CN111264303B - 一种烟色离褶伞栽培种及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种烟色离褶伞栽培种及其制备方法。所述的烟色离褶伞栽培种是以棉籽壳、玉米芯、锯末、小麦、石膏和普钙为原料制备的培养料进行接种培养得到；所述的烟色离褶伞栽培种菌丝吃料快、性状稳定、污染率低、培养周期短，能减少不良菌种导致不能正常出菇的现象。所述的制备方法包括前处理和接种培养步骤。本发明中使用的原材料组成较为简单，生产成本低；利用本发明中提到的配方配比制作的烟色离褶伞栽培种，菌丝吃料快、性状稳定、污染率低、培养周期短，为云南当地的野生烟色离褶伞的规模化栽培和可持续开发利用提供了菌种保障。

Description

一种烟色离褶伞栽培种及其制备方法

技术领域

本发明属于食用菌栽培技术领域，具体涉及一种烟色离褶伞栽培种及其制备方法。

背景技术

烟色离褶伞（L . fumosum）隶属于离褶伞科（(Lyophyllaceae），离褶伞属（Lyophyllum）。烟色离褶伞在云南省大部分县市都有分布，尤其在大理、楚雄、玉溪、临沧、曲靖、普洱、剑川、宾川、嵩明等地区的野生产量非常丰富，通常大量发生于9月份，一直到当年11月份初期还有少量发生，子实体丛生较多，单生较少，因此该菌又被云南当地民众称作冷菌、九月菇、树窝、一窝鸡、北风菌等。野生烟色离褶伞菌肉肥厚细腻，味道鲜美，风干后风味更加独特，营养丰富，药食兼用，是当地百姓喜爱的重要自然资源之一，在改善膳食结构和发展经济中，起着不可忽视的作用，市场销量逐年增加，导致该野生资源受到掠夺性破坏。近年来我国许多科研工作者不断对该菌进行驯化栽培研究，目前已能在纯人工条件下对其进行栽培，并最终培育出完整的子实体。然而，烟色离褶伞的人工栽培还处于小规模试验阶段，相关研究主要集中在分离鉴定和生物学特性方面，菌种制备周期长、性状不稳定及污染率高，后续栽培的产量较低，这些问题严重制约了该菌的商业化栽培。至今，在日常市场上几乎未见人工栽培的烟色离褶伞，该菌的栽培技术仍待完善。

在烟色离褶伞的人工栽培中，优良菌种的制备是关键的技术环节，采用传统的固体菌种制种需要逐级扩繁生产母种、原种、栽培种，培育的菌种往往生长缓慢或难于生长，且容易感染杂菌，因此，有必要制定出一个科学合理、操作简单、易于推广的烟色离褶伞栽培种规模化制备方法，减少不良菌种导致不能正常出菇、影响产量的现象发生。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种烟色离褶伞栽培种；第二目的在于提供所述的烟色离褶伞栽培种的制备方法。

本发明的第一目的是这样实现的，所述的烟色离褶伞栽培种是以棉籽壳、玉米芯、锯末、小麦、石膏和普钙为原料制备的培养料进行接种培养得到；所述的烟色离褶伞栽培种菌丝吃料快、性状稳定、污染率低、培养周期短，能减少不良菌种导致不能正常出菇的现象。

本发明的第二目的是这样实现的，包括前处理和接种培养步骤，具体包括：

A、前处理：

1）按配方配比称量新鲜、无霉变、无虫蛀和干燥的各原料备用；

2）将玉米芯、小麦和棉籽壳中加入质量浓度0.5~1%的石膏水浸泡24~30h，然后用清水冲洗2~3次，沥干得到玉米芯、小麦和棉籽壳初料a；

3）将初料a和配方配比的锯末、石膏和普钙充分搅拌均匀得到培养料b；

4）将培养料b装入菌袋，灭菌冷却备用；

B、接种培养：将烟色离褶伞菌种接种到菌袋中，然后于温度15~25℃下培养得到目标物烟色离褶伞栽培种。

本发明所述烟色离褶伞栽培种培养基制备方法具体包括如下步骤：

（1）称料：按配方配比称量新鲜、无霉变、无虫蛀和干燥的各原料备用；

（2）预湿:将玉米芯、小麦和棉籽壳中加入质量浓度0.5%~1%的石膏水浸泡24~30h，然后用清水冲洗2~3次，沥干得到玉米芯、小麦和棉籽壳初料a；

（3）拌料：将初料a和配方配比的锯末、石膏、普钙充分搅拌均匀获得培养料b，培养料b要求无结块，含水量达到60%~65%；

（4）装袋：将培养料b装入聚丙烯塑料袋（14cm×28cm×0.05cm）中，装袋要松紧适宜，袋口用套环无棉盖体封口；

（5）灭菌：121℃灭菌（湿热灭菌）2~3 h，灭菌后将菌袋搬入已预先灭菌消毒好的冷却室，冷却至≤28℃时，及时搬入已灭菌消毒（臭氧消毒）的接种室备用。

其中栽培种制备包括母种扩繁、液体培养和固体培养步骤，包括以下：

1、培养基配方

（a）母种扩繁培养基，PDMA培养基：土豆200g/L、葡萄糖15g/L、麦芽糖5g/L、蛋白胨2g/L、KH₂PO₄ 1g/L、MgSO4 0.5g/L、琼脂15 g/L。

（b）液体培养基配方同PDMA培养基，勿加琼脂，121℃灭菌30min（上同）。用于一级液体菌种和发酵罐菌种的发酵培养。

2、母种扩繁

将试管母种从4℃冰箱中取出并转接到装有PDMA培养基的平皿（直径6 cm）中培养，于23~25℃培养9~11天，获得平皿菌种。

3、液体菌种制作

将上述平皿菌种用直径为1cm的打孔器打出10个圆形菌块接种于500mL三角瓶中的液体培养基（土豆200g/L、葡萄糖15g/L、麦芽糖5g/L、蛋白胨2g/L、KH₂PO₄ 1g/L、MgSO40.5g/L），每瓶装液量为200mL；置于摇床中，在转速150~160r/min，温度23~25℃的条件下培养时间为5~7天，获得一级液体菌种。将上述一级液体菌种转接于100L发酵罐中的液体培养基，每罐装液量为80L，接种量为2%~4%，在转速150~160r/min，温度23~25℃的条件下培养6~8天，获得液体菌种。

4、栽培种制作

将上述液体菌种接入栽培种培养基中，每袋接种量为20~25mL，移入培养室培养，室内温度控制在15~25℃，空气相对湿度控制在40%~60%之间，避光培养，得到目标烟色离褶伞栽培种。

本发明的有益效果：本发明采用液体菌种代替传统的固体原种，将液体菌种作为原种直接生产栽培种，与传统的固体菌种生产模式相比，培养基配方及制作工艺简单，降低了菌种生产成本；本发明采用液体发酵制成的菌种有大量断裂的菌丝片段和菌丝球，接种至栽培种培养料后渗透性好，菌丝片段能随液体培养基快速渗透到培养料内部，保证菌种接种后及时的萌发和定植生长，形成菌种生长优势，减少菌种感染杂菌的现象发生，同时，缩短了菌种培养周期，为云南当地的野生烟色离褶伞的规模化栽培和可持续开发利用提供菌种保障。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

本发明所述的烟色离褶伞栽培种是以棉籽壳、玉米芯、锯末、小麦、石膏和普钙为原料制备的培养料进行接种培养得到；所述的烟色离褶伞栽培种菌丝吃料快、性状稳定、污染率低、培养周期短，能减少不良菌种导致不能正常出菇的现象。

所述的培养料是由重量份的棉籽壳40~50份、玉米芯20~30份、锯末10~20份、小麦9~17份、石膏0.5~1.5份和普钙0.5~1.5份组成。

本发明所述的烟色离褶伞栽培种的制备方法，包括前处理和接种培养步骤，具体包括：

A、前处理：

1）按配方配比称量新鲜、无霉变、无虫蛀和干燥的各原料备用；

2）将玉米芯、小麦和棉籽壳中加入质量浓度0.5~1%的石膏水浸泡24~30h，然后用清水冲洗2~3次，沥干得到玉米芯、小麦和棉籽壳初料a；

3）将初料a和配方配比的锯末、石膏和普钙充分搅拌均匀得到培养料b；

4）将培养料b装入菌袋，灭菌冷却备用；

B、接种培养：将烟色离褶伞菌种接种到菌袋中，然后于温度15~25℃下培养得到目标物烟色离褶伞栽培种。

所述的培养料b需要无结块，含水量在60~65%。

所述的菌袋为耐高温聚丙烯塑料袋。

所述的菌袋大小为（12~15）cm×（24~30）cm×0.05mm。

所述的灭菌是湿热灭菌。

所述的冷却是于预先灭菌消毒好的冷却室进行空冷。

所述的冷却是将菌种袋的温度冷却至28℃以下。

所述的培养是于温度22~24℃，空气相对湿度为40~65%条件下进行避光培养。

下面以具体实施案例对本发明做进一步说明：

实施例1

一种烟色离褶伞栽培种及其制备方法具体步骤如下：

（一）栽培种培养基配方

棉籽壳50%、玉米芯20%、锯末19%、小麦9%、石膏1%、普钙1%。

（二）烟色离褶伞栽培种制备方法

（1）母种扩繁：将试管母种从4℃冰箱中取出并转接到装有PDMA培养基（土豆200g/L、葡萄糖15g/L、麦芽糖5g/L、蛋白胨2g/L、KH₂PO₄ 1g/L、MgSO4 0.5g/L、琼脂15 g/L）的平皿（直径6 cm）中培养，于25℃培养9天，获得平皿菌种。

（2）液体菌种制作：将上述平皿菌种用直径为1cm的打孔器打出10个圆形菌块接种于500mL三角瓶中的液体培养基（土豆200g/L、葡萄糖15g/L、麦芽糖5g/L、蛋白胨2g/L、KH₂PO₄ 1g/L、MgSO4 0.5g/L），每瓶装液量为200mL；置于摇床中，在转速160 r/min，温度25℃的条件下培养6天，获得一级液体菌种。将上述一级液体菌种转接于100L发酵罐中的液体培养基（同上），每罐装液量为80L，每罐接种量为3%，在转速160 r/min， 温度25℃的条件下培养时间为7天，获得液体菌种。

（3）栽培种制作

A、称料：按配方配比称量新鲜、无霉变、无虫蛀和干燥的各原料备用；

B、预湿:将玉米芯、小麦和棉籽壳中加入质量浓度0.5%的石膏水浸泡24h，然后用清水冲洗2次，沥干得到玉米芯、小麦和棉籽壳初料a；

C、拌料：将初料a和配方配比的锯末、石膏、普钙充分搅拌均匀获得培养料b，培养料b要求无结块，含水量达到65%；

D、装袋：将培养料b装入聚丙烯塑料袋（14cm×28cm×0.05cm）中，装袋要松紧适宜，袋口用套环无棉盖体封口；

E、灭菌：121℃灭菌（湿热灭菌）2.5h，灭菌后将菌袋搬入已预先灭菌消毒好的冷却室，冷却至≤28℃时，及时搬入已灭菌消毒（臭氧消毒）的接种室备用；

F、接种：按照无菌操作规程将上述发酵罐中液体菌种接入栽培种培养基中，每袋接种量为25mL；

G、培养：栽培种接种完成后，将其移入培养室，室内温度控制在23℃，空气相对湿度控制在40%~65%之间，避光培养，得到目标烟色离褶伞栽培种。

实施例共培养3组烟色离褶伞栽培种，每组100袋。

实施例2

为了更好地说明本发明的优点，设计了本实施例作为对照，具体如下：

（1）本实施例中，取25g固体原种代替液体菌种接种烟色离褶伞栽培种培养基，除此之外，其余培养过程和条件与实施例1完全相同。本实施例共培养3组烟色离褶伞栽培种，每组100袋。

（2）所述原种培养基配方

玉米芯45%、小麦25%、锯末18%、、石膏1%、普钙1%。

（3）所述固体原种制作方法如下：

A、称料：按配方配比称量新鲜、无霉变、无虫蛀和干燥的各原料备用；

B、预湿:将玉米芯和小麦中加入质量浓度0.5%的石膏水浸泡24h，然后用清水冲洗2次，沥干得到玉米芯和小麦初料c；

C、拌料：将初料c和配方配比的锯末、石膏、普钙充分搅拌均匀获得培养料d，培养料d要求无结块，含水量达到65%；

D、装瓶：将培养料天装入650mL组培瓶中的，装料松紧适宜，瓶子用配套的透气耐高温瓶盖封口；

E、灭菌：121℃灭菌（湿热灭菌）2.5h，灭菌后将瓶子搬入已预先灭菌消毒好的冷却室，冷却至≤28℃时，及时搬入已灭菌消毒（臭氧消毒）的接种室备用；

F、接种：按照无菌操作规程将实施例1中的平皿菌种用直径为1cm的打孔器打出10个圆形菌块接种于原种培养基；

G、培养：原种接种完成后，将其移入培养室，室内温度控制在23℃，空气相对湿度控制在40%~65%之间，避光培养，得到固体原种。

（4）固体原种平均制作时间为60天，远长于实施例1中液体菌种制作时间（13天）；且二者同时接种于栽培种培养基后，用液体菌种生产栽培种所需时间也少于用前者生产栽培种所需时间（见下表），从而缩短整个制备周期，极大的提高了烟色离褶伞菌种的生产效率。

栽培种种源	萌发时间/h	萌发率/%	菌种长势	平均满袋时间/天
					固体原种	30	97	菌丝洁白、较密	54
液体菌种	24	100	菌丝洁白、致密	45

实施例3

一种烟色离褶伞栽培种及其制备方法具体步骤如下：

（一）栽培种培养基配方

棉子壳40%、玉米芯30%、锯末19%、小麦9%、石膏1%、普钙1%。

（二）烟色离褶伞栽培种制备方法同实施例1。

实施例4

一种烟色离褶伞栽培种及其制备方法具体步骤如下：

（一）栽培种培养基配方

棉子壳43%、玉米芯25%、锯末15%、小麦15%、石膏1%、普钙1%。

（二）烟色离褶伞栽培种制备方法同实施例1。

Claims (1)

1.一种烟色离褶伞栽培种的制备方法，其特征在于所述的烟色离褶伞栽培种由重量比的棉籽壳50%、玉米芯20%、锯末19%、小麦9%、石膏1%、普钙1%组成的栽培种培养料接种获得，所述的烟色离褶伞栽培种菌丝吃料快、性状稳定、污染率低、培养周期短，萌发时间24h，萌发率100%，菌丝洁白、致密，平均满袋时间45天，能减少不良菌种导致不能正常出菇的现象；烟色离褶伞栽培种由以下步骤获得：

（1）母种扩繁：将试管母种从4℃冰箱中取出并转接到装有土豆200g/L、葡萄糖15g/L、麦芽糖5g/L、蛋白胨2g/L、KH2PO4 1g/L、MgSO4 0.5g/L、琼脂15 g/L组成的PDMA培养基的平皿中培养，于25℃培养9天，获得平皿菌种；

（2）液体菌种制作：将上述平皿菌种用直径为1cm的打孔器打出10个圆形菌块接种于500mL三角瓶中由土豆200g/L、葡萄糖15g/L、麦芽糖5g/L、蛋白胨2g/L、KH₂PO₄ 1g/L、MgSO₄0.5g/L组成的液体培养基，每瓶装液量为200mL；置于摇床中，在转速160 r/min，温度25℃的条件下培养6天，获得一级液体菌种；将上述一级液体菌种转接于100L发酵罐中的液体培养基，每罐装液量为80L，每罐接种量为3%，在转速160 r/min， 温度25℃的条件下培养时间为7天，获得液体菌种；

（3）栽培种制作

A、称料：按栽培种培养料配方称量新鲜、无霉变、无虫蛀和干燥的各原料备用；

B、预湿：将玉米芯、小麦和棉籽壳中加入质量浓度0.5%的石膏水浸泡24h，然后用清水冲洗2次，沥干得到玉米芯、小麦和棉籽壳初料a；

C、拌料：将初料a和配方配比的锯末、石膏、普钙充分搅拌均匀获得培养料b，培养料b要求无结块，含水量达到65%；

D、装袋：将培养料b装入14cm×28cm×0.05cm聚丙烯塑料袋中，装袋要松紧适宜，袋口用套环无棉盖体封口；

E、灭菌：121℃湿热灭菌2.5h，灭菌后将菌袋搬入已预先灭菌消毒好的冷却室，冷却至≤28℃时，及时搬入已臭氧灭菌消毒的接种室备用；

F、接种：按照无菌操作规程将上述发酵罐中液体菌种接入栽培种培养基中，每袋接种量为25mL；

G、培养：栽培种接种完成后，将其移入培养室，室内温度控制在23℃，空气相对湿度控制在40%~65%之间，避光培养，得到目标烟色离褶伞栽培种。