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CN110105421B - 一种氧化钩藤吲哚二萜生物碱及其制备方法与应用 - Google Patents

一种氧化钩藤吲哚二萜生物碱及其制备方法与应用 Download PDF

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CN110105421B CN201910500313.6A CN201910500313A CN110105421B CN 110105421 B CN110105421 B CN 110105421B CN 201910500313 A CN201910500313 A CN 201910500313A CN 110105421 B CN110105421 B CN 110105421B
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Abstract

本发明涉及一种氧化钩藤吲哚二萜生物碱及其制备方法与应用，所述氧化钩藤吲哚二萜生物碱的制备方法包括如下步骤：(1)将干燥的钩藤带钩茎枝粉碎后，室温下加入95％乙醇、双氧水和冰醋酸搅拌2‑3小时后，再加入等体积的无水乙醇，升温至回流温度，回流提取12‑14小时后，过滤、滤液浓缩得浸提物；(2)步骤(1)得到的浸提物经色谱分离即得所述氧化钩藤吲哚二萜生物碱。

Description

一种氧化钩藤吲哚二萜生物碱及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于天然植物提取领域，具体涉及一种氧化钩藤吲哚二萜生物碱及其制备方法与应用。
背景技术
钩藤Uncaria rhynchophylla(Miq.)Jacks.为茜草科(Rubiaceae)钩藤属(Uncaria)植物该植物是传统中药钩藤的主要基源植物之一,药用部位是带钩茎枝,具有息风定惊、清热平肝等功效。目前已从钩藤中分离出多种吲哚类生物碱(以钩藤碱为主)。近期申请人利用乙醇回流提取，结合硅胶柱层析、高效液相色谱制备从钩藤带钩茎枝中获得一种结构新颖的钩藤吲哚二萜生物碱化合物，并测试了其细胞毒活性。为了获得更多结构新颖的钩藤吲哚二萜生物碱化合物，申请人对上述提取方法进行改进获得了一种活性增强的氧化钩藤吲哚二萜生物碱。
发明内容
本发明提供一种氧化钩藤吲哚二萜生物碱或其药学上可接受的盐，其特征在于所述氧化钩藤吲哚二萜生物碱具有式I所示的结构：
Figure BDA0002091805960000011
本发明提供一种钩藤吲哚二萜生物碱或其药学上可接受的盐，其特征在于所述钩藤吲哚二萜生物碱具有式II所示的结构：
Figure BDA0002091805960000012
本发明的另一实施方案提供一种同时制备上述式I、式II化合物方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将干燥的钩藤带钩茎枝粉碎后，室温下加入95％乙醇、双氧水和冰醋酸搅拌2-3小时后，再加入等体积的无水乙醇，升温至回流温度，回流提取12-14小时后，过滤、滤液浓缩得浸提物；
(2)步骤(1)得到的浸提物经色谱分离即得式I、式II化合物。
步骤(1)中所述粉碎优选20-100目，每千克干燥的钩藤带钩茎枝优选使用95％乙醇3-4L、双氧水1.0-1.5L、冰醋酸0.5-0.8L。
步骤(2)所述色谱分离优选硅胶柱层析与高效液相色谱制备结合；具体为浸提物先经硅胶柱层析，固定相为200-300目硅胶，流动相采用石油醚-乙酸乙酯按100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100梯度洗脱，每个梯度收集3个柱体积，其中90:10和70:30梯度洗脱得到的馏分合并浓缩后经高效液相色谱制备得式I、式II化合物；所述高效液相色谱制备采用的色谱条件：色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18,9.4×250mm,5μm，流速为1.5mL/min，流动相为MeOH:H2O＝65:35。
本发明的另一实施方案提供钩藤带钩茎枝在制备上述式I、式II化合物中的应用。
本发明的另一实施方案提供上述式I、式II化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供一种药物组合物，其特征在于所述药物组合物以上述式I、式II化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分。该药物组合物还可包括其他抗肿瘤药物。该药物组合物还可包括药学上可接的辅料。
本发明所述95％乙醇指的是体积分数为95％的乙醇溶液；所述双氧水优选质量分数为30％-50％的双氧水。
附图说明
图1是式I化合物1H NMR(CDCl3,600MHz)图；
图2是式I化合物13C NMR(CDCl3,150MHz)图；
图3是式I化合物的MS图；
图4是式II化合物1H NMR(CDCl3,600MHz)图；
图5是式II化合物13C NMR(CDCl3,150MHz)图；
图6是式II化合物的MS图。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。
实施例1
(1)取干燥的钩藤带钩茎枝(100g)粉碎至20-100目，室温下加入95％乙醇(300mL)、30％双氧水(100mL)和冰醋酸(50mL)搅拌2小时后，再加入等体积的无水乙醇(450mL)，升温至回流温度，回流提取12小时后，过滤、滤液浓缩得浸提物；
(2)步骤(1)得到的浸提物先经硅胶柱层析，固定相为200-300目硅胶，流动相采用石油醚-乙酸乙酯按100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100梯度洗脱，每个梯度收集3个柱体积，其中90:10和70:30梯度洗脱得到的馏分合并浓缩后经高效液相色谱制备(色谱条件：色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18,9.4×250mm,5μm，流速为1.5mL/min，流动相为MeOH:H2O＝65:35)得式I化合物(淡黄色固体，22mg)、式II化合物(白色固体，15mg)。
Figure BDA0002091805960000031
式I化合物：1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:7.78(1H,s,NH-1),7.46(1H,d,J＝7.2Hz,H-20),7.32(1H,d,J＝7.2Hz,H-23),7.13-7.07(2H,m,H-21,22),6.04(1H,s,H-11),5.76(1H,m,H-6),4.23(1H,s,H-9),3.26(1H,d,J＝17.8Hz,Ha-5),2.83-2.74(2H,m,H-16,Ha-17),2.47(1H,dd,J＝12.0,10.1Hz,Hb-17),2.16-2.04(2H,m,Hb-5,H-15a),2.00-1.92(2H,m,H-14),1.86-1.80(1H,m,H-15b),1.37(3H,s,CH3-25),1.33(3H,s,CH3-28),1.28(3H,s,CH3-29),1.06(3H,s,CH3-26)；13C NMR(CDCl3,125MHz)δ:196.8,154.1,151.3,144.8,139.9,125.1,120.7,119.8,118.6,117.7,116.6,111.5,111.5,84.9,75.8,73.8,50.7,49.4,43.2,32.8,32.1,27.2,26.5,25.2,21.1,21.0,16.3；ESIMS m/z[M+H]+434.2.
式II化合物：1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:7.78(1H,s,NH-1),7.46-7.44(1H,m,H-20),7.33-7.30(1H,m,H-23),7.12-7.10(2H,m,H-21,22),3.26-3.22(1H,dd,J＝12.0,2.4Hz,H-9),3.08-3.04(1H,dd,J＝12.0,3.6Hz,H-7),2.82-2.75(1H,m,H-16),2.72-2.68(1H,dd,J＝13.3,6.6Hz,Ha-17),2.38-2.33(1H,dd,J＝13.3,10.9Hz,Hb-17),2.02-1.95(1H,m,Ha-5),1.87-1.77(2H,m,Hb-11,Ha-15),1.72-1.60(4H,m,Ha-14,Ha-10,Hb-5,Hb-15),1.52-1.39(3H,m,H-13,Hb-14,Hb-10),1.22(3H,s,CH3-29),1.21(3H,s,CH3-28),1.16(3H,s,CH3-26),1.15-1.14(1H,m,Ha-11),1.05(3H,s,CH3-25),0.91(3H,s,CH3-30)；13C NMR(CDCl3,125MHz)δ:150.8,140.0,125.1,120.4,119.5,118.4,118.2,111.4,85.7,84.7,72.0,53.0,48.8,46.4,40.0,37.7,36.6,33.9,26.1,25.3,24.6,23.7,22.0,21.9,20.0,14.6,12.7；ESIMS m/z[M+H]+422.61,[M+H]+444.60.
实施例2
本实验根据MTT法测试肝癌细胞株HepG2的细胞毒活性。首先用胰酶消化对数期细胞，将细胞均匀稀释制成2×104个/mL的单细胞悬液，接种于96孔板中各加入100μL，随后放入细胞培养箱内恒温培养(恒温37℃、5％CO2条件下培养)，24h之后待细胞已贴壁，分别加入式I、II化合物，使化合物终浓度依次为0.625μg/mL、1.25μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、25μg/mL，并设置空白对照孔和阳性对照孔(阳性对照药顺铂)各三个，48h之后用使用自动ELISA板读数器测量每个孔在490nm处的吸光度。重复三次，与阴性对照相比，分别计算化合物对肿瘤细胞的抑制率及IC50值。结果表明，本发明式I化合物的IC50值为6.3±1.1μg/mL，式II化合物的IC50值为14.2±2.1μg/mL。

Claims (1)

1.一种同时制备式I、式II化合物方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将干燥的钩藤带钩茎枝粉碎后，室温下加入95％乙醇、双氧水和冰醋酸搅拌2-3小时后，再加入等体积的无水乙醇，升温至回流温度，回流提取12-14小时后，过滤、滤液浓缩得浸提物；
(2)步骤(1)得到的浸提物经色谱分离即得式I、式II化合物；
式I、式II化合物结构如下：
Figure FDA0002344574700000011
步骤(1)中所述粉碎为粉碎至20-100目，每千克干燥的钩藤带钩茎枝使用95％乙醇3-4L、双氧水1.0-1.5L、冰醋酸0.5-0.8L；
步骤(2)所述色谱分离为硅胶柱层析与高效液相色谱制备结合；具体为浸提物先经硅胶柱层析，固定相为200-300目硅胶，流动相采用石油醚-乙酸乙酯按100:0、90:10、80:20、70:30、60:40、50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100梯度洗脱，每个梯度收集3个柱体积，其中90:10和70:30梯度洗脱得到的馏分合并浓缩后经高效液相色谱制备得式I、式II化合物；所述高效液相色谱制备采用的色谱条件：色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18,9.4×250mm,5μm，流速为1.5mL/min，流动相为MeOH:H2O＝65:35。
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