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CN1196679A - 结肠腺瘤治疗方法 - Google Patents

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CN1196679A
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J·埃文斯
T·J·思蒙
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Merck and Co Inc
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Abstract

本发明涉及一种阻滞或防止结肠腺瘤向结肠腺癌转化的方法,包括对有FAP(家族腺瘤性息肉病)的患者或者有一种或多种所述腺瘤的患者给药一无毒治疗有效量的NSAID(非甾类抗炎药),所述量能有效抑制所述腺瘤中的PGHS－2。较好的方法包括给药本文中所定义的一种特效PGHS－2抑制剂。

Description

结肠腺瘤治疗方法
发明背景
本申请涉及通过给药一无毒治疗有效量的一种非甾类抗炎剂(NSAID)来治疗结肠腺瘤的方法。具体地说，本申请涉及通过给药一种无毒治疗有效的特异PGHS-2抑制剂来防止或阻滞结肠腺瘤向结肠腺癌转变的方法。
前列腺素G/H合成酶(PGHS)这种酶，是导致前列腺素生成的生物合成途径中的一种关键酶(Watkins，W.D.，Peterson，M.B.，和Fletcher，J.R.ed.Prostaglandins in Clinical Practice.NewYork：Raven，1989和Dewitt，D.L.前列腺素桥过氧化物合成酶：调控与酶表达。Biochim.Biophys. Acta，1083；121-134，1991)。这类前列腺素(prostanoids)是有多种多样正常生理效应的强力生物传递质，也有人将其与包括发炎和肿瘤转变在内的各种病理学症状联系起来(Watkins，W.D.，Peterson，M.B.，和Fletcher，J.R.edProstaglandins  in  Clinical Practice.New  York：Raven，1989和Dewitt，D.L.前列腺素桥过氧化物合成酶：调控与酶表达。Biochim.Biophys. Acta，1083；121-134，1991及Xie，W.，Robertson，D.L.，and  Simmons.D.L.有丝分裂原可诱变前列腺素G/H合成酶：非甾类抗炎药的一个新目标。Drug Dev.  Res.，25；249-265，1992)。已经有人鉴别了PGHS的两种重整异构型(Loll，P.J.andGaravito，R.M.环氧化酶的重整异构型：结构与功能。Expert Opin.Invest.Drugs，3；1171-1180，1994)。PGHS-1从构成上看表达于大多数组织中，而且已经有人提出它会产生正常生理功能所需要的前列腺素。第二种重整异构型PGHS-2的特征是它能被各种各样刺激迅速诱发，其中包括有丝分裂原、激素、细胞因子和生长因子(Loll，P.J.和Garavito.R.M.，环氧化酶的重整异构型：结构与功能，Expert opin.Invest.Drugs，3；1171-1180，1994和Battistini，B.，Botting，R.和Bakhle，Y.S.，COX-1和COX-2：推动更具选择性的NSAIDS的发展，Drug News Perspectives，7；501-512，1994)。在发炎等症状中，PGHS-2衍生的前列腺素可能是占主导的效应物(Masferrer，J.L；  Zweifel，B.S.；Manning，P.T.；Hauser，S.D.；Leahy，K.M.；Smith，W.G.；Isakson，P.C.；和Seibert，K.，活体中可诱发环氧化酶2的选择性抑制是抗炎的和非致溃的；Proc.Natl.Acad.Sci.USA；91；3228-3232，1994)。PGHS-1和PGHS-2两者均已被显示是非甾素抗炎药(NSAIDs)的靶(Battistini，B.，Botting，R.和Bakhle，Y.S.，COX-1和COX-2：推动更具选择性的NSAIDS的发展，Drug NewsPerspectives，7；501-512，1994和O′Neil，G.P.，Mancini，J.A.，Kargman，S.，Yergey，J.，Kwan，M.Y.，Falgueyret，J.-P.，Abramovitz，M.，Kennedy，B.P.，Ouellet，M.，Cromlish，W.，Culp，S.，Evans，J.F.，Ford-Hutchinson，A.W.和Vickers，P.J.，重组体牛痘病毒对人体前列腺素G/H合成酶-1和-2的过度表达：非甾类抗炎药引起的抑制和15-羟基廿碳四烯酸的生物合成，Mol.Pharmacol.，45；245-254，1994和Dewitt，D.L.，Meade，E.A.和Smith，W.L.，PGH合成酶同功酶选择性：更安全非甾类抗炎药的潜力，Am.J.Med.(Suppl.)，95；40S-44S，1993)。也请参阅1994年7月7日公布的WO 94/14977，该文献公开了PGHS-2抑制剂的药效以及PGHS-2相对于PGHS-1的选择性的评估方法。
已有人证实在各种癌症包括肺癌和结肠癌中前列腺素的水平提高了(Mclemore，T.L.，Hubbard，W.C.，Litterst，C.L.，Liu，M.C.，Miller，S.，McMahon，N.A.，Eggleston，J.C.，和Boyd，M.R.)肺癌患者的正常肺和肿瘤组织中前列腺素生物合成概况，Cancer Res.，48；3140-3147，1988和Rigas，B.，Goldman，I.S.，和Levine，L.人体结肠癌中改变的类廿碳烷水平，J.Lab.Clin.Med.，122；518-523，1993)。具体地说，已经有人显示，同组织学上正常的粘膜相比，良性腺瘤性息肉中的前列腺素水平是偏高的，而在癌性结肠组织中又进一步提高。由于类前列腺素已被显示是免疫抑制性的，因而它们可能在肿瘤发育中发挥作用(Earnest，D.L.，Hixson，L.J.，和Alberts，D.S.，Piroxicam及其它环氧化酶抑制剂：癌症化学预防的潜力，J.Cell.Biochem.，161(Suppl)；156-166，1992)。
从1970年代后期以来，研究者就一直在考虑阿司匹林和有关非甾类抗炎药(NSAIDS)也许有益于某些癌症包括结肠癌的治疗的可能性。
表明阿司匹林可以降低结肠直肠癌风险的第一项流行病学研究出现于1988年，是一份来自澳大利亚墨尔本的回溯探讨性分析(Cancer，Res.，48：4399-4404，1988)。该研究发现，与从不服用阿司匹林的人相比，在经常服用阿司匹林的人当中结肠癌发病的风险低40％。最近，Heath等人的数据表明NSAIDs可能有益于预防结肠直肠肿瘤(Heath，C.W.，Jr.，Thun，M.J.，Greenberg，E.R.，Levin，B.，和Marnett，L.J.非甾类抗炎药和人体癌症，Cancer，74；2885-2888，1994)。然而，尽管有这项研究和随后的研究，但还是既没有过硬的证据把阿司匹林的服用与结肠癌的预防联系起来，也没有任何过硬的证据证实结肠直肠癌与PGHS之间的病理学联系或阿司匹林给药对抑制PGHS的治疗价值。例如，关节炎患者(其中很多人服用阿司匹林)可能只是不太容易患结肠癌而己。
在本申请中，我们公开了一些研究工作，其中我们分析了25对正常和自体固有结肠肿瘤、4种恶化前结肠息肉、5种对照结肠组织(来自非癌患者)和3种匹配的正常与癌性人体乳腺组织中人体PGHS-1和PGHS-2蛋白的表达。来自这项研究的观测结果包括：与组织学上正常的结肠粘膜相比，结肠肿瘤组织中PGHS-1蛋白减少了；而且在大多数结肠肿瘤样品中都检测到PGHS-2，而在正常组织、息肉和乳腺癌样品中实际上是不可检测的。结肠肿瘤组织中提高的前列腺素水平是从可诱导PGHS-2重整异构型衍生的。这些研究支持了我们的信念：结肠腺瘤向结肠腺癌的转变是通过该腺瘤中大幅度和令人惊讶的过度产生PGHS-2传递的。因此，我们已经令人惊讶地发现了一种阻滞或防止结肠腺瘤向结肠腺癌转变的方法，其中包括向有FAP(家族腺瘤性息肉病)历史的患者或有一种或多种结肠腺瘤的患者给药一无毒治疗有效量的NSAID；所述量能有效抑制所述腺瘤中的PGHS-2。
附图简单说明
图1  正常人体结肠结膜和自体固有肿瘤组织中PGHS-1和PGHS-2蛋白表达的代表性免疫斑(immunoblot)分析。
图2  与自体固有正常粘膜比较的、匹配肿瘤中PGHS-1和PGHS-2蛋白表达变化的定量。
图3  证实ApcΔ716处理小鼠中尺寸范围为直径0.3-5mm的息肉中PGHS-1和PGHS-2表达的免疫斑分析。
发明概要
本发明涉及一种阻滞或防止结肠腺瘤向结肠腺癌转变方法，包括向有FAP的患者或有一种或多种所述腺瘤的患者给药一无毒治疗有效量的NSAID，所述量能有效抑制所述腺瘤中的PGHS-2。较好的方法包括给药这里所定义的一种特异PGHS-2抑制剂。
附图详细说明
图1  正常人体结肠粘膜与自体固有肿瘤组织中PGHS-1和PGHS-2蛋白表达的代表性免疫斑分析。用抗PGHS-1抗血清进行的免疫斑分析(板A)，和用抗PGHS-2抗血清对与板A所示那些相同的样品进行的免疫斑分析(板B)。纯化的PGHS标准物和微粒体蛋白样品(50μg/道)用SDS-PAGE分离、转移到硝基纤维素上、用抗PGHS抗血清点免疫斑(immunoblotted)、用强化的化学发光法检测。号码1-4指出来自所考察25名患者中4名代表性患者的样品。此图中患者1-4的光密度测定值对应于图2中所示的患者17-20。N和T分别表示每位患者匹配的正常结肠粘膜和肿瘤组织。纯化的PGHS-1和PGHS-2标准物显示在左侧。指出了分子量标记物(markers)的位置。
图2  与自体固有正常粘膜比较的、匹配的肿瘤组织中PGHS-1和PGHS-2蛋白表达变化的定量。PGHS标准物和来自25位患者的微粒体蛋白的各等分试样(50μg/道)用SDS-PAGE分离、转移到硝基纤维素上、用抗PGHS-1或抗PGHS-2抗血清点免疫斑、用强化的化学发光法检测。PGHS蛋白的数量用光密度法测定。来自已知量的纯化PGHS-1和PGHS-2标准物的扫描放射自显影图的光密度读数用来定量测定来自正常粘膜和肿瘤样品的微粒体样品中PGHS-1与PGHS-2蛋白的近似数量。数值代表每位患者从正常粘膜到肿瘤组织用ng表示的表达变化。
图3  说明尺寸范围为直径0.3-5mm的息肉中PGHS-1和PGHS-2表达的免疫斑分析。(道1-5分别对应于直径大约1-5mm的息肉所产生的样品。)所有肠的和结肠的对照样品与息肉样品中全部证实有PGHS-1蛋白。在肠或结肠对照样品中没有检测到PGHS-2免疫反应性。尽管在较大的肠息肉(直径3-5mm)(道3、4和5)中检测了低水平的PGHS-2蛋白，但在尺寸范围为直径1-5mm(道1-5)的所有结肠息肉样品中全部检测到较高水平的PGHS-2免疫反应性化学种，并证实在直径2-3mm(道2和3)的息肉中有非常高水平的PGHS-2蛋白。纯化的绵羊PGHS-1和PGHS-2蛋白(5ng、10ng和20ng)被电泳分离作为标准物，并进行标记。
本发明的详细说明
在一种实施方案中，本发明涉及一种阻滞或防止结肠腺瘤向结肠腺癌转变的方法，其中包括向有FAP史的患者或者有一种或多种腺瘤的患者给药一无毒治疗有效量的非甾类抗炎药(NSAID)，所述量能有效抑制所述腺瘤中的PGHS-2。
为了本说明书之目的，这样的非甾类抗炎药包括但不限于阿司匹林、布洛芬(异丁苯丙酸)、消炎痛(抗炎引哚酸)、舒林酸(SULINDAC)、DOLOBID、双氯芬酸(DICLOFENAC)、萘普生(甲氧萘丙酸)、吡罗昔康(PIROXICAN)、依托度酸、酮苯丙酸、氟比洛芬、美洛昔康(MELOXICAN)、FLOSULIDE和萘丁美酮。
如同有本门技术技能的人员所知道的，结肠腺瘤向结肠腺癌转变过程中的一个里程碑性事件，是腺瘤细胞侵入结肠粘膜下组织基膜的获得性能力。
因此，在本实施方案范围内，一个发明方面涉及一种阻滞或防止腺瘤或其细胞部分侵入结肠粘膜下组织基膜的能力的出现，其中包括向有FAP史的患者或者有一种或多种腺瘤的患者给药一无毒治疗有效量的非甾类抗炎药，所述量能有效抑制所述腺瘤中的PGHS-2。
在本实施方案的一个方面，本发明涉及属于强效PGHS-2抑制剂的非甾类抗炎药的使用。为了本说明书之目的，一种非甾类抗炎药若用这里所公开的细胞或微粒体试验来衡量时其抑制PGHS-2的IC50值为1μM或以下，则为强效。
在这个方面的一个小方面，本发明涉及属于PGHS-2特效抑制剂的非甾类抗炎药的用途。为了本说明书之目的，属于PGHS-2特效抑制剂的非甾类抗炎药定义为，当用本文中以下所公开的细胞或微粒体试验评估的PGHS-2的IC50与PGHS-1的IC50之比来衡量时，相对于抑制PGHS-1而言，其抑制PGHS-2的专一性为至少100倍者。这样的化合物包括但不限于如下专利中所公开的那些：1994年6月3日公布的WO 94/13635，1995年1月5日公布的WO 95/00501，1994年7月21日公布的WO 94/15932，1994年6月6日公布的美国专利5,344,991，1991年3月27日公布的EP 0418845，1995年1月10日公布的美国专利5,380,738，和1995年2月20日公布的美国专利5,393,790，这些专利全部列为本文的参考文献。
本发明涉及一种阻滞或防止腺瘤向腺癌转变的方法，其中包括向有一种或多种腺瘤的患者给药一无毒治疗有效量的非甾类抗炎药，所述量能有效抑制所述腺瘤中PGHS-2的产生。较好的方法包括给药一种这里所定义的特效PGHS-2抑制剂。
第二方面，本发明涉及一种阻滞或防止腺瘤向腺癌转变的方法，其中包括向有一种或多种腺瘤的患者给药一无毒治疗有效量的式I化合物式中A、B和C各自独立地选自以下组成的一组
(a)氢，
(b)F、Cl、Br或I，
(c)甲基或乙基，
(d)CF3，
(e)乙烯基，
(f)OCH3或OCF3，
(g)SCH3或SCF3，
(h)CN，
(i)N3，其先决条件是A、B和C中至少一个必须是氢。
在这一方面范围内，有一个子方面涉及式I化合物的用途，式中A和B各自独立地选自以下组成的一组
(a)氢，
(b)F、Cl、Br或I，
(c)甲基或乙基，
(d)CF3，
(e)乙烯基，
(g)SCH3或SCF3，
(h)CN，
(i)N3，且C是氢。
在这一类范围内，有一个亚类涉及下式化合物的用途
Figure A9619704100201
式中B是
(a)氢，
(b)F、Cl、Br或I，
(c)甲基或乙基，
(d)CF3，
(e)乙烯基，
(f)-OCF3或
(g)-SCH3。
本发明这一方面的例示是一种选自如下的化合物的用途 或其药物上可接受的盐。
第三方面，本发明涉及一种阻滞或防止腺瘤向腺癌转变的方法，其中包括向有一种或多种腺瘤的患者给药一无毒治疗有效量的式II化合物
Figure A9619704100212
或其药物上可接受的盐，式中X-Y-Z选自如下组成的一组：
              (a) -CH2CH2CH2-，
              (b) -C(O)CH2CH2-，
              (c) -CH2CH2C(O)-，
              (d) -CR5(R5′)-O-C(O)-，
              (e) -C(O)-O-CR5(R5′)-，
              (f) -CH2-NR3-CH2-，
              (g) -CR5(R5′)-NR3-C(O)-，
              (h) -CR4＝CR4′-S-，
              (i) -S-CR4＝CR4′-，
              (j) -S-N＝CH-，
              (k) -CH＝N-S-，
              (l) -N＝CR4-O-，
              (m) -O-CR4＝N-
              (n) -N＝CR4-NH-，
              (o)-N＝CR4-S-，和
        (p)-S-CR4＝N-，
        (q)-C(O)-NR3(R5(R5′)-，
        (r)-NR3-CH＝CH-  若R1不是  -S(O)2Me，
        (s)-CH＝CH-NR3-  若R1不是  -S(O)2Me，此时b边是一个双键，而a边和c边是单键；和X-Y-Z-选自如下组成的一组：
                  (a)＝CH-O-CH＝，和
                  (b)＝CH-NR3-CH＝，
                  (c)＝N-S-CH＝，
                  (d)＝CH-S-N＝，
                  (e)＝N-O-CH＝，
                  (f)＝CH-O-N＝，
                  (g)＝N-S-N＝，
                  (h)＝N-O-N＝，此时a边和c边是双键，而b边是单键；
R1选自如下组成的一组：
            (a)  S(O)2CH3，
            (b)  S(O)2NH2，
            (c)  S(O)2NHC(O)CF3，
            (d)  S(O)(NH)CH3，
            (e)  S(O)(NH)NH2，
            (f)  S(O)(NH)NHC(O)CF3，
            (g)  P(O)(CH3)OH，和
            (h)  P(O)(CH3)NH2，
R2选自如下组成的一组：
(a)C1-6烷基，
(b)C3、C4、C5、C6和C7环烷基，
(c)有一个、两个或三个取代基的苯基，其中取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)卤素，
(3)C1-6烷氧基，
(4)C1-6烷硫基，
(5)CN，
(6)CF3，
(7)C1-6烷基，
(8)N3，
(9)-CO2H，
(10)-CO2-C1-4烷基，
(11)-C(R5)(R6)-OH，
(12)-C(R5)(R6)-O-C1-4烷基，和
(13)-C1-6烷基-CO2-R5；
(d)有一个、两个或三个取代基的杂芳基，其中杂芳基是一个有5个原子的单环芳香环，所述环有一个选自S、O或N的杂原子和任选的另外1个、2个或3个N原子；或该杂芳基是一个有6个原子的单环式环，所述环有一个N杂原子和任选的另外1个、2个或3个N原子；所述取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)卤素，包括氟、氯、溴和碘，
(3)C1-6烷基，
(4)C1-6烷氧基，
(5)C1-6烷硫基，
(6)CN，
(7)CF3，
(8)N3，
(9)-C(R5)(R6)-OH，
(10)-C(R5)(R6)-O-C1-4烷基；
R3选自如下组成的一组
(a)氢，
(b)CF3，
(c)CN，
(d)C1-6烷基，
(e)羟基C1-6烷基，和
(f)-C(O)-C1-6烷基，(g)任选地有取代的
(1)-C1-5烷基-Q ，
(2)-C1-3烷基-O-C1-3烷基-Q，
(3)-C1-3烷基-S-C1-3烷基-Q，
(4)-C1-5烷基-O-Q，或
(5)-C1-5烷基-S-Q，
其中取代基寓于该烷基上且取代基是C1-3烷基；
(h)-Q
R4和R4′各自独立地选自如下组成的一组
(a)氢，
(b)CF3，
(c)CN，
(d)C1-6烷基，
(e)-Q，
(f)-O-Q；
(g)-S-Q，和
(h)任选地有取代的
(1)-C1-5烷基-Q，
(2)-O-C1-5烷基-Q，
(3)-S-C1-5烷基-Q，
(4)-C1-3烷基-O-C1-3烷基-Q，
(5)-C1-3烷基-S-C1-3烷基-Q，
(6)-C1-5烷基-O-Q，
(7)-C1-5烷基-S-Q，
其中取代基寓于该烷基上且取代基是C1-3烷基，和
R5、R5′以及R6、R7和R8各自独立地选自
(a)氢，
(b)C1-6烷基，
或者R5和R6或R7和R8连同它们所连接的碳一起形成一个有3个、4个、5个、6个或7个原子的单环式饱和碳环；
Q是CO2H、CO2-C1-4烷基、四唑-5-基、C(R7)(R8)(OH)、或C(R7)(R8)(O-C1-4烷基)；
先决条件是，当X-Y-Z是-S-CR4＝CR4′时，则R4和R4′不是CF3。
在这一类范围内，有一个亚类涉及式III化合物的用途或其药物上可接受的盐，其中：
R1选自如下组成的一组
              (a)  S(O)2CH3，
              (b)  S(O)2NH2，
              (c)  S(O)2NHC(O)CF3，
              (d)  S(O)(NH)CH3，
              (e)  S(O)(NH)NH2，
              (f)  S(O)(NH)NHC(O)CF3，
              (g)  P(O)(CH3)OH，和
              (h)  P(O)(CH3)NH2，
R2选自如下组成的一组
(a)C1-6-烷基，
(b)C3、C4、C5、C6和C7环烷基，
(c)有一个、两个或三个取代基的苯基，其中取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)卤素，
(3)C1-6烷氧基，
(4)C1-6烷硫基，
(5)CN，
(6)CF3，
(7)C1-6烷基，
(8)N3，
(9)-CO2H，
(10)-CO2-C1-4烷基，
(11)-C(H)(R6)-OH，
(12)-C(H)(R6)-O-C1-4烷基，和
(13)-C1-6烷基-CO2H；
(d)有一个、两个或三个取代基的杂芳基，其中杂芳基是一个有5个原子的单环式芳香环，所述环有一个选自S、O或N的杂原子和任选地另外1个、2个或3个N原子；或该杂芳基是一个有6个原子的单环式环，所述环有一个杂原子N和任选地另外1个、2个或3个N原子；所述取代基选自如下组成的一组
  (1)氢，
  (2)卤素，包括氟、氯、溴和碘，
  (3)C1-6烷基，
  (4)C1-6烷氧基，
  (5)C1-6烷硫基，
  (6)CN，
  (7)CF3，
  (8)N3，
  (9)-C(H)(R6)-OH，
  (10)-C(H)(R6)-O-C1-4烷基；
R5和R5′各自是甲基或乙基，
R5和R5′各自是氢，
R6选自如下组成的一组
(a)氢，
(b)C1-6烷基。
在这个亚类范围内，还有一小类涉及式III化合物的用途，其中
R1选自如下组成的一组
(a)  S(O)2CH3，
(b)  S(O)2NH2，
(c)  S(O)2NHC(O)CF3，
(d)  S(O)NHCH3，
(e)  S(O)NHNH2，和
(f)  S(O)NHNHC(O)CF3；
R2选自如下组成的一组
(a)C1-4烷基，
(b)C3、C4、C5、C6和C7环烷基，
(c)有一个或两个取代基的苯基，其中取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)氟、氯和溴，
(3)C1-4烷氧基，
(4)C1-4烷硫基，
(5)CN，
(6)CF3，
(7)C1-4烷基，
(8)N3，
(9)-CO2H，
(10)-CO2-C1-3烷基，
(11)-C(H)(R6)-OH，和
(12)-C(H)(R6)-O-C1-3烷基。
在这个小类范围内，还有一个小小类涉及式III化合物的用途，其中
R2选自如下组成的一组
(a)环己基，和
(b)有一个或两个取代基的苯基，且其中这些取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)卤素，
(3)C1-4烷氧基，
(4)C1-4烷硫基，
(5)CN，
(6)CF3，
(7)C1-4烷基，
(8)N3，和
(9)-C(H)(R6)-OH；
在这一小小类范围内，有一组涉及式III化合物的用途，其中
R1选自如下组成的一组
           (a)  S(O)2CH3，
           (b)  S(O)2NH2，
           (c)  S(O)NHCH3，和
           (d)  S(O)NHNH2；
R2选自如下组成的一组
有一个或两个取代基的苯基，其中取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)卤素，选自氟、氯和溴组成的一组，
(3)C1-3烷氧基，
(4)C1-3烷硫基，
(5)CN，和
(6)C1-3烷基。
以实例说明本发明的是选自下列的化合物的用途
(1)3-(3-氟苯基)-4-(4-(甲基磺酰)苯基)-2-(5H)-呋喃酮，
(2)3-(3，4-二氟苯基)-4-(4-(甲基磺酰)苯基)-2-(5H)-呋喃酮，
(3)3-(3，4-二氯苯基)-4-(4-(甲基磺酰)苯基)-2-(5H)-呋喃酮，
(4)3-苯基-4-(4-(甲基磺酰)苯基)-2-(5H)-呋喃酮，和
(5)5，5-二甲基-3-(3-氟苯基)-4-(甲基磺酰)苯基)-2-(5H)-呋喃酮，或其药物上可接受的盐。
本发明的医药组合物包含作为有效成分的式I化合物或其药物上可接受的盐，而且也可以含有药物上可接受的载体和任选的其它治疗组分。“药物上可接受的盐”这个术语是指从包括无机碱和有机碱在内的药物上可接受的无毒碱制备的盐。从无机碱衍生的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰(三价)盐、亚锰(二价)盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别好的是铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。从药物上可接受的有机无毒碱衍生的盐、包括伯胺、仲胺、叔胺、有取代的胺包括天然存在的有取代的胺、环状胺类，和碱性离子交换树脂的盐，例如，精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙胺基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可豆碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、缓血酸胺(即三羟甲基氨基甲烷)等的盐。
本发明的化合物是环氧化酶-2的抑制剂，因而可以用于治疗如以上所说明的、环氧化酶-2传递的疾病。这种活性可以用它们选择性抑制环氧化酶-2胜过抑制环氧化酶-1的能力来说明。因此，在一个试验中，本发明化合物治疗环氧化酶传递的疾病的能力，可以通过测定在花生四烯酸、环氧化酶-1或环氧化酶-2和一种式I化合物的存在下合成的前列腺素E2(PGE2)数量来证实。IC50值代表使PGE2合成回到与无抑制对照组比较时所得到数值的50％所需要的抑制剂浓度。
为了治疗这些环氧化酶传递的疾病中的任何一种，可以经口、经局部、非经肠、经吸入喷雾或经直肠，以含有常用、无毒、药物上可接受的载体、佐药和赋形剂的剂量单元配方的形式给药式I化合物。这里使用的非经肠这一术语包括皮下注射、经静脉内、经肌内、经胸骨内的注射或输注技术。除小鼠、大鼠、马、牛、羊、狗、猫等温血动物的治疗外，本发明的化合物还可有效地用于人类治疗。
如以上所指出的，用于治疗所定义的环氧化酶-2传递的疾病的医药组合物，可以任选地包括以上所列的一种或多种组分。
含有有效成分的医药组合物可以呈适合于经口使用的剂型，例如，片剂、锭剂、糖锭、水基或油基悬浮液剂、可分散粉剂或颗粒剂、乳液剂、硬或软胶囊剂、糖浆剂或酏剂。打算供经口使用的组合物可以按照医药组合物制造技术上已知的任何一种方法制备，这样的组合物可以含有选自增甜剂、矫味矫臭剂、着色剂和防腐剂组成的一组中的一种或多种剂，以便提供药物上美观和可口的制剂。片剂含有与适合于片剂制造的无毒、药物上可接受的赋形剂混合的有效成分。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉、或藻酸；粘结剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石等。这些片剂可以是无包衣的，也可以用已知技术包衣，以延缓在胃肠道中的崩解和吸收，从而在较长期内提供一种延效作用。例如，可以采用一种延时材料，例如甘油一硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。它们也可以用美国专利4,256,108、4,166,452和4,265,874中描述的技术包衣，以形成控制释放用的渗透治疗片剂。
供经口使用的配方也可以呈硬胶囊形式，其中有效成分是与一种惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合的，还可以呈软胶囊形式，其中有效成分是与水或一种油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合的。
水基悬浮液剂含有与适合于水基悬浮液剂制造的赋形剂混合的有效物质。这样的赋形剂是悬浮剂，例如，羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或润湿剂可以是一种天然存在的磷脂例如卵磷脂，或一种烯化氧与脂肪酸的缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物例如十七乙烯氧基鲸蜡醇，或环氧乙烷与从脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的缩合产物例如聚氧乙烯山梨糖醇一油酸酯，或环氧乙烷与从脂肪酸和己糖醇酐衍生的部分酯的缩合产物例如聚氧乙烯山梨糖醇酐一油酸酯。水基悬浮液剂也可以含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯，一种或多种着色剂，一种或多种矫味矫臭剂，以及一种或多种增甜剂，例如蔗糖、糖精或天冬酰胺(aspartame)。
油基悬浮液剂可以通过把有效成分悬浮在植物油如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油中或矿物油如液体石蜡中来配制。油基悬浮液剂可以含有一种增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。还可以添加以上提到的增甜剂以及矫味矫臭剂，以提供一种可口的经口制剂。这些组合物可以通过添加一种抗氧剂如抗坏血酸来防腐。
适合于通过加水制成水基悬浮液剂的可分散粉末剂和颗粒剂，提供了与一种分散剂或润湿剂、悬浮剂以及一种或多种防腐剂混合的有效成分。适用的分散剂或润湿剂和悬浮剂可以用以上已经提到的那些为例。也可以存在另一些赋形剂，例如增甜剂、矫味矫臭剂和着色剂。
本发明的医药组合物也可以呈水中油乳液剂的形式。油相可以是一种植物油如橄榄油或花生油，或一种矿物油如液体石蜡，或这些的混合物。适用的乳化剂可以是天然存在的磷脂例如大豆卵磷脂，和从脂肪酸与己糖醇酐衍生的酯或部分酯，例如山梨糖醇酐一油酸酯，以及所述部分酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇酐一油酸酯。这些乳液剂也可以含有增甜剂和矫味矫臭剂。
糖浆剂和酏剂可以用增甜剂例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖配制。这样的配方也可以含有粘滑剂、防腐剂、矫味矫臭剂和着色剂。这些医药组合物可以呈无菌可注射水基或油基悬浮液的形式。这种悬浮液可以用以上已经提到的那些适用分散剂或润湿剂和悬浮剂按照已知技术配制。这种无菌可注射制剂也可以是无毒非经肠可接受稀释剂或溶剂中的一种无菌可注射溶液或悬浮液，例如1，3-丁二醇中的一种溶液。在可以采用的可接受载体和溶剂中间、有水、生理食盐水和等渗氯化钠溶液。此外，还常用无菌固定油作为一种溶剂或悬浮介质。为此，可以采用任何品牌固定油，包括合成的甘油单酯或二酯。此外，脂肪酸如油酸也可用于制备可注射制剂。
式I化合物也可以以经直肠给药用的栓剂形式给药。这些组合物可以通过使该药物与在常温下为固体但在直肠温度下为液体、因而将在直肠中熔融以释放出该药物的适用无毒赋形剂混合来制备。这样的材料是可可油和聚乙二醇。
对局部用途来说，采用的是含有式I化合物的霜剂、软膏剂、凝胶剂、溶液剂或悬浮液剂等。(为了这种应用之目的，局部施用将包括口腔洗涤和漱口。)
每日每kg体重约0.01mg-约140mg量级的剂量水平可用于治疗以上所指出的病症，或者也可以采用每日每位患者约0.5mg-约7g。例如，发炎可以通过每日每千克体重给药约0.01-50mg该化合物，或者也可以每日每位患者给药约0.5mg-约3.5g来有效地治疗。
为生产一种单一剂型而可以与载体材料组合的有效成分数量将因治疗主体和特定给药方式而异。例如，打算用于人体经口给药的配方可以含有0.5mg-5g有效药剂，并配合适用和方便数量的载体材料，后者可为总组成的约5％-约95％不等。单元剂型一般将含有约1mg-约500mg有效成分，典型地含有25mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg。期望一天给药一次。
然而，要理解的是，任何特定患者的特有剂量水平将取决于各种各样的因素，其中包括年龄、体重、总体健康、性别、食谱、给药时间、给药途径、排泄速度、药物组合以及进行治疗的特定疾病的严重性。
以下实例旨在说明但不限制这里所公开的发明。
实例
患者样品
考察了结肠癌和匹配的正常粘膜组织、腺瘤性息肉、非癌症患者的正常结肠粘膜以及匹配的正常与癌性乳腺组织。匹配的正常样品与结肠癌样品的平均年龄及其范围分别为63.3岁和41-93岁。结肠组织标本取自肿瘤的非坏死区，以及取自同一患者位于距该肿瘤  5cm以上的切除边际的自体固有正常粘膜。在组织学上，所有结肠肿瘤都是腺癌，且所有患者都有偶发性结肠癌。一位患者有一个腺癌病灶位于一个腺瘤性息肉内部。结肠腺瘤取自有家族腺瘤性息肉病(FAP)的患者。
从结肠组织制备微粒体膜
冷冻的组织在冰冷的匀化缓冲剂〔50mM磷酸钾，pH 7.1，含有0.1M NaCl、2mM EDTA、0.4mM苯基甲基磺酰氟、60μg/ml大豆胰蛋白酶抑制剂、2μg/ml亮肽菌素、2μg/ml抑肽酶和2μg/ml抑胃酶肽，全部购自Sigma化学公司，美国密苏里州圣路易斯)中解冻。这些组织在冰上用一种组织撕碎器(Biospec产品公司，Bartlesville，OK)破坏两次，然后在4℃用一台Cole Parmer  4710系列超声匀浆器(ColeParmer仪器公司，美国伊利诺伊州芝加哥)进行声处理匀化。在4℃以1,000×g离心分离15分钟以除去细胞碎屑，所得到的上清液在4℃以100,000×g进行离心分离60分钟。将膜级分重新悬浮于匀化缓冲剂中并进行声处理，以期得到一种均匀的膜悬浮液。每个样品都用一种蛋白试验试剂盒(Bio-Rad，加拿大安大略省密西索加)测定蛋白浓度。
抗血清
全长绵羊精囊PGHS-1和胎盘PGHS-2纯化蛋白购自Cayman公司(Ann Arbor，MI)，并用来产生兔多克隆抗体。给“新西兰白”雌兔注射1ml弗洛因德全佐剂，其中含有200μg纯化PGHS-1或PGHS-2。初次注射后两周，这些兔用0.5ml弗洛因德不全佐剂中的100μg纯化PGHS-1或PGHS-2促进。抗PGHS抗血清能识别同源人体PGHS重整异构型，对适当的重整异构型有大约1000倍选择性。在本研究中使用的条件下，抗PGHS抗体证实与交互PGHS重整异构型无显著交叉反应性。对于每个实验，都在每个凝胶上施用2个浓度的PGHS-1和PGHS-2这两种蛋白标准物，以评价这些抗体的选择性。
硫酸十二烷酯钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫斑分析
膜级分与硫酸十二烷酯钠(SDS)样品缓冲剂(20mM Tris-HCl，pH 6.8，含有0.4％(w/v)SDS，4％甘油、0.24M β-巯基乙醇和0.5％溴酚蓝)混合，煮沸5分钟，按照Laemmli方法(Laemmli，U.K.，噬菌体T4头部装配期间结构性蛋白的断裂，Nature，227；680-685，1970)进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。如以前描述的那样(Towbin，H.，Staehelin，T.和Gordon.J.，蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上电泳转移到硝基纤维素薄板：程序和一些应用，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，75；4350-4354，1979)，用电泳法使蛋白质转移到硝基纤维素膜上。PGHS-1和PGHS-2的初级抗体分别以最终稀释1∶5,000和1∶7,500使用。次级马radish过氧化酶联系的驴抗兔IgG抗体(Amersham生命科学公司，加拿大安大略省奥克维尔)是以1∶3,000的稀释度使用的。免疫检测是利用增强的化学发光法按照制造商的说明(Amersham)进行的。利用一台计算型光密度计(分子动力学公司，Sunnyvale，CA)扫描放射自显影照片，利用对应于纯化PGHS重整异构型的光密度数值来计算组织学上正常的结肠组织和肿瘤组织中PGHS蛋白的数量(ng)。
统计分析
本研究的结果用一种Wilcoxon符号排序非参数试验进行分析，以确定正常的肿瘤的PGHS-1与PGHS-2水平之间的显著差异(Freund，J.E.，数理统计，Prentice Hall，Englewood Cliffs，New Jersey，1992)。
结果
人体结肠中PGHS-1的表达：正常组织和肿瘤组织
图1是一种代表性免疫斑，证实本研究中考察的25位患者中4位患者的PGHS表达。72KD带，即所报告的PGHS-1分子量(Otto，J.C.，DeWitt，D.L.S.，和Smith，W.L.，前列腺素内过氧化物合成酶-1和-2的N-糖基化及其在内质网中的取向，J.Biol.Chem.，268；18234-18242，1993)，随纯化的绵羊精囊PGHS-1标准物(图1A)以及随COS-7细胞中表达的重组体人PGHS-1(数据未示出；7)共同迁移(Comigrated)。全部25位患者的免疫斑结果都用光密度测定分析法定量，并在图2中以棒图显示。25位患者中有21位患者，其肿瘤组织中的PGHS-1与正常结肠相比降低了。所考察的全部25位患者肿瘤中PGHS-1与正常组织相比的平均减少是170ng/mg微粒体蛋白。与纯化的PGHS-1标准物相比，正常组织和肿瘤组织中PGHS-1浓度的范围分别是每mg微粒体蛋白0-760ng(中值199.8)和4-540ng(中值51.1)。正常组织与肿瘤组织相比，其PGHS-1表达的差异当用非参数法分析(Wilcoxon符号排序试验，p＜0.0001)确定时从统计学来看是相当显著的。
人体结肠中PGHS-2的表达：正常组织和肿瘤组织
利用一种特异抗-PGHS-2抗体对25个匹配结肠样品中4个样品的代表性免疫斑分析显示在图1B中。进行了免疫斑重复试验，以期评价从相同患者产生的样品中PGHS-1(图1A)和PGHS-2(图1B)的表达。在4个正常结肠组织样品的任何一个样品中，均未检测到PGHS-2免疫反应性。反之，在这里显示的4位患者中有3位患者的肿瘤中检测到70-72kD的免疫反应带，这些免疫反应带随纯化的绵羊胎盘PGHS-2(图1B)和COS-7细胞中表达的人重组体PGHS-2(数据未示出；7)共同迁移。总而言之，在所考察的25位患者有19位患者的肿瘤组织中，检测到PGHS-2免疫反应蛋白(图2)。总体上，所考察的全部25位患者的结肠肿瘤中PGHS-2平均增加大约73ng/mg微粒体蛋白。与PGHS-2标准物相比，正常组织和肿瘤组织中PGHS-2免疫反应蛋白浓度的范围分别是每mg微粒体蛋白0-49ng(中值3.8ng)和1.6-580ng(中值37.7ng)。正常组织与肿瘤组织相比，其PGHS-2表达的差异当用非参数法分析(Wilcoxon符号排序试验，p＜0.0001)确定时从统计学来看是相当显著的。
结肠肿瘤是按4个Dukes′阶段分类的：A，肠粘膜内部的肿瘤；B，进入肌层粘膜的肿瘤；C，向淋巴结转移的转移瘤；和D，向其它组织转移的转移瘤。在本研究中，结肠肿瘤来自Dukes′分类法所有阶段的患者(表1)。
                                      表1
                                    患者数据
  患者#     药疗法 Dukes阶段 蛋白表达的变化(ng)
PGHS-2   PGHS-1
    12345 NANANANA无  NANANANAB   6.201.702 801.200.10    -10.00-6.00-9.40-4.10ND
    678910 氯氮_盐酸盐/克利溴铵，镁加铝(氢氧化镁铝)非甾类抗炎药左旋甲状腺素钠，劳拉西泮，奥美拉唑无NA   CACCC   3.200.000.500.904.70     -5.90-17.301.500.50-16.30
    1112131415 无NANA阿司匹林δ-可的松，硫唑嘌呤，洛伐他汀   BDBCB   0.90-0.204.300.800.00     -9.00-14.40-7.10-5.605.70
    1617181920 依那普利马来酸盐无无阿司匹林无   BBBCB   25.60-0.309.7013.708.30     -6.60-1.50-11.20-11.10-5.9
    2122232425 无阿司匹林无硫氮_酮盐酸盐，奥美拉唑氟比洛芬，阿司匹林，硝苯吡啶，美托洛尔酒石酸盐   CCCBB    -0.100.200.002.200.10     -9.30-3.00-12.30-17.00-10.00
NA＝数据不可得ND＝不可检测    A＝粘膜内的肿瘤Dukes阶段：     B＝进入肌层粘膜的肿瘤
            C＝向淋巴结转移的转移瘤
            D＝向其它组织转移的转移瘤
表1。患者数据。列出了本研究中考察的每一位患者的信息。当(数据)可得时，指出患者采用的药疗法。疾病的Dukes阶段如下：A＝粘膜内部的肿瘤；B＝进入肌层粘膜的肿瘤；C＝向淋巴结转移的转移瘤；和D＝向其它组织转移的转移瘤。PGHS免疫反应性蛋白的数量，表示为从正常结肠粘膜到肿瘤组织的表达相对变化。NA：数据不可得，和ND：免疫反应性不可检测。
阶段与PGHS-1或PGHS-2蛋白的表达变化之间没有任何联系。这种缺乏联系与如下观察结果是一致的：人体结肠瘤中的PGE2水平看来与Dukes′阶段不相关(Rigas，B.，Goldman，I.S.，和Levine.L.，人体结肠癌中改变的类廿碳酸水平，J.Lab.Clin.Med.，122；518-523；1993)。令人感兴趣的是，在目前使用抗炎药疗法的6位患者中有5位，其PGHS-2表达要么很低要么不可检测(表1)。
正常结肠、恶化前息肉和匹配的正常与乳腺癌组织中PGHS-1和-2蛋白的表达
PGHS-1和-2蛋白的表达是用各种各样其它人体组织分析的，其中包括来自非癌患者的5种结肠组织，4种恶化前息肉，和3种匹配的正常与癌变乳腺组织。尽管正常组织和癌组织中都观察到PGHS-1蛋白，但这些样品中任何一种都没有检测到PGHS-2蛋白。
讨论
在本研究中，所考察的25种结肠肿瘤中有19种表达了PGHS-2蛋白，而25种正常结肠组织样品中只有2种表达了这种蛋白。伴随PGHS-2的诱导表达，与正常的毗邻结肠粘膜相比，25种肿瘤样品中有21种的PGHS-1表达减少了；然而，在对照结肠与息肉样品中，PGHS-1蛋白浓度是类似的。
就我们所知，这是考察人体结肠癌中PGHS-1和-2蛋白表达的第一个研究。以前的研究已经显示人体结肠癌中类廿碳酸水平尤其PGE2提高了(Rigas，B.，Goldman，I.S.和Levine，L.，人体结肠癌中改变的类廿碳酸水平，J.Lab.Clin.Med.，122；518-523，1993；Bennett，A.，Del Tacca，M.，Stamford，I.F.和Zebro，T.，来自人体大肠肿瘤的前列腺素，Br.J.Cancer.，35：881-884，1977；Bennett，A.，Civier，A.，Hensby，C.N.，Melhuish，P.B.和Stamford，I.F.，从人体正常和恶化的胃肠组织中提取的花生四烯酸酯及其代谢物的测定，Gut，28：315-318，1987)。我们断言，我们在结肠肿瘤组织中观察到的PGHS-2酶的增加导致这些肿瘤中较高的前列腺素水平。进而，我们还断言，由于前列腺素在癌生物学中可能有多种效应，包括生长促进和免疫监督调制，因而肿瘤中较高的类前列腺素水平将有助于肿瘤生长或发育(Earnest，D.L.，Hixson，L.J.和Alberts，D.S.，Piroxicam及其它环氧化酶抑制剂：癌症化学预防潜力，J.Cell.Biochem.，161(Suppl.)：156-166，1992)。令人感兴趣的是，在乳腺癌样品考察中没有观察到PGHS-2蛋白。因此，PGHS-2蛋白表达是组织从恶化前阶段向恶化阶段转变中的一个典型特征。
Eberhart及其同事证实了人体结肠直肠腺瘤和腺癌中PGHS-2mRNA的上调(Eberhart，C.E.，Coffey，R.J.Radhika，A.，Giardiello，F.M.，Ferrenbach，S.，Dubois，R.N.，人体结肠直肠腺瘤和腺癌中环氧化酶2基因表达的上调，Gastroenterology，107：1183-1188，1994)。虽然这是一个令人感兴趣的发现，但这个发现也许并不是由于PGHS-2 mRNA的复杂转录后和翻译后调节而引起的实际酶表达的迹象。例如，Hoff等人(Hoff，T.，DeWitt，D.，Kaever，V.，Resch，K.和Goppelt-Struebe.M.，单细胞类细胞中前列腺素G/H合成酶的与分化相联系的表达，FEBS Lett.，320：38-42，1993)，Lee等人(Lee，S.H.，Soyoola，E.，Chanmugam.，P.，Hart，S.，Sun，W.，Zhong.H，Liou，S.，Simmons，D.和Hwang，D.，用脂多糖刺激的巨噬细胞中分裂素可诱导环氧化酶的选择性表达，J.Biol.Chem.，267：25934-25938，1992)和我们实验室已经显示PGHS-2  mRNA的实质性表达而无PGHS-2蛋白的伴随表达。因此，PGHS蛋白表达的考察对于估计PGHS-2酶的的浓度是至关重要的。
技术上无任何事实能表明在来自4名有家族腺瘤性息肉病的患者的息肉中不存在PGHS-2蛋白，特别是鉴于有若干组证明舒林酸(sulindac)(同时抑制PGHS-1和PGHS-2)导致有家族息肉病的患者中的息肉退化。人体息肉样品是尺寸范围为0.4-＜5mm直径的小结肠息肉群。我们认为，PGHS-2蛋白是在息肉-癌症序列中的一个较后阶段表达的，此时息肉直径较大，也许尺寸大于或等于5mm。Ladenheim等人的一项最近研究报告说舒林酸并没有导致偶发性结肠息肉的退化；然而，他们强调说他们的研究针对早期偶发性息肉(这些息肉的67％都≤5mm)，而且提出，在“沿着腺瘤-癌序列发展的一个特定阶段”，对非甾类抗炎药的反应可能更有利于息肉(Ladenheim，J.，Garcia，G.，Titzer，D.，Herzenberg，H.，Lavori，P.，Edson，R.和Omary，B.，Sulindac对偶发性结肠息肉的影响，Gastroenterology，108：1083-1087，1995)。
长期使用非甾类抗炎药，是与包括肾毒性、胃肠溃疡和增加出血在内的副作用相联系的。当前的非甾类抗炎药如阿司匹林、舒林酸和消炎痛，无论对PGHS-1还是对PGHS-2的抑制，都有很小的选择性(Battistini，B.，Botting，R.和Bakhle，Y.S.，COX-1和COX-2：推进更具选择性的非甾类抗炎药的开发，Drug NewsPerspectives，7：501-512，1994；O′Neill，G.P.，Mancini，J.A.，Kargman，S.，Yergey，J.，Kwan，M.Y.，Falgueyret，J.-P.，Abramovitz，M.，Kennedy，B.P.，Ouellet，M.，Cromlish，W.，Culp，S.，Evans，J.F.，Ford-Hutchinson，A.W.和Vickers，P.J.，重组体牛痘病毒引起的人体前列腺素G/H合成酶-1和-2的过度表达：非甾类抗炎药的抑制和15-羟基廿碳四烯酸的生物合成，Mol.Pharmacol.，45；245-254，1994；DeWitt，D.L.，Meade，E.A.和Smith，W.L.，PGH合成酶同功酶选择性：更安全非甾类抗炎药的潜力，Am J.Med.(Suppl.)，95；40S-44S，1993)。已经有人提出，PGHS-2的选择性抑制剂会有有用的疗效，而且降低了诱发基于机理的副作用的能力。最近，一种选择性PGHS-2抑制剂，即NS-398，已在大鼠中显示出有抗炎、解热和止痛效果而且不是致溃疡的(Futaki，N.，Yoshikawa，K.，Hamasaka，Y.，Arai，I.，Higuchi，S.，Iizuka，H和Otomo，S.，NS-398-一种有强止痛和解热效果且只引起微小胃伤害的新型非甾类抗炎药，Gen.Pharmacol.，24：105-110，1993；Futaki，N.，Takahashi，S.，Yokoyama.M.，Arai，I.，Higuchi.S.和Otomo.S.，NS-398-一种新型抗炎药—在离体试验中选择性抑制前列腺素G/H合成酶/环氧化酶(COX-2)活性，Prostaglandins，47：55-59，1994)。考察了结肠中PGHS-1和PGHS-2的表达的本研究，证实在结肠肿瘤中同时存在两种PGHS重整异构型。
小鼠息肉
ApcΔ716处理小鼠(Taketo博士在Banyu Merck开发的，参照：Oshima，M.，Oshima，H.，Kitagawa，K.，Kobayashi，M.，Itakura，C.和Taketo.M.，怀有一只秃头Apc基因截断突变型小鼠的小鼠中Apc杂合性的丧失和新生肠息肉中正在建立的异常组织，Proc，Natl.Acad.Sci.USA，92，4482-4486，1995)在其整个肠道中发育了多种息肉。从来自回交N1、N2和N4代小鼠的6只小鼠(既有雄性也有雌性)中，收集来自ApcΔ716处理小鼠、尺寸范围为0.3-5.6mm的小肠和结肠息肉样品，并立即将其冷冻。
结果
ApcΔ716小鼠息肉中PGHS-1和PGHS-2的表达
PGHS-1和PGHS-2蛋白的表达是用来自ApcΔ716小鼠，尺寸不断增大的息肉考察的。图3是一张证实尺寸范围为0.3-5mm直径的息肉中PGHS-1和PGHS-2表达的免疫班分析图。(线1-5分别对应于从直径大约1-5mm的息肉产生的样品。)在所有肠和结肠对照与息肉样品中，全都证实了PGHS-1蛋白。在对照肠或结肠样品中未检测到PGHS-2免疫反应性。尽管在较大肠息肉(直径3-5mm)(线3、4和5)中检测到低水平的PGHS-2蛋白，但在尺寸范围为直径1-5mm的所有结肠息肉样品(线1-5)中全都检测到较高水平的PGHS-2免疫反应性化学种，而且证实在直径2-3mm的息肉(线2和3)中有非常高水平的PGHS-2蛋白。纯化的绵羊PGHS-1和PGHS-2蛋白(5ng、10ng和20ng)被电泳分离成为标准物，并按常规方法标记。我们相信，息肉生长期间COX-2的大幅度诱发，反映出COX-2决定性地卷入了引发腺瘤向腺癌的转变。

Claims (18)

1.一种阻滞或防止结肠腺瘤向结肠腺癌转变的方法，包括对有FAP史的患者或者有一种或多种所述腺瘤的患者给药一无毒治疗有效量的非甾类抗炎药，所述量能有效抑制所述腺瘤中的PGHS-2。
2.按照权利要求1的方法，其中所述非甾类抗炎药是PGHS-2的一种强抑制剂。
3.按照权利要求1的方法，其中所述非甾类抗炎药选自阿司匹林、布洛芬(异丁苯丙酸)、消炎痛(抗炎引哚酸)、舒林酸(SULINDAC)、DOLOBID、双氯芬酸(DICLOFENAC)、萘普生(甲氧萘丙酸)、吡罗昔康(PIROXICAN)、依托度酸、酮苯丙酸、氟比洛芬、美洛昔康(MELOXICAN)、FLOSULIDE和萘丁美酮。
4.按照权利要求3的方法，其中所述非甾类抗炎药当用整细胞试验测定时，以抑制PGHS-2的IC50与抑制PGHS-1的IC50之比量度，其抑制PGHS-2的专一性比抑制PGHS-1大至少50倍。
5.一种阻滞或防止出现腺瘤入侵结肠粘膜下组织基膜的能力的方法，包括对有FAP史的患者或者有一种或多种腺瘤的患者给药一无毒治疗有效的非甾类抗炎药，所述量能有效抑制所述腺瘤中的PGHS-2。
6.一种阻滞或防止结肠腺瘤向结肠腺癌转变的方法，包括对有FAP史的患者或者有一种或多种结肠腺瘤的患者给药一无毒治疗有效量的式I化合物。式中A、B和C各自独立地选自如下组成的一组
(a)氢，
(b)F、Cl、Br或I，
(c)甲基或乙基，
(d)CF3，
(e)乙烯基，
(f)OCH3或OCF3，
(g)SCH3或SCF3，
(h)CN，
(i)N3，其先决条件是，A、B和C中至少一个必须是氢。
7.按照权利要求6的方法，其中A和B各自独立地选自如下组成的一组
(a)氢，
(b)F、Cl、Br或I，
(c)甲基或乙基，
(d)CF3，
(e)乙烯基，
(g)SCH3或SCF3，
(h)CN，
(i)N3，且C是氢。
8.按照权利要求7的方法，其中非甾类抗炎药具有如下化学结构式
Figure A9619704100031
式中B是
(a)氢，
(b)F、Cl、Br或I，
(c)甲基或乙基，
(d)CF3，
(e)乙烯基，
(f)-OCF3，或
(g)-SCH3。
9.按照权利要求8的方法，其中非甾类抗炎药具有如下化学结构式式中A是F、Cl、Br，且
B是F、Cl、Br。
10.按照权利要求9的方法，其中非甾类抗炎药具有如下化学结构式或其药物上可接受的盐。
11.一种阻滞或防止结肠腺瘤向结肠腺癌转变的方法，包括对有一种或多种所述腺瘤的患者给药一无毒治疗有效量的式II化合物或其药物上可接受的盐，其中：
X-Y-Z-选自如下组成的一组：
  (a)-CH2CH2CH2-，
  (b)-C(O)CH2CH2-，
  (c)-CH2CH2C(O)-，
  (d)-CR5(R5′)-O-C(O)-，
  (e)-C(O)-O-CR5(R5′)-，
  (f)-CH2-NR3-CH2-，
  (g)-CR5(R5′)-NR3-C(O)-，
  (h)-CR4＝CR4′-S-，
  (i)-S-CR4＝CR4′-，
  (j)-S-N＝CH-，
  (k)-CH＝N-S-，
  (l)-N＝CR4-O-，
  (m)-O-CR4＝N-
  (n)-N＝CR4-NH-，
  (o)-N＝CR4-S-，和
  (p)-S-CR4＝N-，
  (q)-C(O)-NR3-CR5(R5′)-，(r)-NR3-CH＝CH- 前提是R1不是 -S(O)2Me，
(s)-CH＝CH-NR3- 前提是R1不是 -S(O)2Me，此时b边是一个双键，且a边和c边是单键；和
X-Y-Z-选自如下组成的一组：
  (a)＝CH-O-CH＝，和
  (b)＝CH-NR3-CH＝，
  (c)＝N-S-CH＝，
  (d)＝CH-S-N＝，
  (e)＝N-O-CH＝，
  (f)＝CH-O-N＝，
  (g)＝N-S-N＝，
  (h)＝N-O-N＝，此时a边和c边是双键且b边是单键；
R1选自如下组成的一组
  (a)  S(O)2CH3，
  (b)  S(O)2NH2，
  (c)  S(O)2NHC(O)CF3，
  (d)  S(O)(NH)CH3，
  (e)  S(O)(NH)NH2，
  (f)  S(O)(NH)NHC(O)CF3，
R2选自如下组成的一组
(a)C1-6烷基，
(b)C3、C4、C5、C6和C7环烷基，
(c)有一个、两个或三个取代基的苯基，其中取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)卤素，
(3)C1-6烷氧基，
(4)C1-6烷硫基，
(5)CN，
(6)CF3，
(7)C1-6烷基，
(8)N3，
(9)-CO2H，
(10)-CO2-C1-4烷基，
(11)-C(R5)(R6)-OH，
(12)-C(R5)(R6)-O-C1-4烷基，和
(13)-C1-6烷基-CO2-R5；
(d)有一个、两个或三个取代基的杂芳基，其中杂芳基是一个有5个原子的单环式芳香族环，所述环有一个选自S、O或N的杂原子和任选地另外1个、2个或3个N原子；或该杂芳基是一个有6个原子的单环式环，所述环有一个N杂原子和任选地另外1个、2个或3个N原子；所述取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)卤素，包括氟、氯、溴和碘，
(3)C1-6烷基，
(4)C1-6烷氧基，
(5)C1-6烷硫基，
(6)CN，
(7)CF3，
(8)N3，
(9)-C(R5)(R6)-OH，
(10)-C(R5)(R6)-O-C1-4烷基；
R3选自如下组成的一组
(a)氢，
(b)CF3，
(c)CN，
(d)C1-6烷基，
(e)羟基C1-6烷基，和
(f)-C(O)-C1-6烷基，
(g)也可以有取代基的
(1)-C1-5烷基-Q，
(2)-C1-3烷基-O-C1-3烷基-Q，
(3)-C1-3烷基-S-C1-3烷基-Q，
(4)-C1-5烷基-O-Q，或
(5)-C1-5烷基-S-Q，
其中取代基寓于烷基上且取代基是C1-3烷基；
(h)-Q
R4和R4′各自独立地选自如下组成的一组
(a)氢，
(b)CF3，
(c)CN，
(d)C1-6烷基，
(e)-Q，
(f)-O-Q；
(g)-S-Q，和
(h)也可以有取代基的
(l)-C1-5烷基-Q，
(2)-O-C1-5烷基-Q，
(3)-S-C1-5烷基-Q，
(4)-C1-3烷基-O-C1-3烷基-Q，
(5)-C1-3烷基-S-C1-3烷基-Q，
(6)-C1-5烷基-O-Q，
(7)-C1-5烷基-S-Q，
其中取代基寓于烷基上且取代基是C1-3烷基，和
R5、R5′和R6、R7与R8各自独立地选自如下组成的一组
(a)氢，
(b)C1-6烷基，
或者R5和R6或R7和R8连同它们所连接的碳一起形成一个有3、4、5、6或7个原子的单环式饱和碳环；
Q是CO2H、CO2-C1-4烷基、四唑-5-基、C(R7)(R8)(OH)或C(R7)(R8)(O-C1-4烷基)；
先决条件是，当X-Y-Z是-S-CR4＝CR4′时，则R4和R4′不是CF3。
12.按照权利要求11的方法，其中该化合物具有如下式III
Figure A9619704100091
或其药物上可接受的盐，式中：
R1选自如下组成的一组
        (a)  S(O)2CH3，
        (b)  S(O)2NH2，
        (c)  S(O)2NHC(O)CF3，
        (d)  S(O)(NH)CH3，
        (e)  S(O)(NH)NH2，
        (f)  S(O)(NH)NHC(O)CF3，
R2选自如下组成的一组
(a)C3、C4、C5、C6和C7环烷基，
(b)有一个、两个或三个取代基的苯基，其中取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)卤素，
(3)C1-6烷氧基，
(4)C1-6烷硫基，
(5)CN，
(6)CF3，
(7)C1-6烷基，
(8)N3，
(9)-CO2H，
(10)-CO2-C1-4烷基，
(11)-C(H)(R6)-OH，
(12)-C(H)(R6)-O-C1-4烷基，和
(13)-C1-6烷基-CO2H；
(c)有一个、两个或三个取代基的杂芳基，其中杂芳基是一个有5个原子的单环式芳香族环，所述环有一个选自S、O或N的杂原子和任选地另外1个、2个或3个N原子；或该杂芳基是一个有6个原子的单环式环，所述环有一个N杂原子和任选地另外1个、2个或3个N原子；所述取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)卤素，包括氟、氯、溴和碘，
(3)C1-6烷基，
(4)C1-6烷氧基，
(5)C1-6烷硫基，
(6)CN，
(7)CF3，
(8)N3，
(9)-C(H)(R6)-OH，
(10)-C(H)(R6)-O-C1-4烷基；
R5和R5′各自是甲基或乙基，
R6选自如下组成的一组
(a)氢，
(b)C1-6烷基。
13.按照权利要求12的方法，其中
R1选自如下组成的一组
      (a)  S(O)2CH3，
      (b)  S(O)2NH2，
      (c)  S(O)2NHC(O)CF3，
      (d)  S(O)NHCH3，
R2选自如下组成的一组
(a)C3、C4、C5、C6和C7环烷基，
(b)有一个或两个取代基的苯基，其中取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)氟、氯和溴
(3)C1-4烷氧基，
(4)C1-4烷硫基，
(5)CN，
(6)CF3，
(7)C1-4烷基，
(8)N3，
(9)-CO2H，
(10)-CO2-C1-3烷基，
(11)-C(H)(R6)-OH，和
(12)-C(H)(R6)-O-C1-3烷基。
14.按照权利要求13的方法，其中
R2选自如下组成的一组
(a)环己基，和
(b)有一个或两个取代基的苯基，其中取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)卤素，
(3)C1-4烷氧基，
(4)C1-4烷硫基，
(5)CN，
(6)CF3，
(7)C1-4烷基，
(8)N3，和
(9)-C(H)(R6)-OH，
R5和R5′各自独立地选自甲基或乙基组成的一组，
R6选自如下组成的一组，
(a)氢，
(b)甲基或乙基。
15.按照权利要求14的方法，其中
R1选自如下组成的一组
                  (a)  S(O)2CH3，
                  (b)  S(O)2NH2，
                  (c)  S(O)NHCH3，和
                  (d)  S(O)NHNH2
R2选自由有一个或两个取代基的苯基组成的一组，其中取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)卤素，选自由氟、氯、和溴组成的一组，
(3)C1-3烷氧基，
(4)C1-3烷硫基，
(5)CN，和
(6)C1-3烷基。
16.按照权利要求15的方法，其中
R1选自如下组成的一组
            (a)  S(O)2CH3，
            (b)  S(O)2NH2，
            (c)  S(O)NHCH3，和
            (d)  S(O)NHNH2；
R2是有一个或两个取代基的苯基，其中取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)卤素，选自由氟、氯和溴组成的一组，
(3)甲氧基，和
(4)甲基。
17.按照权利要求16的方法，其中
R1选自如下组成的一组
(a)S(O)2CH3，和
(b)S(O)2NH2，
R2是有一个或两个取代基的苯基，其中取代基选自如下组成的一组
(1)氢，
(2)卤素，选自由氟、氯和溴组成的一组。
18.按照权利要求17的方法，其中该化合物选自
(1)3-(3-氟苯基)-4-(4-(甲基磺酰)苯基)-2-(5H)-呋喃酮，
(2)3-(3，4-二氟苯基)-4-(4-(甲基磺酰)苯基)-2-(5H)-呋喃酮，
(3)3-(3，4-二氯苯基)-4-(4-(甲基磺酰)苯基)-2-(5H)-呋喃酮，
(4)3-苯基-4-(4-(甲基磺酰)苯基)-2-(5H)-呋喃酮，和
(5)5，5-二甲基-3-(3-氟苯基)-4-(甲基磺酰)苯基)-2-(5H)-呋喃酮，或其药物上可接受的盐。
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