CN111337673B

CN111337673B - 一种用于新型冠状病毒免疫检测的合成多肽组合物及应用

Info

Publication number: CN111337673B
Application number: CN202010417955.2A
Authority: CN
Inventors: 刘萍; 黄爱龙; 栾大伟; 张振斌; 李华; 侯玉文; 史光辉; 寇悦; 汪德强; 陈娟
Original assignee: Bioscience Tianjin Diagnostic Technology Co ltd; Chongqing Medical University
Current assignee: Tianjin Boasaisi Biotechnology Co ltd; Chongqing Medical University
Priority date: 2020-05-18
Filing date: 2020-05-18
Publication date: 2020-08-11
Anticipated expiration: 2040-05-18
Also published as: CN111337673A

Abstract

本发明提供一种用于新型冠状病毒免疫检测的合成多肽组合物，含有四种合成多肽；本发明所述的合成多肽可以与新型冠状病毒（2019‑nCoV）的抗体IgG/IgM反应，而不与其它肺部感染性冠状病毒等发生反应，也不与正常人血清发生反应；使用本发明的合成多肽检测血清中新型冠状病毒（2019‑nCoV）IgM/IgG抗体，灵敏度可以达到90%以上，特异性达到99%以上，且本发明所述多肽，通过化学合成即可，不需要使用生物技术进行重组，成本更低，且更易获得，便于推广使用。

Description

一种用于新型冠状病毒免疫检测的合成多肽组合物及应用

技术领域

本发明属于免疫分析检测技术领域，尤其是涉及一种用于新型冠状病毒免疫检测的合成多肽组合物及应用。

背景技术

新型冠状病毒（SARS-CoV-2）是2019年在人体中发现的冠状病毒新毒株。冠状病毒（coronavirus，CoV）属巢状病毒目，冠状病毒科，分为本 α、β、γ三个属。α、β属仅对哺乳动物致病，γ属主要引起鸟类感染，CoV主要通过直接接触分泌物或经气溶胶、飞沫传播，也有证据表明可经粪口途径传播。

到目前为止，引起人类呼吸道疾病的人冠状病毒（HCoV）已达7种：HCoV－229E、HCoV－OC43、SARS－CoV、HCoV－NL63、HCoV－HKU1、MERS－CoV和新型冠状病毒（2019），是人呼吸道感染的重要病原体。其中，新型冠状病毒（2019-nCoV），临床表现为发热、乏力等全身症状，伴有干咳，呼吸困难等，可迅速发展为重症肺炎、呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征，浓毒性休克，多器官功能衰竭，严重酸碱代谢紊乱等，甚至危及生命。

目前临床实验室的检测方法主要依靠核酸检测，核酸检测是可以找到感染的病毒证据，但核酸检测要在有条件和资质的实验室进行，存在检测时间长、步骤多、场地、设备、专业检测人员要求高等不足，难以大规模开展，而且成本较高。

人体一旦感染病毒，人体内的免疫系统立刻会开始反应，产生抗体。一般来说，在感染初期的3—7天，IgM抗体指标会迅速上升，达到峰值后逐步下降，随后IgG抗体会长期存在人体内。

由于方法学的限制，核酸检测会出现假阳性和假阴性，造成误诊和漏诊。采用化学发光免疫分析法对IgM抗体分析，可以在较短时间内迅速对轻症患者、疑似患者和密切接触者进行大规模排查，而且成本大概降低三分之二左右。人体一旦感染病毒，人体内的免疫系统立刻会开始反应，产生抗体。一般来说，在感染初期的3—7天，IgM抗体指标会迅速上升，达到峰值后逐步下降。

抗体测定还可用于流行病学调查，了解人群中有多少个体接触过相应的新型病毒，有助于对疫情的整体判断和控制。

在抗体检测中，如何选择与新型冠状病毒（2019-nCoV）的抗体IgG/IgM反应，而不与其它肺部感染性冠状病毒等发生反应，也不与正常人血清发生反应，特异性高的抗原，成为亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种用于新型冠状病毒免疫检测的合成多肽组合物及应用，该合成多肽组合物，既能满足抗体检测的特异性以及灵敏度，且合成较为简单，只需要使用现有技术中的化学合成技术即可，不需要利用生物重组表达制备，成本较低。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种用于新型冠状病毒免疫检测的合成多肽组合物，含有四种合成多肽，四种合成多肽的氨基酸序列如表1所示：

表1 合成多肽的氨基酸序列

本发明还提供一种如上所述合成多肽组合物在新型冠状病毒(2019-nCoV)免疫检测试剂中的应用。

优选的，合成多肽组合物中，四种合成多肽的质量比为（0.5-2）：（0.5-2）：（0.5-2）：（0.5-2）。

优选的，合成多肽组合物中，四种合成多肽的质量比为1:1:1:1。

优选的，四种合成多肽分别为生物素化或FITC化的Spike多肽、nucleocapsid多肽。

优选的，免疫检测包括化学发光免疫、酶联免疫法检测中的一种。

优选的，检测的是新型冠状病毒（2019-nCoV）总抗体或IgM或IgG抗体或IgM、IgG抗体联合检测。

生物素化或FITC化的Spike多肽（结构蛋白表面糖蛋白多肽）、nucleocapsid多肽（结构蛋白核衣壳磷蛋白多肽）进行优化组合，配合链霉亲和素包被板/磁性颗粒或抗FITC抗体包被板/磁性颗粒，标记过的鼠抗人IgM/IgG单克隆抗体，化学发光法底物液等制备出试剂盒，可检测血清中新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM/IgG抗体。

相对于现有技术，本发明所述的用于新型冠状病毒免疫检测的合成多肽组合物及应用，具有以下优势：

本发明所述的合成多肽可以与新型冠状病毒（2019-nCoV）的抗体IgG/IgM反应，而不与其它肺部感染性冠状病毒等发生反应，也不与正常人血清发生反应；使用本发明的合成多肽检测血清中新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM/IgG抗体，灵敏度可以达到90%以上，特异性达到99%以上，且本发明所述多肽，通过化学合成即可，不需要使用生物技术进行重组，成本更低，且更易获得，便于推广使用。

附图说明

图1为实施例一的ROC曲线分析图；

图2为实施例二的ROC曲线分析图；

图3为对比例一的ROC曲线分析图。

具体实施方式

除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下面结合实施例来详细说明本发明。

实施例一

磁性颗粒-抗FITC抗体配制包括以下步骤，取200mL0 .2M 羟乙基哌嗪乙硫磺酸（HEPES）缓冲液，加入60mg表面联有氨基或羧基的磁性颗粒，室温搅拌30min，之后加入21mg的抗FITC抗体，然后加入EDC，其浓度为10mg/mL，室温避光反应1h后，用0 .01M PBS缓冲液洗涤3次，最后用0 .01M PBS定溶至1L即可；所述磁性颗粒为表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径1～2μm。

所述FITC标记新型冠状病毒抗原的制备包括以下步骤，

1）将FITC与新型冠状病毒合成多肽按摩尔比1:1进行混合，避光37℃反应12h。

2）将上述步骤1）完成的标记液用0 .01M PBS 于2-8℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。

其中，新型冠状病毒抗原为4种合成多肽按相同质量比混合；4种合成多肽的氨基酸序列如表1所示。

需要说明的是，本申请使用的FITC标记的新型冠状病毒合成多肽可为以上方法合成，也可以通过其他现有的常规方式合成，只要能够达到将FITC与新型冠状病毒合成多肽连接就可以。

20倍浓缩洗液包括58g/L 磷酸氢二钠，5.92g/L磷酸二氢钠，180g/L NaCl，10mL/LTween-20和质量浓度2% Proclin300。

阴性对照以及阳性对照试剂，其中阴性对照，制备方法：将含牛血清白蛋白的缓冲液加入1%体积浓度的ProClin^TM 300。分装，贴标签，储存于2~8℃。其中缓冲液的配方为：10g/L BSA，0.02mol/L PBS（pH值：7-8，有效期：14个月）

阳性对照，制备方法：取5份阳性人血清混合，经56℃热灭活45分钟，用含牛血清白蛋白的缓冲液稀释至工作浓度，加入ProClinTM 300，分装，贴标签，储存于2~8℃。其中缓冲液的配方为：10g/L BSA，0.02mol/L PBS（pH值：7-8，有效期：14个月）。

碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体的制备方法如下：

A、碱性磷酸酶（ALP）活化

1）配置10mg/mL ALP溶液；

2）配置12.8 mg/mL 过碘酸钠NaIO₄溶液；

3）将上述步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比1：1混合均匀，2-8℃避光反应30min；

4）配置浓度为20μL/mL的乙二醇水溶液，与上述步骤3）溶液以相同体积混合，常温避光反应30min，活化即完成，放-20℃保存（保存时间不超过3个月）；

B、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体

1）将待标记原料装入透析袋中，用0.05 M pH9 .6 的碳酸盐缓冲液，透析30min；

2）将标记原料与活化的ALP按质量比1:3进行混合，之后用0.05 M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析24h，期间换液2-3次；

3）配置浓度为2mg/mL的 NaBH₄水溶液，按1mgALP加80μL配制好的NaBH₄水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应2h；

4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01 PBS 于2-8℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。

稀释液通过如下步骤配制而成，在1L工艺用水中，加入6g Tris、1.36gZnCl₂，9.6gMgCl₂搅拌至完全溶解；再加入2.1g 聚合BSA搅拌至完全溶解；再加入1.1mL ProClin^TM300，搅拌30分钟。用6M HCl 或2M NaOH 调整pH值在8.0±0.2范围内的要求。

化学发光底物通过如下步骤配制而成，量取900mL的纯化水；分别添加0.25gAMPPD，0.05g Na₂SO₃，5gSDS(十二烷基硫酸钠)，6gTris，搅拌至完全溶解；再分别添加0.05mLTween-20和1mL Proclin^TM300，定容至1L。调节pH至9.0，储存于2~8℃。

将FITC标记新型冠状病毒重组抗原、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体用稀释液进行稀释，稀释到工作浓度0.2μg/mL；也可以在制备相关试剂后，直接稀释至工作浓度，在操作时，直接使用，不需要稀释。

样本分析过程：

1、将待检试剂盒在室温（18~25℃）下平衡30分钟。

2、配制洗液：用蒸馏水将浓缩洗液按1:20稀释（1mL洗液加19mL蒸馏水）。若浓缩洗液有结晶，可将浓缩洗液置于室温或37℃待结晶溶解后再进行稀释。

根据以上研究，确定本试剂盒的反应步骤为：

1、样本处理：取1mL生理盐水，加入20μL样本，用漩涡混匀仪混匀5秒，静置15分钟后开始实验。

2、根据实验需要取出适量的反应管。设置阴性、阳性对照各2管。每管先加入50μLFITC标记的新型冠状病毒抗原（合成多肽）、75μL处理后样本或阴性、阳性对照，再加入50μL抗FITC抗体标记的磁性颗粒，在37℃下反应20分钟。

3、磁分离清洗。

4、每管加入75µL碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体。

5、在37℃下反应15分钟。

6、磁分离清洗。

7、每管加入化学发光底物200μL，避光检测，反应5秒读数。

该实施例制备的试剂盒检测效果评价如下：

该产品临床试验以《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》明确的疾病确诊/排除标准为对比，选取684例病例，其中确诊病例282例，排除病例402例。

以下检测使用的仪器是：化学发光法免疫分析仪Axceed260；产品注册号-津械注准20182400046；

1、稳定性

1.1设计要求：试剂盒37±1℃放置7天，外观、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出限、精密性检测结果均应符合设计要求。

1.2试验方法：将试剂盒在37℃存放7天后取出，检测参考品。

表2 实施例一稳定性检测结果

表3 实施例一稳定性具体检测数据

2、精密度

2.1设计要求

2.1.1批内精密度：检测参考品中3个不同水平精密度参考品，应符合以下要求

2.1.1.1精密度参考品N：阴性检出率应为100%（n=20）；

2.1.1.2精密度参考品L：阳性检出率应≥90%（n=20）；

2.1.1.3精密度参考品CV：阳性检出率为100%，且CV≤10%（n=20）。

2.1.2批间精密性：检测参考品中精密度阳性质控品，阳性检出率应为100%，且CV≤15%。

2.2试验方法

2.2.1批内精密性：检测精密度参考品，每个水平重复检测20次，计算阴性检出率、阳性检出率。依据阳性质控品测定结果（S/CO）的平均值（）与标准差（SD），根据公式（2）计算变异系数（CV），结果应符合2.1.1要求。

变异系数（CV%）＝SD/平均值×100%…………公式（2）

2.2.2批间精密性：用三批试剂盒检测参考品中精密度参考品CV，每批次测试20管，计算阳性检出率。同时计算60次检测结果的平均值和标准差（SD），根据公式（2）计算变异系数（CV），结果应符合2.1.2要求。

2.3精密性参考品测定结果

表4 实施例一精密性检测数据

3、灵敏度与特异性

表5 实施例一排除2019-nCoV感染的部分检测结果

表6 实施例一确诊2019-nCoV感染的部分检测结果

根据检验结果使用SPSS软件进行ROC曲线分析，具体结果如下表所示，ROC曲线分析图如图1所示。

表7 实施例一曲线下的面积

样本S/CO ≥ 1，检测结果判为阳性；样本S/CO < 1，检测结果判为阴性。其中S/CO值为检测样本的发光值/cutoff值。通过ROC曲线确定试剂盒在不同cutoff值的情况下，试剂盒灵敏度及特异性的表现，筛选出最优的cutoff值。

ROC曲线分析结果显示曲线下面积为0.963，表明本发明所述试剂盒在临床诊断中的准确性较高。

实施例二

磁性颗粒-抗FITC抗体配制包括以下步骤，取100mL0 .1M 吗啉乙磺酸（MES）缓冲液，加入20mg表面联有氨基或羧基的磁性颗粒，室温搅拌40min，之后加入7mg的抗FITC抗体，然后加入EDC，其浓度为8mg/mL，2-8℃反应1h后，用0 .01M PBS缓冲液洗涤3次，最后用0.01M PBS定溶至1L即可；所述磁性颗粒为表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径1～2μm。

所述FITC标记新型冠状病毒抗原的制备包括以下步骤，

碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法如下：

A、碱性磷酸酶（ALP）活化

1）配制10mg/mL ALP溶液；

2）配制12.8 mg/mL 过碘酸钠NaIO₄溶液；

4）配制浓度为20μL/mL的乙二醇水溶液，与上述步骤3）溶液以相同体积混合，常温避光反应20min，活化即完成，放-20℃保存（保存时间不超过3个月）；

B、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体

3）配制浓度为2mg/mL的 NaBH₄水溶液，按1mgALP加80μL配制好的NaBH₄水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应2h；

稀释液通过如下步骤配制，在1.6L工艺用水中，加入12.684g Tris、18.396gNaCl，搅拌至完全溶解；再加入2.1g CaseinNa搅拌至完全溶解；再加入0.2331g MgCl2搅拌至完全溶解；再加入2.1mL ProClinTM300，搅拌30分钟。用纯化水定容至2L，用pH计测定其pH值，用6M HCl 或2M NaOH 调整pH值在7.4±0.2范围内的要求。

化学发光底物包括如下组分，0.25g/L AMPPD，0.05g/L Na₂SO₃，5g/L SDS(十二烷基硫酸钠)，6g/L Tris；0.05mL/L Tween-20和1mL Proclin^TM300，pH值为9.0。

将FITC标记新型冠状病毒重组抗原、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体用稀释液进行稀释，稀释到工作浓度0.2μg/mL；也可以在制备相关试剂后，直接稀释至工作浓度，在操作时，直接使用，不需要稀释。

样本分析过程：

1、将待检试剂盒在室温（18~25℃）下平衡30分钟。

2、配制洗液：用蒸馏水将20倍浓缩洗液按1:20稀释（1mL洗液加19mL蒸馏水）。若浓缩洗液有结晶，可将浓缩洗液置于室温或37℃待结晶溶解后再进行稀释。

根据以上研究，确定本试剂盒的反应步骤为：

3、磁分离清洗。

4、每管加入75µL碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体。

5、在37℃下反应15分钟。

6、磁分离清洗。

7、每管加入化学发光底物液200μL，避光检测，反应5秒读数。

该实施例制备的试剂盒检测效果评价如下：

1.稳定性

1.1设计要求：试剂盒37±1℃放置7天，外观、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出限、精密度检测结果均应符合设计要求。

1.2试验方法：将试剂盒在37℃存放7天后取出，检测参考品。

1.3试验结果

表8 实施例二稳定性检测结果

表9 实施例二稳定性具体检测数据

2、精密度

2.1设计要求

2.1.1.1精密度参考品N：阴性检出率应为100%（n=20）；

2.1.1.2精密度参考品L：阳性检出率应≥90%（n=20）；

2.1.1.3精密度参考品CV：阳性检出率为100%，且CV≤10%（n=20）。

2.1.2批间精密度：检测参考品中精密度参考品CV，阳性检出率应为100%，且CV≤15%。

2.2试验方法

2.2.1批内精密度：检测精密度参考品，每个水平重复检测20次，计算阴性检出率、阳性检出率。依据测定结果（S/CO）的平均值（）与标准差（SD），根据公式（2）计算变异系数（CV），结果应符合2.1.1要求。

变异系数（CV%）＝SD/平均值×100%…………公式（2）

2.2.2批间精密度：用三批试剂盒检测参考品中精密度参考品CV，每批次测试20管，计算阳性检出率。同时计算60次检测结果的平均值和标准差（SD），根据公式（2）计算变异系数（CV），结果应符合2.1.2要求。

2.3精密度参考品测定结果

表10 实施例二精密度检测结果

3、灵敏度与特异性

表11 实施例二排除2019-nCoV感染的部分检测结果

表12 实施例二确诊2019-nCoV感染的部分检测结果

根据检验结果使用SPSS软件进行ROC曲线分析，具体结果如下表所示，ROC曲线分析图如图2所示。

表13 实施例二曲线下的面积

ROC曲线分析结果显示曲线下面积为0.984，表明本发明所述试剂盒在临床诊断中的准确性较高。

对比例一

将实施例一中的，新型冠状病毒抗原改用新型冠状病毒重组抗原；重组抗原的氨基酸序列如下表所示

表14 重组抗原的氨基酸序列信息

所述FITC标记新型冠状病毒抗原的制备包括以下步骤，

1）将新型冠状病毒重组抗原装入透析袋中，用0.02-0.1 M pH8.5-10的碳酸盐缓冲液，透析0.5-2h；

2）将FITC与新型冠状病毒重组抗原按摩尔比4:1进行混合，之后用0.02-0.1 M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析20-24h，期间换液2-3次；

3）将上述步骤2）完成的标记液用0 .01-0.05M PBS 于2-8℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。

灵敏度与特异性

表15 对比例一排除2019-nCoV感染的部分检测结果

表16 对比例一确诊2019-nCoV感染的部分检测结果

根据检验结果使用SPSS软件进行ROC曲线分析，具体结果如下表所示，ROC曲线分析图如图3所示。

表17 对比例一曲线下的面积

ROC曲线分析结果显示曲线下面积为0.960，表明本发明所述试剂盒在临床诊断中的准确性较高。

以上所述仅为本发明的较佳施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司

重庆医科大学

<120> 一种用于新型冠状病毒免疫检测的合成多肽组合物及应用

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser

1 5 10 15

Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln

20 25

<210> 2

<211> 45

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln Pro

1 5 10 15

Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe

20 25 30

Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr

35 40 45

<210> 3

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Trp Phe Thr Ala Leu Thr Gln His Gly Lys Glu Asp Leu Lys Phe Pro

1 5 10 15

Arg Gly Gln Gly Val Pro Ile Asn Thr Asn Ser

20 25

<210> 4

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Gly Lys Gly Gln Gln Gln Gln Gly Gln

1 5 10 15

Thr Val Thr Lys Lys Ser Ala Ala Glu Ala Ser Lys Lys Pro Arg Gln

20 25 30

Lys Arg Thr Ala Thr Lys Ala Tyr

35 40

<210> 5

<211> 204

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

Met Ser Asp Asn Gly Pro Gln Asn Gln Arg Asn Ala Pro Arg Ile Thr

1 5 10 15

Phe Gly Gly Pro Ser Asp Ser Thr Gly Ser Asn Gln Asn Gly Glu Arg

20 25 30

Ser Gly Ala Arg Ser Lys Gln Arg Arg Pro Gln Gly Leu Pro Asn Asn

35 40 45

Thr Ala Ser Trp Phe Thr Ala Leu Thr Gln His Gly Lys Glu Asp Leu

50 55 60

Lys Phe Pro Arg Gly Gln Gly Val Pro Ile Asn Thr Asn Ser Ser Pro

65 70 75 80

Asp Asp Gln Ile Gly Tyr Tyr Arg Arg Ala Thr Arg Arg Ile Arg Gly

85 90 95

Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr

100 105 110

Leu Gly Thr Gly Pro Glu Ala Gly Leu Pro Tyr Gly Ala Asn Lys Asp

115 120 125

Gly Ile Ile Trp Val Ala Thr Glu Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp

130 135 140

His Ile Gly Thr Arg Asn Pro Ala Asn Asn Ala Ala Ile Val Leu Gln

145 150 155 160

Leu Pro Gln Gly Thr Thr Leu Pro Lys Gly Phe Tyr Ala Glu Gly Ser

165 170 175

Arg Gly Gly Ser Gln Ala Ser Ser Arg Ser Ser Ser Arg Ser Arg Asn

180 185 190

Ser Ser Arg Asn Ser Thr Pro Gly Ser Ser Arg Gly

195 200

<210> 6

<211> 244

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

Ser Arg Gly Gly Ser Gln Ala Ser Ser Arg Ser Ser Ser Arg Ser Arg

1 5 10 15

Asn Ser Ser Arg Asn Ser Thr Pro Gly Ser Ser Arg Gly Thr Ser Pro

20 25 30

Ala Arg Met Ala Gly Asn Gly Gly Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu

35 40 45

Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Gly Lys Gly Gln

50 55 60

Gln Gln Gln Gly Gln Thr Val Thr Lys Lys Ser Ala Ala Glu Ala Ser

65 70 75 80

Lys Lys Pro Arg Gln Lys Arg Thr Ala Thr Lys Ala Tyr Asn Val Thr

85 90 95

Gln Ala Phe Gly Arg Arg Gly Pro Glu Gln Thr Gln Gly Asn Phe Gly

100 105 110

Asp Gln Glu Leu Ile Arg Gln Gly Thr Asp Tyr Lys His Trp Pro Gln

115 120 125

Ile Ala Gln Phe Ala Pro Ser Ala Ser Ala Phe Phe Gly Met Ser Arg

130 135 140

Ile Gly Met Glu Val Thr Pro Ser Gly Thr Trp Leu Thr Tyr Thr Ala

145 150 155 160

Ala Ile Lys Leu Asp Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile

165 170 175

Leu Leu Asn Lys His Ile Asp Ala Tyr Lys Thr Phe Pro Pro Thr Glu

180 185 190

Pro Lys Lys Asp Lys Lys Lys Lys Ala Asp Glu Thr Gln Ala Leu Pro

195 200 205

Gln Arg Gln Lys Lys Gln Gln Thr Val Thr Leu Leu Pro Ala Ala Asp

210 215 220

Leu Asp Asp Phe Ser Lys Gln Leu Gln Gln Ser Met Ser Ser Ala Asp

225 230 235 240

Ser Thr Gln Ala

<210> 7

<211> 325

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val

1 5 10 15

Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe

20 25 30

Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu

35 40 45

His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp

50 55 60

Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp

65 70 75 80

Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu

85 90 95

Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser

100 105 110

Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile

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290 295

Claims

1. 一种用于新型冠状病毒免疫检测的合成多肽组合物，其特征在于，由以下四种合成多肽组成，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4所示。

2.根据权利要求1所述的合成多肽组合物，其特征在于，四种合成多肽为生物素化或FITC化的多肽。

3.根据权利要求1或2所述的合成多肽组合物在制备新型冠状病毒2019-nCoV免疫检测试剂中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：合成多肽组合物中，四种合成多肽的质量比为（0.5-2）：（0.5-2）：（0.5-2）：（0.5-2）。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：合成多肽组合物中，四种合成多肽的质量比为1:1:1:1。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：免疫检测包括化学发光免疫、酶联免疫法检测中的一种。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：检测的是新型冠状病毒2019-nCoV总抗体或IgM或IgG抗体或IgM、IgG抗体联合检测。