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CN111771719A - 一种珍珠绣线菊的组培快繁方法 - Google Patents

一种珍珠绣线菊的组培快繁方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于植株组织培养领域，具体涉及一种珍珠绣线菊的组培快繁方法。步骤包括：初代培养：取珍珠绣线菊嫰枝剪成小枝条，经杀毒灭菌后斜插入初代培养基中接种，得无菌幼苗；增殖培养：将无菌幼苗切取成带芽茎段，放至增殖培养基，进行愈伤组织的增殖分化，得到丛生芽；生根培养：将丛生芽切成带芽段，接种至生根培养基，得到生根苗。本发明初代萌发率高，萌发时间短，增殖系数最高为19.75，其繁殖比例远高于扦插方法，生根率可达100%，根系发达，长势好，具有较大的经济价值。

Description

一种珍珠绣线菊的组培快繁方法
技术领域
本发明属于植株组织培养领域，具体涉及一种珍珠绣线菊的组培快繁方法。
背景技术
珍珠绣线菊(Spiraea thunbergii Bl.)蔷薇科、绣线菊属灌木，高可达到1.5米。花期较早，花开密集如雪，白洁无暇，叶片轻薄如羽，其具有极高的观赏价值，同时该植物抗逆性强，耐旱耐寒，亦无病虫害，喜光，不耐荫蔽，喜生于湿润且排水良好的土壤，栽培管理方便。珍珠绣线菊作为花镜、花带是一个不错的选择，其优良的特性还可作为鲜切花创造商业价值。然而目前在南方，珍珠绣线菊在园林景观造景中还没有得到充分的应用，关键在于珍珠绣线菊没有得到足够的扩繁，使其观赏价值无从体现。现有技术中珍珠绣线菊的培育基本都是通过播种和扦插，播种的优点碍于一次繁殖量大，幼苗根系完整，生长健壮，缺点在于发育周期长，且繁殖系数低，受季节影响较大，开花较迟；因此扦插技术开始兴起，如中国专利CN110999645A公开的一种珍行足绣线菊的繁殖方法，则是通过将珍珠绣线菊的嫩枝经过消毒、截穗等步骤进行生根培养，生根快、成本低，但对插穗要求较高，一般老枝不适合于扦插；且对土壤和肥料的要求较高；新长的根系较弱，因此成活率低。综上所述，研发出一种适合珍珠绣线菊组培快繁的研究技术，促进珍珠绣线菊的广泛应用，是当前的研发方向。
发明内容
为解决现有技术中珍珠绣线菊繁殖培育过程成活率低，增殖系数低的缺点，填补组培珍珠绣线菊的空缺，本发明提供一种珍珠绣线菊的组培快繁方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种珍珠绣线菊的组培快繁方法，包括以下步骤：
初代培养：取珍珠绣线菊嫰枝剪成小枝条，经杀毒灭菌后斜插入初代培养基中接种，得无菌幼苗；所述初代培养基的成分为：1/2MS(3/4Fe)+25g/L蔗糖+6g/L琼脂；
增殖培养：将无菌幼苗切取成带芽茎段，放至增殖培养基，进行愈伤组织的增殖分化，得到丛生芽；所述增殖培养基的成分为：1/2MS(3/4Fe)+(1～2)mg/L 6-BA+(0.2～0.6)mg/LGA3+25g/L蔗糖+6g/L琼脂；
生根培养：将丛生芽切成带芽段，接种至生根培养基，得到生根苗，然后进行移栽，所述生根培养基的成分为：1/2MS(3/4Fe)+(0.1～0.3)mg/L IBA+0.1mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂。
进一步地，所述小枝条的长度为2～3cm，每个所述枝条上带有2～4个芽。
进一步地，所述消毒灭菌的具体步骤为：将小枝条放置在超净工作台上，用75％酒精杀毒40s，倒出酒精，使用无菌水快速冲洗1遍，再倒入2％的次氯酸钠灭菌6min，倒出次氯酸钠，无菌水冲洗3次，经滤纸过滤掉多余水分。
进一步地，所述带芽茎段的长度为1.5～2.5cm，每个所述带芽茎段上带有2～3个芽。
进一步地，所述培养温度为22℃～26℃，培养基中的pH为5.8～6.0，所述生根苗移栽7天内湿度为95％，7天之后湿度为80％。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明采用组织培养的方法对珍珠绣线菊进行繁殖培育，将珍珠绣线菊嫰枝经过初代培养得无菌幼苗、带芽茎段增殖培养分化丛生芽和带芽段生根培养成幼苗。本发明中各培养基均采用1/2MS作为基本培养基，且仅采用了其3/4铁盐浓度来配合珍珠绣线菊根系耐盐碱度高的特性，从而达到更好的培育效果，其中初代萌发率高，萌发时间短，增殖系数最高为19.75，其繁殖比例远高于扦插方法，生根率可达100％，根系发达，成活率高，长势好，具有较大的经济价值。
附图说明
图1为实施例3中分组3的生长情况；
图2为实施例3中分组2的生长情况；
图3为实施例4中分组C2的生长情况；
图4为实施例4中分组C4的生长情况；
图5为实施例5中分组2的生长情况；
图6为实施例5中分组5的生长情况。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未标明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1珍珠绣线菊的组培快繁方法
外植体处理：于6月上旬，采集珍珠绣线菊的当年生嫩枝作为试验材料，将其用枝剪截断成2～3CM左右并带2～4个芽的小枝条，放置在超净工作台上，用75％酒精灭菌40s，倒出酒精，使用无菌水快速冲洗1遍；再倒入2％的次氯酸钠灭菌6min，倒出次氯酸钠，无菌水冲洗3次，放到滤纸上滤掉多余水分。
初代培养：将处理后的外植体斜插入初代培养基中接种，培养20d后统其萌发率，45d后得无菌幼苗；所述萌发率＝萌发数/接种总数×100％；所述初代培养基的成分为：1/2MS(3/4Fe)+25g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH为5.8～6.0，培养温度为24℃。
增殖培养：将无菌幼苗切取成1.5～2.5cm带芽茎段，每个所述带芽茎段上带有2～3个芽，放至增殖培养基，进行愈伤组织的增殖分化，增殖培养30d后统计其增殖系数，得到丛生芽；所述增殖系数＝转接总株数/接种总株数；所述增殖培养基的成分为：1/2MS(3/4Fe)+1.5mg/L 6-BA+0.6mg/L GA3+25g/L蔗糖+6g/L琼脂；pH为5.8～6.0，培养温度为24℃。
生根培养：将丛生芽切成带芽段，接种至生根培养基，得到生根苗，生根培养30d后统计生根情况，然后进行移栽，所述生根苗移栽7天内湿度为95％，7天之后湿度为80％；所述生根率＝生根总株数/接种总株数×100％；所述生根培养基的成分为：1/2MS(3/4Fe)+0.1mg/L IBA+0.1mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH为5.8～6.0，培养温度为26℃。
实施例2珍珠绣线菊的组培快繁方法
外植体处理：于6月上旬，采集珍珠绣线菊的当年生嫩枝作为试验材料，将其用枝剪截断成2～3CM左右并带2～4个芽的小枝条，放置在超净工作台上，用75％酒精灭菌40s，倒出酒精，使用无菌水快速冲洗1遍；再倒入2％的次氯酸钠灭菌6min，倒出次氯酸钠，无菌水冲洗3次，放到滤纸上滤掉多余水分。
初代培养：将处理后的外植体斜插入初代培养基中接种，培养20d后统其萌发率，45d后得无菌幼苗；所述萌发率＝萌发数/接种总数×100％；所述初代培养基的成分为：1/2MS(3/4Fe)+25g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH为5.8～6.0，培养温度为22℃。
增殖培养：将无菌幼苗切取成1.5～2.5cm带芽茎段，每个所述带芽茎段上带有2～3个芽，放至增殖培养基，进行愈伤组织的增殖分化，增殖培养30d后统计其增殖系数，得到丛生芽；所述增殖系数＝转接总株数/接种总株数；所述增殖培养基的成分为：1/2MS(3/4Fe)+2mg/L 6-BA+0.4mg/L GA3+25g/L蔗糖+6g/L琼脂；pH为5.8～6.0，培养温度为22℃。
生根培养：将丛生芽切成带芽段，接种至生根培养基，得到生根苗，生根培养30d后统计生根情况，然后进行移栽，所述生根苗移栽7天内湿度为95％，7天之后湿度为80％；所述生根率＝生根总株数/接种总株数×100％；所述生根培养基的成分为：1/2MS(3/4Fe)+0.3mg/L IBA+0.1mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH为5.8～6.0，培养温度为24℃。
实施例3初代培养基成分对珍珠绣线菊茎段萌发的影响
本实施例的外植体处理同实施例1，将处理后的外植体随机分为三组，每组处理5个培养瓶，每个培养瓶1株外植体，每个外植体约2个芽点，三组外植体分别斜插入三个初代培养基中进行接种，三个培养基中分别以1/2MS、1/2MS(1/2Fe)和1/2MS(3/4Fe)固体培养基作为基础培养基，然后分别加入25g/L蔗糖+6g/L琼脂，培养基pH为5.8～6.0，温度为24℃，记录其萌发现象及20d后的萌发率，结果如表1所示，其中芽萌动状况为每组实验中最早有萌发现象当天5个培养瓶中的情况。20d后分组3的生长情况如图1所示，分组2的生长情况如图2所示。
表1.初代培养基成分对珍珠绣线菊茎段萌发的影响
分组 处理 芽萌动状况 萌动时间 萌发率
1 1/2MS 1个有萌芽现象 12d 30.00％
2 1/2MS(1/2Fe) 2个有萌芽现象，有展叶趋势 8d 70.00％
3 1/2MS(3/4Fe) 6个有萌芽现象，并展叶 6d 90.00％
从表1中可以看出，初代培养基中采用含有3/4Fe的1/2MS培养基加上25g/L蔗糖+6g/L琼脂作为珍珠绣线菊的营养成分时，萌动时间最快，且萌动趋势整齐，同时有6个芽点有萌芽现象，并已开始展叶，其萌动势、萌动时间、15d萌发率均优于其余两组，因此说明采用含有3/4Fe的1/2MS培养基为基础培养基比含有更高或更低铁盐含量的培养基更适合作为珍珠绣线菊的初代培养基。
实施例4增殖培养基成分对珍珠绣线菊幼苗分化的影响
本实施例的外植体处理和初代培养步骤同实施例1，将初代培养得到的无菌幼苗切取成1.5～2.5cm带芽茎段，每个所述带芽茎段上带有2～3个芽，将带芽茎段随机分为三大组(A、B、C)，每大组分为4个小组进行增殖培养，每组3个瓶，每瓶5个带芽茎段，12组培养基分别采用1/2MS(3/4Fe)作为基础培养基，并每个培养瓶中都加入25g/L蔗糖+6g/L琼脂，其中A组分别加入不同浓度的6-BA和NAA，B组加入不同浓度的6-BA和IBA，C组加入不同浓度的6-BA和GA3，培养基pH均为5.8～6.0，温度为24℃。分别记录其30d的增殖系数和株高，结果如表2所示，C2组的生长情况如图4所示，C4组生长情况如图4所示。
表2.增殖培养基成分对珍珠绣线菊幼苗分化的影响
编号 处理 平均丛生芽数 株高(cm)
A1 1/2MS(3/4Fe)+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA 3.75 2.4
A2 1/2MS(3/4Fe)+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA 7.75 3.0
A3 1/2MS(3/4Fe)+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA 3.5 1.5
A4 1/2MS(3/4Fe)+1.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA 11.5 2.6
B1 1/2MS(3/4Fe)+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LIBA 9.75 1.3
B2 1/2MS(3/4Fe)+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LIBA 13 4.6
B3 1/2MS(3/4Fe)+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LIBA 11.75 3.8
B4 1/2MS(3/4Fe)+1.5mg/L6-BA+0.2mg/LIBA 9.5 3.0
C1 1/2MS(3/4Fe)+1.0mg/L6-BA+0.3mg/LGA<sub>3</sub> 13.75 2.5
C2 1/2MS(3/4Fe)+1.5mg/L6-BA+0.4mg/LGA<sub>3</sub> 19.75 5.3
C3 1/2MS(3/4Fe)+1.0mg/L6-BA+0.4mg/LGA<sub>3</sub> 15 2.0
C4 1/2MS(3/4Fe)+1.5mg/L6-BA+0.3mg/LGA<sub>3</sub> 16.25 3.0
从表2中可以看出，采用6-BA与GA3的增殖培养基进行增殖培养的珍珠绣线菊带芽茎段，其增殖系数明显高于6-BA和NAA以及6-BA和IBA的组合培养基。进一步地，当培养基中6-BA的浓度为1.5mg/L，GA3的浓度为0.4mg/L时，其平均分化的丛生芽数量最高，达到19.75。因此本发明采用1/2MS(3/4Fe)+1.5mg/L 6-BA+0.4mg/L GA3
实施例5生根培养基成分对珍珠绣线菊生根的影响
本实施例的外植体处理、初代培养和增殖培养过程同实施例1，将增殖培养后得到的丛生芽切成带芽段，随机分为5个组，接种至不同的生根培养基进行生根培养，每组5个瓶，每瓶1株丛生芽，5组生根培养基均是以1/2MS(3/4Fe)为基础培养基，加入30g/L蔗糖+7g/L琼脂，再添加不同浓度IBA和NAA，培养基pH为5.8～6.0，分别记录其生根时间、生根率和生长情况，结果如表3所示，30d后分组2的生长情况如图5所示，分组5的的生长情况如图6所示。
表3.生根培养基成分对珍珠绣线菊生根的影响
Figure BDA0002557266600000051
Figure BDA0002557266600000061
从表3中可以看出，当生根培养基中的成分为1/2MS(3/4Fe)+0.2mg/L IBA+0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂时，其生根率为100％，根系发达，植株高，长势很好，叶色深绿，生根效果均优于其他组合培养基。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种珍珠绣线菊的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
初代培养：取珍珠绣线菊嫰枝剪成小枝条，经杀毒灭菌后斜插入初代培养基中接种，得无菌幼苗；所述初代培养基的成分为：1/2 MS(3/4Fe)+25g/L蔗糖+6g/L琼脂；
增殖培养：将无菌幼苗切取成带芽茎段，放至增殖培养基，进行愈伤组织的增殖分化，得到丛生芽；所述增殖培养基的成分为：1/2MS(3/4Fe)+（1～2）mg/L 6-BA+（0.2～0.6）mg/LGA3+25g/L蔗糖+6g/L琼脂；
生根培养：将丛生芽切成带芽段，接种至生根培养基，得到生根苗，然后进行移栽，所述生根培养基的成分为：1/2MS(3/4Fe)+（0.1～0.3）mg/L IBA+0.1mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂。
2.根据权利要求1所述的一种珍珠绣线菊的组培快繁方法，其特征在于，所述小枝条的长度为2～3cm，每个所述枝条上带有2～4个芽。
3.根据权利要求1所述的一种珍珠绣线菊的组培快繁方法，其特征在于，所述杀毒灭菌的具体步骤为：将小枝条放置在超净工作台上，用75%酒精杀毒40s，倒出酒精，使用无菌水快速冲洗1遍，再倒入2%的次氯酸钠灭菌6min，倒出次氯酸钠，无菌水冲洗3次，经滤纸过滤掉多余水分。
4.根据权利要求1所述的一种珍珠绣线菊的组培快繁方法，其特征在于，所述带芽茎段的长度为1.5～2.5cm，每个所述带芽茎段上带有2～3个芽。
5.根据权利要求1所述的一种珍珠绣线菊的组培快繁方法，其特征在于，所述组培的温度为22℃～26℃，培养基中的pH为5.8～6.0，所述生根苗移栽7天内湿度为95%，7天之后湿度为80%。
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