CN111454828A - 一种药敏试剂盒以及细菌药敏检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种药敏试剂盒以及细菌药敏检测方法，涉及药物检测技术领域。所述药敏试剂盒包括盒体和盖体，还包括培养皿、药敏纸片和支架，所述培养皿设于所述盒体内部，培养皿的底壁外侧标有至少10个实线同心圆，每两个相邻实线同心圆之间的距离为0.25cm，所述培养皿上铺设有培养基平板；药敏纸片设于所述盒体内部；支架设于所述盒体内部，所述支架上设有多个用以粘贴药敏纸片的安装点。本发明提供的药敏试剂盒具有实验结果准确、耗时短的特点。

Description

一种药敏试剂盒以及细菌药敏检测方法

技术领域

本发明涉及药物检测技术领域，特别涉及一种药敏试剂盒以及细菌检测方法。

背景技术

养殖场在动物生产中，部分存在滥用抗生素，比如，为了提高抗生素的保健效果，长时间、超剂量使用抗生素现象严重，导致动物性食品药物残留，危害消费者的健康。此外，盲目使用抗生素，不仅不能达到治疗效果，而且使致病性菌株产生广泛耐药性，从而导致用药效果差或无药可治。因此，规范使用抗生素，针对病原菌来选择敏感性药物，能够更高效、更准确的用药，从而减少药物治疗成本，并且降低动物食品的药物残留。

养殖场兽医根据动物临床和病理剖检情况，判断动物疾病的类型，其中细菌性疾病，则可根据药敏试验筛选敏感性药物，从而科学地使用药物治疗和预防细菌性疾病。目前，药敏试验常通过药敏试剂盒进行，但是现有的药敏试剂盒存在耗时较长、抑菌圈读取结果不准确等缺点。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种药敏试剂盒以及细菌药敏检测方法，旨在解决现有药敏试剂盒耗时较长、抑菌圈读取结果不准确的问题。

为实现上述目的，本发明提出一种药敏试剂盒，包括盒体和盖体，还包括：

培养皿，所述培养皿设于所述盒体内部，所述培养皿的底壁外侧标有至少10个实线同心圆，每两个相邻所述实线同心圆之间的距离为0.25cm，所述培养皿上铺设有培养基平板；

药敏纸片，所述药敏纸片设于所述盒体内部；以及，

支架，所述支架设于所述盖体上，所述支架上设有多个用以粘贴药敏纸片的安装点。

可选地，多个所述实线同心圆中距离所述培养皿中心最近的实线圆的半径为0.25cm。

可选地，所述支架包括相互垂直的2个支杆，每一所述支杆的长度与所述培养皿的直径相同，且两个所述支杆的交点位于任一所述支杆的中点处。

可选地，所述药敏纸片设有20个，且每一所述药敏纸片对应含有20种药物中的任意一种，所述20种药物包括泰拉菌素、乙酰异戊酰基泰乐菌素、沃尼妙林、左氧氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、恩诺沙星、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、替米考星、大观霉素、氟苯尼考、头孢噻呋、泰妙菌素、强力霉素、黏菌素、阿莫西林以及林可霉素。

可选地，所述培养基平板包括普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、SS琼脂平板以及含辅酶A的胰酪胨大豆肉汤琼脂平板中任意一种。

此外，本发明还提出一种细菌药敏检测方法，所述细菌药敏检测方法使用如上所述的药敏试剂盒进行，包括如下步骤：

无菌采集病料的病变组织，并将病变组织接种至对应的培养基平板上，以使病变组织中的细菌接种至培养基平板；

将药敏纸片贴于支架上，将支架置于已接种细菌的培养基平板，并使药敏纸片与培养基平板紧密接触，完成药敏纸片粘贴；

在药敏纸片粘贴完成后的15～30min内，将培养基平板置于36～38℃条件下培养，12～24h后读取抑菌圈直径，并根据抑菌圈直径判断病料组织中的细菌对药敏纸片中所含药物成分的敏感性。

可选地，每一所述安装点粘贴1片所述药敏纸片或2片不同的所述药敏纸片。

本发明的技术方案中，通过对培养皿的底壁外侧标有多个同心圆，可以准确、快速的读取药敏检测完成后的抑菌圈直径，从而准确判断病料组织中的细菌对药敏纸片中所含药物成分的敏感性；并且支架设有多个粘贴药敏纸片的安装点，即每次可以检测多种药物，节省时间和成本。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明提供的药敏试剂盒示意图。

图2为图1提供的药敏试剂盒使用时的部分结构示意图。

附图标号说明：

标号	名称	标号	名称
				1	盒体	21	支架
11	培养皿	211	支杆
				12	药敏纸片	212	安装点
2	盖体

本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。

需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

目前的药敏试剂盒存在耗时较长、抑菌圈读取结果不准确等缺点，鉴于此，本发明提出一种药敏试剂盒，使药敏试剂盒检测结果更加准确，且节省时间。

请参阅图1，药敏试剂盒包括盒体1和盖体2，在一实施例中，药敏试剂盒还包括培养皿11、药敏纸片12和支架21，培养皿11设于盒体1内部，培养皿11的底壁外侧标有至少10个实线同心圆，每两个相邻实线同心圆之间的距离为0.25cm，培养皿11上铺设有培养基平板；药敏纸片12设于盒体1内部；支架21设于盖体2上，支架上设有多个用以粘贴药敏纸片12的安装点212。

本发明还提出一种细菌药敏检测方法，细菌药敏检测方法使用上述药敏试剂盒进行，包括如下步骤：

S10、无菌采集病料的病变组织，并将病变组织接种至对应的培养基平板上，以使病变组织中的细菌接种至培养基平板；

S20、将药敏纸片贴于支架上，将支架置于已接种细菌的培养基平板，并使药敏纸片与培养基平板紧密接触，完成药敏纸片粘贴；

S30、在药敏纸片粘贴完成后的15～30min内，将培养基平板置于36～38℃条件下培养，12～24h后观测抑菌圈直径，并根据抑菌圈直径判断病料组织中的细菌对药敏纸片中所含药物成分的敏感性。

在细菌药敏检测实验结束后，需要根据抑菌圈(或杀菌圈)直径判断病料组织中的细菌对药敏纸片中所含药物成分的敏感性，因此，可对培养皿11进行刻度标记，从而读取抑菌圈直径。结合本领域熟知的公知常识，在本实施例中，敏感性判定标准如下：抑菌圈直径＞15mm，判定为高度敏感；10mm≤抑菌圈直径≤15mm，判定为中度敏感；6mm＜抑菌圈直径＜10mm，判定为低度敏感；抑菌圈直径≤6mm(即无抑菌圈)，判定为不敏感。事实上，并不是刻度线越细越好，如每个刻度之间相隔1mm，刻度线过密，在读取的时候容易误读错读。

因此，结合动物药敏试验的敏感性判断标准，在一实施例中，请参阅图2，药敏试剂盒的培养皿11的底壁外侧标有至少10个实线同心圆，每两个相邻实线同心圆之间的距离为0.25cm。图2中12-1、12-2、12-3、12-4、12-5外的虚线圆即分别为药敏纸片1、药敏纸片2、药敏纸片3(图中d)、药敏纸片4、药敏纸片5的抑菌圈的直径，由于标有同心圆刻度线，测量时，直接看抑菌圈直径跨过几个同心圆弧线即可(每条弧线相隔0.25cm)。因此，根据敏感性判断标准，可以快速、准确的判断出：药敏纸片1对所测细菌为不敏感(d≤6mm)，药敏纸片2对所测细菌为中度敏感(15mm)，药敏纸片3对所测细菌为低度敏感(10mm>d>6mm)，药敏纸片4对所测细菌为中度敏感(15mm>d>10mm)，药敏纸片5对所测细菌为高度敏感(d>15mm)。

此外，选择同心圆来标记刻度，步骤S40中，支架21置于已接种细菌的培养基平板时，可以任意角度放置，都不影响抑菌圈直径的判断，操作简便。在本发明实施例中，支架21上设有多个用以粘贴药敏纸片12的安装点212，使每次药敏试验可以检测多个药敏纸片12(每个药敏纸片12中所含药物不同)中所含药物对所测细菌的敏感性，节省时间。

本发明对支架21的具体形状和材质不做限制，只要质量合适、可以粘贴多个药敏纸片12，置于培养皿11时不影响检测结果，且能使药敏纸片12与已接种细菌的培养基平板紧密接触即可。较优地，为了使药敏纸片12之间不会相互影响，且培养皿11边不影响实验结果，各个药敏纸片12之间的中心间距不得小于24mm，药敏纸片12距培养皿11边不得小于15mm。在一实施例中，支架21包括相互垂直的2个支杆211，支架21上设有5个安装点212，中心一个，每个支杆211两边各1个。

进一步地，如图2所示，支杆211两边的安装点212，为第10个同心圆处，因为本发明选用的常规培养皿，直径为9cm，在第10个同心圆处，既满足各个药敏纸片之间的间距，又满足与培养皿11边的距离，也因此，培养皿11的底壁外侧标有至少10个实线同心圆。需要说明的是，药敏纸片12的中点(圆心)安装于支架21的安装点212。此外，为了使支架21放置操作简单，且不影响实验结果的判断，每一支杆211的长度与培养皿11的直径相同，且两个支杆211的交点位于任一支杆的中点处。支杆211与培养皿11的直径相同，使其能固定于培养皿11，且不需要放置于培养皿11特定位置，操作简单，不易出错。

在一实施例中，支架21上的每个安装点212粘贴1片药敏纸片12或2片不同药敏纸片12。每个安装点212粘贴一片药敏纸片12时，为常规药敏检测方式，在此不多做解释。每个安装点212粘贴2片不同药敏纸片12时，可检测两种抗生素药物结合使用对待测细菌的影响。具体地，粘贴2片药敏纸片时，先在支架21的安装点212贴一片，然后在第一片药敏纸片12上润少许生理盐水，再在第一片药敏纸片12上贴第二片。

为了判断抑菌圈直径时利于计算，在一实施例中，多个实线同心圆中距离培养皿11中心最近的实线圆的半径为0.25cm。进一步地，由于常用的药敏纸片12的直径一般为6mm，因此，本发明的药敏纸片12的直径也设置为6mm。

在一实施例中，药敏试剂盒的药敏纸片12设有20个，且每一药敏纸片12对应含有20种药物中的任意一种，20种药物包括泰拉菌素、乙酰异戊酰基泰乐菌素、沃尼妙林、左氧氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、恩诺沙星、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、替米考星、大观霉素、氟苯尼考、头孢噻呋、泰妙菌素、强力霉素、黏菌素、阿莫西林以及林可霉素。上述药物均选于国内外知名动保企业的常规和最新兽用药物，药物适宜浓度以及药敏纸片的制作属于本领域公知常识，在此不做赘述。需要说明的是，每个药敏纸片12是含有20种药物中的任意一种，如需测量多种药物，即需要多个含有不同药物的药敏纸片。

为了使药敏试验减少来自其他因素的影响，例如培养基平板不适用于所测细菌，因此，需要根据不同的感染细菌配制不同的培养基平板，在一实施例中，培养基平板包括普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、SS琼脂平板以及含辅酶A的胰酪胨大豆肉汤琼脂平板中任意一种。例如，大肠杆菌可选用麦康凯琼脂平板，沙门氏菌可选用SS琼脂平板，副猪嗜血杆菌可选用含NAD的TSA琼脂平板，普通葡萄球菌可选用普通营养琼脂平板。

以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (7)

1.一种药敏试剂盒，包括盒体和盖体，其特征在于，还包括：

培养皿，所述培养皿设于所述盒体内部，所述培养皿的底壁外侧标有至少10个实线同心圆，每两个相邻所述实线同心圆之间的距离为0.25cm，所述培养皿上铺设有培养基平板；

药敏纸片，所述药敏纸片设于所述盒体内部；以及，

支架，所述支架设于所述盖体上，所述支架上设有多个用以粘贴药敏纸片的安装点。

2.如权利要求1所述的药敏试剂盒，其特征在于，多个所述实线同心圆中距离所述培养皿中心最近的实线圆的半径为0.25cm。

3.如权利要求1所述的药敏试剂盒，其特征在于，所述支架包括相互垂直的2个支杆，每一所述支杆的长度与所述培养皿的直径相同，且两个所述支杆的交点位于任一所述支杆的中点处。

4.如权利要求1所述的药敏试剂盒，其特征在于，所述药敏纸片设有20个，且每一所述药敏纸片对应含有20种药物中的任意一种，所述20种药物包括泰拉菌素、乙酰异戊酰基泰乐菌素、沃尼妙林、左氧氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、恩诺沙星、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、替米考星、大观霉素、氟苯尼考、头孢噻呋、泰妙菌素、强力霉素、黏菌素、阿莫西林以及林可霉素。

5.如权利要求1所述的药敏试剂盒，其特征在于，所述培养基平板包括普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、SS琼脂平板以及含辅酶A的胰酪胨大豆肉汤琼脂平板中任意一种。

6.一种细菌药敏检测方法，其特征在于，所述细菌药敏检测方法使用如权利要求1所述的药敏试剂盒进行，包括如下步骤：

无菌采集病料的病变组织，并将病变组织接种至对应的培养基平板上，以使病变组织中的细菌接种至培养基平板；

将药敏纸片贴于支架上，将支架置于已接种细菌的培养基平板，并使药敏纸片与培养基平板紧密接触，完成药敏纸片粘贴；

在药敏纸片粘贴完成后的15～30min内，将培养基平板置于36～38℃条件下培养，12～24h后读取抑菌圈直径，并根据抑菌圈直径判断病料组织中的细菌对药敏纸片中所含药物成分的敏感性。

7.如权利要求6所述的细菌药敏检测方法，其特征在于，每一所述安装点粘贴1片所述药敏纸片或2片不同的所述药敏纸片。

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