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CN110959863A - 一种甜菊叶混合营养料糖浆及其制备方法和应用 - Google Patents

一种甜菊叶混合营养料糖浆及其制备方法和应用 Download PDF

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CN110959863A
CN110959863A CN201911288732.4A CN201911288732A CN110959863A CN 110959863 A CN110959863 A CN 110959863A CN 201911288732 A CN201911288732 A CN 201911288732A CN 110959863 A CN110959863 A CN 110959863A
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Abstract

本发明提出了一种甜菊叶混合营养料糖浆的制备方法，所述糖浆至少包括甜菊叶提取物、营养料提取物、甜味剂、酿造醋、果汁和增调剂，制备方法包括以下步骤：步骤(1)，将甜菊叶提取物、营养料、甜味剂、酿造醋、果汁和增调剂混合，加水搅拌均匀使其充分溶解；步骤(2)，静置24小时，滤过，加水至规定量，文火熬制，边熬边搅拌，熬至相对密度为3‑5，关火；步骤(3)，静置24小时，灌装，灭菌，即得。本发明活性提取物对化学性肝损伤和酒精性肝损伤具有明显的肝脏保护作用。甜菊叶混合营养料糖浆降低了其糖浆的含糖量，其甜菊糖苷成分能够明显提高糖浆的甜度而不升高食用者的血糖含量，可供糖尿病患者、原发性高血压患者、高血糖、高血脂患者食用。本发明解决了一般糖浆没有保健价值的向题。

Description

一种甜菊叶混合营养料糖浆及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及食品加工技术领域，具体涉及一种甜菊叶混合营养料糖浆及其制备方法和应用。
背景技术
糖浆是通过煮或其他技术制成的、粘稠的、含高浓度的糖的溶液。制造糖浆的原材料可以是糖水、甘蔗汁、果汁或者其它植物汁等。由于糖浆含糖量非常高，在密封状态下它不需要冷藏也可以保存比较长的时间。糖浆可以用来调制饮料或者做甜食。
本发明以糖浆为基础，选取甜菊叶为原料，得到的甜菊叶混合营养料糖浆食用后对肝损伤具有良好的保护作用，现有技术中制备了许多润肺糖浆、止咳糖浆、利咽糖浆等，但制备防治肝损伤的甜菊叶混合营养料糖浆目前还未见报道。同时具有低脂低热量的特点，混合营养料如维生素、氨基酸、动物蛋白质、植物蛋白质或中药等，补充人体所需的营养物质，制成健康和低热量的糖浆，互补日常饮食不足，长时间食用有利于人们的健康。
甜菊属菊科，又名甜叶菊、甜草，是一种多年生菊科野生草本植物。甜菊叶中含有大量的甜菊糖苷，其含量占10％左右，是一种天然的甜味剂，在国际上被授予“植物糖王”、“最佳天然甜味剂”等称号。它可替代食糖和糖精等化学合成的各种甜味剂，广泛应用于食品、饮料、医药、日用化工、酿酒、化妆品等行业。用其制成的食品饮料长期食用不会使人发胖，特别适宜肥胖病、糖尿病、高血压、动脉硬化、龋齿病等患者食用。近年来，国内外对甜菊叶的研究主要集中在甜菊糖苷的提取和应用上，而对甜菊叶保护化学性损伤肝、防治肝损伤的能力研究，还未见报道。
发明内容
本发明提供一种甜菊叶混合营养料糖浆及其制备方法，其目的在于，提供一种甜菊叶混合营养料糖浆，通过采用水浸泡和超临界流体萃取制备其活性提取物，提出来的甜菊叶提取物，混合中药提取物、维生素、动物蛋白质、植物蛋白质、氨基酸等营养料，可用于制备防治多种类型肝保护保健品或食品，并且能够明显提高糖浆的甜度而不升高食用者的血糖含量，可供糖尿病患者、原发性高血压患者、高血糖、高血脂患者食用。本发明解决了一般糖浆没有保健价值的向题。
本发明提供一种甜菊叶混合营养料糖浆的制备方法，所述糖浆至少包括甜菊叶提取物、营养料提取物、甜味剂、酿造醋、果汁和增调剂，制备方法包括以下步骤：
步骤(1)，将甜菊叶提取物、营养料、甜味剂、酿造醋、果汁和增调剂混合，加水搅拌均匀使其充分溶解；
步骤(2)，静置24小时，滤过，加水至规定量，文火熬制，边熬边搅拌，熬至相对密度为3-5，关火；
步骤(3)，静置24小时，灌装，灭菌，即得。
优选地，在所述步骤(3)之后还包括：步骤(4a)，将所述甜菊叶混合营养料糖浆混合于纯水、牛奶、水果汁、杏仁汁、豆浆、奶油、淡奶油、酸奶油、乳酪、酸奶、雪羔、醋、果醋、红茶、奶茶、咖啡、可可粉饮料、中药液、西药液、天然果汁、人造果汁、阿萨姆红茶、锡兰红茶、伯爵红茶、立顿红茶、普洱茶、红茶粉、粗茶中的一种中并搅拌均匀。
优选地，在所述步骤(3)之后还包括：步骤(4b)，将所述糖浆混合于糖水果冻、牛奶果冻、杏仁果冻、豆浆果冻、红茶果冻、奶茶果冻、咖啡果冻、可可粉果冻、中药液果冻中的一种中并混合均匀。
优选地，在所述步骤(3)之后还包括：步骤(4c)，将所述糖浆混合于蛋糕、饼干、花生酱、果酱、酱酒中的一种中并混合均匀。
优选地，所述灭菌的方法为巴氏灭菌，具体为将糖浆加热至62-65℃，保持30min。
优选地，所述甜味剂选自菊粉、罗汉果甜苷、赤藻糖醇、麦芽糖浆、雪莲果糖浆、山梨糖醇中的一种或几种混合；所述酿造醋选自糯米醋、黑醋、红醋、柿子醋、苹果醋、红枣醋、玫瑰花醋、桃花醋、洛神花醋中的一种或几种混合；所述果汁选自柠檬汁、橘子汁、苹果汁、西瓜汁、葡萄汁、西柚汁、百香果汁、蓝莓汁中的一种或几种混合；所述增调剂选自阿拉伯胶、罗望子多糖胶、田菁胶、琼脂、卡拉胶、黄原胶、β-环状糊精和藻酸丙二醇酯中的一种或几种。
作为本发明进一步的改进，所述甜菊叶提取物由以下方法制备：
S1.将甜菊叶洗净、剪碎，加入纯水中浸泡，超声波辅助提取30min，过滤，滤渣留用，滤液冷冻干燥，得到水提物冻干粉；
S2.将步骤S1得到的滤渣装入萃取釜中，打开CO2钢瓶，进行超临界流体萃取，萃取完成后打开萃取釜阀门，收集萃取物，低温干燥，得到超临界流体萃取物；
萃取条件为：
萃取压力：21-24MPa；萃取温度：45-50℃；CO2流量：6-9L/h；萃取时间：2h；夹带剂：水和乙醇，体积比为3:1；
S3.将步骤S1得到的水提取冻干粉和步骤S2得到的超临界流体萃取物混合均匀，得到甜菊叶提取物。
作为本发明进一步的改进，所述超声波功率为1500-2000W，所述冷冻干燥条件为-15℃冷冻30min后降至-35℃冷冻10h，所述低温干燥为-5℃干燥1h。
作为本发明进一步的改进，所述甜菊叶提取物、营养料、甜味剂、酿造醋、果汁和增调剂的质量比为100:(5-10)：2：(3-7)：(10-20)：(2-5)。
作为本发明进一步的改进，所述营养料选自中药提取物、维生素、动物蛋白质、植物蛋白质、氨基酸中的一种或几种混合。
优选地，所述维生素选自维生素A、维生素C、维生素E、B族维生素、维生素D、维生素K中的一种或几种混合。
优选地，所述氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸中的一种或几种混合。
优选地，所述动物蛋白质选自乳清蛋白、胶原蛋白、牛肉粉、猪肉粉、鸡肉粉中的一种或几种混合。猪肉粉和鸡肉粉为将新鲜猪肉或鸡肉烘干至含水量小于5％后打粉得到。
优选地，所述植物蛋白质选自豆蛋白质、豌豆蛋白、玉米蛋白、水解小麦蛋白、花生蛋白中的一种或几种混合。
作为本发明进一步的改进，所述中药提取物包括以下重量份的原料：甘草100-200份、甘蔗50-120份、铁皮石斛10-20份。
作为本发明进一步的改进，所述中药提取物采用以下方法制备：
S1.前处理：按比例称取各原料药材，洗净，干燥，粉碎，得到中药粉，备用；
S2.提取：将中药粉加入纯水中，加入纤维素酶，调节pH值和温度，酶解0.5-1h后，灭酶，加入碳酸钠调节pH至中性，超声波辅助提取1-3h后，离心，收集上清液，浓缩，冷冻干燥，得到中药提取物。
作为本发明进一步的改进，所述pH值调节至5，所述温度调节至45-60℃，所述灭酶方法为100℃加热10min，所述超声波功率为1200-1500W，所述离心条件为4℃，10000-12000r/min离心5min，所述冷冻干燥条件为-10℃冷冻15min，-30℃冷冻12h，所述中药粉与纯水的质量体积比为1：(5-10)；所述纤维素酶的添加量为1000-1200U/kg，所述浓缩方法为采用陶瓷膜超滤，陶瓷膜的孔径为0.05-0.10μm，陶瓷膜超滤的操作条件为：跨膜压差为0.17-0.30MPa，过滤温度为52-57℃，膜面流速为7m/s-10m/s。
本发明进一步保护一种上述甜菊叶混合营养料糖浆在制备防治肝损伤的保健食品或食品中的应用。
作为本发明进一步的改进，所述肝损伤为化学性肝损伤或酒精性肝损伤。
优选地，将保健食品制备成片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂。
本发明具有如下有益效果：本发明在甜菊叶原有化学成分和传统功效的研究基础上，同时采用水浸泡和超临界流体萃取制备其活性提取物，和现有技术相比，提出来的甜菊叶提取物可以显著降低CCl4或酒精致肝损伤的模型小鼠血清中的ALT、AST活性及肝组织MDA含量，增强肝脏SOD活性，表明该活性提取物对化学性肝损伤和酒精性肝损伤具有明显的肝脏保护作用。因此，甜菊叶提取物有望开发成为新一代安全有效，用于防治多种类型肝保护的药物、保健品或食品。
本发明新提供的甜菊叶混合营养料糖浆降低了其糖浆的含糖量，其甜菊糖苷成分能够明显提高糖浆的甜度而不升高食用者的血糖含量，可供糖尿病患者、原发性高血压患者、高血糖、高血脂患者食用，进一步具有降血压、降血糖、降血脂等功效，具有广阔的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为为本发明测试例2中各组小鼠不同时期血糖值对比图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
粉碎操作由潍坊拓日环保科技有限公司提供的TRM系列机械冲击式粉碎机处理。干燥操作由常州步远干燥设备有限公司提供的SZG双锥回转真空干燥机处理。冷冻干燥操作由上海东富龙科技股份有限公司提供的真空冷冻干燥剂处理；离心操作由无锡市龙泰化工机械设备有限公司提供的PZ平板直联式离心机处理；超声处理由山东百禾生物技术有限公司提供的超声波提取罐处理。超临界流体萃取操作由海安华安超临界设备有限公司提供的超临界流体萃取设备处理，浓缩操作由南京朋润膜科技有限公司提供的陶瓷膜设备处理。
甜菊叶由济宁奥星甜菊制品有限公司提供。
纤维素酶，CAS号9012-54-8由上海阿拉丁生化科技股份有限公司提供。
山梨糖醇，CAS号50-70-4；菊粉，CAS号9005-80-5；赤藻糖醇，CAS号149-32-6；麦芽糖浆，CAS号69-79-4。
乳清蛋白，CAS号84082-51-9；胶原蛋白，CAS号9064-67-9；豌豆蛋白，CAS号222400-29-5；牛肉粉，CAS号68990-09-0；水解小麦蛋白，CAS号70084-87-6。
阿拉伯胶，CAS号9000-01-5；罗望子多糖胶，CAS号39386-78-2；田菁胶，CAS号12493-90；琼脂，CAS号9002-18-0；卡拉胶，CAS号11114-20-8。
各种维生素、各种氨基酸由浙江康普达生物科技有限公司提供。
各种酿造醋、各种果汁由福州康达食品有限公司提供。
甘蔗，味甘性平，具有除热止渴，和中，宽隔，行水。主治发热口干，肺燥咳嗽，咽喉肿痛，心胸烦热，反胃呕吐，妊娠水肿的功效。属于药食同源材料，由广东省药材公司中药饮片厂提供。
甘草，味甘性平，归心、肺、脾、胃经，具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性的效果。属于药食同源材料，由广东省药材公司中药饮片厂提供。
实施例1甜菊叶提取物的制备
一种甜菊叶提取物的制备方法，包括以下步骤：
S1.纯水提取：将甜菊叶洗净、剪碎，加入纯水中浸泡，超声波辅助提取30min，超声波功率为1500W，过滤，滤渣留用，滤液冷冻干燥，冷冻干燥条件为-15℃冷冻30min后降至-35℃冷冻10h，得到水提物冻干粉；
S2.超临界流体萃取：将步骤S1得到的滤渣装入萃取釜中，打开CO2钢瓶，进行超临界流体萃取，萃取完成后打开萃取釜阀门，收集萃取物，低温干燥，低温干燥为-5℃干燥1h，得到超临界流体萃取物；
萃取条件为：
萃取压力：21MPa；萃取温度：45℃；CO2流量：6L/h；萃取时间：2h；夹带剂：水和乙醇，体积比为3:1；
S3.将步骤S1得到的水提取冻干粉和步骤S2得到的超临界流体萃取物混合均匀，得到甜菊叶提取物，得率82％。
实施例2甜菊叶提取物的制备
一种甜菊叶提取物的制备方法，包括以下步骤：
S1.纯水提取：将甜菊叶洗净、剪碎，加入纯水中浸泡，超声波辅助提取30min，超声波功率为1500W，过滤，滤渣留用，滤液冷冻干燥，冷冻干燥条件为-15℃冷冻30min后降至-35℃冷冻10h，得到水提物冻干粉；
S2.超临界流体萃取：将步骤S1得到的滤渣装入萃取釜中，打开CO2钢瓶，进行超临界流体萃取，萃取完成后打开萃取釜阀门，收集萃取物，低温干燥，低温干燥为-5℃干燥1h，得到超临界流体萃取物；
萃取条件为：
萃取压力：24MPa；萃取温度：50℃；CO2流量：9L/h；萃取时间：2h；夹带剂：水和乙醇，体积比为3:1；
S3.将步骤S1得到的水提取冻干粉和步骤S2得到的超临界流体萃取物混合均匀，得到甜菊叶提取物，得率85％。
实施例3甜菊叶提取物的制备
一种甜菊叶提取物的制备方法，包括以下步骤：
S1.纯水提取：将甜菊叶洗净、剪碎，加入纯水中浸泡，超声波辅助提取30min，超声波功率为1700W，过滤，滤渣留用，滤液冷冻干燥，冷冻干燥条件为-15℃冷冻30min后降至-35℃冷冻10h，得到水提物冻干粉；
S2.超临界流体萃取：将步骤S1得到的滤渣装入萃取釜中，打开CO2钢瓶，进行超临界流体萃取，萃取完成后打开萃取釜阀门，收集萃取物，低温干燥，低温干燥为-5℃干燥1h，得到超临界流体萃取物；
萃取条件为：
萃取压力：22MPa；萃取温度：47℃；CO2流量：7L/h；萃取时间：2h；夹带剂：水和乙醇，体积比为3:1；
S3.将步骤S1得到的水提取冻干粉和步骤S2得到的超临界流体萃取物混合均匀，得到甜菊叶提取物，得率90％。
对比例1
与实施例3相比，实验工艺参数不同。
一种甜菊叶提取物的制备方法，包括以下步骤：
S1.纯水提取：将甜菊叶洗净、剪碎，加入纯水中浸泡，超声波辅助提取10min，超声波功率为500W，过滤，滤渣留用，滤液冷冻干燥，冷冻干燥条件为-15℃冷冻10min后降至-35℃冷冻10h，得到水提物冻干粉；
S2.超临界流体萃取：将步骤S1得到的滤渣装入萃取釜中，打开CO2钢瓶，进行超临界流体萃取，萃取完成后打开萃取釜阀门，收集萃取物，低温干燥，低温干燥为-5℃干燥30min，得到超临界流体萃取物；
萃取条件为：
萃取压力：12MPa；萃取温度：27℃；CO2流量：3L/h；萃取时间：1h；夹带剂：水和乙醇，体积比为1:1；
S3.将步骤S1得到的水提取冻干粉和步骤S2得到的超临界流体萃取物混合均匀，得到甜菊叶提取物，得率20％。
实施例4
步骤(1)，将100g实施例1制备甜菊叶提取物、5g营养料、2g菊粉、3g红醋、10g柠檬汁和2g卡拉胶混合，加水搅拌均匀使其充分溶解；
营养料包括维生素A、乳清蛋白、豌豆蛋白、甘氨酸、丙氨酸，质量比为1：50:30:1:2。
步骤(2)，静置24小时，滤过，加水至规定量，文火熬制，边熬边搅拌，熬至相对密度为3，关火；
步骤(3)，静置24小时，灌装，灭菌，灭菌的方法为巴氏灭菌，具体为将糖浆加热至62℃，保持30min，即得。
实施例5
步骤(1)，将100g实施例2制备的甜菊叶提取物、10g营养料、2g罗汉果甜苷、7g苹果醋、20g苹果汁和5g琼脂混合，加水搅拌均匀使其充分溶解；
营养料包括维生素C、维生素E、胶原蛋白、牛肉粉、水解小麦蛋白、豌豆蛋白、酪氨酸、丝氨酸，质量比为3:1:10:20:15:22:1:2。
步骤(2)，静置24小时，滤过，加水至规定量，文火熬制，边熬边搅拌，熬至相对密度为5，关火；
步骤(3)，静置24小时，灌装，灭菌，灭菌的方法为巴氏灭菌，具体为将糖浆加热至65℃，保持30min，即得。
步骤(4)，将所述甜菊叶混合营养料糖浆混合于牛奶中并搅拌均匀。
实施例6
步骤(1)，将100g实施例3制备甜菊叶提取物、6g营养料、2g赤藻糖醇、4g柿子醋、12g葡萄汁和3g田菁胶混合，加水搅拌均匀使其充分溶解；
营养料包括中药提取物、维生素C、乳清蛋白、色氨酸、酪氨酸，质量比为10:2:12:1:2。
中药提取物包括以下重量份的原料：甘草100份、甘蔗50份、铁皮石斛10份。
中药提取物采用以下方法制备：
S1.前处理：按比例称取各原料药材，洗净，干燥，粉碎，得到中药粉，备用；
S2.提取：将10g中药粉加50mL入纯水中，加入纤维素酶，添加量为1000U/kg，用1mol/L的盐酸调节pH值至5，调节温度至45℃，酶解0.5h后，灭酶，灭酶方法为100℃加热10min，加入碳酸钠调节pH至中性，1200W超声波辅助提取1h后，离心，离心条件为4℃，10000r/min离心5min，收集上清液，浓缩，所述浓缩方法为采用陶瓷膜超滤，陶瓷膜的孔径为0.10μm，陶瓷膜超滤的操作条件为：跨膜压差为0.30MPa，过滤温度为57℃，膜面流速为10m/s，冷冻干燥，冷冻干燥条件为-10℃冷冻15min，-30℃冷冻12h，得到中药提取物。
步骤(2)，静置24小时，滤过，加水至规定量，文火熬制，边熬边搅拌，熬至相对密度为3.5，关火；
步骤(3)，静置24小时，灌装，灭菌，灭菌的方法为巴氏灭菌，具体为将糖浆加热至63℃，保持30min，即得。
步骤(4)，将所述糖浆混合于红茶果冻中并混合均匀。
实施例7
步骤(1)，将100g实施例3制备甜菊叶提取物、9g营养料、2g麦芽糖浆、6g黑醋、18g百香果汁和4g罗望子多糖胶混合，加水搅拌均匀使其充分溶解；
营养料包括中药提取物、B族维生素、乳清蛋白、豌豆蛋白、脯氨酸，质量比为12:1:15:5:1:2，B族维生素包括维生素B1、维生素B12、叶酸，质量比为5:1:1。
中药提取物包括以下重量份的原料：甘草200份、甘蔗120份、铁皮石斛20份。
中药提取物采用以下方法制备：
S1.前处理：按比例称取各原料药材，洗净，干燥，粉碎，得到中药粉，备用；
S2.提取：将10g中药粉加100mL入纯水中，加入纤维素酶，添加量为1200U/kg，用1mol/L的盐酸调节pH值至5，调节温度至60℃，酶解1h后，灭酶，灭酶方法为100℃加热10min，加入碳酸钠调节pH至中性，1500W超声波辅助提取3h后，离心，离心条件为4℃，12000r/min离心5min，收集上清液，浓缩，所述浓缩方法为采用陶瓷膜超滤，陶瓷膜的孔径为0.05μm，陶瓷膜超滤的操作条件为：跨膜压差为0.17MPa，过滤温度为52℃，膜面流速为7m/sm/s，冷冻干燥，冷冻干燥条件为-10℃冷冻15min，-30℃冷冻12h，得到中药提取物。
步骤(2)，静置24小时，滤过，加水至规定量，文火熬制，边熬边搅拌，熬至相对密度为4.5，关火；
步骤(3)，静置24小时，灌装，灭菌，灭菌的方法为巴氏灭菌，具体为将糖浆加热至64℃，保持30min，即得。
步骤(4)，将所述糖浆混合于花生酱中并混合均匀。
实施例8
步骤(1)，将100g实施例3制备甜菊叶提取物、7g营养料、2g山梨糖醇、5g糯米醋、15g蓝莓汁和3g阿拉伯胶混合，加水搅拌均匀使其充分溶解；
营养料包括中药提取物、维生素A、维生素C、乳清蛋白、半胱氨酸，质量比为10:1:2:10:1。
中药提取物包括以下重量份的原料：甘草150份、甘蔗70份、铁皮石斛15份。
中药提取物采用以下方法制备：
S1.前处理：按比例称取各原料药材，洗净，干燥，粉碎，得到中药粉，备用；
S2.提取：将10g中药粉加70mL入纯水中，加入纤维素酶，添加量为1100U/kg，用1mol/L的盐酸调节pH值至5，调节温度至55℃，酶解1h后，灭酶，灭酶方法为100℃加热10min，加入碳酸钠调节pH至中性，1350W超声波辅助提取2h后，离心，离心条件为4℃，11000r/min离心5min，收集上清液，浓缩，所述浓缩方法为采用陶瓷膜超滤，陶瓷膜的孔径为0.07μm，陶瓷膜超滤的操作条件为：跨膜压差为0.22MPa，过滤温度为55℃，膜面流速为8m/s，冷冻干燥，冷冻干燥条件为-10℃冷冻15min，-30℃冷冻12h，得到中药提取物。
步骤(2)，静置24小时，滤过，加水至规定量，文火熬制，边熬边搅拌，熬至相对密度为4，关火；
步骤(3)，静置24小时，灌装，灭菌，灭菌的方法为巴氏灭菌，具体为将糖浆加热至63℃，保持30min，即得。
步骤(4)，将所述糖浆与辅料混合均匀，压片制得甜菊叶混合营养料糖浆片。
对比例2
与实施例8相比，实施例3制备的甜菊叶提取物由对比例1制备的甜菊叶提取物替代，其他原料和制备方法与实施例8相同。
对比例3
与实施例8相比，实施例3制备的甜菊叶提取物由普通甜菊叶提取物替代，其他原料和制备方法与实施例8相同。普通甜菊叶提取物由陕西富恒生物科技有限公司提供。
对比例4
与实施例8相比，营养料中未添加中药提取物，其他原料和制备方法与实施例8相同。
营养料包括维生素A、维生素C、乳清蛋白、半胱氨酸，质量比为1:2:20:1。
对比例5
与实施例8相比，营养料中未添加乳清蛋白，其他原料和制备方法与实施例8相同。
营养料选自中药提取物、维生素A、维生素C、半胱氨酸，质量比为20:1:2:1。
测试例1抗肝损伤的实验研究
一、实验材料、仪器和试剂
1、实验材料
甜菊叶采自江苏省东台市新曹农场，按实施例1-3和对比例1方法制备得到甜菊叶提取物。甜菊叶混合营养料糖浆按照实施例4-8和对比例2-5方法制备得到的甜菊叶混合营养料糖浆。
2、实验仪器
TG16-WS台式高速离心机，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；DK-98-1型电热恒温水浴锅，天津泰斯特仪器有限公司；连续光谱扫描式酶标仪SpectraMaxPlus384美国分子生物仪器公司。
3、实验试剂
CCl4，无水乙醇，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；食用豆油，丙氨酸转氨酶(ALT)试剂盒和天冬氨酸转氨酶(AST)试剂盒以及SOD试剂盒、MDA试剂盒，考马斯亮蓝试剂盒，南京建成生物工程研究所。
4、实验动物
清洁级雄性ICR小鼠，体重(20±2)g。
二、实验方法
1、对CCl4致小鼠急性肝损伤的影响
小鼠适应性喂养一周，期间自由进食饮水。一周之后，按照体重随机分为14组，每组10只，分别为：正常对照组，CCl4模型组，实施例1-3制备的甜菊叶提取物低剂量组(50mg/kg/d)，中剂量组(100mg/kg/d)，高剂量组(200mg/kg/d)，对比例1制备的甜菊叶提取物组(100mg/kg/d)，实施例4制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，实施例5制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，实施例6制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，实施例7制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，实施例8制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，对比例2制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，对比例3制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，对比例4制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，对比例5制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，联苯双酯组(阳性对照组，150mg/kg/d)，所有药物均用生理盐水溶解，超声助溶。除正常对照组和模型组按体重灌胃等量的生理盐水外，其他各给药组均按体重灌胃给予相应药物。每天灌胃1次，连续给药7天。于给药第6天晚上禁食不禁水12h，次日正常给药1h后，除正常对照组外，其余各组腹腔注射10％的CCl4豆油溶液，造成急性CCl4肝损伤。6h后眼球取血，血清于4200rpm离心10min，取上清液于4℃冰箱中保存。取血后，立即劲椎脱臼处死小鼠，解剖取肝脏和脾，称重后，用生理盐水清洗掉肝脏表面血迹，拭去表面生理盐水后，部分肝脏用10％的福尔马林浸泡固定，另一部分用锡纸包好后，立即放入-80℃冰箱中保存。
血清学及肝脏指标检测：离心完的血清分别按照ALT，AST试剂盒的说明书于96孔板中加样，酶标仪测定OD值，计算出小鼠血清中ALT，AST的活性。
称取一定重量的冻存肝脏，按照重量体积比1:9加冷生理盐水进行匀浆，于冷冻离心机中4200rpm离心10min，取上清液得10％的肝匀浆，制备肝匀浆均在低温条件下操作。取少量10％的肝匀浆，用冷生理盐水稀释成1％的肝匀浆。
按照考马斯亮蓝试剂盒和SOD，MDA试剂盒的说明分别于96孔板中加样，酶标仪测定各自的OD值，分别计算出1％肝匀浆中肝蛋白浓度和肝脏中SOD的活性以及10％肝匀浆中MDA的浓度。
2、对酒精致小鼠急性肝损伤的影响
小鼠适应性喂养一周，期间自由进食饮水。一周之后，按照体重随机分为14组，每组10只，分别为：正常对照组，酒精模型组，实施例1-3制备的甜菊叶提取物低剂量组(50mg/kg/d)，中剂量组(100mg/kg/d)，高剂量组(200mg/kg/d)，对比例1制备的甜菊叶提取物组(100mg/kg/d)，实施例4制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，实施例5制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，实施例6制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，实施例7制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，实施例8制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，对比例2制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，对比例3制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，对比例4制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，对比例5制备的甜菊叶混合营养料糖浆组(100mg/kg/d)，联苯双酯组(阳性对照组，150mg/kg/d)，所有药物均用生理盐水溶解，超声助溶。除空白对照组和模型组按体重灌胃等量的生理盐水外，其他各给药组均按体重灌胃给予相应药物。每天灌胃1次，连续给药7天。于给药第6天晚上禁食不禁水12h，次日正常给药1h后，除空白对照组外，其余各组按按12ml/kg剂量灌胃50％乙醇造成急性酒精肝损伤。12h后，眼球取血，血清于4200rpm离心10min，取上清液于4℃冰箱中保存。取血后，立即劲椎脱臼处死小鼠，解剖取肝脏和脾，称重后，用生理盐水清洗掉肝脏表面血迹，拭去表面生理盐水后，部分肝脏用10％的福尔马林浸泡固定，另一部分用锡纸包好后，立即放入-80℃冰箱中保存。
血清学及肝脏指标检测：离心完的血清分别按照ALT，AST试剂盒的说明书于96孔板中加样，酶标仪测定OD值，计算出小鼠血清中ALT，AST的活性。
称取一定重量的冻存肝脏，按照重量体积比1:9加冷生理盐水进行匀浆，于冷冻离心机中4200rpm离心10min，取上清液得10％的肝匀浆，制备肝匀浆均在低温条件下操作。取少量10％的肝匀浆，用冷生理盐水稀释成1％的肝匀浆。
按照考马斯亮蓝试剂盒和SOD，MDA试剂盒的说明分别于96孔板中加样，酶标仪测定各自的OD值，分别计算出1％肝匀浆中肝蛋白浓度和肝脏中SOD的活性以及10％肝匀浆中MDA的浓度。
三、实验结果
1、对CCl4致小鼠急性肝损伤的影响
本实验结果显示，经CCl4注射后，模型组小鼠ALT和AST明显升高，高于正常对照组，提示造模成功(p<0.05)，高剂量、中剂量组，以及实施例4-6给药组与模型组比较，均能降低血清中增加的ALT和AST活性，具有显著性差异(p<0.05)，实施例7-8具有极显著的差异(p<0.01)；同时，甜菊叶提取物高、中剂量组以及实施例4-6组可以有效降低肝组织MDA水平，升高肝组织SOD水平，具有显著性差异(p<0.05)，实施例7-8具有极显著的差异(p<0.01)，对比例1-5组具有降低趋势，无统计学意义(p>0.05)。具体结果见表1。
表1甜菊叶提取物对CCl4致急性肝损伤小鼠血清ALT、AST及肝脏SOD、MDA的影响
Figure BDA0002317502890000141
Figure BDA0002317502890000151
注释：#，给药组vs模型组，p<0.05；﹡，给药组vs模型组，p<0.05，**，给药组vs模型组，p<0.01。
2、对酒精致小鼠急性肝损伤的影响
本实验结果显示，经50％酒精灌胃后，模型组小鼠ALT和AST明显升高，高于正常对照组，提示造模成功(p<0.05)，高剂量和中剂量组，以及实施例4-6给药组与模型组比较，均能降低血清中增加的ALT和AST活性，具有显著性差异(p<0.05)，实施例7-8具有极显著的差异(p<0.01)；同时，甜菊叶提取物高、中剂量组以及实施例4-6组可以有效降低肝组织MDA水平，升高肝组织SOD水平，具有显著性差异(p<0.05)，实施例7-8具有极显著的差异(p<0.01)，对比例1-5组具有降低趋势，无统计学意义(p>0.05)。具体结果见表2。
表2甜菊叶提取物对酒精致急性肝损伤小鼠血清ALT、AST及肝脏SOD、MDA的影响
Figure BDA0002317502890000152
Figure BDA0002317502890000161
注释：#，给药组vs模型组，p<0.05；﹡，给药组vs模型组，p<0.05，**，给药组vs模型组，p<0.01。
四、实验结论
本发明实施例1-3制备的甜菊叶提取物、实施例4-8制备的甜菊叶糖浆可以显著降低CCl4或酒精致肝损伤的模型小鼠血清中的ALT、AST活性及肝组织MDA含量，增强肝脏SOD活性，表明该活性提取物对化学性肝损伤和酒精性肝损伤具有明显的肝脏保护作用。
对比例1制备工艺以本发明实施例3不同，制得的甜菊叶提取物得率较低，且保护肝脏的活性较差，虽有恢复肝脏各项指标趋势，但不明显。
对比例2采用对比例1制备的甜菊叶提取物制备得到的甜菊叶糖浆，其保护肝脏的活性也较差。
对比例3与实施例8相比，采用普通甜菊叶提取物替代实施例3制备的甜菊叶提取物，几乎没有保护肝脏的活性。
对比例4和5与实施例8相比，分别未添加中药提取物和乳清蛋白，其保护肝脏的活性较差，虽有恢复肝脏各项指标趋势，但不明显，与实施例6相比，明显活性大幅度下降。因此，中药提取物和乳清蛋白两者具有协同增效的作用。
测试例2甜菊叶提取物的降糖实验
1材料与方法
1.1材料
SPF级KM小鼠，雄性，(22±2)g，购于湖南斯莱克景达试验动物有限公司，试验动物生产许可证号：SCXK(湘)2018-0020，普通甜菊叶提取物由陕西富恒生物科技有限公司提供。
1.2实验方法
1.2.1高血糖小鼠模型的方法建立
将SPF级KM雄性小鼠，22g左右，自由饮食，适应性喂养3d。禁食16h，测其空腹血糖值和体重，按照体重值确定所需链脲佐菌素量，配置溶液，腹腔注射50mg·kg-1，连续注射5d，每天1次。最后一次注射结束后，禁食16h，测定血糖值，血糖值高于11.1mmoL·L-1视为造模成功；同时观察记录小鼠的体重、饮水、饮食等生理变化。
1.2.2动物试验设计
以建立的高血糖小鼠模型方法为基础，将42只SPF级KM小鼠在22-25℃条件下适应性饲养7d后，称重，随机取6只作为正常组，其余小鼠进行造模，将36只造模成功小鼠随机分为模型组、甜菊叶提取物高剂量组(剂量为700mg·kg-1·d-1)、甜菊叶提取物中剂量组(剂量为350mg·kg-1·d-1)、甜菊叶提取物低剂量组(剂量为175mg·kg-1·d-1)、普通甜菊叶提取物高剂量组、盐酸二甲双胍片组，每组6只。正常组与模型组均灌喂等体积水，灌喂体积为10mL·kg-1·d-1，连续灌喂28d，在7、14、21、28d分别测定各组小鼠血糖值。
1.2.3数据处理采用SPSS 22.0软件进行数据处理，结果以“平均值±标准差(x±sd)”表示。采用单因素方差分析(ONE-WAY ANOVA)，Duncan多重比较分析组间差异性，p＜0.05表示差异显著，p＜0.01表示差异极显著。相关性分析采用Pearson’s法。
2.对高血糖小鼠血糖的影响
结果如图1，注：与正常组比较，**表示有显著性差异(p＜0.01)；与模型组比较，#表示有显著性差异(p＜0.05)，##表示有极显著性差异(p＜0.01)。
由图1可知，与正常组相比，造模前的各组小鼠血糖值均处于正常水平，造模后的各组小鼠空腹血糖含量极显著升高(P＜0.01)，血糖值均高于11.1mmoL·L-1，说明高血糖模型造模成功。灌喂28d后，与模型组比较，甜菊叶提取物高、中剂量组和盐酸二甲双胍组的血糖水平极显著降低(P＜0.01)，低剂量组有显著降低(P＜0.05)，由此说明甜菊糖浆具有显著的降血糖效果。普通甜菊糖浆组小鼠血糖也稍有下降，与模型组差异不显著，说明普通甜菊糖浆不具有显著的降血糖效果。
与现有技术相比，本发明在甜菊叶原有化学成分和传统功效的研究基础上，同时采用水浸泡和超临界流体萃取制备其活性提取物，和现有技术相比，提出来的甜菊叶提取物可以显著降低CCl4或酒精致肝损伤的模型小鼠血清中的ALT、AST活性及肝组织MDA含量，增强肝脏SOD活性，表明该活性提取物对化学性肝损伤和酒精性肝损伤具有明显的肝脏保护作用。因此，甜菊叶提取物有望开发成为新一代安全有效，用于防治多种类型肝保护的药物、保健品或食品。
本发明新提供的甜菊叶糖浆降低了其糖浆的含糖量，其甜菊糖苷成分能够明显提高糖浆的甜度而不升高食用者的血糖含量，可供糖尿病患者、原发性高血压患者、高血糖、高血脂患者食用，进一步具有降血压、降血糖、降血脂等功效，具有广阔的应用前景。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种甜菊叶混合营养料糖浆的制备方法，其特征在于，所述糖浆至少包括甜菊叶提取物、营养料提取物、甜味剂、酿造醋、果汁和增调剂，制备方法包括以下步骤：
步骤(1)，将甜菊叶提取物、营养料、甜味剂、酿造醋、果汁和增调剂混合，加水搅拌均匀使其充分溶解；
步骤(2)，静置24小时，滤过，加水至规定量，文火熬制，边熬边搅拌，熬至相对密度为3-5，关火；
步骤(3)，静置24小时，灌装，灭菌，即得。
2.根据权利要求1所述一种甜菊叶混合营养料糖浆的制备方法，其特征在于，所述甜菊叶提取物由以下方法制备：
S1. 将甜菊叶洗净、剪碎，加入纯水中浸泡，超声波辅助提取30min，过滤，滤渣留用，滤液冷冻干燥，得到水提物冻干粉；
S2. 将步骤S1得到的滤渣装入萃取釜中，打开CO2钢瓶，进行超临界流体萃取，萃取完成后打开萃取釜阀门，收集萃取物，低温干燥，得到超临界流体萃取物；
萃取条件为：
萃取压力：21-24MPa；萃取温度：45-50℃；CO2流量：6-9L/h；萃取时间：2h；夹带剂：水和乙醇，体积比为3:1；
S3. 将步骤S1得到的水提取冻干粉和步骤S2得到的超临界流体萃取物混合均匀，得到甜菊叶提取物。
3.根据权利要求2所述一种甜菊叶混合营养料糖浆的制备方法，其特征在于，所述超声波功率为1500-2000W，所述冷冻干燥条件为-15℃冷冻30min后降至-35℃冷冻10h，所述低温干燥为-5℃干燥1h。
4.根据权利要求1所述一种甜菊叶混合营养料糖浆的制备方法，其特征在于，所述甜菊叶提取物、营养料、甜味剂、酿造醋、果汁和增调剂的质量比为100:（5-10）：2：（3-7）：（10-20）：（2-5）。
5.根据权利要求1所述一种甜菊叶混合营养料糖浆的制备方法，其特征在于，所述营养料选自中药提取物、维生素、动物蛋白质、植物蛋白质、氨基酸中的一种或几种混合。
6.根据权利要求5所述一种甜菊叶混合营养料糖浆的制备方法，其特征在于，所述中药提取物包括以下重量份的原料：甘草100-200份、甘蔗50-120份、铁皮石斛10-20份。
7.根据权利要求5所述一种甜菊叶混合营养料糖浆的制备方法，其特征在于，所述中药提取物采用以下方法制备：
S1. 前处理：按比例称取各原料药材，洗净，干燥，粉碎，得到中药粉，备用；
S2. 提取：将中药粉加入纯水中，加入纤维素酶，调节pH值和温度，酶解0.5-1h后，灭酶，加入碳酸钠调节pH至中性，超声波辅助提取1-3h后，离心，收集上清液，浓缩，冷冻干燥，得到中药提取物。
8.根据权利要求7所述一种甜菊叶混合营养料糖浆的制备方法，其特征在于，所述pH值调节至5，所述温度调节至45-60℃，所述灭酶方法为100℃加热10min，所述超声波功率为1200-1500W，所述离心条件为4℃，10000-12000r/min离心5min，所述冷冻干燥条件为-10℃冷冻15min，-30℃冷冻12h，所述中药粉与纯水的质量体积比为1：（5-10）；所述纤维素酶的添加量为1000-1200U/kg，所述浓缩方法为采用陶瓷膜超滤，陶瓷膜的孔径为0.05-0.10μm，陶瓷膜超滤的操作条件为：跨膜压差为0.17-0.30MPa，过滤温度为52-57℃，膜面流速为7m/s-10m/s。
9.一种如权利要求1-8任一项权利要求所述方法制备的甜菊叶混合营养料糖浆在制备防治肝损伤的药物、保健食品或食品中的应用。
10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述肝损伤为化学性肝损伤或酒精性肝损伤。
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