CN110381965A

CN110381965A - 用于促进体内bdnf量增加的组合物

Info

Publication number: CN110381965A
Application number: CN201880016219.7A
Authority: CN
Inventors: 东诚一郎; 斋藤佳绘; 山地健人
Original assignee: Meiji Corp
Current assignee: Meiji Corp; Meiji Co Ltd
Priority date: 2017-03-10
Filing date: 2018-03-09
Publication date: 2019-10-25
Also published as: TWI773739B; JP7108521B2; WO2018164254A1; JPWO2018164254A1; JP6435079B1; TW201842924A; JP2019043956A

Abstract

本发明提供一种用于促进体内、特别是肌肉内的脑源性神经营养因子(BDNF)量的增加的组合物。本发明的组合物为以乳清蛋白水解物为有效成分并用于促进体内的BDNF量增加的组合物，其特征在于，该乳清蛋白水解物含有选自由Ile‑Leu、Leu‑Leu及Val‑Leu组成的组中的至少一种二肽。

Description

用于促进体内BDNF量增加的组合物

技术领域

本发明涉及一种具有促进体内的脑源性神经营养因子(Brain DerivedNeurotrophic Factor：BDNF)(以下，本发明中仅称为“BDNF”)的量的增加的作用的组合物。更详细而言，本发明涉及一种无论有无运动，都能够促进体内、特别是肌肉内的BDNF量的增加的组合物。

背景技术

现在，在日本，抑郁或痴呆症(包含阿尔茨海默病或血管性痴呆症等)等精神疾病的增加已成为社会问题。痴呆症老年人数目在10年间从2002年的149万人已倍增至2012年的300万人以上。此外，根据日本厚生劳动省研究小组的发表(2012年)，据估计作为痴呆症的发病高危人群而受到瞩目的轻度痴呆症的老年人约为400万人，经计算，65岁以上的4人中就有1人为痴呆症或痴呆症高危人群。痴呆症的现状为：一旦发病，即使进行治疗也仅能抑制病情进展而无法根治。因此，痴呆症一旦发病，不仅患者的人生会发生很大变化，且对于护理的家人而言也是很大的负担，因护理的理由而不得不离职等，不得不改变人生计划。由于这样的离职引起的工作一代的劳动力损失对国民经济的影响决不可忽视。

根据上述情况，进行预防及控制以使痴呆症不发病，不仅对个人而且对现代社会也是紧迫的技术问题。

在以往，认为牛奶或乳制品的摄取对这种痴呆症的预防是有用的。具体而言，有文献报道或暗示了牛奶或乳制品中大量含有的钙和镁对痴呆症具有预防效果(非专利文献1)，此外牛奶或乳制品中所含的乳清可改善对作为阿尔茨海默病的危险因素的胰岛素的抗药性(非专利文献2)。

另一方面，已知若进行运动，则作为参与神经元的产生、生长、维持或再生的神经营养因子之一的BDNF显著增加，且同时记忆或学习等表现得以提高(非专利文献3)。此外，根据许多流行病学研究或实验，已知通过运动能够抑制老年人的认知功能的减退(非专利文献4～6)。此外，最近通过动物实验确认到，通过介由一过性电刺激的强制运动负荷，海马BDNF得以增加(非专利文献7)。进一步，有文献报告了脑内的BDNF的表达量在抑郁症或阿尔茨海默病的患者中减少(非专利文献8、非专利文献9)。

如上所述，暗示了通过运动而增加的BDNF对抑郁症或痴呆症等精神疾病的预防是有效的。

此外，有文献报告了通过对脑室内、皮下或腹腔内给予BDNF，可抑制体重的增加、改善糖代谢(非专利文献10)。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：J Am Geriatr Soc.2012,60(8):1515-1520.

非专利文献2：Nutrition.2014,30(9):1076-1080.

非专利文献3：Neeper SA et al.Brain Res,726:49-56(1996).

非专利文献4：Trends Neurosci.2002,25(6):295-301.

非专利文献5：Nature.1999,29；400(6743):418-419.

非专利文献6：Cell Mol Neurobiol.2010,30(4):493-503.

非专利文献7：第31回若手研究者のための健康科学研究助成成果報告書2014年度、pp.104-109.

非专利文献8：Chen B et al,Biol Psychiatry.50:260-265(2001).

非专利文献9：Phillips HS et al.Neuron.7:695-702(1991).

非专利文献10：Nakagawa T et al,Diabetes,49:436-444(2000)

发明内容

本发明要解决的技术问题

如上所述，关于运动与认知功能的研究很热门，尽管已公开了暗示BDNF参与基于运动的认知功能改善的结果，但是对于饮食品摄取对BDNF的影响、特别是运动与饮食品摄取的组合所带来的效果，还有许多不清楚的部分。因此，本发明着眼于饮食品摄取对BDNF的效果、特别是运动与饮食品摄取所带来的效果。具体而言，本发明的技术问题在于通过饮食品摄取、或者通过同时进行运动与饮食品摄取，有效地增加与认知功能或糖代谢的改善相关的体内的BDNF的量，并对此进行了开发。

即，本发明的目的在于提供一种用于促进体内、特别是肌肉内的BDNF量的增加的组合物，换言之，提供一种体内、特别是肌肉内的BDNF量增加促进用组合物。此外，本发明的目的还在于提供一种用于促进体内、特别是肌肉内的BDNF量的增加的方法。

解决技术问题的技术手段

本申请的发明人为了解决上述技术问题而进行了认真研究，结果发现，通过摄取包含选自由Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu组成的组中的至少一种二肽的乳清蛋白水解物，肌肉内的BDNF量显著增加。由于在水解前的乳清蛋白中未观察到显著的该效果，因此认为乳清蛋白不包含且作为乳清蛋白水解物所特有的成分的二肽做出了贡献。如上所述，暗示了BDNF对抑郁症或痴呆症等精神疾病的预防以及认知功能改善是有效的，此外也有报道指出BDNF对体重增加的抑制或糖代谢的改善是有效的。因此，认为包含所述二肽的乳清蛋白水解物对抑郁症或痴呆症等精神疾病的预防、认知功能改善、体重增加的抑制、或/和糖代谢能力下降的改善是有用的。

本发明是基于该见解而完成的，其具有下述实施方式。另外，以下，在本说明书中，乳清蛋白水解物(Whey Protein Hydrolysate)仅简称为“WPH”。此外，对于二肽，使用氨基酸的三字母符号，并将构成该二肽的氨基酸序列记作“Xxx-Yyy”。

(I)用于促进体内的BDNF量增加的组合物

(I-1)一种用于促进BDNF量增加的组合物，其为以WPH为有效成分并用于促进体内、优选用于促进肌肉内的BDNF量增加的组合物，

该WPH含有选自由Ile-Leu(异亮氨酰-亮氨酸)、Leu-Leu(亮氨酰-亮氨酸)及Val-Leu(缬氨酰-亮氨酸)组成的组中的至少一种二肽。

(I-2)根据(I-1)所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其中，上述WPH含有Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu。

(I-3)根据(I-1)或(I-2)所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其中，上述WPH进一步含有选自由Ile-Val(异亮氨酰-缬氨酸)、Ile-Ile(异亮氨酰-异亮氨酸)、Leu-Val(亮氨酰-缬氨酸)及Leu-Ile(亮氨酰-异亮氨酸)组成的组中的至少一种二肽。

(I-4)根据(I-1)或(I-2)所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其中，上述WPH进一步含有由Ile-Val、Ile-Ile、Leu-Val及Leu-Ile组成的二肽。

(I-5)根据(I-1)～(I-4)中任一项所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为对运动前或运动中的包含人的哺乳动物口服给予或被运动前或运动中的包含人的哺乳动物摄取的组合物。

(I-6)根据(I-5)所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其促进运动中或运动后的肌肉内BDNF量的增加。

(I-7)根据(I-1)～(I-4)中任一项所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为对非运动状态的包含人的哺乳动物口服给予或被非运动状态的包含人的哺乳动物摄取的组合物。

(I-8)根据(I-1)～(I-7)中任一项所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为对认知功能减退者或其高危人群口服给予或者被认知功能减退者或其高危人群摄取的组合物。

(I-9)根据(I-8)所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为用于抑制或改善认知功能的减退的组合物。

(I-10)根据(I-1)～(I-7)中任一项所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为对肥胖者或/和糖代谢能力下降者或它们的高危人群口服给予或者被肥胖者或/和糖代谢能力下降者或它们的高危人群摄取的组合物。

(I-11)根据(I-10)所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为用于抑制或改善肥胖的组合物、或/和用于抑制或改善糖代谢能力下降的组合物。

(I-12)根据(I-1)～(I-11)中任一项所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其由每一次给予(摄取)的单位包装形态构成，作为一次给予量(摄取量)，该单位包装形态中包含以总蛋白质换算计为0.1～40g的上述WPH。

(I-13)根据(I-1)～(I-12)中任一项所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为饮食品。

(I-14)根据(I-13)所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为健康食品、功能性食品、膳食补充剂、功能性表示食品、特定保健用食品、患者用食品、婴幼儿配方奶粉、产妇或哺乳期妇女用奶粉，或者为附有用于促进基于运动的体内BDNF量增加这一内容的标记的饮食品。

(II)体内BDNF量的增加方法

(II-1)一种方法，其为对受试者给予或使受试者摄取含有WPH的组合物，从而增加该受试者体内、优选为肌肉内的BDNF量的方法，所述WPH含有选自由Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu组成的组中的至少一种二肽。

(II-2)根据(II-1)所述的方法，其中，上述WPH含有Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu。

(II-3)根据(II-1)或(II-2)所述的方法，其中，上述WPH进一步含有选自由Ile-Val、Ile-Ile、Leu-Val及Leu-Ile组成的组中的至少一种二肽。

(II-4)根据(II-1)或(II-2)所述的方法，其中，上述WPH进一步含有由Ile-Val、Ile-Ile、Leu-Val及Leu-Ile组成的二肽。

(II-5)根据(II-1)～(II-4)中任一项所述的方法，其中，所述受试者为运动前或运动中的包含人的哺乳动物。

(II-6)根据(II-5)所述的方法，其为增加运动中或运动后的肌肉内BDNF量的方法。

(II-7)根据(II-1)～(II-4)中任一项所述的方法，其中，所述受试者为非运动状态的包含人的哺乳动物。

(II-8)根据(II-1)～(II-7)中任一项所述的方法，其中，所述受试者为认知功能减退者或其高危人群。

(II-9)根据(II-8)所述的方法，其为抑制或改善所述受试者的认知功能减退的方法。

(II-10)根据(II-1)～(II-8)中任一项所述的方法，其为增进包含人的哺乳动物的记忆或学习表现的方法。

(II-11)根据(II-1)～(II-7)中任一项所述的方法，其中，所述受试者为肥胖者或/和糖代谢能力下降者或它们的高危人群。

(II-12)根据(II-11)所述的方法，其为抑制或改善所述受试者的肥胖、或/和抑制或改善糖代谢能力下降的方法。

(II-13)根据(II-1)～(II-12)中任一项所述的方法，其中，所述组合物由每一次给予(摄取)的单位包装形态构成，作为一次给予量(摄取量)，该单位包装形态中包含以总蛋白质换算计为0.1～40g的WPH。

(II-14)根据(II-1)～(II-13)中任一项所述的方法，所述组合物为饮食品，优选为健康食品、功能性食品、膳食补充剂、功能性表示食品、特定保健用食品、患者用食品、婴幼儿配方奶粉、产妇或哺乳期妇女用奶粉，或者附有用于促进基于运动的体内BDNF量增加这一内容的标记的饮食品。

(III)用于促进体内的BDNF量增加的WPH

(III-1)一种组合物，其用于促进受试者的体内、优选用于促进受试者的肌肉内的BDNF量的增加，

该组合物以WPH为有效成分，该WPH含有选自由Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu组成的组中的至少一种二肽。

(III-2)根据(III-1)所述的组合物，其中，上述WPH含有Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu。

(III-3)根据(III-1)或(III-2)所述的组合物，其中，上述WPH进一步含有选自由Ile-Val、Ile-Ile、Leu-Val及Leu-Ile组成的组中的至少一种二肽。

(III-4)根据(III-1)或(III-2)所述的组合物，其中，上述WPH进一步含有由Ile-Val、Ile-Ile、Leu-Val及Leu-Ile组成的二肽。

(III-5)根据(III-1)～(III-4)中任一项所述的组合物，其中，所述受试者为运动前或运动中的包含人的哺乳动物。

(III-6)根据(III-5)所述的组合物，其用于促进运动中或运动后的肌肉内BDNF量的增加。

(III-7)根据(III-1)～(III-4)中任一项所述的组合物，其中，所述受试者为非运动状态的包含人的哺乳动物。

(III-8)根据(III-1)～(III-7)中任一项所述的组合物，其中，所述受试者为认知功能减退者或其高危人群。

(III-9)根据(III-8)所述的组合物，其用于抑制或改善认知功能的减退。

(III-10)根据(III-1)～(III-7)中任一项所述的组合物，其中，所述受试者为肥胖者或/和糖代谢能力下降者或它们的高危人群。

(III-11)根据(III-10)所述的组合物，其用于抑制或改善肥胖、或/和抑制或改善糖代谢能力下降。

(III-12)根据(III-1)～(III-11)中任一项所述的组合物，其由每一次给予(摄取)的单位包装形态构成，作为一次给予量(摄取量)，该单位包装形态中包含以总蛋白质换算计为0.1～40g的上述WPH。

(III-13)根据(III-1)～(III-12)中任一项所述的组合物，其为饮食品，优选为健康食品、功能性食品、膳食补充剂、功能性表示食品、特定保健用食品、患者用食品、婴幼儿配方奶粉、产妇或哺乳期妇女用奶粉，或者附有用于促进基于运动的体内BDNF量增加这一内容的标记的饮食品。

(IV)WPH在制备用于促进体内BDNF量增加的组合物中的应用

(IV-1)一种应用，其为WPH在制备用于促进受试者的体内、优选用于促进受试者的肌肉内的BDNF量增加的组合物中的应用，该WPH含有选自由Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu组成的组中的至少一种二肽。

(IV-2)根据(IV-1)所述的应用，其中，上述WPH含有Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu。

(IV-3)根据(IV-1)或(IV-2)所述的应用，其中，上述WPH进一步含有选自由Ile-Val、Ile-Ile、Leu-Val及Leu-Ile组成的组中的至少一种二肽。

(IV-4)根据(IV-1)或(IV-2)所述的应用，其中，上述WPH进一步含有由Ile-Val、Ile-Ile、Leu-Val及Leu-Ile组成的二肽。

(IV-5)根据(IV-1)～(IV-4)中任一项所述的应用，其中，所述受试者为运动前或运动中的包含人的哺乳动物。

(IV-6)根据(IV-5)所述的应用，其中，所述组合物用于促进受试者的运动中或运动后的肌肉内BDNF量的增加。

(IV-7)根据(IV-1)～(IV-4)中任一项所述的应用，其中，所述受试者为非运动状态的包含人的哺乳动物。

(IV-8)根据(IV-1)～(IV-7)中任一项所述的应用，其中，所述受试者为认知功能减退者或其高危人群。

(IV-9)根据(IV-8)所述的应用，其中，所述组合物用于抑制或改善认知功能的减退。

(IV-10)根据(IV-1)～(IV-7)中任一项所述的应用，其中，所述受试者为肥胖者或/和糖代谢能力下降者或它们的高危人群。

(IV-11)根据(IV-10)所述的应用，其中，所述组合物用于抑制或改善肥胖、或/和抑制或改善糖代谢能力下降。

(IV-12)根据(IV-1)～(IV-11)中任一项所述的应用，其中，所述组合物由每一次给予(摄取)的单位包装形态构成，作为一次给予量(摄取量)，该单位包装形态中包含以总蛋白质换算计为0.1～40g的上述WPH。

(IV-13)根据(IV-1)～(IV-12)中任一项所述的应用，其中，所述组合物为饮食品，优选为健康食品、功能性食品、膳食补充剂、功能性表示食品、特定保健用食品、患者用食品、婴幼儿配方奶粉、产妇或哺乳期妇女用奶粉，或者附有用于促进基于运动的体内BDNF量增加这一内容的标记的饮食品。

发明效果

根据本发明，提供一种以WPH为有效成分并用于促进体内、特别是肌肉内BDNF量增加的组合物(以下，有时仅称作“本发明的组合物”)。

通过在摄取本发明的组合物后进行运动、或在运动中摄取本发明的组合物，能够促进基于运动的体内、特别是肌肉内的BDNF量的增加，其结果，能够有效地增加肌肉内的BDNF量(参考试验例1)。如上所述，在以往已知通过运动能够抑制老年人的认知功能的减退，此外也暗示了，BDNF对提高记忆或学习等的表现、预防抑郁症或痴呆症等精神疾病是有效的。由此，通过在运动时摄取本发明的组合物，可进一步提高上述效果。

此外，摄取WPH后，不仅在进行了运动的情况下，即使在不运动的情况下，也观察到了显著的BDNF的增加(参考试验例2)。由此认为，BDNF量的增加与有无运动无关，为可通过摄取WPH而得到的特有的效果。此外，由于在水解前的WPH中没有观察到显著的这种效果，因此认为乳清蛋白中不包含(即使含有也为微量)且作为WPH特有成分的二肽做出了贡献。

此外，报告有BDNF具有体重增加的抑制作用或糖代谢的改善作用。因此，根据本发明，通过摄取本发明的组合物，能够期待该效果。

另外，作为本发明的组合物中所含的WPH，可利用多年来用作食品原料的牛奶蛋白。因此，本发明的组合物即使经长期持续服用，也没有副作用的风险，在安全性高的点上是有利的。此外，通常乳清蛋白为在天然奶酪的制备过程中、原料乳的凝固过程之后被排出、丢弃的工业废弃物。由于本发明的组合物中作为有效成分而含有的WPH将该作为工业废弃物的乳清作为原料而进行再利用，因此可以说本发明在环境面或经济面上也是有用的。

附图说明

图1示出将受试动物(雄性SD大鼠)分为(a)“未给予二肽/非运动组”、(b)“未给予二肽/运动组”及(c)“给予二肽/运动组”，比较使(a)不摄取WPH且不施加运动负荷的情况下的肌肉中的BDNF量(ng/g)(平均值±标准误差，以下相同)、使(b)不摄取WPH但施加运动负荷的情况下的BDNF量以及使(c)摄取WPH且施加运动负荷后的BDNF量的结果。图中，＊是指根据Dunnet t检验，相对于(a)具有p＜0.05的显著差异。

图2分别示出将受试动物(雄性SD大鼠)分为(1)“给予水/运动组”、(2)“给予WPC/运动组”及(3)“给予WPH/运动组”，测定使(1)摄取水并施加运动负荷后的肌肉中的BDNF量(ng/g)(平均值±标准误差，以下相同)、使(2)摄取WPC(乳清蛋白浓缩物)并施加运动负荷后的BDNF量以及使(3)摄取WPH并施加运动负荷后的BDNF量的结果。图中，＊是指根据Dunnet t检验，相对于(1)具有p＜0.05的显著差异。

图3分别示出将受试动物(雄性SD大鼠)分为(i)“给予水/非运动组”、(ii)“给予WPC/非运动组”及(iii)“给予WPH/非运动组”，均不施加运动负荷而测定使(i)摄取水后的BDNF量(ng/g)(平均值±标准误差，以下相同)、使(ii)摄取WPC后的BDNF量以及使(iii)摄取WPH后的BDNF量的结果。图中，＊是指根据Dunnet t检验，相对于(i)具有p＜0.05的显著差异。

具体实施方式

作为本发明的对象的用于促进体内BDNF量增加的组合物(本发明的组合物)的特征在于，包含WPH(以下，有时称作“本发明的WPH”)作为有效成分，所述WPH含有选自由Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu组成的组中的至少一种二肽。

通常WPH为以乳清蛋白为原料并使其全部或一部分水解而得到的物质，也被称作乳清肽。

乳清蛋白为从牛奶中去除了酪蛋白或脂肪的液体部分、即乳清(whey)中所含的球状蛋白质的混合物，包含α-乳清蛋白(α-La)、β-乳球蛋白(β-Lg)、免疫球蛋白、乳铁蛋白、牛血清白蛋白等蛋白质。在本发明中，用作制备WPH的原料的乳清蛋白可以为由牛奶或乳清提纯的乳清蛋白，或者也可以为从牛奶或乳清中分离的粗提纯的乳清蛋白(含乳清蛋白的物质)。进一步，也能够使用包含乳清蛋白的饮食品或其原料(例如，包含除了牛奶蛋白以外的其他成分的组合物等)。该饮食品或其原料除了乳清蛋白以外，也可以含有酪蛋白。

作为上述提纯的乳清蛋白，可列举出α-乳清蛋白(α-La)、β-乳球蛋白(β-Lg)、免疫球蛋白、乳铁蛋白及至少包含其中一种的蛋白质的混合物、以及乳清蛋白分离物(WPI)等。此外，作为上述提纯的乳清蛋白(含乳清蛋白的物质)，可列举出由牛奶制备的例如乳清的原液(甜乳清、酸乳清等)、其浓缩物、其干燥物(乳清粉等)、其冷冻物以及它们的还原物等。此外，它们能够包含脱盐乳清、乳清蛋白浓缩物(WPC)及它们的还原物。此外，作为包含乳清蛋白的饮食品或其原料，例如可列举出原料奶、灭菌乳(牛奶等)、脱脂奶、成分调整牛奶、加工牛奶、乳制品(浓缩牛奶、奶粉、炼乳、发酵乳(酸奶等)、乳酸菌饮料、加工奶酪类、冰淇淋类、奶油类)及乳蛋白浓缩物(MPC)以及它们的浓缩物、它们的干燥物、它们的冷冻物等。此时，含有所述乳清蛋白的原料或饮食品可以购买并使用市售商品，也可以自己制备而使用。

本发明的WPH能够通过对如上所述的乳清蛋白进行一次以上的水解而制备。其手段和/或方法没有特别限制。例如，可在从牛奶或乳清中分离或提纯乳清蛋白的工序中，使乳清蛋白部分水解，然后进一步进行再一次水解而制备。水解能够通过公知的水解方法实施，可优选使用利用蛋白水解酶的水解方法。

蛋白水解酶只要能够使乳清蛋白水解，生成发挥本发明的效果的WPH，则没有特别限定。例如能够参考国际公开第2007/123200号等的记载，任意设定其种类或反应条件等。例如可列举出来源于属于芽孢杆菌属(Bacillus)或曲霉属(Aspergillus)的微生物的蛋白水解酶；来源于番木瓜的木瓜蛋白酶、来源于菠萝的菠萝蛋白酶、来源于奇异果的猕猴桃蛋白酶等来源于植物的蛋白水解酶；胰酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶等来源于动物的蛋白水解酶。它们能单独使用一种，或者任意组合使用两种以上。此外，这些蛋白水解酶能够使用市售商品。市售商品的蛋白水解酶例如有Protease M“Amano”(Amano Enzyme Inc.)、Protease N“Amano”(Amano Enzyme Inc.)、Protease P“Amano”(Amano Enzyme Inc.)、Protease A“Amano”(Amano Enzyme Inc.)、胰蛋白酶(Novozymes公司)、胃蛋白酶(WakoPure Chemical Industries,Ltd.)、鲜味强化酶(Umamizyme)(Amano Enzyme Inc.)、风味蛋白酶(Flavorzyme)(Novozymes公司)等，但并不限定于此。根据本发明的优选的实施方式，用于使乳清蛋白水解的蛋白水解酶为选自由来源于芽孢杆菌属的蛋白水解酶、来源于曲霉属的蛋白水解酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶及风味蛋白酶(Novozymes公司)组成的组中的一种或两种以上。

本发明的WPH可通过使用使乳清蛋白水解的蛋白水解酶，作为富含选自由Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu组成的组中的至少一种二肽的水解物而制备。例如，为了使乳清蛋白水解而生成Ile-Leu的二肽，优选组合来源于芽孢杆菌属的蛋白酶及来源于曲霉属的蛋白酶，对乳清蛋白进行水解。此外，为了使乳清蛋白水解而生成Leu-Leu的二肽，优选用胃蛋白酶使乳清蛋白反应后，用来源于曲霉属的蛋白酶使其反应。另外，根据该方法，乳清蛋白被水解后有时也会生成Leu-Val或Gly-Leu的二肽。进一步，为了使乳清蛋白水解而生成Val-Leu的二肽，优选使用来源于曲霉属的蛋白酶使乳清蛋白水解。根据该方法，乳清蛋白被水解后有时也会生成Ile-Val、Ile-Ile及Leu-Ile的二肽。此外，为了使乳清蛋白水解而生成Ala-Leu的二肽，优选用胰蛋白酶使乳清蛋白反应后，用来源于芽孢杆菌属的蛋白酶使其反应。

用于利用蛋白水解酶使乳清蛋白水解并生成所需要的二肽的反应温度优选为20～80℃，更优选为25～75℃，进一步优选为30～70℃，进一步优选为35～65℃，进一步优选为40～60℃，特别优选为45～55℃。若反应温度为20℃以上，则利用蛋白水解酶，能够使乳清蛋白有效地水解。此外，若反应温度为80℃以下，则能够抑制由蛋白水解酶的变性导致的失活。鉴于使用的蛋白水解酶的最适温度，该反应温度可以设定为恒定的温度(1阶段)，此外也能够设定为2个以上的不同的温度(2阶段以上)。设定2阶段以上的反应温度时，其顺序任意。

用于利用蛋白水解酶使乳清蛋白水解并生成所需要的二肽的反应时间没有特别限制，优选为2～48小时，更优选为2～36小时，进一步优选为2～24小时，进一步优选为2～18小时，进一步优选为2～14小时，进一步优选为4～12小时，进一步优选为6～10小时，特别优选为7～9小时。通过使蛋白水解酶的反应时间为2小时以上，能够水解更多的乳清蛋白。在使乳清蛋白有效地水解的基础上，反应时间优选限制在48小时以内。另外，对于将反应温度设定为2阶段以上的情况，在该反应时间的范围中，能够任意地设定2阶段以上的反应温度。

只要能够生成发挥本发明的效果的WPH，则用于利用蛋白水解酶使乳清蛋白水解并生成所需要的二肽的蛋白水解酶的添加量没有特别限制。例如，相对于100g乳清蛋白，可列举出优选为0.5～10g、更优选为0.7～5g、进一步优选为0.8～4g、特别优选为1～2g的添加量。

期望用于利用蛋白水解酶使乳清蛋白水解并生成所需要的二肽的反应pH为所使用的蛋白水解酶进行反应的pH范围，作为更适合的反应pH，可列举出所使用的蛋白水解酶的最适pH或其附近的值。例如，同时使用来源于芽孢杆菌属的蛋白水解酶及来源于曲霉属的蛋白水解酶时，优选pH为5～9，更优选pH为5.5～8.5，进一步优选pH为6～8，特别优选pH为6.5～7.5。

鉴于所使用的蛋白水解酶的最适pH，该反应pH也可以设定为恒定的pH条件(1阶段)，或者也可以设定2个以上的不同的pH条件(2阶段以上)。设定为2阶段以上的pH条件时，其顺序任意。

如上所述，本发明的WPH的特征在于，包含选自由Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu组成的组中的至少一种二肽。优选包含这些二肽中的两种以上，更优选包含这三种二肽。作为包含两种以上时的组合方式，可例示出Ile-Leu与Leu-Leu、Ile-Leu与Val-Leu、Leu-Leu与Val-Leu、或Ile-Leu与Leu-Leu与Val-Leu。本发明的WPH能够以包含上述特定的二肽为指标。

本发明的WPH中所含的这些二肽能够通过LC/MS或LC/MS/MS进行测定。具体而言，能够用后述的制备例1中记载的方法进行测定。除了如上所述的水解反应条件，包含这些二肽的本发明的WPH也能够通过参考后述的制备例1～11中记载的例子而进行制备。

这些二肽在每1g WPH中的含量(mg)能够以以下方式进行设定。

Ile-Leu：0.1～25mg/gWPH、适合为0.5～15mg/gWPH、更适合为1～10mg/gWPH。

Leu-Leu：0.5～50mg/gWPH、适合为1～25mg/gWPH、更适合为2～10mg/gWPH。

Val-Leu：0.5～50mg/gWPH、适合为1～25mg/gWPH、更适合为2～10mg/gWPH。

本发明的WPH可以以下述所示的每1gWPH的蛋白质含量中的比例包含至少一种上述二肽。

Ile-Leu：0.09～22.5mg/g蛋白质、适合为0.45～13.5mg/g蛋白质、更适合为0.9～9mg/g蛋白质。

Leu-Leu：0.45～45mg/g蛋白质、适合为0.9～22.5mg/g蛋白质、更适合为1.8～9mg/g蛋白质。

Val-Leu：0.45～45mg/g蛋白质、适合为0.9～22.5mg/g蛋白质、更适合为1.8～9mg/g蛋白质。

此处，“WPH的蛋白质含量”是指WPH中所含的氨基酸、及WPH中所含的构成蛋白质及肽的氨基酸的总量。该蛋白质含量能够通过凯氏法测定并计算。实际上，在使用凯氏法的情况下，测定作为对象的WPH中所含的氮，用该值乘以蛋白质的换算系数(通常为6.25)，能够计算该蛋白质含量。例如，由于本发明的WPH通过使乳清蛋白水解而得到，因此通过上述方法计算的WPH的蛋白质含量与水解前的乳清蛋白的蛋白质含量理论上是相等的。

进一步，本发明的WPH包含选自由上述的Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu组成的组中的至少一种、优选包含两种以上、更优选包含三种二肽，除此以外，也可以进一步包含选自由Ile-Val、Ile-Ile、Leu-Val及Leu-Ile组成的组中的至少一种二肽。优选包含这些二肽中的两种以上，更优选包含这些二肽中的三种以上，进一步优选包含这四种二肽。作为包含两种以上时的组合方式，能够列举出Ile-Val与Ile-Ile、Ile-Val与Leu-Val、Ile-Val与Leu-Ile、Ile-Ile与Leu-Val、Ile-Ile与Leu-Ile、Leu-Val与Leu-Ile、Ile-Val与Ile-Ile与Leu-Val、Ile-Val与Ile-Ile与Leu-Val、Ile-Ile与Leu-Val与Leu-Ile、Ile-Val与Ile-Ile与Leu-Val与Leu-Ile。该本发明的WPH能够以包含上述特定的二肽为指标。

本发明的WPH中所含的这些二肽也能够通过LC/MS或LC/MS/MS进行测定。这些二肽在每单位WPH中的含量能够以以下方式进行设定。

Ile-Val：0.1～10mg/gWPH、适合为0.2～5mg/gWPH、更适合为0.5～1.5mg/gWPH

Ile-Ile：0.05～10mg/gWPH、适合为0.1～5mg/gWPH、更适合为0.2～1mg/gWPH

Leu-Val：0.1～10mg/gWPH、适合为0.2～5mg/gWPH、更适合为0.5～1.5mg/gWPH

Leu-Ile：0.01～10mg/gWPH、适合为0.02～5mg/gWPH、更适合为0.05～0.2mg/gWPH。

本发明的WPH也可以以下述所示的每1gWPH的蛋白质含量中的比例包含上述二肽中的至少一种。“WPH的蛋白质含量”的含义与上文相同。

Ile-Val：0.09～9mg/g蛋白质、适合为0.18～4.5mg/g蛋白质、更适合为0.45～1.35mg/g蛋白质

Ile-Ile：0.045～9mg/g蛋白质、适合为0.09～4.5mg/g蛋白质、更适合为0.18～0.9mg/g蛋白质

Leu-Val：0.09～9mg/g蛋白质、适合为0.18～4.5mg/g蛋白质、更适合为0.45～1.35mg/g蛋白质

Leu-Ile：0.009～9mg/g蛋白质、适合为0.018～4.5mg/g蛋白质、更适合为0.045～0.2mg/g蛋白质。

以Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu的二肽的总量计，可列举出本发明的WPH在每1gWPH中以1.1～125mg/gWPH、优选以2.5～65mg/gWPH、更优选以5～30mg/gWPH的比例含有上述二肽。若将该WPH中所含的这些二肽的总量换算为在每1g WPH的蛋白质含量中的比例，则可以为0.99～112.5mg/g蛋白质，优选为2.25～58.5mg/g蛋白质，更优选为4.5～27mg/g蛋白质。

进一步，以Ile-Val、Ile-Ile、Leu-Val及Leu-Ile的二肽的总量计，可列举出本发明的WPH在每1g WPH中以0.26～40mg/gWPH、优选以0.52～20mg/gWPH、更优选以1.25～4.2mg/gWPH的比例含有上述二肽。若将该WPH中所含的这些二肽换算为在每1gWPH的蛋白质含量中的比例，则可以为0.234～36mg/g蛋白质，优选为0.468～18mg/g蛋白质，更优选为1.125～3.8mg/g蛋白质。

本发明的WPH虽然在制备后为液体状，但是为了提高其贮藏稳定性，可以进行冷冻储存、干燥(喷雾干燥、冷冻干燥)、浓缩、加热杀菌(板式加热杀菌、管式加热杀菌、间歇式加热杀菌、电加热杀菌、利用微波的加热杀菌、蒸馏加热等间接加热杀菌，蒸汽喷射(steaminjection)、蒸汽注入(steam infusion)等直接加热杀菌)、或非热杀菌(光照杀菌、辐照杀菌、高压电脉冲杀菌)。其中，从贮藏稳定性与操作的容易度出发，优选制备成WPH后进行干燥(喷雾干燥、冷冻干燥)处理，制成干燥固体形态。

如后述的试验例1及2所示，通过对哺乳动物(包含人及非人动物)给予或使其摄取含有WPH的本发明的组合物并施加运动负荷，能够增加体内、特别是肌肉内的BDNF量(参考图1及2)。此外，该增加量高于不对哺乳动物给予或不使其摄取本发明的组合物、仅施加运动负荷的情况下增加的体内、特别是肌肉内的BDNF量。因此，包含该WPH的本发明的组合物作为用于促进体内、特别是肌肉内的BDNF量的增加的组合物(体内、特别是肌肉内的BDNF量增加促进用组合物)是有用的。另外，优选在哺乳动物进行运动前或运动中，对该哺乳动物给予或使其摄取该用于促进BDNF量增加的组合物，由此能够用于提高运动后的体内、特别是肌肉内的BDNF量。此处，“BDNF量的增加促进”是指在哺乳动物进行运动前或运动中对该哺乳动物给予(使其摄取)本发明的组合物时，运动后的体内、特别是肌肉内的BDNF量比未给予(摄取)本发明的组合物的情况的该量更高。此处，“未给予(摄取)本发明的组合物的情况”同时包括未给予(摄取)本发明的组合物且不施加运动负荷的情况以及未给予(摄取)本发明的组合物但施加运动负荷的情况。更具体而言是指，通过在运动前或运动中给予(摄取)本发明的组合物，促进未给予(摄取)本发明的组合物但施加运动负荷时的肌肉内BDNF量的增加，使肌肉内的BDNF量比未给予(摄取)本发明的组合物但施加运动负荷时的增加量更多。

另外，在本发明中，“运动”是指通过骨骼肌的收缩而伴随比镇静时更多的能量消耗，即只要给肌肉施加负荷即可。在这一限制内并无特别限制，具体而言，可例示出为了维持并促进体力而进行的运动、散步、快走、慢跑、跑步、跳舞、水下运动、滑冰、骑自行车、体操、瑜伽、拉伸、负重训练、压力训练、游泳、登山、攀岩、各种运动(例如球类运动、羽毛球、芭蕾舞等)。

此外，如后述的试验例2所示，即使在无运动负荷的情况下，通过对哺乳动物给予或使其摄取含有WPH的本发明的组合物，也能够增加体内、特别是肌肉内的BDNF量(参考图3)。此时的“BDNF量的增加”是指在无运动负荷地对哺乳动物给予(使其摄取)本发明的组合物的情况下，体内、特别是肌肉内的BDNF量比无运动负荷且未给予(摄取)本发明的组合物时的该量更高。因此，该包含WPH的本发明的组合物作为即使在无运动负荷的情况下，仅通过摄取至体内即可促进体内、特别是肌肉内的BDNF量增加的组合物也是有用的。

此处，“给予或摄取”只要为进入哺乳动物(包含人及非人动物)的体内的方法即可，没有限制，可优选例示出口服给予或摄取、肠道内给予及胃造瘘等在肠道内消化吸收的方式，能够根据作为对象的哺乳动物的状态或用途进行适当选择。优选为口服摄取。因此，本发明的组合物具有口服给予用或摄取用的形态、肠道内给予用的形态、及胃造瘘用的形态，并能够制备成该形态。

如上所述，已知BDNF为参与神经元的产生或生长、维持或再生的神经营养因子之一，可提高记忆或学习表现(非专利文献3)。由此，本发明的组合物能够作为用于辅助记忆或学习表现的提高的组合物，被需要提高记忆力、学习能力或学习效率的人(例如，考生、在意记忆力·学习能力·学习效率下降的人等)摄取或对其进行给予。

此外，已知抑郁症或阿尔茨海默病的患者的脑中，BDNF的表达量减少(非专利文献8及9)。由此，本发明的组合物能够作为用于改善认知功能、用于抑制认知功能减退、或用于提高认知功能的组合物，被痴呆症、特别是阿尔茨海默病患者或其高危人群摄取或进行给予。此处，“认知功能”是指用于正确地理解事物并确切地执行的功能，包含记忆力、语言能力、判断力(包含视空间、注意力)、计算能力和/或执行能力。此外，痴呆症的高危人群也包含轻度认知障碍者。此外65岁以上的老年人4人中就有1人患有痴呆症或轻度认知障碍，因此在本发明中，65岁以上的老年人也可包含在痴呆症的高危人群中。此外本发明的组合物作为用于改善抑郁症的组合物，能够被抑郁症(包含新型抑郁症)患者或者处于抑郁状态或具有抑郁倾向的高危人群摄取或进行给予。

进一步，有文献报告了通过对脑室内、皮下或腹腔内给予BDNF，可抑制体重的增加、改善糖代谢(非专利文献10)。由此，本发明的组合物能够作为用于抑制或改善肥胖的组合物，被肥胖者、有肥胖倾向者或其高危人群摄取或进行给予。此外，本发明的组合物能够作为用于抑制糖代谢能力下降或用于改善糖代谢的组合物，被糖尿病患者、临界性糖尿病患者或它们的高危人群摄取或进行给予。

以能够发挥本发明的效果为限，除了本发明的WPH以外，本发明的组合物中还能够添加其他的食品原料和/或食品添加剂原料。例如，为了赋予本发明的组合物可口性，能够添加甜味剂(白糖类、液体糖类、果糖、麦芽糖、三温糖等)、糖醇(赤藓糖醇等)、高甜度甜味剂(甜叶菊、阿斯巴甜、三氯蔗糖、安赛蜜等)、酸化剂、香料、果汁、蔬菜汁、多糖胶、乳化剂、矫味剂、矫臭剂等。此外，以赋予本发明的组合物附加的功能(营养功能、生理功能)为目的，还能够添加矿物质类(钙、铁、锰、镁、锌等)、维生素类、功能性原料、乳酸菌活菌制剂(probiotics lactobacillus)等来制备本发明的组合物。

本发明的组合物以在市场提供为目的，能够制成包装的形态。作为包装的形态，能够列举出将本发明的组合物制备成固体状并填充于容器中的方式。作为该固体状的形态，能够列举出粉末及颗粒。作为此时的容器，能够使用纸、袋、箱、罐、瓶等公知的容器。此时的容器的容量没有特别限制，例如为1～5000g、2～4000g、3～3000g、4～2000g、4～1000g、4～500g、4～250g、4～200g、4～100g、4～50g、4～30g。其中，在为家庭规格(多人服用)时，例如为300～5000g、300～4000g、300～3000g、300～2000g、300～1500g、300～1400g、300～1300g、300～1200g、300～1100g，在用于个人(个人服用)时，为1～500g、2～250g、3～200g、4～100g、4～50g、4～40g、4～30g、5～30g、10～30g、15～30g。

此外，本发明的组合物以在市场提供为目的，能够制成包装的饮料的形态。此处，容器只要为能够以填充有饮料的状态直接饮用的容器即可，能够使用纸质容器、软袋、塑料瓶、罐、瓶等公知的容器。该饮料能够通过将上述粉末或颗粒分散并溶解于饮用水中而制备。容器的容量没有特别限制，例如为1～5000g、2～4000g、3～3000g、4～2000g、5～1000g、6～800g、7～1300g、80～1200g、90～1100g。其中，在为家庭规格(多人饮用)时，例如为300～5000g、300～4000g、300～3000g、300～2000g、300～1500g、300～1400g、300～1300g、300～1200g、300～1100g，在用于个人(个人饮用)时，为10～500g、20～500g、30～500g、40～500g、50～500g、60～500g、70～500g、80～500g、90～500g。

根据本发明的一个实施方式，例如，可以以使WPH的总蛋白质含量在每一次给予(摄取)中为0.1g以上(优选为1g以上)的方式摄取(给予)本发明的组合物。能够以每一次给予(摄取)的总蛋白质含量优选为0.1～40g、更优选为0.1～30g、进一步优选为1～30g的方式进行摄取(给予)。

“一次给予(摄取)量”是指在必须促进体内BDNF量增加的状态下的每一次的量。例如是指在1天的规定时间进行一系列的运动时，在该运动前或该运动中给予或摄取的总量，不通过一口(一次)摄取、分为数次摄取时，将这些历经数次给予(摄取)的量汇总并作为“一次给予(摄取)”。

从促进基于运动的BDNF量的增加的角度出发，对需要增加体内、特别是肌肉内的BDNF量的受试者(哺乳动物)给予(使其摄取)本发明的组合物的时期为运动前或运动中。优选在运动前15分钟～240分钟、更优选在运动前30分钟～180分钟、进一步优选在运动前45分钟～135分钟时进行摄取。或不进行运动时，能够在任意的时期进行给予(使其摄取)，由于在用餐前或用餐期间等比较空腹时进行给予(摄取)的情况下更易吸收，因此能够得到更好的效果。

根据本发明的另一个实施方式，例如，可以以每一次给予(摄取)的单位包装形态提供本发明的组合物。对于具有该单位包装形态的本发明的组合物，期望在该单位中，作为一次给予(摄取)量，以总蛋白质含量换算计，将所述WPH制备成0.1g以上(优选为1g以上)，此外，期望作为一次给予(摄取)量，以总蛋白质含量换算计，将所述WPH制备成40g以下(优选为30g以下)。即，作为一次给予(摄取)量，以总蛋白质含量换算计，每单位包装的本发明的WPH的含量能够设为0.1～40g，优选为0.1～30g，更优选为1～30g。此处，由“每一次给予(摄取)的单位包装形态”构成是指预先规定每一次给予(摄取)的量的形态，例如，可口服摄取特定量的饮食品不仅是指通常的食品，还指饮料(饮剂等)、健康辅助食品、功能性保健食品、补充剂(supplement)等形态。作为“每一次给予(摄取)的单位包装形态”，例如在为液体状的饮料、凝胶状·糊状·浆状的果冻、粉末状·颗粒状·胶囊状·块状的固体状的食品等时，可列举出能够用金属罐、玻璃瓶(瓶等)、塑料容器(聚酯瓶等)、纸袋、荷包、胶卷盒、纸盒等包装容器规定特定量(用量)的形态；或者能够通过将每一次给予(摄取)的量(用法、用量)记载在包装容器或首页等上来规定特定量的形态。由于本发明的组合物将WPH用作有效成分，因此与乳清蛋白相比，由加热引起的凝胶化较少，因此，能够在饮料、果冻等的制备工序中维持适合的物性。此外，由于即使少量摄取本发明的组合物，也能发挥本发明的效果，因此即使本发明的组合物为一口大小的块状、或能够通过一口饮尽而摄取的迷你罐饮料等形态，也容易摄取·吞咽，能够对小孩或老年人的便利性。

本发明的组合物能够以掺合有多种成分的组合物的形态进行提供。只要能够发挥本发明的效果，则本发明的组合物的形态没有特别限定，例如能够采取固体状(粉末状、颗粒状、胶囊状、块状等)、液体状、凝胶状、糊状、浆状等形态，优选为粉末状。组合物包含食品组合物及药物组合物。

根据本发明的优选实施方式，提供一种包含WPH作为有效成分并用于促进BDNF量增加的饮食品。本发明中，食品的形态只要为溶液、悬浊液、乳浊液、粉末、固体成型物等可口服摄取的形态即可，没有特别限定。具体而言，例如可列举出速食面、蒸煮袋装食品(retort foods)、罐头、微波食品、速溶汤·味噌汤类、冻干食品等速食食品类；清凉饮料、果汁饮料、蔬菜饮料、豆乳饮料、咖啡饮料、茶饮料、粉末饮料、浓缩饮料、酒精饮料等饮料类；面包、意大利面、面条、蛋糕预拌粉、面包粉等小麦粉制品；糖、焦糖、口香糖、巧克力、曲奇、饼干、蛋糕、馅饼、膨化食品(snack)、薄脆饼干(cracker)、日式点心、甜点等点心类；沙司、番茄加工调味料、风味调味料、烹饪混合料、调味汁类、调味酱汁类(dressings)、调味露类、咖喱·炖菜的调味原料类等调味料；加工油脂、黄油、人造黄油、蛋黄酱等油脂类；乳饮料、酸奶类、乳酸菌饮料、冰淇淋类、奶油类等乳制品；农产品罐头、果酱_·橘皮果酱类、谷物麦片等农产品；冷冻食品等。饮食品优选为乳制品，更优选为乳饮料、乳酸菌饮料。

此外，饮食品还包含健康食品、功能性食品、膳食补充剂、功能性表示食品、特定保健用食品、患者用食品、婴幼儿配方奶粉、产妇或哺乳期妇女用奶粉这样的分类。

本发明的饮食品上也可以附上“增加体内的BDNF量”、“促进体内的BDNF量的增加”、“有助于体内的BDNF量的增加”等内容的标记。另外，上述“体内”这一术语也包含“肌肉内”的含义。

根据本发明的另一个实施方式，提供了一种促进体内、特别是肌肉内的BDNF量增加的方法，其中包含使哺乳动物(包含人或非人动物)摄取WPH或对哺乳动物(包含人或非人动物)给予WPH。本发明的促进BDNF量增加的方法能够按照关于本发明的组合物的记载内容进行实施此处，本发明的促进BDNF量增加的方法可以为在哺乳动物及来源于它们的样品(肌肉组织、肌肉细胞)中的应用，意指治疗用途和非治疗用途中的任一种。此处，“非治疗”是指不包含对人进行手术、治疗或诊断的行为(即，对人的医疗行为)，具体而言，是指不包含医生或受到医生指示的人对人进行手术、治疗或诊断的方法。

实施例

以下，列举出制备例及试验例，对本发明进行更详细的说明。其中，这些制备例及试验例是为了容易理解本发明而用于说明的一个例子，本发明并不限定于此。另外，除非另有说明，则下述制备例及试验例在室温(25±5℃)及大气压的条件下进行。此外，使用凯氏法测定受试样品中所含的蛋白质含量。

制备例1

(1)乳清蛋白水解物(干燥粉末物质)的制备

将50g市售的乳清蛋白浓缩物(以下，仅称作“WPC”)溶解于1L水中而制备WPC溶液，用pH调节剂将其调节至pH为7。通过向其中加入500mg来源于芽孢杆菌属的蛋白酶(Protease M“Amano”，Amano Enzyme Inc.)及500mg来源于曲霉属的蛋白酶(Protease N“Amano”，Amano Enzyme Inc.)，于50℃处理8小时，使乳清蛋白水解。对其进行加热而使蛋白酶失活后，供于冷冻干燥而进行粉末化，将其作为乳清蛋白水解物(WPH)(干燥粉末物质)。

(2)成分分析

用0.1(w/w)％浓度的三氟乙酸溶液将上述得到的乳清蛋白水解物(干燥粉末物质)稀释并溶解至1000倍(体积比)，供于下述条件的LC/MS/MS，测定WPH中所含的二肽(Ile-Leu、Leu-Leu、Val-Leu、Ile-Asn、Leu-Ala、Leu-Glu、Ala-Leu及Lys-Ile)的量(单位为mg/g蛋白质：固体成分换算，以下相同)。

[LC/MS/MS的分析条件]

色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱、1.7μm、2.1×50mm(Waters)

流动相：A液：含0.1(w/w)％三氟乙酸的溶液

B液：含0.1(w/w)％三氟乙酸的乙腈溶液

流动相中A液及B液的比例

开始对流动相进行通液→0分：A液100v/v％(B液0v/v％)

0分→9分：A液100v/v％→A液60v/v％-B液40v/v％

9分→10分：A液60v/v％-B液40v/v％→A液20v/v％-B液80v/v％

10→11分：A液20v/v％-B液80v/v％→A液100v/v％(B液0v/v％)

柱温：40℃

流速：0.3ml/分钟。

[MS/MS条件]

ESI正离子模式

毛细管电压：3000V

源温度：120℃

脱溶剂温度：400℃

脱溶剂气体流速：850L/小时

锥孔气体流速：50L/小时

锥孔电压：25V

碰撞电压：15mV。

将上述制备例1中制备的WPH(干燥粉末物质)中所含的二肽的含量示于表1。

[表1]

制备例1的WPH中所含的二肽

	二肽	含量(mg/g蛋白质)
			1	Ile-Leu	3.82
2	Leu-Leu	1.56
			3	Val-Leu	4.70
4	Ile-Asn	3.98
			5	Leu-Ala	0.75
6	Leu-Glu	4.35
			7	Ala-Leu	1.53
8	Lys-Ile	4.82

制备例2

将50g市售的WPC(与制备例1中使用的WPC相同)溶解于1L水中而制备WPC溶液，用pH调节剂将其调节至pH为7。向其中加入500mg来源于芽孢杆菌属的蛋白酶(Protease M“Amano”，Amano Enzyme Inc.)，于50℃处理8小时，使WPC溶液中的乳清蛋白水解。接着对其进行加热而使蛋白酶失活后，供于冷冻干燥而进行粉末化，将其作为制备例2的WPH(干燥粉末物质)。

按照制备例1的(2)一栏中记载的分析方法，测定上述制备的WPH(干燥粉末物质)中所含的二肽的量。将结果记载于表2。

[表2]

制备例2的WPH中所含的二肽

	二肽	含量(mg/g蛋白质)
			1	Ile-Leu	2.39
2	Leu-Leu	0.67
			3	Val-Leu	2.35
4	Ile-Asn	2.73
			5	Leu-Ala	1.22
6	Leu-Glu	1.90
			7	Ala-Leu	0.64
8	Lys-Ile	1.97

制备例3

将50g市售的WPC(与制备例1中使用的WPC相同)溶解于1L水中而制备WPC溶液，用pH调节剂将其调节至pH为7。向其中加入500mg来源于曲霉属的蛋白酶(Protease N“Amano”，Amano Enzyme Inc.)，于50℃处理8小时，使WPC溶液中的乳清蛋白水解。接着对其进行加热而使蛋白酶失活后，供于冷冻干燥而进行粉末化，将其作为制备例3的WPH(干燥粉末物质)。

按照制备例1的(2)一栏中记载的分析方法，测定上述制备的WPH(干燥粉末物质)中所含的二肽的量。将结果记载于表3。

[表3]

制备例3的WPH中所含的二肽

	二肽	含量(mg/g蛋白质)
			1	Ile-Leu	3.74
2	Leu-Leu	8.20
			3	Val-Leu	2.13
4	Ile-Asn	2.40
			5	Leu-Ala	1.77
6	Leu-Glu	1.08
			7	Ala-Leu	1.98
8	Lys-Ile	1.07

制备例4

将50g市售的WPC(与制备例1中使用的WPC相同)溶解于1L水中而制备WPC溶液，用pH调节剂将其调节至pH为7。向其中加入500mg胰蛋白酶(Novozymes公司)，于37℃反应4小时后，加入500mg来源于芽孢杆菌属的蛋白酶(Protease M“Amano”，Amano Enzyme Inc.)，进一步于50℃反应4小时，使WPC溶液中的乳清蛋白水解。接着对其进行加热而使蛋白酶失活后，供于冷冻干燥而进行粉末化，将其作为制备例4的WPH(干燥粉末物质)。

按照制备例1的(2)一栏中记载的分析方法，测定上述制备的WPH(干燥粉末物质)中所含的二肽的量。将结果记载于表4。

[表4]

制备例4的WPH中所含的二肽

	二肽	含量(mg/g蛋白质)
			1	Ile-Leu	3.16
2	Leu-Leu	1.07
			3	Val-Leu	5.33
4	Ile-Asn	1.65
			5	Leu-Ala	0.83
6	Leu-Glu	4.82
			7	Ala-Leu	4.77
8	Lys-Ile	4.84

制备例5

将50g市售的WPC(与制备例1中使用的WPC相同)溶解于1L水中而制备WPC溶液，用pH调节剂将其调节至pH为7。向其中加入500mg胰蛋白酶(Novozymes公司)，于37℃反应4小时后，加入500mg来源于曲霉属的蛋白酶(Protease N“Amano”，Amano Enzyme Inc.)，进一步于50℃反应4小时，使WPC溶液中的乳清蛋白水解。接着对其进行加热而使蛋白酶失活后，供于冷冻干燥而进行粉末化，将其作为制备例5的WPH(干燥粉末物质)。

按照制备例1的(2)一栏中记载的分析方法，测定上述制备的WPH(干燥粉末物质)中所含的二肽的量。将结果记载于表5。

[表5]

制备例5的WPH中所含的二肽

	二肽	含量(mg/g蛋白质)
			1	Ile-Leu	3.57
2	Leu-Leu	4.89
			3	Val-Leu	2.60
4	Ile-Asn	1.61
			5	Leu-Ala	1.96
6	Leu-Glu	0.71
			7	Ala-Leu	2.04
8	Lys-Ile	0.74

制备例6

将50g市售的WPC(与制备例1中使用的WPC相同)溶解于1L水中而制备WPC溶液，用pH调节剂将其调节至pH为7。向其中加入500mg胃蛋白酶(Wako Pure ChemicalIndustries，Ltd.)，于37℃反应4小时后，加入500mg来源于芽孢杆菌属的蛋白酶(ProteaseM“Amano”，Amano Enzyme Inc.)，进一步于50℃反应4小时，使WPC溶液中的乳清蛋白水解。接着对其进行加热而使蛋白酶失活后，供于冷冻干燥而进行粉末化，将其作为制备例6的WPH(干燥粉末物质)。

按照制备例1的(2)一栏中记载的分析方法，测定上述制备的WPH(干燥粉末物质)中所含的二肽的量。将结果记载于表6。

[表6]

制备例6的WPH中所含的二肽

	二肽	含量(mg/g蛋白质)
			1	Ile-Leu	1.47
2	Leu-Leu	2.21
			3	Val-Leu	4.92
4	Ile-Asn	1.59
			5	Leu-Ala	2.80
6	Leu-Glu	0.62
			7	Ala-Leu	0.75
8	Lys-Ile	0.54

制备例7

将50g市售的WPC(与制备例1中使用的WPC相同)溶解于1L水中而制备WPC溶液，用pH调节剂将其调节至pH为7。向其中加入500mg胃蛋白酶(Wako Pure ChemicalIndustries，Ltd.)，于37℃反应4小时后，加入500mg来源于曲霉属的蛋白酶(Protease N“Amano”，Amano Enzyme Inc.)，进一步于50℃反应4小时，使乳清蛋白溶液中的乳清蛋白水解。接着对其进行加热而使蛋白酶失活后，供于冷冻干燥而进行粉末化，将其作为制备例7的WPH(干燥粉末物质)。

按照制备例1的(2)一栏中记载的分析方法，测定上述制备的WPH(干燥粉末物质)中所含的二肽的量。将结果记载于表7。

[表7]

制备例7的WPH中所含的二肽

	二肽	含量(mg/g蛋白质)
			1	Ile-Leu	2.86
2	Leu-Leu	13.37
			3	Val-Leu	3.90
4	Ile-Asn	2.82
			5	Leu-Ala	3.08
6	Leu-Glu	0.97
			7	Ala-Leu	2.28
8	Lys-Ile	0.81

制备例8

将50g市售的WPC(与制备例1中使用的WPC相同)溶解于1L水中而制备WPC溶液，用pH调节剂将其调节至pH为7。向其中加入500mg风味蛋白酶(Novozymes公司)，于50℃反应6小时，使乳清蛋白溶液中的乳清蛋白水解。接着对其进行加热而使蛋白酶失活后，供于冷冻干燥而进行粉末化，将其作为制备例8的WPH(干燥粉末物质)。

按照制备例1的(2)一栏中记载的分析方法，测定上述制备的WPH(干燥粉末物质)中所含的二肽的量。将结果记载于表8。

[表8]

制备例8的WPH中所含的二肽

	二肽	含量(mg/g蛋白质)
			1	Ile-Leu	0.62
2	Leu-Leu	0.20
			3	Val-Leu	1.58
4	Ile-Asn	1.64
			5	Leu-Ala	1.05
6	Leu-Glu	1.40
			7	Ala-Leu	0.35
8	Lys-Ile	1.54

制备例9

将50g市售的WPC(与制备例1中使用的WPC相同)溶解于1L水中而制备WPC溶液，用pH调节剂将其调节至pH为7。向其中加入500mg来源于曲霉属的蛋白酶(Umamizyme，AmanoEnzyme Inc.)，于50℃反应6小时，使WPC溶液中的乳清蛋白水解。接着对其进行加热而使蛋白酶失活后，供于冷冻干燥而进行粉末化，将其作为制备例9的WPH(干燥粉末物质)。

按照制备例1的(2)一栏中记载的分析方法，测定上述制备的WPH(干燥粉末物质)中所含的二肽的量。将结果记载于表9。

[表9]

制备例9的WPH中所含的二肽

	二肽	含量(mg/g蛋白质)
			1	Ile-Leu	2.78
2	Leu-Leu	1.85
			3	Val-Leu	6.25
4	Ile-Asn	4.93
			5	Ala-Leu	1.09
6	Leu-Ala	3.93
			7	Leu-Glu	5.87
8	Lys-Ile	6.45

制备例10

将50g市售的WPC(与制备例1中使用的WPC相同)溶解于1L水中而制备WPC溶液，用pH调节剂将其调节至pH为7。向其中加入500mg来源于曲霉属的蛋白酶(Protease A“Amano”，Amano Enzyme Inc.)，于50℃反应6小时，使WPC溶液中的乳清蛋白水解。接着对其进行加热而使蛋白酶失活后，供于冷冻干燥而进行粉末化，将其作为制备例10的WPH(干燥粉末物质)。

按照制备例1的(2)一栏中记载的分析方法，测定上述制备的WPH(干燥粉末物质)中所含的二肽的量。将结果记载于表10。

[表10]

制备例10的WPH中所含的二肽

	二肽	含量(mg/g蛋白质)
			1	Ile-Leu	2.17
2	Leu-Leu	2.22
			3	Val-Leu	4.23
4	Ile-Asn	3.23
			5	Leu-Ala	2.97
6	Leu-Glu	2.48
			7	Ala-Leu	0.64
8	Lys-Ile	2.72

制备例11

将50g市售的WPC(与制备例1中使用的WPC相同)溶解于1L水中而制备WPC溶液，用pH调节剂将其调节至pH为7。向其中加入500mg来源于曲霉属的蛋白酶(Protease P“Amano”，Amano Enzyme Inc.)，于50℃反应6小时，使乳清蛋白溶液中的乳清蛋白水解。接着对其进行加热而使蛋白酶失活后，供于冷冻干燥而进行粉末化，将其作为制备例11的WPH(干燥粉末物质)。

按照制备例1的(2)一栏中记载的分析方法，测定上述制备的WPH(干燥粉末物质)中所含的二肽的量。将结果记载于表11。

[表11]

制备例11的WPH中所含的二肽

	二肽	含量(mg/g蛋白质)
			1	Ile-Leu	1.85
2	Leu-Leu	1.74
			3	Val-Leu	5.19
4	Ile-Asn	3.70
			5	Leu-Ala	3.54
6	Leu-Glu	3.56
			7	Ala-Leu	0.66
8	Lys-Ile	3.83

试验例1

为了以肌肉中的BDNF浓度为指标，评价作为乳制品材料的乳清蛋白的水解物的摄取与运动的结合对认知功能的影响而进行了本试验。试验中使用大鼠，分别在使大鼠摄取乳清蛋白水解物并施加运动负荷的情况下、未摄取WPH并施加运动负荷的情况下、及未摄取乳清蛋白水解物且无运动负荷的情况下，测定并比较骨骼肌中所含的BDNF浓度。

(1)试验方法

(1-1)受试样品(试验餐)的制备

试验例1的试验餐中使用了利用蛋白酶水解市售的WPC(与制备例1中使用的WPC相同)而得到的WPH(干燥粉末物质)。另外，该WPH在每100质量％固体成分中含有约89.3质量％的蛋白质。以使固体成分浓度成为10w/v％的方式，将该WPH溶解于蒸馏水中，将其作为受试样品(试验餐)。

按照制备例1的(2)一栏中记载的分析方法，测定上述制备的WPH(干燥粉末物质)中所含的二肽的量(mg/gWPH、mg/g蛋白质)。将结果记载于表12。

[表12]

WPH中所含的二肽

	二肽	含量(mg/gWPH)	含量(mg/g蛋白质)
				1	Ile-Leu	4.27	5.41
2	Leu-Leu	6.55	8.29
				3	Val-Leu	6.11	7.73
9	Ile-Val	0.985	1.25
				10	Ile-Ile	0.524	0.66
11	Leu-Val	0.896	1.13
				12	Leu-Ile	0.145	0.18

(1-2)受试动物的准备

作为受试动物，使用8周龄的雄性SD大鼠。预先进行4～5天的预备饲养，预备饲养结束后，在异氟醚麻醉下对右小腿部进行脱毛直至试验前一天为止。此外，从试验前一天开始禁食16小时。

试验当天，以使体重均等(约290～320g)的方式，按照下述方式进行分组。

[试验组(共3组)]

(a)“未给予二肽/非运动组”(n＝6)：不施加运动负荷、未给予受试样品

(b)“未给予二肽/运动组”(n＝6)：运动负荷50次、未给予受试样品

(c)“给予二肽/运动组”(n＝3)：运动负荷50次、给予受试样品。

(1-3)试验

以10ml/kg体重(含有二肽的WPH 1.0g/kg体重)，对上述各组的受试动物中的“给予二肽/运动组”的受试动物单次口服给予上述制备的受试样品(试验餐)。从给予30分钟后，在异氟醚麻醉下，通过电刺激对右后肢施加强制性运动负荷(细节如后文详述)。此外，以10ml/kg体重的比例对“未给予二肽/运动组”的受试动物单次口服给予蒸馏水来代替受试样品(试验餐)，从给予开始30分钟后，以与上述相同的方式，在异氟醚麻醉下，通过电刺激对右后肢施加强制性运动负荷。进一步，以10ml/kg体重的比例对“未给予二肽/非运动组”的受试动物单次口服给予蒸馏水来代替受试样品(试验餐)，在异氟醚麻醉下使其镇静。

对于“给予二肽/运动组”及“未给予二肽/运动组”的受试动物，在运动负荷结束3小时后，此外，对于“未给予二肽/非运动组”的受试动物，在给予蒸馏水3小时30分钟后，在异氟醚麻醉下，由腹部下腔静脉采集所有血液，处死。

然后，迅速地收集下肢骨骼肌并称量。使用收集的骨骼肌，测定作为认知功能的评价指标的BDNF浓度(ng/g)。

[运动负荷方法]

在异氟醚麻醉下，将大鼠以俯卧位固定在通过电刺激施加运动负荷的装置的专用固定台上。压迫固定右后肢的膝盖，将踝关节固定于踏板(foot plate)。将皮肤电极贴在小腿上，通过电刺激使其强制性运动。以8秒1次的电刺激频率，重复共5次作为1组，对运动组进行10组(共50次的电刺激)强制性运动负荷。另外，运动负荷模式为等长收缩负荷(ISO)。

(2)结果

将结果示于图1。在图1中，根据(b)“未给予二肽/运动组”与(a)“未给予二肽/非运动组”的比较可确认到，通过运动，肌肉中的BDNF浓度上升。此外，根据(b)“未给予二肽/运动组”与(c)“给予二肽/运动组”的比较可确认到，与仅运动的情况相比，通过在运动的基础上摄取受试样品(WPH)，肌肉中的BDNF浓度得以进一步上升。进一步，根据(a)“未给予二肽/非运动组”与(c)“给予二肽/运动组”的比较可确认到，与未摄取且不进行运动的情况相比，通过摄取受试样品并运动，肌肉中的BDNF浓度得以急剧上升(student t检验：P＜0.05)。

由此显示了：通过结合作为本发明对象的含有二肽的WPH的内服与运动，能够发挥促进骨骼肌中的BDNF产生的效果。另外，已知BDNF可以通过血脑屏障(Pardridge WM etal.Pharm Res.11(5):738-46(1994)。因此，认为肌肉内产生的BDNF通过血脑屏障进入脑内，有助于抑制认知功能减退。即，通过摄取本发明的乳清蛋白水解物并进行运动，可期待能够抑制认知功能减退的效果。

试验例2

为了以肌肉中的BDNF浓度为指标，评价WPH摄取对认知功能的影响而进行了本试验。试验中使用大鼠，分别在摄取WPH的情况下、摄取水或水解前的乳清蛋白来代替乳清蛋白水解物的情况下，测定并比较骨骼肌中所含的BDNF浓度。此外，以相同的方式，在摄取WPH并施加运动负荷的情况下、摄取水或水解前的乳清蛋白来代替WPH并施加运动负荷的情况下，测定并比较骨骼肌中所含的BDNF浓度，确认与运动同时使用所带来的影响。

(1)试验方法

(1-1)受试样品(试验餐、比较试验餐)的制备

与试验例1同样地，在试验例2的试验餐中使用了利用蛋白酶水解市售的WPC(与制备例1中使用的WPC相同)而得到的WPH(干燥粉末物质)(参考表12)。以使固体成分浓度成为10w/v％的方式，将该WPH溶解于蒸馏水中，将其作为受试样品(试验餐)。另一方面，作为比较试验餐，使用水解前的乳清蛋白(市售的WPC，与制备例1中使用的WPC相同)。另外，试验餐(WPH)及比较试验餐(乳清蛋白)均以使换算为蛋白质含量的给予量成为1.0g蛋白质/体重kg的方式，统一给予量。

(1-2)受试动物的准备

作为受试动物，使用8周龄的雄性SD大鼠。预先进行4～5天的预备饲养，预备饲养结束后，在异氟醚麻醉下，对右小腿部进行脱毛直至试验前一天为止。此外，从试验前一天开始禁食16小时。

试验当天，以使体重均等(约290～310g)的方式，按照下述方式进行分组。

[试验组(共6组)]

＜运动组＞

(1)“给予水/运动组”(n＝5)：运动负荷50次、给予水

(2)“给予WPC/运动组”(n＝5)：运动负荷50次、以1.0g蛋白质/体重kg给予比较试验餐(乳清蛋白)

(3)“给予WPH/运动组”(n＝5)：运动负荷50次、以1.0g蛋白质/体重kg给予试验餐(WPH)。

＜非运动组＞

(i)“给予水/非运动组”(n＝5)：无运动负荷、给予水

(ii)“给予WPC/非运动组”(n＝5)：无运动负荷、以1.0g蛋白质/体重kg给予比较试验餐(乳清蛋白)

(iii)“给予WPH/非运动组”(n＝5)：无运动负荷、以1.0g蛋白质/体重kg给予试验餐(WPH)。

(1-3)试验

对上述运动组的受试动物单次口服给予水或受试样品15分钟后，在异氟醚麻醉下，通过电刺激对右下肢施加强制性运动负荷。运动负荷方法如试验例1中的记载所示。对非运动组的受试动物单次口服给予水或受试样品15分钟后，进行与所述运动组相同时间的异氟醚麻醉。对于运动组、在运动负荷结束180分钟后，对于非运动组、在麻醉结束180分钟后，在异氟醚麻醉下，由腹部下腔静脉采集全部血液，处死。然后，迅速地收集下肢骨骼肌并称量。使用收集的骨骼肌，测定作为认知功能的评价指标的BDNF浓度(ng/g)。

(2)结果

将运动组及非运动组的结果分别示于图2及3。如图2所示，与(1)“给予水/运动组”的受试动物相比，(2)“给予WPC/运动组”的受试动物的肌肉中BDNF浓度稍稍上升，但是没有显著差异。与之相比，可确认到与(1)“给予水/运动组”的受试动物相比，(3)“给予WPH/运动组”的受试动物的肌肉中BDNF浓度显著上升。此外，如图3所示，非运动组也同样，与(i)“给予水/非运动组”的受试动物相比，(ii)“给予WPC/非运动组”的受试动物的肌肉中BDNF浓度上升，但是没有显著差异，与之相比，可确认到与(i)“给予水/非运动组”的受试动物相比，(iii)“给予WPH/非运动组”的受试动物的肌肉中BDNF浓度显著上升。

由以上的试验例1及2的结果可确认到，无论有无运动，通过受试样品(含有二肽的WPH)的摄取均可引起肌肉中BDNF浓度的显著上升。认为这种显著的效果是通过摄取含有二肽(Ile-Leu、Leu-Leu、Val-Leu、Ile-Val、Ile-Ile、Leu-Val、Leu-Ile、Ile-Asn、Leu-Ala、Leu-Glu、Ala-Leu、或/和Lys-Ile)的WPH而特有的，摄取不含有这些二肽的乳清蛋白则没有确认到这种显著的效果。即，确认到通过摄取本发明的含二肽的WPH并与运动组合(例如，运动前或运动中的摄取)、或不与运动同时使用而仅摄取(非运动下的摄取)本发明的含二肽的WPH，骨骼肌内中的BDNF产生得到促进、BDNF的体内含量得以增加。如上所述，暗示了BDNF对认知功能减退的抑制、记忆或学习表现的提高、肥胖的控制、或糖代谢能力下降的抑制等具有效果。因此，认为本发明的含二肽的WPH通过促进体内的BDNF的产生的作用，对认知功能减退的抑制、记忆或学习表现的提高、肥胖的控制、或糖代谢能力下降的抑制发挥作用。

Claims

1.一种用于促进BDNF量增加的组合物，其为以乳清蛋白水解物为有效成分并用于促进体内的脑源性神经营养因子(BDNF)量增加的组合物，其中，所述乳清蛋白水解物为含有选自由Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu组成的组中的至少一种二肽的乳清蛋白水解物，或者为除了选自由Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu组成的组中的至少一种二肽，还含有选自由Ile-Val、Ile-Ile、Leu-Val及Leu-Ile组成的组中的至少一种二肽的乳清蛋白水解物。

2.一种用于促进BDNF量增加的组合物，其中，上述乳清蛋白水解物为含有Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu的二肽的乳清蛋白水解物，或者为除了Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu的二肽，还含有Ile-Val、Ile-Ile、Leu-Val及Leu-Ile的二肽的乳清蛋白水解物。

3.根据权利要求1或2所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为对运动前或运动中的包含人的哺乳动物口服给予或被运动前或运动中的包含人的哺乳动物摄取的组合物。

4.根据权利要求3所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其促进运动中或运动后的肌肉内BDNF量的增加。

5.根据权利要求1或2所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为对非运动状态的包含人的哺乳动物口服给予或被非运动状态的包含人的哺乳动物摄取的组合物。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为对认知功能减退者或其高危人群口服给予或被认知功能减退者或其高危人群摄取的组合物。

7.根据权利要求6所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为用于抑制或改善认知功能的减退的组合物。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为对肥胖者或/和糖代谢能力下降者或它们的高危人群口服给予、或者被肥胖者或/和糖代谢能力下降者或它们的高危人群摄取的组合物。

9.根据权利要求8所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为用于抑制或改善肥胖的组合物、或/和用于抑制或改善糖代谢能力下降的组合物。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其为饮食品。

11.一种组合物，其用于促进受试者体内的BDNF量增加，

所述组合物以下述乳清蛋白水解物为有效成分：

含有选自由Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu组成的组中的至少一种二肽的乳清蛋白水解物；或

除了选自由Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu组成的组中的至少一种二肽，还含有选自由Ile-Val、Ile-Ile、Leu-Val及Leu-Ile组成的组中的至少一种二肽的乳清蛋白水解物。

12.根据权利要求11所述的用于促进BDNF量增加的组合物，其中，所述用于促进BDNF量增加的组合物为用于抑制或改善认知功能的减退的组合物、或者为用于抑制或改善肥胖或/和抑制或改善糖代谢能力下降的组合物。

13.一种方法，其中，对受试者给予包含乳清蛋白水解物的组合物或使受试者摄取包含乳清蛋白水解物的组合物，抑制或改善所述受试者的认知功能的减退、增进记忆或学习表现、或者抑制或改善肥胖、或/和抑制或改善糖代谢能力下降，所述乳清蛋白水解物为含有选自由Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu组成的组中的至少一种二肽的乳清蛋白水解物，或者为除了选自由Ile-Leu、Leu-Leu及Val-Leu组成的组中的至少一种二肽，进一步含有选自由Ile-Val、Ile-Ile、Leu-Val及Leu-Ile组成的组中的至少一种二肽的乳清蛋白水解物。