPD)；移植排斥；其中抗体产生、抗原呈递、细胞因子产生或淋巴器官发生为异常或不期望的疾病；类风湿性关节炎；全身型幼年型特发性关节炎(SOJIA)；痛风；寻常天疱疮；特发性血小板减少症性紫癜；系统性红斑狼疮；多发性硬化症；重症肌无力；干燥综合征；自身免疫性溶血性贫血；抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关血管炎；冷球蛋白血症；血栓性血小板减少症性紫癜；慢性自身免疫性荨麻疹；过敏(特应性皮炎、接触性皮炎、过敏性鼻炎)；动脉粥样硬化；1型糖尿病；2型糖尿病；炎症性肠病；溃疡性结肠炎；克隆氏症；胰腺炎；肾小球肾炎；古德帕斯彻氏综合征；桥本氏甲状腺炎；格雷夫斯病；抗体介导的移植排斥(AMR)；移植物抗宿主疾病(GvHD)；慢性移植物抗宿主疾病(cGvHD)；B细胞介导的超急性；急性和慢性移植物排斥；血栓栓塞障碍；心肌梗塞；心绞痛；中风；缺血性障碍；肺栓塞；真性红细胞增多症；原发性血小板增多症；和髓样化生性骨髓纤维化。

在另一个实施例中，游离形式或药学上可接受的盐形式的本发明化合物可用于预防或治疗免疫球蛋白轻链淀粉样变性(AL)。

在另外的方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐在疗法中的用途。在实施例中，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐在预防或治疗由BTK介导的疾病中的用途。在另一个实施例中，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐在预防或治疗癌症中的用途。在另外的实施例中，癌症是造血系统癌症。在另外的实施例中，该造血系统癌症是慢性淋巴细胞白血病(CLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)和华氏巨球蛋白血症，特别是CLL或DLBCL。

在实施例中，化合物是N-(3-(6-(4-((4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺或其药学上可接受的盐。

在实施例中，化合物是N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺或其药学上可接受的盐。

在实施例中，化合物是N-(3-(6-(4-(2-(4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺或其药学上可接受的盐。

在实施例中，化合物是N-(3-(6-(4-((4-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺或其药学上可接受的盐。

在实施例中，化合物是N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺或其药学上可接受的盐。

在实施例中，化合物是N-(3-(6-(4-(2-(4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺或其药学上可接受的盐。

在实施例中，化合物是N-(3-(6-(4-(((4-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)丁基)氨基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺或其药学上可接受的盐。

在实施例中，化合物是N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺或其药学上可接受的盐。

在另外的方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，用于在疗法中使用。在实施例中，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，用于在预防或治疗由BTK介导的疾病中使用。在实施例中，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，用于在预防或治疗癌症中使用。在另外的实施例中，癌症是造血系统癌症。在另外的实施例中，该造血系统癌症是慢性淋巴细胞白血病(CLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)和华氏巨球蛋白血症，特别是CLL或DLBCL。

在另外的方面，本发明提供一种治疗由BTK介导的疾病的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗上可接受的量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在实施例中，本发明提供一种治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗上可接受的量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，癌症是造血系统癌症。在另外的实施例中，该造血系统癌症是慢性淋巴细胞白血病(CLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)和华氏巨球蛋白血症，特别是CLL或DLBCL。

在另外的方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药物的用途。在实施例中，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药物、用于预防或治疗由BTK介导的疾病的用途。在实施例中，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药物、用于预防或治疗癌症的用途。在另外的实施例中，癌症是造血系统癌症。在另外的实施例中，该造血系统癌症是慢性淋巴细胞白血病(CLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)和华氏巨球蛋白血症，特别是CLL或DLBCL。

对于约50-70kg的受试者，本发明的药物组合物或组合可以呈约1-1000mg一种或多种活性成分，或约1-500mg或约1-250mg或约1-150mg或约0.5-100mg或约1-50mg活性成分的单位剂量。化合物、药物组合物、或其组合的治疗有效剂量取决于受试者的物种，体重、年龄和个体状况，所治疗的障碍或疾病或其严重性。具有普通技能的医师、临床医生或兽医可以容易地确定预防、治疗或抑制障碍或疾病的进展所必需的每种活性成分的有效量。

使用有利的哺乳动物，例如小鼠、大鼠、狗、猴或其分离的器官、组织和制剂，可以在体外和体内试验中证明上述剂量特性。本发明化合物可以以溶液(例如水溶液)的形式体外应用，和例如以悬浮液或以水溶液的形式肠内、肠胃外(有利地，静脉内)体内应用。体外剂量的范围可以在约10^-6摩尔浓度与10^-10摩尔浓度之间。根据施用途径，体内治疗有效量的范围可以在约0.1-500mg/kg之间或在约1-100mg/kg之间。

本发明化合物可以与一种或多种其他治疗剂同时施用或者在其之前或之后施用。本发明化合物可以通过与其他药剂相同或不同的施用途径分开施用，或在相同的药物组合物中一起施用。治疗剂是例如化学化合物、肽、抗体、抗体片段或核酸，当将该治疗剂与本发明的化合物组合施用至患者时，该治疗剂具有治疗活性或增强治疗活性。

在一个实施例中，本发明提供了包含本发明的化合物和至少一种其他的治疗剂的产品，作为组合制剂用于在疗法中同时的、分开的或顺序的使用。在一个实施例中，该疗法是治疗由BTK介导的疾病或病症。在另一个实施例中，该疗法是治疗本文所述的癌症。作为组合制剂提供的产品包括组合物，该组合物包含具有本发明的化合物和一起在相同的药物组合物中的一种或多种其他治疗剂，或具有本发明的化合物和呈分开形式(例如，呈试剂盒的形式)的一种或多种其他治疗剂。

在一个实施例中，本发明提供了药物组合物，该药物组合物包含本发明的化合物和另一种或多种治疗剂。在另一个实施例中，本发明提供了药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的本发明的化合物和另一种或多种治疗剂。

任选地，药物组合物可以包含如上所述的药学上可接受的载体。

在一个实施例中，本发明提供了试剂盒，该试剂盒包含两种或多种分开的药物组合物，其中至少一种药物组合物含有本发明的化合物。在一个实施例中，试剂盒包含用于单独地保留所述组合物的装置，诸如例如容器、分开的瓶、或分开的箔袋。此类试剂盒的实例是泡罩包装，如典型地用于包装片剂、胶囊等。

本发明试剂盒可以用于施用不同剂型(例如，口服和肠胃外)，用于以不同剂量间隔施用单独的组合物，或用于相对彼此滴定单独的组合物。为了有助于依从性，本发明试剂盒典型地包括施用指导。

在本发明的组合疗法中，本发明化合物和其他治疗剂可以由相同或不同的制造商生产和/或配制。此外，可以将本发明化合物和另一种治疗剂一起形成组合疗法：(i)在将组合产物释放给医师之前(例如，在包含本发明的化合物和其他治疗剂的试剂盒的情况下)；(ii)在施用前不久由医师本人(或在医师指导下)进行；(iii)在患者自身中，例如在依序施用本发明的化合物和其他治疗剂期间进行。

因此，本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗由BTK介导的疾病或病症的用途，其中该另一种治疗剂与本发明的化合物一起施用。

本发明还提供了在治疗由BTK介导的疾病或病症的方法中使用的本发明的化合物，其中该本发明的化合物与另一种治疗剂一起施用。

本发明还提供了在治疗由BTK介导的疾病或病症的方法中使用的另一种治疗剂，其中该另一种治疗剂与本发明的化合物一起施用。

本发明还提供本发明的化合物用于治疗由BTK介导的疾病或病症的用途，其中患者先前(例如在24小时内)已经用另一种治疗剂治疗。

本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗由BTK介导的疾病或病症的用途，其中患者先前(例如在24小时内)已经用本发明的化合物治疗。

本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗癌症的用途，其中该另一种治疗剂与本发明的化合物一起施用。

本发明还提供了在治疗癌症的方法中使用的本发明的化合物，其中该本发明的化合物与另一种治疗剂一起施用。

本发明还提供了在治疗癌症的方法中使用的另一种治疗剂，其中该另一种治疗剂与本发明的化合物一起施用。

本发明还提供了本发明的化合物用于治疗癌症的用途，其中患者先前(例如在24小时内)已经用另一种治疗剂治疗。

本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗癌症的用途，其中患者先前(例如在24小时内)已经用本发明的化合物治疗。

在一个实施例中，其他治疗剂选自：

凋亡调节剂、抗CD20抗体、抗CD22抗体、PI3K抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、免疫检查点剂、CART治疗剂、免疫调节剂、靶向CD20和CD3的双特异性抗体、抗体-药物偶联物(ADC)、蛋白酶体抑制剂、表观遗传修饰剂、抗CD38 mAb、抗SLAMF7剂、XPO1抑制剂和其他药剂(例如化学治疗剂)。

在实施例中，凋亡调节剂选自Bcl2抑制剂(例如抗霉素、奥巴妥拉、维奈托克乙基-2-氨基-6-环戊基-4-(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基)-4H-色酮-3-甲酸酯(HA14-1)、奥利默森(G3139，)、Bak BH3肽、(-)-棉酚(AT-101，BL-193)、那维托克莱克斯(Navitoclax)(ABT-263))、Mcl1抑制剂(例如AMG176、S63845、AZD5991、MIK665)和MDM2/p53抑制剂(例如NVP-HDM201、NVP-CGM-097、ALRN-6924、依达奴林(idasanutlin)、AMG232和DS-3032B)。

在实施例中，抗CD20抗体选自利妥昔单抗、奥比妥单抗、奥法木单抗、奥瑞珠单抗、和ublituximab。

在实施例中，抗CD22抗体选自奥英妥珠单抗、依帕珠单抗、贝妥莫单抗(bectumomab)和莫塞妥莫单抗(moxetumomab)。

在实施例中，PI3K抑制剂选自度维利司(duvelisib)、甲苯磺酸厄布利塞、INCB050465、甲磺酸apilimod(LAM-002)、盐酸库潘尼西特那利司、匹替利司(GDC 0941)、sonolisib(PX866)、匹雷利司(pilaralisib)(SAR 245408或XL 147)、阿培利司(BYL719)和leniolisib(CDZ173)。

在实施例中，酪氨酸激酶抑制剂选自BTK抑制剂(例如依鲁替尼、阿卡替尼、泽布替尼(BGB-3111)、替卢替尼(tirabrutinib)(ONO-4059)、ARQ531、CC-292(AVL-292)、CT-1530、DTRMWXHS-12、GDC-0853、M7583、和维卡布瑞替尼(SNS-062))、SYK抑制剂(例如entospletinib(GS9973)、福他替尼(fostamatinib)和HMPL-523)、SYK/JAK抑制剂舍拉替尼(cerdulatinib)(PRT062070)、SYK/FLT抑制剂例如TAK-659、FLT3抑制剂例如FF-10101、FLT3/BTK抑制剂(CG806)、JAK抑制剂(例如itacitanib、INCB052793、BMS911543、fedratinib、WP-1066、NS-018和鲁索替尼)、盐酸埃洛替尼利尼法尼(ABT869)、苹果酸舒尼替尼博舒替尼达沙替尼帕唑帕尼索拉非尼Zactima(ZD6474)、伊马替尼或甲磺酸伊马替尼(和)和托扎舍替(VX680或MK-0457)。

在实施例中，免疫检查点剂是抗PD-1剂、抗PD-L1剂，其选自派姆单抗、纳武单抗、替雷利珠单抗、阿特珠单抗、艾匹利木单抗、塞米普利单抗、TLR4激动剂、CCR4 mAb莫加利珠单抗和CD47 mAb融合蛋白(TTI-621)。

在实施例中，CART疗法选自CD19、BCMA CART、CD20、CD79b、CD22、CD30。

在实施例中，免疫调节剂选自来那度胺沙利度胺avadomide(CC-122)和泊马度胺

在实施例中，靶向CD20和CD3的双特异性抗体选自REGN-1979、XmAb-13676、BTCT-4465-A、CD20-TCB和8RG-6026。

在实施例中，ADC选自CD79 ADC维汀-珀拉妥珠单抗、CD30 ADC维汀-布仑妥昔单抗、CD25 ADC camidanlumab tesirine和CD19 ADC loncastuximab tesirine。

在实施例中，蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米卡非佐米马里佐布(marizomib)(NPI-0052)、柠檬酸伊沙佐米(MLN-9708，)、delanzomib(CEP-18770)和奥波佐布(ONX-0912)。

在实施例中，表观遗传修饰剂例如HDAC和DNA甲基化抑制剂选自伏立诺他罗米地辛阿扎胞苷吡咯沙敏、斯皮鲁他汀A、麦普罗因(丙戊酸)、恩诺司他、和呱西他滨(guadecitabine)。

在实施例中，抗CD38 mAb选自达雷木单抗(Daratumumab)和Isatuximab。

在实施例中，抗SLAMF7剂是埃罗妥珠单抗。

在实施例中，XPO1抑制剂选自塞立奈索(Selinexor)和Eltanexor。

在实施例中，可与本发明化合物组合的其他药剂(例如一般化学治疗剂)选自阿那曲唑苯达莫司汀比卡鲁胺硫酸博莱霉素白消安白消安注射液卡培他滨N4-戊氧羰基-5-脱氧-5-氟胞苷、卡铂卡莫司汀苯丁酸氮芥顺铂克拉屈滨环磷酰胺(或)、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷阿糖胞苷脂质体注射液达卡巴嗪更生霉素(放线菌素D、Cosmegan)、盐酸柔红霉素柠檬酸柔红霉素脂质体注射液地塞米松、多西他赛盐酸阿霉素表柔比星依托泊苷磷酸氟达拉滨5-氟尿嘧啶氟他胺替扎他滨(tezacitibine)、吉西他滨(双氟脱氧胞苷)、羟基脲伊达比星异环磷酰胺伊立替康L-天冬酰胺酶亚叶酸钙、美法仑6-巯嘌呤甲氨蝶呤米托蒽醌吉妥单抗(mylotarg)、紫杉醇白蛋白结合型紫杉醇phoenix(Yttrium90/MX-DTPA)、喷司他丁(pentostatin)、聚苯丙生(polifeprosan)20与卡莫司汀的植入物枸橼酸它莫西芬替尼泊苷6-硫代鸟嘌呤、噻替派、替拉扎明注射用盐酸托泊替康长春花碱长春新碱和长春瑞滨ROR mAb cirmtuzumab、双重PI3K/HDAC抑制剂(CUDC-907)、Bet抑制剂(INCB357643)、ALK抑制剂(克唑替尼)、EZH1/2抑制剂(DS-3201b)、MAPK抑制剂、Aplidin、Plitidepsin(eEF1A2抑制剂)、Wnt抑制剂、放射药物、独特型疫苗、乙二醇化非格司亭citoplurikin(IRX-2)。

在另外的实施例中，另一种治疗剂选自：

维奈托克、奥利默森(oblimersen)、那维托克莱克斯(navitoclax)、MIK665、NVP-HDM201、利妥昔单抗、奥比妥珠单抗(obinutuzumab)、奥法木单抗、奥瑞珠单抗、ublituximab、奥英妥珠单抗、依帕珠单抗(epratuzumab)、贝妥莫单抗、莫塞妥莫单抗、度维利司(duvelisib)、甲苯磺酸厄布利塞(umbralisib tosylate)、INCB050465、leniolisib(CDZ173)、甲磺酸apilimod(LAM-002)、盐酸库潘尼西(copanlisib hydrochloride)、特那利司、匹替利司(pictilisib)、阿培利司、依鲁替尼、阿卡替尼、泽布替尼(BGB-3111)、替卢替尼(tirabrutinib)(ONO-4059)、ARQ531、CC-292(AVL-292)、CT-1530、DTRMWXHS-12、GDC-0853、M7583、维卡布瑞替尼(SNS-062)、entospletinib(GS9973)、福他替尼(fostamatinib)、HMPL-523、舍拉替尼(cerdulatinib)(PRT062070)、(TAK-659)、FF-10101、FLT3/BTK抑制剂(CG806)、itacitanib、INCB052793、BMS911543、fedratinib、WP-1066、NS-018、鲁索替尼派姆单抗、纳武单抗、替雷利珠单抗、阿特珠单抗、艾匹利木单抗、塞米普利单抗、TLR4激动剂、CCR4 mAb莫加利珠单抗、CD47 mAb融合蛋白(TTI-621)、CD19、BCMA CART、CD20、CD79b、CD22、CD30、来那度胺、沙利度胺、avadomide、泊马度胺、XmAb-13676、CD79 ADC维汀-珀拉妥珠单抗(polatuzumab vedotin)、CD30 ADC维汀-布仑妥昔单抗(brentuximab vedotin)、CD25 ADC camidanlumab tesirine、CD19 ADCloncastuximab tesirine、卡非佐米、硼替佐米、伊沙佐米、马里佐布、奥波佐布、阿扎胞苷、罗米地辛、伏立诺他、呱西他滨(guadecitabine)、达雷木单抗、Isatuximab、埃罗妥珠单抗、塞立奈索(Selinexor)、Eltanexor、氟达拉滨(Fludarabine)、卡莫司汀、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、苯达莫司汀(bendamustine)、美法仑、克拉屈滨、达卡巴嗪、喷司他丁、长春新碱、依托泊苷、表柔比星、阿霉素、蒽环类药物和抗叶酸剂。

在另外的实施例中，另一种治疗剂选自Bcl2抑制剂和BTK抑制剂。

在另外的实施例中，另一种治疗剂选自维奈托克、依鲁替尼和阿卡替尼。

可以提供特定治疗益处的特定个体组合包括选自以下的化合物：

N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐，与维奈托克组合。

可以提供特定治疗益处的其他特定个体组合包括选自以下的化合物：

N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐，与依鲁替尼组合。

可以提供特定治疗益处的又其他特定个体组合包括选自以下的化合物：

N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐，与阿卡替尼组合。

这些组合可以作为药物组合物提供，该组合物包含上述本发明的化合物或其药学上可接受的盐，以及维奈托克、依鲁替尼或阿卡替尼。

可替代地，这些组合可以作为上述本发明的化合物或其药学上可接受的盐的组合制剂提供，用于在疗法中与维奈托克、依鲁替尼或阿卡替尼同时、分开或依序使用。

这些组合，特别是与依鲁替尼组合，在治疗造血系统癌症，特别是CLL和DLBCL中可能特别有效。

本发明的化合物的活性可借由以下本文所述体外方法进行评估。

可以如以下实例中所述制备本发明的化合物。

实例

以下实例说明本发明，而不应被解释为对其的限制。温度以摄氏度给出。所使用的缩写是本领域常规的或以下列出的缩写。

用于合成本发明化合物的所有起始材料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂是可商购获得的或可通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法制备。此外，本发明的化合物可以通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法生产，如以下实例所示。

缩写：

ACN 乙腈

OAc 乙酸酯

AcOH 乙酸

aq. 水性

BISPIN 双(频哪醇)二硼

BOC 叔丁氧基羰基

br 宽

CHX 环己烷

d 双重峰

DCM 二氯甲烷

dd 双双重峰

DEA 二乙胺

DEAD 偶氮二甲酸二乙酯

DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯

DIPEA 二异丙基乙胺

DMA N,N-二甲基乙酰胺

DMEM 杜氏改良伊戈尔培养基(Dulbecco's Modified Eagle'smedium)

DMF N,N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲亚砜

e.g. 例如

eq. 当量

ESI 电喷雾电离

Et₂O 二乙醚

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

FCS 胎牛血清

h 小时

HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐

HBTU 2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐

HPLC 高压液相色谱法

HV 高真空

iPrOH 异丙醇

LC-MS 液相色谱法和质谱法

m 多重峰

m/z 质荷比

MeOH 甲醇

mg 毫克

min 分钟

ml 毫升

mmol 毫摩尔

MS 质谱法

Ms₂O 甲磺酸酐

NaBH(OAc)₃ 三乙酰氧基硼氢化钠

NaBH₃CN 氰基硼氢化钠

NaPyr. 丙酮酸钠

NEAA 非必需氨基酸

NMM N-甲基吗啉

NMP N-甲基-2-吡咯烷酮

NMR 核磁共振

PBS 磷酸盐缓冲盐水

PG 保护基团

Pd(PPh₃)₄ 四(三苯基膦)钯

PdCl₂(dppf) [1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯

PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂ [1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯-二氯甲烷加合物

PdCl₂(PPh₃)₂ 双(三苯基膦)氯化钯

ppm 百万分率

rac 外消旋的

RM 反应混合物

Rt 保留时间

RT 室温

s 单峰

sat. 饱和的

SFC 超临界液相色谱法

t 三重峰

TBME 叔丁基甲基醚

TBTU O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸酯

TEA 三乙胺

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

分析方法

通用条件：

NMR：

NMR谱是在Bruker AVANCE 400MHz、500MHz或600MHz NMR光谱仪上使用ICON-NMR在TopSpin程序控制下记录的。除非另外指明，否则光谱在298K下测量，并相对于已知溶剂共振来参考。

LC-MS：

使用电喷雾方法、化学方法和电子轰击离子化方法在LC-MS、SFC-MS或GC-MS系统上从一系列以下配置的仪器中获取质谱：沃特世Acquity UPLC/SQD系统，使用光电二极管阵列检测器和单四极杆质量检测器，或使用带有G 6110系列质谱仪的安捷伦1200系统。[M+H]⁺是指化学物种的质子化分子离子。

方法A：

柱：沃特世Acquity HSS T3 1.8μm 2.1x 50mm或2.1x 100mm

柱温：60℃

洗脱液：A：水性甲酸(0.05％)+水性乙酸铵(3.75mM)

B：含有甲酸(0.04％)的ACN

流速：1.0ml/min

梯度：1.4min内5％至98％B

方法B：

柱：沃特世Acquity HSS T3 1.8μm 2.1x 50mm或2.1x 100mm

柱温：60℃

洗脱液：A：水性甲酸(0.05％)+水性乙酸铵(3.75mM)

B：含有甲酸(0.04％)的ACN

流速：0.8ml/min

梯度：9.4min内5％至98％B

方法C：

柱：沃特世Acquity HSS T3 1.8μm 2.1x 50mm或2.1x 100mm

柱温：50℃

洗脱液：A：水性甲酸(0.05％)+水性乙酸铵(3.75mM)

B：含有甲酸(0.04％)的ACN

流速：1.2ml/min

梯度：1.4min内2％至98％B

方法D：

柱：SunFire C18，4.6x 50mm，3.5μm

柱温：50℃

洗脱液：A：水性TFA(0.01％)

B：含有TFA(0.01％)的乙腈

流速：2.0ml/min

梯度：1.4min内5％至95％B

方法E：

柱：SunFire C18，4.6x 50mm，3.5μm

柱温：50℃

洗脱液：A：水性TFA(0.01％)

B：含有TFA(0.01％)的乙腈

流速：2.0ml/min

梯度：1.2min内5％至95％B，95％B持续1.3min

方法F：

柱：Phenomenex，3.0×30mm，5μm

柱温；50℃

洗脱液：A：水性碳酸氢铵(10mM)

B：乙腈

流速：1.5ml/min

梯度：1.5min内5％至95％B，95％B持续0.7min

方法G：

柱：XBridge C18，4.6x 50mm，3.5μm

柱温：40℃

洗脱液：A：水性碳酸氢铵(10mM)

B：乙腈

流速：2.0ml/min

梯度：1.5min内5％至95％B

方法H：

柱：XBridge C18，4.6×50mm，3.5μm

柱温：50℃

洗脱液：A：水性碳酸氢铵(10mM)

B：乙腈

流速：1.8ml/min

梯度：1.5min内5％至95％B，95％B持续1.5min

方法I：

柱：SunFire C18，3x 30mm，2.5μm

柱温：50℃

洗脱液：A：水性TFA(0.01％)

B：含有TFA(0.01％)的乙腈

流速：1.5ml/min

梯度：1.5min内5％至95％B

方法J：

柱：XBridge C18，4.6x 50mm，3.5μm

柱温：40℃

洗脱液：A：水性碳酸氢铵(10mM)

B：乙腈

流速：1.8ml/min

梯度：1.4min内5％至95％B，95％B持续1.6min

手性分析HPLC方法：

方法K：

仪器：安捷伦1200系统

柱：Chiralpak ID 5um 4.6x 250mm

柱温：RT

洗脱液：Hept:DCM:MeOH(40:35:25)+DEA(0.1％)

流速：1.0mL/min

梯度：等度

检测：在254nm处UV

制备型色谱法

正相和反相快速色谱纯化已在CombiFlash Rf200或Rf+系统上进行。可替代地，已在Interchim Puriflash 4250系统或Biotage系统上进行反相色谱纯化。使用MeOH作为改性剂的，用带有沃特世2998光电二极管阵列检测器或沃特世MS单四极杆检测器的沃特世制备型SFC-100-MS系统，已经进行了超临界流体色谱(SFC)分离。通常，背压为120巴，流量为100g CO₂/min，以及柱温为40℃。反相HPLC纯化已在带有沃特世2998光电二极管阵列检测器或沃特世MS单四极杆检测器的沃特世HPLC制备型系统上进行。

非手性制备型HPLC方法：

方法L：

仪器：Gilson GX-281

柱：SunFire C18

柱温：RT

流动相：含有TFA(0.1％)的水中的ACN

流量：40ml/min

检测：UV@254nm

手性制备型色谱法：

方法M：

仪器：Gilson Trilution I HPLC系统

柱：ChiralPak ID，5μM，250x 20mm

柱温：RT

流动相：含有DEA(0.05％)的庚烷/DCM/MeOH(40:35:25)

流量：10ml/min

检测：UV@254nm

用于固相萃取的材料：

根据制造商的通知，使用以下固相萃取(SPE)筒从不同的盐生成相应的游离碱：

PL-HCO3 MP SPE筒购自安捷伦StratosPhere-参考：PL-HCO3 MP-树脂，1.8mmol/g，100A，150-300μm，500mg，6ml。

SCX筒购自安捷伦-参考：HF Mega DE-SCX，2g，12ml。

中间体的合成

中间体1

4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯甲醛

步骤1：(4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)甲醇

在0和5℃之间，向在氩气下的乙基4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯甲酸酯(其可以根据公开的专利US 6140332，第45栏，实例30中所述的程序制备)(10.2g，33.8mmol)在THF(100ml)中的悬浮液中缓慢添加在THF中的氢化铝锂溶液(1M)(50.7ml，50.7mmol)。在添加期间，将RM用THF(5ml)稀释。添加后，将RM在0℃下搅拌10min，然后使其温热至RT。在RT下搅拌3h后，使用水和NaOH的水性溶液(15％)的混合物，在0℃下淬灭RM。将混合物通过过滤，将固体用THF洗涤并将合并的滤液浓缩以提供标题化合物(9.32g)。

方法A：Rt＝0.78min；[M+H]⁺＝260.1。

步骤2：4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯甲醛

将(4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)甲醇(9.32g，32.7mmol)和二氧化锰(28.4g，327mmol)在THF(250ml)中的悬浮液在RT下搅拌过夜。将另外的二氧化锰(8.52g，98mmol)添加至RM并在RT下继续再搅拌一晚上。将RM通过过滤并将固体用THF洗涤。将合并的滤液浓缩，用THF再次稀释，再次通过过滤并浓缩以提供呈固体的标题化合物(5.68g)。

方法A：Rt＝0.88min；[M+H]⁺＝258.1。

中间体2

2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

将2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酸(6.35g，32.0mmol)、HATU(17.06g，44.9mmol)和DIPEA(16.79ml，96mmol)在DMF(100ml)中的混合物在RT下搅拌30min。然后添加5-氟-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯胺(其可以根据公开的专利申请WO 2013/008095 A1，第37页，中间体5中描述的程序制备)(8.47g，32.0mmol)并将RM在50℃下搅拌过夜。将RM用EtOAc稀释并将有机相用NaHCO₃的饱和水性溶液和盐水洗涤。将合并的水相再次用EtOAc萃取，并将合并的有机相经Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至10％)洗脱)纯化。将所得的固体与Et₂O一起研磨，过滤，并将固体用二异丙醚洗涤并干燥以提供呈固体的标题化合物(9.28g)。

方法A：Rt＝1.28min；[M+H]⁺＝432.3。

注意：中间体2的可替代的制备描述于WO 2013/008095 A1，第81页，中间体35中。

中间体3

2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

将4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯甲醛(中间体1，150mg，0.553mmol)、2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体2，328mg，0.608mmol)、Na₂CO₃的水性溶液(2M)(0.553ml，1.106mmol)和PdCl₂(PPh₃)₂(19.41mg，0.028mmol)在1-丙醇(4ml)中的悬浮液使用微波辐射在140℃下加热15min。将悬浮液过滤并将固体用1-丙醇、水和1-丙醇洗涤。将剩余固体干燥以提供呈固体的标题化合物(178mg)。

方法A：Rt＝0.99min；[M+H]⁺＝527.2。

中间体4

外消旋-2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-((7-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：外消旋-叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)-1-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

向2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，300mg，0.570mmol)、外消旋-叔丁基1-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(219mg，0.684mmol)和TEA(0.119ml，0.855mmol)在THF(3ml)中的混合物中添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.5M)(1.197ml，0.598mmol)。将所得的RM在氩气下在RT搅拌3h，然后添加固体NaBH₃CN(71.6mg，1.140mmol)。将RM在RT下搅拌过夜，然后用DCM稀释并用水和盐水洗涤。将有机相经MgSO₄干燥，浓缩并通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至20％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(273mg)。

方法A：Rt＝0.87min；[M+H]⁺＝795.6。

步骤2：外消旋-2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-((7-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

将外消旋-叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)-1-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(273mg，0.343mmol)和TFA(0.794ml，10.30mmol)在DCM(3ml)中的溶液在RT下搅拌2h，浓缩并干燥以提供呈固体TFA盐的标题化合物(288mg)。

方法A：Rt＝0.63min；[M+H]⁺＝695.5。

中间体5

3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸

将3-氨基-4-甲氧基苯甲酸(5.0g，29.3mmol)悬浮于丙烯酸(8.05ml，117mmol)中并将所得的悬浮液在100℃下搅拌3h并将RM冷却至RT。添加AcOH(33ml)并将搅拌的悬浮液在100℃下加热10min.，然后添加脲(11.00g，183mmol)并将RM在120℃下搅拌过夜。将溶液添加至水和浓缩水性HCl(37％)的冰冷混合物中。搅拌后，将所得的悬浮液在5℃下的冰箱中储存过夜，然后过滤，并将固体用水洗涤并干燥以提供固体。将固体在HCl的水性溶液(0.05M)中研磨，过滤，并将固体用TBME洗涤，并在减压下在40℃干燥以提供呈固体的标题化合物(6.29g)。

方法A：Rt＝0.48min；[M+H]⁺＝265.2。

中间体6

N-(3-(6-(4-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

将2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，510mg，0.969mmol)、叔丁基3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(271mg，1.065mmol)、TEA(0.135ml，0.969mmol)和在THF中的ZnCl₂溶液(0.5M)(2.325ml，1.162mmol)的混合物在RT下在MeOH(10ml)中搅拌6h。添加固体NaBH₃CN(67.0mg，1.065mmol)并将RM在RT下搅拌过夜。将RM用EtOAc稀释并将有机相用NaHCO₃的饱和水性溶液和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，浓缩并通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至50％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(550mg)。

方法A：Rt＝4.60min；[M+H]⁺＝765.4。

步骤2：N-(3-(6-(4-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

在RT下，向叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(0.55g，0.683mmol)在DCM(40ml)中的溶液中添加TFA(1.053ml，13.66mmol)。将所得的RM在RT下搅拌过夜，蒸发，再次溶解于ACN和水的混合物中，并冷冻干燥，产生呈固体TFA盐的标题化合物(0.76g)。

方法B：Rt＝2.84min；[M+H]⁺＝665.6。

中间体7

4-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶

步骤1：4-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶

在置于氩气下的火焰干燥的烧瓶中，将在矿物油(1.563g，39.1mmol)中的NaH(60％)悬浮于DMF(60ml)并将混合物冷却至0℃。经10min.，缓慢添加4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(4g，26.0mmol)在DMF(20ml)中的溶液，并将RM搅拌10min.直至氢气逸出停止。添加苯磺酰氯(3.36ml，26.0mmol)并将RM在RT下搅拌1h。添加水并将所得的沉淀过滤，并将固体干燥以提供呈固体的标题化合物(7.418g)。

方法C：Rt＝1.01min；[M+H]⁺＝294.1。

步骤2：4-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶

经15min，向在-78℃下的在氩气气氛下的4-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶在干燥的THF(80ml)中的搅拌溶液中添加在CHX中的二异丙基氨基锂单-四氢呋喃溶液(1.5M)(5.22ml，7.83mmol)。1h后，在-78℃下经15min滴加碘(1.987g，7.83mmol)在THF(20ml)中的溶液。在-78℃下，将所得溶液搅拌3h。添加水(2ml)并将混合物温热至RT。将混合物用DCM稀释，将有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，并蒸发至干燥。将所得的固体与ACN一起研磨，过滤并干燥，以提供呈固体的标题化合物(1.513g)。

方法C：Rt＝1.12min；[M+H]⁺＝419.9。

中间体8

3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酸

步骤1：3-((2-羧乙基)氨基)-4-甲基苯甲酸

将3-氨基-4-甲基苯甲酸(15.12g，100mmol)在甲苯(25ml)中的悬浮液加热至回流。添加丙烯酸(27.5ml，400mmol)和甲苯(10ml)，混合物开始变成均质溶液，并将RM在100℃下搅拌3h并然后冷却至RT。通过过滤收集分离固体，将固体用甲苯洗涤并干燥以提供呈固体的标题化合物(17.87g)。

方法A：Rt＝0.61min；[M+H]⁺＝224.1。

步骤2：3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酸

将3-((2-羧乙基)氨基)-4-甲基苯甲酸(893mg，4mmol)和脲(601mg，10mmol)在AcOH(12ml)中的悬浮液在120℃下搅拌过夜。将RM冷却至RT，倒入碎冰中并将所得的混合物用HCl的水性溶液(1M)酸化至pH 0。通过过滤收集固体，用冰水洗涤，并干燥以提供呈固体的标题化合物(661mg)。

方法A：Rt＝0.51min；[M+H]⁺＝249.1。

中间体9

3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酸

步骤1：3-(2-羧乙基氨基)-4-氟苯甲酸

向在25℃下的3-氨基-4-氟苯甲酸(9.3g，60mmol)和丙烯酸(13.0g，180mmol)的混合物中添加AcOH(40ml)和浓H₂SO₄(0.5ml)。将混合物在100℃搅拌5.5h。将含有标题化合物的粗制混合物(13.6g)无需进一步纯化即可直接用于下一步。

方法D：Rt＝1.298min；[M+H]⁺＝228。

步骤2：3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酸

将AcOH(60ml)和脲(18.0g，300.0mmol)添加至3-(2-羧乙基氨基)-4-氟苯甲酸(13.6g，60.0mmol)的粗制混合物中并将所得的RM在120℃下搅拌26h并蒸发。添加冰和水，然后添加HCl(37％)的浓缩水性溶液。所得的混合物过滤，并将滤液与固体NaCl一起研磨并置于15℃下20h。收集沉淀并干燥，产生第一批产物(5g)。将滤液蒸发，将残余物用H₂O稀释并将所得的混合物置于15℃下20h。过滤沉淀并干燥，产生第二批产物(4g)。向合并批次的产物(9g)中添加AcOH并将混合物超声处理10min。添加TBME，将TBME相倒出并将该步骤再重复一次。将残余物蒸发，添加AcOH和TBME，并将混合物超声处理。添加另外的TBME，将TBME相倒出并将该步骤再重复一次。添加TBME，将混合物置于15℃下20h并将TBME相倒出。将混合物蒸发至干燥，添加HCl的水性溶液(0.001M)，将混合物过滤并将固体用HCl的水性溶液(0.001M)、ACN洗涤，并干燥以提供呈固体的标题化合物(4.0g)。

方法D：Rt＝1.164min；[M+H]⁺＝253.1。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ13.16(br s,1H),10.54(s,1H),8.02(dd,J＝7.4,2.0Hz,1H),7.93(ddd,J＝8.3,4.7,2.1Hz,1H),7.44(dd,J＝9.8,8.9Hz,1H),3.77(t,J＝6.6Hz,2H),2.74(t,J＝6.6Hz,2H)。

中间体10

叔丁基4-(哌啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸酯

步骤1：叔丁基4-(吡啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸酯

向500ml圆底烧瓶中添加吡啶-4-醇(5g，52.6mmol)、THF(200ml)、叔丁基4-羟基哌啶-1-甲酸酯(13.3g，65.8mmol)和三苯基膦(18g，68.4mmol)。在RT下滴加DEAD(12g，68.4mmol)并在添加后将RM在RT下搅拌3h。将RM浓缩并通过硅胶色谱法(用甲醇的DCM溶液(1:30)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(10g)。

方法E：Rt＝1.35min；MS m/z[M+H]⁺279。

步骤2：叔丁基4-(哌啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸酯

向经吹扫并在惰性气氛下维持的500ml圆底烧瓶中添加叔丁基4-(吡啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸酯(2g，7.2mmol)、EtOH(100ml)、AcOH(5ml)和Pd/C(10％)(0.4g)。将RM在氢气气氛(4MPa)下在80℃搅拌16h。将混合物通过过滤，将滤液浓缩并通过硅胶色谱法(用MeOH的DCM溶液(1:10)洗脱)纯化，产生呈油状物的标题化合物(0.5g)。

方法D：Rt＝1.32min；MS m/z[M+H]⁺285.3。

中间体11

向25ml圆底烧瓶中添加叔丁基3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(118mg，0.450mmol)、TEA(0.100ml，0.717mmol)、2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，220mg，0.409mmol)和MeOH(4ml)。添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.5M)(1ml，0.500mmol)并将所得的RM在RT下搅拌过夜。添加固体NaBH₃CN(30mg，0.477mmol)，并将RM在RT下搅拌5h，蒸发，并将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至50％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(354mg)。

方法A：Rt＝0.96min；[M+H]⁺＝765.4。

向叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(354mg，0.407mmol)在MeOH(2ml)中的溶液中添加在1,4-二噁烷中的HCl溶液(4M)(2ml，8.00mmol)，并将RM在RT下搅拌1h。将RM浓缩，与DCM一起共蒸发并干燥以得到呈固体HCl盐的标题化合物(340mg)。

方法A：Rt＝0.65min；[M+H]⁺＝665.5。

中间体12

2-(4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)乙醇

将含有4-氯-6-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.2g，4.29mmol)、4-(2-羟基乙基)苯基硼酸(750mg，4.29mmol)、Na₂CO₃的水性溶液(2.0M)(4.72ml，9.45mmol)、PdCl₂(PPh₃)₂(154mg，0.215mmol)和1-丙醇(36ml)的混合物的100ml圆底烧瓶在RT下用N₂吹扫并然后在105℃下搅拌过夜。将混合物浓缩至干燥并通过硅胶色谱法(用在CHX中的EtOAc(从40％至100％)洗脱)纯化，以得到呈固体的标题化合物(762mg)。

方法A：Rt＝0.82min；[M+H]⁺＝274.0。

中间体13

4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基甲磺酸酯

步骤1：2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-(2-羟基乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

在RT下，将2-(4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)乙醇(中间体12，888mg，2.60mmol)和2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体2，1567mg，3.63mmol)悬浮于1-丙醇(12ml)、和Na₂CO₃的水性溶液(2.0M)(2.60ml，5.19mmol)的混合物中。使氩气通过RM 2min并添加PdCl₂(PPh₃)₂(91mg，0.130mmol)。使用微波辐射将混合物在140℃下加热20min.。将RM用EtOAc、水和盐水稀释，分离各相并将有机相经MgSO₄干燥，并在HM-N上吸附和干燥。通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至20％)洗脱)纯化提供呈固体的标题化合物(863mg)。

方法A：Rt＝0.92min；[M+H]⁺＝543.3。

步骤2：4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基甲磺酸酯

在RT以及在氩气下，将2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-(2-羟基乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(89mg，0.164mmol)溶解于干燥的THF(2ml)和TEA(0.114ml，0.820mmol)中，并将混合物冷却至0℃。添加Ms₂O(57.1mg，0.328mmol)并将RM在0℃下搅拌30min.，用冰水淬灭，添加DCM并分离各相。将水相用DCM萃取并将合并的有机相经MgSO₄干燥。蒸发提供呈固体的标题化合物(94mg)。

方法A：Rt＝1.01min；[M+H]⁺＝621.2。

中间体14

叔丁基4-((4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氧基)哌啶-1-甲酸酯

向在氩气下的4-氯-6-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(848mg，3.03mmol)和(4-(((1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)硼酸(1.068g，3.19mmol)在1-丙醇(20ml)中的悬浮液中添加PdCl₂(PPh₃)₂(106mg，0.152mmol)，然后添加Na₂CO₃的水性溶液(2.0M)(3.03ml，6.07mmol)。将RM在100℃下搅拌过夜并然后用EtOAc稀释。分离有机相，用水和盐水洗涤，并经MgSO₄干燥。蒸发后，将残余物通过硅胶色谱法(用在CHX中的EtOAc(从0至100％)洗脱)纯化，以提供标题化合物(844mg)。

方法A：Rt＝1.29min；[M+H]⁺＝443.3。

中间体15

4-氯-6-碘-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶

在氩气下向在0℃下的4-氯-6-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(10g，35.8mmol)在DMF(120ml)中的溶液中滴加NaH的矿物油溶液(60％)(1.7g，42.5mmol)。将所得的悬浮液在0℃下搅拌30min.，添加2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯化物(7.5ml，42.3mmol)并将RM温热至RT持续超过1h。然后将RM小心地倒入冰水中，并用Et₂O萃取。将合并的有机相用盐水洗涤并蒸发。将残余物用ACN稀释并将所得的混合物过滤以得到呈固体的标题化合物(8.052g)。将滤液浓缩，在冷的MeOH中研磨并过滤以得到第二批呈固体的标题化合物(3.120g)。

方法A：Rt＝1.48min；[M+H]⁺＝410.1。

中间体16

2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-(哌啶-4-基氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：4-(4-氯-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯酚

将4-氯-6-碘-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(中间体15，1333mg，3.254mmol)、Cs₂CO₃(2.651g，11.33mmol)和4-羟基苯基硼酸(840mg，2.67mmol)在1,4-二噁烷(15ml)和水(15ml)的混合物中的溶液用氩气脱气。添加PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂加合物(266mg，0.325mmol)并将RM在100℃下搅拌1.5h。将RM经过滤并将固体用MeOH洗涤。将合并的滤液浓缩并在EtOAc和水之间分配。分离各相，并将有机相用盐水洗涤，经MgSO₄干燥并蒸发以提供呈固体的标题化合物(575mg)。

方法A：Rt＝1.30min；[M+H]⁺＝376。

步骤2：2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-羟基苯基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

将4-(4-氯-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯酚(1635mg，2.044mmol)、K₂CO₃(1119mg，8.1mmol)和2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体2，1811mg，4.2mmol)在1,4-二噁烷(10ml)和水(10ml)的混合物中的溶液用氩气脱气。添加PdCl₂(dppf)(238mg，0.325mmol)并将RM在100℃下搅拌1.5h。将RM经过滤并将固体用MeOH洗涤。将合并的滤液浓缩并在EtOAc和水之间分配。分离各相，将有机相用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，蒸发并通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至7.5％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(1.214g)。

方法A：Rt＝1.35min；[M+H]+＝645.3。

步骤3：叔丁基4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯氧基)哌啶-1-甲酸酯

在氩气下在RT下向2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-羟基苯基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(749mg，0.999mmol)、1-Boc-4-羟基哌啶(221mg，1.099mmol)和三苯基膦(365mg，1.392mmol)在THF(10ml)中的溶液中逐滴添加DEAD在甲苯(0.550ml，1.390mmol)中的溶液(40％)。将所得的RM在RT搅拌过夜。添加另外的1-Boc-4-羟基哌啶(79mg，0.393mmol)，并将RM在RT下搅拌2h并去除溶剂。将残余物通过色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，提供呈固体的标题化合物(421mg)。

方法A：Rt＝1.64min；[M+H]⁺＝828.5。

步骤4：2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-(哌啶-4-基氧基)苯基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

将叔丁基4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯氧基)哌啶-1-甲酸酯(416.6mg，0.503mmol)和TFA(1ml，12.98mmol)在DCM(5ml)中的溶液在RT下搅拌2h，浓缩并通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，提供呈固体TFA盐的标题化合物(101mg)。

方法A：Rt＝0.77min；[M+H]⁺＝598.4。

中间体17

2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-(哌嗪-1-基甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)哌嗪-1-甲酸酯

在RT下，将1-Boc-哌嗪(95mg，0.500mmol)、TEA(0.100ml，0.717mmol)和2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，250mg，0.465mmol)溶解于MeOH(4ml)中。添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.5M)(1ml，0.500mmol)并将所得的混合物在RT下搅拌3天。添加固体NaBH₃CN(32mg，0.509mmol)，将RM在RT下搅拌过夜，去除溶剂并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(370mg)。

方法A：Rt＝0.94min；[M+H]⁺＝697.5。

步骤2：2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-(哌嗪-1-基甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向叔丁基4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)哌嗪-1-甲酸酯(360mg，0.431mmol)在MeOH(2ml)中的溶液中添加在1,4-二噁烷中的HCl溶液(4M)(2ml，8.00mmol)，并将RM在RT下搅拌4h。将RM浓缩并干燥以提供呈固体HCl盐的标题化合物(281mg)。

方法A：Rt＝0.76min；[M+H]⁺＝597.5。

中间体18

在RT下，将1-Boc-哌嗪(170mg，0.912mmol)、TEA(0.300ml，2.152mmol)和2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，400mg，0.760mmol)溶解于MeOH(6ml)中。添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.7M)(1.2ml，0.840mmol)并将所得的混合物在RT下搅拌5h。添加固体NaBH₃CN(50mg，0.796mmol)，将RM在RT下搅拌3天，将溶剂蒸发并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(328mg)。

方法A：Rt＝0.94min；[M+H]⁺＝697.5。

向叔丁基4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)哌嗪-1-甲酸酯(328mg，0.360mmol)在MeOH(2.0ml)中的溶液中添加在1,4-二噁烷中的HCl溶液(4M)(2ml，8.00mmol)，并将RM在RT下搅拌4h。将RM浓缩并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(278mg)。

方法A：Rt＝0.74min；[M+H]⁺＝597.4。

中间体19

叔丁基4-(2-氧代乙氧基)哌啶-1-甲酸酯

步骤1：叔丁基4-(烯丙氧基)哌啶-1-甲酸酯

在RT下，在氩气下，将NaH的矿物油溶液(60％)(964mg，24.10mmol)中的逐滴添加到1-Boc-4-羟基哌啶(1000mg，4.82mmol)在无水THF(45ml)中的溶液中并继续搅拌30分钟。滴加烯丙基溴(0.500ml，5.78mmol)并将RM在RT下搅拌40小时并然后用冰水淬灭。将混合物用EtOAc萃取，将合并的有机相经Na₂SO₄干燥，浓缩并通过硅胶色谱法(用在CHX中的EtOAc(从0至20％)洗脱)纯化，以提供呈无色液体的标题化合物(1130mg)。

方法A：Rt＝1.13min；[M-tBu+H]⁺＝186.1。

步骤2：叔丁基4-(2-氧代乙氧基)哌啶-1-甲酸酯

将叔丁基4-(烯丙氧基)哌啶-1-甲酸酯(1120mg，4.64mmol)在无水DCM(40ml)中的溶液冷却至-78℃并使臭氧鼓泡通过RM持续70min。使RM温热至RT并添加聚合物结合的三苯基膦(5g，16.00mmol)。将RM在RT下搅拌30min.，经过滤并将固体用DCM洗涤。将合并的滤液蒸发至干燥，产生呈无色油状物的标题化合物(1147mg)，将其不经进一步纯化而使用。

中间体20

外消旋-1-(5-(7-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)-2-甲氧基苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

步骤1：外消旋-叔丁基9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-1-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

向外消旋-叔丁基1-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(200mg，0.703mmol)、3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，204mg，0.774mmol)和NMM(0.387ml，3.52mmol)在DMF(3ml)中的溶液中添加HATU(401mg，1.055mmol)，将RM在RT下搅拌2h并然后倒入水中并过滤。将滤液用DCM萃取，将合并的有机相用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，蒸发并通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至20％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(241mg)。

方法A：Rt＝0.77min；[M+H]⁺＝531.3。

步骤2：外消旋-1-(5-(7-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)-2-甲氧基苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

将外消旋-叔丁基9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-1-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(241mg，0.454mmol)和TFA(1.050ml，13.63mmol)在DCM(4ml)中的溶液在RT下搅拌2h，浓缩并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(228mg)。

方法A：Rt＝0.38min；[M+H]⁺＝431.2。

中间体21

1-(2-甲氧基-5-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

步骤1：叔丁基9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

向在氩气下在RT下的叔丁基3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(432mg,1.698mmol)和NMM(0.392ml，3.57mmol)在DMF(4ml)中的溶液中添加3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，471mg，1.783mmol)，然后添加HATU(743mg，1.953mmol)。将RM在RT下搅拌2.5h并添加NaHCO₃的饱和水性溶液。添加EtOAc，并分离两个相。将水相用EtOAc萃取并将合并的有机相用水和盐水洗涤，经MgSO₄干燥并浓缩以提供呈固体的标题化合物(900mg)。

方法A：Rt＝0.91min；[M+H]⁺＝501.4。

步骤2：1-(2-甲氧基-5-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

向叔丁基9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(805mg，1.415mmol)在DCM(19ml)中的溶液中添加TFA(3.27ml，42.5mmol)。将RM在RT下搅拌1h，浓缩并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从5％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(767mg)。

方法A：Rt＝0.40min；[M+H]⁺＝401.3。

中间体22

5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸

步骤1：5-氨基-2-氟-4-甲基苯甲酸

向在RT下的甲基5-氨基-2-氟-4-甲基苯甲酸酯(250mg，1.365mmol)在THF(5.4ml)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂一水合物(128mg，3.02mmol)在水(1.35ml)中的溶液。将所得的RM在RT搅拌过夜。将RM浓缩，用水(5ml)再次稀释，并添加HCl的水性溶液(2M)(1.5ml)直到混合物的pH达到4。将混合物在冰水浴中冷却，过滤，将固体用水和Et₂O洗涤，并将固体干燥以提供呈固体的标题化合物(217mg)。

方法A：Rt＝0.46min；[M+H]⁺＝170.1。

步骤2：5-((2-羧乙基)氨基)-2-氟-4-甲基苯甲酸

将5-氨基-2-氟-4-甲基苯甲酸(216mg，1.277mmol)和丙烯酸(0.354ml，5.11mmol)在甲苯(0.5ml)中的混合物用N₂冲洗并在100℃下搅拌3.5h。将RM浓缩以提供呈固体的标题化合物(352mg)。

方法A：Rt＝0.58min；[M+H]⁺＝242.1。

步骤3：5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸

将5-((2-羧乙基)氨基)-2-氟-4-甲基苯甲酸(350mg，1.277mmol)和脲(460mg，7.66mmol)在AcOH(1ml)中的混合物在120℃下搅拌过夜并冷却至RT。将所得的油状物将用水(1-2ml)稀释并将混合物倒入碎冰中。添加HCl的水性溶液(1M)，并继续搅拌直至所有冰融化。将所得的混合物过滤并将固体用ACN洗涤并干燥以提供呈固体的标题化合物(250mg)。

方法A：Rt＝0.48min；[M+H]⁺＝267.1

中间体23

五氟苯基3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸酯

向250ml圆底烧瓶中添加3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，28g，106mmol)、五氟苯基2,2,2-三氟乙酸酯(36g，127mmol)和DMF(50ml)。在0℃下添加DIPEA(76ml，424mmol)，将RM在RT搅拌2h并用水稀释。将混合物用EtOAc萃取，将合并的有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从10％至30％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(40g)。

方法H：Rt＝1.51min，[M+H]⁺＝432。

中间体24

叔丁基9-(4-(4-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

步骤1：2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙-1-醇

将2-(4-溴苯基)乙-1-醇(60g，300mmol)、BISPIN(84g，330mmol)、KOAc(90g，900mmol)和PdCl₂(dppf)(6.6g，9mmol)在1,4-二噁烷(600ml)中的混合物在N₂下在85℃搅拌16h。将RM冷却至RT，过滤，将滤液浓缩并将残余物通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从0至30％)洗脱)纯化，以提供呈油状物的标题化合物(100g)。

方法J：Rt＝1.87min，[M+NH₄]⁺＝266。

步骤2：4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯乙基甲磺酸酯

将2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙-1-醇(100g，300mmol)和TEA(240g，2400mmol)在DCM(1300ml)中的混合物在0℃下搅拌20min。逐滴添加MsCl(136g，1200mmol)在DCM(200ml)中的溶液，并将RM在RT下搅拌16h并添加水。分离各相，将有机相经Na₂SO₄干燥，浓缩并将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的EtOAc(从0至50％)洗脱)纯化，以提供呈油状物的标题化合物(87g)。

方法E：Rt＝1.92min，[M+H]⁺＝327。

步骤3：叔丁基9-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

将叔丁基3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(34g，133mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯乙基甲磺酸酯(86g，172mmol)、K₂CO₃(47g，345mmol)和KI(2.3g，13.8mmol)在ACN(1000ml)中的混合物在60℃下搅拌16h。将RM过滤，将滤液浓缩并将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至10％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(49g)。

方法I：Rt＝1.47min，[M+H]⁺＝485。

步骤4：叔丁基9-(4-(4-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

将叔丁基9-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(38g，79mmol)、4-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(中间体7，37g，88mmol)、K₂CO₃(22g，160mmol)和PdCl₂(dppf)(5.8g，8mmol)在1,4-二噁烷和水(5:1)的混合物(480ml)中的混合物在N₂下在80℃搅拌16h。将RM倒入EtOAc，分离有机相，并用水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩，并将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至10％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(34g)。

方法I：Rt＝1.99min，[M+H]⁺＝650。

最终化合物的合成

化合物1

外消旋-N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-7-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向外消旋-2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-((7-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体4，100mg，0.108mmol)和3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，31.5mg，0.119mmol)的混合物中添加HATU(61.8mg，0.163mmol)和NMM(0.060ml，0.542mmol)。将RM在RT下搅拌2h，将溶液倒入水中，过滤，并将固体干燥，并通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从10％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物。使固体溶解于MeOH，通过SCX筒过滤并将合并的滤液浓缩以提供标题化合物(19.6mg)。

方法B：Rt＝3.41min；[M+H]⁺＝941.6。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.53(s,1H),9.92(s,1H),9.62(d,J＝3.1Hz,1H),8.85(s,1H),7.99(s,2H),7.8-7.6(m,2H),7.50-7.25(m,6H),7.25-7.05(m,2H),6.81(s,1H),3.86(s,4H),3.75-3.6(m,6H),3.29(s,3H),2.69(t,J＝6.7Hz,4H),2.19(s,4H),2.1-1.6(m,2H),1.6-1.4(m,11H),1.4-1.25(m,3H)。

化合物2和化合物3：

(R)-N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-7-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺和

(S)-N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-7-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

使用HPLC(在Chiralpak ID柱(5μm，250x 20mm)上，用含有DEA的庚烷、DCM和MeOH(40:35:25)的混合物(0.05％)洗脱，流速为10ml/min)(方法M)，对外消旋-N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-7-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(7.7mg，7.9μmol)进行手性分离提供作为单一对映异构体的呈下列顺序的标题化合物：

第一洗脱对映异构体：1.2mg

方法K：Rt＝29.5min

方法B：Rt＝3.44min；[M+H]⁺＝941.5

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)与上文报道的针对外消旋体的NMR一致

第二洗脱对映异构体：2.0mg

方法K：Rt＝37.5min

方法B：Rt＝3.46min；[M+H]⁺＝941.4

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)与上文报道的针对外消旋体的NMR一致

化合物4：

N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-乙氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-乙氧基苯甲酸

3-氨基-4-乙氧基苯甲酸(2.7g，14.90mmol)悬浮于丙烯酸(4.09ml，59.6mmol)中并将RM在110℃下搅拌1h。添加脲(5.37g，89mmol)和AcOH(18ml)并将RM在130℃下搅拌2h。将RM用水淬灭，用HCl(37％)的水性浓缩溶液酸化并用EtOAc萃取。将有机相合并且蒸发。添加水，将混合物过滤并将固体用水和EtOAc洗涤，产生呈固体的标题化合物(1.1g)。

方法A：Rt＝0.56min；[M+H]⁺＝279.1。

步骤2：N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-乙氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

将TBTU(38.4mg，0.119mmol)添加至3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-乙氧基苯甲酸(33.2mg，0.119mmol)在DMF(0.5ml)中的溶液中，然后添加2,4,6-可力丁(0.2ml，1.508mmol)。将RM在RT下搅拌15min。添加N-(3-(6-(4-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体6，60mg，0.060mmol)并将RM在RT下搅拌3天。将RM用DMF(2ml)稀释，并通过HPLC(在SunFire C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(线性梯度从5％至100％)洗脱)纯化(方法L)，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(32.8mg)。

方法B：Rt＝3.74min；[M+H]⁺＝925.3。

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.91(s,1H),8.06(d,J＝8.1Hz,2H),7.90(t,J＝7.9Hz,1H),7.74-7.68(m,1H),7.66(d,J＝8.1Hz,2H),7.52-7.37(m,4H),7.25(dd,J＝8.5,2.7Hz,1H),7.19(d,J＝8.5Hz,1H),7.00(s,1H),4.41(s,2H),4.19(q,J＝7.0Hz,2H),3.8-3.5(m,6H),3.45-3.15(m,4H),2.82(t,J＝6.7Hz,2H),2.23(s,3H),2.07(m,2H),1.9-1.4(m,6H),1.58(s,6H),1.45(t,J＝7.0Hz,3H)。

化合物5：

N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基9-(4-溴苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

向250ml圆底烧瓶中添加在ACN(50ml)中的叔丁基3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(5g，19.7mmol)、K₂CO₃(4.07g，29.5mmol)和1-溴-4-(2-溴乙基)苯(5.2g，17.6mmol)。在N₂下，将RM在RT下搅拌16h。将RM浓缩，用水稀释并用DCM萃取。将合并的有机相浓缩并通过硅胶色谱法(用MeOH的DCM溶液(1:100)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(4.8g)。

方法F：Rt＝1.91min；MS m/z[M+H]⁺438.1。

步骤2：叔丁基9-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

向250ml圆底烧瓶中添加叔丁基9-(4-溴苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(4.8g，11mmol)、BISPIN(3.4g，13.2mmol)、KOAc(2.2g，22mmol)、PdCl₂(dppf)(0.8g，1.1mmol)和DMSO(60ml)。将RM在80℃下搅拌16h并然后用水稀释。将混合物用EtOAc萃取，并将合并的有机相用水和盐水洗涤，浓缩并通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从0至100％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(4.0g)。

方法E：Rt＝1.67min；MS m/z[M+H]⁺485。

步骤3：叔丁基9-(4-(4-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

向25ml圆底烧瓶中添加叔丁基9-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(889mg，1.83mmol)、4-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(中间体7，700mg，1.67mmol)、Na₂CO₃(354mg，3.34mmol)和PdCl₂(dppf)(124mg，0.17mmol)。添加ACN(10ml)和水(2ml)并在N₂下将RM在80℃下搅拌16h。将RM用EtOAc稀释，将混合物过滤，将滤液浓缩并通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从0至100％)洗脱)纯化，产生呈油状物的标题化合物(600mg)。

方法F：Rt＝1.85min；MS m/z[M+H]⁺650。

步骤4：叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

向25ml圆底烧瓶中添加叔丁基9-(4-(4-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(400mg，0.62mmol)、2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体2，265mg，0.62mmol)、Na₂CO₃(130mg，1.23mmol)和PdCl₂(dppf)(44mg，0.06mmol)。添加ACN(10ml)和水(2ml)并在N₂下将RM在80℃下搅拌16h。将RM用EtOAc稀释，将混合物过滤，将滤液浓缩并通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从0至100％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(200mg)。

方法E：Rt＝1.74min；MS m/z[M+H]⁺919。

步骤5：叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

向10ml圆底烧瓶中添加叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(200mg，0.22mmol)和DMSO(2ml)。在RT下添加NaOH(35mg，0.87mmol)在水(1ml)中的溶液，将RM在RT下搅拌1h并用EtOAc稀释。分离各相并将有机相用水和盐水洗涤，干燥并浓缩，产生呈固体的标题化合物(170mg)。

方法E：Rt＝1.64min；MS m/z[M+H]⁺779。

步骤6：N-(3-(6-(4-(2-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向10ml圆底烧瓶中添加叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(160mg，0.21mmol)、EtOH(2ml)和DCM(0.5ml)。在0℃下添加HCl在1,4-二噁烷(1.5ml，6mmol)中的溶液(4M)。使RM温热至RT并继续搅拌2h。将RM浓缩，产生呈固体HCl盐的标题化合物(130mg)。

方法E：Rt＝1.45min；MS m/z[M+H]⁺679。

步骤7：N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向10ml圆底烧瓶中添加在DMF(2ml)中的N-(3-(6-(4-(2-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺盐酸盐(100mg，0.13mmol)、3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酸(中间体8，33mg，0.13mmol)、HATU(59mg，0.16mmol)和DIPEA(34mg，0.27mmol)。将RM在RT下搅拌2h并将混合物通过制备型HPLC(在XBridge C18柱上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(40mg)。

方法G：Rt＝1.92min；MS m/z[M+H]⁺909。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.72(br.s,1H),10.37(br.s,1H),9.93(br.s,1H),8.80(s,1H),7.89(d,J＝8.1Hz,2H),7.73(t,J＝7.9Hz,1H),7.7-7.6(m,1H),7.5-7.4(m,2H),7.4-7.3(m,4H),7.3-7.2(m,2H),6.77(s,1H),5.4-5.3(m,1H),3.9-3.8(m,1H),3.6-3.5(m,3H),2.9-2.7(m,4H),2.6-2.5(m,2H),2.4-2.3(m,4H),2.21(s,3H),2.17(s,3H),1.7-1.3(m,16H)。

化合物6：

N-(3-(6-(4-(((1-(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-(4-溴苄基氧基)哌啶-1-甲酸酯

在5℃下，向在5℃下的矿物油(1.17g，29.25mmol)中的NaH(60％)在DMF(30ml)中的悬浮液中添加叔丁基4-羟基哌啶-1-甲酸酯(4.03g，20.0mmol)在DMF(15ml)中的溶液。将RM在5℃下搅拌1h，然后在5℃下添加1-溴-4-(溴甲基)苯(7.0g，28.0mmol)。使RM温热至RT并继续搅拌18h。添加冰冷水(250ml)，将混合物用EtOAc和石油醚(2:1)的混合物萃取，将合并的有机相在MgSO₄上干燥，浓缩并通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从0至20％)洗脱)纯化，产生呈油状物的标题化合物(6.1g)。

方法H：Rt＝2.301min；[M-100+H]⁺＝270。

步骤2：叔丁基4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基氧基)哌啶-1-甲酸酯

向置于惰性气氛下的叔丁基-4-(4-溴苄基氧基)哌啶-1-甲酸酯(2.0g，5.4mmol)、BISPIN(2.7g，10.8mmol)、KOAc(1.59g，16.2mmol)和PdCl₂(dppf)(630mg，0.86mmol)的混合物中添加1,4-二噁烷(45ml)并将RM在N₂下在85℃搅拌18h。将RM蒸发并通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从0％至20％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(2.1g)。

方法F：Rt＝1.698min，[M-100+H]⁺＝318。

步骤3：4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基氧基)哌啶

向在5℃下的叔丁基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基氧基)哌啶-1-甲酸酯(2.1g，5.0mmol)在DCM(10ml)中的溶液中缓慢添加HCl在1,4-二噁烷(5ml，20mmol)中的溶液(4M)。使RM温热至30℃并继续搅拌2h。将RM浓缩，将残余物在石油醚和TBME(2:1)的混合物中研磨，过滤并将固体干燥以提供呈固体HCl盐的标题化合物(1.2g)。

方法E：Rt＝1.743min，[M+H]⁺＝318.2。

步骤4：叔丁基4-(2-(甲基磺酰基氧基)乙基)哌啶-1-甲酸酯向叔丁基-4-(2-羟基乙基)哌啶-1-甲酸酯(2g，8.72mmol)和TEA(1.77g，17.44mmol)在DCM(50ml)中的混合物中滴加甲磺酰氯(1.2g，10.47mmol)并将RM在RT下搅拌16h。将RM用DCM(100ml)稀释，用水和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩以提供呈固体的标题化合物(2.6g)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ4.24(t,J＝6.3Hz,2H),3.91(d,J＝9.9Hz,2H),3.17(s,3H),2.68(s,2H),1.71-1.48(m,5H),1.39(s,9H),1.07-0.94(m,2H)。

步骤5：叔丁基4-(2-(4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基氧基)哌啶-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸酯

向在惰性气氛下的4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基氧基)哌啶(700mg，1.98mmol)、叔丁基-4-(2-(甲基磺酰基氧基)乙基)哌啶-1-甲酸酯(913mg，2.97mmol)、K₂CO₃(821mg，5.94mmol)和NaI(445mg，1.5mmol)的混合物中添加ACN(20ml)并将RM在N₂下在RT搅拌16h。然后将RM用EtOAc(100ml)稀释，过滤并将滤液浓缩以提供呈固体的标题化合物(1g)。

方法I：Rt＝1.527min；[M+H]⁺＝529。

步骤6：叔丁基4-(2-(4-(4-(4-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基氧基)哌啶-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸酯

向在惰性气氛下的叔丁基-4-(2-(4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基氧基)哌啶-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸酯(472mg，0.89mmol)、4-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(中间体7，250mg，0.60mmol)、Na₂CO₃(126mg，1.19mmol)和PdCl₂(dppf)(49mg，0.06mmol)的混合物中添加ACN(5ml)和水(1ml)并将RM在80℃下搅拌16h。将RM用EtOAc(100ml)稀释，过滤，将滤液浓缩并通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至15％)洗脱)纯化，产生呈油状物的标题化合物(500mg)。

方法I：Rt＝1.553min；[M+H]⁺＝694。

步骤7：叔丁基4-(2-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基氧基)哌啶-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸酯

向在惰性气氛下的2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体2，149mg，1.2mmol)、叔丁基-4-(2-(4-(4-(4-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基氧基)哌啶-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸酯(200mg，1mmol)、Na₂CO₃(92mg，0.86mmol)和PdCl₂(dppf)(24mg，0.03mmol)的混合物中添加ACN(5ml)和水(1ml)并将RM在N₂下在80℃搅拌16h。然后将RM用EtOAc(100ml)稀释，过滤，将滤液浓缩并通过硅胶色谱法(用在DCM中的甲醇(从0至15％)洗脱)纯化，产生呈油状物的标题化合物(260mg)。

方法G：Rt＝2.875min，[M+H]⁺＝694。

步骤8：叔丁基4-(2-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基氧基)哌啶-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸酯

在RT下，向叔丁基-4-(2-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基氧基)哌啶-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸酯(200mg，0.21mmol)在DMSO(2ml)中的溶液中缓慢添加NaOH(33mg，0.83mmol)在水(1ml)中的溶液。将RM在RT下搅拌2h并将混合物通过反相HPLC(在XBridgeC18柱上，用在碳酸氢铵的水性溶液(0.1％)中的ACN(从5％至95％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(150mg)。

方法J：Rt＝2.419min，[M+H]⁺＝823。

步骤9：2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((1-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

将叔丁基4-(2-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基氧基)哌啶-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸酯(150mg，0.16mmol)在DCM(4ml)中的溶液在0℃下冷却。缓慢添加HCl在1,4-二噁烷(1ml，6mmol)中的溶液(6M)。使RM温热至RT并继续搅拌2h。将RM浓缩以提供呈固体HCl盐的标题化合物(115mg)。

方法I：Rt＝1.142min；[M+H]⁺＝723。

步骤10：N-(3-(6-(4-(((1-(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺。

将2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((1-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(80mg，0.11mmol)、3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酸(中间体9，31mg，0.12mmol)、HATU(50mg，0.13mmol)、DIPEA(29mg，0.22mmol)和DMF(2ml)的混合物在RT下搅拌2h。将混合物通过反相HPLC(在XBridge C18柱(21.2x 250mm，10μm)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(0.1％)中的ACN(从5％至95％)洗脱)纯化，提供呈固体的标题化合物(53mg)。

方法D：Rt＝1.319min，[M+H]⁺＝957。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.77(s,1H),9.94(s,1H),8.85(s,1H),7.96(d,J＝8.2Hz,2H),7.73(t,J＝8.0Hz,1H),7.67-7.65(dd,J＝9.2Hz,1H),7.49(dd,J＝7.6Hz,1H),7.44-7.36(m,6H),7.24(dd,J＝8.3,2.6Hz,1H),6.84(s,1H),5.30(s,1H),4.53(s,2H),3.75(t,J＝6.6Hz,2H),3.41-3.36(m,2H),2.99-2.93(m,1H),2.77-2.61(m,4H),2.49-2.35(m,2H),2.28-2.24(m,2H),2.18(s,3H),2.04-1.93(m,3H),1.92-1.79(m,2H),1.88-1.85(m,2H),1.75-1.46(m,3H),1.45(s,6H),1.39-1.31(m,2H),1.13-1.04(m,2H)。

化合物7：

N-(3-(6-(4-((4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-(哌嗪-1-基甲基)哌啶-1-甲酸酯

向100ml圆底烧瓶中添加叔丁基4-(溴甲基)哌啶-1-甲酸酯(1.0g，3.59mmol)、哌嗪(3.1g，31.95mmol)和ACN(20ml)。将RM在80℃下搅拌16h。将混合物浓缩并将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至10％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(400mg)。

方法G：Rt＝1.56min；MS m/z[M+H]⁺284。

步骤2：叔丁基4-((4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)哌啶-1-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯

向25ml圆底烧瓶中添加叔丁基4-(哌嗪-1-基甲基)哌啶-1-甲酸酯(400mg，1.41mmol)、K₂CO₃(585mg，4.23mmol)和DMSO(5ml)并将RM在RT下搅拌30min。添加在THF中的ZnCl₂溶液(1.0M)(1.55ml，1.55mmol)以及2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，743mg，1.41mmol)。将RM在RT下搅拌30min.，添加固体NaBH₃CN(266mg，4.23mmol)和MeOH(5ml)并将RM在RT下搅拌16h。将混合物浓缩并将残余物通过色谱法(在Agela C18柱(球形20-35μm，120g)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(500mg)。

方法G：Rt＝2.44min；MS m/z[M+H]⁺794。

步骤3：2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺盐酸盐

向25ml圆底烧瓶中添加在DCM(3ml)中的叔丁基4-((4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(150mg，0.19mmol)。缓慢添加HCl在1,4-二噁烷(3.0ml，12.0mmol)中的溶液(4M)。将RM在RT下搅拌3h，浓缩并将残余物无需进一步纯化即可直接用于下一步。获得呈固体HCl盐的标题化合物(138mg)。

方法G：Rt＝1.98min；MS m/z[M+H]⁺694。

步骤4：N-(3-(6-(4-((4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向25ml圆底烧瓶中添加2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺盐酸盐(138mg，0.19mmol)、3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，55mg，0.21mmol)、DIPEA(123mg，0.95mmol)和DMF(3ml)。然后添加HATU(86mg，0.23mmol)并将RM在RT下搅拌2h。将混合物浓缩并将残余物通过制备型HPLC(在XBridge C18柱(21.2*250mm，10μm)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(65mg)。

方法J：Rt＝1.76min；MS m/z[M+H]⁺940。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.77(s,1H),10.34(s,1H),9.96(s,1H),8.84(s,1H),7.94(d,J＝8.2Hz,2H),7.81-7.58(m,2H),7.46-7.33(m,5H),7.31(d,J＝2.1Hz,1H),7.24(dd,J＝8.8,2.7Hz,1H),7.15(dd,J＝8.6Hz,2.6Hz,1H),6.83(s,1H),5.31(s,1H),3.84(s,3H),3.59(t,J＝6.6Hz,2H),3.49(s,2H),3.20-2.70(m,4H),2.68(m,2H),2.48-2.36(m,8H),2.22-2.10(m,5H),1.82-1.61(m,3H),1.45(s,6H),1.04(m,2H)。

化合物8：

N-(3-(6-(4-((4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-(1-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)哌啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸酯

向100ml圆底烧瓶中添加2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，4.35g，8.26mmol)和叔丁基4-(哌啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸酯(中间体10，2.35g，9.09mmol)和DMSO(30ml)。添加在THF中的ZnCl₂溶液(1M)(9.1ml，9.1mmol)并将混合物在RT下搅拌45min。添加固体NaBH₃CN(1.56g，24.8mmol)并将混合物在RT下搅拌30分钟。添加MeOH(20ml)，并继续搅拌16h。将混合物浓缩并将残余物通过色谱法(在Agela C18柱(球形20-35μm，120g)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(4.0g)。

方法E：Rt＝1.58min；MS m/z[M+H]⁺795。

步骤2：2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((4-(哌啶-4-基氧基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向50ml圆底烧瓶中添加叔丁基4-(1-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)哌啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸酯(4.5g，5.66mmol)、1,4-二噁烷(20ml)和MeOH(2ml)。缓慢添加HCl在1,4-二噁烷(4ml，16mmol)中的溶液(4M)。将混合物在RT下搅拌1h并然后浓缩以获得呈固体HCl盐的标题化合物(5.0g)。此材料无需进一步纯化即可用于下一步。

方法F：Rt＝1.27min；MS m/z[M+H]⁺695。

步骤3：N-(3-(6-(4-((4-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基氧基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向100ml圆底烧瓶中添加3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，1.6g，6.23mmol)、DMF(25ml)和HATU(2.58g，6.79mmol)。将RM在RT下搅拌0.5h。添加2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((4-(哌啶-4-基氧基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺盐酸盐(5g，6.84mmol)和DIPEA(2.19g，16.98mmol)，将混合物在RT下搅拌3h并将混合物通过色谱法(在Agela C18柱(球形20-35μm，120g)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(4.17g)。

方法J：Rt＝1.78min；MS m/z[M+H]⁺941。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.77(s,1H),10.34(s,1H),9.95(s,1H),8.85(s,1H),7.94(d,J＝7.5Hz,2H),7.73(t,J＝7.9Hz,1H),7.66(d,J＝9.1Hz,1H),7.47-7.31(m,6H),7.24(dd,J＝8.8,2.7Hz,1H),7.15(d,J＝8.6Hz,1H),6.83(s,1H),5.31(s,1H),3.84(s,3H),3.74-3.38(m,8H),3.20(t,J＝9.7Hz,2H),2.68-2.57(m,4H),2.18(s,3H),2.18-2.05(m,2H),1.84-1.74(m,4H),1.49-1.40(m,10H)。

化合物9：

N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向N-(3-(6-(4-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体11，50mg，0.068mmol)、3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，17.91mg，0.068mmol)和HBTU(30.8mg，0.081mmol)在DMF(3ml)中的溶液中添加DIPEA(0.071ml，0.407mmol)。将RM在氩气下在RT下搅拌2h，添加水并将所得的悬浮液过滤，将固体用水洗涤，干燥并通过SFC(在Princeton PPU柱(250x 30mm，100A，5μm)上，用在CO₂中的MeOH(从30％至45％)洗脱)纯化，以提供标题化合物(15mg)。

方法B：Rt＝3.67min，[M+H]+＝911.6。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.74(s,1H),10.31(s,1H),9.93(d,J＝2.6Hz,1H),8.85(s,1H),7.94(d,J＝8.2Hz,2H),7.74(t,J＝7.9Hz,1H),7.66(m,1H),7.47-7.34(m,5H),7.32(d,J＝2.1Hz,1H),7.24(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),7.15(d,J＝8.6Hz,1H),6.82(s,1H),5.29(s,1H),3.85(s,3H),3.60(t,J＝6.6Hz,2H),3.55-3.25(m,6H),2.68(t,J＝6.4Hz,2H),2.42-2.28(m,4H),2.18(s,3H),1.6-1.35(m,8H),1.46(s,6H)。

化合物10：

N-(3-(6-(4-(2-(4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-((1-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-甲酸酯

向用N₂冲洗的在RT下的4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基甲磺酸酯(中间体13，334mg，0.538mmol)和叔丁基4-(哌啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸酯(中间体10，306mg，1.076mmol)在ACN和DMF(4:1)的混合物(13.5ml)中的混合物中添加K₂CO₃(446mg，3.23mmol)。将所得的RM在50℃搅拌3天。将RM在冰水浴中在搅拌下冷却，并缓慢地用TFA酸化直到混合物达到pH为3和4之间。使所得的混合物温热至RT，部分浓缩，在上吸附并通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN洗脱)纯化，以提供呈TFA盐的标题化合物(225mg)。

方法A：Rt＝0.99min；[M+H]⁺＝809.6。

步骤2：2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-(2-(4-(哌啶-4-基氧基)哌啶-1-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向在RT下的叔丁基4-((1-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-甲酸酯(223mg，0.194mmol)在DCM(3.7ml)中的溶液中添加TFA(0.447ml，5.81mmol)。将所得的溶液在RT下搅拌1h，用DCM和ACN的混合物稀释，浓缩并干燥以提供树脂。将树脂再次溶解于ACN和水的混合物中并冷冻干燥以提供呈固体TFA盐的标题化合物(225mg)。

方法A：Rt＝0.67min；[M+H]⁺＝709.5。

步骤3：N-(3-(6-(4-(2-(4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向用N₂冲洗的2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-(2-(4-(哌啶-4-基氧基)哌啶-1-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(120mg，0.114mmol)、3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酸(中间体8，29.8mg，0.120mmol)和HBTU(46.4mg，0.120mmol)在干燥的DMF(2.25ml)中的混合物中缓慢添加DIPEA(140μl，0.799mmol)。所得的溶液在RT下搅拌1.5h，然后用ACN稀释，在上吸附，并通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从10％至100％)洗脱)纯化，以在通过PL-HCO₃ MP SPE筒过滤包含纯目标化合物的级分并冷冻干燥后，提供呈固体的标题化合物(66mg)。

方法B：Rt＝3.85min；[M+H]⁺＝939.6。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.70(s,1H),10.36(s,1H),9.91(s,1H),8.76(s,1H),7.89(d,J＝8.07Hz,2H),7.73(t,J＝7.89Hz,1H),7.63(d,J＝9.05Hz,1H),7.37-7.46(m,2H),7.31-7.36(m,2H),7.16-7.31(m,4H),6.73(s,1H),5.29(s,1H),3.96(m,1H),3.81(m,1H),3.68(m,1H),3.38-3.59(m,3H),3.20(m,2H),2.69-2.83(m,6H),2.52-2.55(m,2H),2.21(s,3H),2.17(s,3H),2.11(t,J＝10.15Hz,2H),1.62-1.94(m,4H),1.32-1.51(m,10H)。

化合物11：

N-(3-(6-(4-(3-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)丙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：3-(4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)丙-1-醇

在RT下将4-(3-羟基丙基)苯硼酸(2.511g，13.95mmol)和4-氯-6-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(3.44g，12.31mmol)溶解于1-丙醇(100ml)并添加Na₂CO₃的水性溶液(2M)(13.54ml，27.1mmol)。使氩气鼓泡通过混合物5min并添加PdCl₂(PPh₃)₂(0.432g，0.615mmol)。将RM在105℃下搅拌22h并然后冷却至RT过夜。去除溶剂并将残余物在水和THF(3:2)的混合物中超声处理。将混合物过滤，将固体用水洗涤并干燥以提供呈固体的标题化合物(2.4g)。

方法A：Rt＝0.86min；[M+H]⁺＝288.2。

步骤2：2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-(3-羟基丙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

在RT下将3-(4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)丙-1-醇(1.5g，4.85mmol)和2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体2，2.1g，4.87mmol)悬浮于1-丙醇(36ml)并添加Na₂CO₃的水性溶液(2M)(5.1ml，10.20mmol)。使氩气鼓泡通过混合物1min并添加PdCl₂(PPh₃)₂(0.180g，0.256mmol)。使用微波辐射将RM在140℃下加热20min.。将RM用EtOAc稀释并经过滤。将滤液蒸发，用THF和H₂O(1:1)的混合物再次稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机相经MgSO₄干燥并蒸发。将残余物在DCM和MeOH的混合物中研磨过滤，并将固体用DCM洗涤并干燥以提供呈固体的标题化合物(1.696g)。

方法A：Rt＝0.95min；[M+H]⁺＝557.4。

步骤3：3-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)丙基甲磺酸酯

在氩气下在RT下将2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-(3-羟基丙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(1032mg，1.539mmol)溶解于干燥的THF(16ml)并添加TEA(0.858ml，6.16mmol)。将混合物冷却至0℃，添加Ms₂O(536mg，3.08mmol)并将RM在0℃下搅拌40min。将RM用冰水淬灭，用DCM萃取，将合并的有机相经MgSO₄干燥并浓缩以提供呈固体的标题化合物(1.33g)。

方法A：Rt＝1.03min；[M+H]⁺＝635.3。

步骤4：叔丁基9-(3-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)丙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

在氩气下在RT下将3-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)丙基甲磺酸酯(0.977g，1.539mmol)溶解于干燥的DMF(4ml)和ACN(16ml)的混合物中。添加K₂CO₃(1.063g，7.70mmol)和3,9-二氮杂-螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁基酯(0.783g，3.08mmol)并将RM在60℃下搅拌13.5h。将混合物蒸发至干燥，将所得的残余物吸收在EtOAc和水的混合物中，并分离各相。将水相用EtOAc萃取并将合并的有机相用溴化锂的水性溶液、盐水和水(1:1)的混合物、和盐水洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩并干燥以提供呈固体的标题化合物(1.76g)。

方法A：Rt＝1.00min；[M+H]⁺＝793.5。

步骤5：N-(3-(6-(4-(3-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)丙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

将叔丁基9-(3-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)丙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(1.545g，1.539mmol)在DCM(10ml)和TFA(4ml，51.9mmol)中的溶液在RT下搅拌30min，将混合物蒸发并在HM-N上吸附，并通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从5％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(1.337g)。

方法A：Rt＝0.75min；[M+H]⁺＝693.5。

步骤6：N-(3-(6-(4-(3-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)丙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

在氩气下在RT下将N-(3-(6-(4-(3-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)丙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺三氟乙酸酯(200mg，0.193mmol)溶解于干燥的DMF(3ml)中，添加DIPEA(0.270ml，1.546mmol)和3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，58mg，0.220mmol)，然后添加HBTU(86mg，0.227mmol)。将RM在RT下搅拌20min，用ACN稀释，在HM-N上吸附并干燥，并通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从5％至100％)洗脱)纯化，以提供呈TFA盐的化合物。经PL-HCO3 MPSPE筒过滤然后冷冻干燥提供呈固体TFA盐的标题化合物(100mg)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.76(s,1H),10.33(s,1H),9.95(s,1H),9.0-9.25(m,1H),8.85(s,1H),7.95(d,J＝8.1Hz,2H),7.73(t,J＝7.9Hz,1H),7.65(d,J＝10.0Hz,1H),7.48-7.28(m,6H),7.25-7.21(m,1H),7.16(d,J＝8.6Hz,1H),6.84(s,1H),5.30(s,1H),3.84(s,3H),3.6-3.3(m,7H),3.2-2.9(m,4H),2.75-2.6(m,4H),2.17(s,3H),2.1-1.9(m,2H),1.9-1.8(m,2H),1.7-1.25(m,12H)。

方法B：Rt＝3.91min[M+H]⁺＝939.7。

化合物12：

N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向250ml圆底烧瓶中添加在ACN(50ml)中的叔丁基3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(5g，19.7mmol)、K₂CO₃(4.07g，29.5mmol)和1-溴-4-(2-溴乙基)苯(5.2g，17.6mmol)。将RM在N₂下在RT搅拌16h，浓缩并在水和DCM的混合物中再次稀释。分离各相，将水相用DCM萃取，将合并的有机相浓缩并通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(MeOH:DCM，1:100)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(4.8g)。

方法F：Rt＝1.91min；MS m/z[M+H]⁺438.1。

向250ml圆底烧瓶中添加叔丁基9-(4-溴苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(4.8g，11mmol)、BISPIN(3.4g，13.2mmol)、KOAc(2.2g，22mmol)、PdCl₂(dppf)(0.8g，1.1mmol)和DMSO(60ml)。将RM在80℃下搅拌16h，用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机相用水和盐水洗涤，浓缩并通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从0至100％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(4.0g)。

方法E：Rt＝1.67min；MS m/z[M+H]⁺485。

向25ml圆底烧瓶中添加叔丁基9-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(889mg，1.83mmol)、4-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(中间体7，700mg，1.67mmol)、Na₂CO₃(354mg，3.34mmol)和PdCl₂(dppf)(124mg，0.17mmol)。添加ACN(10ml)和水(2ml)并在N₂下将RM在80℃下搅拌16h。将RM用EtOAc稀释，过滤，将滤液浓缩并通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从0至100％)洗脱)纯化，产生呈油状物的标题化合物(600mg)。

方法F：Rt＝1.85min；MS m/z[M+H]⁺650。

向25ml圆底烧瓶中添加叔丁基9-(4-(4-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(400mg，0.62mmol)、2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体2，265mg，0.62mmol)、Na₂CO₃(130mg，1.23mmol)和PdCl₂(dppf)(44mg，0.06mmol)。添加ACN(10ml)和水(2ml)并在N₂下将RM在80℃下搅拌16h。将RM用EtOAc稀释，过滤，将滤液浓缩并通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从0至100％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(200mg)。

方法E：Rt＝1.74min；MS m/z[M+H]⁺919。

向10ml圆底烧瓶中添加叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(200mg，0.22mmol)和DMSO(2ml)。在RT下添加NaOH(35mg，0.87mmol)在水(1ml)中的溶液，将RM搅拌1h并然后用EtOAc稀释。分离各相并将有机相用水和盐水洗涤，干燥并浓缩，产生呈固体的标题化合物(170mg)。

方法E：Rt＝1.64min；MS m/z[M+H]⁺779。

向10ml圆底烧瓶中添加叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(160mg，0.21mmol)、EtOH(2ml)和DCM(0.5ml)。在0℃下，添加HCl(6N)在1,4-二噁烷(1.5ml，6mmol)中的溶液，使RM温热至RT并继续搅拌2h。将RM浓缩以提供呈固体HCl盐的标题化合物(130mg)。

方法E：Rt＝1.45min；MS m/z[M+H]⁺679。

步骤7：3-(2-羧乙基氨基)苯甲酸

向500ml圆底烧瓶中添加3-氨基苯甲酸(10g，72.92mmol)、丙烯酸(6.83g，94.79mmol)和甲苯(200ml)并将RM在120℃下搅拌48h，使其温热至RT并过滤。将固体用甲苯洗涤并干燥以获得呈固体的标题化合物(14.0g)。

方法D：Rt＝1.19min；MS m/z[M+H]⁺210。

步骤8：3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸

向50ml圆底烧瓶中添加3-(2-羧乙基氨基)苯甲酸(2g，9.56mmol)、AcOH(25ml)和脲(1.72g，28.68mmol)并将RM在120℃下搅拌16h。将溶剂蒸发，添加水(20ml)，将混合物过滤并将固体用水洗涤并干燥以获得固体。将固体再次溶解于DMF中，将混合物在RT下搅拌2h，过滤并将固体用水洗涤并干燥以提供呈固体的标题化合物(800mg)。

方法D：Rt＝1.13min；MS m/z[M+H]⁺235。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ13.12(s,1H),10.46(s,1H),7.89(s,1H),7.80(d,J＝7.6Hz,1H),7.59(d,J＝8.6Hz,1H),7.53(t,J＝7.8Hz,1H),3.84(t,J＝6.6Hz,2H),2.73(t,J＝6.6Hz,2H)。

步骤9：N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

在5℃下，向含有N-(3-(6-(4-(2-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(137mg，0.182mmol)和3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸(43mg，0.182mmol)在DMF(2.5ml)溶液的25ml圆底烧瓶中添加DIPEA(141mg，1.09mmol)和HATU(73mg，0.191mmol)。将RM在25℃下搅拌1h，过滤，将滤液浓缩并通过制备型HPLC(在XBridge C18柱(250x 21.2mm，10μm)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(50mg)。

方法G：Rt＝2.003min，MS m/z[M+H]⁺895。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.72(s,1H),10.42(s,1H),9.94(s,1H),8.83(s,1H),7.89(d,J＝8.1Hz,2H),7.73(t,J＝7.6Hz,1H),7.65(d,J＝10.7Hz,1H),7.50-7.35(m,5H),7.31(d,J＝8.2Hz,2H),7.25-7.20(m,2H),6.79(s,1H),5.30(s,1H),3.82(t,J＝6.7Hz,2H),3.65-3.50(m,2H),2.76(t,J＝7.6Hz,2H),2.71(t,J＝6.6Hz,2H),2.60-2.50(m,2H),2.45-2.35(m,6H),2.17(s,3H),1.55-1.45(m,6H),1.45(s,6H),1.40-1.30(m,2H)。

化合物13：

N-(3-(6-(4-(((1-(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-((4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氧基)哌啶-1-甲酸酯

向叔丁基4-((4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氧基)哌啶-1-甲酸酯(中间体14，560mg，1.264mmol)、2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体2，709mg，1.0644mmol)和Na₂CO₃的水性溶液(2M)(1.26ml，2.53mmol)在1-丙醇(10ml)中的混合物中添加PdCl₂(PPh₃)₂(89mg，0.126mmol)。将所得的RM使用微波辐射加热至140℃，持续15min。将混合物在上过滤，将滤液浓缩并通过色谱法(在二氧化硅上，用在CHX中的EtOAc(从0至95％)洗脱)纯化，提供呈固体的标题化合物(526mg)。

方法A：Rt＝1.29min；[M+H]⁺＝712.5。

步骤2：2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((哌啶-4-基氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

将叔丁基4-((4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氧基)哌啶-1-甲酸酯(526mg，0.739mmol)溶解于干燥的DCM(4ml)中，添加TFA(1.708ml，22.17mmol)，并所得的混合物在RT下搅拌2h。将RM蒸发至干燥以提供呈TFA盐和呈油状物的标题化合物(536mg)。

方法A：Rt＝0.79min；[M+H]⁺＝612.5。

步骤3：叔丁基4-(2-(4-((4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氧基)哌啶-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸酯

向2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((哌啶-4-基氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(536mg，0.739mmol)、叔丁基(2-氧代乙基)氨基甲酸酯(201mg，0.886mmol)和TEA(0.309ml，2.216mmol)在MeOH(5ml)中的混合物中添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.5M)(1.625ml，0.812mmol)，并将RM在氩气下在RT搅拌3h。添加固体NaBH₃CN(20.06mg，0.319mmol)并将RM在RT下搅拌过夜。将RM用EtOAc稀释并将水相用NaHCO₃的水性溶液和盐水洗涤。将有机相经MgSO₄干燥，在上吸附并干燥，并通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(400mg)。

方法B：Rt＝4.90min；[M+H]⁺＝823.6。

步骤4：2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-(((1-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

将叔丁基4-(2-(4-((4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氧基)哌啶-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸酯(400mg，0.427mmol)在DCM(10ml)和TFA(0.987ml，12.81mmol)中的溶液在氩气下在RT搅拌2h。将RM浓缩以提供呈固体TFA盐的标题化合物(500mg)。

方法A：Rt＝0.70min；[M+H]⁺＝723.6。

步骤5：N-(3-(6-(4-(((1-(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-(((1-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺三氟乙酸酯(120mg，0.102mmol)、3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，27.0mg，0.102mmol)和HBTU(46.5mg，0.123mmol)在DMF(3ml)中的溶液中添加DIPEA(0.107ml，0.613mmol)并将RM在氩气下在RT搅拌2h。添加水并将所得的白色沉淀过滤，用水洗涤，干燥，并通过SFC(在Reprospher PEI柱(250x30mm，100A，5μm)上，用在CO₂中的MeOH(从22％至55％)洗脱)纯化，然后通过反相HPLC(在XBridge C18 OBD柱(100x 30mm，5μm)上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从18％至48％)洗脱)纯化，以在通过PL-HCO3 MPSPE筒过滤并冷冻干燥后，提供呈固体的标题化合物(35.9mg)。

方法B：Rt＝4.11min；[M+H]⁺＝970.5。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.73(s,1H),10.35(s,1H),9.95(s,1H),8.79(s,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,2H),7.80-7.56(m,2H),7.52-7.12(m,9H),6.79(s,1H),5.32(s,1H),4.54(s,2H),4.35(m,1H),3.85(s,3H),3.61(t,J＝6.7Hz,2H),3.10-2.60(m,6H),2.28(t,J＝7.4Hz,2H),2.19(s,3H),2.02(t,J＝10.6Hz,2H),1.95-1.82(m,2H),1.69(m,2H),1.47(m,10H),1.39(m,2H),1.10(m,2H)。

化合物14：

N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向在RT下的3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟苯甲酸(中间体9，8.89mg，0.035mmol)在DMA(0.5ml)中的溶液中添加HATU(15.46mg，0.041mmol)，然后添加DIPEA(0.047ml，0.271mmol)。15min后，添加N-(3-(6-(4-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体6，31mg，0.027mmol)并将RM在RT下搅拌过夜。将RM用EtOAc稀释，将有机相用NaHCO₃和盐水的水性溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥，浓缩，并通过反相HPLC(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从10％至100％)洗脱)纯化。合并含有纯化合物的级分，用NaHCO₃的水性溶液碱化，并用EtOAc萃取。将合并的有机相经Na₂SO₄干燥，浓缩，并将残余物溶解于水和ACN的混合物中并冷冻干燥以提供呈固体的标题化合物(18.5mg)。

方法B：Rt＝3.64min；[M+H]⁺＝899.8。

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ12.79(s,1H),10.55(s,1H),9.98(s,1H),8.87(s,1H),8.08-7.90(m,2H),7.74(t,J＝7.8Hz,1H),7.67(d,J＝10.9Hz,1H),7.51(d,J＝6.6Hz,1H),7.46-7.35(m,6H),7.25(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),6.85(br.s,1H),5.32(s,1H),3.76(t,J＝6.6Hz,2H),3.67-3.44(m,4H),3.42-3.32(m,2H),2.73(t,J＝6.6Hz,2H),2.55-2.51(m,2H),2.42-2.31(m,2H),2.18(s,3H),1.57-1.35(m,8H),1.46(s,6H)。

化合物15：

N-(3-(6-(4-((1-(3-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)丙基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-(3-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯氧基)哌啶-1-基)丙基)哌啶-1-甲酸酯

在RT下，将2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-(哌啶-4-基氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体16，101mg，0.142mmol)、TEA(0.060ml，0.430mmol)和叔丁基4-(3-氧代丙基)哌啶-1-甲酸酯(45mg，0.186mmol)溶解于MeOH(1.5ml)。添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.7M)(0.250ml，0.175mmol)，并将RM在氩气下在RT搅拌过夜。添加固体NaBH₃CN(11mg，0.175mmol)并将RM在RT下搅拌过夜。去除溶剂并将所得的残余物不经进一步纯化直接用于下一步(134mg)。

方法A：Rt＝1.05min；[M+H]⁺＝823.5。

步骤2：2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((1-(3-(哌啶-4-基)丙基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

将粗制叔丁基4-(3-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯氧基)哌啶-1-基)丙基)哌啶-1-甲酸酯(117mg，0.142mmol)在DCM(1.5ml)和TFA(0.150ml，1.947mmol)中的溶液在RT下搅拌2.5h，去除溶剂并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(135mg)。

方法A：Rt＝0.72min；[M+H]⁺＝723.6。

步骤3：N-(3-(6-(4-((1-(3-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)丙基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，45mg，0.170mmol)在DMF(1ml)中的溶液中添加NMM(0.050ml，0.455mmol)，然后添加HATU(65mg，0.170mmol)。搅拌RM 30min后，逐滴添加2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((1-(3-(哌啶-4-基)丙基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺三氟乙酸酯(0.142mmol)和NMM(0.050ml，0.455mmol)在DMF(0.5ml)中的溶液并将RM在RT下搅拌2.5h。将混合物浓缩，并通过反相色谱法(在C18柱上，用在NH₄HCO₃的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(93mg)。

方法B：Rt＝3.99min；[M+H]⁺＝969.7。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.64(s,1H),10.31(s,1H),9.92(s,1H),8.80(s,1H),7.89(d,J＝8.3Hz,2H),7.72(t,J＝7.9Hz,1H),7.68-7.57(m,1H),7.47-7.26(m,4H),7.26-7.18(m,1H),7.13(d,J＝8.5Hz,1H),7.02(d,J＝8.4Hz,2H),6.70(s,1H),5.29(s,1H),4.45(m,1H),3.82(s,3H),3.58(t,J＝6.8Hz,2H),3.00-2.63(m,6H),2.21(m,7H),1.93(m,2H),1.63(m,4H),1.44(m,10H),1.22(m,3H),1.15-0.97(m,2H)。

化合物16：

N-(3-(6-(4-((4-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-(2-氧代乙基)哌嗪-1-甲酸酯

向在-78℃下的草酰氯(0.380ml，4.25mmol)在无水DCM(10ml)中的搅拌溶液中添加DMSO(0.538ml，7.58mmol)。将RM搅拌30min，然后添加在DCM(10ml)中的1-Boc-4-(2-羟基乙基)哌嗪(500mg，2.106mmol)。在-78℃下搅拌RM 30分钟后，添加TEA(2.4ml，17.22mmol)，并继续搅拌1.5h，同时使RM温热至RT。通过添加NaHCO₃的饱和水性溶液来淬灭RM并然后用DCM萃取。将合并的有机相经Na₂SO₄干燥，蒸发至干燥并将残余物通过色谱法(在二氧化硅上，用在EtOAc中的EtOAc和MeOH(4:1)的混合物(从0至30％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(371mg)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.57(d,J＝1.5Hz,1H),3.31(dd,J＝10.0,5.0Hz,4H),3.18(d,J＝1.5Hz,2H),2.38(t,J＝5.1Hz,4H),1.38(s,9H)。

步骤2：叔丁基4-(2-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-甲酸酯

在RT下，将2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-(哌嗪-1-基甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺盐酸盐(中间体17，265mg，0.384mmol)、TEA(0.200ml，1.435mmol)和叔丁基4-(2-氧代乙基)哌嗪-1-甲酸酯(96mg，0.399mmol)溶解于MeOH(2ml)中。添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.5M)(0.850ml，0.425mmol)并将RM在RT下搅拌7h。添加固体NaBH₃CN(27mg，0.430mmol)，并将RM在RT下搅拌过夜，浓缩，并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(259mg)。

方法D：Rt＝0.58min；[M+H]⁺＝809.6。

步骤3：2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((4-(2-(哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向叔丁基4-(2-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-甲酸酯(259mg，0.109mmol)在MeOH(2ml)中的溶液中添加HCl在1,4-二噁烷(2ml，8.00mmol)中的溶液(4M)，并将RM在RT下搅拌1h，浓缩，并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(91mg)。

方法A：Rt＝0.65min；[M+H]⁺＝709.6。

步骤4：N-(3-(6-(4-((4-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

在RT下将3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，20mg，0.074mmol)溶解于DMF(0.5ml)，添加NMM(0.050ml，0.455mmol)和HATU(30mg，0.077mmol)并将RM在RT下搅拌30min.。逐滴添加2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((4-(2-(哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺三氟乙酸酯(91mg，0.059mmol)和NMM(0.050ml，0.455mmol)在DMF(0.5ml)中的溶液，并将RM在RT下搅拌2.5h。将混合物浓缩并通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，以在PL-HCO3 MP SPE筒上过滤、冷冻干燥以及另外通过SFC(在Torus 2PIC柱(250x 30mm，130A，5μm)上，用在CO₂中的MeOH(从22％至52％)洗脱)纯化后，提供呈固体的标题化合物(34mg)。

方法B：Rt＝3.07min；[M+H]⁺＝955.5。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.75(s,1H),10.31(s,1H),9.92(s,1H),8.83(s,1H),7.92(m,2H),7.68(m,2H),7.36(m,6H),7.19(m,2H),6.81(s,1H),5.28(s,1H),3.82(s,3H),3.75-2.85(m,14H),2.64(m,8H),2.16(m,6H),1.44(m,6H)。

化合物17：

N-(3-(6-(4-((4-(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-(2-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸酯

在RT下将2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-(哌嗪-1-基甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺三氟乙酸酯(中间体18，200mg，0.228mmol)、TEA(0.100ml，0.717mmol)和N-Boc-4-哌啶乙醛(70mg，0.293mmol)溶解于MeOH(2ml)，添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.7M)(0.370ml，0.259mmol)，并将RM在氩气下在RT搅拌5h。添加固体NaBH₃CN(16mg，0.255mmol)，并将RM在RT下搅拌过夜，去除溶剂并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(236mg)。

方法A：Rt＝0.96min；[M+H]⁺＝808.5。

步骤2：2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((4-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向叔丁基4-(2-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸酯(230mg，0.249mmol)在MeOH(2ml)中的溶液中添加HCl在1,4-二噁烷(1.5ml，6.00mmol)中的溶液(4M)，并将RM在RT下搅拌2h。将RM浓缩以提供呈固体HCl盐的标题化合物(234mg)。

方法A：Rt＝0.68min；[M+H]⁺＝708.5。

步骤3：N-(3-(6-(4-((4-(2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

将3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，41mg，0.155mmol)溶解于DMF(1ml)，添加NMM(0.050ml，0.455mmol)和HATU(58mg，0.153mmol)，并将RM在RT下搅拌30min。逐滴添加2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((4-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺盐酸盐(100mg，0.122mmol)和NMM(0.050ml，0.455mmol)在DMF(0.5ml)中的溶液，并将RM在RT下搅拌过夜。将混合物浓缩，并通过反相色谱法(在C18柱上，用在NH₄HCO₃的水性溶液(0.1％)中的ACN洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(78mg)。

方法B：Rt＝3.77min；[M+H]⁺＝954.5。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.76(s,1H),10.32(s,1H),9.94(s,1H),8.85(s,1H),7.94(d,J＝7.6Hz,2H),7.82-7.60(m,2H),7.53-7.06(m,8H),6.83(s,1H),5.30(s,1H),3.83(s,3H),3.53(m,4H),3.00-2.3(m,16H),2.17(s,3H),1.91-0.91(m,13H)。

化合物18：

外消旋-N-(3-(6-(4-((1-(2-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)-3-羟基丙基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：外消旋-叔丁基4-((1-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯氧基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-2-基)氧基)哌啶-1-甲酸酯

在RT下将2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-(哌啶-4-基氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺三氟乙酸酯(中间体16，124mg，0.171mmol)、TEA(0.100ml，0.717mmol)和叔丁基4-(2-氧代乙氧基)哌啶-1-甲酸酯(中间体19，60mg，0.222mmol)溶解于MeOH(2ml)，添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.7M)(0.300ml，0.210mmol)，并将RM在氩气下在RT搅拌过夜。添加固体NaBH₃CN(13mg，0.207mmol)，将RM在RT下搅拌过夜，浓缩并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(78mg)。

方法A：Rt＝0.94min；[M+H]⁺＝855.5。

步骤2：外消旋-2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-((1-(3-羟基-2-(哌啶-4-基氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

将外消旋-叔丁基4-((1-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯氧基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-2-基)氧基)哌啶-1-甲酸酯三氟乙酸酯(75mg，0.079mmol)在DCM(1ml)和TFA(0.100ml，1.3mmol)中的溶液在RT下搅拌2h，浓缩并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(67mg)。

方法A：Rt＝0.67min；[M+H]⁺＝755.5。

步骤3：外消旋-N-(3-(6-(4-((1-(2-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)-3-羟基丙基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，20mg，0.076mmol)在DMF(0.5ml)中的溶液中添加NMM(0.050ml，0.455mmol)和HATU(30mg，0.079mmol)并将RM在RT下搅拌30min。逐滴添加外消旋-2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-((1-(3-羟基-2-(哌啶-4-基氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(65mg，0.065mmol)和NMM(0.050ml，0.455mmol)在DMF(0.5ml)中的溶液，并将RM在RT下搅拌2h。去除溶剂，并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在NH₄HCO₃的水性溶液(0.1％)中的ACN洗脱)纯化，以在另外通过SFC(在Torus 2PIC柱(250x 30mm，130A，5μm)上，用在CO₂中的MeOH(从22％至55％)洗脱)纯化后，提供呈固体的标题化合物(30mg)。

方法B：Rt＝3.77min；[M+H]⁺＝1001.6。

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ13.99(s,1H),10.31(s,1H),10.08(s,1H),9.22(s,1H),8.04(m,2H),7.86(d,J＝9.9Hz,1H),7.72(t,J＝7.8Hz,1H),7.44-7.38(m,3H),7.36(m,1H),7.32(s,1H),7.15(m,4H),4.75-4.35(m,1H),3.94(m,1H),3.82(m,4H),3.75-3.50(m,6H),3.50-3.32(m,2H),3.32-3.07(m,5H),2.66(t,J＝6.8Hz,2H),2.28(m,1H),2.19(s,3H),2.14-2.01(m,2H),2.00-1.77(m,3H),1.63-1.45(m,3H),1.44(s,6H)。

化合物19：

N-(3-(6-(4-((1-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-((4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯氧基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-甲酸酯

在RT下将2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-(哌啶-4-基氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺三氟乙酸酯(中间体16，127mg，0.170mmol)、TEA(0.075ml，0.538mmol)和1-Boc-哌啶4-甲醛(40mg，0.182mmol)溶解于MeOH(2ml)，添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.7M)(0.300ml，0.210mmol)，并将RM在氩气下在RT搅拌7h。添加固体NaBH₃CN(13mg，0.207mmol)，将RM在RT下搅拌4天，去除溶剂并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(174mg)。

方法D：Rt＝0.75min；[M+H]⁺＝795.5。

步骤2：2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺将叔丁基4-((4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯氧基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-甲酸酯三氟乙酸酯(170mg，0.190mmol)在DCM(2ml)和TFA(0.100ml，1.298mmol)中的溶液在RT下搅拌1h并将RM浓缩以提供呈固体TFA盐的标题化合物(202mg)。

方法D：Rt＝0.52min；[M+H]⁺＝695.6。

步骤3：N-(3-(6-(4-((1-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向在RT下的3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，60mg，0.227mmol)在DMF(1ml)中的溶液中添加NMM(0.050ml，0.455mmol)和HATU(87mg，0.042mmol)并将RM在RT下搅拌30min。逐滴添加2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺三氟乙酸酯(0.190mmol)和NMM(0.050ml，0.455mmol)在DMF(1ml)中的溶液并将RM在RT下搅拌2.5h。去除溶剂，并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在NH₄HCO₃的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，以在另外通过反相HPLC(在XBridge柱(50x 250mm，5μm)上，用在NH₄OH的水性溶液(0.1％)中的ACN(从30％至65％)洗脱)纯化后，提供呈固体的标题化合物(47mg)。

方法B：Rt＝3.95min；[M+H]⁺＝941.8。

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ12.69(s,1H),10.36(s,1H),9.97(s,1H),8.83(s,1H),7.92(d,J＝8.4Hz,2H),7.74(m,1H),7.66(d,J＝10.2Hz,1H),7.46-7.39(m,2H),7.37(m,1H),7.33(m,1H),7.24(m,1H),7.16(m,1H),7.05(d,J＝8.3Hz,2H),6.76-6.70(s,1H),5.33(s,1H),4.48(m,1H),3.85(s,3H),3.61(t,J＝6.6Hz,2H),3.20-2.75(m,4H),2.18(m,7H),1.97(m,2H),1.80-1.55(m,5H),1.46(s,6H),1.08(m,2H)。

化合物20：

N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-甲基丙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基9-(2-(4-溴苯基)乙酰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

向在氩气下在RT下的3,9-二氮杂-螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(1269mg，4.99mmol)在干燥的DMF(12ml)中的溶液中添加DIPEA(1.743ml，9.98mmol)、4-溴苯基乙酸(1073mg，4.99mmol)和干燥的DMF(6ml)。添加固体HBTU(2081mg，5.49mmol)并将RM在RT下搅拌1h，倒入水中并将所得的混合物搅拌1h。倒出液体，添加水，并将混合物超声处理。再次倒出液体并将残余物溶解于DCM，将溶液经MgSO₄干燥并蒸发以提供呈油状物的标题化合物(2.2g)。

方法A：Rt＝1.22min；[M+H]⁺＝451.2。

步骤2：叔丁基9-(1-(4-溴苯基)-2-甲基丙-2-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

向在氩气下在-50℃下的叔丁基9-(2-(4-溴苯基)乙酰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(1.9g，4.21mmol)在干燥的THF(15ml)中的溶液中添加经烘箱干燥的ZrCl₄(1.079g，4.63mmol)并将RM在-50℃和-45℃之间搅拌30分钟。经10min.逐滴添加甲基溴化镁在Et₂O(8.42ml，25.3mmol)中的溶液(3M)，同时保持反应温度在-45℃和-40℃之间。使RM温热至-20℃，然后在冰浴中搅拌15min并然后在RT下搅拌2h。添加NH₄Cl的饱和水性溶液和EtOAc并分离各相。将水相用EtOAc萃取，并将合并的有机相经MgSO₄干燥，蒸发，并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从10％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(70mg)。

方法A：Rt＝0.95min；[M+H]⁺＝465.2。

步骤3：叔丁基9-(2-甲基-1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙-2-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

向叔丁基9-(1-(4-溴苯基)-2-甲基丙-2-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(70mg，0.121mmol)在干燥的1,4-二噁烷(2ml)中的溶液中添加KOAc(35.6mg，0.362mmol)和BISPIN(36.8mg，0.145mmol)并使氩气通过混合物5分钟。将混合物在35℃下加热并添加PdCl₂(dppf)(4.42mg，6.04μmol)，将RM再次用氩气冲洗并然后在90℃下搅拌6h。除去溶剂，并将残余物在二氧化硅上吸附，并通过硅胶色谱法(用在CHX中的EtOAc(从10％至100％)，然后用在DCM中的MeOH(从0至20％)洗脱)纯化，以提供呈油状物的标题化合物(94mg)。

方法A：Rt＝1.09min；[M+H]⁺＝513.4。

步骤4：叔丁基9-(1-(4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)-2-甲基丙-2-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

在RT下，将叔丁基9-(2-甲基-1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙-2-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(94mg，0.182mmol)和4-氯-6-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(51mg，0.182mmol)悬浮于1-丙醇(5ml)和Na₂CO₃的水性溶液(2M)的混合物(0.182ml，0.365mmol)中。使氩气通过混合物，添加PdCl₂(PPh₃)₂(12.81mg，0.018mmol)并将RM在氩气氛下在100℃搅拌23h。添加1-丙醇(3ml)和Na₂CO₃的水性溶液(2M)(0.540ml，1.08mmol)，使氩气通过RM 5min.，添加PdCl₂(PPh₃)₂(15mg，0.021mmol)并将RM在110℃下搅拌7h。将RM用EtOAc稀释，将混合物经MgSO₄干燥，在HM-N上吸附并干燥，并通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从5％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(33mg)。

方法A：Rt＝0.94min；[M+H]⁺＝538.3。

步骤5：叔丁基9-(1-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)-2-甲基丙-2-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

向在RT下的叔丁基9-(1-(4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)-2-甲基丙-2-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(33mg，0.019mmol)在1-丙醇(1ml)中的溶液中添加2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体2，36mg，0.083mmol)、1-丙醇(1.5ml)和Na₂CO₃的水性溶液(2M)(0.08ml，0.160mmol)。使氩气通过混合物，添加PdCl₂(PPh₃)₂(1.330mg，1.895μmol)并使用微波辐射将RM在140℃下加热20min。将RM用EtOAc稀释，将混合物经MgSO₄干燥，在HMN上吸附并干燥，并通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从5％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(9mg)。

方法A：Rt＝1.00min；[M+H]⁺＝807.4。

步骤6：N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-甲基丙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺将叔丁基9-(1-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)-2-甲基丙-2-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(9mg，8.70μmol)在DCM(0.8ml)和TFA(0.8ml)中的溶液在RT下搅拌10min。蒸发溶剂并将残余物溶解于DMF(0.8ml)和NMM(0.022ml，0.200mmol)。添加3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，4.60mg，0.017mmol)和HATU(6.61mg，0.017mmol)并将RM在氩气下在RT搅拌15h。将混合物在上吸附并干燥并通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从5％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(6.5mg)。

方法B：Rt＝3.91min；[M+H]⁺＝953.7。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.83(s,1H),10.34(s,1H),9.95(s,1H),8.88(s,1H),7.99(d,J＝8.2Hz,2H),7.73(t,J＝7.9Hz,1H),7.70-7.50(m,1H),7.50-7.25(m,6H),7.25(d,J＝8.8Hz,1H),7.17(d,J＝8.7Hz,1H),6.89(s,1H),3.85(s,3H),3.70-3.40(m,6H),3.20-3.00(m,2H),2.70-2.60(m,2H),2.18(s,3H),2.1-1.9(m,3H),1.75-1.55(m,4H),1.45(s,6H),1.45-1.20(m,12H)。

化合物21：

N-(3-(6-(4-(((1-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-(2-氯乙基)哌嗪-1-甲酸酯

向250ml圆底烧瓶中添加叔丁基哌嗪-1-甲酸酯(10g，53.7mmol)、ACN(100ml)和K₂CO₃(11.1g，80.6mmol)并将混合物冷却至5℃。在5℃下，缓慢添加1-溴-2-氯乙烷(15.0g，104mmol)，使RM温热至RT并继续搅拌18h。将RM过滤，将滤液浓缩并通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从0至50％)洗脱)纯化，产生呈油状物的标题化合物(4.2g)。

方法J：Rt＝1.93min，MS m/z[M+H]⁺249。

步骤2：叔丁基4-(4-溴苄基氧基)哌啶-1-甲酸酯

向250ml圆底烧瓶中添加在矿物油(1.17g，29.25mmol)中的NaH(60％)，和DMF(30ml)，并将混合物冷却至5℃。在5℃下逐滴添加叔丁基4-羟基哌啶-1-甲酸酯(4.03g，20.0mmol)在DMF(15ml)中的溶液并将RM在5℃下搅拌1h。在5℃下添加1-溴-4-(溴甲基)苯(7.0g，28.0mmol)，将RM在30℃下搅拌18h并然后用冰水稀释。分离各相，并将水相用EtOAc和石油醚(2:1)的混合物萃取，将合并的有机相干燥，浓缩并通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从0至20％)洗脱)纯化，产生呈油状物的标题化合物(6.1g)。

方法H：Rt＝2.30min，MS m/z[M-100+H]⁺270。

步骤3：叔丁基4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基氧基)哌啶-1-甲酸酯

向经吹扫并在惰性气氛下维持的100ml圆底烧瓶中添加叔丁基4-(4-溴苄基氧基)哌啶-1-甲酸酯(2.0g，5.4mmol)、BISPIN(2.7g，10.8mmol)、KOAc(1.59g，16.2mmol)和PdCl₂(dppf)(630mg，0.86mmol)。添加1,4-二噁烷(45ml)并将RM在N₂下在85℃搅拌18h。将RM蒸发并将残余物通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从0至20％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(2.1g)。

方法F：Rt＝1.70min，MS m/z[M-100+H]⁺318。

步骤4：4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基氧基)哌啶

向50ml圆底烧瓶中添加叔丁基4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基氧基)哌啶-1-甲酸酯(2.1g，5.0mmol)和DCM(10ml)并将溶液冷却至5℃。缓慢添加HCl在1,4-二噁烷(5ml，20mmol)中的溶液(4M)并将RM在30℃下搅拌2h。将混合物浓缩，与石油醚和TBME(2:1)的混合物一起研磨，并将固体过滤，产生呈固体HCl盐的标题化合物(1.2g)。

方法E：Rt＝1.74min，MS m/z[M+H]⁺318。

步骤5：4-((1-(2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-4-基氧基)甲基)苯基硼酸

在100ml圆底烧瓶中添加4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基氧基)哌啶盐酸盐(530mg，1.5mmol)、K₂CO₃(518mg，3.75mmol)、NaI(80mg，0.53mmol)、ACN(30ml)和叔丁基4-(2-氯乙基)哌嗪-1-甲酸酯(374mg，1.5mmol)。将RM在30℃下搅拌24h，浓缩，在DMF(9ml)中再次稀释，在60℃下搅拌6h并过滤以得到呈固体的标题化合物(670mg)。

方法I：Rt＝1.02min，MS m/z[M+H]⁺448。

步骤6：叔丁基4-(2-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基氧基)哌啶-1-基)乙基)哌嗪-1-甲酸酯

向经吹扫并在惰性气氛下维持的100ml圆底烧瓶中添加4-((1-(2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-4-基氧基)甲基)苯基硼酸(604mg，1.35mmol)在DMF(9ml)、4-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(中间体7，680mg，1.62mmol)、Na₂CO₃(300mg，2.83mmol)和PdCl₂(dppf)(120mg，0.16mmol)中的溶液。添加ACN(25ml)和水(7ml)并在N₂下将RM在95℃下搅拌1h。向混合物中添加2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体2，815mg，1.89mmol)、Na₂CO₃(520mg，4.9mmol)和PdCl₂(dppf)(80mg，0.11mmol)并将RM在N₂下在100℃搅拌16h。将混合物浓缩，添加水，过滤，并将固体通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从0至50％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(1.3g)。

方法I：Rt＝1.51min，MS m/z[M+H]⁺965。

步骤7：叔丁基4-(2-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基氧基)哌啶-1-基)乙基)哌嗪-1-甲酸酯

向100ml圆底烧瓶中添加叔丁基4-(2-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基氧基)哌啶-1-基)乙基)哌嗪-1-甲酸酯(1.3g，1.35mmol)在DMSO(12ml)中的溶液并在0℃下添加NaOH(630mg，15.75mmol)在水(2.6ml)中的溶液。将RM在30℃下搅拌1h并且然后添加水。将固体过滤，再次溶解于DCM，将溶液经Na₂SO₄干燥，浓缩并将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的甲醇(从0至60％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(600mg)。

方法I：Rt＝1.34min，MS m/z[M+H]⁺825。

步骤8：2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((1-(2-(哌嗪-1-基)乙基)哌啶-4-基氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向100ml圆底烧瓶中添加叔丁基4-(2-(4-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基氧基)哌啶-1-基)乙基)哌嗪-1-甲酸酯(200mg，0.24mmol)、DCM(1.5ml)和EtOH(4.5ml)。在5℃下，缓慢添加HCl在1,4-二噁烷(1.8ml，7.2mmol)中的溶液(4M)并将RM在30℃下搅拌4h。将RM浓缩，与石油醚和TBME(1:1)的混合物、TBME以及DCM和TBME(1:2)的混合物一起研磨，并过滤，产生呈固体HCl盐的标题化合物(160mg)。

方法I：Rt＝1.15min，MS m/z[M+H]⁺725。

步骤9：N-(3-(6-(4-(((1-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向100ml圆底烧瓶中添加2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(6-(4-((1-(2-(哌嗪-1-基)乙基)哌啶-4-基氧基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺盐酸盐(160mg，0.21mmol)、3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，63mg，0.24mmol)、DMF(2.5ml)和DIPEA(163mg，1.26mmol)并将混合物冷却至5℃。添加HATU(90mg，0.24mmol)并将RM在5℃下搅拌1h。将混合物过滤并将滤液通过制备型HPLC(在XBridge C18柱(21.2x 250mm，10μm)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(79mg)。

方法G：Rt＝1.95min，MS m/z[M+H]⁺970。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.78(s,1H),10.34(s,1H),9.95(s,1H),8.85(s,1H),7.96(d,J＝8.2Hz,2H),7.73(t,J＝8.0Hz,1H),7.66(dd,J＝9.8,1.7Hz,1H),7.45-7.39(m,4H),7.37(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),7.33(d,J＝2.0Hz,1H),7.24(dd,J＝8.8,2.7Hz,1H),7.15(d,J＝8.6Hz,1H),6.85(s,1H),5.31(s,1H),4.53(s,2H),3.84(s,3H),3.59(t,J＝6.6Hz,2H),3.54-3.40(m,4H),3.39-3.36(m,1H),2.74-2.64(m,4H),2.45-2.36(m,8H),2.17(s,3H),2.07(t,J＝9.3Hz,2H),1.89-1.80(m,2H),1.54-1.47(m,2H),1.45(s,6H)。

化合物22：

N-(3-(6-(4-((4-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-羰基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-(哌嗪-1-羰基)哌嗪-1-甲酸酯

在0℃下，向含有二(1H-咪唑-1-基)甲酮(1.95g，12.0mmol)在THF(35ml)中的溶液的100ml圆底烧瓶中添加叔丁基哌嗪-1-甲酸酯(1.863g，10.0mmol)。将所得的溶液在0℃下搅拌2h，然后添加哌嗪(2.59g，30.0mmol)，并将RM在65℃下搅拌16h，然后添加另外的哌嗪(0.86g，10.0mmol)，并将RM在65℃下搅拌24h。去除溶剂并将残余物再次溶解于H₂O，添加Na₂CO₃并将混合物用DCM萃取。将合并的有机相经Na₂SO₄干燥并将溶剂去除。将残余物与TBME一起研磨，将混合物过滤，将固体用TBME洗涤，并干燥，产生呈固体的标题化合物(2.0g)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ3.30(s,4H),3.11-3.02(m,8H),2.67-2.61(m,4H),2.36(s,1H),1.40(s,9H)。

步骤2：叔丁基4-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-羰基)哌嗪-1-甲酸酯

向含有3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，555mg，2.1mmol)和HATU(783mg，2.06mmol)在DMF(8ml)中的溶液的100ml圆底烧瓶中添加DIPEA(517mg，4.0mmol)并将RM在15℃下搅拌5min.，然后添加叔丁基4-(哌嗪-1-羰基)哌嗪-1-甲酸酯(587mg，2.0mmol)。将溶液在15℃下搅拌1h，倒入含有KH₂PO₄的冰水中并将混合物用DCM萃取。将合并的有机相经Na₂SO₄干燥并蒸发，产生呈固体的标题化合物(1.1g)。

方法F：Rt＝1.113min，MS m/z[M+Na]⁺567。

步骤3：1-(2-甲氧基-5-(4-(哌嗪-1-羰基)哌嗪-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

向含有叔丁基4-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-羰基)哌嗪-1-甲酸酯(1.1g，2.0mmol)在DCM(10ml)中的溶液的100ml圆底烧瓶中添加苯甲醚(1ml)和TFA(3.5ml)。将RM在15℃下搅拌3h，去除溶剂，将残余物与TBME一起研磨，将混合物过滤并将固体干燥，提供呈固体TFA盐的标题化合物(1.0g)。

方法F：Rt＝0.750min，MS m/z[M+Na]⁺445。

步骤4：N-(3-(6-(4-((4-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-羰基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向含有1-(2-甲氧基-5-(4-(哌嗪-1-羰基)哌嗪-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮三氟乙酸酯(440mg，0.788mmol)和DIPEA(70mg，0.542mmol)在MeOH(5ml)中的溶液的50ml圆底烧瓶中添加在10℃下的2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，206mg，0.391mmol)在DMSO(5ml)中的溶液并将混合物搅拌5min。添加在THF中的ZnCl₂溶液(1M)(0.41ml，0.41mmol)，并将RM在22℃下搅拌2h。添加固体NaBH₃CN(30mg，0.477mmol)并在22℃下继续搅拌18h。去除溶剂，添加冰水和KH₂PO₄，将混合物过滤，并将滤液通过反相色谱法(在AgelaC18柱(球形20-35μm，40g)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(0.0075M)中的ACN洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(63mg)。

方法D：Rt＝1.223min，MS m/z[M+H]⁺955。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.78(s,1H),10.36(s,1H),9.96(s,1H),8.85(s,1H),7.96(d,J＝8.1Hz,2H),7.73(m,1H),7.66(d,J＝9.9Hz,1H),7.44-7.36(m,6H),7.24(dd,J＝8.7,2.7Hz,1H),7.16(d,J＝8.4Hz,1H),6.84(s,1H),5.31(s,1H),3.84(s,3H),3.60(t,J＝6.6Hz,2H),3.53(s,2H),3.49-3.41(m,2H),3.31(s,2H),3.24-3.13(m,8H),2.68(t,J＝6.5Hz,2H),2.40-2.34(m,4H),2.18(s,3H),1.45(s,6H)。

化合物23：

外消旋-N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-1-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，200mg，0.380mmol)、外消旋-1-(5-(7-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)-2-甲氧基苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮三氟乙酸酯(中间体20，228mg，0.418mmol)和TEA(0.079ml，0.570mmol)在THF(3ml)中的混合物中添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.5M)(0.798ml，0.399mmol)。在氩气下将RM在RT下搅拌3h，添加固体NaBH₃CN(47.7mg，0.760mmol)并将RM在RT下搅拌4h。将混合物用DCM稀释，将有机相用水洗涤，浓缩，将残余物在上吸附并干燥并通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从10％至100％)洗脱)纯化，以在通过PL-HCO3 MP SPE筒过滤并冷冻干燥后，提供呈固体的标题化合物(161mg)。

方法B：Rt＝3.53min；[M+H]⁺＝942.3。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.77(s,1H),10.33(s,1H),9.95(s,1H),8.85(s,1H),8.2-7.85(m,2H),7.73(t,J＝8Hz,1H),7.66(d,J＝8.8Hz,1H),7.57-7.28(m,6H),7.24(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.14(d,J＝8.6Hz,1H),6.84(s,1H),5.30(s,1H),4.38(br.s,1H),3.84(s,3H),3.7-3.40(m,6H),3.3-3.0(m,4H),2.75-2.55(m,3H),2.35-2.25(m,2H),2.18(s,3H),2.0-1.7(m,2H),1.58-1.15(m,6H),1.45(s,6H)。

化合物24和化合物25：

(R)-N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-1-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺和

(S)-N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-1-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

使用HPLC(在Chiralpak ID柱(5μm，250x 20mm)上，用含有DEA的庚烷、DCM和MeOH(40:35:25)的混合物(0.05％)洗脱，流速为10ml/min)(方法M)，对外消旋-N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-1-(羟基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(50mg，50.6μmol)进行手性分离提供作为单一对映异构体的呈下列顺序的标题化合物：

第一洗脱对映异构体：14.7mg；

方法K：Rt＝30.8min；

方法B：Rt＝3.45min；[M+H]⁺＝941.5。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)与上文报道的针对外消旋体的NMR一致

第二洗脱对映异构体：12.7mg；

方法K：Rt＝42.3min；

方法B：Rt＝3.48min；[M+H]⁺＝941.5。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)与上文报道的针对外消旋体的NMR一致

化合物26：

N-(3-(6-(4-((4-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺基)丁基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺基)丁基)哌嗪-1-甲酸酯

将3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，150mg，0.539mmol)、4-(4-氨基-丁基)-哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(146mg，0.539mmol)、HATU(293mg，0.755mmol)和NMM(0.300ml，2.70mmol)在DMF(5ml)中的溶液在RT下搅拌3h。将反应混合物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(348mg)。

方法A：Rt＝0.98min；[M+H]⁺＝504.3。

步骤2：3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基-N-(4-(哌嗪-1-基)丁基)苯甲酰胺

将叔丁基4-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺基)丁基)哌嗪-1-甲酸酯(305mg，0.469mmol)在MeOH(2ml)和HCl在1,4-二噁烷(4ml，16mmol)中的溶液(4M)中的溶液在RT下搅拌1.5h。去除溶剂，将残余物再次溶解于ACN和水的混合物中并冷冻干燥以提供呈固体HCl盐的标题化合物(249mg)。

方法A：Rt＝0.70min；[M+H]⁺＝404.4。

步骤3：N-(3-(6-(4-((4-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺基)丁基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

将3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基-N-(4-(哌嗪-1-基)丁基)苯甲酰胺盐酸盐(136mg，0.303mmol)、TEA(0.100ml，0.717mmol)和2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，163mg，0.303mmol)在RT下溶解于MeOH(2ml)，添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.5M)(0.75ml，0.375mmol)并将RM在RT下搅拌过夜。添加固体NaBH₃CN(22mg，0.350mmol)，将RM在RT下搅拌过夜并去除溶剂。将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从2％至100％)洗脱)纯化，以在通过PL-HCO₃ MP SPE筒过滤并冷冻干燥后，提供固体。另外通过SFC(在Reprospher PEI柱(250x 30mm，100A，5μM)上，用在CO₂中的MeOH(从33％至50％)洗脱)对该材料进行纯化提供呈固体的标题化合物(95mg)。

方法B：Rt＝3.68min；[M+H]⁺＝914.5。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.74(s,1H),10.33(s,1H),9.93(s,1H),8.84(s,1H),8.33(t,J＝5.6Hz,1H),7.93(d,J＝7.8Hz,2H),7.83(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),7.78-7.68(m,2H),7.64(d,J＝9.7Hz,1H),7.39(m,4H),7.22(dd,J＝8.9,2.8Hz,1H),7.15(d,J＝8.7Hz,1H),6.81(s,1H),5.28(s,1H),3.84(s,3H),3.57(t,J＝6.7Hz,2H),3.48(s,2H),3.25-3.18(m,2H),2.67(t,J＝6.6Hz,2H),2.43-2.24(m,10H),2.16(s,3H),1.45(m,10H)。

化合物27：

N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

向100ml圆底烧瓶中添加3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酸(中间体8，195mg，0.787mmol)、TEA(0.33ml，2.36mmol)、THF(8ml)和HATU(420mg，1.1mmol)。将RM在RT下搅拌5min；在0℃下，滴加叔丁基3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(200mg，0.787mmol)并将混合物在RT下搅拌1h。将混合物浓缩并将残余物通过硅胶色谱法(用EtOAc洗脱)纯化，以得到呈固体的标题化合物(350mg)。

方法J：Rt＝1.77min；MS m/z[M+H]⁺485

步骤2：1-(2-甲基-5-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

向100ml圆底烧瓶中添加叔丁基9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(0.35g，0.723mmol)和DCM(5ml)并将混合物冷却至0℃。逐滴添加HCl在1,4-二噁烷(20ml，80mmol)中的溶液(4M)，使RM温热至RT并继续搅拌3h。将RM浓缩并不经进一步纯化直接用于下一步，并获得呈固体HCl盐的标题化合物(0.32g)。

方法D：Rt＝1.62min；MS m/z[M+H]⁺384。

步骤3：N-(3-(6-(4-((9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

在100ml圆底烧瓶中添加1-(2-甲基-5-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮盐酸盐(0.32g，0.723mmol)、2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，0.25g，0.462mmol)、MeOH(10ml)和THF(30ml)。在0℃下，添加在THF中的ZnCl₂溶液(1M)(1.38ml，0.462mmol)，并将RM温热至RT并继续搅拌2h。添加固体NaBH₃CN(87mg，1.38mmol)并将RM在RT下搅拌16h。将混合物过滤，将固体用MeOH(10ml)洗涤并浓缩合并的滤液。将残余物通过制备型HPLC(在XBridge C18柱(21.2x 250mm，10μm)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(109mg)。

方法I：Rt＝1.28min；MS m/z[M+H]⁺896。

¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.75(s,1H),10.37(s,1H),9.95(s,1H),8.85(s,1H),7.94(d,J＝8.0Hz,2H),7.75(t,J＝8.0Hz,1H),7.67(d,J＝9.0Hz,1H),7.43-7.30(m,6H),7.24(d,J＝7.5Hz,2H),6.82(s,1H),5.3(s,1H),3.85-3.75(m,1H),3.56-3.49(m,5H),3.37-3.27(m,2H),2.77-2.6(m,2H),2.39-2.29(m,4H),2.21(s,3H),2.17(s,3H),1.49-1.37(m,8H),1.45(s,6H)。

化合物28：

5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-N-(5-((4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氨基)戊基)-N,4-二甲基苯甲酰胺

步骤1：叔丁基(5-(5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-N,4二甲基苯甲酰胺基)戊基)氨基甲酸酯

向在N₂下的5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸(中间体22，80mg，0.300mmol)、5-(甲基氨基)-N-Boc-戊胺(73.7mg，0.331mmol)和HBTU(128mg，0.331mmol)在干燥的DMF(3ml)中的溶液中添加DIPEA(210μl，1.202mmol)并将所得的RM在RT下搅拌1h。将RM用DCM稀释并添加柠檬酸缓冲剂(pH＝4，西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)33643)。分离各相，将水相用DCM萃取，将合并的有机相经MgSO₄干燥，蒸发并将残余物通过色谱法(在二氧化硅上，用在DCM中的iPrOH(从1％至6％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(124mg)。

方法A：Rt＝0.88min；[M+H]⁺＝465.4。

步骤2：N-(5-氨基戊基)-5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-N,4-二甲基苯甲酰胺

在N₂气氛下将叔丁基(5-(5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-N,4二甲基苯甲酰胺基)戊基)氨基甲酸酯(123mg，0.244mmol)于HCl在1,4-二噁烷(1.827ml，7.31mmol)中的溶液(4M)中的悬浮液在RT下搅拌2h。将RM浓缩，再次溶解于ACN和水的混合物中并冷冻干燥以提供呈固体HCl盐的标题化合物(116mg)。

方法A：Rt＝0.46min；[M+H]+＝365.3。

步骤3：5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-N-(5-((4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氨基)戊基)-N,4-二甲基苯甲酰胺

向2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，60mg，0.114mmol)、N-(5-氨基戊基)-5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-N,4-二甲基苯甲酰胺盐酸盐(59.8mg，0.125mmol)和TEA(0.017ml，0.125mmol)在MeOH(2.1ml)中的混合物中添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.5M)(0.251ml，0.125mmol)。将所得混合物在N₂气氛下在RT下搅拌3h。添加固体NaBH₃CN(8.29mg，0.125mmol)并将RM在RT下搅拌18h。将RM用ACN稀释，在上吸附并干燥并通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN洗脱)纯化，以在通过PL-HCO3 MP SPE筒过滤并冷冻干燥后，提供呈固体的标题化合物(77mg)。

方法A：Rt＝0.81min；[M+H]⁺＝875.4。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.71(s,1H),10.35(s,1H),9.92(s,1H),8.83(s,1H),7.91(m,2H),7.72(t,J＝7.89Hz,1H),7.64(m,J＝9.70Hz,1H),7.44-7.35(m,4H),7.31(dd,J＝6.48,2.81Hz,1H),7.24-7.18(m,2H),6.81(s,1H),5.28(s,1H),3.80-3.62(m,3H),3.51-3.40(m,2H),3.11(m,1H),2.93(s,1H),2.80(s,3H),2.64-2.77(m,2H),2.52(m,1H),2.39(m,1H),2.17(d,J＝7.34Hz,6H),1.41-1.57(m,9H),1.25-1.36(m,2H),1.02-1.14(m,1H)。

化合物29：

5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-N-(5-((4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氨基)戊基)-4-甲基苯甲酰胺

步骤1：叔丁基(5-(5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-4-甲基苯甲酰胺基)戊基)氨基甲酸酯

向在N₂气氛下的5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸(中间体22，80mg，0.300mmol)、N-Boc-尸胺(0.071ml，0.331mmol)和HBTU(128mg，0.331mmol)在DMF(3ml)中的溶液中添加DIPEA(210μl，1.202mmol)。将所得的RM在RT下搅拌2.5h，将RM用DCM和柠檬酸缓冲剂(pH＝4，西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)33643)稀释，分离各相并将水相用DCM萃取。将合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，蒸发并将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的iPrOH(从1％至6％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(117mg)。

方法A：Rt＝0.86min；[M+H]⁺＝451.3。

步骤2：N-(5-氨基戊基)-5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-4-甲基苯甲酰胺

在N₂气氛下将叔丁基(5-(5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-4-甲基苯甲酰胺基)戊基)氨基甲酸酯(117mg，0.234mmol)于HCl在1,4-二噁烷(1.753ml，7.01mmol)中的溶液(4M)中的悬浮液在RT下搅拌2h。将RM浓缩，再次溶解于ACN和水的混合物中并冷冻干燥以提供呈固体HCL盐的标题化合物(106mg)。

方法A：Rt＝0.43min；[M+H]⁺＝351.2。

步骤3：5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-N-(5-((4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氨基)戊基)-4-甲基苯甲酰胺

向2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，53mg，0.101mmol)、N-(5-氨基戊基)-5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟-4-甲基苯甲酰胺盐酸盐(50.4mg，0.111mmol)和TEA(0.015ml，0.111mmol)在MeOH(2ml)中的混合物中添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.5M)(0.221ml，0.111mmol)。在N₂气氛下，将RM在RT下搅拌3h。添加固体NaBH₃CN(7.32mg，0.111mmol)并将RM在RT下搅拌18h。将混合物用ACN稀释，在上吸附并干燥并通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从10％至100％)洗脱)纯化，以在通过PL-HCO₃ MP SPE筒过滤并冷冻干燥后，提供呈固体的标题化合物(65mg)。

方法A：Rt＝0.80min；[M+H]⁺＝861.5。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.71(s,1H),10.35(s,1H),9.92(s,1H),8.83(s,1H),8.18-8.24(m,1H),7.90(d,J＝8.19Hz,2H),7.72(t,J＝7.95Hz,1H),7.64(d,J＝10.51Hz,1H),7.50(d,J＝6.97Hz,1H),7.37-7.43(m,4H),7.17-7.24(m,2H),6.80(s,1H),5.28(s,1H),3.67-3.80(m,4H),3.45-3.52(m,1H),3.21(m,2H),2.67-2.80(m,2H),2.43-2.47(m,2H),2.17(d,J＝7.46Hz,6H),1.40-1.52(m,10H),1,29-1.38(m,2H)。

化合物30：

3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-N-(5-((4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氨基)戊基)-N,4-二甲基苯甲酰胺

步骤1：叔丁基(5-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-N,4-二甲基苯甲酰胺基)戊基)氨基甲酸酯

向3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯甲酸(中间体8，125mg，0.504mmol)、5-(甲基氨基)-N-Boc-戊胺(124mg，0.554mmol)和HBTU(214mg，0.554mmol)在干燥的DMF(5ml)中的溶液中添加DIPEA(352μl，2.014mmol)并将所得的RM在N₂气氛下在RT下搅拌1h。将RM用DCM和柠檬酸缓冲剂(pH＝4，西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)33643)稀释，分离各相，将水相用DCM萃取，将合并的有机相经MgSO₄干燥，浓缩并将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的iPrOH(从2％至10％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(188mg)。

方法A：Rt＝0.86min；[M+H]⁺＝447.4。

步骤2：N-(5-氨基戊基)-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-N,4-二甲基苯甲酰胺

将叔丁基(5-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-N,4-二甲基苯甲酰胺基)戊基)氨基甲酸酯(187mg，0.385mmol)于HCl在1,4-二噁烷(2.89ml，11.56mmol)中的溶液(4M)中的悬浮液在N₂气氛下在RT搅拌1h。将RM浓缩，将残余物再次溶解于ACN和水的混合物中并冷冻干燥以提供呈固体HCl盐的标题化合物(171mg)。

方法A：Rt＝0.43min；[M+H]⁺＝347.3。

步骤3：3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-N-(5-((4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)氨基)戊基)-N,4-二甲基苯甲酰胺

向2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，90mg，0.171mmol)、N-(5-氨基戊基)-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-N,4-二甲基苯甲酰胺盐酸盐(90mg，0.171mmol)和TEA(0.026ml，0.188mmol)在MeOH(3.5ml)中的混合物中添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.5M)(0.376ml，0.188mmol)。在N2气氛下，将RM在RT下搅拌3h。添加固体NaBH₃CN(12.44mg，0.188mmol)并在RT下继续搅拌18h。将混合物用ACN稀释，在上吸附并干燥并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN洗脱)纯化，以在通过PL-HCO₃ MP SPE筒过滤并冷冻干燥后，提供呈固体的标题化合物(110mg)。

方法A：Rt＝0.80min；[M+H]⁺＝857.6。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.72(s,1H),10.34(s,1H),9.92(s,1H),8.83(s,1H),7.91(d,J＝8.07Hz,2H),7.68-7.76(m,1H),7.64(d,J＝9.78Hz,1H),7.35-7.45(m,4H),7.25-7.32(m,2H),7.22(m,2H),6.80(s,1H),5.28(s,1H),3.63-3.81(m,3H),3.46-3.53(m,1H),3.39(m,2H),3.16(m,1H),2.88(m,3H),2.64-2.76(m,2H),2.52-2.61(m,1H),2.38(m,1H),2.18(s,3H),2.16(s,3H),1.44(m,10H),1.31(m,1H),1.09(m,1H)。

化合物31：

N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

在氩气气氛下在RT下将1-(2-甲氧基-5-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(中间体21，94mg，0.182mmol)溶解于干燥的ACN(2ml)中，添加K₂CO₃(144mg，1.042mmol)，然后添加4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基甲磺酸酯(中间体13，94mg，0.151mmol)在干燥的DMF(1ml)和干燥的ACN(1ml)的混合物中的溶液。将RM在55℃下搅拌24h并然后将其冷却至0℃，然后添加TFA(0.198ml，2.57mmol)。将混合物在HMN上吸附并干燥并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从5％至100％)洗脱)纯化，以在通过PL-HCO3 MP SPE筒过滤并冷冻干燥后，提供呈固体的标题化合物(21.2mg)。

方法B：Rt＝3.69min；[M+H]⁺＝925.5。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.71(s,1H),10.31(s,1H),9.92(s,1H),8.83(s,1H),7.88(d,J＝7.8Hz,2H),7.72(t,J＝7.8Hz,1H),7.64(d,J＝10.0Hz,1H),7.46-7.26(m,6H),7.22(d,J＝8.7Hz,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,1H),6.79(s,1H),5.28(s,1H),3.83(s,3H),3.58(t,J＝6.5Hz,2H),3.6-3.3(m,4H),2.8-2.7(m,2H),2.67(t,J＝6.2Hz,2H),2.6-2.5(m,2H),2.45-2.35(m,4H),2.16(s,3H),1.60-1.30(m,8H),1.44(s,6H)。

化合物31的第二种且可替代的合成路线如下所述：

步骤1：叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

将叔丁基9-(4-(4-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(中间体24，6.2g，9.55mmol)、2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体2，4.32g，10.03mmol)、K₂CO₃(2.64g，19.1mmol)和PdCl₂(dppf)(698mg，0.955mmol)在二噁烷(100ml)和水(20ml)中的混合物在N₂下在80℃搅拌4h。将混合物用水稀释，分离各相，并将有机相用EtOAc萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，浓缩并将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的EtOAc(从0至100％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(5.1g)。

方法D：Rt＝1.53min；[M+H]⁺＝919.0。

步骤2：叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯

向在0℃下冷却的叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(5.1g，5.55mmol)在DMSO(50ml)中的溶液中缓慢添加NaOH(888mg，22.2mmol)在水(2ml)中的溶液。将RM在RT下搅拌2h，用水稀释，分离各相，并将有机相用EtOAc萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩以提供呈固体的标题化合物(4.5g)。

方法D：Rt＝1.42min；[M+H]⁺＝779。

步骤3：N-(3-(6-(4-(2-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向在RT下搅拌的叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸酯(4.5g，5.5mmol)在DCM(100ml)中的溶液中缓慢添加HCl在1,4-二噁烷(10ml，40mmol)中的溶液(4M)。将RM在RT下搅拌8h并浓缩以提供呈固体HCl盐的标题化合物(4.5g)。

方法I：Rt＝0.59min；[(M+H)/2]⁺＝340。

步骤4：N-(3-(6-(4-(2-(9-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向在RT下的N-(3-(6-(4-(2-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺盐酸盐(4.5g，5.5mmol)和DIPEA(2.8g，22mmol)在DMF(100ml)中的溶液中添加五氟苯基3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸酯(中间体23，2.5g，5.8mmol)并将RM在RT下搅拌3h。将RM倒入水中，将混合物过滤，将固体用水洗涤并干燥，并通过反相色谱法(在C18柱上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，提供呈固体的标题化合物(3.7g)。

方法E：Rt＝1.44min；[M/2+H]⁺＝463.5。

化合物32：

N-(3-(6-(4-((2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸酯

在RT下，向25ml圆底烧瓶中添加3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，100mg，0.38mmol)、叔丁基2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸酯(94mg，0.42mmol)、DMF(2ml)和DIPEA(147mg，1.14mmol)。添加HATU(174mg，0.46mmol)并将RM在RT下搅拌16h。将混合物浓缩并将残余物通过反相色谱法(在Agela C18柱(球形20-35μm，80g)上，用在碳酸氢铵的水性溶液中的ACN(0.05％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(151mg)。

方法G：Rt＝1.90min，MS m/z[M-55]⁺417。

步骤2：1-(2-甲氧基-5-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

向叔丁基2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸酯(151mg，0.32mmol)在DCM(1ml)中的溶液中的添加HCl在1,4-二噁烷(1ml，4mmol)中的溶液(4M)。将RM在RT下搅拌3h。将RM浓缩并无需进一步纯化即可直接用于下一步。获得呈固体HCl盐的标题化合物(119mg)。

方法G：Rt＝1.42min，MS m/z[M+H]⁺373。

步骤3：N-(3-(6-(4-((2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向25ml圆底烧瓶中添加1-(2-甲氧基-5-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮盐酸盐(119mg，0.32mmol)、K₂CO₃(132mg，0.96mmol)和DMSO(2ml)。在RT下搅拌混合物30min后，相继添加在THF中的ZnCl₂溶液(1M)(0.35ml，0.35mmol)、2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，168mg，0.32mmol)和NaBH₃CN(30mg，0.48mmol)。将RM在RT下搅拌30min，添加MeOH(2ml)并将所得的混合物在RT下搅拌16h。将混合物浓缩，将残余物通过反相色谱法(在Agela C18柱(球形20-35μm，80g)上，用在碳酸氢铵的水性溶液中的ACN(0.05％)洗脱)纯化，并另外地通过制备型HPLC(在XBridge C18柱(21.2*250mm，10μm)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)再纯化，产生呈固体的标题化合物(64mg)。

方法J：Rt＝1.707min，MS m/z[M+H]⁺883。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.76(s,1H),10.34(s,1H),9.95(s,1H),8.85(s,1H),7.94(d,J＝8.2Hz,2H),7.77-7.65(m,1H),7.65-7.57(m,2H),7.55(s,1H),7.48-7.35(m,4H),7.27-7.20(m,1H),7.20-7.10(m,1H),6.83(s,1H),5.30(s,1H),4.03(s,2H),3.85(s,3H),3.72(s,2H),3.58(t,J＝6.6Hz,2H),3.47(s,2H),2.70-2.60(m,2H),2.40-2.20(m,4H),2.18(s,3H),1.8-1.6(m,4H),1.45(s,6H)。

化合物33：

N-(3-(6-(4-((4-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-(1-(苄基氧基羰基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-甲酸酯

在含有1-(苄基氧基羰基)哌啶-4-甲酸(2.63g，10mmol)在THF(50ml)中的溶液的250ml圆底烧瓶中添加HATU(4.56g，12mmol)并将混合物在RT下搅拌30min。添加叔丁基哌嗪-1-甲酸酯(1.86g，10mmol)和DIPEA(2.58g，20mmol)并将RM在RT下搅拌2h。除去溶剂，将残余物溶于EtOAc，用水和盐水洗涤，将合并的有机相经Na₂SO₄干燥，蒸发，并将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至15％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(4.17g)。

方法G：Rt＝1.94min；MS m/z[M+H]⁺432。

步骤2：叔丁基4-(哌啶-4-羰基)哌嗪-1-甲酸酯

向经吹扫并在惰性气氛下维持的500ml圆底烧瓶中添加叔丁基4-(1-(苄基氧基羰基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-甲酸酯(4.17g，9.67mmol)、THF(120ml)和Pd/C(1g，10％w/w)。在H₂气氛下，将RM在RT下搅拌16h。将RM过滤并将滤液浓缩，产生呈固体的标题化合物(2.85g)。

方法J：Rt＝1.51min；MS m/z[M+H]⁺298。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ3.43(d,J＝26.3Hz,4H),3.29(d,J＝25.9Hz,4H),2.91(d,J＝12.2Hz,2H),2.70-2.59(m,1H),2.55-2.51(m,1H),2.48-2.4(m,1H),1.59-1.32(m,13H)。

步骤3：叔丁基4-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-甲酸酯

向250ml圆底烧瓶中添加3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，197mg，0.75mmol)、DMF(5ml)和HATU(309mg，0.81mmol)并将RM在RT下搅拌0.5h。添加叔丁基4-(哌啶-4-羰基)哌嗪-1-甲酸酯(200mg，0.68mmol)和K₂CO₃(280mg，2.03mmol)并将RM在RT下搅拌3h。将混合物倒入水中，用EtOAc和DCM萃取，将合并的有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，蒸发，并将残余物通过反相色谱法(在Agela C18柱(球形20-35μm，40g)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(380mg)。

方法J：Rt＝1.63min；MS m/z[M+H]⁺544。

步骤4：1-(2-甲氧基-5-(4-(哌嗪-1-羰基)哌啶-1-羰基)苯基)-二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

向100ml圆底烧瓶中添加叔丁基4-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-甲酸酯(350mg，0.64mmol)、MeOH(0.5ml)和1,4-二噁烷(4ml)并将RM冷却至5℃。缓慢添加HCl在1,4-二噁烷(1ml，4mmol)中的溶液(4M)，将RM在RT下搅拌1h，浓缩，将残余物溶解于DMF(2ml)中并添加NaHCO₃(200mg)。将混合物在RT下搅拌0.5h，并然后通过反相色谱法(在Agela C18柱(球形20-35μm，40g)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(233mg)。

方法F：Rt＝0.75min；MS m/z[M+H]⁺444。

步骤5：N-(3-(6-(4-((4-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向10ml圆底烧瓶中添加1-(2-甲氧基-5-(4-(哌嗪-1-羰基)哌啶-1-羰基)苯基)-二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(233mg，0.53mmol)、2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，251mg，0.48mmol)和DMSO(2ml)。在RT下，添加在THF中的ZnCl₂溶液(1M)(0.5ml，0.5mmol)，并将RM搅拌30min。添加固体NaBH₃CN(60mg，0.96mmol)并将RM在RT下搅拌30min。添加MeOH(2ml)并将所得的RM在RT下搅拌16h，浓缩，倒入水中，过滤，将固体用水洗涤，干燥，并然后将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至10％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(209mg)。

方法J：Rt＝1.22min；MS m/z[M+H]⁺955。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.77(s,1H),10.32(s,1H),9.94(s,1H),8.85(s,1H),7.96(d,J＝8.2Hz,2H),7.78-7.61(m,2H),7.45-7.15(m,8H),6.84(s,1H),5.30(s,1H),3.80(s,3H),3.64-3.32(m,8H),3.22-2.93(m,4H),2.69-2.64(m,2H),2.41-2.33(m,5H),2.18(s,3H),1.76-1.38(m,10H)。

化合物34：

N-(3-(6-(4-(2-(4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-甲酸酯

将3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，1.20g，4.54mmol)溶解于DMF(15ml)中，添加叔丁基4-(哌啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸酯(中间体10，1.292g，4.54mmol)和DIPEA(1.586ml，9.08mmol)，然后添加HBTU(2.067g，5.45mmol)并将RM在RT下搅拌2.5h。将RM倒入冰水中，并将混合物用DCM萃取。将合并的有机相经MgSO₄干燥，蒸发并将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至20％)洗脱)纯化，以提供油状物。将油状物溶解于EtOAc，将溶液用水和盐水(1:1)的混合物、盐水洗涤，经MgSO₄干燥并浓缩以提供呈固体的标题化合物(2.43g)。

方法A：Rt＝0.93min；[M+H]⁺＝531.4。

步骤2：1-(2-甲氧基-5-(4-(哌啶-4-基氧基)哌啶-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

在RT下，将叔丁基4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-甲酸酯(1g，1.885mmol)溶解于DCM(3ml)，添加TFA(3ml，38.9mmol)并将RM在RT下搅拌2h。将RM蒸发至干燥并进行干燥以提供呈TFA盐的标题化合物(1.15g)。

方法A：Rt＝0.43min；[M+H]+＝431.4。

步骤3：N-(3-(6-(4-(2-(4-((1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)乙基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

在氩气氛下，在RT下，将4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯乙基甲磺酸酯(中间体13，300mg，0.411mmol)溶解于干燥的DMF和干燥的ACN(2:5)的混合物(7ml)中，并添加1-(2-甲氧基-5-(4-(哌啶-4-基氧基)哌啶-1-羰基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮三氟乙酸酯(460mg，0.845mmol)、K₂CO₃(341mg，2.465mmol)和干燥的ACN(3ml)。将RM在50℃下搅拌63h，冷却至0℃，用ACN稀释，并添加TFA(0.380ml，4.93mmol)。将混合物在HM-N上吸附并干燥并将残余物通过反相色谱法(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从5％至100％)洗脱)纯化，以在PL-HCO3 MP SPE筒上过滤并冷冻干燥后，提供呈固体的标题化合物(190mg)。

方法B：Rt＝3.88min；[M+H]⁺＝955.6。

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ12.74(s,1H),10.35(s,1H),9.95(s,1H),8.84(s,1H),7.89(d,J＝8.1Hz,2H),7.73(t,J＝7.8Hz,1H),7.66(d,J＝10.0Hz,1H),7.45-7.39(m,2H),7.38(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),7.34(d,J＝2.1Hz,1H),7.32(d,J＝8.1Hz,2H),7.23(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),7.15(d,J＝8.6Hz,1H),6.8-6.75(m,1H),5.31(s,1H),3.84(s,3H),3.7-3.6(m,2H),3.59(t,J＝6.6Hz,3H),3.5-3.4(m,1H),3.20(t,J＝11.3Hz,2H),2.8-2.7(m,4H),2.7-2.6(m,2H),2.6-2.5(m,2H),2.17(s,3H),2.15-2.05(m,2H),1.75-1.60(m,4H),1.45(s,6H),1.45-1.3(m,4H)。

化合物35：

N-(3-(6-(4-((8-(2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺基)乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-2-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基8-(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-甲酸酯

在15℃下，向50ml圆底烧瓶中添加叔丁基2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-甲酸酯(320mg，1.41mmol)、2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙醛(321mg，1.70mmol)、MeOH(15ml)和AcOH(20滴)并将RM在15℃下搅拌1h。添加固体NaBH₃CN(133mg，2.12mmol)并将RM在15℃下搅拌6h。将RM浓缩，再次溶解于EtOAc和NaHCO₃的水性溶液(10％)的混合物中，并分离各相。将水相用EtOAc萃取，并将合并的有机相用水洗涤，浓缩，并无需进一步纯化即可直接用于下一步。获得呈固体的标题化合物(520mg)。

方法F：Rt＝1.44min；MS m/z[M+H]⁺414。

步骤2：叔丁基2-(2-氨基乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸酯

在15℃下向100ml圆底烧瓶中添加叔丁基8-(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-甲酸酯(320mg，0.774mmol)、EtOH(15ml)和水合肼(240mg，4.8mmol)。将RM在40℃下搅拌18h，过滤，浓缩，并将残余物再次溶解于DCM和NaHCO₃的水性溶液(10％)的混合物中。分离各相，并将水相用DCM萃取，将合并的有机相浓缩并将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从0至7％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(160mg)。

方法J：Rt＝1.57min；MS m/z[M+H]⁺284。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ3.45-3.27(m,4H),2.77(t,J＝6.2Hz,2H),2.58(s,2H),2.48(t,J＝6.2Hz,2H),2.39(s,2H),1.66-1.61(m,2H),1.51(dd,J＝9.5,5.1Hz,4H),1.45(s,9H)。

步骤3：叔丁基8-(2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺基)乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-甲酸酯

在RT下向50ml圆底烧瓶中添加3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，150mg，0.56mmol)、叔丁基2-(2-氨基乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸酯(100mg，0.62mmol)、DIPEA(220mg，1.70mmol)、DMF(4ml)和HATU(323mg 0.85mmol)。将RM在RT下搅拌3h，浓缩，并将残余物通过反相色谱法(在Agela C18柱(球形20-35μm，80g)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(175mg)。

方法G：Rt＝1.66min；MS m/z[M+H]⁺530。

步骤4：N-(2-(2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)乙基)-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺

在RT下向100ml圆底烧瓶中缓慢添加叔丁基8-(2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺基)乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-甲酸酯(175mg，0.33mmol)在DCM(5ml)和TFA(1ml)中的溶液。将RM在RT下搅拌3h，浓缩并将残余物无需进一步纯化即可直接用于下一步。获得呈油状物呈TFA盐的标题化合物(170mg)。

方法G：Rt＝1.20min；MS m/z[M+H]⁺430。

步骤5：N-(3-(6-(4-((8-(2-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺基)乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-2-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向50ml圆底烧瓶中添加N-(2-(2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)乙基)-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰胺三氟乙酸酯(170mg)、DMSO(5ml)和K₂CO₃(114mg，0.83mmol)并将溶液在RT下搅拌30min。在RT下添加2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，145mg，0.27mmol)、和在THF中的ZnCl₂溶液(1M)(0.3ml，0.3mmol)，并将RM在RT下搅拌30min。添加固体NaBH₃CN(26mg，0.41mmol)并将RM在RT下搅拌30min.，然后添加MeOH(5ml)并将RM在RT下搅拌16h。将混合物浓缩并将残余物通过反相色谱法(在Agela C18柱(球形20-35μm，40g)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(130mg)。

方法G：Rt＝1.86min；MS m/z[M+H]⁺940。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.77(s,1H),10.37(s,1H),9.96(s,1H),8.86(s,1H),8.30(br.s,1H),7.94(d,J＝8.0Hz,2H),7.83(d,J＝8.5Hz,1H),7.76-7.72(m,2H),7.66(d,J＝8.5Hz,1H),7.44-7.35(m,4H),7.24(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),7.18(d,J＝8.8Hz,1H),6.84(s,1H),5.31(s,1H),3.85(s,3H),3.62-3.55(m,4H),2.72-2.55(m,5H),2.47-2.22(m,9H),2.18(s,3H),1.60-1.39(m,6H),1.45(s,6H)。

化合物36：

N-(3-(6-(4-(4-((2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙基)氨基)丁氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯氧基)丁基氨基甲酸酯

向经吹扫并在惰性气氛下维持的100ml圆底烧瓶中添加4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚(1.95g，8.86mmol)、叔丁基4-羟基丁基氨基甲酸酯(1.843g，9.75mmol)、三苯基膦(3.483g，13.3mmol)和干燥的THF(50ml)。将RM冷却至0℃并经20min的时间段在0℃下滴加DIAD(3.223g，15.98mmol)。然后使RM温热至RT并继续搅拌16h。将混合物浓缩并将残余物通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从10％至25％)洗脱)纯化，产生呈油状物的标题化合物(3.19g)。

方法H：Rt＝2.26min；MS m/z[M+H-55]⁺336。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.73(dd,J＝8.5,1.7Hz,2H),6.90-6.85(m,2H),4.61(s,1H),4.00(t,J＝6.2Hz,2H),3.25-3.14(m,2H),1.86-1.77(m,2H),1.71-1.63(m,2H),1.44(s,9H),1.33(s,14H)。

步骤2：叔丁基3-(4-(4-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯氧基)丙基氨基甲酸酯

向经吹扫并在惰性气氛下维持的100ml圆底烧瓶中添加叔丁基4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯氧基)丁基氨基甲酸酯(1.500g，3.836mmol)、4-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(中间体7，1.768g，4.22mmol)、PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂加合物(235mg，0.288mmol)和NaHCO₃(806mg，9.591mmol)。添加1,4-二噁烷(16ml)和水(4ml)并将RM在90℃下搅拌2h。将混合物浓缩，用水再次稀释并用DCM萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，浓缩并通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从10％至40％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(1.08g)。

方法J：Rt＝2.27min；MS m/z[M+H]⁺543.2。

步骤3：叔丁基3-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯氧基)丙基氨基甲酸酯

向经吹扫并在惰性气氛下维持的100ml圆底烧瓶中添加叔丁基3-(4-(4-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯氧基)丙基氨基甲酸酯(515mg，0.814mmol)、2-氟-N-(5-氟-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体2，374mg，0.867mmol)、PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂加合物(69mg，0.084mmol)和Na₂CO₃(223mg，2.1mmol)。添加ACN(8ml)和水(2ml)并将RM在90℃下搅拌1h。将混合物浓缩，用水再次稀释并用DCM萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，浓缩并将残余物通过硅胶色谱法(用在石油醚中的EtOAc(从10％至50％)洗脱)纯化，产生呈油状物的标题化合物(509mg)。

方法J：Rt＝2.21min；MS m/z[M+H]⁺812.3。

步骤4：N-(3-(6-(4-(3-氨基丙氧基)苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向100ml圆底烧瓶中添加在DCM(9ml)和EtOH(3ml)中的叔丁基3-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯氧基)丙基氨基甲酸酯(280mg，0.49mmol)。缓慢添加HCl在1,4-二噁烷(4.93ml，19.72mmol)中的溶液(4M)并将RM在RT下搅拌2h。将混合物浓缩，用DCM和MeOH(1:1)的混合物再次稀释并添加NaHCO₃的水性饱和溶液直至混合物达到pH 9。将混合物浓缩。在硅胶上吸附并干燥，并通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从4％至8％)洗脱)纯化，产生呈白色固体的标题化合物(280mg)。

方法E：Rt＝1.58min；MS m/z[M+H]⁺712.2。

步骤5：N-(3-(6-(4-(3-氨基丙氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向100ml圆底烧瓶中添加N-(3-(6-(4-(3-氨基丙氧基)苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(200mg，0.28mmol)、DMSO(2ml)和NaOH的水性溶液(1.1ml，1.1mmol，1.0M)。将RM在RT下搅拌1h，用HCl的水性溶液(1.0M)酸化至pH 6，并然后直接通过反相色谱法(在Agela C18柱(球形20-35μm，25g)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(152mg)。

方法J：Rt＝2.15min；MS m/z[M+H]⁺572.3。

步骤6：1-(5-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-羰基)-2-甲氧基苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

向100ml圆底烧瓶中添加2-(哌嗪-1-基)乙醇(400mg，3.07mmol)、3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酸(中间体5，812mg，3.07mmol)、HATU(1.286g，3.39mmol)、DIPEA(794mg，6.15mmol)和DMF(5ml)。将RM在RT下搅拌16h，并然后直接通过反相色谱法(在Agela C18柱(球形20-35μm，80g)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(382mg)。

方法F：Rt＝1.53min；MS m/z[M+H]⁺377.2。

步骤7：2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙醛

向经吹扫并在惰性气氛下维持的100ml圆底烧瓶中添加DCM(3ml)和草酰氯(0.21ml，2.53mmol)。在-78℃下添加DMSO(0.36ml，5.05mmol)在干燥的DCM(1ml)中的溶液，并在-78℃下搅拌RM 30min后，添加1-(5-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-羰基)-2-甲氧基苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(380mg，1.01mmol)在DCM(6ml)中的溶液。将混合物

在-78℃下搅拌1h，然后在-78℃下添加TEA(1.4ml，10.11mmol)，并将混合物在30min的时间段内温热至RT。将混合物用水稀释，用氯仿和iPrOH(3:1)的混合物萃取，将合并的有机相经Na₂SO₄干燥，浓缩，并将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从2％至5％)洗脱)纯化，产生呈固体的标题化合物(225mg)。

方法H：Rt＝1.23min；MS m/z[M+H]⁺375.1。

步骤8：N-(3-(6-(4-(4-((2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙基)氨基)丁氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向100ml圆底烧瓶中添加N-(3-(6-(4-(3-氨基丙氧基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(156mg，0.27mmol)、新鲜制备的2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲氧基苯甲酰)哌嗪-1-基)乙醛(100mg，0.27mmol)和干燥的THF(6ml)。缓慢添加在THF中的ZnCl₂溶液(1M)(0.4ml，0.4mmol)，并将混合物在RT下搅拌30min后，在0℃下添加固体NaBH₃CN(50mg，0.8mmol)和MeOH(1ml)，并将RM在RT下搅拌16h。添加HCl的水性溶液(1M)，直至混合物达到pH 6，将混合物浓缩并在硅胶上吸附，并通过硅胶色谱法(用在DCM中的MeOH(从2％至5％)洗脱)纯化。将纯化的材料通过反相色谱法(在Agela C18柱(球形20-35μm，40g)上，用在碳酸氢铵的水性溶液(10mM)中的ACN洗脱)再次纯化，产生呈固体的标题化合物(80mg)。

方法J：Rt＝1.89min；MS m/z[M+H]⁺944。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.7(br.s,1H),10.34(s,1H),9.95(s,1H),8.82(s,1H),7.92(d,J＝8.8Hz,2H),7.73(t,J＝7.9Hz,1H),7.65(d,J＝9.2Hz,1H),7.5-7.3(m,4H),7.23(dd,J＝8.8,2.7Hz,1H),7.14(d,J＝8.6Hz,1H),7.02(d,J＝8.9Hz,2H),6.72(s,1H),5.30(s,1H),4.03(t,J＝6.5Hz,2H),3.84(s,3H),3.6-3.4(m,6H),2.8-2.5(m,6H),2.45-2.30(m,6H),2.17(s,3H),1.8-1.7(m,2H),1.6-1.5(m,2H),1.45(s,6H),1.2(s,1H)。

化合物37：

N-(3-(6-(4-((4-(2-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰胺基)乙基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

步骤1：叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-甲酸酯

将叔丁基1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-甲酸酯(155mg，0.605mmol)和2-氟-N-(5-氟-3-(6-(4-甲酰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲基苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(中间体3，350mg，0.665mmol)在THF(6ml)中的混合物在60℃下搅拌过夜。添加固体NaBH(OAc)₃(384mg，1.814mmol)并在60℃下继续搅拌9h并在RT下搅拌过夜。将RM用EtOAc稀释并用NaHCO₃的水性溶液和盐水洗涤。将有机相经Na₂SO₄干燥并浓缩以提供呈固体的标题化合物(0.42g)。

方法A：Rt＝0.90min；[M+H]+＝767.5。

步骤2：N-(3-(6-(4-(1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向叔丁基9-(4-(4-(5-氟-3-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺基)-2-甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)苄基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-甲酸酯(0.42g，0.531mmol)在DCM(5ml)中的溶液中添加TFA(1.228ml，15.94mmol)。将RM在RT下搅拌1h，蒸发并将残余物通过反相HPLC(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从5％至95％)洗脱)纯化，以提供呈固体TFA盐的标题化合物(0.11g)。

方法A：Rt＝0.68min；[M+H]+＝667.5。

步骤3：3-((2-羧乙基)氨基)-4-氯苯甲酸

向3-氨基-4-氯苯甲酸(0.63g，3.67mmol)在水和AcOH(5:1)的混合物(4.8ml)中的混合物中添加丙烯酸(0.264ml，3.86mmol)。将RM在110℃下搅拌5h并然后在120℃下搅拌过夜。添加额外量的丙烯酸(1.260ml，18.36mmol)并将RM在120℃下搅拌过夜，冷却至RT并过滤。将固体用水和二异丙醚洗涤并干燥以提供呈固体的标题化合物(0.67g)。

方法A：Rt＝0.65min；[M+H]⁺＝244.1。

步骤4：4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸

向3-((2-羧乙基)氨基)-4-氯苯甲酸(0.64g，2.469mmol)中添加AcOH(14.14ml，247mmol)，然后添加脲(2.97g，49.4mmol)并将RM在120℃下搅拌过夜。添加额外量的脲(2.97g，49.4mmol)并将RM在120℃下搅拌过夜并然后在RT下放置3天。将RM用NaOH的水性溶液稀释并用EtOAc萃取。分离各相，将水相倒入冰冷的HCl的浓缩水性溶液(pH＝1)中并将混合物用DCM萃取。将合并的有机相经Na₂SO₄干燥并浓缩。将残余物吸收在二异丙醚和EtOAc(10:1)的混合物中，超声处理并过滤。将固体用二异丙醚洗涤并干燥以提供呈固体的标题化合物(0.11g)。

方法A：Rt＝0.50min；[M+H]⁺＝267.1。

步骤5：N-((1,3-二氧戊环-2-基)甲基)-4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰胺

向4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酸(95mg，0.329mmol)在DMA(2ml)中的混合物中添加HATU(163mg，0.428mmol)，然后添加DIPEA(0.230ml，1.315mmol)。15min后，添加(1,3-二氧戊环-2-基)甲胺(40.7mg，0.395mmol)并将RM在RT下搅拌过夜。将RM过滤并将滤液通过反相HPLC(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从5％至95％)洗脱)纯化，以提供呈固体的标题化合物(30mg)。

方法A：Rt＝0.53min；[M+H]⁺＝354.2。

步骤6：4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-N-(2-氧代乙基)苯甲酰胺

将N-((1,3-二氧戊环-2-基)甲基)-4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰胺(30mg，0.085mmol)溶解于甲酸(0.325ml，8.48mmol)并将RM在RT下搅拌过夜。然后将RM用水稀释并冷冻干燥以提供呈固体的标题化合物(20mg)。

方法A：Rt＝0.44min；[M+H]⁺＝310.1。

步骤7：N-(3-(6-(4-((4-(2-(4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲酰胺基)乙基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺

向N-(3-(6-(4-(1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基甲基)苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯基)-2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺三氟乙酸酯(0.050g，0.065mmol)和4-氯-3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-N-(2-氧代乙基)苯甲酰胺(0.02g，0.065mmol)在MeOH(3ml)中的混合物中添加TEA(0.027ml，0.194mmol)，然后添加在THF中的ZnCl₂溶液(0.5M)(0.142ml，0.071mmol)，并将RM在RT下搅拌3h。添加固体NaBH₃CN(4.46mg，0.071mmol)，将RM在RT下搅拌过夜并过滤。将滤液浓缩，添加几滴TFA并将残余物通过反相HPLC(在C18柱上，用在TFA的水性溶液(0.1％)中的ACN(从5％至95％)洗脱)纯化。合并含有纯材料的级分，用NaHCO₃的水性溶液碱化，并用EtOAc萃取。将合并的有机相浓缩，将残余物溶解于含有几滴水的叔丁醇中并冷冻干燥以提供呈固体的标题化合物(30.5mg)。

方法B：Rt＝3.42min；[M+H]⁺＝960.6。

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ12.79(s,1H),10.56(s,1H),9.97(s,1H),8.87(s,1H),8.52(t,J＝5.7Hz,1H),8.02-7.89(m,3H),7.81(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),7.74(t,J＝7.9Hz,1H),7.72-7.64(m,2H),7.49-7.34(m,4H),7.25(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),6.9-6.8(m,1H),5.32(s,1H),3.8-3.7(m,1H),3.67-3.57(m,4H),3.55-3.45(m,2H),3.4-3.3(m,2H),3.32(s,2H),2.8-2.7(m,2H),2.41(s,1H),2.45-2.2(m,9H),1.8-1.7(m,2H),1.51(m,2H),1.46(s,6H)。

表1中所述的化合物以与上述化合物类似的方式并通过遵循一般合成方案中概述的原理而获得。

测定说明

在以下细胞测定中测试了本发明的化合物。获得的数据示于表2中。表2中的术语定义如下：DC₅₀是指观察到50％最大降解时的浓度；deg Amax是降解的程度，该值是指在看到最大降解的浓度下残留的蛋白质％；Prol GI₅₀是指增殖数据，并定义了在孵育时间结束时与媒介物处理的对照相比观察到50％生长抑制的浓度。TMD8细胞是BTK依赖性的，而OCI-LY3细胞是非BTK依赖性的。

HEK293A细胞中的BTK-GFP和IKZF3-GFP蛋白丰度流式细胞术测定：

在分别从稳定整合的双顺反子BTK-GFP-iresRFP或IKZF3-GFP-iresRFP构建体表达BTK-GFP和RFP或IKZF3-GFP和RFP的HEK293A细胞(英杰公司R70507)中测量了BTK或IKZF3的降解。通过流式细胞术测量的GFP信号的减少充当降解剂处理后BTK或IKZF3降解的读数。

i)pLenti6-BTK-GFP-Ires-RFP和IKZF3-GFP-Ires-RFP传感器载体的克隆

双顺反子BTK-GFP-iresRFP构建体基于pLenti6-DEST载体主链，其中将GFP引入目的盒下游(DEST)下游的独特Xho1位点，并将RFP克隆到内部核糖体进入位点(Ires)之后。

详细地，通过用GFP代替纳米萤光素酶(NLuc)和用来自pLenti6-DEST-NLuc-Ires-FF的RFP代替萤火虫荧光素酶(FF)来工程化传感器构建体。

通过使用平末端克隆替换两个PmlI之间的Ires-eGFP，用合成的填充元件(其编码Ires-FF，其中FF的两侧为两个Nhe1限制位点)替换来自pLenti6-DEST-Ires-eGFP的eGFP，从而克隆pLenti6-DEST-NLuc-Ires-FF传感器构建体。为了能够用纳米荧光素酶(NLuc)进行C端标记，使用具有Xho1位点的接头引物从pNL1.1(普洛麦格公司#N1001)扩增NLuc，以使用Xho1消化物连接到线性化的pLenti6-DEST-Ires-FF中，从而产生构建体pLenti6-DEST-NLuc-Ires-FF。

使用吉布森(Gibson)组装将pLenti6-DEST-NLuc-Ires-FF用作克隆pLenti6-DEST-GFP-Ires-RFP的基本载体，从而用RFP代替FF并用GFP代替NLuc。在第一轮中，通过使用以下吉布森组装接头引物(Gibson-Nhe1 RFPfw，CGATGAATTCGCCACCgctagcATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGC(SEQ ID NO:1)；Gibson-Nhe1 RFP-Stoprev，CTCATTACTAACCGGctagcTTACTTGTACAGCTCGTCCATGC(SEQ ID NO:2))从模板扩增RFP，以RFP取代FF，以克隆到经Nhe1消化并凝胶纯化以去除FF片段的pLenti6-DEST-NLuc-Ires-FF中。所得的pLenti6-DEST-NLuc-Ires-RFP载体用作模板，通过使用以下吉布森组装接头引物(Gibson-Xho1 GFPfw，CCAGCACAGTGGCGGCCGCTCGAGcATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACC(SEQ ID NO:3)；Gibson-Xho1GFP-Stoprev，CCGCGGGCCCTCTAGACTCGAGTTACTTGTACAGCTCGTCCATGCCGAGAGT(SEQ ID NO:4))从模板扩增GFP来用GFP替代NLuc，以克隆到经Xho1消化并凝胶纯化以去除NLuc片段的pLenti6-DEST-NLuc-Ires-RFP中。根据制造商手册，使用吉布森组装预混合液(新英格兰生物实验室(New England Biolabs)NEB E2611L)进行所有吉布森组装反应，得到目的载体pLenti6-DEST-GFP-Ires-RFP以进行Gateway克隆。

为了实现BTK的gateway克隆和C-末端GFP标记，首先根据制造商手册(英杰公司11789-013)使用gateway BP反应将BTK可读框(ORF)从pcDNA-DEST40-BTK载体(英杰公司文库ID INV_20090504v1)穿入pDONR221(英杰公司12536-017)载体，产生新的构建体pENTR221-BTK。对于C-末端标记，根据制造商手册，使用QuikChange Lightning诱变试剂盒(安捷伦科技公司(Agilent Technologies)#210518)，用以下引物(pENTR221-BTKQuikchange STOP-Leu fw，gtcatggatgaagaatccTTGaacccagctttcttgtac；pENTR221-BTKQuikchange STOP-Leu REVC，gtacaagaaagctgggttCAAggattcttcatccatgac)进行诱变反应，将STOP密码子突变为亮氨酸，产生pENTR221-BTK(STOP-Leu)。

为了获得最终的pLenti6-BTK-GFP-Ires-RFP传感器构建体，根据制造商手册，使用LR克隆酶试剂盒(英杰公司11791-019)，在pLenti6-DEST-GFP-Ires-RFP和pENTR221-BTK(STOP-Leu)之间进行Gateway LR反应。所描述的所有载体均已测序进行验证。

根据制造商手册，使用LR克隆酶试剂盒(英杰公司11791-019)，通过类比，通过将IKZF3从pENTR221-IKZF3(STOP-Leu)构建体gateway克隆到先前描述的pLenti6-DEST-GFP-Ires-RFP载体中来工程化双顺反子pLenti6-IKZF3-GFP-iresRFP。所描述的所有载体均已测序进行验证。

为了实现IKZF3的gateway克隆和C-末端GFP标记，根据制造商手册，使用QuikChange Lightning诱变试剂盒(安捷伦科技公司(Agilent Technologies)#210518)，用以下引物(pENTR221-IKZF3 Quikchange STOP-Leu fw，AGAGCCCTGCTGAAGttgaaccCAGCTTTcttgtac(SEQ ID NO:5)；pENTR221-IKZF3 Quikchange STOP-Leu REVC，gtacaagAAAGCTGggttcaaCTTCAGCAGGGCTCT(SEQ ID NO:6))进行诱变反应，将STOP密码子从pENTR221-IKZF3(英杰公司#INVE089_A8)突变为亮氨酸，产生pENTR221-IKZF3(STOP-Leu)。

ii)工程化稳定表达的293ABTK-GFP-Ires-RFP和IKZF3-GFP-Ires-RFP传感器细胞

使用之前描述的pLenti6-BTK-GFP-Ires-RFP或pLenti6-IKZF3-GFP-Ires-RFP传感器构建体通过慢病毒载体转导产生293A BTK-GFP-Ires-RFP和IKZF3-GFP-Ires-RFP传感器细胞。通过在100μl OptiMEM无血清培养基(英杰公司#11058-021)(将其与3μl的Lipofectamine2000(英杰公司#11668-019)在97μl OptiMEM无血清培养基中预孵育5min后混合)中稀释的500ng pLenti6-BTK-GFP-Ires-RFP或pLenti6-IKZF3-GFP-Ires-RFP、500ngdelta8.71和200ng pVSVG的共转染，在HEK293FT细胞(英杰公司R70007)中产生慢病毒颗粒。将混合物在RT下再孵育20min，然后添加到6孔板孔中的1ml新鲜制备的HEK293FT细胞悬浮液中(浓度1.2x 10⁶个细胞/ml)。转染后1天，将培养基替换为1.5ml完全生长培养基(DMEM高葡萄糖+10％FCS+1％L-谷氨酰胺+1％NEAA+1％NaPyr.)。转染后48h，收集含有病毒转导颗粒的上清液，并将其冷冻在-80℃下。

在用病毒颗粒转导前两天，将1x 10⁵个HEK293A细胞(英杰公司R70507)接种到6孔板孔中的2ml生长培养基中。用90μl收集的含有病毒转导颗粒的上清液在1ml包括8μg/ml聚凝胺的培养基中进行感染。感染后24h，用杀稻瘟素以8μg/ml的浓度选择稳定转染的细胞。

iii)定量BTK-GFP和IKZF3-GFP丰度测量

将稳定的HEK293A-BTK-GFP-iresRFP细胞保持在完全生长培养基(DMEM高葡萄糖+10％FCS+1％L-谷氨酰胺+1％NEAA+1％NaPyr.)中，每周传代两次。在第0天，将HEK293A-BTK-GFP-iresRFP或HEK293A-IKZF3-GFP-iresRFP和HEK293A-iresRFP细胞以10,000个细胞/孔接种在260μl完全培养基中的96孔微量滴定板中。在第1天，使用HP D300数字分配器(帝肯公司(Tecan))用10点1:3稀释系列化合物一式两份处理细胞。将整个板上的DMSO浓度标准化为0.1％。在第2天，在37℃下孵育24h后，弃去处理培养基，用100ul/孔PBS冲洗细胞，并然后使用40ul胰蛋白酶/孔分离5min。用100ul/孔PBS+20％FCS中和胰蛋白酶。使用BDFACS CANTO II(贝迪公司(Becton Dickinson))对样品进行流式细胞术。然后使用前向(FSC)对侧向散射(SSC)图进行细胞鉴定。使用SSC宽度(SSC-W)对SSC高度(SSC-H)图进行单细胞区分。将5,000个单细胞的GFP中值用于确定BTK水平。将来自HEK293A-iresRFP的GFP中值用作背景信号，并且因此定义为0％BTK信号。将来自DMSO处理的HEK293A-BTK-GFP-iresRFP或HEK293A-IKZF3-GFP-iresRFP的中值GFP值用于定义100％BTK信号，用于随后的DC₅₀曲线(50％BTK降解时的浓度)。分别在称为FITC和PE的通道中读取GFP和RFP。

绘制GFP信号的相对减少(通过流式细胞术测量)相对于化合物的10种化合物浓度(起始浓度10μM，3倍稀释步骤)的浓度应答曲线可以产生DC₅₀值。

对于IKZF3丰度测定，将文献分子泊马度胺和来那度胺作为阳性对照化合物进行测试。数据示于表3，其中DC₅₀是指观察到50％最大降解时的浓度；deg Amax是降解的程度，该值是指在看到最大降解的浓度下残留的蛋白质％。

在TMD8细胞中的BTK(C481S)-GFP蛋白丰度流式细胞术

在表达BTK(C481S)-GFP和mCherry的TMD8细胞中，从稳定整合的第二代双顺反子BTK(C481S)-GFP-CHYSEL-mCherry构建体中测量BTK(C481S)的降解。通过流式细胞术测量的GFP信号的减少充当降解剂处理后BTK(C481S)降解的读数。

pLenti6- BTK(C481S)-GFP-CHYSEL-mCherry传感器载体的克隆

BTK(C481S)蛋白丰度传感器基于第二代双顺反子构建体，其中2个阅读框BTK(C481S)和mCherry对照由顺式作用水解酶元件隔开(参见：Lo等人,2015Cell Reports[细胞报告]13,2634)，从前面描述的第一代载体中替换Ires。

双顺反子BTK(C481S)-GFP-CHYSEL-mCherry构建体基于pLenti6-DEST载体骨架，其中合成GFP-CHYSEL-mCherry盒并通过吉布森组装将其插入DEST盒的下游，产生新的gateway相容载体pLenti6-DEST-GFP-CHYSEL-mCherry以允许使用pENTR221-BTK(C481S)(STOP-Leu)进行gateway克隆以获得最终传感器构建体pLenti6-BTK(C481S)-GFP-CHYSEL-mCherry。通过用根据制造商手册进行的、使用QuikChange Lightning诱变试剂盒(安捷伦科技公司(Agilent Technologies)#210518)，用以下引物(BTK C481S Quikchange fw，gagtacatggccaatggctCcctcctgaactacctgagg(SEQ ID NO:7)；BTK C481S Quikchange REVC，cctcaggtagttcaggaggGagccattggccatgtactc(SEQ ID NO:8))在pENTR221-BTK(STOP-Leu)上进行诱变反应，将野生型BTK突变为BTK(C481S)来产生pENTR221-BTK(C481S)(STOP-Leu)，从而生成pENTR221-BTK(C481S)(STOP-Leu)。

合成构建体的序列(Xho1位点以粗体显示，mCherry-ORF以小写字母显示)：

稳定表达的TMD8 BTK(C481S)-GFP-CHYSEL-mCherry传感器细胞的工程化

使用之前描述的pLenti6-BTK(C481S)-GFP-CHYSEL-mCherry传感器构建体通过慢病毒载体转导产生TMD8 BTK(C481S)-GFP-CHYSEL-mCherry传感器细胞。通过在100μlOptiMEM无血清培养基(英杰公司#11058-021)(将其与3μl的Lipofectamine2000(英杰公司#11668-019)在97μl OptiMEM无血清培养基中预孵育5min后混合)中稀释的500ngpLenti6-BTK-GFP-Ires-RFP或pLenti6-IKZF3-GFP-Ires-RFP、500ng delta8.71和200ngpVSVG的共转染，在HEK293FT细胞(英杰公司R70007)中产生慢病毒颗粒。将混合物在RT下再孵育20min，然后添加到6孔板孔中的1ml新鲜制备的HEK293FT细胞悬浮液中(浓度1.2x 10⁶个细胞/ml)。转染后1天，将培养基替换为1.5ml完全生长培养基(DMEM高葡萄糖+10％FCS+1％L-谷氨酰胺+1％NEAA+1％NaPyr.)。转染后48h，收集含有病毒转导颗粒的上清液，并将其冷冻在-80℃下。

DLBCL(弥漫性大B细胞淋巴瘤)细胞中的细胞活力测定：

通过基于刃天青(Resazurin)(西格玛公司，#R7017)的细胞活力测定法测量BTK化合物对细胞增殖的作用。将TMD8(对BTK化合物敏感)和OCI-LY3(对BTK化合物不敏感)细胞与相应化合物一起在37℃和5％CO₂下孵育72h。刃天青是无毒的、细胞可渗透的底物，其实际上是无荧光的。进入活细胞后，刃天青(西格玛公司，#R7017)还原为荧光强的试卤灵(Resorufin)。通过测量荧光信号(激发谱530nm；发射谱600nm)来评估代谢活性。

将TMD8和OCI-Ly3细胞在第0天一式三份接种在96孔板(科斯塔尔公司(Costar)#3904)中，每150μl/孔的细胞密度为1x 10⁴个细胞。为了在实验开始时评估两种细胞系的基础代谢活性，准备了其他板。对于这些参照板，在接种后3h添加刃天青(西格玛公司，#R7017)至终浓度为13μg/ml，并在37℃和5％CO₂下孵育2h。孵育后，在Mithras LB940多模式读板器上以530/600nm(德国伯托公司(Berthold Technologies,Germany))测量96孔板的荧光信号强度。

平行地，在接种后3h，用各种浓度的化合物或单独用媒介物(DMSO)处理试验板3天。使用HP D300数字分配器(瑞士帝肯公司(TECAN,Switzerland))将化合物添加到板中。将化合物一式三份以8点连续稀释(1:4)进行测试，其中OCI-LY3和TMD8细胞的起始浓度分别为10μM和1μM。为了评估细胞的相对增殖，将刃天青直接添加到培养基的每个孔中，至最终浓度为13μg/ml。将板在37℃和5％CO₂下孵育2h以产生72h终点。孵育后，在MithrasLB940多模式读板器上以530/600nm(德国伯托公司(Berthold Technologies,Germany))测量96孔板的荧光信号强度。试卤灵染料的形成与代谢活性细胞的数量直接相关。对于每次一式三份的处理，计算平均值和标准偏差，并通过曲线拟合软件进行分析，以确定各自的化合物浓度，从而得出50％生长抑制(GI₅₀)值。对于每种化合物，GI₅₀值通常由至少2个完全独立的实验确定。

OCI-LY3细胞是通过与加拿大多伦多教学医院(University Health Network,Toronto,Canada)达成的许可协议获得的。在RPMI1640培养基(Gibco公司，#61870-010，批次1894759)中培养细胞，该培养基补充有10％FCS(HyClone公司，GE#SH30066.03，批次AB217603)、2mM L-谷氨酰胺(生物概念公司(BioConcept)，#5-10K50-H，批次LA03467P)、1mM丙酮酸钠(生物概念公司，#5-60F00-H，批次LB10510P)、10mM HEPES(Gibco公司，#15630-056，批次1854074)、1％Pen/Strep(生物概念公司，#4-01F00-H，批次LB04235P)。

TMD8细胞是通过与日本东京医科齿科大学(Tokyo Medical and DentalUniversity,Japan)达成的许可协议获得的。在MEM Alpha培养基(生物概念公司，#1-23F01-I，批次LB04262P)中培养细胞，该培养基补充有10％FCS(HyClone公司，GE#SH30066.03，批次AB217603)、2mM L-谷氨酰胺(生物概念公司，#5-10K50-H，批次LA03467P)、1％Pen/Strep(生物概念公司，#4-01F00-H，批次LB04235P)。

n.d.＝未确定

Claims

1.一种具有式(I)的化合物，

其中：

R¹、R^1a、R²和R^2a在每次出现时独立地选自H和F；

R⁶是H或F；

R⁷选自H、F、Cl、-CH₃、-OCH₃和-OCH₂CH₃；

X¹是具有式(A)或(B)的基团：

其中，

*X^1a选自*-(CH₂)_1-3-和*-CH₂C(CH₃)₂-，其中所述*表示所述X^1a基团与式(I)中的苯基环的附接点；

*X^1b选自*-O-、*-OCH₂-和*-CH₂O-，其中所述*表示所述X^1b基团与式(I)中的苯基环的附接点；

X^2a选自式(C)、(D)、(E)、(F)和(G)：

其中**表示与X^1a的附接点；

X^2b选自式(E1)和(F1)：

其中**表示与X^1b的附接点；

X⁵是CH或N；

X⁶是CH或N；

R³是H或-CH₃；

R⁴是H或-CH₂OH；

R⁵是H或-CH₂OH；

Z^2a不存在或是-NH(CH₂)₄-**；

Z^2b是-(CH₂)_3-4NH(CH₂)₂-**；

q是0或1；并且

n和p独立地是0或1；并且

或其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ia)：

3.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁶是H。

4.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁷是-OCH₃。

5.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中X¹是具有式(A)的基团：

并且X^2a选自式(C)、(E)和(F)：

其中**表示与X^1a的附接点。

6.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，X¹选自：

其中*表示式(I)或(Ia)中与苯基环附接的原子。

7.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物是：

或其药学上可接受的盐。

8.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体。

9.一种组合，所述组合包含根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种治疗活性剂。

10.根据权利要求1、2和7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于作为药物使用。

11.根据权利要求1、2和7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在预防或治疗由BTK介导的疾病中使用。

12.根据权利要求1、2和7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗癌症中使用。

13.用于根据权利要求12所述使用的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症选自慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、里氏综合征、和前体B淋巴母细胞淋巴瘤、原发性和继发性的多发性骨髓瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾脏边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、淋巴结外边缘区B细胞淋巴瘤、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、纵隔大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、和急性成淋巴细胞性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、移植后淋巴组织增生性障碍、毛细胞白血病、组织细胞性和树突状肿瘤。

14.用于根据权利要求12所述使用的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症选自胸腺大B细胞淋巴瘤。

15.根据权利要求1、2和7中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐，用于在治疗自身免疫障碍、炎性障碍、过敏性疾病和气道疾病中使用，以及用于在移植中使用。

16.根据权利要求1、2和7中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐，用于在治疗过敏反应中使用。

17.根据权利要求1、2和7中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐，用于在治疗过敏性哮喘中使用。

18.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗癌症，其中所述癌症选自慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、里氏综合征、和前体B淋巴母细胞淋巴瘤、原发性和继发性的多发性骨髓瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾脏边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、淋巴结外边缘区B细胞淋巴瘤、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、纵隔大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、和急性成淋巴细胞性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、移植后淋巴组织增生性障碍、毛细胞白血病、组织细胞性和树突状肿瘤。

19.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗癌症，其中所述癌症选自胸腺大B细胞淋巴瘤。