CN111514282B - 转铁蛋白联合甘露特钠胶囊的应用以及包含甘露特钠胶囊的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种转铁蛋白联合甘露特钠胶囊的应用以及包含甘露特钠胶囊的组合物。转铁蛋白联合甘露特钠胶囊在制备预防或/和改善或/和治疗痴呆或/和认知功能障碍的药物中的应用；包含甘露特钠胶囊的组合物，包括甘露特钠胶囊和转铁蛋白；本发明的有益效果为：转铁蛋白与甘露特钠胶囊联合使用，进一步提高甘露特钠胶囊在预防、改善、治疗阿尔茨海默症以及其它类型痴呆症比如：血管性痴呆，额颞叶痴呆，路易体痴呆及感染引起的认知障碍的效果。

Description

转铁蛋白联合甘露特钠胶囊的应用以及包含甘露特钠胶囊的 组合物

技术领域

本发明属于生物药品应用领域，具体涉及转铁蛋白与甘露特钠胶囊联合使用，进一步提高甘露特钠胶囊治疗阿尔茨海默症以及其它类型痴呆症的效果。

背景技术

甘露特钠胶囊(GV-971，商品名“九期一”)，是以海洋褐藻提取的低分子酸性寡糖化合物。该药是我国原创、国际首个靶向脑—肠轴的阿尔茨海默症(AD)治疗新药。此前，世界范围内治疗AD主要依靠之前上市的5种药物，均以延缓AD中早期病状进展和改善早期AD临床病状为主。支撑抗AD新药试验的理论认为，大脑中β-淀粉样蛋白沉积引发炎症，进而损伤神经元，导致AD。但是，靶向β-淀粉样蛋白研发药物的临床试验结果显示，其临床药效不明显，其原因可能与新药靶向单一，而AD发病机制复杂有关。

多奈哌齐为是第二代胆碱酯酶(ChE)抑制剂，它能明显抑制脑组织中的ChE，临床上用于治疗轻、中度老年痴呆，但临床效果有限。

北京豪思生物科技有限公司发现转铁蛋白治疗后的FAD转基因小鼠的学习记忆能力显著提高。转铁蛋白主要生理功能为转运铁离子，使血红蛋白有供氧能力。在AD模型上的作用机制尚不明确。

鉴于AD发病机制的复杂性，在治疗该疾病时，应考虑低毒性的不同作用机制的药物联合使用。甘露特钠胶囊以其出色的安全性被批准有条件上市，而运铁蛋白为天然的人血浆蛋白，在生理浓度范围内是安全的。同时考虑它们在AD治疗上的有效性，可考虑联合使用治疗AD以及其它类型痴呆症。

发明内容

本发明的目的在于提供转铁蛋白和甘露特钠胶囊联合组合物及其应用。转铁蛋白和甘露特钠胶囊联合使用可明显提高治疗AD以及其它类型痴呆症或认知功能障碍疾病的效果。本发明通过在FAD转基因AD模型以及东莨菪碱诱导的痴呆动物模型上进行体内药效实验以证明二者联用的效果。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明第一方面提供转铁蛋白联合甘露特钠胶囊，在制备预防或/和改善或/和治疗痴呆或/和认知功能障碍的药物中的应用。

上述第一方面的应用中，作为一种优选的实施方式，所述痴呆为阿尔茨海默症、血管性痴呆、额颞叶痴呆和路易体痴呆中的一种；所述认知功能障碍为感染导致的认知障碍。

上述第一方面的的应用中，作为一种优选的实施方式，所述甘露特钠胶囊被包含与所述甘露特钠胶囊具有相同药物活性成分的胶囊以外的剂型替代；

优选地，转铁蛋白联合甘露特钠胶囊使用时，甘露特钠胶囊的有效剂量为50-100mg/kg，转铁蛋白的有效剂量为5-15mg/kg。

本发明第二方面提供一种包含甘露特钠胶囊的组合物，所述组合物包括甘露特钠胶囊和转铁蛋白。

上述第二方面的包含甘露特钠胶囊的组合物中，作为一种优选的实施方式，所述甘露特钠胶囊和所述转铁蛋白分别使用或者以混合物的形式使用；

优选地，所述甘露特钠胶囊被包含与所述甘露特钠胶囊具有相同药物活性成分的胶囊以外的剂型替代。

上述第二方面的包含甘露特钠胶囊的组合物中，作为一种优选的实施方式，当所述甘露特钠胶囊和所述转铁蛋白分别使用时，所述组合物中各组分的有效剂量为：甘露特钠胶囊50-100mg/kg，转铁蛋白5-15mg/kg。

上述第二方面的包含甘露特钠胶囊的组合物中，作为一种优选的实施方式，所述转铁蛋白的纯度为95wt％以上。

上述第二方面的包含甘露特钠胶囊的组合物，作为一种优选的实施方式，所述组合物还包括药学上可接受的载体。

本发明第三方面提供所述包含甘露特钠胶囊的组合物在制备预防或/和改善或/和治疗痴呆和/或认知功能障碍的药物中的应用。

上述第三方面的包含甘露特钠胶囊的组合物的应用中，作为一种优选的实施方式，所述痴呆为阿尔茨海默症、血管性痴呆、额颞叶痴呆和路易体痴呆中的一种；所述认知功能障碍为感染导致的认知障碍；

优选地，所述甘露特钠胶囊被包含与所述甘露特钠胶囊具有相同药物活性成分的胶囊以外的剂型替代。

相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：

在本发明中，转铁蛋白与甘露特钠胶囊联合使用，进一步提高甘露特钠胶囊在预防、改善、治疗阿尔茨海默症以及其它类型痴呆症(比如：血管性痴呆，额颞叶痴呆，路易体痴呆及感染引起的认知障碍)的效果。

附图说明

图1：检测例1中水迷宫行为学实验检测甘露特钠胶囊，转铁蛋白+甘露特钠胶囊，转铁蛋白，多奈哌齐，转铁蛋白+多奈哌齐处理小鼠的记忆改善情况，各组小鼠在隐藏平台训练阶段上台时间；其中，横坐标为：训练天数(training day)，纵坐标为：逃离潜伏期(escape latency)；

图2：检测例1中水迷宫行为学实验检测甘露特钠胶囊，转铁蛋白+甘露特钠胶囊，转铁蛋白，多奈哌齐，转铁蛋白+多奈哌齐处理小鼠的记忆改善情况，各组小鼠在测试阶段在目标象限所处时间百分比；其中，纵坐标为：目标象限所处时间百分比(Time spent intarget quadrant)；

图3：检测例2中水迷宫行为学实验各组小鼠在隐藏平台训练阶段上台时间，其中，横坐标为：训练天数(training day)，纵坐标为：逃离潜伏期(escape latency)。

图4：检测例2中水迷宫行为学实验各组小鼠在测试阶段在目标象限所处时间百分比，其中，纵坐标为：目标象限所处时间百分比(Time spent in target quadrant)。

其中，*代表p<0.05；**代表p<0.01；图中上部的直线段表示线段两端点对应的正下方组别之间进行统计分析。

具体实施方式

以下实施例对本发明的内容做进一步的详细说明，本发明的保护范围包含但不限于下述各实施例。

除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员通常理解相同的含义。若存在矛盾，则以包括定义在内的本说明书为主。

本文的材料、方法和实施例仅是示例性的，并且除非特别说明，不应理解为限制性的。本文仅描述了适合的方法和材料，在实施或测试本发明时可以使用与本文所述的那些相似或等效的方法和材料。

一种转铁蛋白联合甘露特钠胶囊，在制备预防或/和改善或/和治疗痴呆或/和认知功能障碍的药物中的应用。

本发明所述痴呆或认知功能障碍可以是任何由于神经细胞损伤或凋亡引起的乙酰胆碱减少导致的认知水平下降。

所述痴呆优选为阿尔茨海默症、血管性痴呆、额颞叶痴呆和路易体痴呆中的一种；所述认知功能障碍为感染导致的认知障碍。所述感染可以是病毒感染或其他病原体感染。

阿尔茨海默病(AD)是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。

一种包含甘露特钠胶囊的组合物，所述组合物包括甘露特钠胶囊和转铁蛋白；在本发明中，所述甘露特钠胶囊和所述转铁蛋白可以分别使用也可以混合物的形式使用；优选分别使用，其甘露特钠胶囊的给药途径为口服，转铁蛋白的给药途径为静脉注射以及鼻腔内给药。更优选地，按重量份，所述组合物包括甘露特钠胶囊50-100mg/kg，转铁蛋白5-15mg/kg。

所述组合物还可以包括药学上可接受的载体，比如用于稀释转铁蛋白的稀释剂，PBS缓冲液或水等。

所述组合物中所述转铁蛋白的有效剂量为5-15mg/kg，所述甘露特纳胶囊的有效剂量为50-100mg/kg。

本发明使用转铁蛋白可以是市售产品也可以是按照如下方法从人血浆CohnIV组分中提取，该方法可以实现废物利用。优选转铁蛋蛋白纯度为95wt％以上，本发明使用的转铁蛋白为含铁转铁蛋白，经测试有效成分是部分饱和转铁蛋白和/或饱和转铁蛋白，转铁蛋白优选为人血源且未脱铁的转铁蛋白，发明人意外地发现完全脱铁后的蛋白在体外没有促进神经生长和神经细胞抗Aβ毒性的作用。

本发明所用甘露特钠胶囊可以被任何包含与甘露特钠胶囊具有相同药物活性成分(即甘露特钠，化学名称为寡聚-β-1→4-D-甘露糖醛酸二酸钠)的胶囊以外的剂型替代。所述胶囊以外的剂型包括仅为甘露特钠的情况。

所述转铁蛋白的制备方法如下：

依次包括以下步骤：预处理液制备，疏水层析纯化，浓缩置换。

步骤一、预处理液制备：本步骤的目的为复溶人血浆CohnIV组分沉淀中的蛋白质，去除助滤剂，并去除复溶后的一些杂蛋白。

分步骤一、第一次复溶处理：将CohnIV组分固体溶解到PBS缓冲液中，混合均匀，得到第一次复溶液。

上述人血浆CohnIV组分与PBS缓冲液的质量体积比(w/v)为1：(2-10)，优选为1：3.5；上述PBS缓冲液为：10-50mmol/LPBS，pH6.0-8.0，优选为20mmol/LPBS，pH7.5。

分步骤二、第一次离心处理：将上述第一次复溶液离心，保留上清液，作为第一次上清液。

上述离心的转速为4000-15000rpm，温度为0-10℃，优选为10000rpm，温度为4℃。

分步骤三、第一次过滤处理：将上述第一次上清液用0.1-1.0um，优选为0.45μm的滤膜过滤，得到滤液，作为第一次过滤液。

分步骤四、调节pH处理：在上述第一次过滤液中加入1mol/L的柠檬酸钠溶液，得到调节pH值后的过滤液，其pH值为6.5-7.5，优选为7.0。

分步骤五、去除杂质蛋白处理：搅拌上述调节pH值后的过滤液同时向其中缓慢加入蛋白沉淀剂至沉淀自动沉降变实(此处的变实指：上清和沉淀有明显的分界线，上清变得透亮，沉淀数量不再增多)，之后取上清液，作为去除杂质蛋白液，以备下一步的离心。

上述蛋白沉淀剂优选为聚乙二醇4000(PEG4000)，PEG4000与调节pH值后的过滤液的质量体积比为10-20％，优选为15％。

上述蛋白沉淀剂也可以为体积百分浓度为90-98％、优选为96％，温度为零下10℃，优选为零下4℃的乙醇溶液；由于采用乙醇溶液在沉淀过程中会产热，所以乙醇溶液要保持低温。

本分步骤可以有效去除一部分杂质蛋白，同时还可以沉淀病毒，提高产品的安全性。

分步骤六、第二次离心处理：将上述去除杂质蛋白液离心，保留上清液，作为第二次上清液。

上述离心的转速为4000-15000rpm，温度为0-10℃，优选为10000rpm，温度为4℃。

分步骤七、第二次过滤处理：将上述第二次上清液用0.1-1.0μm，优选为0.45μm的滤膜过滤，得到滤液，作为人血浆CohnIV组分预处理液。

步骤二、疏水层析纯化：本步骤的目的是从人血浆CohnIV组分预处理液中去除其他蛋白杂质，分离得到纯化转铁蛋白。

分步骤一、缓冲液置换处理：

本分步骤中，选用HiTrap Desalting脱盐柱，置换上述人血浆Cohn IV组分预处理液，使其初始盐浓度和pH与平衡缓冲液(10-50mmol/L PBS，pH6.0-8.0，0.5-3mol/L(NH₄)₂SO₄，优选为20mmol/L PBS，pH7.0，1.5mol/L(NH₄)₂SO₄)相同。具体的操作为：(1)将HiTrapDesalting脱盐柱预先用5-10倍柱体积的平衡缓冲液(10-50mmol/L PBS，pH6.0-8.0，其中(NH₄)₂SO₄浓度为0.5-3mol/L，优选为20mmol/L PBS，pH7.0，其中(NH₄)₂SO₄浓度为1.5mol/L)来平衡，直至电导率检测器显示流出的液体的pH值和该平衡缓冲液的一致。(2)再将适量的上述人血浆CohnIV组分预处理液进料到HiTrap Desalting柱。(3)再用平衡缓冲液(包括10-50mmol/L PBS，pH6.0-8.0，其中(NH₄)₂SO₄浓度为0.5-3mol/L，优选为20mmol/L PBS，pH7.0，其中(NH₄)₂SO₄浓度为1.5mol/L)对HiTrap Desalting柱进行淋洗，根据UV280峰图收集蛋白溶液，得到置换缓冲液的Cohn IV蛋白溶液。

分步骤二、疏水层析处理：

本分步骤中，选用辛基疏水柱(Octyl Sepharose 4Fast Flow装填)。

具体的操作为：(1)预先用5-10倍柱体积的平衡缓冲液(10-50mmol/L PBS，pH6.0-8.0，其中(NH₄)₂SO₄浓度为1.5-3mol/L，优选为20mmol/L PBS，pH7.0，其中(NH₄)₂SO₄浓度为1.5mol/L)平衡辛基疏水柱，直至电导率检测器显示流出的液体的pH值和该平衡缓冲液的一致。(2)然后将适量的上述置换缓冲液的Cohn IV蛋白溶液进料到辛基疏水柱。(3)再用平衡缓冲液(10-50mmol/L PBS，pH6.0-8.0，其中(NH₄)₂SO₄浓度为1.5-3mol/L，优选为20mmol/L PBS，pH7.0，其中(NH₄)₂SO₄浓度为1.5mol/L)进行淋洗，使目标成分充分与辛基疏水柱结合，根据UV280峰图收集流穿液(又名穿透液)。(4)再用洗脱缓冲液(10-50mmol/L PBS，pH6.0-8.0，其中(NH₄)₂SO₄浓度为0.9-1.4mol/L，优选为20mmol/L PBS，pH7.0，其中(NH₄)₂SO₄浓度为1.2mol/L)进行洗脱，得到的洗脱液即为纯化转铁蛋白。

步骤三、浓缩置换步骤：

分步骤一、浓缩处理：将上述纯化转铁蛋白采用1KD-10KD，优选为3KD的超滤膜浓缩，得到浓缩液。上述步骤二的层析过程会稀释样品，本分步骤的目的为将样品浓缩达到可以使用的程度。

分步骤二、置换处理：采用置换缓冲液通过透析或超滤的方法，将上述浓缩液中的高浓度盐(主要是硫酸铵)置换到置换缓冲液中，取透析膜内的蛋白溶液或超滤膜上的蛋白溶液即为转铁蛋白。本分步骤的目的是将浓缩液含有的高浓度盐(主要是硫酸铵)的缓冲液置换到PBS缓冲液中。

其中采用的置换缓冲液为10-50mmol/L PBS，pH7.0-7.4，优选为20mmol/L PBS，pH7.2。

采用透析时：优选上述置换缓冲液作为透析缓冲液，透析时间为20-72h，优选为24h，透析体积比是1：(100-10000)，优选为1：500，保留透析膜内的蛋白溶液，即为转铁蛋白。

采用超滤时：优选上述置换缓冲液作为超滤缓冲液，超滤膜的规格为1-10KD，优选为3KD，压力为0.1-0.3MPa，优选为0.1MPa，保留超滤膜上的蛋白溶液，即为转铁蛋白。

本发明中涉及的质量体积比(w/v)是指：固体的质量(g)与液体体积(ml)之间的比例，如：上述人血浆Cohn组分与PBS缓冲液的质量体积比(w/v)为1：3.5，是指人血浆Cohn IV组分量取1g时，PBS缓冲液则量取3.5ml。

经过对比实验，北京豪思生物科技有限公司从血浆中制备得到的运铁蛋白与sigma公司购买的人血浆运铁蛋白体内药效无显著差别。本实验采用的运铁蛋白(TF)为sigma公司购买所得，货号为：T3309，属于部分饱和转铁蛋白。在进行以下实验例和实施例进行尾静脉注射时使用的是：TF溶液，其配制方法如下：5-15mg TF溶于5ml PBS配置成浓度为1-3mg/ml溶液，其中使用的PBS为20mmol/L PBS，pH7.2。

本发明实施例采用的甘露特钠胶囊为市售产品，上海绿谷制药有限公司生产。在进行以下实验例和实施例时提到的甘露特钠胶囊的用量实质上为胶囊的内容物，用于给小鼠灌胃的GV-971是胶囊的内容物经稀释溶解后得到的，具体制备方法如下：50-100mg GV-971内容物有效成分溶于10ml PBS配置成浓度为5-10mg/ml溶液，其中使用的PBS为20mmol/L PBS，pH7.2。

本发明实施例采用的多奈哌齐(DPZ)为市售产品，卫材(中国)药业有限公司生产。灌胃用DPZ是50-100mg DPZ有效成分溶于10ml PBS配置成浓度为5-10mg/ml溶液，其中使用的PBS为20mmol/L PBS，pH7.2。

本发明实施例中腹腔注射用东莨菪碱溶液的配制是将市售东莨菪碱(sigma)溶于生理盐水中，制备浓度为0.4mg/mL溶液。

检测例1

在10月龄5xFAD转基因动物模型上验证转铁蛋白联用甘露特钠囊的药效作用。

(1)将小鼠分为以下七组，每组16只。

第一组(WT-PBS)：野生型(WT)小鼠作为对照，小鼠灌胃PBS(根据体重计算20μl/g)；尾静脉注射PBS(根据体重计算5μl/g)。本组为空白对照；

第二组(TG-PBS)：5×FAD转基因小鼠，各小鼠灌胃PBS(根据体重计算20μl/g)；尾静脉注射PBS(根据体重计算5μl/g)。本组为模型对照；

第三组(TG-GV-971)：5×FAD转基因小鼠，各小鼠灌胃GV-971有效成分(100mg/kg体重)及尾静脉注射PBS(根据体重计算5μl/g)；

第四组(TG-TF+GV-971)：5×FAD转基因小鼠，各小鼠灌胃GV-971有效成分(100mg/kg体重)及尾静脉注射TF(15mg/kg体重)；

第五组(TG-DPZ)：5×FAD转基因小鼠，各小鼠灌胃DPZ有效成分(100mg/kg体重)及尾静脉注射PBS(根据体重计算5μl/g)；

第六组(TG-TF+DPZ)：5×FAD转基因小鼠，各小鼠灌胃DPZ有效成分(100mg/kg体重)及尾静脉注射TF(15mg/kg体重)；

第七组(TG-TF)：5×FAD转基因小鼠，各小鼠尾静脉注射TF(15mg/kg体重)；

备注：WT为野生型小鼠；TG为5×FAD转基因小鼠；PBS为磷酸盐缓冲液；TF为转铁蛋白；GV-971为甘露特钠胶囊；DPZ为多奈哌齐。

上述7组灌胃给药每天一次，尾静脉注射每三天注射一次。

一、灌胃30天之后进行Morris水迷宫训练。

(2)水迷宫实验记录潜伏期的长短测定小鼠的空间辨别能力。水迷宫装置由直径120cm、高50cm的圆形水池和可移动的直径10cm的平台组成，水池的上方装有摄像头并与电脑自动记录仪连接，水温保持(22±3)℃。

(3)第1-5天训练为隐藏平台训练，平台放置于固定位置并低于水面1cm，加入钛白粉使平台不可见，将小鼠头朝池壁轻轻随机放入水池中4个象限之一，每次试验每只小鼠游泳60s，让其找到水中平台，让其停留5s；若小鼠入水后未能找到平台，则将时间记录为60s，并且将其人为放置在平台上20s，每只小鼠每天重复4次试验。

(4)最后一次定位航行实验结束后24h，撤出平台，将小鼠放入水中追踪器运动轨迹60s，测试小鼠60s内的运动轨迹、潜伏期及穿过原先放置平台位置象限次数及时间作为空间记忆形成指标，并进行组间对比。

测试结果见图1和图2，其中，图1为小鼠在隐藏平台训练阶段上台时间，图2为小鼠在测试阶段在目标象限所处时间百分比。

图1中，在隐藏平台训练阶段，WT-PBS组和TG-PBS组学习曲线(逃离潜伏期)第2，3天差异显著，后面趋于一致，TG-TF+GV-971、TG-TF+DPZ组学习曲线与WT+PBS组(逃离潜伏期)相近。所有小鼠在测试之前都学会记住隐藏平台的位置。

图2中，各组在目标象限所处时间百分比依次为：第一组(WT-PBS)：32.3±7.8,第二组(TG-PBS):22.5±6.7(p<0.01vs.WT-PBS),第三组(TG-GV-971):25.3±3.9(p>0.05vs.TG-PBS),第四组(TG-TF+GV-971):32.7±3.1(p<0.01vs.TG-PBS；p<0.05vs.TG-GV971,TG-TF+DPZ,TG-TF),第五组(TG-DPZ):22.2±3.9(p>0.05vs.TG-PBS),第六组(TG-TF+DPZ):27.4±2.1(p>0.05vs.TG-PBS；p<0.05vs.TG_DPZ；p<0.05vs.TG-TF+GV971)，第七组(TG-TF)：27.6±2.3(p<0.05vs.TG-TF+GV971；p>0.05vs.TG-TF+DPZ)，可见对于阿尔茨海默症模型小鼠来说，单独注射GV-971、TF或多奈哌齐不能显著提高小鼠在目标象限时间。联用GV-971和转铁蛋白后，小鼠在目标象限时间显著提高；而联用多奈哌齐和转铁蛋白不能显著提高小鼠在目标象限时间,即转铁蛋白与GV-971联用在治疗阿尔茨海默症方面的效果优于转铁蛋白与多奈哌齐联用的效果，优于GV-971单独使用在治疗阿尔茨海默症方面的效果，优于TF单独使用在治疗阿尔茨海默症方面的效果。

以上结果显示，联用GV-971和转铁蛋白在提高阿尔茨海默症模型小鼠的认知水平方面的效果优于单独注射GV-971的效果，优于单独注射TF的效果；

与联用多奈哌齐和转铁蛋白对比，注射转铁蛋白提高GV-971对阿尔茨海默症模型小鼠的认知水平作用更显著。

检测例2

在东莨菪碱诱导的痴呆动物模型上验证转铁蛋白联用甘露特钠囊的药效作用。

(1)将C57BL/6小鼠分为以下七组，每组16只。

第一组(Saline-PBS)：空白对照野生型小鼠(即健康小鼠)，小鼠灌胃PBS(根据体重计算20μl/g)；尾静脉注射PBS(根据体重计算5μl/g)。本组为空白对照；

第二组(Scop-PBS)：东莨菪碱诱导的小鼠痴呆模型，各小鼠灌胃PBS(根据体重计算20μl/g)；尾静脉注射PBS(根据体重计算5μl/g)。本组为模型对照；

第三组(Scop-GV-971)：东莨菪碱诱导的小鼠痴呆模型，各小鼠灌胃GV-971有效成分(100mg/kg体重)及尾静脉注射PBS(根据体重计算5μl/g)；

第四组(Scop-TF+GV-971)：东莨菪碱诱导的小鼠痴呆模型，各小鼠灌胃GV-971有效成分(100mg/kg体重)及尾静脉注射TF(15mg/kg体重)；

第五组(Scop-DPZ)：东莨菪碱诱导的小鼠痴呆模型，各小鼠灌胃DPZ有效成分(100mg/kg体重)及尾静脉注射PBS(根据体重计算5μl/g)；

第六组(Scop-TF+DPZ)：东莨菪碱诱导的小鼠痴呆模型，各小鼠灌胃DPZ有效成分(100mg/kg体重)及尾静脉注射TF(15mg/kg体重)；

第七组(Scop-TF)：东莨菪碱诱导的小鼠痴呆模型，各小鼠尾静脉注射TF(15mg/kg体重)；

备注：Saline为腹腔注射生理盐水的对照小鼠；Scop为腹腔注射东莨菪碱诱导的小鼠痴呆模型；PBS为磷酸盐缓冲液；TF为转铁蛋白；GV-971为甘露特钠胶囊；DPZ为多奈哌齐。东莨菪碱诱导的小鼠痴呆模型是通过使用东莨菪碱来减少小鼠脑中的神经递质(乙酰胆碱)，从而诱导痴呆症状。

上述7组灌胃以及尾静脉注射给药为每天一次。

灌胃和尾静脉注射7天之后进行Morris水迷宫训练。水迷宫训练以及定位航行实验同5x FAD动物模型实施例。不同的是：在第1-5天的水迷宫训练前，每天第一次训练前半小时，按小鼠体重给第二至第七组的小鼠分别腹腔注射2mg/kg(给药体积为5ml/kg)东莨菪碱诱导学习记忆损伤，制造每组的小鼠痴呆模型。同时对照组(第一组)腹腔注射生理盐水(5ml/kg)。

测试结果见图3和图4，其中，图3为小鼠在隐藏平台训练阶段上台时间，图4为小鼠在测试阶段在目标象限所处时间百分比。

图3中，在隐藏平台训练阶段，Saline-PBS组和Scop-PBS组学习曲线(逃离潜伏期)第2，3，4，5天差异显著，说明东莨菪碱成功诱导了小鼠学习记忆缺陷。Scop-TF+GV-971、Scop-TF+DPZ、Scop-TF组学习曲线与Saline+PBS组(逃离潜伏期)相近，说明这三种给药方式提高了小鼠的学习能力。所有小鼠在测试之前都学会记住隐藏平台的位置。

图4中，各组在目标象限所处时间百分比依次为：第一组(Saline-PBS)：38.6±7.5,第二组(Scop-PBS):20.3±5.6(p<0.01vs.Saline-PBS),第三组(Scop-GV-971):26.3±6.9(p>0.05vs.Scop-PBS),第四组(Scop-TF+GV-971):38.1±6.1(p<0.01vs.Scop-PBS,Scop-GV-971,Scop-DPZ,Scop-TF；p<0.05vs.Scop-TF+DPZ),第五组(Scop-DPZ):27.2±6.7(p<0.05vs.Scop-PBS；p<0.01vs.Scop-TF+GV-971),第六组(Scop-TF+DPZ):30.4±5.9(p<0.01vs.Scop-PBS；p<0.05vs.Scop-TF+GV971；p>0.05vs.Scop-TF,Scop-DPZ)，第七组(Scop-TF)：27.3±5.5((p<0.05vs.Scop-PBS；p<0.01vs.TG-TF+GV971)，可见对于东莨菪碱诱导的痴呆模型小鼠来说，单独注射GV-971不能显著提高小鼠在目标象限时间，联用GV-971和转铁蛋白后，小鼠在目标象限时间显著提高；TF或多奈哌齐能显著提高小鼠在目标象限时间，而联用多奈哌齐和转铁蛋白提高小鼠在目标象限时间不显著。同时转铁蛋白与GV-971联用在治疗痴呆症方面的效果显著优于转铁蛋白与多奈哌齐联用的效果，优于GV-971单独使用在治疗痴呆症方面的效果，优于TF单独使用在治疗痴呆症方面的效果。

以上结果显示，联用GV-971和转铁蛋白在提高东莨菪碱诱导的痴呆症模型小鼠的认知水平方面的效果优于单独注射GV-971的效果，优于单独注射TF的效果；

与联用多奈哌齐和转铁蛋白对比，注射转铁蛋白提高GV-971对阿尔茨海默症模型小鼠的认知水平作用更显著。

Claims (7)

1.转铁蛋白联合甘露特钠胶囊在制备预防或/和改善或/和治疗痴呆的药物中的应用，所述转铁蛋白与甘露特钠胶囊有效成分的重量比为15:100，所述痴呆为阿尔茨海默症，所述转铁蛋白为部分饱和转铁蛋白和/或饱和转铁蛋白。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述甘露特钠胶囊被包含与所述甘露特钠胶囊具有相同药物成分的胶囊以外的剂型替代。

3.一种预防或/和改善或/和治疗阿尔茨海默症的包含甘露特钠胶囊的组合物，其特征在于，所述组合物包括甘露特钠胶囊和转铁蛋白，所述转铁蛋白与甘露特钠胶囊有效成分的重量比为15:100，所述转铁蛋白为部分饱和转铁蛋白和/或饱和转铁蛋白。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述甘露特钠胶囊和所述转铁蛋白分别使用或者以混合物的形式使用。

5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述甘露特钠胶囊被包含与所述甘露特钠胶囊具有相同药物成分的胶囊以外的剂型替代。

6.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述转铁蛋白的纯度为95wt%以上。

7.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括药学上可接受的载体。