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CN110088628B - 对样品中干扰物的确定 - Google Patents

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CN110088628B CN201780077363.7A CN201780077363A CN110088628B CN 110088628 B CN110088628 B CN 110088628B CN 201780077363 A CN201780077363 A CN 201780077363A CN 110088628 B CN110088628 B CN 110088628B
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Abstract

本发明涉及一种确定个体的血液来源样品中非抗凝剂干扰物的方法，所述方法包括a)确定所述样品中凝血时间相关参数的值；b)将a)确定的凝血时间相关参数的值与至少一个参考样品中确定的所述凝血时间相关参数的值比较；和c)基于步骤b)的比较结果，确定个体的血液来源样品中的所述非抗凝剂干扰物。另外，本发明涉及一种鉴定具有欠佳质量的血液来源样品的方法，所述方法包括根据前述方法确定非抗凝剂干扰物；并涉及与之相关的装置、试剂盒和用途。

Description

对样品中干扰物的确定
本发明涉及确定个体的血液来源样品中非抗凝剂干扰物(interferent)的方法，所述方法包括a)确定所述样品中凝血时间相关参数的值；b)将a)确定的凝血时间相关参数的值与至少一个参考样品中确定的所述凝血时间相关参数的值比较；和c)基于步骤b)的比较结果，确定个体的血液来源样品中的所述非抗凝剂干扰物。另外，本发明涉及鉴定具有欠佳质量的血液来源样品的方法，所述方法包括根据前述方法确定非抗凝剂干扰物；并涉及与之相关的装置、试剂盒和用
临床化学中血液样品分析经常被样品中化合物的存在所混淆，所述化合物干扰所使用的测定。最突出的混杂因素是血红蛋白，主要通过样本中的溶血释放；胆红素，特别是在患有黄疸的患者样本中；和脂质浓度增加，特别是在来自脂血症患者的样本中；这也称为溶血、黄疸和脂血症(HIL)干扰。
检测和报告HIL干扰传统上由实验室人员通过视检各个标本进行；然而，这种过程是高度主观和可变的。最近，推出了对血清或血浆样品提供自动化检测HIL状态并且已经报告HIL浊度指数值的临床化学分析仪(例如参考Shin等人(2014),Ann Lab Med 34:307；Boyd等人(2015),Clin Chim Acta 450:3)。HIL指数(也称作阈值水平)是HIL干扰的半定量估计，使用分光光度测量和数学校正来确定干扰水平。在临床化学分析仪中，这些指数通常定义为干扰分析的HIL最低浓度，产生>10％的偏差。
HIL指数可以在预分析性算法中用于若样品高于规定的报警指数，拒绝样品接受分析，其中所述报警指数由其相应的体外诊断试剂盒或分析仪生产商推荐。预定义的HIL指数是分析仪特定的，并且基本上基于几个选定波长的吸光度读数。由于胆红素、血红蛋白和脂血症的吸收光谱在一定程度上重叠，因此HIL指数的计算只能是半定量的。例如，血红蛋白的吸收光谱与胆红素的大部分光谱重叠，因此当使用光度法时，在溶血存在下估计黄疸程度或反之亦然是HIL测量的难题。
胆红素定量主要基于重氮偶联反应进行(US 6,326,208B1)。胆红素和对重氮苯磺酸产生有色产物(偶氮胆红素)，其在中性溶液中为红色并且在碱性溶液中为蓝色(van denBergh反应)。非结合胆红素(biliu)与偶氮染料反应缓慢，因为它在生理pH和温度不溶于水中。与葡糖醛酸(胆汁酸)结合的胆红素是水溶性的并且反应迅速。Biliu反应可以因所谓的加速物质例如甲醇或咖啡因加速(Walters和Gerarde(1970),Microchemical Journal 15:231；Valdes等人(1979),Annal.Clin.Lab.Science 9(3):251)。通常借助添加抗坏血酸终止该反应并且在分光光度计中在540nm读取染料的消光。一般，这些测定法需要使用危险化学化合物。例如通过使用来自日本鳗肌肉的胆红素诱导型荧光蛋白，作出尽力替换这类化合物的尝试(Iwatani等人(2016),Scientific Reports,doi 10.1038/srep28489)。还已知利用胆红素氧化酶的酶促方法。当胆红素氧化酶催化胆红素氧化成胆绿素时，它降低450nm处的吸光度。常规方法(重氮法、胆红素氧化酶法或分光光度测定法)的主要缺点是结果受血清样品中的浊度影响。例如，胆红素氧化酶法通过监测450nm处吸光度的变化，测量胆红素水平，这受到因血红蛋白或脂质乳液所致的浊度影响。
鉴于本领域已知方法的缺点，例如使用有毒化合物和由混浊样品引起的问题，需要改进的方法以确定血液样品中干扰性化合物，尤其是扰凝血和/或临床化学测定法的化合物的存在，避免现有技术的缺点。该问题通过本文公开的手段和方法解决。
因此，本发明涉及确定个体血液来源样品中非抗凝剂干扰物的方法，所述方法包括
a)确定所述样品中凝血时间相关参数的值；
b)将a)确定的凝血时间相关参数的值与至少一个参考样品中确定的所述凝血时间相关参数的值比较；并且
c)基于步骤b)的比较结果，确定个体的血液来源样品中的所述非抗凝剂干扰物。
确定非抗凝剂干扰物的本发明方法是体外方法。另外，它可以包括除上文明确提到的那些之外的步骤。例如，其他步骤可以例如涉及为步骤a)提供样品，或为步骤b)提供适宜的参考样品。下文具体说明确定干扰物的方法可以包含的其他步骤。另外，可以通过自动化设备执行所述一个或多个步骤。
如下文中使用，术语“具有”、“包含”或“包括”或其任何任意语法变型按照非排斥性方式使用。因此，这些术语可以指其中这种语境下描述的实体中除了这些术语引入的特征之外，不存在其他特征的情形，并且指其中存在一个或多个其他特征的情形。作为一个例子，表述“A具有B”、“A包含B”和“A包括B”可以指这样的情形，其中A中除了B之外，不存在其他要素的(即其中A完全和排他性由B组成的情形)并且这样的情形，其中A中除了B之外，存在一个或多个其他要素，如要素C、要素C和D或甚至其他要素。
另外，如下文中所用，术语“优选地”、“更优选地”、“最优选地”、“具体地”、“更具体地”、“特别地”、“更特别地”或相似术语结合任选的特征使用，不限制其他可能性。因此，这些术语引入的特征是任选的特征并且不是意在以任何方式限制权利要求的范围。如技术人员将意识到，可以通过使用备选特征实施本发明。类似地，由“在本发明的一个实施方案中”或相似表达引入的特征意在是任选的特征，对本发明的其他实施方案无任何限制，对本发明的范围无任何限制并且对按照这种方式引入的特征与其他任选或非任选的本发明特征组合的可能性无任何限制。另外，如果未另外指出，术语“约”涉及附带有关领域内公认技术精度的所示值，优选地涉及所示值±20％、更优选地±10％、最优选地±5％。
如本文所用，术语“确定非抗凝剂干扰物”涉及提供关于样品中至少一种非抗凝剂干扰物的存在和/或数量的指示。在一个实施方案中，确定是定量确定，在又一个实施方案中样品中确定是非抗凝剂干扰物浓度的绝对定量，所述绝对定量可以例如作为重量/体积、活性/体积等的值提供；和/或确定是非抗凝剂干扰物浓度的相对定量，例如与参考值比较，所述相对定量可以例如按任意单位/体积或作为参考值的分数(例如以百分数)提供。在又一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物是定性确定，即，在一个实施方案中，是评价非抗凝剂干扰物是否在样品中以检测限之上的量或浓度存在。在又一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物是半定量确定，即在如下文具体说明的一个实施方案中，是评价非抗凝剂干扰物是否在样品中以高于预定阈(例如质量阈，即为确定样品是否具有足够质量供进一步分析所建立的阈)的量或浓度存在。预定阈的值将取决于所构思方法的具体应用。本领域普通技术人员知道如何确立一个或多个阈值，例如通过如下文具体说明那样测量一种或多种参考样品中相应参数的值确立。在一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物是评价至少一种非抗凝剂干扰物是否在样品中以超过至少一个阈的浓度存在。如技术人员将理解，确定非抗凝剂干扰物是评价至少一种非抗凝剂干扰物是否在样品中以超过至少一个阈的浓度存在，可以包括对于每种目的非抗凝剂干扰物，确定其浓度是否在样品中超过预定阈；在一个实施方案中，在这种情况下每种目的非抗凝剂干扰物，使用至少一个预定阈。在又一个实施方案中，评价至少一种非抗凝剂干扰物是否在样品中以超过至少一个阈的浓度存在包括，在一个实施方案中是，确定所述样品中存在的非抗凝剂干扰物是否调节凝血时间相关参数至如此程度，从而应当从所述凝血时间相关参数确定和/或从临床化学排除该样品。因此，在一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物不包括鉴定样品中的非抗凝剂干扰物；如果质量控制(例如在如下文具体说明的血液来源样品分析前质量控制中)中使用确定样品中的非抗凝剂干扰物，则尤其构思这种确定。在一个实施方案中，定量确定和半定量确定包括将样品中确定的值与多于一个参考值比较。在一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物包括将样品中确定的凝血时间相关参数的值与至少两个参考值(例如阴性对照和阳性对照)比较。在又一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物包括从至少三个、在一个实施方案中至少四个、在又一个实施方案中至少五个具有预定、非相同浓度的非抗凝剂干扰物的参考样品建立校准曲线。在一个实施方案中，至少一个参考样品的非抗凝剂干扰物浓度低于检测限。
如本文所用，术语“参考值”涉及参考样品中确定的参数的值。在一个实施方案中，所述参数是凝血时间相关参数。在一个实施方案中，参考值从较早的确定可获得，并且，在一个实施方案中，例如在数据库中提供；在又一个实施方案中，相对于确定目的样品中至少一个参数的值同步地确定参考值。术语“相应参数”涉及这样的参数，其提供基本上与它所对应的参数相同的信息，可能包括标准数学运算。例如，已知体积的样品中所确定的量的值对应于浓度值。在一个实施方案中，相应参数是相同的参数。
如本文中使用本术语，“参考样品”是这样的样品，其包含为凝血反应出现所需要的化合物，在实施方案中以这些化合物在血液来源样品中存在的浓度包含这些化合物，并且包含已知量的非抗凝剂干扰物。在一个实施方案中，术语“已知量的非抗凝剂干扰物”涉及半定量已知的非抗凝剂干扰物的量。在一个实施方案中，所述半定量性量可以例如是高于或低于检测限的量，或高于或低于质量阈的量。在又一个实施方案中，非抗凝剂干扰物的量是定量已知的，即已经作为相对或绝对量或浓度确定。参考样品可以是人工样品；在一个实施方案中，参考样品是或基于天然样品，在一个实施方案中是血浆，在又一个实施方案中是柠檬酸盐血浆，如下文详述。在一个实施方案中，参考样品是在一个实施方案中允许半定量地确定样品是否包含非抗凝剂干扰物的样品。因此，如本文所用，在参考样品中，非抗凝剂干扰物的绝对浓度无需必然已知。在一个实施方案中，参考样品是允许定量确定样品中非抗凝剂干扰物的样品。在这种情况下，在一个实施方案中，已知参考样品中非抗凝剂干扰物的绝对浓度。
在一个实施方案中，参考样品已知不以可检出量包含非抗凝剂干扰物；可以例如通过以下方式提供这种参考样品：提供不添加非抗凝剂干扰物或以低于检测限的浓度添加非抗凝剂干扰物的人工参考样品；或可以例如通过以下方式提供这种参考样品：借助与本发明方法不同的方法确定血液来源样品中非抗凝剂干扰物的量和选择检测其不存在非抗凝剂干扰物的样品；或调节非抗凝剂干扰物的浓度至检测限以下。在一个实施方案中，也可以由本发明的方法通过以下方式提供这种样品：使用先前经鉴定不包含非抗凝剂干扰物的参考样品和选择检测其不存在非抗凝剂干扰物的样品。另外，参考样品可以是来自表观健康的个体或来自表观健康的个体群体的样品，其中如本文所用，术语“表观健康的个体”涉及经诊断尚未患有凝血缺陷的个体。在又一个实施方案中，参考样品是来自个体群体的样品的混合物，条件是所述个体群体中包含非抗凝剂干扰物的样品的发生率低到足以统计地确信，非抗凝剂干扰物的浓度不显著地偏离健康个体的样品中非抗凝剂干扰物的浓度。已知不按可检出量包含非抗凝剂干扰物的参考样品可以例如作为阴性对照样品使用。
备选地或额外地，“参考样品”是已知以可检出量包含非抗凝剂干扰物的(其他)样品。可以例如通过以下方式提供这种参考样品：提供人工参考样品并添加已知量的非抗凝剂干扰物至所述人工样品。另外，如上所述，可以通过将已知量的非抗凝剂干扰物添加至血液来源样品，在一个实施方案中添加至已知不包含非抗凝剂干扰物的样品，提供这种样品。在又一个实施方案中，这种参考样品是从已知包含非抗凝剂干扰物的个体获得的血液来源样品；在一个实施方案中，通过与本发明方法不同的方法，确立所述非抗凝剂干扰物的存在和/或浓度。在一个实施方案中，也可以由本发明的方法通过以下方式提供这种参考样品：使用先前经鉴定包含非抗凝剂干扰物的参考样品和选择经鉴定包含非抗凝剂干扰物的样品。已知按预定、可检出量包含非抗凝剂干扰物的参考样品可以例如作为阳性对照样品使用；或已知按预定、可检出量包含非抗凝剂干扰物的参考样品可以作为质量控制样品使用，例如以确定量值的精度。
如本文所用，术语“校准样品”涉及其中非抗凝剂干扰物的量或浓度已知的参考样品。在一个实施方案中，校准样品是包含预定量的非抗凝剂干扰物的血液来源样品。在一个实施方案中，提供至少两个、在又一个实施方案中至少三个、在又一个实施方案中至少四个校准样品，所述校准样品包含预定义、非相同浓度的非抗凝剂干扰物。在一个实施方案中，通过将非抗凝剂干扰物混入所述校准样品中调节所述校准样品中所述非抗凝剂干扰物的浓度，提供所述校准样品。在又一个实施方案中，至少两个、在又一个实施方案中至少三个、在又一个实施方案中至少四个校准样品衍生自一种校准物母液。在又一个实施方案中，至少两个、在又一个实施方案中至少三个、在又一个实施方案中至少四个校准样品衍生自一种校准物母液，例如衍生自一种已知不包含抗凝剂干扰物的校准物母液和一种以用于校正的最高浓度包含抗凝剂干扰物的校准物母液。如本领域技术人员将理解，在一个实施方案中，至少一个校准样品以低于检测限的浓度包含非抗凝剂干扰物，并且至少一个校准样品以高于检测限的浓度包含非抗凝剂干扰物，
如本文所用，术语“干扰物”涉及调节个体的血液来源样品中凝血时间相关参数的物质。如技术人员已知，凝血时间可以因样品中存在抗凝剂而修改。如该术语在本文中所用，“抗凝剂”是在治疗性应用中用来调节，在一个实施方案中延长个体中凝血过程的化学化合物。抗凝剂是技术人员已知的并且包括，在一个实施方案中，肝素，例如未未分级肝素肝素或低分子量肝素；因子Xa抑制剂，例如人造五糖或因子Xa直接抑制剂；凝血酶直接抑制剂；或维生素K拮抗剂。其他的抗凝剂是4-羟香豆素，在一个实施方案中是醋硝香豆醇、双香豆素、双香豆乙酸乙酯、苯丙香豆素、华法林、杀鼠醚(coumatetralyl)、鼠得克(difenacoum)、氟鼠酮(flocoumafen)、溴敌鼠(bromadiolone)、喀氯香豆醇(tioclomarol)、大隆(brodifacoum)和/或苯丙香豆素(苯丙香豆素(marcumar)、(RS)-4-羟-3-(1-苯基丙基)香豆素)；在一个实施方案中是华法林((RS)-4-羟-3-(3-氧代-1-苯基丁基)-2H-色烯-2-酮)；在又一个实施方案中是(-)-华法林((S)-4-羟-3-(3-氧代-1-苯基丁基)-2H-色烯-2-酮)，在又一个实施方案中是苯丙香豆素(苯丙香豆素、(RS)-4-羟-3-(1-苯基丙基)香豆素)。其他的抗凝剂是苯茚二酮、氯茚二酮和/或二苯茚酮。
其他的干扰物是“非抗凝剂干扰物”，即不是如上所述的抗凝剂，然而具有调节样品中凝血时间相关参数的活性的化合物。在一个实施方案中，所述非抗凝剂干扰物是由个体的身体细胞产生的化合物。在又一个实施方案中，非抗凝剂干扰物是胆红素，在一个实施方案中是结合胆红素。在又一个实施方案中，非抗凝剂干扰物是血红蛋白。在又一个实施方案中，非抗凝剂干扰物是脂质，在一个实施方案中是甘油三酯或甘油三酯混合物。在又一个实施方案中，非抗凝剂干扰物是结合胆红素和/或血红蛋白和/或脂质，在一个实施方案中是甘油三酯或甘油三酯混合物。在一个实施方案中，干扰物不是离子络合剂，尤其不是乙二胺四乙酸(EDTA)或其盐之一并且不是柠檬酸或其盐之一。
术语“凝血时间相关参数”涉及指示为血液来源样品凝固所需要的时间的参数。因此，术语“凝血时间相关参数”涉及这样参数，其指示为血液来源样品凝固所需要的时间与之相关或与自其中导出的参数相关。在一个实施方案中，通过标准数学、物理和/或化学操作从前述参数导出凝血时间相关参数。通常，在凝血实验室中，例如激活凝血酶原时间(APTT)试剂和凝血酶时间(TT)试剂用来筛选凝血异常并用来监测抗凝剂在治疗中的治疗作用。延迟的APTT可以提示使用过肝素(或样品污染)、抗磷脂抗体(尤其狼疮抗凝物)、凝血因子缺乏(例如血友病)、脓毒症(包括凝血因子消耗)或存在针对凝血因子的抗体(因子抑制物)。因此，在一个实施方案中，凝血时间相关参数是凝血酶时间或活化部分促凝血酶原激酶时间。在一个实施方案中，凝血时间相关参数是凝血酶时间。在一个实施方案中，凝血时间相关参数是活化部分促凝血酶原激酶时间。确定凝血时间的方法是本领域熟知；在一个实施方案中，在生色测定法中、用机械测定法、通过随时间推移确定血凝块质量、通过随时间推移确定粘度相关参数，例如凝血反应中嵌入的钢珠振荡(Hubbuch等人(1996),Clin.Lab.42:637-640)或用光学照相测定法(photo-optical assay)确定凝血时间相关参数，前者全部为技术人员已知。在一个实施方案中，用光学照相测定法、在又一个实施方案中通过光度法、在又一个实施方案中通过散射比浊法或通过透射比浊法，在又一个实施方案中通过透射比浊法确定凝血时间相关参数。因此，在一个实施方案中，通过如本文中他处所述那样随时间推移确定至少一个透射相关参数，确定凝血时间相关参数。如技术人员理解，在一个实施方案中，在激发凝血后的两个不相同时间点确定透射相关参数至少两次。
如本文所用，术语“血液来源样品”涉及血液或涉及衍生自血液的样品材料，其至少包含在要求凝血的血液中所包含的凝血因子。在一个实施方案中，血液来源样品是血浆，在又一个实施方案中是柠檬酸盐血浆。从个体获得血液来源样品的方法是技术人员已知的并且在一个实施方案中包括动脉或静脉穿刺和皮肤穿刺。
如本文所用，术语“个体”涉及脊椎动物，在一个实施方案中涉及哺乳动物，在又一个实施方案中涉及人。在一个实施方案中，个体是表观健康的个体。在又一个实施方案中，个体是并未正在施用抗凝疗法的个体，即，是并未正接受如上文中详述的抗凝剂治疗的个体。在又一个实施方案中，个体已知未患有凝血病。在又一个实施方案中，个体是胆红素脑病形成风险升高的个体，尤其个体是新生者，在一个实施方案中是人类新生儿。在又一个实施方案中，个体是年龄小于二个月、在一个实施方案中小于一个月、在一个实施方案中小于二周的人类新生儿。在又一个实施方案中，个体是早产婴儿，在一个实施方案中是在不到37周妊娠分娩的人类婴儿。
在一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物的方法包含附加步骤和/或子步骤。如技术人员已知，凝血需要钙离子的存在；在另一方面，凝血检验用临床样品通常含有钙离子螯合剂以防止过早凝血。因此，在一个实施方案中，步骤a)，即确定样品中凝血时间相关参数的值，包括子步骤a0)使所述样品与提供钙离子的物质接触，在一个实施方案中紧邻所述样品与激发凝血的物质接触之前或与之同时，使所述样品与提供钙离子的物质接触。在一个实施方案中，步骤a)，即确定样品中凝血时间相关参数的值，包括子步骤a1)使所述样品与激发凝血的物质接触。激发凝血的物质是本领域已知的；在一个实施方案中，激发凝血的物质是凝血酶、二氧化硅、硅藻土、高岭土、鞣花酸、磷脂、巴曲酶(baxtroxobin)和/或蛇静脉酶(ecarin)，在一个实施方案中是凝血酶。在又一个实施方案中，步骤a)包括子步骤a2)：在所述样品中激发凝血后的第一时间点，确定透射相关参数的第一值，和子步骤a3)：在所述样品中激发凝血后的第二时间点，确定透射相关参数的第二值。如本文以上指出，第一时间点和第二时间点不相同。在又一个实施方案中，步骤a)包括其他子步骤：在所述样品中激发凝血后的其他时间点，确定透射相关参数的其他值。因此，在一个实施方案中，步骤a)包括多个子步骤：在所述样品中激发凝血后的多个不相同时间点，确定透射相关参数的值，即在一个实施方案中包括在多个间隔时间后、在一个实施方案中按定期间隔时间确定透射相关参数的值。因此，在一个实施方案中，将透射相关参数的值至少每10秒、在又一个实施方案中至少每8秒、在又一个实施方案中至少每5秒、在又一个实施方案中至少每3秒、在又一个实施方案中至少每2秒、在又一个实施方案中至少每秒、在又一个实施方案中至少每0.2秒确定。在又一个实施方案中，步骤a)包括连续确定透射相关参数的值。如技术人员理解，在一个实施方案中，确定透射相关参数至少包括确立信号，所述信号与透射相关参数和所述信号的实际记录值相关。在与透射相关参数相关的信号可以真实、连续地例如作为光度计的光电池中测量的电压提供，或可以例如通过将多孔板的孔移入光度计的光程，按分立量值提供时，将在给定的时间点在分离的步骤记录所述信号的值。然而，如本文所用，术语“连续地确定透射相关参数的值”涉及至少每0.1秒确定透射相关参数的值。因此，该术语涉及按前述频率记录透射相关参数的值。在又一个实施方案中，步骤a)包括子步骤a4)：基于子步骤a2)中确定的透射相关参数的第一值和基于子步骤a3)中确定的上的透射相关参数的第二值，确定所述样品中凝血时间相关参数的值。如技术人员将理解，如若确定多于两个透射相关参数的值，则确定凝血时间相关参数的值基于至少两个所述确定的透射相关参数的值；在一个实施方案中，确定凝血时间相关参数的值基于多于两个所述确定的透射相关参数的值，在一个实施方案中基于三个或更多个所述确定的透射相关参数的值、在又一个实施方案中基于四个或更多个前述值、在又一个实施方案中基于其五个或更多个前述值，在又一个实施方案中基于其全部前述值。因此，在一个实施方案中，确定凝血时间相关参数的值基于所述样品中确定的凝血时间相关参数的值。因此，在一个实施方案中，步骤a)包括子步骤a1)：使所述样品与激发凝血的物质接触剂，在一个实施方案中与凝血酶接触；a2)在所述样品中激发凝血后的第一时间点，确定透射相关参数的第一值；a3)在所述样品中激发凝血后的第二时间点，确定所述样品中透射相关参数的第二值；并且a4)基于子步骤a2)和a3)的结果，确定凝血时间相关参数。在又一个实施方案中步骤a)包括子步骤：a1)使所述样品与激发凝血的物质接触，在一个实施方案中与凝血酶接触；a2)在所述样品中激发凝血后的多个不相同时间点，确定所述样品中多种透射相关参数的值；和a3)基于子步骤a2)的结果，确定凝血时间相关参数。
术语“透射相关参数”涉及指示中样品的透射光/入射光比率或与之相关的参数或涉及从中衍生的参数。在一个实施方案中，透射相关参数通过标准数学、物理和/或化学操作衍生自前述比率。因此，在一个实施方案中，透射相关参数是透射系数、消光系数、透光率、吸光度、光散射或吸收。另外，在一个实施方案中，透射相关参数是通过标准数学运算(例如校正应用于样品的稀释度、校正校正因子等)从上述参数之一导出的值。确定血液样品中透射相关参数的手段和方法是技术人员已知的并且在一个实施方案中是透射测量、散射比浊法或透射比浊法。为了确定透射相关参数，样品可以包含于多孔板的孔中。在又一个实施方案中，样品包含于比色皿中；比色皿可以作为单个比色皿或按照多个比色皿的布局(如比色皿转子或装填有比色皿的基于机架的系统)使用。在一个实施方案中，通过透射比浊法确定透射相关参数。技术人员理解，可以在特定波长确定透射相关参数；因此，在一个实施方案中，在可见光波长，在一个实施方案中在300nm至700nm波长、在一个实施方案中300nm至600nm或500nm至700nm波长确定所述透射相关参数。在一个实施方案中，在550nm至650nm波长、在又一个实施方案中600nm至650nm波长、在又一个实施方案中在625±10nm波长、在又一个实施方案中在波长625nm确定透射相关参数。本领域技术人员还已知，上述透射相关参数可以用来例如通过在随时间推移的值的图示中鉴定平顶并因而扣除预定的信号高度百分数和/或通过从代表所述透射相关参数的值随时间推移变化的曲线的斜率外推，确定凝血时间相关参数。
在一个实施方案中，步骤b)，即，将步骤a)确定的凝血时间相关参数的值与至少一个参考样品中确定的所述凝血时间相关参数的值比较，包括子步骤b1)：提供至少两个、在一个实施方案中至少三个、在又一个实施方案中至少五个具有预定、非相同浓度的所述非抗凝剂干扰物或干扰物的校准样品。在一个实施方案中，步骤b)包括子步骤b2)：确定所述校准样品中每一个的所述凝血时间相关参数的值，在一个实施方案中根据步骤a)的子步骤确定。在又一个实施方案中，步骤b)包括子步骤b3)：基于子步骤b2)中确定的值，提供校准曲线。因此，在一个实施方案中，步骤b)包括子步骤b1)：提供至少两个、在一个实施方案中至少三个、在又一个实施方案中至少五个具有预定、非相同浓度的所述非抗凝剂干扰物或干扰物的校准样品；b2)：确定所述校准样品中每一个的所述凝血时间相关参数的值，在一个实施方案中根据步骤a)的子步骤确定；并且；和b3)基于子步骤b2)中确定的值，提供校准曲线。
在一个实施方案中，血液来源样品是疑似不包含干扰物、尤其抗凝物的个体的样品，例如来自如上文详述的表观健康的个体的样品。在又一个实施方案中，血液来源样品是来自已知或疑似经抗凝剂治疗的个体的样品。在这种情况下，在一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物的方法包括使所述样品与选自溴化己二甲胺、鱼精蛋白和肝素酶的化合物接触。备选地或额外地，在一个实施方案中，该方法包括使所述样品与抗纤溶剂、在一个实施方案中氨甲环酸或其抗纤溶衍生物或抑酶肽或其抗纤溶衍生物接触。
在一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物的方法是一种包括确定结合胆红素的方法。在这种情况下，在一个实施方案中，该方法包括使所述样品的等分试样与胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)接触并确定所述胆红素氧化酶处理的等分试样中所述凝血时间相关参数的值，在一个实施方案中根据确定非抗凝剂干扰物的本发明方法来确定。在又一个实施方案中，该方法还包括确定总胆红素。因此，在又一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物的方法是一种包括确定总胆红素的方法。确定总胆红素的方法是本领域已知的，例如从上文中援引的文献已知。在又一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物的方法是一种包括确定总胆红素并从针对总胆红素和结合胆红素确定的值计算游离胆红素的方法。
在一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物的方法还包含，使所述样品的等分试样与β-葡糖醛酸糖苷酶(EC 3.2.1.31)接触并且在所述胆红素氧化酶处理的等分试样中确定凝血时间相关参数的值，在一个实施方案中确定凝血酶时间的值，在一个实施方案中根据确定非抗凝剂干扰物的本发明方法来确定。在一个实施方案中，β-葡糖醛酸糖苷酶是使用结合胆红素作为底物的β-葡糖醛酸糖苷酶；合适的β-葡糖醛酸糖苷酶是本领域已知的并且包括来自细菌、尤其肠细菌(包括大肠杆菌(Escherichia coli))的那些；哺乳动物肝脏β-葡糖醛酸糖苷酶，例如人或牛肝脏β-葡糖醛酸糖苷酶；盖罩大蜗牛(Helix pomatia)β-葡糖醛酸糖苷酶；和鲍鱼β-葡糖醛酸糖苷酶。
在一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物的方法包括辅助确立干扰物身份的其他步骤。在一个实施方案中，该方法还包括在激发凝血之前确定样品的浊度和/或吸收。如技术人员将理解，在激发凝血之前，与不包含增加量的脂质的参考相比，在一个实施方案中升高的浊度提示非抗凝剂干扰物是如上文详述的脂质；和与不包含增加量的血红蛋白的参考相比，在一个实施方案中在400nm至600nm波长测量的增加的吸收提示非抗凝剂干扰物是血红蛋白。如上文所示，在样品的等分量和所述样品的已经用胆红素氧化酶处理的其他等分量之间凝血时间相关参数的差异提示非抗凝剂干扰物为胆红素。在一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物的方法包括辅助确立干扰物身份的其他和/或附加步骤，所述步骤是技术人员已知的，例如酶促方法、化学检测反应、染色方法(例如用亲脂剂染色)等。
有利地，于奠定本发明的工作中发现，血液来源样品中天然存在的化合物，尤其胆红素、血红蛋白和脂质，可能干扰凝血并且借助这种干扰，可以通过确定凝血时间相关参数定量干扰性物质。另外，由于干扰性物质往往视作凝血试验和临床化学测定法的混杂因素，优选地从这类分析排除包含升高量的这些化合物的血液来源样品，以避免产生虚假结果。
上文作出的定义在已作必要校正时适用于以下情况。在已作必要校正时，下文作出的附加定义和解释也适用于本说明书中描述的全部实施方案。
本发明还涉及鉴定具有欠佳质量的血液来源样品的方法，所述方法包括：
A)根据本发明确定非抗凝剂干扰物；
B)将步骤A)的结果与质量参考比较；并且
C)基于步骤b)的比较结果，鉴定具有欠佳质量的样品。
如本文所用，术语“具有欠佳质量的血液来源样品”涉及以干扰临床化学和/或凝血测量的至少一种测定法的量，包含非抗凝剂干扰物的血液来源样品。在一个实施方案中，该术语涉及以干扰凝血测量的量包含非抗凝剂干扰物的样品。在一个实施方案中，该术语涉及这样的样品，其中，如果根据标准方案分析，则至少一个临床化学值和/或凝血测量值显著地偏离本将测量到或本将预期测量到的实际值。因此，在一个实施方案中，具有欠佳质量的血液来源样品是不应当根据标准方案分析以避免虚假结果或应当在这类分析之前预处理以移除所述非抗凝剂干扰物或减少其量的样品。例如，在一个实施方案中，如若鉴定样品为包含高于阈的胆红素浓度，则所述样品可以在进一步分析之前，用胆红素氧化酶处理。另外，在一个实施方案中，如若鉴定样品为包含高于阈的胆红素浓度，则所述样品可以在进一步分析之前，用适宜的脂质处理，可以接受离心以移除脂质小滴等。在又一个实施方案中，从临床化学分析和/或凝血测量中排除鉴定为具有欠佳质量的样品。
如本领域技术人员将理解，根据鉴定本发明的具有欠佳质量的血液来源样品的方法，在一个实施方案中，不需要鉴定样品中存在的非抗凝剂干扰物；也不需要确认实际测量到值的偏差。因此，在一个实施方案中，具有欠佳质量的血液来源样品，在一个实施方案中，通过确定至少一种非抗凝剂干扰物高于预定阈存在于所述样品中来鉴定，并且，在一个实施方案中，单独基于所述结果从临床化学分析和/或凝血分析中排除样品。
如上文详述，阈可以是限定的阈值或阈范围。但是，它是还设想在一个实施方案中，通过提供包含阈量非抗凝剂干扰物的参考样品，提供预定阈；例如可以提供包含最高可耐受浓度干扰物的参考样品。原则上，所述参考样品中非抗凝剂干扰物的实际浓度并不必须已知，因为也可以经验地鉴定包含阈浓度的样品。在又一个实施方案中，阈是阈值，在一个实施方案中阈浓度。
根据本发明，确定非抗凝剂干扰物的结果可以与质量参考比较。如本文所用，术语“质量参考”涉及使得以下决定成为可能的参考样品或参考值：给定血液来源样品是否具有足够质量。在一个实施方案中，质量参考是包含最高可容忍浓度的干扰物的参考样品并且血液来源样品和质量参考样品之间比较相应参数的值。在又一个实施方案中，质量参考是可以预先确定或可以从例如校准曲线确定的参考值。因此，在一个实施方案中，质量参考是质量参考范围或质量参考曲线。在又一个实施方案中，所述质量参考的下限是正常样品中凝血时间相关参数的值-20％，在一个实施方案中-10％，在又一个实施方案中-7.5％。在又一个实施方案中，所述质量参考的上限是正常样品中凝血时间相关参数的值+20％，在一个实施方案中+10％，在又一个实施方案中+7.5％。在又一个实施方案中，质量参考是这样的质量参考范围，其正常样品中凝血时间相关参数的值±20％，在一个实施方案中±10％，在又一个实施方案中±7.5％。在又一个实施方案中，质量参考的下限是正常样品中凝血时间相关参数的值的正常下限。在又一个实施方案中，所述质量参考的上限是正常样品中凝血时间相关参数的值的正常上限。
在一个实施方案中，非抗凝剂干扰物是血红蛋白；在这种情况下，在一个实施方案中，如果确定的血红蛋白浓度高于20mg/dL，在一个实施方案中高于50mg/dL，则鉴定到具有欠佳质量的血液来源样品。
在又一个实施方案中，非抗凝剂干扰物是结合胆红素；在这种情况下，在一个实施方案中，如果确定的结合胆红素高于1mg/dl，在一个实施方案中高于2.5mg/dL，则鉴定到具有欠佳质量的血液来源样品。
在又一个实施方案中，非抗凝剂干扰物是脂质，在一个实施方案中是包含甘油三酯的混合物；在这种情况下，在一个实施方案中，如果确定的脂质浓度高于100mg/dL，在一个实施方案中高于250mg/dL，则鉴定到具有欠佳质量的血液来源样品。如技术人员理解，血液来源样品中升高的脂质浓度可以导致浊度；因此在一个实施方案中，如若所述样品中透射相关参数的值在凝血之前高于透射参考，则鉴定到具有欠佳质量的血液来源样品。如本文所用，术语“透射参考”涉及如上文详述的参考样品中确定的值，其中已知所述参考样品包含最大可接受浓度的脂质，或涉及与所述最大可接受浓度的脂质相对应的参考值。在一个实施方案中，透射参考值是正常样品中透射相关参数的值+20％，在一个实施方案中+10％，在又一个实施方案中+7.5％。在又一个实施方案中，透射参考值是正常样品中透射相关参数的值的正常上限。
因此，在一个实施方案中，鉴定具有欠佳质量的血液来源样品的方法包括评价以下状况中至少一个并且如果满足以下状况中至少一个，则将该样品鉴定为具有欠佳质量：
i)所述样品中凝血时间相关参数的值低于质量参考；
ii)所述样品中凝血时间相关参数的值高于质量参考并且用胆红素氧化酶处理所述样品后，凝血时间相关参数的值显著较低；
iii)确定的血红蛋白浓度高于20mg/dL，在一个实施方案中高于50mg/dL；
iv)确定的结合胆红素浓度高于1mg/dl，在一个实施方案中高于2.5mg/dL；
v)确定的脂质浓度高于100mg/dL，在一个实施方案中高于250mg/dL；和
vi)凝血之前所述样品中透射相关参数的值高于透射参考样品的值。
本发明还涉及一种确定血液来源样品中非抗凝剂干扰物的装置，所述装置包含分析单元和评价单元，其中
(I)所述分析单元适应于确定所述样品中凝血时间相关参数的值，并且(II)所述评价单元包含存储器单元，所述存储器单元包含将分析单元确定的凝血时间相关参数与所述非抗凝剂干扰物的定量参考进行比较的有形嵌入式算法。
如本文所用，术语“装置”涉及一种手段系统，所述手段系统至少包括彼此有效连接以致允许确定过程的所述手段。确定凝血时间相关参数的常见手段是本领域已知的并且已经在上文本发明方法的语境下描述。在一个实施方案中，确定凝血时间相关参数的手段是用确定透射相关参数的手段，所述手段是本领域已知的并且例如在Hubbuch等人(1996),Clin.Lab.42:637-640中描述。怎样以运行方式连接装置的手段将取决于纳入装置中的手段的类型。在一个实施方案中，手段由单一装置组成。但是，还构思本发明的手段可以在一个实施方案中作为分立的装置出现，并且在又一个实施方案中，作为试剂盒包装在一起。本领域技术人员将在不另外费力的情况下实现如何连接该手段。优选的装置是在不具备专业技师知识的情况下可以应用的那些。在一个实施方案中，装置适应于包括如本文所述的附加特征。
在一个实施方案中，装置包括确定凝血时间相关参数的分析单元和处理数据的评价单元，所述数据从分析单元和/或从提供非抗凝剂干扰物确定的数据库接收。在一个实施方案中，确定非抗凝剂干扰物包括基于借助如本文中他处描述的分析单元所确定的透射相关参数，确定凝血时间相关参数。因此，在一个实施方案中，分析单元适应于按时间间隔、在一个实施方案中按固定时间间距、在又一个实施方案中如本文中他处所述那样，测量相同样品的所述透射相关参数的多个值。在一个实施方案中，分析单元进一步适应于确定参考样品中、在一个实施方案中校正样品中的凝血时间相关参数的值。在又一个实施方案中，分析单元进一步适应于自动提供校正样品，在一个实施方案中适应于自动提供至少两个、在一个实施方案中至少三个、在又一个实施方案中至少五个校正样品，在又一个实施方案中从一种校正母液或从两种校正母液提供。在又一个实施方案中，分析单元包含适应于在350nm至700nm、在一个实施方案中600nm至650nm波长、在又一个实施方案中625±10nm波长、在又一个实施方案中625nm、在又一个实施方案中400nm至450nm波长确定透射相关参数的光学单元。在又一个实施方案中，分析单元包含光学单元适应于排他地在350nm至700nm、在一个实施方案中600nm至650nm波长、在又一个实施方案中625±10nm波长、在又一个实施方案中625nm、在又一个实施方案中400nm至450nm波长确定透射相关参数。
装置的评价单元包含存储器单元，所述存储器单元包含将确定的凝血时间相关参数与所述非抗凝剂干扰物的参考进行比较的有形嵌入式算法。在又一个实施方案中，存储器单元包含校准曲线和/或将所述校准曲线应用于凝血时间相关参数或应用于从中导出的参数的有形嵌入式算法。因此，在一个实施方案中，有形嵌入式算法执行根据本发明方法的确定。在一个实施方案中，评价单元适应于从所述透射相关参数的所述多个值确定凝血相关参数的值。
另外，本发明涉及确定结合胆红素和/或血红蛋白浓度的试剂盒，所述试剂盒包含
i)凝血酶；和
ii)至少一个按预定浓度包含结合胆红素或按预定浓度包含血红蛋白的校准样品。
另外，本发明涉及鉴定具有欠佳质量的血液来源样品的试剂盒，所述试剂盒包含
i)激发凝血的物质；和
ii)至少一个按预定、可检出量包含非抗凝剂干扰物的参考样品。
另外，本发明涉及在个体的血液来源样品中确定非抗凝剂干扰物、在一个实施方案中确定结合胆红素和/或血红蛋白和/或脂质的试剂盒，所述试剂盒包含
i)激发凝血的物质；和
ii)至少一个按预定、可检出量包含非抗凝剂干扰物的参考样品。
如本文所用，术语“试剂盒”指本发明的一组前述化合物、手段或试剂，它们可以或可以不包装在一起。试剂盒的组分可以由独立的壳体组成(即，作为独立部分的试剂盒)或，可以在单一壳体中提供两种或更多种组分。另外，应当理解在一个实施方案中，本发明的试剂盒，应当用于实施上文中提到的方法。在一个实施方案中，构思了以实施上文所提及的方法的即用型方式提供组分，在一个实施方案中提供全部组分。在一个实施方案中，全部或所述组分某些以干燥形式(如以冻干形式)提供，其中使用液体如缓冲水溶液，使组分复溶。在一个实施方案中，全部或所述组分某些以浓缩液体形式提供，其中使用液体如缓冲水溶液，稀释浓缩的组分。在一个实施方案中，全部或所述组分某些以即用型形式提供，即处于它们可以直接使用并且在一个实施方案中不需要稀释的状态。在一个实施方案中，全部或所述组分的某些，尤其参考样品，以冷冻形式提供，例如作为冷冻的溶液提供。另外，试剂盒，在一个实施方案中，含有实施所述方法和(如果适用)所述复溶干燥试剂的说明。说明可以由用户手册以纸质或电子形式提供。此外，手册可以包含用于解读使用本发明试剂盒实施前述方法时所获得的结果的说明。
在一个实施方案中，试剂盒还包含胆红素氧化酶。在又一个实施方案中，试剂盒还包含至少一个校准样品和/或至少一个质量参考样品。在又一个实施方案中，试剂盒还包含选自溴化己二甲胺、鱼精蛋白和肝素酶的化合物；和/或包含抗纤溶剂，在一个实施方案中氨甲环酸或其抗纤溶衍生物或抑酶肽或其抗纤溶衍生物。在一个实施方案中，试剂盒还包含提供钙离子的物质，尤其以至少0.01M、在一个实施方案中至少0.02M的浓度包含钙离子的溶液。在一个实施方案中，试剂盒还包含凝血酶。
在一个实施方案中，试剂盒进一步包含至少一种接触激活物，在一个实施方案中包含二氧化硅、硅藻土、高岭土和/或鞣花酸，尤其硅胶或鞣花酸，在一个实施方案中还包含磷脂；在一个实施方案中，试剂盒还包含(i)至少一个按预定浓度包含结合胆红素的参考样品和/或(ii)至少一个按预定浓度包含血红蛋白的参考样品和/或(iii)至少一个按预定浓度包含脂质的参考样品。因此，在一个实施方案中，试剂盒是一种试剂盒，所述试剂盒包含APTT试剂，在一个实施方案中如本文提到的APTT试剂，和至少一种非抗凝剂干扰物校准样品。
在又一个实施方案中，确定结合胆红素和/或血红蛋白浓度的试剂盒包含校准样品，所述校准样品按至少1mg/dL、在一个实施方案中至少2.5mg/dL、在又一个实施方案中至少5mg/dL的预定浓度包含结合胆红素。在又一个实施方案中，确定结合胆红素和/或血红蛋白浓度的试剂盒包含校准样品，所述校准样品按至少20mg/dL、在一个实施方案中至少50mg/dL、在一个实施方案中至少100mg/dL的预定浓度包含血红蛋白。
另外，本发明涉及确定非抗凝剂干扰物的本发明方法、本发明装置和/或本发明试剂盒用于血液来源样品分析之质量控制的用途。
在一个实施方案中，所述质量控制包括从临床化学分析和/或从凝血分析排除质量欠佳的样品。在又一个实施方案中，质量欠佳的样品是符合如上文详述的至少一个欠佳质量状况的样品。
另外，本发明涉及一种确定个体的血液来源样品中胆红素校正的凝血时间相关参数的方法，所述方法包括a)使所述样品与胆红素氧化酶(EC1.3.3.5)和/或β-葡糖醛酸糖苷酶(EC 3.2.1.31)接触，b)确定步骤a)的样品中凝血时间相关参数的值；和c)因而，确定胆红素校正的凝血时间相关参数。
另外，本发明涉及一种确定个体的血液来源样品中结合胆红素和胆红素校正的凝血时间相关参数的方法，所述方法包括a)确定所述个体的第一血液来源样品中凝血时间相关参数的第一值；b)使所述个体的第二血液来源样品与胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)和/或β-葡糖醛酸糖苷酶(EC 3.2.1.31)接触，c)确定步骤b)的样品中凝血时间相关参数的第二值，d)将从a)中确定的凝血时间相关参数的第一值衍生的参数与参考值比较；e)基于步骤d)的比较结果，确定所述个体中的结合胆红素，f)确定步骤b)的第二样品中凝血时间相关参数的值；并且因而g)确定所述个体中的结合胆红素和胆红素校正的凝血时间相关参数。在一个实施方案中，在这种情况下，第一和第二血液来源样品是个体相同样品的等分试样。
本发明进一步公开并提出一种计算机程序，所述计算机程序包含在计算机或计算机网络上执行程序时，按照本文所纳入的一个或多个实施方案实施本发明方法的计算机可执行指令。具体而言，计算机程序可以存储在计算机可读取数据载体上。因此，特别地，如上文所示的方法步骤a)至d)中一个、多于一个或甚至全部均可以通过使用计算机或计算机网络，优选地通过使用计算机程序实施。
本发明进一步公开并提出一种计算机产品，所述计算机产品具有程序代码手段，旨在在计算机或计算机网络上执行程序时，按照本文所纳入的一个或多个实施方案实施本发明的方法。具体而言，程序代码手段可以存储在计算机可读取数据载体上。
另外，本发明公开并提出了具有其上所存储的数据结构的数据载体，所述数据结构在载入计算机或计算机网络后，如载入计算机或计算机网络的工作存储器或主存储器，可以执行根据本文公开的一种或多种实施方案的方法。
本发明进一步提出并公开了一种计算机程序产品，所述计算机程序产品具有存储在可机读载体上的程序代码手段，旨在计算机或计算机网络上执行程序时，实施根据本文公开的一个或多个实施方案的方法。如本文所用，计算机程序产品涉及作为可交易产品的程序。产品可以通常按照主观样式存在，如以纸质样式存在，或在计算机可读取数据载体上存在。具体而言，计算机程序产品可以分布在数据网络上。
最后，本发明提出并公开了调制数据信号，所述调制数据信号含有计算机系统或计算机网络可读取的指令，以实施根据本文公开的一个或多个实施方案的方法。
优选地，提到本发明的计算机执行方面时，可以通过使用计算机或计算机网络实施根据本文公开的一种或多种实施方案的一个或多个方法步骤或甚至全部方法步骤方法。因此，通常可以通过使用计算机或计算机网络实施任何方法步骤，包括提供和/或操作数据。通常，这些方法步骤可以包括任何方法步骤，一般例外是需要手工作业的方法步骤，如提供样品和/或实施实际测量的某些方面。
具体而言，本发明进一步公开了：
-计算机或计算机网络，包含至少一个处理器，其中处理器适应于实施根据本说明书中描述的实施方案之一的方法，
-计算机可载入数据结构，其适应于数据结构正在计算机上执行时，实施根据本说明书中描述的实施方案之一的方法，
-计算机程序，其中计算机程序适应于该程序在计算机上执行的同时，实施根据本说明书中描述的实施方案之一的方法，
-计算机程序，其包含在计算机上或计算机网络上执行的同时，实施根据本说明书中描述的实施方案之一的方法，
-计算机程序，包含根据前述实施方案的程序手段，其中程序手段存储在计算机可读取的存储介质上，
-存储介质，其中数据结构存储在存储介质上并且其中数据结构适应于已经载入计算机或计算机网络的主要存储设备和/或工作存储设备后，实施根据本说明书中描述的实施方案之一的方法，和
-计算机程序产品，具有程序代码手段，其中程序代码手段可以存储或被存储在存储介质上，以便如果程序代码手段在计算机或在上的计算机网络上执行的，实施根据本说明书中描述的实施方案之一的方法。
鉴于以上所述，特别构思了下实施方案：
1.确定个体血液来源样品中非抗凝剂干扰物的方法，所述方法包括
a)确定所述样品中凝血时间相关参数的值；
b)将a)确定的凝血时间相关参数的值与至少一个参考样品中确定的所述凝血时间相关参数的值比较；并且
c)基于步骤b)的比较结果，确定个体的血液来源样品中的所述非抗凝剂干扰物。
2.实施方案1的方法，其中所述非抗凝剂干扰物是脂质、结合胆红素和/或血红蛋白，在一个实施方案中是结合胆红素和/或血红蛋白，在一个实施方案中是结合胆红素。
3.实施方案1或2的方法，其中步骤a)是用生色测定法、机械测定法或光学照相测定法、在一个实施方案中用光学照相测定法、在又一个实施方案中借助光度法、在又一个实施方案中借助散射比浊法(nephelometry)或借助透射比浊法(turbidimetry)、在又一个实施方案中借助透射比浊法确定所述样品中凝血时间相关参数的值。
4.实施方案1至3中任一项的方法，其中步骤a)包括子步骤a1)：使所述样品与激发凝血的物质接触剂，在一个实施方案中与凝血酶接触。
5.实施方案1至4中任一项的方法，其中步骤a)包括子步骤a2)：在所述样品中激发凝血后的第一时间点，确定透射相关参数的第一值，和子步骤a3)：在所述样品中激发凝血后的第二时间点，确定透射相关参数的第二值。
6.实施方案1至5中任一项的方法，其中步骤a)包括其他子步骤：在所述样品中激发凝血后的其他时间点，确定透射相关参数的其他值。
7.实施方案4至6中任一项的方法，其中步骤a)包括子步骤a4)基于子步骤a2)中确定的透射相关参数的第一值和基于子步骤a3)中确定的上的透射相关参数的第二值，在一个实施方案中基于所述样品中确定的透射相关参数的值，确定所述样品中凝血时间相关参数的值。
8.实施方案1至7中任一项的方法，其中步骤a)包括子步骤
a1)使所述样品与激发凝血的物质接触，在一个实施方案中与凝血酶接触；
a2)在所述样品中激发凝血后的第一时间点，确定所述样品中透射相关参数的第一值；
a3)在所述样品中激发凝血后的第二时间点，确定所述样品中透射相关参数的第二值；并且
a4)基于子步骤a2)和a3)的结果，确定凝血时间相关参数。
9.实施方案1至8中任一项的方法，其中步骤b)包括子步骤b1)提供至少两个、在一个实施方案中至少三个、在又一个实施方案中至少五个具有预定、非相同浓度的所述非抗凝剂干扰物的校准样品。
10.实施方案1至9中任一项的方法，其中步骤b)包括子步骤b2)：确定所述校准样品中每一个的所述凝血时间相关参数的值，在一个实施方案中根据步骤a)的子步骤确定。
11.实施方案10的方法，其中步骤b)包括子步骤b3)：基于子步骤b2)中确定的值，提供校准曲线。
12.实施方案1至11中任一项的方法，其中步骤b)包括子步骤
b1)提供至少两个、在一个实施方案中至少三个、在又一个实施方案中至少五个具有预定、非相同浓度的所述非抗凝剂干扰物的校准样品；
b2)确定所述校准样品中每一个的所述凝血时间相关参数的值，在一个实施方案中根据步骤a)的子步骤确定；并且
b3)基于子步骤b2)中确定的值，提供校准曲线。
13.实施方案1至12中任一项的方法，其中所述样品是血液样品或其衍生物，在一个实施方案中是血浆样品，在又一个实施方案中是柠檬酸盐血浆样品。
14.实施方案1至13中任一项的方法，其中所述个体是表观健康的个体。
15.实施方案1至14中任一项的方法，其中所述个体是并未正在施用抗凝疗法的个体。
16.实施方案1至15中任一项的方法，其中所述个体已知未患有凝血病。
17.实施方案1至16中任一项的方法，其中所述个体是胆红素脑病形成风险升高的个体。
18.实施方案1至17中任一项的方法，其中所述个体是新生者，在一个实施方案中人类新生儿。
19.实施方案1至19中任一项的方法，其中所述个体是年龄小于二个月、在一个实施方案中小于一个月、在一个实施方案中小于二周的人类新生儿。
20.实施方案1至19中任一项的方法，其中所述个体是早产婴儿，在一个实施方案中是在不到37周妊娠分娩的人类婴儿。
21.实施方案1至中任一项的方法，其中所述凝血时间相关参数是活化部分促凝血酶原激酶时间或凝血酶时间，在一个实施方案中是凝血酶时间。
22.实施方案1至21中任一项的方法，其中所述方法包括使所述样品与选自溴化己二甲胺(hexadimethrine bromide)、鱼精蛋白和肝素酶的化合物接触。
23.实施方案1至22中任一项的方法，其中所述方法包括使所述样品与抗纤溶剂、在一个实施方案中与氨甲环酸或其抗纤溶衍生物或抑酶肽或其抗纤溶衍生物接触。
24.实施方案1至23中任一项的方法，其中所述方法包括使所述样品的等分试样与胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)接触并确定所述胆红素氧化酶处理的等分试样中所述凝血时间相关参数的值。
25.实施方案1至24中任一项的方法，其中所述方法还包括确定总胆红素。
26.实施方案1至25中任一项的方法，其中所述方法还包括确定总胆红素并从针对总胆红素和结合胆红素确定的值计算游离胆红素。
27.实施方案9至26中任一项的方法，其中所述校准样品衍生自一种校准物母液。
28.实施方案1至27中任一项的方法，其中至少一个参考样品中确定的所述凝血时间相关参数的所述值是标准曲线。
29.实施方案1至28中任一项的方法，其中所述确定是定量确定，在一个实施方案中是确定浓度。
30.实施方案1至29中任一项的方法，其中所述方法是体外方法。
31.实施方案1至30中任一项的方法，其中所述样品是分离的样品。
32.鉴定具有欠佳质量的血液来源样品的方法，所述方法包括
A)根据实施方案1至31中任一个，确定非抗凝剂干扰物；
B)将步骤A)的结果与质量参考比较；并且
C)基于步骤b)的比较结果，鉴定具有欠佳质量的样品。
33.实施方案32的方法，其中所述非抗凝剂干扰物是结合胆红素和/或血红蛋白，在一个实施方案中是结合胆红素。
34.方法实施方案32或33，其中所述方法包括评价以下状况中至少一个并且其中如果满足以下状况中至少一个，则将所述样品鉴定为具有欠佳质量：
i)所述样品中凝血时间相关参数的值低于质量参考；
ii)所述样品中凝血时间相关参数的值高于质量参考并且用胆红素氧化酶处理所述样品后，凝血时间相关参数的值显著较低；
iii)确定的血红蛋白浓度高于20mg/dL，在一个实施方案中高于50mg/dL；
iv)确定的结合胆红素浓度高于1mg/dl，在一个实施方案中高于2.5mg/dL；
v)确定的脂质浓度高于100mg/dL，在一个实施方案中高于250mg/dL；和
vi)凝血之前所述样品中透射相关参数的值高于透射参考的值。
35.实施方案32至34中任一项的方法，其中所述质量参考是质量参考范围或质量参考曲线。
36.实施方案32至35中任一项的方法，其中所述质量参考的下限是正常样品中凝血时间相关参数的值-20％，在一个实施方案中-10％，在又一个实施方案中-7.5％。
37.实施方案32至36中任一项的方法，其中所述质量参考的上限是正常样品中凝血时间相关参数的值+20％，在一个实施方案中+10％，在又一个实施方案中+7.5％。
38.实施方案32至37中任一项的方法，其中所述质量参考是这样的质量参考范围，其是正常样品中凝血时间相关参数的值±20％，在一个实施方案中是±10％，在又一个实施方案中是±7.5％。
39.实方实施方案32至35或37中任一项的方法，其中所述质量参考的下限是正常样品中凝血时间相关参数的值的正常下限。
40.实施方案32至36中任一项的方法，其中所述质量参考的上限是正常样品中凝血时间相关参数的值的正常上限。
41.实施方案32至40中任一项的方法，其中所述透射参考是正常样品中透射相关参数的值+20％，在一个实施方案中是+10％，在又一个实施方案中是+7.5％。
42.实施方案32至41中任一项的方法，其中所述透射参考是正常样品中透射相关参数的值的正常上限。
43.实施方案32至42中任一项的方法，其中所述确定是半定量确定，在一个实施方案中是定量确定，在又一个实施方案中是确定浓度。
44.实施方案32至43中任一项的方法，其中从临床化学分析排除鉴定为具有欠佳质量的样品和/或将其用胆红素氧化酶处理，之后进一步分析。
45.确定血液来源样品中非抗凝剂干扰物的装置，包含分析单元和评价单元，其中
(I)所述分析单元适应于确定所述样品中凝血时间相关参数的值，并且(II)所述评价单元包含存储器单元，所述存储器单元包含将分析单元确定的凝血时间相关参数与所述非抗凝剂干扰物的参考进行比较的有形嵌入式算法。
46.实施方案45的装置，其中所述分析单元进一步适应于确定校正样品中所述凝血时间相关参数的值。
47.实施方案45或46的装置，其中所述分析单元进一步适应于自动提供校正样品，在一个实施方案中适应于自动提供至少两个校正样品、在一个实施方案中自动提供至少三个校正样品、在又一个实施方案中自动提供至少五个校正样品，在又一个实施方案中从一种校正母液提供。
48.实施方案45至47中任一项的装置，其中所述分析单元包含适应于在350nm至700nm、在一个实施方案中600nm至650nm波长、在又一个实施方案中625±10nm波长、在又一个实施方案中625nm、在又一个实施方案中400nm至450nm波长确定透射相关参数的光学单元。
49.实施方案45至48中任一项的装置，其中所述分析单元包含光学单元适应于排他地在350nm至700nm、在一个实施方案中600nm至650nm波长、在又一个实施方案中625±10nm波长、在又一个实施方案中625nm、在又一个实施方案中400nm至450nm波长确定透射相关参数。
50.实施方案45至49中任一项的装置，其中通过光学照相方法、在一个实施方案中通过光度法、在又一个实施方案中通过散射比浊法或通过透射比浊法、在又一个实施方案中通过透射比浊法，确定所述透射相关参数。
51.实施方案45至50中任一项的装置，其中所述分析单元适应于通过散射比浊法或通过透射比浊法、在一个实施方案中通过透射比浊法确定所述透射相关参数。
52.实施方案45至51中任一项的装置，其中所述装置适应于包括实施方案1至44中任一项的附加特征。
53.确定结合胆红素和/或血红蛋白浓度的试剂盒，包含
i)凝血酶；和
ii)至少一个按预定浓度包含结合胆红素或按预定浓度包含血红蛋白的校准样品。
54.实施方案53的试剂盒，其中所述预定浓度超过浓度正常样品至少20％、在一个实施方案中超过至少10％。
55.实施方案53或54的试剂盒，其中所述试剂盒包含校准样品，所述校准样品按至少1mg/dL、在一个实施方案中至少2.5mg/dL、在又一个实施方案中至少5mg/dL的预定浓度包含结合胆红素。
56.实施方案53至55中任一项的试剂盒，其中所述试剂盒包含校准样品，所述校准样品按至少20mg/dL、在一个实施方案中至少50mg/dL、在一个实施方案中至少100mg/dL的预定浓度包含血红蛋白。
57.鉴定具有欠佳质量的血液来源样品的试剂盒，包含
i)激发凝血的物质；和
ii)至少一个按预定、可检出量包含非抗凝剂干扰物的参考样品。
58.实施方案53至57中任一项的试剂盒，其中所述试剂盒还包含胆红素氧化酶。
59.实施方案53至58中任一项的试剂盒，其中所述试剂盒还包含至少一个校准样品和/或至少一个质量参考样品。
60.实施方案53至59中任一项的试剂盒，其中所述试剂盒还包含选自溴化己二甲胺、鱼精蛋白和肝素酶的化合物。
61.实施方案53至60中任一项的试剂盒，其中所述试剂盒还包含抗纤溶剂、在一个实施方案中还包含氨甲环酸或其抗纤溶衍生物或抑酶肽(aprotinin)或其抗纤溶衍生物。
62.实施方案53至61中任一项的试剂盒，其中所述试剂盒还包含接触激活物、尤其硅胶或鞣花酸，在一个实施方案中还包含磷脂。
63.实施方案57至62中任一项的试剂盒，其中所述试剂盒还包含凝血酶。
64.根据实施方案1至44中任一项的方法、根据实施方案45至52中任一项的装置和/或根据实施方案53至63中任一项的试剂盒的用途，用于血液来源样品分析之质量控制。
65.实施方案64的用途，其中所述质量控制包括从临床化学分析和/或从凝血分析排除质量欠佳的样品。
66.实施方案的用途64或65，其中质量欠佳的样品是符合根据实施方案34的至少一个状况的样品。
67.在个体血液来源样品中确定非抗凝剂干扰物、在一个实施方案中确定结合胆红素和/或血红蛋白和/或脂质的试剂盒，所述试剂盒包含
i)激发凝血的物质；和
ii)至少一个按预定、可检出量包含非抗凝剂干扰物的参考样品。
68.实施方案67的试剂盒，其中所述激发凝血的物质是接触激活物，在一个实施方案中是二氧化硅、硅藻土(celite)、高岭土和/或鞣花酸。
69.实施方案67或68的试剂盒，其中所述试剂盒还包含提供钙离子的物质。
70.实施方案67至69中任一项的试剂盒，其中所述至少一个参考样品是(i)至少一个按预定、可检出量包含结合胆红素(conjugated bilirubin)的参考样品和/或(ii)至少一个按预定、可检出量包含血红蛋白的参考样品和/或(iii)至少一个按预定、可检出量包含脂质的参考样品。
71.实施方案67至70中任一项的试剂盒，其中所述试剂盒还包含胆红素氧化酶。
72.确定个体血液来源样品中胆红素校正的凝血时间相关参数的方法，所述方法包括
a)使所述样品与胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)和/或β-葡糖醛酸糖苷酶(EC3.2.1.31)接触，
b)确定步骤a)的样品中凝血时间相关参数的值；和，
c)因而，确定胆红素校正的凝血时间相关参数。
73.确定个体中结合胆红素和胆红素校正的凝血时间相关参数的方法，所述方法包括
a)确定所述个体的第一血液来源样品中凝血时间相关参数的第一值；
b)使所述个体的第二血液来源样品与胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)和/或β-葡糖醛酸糖苷酶(EC 3.2.1.31)接触，
c)确定步骤b)的样品中凝血时间相关参数的第二值，
d)将从a)中确定的凝血时间相关参数的第一值衍生的参数与参考比较；
e)基于步骤d)的比较结果，确定所述个体中的结合胆红素，
f)确定步骤b)的第二样品中凝血时间相关参数的值；和，因而
g)确定所述个体中的结合胆红素和胆红素校正的凝血时间相关参数。
74.实施方案73的方法，其中所述第一和第二血液来源样品是个体相同样品的等分试样。
将本说明书中援引的全部参考文献在此就其完整公开内容和本说明书中具体提到的公开内容而言均通过引用的方式并入。
本说明书中引用的所有参考文献均完整引入作为参考，尤其是其中具体提及的公开内容引入作为参考。
图注
图1：使用APTT试剂在Roche t711凝血分析仪上确定结合胆红素(bilic)的校准曲线。将正常血浆汇集物用渐增量的结合胆红素内标(spike)。
图2：使用APTT试剂在Roche t711凝血分析仪上确定结合胆红素(bilic)的校准曲线。将病理性血浆汇集物用渐增量的结合胆红素内标。
图3：使用APTT试剂在Roche t711凝血分析仪上确定非结合胆红素(biliu)的校准曲线。将正常血浆汇集物用渐增量的非结合胆红素内标。
图4：使用APTT试剂在Roche t711凝血分析仪上确定血红蛋白的校准曲线。正常血浆用渐增量的血红蛋白内标并经历使用Roche APTT LS试剂的活化部分促凝血酶原激酶时间测定法。
图5：使用APTT试剂在Roche t711凝血分析仪上确定甘油三酯的校准曲线。正常血浆用渐增量的
Figure BDA0002093218760000311
内标并经历使用Roche APTT LS试剂的活化部分促凝血酶原激酶时间测定法。
图6：使用APTT试剂在Roche t711凝血分析仪上确定甘油三酯的校准曲线。病理性血浆汇集物用渐增量的
Figure BDA0002093218760000312
内标并经历使用Roche APTT LS试剂的活化部分促凝血酶原激酶时间测定法。
图7：使用凝血酶时间试剂在Roche Cobas t711凝血分析仪上确定结合胆红素(bilic)的校准曲线。将正常血浆汇集物用渐增量的结合胆红素内标。
图8：使用凝血酶时间试剂在Roche Cobas t711凝血分析仪上确定结合胆红素(bilic)的校准曲线。将病理性血浆汇集物用渐增量的结合胆红素内标。
图9：使用凝血酶时间试剂在Roche Cobas t711凝血分析仪上确定非结合胆红素(biliu)的校准曲线。将正常血浆汇集物用渐增量的非结合胆红素内标。
图10：使用凝血酶时间试剂在Roche Cobas t711凝血分析仪上确定血红蛋白的校准曲线。将病理性血浆用渐增量的血红蛋白内标
以下实施例应当仅说明本发明。它们不应解释为限制本发明的范围。
实施例1：样品中结合胆红素(bilic)的定量(APTT测定法)
出乎意料地发现，可以在自动化凝血分析仪(Roche cobas t711)上使用市售的活化部分促凝血酶原激酶时间试剂(Roche APTT LS试剂，正在开发)定量结合胆红素(bilic)。向正常血浆样品添加渐增浓度的结合胆红素显示在添加的结合胆红素的量和所产生以[秒]计的凝血时间之间线性正相关。这意味着APTT测定法的凝血时间依赖于内标结合胆红素的量系统延长(表1)。
表1：使用APTT试剂的结合胆红素(bilic)定量。将结合胆红素按渐增的量内标至正常血浆。随后，这种血浆经历使用APTT试剂的活化部分促凝血酶原激酶时间测定法。测定法：在Roche Cobas t711凝血分析仪上Roche APTT LS，样品：正常血浆汇集物。
Figure BDA0002093218760000321
这显示，与正常血浆样品组合的APTT测定法可以用来确定血浆样品中结合胆红素的未知量。表1中显示的数据的图示是胆红素确定测定法的标准曲线(图1)。当使用以渐增浓度的结合胆红素内标的病理性血浆汇集物时，获得相似的结果(图2)。
使用来自图1的标准曲线和相应等式，可以在数秒内从APTT结果推导出结合胆红素的未知量(≥2mg/dL)。例如：
Figure BDA0002093218760000322
31秒的APTT结果将导致结合胆红素浓度x＝11.74mg/dL。
通过将渐增量的bilic内标至正常血浆样品，产生上文显示的标准曲线。病理性血浆样品用渐增量的bilic内标并经历APTT测定法时，获得相似的结果。这表明在凝血时间和胆红素浓度之间存在系统的剂量依赖性。
与采用结合胆红素(bilic)获得的结果相反，可以显示非结合胆红素(biliu)仅略微地影响APTT结果，甚至在高浓度中也是如此(表2和图3)。
表2：使用APTT试剂的非结合胆红素(biliu)定量。将非结合胆红素按渐增的量内标至正常血浆。随后，这种血浆经历使用Roche APTT LS试剂的APTT测定法。在Roche Cobast711凝血分析仪上APTT LS；样品：正常血浆汇集物。
Figure BDA0002093218760000331
这显示，基于APTT试剂的胆红素测定法可以用来在不受非结合胆红素明显干扰的情况下，确定结合胆红素。这种测定法允许区分结合胆红素和非结合胆红素，当使用常规方法时，这是微不足道的。
实施例2：样品中血红蛋白的定量(APTT测定法)
基本上类似于上文描述的方法和示例，发现相同的APTT试剂(Roche APTT LS)可以用来在自动化凝血分析仪(Roche Cobas t711凝血分析仪，目前正在开发)上定量柠檬酸盐血浆样品中的血红蛋白浓度。向病理性血浆样品添加渐增浓度的血红蛋白显示，在添加的血红蛋白的量和所产生以[秒]计的凝血时间之间线性负相关。与显示凝血时间随bilic浓度渐增而剂量依赖性延长的胆红素定量方法相反，APTT测定法的凝血时间依赖于内标的血红蛋白的量系统地缩短(表3)。
表3：使用APTT试剂的血红蛋白定量。将血红蛋白按渐增的量内标至柠檬酸化的正常血浆。随后，这种血浆经历使用APTT试剂的活化部分促凝血酶原激酶时间测定法。测定法：在Roche Cobas t711凝血分析仪上Roche APTT LS，样品：正常血浆汇集物。
Figure BDA0002093218760000341
这显示，与正常血浆样品组合的APTT测定法适合确定血浆样品中血红蛋白的未知量。表3中显示的数据的图示是血红蛋白确定测定法的标准曲线(图4)。
使用来自图4的标准曲线和相应等式，可以在数秒内从APTT结果推导出血红蛋白的未知量。例如：
Figure BDA0002093218760000342
27秒的APTT结果将导致血红蛋白浓度x＝785.71mg/dL。
类似于上文描述的胆红素定量方法，使用的APTT试剂可以按照如此方式调整，从而添加肝素中和剂并且因而系统地改善用于定量血红蛋白的APTT结果的特异性。
实施例3：样品中甘油三酯的定量(APTT测定法)
基本上类似于上文描述的方法和示例，发现相同的APTT试剂(Roche APTT LS)可以用来在自动化凝血分析仪(Roche Cobas t711)上定量柠檬酸盐血浆样品中的甘油三酯浓度。向病理性血浆样品添加渐增浓度的
Figure BDA0002093218760000343
(大豆油(20％w/v)乳液，借助纯化的卵磷脂和丙三醇乳化)显示，在添加的
Figure BDA0002093218760000344
的量和所产生以[秒]计的凝血时间之间线性负相关。与显示凝血时间随bilic浓度渐增而剂量依赖性延长的胆红素定量方法相反，APTT测定法的凝血时间依赖于内标的
Figure BDA0002093218760000345
的量系统地缩短(表4)。
表4：使用APTT试剂的甘油三酯定量。将
Figure BDA0002093218760000353
按渐增的量内标至柠檬酸化的正常血浆。随后，这种血浆经历使用APTT试剂的活化部分促凝血酶原激酶时间测定法。测定法：在t711凝血分析仪上Roche APTT LS，样品：正常血浆汇集物。
Figure BDA0002093218760000351
这显示，与正常血浆样品组合的APTT测定法适合确定血浆样品中甘油三酯的未知量。表4中显示的数据的图示是血红蛋白确定测定法的标准曲线(图5)。
使用来自图5的标准曲线和相应等式，可以在数秒内从APTT结果推导出甘油三酯的未知量。例如：
Figure BDA0002093218760000352
27.9秒的APTT结果将导致血红蛋白浓度x＝283.88mg/dL。
病理性血浆样品用渐增量的
Figure BDA0002093218760000354
内标并经历APTT测定法时，获得相似的结果。这表明在凝血时间和
Figure BDA0002093218760000355
浓度之间存在系统的剂量依赖性(图6)。
类似于上文描述的胆红素定量方法，使用的APTT试剂可以按照如此方式调整，从而添加肝素中和剂并且因而系统地改善用于定量血红蛋白的APTT结果的特异性。
实施例4：样品中结合胆红素(bilic)的定量(凝血酶时间测定法)
出乎意料地发现，可以在自动化凝血分析仪(Roche Cobas t711凝血分析仪，目前正在开发)使用凝血酶试剂(Roche凝血酶时间试剂，正在开发)定量结合胆红素(bilic)。向正常血浆样品添加渐增浓度的结合胆红素显示在添加的结合胆红素的量和所产生以[秒]计的凝血时间之间线性正相关。这意味着凝血时间凝血酶时间(TT)测定法的凝血时间依赖于内标结合胆红素的量系统延长(表5)。
表5：使用凝血酶试剂定量结合胆红素(bilic)。将结合胆红素按渐增的量内标至正常血浆。随后，这种血浆经历使用商业凝血酶试剂的凝血酶时间测定法。测定法：在RocheCobas t711凝血分析仪(目前正在开发)上凝血酶时间，样品：正常血浆汇集物
Figure BDA0002093218760000361
这显示，与正常血浆样品组合的凝血酶时间测定法(TT测定法中的有效成分是凝血酶)可以用来确定血浆样品中结合胆红素的未知量。表5中显示的数据的图示是胆红素确定测定法的标准曲线(图7)。
使用来自图7的标准曲线和相应等式，可以在数秒内从TT结果导出结合胆红素的未知量(≥1mg/dL)。例如：
Figure BDA0002093218760000362
19秒的TT结果将导致结合胆红素浓度x＝4.95mg/dL。
通过将渐增量的bilic内标至正常血浆样品，产生上文显示的标准曲线。病理性血浆样品用渐增量的bilic内标并经历凝血酶时间测定法时，获得相似的结果(图8)。这表明在凝血时间和胆红素浓度之间存在系统的剂量依赖性。
与采用结合胆红素(bilic)获得的结果相反，可以显示非结合胆红素(biliu)似乎不影响凝血酶时间结果，甚至在高浓度中也是如此(表6和图9)。
表6：使用凝血酶试剂的非结合胆红素(biliu)定量。将非结合胆红素按渐增的量内标至正常血浆。随后，这种血浆经历使用商业凝血酶试剂的凝血酶时间测定法。测定法：在Roche Cobas t711凝血分析仪上凝血酶时间，样品：正常血浆汇集物。
Figure BDA0002093218760000371
这显示，基于凝血酶试剂的胆红素测定法可以用来在不受非结合胆红素明显干扰的情况下，确定结合胆红素。这种测定法允许区分结合胆红素和非结合胆红素，当使用常规方法时，这是微不足道的。
实施例5：样品中血红蛋白的定量(TT测定法)
基本上类似于上文描述的实施例4的方法，发现相同的凝血酶试剂(Roche凝血酶时间试剂)可以用来在自动化凝血分析仪(Roche Cobas t711凝血分析仪，目前正在开发)上定量柠檬酸化血浆样品中的血红蛋白浓度。向病理性血浆样品添加渐增浓度的血红蛋白显示，在添加的血红蛋白的量和所产生以[秒]计的凝血时间之间线性负相关。与显示凝血时间随bilic浓度渐增而剂量依赖性延长的胆红素定量方法相反，凝血酶时间测定法的凝血时间依赖于内标的血红蛋白的量系统地缩短(表7)。
表7：使用凝血酶试剂时血红蛋白的定量。将血红蛋白按渐增的量内标至柠檬酸化的正常血浆。随后，这种血浆经历使用商业凝血酶试剂的凝血酶时间(TT)测定法。测定法：在Roche Cobas t711凝血分析仪上凝血酶时间，样品：病理性血浆汇集物。
Figure BDA0002093218760000372
Figure BDA0002093218760000381
这显示，与病理性血浆样品组合的凝血酶时间测定法适合确定血浆样品中血红蛋白的未知量。表7中显示的数据的图示是血红蛋白确定测定法的标准曲线(图10)。
使用来自图10的标准曲线和相应等式，可以在数秒内从TT结果导出血红蛋白的未知量。例如：
Figure BDA0002093218760000382
35秒的TT结果将导致血红蛋白浓度x＝919.58mg/dL。
类似于上文描述的胆红素定量方法，使用的凝血酶试剂可以按照如此方式调整，从而将要添加肝素中和剂，并且因而系统地改善用于定量血红蛋白的凝血酶时间的特异性。

Claims (18)

1.确定个体血液来源样品中结合胆红素的方法，所述方法包括
a)确定所述样品中凝血酶时间的值；
b)将a)确定的凝血酶时间的值与至少一个参考样品中确定的凝血酶时间的值比较；并且
c)基于步骤b)的比较结果，确定个体的血液来源样品中的结合胆红素，
其中步骤a)是用光学照相测定法确定所述样品中凝血酶时间的值。
2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤a)是通过透射比浊法确定所述样品中凝血酶时间的值。
3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤a)包括子步骤
a1)使所述样品与凝血酶接触；
a2)使样品与凝血酶接触后，在第一时间点确定所述样品中透射相关参数的第一值；
a3)使样品与凝血酶接触后，在第二时间点确定所述样品中透射相关参数的第二值；并且
a4)基于子步骤a2)和a3)的结果，确定凝血酶时间的值。
4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤b)包括子步骤
b1)提供至少两个、在一个实施方案中至少三个、在又一个实施方案中至少五个具有预定、非相同浓度的结合胆红素的校准样品；
b2)确定所述校准样品中每一个的凝血酶时间的值，在一个实施方案中根据步骤a)的子步骤确定；并且
b3)基于子步骤b2)中确定的值，提供校准曲线。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述样品是柠檬酸盐血浆样品。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述方法还包括使所述样品的等分试样与胆红素氧化酶EC 1.3.3.5和/或β-葡糖醛酸糖苷酶EC 3.2.1.31接触并且确定所述样品的等分试样中凝血酶时间的值。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述方法还包括确定总胆红素的值并从针对总胆红素和结合胆红素确定的值计算游离胆红素。
8.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述个体是胆红素脑病形成风险升高的个体。
9.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述个体是并未正在施用抗凝疗法的个体。
10.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述确定是定量确定。
11.鉴定具有欠佳质量的血液来源样品的方法，所述方法包括
A)根据权利要求1至10中任一项所述的方法确定结合胆红素；
B)将步骤A)的结果与质量参考比较；并且
C)基于步骤b)的比较结果，鉴定具有欠佳质量的样品。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述方法包括评价以下状况中至少一个并且其中如果满足以下状况中至少一个，则将所述样品鉴定为具有欠佳质量：
i)所述样品中凝血时间相关参数的值低于质量参考；
ii)所述样品中凝血时间相关参数的值高于质量参考并且用胆红素氧化酶和/或β-葡糖醛酸糖苷酶处理所述样品后，凝血时间相关参数的值显著较低；和
iii)确定的结合胆红素浓度高于1mg/dl，在一个实施方案中高于2.5mg/dL。
13.根据权利要求11或12所述的方法，其中从临床化学分析排除鉴定为具有欠佳质量的样品。
14.确定血液来源样品中结合胆红素的装置，包含分析单元和评价单元，其中
(I)所述分析单元适应于确定所述样品中凝血酶时间的值，其中所述凝血酶时间的值用光学照相方法确定，并且
(II)所述评价单元包含存储器单元，所述存储器单元包含将分析单元确定的凝血酶时间的值与结合胆红素的参考进行比较的有形嵌入式算法。
15.根据权利要求1至13中任一项所述的方法或根据权利要求14所述的装置通过用光学照相测定法确定凝血酶时间的值来确定结合胆红素，用于血液来源样品分析之质量控制的用途。
16.确定个体的血液来源样品中胆红素校正的凝血时间相关参数的方法，所述方法包括：
a)使所述样品与胆红素氧化酶EC 1.3.3.5和/或β-葡糖醛酸糖苷酶EC 3.2.1.31接触，
b)确定步骤a)的样品中凝血时间相关参数的值；和，
c)因而，确定胆红素校正的凝血时间相关参数。
17.确定个体中结合胆红素和胆红素校正的凝血时间相关参数的方法，所述方法包括：
a)确定所述个体的第一血液来源样品中凝血时间相关参数的第一值；
b)使所述个体的第二血液来源样品与胆红素氧化酶EC 1.3.3.5和/或β-葡糖醛酸糖苷酶EC 3.2.1.31接触，
c)确定步骤b)的样品中凝血时间相关参数的第二值，
d)将a)中确定的凝血时间相关参数的第一值衍生的参数与参考比较；
e)基于步骤d)的比较结果，确定所述个体中的结合胆红素，
f)确定步骤b)的第二样品中凝血时间相关参数的值；和，因而
g)确定所述个体中的结合胆红素和胆红素校正的凝血时间相关参数。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述第一和第二血液来源样品是个体相同样品的等分试样。
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