CN111019905A - Car修饰细胞及其在制备自身免疫性疾病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本公开涉及使用嵌合抗原受体(CAR)的T细胞疗法来治疗自身免疫病。本公开内容的实施方案包括给予人类患者药学有效量表达的嵌合抗原受体(CAR)的人类患者自身的T细胞群，该CAR与B细胞的抗原相结合。

Description

CAR修饰细胞及其在制备自身免疫性疾病药物中的应用

技术领域

本公开涉及修饰的细胞及其应用，特别是涉及使用嵌合抗原受体修饰的细胞治疗自身免疫疾病的组合物和方法。

背景技术

全身性自身免疫性疾病可能危及生命，其中系统性红斑狼疮(SLE)的10年存活率为89％。与正常人群相比，多发性硬化症(MS)患者的预期寿命缩短了7至14年。此外，一般来说，患者的生活质量不仅受到疾病症状/突发疾病的影响，而且还受到常规环境诱因的影响。

由于这些疾病的不可治愈性，治疗措施通常是支持性治疗。传统治疗中，全身施用免疫抑制剂可以用于控制疾病严重性和降低复发率，但是长期使用免疫抑制药物可导致各种副作用，包括疲劳，过敏，带状疱疹，肾脏和心脏问题。

最近，B-淋巴细胞耗竭疗法已被证明能够有效抑制SLE和MS活性测量，包括产生新的增强病灶和复发率。与传统的全身免疫抑制药物(可能过度下调大量免疫活性)不同，靶向CD19，CD20，B细胞成熟抗原(BCMA)或BAFF-R的单克隆抗体能够特异性地耗竭B淋巴细胞介导的免疫反应，最大限度地减少全身免疫抑制可能产生的副作用。

然而，使用单克隆抗体的治疗方案通常需要在一个月内每周施用IV次，并且完全输注后的平均半衰期大约为21天(对于利妥昔单抗)。时间效应仅在初次输注后约六周开始，并且完全效果通常在第三个月发生，并且疾病症状可在输注后9个月重新出现。

发明内容

1.要解决的问题

本发明目的是提供一种嵌合抗原受体(CAR)修饰细胞及其在制备自身免疫性疾病药物中的应用。

2.技术方案

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

实施方案涉及T细胞疗法的治疗。实施方案包括使用嵌合抗原受体修饰的细胞治疗自身免疫疾病的方法和系统。例如，一种方法包括向人类患者施用药物有效量的人患者T细胞群，其表达与B细胞相关的抗原结合的嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，自身免疫疾病是与B细胞增殖和免疫球蛋白分泌相关的自身免疫疾病。在一些实施方案中，自身免疫疾病是系统性红斑狼疮(SLE)，类风湿性关节炎(RA)，1型糖尿病(T1D)，干燥综合征或多发性硬化症(MS)。在一些实施方案中，抗原是BAFF，APRIL，CD19，CD20，CD22，B细胞受体(BCR)，BCMA或CD79。

在一些实施方案中，抗原是CD19，CD20或BAFF。在一些实施方案中，T细胞群的药学有效量是人患者每kg体重10⁴至10⁹个细胞。在一些实施方案中，T细胞群的药学有效量是人患者每kg体重10⁵至10⁶个细胞。在一些实施方案中，T细胞群的药学有效量是人患者每kg体重10⁶至10⁷个细胞。在一些实施方案中，T细胞群的药学有效量是人患者每kg体重10⁴至10⁵个细胞。在一些实施方案中，T细胞群的药学有效量是人患者的每kg体重10⁷至10⁸个细胞。在一些实施方案中，T细胞群的药学有效量是人患者每kg体重10⁸至10⁹个细胞。

本发明内容不旨在标识所要求保护的主题的关键特征或必要特征，也不旨在用于限制所要求保护的主题的范围。

附图说明

参照附图描述具体实施方式。在不同附图中使用相同的参考数字表示类似或相同的项目。

图1示出CAR结构的示意图。

图2示出CAR在293T和K562细胞上的表达。

图3示出CAR在原代T细胞上的表达。

图4示出抗小鼠CD19 CAR-T细胞的制备。

图5示出转染前后scFv片段和EGFP荧光标记的双阳性细胞的流式检测结果。

图6示出在体外共培养条件下细胞的特异性杀伤。

图7示出抗小鼠CD19 CAR-T回输治疗SLE疾病模型小鼠的实验流程图。

图8示出12周龄SLE疾病模型小鼠和正常B6小鼠的血清表征。

图9示出SLE疾病模型小鼠存活状况及皮肤破损情况。

图10示出在对照组和实验组中处理后SLE疾病模型小鼠的肾功能损伤情况。

图11示出在抗小鼠CD19 CAR-T细胞处理一周后SLE疾病模型小鼠血液中CD19+细胞的比例。

图12示出20周龄正常B6小鼠和SLE疾病模型小鼠的脾和淋巴结中CD19+细胞的比例。

图13示出20周龄正常B6小鼠和SLE疾病模型小鼠的骨髓中CD19+细胞和CD138+细胞的比例。

具体实施方式

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管与本文描述的那些类似或等同的任何方法和材料可用于本公开的实践或测试，但描述了优选的方法和材料。出于本公开的目的，以下术语定义如下。

本文使用冠词“一(a)”和“一个(an)”指的是一个或多于一个(即，指的是至少一个)该冠词的语法对象。举例来说，“元件”表示一个元件或多于一个元件。

所谓“约”是指数量，水平，数值，数量，频率，百分比，尺寸，大小，数量，重量或长度变化多达20，15，10，9，8，7，6，4，3，2或1％至参考数量，水平，数值，数量，频率，百分比，尺寸，大小，数量，重量或长度。

如本文所用，术语“活化”是指已经充分刺激以诱导可检测的细胞增殖的细胞的状态。激活还可以与诱导的细胞因子产生和可检测的效应子功能相关联。术语“活化的T细胞”特别指正在进行细胞分裂的T细胞。

术语“抗体”以最广泛的含义使用，并且是指单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)，多克隆抗体，多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出期望的生物学活性或功能。本公开中的抗体可以以各种形式存在，包括例如多克隆抗体，单克隆抗体，Fv，Fab和F(ab)₂以及单链抗体和人源化抗体(Harlow等，1999，Antibodies：A LaboratoryManual，Cold Spring Harbor，New York；Houston等，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883；Bird等，1988，Science 242：423-426)。

术语“抗体片段”是指全长抗体的一部分，例如抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的其他实例包括Fab，Fab'，F(ab')₂和Fv片段；双体；线性抗体；单链抗体分子；和由抗体片段形成的多特异性抗体。

术语“Fv”是指含有完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。该片段由紧密非共价结合的一个重链和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。从这两个结构域的折叠产生六个超变环(每个来自H和L链的3个环)，其贡献氨基酸残基用于抗原结合并赋予抗体结合抗原的特异性。然而，甚至单个可变结构域(或仅包含对抗原特异性的三个互补决定区(CDR)的Fv的一半)具有识别和结合抗原的能力，尽管其亲和力低于整个结合位点(二聚体)。

如本文所用，“抗体重链”是指存在于所有抗体分子中的天然存在的构象中的两种类型的多肽链中较大的一种。如本文所用，“抗体轻链”是指存在于其天然存在的构象中的所有抗体分子中的两种类型的多肽链中较小的一种。κ和λ轻链是指两种主要抗体轻链同种型。

术语“合成抗体”是指使用重组DNA技术产生的抗体，例如由噬菌体表达的抗体。该术语还包括通过合成编码抗体的DNA分子和表达DNA分子以获得抗体或获得编码抗体的氨基酸而产生的抗体。合成DNA是使用本领域已知的技术获得的。

术语“抗原”是指引起免疫应答的分子，其可以涉及抗体产生或特异性免疫活性细胞的活化或两者。抗原包括任何大分子，包括所有蛋白质或肽，或来源于重组或基因组DNA的分子。例如，包含编码引起免疫应答的蛋白质或肽的核苷酸序列或部分核苷酸序列的DNA，因此编码如本文所用的术语“抗原”。抗原不需要仅由基因的全长核苷酸序列编码。可以从包括组织样本，肿瘤样本，细胞或生物流体的生物样本产生，合成或衍生抗原。

如本文所用，术语“抗肿瘤作用”是指与肿瘤体积减少，肿瘤细胞数量减少，转移瘤数量减少，肿瘤细胞增殖减少，肿瘤细胞存活，具有肿瘤细胞的受试者的预期寿命增加，或与癌症相关的各种生理症状的改善。“抗肿瘤效应”也可以通过肽，多核苷酸，细胞和抗体首先预防肿瘤发生的能力来表现。

术语“自体抗原”指的是由免疫系统错误识别为外源的抗原。自体抗原包括细胞蛋白质、磷蛋白质、细胞表面蛋白质、细胞脂质、核酸、糖蛋白，包括细胞表面受体。

术语“自体”用于描述源自受试者的材料，随后将其重新引入相同的受试者。

术语“同种异体”用于描述来源于相同物种的不同受试者的移植物。作为例子，供体受试者可以是相关或不相关或受体受试者，但供体受试者具有与受体受试者相似的免疫系统标记。

术语“异种”用于描述来源于不同物种的受试者的移植物。举例来说，供体受试者来自与受体受试者不同的物种，并且供体受试者和受体受试者可以是遗传和免疫学不相容的。

术语“癌症”用于指代以异常细胞的快速且不受控制的生长为特征的疾病。癌细胞可以局部或通过血液和淋巴系统传播到身体的其他部位。各种癌症的例子包括乳腺癌，前列腺癌，卵巢癌，宫颈癌，皮肤癌，胰腺癌，结直肠癌，肾癌，肝癌，脑癌，淋巴瘤，白血病，肺癌等。

在整个说明书中，除非上下文另有要求，否则词语“包括”，“包含”和“含有”将被理解为暗示包括所述步骤或元件或步骤或元件组但不排除任何其他步骤或元素或一组步骤或元素。

短语“由...组成”意味着包括并且限于在短语“由...组成”之后的任何事物。因此，短语“由...组成”表示列出的元素是必需的或强制性的，并且不存在其它元素可以存在。

短语“基本上由......组成”意在包括在该短语之后列出的任何要素，并且可以包括不干扰或有助于本公开中所列举的要素所指定的活动或动作的其他要素。因此，短语“基本上由......组成”表示列出的要素是必需的或强制性的，但是其他要素是可选的并且可能存在或可能不存在，这取决于它们是否影响所列要素的活性或作用。

术语“互补的”和“互补”指的是通过碱基配对原则相关的多核苷酸(即核苷酸的序列)。例如，序列“A-G-T”与序列“T-C-A”是互补的。互补可以是“部分的”，其中仅一些核酸的碱基根据碱基配对原则进行匹配。或者，核酸之间可存在“完全”或“总体”的互补。核酸链之间的互补程度对核酸链之间杂交的效率和强度具有显著影响。

术语“对应”或“对应于”是指(a)具有与参考多核苷酸序列的全部或一部分基本上相同或互补或编码与氨基酸序列相同的氨基酸序列的核苷酸序列的多核苷酸在肽或蛋白质中；或(b)具有与参考肽或蛋白质中的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列的肽或多肽。

术语“共刺激配体”是指特异性结合T细胞上的同源共刺激分子的抗原呈递细胞(例如，APC，树突细胞，B细胞等)上的分子，由此提供除了通过例如TCR/CD3复合物与负载有肽的MHC分子的结合所提供的初级信号之外，信号还介导包括增殖，活化，分化和其他中的至少一种的T细胞应答细胞反应。共刺激配体可以包括B7-1(CD80)，B7-2(CD86)，PD-L1，PD-L2，4-1BBL，OX40L，诱导型共刺激配体(ICOS-L)，细胞间粘附分子ICAM)，CD30L，CD40，CD70，CD83，HLA-G，MICA，MICB，HVEM，淋巴毒素β受体，3/TR6，ILT3，ILT4，HVEM，CD7的配体，与Toll配体受体结合的激动剂或抗体和与B7-H3特异性结合的配体。共刺激配体还尤其包括特异性结合存在于T细胞上的共刺激分子如CD27，CD28，4-1BB，OX40，CD30，CD40，PD-1的激动剂或抗体，ICOS，淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)，CD2，CD7，LIGHT，NKG2C，B7-H3和特异性结合CD83的配体。

术语“共刺激分子”是指T细胞上的同源结合配偶体，其与共刺激配体特异性结合，由此介导T细胞的共刺激反应，例如增殖。共刺激分子包括MHC I类分子，BTLA和Toll样受体。

术语“共刺激信号”是指信号，其与主要信号(例如TCR/CD3连接)组合导致T细胞增殖和/或关键分子的上调或下调。术语“疾病”和“病症”可以互换使用，或者可以是不同的，因为特定的疾病或病症可能没有已知的致病因子(因此病因尚未解决)，因此尚未被认识到作为一种疾病，但仅作为不良状况或综合征，其中临床医生已经确定了或多或少特定的一组症状。术语“疾病”是受试者的健康状态，其中受试者不能维持体内平衡，并且其中如果疾病没有改善则受试者的健康继续恶化。相反，受试者中的“病症”是动物能够维持体内平衡的健康状态，但其中动物的健康状态不如没有病症时的健康状态。如果不及时治疗，疾病并不一定会导致动物的健康状况进一步下降。

术语“有效”是指足以实现期望的，预期的或预期的结果。例如，治疗背景下的“有效量”可以是足以产生治疗或预防益处的化合物的量。

术语“编码”是指多核苷酸(例如基因，cDNA或mRNA)中特定核苷酸序列的固有性质，用作在生物过程中合成其他聚合物和大分子的模板，其具有确定的序列核苷酸(即，rRNA，tRNA和mRNA)或确定的氨基酸序列以及由此产生的生物学性质。因此，如果对应于该基因的mRNA的转录和翻译在细胞或其他生物系统中产生蛋白质，则该基因编码蛋白质。编码链的核苷酸序列与mRNA序列相同(除了“T”被“U”代替外)并且通常在序列表中提供，非编码链用作模板对于基因或cDNA的转录而言，可以称为编码该基因或cDNA的蛋白质或其他产物。

术语“外源性”是指在野生型细胞或生物中不天然存在但通常通过分子生物学技术引入细胞的分子。外源多核苷酸的实例包括编码所需蛋白质的载体，质粒和/或人造核酸构建体。关于多核苷酸和蛋白质，术语“内源性”或“天然的”是指可以在给定的野生型细胞或生物体中发现的天然存在的多核苷酸或氨基酸序列。而且，从第一生物体中分离并通过分子生物学技术转移至第二生物体的特定多核苷酸序列通常被认为是关于第二生物体的“外源”多核苷酸或氨基酸序列。在具体的实施方案中，可以通过分子生物学技术将多核苷酸序列“引入”已经含有这种多核苷酸序列的微生物中，例如以产生另外天然存在的多核苷酸序列的一个或多个另外的拷贝，并且由此有助于过表达编码的多肽。

术语“表达”是指由其启动子驱动的特定核苷酸序列的转录和/或翻译。

术语“表达载体”是指包含重组多核苷酸的载体，所述重组多核苷酸包含与待表达的核苷酸序列可操作地连接的表达控制序列。表达载体包括足够的用于表达的顺式作用元件；用于表达的其他元件可以由宿主细胞提供或在体外表达系统中提供。表达载体包括本领域已知的所有那些，如掺入重组多核苷酸的粘粒，质粒(例如裸露的或包含在脂质体中)和病毒(例如慢病毒，逆转录病毒，腺病毒和腺伴随病毒)。

术语“同源的”是指当两个比较的序列中的两个位置被相同的碱基或氨基酸单体亚基占据时，例如如果两个多肽DNA分子被腺嘌呤占据，那么分子在该位置是同源的。两个序列之间的同源性百分比是由两个序列共有的匹配或同源位置的数量除以比较的位置数×100的函数。例如，如果两个序列中10个位置中的6个匹配或同源，那么这两个序列是60％同源的。举例来说，DNA序列ATTGCC和TATGGC具有50％的同源性。当两个序列比对以给出最大的同源性时进行比较。

术语“免疫球蛋白”或“Ig”是指一类起抗体作用的蛋白质。包括在这类蛋白质中的五个成员是IgA，IgG，IgM，IgD和IgE。IgA是存在于体内分泌物中的一级抗体，例如唾液，泪液，母乳，胃肠分泌物和呼吸道和泌尿生殖道的粘液分泌物。IgG是最常见的循环抗体。IgM是大多数受试者在初次免疫应答中产生的主要免疫球蛋白。它是凝集，补体结合和其他抗体反应中最有效的免疫球蛋白，并且在防御细菌和病毒方面是重要的。IgD是免疫球蛋白，其没有已知的抗体功能，但可以作为抗原受体。IgE是免疫球蛋白，其通过在暴露于过敏原时从肥大细胞和嗜碱性粒细胞释放介质而介导即时超敏反应。

术语“分离的”是指基本上或基本上不含通常伴随其天然状态的组分的材料。该材料可以是细胞或大分子，如蛋白质或核酸。例如，如本文所用的“分离的多核苷酸”是指已经从天然存在状态的侧翼序列中纯化的多核苷酸，例如已经从通常是正常序列中去除的DNA片段与片段相邻。或者，本文所用的“分离的肽”或“分离的多肽”等是指肽或多肽分子从其天然细胞环境的体外分离和/或纯化，以及与其他组分细胞。

术语“基本上纯化的”是指基本上来自通常与其天然状态相关的组分的材料。例如，基本上纯化的细胞是指与其天然存在或天然状态下正常结合的其他细胞类型分开的细胞。在一些情况下，基本上纯化的细胞群指的是均质细胞群。在其他情况下，这个术语简单地指的是与它们天然状态下与其天然相关的细胞分开的细胞。在一些实施方案中，细胞在体外培养。在其他实施方案中，细胞不在体外培养。

在本公开的上下文中，使用下列普遍存在的核酸碱基的缩写。“A”指的是腺苷，“C”指的是胞嘧啶，“G”指的是鸟苷，“T”指的是胸苷，以及“U”指的是尿苷。

除非另有说明，“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括彼此互为简并版本并且编码相同的氨基酸序列的所有核苷酸序列。短语编码蛋白质或RNA的核苷酸序列也可包括内含子，在一定程度上编码蛋白质的核苷酸序列可在某些版本中包含(一个或多个)内含子。

术语“慢病毒”是指逆转录病毒科的一个属。慢病毒在能够感染非分裂细胞的逆转录病毒中是独特的；它们可以将大量的遗传信息输送到宿主细胞的DNA中，因此它们是基因递送载体最有效的方法之一。HIV，SIV和FIV都是慢病毒的例子。来自慢病毒的载体提供了实现显着水平的体内基因转移的手段。

术语“调节”是指与不存在治疗或化合物的受试者中的反应水平相比，调节受试者中反应水平的可检测增加或减少，和/或与在其他方面相同但未经处理的主题中的回应。该术语包括扰乱和/或影响天然信号或应答，由此介导受试者，优选人的有益治疗反应。

当核酸置于与另一核酸序列的功能关系中时，它是“可操作地连接”的。例如，如果将前序列或分泌前导序列的DNA表达为参与多肽分泌的前蛋白，则其与多肽的DNA可操作地连接；如果启动子或增强子影响序列的转录，则其与编码序列可操作地连接；或者如果核糖体结合位置被定位以便于翻译，则该核酸体结合位点与编码序列可操作地连接。

术语“在转录控制下”是指与多核苷酸有效连接并处于正确位置和方向的启动子，以控制RNA聚合酶的转录起始和多核苷酸的表达。

术语“过度表达”的肿瘤抗原或肿瘤抗原的“过表达”旨在表示肿瘤抗原在来自疾病区域的细胞中的异常表达水平，所述疾病区域例如患者相关的特定组织或器官内的实体肿瘤到来自该组织或器官的正常细胞中的表达水平。可以通过本领域已知的标准测定来确定具有肿瘤抗原过表达的以实体瘤或血液恶性肿瘤为特征的患者。

组合物的术语“肠胃外施用”包括例如皮下(s.c.)，静脉内(i.v.)，肌内(i.m.)，胸骨内注射或输注技术。

术语“患者”，“受试者”和“个体”等在本文中可互换使用，并且指适用于本文所述方法的任何人类，动物或活的生物体。在某些非限制性实施方案中，患者，受试者或个体是人或动物。在一些实施方案中，术语“受试者”旨在包括其中可引发免疫应答的活生物体(例如，哺乳动物)。受试者的实例包括人，以及动物如狗，猫，小鼠，大鼠及其转基因物种。

需要治疗或需要治疗的受试者包括具有需要治疗的疾病，病症或障碍的受试者。有需要的受试者还包括需要治疗以预防疾病，病症或障碍的受试者。

术语“多核苷酸”或“核酸”是指mRNA，RNA，cRNA，rRNA，cDNA或DNA。该术语通常是指至少10个碱基长度的核苷酸的聚合形式，或者是核糖核苷酸或者脱氧核苷酸，或者是任一种核苷酸的修饰形式。该术语包括所有形式的核酸，包括单链和双链形式的核酸。

术语“多核苷酸变体”和“变体”等是指与参考多核苷酸序列显示出实质序列同一性的多核苷酸或在下文定义的严格条件下与参考序列杂交的多核苷酸。这些术语还包括通过添加，缺失或取代至少一个核苷酸而与参考多核苷酸不同的多核苷酸。因此，术语“多核苷酸变体”和“变体”包括其中一个或多个核苷酸已被添加或缺失或被不同核苷酸置换的多核苷酸。就这一点而言，本领域众所周知的是，可以对参照多核苷酸进行包括突变，添加，缺失和取代的某些改变，由此改变的多核苷酸保留参照多核苷酸的生物学功能或活性或具有与参考多核苷酸的关系(即优化的)。多核苷酸变体包括例如与参考多核苷酸序列具有至少50％(以及至少51％至至少99％以及所有整数百分比之间，例如90％，95％或98％)序列同一性的多核苷酸在此描述。术语“多核苷酸变体”和“变体”还包括天然存在的等位基因变体和直向同源物。

术语“多肽”，“多肽片段”，“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，是指氨基酸残基的聚合物以及其变体和合成类似物。因此，这些术语适用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是合成的非天然存在的氨基酸，例如相应天然存在的氨基酸的化学类似物，以及天然存在的氨基酸聚合物。在某些方面，多肽可以包括通常催化(即增加各种化学反应的速率)的酶促多肽或“酶”。

术语“多肽变体”是指通过添加，缺失或取代至少一个氨基酸残基而与参考多肽序列区分的多肽。在某些实施方案中，通过一个或多个取代将多肽变体与参考多肽区分开来，所述取代可以是保守的或非保守的。在某些实施方案中，多肽变体包含保守取代，并且就此而言，本领域中熟知可以将一些氨基酸改变为具有广泛相似性质的氨基酸，而不改变多肽活性的性质。多肽变体还包括其中一个或多个氨基酸已被添加或缺失或被不同氨基酸残基置换的多肽。

术语“启动子”是指由启动多核苷酸序列特异性转录所需的细胞合成机器或引入的合成机器识别的DNA序列。术语“表达控制序列”是指在特定宿主生物中表达可操作连接的编码序列所必需的DNA序列。例如，适用于原核生物的控制序列包括启动子，任选的操纵子序列和核糖体结合位点。已知真核细胞利用启动子，聚腺苷酸化信号和增强子。

术语“结合”或“与......相互作用”是指识别并粘附于样品或生物体中特定第二分子的分子，但基本上不识别或粘附于样品中其他结构不相关的分子。如本文关于抗体所使用的术语“特异性结合”是指识别特异性抗原但实质上不识别或结合样品中其他分子的抗体。例如，特异性结合来自一个物种的抗原的抗体也可以结合来自一个或多个物种的抗原。但是，这种跨物种反应性本身并不改变抗体的特异性分类。在另一个实例中，特异性结合抗原的抗体也可以结合不同的抗原等位基因形式。然而，这种交叉反应本身并不改变抗体的特异性分类。在一些情况下，术语“特异性结合”可用于指抗体，蛋白质或肽与第二化学物质的相互作用，意指相互作用取决于存在化学物种上的特定结构(例如抗原决定簇或表位)；例如，抗体识别并结合特定蛋白质结构而不是任何蛋白质。如果抗体对表位“A”具有特异性，则在含有标记的“A”和抗体的反应中含有表位A的分子(或游离的，未标记的A)的存在将减少与抗体结合的标记的A的量。

“结合蛋白”是能够与另一个分子非共价结合的蛋白质。结合蛋白可以结合例如DNA分子(DNA结合蛋白)，RNA分子(RNA结合蛋白)和/或蛋白质分子(蛋白质结合蛋白)。在蛋白质结合蛋白质的情况下，它可以与自身结合(形成同型二聚体，同源三聚体等)和/或其可以结合不同蛋白质或蛋白质的一个或多个分子。结合蛋白可以具有多于一种类型的结合活性。例如，锌指蛋白具有DNA结合，RNA结合和蛋白结合活性。

“锌指DNA结合蛋白”(或结合结构域)是蛋白质或更大蛋白质内的结构域，其以序列特异性方式通过一个或多个锌指结合DNA，所述锌指是在其结构通过配位锌离子稳定结构域。术语锌指DNA结合蛋白通常缩写为锌指蛋白或ZFP。

锌指结合结构域可以被“工程化”以结合预定的核苷酸序列，例如通过天然存在的锌指蛋白的识别螺旋区的工程(改变一个或多个氨基酸)。此外，锌指结合结构域可以融合DNA切割结构域以形成靶向特定所需DNA序列的锌指核酸酶(ZFN)。例如，可以将一对ZFN(例如，ZFN-左臂和ZFN-右臂)设计成靶向并引起特定所需DNA序列(例如，TRAC基因)的修饰。

“裂解”是指DNA分子的共价骨架的断裂。切割可以通过多种方法引发，包括但不限于磷酸二酯键的酶促或化学水解。单链切割和双链切割都是可能的，并且由于两个不同的单链切割事件的结果可能发生双链切割。DNA切割可导致产生钝端或交错末端。在某些实施方案中，融合多肽用于靶向双链DNA切割。

“靶位点”或“靶序列”是定义结合分子将与之结合的核酸的一部分的核酸序列，提供足够的结合条件存在。例如，序列5'GAATTC3'是EcoRI限制性内切核酸酶的靶位点。

“融合”分子是其中两个或多个亚单位分子连接，优选共价的分子。亚基分子可以是相同的化学类型的分子，也可以是不同化学类型的分子。第一类融合分子的实例包括但不限于融合蛋白(例如，ZFP DNA结合结构域和一个或多个激活结构域之间的融合物)和融合核酸(例如，编码上述融合蛋白)。第二类融合分子的实例包括但不限于三链体形成核酸和多肽之间的融合，以及小沟粘合剂和核酸之间的融合。

融合蛋白在细胞中的表达可以通过将融合蛋白递送至细胞或通过将编码融合蛋白的多核苷酸递送至细胞而产生，其中多核苷酸被转录并转录转录物以产生融合蛋白。跨剪接，多肽切割和多肽连接也可以参与蛋白质在细胞中的表达。将多核苷酸和多肽递送到细胞的方法在本公开的其他地方有描述。

基因表达的“调节”是指基因活性的变化。表达的调节可以包括但不限于基因激活和基因抑制。基因组编辑(例如，切割，改变，失活，随机突变)可用于调节表达。基因失活是指与不包含本文所述的ZFP的细胞相比，基因表达的任何降低。因此，基因失活可能是部分或完全的。

“感兴趣区域”是细胞染色质的任何区域，例如在基因内或邻近基因中的基因或非编码序列，其中期望结合外源性分子。结合可以用于靶向DNA切割和/或靶向重组。感兴趣的区域可以存在于例如染色体，附属物，细胞器基因组(例如线粒体，叶绿体)或感染性病毒基因组中。感兴趣的区域可以在转录的非编码区域(例如前导序列，尾部序列或内含子)内，或在编码区的上游或下游的非转录区域内的基因的编码区内。感兴趣的区域可以与单个核苷酸对一样小或长达2,000个核苷酸对，或核苷酸对的任何整数值。

“统计上显著”意味着结果不可能偶然发生。统计显著性可通过本领域已知的任何方法确定。常用的重要度量包括p值，即如果零假设为真，观察事件将发生的频率或概率。如果获得的p值小于显著性水平，则拒绝零假设。在简单的情况下，显著性水平定义为p值为0.5或更小。“减少”或“降低”量通常是“统计学上显著的”或生理学上显著的量，并且可以包括减少约1.1，1.2，1.3，1.4，1.5，1.6，1.7，1.8，1.9，2，2.5，3，3.5，4，4.5，5，6，7，8，9，10，15，20，30，40或50次或更多次(例如100，500，1000次)(包括所有1左右和1以上的整数和小数，例如1.5，1.6，1.7，1.8等，这里描述的数量或水平。

术语“刺激”是指通过刺激分子(例如，TCR/CD3复合物)与其同源配体结合诱导的初级应答，从而介导信号转导事件，例如通过TCR/CD3复合物的信号转导。刺激可以介导某些分子的改变的表达，例如TGF-β的下调和/或细胞骨架结构的重组。就初级应答而言，CD3ζ不是CAR构建体的唯一合适的主要信号传导结构域。例如，早在1993年，CD3 zeta和FcRγ均显示为CAR分子的功能性主要信号传导结构域。Eshhar等，“通过由抗体结合结构域和免疫球蛋白和T细胞受体的γ或zeta亚基组成的嵌合单链特异性激活和靶向细胞毒性淋巴细胞”，PNAS，1993年1月15日；90(2)：720图-4显示，其中scFv与“FcR y链或CD3复合物链”融合的两种CAR构建体触发T细胞活化和靶细胞。值得注意的是，如Eshhar等人所证明的，仅含有主要信号传导结构域CD3ζ或FcRγ的CAR构建体在没有共刺激结构域共存的情况下是功能性的。多年来已经开发了另外的基于非CD3 zeta的CAR构建体。例如，Wang等人，“基于杀伤免疫球蛋白样受体(KIR)的嵌合抗原受体(CAR)在固体肿瘤中引发强烈的细胞毒活性”Molecular Therapy，vol.22，No.Suppl.1，2014年5月，第S57页，测试了一种CAR分子，其中scFv与杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)的跨膜和细胞质结构域融合。Wang等人指出，“KIR-基于CAR靶向间皮素(SS 1-KIR)引发抗原特异性细胞毒活性和细胞因子产生，其与基于CD3的CAR相当。来自同一组的第二个出版物，Wang等人，强有力的T细胞的产生使用基于DAP12的多链，嵌合免疫受体的癌症免疫疗法“Cancer Immunol.Res.2015年7月，3(7)：815-26”，显示一种CAR分子，其中用于抗原识别的单链可变片段与KIR2DS2(刺激性杀伤免疫球蛋白样受体(KIR))的跨膜和细胞质结构域融合，当用含有免疫酪氨酸的活化基序的衔接子DAP12导入人T细胞时，其在体外和体内均发挥作用。

术语“刺激分子”是指特异性结合存在于抗原呈递细胞上的同源刺激配体的T细胞上的分子。例如，源自刺激分子的功能性信号传导结构域是与T细胞受体复合物相关的ζ链。

术语“刺激性配体”是指当存在于抗原呈递细胞(例如，APC，树突细胞，B细胞等)上时可以与同源结合配偶体特异性结合的配体(在本文中称为作为“刺激分子”)在细胞(例如T细胞)上的表达，从而介导T细胞的主要应答，包括激活，启动免疫应答，增殖和类似过程。刺激性配体在本领域中是公知的，并且尤其包括装载有肽，抗CD3抗体，超级激动剂抗CD28抗体和超级激动剂抗CD2抗体的MHC I类分子。

术语“治疗剂”是指治疗和/或预防。治疗效果通过抑制，缓解或根除疾病状态或减轻疾病状态症状而获得。

术语“治疗有效量”是指将引起研究人员，兽医，医生或另一临床医生正在寻求的组织，系统或受试者的生物或医学反应的主题化合物的量。术语“治疗有效量”包括当施用时足以预防所治疗的病症或疾病的一种或多种症状或症状的发展或在一定程度上减轻所述病症或疾病的一种或多种症状或症状的量的化合物。治疗有效量将取决于待治疗的受试者的化合物，疾病及其严重程度和年龄，体重等而变化。

术语“治疗疾病”是指降低受试者经历的疾病或病症的至少一种体征或症状的频率或严重程度。

术语“转染的”或“转化的”或“转导的”是指将外源核酸转移或引入宿主细胞的过程。“转染的”或“转化的”或“转导的”细胞是已经用外源核酸转染，转化或转导的细胞。细胞包括主要受试细胞及其后代。

术语“载体”是指包含分离的核酸并且可用于将分离的核酸递送至细胞内部的多核苷酸。本领域已知许多载体，包括线性多核苷酸，与离子或两亲化合物相关的多核苷酸，质粒和病毒。因此，术语“载体”包括自主复制质粒或病毒。该术语还包括便于将核酸转移入细胞的非质粒和非病毒化合物，例如多聚赖氨酸化合物，脂质体等。病毒载体的实例包括腺病毒载体，腺伴随病毒载体，逆转录病毒载体等。例如，慢病毒是复杂的逆转录病毒，除常见的逆转录病毒基因gag，pol和env外，还含有其他具有调控或结构功能的基因。慢病毒载体在本领域中是众所周知的。慢病毒的一些例子包括人免疫缺陷病毒：HIV-1，HIV-2和猿猴免疫缺陷病毒：SIV。通过多重减毒HIV毒力基因产生慢病毒载体，例如，缺失基因env，vif，vpr，vpu和nef使载体生物安全。

范围：在整个本公开中，本公开的各个方面可以以范围格式给出。应当理解，范围格式的描述仅是为了方便和简洁，并且不应当被解释为对本公开的范围的硬性限制。因此，范围的描述应被认为具有具体公开的所有可能的子范围以及处于那个范围内的单个数值。例如，范围的描述诸如从1至6应被认为具有具体公开的子范围诸如从1至3、从1至4、从1至5、从2至4、从2至6、从3至6等，以及该范围内的单个数值，例如，1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。不管范围的宽度如何，这一点都是适用的。

本公开涉及使用CAR T细胞鉴定恶性B细胞从而耗尽这些恶性B细胞的发现。与常规治疗不同，CAR-T使用基因工程自体T淋巴细胞来靶向和破坏“表达标志物”的细胞。CAR-T不仅具有单克隆抗体治疗的靶特异性，而且由于其转化为记忆T淋巴细胞的能力，它还可以提供持久的治疗效果。

与常规疗法不同，本公开内容使用CAR-T技术靶向标记物如CD19，CD20和BAFF-R来治疗B-淋巴细胞相关的自身免疫疾病。本文的实施方案使用慢病毒工程化的自体T淋巴细胞，其表达并展示靶向B-淋巴细胞特异性标志物的抗体，同时保留“健康”的免疫系统。

与常规疗法相比，本公开的实施方案提供了更持久的治疗效果，其通过避免常规药物和长期使用潜在细胞毒性药物而使患者受益。此外，实施方案提供了比单克隆抗体治疗更快的作用治疗效果。

实施方案涉及T细胞疗法的治疗。实施方案包括使用嵌合抗原受体修饰的细胞治疗自身免疫疾病的方法和系统。例如，一种方法包括向人类患者施用药物有效量的人患者T细胞群，其表达与B细胞相关的抗原结合的嵌合抗原受体(CAR)。

修饰的T细胞可以源自干细胞。干细胞可以是成体干细胞，胚胎干细胞，更特别是非人干细胞，脐带血干细胞，祖细胞，骨髓干细胞，诱导多能干细胞，全能干细胞或造血干细胞。修饰细胞还可以是树突细胞，NK细胞，B细胞或选自炎性T淋巴细胞，细胞毒性T淋巴细胞，调节性T淋巴细胞或辅助性T淋巴细胞的T细胞。在另一个实施方案中，修饰细胞可以衍生自CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞。在扩增和遗传修饰本发明的细胞之前，可以通过各种非限制性方法从受试者获得细胞来源。T细胞可以从许多非限制性来源获得，包括外周血单核细胞，骨髓，淋巴结组织，脐带血，胸腺组织，来自感染部位的组织，腹水，胸腔积液，脾组织和肿瘤。在本发明的某些实施方案中，可以使用本领域技术人员可获得和已知的任何数量的T细胞系。在实施方案中，修饰的细胞可以源自健康供体，来自诊断患有癌症的患者或来自诊断患有感染的患者。在实施方案中，修饰的细胞是呈现不同表型特征的混合细胞群的一部分。

术语“干细胞”是指某些类型的细胞中的任何一种，其具有自我更新的能力和分化成其他种类细胞的能力。例如，干细胞产生两个子代干细胞(如体外培养的胚胎干细胞)或一个干细胞和一个经历分化的细胞(如在造血干细胞中发生，如产生血细胞)。可以基于它们的起源和/或它们分化成其他类型细胞的能力的程度来区分不同类别的干细胞。例如，干细胞可包括胚胎干(ES)细胞(即多能干细胞)，体干细胞，诱导多能干细胞和任何其他类型的干细胞。

多能胚胎干细胞可以在胚泡的内细胞团中发现并且具有高的先天分化能力。例如，多能胚胎干细胞可能具有在体内形成任何类型细胞的潜力。当在体外长时间生长时，ES细胞保持多能性：子代细胞保留多谱系分化的潜力。

体干细胞可包括胎儿干细胞(来自胎儿)和成体干细胞(存在于各种组织中，例如骨髓)。这些细胞被认为具有低于多能ES细胞的分化能力-胎儿干细胞的能力大于成体干细胞的能力；它们显然只能区分为有限范围的细胞，并被描述为多能的。“组织特异性”干细胞通常仅产生一种类型的细胞。例如，胚胎干细胞可以分化成血液干细胞(例如，造血干细胞(HSC))，其可以进一步分化成各种血细胞(例如，红细胞，血小板，白细胞等)。

诱导多能干细胞(即，iPS细胞或iPSC)可以包括一类多能干细胞，其通过诱导特定基因的表达，人工地来源于非多能细胞(例如，成年体细胞)。在许多方面，诸如某些干细胞基因和蛋白质的表达、染色质甲基化模式、倍增时间，拟胚体形成、畸胎瘤形成、活嵌合体形成，以及潜能和可辨性，诱导多能干细胞类似于天然多能干细胞，诸如胚胎干(ES)细胞。诱导多能干细胞可以从成人的胃、肝、皮肤细胞和血细胞制得。

在实施方案中，多核苷酸可以整合到修饰细胞的基因组中，并且修饰细胞的后代也将表达多核苷酸，从而产生稳定转染的修饰细胞。在实施方案中，修饰的细胞可以表达编码CAR的多核苷酸，但是多核苷酸不整合到修饰的细胞的基因组中，使得修饰的细胞在有限的时间段(例如，几天)内表达瞬时转染的多核苷酸。多核苷酸通过细胞分裂或其他因素丢失。例如，多核苷酸在重组DNA构建体，mRNA或病毒载体中存在于修饰细胞中，和/或多核苷酸是mRNA，其未整合到修饰细胞的基因组中。

在一些实施方案中，自身免疫疾病是与B细胞增殖和免疫球蛋白分泌相关的自身免疫疾病。在一些实施方案中，自身免疫疾病是系统性红斑狼疮(SLE)，类风湿性关节炎(RA)，1型糖尿病(T1D)，干燥综合征或多发性硬化症(MS)。在一些实施方案中，抗原是BAFF，APRIL，CD19，CD20，CD22，B细胞受体(BCR)，BCMA，Tall-1或CD79。在一些实施方案中，抗原是CD19，CD20或BAFF。

在一些实施方案中，T细胞群的药学有效量是人患者每kg体重10⁴至10⁹个细胞。在一些实施方案中，T细胞群的药学有效量是人患者每kg体重10⁵至10⁶个细胞。在一些实施方案中，T细胞群的药学有效量是人患者每kg体重10⁶至10⁷个细胞。在一些实施方案中，T细胞群的药学有效量是人患者每kg体重10⁴至10⁵个细胞。在一些实施方案中，T细胞群的药学有效量是人患者的每kg体重10⁷至10⁸个细胞。在一些实施方案中，T细胞群的药学有效量是人患者的每kg体重10⁸至10⁹个细胞。

一些实施方案涉及编码CAR结合CD19的多核苷酸的方法或用途，以治疗自身免疫疾病。所述方法或用途包括：提供包含载体基因组(图1中的CAR)的病毒颗粒(例如，AAV或其变体)，所述载体基因组包含所述多核苷酸，其中所述多核苷酸与赋予表达控制元件的载体可操作地连接。多核苷酸的转录(例如，Hif1a，NFAT，FOXP3或NFkB)；并向受试者施用一定量的病毒颗粒，使得CAR在受试者中表达。在实施方案中，AAV制剂可包括AAV载体颗粒，空衣壳和宿主细胞杂质，从而提供基本上不含AAV空衣壳的AAV产物。有关给药和制备病毒颗粒的更多信息可以在美国专利NO：9840719中找到，其通过引用并入本文。

CAR是通常包括细胞外和细胞内结构域的分子。细胞外结构域包括靶特异性结合元件。细胞内结构域(例如，细胞质结构域)包括共刺激信号传导区和ζ链部分。共刺激信号传导区域是指CAR的一部分，包括共刺激分子的细胞内结构域。共刺激分子是除了抗原受体或其配体之外的细胞表面分子，其是淋巴细胞对抗原的有效响应所必需的。

在细胞外结构域和CAR的跨膜结构域之间，可以掺入间隔结构域。如本文所用，术语“间隔结构域”通常是指用于将跨膜结构域连接至多肽链的细胞外结构域或细胞质结构域的任何寡肽或多肽。间隔结构域可包括至多300个氨基酸，优选10至100个氨基酸，最优选25至50个氨基酸。

在一些实施方案中，本公开内容的CAR的抗原结合元件靶向CD19。

在一些实施方案中，本公开的CAR的跨膜结构域包括CD8或CD9跨膜结构域。在一些实施方案中，本公开内容的CAR的细胞内结构域包括4-1BB(CD137)或CD28的细胞内结构域。

实施方案还涉及用于治疗患者的疾病的方法，包括向患者施用有效量的本公开的工程细胞。可以根据本方法治疗各种疾病，包括癌症，例如卵巢癌，乳腺癌，结肠癌，多形性成胶质细胞瘤，前列腺癌和白血病。

在一些实施方案中，抗原结合分子是嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。术语“嵌合抗原受体”或可选地“CAR”是指重组多肽构建体，其包含至少细胞外抗原结合结构域，跨膜结构域和细胞内信号传导结构域(例如，细胞质结构域)。在一些实施方案中，CAR多肽构建体中的结构域在相同的多肽链中(例如，包含嵌合融合蛋白)或彼此不连续(例如，在不同的多肽链中)。

在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域可包括衍生自如上所述的刺激分子和/或共刺激分子的功能信号传导结构域。在某些实施方案中，细胞内信号传导结构域包括衍生自主要信号传导结构域(例如，CD3-zeta的主要信号传导结构域)的功能性信号传导结构域。在其他实施方案中，细胞内信号传导结构域还包括衍生自至少一种共刺激分子的一个或多个功能信号传导结构域。共刺激信号传导区域是指CAR的一部分，包括共刺激分子的细胞内结构域。共刺激分子是除了抗原受体或其配体之外的细胞表面分子，其是淋巴细胞对抗原的有效响应所需的。

在CAR的细胞外结构域和跨膜结构域之间，可以掺入间隔区。如本文所用，术语“间隔结构域”通常意指用于将跨膜结构域连接至多肽链中的细胞外结构域或胞质结构域的任何寡肽或多肽。间隔区可包含多达300个氨基酸，优选10-100个氨基酸，最优选25-50个氨基酸。

CAR的细胞外结构域可包括靶向特定肿瘤标志物的抗原结合结构域(例如，scFv，单结构域抗体或TCR(例如，TCRα结合结构域或TCRβ结合结构域))(例如，肿瘤抗原)。肿瘤抗原是由引起免疫应答的肿瘤细胞产生的蛋白质，特别是T细胞介导的免疫应答。肿瘤抗原是本领域公知的，包括例如神经胶质瘤相关抗原，癌胚抗原(CEA)，β-人绒毛膜促性腺激素，甲胎蛋白(AFP)，凝集素反应性AFP，甲状腺球蛋白，RAGE-1，MN-CA IX，人端粒酶逆转录酶，RU1，RU2(AS)，肠道羧基酯酶，mut hsp70-2，M-CSF，前列腺素酶，前列腺特异性抗原(PSA)，PAP，NY-ESO-1，LAGE-1a，p53，prostein，PSMA，Her2/neu，survivin和端粒酶，前列腺癌肿瘤抗原-1(PCTA-1)，MAGE，ELF2M，中性粒细胞弹性蛋白酶，ephrinB2，CD22，胰岛素生长因子(IGF)-I，IGF-II，IGF-I受体和间皮素。例如，肿瘤抗原是CD19，其CAR可以称为CD19CAR。CD19 CAR和其他的scFv序列在下述内容中美国专利号：6410319(CD20 CAR)中提供。

在一些实施方案中，细胞外配体结合结构域包含scFv，其包含通过柔性接头连接的靶抗原特异性单克隆抗体的轻链可变(VL)区和重链可变(VH)区。单链可变区片段通过使用短连接肽连接轻链和/或重链可变区来制备(Bird等，Science 242：423-426,1988)。连接肽的实例是具有氨基酸序列(GGGGS)₃(SEQ ID NO：2)的GS接头，其在一个可变区的羧基末端与另一个可变区的氨基末端之间桥接大约3.5nm。已经设计和使用了其他序列的接头(Bird等，1988，同上)。通常，接头可以是短而灵活的多肽，并且优选包含约20或更少的氨基酸残基。接头又可以被修改用于附加功能，例如附着药物或附着到固体支持物上。单链变体可以重组或合成产生。为了合成生产scFv，可以使用自动合成仪。为了重组生产scFv，可以将合适的含有编码scFv的多核苷酸的质粒引入合适的宿主细胞，真核生物如酵母，植物，昆虫或哺乳动物细胞，或原核生物如大肠杆菌。编码感兴趣的scFv的多核苷酸可以通过常规操作例如连接多核苷酸来制备。可以使用本领域已知的标准蛋白质纯化技术分离得到的scFv。

在一些实施例中，肿瘤抗原包括HER2、CD19、CD20、CD22、κ轻链、CD30、CD33、CD123、CD38、ROR1、ErbB3/4、EGFR、EGFRvIII、EphA2、FAP、癌胚抗原、EGP2、EGP40、间皮素、TAG72、PSMA、NKG2D配体、B7-H6、IL-13受体α2、IL-11受体α、MUC1、MUC16、CA9、GD2、GD3、HMW-MAA、CD171、Lewis Y、G250/CAIX、HLA-AI MAGE A1、HLA-A2 NY-ESO-1、PSC1、叶酸受体-α、CD44v7/8、8H9、NCAM、VEGF受体、5T4、胎儿型乙酰胆碱受体、NKG2D配体、CD44v6、TEM1、TEM8，或者由肿瘤表达的病毒相关抗原。

在一些实施方案中，细胞可进一步包括T细胞受体(TCR)。在一些实施方案中，TCR是经修饰的TCR。在一些实施方案中，TCR衍生自患者中自发发生的肿瘤特异性T细胞。在一些实施方案中，TCR结合肿瘤抗原。在一些实施方案中，肿瘤抗原包含CEA，gp100，MART-1，p53，MAGE-A3或NY-ESO-1。在一些实施方案中，TCR包含TCRγ和TCRδ链或TCRα和TCRβ链。在一些实施方案中，可以分离表达对靶抗原具有高亲和力的TCR的T细胞克隆。在某些实施方案中，肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)或外周血单核细胞(PBMC)可以在抗原呈递细胞(APC)的存在下培养，所述抗原呈递细胞(APC)用肽表示，所述肽代表已知的表位，当呈现时引起显性T细胞应答。在确定的HLA等位基因的背景下。然后可以基于MHC-肽四聚体染色和/或识别和裂解用低滴定浓度的同源肽抗原脉冲的靶细胞的能力来选择高亲和力克隆。选择克隆后，通过分子克隆鉴定和分离TCRα和TCRβ链或TCRγ和TCRδ链。例如，对于TCRα和TCRβ链，然后使用TCRα和TCRβ基因序列产生表达构建体，其理想地促进人T细胞中两种TCR链的稳定并高水平表达。然后可以产生转导载体(例如，γ逆转录病毒或慢病毒)并测试其功能性(抗原特异性和功能亲合力)并用于产生临床批次的载体。然后将等份的最终产物用于转导靶T细胞群(通常从患者PBMC中纯化)，其在输注到患者体内之前扩增。

在一些实施方案中，CAR的结合元件可以包括任何抗原结合部分，其当结合其关联抗原，影响肿瘤细胞，使得肿瘤细胞无法生长，或促进死亡或减少。

编码所需分子的核酸序列可以使用本领域中已知的重组方法获得，例如使用标准技术通过从表达基因的细胞筛选文库、通过从已知包括基因的载体衍生该基因，或者通过直接从含有基因的细胞或组织中分离该基因而获得。可选地，也可以合成而非克隆生产感兴趣的基因。

本公开的实施例进一步涉及将本发明的DNA插入其中的载体。从逆转录病毒(例如慢病毒)衍生的载体是实现长期的基因转移的合适的工具，因为它们允许转基因的长期、稳定的整合及其在子细胞中的繁殖。与从致癌性逆转录病毒(例如鼠白血病病毒)衍生的载体相比，慢病毒载体具有附加优点，在于因为它们能转导非增殖细胞，例如肝细胞。它们也具有低免疫原性的附加优点。

编码CAR的天然或合成核酸的表达通常通过将编码CAR多肽或其部分的核酸与一个或多个启动子可操作地连接并将该构建体整合到表达载体中来实现。载体可以适合于复制和整合真核生物。典型的克隆载体含有转录和翻译终止子，起始序列和可用于调节所需核酸序列表达的启动子。

关于编码CAR的基因转移到哺乳动物细胞中的表达合成核酸的其它信息在美国专利申请US8,906,682号通过引用整体并入本文。

本公开的药物组合物可以以适于待治疗(或预防)的疾病的方式施用。施用的量和频率将由以下因素确定，诸如患者的病症、以及患者疾病的类型和严重度，尽管适当的剂量可由临床试验确定。

当指示“免疫有效量”，“抗肿瘤有效量”，“肿瘤抑制有效量”或“治疗量”时，可以确定要给予的本公开的组合物的精确量由医生考虑年龄，体重，肿瘤大小，感染或转移程度和患者(受试者)的状况的个体差异。可以说包含本文描述的T细胞的药物组合物可以以10⁴至10⁹细胞/kg体重，优选10⁵至10⁶细胞/kg体重的剂量给予，包括在这些范围内的所有整数值。T细胞组合物也可以在这些剂量下多次给药。细胞可以通过使用在免疫疗法中通常已知的输注技术来施用(参见例如Rosenberg等人，New Eng.J.of Med.319：1676,1988)。对于特定患者的最佳剂量和治疗方案可容易地由医学领域的技术人员通过监测患者的疾病迹象并相应地调整治疗来确定。在某些实施方案中，可能希望将活化的T细胞给予受试者，然后重新绘制血液(或进行单采)，收集活化和扩增的T细胞，并用这些活化和扩增的T细胞再灌注患者。这个过程可以每隔几周进行多次。在某些实施方案中，T细胞可以从10cc至400cc的抽血活化。在某些实施方案中，T细胞从20cc，30cc，40cc，50cc，60cc，70cc，80cc，90cc或100cc的抽血活化。不受理论束缚，使用这种多次抽血/多次再输注方案，可以选择某些T细胞群体。

本文所述药物组合物的施用可以以任何方便的方式进行，包括通过气雾吸入，注射，摄入，输血，植入或移植。本文所述的组合物可以皮下，皮内，瘤内，结节内，髓内，肌内，静脉内(i.v.)注射或腹膜内给予患者。在一些实施方案中，本公开内容的T细胞组合物通过皮内或皮下注射给予患者。在另一个实施方案中，本公开的T细胞组合物优选通过静脉内注射施用。T细胞的组合物可以直接注射到肿瘤，淋巴结或感染部位。在本公开的某些实施方案中，使用本文所述的方法或本领域已知的其中T细胞扩展至治疗水平的方法将活化和扩增的细胞与(例如，之前，同时或之后)任何数量的相关治疗方式，包括但不限于用抗病毒疗法，西多福韦和白细胞介素-2，阿糖胞苷(也称为ARA-C)等药物治疗或MS患者的那他珠单抗治疗或牛皮癣患者或其他患者的依法珠单抗治疗治疗PML患者。在进一步的实施方案中，本公开的T细胞可以与化学疗法，放射疗法，免疫抑制剂例如环孢菌素，硫唑嘌呤，甲氨蝶呤，霉酚酸酯和FK506，抗体或其他免疫清除剂例如CAM PATH，CD3抗体或其他抗体疗法，细胞毒素，氟达利宾，环孢菌素，FK506，雷帕霉素，麦考酚酸，类固醇，FR901228，细胞因子和辐射。这些药物抑制钙依赖性磷酸酶钙调磷酸酶(环孢菌素和FK506)或抑制对生长因子诱导的信号传导(雷帕霉素)重要的p70S6激酶。(Liu等，Cell 66：807-815,1991；Henderson等，Immun73：316-321,1991；Bierer等，Curr.Opin.Immun 5：763-773,1993)。在一些实施方案中，将本公开的细胞组合物与骨髓移植联合(例如，之前，同时或之后)，使用化疗剂如氟达拉滨的T细胞消融治疗，外部束放射疗法(XRT)，环磷酰胺或抗体如OKT3或CAMPATH。在其他实施方案中，本公开的细胞组合物在B细胞消融疗法例如与CD20反应的试剂例如Rituxan之后施用。例如，在一些实施方案中，受试者可接受高剂量化学疗法的标准治疗，然后进行外周血干细胞移植。在某些实施方案中，在移植后，受试者接受本公开的扩增的免疫细胞的输注。在其他实施方案中，扩张细胞在手术之前或之后施用。

待给予患者的上述治疗剂量将随着被治疗病症和治疗接受者的确切性质而变化。根据各种因素，医师可根据本领域公认的实践进行人用药剂量的缩放。

在美国专利US8,906,682中提供了关于使用工程化或修饰的T细胞的癌症治疗方法的其他信息，通过引用整体并入。

一些实施方案涉及制备修饰细胞的体外方法。该方法可以包括从受试者获得细胞的样品。例如，样品可以包括T细胞或T细胞祖细胞。该方法可进一步包括用编码至少CAR的DNA转染细胞，在选择性增强CAR表达T细胞增殖的培养基中离体培养CAR细胞群。

在一些实施方案中，样品是冷冻保存的样品。在一些实施方案中，细胞样品来自脐带血或来自受试者的外周血液样品。在一些实施方案中，细胞样品通过单采血液成分或静脉穿刺获得。在一些实施方案中，细胞样品是T细胞的亚群。

通过参考以下示例性实施例和示例来进一步描述本公开。提供这些示例性实施例和示例仅用于说明的目的，并非旨在限制，除非另有说明。因此，本公开绝不应被解释为限于以下示例性实施例和示例，而是应被解释为包含由于本文提供的教导而变得明显的任何和所有变化。

示例性实施例

以下是示例性实施例：

1.一种治疗人类患者的自身免疫疾病的方法，该方法包括：向人类患者施用药物有效量的表达嵌合抗原受体(CAR)的人患者T细胞群，其包含SEQ ID NO：22-24和26中任一个的氨基酸序列。

2.一种治疗人类患者的自身免疫疾病的方法，该方法包括：向人类患者施用药物有效量的人患者T细胞群，其表达与B细胞相关的抗原结合的嵌合抗原受体(CAR)。

3.实施方案2的方法，其中所述自身免疫疾病是与B细胞增殖和免疫球蛋白分泌相关的自身免疫疾病。

4.实施方案2的方法，其中所述自身免疫疾病是系统性红斑狼疮(SLE)，类风湿性关节炎(RA)，1型糖尿病(T1D)，干燥综合征或多发性硬化症(MS)。

5.实施方案2的方法，其中抗原是BAFF，APRIL，CD19，CD20，CD22，B细胞受体(BCR)，B细胞成熟抗原(BCMA)或CD79。

6.实施方案2的方法，其中抗原是CD19，CD20或BAFF。

7.实施方案2的方法，其中T细胞群的药学有效量是人患者每kg体重10⁴至10⁹个细胞。

8.实施方案2的方法，其中T细胞群的药学有效量是人患者每kg体重10⁵至10⁶个细胞。

9.实施方案2的方法，其中T细胞群的药学有效量是人患者每kg体重10⁶至10⁷个细胞。

10.实施方案2的方法，其中T细胞群的药学有效量是人患者每kg体重10⁴至10⁵个细胞。

11.实施方案2的方法，其中T细胞群的药学有效量是人患者每kg体重10⁷至10⁸个细胞。

12.实施方案2的方法，其中T细胞群的药物有效量是人患者每kg体重10⁸至10⁹个细胞。

13.实施方案2的方法，其中CAR包含SEQ ID NO：18，或SEQ ID NO：19，或SEQ IDNO：20和21的氨基酸序列。

实例

附图1为CAR结构示意图。

采用慢病毒载体转导hek293t和K562细胞。采用流式细胞仪检测细胞内CAR的表达。如图2所示，HEK293T和K562细胞均表达CAR。

原代T细胞取自患者。获得的原代T细胞经慢病毒载体转导。采用流式细胞仪分析CAR和PD-1在原代T细胞中的表达情况。如图3所示，原代T细胞表达CAR。

系统性红斑狼疮(SLE)是一种累及多脏器的自身免疫性疾病，多发于14-44岁人群，女性发病率约为男性10倍。SLE病因至今尚未确定，研究表明，SLE患者的B细胞异常增殖，产生大量自身抗体，与体内相应的自身抗原结合，直接破坏细胞，或在补体效应作用下，引起急慢性炎症及组织坏死，从而导致机体的多系统损害。目前SLE的治疗方法主要包括置换血浆，注射免疫球蛋白，注射针对B细胞的单克隆抗体等。CD19作为B细胞表面特征抗原，抗CD19嵌合抗原受体T细胞(anti-CD19 CAR-T cells)能特异性杀伤B细胞，可为SLE的治疗提供新的策略。为了验证抗CD19 CAR-T细胞(CD19 CAR的序列为SEQ ID NO:22)对SLE的治疗效果，我们在SLE疾病模型小鼠中进行了实验。图4显示了抗鼠CD19 CAR-T细胞的制备。

经流式细胞检测，CAR分子scFv段与EGFP荧光标记双阳性细胞，在未转染的细胞中检测到的比列为4.39％(本底)，转染后细胞中双阳性细胞比例提升至34.8％，表明已成功制备出抗鼠CD19 CAR-T细胞。图5显示了转染前后scFv段与EGFP荧光标记双阳性细胞流式检测结果。

将制备好的抗鼠CD19 CAR-T细胞与含大量B细胞的脾脏细胞在体外进行共培养，利用同位素标记技术检测T细胞对B细胞的特异性杀伤(图6最上方的线)，与图6另三组对照组的结果相比较，抗鼠CD19 CAR-T细胞对B细胞有显著的杀伤作用。图6显示了体外共培养条件下细胞的特异性杀伤。

进一步研究抗鼠CD19 CAR-T细胞对SLE疾病模型小鼠的治疗效果，设计如下动物实验。取MRL-lpr小鼠(由正常B6小鼠与其他品系小鼠杂交所得)的脾脏和淋巴结，分离出的T细胞部分用于制备抗鼠CD19 CAR-T细胞，另一部分经慢病毒转染空质粒载体作为对照组，12周后MRL-lpr小鼠发病成为SLE疾病模型小鼠，经1.5Gy辐照后，尾静脉回输制备完成的抗鼠CD19 CAR-T细胞及对照组T细胞，观察8周后处死实验小鼠。图7显示了抗鼠CD19CAR-T回输治疗SLE疾病模型小鼠实验流程图。

取12周龄的SLE疾病模型小鼠血清和正常B6小鼠血清，检测血清中血尿氮素(BUN)含量及抗双链DNA(anti-dsDNA)抗体含量，SLE疾病模型小鼠血清中BUN含量及anti-dsDNA抗体含量均显著高于正常小鼠，表明SLE疾病小鼠建模成功。图8显示了12周龄SLE疾病模型小鼠及正常B6小鼠血清表征。

SLE疾病模型小鼠在回输对照组T细胞后，在16周陆续出现死亡，20周时对照组小鼠死亡50％，小鼠皮肤出现不同程度的损伤；回输抗鼠CD19 CAR-T细胞实验组小鼠在20周时全部存活，小鼠皮肤未见明显损伤。表明抗鼠CD19 CAR-T细胞对SLE疾病模型小鼠具有显著的治疗效果。图9显示了SLE疾病模型小鼠存活状况及皮肤破损情况。

20周后处死实验小鼠，进行生化指标检测及病理切片观察后发现，回输抗鼠CD19CAR-T细胞的SLE疾病模型小鼠较对照组相比，其尿蛋白和血清中抗双链DNA抗体含量均有下调，表明实验组小鼠的肾功能损伤得到了一定缓解。病理切片染色结果显示，较正常的B6小鼠和抗鼠CD19 CAR-T细胞治疗后小鼠相比，对照组小鼠出现了明显的肾脏损伤，A箭头处为肾小球的破坏，B箭头处为淋巴细胞的浸润，C箭头处为肾小球囊壁层上皮细胞显著增生形成的新月体。图10显示了对照组和实验组处理后SLE疾病模型小鼠肾功能损伤情况。

SLE疾病模型小鼠在回输抗鼠CD19 CAR-T细胞治疗一周后，经流式细胞检测，血液中CD19和B220双阳性B细胞比例显著降低。图11显示了抗鼠CD19 CAR-T细胞治疗一周后SLE疾病模型小鼠血液中CD19+细胞占比。

正常B6小鼠和SLE疾病模型小鼠20周时对脾脏和淋巴结中的淋巴细胞进行流式检测，正常发育的B6小鼠CD19+细胞数量处于较高水平，对照组小鼠因SLE导致CD19+细胞发育异常，细胞数量显著下降，而经抗鼠CD19 CAR-T细胞治疗的实验组小鼠的CD19+细胞数量进一步降低。图12显示了20周龄正常B6小鼠和SLE疾病模型小鼠脾脏和淋巴结中CD19+细胞占比。

正常B6小鼠和SLE疾病模型小鼠在20周时，流式检测骨髓血淋巴细胞中CD19+细胞和CD138+细胞(浆细胞)比例，正常发育的B6小鼠CD19+细胞和CD138+细胞数量处于较高水平，对照组小鼠因SLE导致CD19+细胞和CD138+细胞数量显著下降，经抗鼠CD19 CAR-T细胞治疗的实验组小鼠的CD19+细胞和CD138+细胞数量进一步降低。图13显示了20周龄正常B6小鼠和SLE疾病模型小鼠骨髓中CD19+细胞和CD138+细胞占比。

本说明书中引用的所有出版物，专利和专利申请均通过引用整体并入本文，如同每个单独的出版物，专利或专利申请被具体和单独地指示为通过引用并入。虽然已经根据各种实施例描述了前述内容，但是本领域技术人员将认识到，在不脱离其精神的情况下可以进行各种修改，替换，省略和改变。

表1

序列表

<110> 上海斯丹赛生物技术有限公司

浙江大学

<120> CAR修饰细胞及其在制备自身免疫性疾病药物中的应用

<150> US62/730,225

<151> 2018-09-12

<150> US62/775,143

<151> 2018-12-04

<160> 26

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 21

<212> PRT

<213> SP(NATURE)

<400> 1

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro

20

<210> 2

<211> 15

<212> PRT

<213> 连接肽(NATURE)

<400> 2

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 3

<211> 42

<212> PRT

<213> 4-1BB(NATURE)

<400> 3

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

1 5 10 15

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

20 25 30

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

35 40

<210> 4

<211> 112

<212> PRT

<213> CD3-zeta(人工序列)

<400> 4

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 5

<211> 339

<212> DNA

<213> WT CD3-zeta-aa(NATURE)

<400> 5

agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc 60

tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gaggcgtggc 120

cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180

gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240

cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300

tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgctaa 339

<210> 6

<211> 66

<212> PRT

<213> Group B// Hinge & TM domain(人工序列)

<400> 6

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile

35 40 45

Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val

50 55 60

Ile Thr

65

<210> 7

<211> 69

<212> PRT

<213> Group A// Hinge & TM domain(人工序列)

<400> 7

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile

35 40 45

Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val

50 55 60

Ile Thr Leu Tyr Cys

65

<210> 8

<211> 72

<212> PRT

<213> Group D // Hinge & TM domain(人工序列)

<400> 8

Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

1 5 10 15

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

20 25 30

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

50 55 60

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

65 70

<210> 9

<211> 69

<212> PRT

<213> Group C // Hinge & TM domain(人工序列)

<400> 9

Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

1 5 10 15

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

20 25 30

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

50 55 60

Ser Leu Val Ile Thr

65

<210> 10

<211> 50

<212> PRT

<213> Group D // Hinge domain(人工序列)

<400> 10

Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

1 5 10 15

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

20 25 30

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

Ile Tyr

50

<210> 11

<211> 50

<212> PRT

<213> Group C // Hinge domain(人工序列)

<400> 11

Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

1 5 10 15

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

20 25 30

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

Ile Tyr

50

<210> 12

<211> 47

<212> PRT

<213> Group B Hinge domain(人工序列)

<400> 12

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr

35 40 45

<210> 13

<211> 47

<212> PRT

<213> Group A // Hinge domain(人工序列)

<400> 13

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr

35 40 45

<210> 14

<211> 22

<212> PRT

<213> Group D // TM domain(人工序列)

<400> 14

Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu

1 5 10 15

Val Ile Thr Leu Tyr Cys

20

<210> 15

<211> 19

<212> PRT

<213> Group C // TM domain(人工序列)

<400> 15

Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu

1 5 10 15

Val Ile Thr

<210> 16

<211> 19

<212> PRT

<213> Group B // domain(人工序列)

<400> 16

Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu

1 5 10 15

Val Ile Thr

<210> 17

<211> 22

<212> PRT

<213> Group A // domain(人工序列)

<400> 17

Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu

1 5 10 15

Val Ile Thr Leu Tyr Cys

20

<210> 18

<211> 242

<212> PRT

<213> scFv CD19(人工序列)

<400> 18

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

130 135 140

Ala Ala Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Val Arg

145 150 155 160

Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Val Ile Trp Gly Ser

165 170 175

Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser

180 185 190

Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg

195 200 205

Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly

210 215 220

Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

225 230 235 240

Ser Ser

<210> 19

<211> 242

<212> PRT

<213> scFv Humanized CD19(人工序列)

<400> 19

Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu

115 120 125

Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys

130 135 140

Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg

145 150 155 160

Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser

165 170 175

Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile

180 185 190

Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln

195 200 205

Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly

210 215 220

Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val

225 230 235 240

Ser Ser

<210> 20

<211> 115

<212> PRT

<213> VH region of BCMA scFv(人工序列)

<400> 20

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Leu Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Trp Pro Met Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 21

<211> 108

<212> PRT

<213> VL region of BCMA scFv(人工序列)

<400> 21

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Gly Gly Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Met Tyr Asp Ala Ser Ile Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gln Ser Trp Pro

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 22

<211> 486

<212> PRT

<213> CD19 CAR(人工序列)

<400> 22

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln

35 40 45

Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr

50 55 60

Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro

65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly

100 105 110

Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu

130 135 140

Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser

145 150 155 160

Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly

165 170 175

Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly

180 185 190

Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser

195 200 205

Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys

210 215 220

Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys

225 230 235 240

His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

245 250 255

Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro

260 265 270

Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu

275 280 285

Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp

290 295 300

Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly

305 310 315 320

Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg

325 330 335

Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln

340 345 350

Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu

355 360 365

Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala

370 375 380

Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu

385 390 395 400

Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp

405 410 415

Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu

420 425 430

Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile

435 440 445

Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr

450 455 460

Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met

465 470 475 480

Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 23

<211> 486

<212> PRT

<213> hCD19 CAR(人工序列)

<400> 23

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln

35 40 45

Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

50 55 60

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro

65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly

100 105 110

Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu

130 135 140

Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser

145 150 155 160

Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly

165 170 175

Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser

180 185 190

Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser

195 200 205

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

210 215 220

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys

225 230 235 240

His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

245 250 255

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro

260 265 270

Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu

275 280 285

Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp

290 295 300

Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly

305 310 315 320

Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg

325 330 335

Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln

340 345 350

Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu

355 360 365

Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala

370 375 380

Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu

385 390 395 400

Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp

405 410 415

Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu

420 425 430

Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile

435 440 445

Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr

450 455 460

Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met

465 470 475 480

Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 24

<211> 483

<212> PRT

<213> BCMA CAR(人工序列)

<400> 24

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe

35 40 45

Ala Leu Ser Asn His Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr

65 70 75 80

Ala Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg

85 90 95

Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala

100 105 110

Ile Tyr Tyr Cys Ser Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser

145 150 155 160

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

165 170 175

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys

180 185 190

Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln

195 200 205

Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

210 215 220

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr

225 230 235 240

Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys

245 250 255

Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg

275 280 285

Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys

290 295 300

Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu

305 310 315 320

Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu

325 330 335

Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln

340 345 350

Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly

355 360 365

Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

370 375 380

Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

385 390 395 400

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

405 410 415

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

420 425 430

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

435 440 445

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

450 455 460

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

465 470 475 480

Pro Pro Arg

<210> 25

<211> 218

<212> PRT

<213> TALL-1的细胞外序列(人工序列)

<400> 25

Gln Val Ala Ala Leu Gln Gly Asp Leu Ala Ser Leu Arg Ala Glu Leu

1 5 10 15

Gln Gly His His Ala Glu Lys Leu Pro Ala Gly Ala Gly Ala Pro Lys

20 25 30

Ala Gly Leu Glu Glu Ala Pro Ala Val Thr Ala Gly Leu Lys Ile Phe

35 40 45

Glu Pro Pro Ala Pro Gly Glu Gly Asn Ser Ser Gln Asn Ser Arg Asn

50 55 60

Lys Arg Ala Val Gln Gly Pro Glu Glu Thr Val Thr Gln Asp Cys Leu

65 70 75 80

Gln Leu Ile Ala Asp Ser Glu Thr Pro Thr Ile Gln Lys Gly Ser Tyr

85 90 95

Thr Phe Val Pro Trp Leu Leu Ser Phe Lys Arg Gly Ser Ala Leu Glu

100 105 110

Glu Lys Glu Asn Lys Ile Leu Val Lys Glu Thr Gly Tyr Phe Phe Ile

115 120 125

Tyr Gly Gln Val Leu Tyr Thr Asp Lys Thr Tyr Ala Met Gly His Leu

130 135 140

Ile Gln Arg Lys Lys Val His Val Phe Gly Asp Glu Leu Ser Leu Val

145 150 155 160

Thr Leu Phe Arg Cys Ile Gln Asn Met Pro Glu Thr Leu Pro Asn Asn

165 170 175

Ser Cys Tyr Ser Ala Gly Ile Ala Lys Leu Glu Glu Gly Asp Glu Leu

180 185 190

Gln Leu Ala Ile Pro Arg Glu Asn Ala Gln Ile Ser Leu Asp Gly Asp

195 200 205

Val Thr Phe Phe Gly Ala Leu Lys Leu Leu

210 215

<210> 26

<211> 462

<212> PRT

<213> Tall-1-CAR(人工序列)

<400> 26

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Ala Ala Leu Gln Gly Asp Leu Ala Ser

20 25 30

Leu Arg Ala Glu Leu Gln Gly His His Ala Glu Lys Leu Pro Ala Gly

35 40 45

Ala Gly Ala Pro Lys Ala Gly Leu Glu Glu Ala Pro Ala Val Thr Ala

50 55 60

Gly Leu Lys Ile Phe Glu Pro Pro Ala Pro Gly Glu Gly Asn Ser Ser

65 70 75 80

Gln Asn Ser Arg Asn Lys Arg Ala Val Gln Gly Pro Glu Glu Thr Val

85 90 95

Thr Gln Asp Cys Leu Gln Leu Ile Ala Asp Ser Glu Thr Pro Thr Ile

100 105 110

Gln Lys Gly Ser Tyr Thr Phe Val Pro Trp Leu Leu Ser Phe Lys Arg

115 120 125

Gly Ser Ala Leu Glu Glu Lys Glu Asn Lys Ile Leu Val Lys Glu Thr

130 135 140

Gly Tyr Phe Phe Ile Tyr Gly Gln Val Leu Tyr Thr Asp Lys Thr Tyr

145 150 155 160

Ala Met Gly His Leu Ile Gln Arg Lys Lys Val His Val Phe Gly Asp

165 170 175

Glu Leu Ser Leu Val Thr Leu Phe Arg Cys Ile Gln Asn Met Pro Glu

180 185 190

Thr Leu Pro Asn Asn Ser Cys Tyr Ser Ala Gly Ile Ala Lys Leu Glu

195 200 205

Glu Gly Asp Glu Leu Gln Leu Ala Ile Pro Arg Glu Asn Ala Gln Ile

210 215 220

Ser Leu Asp Gly Asp Val Thr Phe Phe Gly Ala Leu Lys Leu Leu Thr

225 230 235 240

Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser

245 250 255

Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly

260 265 270

Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp

275 280 285

Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile

290 295 300

Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys

305 310 315 320

Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys

325 330 335

Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val

340 345 350

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

355 360 365

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

370 375 380

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

385 390 395 400

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

405 410 415

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420 425 430

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

435 440 445

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

Claims (10)

1.一种治疗受试者的系统性红斑狼疮的CAR T细胞，其特征在于，所述CAR T细胞结合与B细胞相关的抗原。

2.根据权利要求1所述的CAR T细胞，其特征在于，所述CAR T细胞包含SEQ ID NO：22-24或26中任意一个氨基酸序列。

3.根据权利要求2所述的CAR T细胞，其特征在于，所述抗原是BAFF，APRIL，CD19，CD20，CD22，BCR，BCMA或CD79。

4.根据权利要求2所述的CAR T细胞，其特征在于，所述抗原是CD19，CD20或BCMA。

5.根据权利要求2-4中任意一项所述的CAR T细胞，其特征在于，所述CAR包含SEQ IDNO：18或SEQ ID NO：19的氨基酸序列。

6.根据权利要求2-4中任意一项所述的CAR T细胞，其特征在于，所述CAR包含SEQ IDNO：20和SEQ ID NO：21的氨基酸序列。

7.一种权利要求2所述的CAR T细胞在制备治疗受试者的系统性红斑狼疮药物中的应用，其特征在于，所述药物的应用方法为，给予受试者药学有效量的CAR T细胞，所述药物有效量的T细胞群是人患者每kg体重10⁴-10⁹个细胞。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物有效量的T细胞群是人患者每kg体重10⁵至10⁶个细胞。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，还包括：测量受试者尿蛋白、血清抗双链DNA抗体、肾损伤和/或皮肤损伤的水平。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述受试者尿蛋白、血清抗双链DNA抗体、肾损伤和/或对皮肤的损伤的水平降低。

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