CN110904116B

CN110904116B - 植物phl3基因在调控植物种子大小、干重和脂肪酸积累中的应用

Info

Publication number: CN110904116B
Application number: CN201911018634.9A
Authority: CN
Inventors: 胡赞民; 殷祥贞; 范成明; 陈宇红
Original assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Current assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Priority date: 2019-10-24
Filing date: 2019-10-24
Publication date: 2022-12-09
Anticipated expiration: 2039-10-24
Also published as: CN110904116A

Abstract

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及植物PHL3基因在调控植物种子大小、干重和脂肪酸积累中的应用。本发明发现PHL3基因具有调控植物种子大小、干重和脂肪酸积累的功能。过表达植物PHL3基因获得的转基因材料与野生型相比，种子的大小、干重以及总脂肪酸含量均显著增加，且过表达植物PHL3基因不会对植物生长发育和农艺性状产生不利影响。本发明发现的PHL3的新功能具有较好的应用潜力，为作物的油脂改良提供了新思路。

Description

植物PHL3基因在调控植物种子大小、干重和脂肪酸积累中的应用

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及植物PHL3基因在调控植物种子大小、干重和脂肪酸积累中的应用。

背景技术

PHL3(PHR1-like 3)属于MYB-CC家族，是PHR1(HOSPHORUS STARVATION RESPONSE1)的近源基因。PHR1及其同源基因PSR1(PHOSPHORUS STARVATION RESPONSE 1)能够通过调节一些磷饥饿诱导基因的表达而参与磷代谢。在拟南芥中，AtPHL3也能够通过调节一些磷饥饿诱导基因的表达而参与磷代谢的调控。此外，PHR1对拟南芥适应高光及保持在磷饥饿期间的功能性光合作用至关重要，并且PHR1还是磷与硫酸盐、锌和铁等其他基本营养素cross-talk的交汇点。

发明内容

为解决现有技术中存在的技术问题，本发明的目的在于提供植物PHL3基因在调控植物种子大小、干重和脂肪酸积累中的应用。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明发现植物PHL3基因具有调控植物种子大小、干重和脂肪酸积累的功能，提高植物中PHL3基因的表达量，植物种子的大小、干重和脂肪酸积累均可显著提高。

第一方面，本发明提供植物PHL3蛋白或其编码基因在调控植物种子大小中的应用。

具体而言，本发明提供的植物PHL3蛋白或其编码基因能够提高植物种子的大小，例如增加种子长度、宽度、投影面积。

第二方面，本发明提供植物PHL3蛋白或其编码基因在调控植物种子干重中的应用。

具体而言，本发明提供的PHL3蛋白或其编码基因能提高植物种子的干重。

第三方面，本发明提供植物PHL3蛋白或其编码基因在调控植物种子发育中的应用。

第四方面，本发明提供植物PHL3蛋白或其编码基因在调控植物脂肪酸代谢中的应用。

第五方面，本发明提供植物PHL3蛋白或其编码基因在调控植物种子脂肪酸积累中的应用。

具体而言，本发明提供植物PHL3蛋白或其编码基因能够显著促进植物种子中总脂肪酸的积累，特别是显著提高以下脂肪酸的含量：C16:0、C18:0、C18:1、C18:2、C18:3、C20:0、C20:1、C20:2、C20:3和C22:1。

第六方面，本发明提供植物PHL3蛋白或其编码基因在植物遗传育种或转基因植物制备中的应用。

上述PHL3蛋白或其编码基因的应用可以PHL3蛋白或其编码基因本身的形式应用，或者以含有PHL3蛋白的编码基因的表达盒、载体、含有所述表达盒或所述载体的宿主细胞或者含有PHL3蛋白的编码基因的转基因植物细胞系的形式应用。

上述植物PHL3蛋白具有如下任一种氨基酸序列：

(1)如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

(2)如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的替换、插入或缺失得到的具有相同功能蛋白的氨基酸序列；

(3)与如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列。优选地，所述同源性为至少90％；更优选为95％。

上述如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列为拟南芥的PHL3蛋白AtPHL3。本领域技术人员可根据本发明公开的氨基酸序列以及氨基酸的保守性替换等本领域常规技术手段，在不影响其活性的前提下，取代、缺失和/或增加一个或几个氨基酸，得到与本发明公开的PHL3蛋白具有相同活性的PHL3蛋白的突变体。

本发明如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列为拟南芥的PHL3蛋白AtPHL3的CDS序列。本发明所述的PHL3蛋白的编码基因可以为任意能够编码上述PHL3蛋白的核苷酸序列。考虑到密码子的简并性以及不同物种密码子的偏爱性，本领域技术人员可以根据需要使用适合特定物种表达的密码子。

上述植物PHL3蛋白的CDS具有如下任一种核苷酸序列：

(1)如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

(2)如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列经一个或多个核苷酸的替换、插入或缺失得到的编码相同功能蛋白的核苷酸序列。

第七方面，本发明提供一种调控植物种子大小、干重或脂肪酸积累的方法，包括：调控所述植物中PHL3蛋白的表达量；

所述PHL3蛋白具有如下任一种氨基酸序列：

(1)如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

(3)与如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列；优选地，所述同源性为至少90％；更优选为95％。

具体地，所述方法为通过在所述植物中过表达PHL3蛋白的编码基因，提高植物的种子大小、干重或脂肪酸积累；

所述植物PHL3蛋白的CDS具有如下任一种核苷酸序列：

(1)如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

所述过表达PHL3蛋白的编码基因可通过本领域常规技术手段实现，例如：在所述植物中导入携带PHL3蛋白的编码基因的表达载体。

所述过表达PHL3蛋白的编码基因可采用常用的启动子启动所述PHL3蛋白的编码基因的转录，例如：CaMV 35S启动子。

本发明中，所述植物为单子叶植物或双子叶植物。所述植物包括但不限于拟南芥，油菜、大豆、棉花、花生、棕榈等油料植物以及小麦、水稻、玉米等。

本发明的有益效果在于：

本发明发现PHL3基因具有调控植物种子大小、干重和脂肪酸积累的功能。本发明通过实验证明，在拟南芥中过表达拟南芥的AtPHL3获得的转基因材料与野生型相比，转AtPHL3的拟南芥种子的长度、宽度及投影面积分别增加了2.74％～11.23％、1.92％～8.10％和4.29％～19.95％，种子干重增加了18.23％～36.21％及种子总脂肪酸的含量增加了14.99％～31.11％，特别显著提高以下脂肪酸的含量：C16:0、C18:0、C18:1、C18:2、C18:3、C20:0、C20:1、C20:2、C20:3和C22:1。。同时，将AtPHL3过表达于拟南芥中，除显著提高拟南芥种子大小、种子干重及种子中脂肪酸的积累之外，未发现出现抑制植物生长发育等不利的农艺性状。本发明发现的PHL3的功能及其应用具有较好的应用潜力，为作物的油脂改良提供了新思路。

附图说明

图1为本发明实施例1中pGWC-AtPHL3入门载体的结构示意图。

图2为本发明实施例1中pAtPHL3植物表达载体的结构示意图。

图3为本发明实施例3中不同转基因拟南芥株系的种子大小的分析；其中，WT表示野生型；35S::AtPHL3::eGFP表示野生型转AtPHL3基因的株系；phl3表示突变AtPHL3的株系；#1、#2等分别表示不同的转基因株系；*表示在0.01<p<0.05水平上的差异显著；**表示在p<0.01水平上差异显著。

图4为本发明实施例4中不同转基因拟南芥株系的种子干重的分析；其中，WT表示野生型；phl3表示AtPHL3的株系，#1、#2等分别表示不同的野生型转AtPHL3基因的株系；*表示在0.01<p<0.05水平上的差异显著；**表示在p<0.01水平上差异显著。

图5为本发明实施例5中不同转基因拟南芥株系中种子脂肪酸的成份分析；其中，*表示在0.01<p<0.05水平上的差异显著；**表示在0.001<p<0.01水平上差异显著；***表示在p<0.001水平上差异显著。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1拟南芥PHL3基因的克隆及表达载体构建

1、植物总RNA的提取

依据RNAprep Pure植物总RNA提取试剂盒(目录号：DP432，天根生化科技(北京)有限公司)对植物总RNA进行提取，步骤如下：

(1)匀浆处理50～100mg拟南芥或甘蓝型油菜叶片在液氮中迅速研磨成粉末，加入450μL RL(加入10μLβ-巯基乙醇)，涡旋剧烈震荡混匀；

(2)将所有溶液转移至过滤柱CS上(过滤柱CS放在收集管中)，12,000rpm离心2min，小心吸取收集管中的上清至RNase-Free的离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀；

(3)缓慢加入0.5倍上清体积的无水乙醇(225μL)，混匀，将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中，12000rpm离心60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中；

(4)向吸附柱CR3中加入350μL去蛋白液RW1，12000rpm离心60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中；

(5)DNase I工作液的配制：取10μL DNase I储存液放入新的RNase-Free离心管中，加入70μL RDD缓冲液，轻柔混匀；

(6)向吸附柱CR3中央加入80μL的DNase I工作液，室温放置15min；

(7)向吸附柱CR3中加入350μL去蛋白液RW1，12,000rpm离心60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中；

(8)向吸附柱CR3中加入500μL漂洗液RW，室温静置2min，12000rpm离心60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中；

(9)重复步骤8；

(10)12,000rpm离心2min，倒掉废液。将吸附柱CR3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；

(11)将吸附柱CR3放入一个新的RNase-Free离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加60μL RNase-Free ddH2O，室温放置2min，12,000rpm离心2min，得到RNA溶液。RNA样品请在-80℃中保存。

2、cDNA的合成

依据TransScript One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix(目录号：AE311-03，北京全式金生物技术有限公司)对上述1中提取的植物总RNA进行反转录，方法如下：

(1)配制反转录的反应体系(20μL)，具体如下：

(2)轻轻混匀反应体系，于42℃孵育30min。

(3)于85℃加热5sec失活TransScript RT/RI Enzyme和gDNA去除液，-20℃保存备用。

3、AtPHL3基因的获得及表达载体的构建

在拟南芥基因组数据库(TAIR，http://www.arabidopsis.org/)中检索AtPHL3(AtPHL3蛋白序列如SEQ ID NO.1所示，CDS序列如SEQ ID NO.2所示)，根据基因序列设计引物，具体如下：

AtPHL3_F：5'-agcaggctttgactttatgtactcggcgattcggtctt-3'；

AtPHL3_R：5'-tgggtctagagactttcctccaatgctactactaggcataacc-3'

利用上述引物进行基因克隆。基因克隆的详细步骤如下：

(1)按下列组份配制PCR反应体系(总体积：50μL)：

(2)PCR反应条件如下：

98℃ 2min；98℃ 10sec，55℃20sec，72℃1min/kb，共30个循环，72位点10min。

利用In-fusion体系，分别将上述克隆得到的PCR产物连接到入门载体pGWC上，具体方法如下：

反应体系：1μL酶切后的pGWCm(100ng/μL，用AhdI酶切)，1μL PCR产物(80ng/μL)，2μL In-fusion Mix。反应条件：50℃，50～60min。将连接产物转化大肠杆菌DH5α，通过PCR鉴定筛选阳性克隆，经测序鉴定后，得到重组质粒，命名为pGWC-AtPHL3(如图1所示)。

通过Gateway体系，将AtPHL3构建到植物表达载体pHZM27(本实验室构建，在pEarleyGate 103中-P_35S::attR1::ccdB::Cm::attR2::mGFP::T_OCS-两侧分别引入gypsy，即-gypsy::P_35S::attR1::ccdB::Cm::attR2::mGFP::T_OCS::gypsy-，pEarleyGate 103购于BioVector NTCC Inc.)上，命名为pAtPHL3(如图2所示)。将重组质粒pAtPHL3转化至农杆菌GV3101中，经PCR鉴定后，待用。

实施例2 AtPHL3基因的遗传转化及阳性转基因株系的筛选

采用蘸花法将实施例1构建的AtPHL3的表达载体pAtPHL3转化至拟南芥中，具体方法如下：

将实施例1构建的带有pAtPHL3质粒的农杆菌，在LB液体培养基(加有50mg/L卡那霉素、50mg/L庆大霉素和50mg/L利福平)中培养至OD＝0.8，5000rpm离心5min收集菌体，用等体积的悬浮液(10mM MgCl₂，0.005％Silwet L-77，5％蔗糖)悬浮，转化开花初期的拟南芥一次，间隔7天再蘸花一次。待种子成熟后，收集T0代种子，种于培养盘中，出苗后10天，喷Barsta(0.3％)进行筛选，间隔5天，再喷一次；并通过PCR鉴定后，将T1代阳性苗移植于营养钵中培养，待成熟后收种子。

实施例3转AtPHL3基因的植株种子大小分析

每个转基因系分别收集10株成熟的拟南芥主枝上的种子并在37℃烘干。利用体视镜对种子进行观察并拍照，然后利用Image-Pro Plus软件对所拍得种子的图片进行分析，获得种子的长、宽及投影面积。

从实验结果来看：突变AtPHL3(phl3，SALK_010040，见拟南芥数据库www.arabidopsis.org，为在拟南芥中采用T-DNA插入所获得的突变体，插入位点在AtPHL3的CDS中最后一个外显子的3'端)使种子的面积、长度和宽度均显著减小，与野生型相比，分别减小了5.67％、1.96％及3.57％；转AtPHL3基因能够促进种子的长度、宽度及投影面积显著增加，与野生型相比，在转AtPHL3基因的7个株系种子的长度、宽度及投影面积分别增加了2.74％～11.23％、1.92％～8.10％和4.29％～19.95％(见图3)。

实施例4转AtPHL3基因株系的种子干重分析

收集拟南芥种子，37℃将其烘干后，统计500粒种子的干重，每个转基因系取10个植株作为10个生物重复。

从实验结果来看：突变AtPHL3(phl3)使种子的干重显著下降，与野生型相比，下降了9.10％；转AtPHL3基因可以促进种子的干重显著增加，与野生型相比，转基因株系#1、#2、#9和#10的种子干重分别增加了18.32％、18.23％、36.21％及19.95％(见图4)。

实施例5转AtPHL3基因的种子中脂肪酸成份分析

收集转AtPHL3基因拟南芥的种子，37℃将其烘干后充分研磨，称取0.01g，加入3mL7.5％KOH-CH₃OH(已加入C17:0标准品作为内参)，70℃水浴4-5h，中间颠倒混匀几次。加入2mL HCl-CH3OH(V/V，1:1)溶液，2mL 14％BF3-CH3OH溶液，70℃水浴1.5h。加入1mL 0.9％NaCl和4mL正己烷，充分振荡混匀，4,000rpm离心8min，将上层有机相转移至一新管中。氮气吹干，300μL乙酸乙酯溶解。该实验每个转基因系分别随机取四个植株作为四个生物重复。

待测样品通过气相色谱-三重四级杆串联质谱仪(GC-QQQ，Agilent 7890A-7001B)进行分析。色谱柱为HP-FFAP(30mm×0.25mm ID，0.25μm；Agilent)。载气是高纯氦气。具体参数设置如下：流量为1mL/min；进样口温度为220℃；传输线温度为230℃；进样方式为不分流；进样体积为1μL；离子源为EI(70eV)；离子源温度为230℃；扫描方式为全扫(50-550m/z)；柱箱起始温度为60℃，先以10℃/min的速率升温至180℃，其次以3℃/min的速率继续升温至210℃，最后5℃/min的速率继续升温至220℃，保持15min。应用气质工作站自带软件Masshunter workstation进行样品的定性定量。定性鉴定所用的数据库为NIST。然后根据气相色谱分析结果，不同脂肪酸所对应的峰面积与C17:0内标峰面积作比较来计算出各脂肪酸组分含量以及总脂肪酸含量。

从实验结果来看(见图5)，突变或转AtPHL3拟南芥的种子中的脂肪酸组成没有发生变化，均含有C16:0、C18:0、C18:1、C18:2、C18:3、C20:0、C20:1、C20:2、C20:3和C22:1，其中C18约占总脂肪酸的三分之二，而亚油酸和亚麻酸却占总脂肪酸的一半以上；突变PHL3使拟南芥种子中总脂肪酸积累降低了6.20％，但统计结果不显著，而C18:1、C18:2和C20:2的含量显著降低，分别降低了14.46％、10.97％和10.27％；转AtPHL3能够显著促进拟南芥种子中总脂肪酸的积累(增加了14.99％～31.11％)；转AtPHL3的株系#1(Ov#1)中，C18:0、C18:3、C20:0、C20:1和C20:2的含量均显著增加(分别增加了17.44％、16.50％、36.29％、41.62％和17.63％)；转AtPHL3的株系#2(Ov#2)中，C16:0、C18:0、C18:1、C18:2、C18:3、C20:0、C20:1、C20:2、C20:3和C22:1的含量均显著增加(分别增加了14.49％、41.33％、18.94％、12.38％、24.75％、78.07％、71.99％、32.16％、61.87％和52.28％)。

本发明以模式植物拟南芥为例通过实验证明了AtPHL3基因的功能，鉴于拟南芥为模式植物，在拟南芥菜中能够发挥作用的基因在多种作物中均有类似的功效，因此本发明的AtPHL3基因可用于油菜，大豆，棉花，花生，棕榈等油料植物和小麦，水稻，玉米等其他作物中，调控植物种子的大小、干重或脂肪酸积累。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 中国科学院遗传与发育生物学研究所

<120> 植物PHL3基因在调控植物种子大小、干重和脂肪酸积累中的应用

<130> KHP191115373.1

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 292

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Met Tyr Ser Ala Ile Arg Ser Ser Leu Pro Leu Asp Gly Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Tyr Ser Asp Gly Thr Asn Leu Pro Ile Asp Ala Cys Leu Val Leu

20 25 30

Thr Thr Asp Pro Lys Pro Arg Leu Arg Trp Thr Ser Glu Leu His Glu

35 40 45

Arg Phe Val Asp Ala Val Thr Gln Leu Gly Gly Pro Asp Lys Ala Thr

50 55 60

Pro Lys Thr Ile Met Arg Thr Met Gly Val Lys Gly Leu Thr Leu Tyr

65 70 75 80

His Leu Lys Ser His Leu Gln Lys Phe Arg Leu Gly Arg Gln Ser Cys

85 90 95

Lys Glu Ser Ile Asp Asn Ser Lys Asp Val Ser Cys Val Ala Glu Ser

100 105 110

Gln Asp Thr Gly Ser Ser Ser Thr Ser Ser Leu Arg Leu Ala Ala Gln

115 120 125

Glu Gln Asn Glu Ser Tyr Gln Val Thr Glu Ala Leu Arg Ala Gln Met

130 135 140

Glu Val Gln Arg Arg Leu His Glu Gln Leu Glu Val Gln Arg Arg Leu

145 150 155 160

Gln Leu Arg Ile Glu Ala Gln Gly Lys Tyr Leu Gln Ser Ile Leu Glu

165 170 175

Lys Ala Cys Lys Ala Ile Glu Glu Gln Ala Val Ala Phe Ala Gly Leu

180 185 190

Glu Ala Ala Arg Glu Glu Leu Ser Glu Leu Ala Ile Lys Ala Ser Ile

195 200 205

Thr Asn Gly Cys Gln Gly Thr Thr Ser Thr Phe Asp Thr Thr Lys Met

210 215 220

Met Ile Pro Ser Leu Ser Glu Leu Ala Val Ala Ile Glu His Lys Asn

225 230 235 240

Asn Cys Ser Ala Glu Ser Ser Leu Thr Ser Ser Thr Val Gly Ser Pro

245 250 255

Val Ser Ala Ala Leu Met Lys Lys Arg Gln Arg Gly Val Phe Gly Asn

260 265 270

Gly Asp Ser Val Val Val Gly His Asp Ala Gly Trp Val Met Pro Ser

275 280 285

Ser Ser Ile Gly

290

<210> 2

<211> 879

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

atgtactcgg cgattcggtc ttcgcttcct ctagatggca gcttgggaga ctactctgac 60

ggaaccaatc ttcccatcga cgcttgtctg gtcctaacca ctgaccccaa gcctcgcctt 120

cgttggacct ctgagctcca tgaaagattc gttgacgccg tcactcagct cggcggaccc 180

gacaaagcaa cgcctaaaac tataatgaga acaatgggag tgaagggtct cactctttac 240

catctcaaat ctcatcttca gaaattccgc ttggggaggc aatcttgtaa agaatcaatt 300

gacaactcta aggatgtttc ttgtgttgcg gagagtcagg acactggttc atcttcaaca 360

tcatccttaa gattggctgc tcaagaacag aacgagagtt accaggtcac tgaagctttg 420

cgtgcccaga tggaagtcca aagaagacta cacgagcaac tagaggtgca aaggcgactc 480

cagttaagga tcgaggcaca agggaagtac ctgcaatcaa ttctagagaa agcttgcaag 540

gctatagagg agcaagctgt tgcatttgct gggttagagg cagctagaga agagctttca 600

gagctagcca taaaggcctc catcaccaat gggtgccaag gaacaacaag caccttcgac 660

acaaccaaaa tgatgattcc atccttatcc gagcttgcag tagcaataga gcacaagaac 720

aactgttcag cagagagctc tctgacttcc agcactgtag gaagtccggt atcagctgcg 780

ttgatgaaga agagacaacg aggagtgttt ggaaatggag atagtgtggt tgttggtcat 840

gatgctggat gggttatgcc tagtagtagc attggatga 879

<210> 3

<211> 38

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

agcaggcttt gactttatgt actcggcgat tcggtctt 38

<210> 4

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tgggtctaga gactttcctc caatgctact actaggcata acc 43

Claims

1.植物PHL3蛋白或其编码基因在调控拟南芥种子干重中的应用；所述植物PHL3蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.植物PHL3蛋白或其编码基因在调控拟南芥种子脂肪酸积累中的应用；所述植物PHL3蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一种调控拟南芥的种子干重或脂肪酸积累的方法，其特征在于，调控所述拟南芥中PHL3蛋白的表达量；所述PHL3蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在拟南芥中过表达PHL3蛋白的编码基因，提高所述拟南芥的种子干重或脂肪酸积累；所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。