CN1194743C - 一种治疗类风湿性关节炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗类风湿性关节炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。该组合物由蚂蚁、青风藤、鸡血藤、鹿衔草、石楠藤、千年健、威灵仙组成。该中药组合物制备时对不同组分采用蒸馏、煎煮、乙醇提取方法，达到使有效药物的充分发挥，同时本发明还提供了对该组合物进行成分鉴别、含量测定的质量控制方法。本组合物治疗类风湿性关节炎有很好的效果，且无毒副作用。

Description

一种治疗类风湿性关节炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法

发明领域

本发明涉及一种中药组合物，特别涉及用于治疗类风湿性关节炎的中药组合物，同时涉及该组合物的制备方法和质量控制方法。

背景技术

类风湿性关节炎(简称类风关RA)是一种以关节病变为主的慢性全身性自身免疫性疾病，早期有游走性关节疼痛和活动受限，中晚期则表现为关节功能障碍，继则僵硬变形，甚至丧失劳动能力勺终致残废。本病发病率很高，据国外统计约占全人口的2.5％，较重的(符合ARA诊断标准)约占其中的十分之一，美国报道约有5-6百万人口患类风关，国内的发病率为0.3％～0.5％，全国约有500万患者，女性是男性的三倍，发病高峰在35岁～45岁，其中三分之一成为残疾。目前在国内外仍属病因不明的难治之症，尚无特效疗法，对人体健康危害很大，是全世界亟待攻克的难题，也是研制治疗本病中药新药的目的和依据。

中医学根据类风关的临床表现及其病情顽固，久延难愈的特点，将其归属於顽痹、廷痹、历节等范畴。多由素体虚弱，气血不足，外邪乘袭、风寒湿热、痹阻经络、反复迁延、邪伤气血阴阳，由五体而病及脏腑，肝主筋，肾主骨，筋骨肿胀变形僵硬，其重点在於肝肾，五脏之伤穷必及肾，故尤以肾为主，久痹正虚，肝肾不足。病理性质表现为本虚标实，虚实夹杂，病位在於五体，因邪痹经络，气血湿滞而内及脏腑。

当前中医学对类风关的治疗，在传统理论和临床经验的基础上，通过研究已得较大进展，综观各地报道，大致可分为辨证分型论治，固定专方成药及单方验方三大类，辨证一般分为风寒湿证，风湿热证，寒热夹杂证、肝肾亏虚证、痰瘀痹阻证，采用疏风散寒、清热除湿、化痰祛瘀，温肾填精诸法；固定成方如乌头通痹汤，愈痹汤等，单验方如雷公藤，昆明山海棠，蛇，蚂蚁等制剂，但疗效尚欠稳定和满意，专方药性多偏于温燥，单方又失之单一，缺乏复合效应，或有一定的毒副作用和非适应症，如雷公藤对肝肾功能及造血系统均有损害，可致妇女闭经，并非所有患者相宜。西医学对类风关发病机理的研究，尽管已深入至分子免疫水平，但治疗仍停留于炎症的控制上，常用的药物如非甾体类抗炎药物，皮质激素，虽然能较好地控制临床症状，但不能阻止其病情发展，最终形成破坏性病变，再如金制剂、青霉胺等国际通用的抗风湿药达到临床缓解标准的不超过10％，且持续使用副作用超过其治疗作用。

为此，有必要针对上述情况，根据本病久痹正虚，肝肾不足，虚实夹杂的特点，研制一种扶正蠲痹、安全有效、药性平稳无毒，适宜於长期持续服用的纯中药新制剂，以充实临床医疗的需求。

发明内容

本发明的一个目的在于公开一种新的治疗类风湿性关节炎的中药组合物；本发明的另一个目的在于公开制备一种新的治疗类风湿性关节炎中药组合物的方法；本发明目的还在于公开一种新的中药组合物的质量控制方法。

本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：

蚂  蚁260-350重量份    青风藤320-380重量份

鸡血藤250-310重量份    鹿衔草320-380重量份

石楠藤320-380重量份    千年健320-380重量份

威灵仙250-310重量份

蚂蚁拣去杂质、冲洗、干燥；青风藤除去杂质，稍泡、洗净、润透、切厚片，干燥；鸡血藤除去杂质，洗净、浸润至透或蒸软、切碎片，干燥；鹿衔草除去杂质，抢水洗净，切段干燥；石南藤除去杂质，洗净，润透，切小段干燥；千年健除去杂质，洗净，浸泡至三四成透时，捞出、润透、切薄片，低温干燥。

本发明药物组合物制成口服液每10ml，相当于原药材22.6g。

本药物组合物的制备方法：

1.千年健加2-3倍量的水湿润，用蒸馏法蒸馏5-7小时，得挥发油和药渣A；

2.蚂蚁，青风藤，威灵仙加6-10倍量55-70％乙醇回流提取3次，每次1-2小时，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至45-65℃下相对密度为1.05～1.10，得浓缩液B；

3.石楠藤，鹿衔草、鸡血藤和千年健药渣A加6-10倍量的水煎煮提取3次，每次1.5小时，合并滤液，减压浓缩至45-65℃下相对密度约1.05，加2.8倍量95％的乙醇沉淀，放置24小时以上，取上清液减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至45-65℃下相对密度为1.05～1.10，得浓缩液C；

4.合并B、C浓缩液，过滤，加入千年健挥发油，最后经过常规工序，加入药学上可接受的赋型剂敷料制成临床可接受的剂型，如片剂、口服液体制剂、胶囊、颗粒剂。

本组合物制成药剂的质量控制方法包括鉴别和/或含量测定。

鉴别方法包括下列方法中的一种和/或几种：

a.取本组合物制剂口服液10ml，加稀盐酸1ml，摇匀，照柱色谱法，置已处理好的阳离子交换树脂柱，分别用水、乙醇洗至洗脱液无色澄明，再用2-5∶90-110的浓氨溶液-稀乙醇洗脱，洗脱液蒸干，残渣加2-5∶90-110的稀盐酸一稀乙醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加2-5∶90-110的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡1-3小时，滤过，滤液浓缩至2m1，作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加2-5∶90-110的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡1-3小时，滤过，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同-硅胶G薄层板上，以3-5∶0.5-1.5∶4-6的正丁醇-冰醋酸-水的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-3％茚三酮乙醇溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的斑点；

b.取本组合物制剂口服液20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，合并氯仿液，用0.4-0.6ml/L硫酸溶液振摇提取4次，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，合并氯仿液，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试溶液及对照品溶液各5ul，分别点于同-含1.5-3％氨氧化钠的硅胶薄层板上，以2-4∶3-5∶2-4∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水在8-12℃以下放置的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同荧光熄灭斑点；

c.取本组合物制剂口服液10ml，用水饱和正丁醇提取2次，合并正丁醇提提取液，用正丁醇饱和的水洗涤，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取千年健对照药材1g，加水30ml，加热回流1小时，滤过，取滤液10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60-70∶30-40∶8-12的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点；

含量测定

取本组合物制剂口服液20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，合并氯仿液，用0.3-0.6ml/L硫酸溶液振摇提取4次，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试晶溶液10ul，对照品溶液2ul和4ul，分别交叉点于同一用1-3％氢氧化钠溶液制备的硅胶薄层板上，以1-3∶3-5∶2-4∶1的甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水在8-12℃以下放置后的上层液为展开剂，展开，取山，晾干；照薄层色谱法进行扫描，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得，本品含青藤碱(C₁₉H₂₃NO₄)不得少5.0％mg/ml；

本组合物在治疗类风湿性关节炎中有显著的效果，具有抗炎和镇痛作用，安全有效、药性平稳无毒，适宜於长期持续服用。

下面实验例可说明本发明组合物制成的口服液(安泰痹痛定)即ATBTD-1，对弗氏完全佐剂所致大鼠的原发性和继发性损害具有显著的对抗作用，同时又能明显减轻角叉菜胶性大鼠足肿胀，抑制大鼠肉芽组织的形成，降低小鼠腹腔毛细血管通透性，减轻热刺激、化学刺激所致的小鼠的疼痛性反应，表明ATBTD-1具有抗炎和镇痛作用。

下列材料与仪器适用于各实验例。

1.实验材料

1.1药品与试剂

ATBTD-1(棕褐色口服液)，口服，每ml含生药6g，由常州利尔康保健品有限公司提供。成人每日用量67.8g/50kg(按生药计算)，临用前用蒸馏水配成所需浓度。痹冲剂，辽宁省本溪第三制药厂与泰国合资，批号：960303。卡介苗，卫生部上海生物制品研究所提供，批号：950701。按文献[1]制备成弗氏(Freund′s)完全佐剂。角叉菜胶，辽宁省药物研究所产品.伊文思蓝(Evan′s blue)，上海化学试剂采购供应站，批号910518。冰醋酸，江苏省启东市精细化工二厂，批号：940128，临用前配成0.6％醋酸溶液。

1.2动物：SD大鼠，ICR小鼠，均由南京小医药大学实验动物中心提供，合格证：苏动(质)95004。

1.3统计方法：表1、2、3、6、7、8、11、12、13、14、15采用t检验，表4采用u检验。

实验例1 ATBTD-1对佐剂性关节炎的影响

1.1 对原发病变的影响：取雄性大鼠40只，160g±20g，随机分为五组，即(1)生理盐水组：生理盐水10ml/kg；(2)痹组：6.0g/Kg；(3)ATBTD-1小剂量组：3.5g/Kg；(4)ATBTD-1中剂量组：7.0g/Kg；(5)ATBTD-1大剂量组：14.0g/Kg。各组按10ml/kg灌胃给药，共给5日。于第3日给药30min后，在大鼠右后肢足跖皮内注射弗氏(Freund′s)完全佐剂0.05ml/只(其中含卡介苗7.5mg/ml)，然后继续给药2天。用容积法测定致炎前与致炎后12、18、24、48h大鼠足跖容积。以致炎前后足跖容积之差值为肿胀程度。

结果见表1.

表1 ATBTD-1对弗氏完全佐剂致大鼠原发病变的足肿胀的影响( x±S，n＝8)

组别             剂量    致炎前足容积           致炎后足肿胀度(ml)(h)(足肿胀抑制百分率％)

                 (g/kg)  (ml)        12                18                    24                    48

生理盐水组       -       1.34±0.12  0.52±0.15        0.74±0.17            0.78±0.16            0.80±0.11

痹组             6.0     1.33±0 11  0.44(15.4)±0.21  0.52^*(29.7)±0.18    0.54^*(30.8)±0.26   0.59^*(26.3)±0.24

ATBTD-1小剂量组  3.5     1.32±0.15  0.19(5.8)±0.12   0.67(9.5)±0.16       0.71(9.0)±0.23       0.70(12.5)±0.18

ATBTD-1中剂量组  7.0     1.33±0.16  0.45(13.5)±0.16  0.58^*(21.6)±0.11    0.61^*(21.8)±0.13   0.65^*(18.8)±0.15

ATBTD-1大剂量组  14.0    1.35±013   0.11(21.2)±0.11  0.46^**(37.8)±0.20   0.49^**(37.3)±0.19   0.52^**(35.0)±010

^*P＜0.05  ^*p＜0.05  ^**p＜0.01  与生理盐水组比较

实验结果表明：ATBTD-1小、大二个剂量组均能降低弗氏完全佐剂所致大鼠原发病变的足肿胀度，与生理盐水组比较有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)

1.2 对多发性关节炎(继发性病变)的影响

取雄性大鼠60只，170g±20g，用弗氏(Freund′s)完全佐剂0.05ml/只(其中含卡介苗7.5mg/ml)注射于右后足跖皮内，致炎一周后将大鼠随机分为五组，即(1)生理盐水组：生理盐水10mi/kg；(2)痹组：6.0g/kg；(3)ATBTD-1小剂量组：3.6g/Kg；(4)ATBTD-1中剂量组：7.0g/Kg；(5)ATBTD-1大剂量组：14.0g/Kg。各组每日灌胃给药1次，连续给药21日。同期另设一组正常组。并于注射佐剂前及注射佐剂后用容积法测定大鼠左右足跖容积。同侧足跖于给佐剂前后容积之差为肿胀度(ml)，同时观察大鼠前肢，耳部、尾部等部位的病变。实验结束时，大鼠颈动脉放血，以2％EDTA-Na2抗凝，分离血浆，按说明书方法用FMJ-182放射免疫Y计数器测定前列腺素E2(PGE2)。同时取血清，测定大鼠白细胞介素I(IL-1)(其方法为①IL-1诱生：给SD大鼠腹腔内注入冷的含10％小牛血清的1640 20ml，轻揉腹部后取腹腔液，离心洗涤用24孔培养板制备细胞单层(巨噬细胞单层)，每孔再加1ml培养液，继续置5％CO2，37℃中培养24小时，-30℃保存待测。②IL-1活性测定：用小鼠胸腺细胞增殖法，取C57BL/6小鼠胸腺制备单个细胞悬液，用含10％小牛血清的IMDM培养液调整细胞浓度为2×107个/ml，加入3μg/ml的ConA，迅速混匀，尽快加人96孔细板中，每孔0.1ml，含细胞2×106个。在加人ConA-胸腺细胞前，先将待测样品每孔加0.1ml，置5％CO₂、37℃中培养60小时，每孔加0.2uci3H-TdR，继续培养12小时，收集细胞，测定3H-TdR掺人cpm值)。然后处死各组大鼠，立即取肾上腺、胸腺、脾脏称重，并对大鼠左右后肢踝关节进行病理组织学检查，结果见表2、3、4、5、6、7、8、9、10。

表2 ATBTD-1对弗氏完全佐剂致大鼠多发性关节炎(继发性病变)足胀的影响(右足)( x±s，n＝12)

组别               剂量    致炎前足容积                              致炎后不同时间的足肿胀值(ml)(足肿胀抑制百分率％)

                   (g/kg)  (ml)        8d                 10d                14d                  18d                   22d                   28d

生理盐水组         -       1.36±0.15  0.92±0.16         0.99±0.16         1.61±0.46           2.22±0.51            1.92±0.22            1.84±0.31

痹组               6.0     1.34±0.12  0.95(-3.3)±0.25   0.83(16.2)±0.27   1.10^**(31.7)±0.35  1.36^**(38.7)±0.33   1.15^**(40.1)±0.37   0.97^**(47.3)±0.28

ATBTD-1小剂量组    3.5     1.37±0.11  0.89(3.3)±0.23    0.91(8.1)±0.18    1.42(11.8)±0.42     1.78^*(19.8)±0.41    1.59^*(17.2)±0.33    1.51^*(17.9)±0.36

ATBTD-1中剂量组    7.0     1.38±0.13  0.94(-2.2)±0.17   0.85(14.1)±0.19   1.07^**(33.5)±0.30  1.08^**(51.4)±0.43   1.01^**(47.4)±0.31    0.91^**(50.5)±0.22

ATBTD-1大剂量组    14.0    1.35±0.17  0.93(-1.1)±0.21   0.82^*(17.2)±0.14 0.85^**(46.6)±0.62  0.89^**(59.9)±0.60   0.81^**(57.8)±0.34    069^**(62.5)±0.36

p＜0.05，^*p＜0.01  与生理盐水组比较

表3 ATBTD-1对弗氏完全佐剂致大鼠多发性关节炎(继发性病变)足胀的影响(左足)( x±s，n＝12)

组别               剂量    致炎前足容积                              致炎后不同时间的足肿胀值(ml)(足肿胀抑制百分率％)

                   (g/kg)  (ml)          10d                 14d                  18d                   22d                   28d

生理盐水组         -       1.35±016     0.21±0.14          0.68±0.19           0.93±0.50            0.89±0.42            0.75±0.31

痹组               6.0     1.36±0.18    0 22(-4.8)±0.10    0.36^**(47.1)±0.16  0.37^**(60.2)±0.19   0.40^*(55.1)±0.25    0.31^**(58.7)±0.28

ATBTD-1小剂量组    3.5     1.35±0.14    0.23(-9.5)±0.15    0.52(23.5)±0.21     0.75(19.4)±0.39      0.53^*(40.4)±0.38    0.44^*(41.3)±0.32

ATBTD-1中剂量组    7.0     1.37±0.17    0.19(9.5)±0.10     0.41^**(39.7)±0.30  0.54^**(41.9)±0.26   0.39^*(56.2)±0.25    0.27^**(64.0)±0.30

ATBTD-1大剂量组    14.0    1.38±0.16    0.24(-14.3)±0.17   0.30^**(55.9)±0.18  0.44^**(52.7)±0.31   0.36^**(59.6)±0.34   0.23^**(69.3)±0.27

p＜0.05，^*p＜0.01  与生理盐水组比较

表4ATBTD-1对弗氏完全佐剂关节炎大鼠结节的影响

组别               剂量    动物数       结节出现动物数(n)        结节出现动物总数       结节发生率

                   (g/kg)  (n)    耳部    前肢    尾部                (n)                  (％)

生理盐水组         -       12     1       6       11                  11                  91.7

痹组               6.0     12     0       1       2                   2                   16.6^**

ATBTD-1小剂量组    3.5     12     0       3       5                   6                   50.0^*

ATBTD-1中剂量组    7.0     12     0       2       3                   4                   33.3^**

ATBTD-1大剂量组    14.0    12     0       1       3                   3                   25.0^**

p＜0.05，^*p＜0.01  与生理盐水组比较

表5 ATBTD-1对弗氏完全佐剂关节炎大鼠各部位结节数的影响( x±s)

组别                剂量                 各部位结节数(个)

                    (g/kg)    耳部           前肢           尾部

生理盐水组          -         5.0±0.0(1)    5.7±1.9(6)    12.7±2.8(11)

痹组                6.0       0.0±0.0(0)    3.0±0.0(1)    9.5±2.1(2)

ATBTD-1小剂量组     3.5       0.0±0.0(0)    4.0±1.0(3)    9.8±1.9(5)

ATBTD-1中剂量组     7.0       0.0±0.0(0)    3.5±0.7(2)    8.3±1.5(3)

ATBTD-1大剂量组     14.0      0.0±0.0(0)    2.0±0.0(1)    5.3±1.5(3)

注：表内括号的数据为出现结节的动物数

表6 ATBTD-1对弗氏完全佐剂关节炎大鼠血浆前列腺素E2(PGE2)( X±S)

组别                剂量(g/kg)    动物数(n)    PGE₂(cpm)

正常组              -             12           415±72

生理盐水组          -             12           645±97^△△

痹组                6.0           12           495±90^**

ATBTD-1小剂量组     3.5           12           556±105^*

ATBTD-1中剂量组     7.0           12           517±132^*

ATBTD-1大剂量组     14.0          12           458±73^**

^△△P＜0.01与正常组比较

^*p＜0.05  ^**p＜0.01 与生理盐水组比较

表7 ATBTD-1对弗氏完全佐剂关节炎大鼠血清白细胞介素I.(IL-1)的影响( X±S)

组别               剂量(g/kg)    动物数(n)    IL-1(cpm)

正常组             -             12           653±87

生理盐水组         -             12           2298±416^△△

痹组               6.0           12           1195±215^**

ATBTD-1小剂量组    3.5           12           1951±309^*

ATBTD-1中剂量组    7.0           12           1287±268^**

ATBTD-1大剂量组    14.0          12           941±394^**

^△△P＜0.01 与正常组比较

^*p＜0.05  ^**p＜0.01  与生理盐水组比较

表8 ATBTD-1对弗氏完全佐剂关节炎大鼠腺、脾脏、肾上腺重理的影响( X±S)

组别             剂量      动物数    胸腺          脾脏          肾上腺

                 (g/kg)    (只)      (g/100g)      (g/100g)      (g/100g)

正常组           -         12        0.18±0.05    0.35±0.08    0.02±0.01

生理盐水组       -         12        0.19±0.04    0.37±0.06    0.03±0.01

痹组             6.0       12        0.20±0.06    0.35±0.07    0.03±0.01

ATBTD-1小剂量组  3.5       12        0.21±0.03    0.38±0.06    0.02±0.01

ATBTD-1中剂量组  7.0       12        0.17±0.04    0.36±0.08    0.03±0.01

ATBTD-1大剂量组  14.0      12        0.18±0.05    0.37±0.09    0.03±0.01

表9 ATBTD-1对大鼠关节病理组织学的影响(右足)

组别              关节数  关节腔内分泌物  关节软骨破坏  滑膜炎症  关节外软组织炎症

正常组             3      0/3             0/3           0/3       0/3

生理盐水组         6      4/6             5/6           6/6       6/6

痹组               6      1/6             0/6           3/6       1/6

ATBTD-1小剂量组    6      1/6             3/6           5/6       4/6

ATBTD-1大剂量组    6      0/6             1/6           3/6       2/6

表10 ATBTD-1对大鼠关节病理组织学的影响(左足)

组别              关节数  关节腔内分泌物  关节软骨破坏  滑膜炎症  关节外软组织炎症

正常组             3      0/3             0/3           0/3       0/3

生理盐水组         6      1/6             2/6           6/6       1/6

痹组               6      0/6             0/6           2/6       1/6

ATBTD-1小剂量组    6      0/6             0/6           2/6       0/6

ATBTD-1大剂量组    6      1/6             0/6           1/6       0/6

实验结果表明：1.ATBTD-1三个剂量组能明显抑制因弗氏完全佐剂引起

表10 ATBTD-1对大鼠关节病理组织学的影响(左足)

组别               关节数  关节腔内分泌物  关节软骨破坏  滑膜炎症  关节外软组织炎症

正常组             3       0/3             0/3           0/3       0/3

生理盐水组         6       1/6             2/6           6/6       1/6

痹组               6       0/6             0/6           2/6       1/6

ATBTD-1小剂量组    6       0/6             0/6           2/6       0/6

ATBTD-1大剂量组    6       1/6             0/6           1/6       0/6

实验结果表明：1.ATBTD-1三个剂量组能明显抑制因弗氏完全佐剂引起的大鼠致炎侧和对侧后肢因迟发型超敏反应引起的足肿胀，与生理盐水组比较具有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)(见表2、3)。2.生理盐水组大鼠于12天后前肢关节部位红肿，有点状结节；耳部出现结节，直径约3mm左右；尾部关节有结节状突起，呈串珠状。ATBTD-1三个剂量组能明显降低上述的结节发生率，与生理盐水组比较具有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)(见表4、5)。3.ATBTD-1三个剂量组能明显降低佐剂关节炎大鼠血浆前列腺素E2、血清白细胞介素I，与生理盐水组比较具有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)(见表6、7)。4，ATBTD-1小、中、大三个剂量组对弗氏完全佐剂关节炎大鼠的胸腺、脾脏和肾上腺重量无明显影响，与生理盐水组比较无显著性差异(P＞0.05(见表8)。

实验例2 ATBTD-1对其它炎症反应的影响

1.对角叉菜胶诱发足肿胀的影响：取雄性大鼠40只，170g±20g，随机分为五组，即(1)生理盐水组：生理盐水10ml/kg；(2)痹组：6.0/Kg；大剂量组：14.0/Kg。各组按10ml/kg灌胃给药，共给3日。末次给药30min后，在大鼠右后肢足跖皮下注射1％角叉菜胶0.05ml/只，用容积法测定致炎前与致炎后1、2、4、6h大鼠足跖容积。以致炎前后足跖容积之差值为肿胀程度。结果见表11。

表11 ATBTD-1对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响( X±S，n＝8)

组别               剂量    致炎前足容积                      致炎后足肿胀度(ml)(h)(足肿胀抑制率％)

                   (g/kg)  (ml)          1                    2                   4                    6

生理盐水组                 1.33±0.15    0.39±0.11           0.73±0.28           1.07±0.18           0.90±0.11

痹组               6.0     1.36±0.17    0.19^**(51.3)±0.14  0.27^**(63.0)±0.13  0.59^**(44.9)±0.14  0.54^**(40.0)±0.07

ATBTD-1小剂量组    3.5     1.32±0.24    0.34(12.8)±0.09     0.52(28.9)±0.17     0.85^*(25.9)±0.15   0.66^**(26.7)±0.09

ATBTD-1中剂量组    7.0     1.35±0.22    0.26^*(50.0)±0.13   0.44^*(39.7)±0.18   0.67^**(37.4)±0.09  0.57^**(36.7)±0.16

ATBTD-1大剂量组    14.0    1.38±0.16    0.21^**(16.2)±0.12  0.32^**(56.2)±0.10   0.49^**(54.2)±0.11  0.41^**(54.4)±0.09

^*P＜0.05  ^**p＜0.01  与生理盐水组比较

实验结果表明：ATBTD-1三个剂量组均能降低角叉莱胶致大鼠足肿胀度，与生理盐水组比较有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)。

2.对大鼠棉球肉芽肿形成的影响：取雄性大鼠40只，体重150 20g，将两个10mg灭菌消毒棉球分别植入大鼠左右腋下，缝合皮肤、消毒。次日将大鼠分为五组，即(1)生理盐水组：生理盐水10ml/kg；(2)痹组：6.0g/Kg；(3)ATBTD-1小剂量组：3.5g/kg；(4)ATBTD-1中剂量组：7.0g/Kg；(5)ATBTD-1大剂量组：14.0g/Kg各组按10ml灌胃给药，共给8日。停药后次日脱椎处死大鼠，取出棉球，剔除脂肪组织。称取棉球湿重和干重(60℃烘干)，计算肉芽组织湿重和干重及其抑制率，结果见表12。

表12 ATBTD-1对大鼠棉球肉芽肿形成的影响( X±S，n＝8)

组别              剂量    肉芽组织湿重    湿重抑制率  肉芽组织干重  干重抑制率

                  (g/kg)  (mg)             (％)        (mg)          (％)

生理盐水组         -      60.5±8.8        -           45.6±7.8     -

痹组               6.0    39.7±6.1^**     34.4        23.8±6.3^**   47.8

ATBTD-1小剂量组    3.5    52.4±7.2        13.4        38.0±5.2^*    16.7

ATBTD-1中剂量组    7.0    47.3±6.0^**     21.8        32.7±4.6^**   28.3

ATBTD-1大剂量组    14.0   36.6±5.9^**     39.5        22.5±6.1^**   50.7

^*P＜0.05  ^**p＜0.01  与生理盐水组比较比较

实验结果表明，ATBTD-1三个剂量组均能减少肉芽组织重量，与生理盐水组比较有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)。

3.对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响：取19-22gICR小鼠50只，雌雄各半，随机均分为五组，即(1)生理盐水组：生理盐水20ml/kg；(2)痹组：12.0g/Kg；(3)ATBTD-1小剂量组：7.0g/Kg；(4)ATBTD-1中剂量组：14.0g/Kg；(5)ATBTD-1大剂量组：28.0g/Kg。各组按20ml/kg每日灌肖给药，共给3日。末次给药后1h，尾静脉注射0.05％伊文思兰0.05ml/10g，并同时腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，20min后脱颈椎处死，剪开腹腔，用5ml生理盐水冲洗腹腔三次，取出腹腔液约4.5ml，离心5min，在722型分光光度计590nm处测定OD值及其抑制率，结果见表13。

表13 ATBTD-1对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

组别               动物数    剂量    OD值             抑制率

                   (只)      (g/kg)  ( X±S)           (％)

生理盐水组         10        -       0.661±0.162

痹组               10        12.0    0.363±0.177^**   45.1

ATBTD-1小剂量组    10        7.0     0.548±0.138      17.1

ATBTD-1中剂量组    10        14.0    0.481±0.165^*    27.2

ATBTD-1大剂量组    10        28.0    0.445±0.121^**   32.7

^*P＜0.05  ^**P＜0.01  与生理盐水组比较

实验结果表明，ATBTD-1中、大剂量组均能显著地对抗醋酸所致小鼠腹腔毛细血管的通透性的增加，与生理盐水组比较有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)。

实验例3 ATBTD-1的镇痛作用

1 对热刺激的影响(热板法)

取18-21gICR雌性小鼠，恒温(55±0.5℃)热刺激致痛，预先测定痛阈值(以小鼠舔后足为疼痛反应信息，以痛反应的潜伏期为痛阈指标，若痛阈不超过30s为合格小鼠)。挑选合格小鼠50只，随机分为五组，即(1)生理盐水组：生理盐水20ml/kg；(2)痹组：12.0g/Kg；(3)ATBTD-1小剂量组：3.5g/Kg；(4)ATBTD-1中剂量组：14.0g/Kg；(5)ATBTD-1大剂量组：28.0/kg。各组均按20.3/kg灌胃给药，并于给药后30、60、90、120min各测其痛阈值。结果见表14。

表14 ATBTD-1对小鼠的镇痛作用(热板法)( x±S，n＝10)

组别               剂量                             痛阈值(s)

                   (g/kg)    给药前    给药后(min)(痛阈提高百分率％)

                                          30                 60                  90                    120

生理盐水组                   20.3±5.8    23.1(13.8)±7.5    21.2(-4.4)±11.7    19.1(-5.9)±8.4       19.6(-3.4)±8.0

痹组               12.0      19.8±4.4    28.6^*(44.4)±8.7 32.6^**(64.6)±10.5  38.0^**(91.9)±14.1   31.5^*(59.1)±12.1

ATBTD-1小剂量组    7.0       19.4±5.1    24.5(26.3)±6.1    27.8(43.3)±12.4    28 5^*(46.9)±12.6    26.6(37.1)±11.5

ATBTD-1小剂量组    14.0      20.7±5.6    27.2±(31.4)±8.1  33.9^*(63.8)±9.8   35.6^**(72.0)±12.2   30.4^*(46.9)±10.8

ATBTD-1小剂量组    28.0      21.1±4.2    30.4^*(42.7)±10.6 36.5^**(73.0)±12.7 40.3^**(91.0)±14.5   37.8^**(79.1)±13.9

^*P＜0.05  ^**p＜0.01  与给药前比较

实验结果表明：ATBTD-1三个剂量组能提高小鼠的痛阈值，与给药前组比较有显著性差异(P＜0.05、p＜0.01)。

2 对化学刺激的影响(扭体法)

取18-21gICR小鼠60只，雌雄各半。随机分为五组，即(1)生理盐水组：生理盐水20ml/kg；(2)痹组：12.0g/Kg；(3)ATBTD-1小剂量组：7.0/Kg；(4)ATBTD-1中剂量组：14.0g/Kg；(5)ATBTD-1大剂量组：28.8/Kg。各组均按20ml/kg灌胃给药，给药后30min后腹腔注射0.5％醋酸0.2mi/只，观察10min内各组小鼠出现扭体反应的次数。结果见15。

表15 ATBTD-13才小鼠的镇痛作用(扭体法)( X±S，n＝10)

组别               剂量(g/kg)    扭体反应的次数(次/10min)

生理盐水组         -             32.8±12.9

痹组               12.0          17.5±9.6^**

ATBTD-1小剂量组    7.0           24.7±8.5

ATBTD-1中剂量组    14.0          21.3±6.1^*

ATBTD-1大剂量组    28.0          16.4±10.3^**

^*P＜0.05  ^**p＜0.01  与生理盐水组比较

实验结果表明：ATBTD-1中、高剂量组能显著降低小鼠扭体反应次数，与生理盐水组比较有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)。

下列实施例均能实现上述实验例的效果。

实施例1：

蚂蚁300g    青风藤350g  鸡血藤280g  鹿衔草350g

石楠藤350g  千年健350g  威灵仙280g

蚂蚁拣去杂质、冲洗、干燥；青风藤除去杂质，稍泡、洗净、润透、切厚片，干燥；鸡血藤除去杂质，洗净、浸润至透或蒸软、切碎片，干燥；鹿衔草除去杂质，抢水洗净，切段干燥；石南藤除去杂质，洗净，润透，切小段干燥；千年健除去杂质，洗净，浸泡至三四成透时，捞出、润透、切薄片，低温干燥。本发明药物组合物制成口服液每10ml，相当于原药材22.6g，一日三次，一次10ml。

本药物组合物制备制备成口服液的方法：1.千年健加2.5倍量的水湿润，用蒸馏法蒸馏6小时，得挥发油和药渣A；2.蚂蚁，青风藤，威灵仙加8、6和6倍量65％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至50℃下相对密度为1.05～1.10，得浓缩液B；3.石楠藤，鹿衔草、鸡血藤和千年健药渣A加8、6和6倍量的水煎煮提取3次，每次1.5小时，合并滤液，减压浓缩至50℃下相对密度约1.05，加2.8倍量95％的乙醇沉淀，放置24小时以上，取上清液减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至50℃下相对密度为1.05～1.10，得浓缩液C；4.合并B、C浓缩液，过滤，加入千年健挥发油，加蔗糖50g，甜叶菊甙1g矫味，调总量至1000ml，用40％氢氧化钠溶液调pH至5.0-7.0，过滤、灌装，灭菌即得口服液；

实施例2：

蚂  蚁280g  青风藤330g  鸡血藤300g  鹿衔草370g

石楠藤330g  千年健370g  威灵仙280g

本药物组合物制备制备成软胶囊的方法：

1.千年健加2.5倍量的水湿润，用蒸馏法蒸馏6小时，得挥发油和药渣A；

2.蚂蚁，青风藤，威灵仙加8、6和6倍量65％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至50℃下相对密度为1.05～1.10，得浓缩液B；

3.石楠藤，鹿衔草、鸡血藤和千年健药渣A加8、6和6倍量的水煎煮提取3次，每次1.5小时，合并滤液，减压浓缩至50℃下相对密度约1.05，加2.8倍量95％的乙醇沉淀，放置24小时以上，取上清液减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至50℃下相对密度为1.05～1.10，得浓缩液C；

4.合并B、C浓缩液，过滤，加入千年健挥发油，浓缩减压于燥至含水量在5.0％以下，经常规工序制成软胶囊1000粒，即得组合物的软胶囊，每粒装0.25g，相当于原药材2.26g，一日三次，一次3粒。

实施例3 本组合物口服液制剂的质量控制方法：

鉴别

a.取本品10ml，加稀盐酸1ml，摇匀，照柱色谱法，置已处理好的阳离子交换树脂柱，其玻璃柱内径1.5cm，732型氢型强酸型苯乙烯系阳离子交换树脂，湿法装柱至12cm上，分别用水、乙醇洗至洗脱液五色澄明，再用3∶100的浓氨溶液-稀乙醇150ml洗脱，洗脱液蒸干，残渣加3∶100的稀盐酸-稀乙醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加3∶100的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡2小时，滤过，滤液浓缩至2ml；作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加3∶100的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡2小时，滤过，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1∶5的正丁醇-冰醋酸-水的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％茚三酮乙醇溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的斑点；

b.精密量取本品20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，氯仿分别为15ml、15ml、10ml、10ml、5ml，合并氯仿液，用0.5ml/L硫酸溶液振摇提取4次，硫酸溶液分别为40ml、30ml、30ml、20ml，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，氯仿分别为60ml、60ml、50ml、40ml，合并氯仿液，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取背藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试溶液及对照品溶液各5ul，分别点于同-含2％氨氧化钠的硅胶GL2245薄层板上，以3∶4∶3∶1的甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水在10℃以下放置的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同荧光熄灭斑点；

含量测定

精密量取本品20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，氯仿分别为15ml、15ml、10ml、10ml、5ml，合并氯仿液，用0.5ml/L硫酸溶液振摇提取4次，硫酸溶液分别为40ml、30ml、30ml、20ml，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，氯仿分别为60ml、60ml、50ml、40ml，合并氯仿液，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试晶溶液10ul，对照品溶液2ul和4ul，分别交叉点于同一用2％氢氧化钠溶液制备的硅胶GF254薄层板上，以2∶4∶3∶1的甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水在10℃以下放置后的上层液为展开剂，展开，取山，晾干；照薄层色谱法进行扫描，波长：λ＝270nm，λR＝370nm测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得，本品含青藤碱(C₁₉H₂₃NO₄)不得少5.0％mg/ml。

实施例4

鉴别

a.取本品10ml，加稀盐酸1ml，摇匀，照柱色谱法，置已处理好的阳离子交换树脂柱，其玻璃柱内径1.5cm，732型氢型强酸型苯乙烯系阳离子交换树脂，湿法装柱至12cm上，分别用水、乙醇洗至洗脱液五色澄明，再用3∶100的浓氨溶液-稀乙醇150ml洗脱，洗脱液蒸干，残渣加3∶100的稀盐酸-稀乙醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加3∶100的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡2小时，滤过，滤液浓缩至2ml；作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加3∶100的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡2小时，滤过，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1∶5的正丁醇-冰醋酸-水的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％茚三酮乙醇溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的斑点；

b.取本品10ml，用水饱和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇提提取液，用正丁醇饱和的水15mI洗涤，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取千年健对照药材1g，加水30ml，加热回流1小时，滤过，取滤液10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以65∶35∶10的氯仿-甲醇-水在]0℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点；

含量测定

精密量取本品20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，氯仿分别为15ml、15ml、10ml、10ml、5ml，合并氯仿液，用0.5ml/L硫酸溶液振摇提取4次，硫酸溶液分别为40ml、30ml、30ml、20ml，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，氯仿分别为60ml、60ml、50ml、40ml，合并氯仿液，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试晶溶液10ul，对照品溶液2ul和4ul，分别交叉点于同一用2％氢氧化钠溶液制备的硅胶GF254薄层板上，以2∶4∶3∶1的甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水在10℃以下放置后的上层液为展开剂，展开，取山，晾干；照薄层色谱法进行扫描，波长：λ＝270nm，λR＝370nm测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得，本品含青藤碱(C₁₉H₂₃NO₄)不得少5.0％mg/ml。

实施例5 本组合物制剂的质量控制方法：

鉴别

a.取本品10ml，加稀盐酸1ml，摇匀，照柱色谱法，置已处理好的阳离子交换树脂柱，其玻璃柱内径1.5cm，732型氢型强酸型苯乙烯系阳离子交换树脂，湿法装柱至12cm上，分别用水、乙醇洗至洗脱液五色澄明，再用3∶100的浓氨溶液-稀乙醇150ml洗脱，洗脱液蒸干，残渣加3∶100的稀盐酸-稀乙醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加3∶100的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡2小时，滤过，滤液浓缩至2ml；作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加3∶100的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡2小时，滤过，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1∶5的正丁醇-冰醋酸-水的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％茚三酮乙醇溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的斑点；

b.精密量取本品20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，氯仿分别为15ml、15ml、10ml、10ml、5ml，合并氯仿液，用0.5ml/L硫酸溶液振摇提取4次，硫酸溶液分别为40ml、30ml、30ml、20ml，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，氯仿分别为60ml、60ml、50ml、40ml，合并氯仿液，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试溶液及对照品溶液各5ul，分别点于同-含2％氨氧化钠的硅胶GL2245薄层板上，以3∶4∶3∶1的甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水在10℃以下放置的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同荧光熄灭斑点；

c.取本品10ml，用水饱和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇提提取液，用正丁醇饱和的水15mI洗涤，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取千年健对照药材1g，加水30ml，加热回流1小时，滤过，取滤液10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以65∶35∶10的氯仿-甲醇-水在]0℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点；

含量测定

精密量取本品20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，氯仿分别为15ml、15ml、10ml、10ml、5ml，合并氯仿液，用0.5ml/L硫酸溶液振摇提取4次，硫酸溶液分别为40ml、30ml、30ml、20ml，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，氯仿分别为60ml、60ml、50ml、40ml，合并氯仿液，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试晶溶液10ul，对照品溶液2ul和4ul，分别交叉点于同一用2％氢氧化钠溶液制备的硅胶GF254薄层板上，以2∶4∶3∶1的甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水在10℃以下放置后的上层液为展开剂，展开，取山，晾干；照薄层色谱法进行扫描，波长：λ＝270nm，λR＝370nm测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得，本品含青藤碱(C₁₉H₂₃NO₄)不得少5.0％mg/ml。

Claims (13)

1、一种治疗类风湿性关节炎的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：

蚂  蚁260-350重量份          青风藤320-380重量份

鸡血藤250-310重量份          鹿衔草320-380重量份

石楠藤320-380重量份          千年健320-380重量份

威灵仙250-310重量份。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：

蚂  蚁300重量份    青风藤350重量份    鸡血藤280重量份

鹿衔草350重量份    石楠藤350重量份    千年健350重量份

威灵仙280重量份。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：

蚂  蚁280重量份    青风藤330重量份    鸡血藤300重量份

鹿衔草370重量份    石楠藤330重量份    千年健370重量份

威灵仙280重量份。

4、如权利要求1、2或3所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物还可加入赋型剂制成临床可接受的剂型。

5、如权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

千年健加2-3倍量的水湿润，用蒸馏法蒸馏5-7小时，得挥发油和药渣A；

蚂蚁，青风藤，威灵仙加8、6和6倍量55-70％乙醇回流提取3次，每次1-2小时，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至45-65℃下相对密度为1.05～1.10，得浓缩液B；

石楠藤，鹿衔草、鸡血藤和千年健药渣A加8、6和6倍量的水煎煮提取3次，每次1.5小时，合并滤液，减压浓缩至45-65℃下相对密度约1.05，加2.8倍量95％的乙醇沉淀，放置24小时以上，取上清液减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至45-65℃下相对密度为1.05～1.10，得浓缩液C；

合并B、C浓缩液，过滤，加入千年健挥发油，最后经过常规工序，加入药学上可接受的赋型剂敷料制成临床可接受的剂型，如片剂、口服液体制剂、胶囊、颗粒剂。

6、如权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为

千年健加2.5倍量的水湿润，用蒸馏法蒸馏6小时，得挥发油和药渣A；

蚂蚁，青风藤，威灵仙加8、6和6倍量65％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至50℃下相对密度为1.05～1.10，得浓缩液B；

石楠藤，鹿衔草、鸡血藤和千年健药渣A加8、6和6倍量的水煎煮提取3次，每次1.5小时，合并滤液，减压浓缩至50℃下相对密度约1.05，加2.8倍量95％的乙醇沉淀，放置24小时以上，取上清液减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至50℃下相对密度为1.05～1.10，得浓缩液C；

合并B、C浓缩液，过滤，加入千年健挥发油，加蔗糖50重量份，甜叶菊甙矫味，用40％氢氧化钠溶液调pH至5.0-7.0，过滤、灌装，灭菌即得口服液。

7.如权利要求1、2或3所述的药物组合物口服液的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种：

a.取本组合物制剂口服液10ml，加稀盐酸1ml，摇匀，照柱色谱法，置已处理好的阳离子交换树脂柱，分别用水、乙醇洗至洗脱液无色澄明，再用2-5∶90-110的浓氨溶液-稀乙醇洗脱，洗脱液蒸干，残渣加2-5∶90-110的稀盐酸一稀乙醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加2-5∶90-110的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡1-3小时，滤过，滤液浓缩至2ml；作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加2-5∶90-110的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡1-3小时，滤过，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3-5∶0.5-1.5∶4-6的正丁醇-冰醋酸-水的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-3％茚三酮乙醇溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的斑点；

b.取本组合物制剂口服液20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，合并氯仿液，用0.4-0.6ml/L硫酸溶液振摇提取4次，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，合并氯仿液，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试溶液及对照品溶液各5ul，分别点于同-含1.5-3％氨氧化钠的硅胶薄层板上，以2-4∶3-5∶2-4∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水在8-12℃以下放置的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同荧光熄灭斑点；

c.取本组合物制剂口服液10ml，用水饱和正丁醇提取2次，合并正丁醇提提取液，用正丁醇饱和的水洗涤，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取千年健对照药材1g，加水30ml，加热回流1小时，滤过，取滤液10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60-70∶30-40∶8-12的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点。

8、如利要求7所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的-种或几种：

a.取本品10ml，加稀盐酸1ml，摇匀，照柱色谱法，置已处理好的阳离子交换树脂柱，其玻璃柱内径1.5cm，732型氢型强酸型苯乙烯系阳离子交换树脂，湿法装柱至12cm上，分别用水、乙醇洗至洗脱液五色澄明，再用3∶100的浓氨溶液-稀乙醇150ml洗脱，洗脱液蒸干，残渣加3∶100的稀盐酸-稀乙醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加3∶100的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡2小时，滤过，滤液浓缩至2ml；作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加3∶100的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡2小时，滤过，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同-硅胶G薄层板上，以4∶1∶5的正丁醇-冰醋酸-水的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％茚三酮乙醇溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的斑点；

b.精密量取本品20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，氯仿分别为15ml、15ml、10ml、10ml、5ml，合并氯仿液，用0.5ml/L硫酸溶液振摇提取4次，硫酸溶液分别为40ml、30ml、30ml、20ml，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，氯仿分别为60ml、60ml、50ml、40ml，合并氯仿液，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试溶液及对照品溶液各5ul，分别点于同-含2％氨氧化钠的硅胶GL2245薄层板上，以3∶4∶3∶1的甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水在10℃以下放置的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同荧光熄灭斑点；

c.取本品10ml，用水饱和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇提提取液，用正丁醇饱和的水15mI洗涤，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取千年健对照药材1g，加水30ml，加热回流1小时，滤过，取滤液10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以65∶35∶10的氯仿-甲醇-水在]0℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点。

9、如利要求1、2或3所述的药物组合物口服液的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为：

取本组合物制剂口服液20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，合并氯仿液，用0.3-0.6ml/L硫酸溶液振摇提取4次，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试晶溶液10ul，对照品溶液2ul和4ul，分别交叉点于同一用1-3％氢氧化钠溶液制备的硅胶薄层板上，以1-3∶3-5∶2-4∶1的甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水在8-12℃以下放置后的上层液为展开剂，展开，取山，晾干；照薄层色谱法进行扫描，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得，本品含青藤碱不得少5.0％mg/ml。

10.如利要求9所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为：

精密量取本品20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，氯仿分别为15ml、15ml、10ml、10ml、5ml，合并氯仿液，用0.5ml/L硫酸溶液振摇提取4次，硫酸溶液分别为40ml、30ml、30ml、20ml，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，氯仿分别为60ml、60ml、50ml、40ml，合并氯仿液，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试晶溶液10ul，对照品溶液2ul和4ul，分别交叉点于同一用2％氢氧化钠溶液制备的硅胶GF254薄层板上，以2∶4∶3∶的甲苯-醋酸艺酯-甲醇-水在10℃以下放置后的上层液为展开剂，展开，取山，晾干；照薄层色谱法进行扫描，波长：λ＝270nm，λR＝370nm测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得，本品含青藤碱不得少5.0％mg/ml。

11、如权利要求1、2或3所述的药物组合物口服液的质量控制方法包括如下步骤：

鉴别：a.取本组合物制剂口服液10ml，加稀盐酸1ml，摇匀，照柱色谱法，置已处理好的阳离子交换树脂柱，分别用水、乙醇洗至洗脱液无色澄明，再用2-5∶90-110的浓氨溶液-稀乙醇洗脱，洗脱液蒸干，残渣加2-5∶90-110的稀盐酸一稀乙醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加2-5∶90-110的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡1-3小时，滤过，滤液浓缩至2ml；作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加2-5∶90-110的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡1-3小时，滤过，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3-5∶0.5-1.5∶4-6的正丁醇-冰醋酸-水的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-3％茚三酮乙醇溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的斑点；

b.取本组合物制剂口服液20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，合并氯仿液，用0.4-0.6ml/L硫酸溶液振摇提取4次，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，合并氯仿液，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试溶液及对照品溶液各5ul，分别点于同-含1.5-3％氨氧化钠的硅胶薄层板上，以2-4∶3-5∶2-4∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水在8-12℃以下放置的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同荧光熄灭斑点；

c.取本组合物制剂口服液10ml，用水饱和正丁醇提取2次，合并正丁醇提提取液，用正丁醇饱和的水洗涤，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取千年健对照药材1g，加水30ml，加热回流1小时，滤过，取滤液10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60-70∶30-40∶8-12的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点；

含量测定：取本组合物制剂口服液20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，合并氯仿液，用0.3-0.6ml/L硫酸溶液振摇提取4次，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试晶溶液10ul，对照品溶液2ul和4ul，分别交叉点于同一用1-3％氢氧化钠溶液制备的硅胶薄层板上，以1-3∶3-5∶2-4∶1的甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水在8-12℃以下放置后的上层液为展开剂，展开，取山，晾干；照薄层色谱法进行扫描，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得，本品含青藤碱不得少5.0％mg/ml。

12、如权利要求11所述的药物组合物的质量控制方法包括如下步骤：

鉴别：a.取本品10ml，加稀盐酸1ml，摇匀，照柱色谱法，置已处理好的阳离子交换树脂柱，其玻璃柱内径1.5cm，732型氢型强酸型苯乙烯系阳离子交换树脂，湿法装柱至12cm上，分别用水、乙醇洗至洗脱液五色澄明，再用3∶100的浓氨溶液-稀乙醇150ml洗脱，洗脱液蒸干，残渣加3∶100的稀盐酸一稀乙醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加3∶100的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡2小时，滤过，滤液浓缩至2ml；作为供试品溶液；另取蚂蚁对照药材1g，加3∶100的稀盐酸-稀乙醇10ml，浸泡2小时，滤过，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1∶5的正丁醇-冰醋酸-水的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％茚三酮乙醇溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的斑点；

b.精密量取本品20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，氯仿分别为15ml、15ml、10ml、10ml、5ml，合并氯仿液，用0.5ml/L硫酸溶液振摇提取4次，硫酸溶液分别为40ml、30ml、30ml、20ml，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，氯仿分别为60ml、60ml、50ml、40ml，合并氯仿液，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试溶液及对照品溶液各5ul，分别点于同-含2％氨氧化钠的硅胶GL2245薄层板上，以3∶4∶3∶1的甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水在10℃以下放置的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同荧光熄灭斑点；

c.取本品10ml，用水饱和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇提提取液，用正丁醇饱和的水15mI洗涤，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取千年健对照药材1g，加水30ml，加热回流1小时，滤过，取滤液10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以65∶35∶10的氯仿-甲醇-水在]0℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点；

含量测定：精密量取本品20ml，置分液漏斗中，加浓氨溶液1ml，摇匀，用氯仿振摇萃取5次，氯仿分别为15ml、15ml、10ml、10ml、5ml，合并氯仿液，用0.5ml/L硫酸溶液振摇提取4次，硫酸溶液分别为40ml、30ml、30ml、20ml，合并酸液，用浓氨溶液调pH至10，摇匀，用氯仿振摇提取4次，氯仿分别为60ml、60ml、50ml、40ml，合并氯仿液，减压回收氯仿至干，残渣用乙醇溶解定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试晶溶液10ul，对照品溶液2ul和4ul，分别交叉点于同一用2％氢氧化钠溶液制备的硅胶GF254薄层板上，以2∶4∶3∶1的甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水在10℃以下放置后的上层液为展开剂，展开，取山，晾干；照薄层色谱法进行扫描，波长：λ＝270nm，λR＝370nm测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得，本品含青藤碱不得少5.0％mg/ml。

13.如权利要求1、2或3所述的药物组合物在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的应用。