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CN118660910A - 特异性结合gprc5d和cd3的抗原结合分子及其医药用途 - Google Patents

特异性结合gprc5d和cd3的抗原结合分子及其医药用途 Download PDF

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Publication number
CN118660910A
CN118660910A CN202380020924.5A CN202380020924A CN118660910A CN 118660910 A CN118660910 A CN 118660910A CN 202380020924 A CN202380020924 A CN 202380020924A CN 118660910 A CN118660910 A CN 118660910A
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CN
China
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seq
gprc5d
amino acid
acid sequence
sequence
Prior art date
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Pending
Application number
CN202380020924.5A
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English (en)
Inventor
石金平
朱曼曼
叶超百慧
杨筱莹
金薪盛
应华
陶维康
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd
Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd
Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd, Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd
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Abstract

提供特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子及其医药用途。所述抗原结合分子可用于治疗肿瘤相关疾病。

Description

特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子及其医药用途 技术领域
本披露属于生物技术领域，更具体地，本披露涉及抗原结合分子及其应用。
背景技术
这里的陈述仅提供与本披露有关的背景信息，而不必然地构成现有技术。
多发性骨髓瘤(MM)是第二大常见血液恶性肿瘤，5年生存率约为53.9％，随着全球人口老龄化，发病人群预计会更多。
GPRC5D一个G蛋白偶联孤儿受体，七次跨膜蛋白，在多发性骨髓瘤病人中特异性高表达，且与病人的不良预后相关，而在大部分正常组织中，几乎不表达。另外，不管是新确诊MM还是复发/难治性MM的病人，GPR5CD表达量都要远远高于正常人。此外，在各种畸变细胞型中，无论是1(q)gain或者13(q)del病人中，GPRC5D表达无差异。GPRC5D的过表达与癌症的这种关联表明GPRC5D充当癌症的优异治疗靶标的可能性。
针对MM，目前临床上已有不少治疗药物，包括免疫调节剂(IMID)、蛋白酶抑制剂(PI)以及单抗药物，这些药物确实改善了MM病人的临床状况，但这些疗法都各有其缺点，比如IMID会导致出生缺陷、神经毒性、严重血栓，PI则伴随有高发风险的外周神经毒性。CD38和SLAMF7的单抗则会因红系和白系细胞减少而出现严重感染和贫血，同时也会因为抗原丢失而耐药。目前没有一个疗法可以彻底治愈MM，病人最终都会复发。因此，开发一款新的靶向免疫疗法有比较重要的临床意义。
发明内容
本披露提供了一种特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子和特异性结合GPRC5D的抗体。
在一个方面，本披露提供了一种特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子，其包含至少一个特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和至少一个特异性结合CD3的抗原结合模块，所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块包含重链可变区GPRC5D-VH和轻链可变区GPRC5D-VL，所述特异性结合CD3的抗原结合模块包含重链可变区CD3-VH和轻链可变区CD3-VL。在一个方面，本披露提供了一种特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子，其包含一个或两个特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和一个或两个特异性结合CD3的抗原结合模块，所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块包含重链可变区GPRC5D-VH和轻链可变区GPRC5D-VL，所述特异性结合CD3的抗原结合模块包含重链可变区CD3-VH和 轻链可变区CD3-VL。
在一个方面，本披露提供了一种特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子，其包含一个特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和一个特异性结合CD3的抗原结合模块，所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块包含重链可变区GPRC5D-VH和轻链可变区GPRC5D-VL，所述特异性结合CD3的抗原结合模块包含重链可变区CD3-VH和轻链可变区CD3-VL。
在一个方面，本披露提供了一种特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子，其包含两个特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和两个特异性结合CD3的抗原结合模块，所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块包含重链可变区GPRC5D-VH和轻链可变区GPRC5D-VL，所述特异性结合CD3的抗原结合模块包含重链可变区CD3-VH和轻链可变区CD3-VL。
在本披露提供的特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子的实施方案中，所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块可以是Fab，其包含重链可变区GPRC5D-VH、重链恒定区CH1、轻链可变区GPRC5D-VL和轻链恒定区CL。
在本披露提供的特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子的实施方案中，所述特异性结合CD3的抗原结合模块可以是经替换的Fab，其包含重链可变区CD3-VH、Obscurin链、轻链可变区CD3-VL和Titin链。
在本披露提供的特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子的实施方案中，所述特异性结合CD3的抗原结合模块可以是scFv，其包含重链可变区CD3-VH、和轻链可变区CD3-VL。
在一些实施方案中，如前所述的抗原结合分子，其中：
(i)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：137、18、135、136或138的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
(ii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134、10或133的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：130、12、129、131或132的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
(iii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：140、22或139的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所 述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
(iv)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：144、30、141、142或143的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3。
在一些实施方案中，所述GPRC5D-HCDR1、GPRC5D-HCDR2、GPRC5D-HCDR3、GPRC5D-LCDR1、GPRC5D-LCDR2和GPRC5D-LCDR3根据Kabat、IMGT、Chothia、AbM或Contact编号规则定义。
在一些实施方案中，如前所述的抗原结合分子，其中：
(i)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
(ii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：130的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的 GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：129的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：130的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：129的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
(iii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：140的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的 GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
(iv)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：144的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中：
(i)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
(ii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：130的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中：
所述GPRC5D-VH包含GPRC5D-HCDR1：其氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示，GPRC5D-HCDR2：其氨基酸序列如SEQ ID NO：134所示和GPRC5D-HCDR3：其氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示，和所述GPRC5D-VL包含GPRC5D-LCDR1：其氨基酸序列如SEQ ID NO：130所示，GPRC5D-LCDR2：其氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示和GPRC5D-LCDR3：其氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示。
在本披露的特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子的实施方案中，其中：
(i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：15所示的GPRC5D-HCDR1、SEQ ID NO：16所示的GPRC5D-HCDR2和SEQ ID NO：17所示的GPRC5D-HCDR3，和
所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：137、18、135、136或138所示的 GPRC5D-LCDR1、SEQ ID NO：19所示的GPRC5D-LCDR2和SEQ ID NO：20所示的GPRC5D-LCDR3；或
(ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：9所示的GPRC5D-HCDR1、SEQ ID NO：134、10或133所示的GPRC5D-HCDR2和SEQ ID NO：11所示的GPRC5D-HCDR3，和
所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：130、12、129、131或132所示的GPRC5D-LCDR1、SEQ ID NO：13所示的GPRC5D-LCDR2和SEQ ID NO：14所示的GPRC5D-LCDR3；或
(iii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：21所示的GPRC5D-HCDR1、SEQ ID NO：140、22或139所示的GPRC5D-HCDR2和SEQ ID NO：23所示的GPRC5D-HCDR3，和
所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：24所示的GPRC5D-LCDR1、SEQ ID NO：25所示的GPRC5D-LCDR2和SEQ ID NO：26所示的GPRC5D-LCDR3；或
(iv)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：27所示的GPRC5D-HCDR1、SEQ ID NO：28所示的GPRC5D-HCDR2和SEQ ID NO：29所示的GPRC5D-HCDR3，和
所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：144、30、141、142或143所示的GPRC5D-LCDR1、SEQ ID NO：31所示的GPRC5D-LCDR2和SEQ ID NO：32所示的GPRC5D-LCDR3；
优选地，
(i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：15所示的GPRC5D-HCDR1、SEQ ID NO：16所示的GPRC5D-HCDR2和SEQ ID NO：17所示的GPRC5D-HCDR3，和
所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：137所示的GPRC5D-LCDR1、SEQ ID NO：19所示的GPRC5D-LCDR2和SEQ ID NO：20所示的GPRC5D-LCDR3；或
(ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：9所示的GPRC5D-HCDR1、SEQ ID NO：134所示的GPRC5D-HCDR2和SEQ ID NO：11所示的GPRC5D-HCDR3，和
所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：130所示的GPRC5D-LCDR1、SEQ ID NO：13所示的GPRC5D-LCDR2和SEQ ID NO：14所示的GPRC5D-LCDR3。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中：
所述GPRC5D-VH包含GPRC5D-HCDR1：其氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示，GPRC5D-HCDR2：其氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示和GPRC5D-HCDR3：其氨基酸序列如SEQ ID NO：17所示，和所述GPRC5D-VL包含GPRC5D-LCDR1：其氨基酸序列如SEQ ID NO：137所示，GPRC5D-LCDR2：其氨基酸序列如SEQ ID NO：19所示和GPRC5D-LCDR3：其氨基酸序列如SEQ ID NO：20所示。
在一些实施方案中，所述GPRC5D-HCDR1、GPRC5D-HCDR2、GPRC5D-HCDR3、GPRC5D-LCDR1、GPRC5D-LCDR2和GPRC5D-LCDR3根据 Kabat编号规则定义。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中：
(i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44、3、42或43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49、4、45、46、47、48或50的氨基酸序列；或
(ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35、1、33或34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39、2、36、37、38、40或41的氨基酸序列；或
(iii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55、5、51、52、53或54的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56、6或57的氨基酸序列；或
(iv)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：67、7、58、59、60、61、62、63、64、65、66或68的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75、8、69、70、71、72、73或74的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中：
(i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列；或
(ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；或
(iii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列；或
(iv)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：67氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：62的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中：
(i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；或
(ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；或
(iii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；或
(iv)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列，和所述 GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中：
(i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；或
(ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中：
所述GPRC5D-VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：35所示，和所述GPRC5D-VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：39所示。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中：
所述GPRC5D-VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：44所示，和所述GPRC5D-VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：49所示。
在本披露的特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子的实施方案中，其中所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块包含：
(i)SEQ ID NO：44、3、42或43所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：49、4、45、46、47、48或50所示的GPRC5D-VL；或
(ii)SEQ ID NO：35、1、33或34所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：39、2、36、37、38、40或41所示的GPRC5D-VL；或
(iii)SEQ ID NO：55、5、51、52、53或54所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：56、6或57所示的GPRC5D-VL；或
(iv)SEQ ID NO：67、7、58、59、60、61、62、63、64、65、66或68所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：75、8、69、70、71、72、73或74所示的GPRC5D-VL；
优选地，
(i)SEQ ID NO：44所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：49所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：43所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：46所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：43所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：49所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：43所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：50所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：44所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：46所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：44所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：50所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：3所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：4所示的GPRC5D-VL； 或
(ii)SEQ ID NO：35所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：39所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：34所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：36所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：34所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：38所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：34所示的GPRC5D-VH包，和SEQ ID NO：39所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：35所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：36所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：35所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：38所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：1所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：2所示的GPRC5D-VL；或
(iii)SEQ ID NO：55所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：56所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：54所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：56所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：54所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：57所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：55所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：57所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：5所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：6所示的GPRC5D-VL；或
(iv)SEQ ID NO：67所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：75所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：61所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：75所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：62所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：75所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：64所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：75所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：65所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：75所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：7所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：8所示的GPRC5D-VL； 或
更优选地，所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块包含：
(i)SEQ ID NO：44所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：49所示的GPRC5D-VL；或
(ii)SEQ ID NO：35所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：39所示的GPRC5D-VL。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子进一步包含Fc区，所述Fc区优选为IgG Fc区，更优选为IgG1Fc区。在一些实施方案中，所述Fc区相比野生型Fc区，包含一个或多个氨基酸取代，所述的氨基酸取代能够减少与Fc受体的结合，特别是与Fcγ受体的结合。在一些实施方案中，所述Fc区包含一个或多个能够减少Fc区与Fcγ受体结合的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述Fc区是人IgG1Fc区，并且在234和235位置的氨基酸残基为A，编号依据为EU索引。在一些实施方案中，所述Fc区包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含Fc区，所述Fc区包含能够相互缔合的第一亚基(Fc1)和第二亚基(Fc2)，所述Fc1和Fc2各自独立地具有一个或多个减少Fc区同源二聚化的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述Fc1和Fc2各自独立地具有一个或多个根据杵臼技术的的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述Fc1具有根据杵臼技术的凸起结构，和所述Fc2具有根据杵臼技术的孔结构，或所述Fc1具有根据杵臼技术的孔起结构，和所述Fc2具有根据杵臼技术的凸结构；优选地，所述Fc1具有根据杵臼技术的凸起结构，和所述Fc2具有根据杵臼技术的孔结构。在一些实施方案中，所述Fc1在366位置的氨基酸为W；和所述Fc2在366位置的氨基酸为S、在368位置的氨基酸为A、和在407位置的氨基酸为V，编号依据为EU索引；反之亦然。在一些实施方案中，所述Fc1在354位置的氨基酸为C；和所述Fc2在349位置的氨基酸为C，编号依据为EU索引；反之亦然。在一些实施方案中，所述Fc1在354位置的氨基酸为C、在366位置的氨基酸为W；和所述Fc2在349位置的氨基酸为C、在366位置的氨基酸为S、在368位置的氨基酸为A、和在407位置的氨基酸为V，编号依据为EU索引；反之亦然。在一些实施方案中，所述Fc1具有SEQ ID NO：92的氨基酸序列，和所述Fc2具有SEQ ID NO：93的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含一个或两个特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和一个或两个特异性结合CD3的抗原结合模块。在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含一个特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和一个特异性结合CD3的抗原结合模块。在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含两个特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和两个特异 性结合CD3的抗原结合模块。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块是Fab；所述特异性结合CD3的抗原结合模块是经替换的Fab或scFv。在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块是Fab；所述特异性结合CD3的抗原结合模块是经替换的Fab。在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块是Fab；所述特异性结合CD3的抗原结合模块是scFv。在一些实施方案中，所述经替换的Fab为Fab原有的CH1和CL分别被Obscurin链和Titin链所替换，或Fab原有的CH1和CL分别被Titin链和Obscurin链所替换。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块或所述特异性结合CD3的抗原结合模块包含能够形成二聚体的Titin链和Obscurin链。在一些实施方案中，所述Titin链包含选自由SEQ ID NO：145至SEQ ID NO：163组成的组的氨基酸序列，所述Obscurin链包含选自由SEQ ID NO：164至SEQ ID NO：204组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述Titin链包含SEQ ID NO：163或161的氨基酸序列，所述Obscurin链包含SEQ ID NO：198或199的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述Titin链包含SEQ ID NO：163的氨基酸序列，所述Obscurin链包含SEQ ID NO：198的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述Titin链包含SEQ ID NO：161的氨基酸序列，所述Obscurin链包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述的抗原结合分子包含一个特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和一个特异性结合CD3的抗原结合模块，所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块是Fab；所述特异性结合CD3的抗原结合模块是经替换的Fab，其包含能够形成二聚体的Titin链和Obscurin链，优选地，所述经替换的Fab为Fab原有的CH1和CL分别被Obscurin链和Titin链所替换，或Fab原有的CH1和CL分别被Titin链和Obscurin链所替换。
在一些实施方案中，其中至少一个所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和至少一个特异性结合CD3的抗原结合模块通过CH1或Obscurin链的C-末端直接或通过连接子与Fc1或Fc2亚基的N-末端连接，并且在所述Fc1和Fc2亚基的N-末端通过二硫键缔合成异源二聚体。
在一些实施方案中，所述的抗原结合分子包含一条具有式(a)所示结构的第一链、一条具有式(b)所示结构的第二链、一条具有式(c)所示结构的第三链和一条具有式(d)所示结构的第四链，
(a)[GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc1]，
(b)[GPRC5D-VL]-CL，
(c)[CD3-VH]-[Obscurin链]-[Fc2]，
(d)[CD3-VL]-[Titin链]，
式(a)、(b)、(c)和(d)所示的结构是从N端至C端排列的。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列；第二链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；第三链中所述Obscurin链包含SEQ ID NO：198的氨基酸序列；第四链中所述Titin链包含SEQ ID NO：163的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述的抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：86的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：87的氨基酸序列的第四链。
在一些实施方案中，所述抗原结合分子包含一条具有式(e)所示结构的第一链、一条具有式(d)所示结构的第二链、一条具有式(f)所示结构的第三链和一条具有式(b)所示结构的第四链，
(e)[CD3-VH]-[Obscurin链]-[Fc1]，
(d)[CD3-VL]-[Titin链]，
(f)[GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc2]，
(b)[GPRC5D-VL]-CL，
式(e)、(d)、(f)和(b)所示的结构是从N端至C端排列的。
在一些实施方案中，如前所述的抗原结合分子，其中第一链中所述Obscurin链包含SEQ ID NO：198的氨基酸序列；第二链中所述Titin链包含SEQ ID NO：163的氨基酸序列；第三链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列；第四链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述的抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：87的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的第四链。
在一些实施方案中，所述的抗原结合分子包含一条具有式(a)所示结构的第一链、一条具有式(b)所示结构的第二链、一条具有式(g)所示结构的第三链和一条具有式(h)所示结构的第四链，
(a)[GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc1]，
(b)[GPRC5D-VL]-CL，
(g)[CD3-VH]-连接子1-[Obscurin链]-[Fc2]，
(h)[CD3-VL]-连接子2-[Titin链]，
式(a)、(b)、(g)和(h)所示的结构是从N端至C端排列的，所述连接子1和连接子2是相同或不同的肽连接子。
在一些实施方案中，如前所述的抗原结合分子，其中第一链中所述 GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35、44、55或67的氨基酸序列；第二链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39、49、56或75的氨基酸序列；第三链中所述Obscurin链包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列；第四链中所述Titin链包含SEQ ID NO：161的氨基酸序列。在一些实施方案中，连接子1和/或连接子2包含(GGGGS)n的氨基酸序列，其中n为1-5；优选地，n是1、2或3；最优选地，n是1。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列；第二链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；第三链中所述Obscurin链包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列；第四链中所述Titin链包含SEQ ID NO：161的氨基酸序列；连接子1和连接子2的氨基酸序列如SEQ ID NO：90所示。在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列；第二链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；第三链中所述Obscurin链包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列；第四链中所述Titin链包含SEQ ID NO：161的氨基酸序列；连接子1和连接子2的氨基酸序列如SEQ ID NO：90所示。在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；第二链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；第三链中所述Obscurin链包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列；第四链中所述Titin链包含SEQ ID NO：161的氨基酸序列；连接子1和连接子2的氨基酸序列如SEQ ID NO：90所示。在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列；第二链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；第三链中所述Obscurin链包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列；第四链中所述Titin链包含SEQ ID NO：161的氨基酸序列；连接子1和连接子2的氨基酸序列如SEQ ID NO：90所示。
在一些实施方案中，所述的抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第四链；或
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：120的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第四链；或
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：122的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第四链；或
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：124的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：84的 氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第四链。
在一些实施方案中，所述的抗原结合分子包含一条具有式(i)所示结构的第一链、一条具有式(j)所示结构的第二链、一条具有式(f)所示结构的第三链和一条具有式(b)所示结构的第四链，
(i)[CD3-VH]-连接子3-[Obscurin链]-[Fc1]，
(j)[CD3-VL]-连接子4-[Titin链]，
(f)[GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc2]，
(b)[GPRC5D-VL]-CL，
式(i)、(j)、(f)和(b)所示的结构是从N端至C端排列的，所述连接子3和连接子4是相同或不同的肽连接子。
在一些实施方案中，如前所述的抗原结合分子，其中第一链中所述Obscurin链包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列；第二链中所述Titin链包含SEQ ID NO：161的氨基酸序列；第三链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35、44、55、61、62、64、65或67的氨基酸序列；第四链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39、49、56或75的氨基酸序列。在一些实施方案中，连接子3和/或连接子4包含(GGGGS)n的氨基酸序列，其中n为1-5；优选地，n是1、2或3；最优选地，n是1。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述Obscurin链包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列；第二链中所述Titin链包含SEQ ID NO：161的氨基酸序列；第三链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列；第四链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；连接子3和连接子4的氨基酸序列如SEQ ID NO：90所示。在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述Obscurin链包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列；第二链中所述Titin链包含SEQ ID NO：161的氨基酸序列；第三链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列；第四链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；连接子3和连接子4的氨基酸序列如SEQ ID NO：90所示。在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述Obscurin链包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列；第二链中所述Titin链包含SEQ ID NO：161的氨基酸序列；第三链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；第四链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；连接子3和连接子4的氨基酸序列如SEQ ID NO：90所示。在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述Obscurin链包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列；第二链中所述Titin链包含SEQ ID NO：161的氨基酸序列；第三链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：61、62、64、65或67的氨基酸序列；第四链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；连接子3和连接子4的氨基酸序列如SEQ ID NO：90所示。
在一些实施方案中，所述的抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列的第四链；或
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的第四链；或
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列的第四链；或
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列的第四链；或
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列的第四链；或
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列的第四链；或
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：113的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列的第四链；或
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：114的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列的第四链；或
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：227的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：223的氨基酸序列的第四链。
在一些实施方案中，其中所述的抗原结合分子包含两个特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和两个特异性结合CD3的抗原结合模块，所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块是Fab；所述特异性结合CD3的抗原结合模块是scFv。
在一些实施方案中，所述的抗原结合分子包含两条具有式(k)所示结构的第一链和两条具有式(b)所示结构的第二链，
(k)[GPRC5D-VH]-[CH1]-[CD3-VH]-连接子5-[CD3-VL]-连接子6-[Fc3]，
(b)[GPRC5D-VL]-CL，
式(k)和(b)所示的结构是从N端至C端排列的，所述连接子5和连接子6是相 同或不同的肽连接子。
在一些实施方案中，如前所述的抗原结合分子，其中第一链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35、34、44、43、55或54的氨基酸序列；第二链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39、36、38、49、46、50、56或57的氨基酸序列。在一些实施方案中，连接子5和/或连接子6包含(GGGGS)n的氨基酸序列，其中n为1-5；优选地，n是1、2或3；最优选地，n是1或3。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35或34的氨基酸序列；第二链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39、36或38的氨基酸序列；所述连接子5的氨基酸序列如SEQ ID NO：94所示；连接子6的氨基酸序列如SEQ ID NO：95所示。在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44或43的氨基酸序列；第二链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49、46或50的氨基酸序列；所述连接子5的氨基酸序列如SEQ ID NO：94所示；连接子6的氨基酸序列如SEQ ID NO：95所示。在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55或54的氨基酸序列；第二链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56或57的氨基酸序列；所述连接子5的氨基酸序列如SEQ ID NO：94所示；连接子6的氨基酸序列如SEQ ID NO：95所示。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列；第二链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；所述连接子5的氨基酸序列如SEQ ID NO：94所示；连接子6的氨基酸序列如SEQ ID NO：95所示。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列；第二链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；所述连接子5的氨基酸序列如SEQ ID NO：94所示；连接子6的氨基酸序列如SEQ ID NO：95所示。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，其中第一链中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；第二链中所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；所述连接子5的氨基酸序列如SEQ ID NO：94所示；连接子6的氨基酸序列如SEQ ID NO：95所示。
在一些实施方案中，所述的抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：98的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：98的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：101的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：98的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：99的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：99的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：101的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：99的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：111的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：111的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：224的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：217的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：225的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：219的氨基酸序列的第二链；或
所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：226的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：221的氨基酸序列的第二链。
在另一个方面，本披露还提供一种分离的抗体，其能够特异性结合GPRC5D，所述的分离的抗体包含重链可变区GPRC5D-VH和轻链可变区GPRC5D-VL，其中(i)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含 SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：137、18、135、136或138的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
(ii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134、10或133的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：130、12、129、131或132的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
(iii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：140、22或139的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
(iv)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：144、30、141、142或143的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3。
在一些实施方案中，所述GPRC5D-HCDR1、GPRC5D-HCDR2、GPRC5D-HCDR3、GPRC5D-LCDR1、GPRC5D-LCDR2和GPRC5D-LCDR3根据Kabat、IMGT、Chothia、AbM或Contact编号规则定义。
在一些实施方案中，如前所述的分离的抗体，其中：
(i)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨 基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
(ii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：130的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：129的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：130的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的 氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：129的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
(iii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：140的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
(iv)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：144的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3。
在一些实施方案中，如前所述的分离的抗体，其中：
(i)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
(ii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有： 包含SEQ ID NO：130的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3。
在一些实施方案中，提供了一种分离的抗体，其能够特异性结合GPRC5D，所述的抗体包含重链可变区GPRC5D-VH和轻链可变区GPRC5D-VL，其中：
(i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：15所示的GPRC5D-HCDR1、SEQ ID NO：16所示的GPRC5D-HCDR2和SEQ ID NO：17所示的GPRC5D-HCDR3，和
所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：137、18、135、136或138所示的GPRC5D-LCDR1、SEQ ID NO：19所示的GPRC5D-LCDR2和SEQ ID NO：20所示的GPRC5D-LCDR3；或
(ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：9所示的GPRC5D-HCDR1、SEQ ID NO：134、10或133所示的GPRC5D-HCDR2和SEQ ID NO：11所示的GPRC5D-HCDR3，和
所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：130、12、129、131或132所示的GPRC5D-LCDR1、SEQ ID NO：13所示的GPRC5D-LCDR2和SEQ ID NO：14所示的GPRC5D-LCDR3；或
(iii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：21所示的GPRC5D-HCDR1、SEQ ID NO：140、22或139所示的GPRC5D-HCDR2和SEQ ID NO：23所示的GPRC5D-HCDR3，和
所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：24所示的GPRC5D-LCDR1、SEQ ID NO：25所示的GPRC5D-LCDR2和SEQ ID NO：26所示的GPRC5D-LCDR3；或
(iv)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：27所示的GPRC5D-HCDR1、SEQ ID NO：28所示的GPRC5D-HCDR2和SEQ ID NO：29所示的GPRC5D-HCDR3，和
所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：144、30、141、142或143所示的GPRC5D-LCDR1、SEQ ID NO：31所示的GPRC5D-LCDR2和SEQ ID NO：32所示的GPRC5D-LCDR3；
优选地，
(i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：15所示的GPRC5D-HCDR1、SEQ ID NO：16所示的GPRC5D-HCDR2和SEQ ID NO：17所示的GPRC5D-HCDR3，
和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：137所示的GPRC5D-LCDR1、SEQ ID NO：19所示的GPRC5D-LCDR2和SEQ ID NO：20所示的GPRC5D-LCDR3；或
(ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：9所示的GPRC5D-HCDR1、SEQ ID NO：134所示的GPRC5D-HCDR2和SEQ ID NO：11所示的GPRC5D-HCDR3，
和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：130所示的GPRC5D-LCDR1、SEQ ID NO：13所示的GPRC5D-LCDR2和SEQ ID NO：14所示的GPRC5D-LCDR3。
在一些实施方案中，如前所述的分离的抗体，其中：
所述GPRC5D-VH包含GPRC5D-HCDR1：其氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示，GPRC5D-HCDR2：其氨基酸序列如SEQ ID NO：134所示和GPRC5D-HCDR3：其氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示，和所述GPRC5D-VL包含GPRC5D-LCDR1：其氨基酸序列如SEQ ID NO：130所示，GPRC5D-LCDR2：其氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示和GPRC5D-LCDR3：其氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示。在一些实施方案中，如前所述的分离的抗体，其中：
所述GPRC5D-VH包含GPRC5D-HCDR1：其氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示，GPRC5D-HCDR2：其氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示和GPRC5D-HCDR3：其氨基酸序列如SEQ ID NO：17所示，和所述GPRC5D-VL包含GPRC5D-LCDR1：其氨基酸序列如SEQ ID NO：137所示，GPRC5D-LCDR2：其氨基酸序列如SEQ ID NO：19所示和GPRC5D-LCDR3：其氨基酸序列如SEQ ID NO：20所示。
在一些实施方案中，所述GPRC5D-HCDR1、GPRC5D-HCDR2、GPRC5D-HCDR3、GPRC5D-LCDR1、GPRC5D-LCDR2和GPRC5D-LCDR3根据Kabat编号规则定义。
在一些实施方案中，如前所述的分离的抗体，其中：
(i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44、3、42或43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49、4、45、46、47、48或50的氨基酸序列；或
(ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35、1、33或34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39、2、36、37、38、40或41的氨基酸序列；或
(iii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55、5、51、52、53或54的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56、6或57的氨基酸序列；或
(iv)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：67、7、58、59、60、61、62、63、64、65、66或68的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75、8、69、70、71、72、73或74的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如前所述的分离的抗体，其中：
(i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL 包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列；或
(ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；或
(iii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列；或
(iv)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：67氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：62的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL 包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如前所述的分离的抗体，其中：
(i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；或
(ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；或
(iii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；或
(iv)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如前所述的分离的抗体，其中：
(i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；或
(ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如前所述的分离的抗体，其中：
所述GPRC5D-VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：35所示，和所述GPRC5D-VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：39所示。
在一些实施方案中，如前所述的分离的抗体，其中：
所述GPRC5D-VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：44所示，和所述GPRC5D-VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：49所示。
在一些实施方案中，所述分离的抗体包含：
(i)SEQ ID NO：44、3、42或43所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：49、4、45、46、47、48或50所示的GPRC5D-VL；或
(ii)SEQ ID NO：35、1、33或34所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：39、2、36、37、38、40或41所示的GPRC5D-VL；或
(iii)SEQ ID NO：55、5、51、52、53或54所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：56、6或57所示的GPRC5D-VL；或
(iv)SEQ ID NO：67、7、58、59、60、61、62、63、64、65、66或68所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：75、8、69、70、71、72、73或74所示的GPRC5D-VL；
优选地，所示抗体包含：
(i)SEQ ID NO：44所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：49所示的 GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：43所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：46所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：43所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：49所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：43所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：50所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：44所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：46所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：44所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：50所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：3所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：4所示的GPRC5D-VL；或
(ii)SEQ ID NO：35所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：39所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：34所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：36所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：34所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：38所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：34所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：39所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：35所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：36所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：35所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：38所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：1所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：2所示的GPRC5D-VL；或
(iii)SEQ ID NO：55所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：56所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：54所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：56所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：54所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：57所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：55所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：57所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：5所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：6所示的GPRC5D-VL； 或
(iv)SEQ ID NO：67所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：75所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：61所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：75所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：62所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：75所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：64所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：75所示的GPRC5D-VL，或
SEQ ID NO：65所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：75所示的GPRC5D-VL；或
SEQ ID NO：7所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：8所示的GPRC5D-VL；或
更优选地，所述抗体包含：
(i)SEQ ID NO：44所示的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：49所示的GPRC5D-VL，或
(ii)SEQ ID NO：35的所述的GPRC5D-VH，和SEQ ID NO：39所示的GPRC5D-VL。
在一些实施方案中，前述任一项所述的抗原结合分子或前述任一项所述的分离的抗体是双特异性抗体。
在一些实施方案中，所述的双特异性抗体特异性结合GPRC5D和CD3。
在一些实施方案中，前述任一项所述的抗原结合分子或前述任一项所述的分离的抗体，其中所述的抗原结合分子或抗体不与E2肽、E3肽和E4肽结合，其中所述的E2肽包含SEQ ID NO：206的氨基酸序列，所述的E3肽包含SEQ ID NO：207的氨基酸序列，所述的E4肽包含SEQ ID NO：208的氨基酸序列。
在一些实施方案中，前述任一项所述的抗原结合分子或前述任一项所述的分离的抗体与人GPRC5D的氨基末端区域结合，其中所述的人GPRC5D的氨基末端区域包含SEQ ID NO：205的氨基酸序列。
在一些实施方案中，前述任一项所述的抗原结合分子或前述任一项所述的分离的抗体，其中所述的抗原结合分子或抗体不与E2肽、E3肽和E4肽结合，且与人GPRC5D的氨基末端区域结合，其中所述的E2肽包含SEQ ID NO：206的氨基酸序列，所述的E3肽包含SEQ ID NO：207的氨基酸序列，所述的E4肽包含SEQ ID NO：208的氨基酸序列，所述的氨基末端区域包含SEQ ID NO：205的氨基酸序列。
在一些实施方案中，前述任一项所述的抗原结合分子或前述任一项所述的分离的抗体，其中所述的抗原结合分子或抗体不与E2肽、E3肽和E4肽结合，且 与人GPRC5D的氨基末端区域结合，其中所述的E2肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：206所示，所述的E3肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：207所示，所述的E4肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：208所示，所述氨基末端区域的氨基酸序列如SEQ ID NO：205所示。
在一些实施方案中，本披露提供了一种药物组合物，其含有：治疗有效量的前述任一项所述的抗原结合分子或前述任一项所述的分离的抗体，以及一种或更多种药学上可接受的载体、稀释剂、缓冲剂或赋形剂。在一些实施方案中，所述的药物组合物中还包含至少一种第二治疗剂。
在另一个方面，本披露还提供分离的核酸，其编码前述任一项所述的抗原结合分子或前述任一项所述的分离的抗体。
在另一个方面，本披露还提供一种宿主细胞，其包含前述的核酸。
在另一个方面，本披露还提供一种治疗疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的前述任一项所述的抗原结合分子或前述任一项所述的分离的抗体或其组合物。
在另一个方面，本披露还提供前述任一项所述的抗原结合分子或前述任一项所述的分离的抗体或其组合物在制备治疗疾病的药物中的用途。
在另一个方面，本披露还提供用作药物的前述任一项所述的抗原结合分子或前述任一项所述的分离的抗体或其组合物。在一些实施方案中，所述药物用于治疗或预防疾病。
在一些实施方案中，如前任一项所述的疾病是增殖性疾病(包括肿瘤、癌症)或自身免疫疾病。
在一些实施方案中，如前任一项所述的疾病是血液恶性肿瘤或实体瘤。在一些实施方案中，所述血液恶性肿瘤是多发性骨髓瘤、复发/难治性多发性骨髓瘤、冒烟型多发性骨髓瘤、单克隆丙种球蛋白病(MGUS)(例如未明确诊断意义的单克隆丙种球蛋白病)、急性淋巴母细胞白血病(ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、伯基特淋巴瘤(BL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、华氏巨球蛋白血症、浆细胞白血病、轻链型淀粉样变(AL)、前体B细胞淋巴母细胞白血病、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、B细胞恶性肿瘤、慢性髓性白血病(CML)、毛细胞白血病(HCL)、母细胞性浆细胞样树突状细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤(MZBL)、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)、浆细胞白血病或间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)。在一些实施方案中，所述实体瘤是卵巢癌、肺癌(非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、胃癌、前列腺癌、肾癌、肝癌、结直肠癌(如结肠癌和直肠癌)、食管癌(食道癌)、膀胱癌、宫颈癌或黑色素瘤。
在一些实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤、复发/难治性多发性骨髓瘤、冒烟型多发性骨髓瘤、单克隆丙种球蛋白病(MGUS)(例如未明确诊断意义的单克 隆丙种球蛋白病)、急性淋巴母细胞白血病(ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、伯基特淋巴瘤(BL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、华氏巨球蛋白血症、浆细胞白血病、轻链型淀粉样变(AL)、前体B细胞淋巴母细胞白血病、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、B细胞恶性肿瘤、慢性髓性白血病(CML)、毛细胞白血病(HCL)、母细胞性浆细胞样树突状细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤(MZBL)、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)、浆细胞白血病、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、卵巢癌、肺癌、胃癌、前列腺癌、肾癌、肝癌、结直肠癌、食管癌、膀胱癌、宫颈癌或黑色素瘤。
在一些实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤。
在一些实施方案中，所述疾病是复发/难治性多发性骨髓瘤。
在一些实施方案中，前述的疾病为与GPRC5D相关的疾病；在一些实施方案中，前述的疾病为表达GPRC5D的疾病。
本披露提供的抗原结合分子，具有高亲和力、体外杀伤活性、治疗活性和安全性的特点。
附图说明
图1A显示式2的结构示意图；
图1B显示式2-0G4S的结构示意图；
图1C显示式4的结构示意图；
图1D显示式4-0G4S的结构示意图；
图1E显示式11的结构示意图；
图2显示抗体F2-1在NCIH929皮下移植瘤模型药效。
具体实施方式
术语
本文所用的术语只是为了描述实施方案的目的，并非旨在进行限制。除非另外定义，本文所用的全部技术术语和科学术语具有与本披露所属领域的普通技术人员通常所理解的相同意义。
除非上下文另外清楚要求，否则在整个说明书和权利要求书中，应将词语“包含”、“具有”、“包括”等理解为具有包含意义，而不是排他性或穷举性意义；也即，“包括但不仅限于”的意义。除非另有说明，“包含”包括了“由……组成”。例如，对于包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1，其明确的涵盖氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的GPRC5D-HCDR1。
本披露所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.biol.chem，243，p3558(1968)中所述。
术语“和/或”，例如“X和/或Y”应当理解为意指“X和Y”或“X或Y”并且应当被用来提供对两种含义或任一含义的明确支持。
术语“氨基酸”是指天然存在的和合成的氨基酸，以及以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，以及后来修饰的那些氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指与天然存在的氨基酸具有相同基本化学结构(即与氢、羧基、氨基和R基团结合的α碳)的化合物，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。此类类似物具有修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构，但是以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的化学化合物。
术语“氨基酸突变”包括氨基酸取代，缺失，插入和修饰。可以进行取代、缺失、插入和修饰的任意组合来实现最终构建体，只要最终构建体拥有期望的特性，例如降低对Fc受体的结合。氨基酸序列缺失和插入包括在多肽链的氨基端和/或羧基端的缺失和插入。具体的氨基酸突变可以是氨基酸取代。在一个实施方案中，氨基酸突变是非保守性的氨基酸取代，即将一个氨基酸用具有不同结构和/或化学特性的另一种氨基酸替换。氨基酸取代包括由非天然存在的氨基酸或由20种天然氨基酸的衍生物(例如4-羟脯氨酸、3-甲基组氨酸、鸟氨酸、高丝氨酸、5-羟赖氨酸)替换。可以使用本领域中公知的遗传或化学方法生成氨基酸突变。遗传方法可以包括定点诱变、PCR，基因合成等。预计基因工程以外的改变氨基酸侧链基团的方法，如化学修饰也是可用的。本文中可使用各种名称来指示同一氨基酸突变。本文中，可采用位置+氨基酸残基的方式表示特定位点的氨基酸残基，例如366W，则表示在366位点上的氨基酸残基为W。T366W则表示第366位点上的氨基酸残基由原来的T突变为了W。
术语“抗原结合分子”以最广义使用，涵盖各种特异性结合抗原的分子，包括但不限于抗体、其他具有抗原结合活性的多肽以及两者融合而成的抗体融合蛋白，只要它们展现出期望的抗原结合活性。本文的抗原结合分子包含可变区(VH)和可变区(VL)，其共同构成抗原结合域。示例性的，本文中的抗原结合分子是双特异性抗原结合分子(例如：双特异性抗体)。
术语“抗体”以最广义使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体，多克隆抗体；单特异性抗体，多特异性抗体(例如双特异性抗体)，全长抗体和抗体片段(或抗原结合片段，或抗原结合部分)，只要它们展现出期望的抗原结合活性。例如，天然IgG抗体是约150,000道尔顿的异四聚糖蛋白，由二硫键结合的两条相同轻链和两条相同重链构成。从N至C端，每条重链具有一个可变区(VH)，又称作可变重域、重链可变区，接着是三个恒定域(CH1、CH2和CH3)。类似地，从N至C端，每条轻链具有一个可变区(VL)，又称作可变轻域，或轻 链可变域，接着是一个恒定轻域(轻链恒定区、CL)。
术语“双特异性抗体”指能够对两个不同抗原或同一抗原的至少两个不同抗原表位特异性结合的抗体(包括抗体或其抗原结合片段，如单链抗体)。现有技术已公开了各种结构的双特异性抗体，根据IgG分子的完整性可分为IgG样双特异性抗体和抗体片段型双特异性抗体，根据抗原结合区域的数量可分为二价、三价、四价或更多价的双特异性抗体，根据结构是否对称可分为对称结构双特异性抗体和不对称结构双特异性抗体。其中，基于抗体片段的双特异性抗体，例如缺乏Fc片段的Fab片段，其通过将2个或多个Fab片段结合在一个分子中形成双特异性抗体，其具有较低的免疫原性，且分子量小，具有较高的肿瘤组织渗透性，该类型的典型的抗体结构如F(ab)2、scFv-Fab、(scFv)2-Fab；IgG样双特异性抗体(例如具有Fc片段)，这类抗体相对分子量较大，Fc片段有助于抗体的纯化，并提高其溶解性、稳定性，Fc部分还可能会与受体FcRn结合，增加抗体血清半衰期，典型的双特异性抗体结构模型如KiH、CrossMAb、Triomab quadroma、FcΔAdp、ART-Ig、BiMAb、Biclonics、BEAT、DuoBody、Azymetric、XmAb、2:1 TCBs、1Fab-IgG TDB、FynomAb、two-in-one/DAF、scFv-Fab-IgG、DART-Fc、LP-DART、CODV-Fab-TL、HLE-BiTE、F(ab)2-CrossMAb、IgG-(scFv)2、Bs4Ab、DVD-Ig、Tetravalent-DART-Fc、(scFv)4-Fc、CODV-Ig、mAb2、F(ab)4-CrossMAb等(参见Aran F.Labrijn等，Nature Reviews Drug Discovery volume 18，pages585–608(2019)；Chen S1等，J Immunol Res.2019 Feb 11；2019:4516041)。
术语“可变区”或“可变域”指抗原结合分子中结合抗原的域。本文中，特异性结合GPRC5D的抗原结合模块中的重链可变区标示为GPRC5D-VH，轻链可变区标示为GPRC5D-VL；特异性结合CD3的抗原结合模块中的重链可变区标示为CD3-VH，轻链可变区标示为CD3-VL。VH和VL各包含四个保守的框架区(FR)和三个互补决定区(CDR)。其中，术语“互补决定区”或“CDR”指可变结构域内主要促成与抗原结合的区域；“框架”或“FR”是指除CDR残基之外的可变结构域残基。VH包含3个CDR区：HCDR1、HCDR2和HCDR3；VL包含3个CDR区：LCDR1、LCDR2和LCDR3。本文中，GPRC5D-VH中的3个CDR区分别标示为GPRC5D-HCDR1、GPRC5D-HCDR2和GPRC5D-HCDR3；GPRC5D-VL中的3个CDR区分别标示为GPRC5D-LCDR1、GPRC5D-LCDR2和GPRC5D-LCDR3；CD3-VH中的3个CDR区分别标示为CD3-HCDR1、CD3-HCDR2和CD3-HCDR3；CD3-VL中的3个CDR区分别标示为CD3-LCDR1、CD3-LCDR2和CD3-LCDR3。每个VH和VL从N端到C端依次为：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。单个VH或VL可能足以赋予抗原结合特异性。
可以通过各种公知方案来确定CDR的氨基酸序列边界，例如：“Kabat”编号规则(参见Kabat等(1991)，“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD)、 “Chothia”编号规则、“ABM”编号规则、“contact”编号规则(参见Martin,ACR.Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains[J].2001)和ImMunoGenTics(IMGT)编号规则(Lefranc，M.P.等，Dev.Comp.Immunol.，27，55-77(2003)；Front Immunol.2018 Oct 16；9:2278)等；各种编号系统之间的对应关系是本领域技术人员熟知的。本披露的编号规则如下表1中所示。
表1.CDR编号系统之间的关系
除非另有说明，本披露实施例中的可变区和CDR序列均适用“Kabat”编号规则。
术语“抗体片段”指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体的部分，所述部分保留了完整抗体的抗原结合能力。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab′、Fab′-SH、F(ab′)2、单域抗体、单链Fab(scFab)、双抗体、线性抗体、单链抗体分子(例如scFv)；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。
如本文所述，术语“Fab”或“Fab片段”可互换使用，其是指由VH、VL、CH1和CL结构域组成的单价抗体片段；在本文中，一种抗体，例如抗GPRC5D抗体的Fab单价抗体片段可以通过其CH1的C-末端直接或通过连接子与Fc1亚基连接，所形成的Fab-Fc1可进一步通过在Fc1亚基N-末端的二硫键与另一种抗体，例如抗CD3抗体的Fab-Fc2形成双特异性抗体。
如本文所用，术语“scFv”是指单链抗体(Single-chain variable fragment)，其由抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过一个10-25个氨基酸组成的柔性短肽(linker)连接而成，是最小的重组抗体形式。
术语“Fc区”或“片段可结晶区”用于定义抗体重链的C末端区域，包括天然Fc区和改造的Fc区。在一些实施方案中，Fc区包含了相同或不同的两个亚基。在一些实施方案中，人IgG重链的Fc区定义为从Cys226位置处的氨基酸残基或从Pro230延伸至其羧基末端。用于本文所述抗体的合适天然序列Fc区包括人IgG1、IgG2(IgG2A、IgG2B)、IgG3和IgG4。除非另有说明，Fc区的编号规则为EU索引。
术语“Titin链”是指Titin蛋白中一段长度为78-118个氨基酸的包含Titin Ig-样152结构域的肽段或其功能变体，所述Titin链能够与Obscurin Ig-样1或Obscurin-样Ig-样1结构域结合形成二聚化复合物。术语“Obscurin链”是指 Obscurin蛋白上一段长度为87-117个氨基酸的包含Obscurin Ig-样1结构域的肽段或其功能变体，或Obscurin-样1蛋白上一段长度为78-118个氨基酸的包含Obscurin-样Ig-样1结构域的肽段或其功能变体，所述Obscurin链能够与Titin Ig-样152结构域结合形成二聚化复合物。本披露的Titin链与Obscurin链可用于替换Fab中的CH1和CL，形成经替换的Fab(Fab-S)，该替换不影响抗原结合分子与抗原的结合。
术语“嵌合”抗体指抗体中的重和/或轻链的一部分自特定的来源或物种衍生，而重和/或轻链的剩余部分自不同来源或物种衍生的抗体。
术语“人源化”抗体是保留非人抗体的反应性同时在人中具有较低免疫原性的抗体。例如，可以通过保留非人CDR区并用其人对应物(即，恒定区以及可变区的框架区部分)替换抗体的其余部分来实现。
术语“亲和力”是指分子(例如，抗体)的单个结合部位与其结合配体(例如，抗原)之间非共价相互作用的总体的强度。除非另外指明，如本文所用，“结合亲和力”是指内部结合亲和力，其反映出结合对(例如，抗体与抗原)的成员之间1:1相互作用。分子X对其配体Y的亲和力通常可以由平衡解离常数(KD)表示。亲和力可以通过本领域已知的常规方法(包括本文所述的那些)测量。术语“kassoc”或“ka”指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率，而如本文所使用的术语“kdis”或“kd”意在是指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。如本文所使用的，术语“KD”指平衡解离常数，其获得自kd与ka的比率(即kd/ka)并且表示为摩尔浓度(M)。可以使用本领域已知的方法测定抗体的KD值，例如表面等离子体共振法、ELISA或溶液平衡滴定法(SET)。
术语“单克隆抗体”指基本上均质的抗体的群，即在该群中包含的抗体分子的氨基酸序列是相同的，除了可能少量存在的天然突变以外。相比之下，多克隆抗体制剂通常包含在其可变结构域具有不同氨基酸序列的多种不同抗体，其通常特异性针对不同表位。“单克隆”表示从基本上均质的抗体群体获得的抗体的特征，并且不应解释为要求通过任何特定方法来生产抗体。在一些实施方案中，本披露提供的抗体是单克隆抗体。
术语“抗原”是指能够由抗原结合蛋白(例如抗体)的选择性结合剂所结合的分子或分子部分。抗原可具有一个或多个能够与不同的抗原结合蛋白(例如抗体)相互作用的表位。
术语“表位”指能够与抗体或其抗原结合片段特异性结合的抗原上的区域(area或region)。表位可以由连续氨基酸(线性表位)形成或包含非连续氨基酸(构象表位)，例如因抗原的折叠(即通过蛋白质性质的抗原的三级折叠)而使得非连续的氨基酸在空间上得以接近。构象表位和线性表位的差别在于：在变性溶剂的存在下，抗体对构象表位的结合丧失。表位包含处于独特空间构象的至少3，至少4，至少5，至少6，至少7，或8-10个氨基酸。筛选结合特定表位的抗体(即 那些结合相同表位的)可以使用本领域例行方法来进行，例如但不限于丙氨酸扫描，肽印迹(见Meth.Mol.Biol.248(2004)443-463)，肽切割分析，表位切除，表位提取，抗原的化学修饰(见Prot.Sci.9(2000)487-496)，和交叉阻断(见“Antibodies”，Harlow and Lane(Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harb.,NY))。
术语“能够特异性结合”、“特异性结合”或“结合”是指相比其他抗原或表位，抗体能够以更高的亲和力结合至某个抗原或表位。通常，抗体以约1×10-7M或更小(例如约1×10-8M或更小)的平衡解离常数(KD)结合抗原或表位。在一些实施方案中，抗体与抗原结合的KD为该抗体结合至非特异性抗原(例如BSA、酪蛋白)的KD的10％或更低(例如1％)。可使用已知的方法来测量KD，例如通过FACS或表面等离子体共振测定法所测量的。然而，特异性结合至抗原或抗原内的表位的抗体可能对其它相关的抗原具有交叉反应性，例如，对来自其它物种(同源)(诸如人或猴，例如食蟹猕猴(Macaca fascicularis)(cynomolgus，cyno)、黑猩猩(Pan troglodytes)(chimpanzee，chimp))或狨猴(Callithrix jacchus)(commonmarmoset，marmoset)的相应抗原具有交叉反应性。
术语“不结合”是指抗体不能够以上述特异性结合的方式结合至某个抗原或该抗原内的表位。例如，当抗体以约1×10-6M或更大的平衡解离常数(KD)结合抗原或抗原内的表位。
术语“抗原结合模块”指特异性结合目标抗原的多肽分子。具体的抗原结合模块包括抗体的抗原结合域，例如包含重链可变区和轻链可变区。术语“特异性结合GPRC5D的抗原结合模块”是指能够以足够的亲和力结合GPRC5D的模块，使得含有该模块的分子可用作靶向GPRC5D的诊断剂和/或治疗剂。例如，特异性结合GPRC5D的抗原结合模块具有以下的平衡解离常数(KD)：<约10nM，其是通过表面等离子体共振测定法测量的。抗原结合模块包括如本文定义的抗体片段，例如Fab，经替换的Fab或scFv。
术语“连接子”指连接两个多肽片段的连接单元。在本文中，同一结构式中出现的连接子可以是相同或不同的。连接子可以是肽连接子，其包含一个或多个氨基酸，典型的约1-30个、2-24个或3-15个氨基酸。应用于本文的连接子可以是相同或不同的。当“-”出现在结构式中，其表示两侧的单元直接通过共价键连接。
“Tm”是溶解变性温度(内源荧光)。当蛋白质变性(加热或变性剂作用)时，三级结构打开，芳香族氨基酸微环境发生变化，导致发射荧光光谱改变。本披露中，Tm1是指荧光变化到最大值的一半时的温度。
“Tonset”是变性起始温度。意指蛋白质开始变性时的温度，即荧光值开始变化时的温度。
“Tagg”是聚集起始温度。通过静态光散射，在266nm和473nm两个波长下检测聚集体，监测到样品开始聚集时的温度。Tagg 266指的是266nm下监测到聚集起始温度。
术语“核酸”在本文中可与术语“多核苷酸”互换使用，并且是指呈单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。所述术语涵盖含有已知核苷酸类似物或修饰的骨架残基或连接的核酸，所述核酸是合成的、天然存在的和非天然存在的，具有与参考核酸相似的结合特性，并且以类似于参考核苷酸的方式代谢。此类类似物的实例包括但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基膦酸酯、手性-甲基膦酸酯、2-O-甲基核糖核苷酸、肽-核酸(PNA)。“分离的”核酸指已经与其天然环境的组分分开的核酸分子。分离的核酸包括在下述细胞中含有的核酸分子，所述细胞通常含有该核酸分子，但该核酸分子存在于染色体外或存在于不同于其天然染色体位置的染色体位置处。编码所述抗原结合分子的分离的核酸指编码抗体重链和轻链(或其片段)的一个或更多个核酸分子，包括在单一载体或分开的载体中的这样的一个或更多个核酸分子，和存在于宿主细胞中一个或更多个位置的这样的一个或更多个核酸分子。除非另有说明，否则特定的核酸序列还隐含地涵盖其保守修饰的变体(例如，简并密码子取代)和互补序列以及明确指明的序列。具体地，如下详述，简并密码子取代可以通过产生如下序列而获得，在这些序列中，一个或多个所选的(或全部)密码子的第三位被简并碱基和/或脱氧肌苷残基取代。
术语“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，指氨基酸残基的聚合物。该术语适用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是天然存在的氨基酸相应的人工化学模拟物，以及适用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。除非另外说明，否则特定的多肽序列还隐含地涵盖其保守修饰的变体。
术语序列“同一性”指，当对两条序列进行最佳比对时，两条序列的氨基酸/核酸在等价位置相同的程度(百分比)。在比对过程中，必要时可允许引入间隙以获取最大序列同一性百分比，但任何保守性取代不视为构成序列同一性的一部分。为测定序列同一性百分比，比对可以通过本领域技术已知的技术来实现，例如使用公开可得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可确定适用于测量比对的参数，包括在所比较的序列全长上达成最大比对所需的任何算法。
术语“融合”或“连接”是指部件(例如抗原结合模块和Fc结构域)直接地或经由连接子共价连接。
术语“载体”意指能够转运与其连接的另一多核苷酸的多核苷酸分子。一种类型的载体是“质粒”，其是指环状双链DNA环，其中可以连接附加的DNA区段。另一种类型的载体是病毒载体，例如腺相关病毒载体(AAV或AAV2)，其中另外的DNA区段可以连接到病毒基因组中。某些载体能够在引入它们的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。其他载体(例如，非附加型哺乳动物载体)可以在引入宿主细胞中后整合到宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起复制。术语“表达载体”或“表达构建 体”是指适用于对宿主细胞进行转化且含有指导及/或控制(连同宿主细胞一起)与其可操作地连接的一个或多个异源编码区的表达的核酸序列的载体。表达构建体可以包括但不限于影响或控制转录、翻译且在存在内含子时影响与其可操作地连接的编码区的RNA剪接的序列。
术语“宿主细胞”，“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且指已经导入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“经转化的细胞”，其包括原代的经转化的细胞及自其衍生的后代，而不考虑传代的次数。后代在核酸内容物上可以与亲本细胞不完全相同，而是可以含有突变。本文中，该术语包括突变体后代，其与在原代转化细胞中筛选或选择的细胞具有相同的功能或生物学活性。宿主细胞包括原核和真核宿主细胞，其中真核宿主细胞包括但不限于哺乳动物细胞、昆虫细胞系植物细胞和真菌细胞。哺乳动物宿主细胞包括人、小鼠、大鼠、犬、猴、猪、山羊、牛、马和仓鼠细胞，包括但不限于中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NSO、SP2细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如，Hep G2)、A549细胞、3T3细胞和HEK-293细胞。真菌细胞包括酵母和丝状真菌细胞，包括例如巴氏毕赤酵母(Pichiapastoris)、芬兰毕赤酵母(Pichia finlandica)、海藻毕赤酵母(Pichia trehalophila)、科克拉马毕赤酵母(Pichia koclamae)、膜状毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)、小毕赤酵母(Pichia minuta)(Ogataea minuta、Pichia lindneri)、仙人掌毕赤酵母(Pichiaopuntiae)、耐热毕赤酵母(Pichia thermotolerans)、柳毕赤酵母(Pichia salictaria)、Pichia guercuum、皮杰普毕赤酵母(Pichia pijperi)、具柄毕赤酵母(Pichia stiptis)、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)、毕赤酵母属、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、酿酒酵母属、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、克鲁维酵母属、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、白色念珠菌(Candida albicans)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、里氏木霉(Trichoderma reesei)、勒克氏菌(Chrysosporium lucknowense)、镰刀菌属(Fusarium sp.)、禾谷镰刀菌(Fusarium gramineum)、菜镰刀菌(Fusarium venenatum)、小立碗藓(Physcomitrella patens)和粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)。毕赤酵母属、任何酿酒酵母属、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、任何克鲁维酵母属、白色念珠菌(Candida albicans)、任何曲霉属、里氏木霉(Trichoderma reesei)、勒克霉菌(Chrysosporium lucknowense)、任何镰刀菌属、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)和粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)。本专利的宿主细胞不包括在专利法中不授权的客体。
如在本申请中所使用的，表述“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可以互换使用，并且所有这样的名称均包括子代。因而，词语“转化体”和“转化的细胞”包括原代受试者细胞和来源于其的培养物，而与传代的次数无关。还应理解的是，由于有意或无意的突变，使得并非所有子代均具有完全相同的DNA内容 物。包括与筛选出其的原始转化细胞具有相同功能或生物活性的突变子代。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。
术语“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述的抗原结合分子或抗体与其他化学组分的混合物，所述其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。
术语“药学上可接受的载体”指药物制剂中与活性成分不同的，且对受试者无毒的成分。药学上可接受载剂包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
术语“受试者”或“个体”包括人类和非人类动物。非人动物包括所有脊椎动物(例如哺乳动物和非哺乳动物)例如非人灵长类(例如，食蟹猴)、绵羊、狗、牛、鸡、两栖动物和爬行动物。除非明确指出，否则所述术语“患者”或“受试者”在本文中可互换地使用。如本文所使用的，术语“食蟹猴(cyno)”或“食蟹猴(cynomolgus)”是指食蟹猴(Macaca fascicularis)。在某些实施方案中，个体或受试者是人。
“施用”或“给予”，当其应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，是指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体的接触。
术语“样本”是指从受试者分离的类似流体、细胞、或组织的采集物，以及存在于受试者体内的流体、细胞或组织。示例性样本为生物流体，诸如血液、血清和浆膜液、血浆、淋巴液、尿液、唾液、囊液、泪液、排泄物、痰、分泌组织和器官的粘膜分泌物、阴道分泌物、腹水、胸膜、心包、腹膜、腹腔和其它体腔的流体、由支气管灌洗液收集的流体、滑液、与受试者或生物来源接触的液体溶液，例如细胞和器官培养基(包括细胞或器官条件培养基)、灌洗液等，组织活检样本、细针穿刺、手术切除的组织、器官培养物或细胞培养物。
“治疗(treatment或treat)”和“处理”(及其语法变型)指试图施加至所治疗个体的临床干预，并且可以为了预防目的、或者在临床病理学的过程期间进行实施。治疗的期望效果包括但不限于预防疾病的发生或复发，减轻症状，减轻/减少疾病的任何直接或间接病理后果，预防转移，降低疾病进展速率，改善或减轻疾病状态，和消退或改善的预后。在一些实施方案中，使用本披露的分子来延迟疾病的形成或减缓疾病的进展。
“有效量”一般是足以降低症状的严重程度及/或频率、消除这些症状及/或潜在病因、预防症状及/或其潜在病因出现及/或改良或改善由疾病状态引起或与其相关的损伤(例如肺病)的量。在一些实施例中，有效量是治疗有效量或预防有效量。“治疗有效量”是足以治疗疾病状态或症状、尤其与该疾病状态相关的状态或症状，或者以其他方式预防、阻碍、延迟或逆转该疾病状态或以任何方式与该疾病相关的任何其他不理想症状的进展的量。“预防有效量”是当给予受试者时将具有预定预防效应，例如预防或延迟该疾病状态的发作(或复发)，或者降低 该疾病状态或相关症状的发作(或复发)可能性的量。完全治疗或预防效未必在给予一个剂量之后便发生，可能在给予一系列剂量之后发生。因而，治疗或预防有效量可以一次或多次给予的方式给予。“治疗有效量”和“预防有效量”可取决于多种因素变化：诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重，以及治疗剂或治疗剂组合在个体中引发期望的应答的能力。有效治疗剂或治疗剂组合的示例性指标包括例如患者改善的健康状况。
本披露的抗原结合分子
本披露提供了抗原结合分子，其具有诸多有利的特性，例如对GPRC5D和表达GPRC5D的细胞的高亲和力、体外杀伤活性、治疗活性和安全性。
示例性的抗原结合分子
本披露的抗原结合分子，包括特异性结合GPRC5D和CD3的双特异性抗原结合分子(例如双特异性抗体)和抗GPRC5D抗体。特别的，本披露的抗原结合分子具有如下任一的性质：
a.针对GPRC5D的高亲和力；在一些实施方案中，以小于50nM(例如小于25nM、小于20nM、小于15nM、小于10nM、小于5nM、小于2.5nM、小于1nM、小于0.5nM)的EC50与人GPRC5D结合，和/或以小于50nM(例如小于25nM、小于10nM、小于5nM、小于2nM、小于1nM、小于0.5nM)的EC50与CynoGPRC5D有较好的交叉结合活性，所述EC50是通过流式细胞术方法检测的；
b.不结合人CCR8及人GIPR，具有良好的特异性；
c.对表达GPRC5D细胞的体外特异性杀伤活性；
d.诱导低水平的细胞因子(IL6和IFNγ)释放；和/或
e.更强的体内治疗活性。
本披露提供了一种抗原结合分子，其包含至少一个特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和至少一个特异性结合CD3的抗原结合模块，所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块包含GPRC5D-VH和GPRC5D-VL，所述特异性结合CD3的抗原结合模块包含CD3-VH和CD3-VL。
本披露还提供了一种分离的抗体，其能够特异性结合GPRC5D，所述的抗体包含GPRC5D-VH和GPRC5D-VL。具体地，本文的实施例披露了抗体系列1、24、30和45。以下以抗体1和24为例描述本文的抗体。
特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子或抗GPRC5D抗体，其中所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：130的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3。
特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子或抗GPRC5D抗体，其中所述 GPRC5D-VH具有：氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示的GPRC5D-HCDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO：134所示的GPRC5D-HCDR2、氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示的GPRC5D-HCDR3，和氨基酸序列如SEQ ID NO：130所示的GPRC5D-LCDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的GPRC5D-LCDR2、氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示的GPRC5D-LCDR3。
特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子或抗GPRC5D抗体，其中所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3。
特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子或抗GPRC5D抗体，其中所述GPRC5D-VH具有：氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的GPRC5D-HCDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的GPRC5D-HCDR2、氨基酸序列如SEQ ID NO：17所示的GPRC5D-HCDR3，和氨基酸序列如SEQ ID NO：137所示的GPRC5D-LCDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO：19所示的GPRC5D-LCDR2、氨基酸序列如SEQ ID NO：20所示的GPRC5D-LCDR3。
在一些实施方案中，如前所述的抗原结合分子或抗体，所述GPRC5D-VH和/或所述GPRC5D-VL是鼠源的或人源化的。
在一些实施方案中，所述GPRC5D-VH和/或所述GPRC5D-VL是人源化的。
在一些实施方案中，所述GPRC5D-VH具有来源于IGHV3-21*01的FR1、FR2、FR3和来源于IGHJ6*01的FR4，并且其是未被取代的或具有选自49A和93T组成的组中的一个或多个氨基酸替换；和/或所述GPRC5D-VL具有来源于IGKV2-29*02的FR1、FR2、FR3和来源于IGKJ2*01的FR4，并且其是未被取代的或具有选自2V和45K组成的组中的一个或多个氨基酸替换。在一些实施方案中，上述可变区和CDR是根据Kabat编号规则定义的。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子或抗体，其中所述GPRC5D-VH的氨基酸序列与SEQ ID NO：35、1、33或34具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，和所述GPRC5D-VL的氨基酸序列与SEQ ID NO：39、2、36、37、38、40或41具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。
在一些实施方案中，所述GPRC5D-VH和/或所述GPRC5D-VL是人源化的。
在一些实施方案中，所述GPRC5D-VH具有来源于IGHV1-46*01的FR1、FR2、FR3和来源于IGHJ6*01的FR4，并且其是未被取代的或具有选自1E、24V、37M、69W、71A、73K和93S组成的组中的一个或多个氨基酸替换；和/或所述GPRC5D-VL具有来源于IGKV2-30*02的FR1、FR2、FR3和来源于IGKJ4*01的 FR4，并且其是未被取代的或具有选自4L、28T、28S、29L、29V、36L和37L组成的组中的一个或多个氨基酸替换。在一些实施方案中，上述可变区和CDR是根据Kabat编号规则定义的。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子或抗体，其中所述GPRC5D-VH的氨基酸序列与SEQ ID NO：44、3、42或43具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，和所述GPRC5D-VL的氨基酸序列与SEQ ID NO：49、4、45、46、47、48或50具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。
在一些实施方案中，所述GPRC5D-VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：35、1、33或34所示，和所述GPRC5D-VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：39、2、36、37、38、40或41所示。
在一些实施方案中，所述GPRC5D-VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：35、33或34所示，和所述GPRC5D-VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：39、36、37、38、40或41所示。
在一些实施方案中，所述GPRC5D-VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：44、3、42或43所示，和所述GPRC5D-VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：49、4、45、46、47、48或50所示。
在一些实施方案中，所述GPRC5D-VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：44、42或43所示，和所述GPRC5D-VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：49、45、46、47、48或50所示。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子或抗体，其中
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子或抗体，其中所述 GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子或抗体，其中所述GPRC5D-VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：35所示，和所述GPRC5D-VL的氨基酸序列包含SEQ ID NO：39所示。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子或抗体，其中
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列；或
所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子或抗体，其中所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子或抗体，其中所述GPRC5D-VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：44所示，和所述GPRC5D-VL的氨基酸序列包含SEQ ID NO：49所示。
在一些实施方案中，如前所述的抗原结合分子，所述CD3-VH具有：氨基酸序列如SEQ ID NO：76所示的CD3-HCDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO：77所示的CD3-HCDR2，和氨基酸序列如SEQ ID NO：78所示的CD3-HCDR3；并且所述CD3-VL具有：氨基酸序列如SEQ ID NO：79所示的CD3-LCDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO：80所示的CD3-LCDR2，和氨基酸序列如SEQ ID NO：81所示的CD3-LCDR3。
在一些实施方案中，如前任一项所述的抗原结合分子，所述CD3-VH和/或所述CD3-VL是鼠源的或人源化的。
在一些实施方案中，所述CD3-VH和/或所述CD3-VL是人源化的。
在一些实施方案中，所述CD3-VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：82所示，和 所述CD3-VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：83所示。
在一些实施方案中，上述可变区和CDR是根据Kabat编号规则定义的。
根据本文实施例所披露的抗体系列30和45的技术方案，这些抗体与以上所描述的抗体1和24具有类似的技术方案范围。
抗原结合分子的结构
本披露的双特异性抗原结合分子并不受限于特定的分子结构，只要其具有所期望的抗原结合功能。例如，本文的双特异性抗原结合分子可以是双价(1+1)的、三价(2+1)的或4价(2+2)的。抗原结合分子中的抗原结合模块可以是任意的具有抗原结合活性的抗体片段，其通过肽连接子融合。本披露的肽连接子(例如连接子1至6)可以是任意适宜的肽链，只要抗原结合分子能够展现出期望的抗原结合活性。例如，肽连接子可以是1-50、或3-20个氨基酸残基的柔性肽。在一些实施方案中，所述的肽连接子各自独立地具有L1-(GGGGS)n-L2的结构，其中，L1是键、A、GS、GGS、GGGS(SEQ ID NO：213)，n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，L2是键、G、GG、GGG(SEQ ID NO：95)或GGGG(SEQ ID NO：214)，并且所述肽连接子不是键。在一些实施方案中，所述肽连接子的长度为3-15个氨基酸残基。在一些实施方案中，所述肽连接子各自独立地包含(GGGGS)n的氨基酸序列，其中n是1-5；优选地，n是1、2或3。在一些实施方案中，所述肽连接子是GGGGS(SEQ ID NO：90)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：94)或GGG(SEQ ID NO：95)。在一些实施方案中，所述连接子1、连接子2、连接子3和连接子4的氨基酸序列如SEQ ID NO：90所示；所述连接子5的氨基酸序列如SEQ ID NO：94所示；连接子6的氨基酸序列如SEQ ID NO：95所示。
示例性的，本披露的所述抗原结合分子包含一条具有式(i)所示结构的第一链、一条具有式(j)所示结构的第二链、一条具有式(k-1)所示结构的第三链和一条具有式(l-1)所示结构的第四链，
(a)[GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc1]，
(b)[GPRC5D-VL]-CL，
(g-1)[CD3-VH]-[GGGGS]-[Obscurin链]-[Fc2]，
(h-1)[CD3-VL]-[GGGGS]-[Titin链]，
式(a)、(b)、(g-1)和(h-1)所示的结构是从N端至C端排列的。
示例性的：
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第四链；或
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：120的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第四链；或
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：122的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第四链；或
所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：124的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第四链。
抗原结合分子的变体
在某些实施方案中，涵盖本文中提供的抗原结合分子的氨基酸序列变体。例如，可以期望改善抗体的结合亲和力和/或其它生物学特性。可以通过将合适的修饰引入编码抗体的核苷酸序列中，或者通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如对抗原结合分子的氨基酸序列内的残基的删除、和/或插入、和/或取代。可以进行删除、插入、和取代的任何组合以得到最终的构建体，只要最终的构建体拥有期望的特征，例如抗原结合特性。
取代、插入、和删除变体
在某些实施方案中，提供了具有一处或多处氨基酸取代的抗原结合分子变体。可以在CDR和FR进行取代。保守取代在表2中在“优选的取代”的标题下显示。更实质的变化在表2中在“例示性取代”的标题下提供，并且如下文参照氨基酸侧链类别进一步描述的。可以将氨基酸取代引入感兴趣的抗体中，并且对产物筛选期望的活性，例如保留/改善的抗原结合，降低的免疫原性，或改善的ADCC或CDC。
表2.氨基酸的取代
依照常见的侧链特性，氨基酸可以如下分组:
(1)疏水性的：正亮氨酸，Met，Ala，Val，Leu，Ile；
(2)中性，亲水性的：Cys，Ser，Thr，Asn，Gln；
(3)酸性的：Asp，Glu；
(4)碱性的：His，Lys，Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly，Pro；
(6)芳香族的：Trp，Tyr，Phe。
非保守取代会是指用一个类别的成员替换另一个类别的成员。
一类取代变体涉及取代亲本抗体(例如人源化或人抗体)的一个或多个CDR残基。一般地，经选择用于进一步研究的所得变体相对于亲本抗体会具有某些生物学特性(例如升高的亲和力，降低的免疫原性)的改变(例如改善)，和/或会基本上保留亲本抗体的某些生物学特性。一种例示性的取代变体是亲和力成熟的抗体，可以例如使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术(如本文所述的那些技术)，便利地产生所述抗体。简言之，将一个或多个CDR残基突变，并将变体抗体在噬菌体上展示，并对其筛选特定的生物学活性(例如结合亲和力)。可以对CDR做出改变(例如取代)，例如以改善抗体亲和力。可以对CDR“热点”，即在体细胞成熟过程期间以高频率经历突变的密码子所编码的残基，和/或接触抗原的残基做出此类改变，同时对所得的变体VH或VL测试结合亲和力。在亲和力成熟的一些实施方案中，通过多种方法(例如易错PCR、链改组、或寡核苷酸指导的诱变)的任一种，将多样性引入所选择用于成熟的可变基因中。然后，创建次级文库。然后，筛选文库以鉴定具有期望的亲和力的任何抗体变体。另一种引入多样性的方法涉及CDR定向的方法，其中将几个CDR残基(例如一次4-6个残基)随机化。可以例如使用丙氨酸扫描诱变或建模来特异性鉴定涉及抗原结合的CDR残基。
在某些实施方案中，取代、插入或缺失可以在一个或多个CDR内发生，只要此类变化不实质性降低抗体结合抗原的能力。例如，可以对CDR做出保守变化(例如保守取代，如本文中提供的)，其不实质性降低结合亲和力。在上文提供的变体VH和VL序列的某些实施方案中，每个CDR是未改变的，或者含有不超过1、2或3处氨基酸取代。
一种可用于鉴定抗体中可以作为诱变靶位的残基或区域的方法称作“丙氨酸扫描诱变”。在这种方法中，鉴定一个残基或残基组(例如带电荷的残基，诸如Arg、Asp、His、Lys和Glu)，并且替换为中性或带负电荷的氨基酸(例如，Ala或聚丙氨酸)，以确定该抗体与抗原的相互作用是否受影响。可以在对初始取代显示功能敏感性的氨基酸位置引入进一步的取代。此外，可通过研究抗原-抗体复合 物的晶体结构来鉴定抗体与抗原间的接触点。这些接触残基及邻近残基可以作为取代候选物被打靶或消除。可以筛选变体以确定它们是否含有期望的特性。
氨基酸序列插入包括：在氨基和/或羧基端融合1个残基或长度为100或更多个残基的多肽；和单个或多个氨基酸残基的序列内插入。在末端插入的例子包括具有N端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其它插入变体包括，在抗体的N或C端融合有酶(或延长抗体的血清半衰期的多肽)的融合物。
Fab的改造
在一个方面，本披露的抗原结合分子中，所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和所述特异性结合CD3的抗原结合模块两者之一是经替换的Fab，所述经替换的Fab包含重链可变区、轻链可变区、Titin链和Obscurin链。在经替换的Fab中，Fab原有的CH1和CL被Titin链和Obscurin链所替换(例如，Fab原有的CH1和CL分别被Obscurin链和Titin链所替换，或Fab原有的CH1和CL分别被Titin链和Obscurin链所替换)。示例性的，Titin链和Obscurin链的序列如表3-1和表3-2所示。
表3-1.Titin链的氨基酸序列
表3-2.Obscurin链的氨基酸序列
Fc区的改造
在一个方面，本披露的抗原结合分子的Fc区包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代减少其与Fc受体的结合，例如其与Fcγ受体的结合，并且降低或消除效应子功能。天然IgG Fc区，具体地是IgG1Fc区或IgG4Fc区，可能导致本披露的抗原结合分子靶向表达Fc受体的细胞，而不是表达抗原的细胞。本披露改造的Fc区表现出降低的对Fc受体的结合亲和力和/或降低的效应子功能。在一些实施方案中，改造的Fc区与天然Fc区相比，对Fc受体的结合亲和力下降50％、80％、90％或95％以上。在一些实施方案中，所述的Fc受体是Fcγ受体。在一些实施方案中，所述Fc受体是人Fcγ受体，例如FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIB、FcγRIIIa。在一些实施方案中，改造的Fc区与天然Fc区相比，对补体，如C1q的结合亲和力也降低。在一些实施方案中，改造的Fc区与天然Fc区相比，对新生儿Fc受体(FcRn)的结合亲和力不降低。在一些实施例中，改造的Fc区具有降低的效应子功能，所述降低的效应子功能可以包括但不限于以下中的一个或多个：降低的补体依赖性细胞毒性(CDC)、降低的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性 (ADCC)、降低的抗体依赖性细胞吞噬(ADCP)、减少的细胞因子分泌、减少的免疫复合物介导的抗原呈递细胞的抗原摄取、减少的与NK细胞的结合、减少的与巨噬细胞的结合、减少的与单核细胞的结合、减少的与多形核细胞的结合、减少的直接信号传导诱导性细胞凋亡、降低的树突细胞成熟或减少的T细胞引发。对于IgG1Fc区，在238、265、269、270、297、327和329等位置的氨基酸残基取代可降低的效应子功能。在一些实施方案中，所述Fc区是人IgG1Fc区，并且在234和235位置的氨基酸残基为A，编号依据为EU索引。对于IgG4Fc区，在228等位置的氨基酸残基取代可降低的效应子功能。
抗原结合分子还可包含二硫键改造，例如第一亚基的354C和第二亚基的349C。为增加抗原结合分子的血清半衰期，可以引入252Y、254T和256E的突变。
当抗原结合分子包含与Fc区的两个亚基融合的不同结合模块，可能导致不期望的同源二聚化。为了提高产率和纯度，因此在本披露的抗原结合分子的Fc区中引入促进异源二聚化的修饰将是有利的。在一些实施方案中，本披露的Fc区包含根据杵臼(knob-into-hole，KIH)技术的改造，该方法涉及在第一亚基的界面处引入凸起结构(knob)以及在第二亚基的界面处引入孔结构(hole)。使得所述凸起结构可以定位在孔结构中，促进异源二聚体的形成并抑制同源二聚体的产生。凸起结构是通过用较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)取代来自第一亚基的界面的小氨基酸侧链而构建的。而孔结构是通过用较小的氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)取代大氨基酸侧链而在第二亚基的界面中创建的。凸起结构和孔结构通过改变编码多肽的核酸来制备，可选的氨基酸取代如下表所示：
表4.KIH突变组合
除了杵臼技术外，用于修饰重链的CH3结构域以实现异源二聚化的其他技术也是本领域中已知的，例如WO96/27011、WO98/050431、EP1870459、WO2007/110205、WO2007/147901、WO2009/089004、WO2010/129304、WO2011/90754、WO2011/143545、WO2012/058768、WO2013/157954和WO013/096291。
Fc区的C末端可以是以氨基酸残基PGK结束的完整C末端；也可以是截短的C末端，例如在所述截短的C末端中去除了一个或两个C末端氨基酸残基。在一个优选的方面中，重链的C末端是以PG结束的缩短的C末端。因此，在一些实施方案中，完整抗体的组合物可以包括去除了所有K447残基和/或G446+K447残基的抗体群体。在一些实施方案中，完整抗体的组合物可以包括没有去除K447 残基和/或G446+K447残基的抗体群体。在一些实施方案中，完整抗体的组合物具有带有和不带有K447残基和/或G446+K447残基的抗体混合物的抗体群体。
重组方法
抗原结合分子可以使用重组方法来产生。对于这些方法，提供编码抗原结合分子的一个或更多个分离的核酸。
在天然抗体、天然抗体片段或具有同源二聚体重链的双特异性抗体的情况下，需要两个核酸，一个用于轻链或其片段，一个用于重链或其片段。此类核酸编码包含抗体VL的氨基酸序列和/或包含抗体VH的氨基酸序列(例如抗体的轻链和/或重链)。这些核酸可以在相同的表达载体上或在不同的表达载体上。
在具有异二聚体重链的双特异性抗体的情况下，需要例如四个核酸，一个用于第一轻链，一个用于包含第一异源单体Fc区多肽的第一重链，一个用于第二轻链，并且一个用于包含第二异源单体Fc区多肽的第二重链。这四个核酸可包含在一个或更多个核酸分子或表达载体中，通常这些核酸位于两个或三个表达载体上，即一个载体可包含这些核酸中的多于一个。
在一个实施方案中，本披露提供了编码如前所述的抗体的分离的核酸。此类核酸可以独立地编码前述的任一多肽链。在另一方面中，本披露提供了包含此类核酸的一种或多种载体(例如表达载体)。在另一方面中，本披露提供了包含此类核酸的宿主细胞。在一个实施方案中，提供制备抗原结合分子的方法，其中所述方法包括，在适合抗体表达的条件下，培养包含编码所述抗体的核酸的宿主细胞，如上文所提供的，和任选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收所述抗体。
为了重组产生抗原结合分子，将编码蛋白的核酸分离并插入一个或更多个载体中，用于在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。此类核酸可以使用常规程序容易地分离和测序(例如通过使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)，或者通过重组方法产生或通过化学合成获得。
用于克隆或表达编码抗体的载体的适当宿主细胞包括本文描述的原核或真核细胞。例如，抗体可在细菌中产生，特别是当抗体不需要糖基化和Fc效应子功能时。在表达后，抗体可以在可溶级分中从细菌细胞糊状物分离，并且可进一步纯化。
除了原核生物以外，真核微生物诸如丝状真菌或酵母也是用于编码抗体的载体的合适的克隆或表达宿主，包括真菌和酵母菌株，其糖基化途径已经“人源化”，导致产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体。适于表达(糖基化)抗体的合适的宿主细胞也可源自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)；无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。已经鉴定了许多杆状病毒株，其可与昆虫细胞联合使用，特别是用于草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞的转染；还可利用植物细胞培养物作为宿主，例如US5959177、US 6040498、US6420548、US 7125978和US6417429；也可将脊椎动物细胞用作宿主，例如适应于在悬浮液中生 长的哺乳动物细胞系。适宜的哺乳动物宿主细胞系的其它例子是经SV40转化的猴肾CVl系(COS-7)；人胚肾系(293或293T细胞)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞托利(sertoli)细胞(TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；水牛鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞；MRC 5细胞；和FS4细胞。其它适宜的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞；以及骨髓瘤细胞系，如Y0、NS0和Sp2/0。关于适合产生抗体的某些哺乳动物宿主细胞系的综述参见例如Yazaki，P.和Wu，A.M.，Methods in Molecular Biology，Vol.248，Lo，B.K.C.(编)，Humana Press，Totowa，NJ(2004)，第255-268页。
免疫缀合物
本披露还提供免疫缀合物，其包含与一种或多种细胞毒性剂缀合的抗原结合分子，所述一种或多种细胞毒性剂为诸如化学治疗剂或药物、生长抑制剂、毒素(例如细菌、真菌、植物或动物来源的蛋白质毒素、酶活性毒素，或它们的片段)、或放射性同位素。
诊断与治疗组合物
在某些实施方案中，本披露提供的抗原结合分子可用于检测生物学样品中GPRC5D和/或CD3的存在。在用于本文时，术语“检测”涵盖定量或定性检测。在某些实施方案中，生物学样品包含细胞或组织，诸如肿瘤组织。
在一个实施方案中，提供了在诊断或检测方法中使用的抗原结合分子。在又一方面，提供了检测生物学样品中GPRC5D和/或CD3的存在的方法。在某些实施方案中，该方法包括在适宜条件下使生物学样品与抗原结合分子接触，并检测是否在检测试剂与抗原之间形成复合物。此类方法可以是体外或体内方法。在一个实施方案中，使用抗原结合分子来选择适合治疗的受试者，例如GPRC5D和/或CD3是用于选择患者的生物标志物。
可使用本披露的抗原结合分子来诊断的例示性病症，例如肿瘤或癌症。
在某些实施方案中，提供了经标记的抗原结合分子。标记物包括但不限于直接检测的标记物或模块(诸如荧光、发色、电子致密、化学发光、和放射性标记物)，和间接检测的模块(例如，经由酶反应或分子相互作用间接检测的模块，诸如酶或配体)。
在另外的方面，提供包含所述抗原结合分子的药物组合物，例如，用于以下任何治疗方法。在一个方面，药物组合物包含本文提供的任何抗原结合分子和药学上可接受的载体。在另一个方面，药物组合物包含本文提供的任何抗原结合分子和至少一种另外的治疗剂。
本披露所述的抗原结合分子的药物组合物通过以下制备：将具有所需纯度的此类抗原结合分子与一种或更多种任选的药学上可接受的载体混合，所述药物组 合物为冻干组合物或水溶液的形式。用于体内施用的制剂一般是无菌的。无菌性可容易地实现，例如通过穿过无菌滤膜过滤。
治疗方法与施用途径
本文提供的任何抗原结合分子可用于治疗方法。
在又一个方面，本披露提供抗原结合分子在药物的制造或制备中的用途。在一个实施方案中，所述药物用于治疗肿瘤或癌症。并且所述药物是以对上述疾病的有效量的形式存在的。在一些实施方案中，所述有效量是单位日剂量或单位周剂量。在一个此类实施方案中，所述用途进一步包括向受试者施用有效量的至少一种另外的治疗剂(例如一种、两种、三种、四种、五种或六种另外的治疗剂)。根据任意以上实施方案的“受试者”可以是人。
在又一个的方面，提供包含所述抗原结合分子的药物组合物，例如，其用于以上任何制药用途或治疗方法。在另一个实施方案中，药物组合物还包含至少一种另外的治疗剂。
本披露的抗原结合分子可单独使用或与其他试剂联合用于治疗。例如，本披露的抗原结合分子可与至少一种另外的治疗剂共同施用。
本披露的抗原结合分子(和任何另外的治疗剂)可通过任何合适的手段施用，包括肠胃外、肺内和鼻内，并且如果需要局部治疗，则病灶内施用。肠胃外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。给药可以通过任何适当的途径，例如，通过注射，诸如静脉内或皮下注射，这部分取决于施用是短期的还是长期的。本文考虑多种给药时间方案，包括但不限于，单次或在多个时间点多次施用，推注施用和脉冲输注。
本披露的抗原结合分子将以符合良好医疗实践的方式配制、给药和施用。在此背景下考虑的因素包括所治疗的具体病症、所治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床状况、病症的起因、试剂的递送部位、施用方法、施用时间安排以及医学从业者已知的其他因素。抗原结合分子无需但任选地与目前用于预防或治疗所述病症的一种或更多种试剂一起配制。此类其它试剂的有效量取决于药物组合物中存在的抗原结合分子的量、病症或治疗的类型以及上文讨论的其它因素。这些通常以与本文所述相同的剂量和施用路径使用，或以本文所述剂量的约1至99％使用，或以任何剂量使用，并通过经验/临床确定为合适的任何途径使用。
为了预防或治疗疾病，本披露的抗原结合分子(当单独使用或与一种或更多种其他另外的治疗剂组合使用时)的适当的剂量将取决于待治疗的疾病的类型，治疗分子的类型，疾病的严重性和病程，是为预防还是治疗目的施用，之前的治疗，患者的临床病史和对治疗分子的响应，和主治医师的判断。治疗分子恰当地以一次或经过一系列治疗施用于患者。取决于疾病的类型和严重性，约1μg/kg至15mg/kg的抗原结合分子可以是用于施用至患者的初始候选剂量，不管例如是通过一次或更多次分开的施用还是通过连续输注。一种典型的每日剂量可能在约 1μg/kg至100mg/kg或更多的范围内，这取决于上文提及的因素。相应的，以50kg体重为例，示例性的单位日剂量为50μg-5g。
制品
在本披露的另一方面中，提供一种制品，所述制品包含可用于治疗、预防和/或诊断上述病症的材料。该制品包含容器和在容器上或与容器联合的标签或包装插页(package insert)。合适的容器包括，例如，瓶子、管形瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可以自各种材料诸如玻璃或塑料形成。容器装有单独或与另一种组合物组合有效治疗，预防和/或诊断疾患的组合物，并且可具有无菌的存取口(例如，容器可以是具有由皮下注射针可刺穿的塞子的静脉内溶液袋或管形瓶)。组合物中的至少一种活性试剂是本披露的抗原结合分子。标签或包装插页指示使用该组合物是来治疗选择的病况。此外，制品可以包含：(a)其中装有组合物的第一容器，其中所述组合物包含本披露的抗原结合分子；和(b)其中装有组合物的第二容器，其中所述组合物包含另外的细胞毒性剂或其他方面的治疗剂。本披露的该实施方案中的制品可进一步包含包装插页，所述包装插页指示所述组合物可以用于治疗特定病况。备选地，或另外地，制品可进一步包含第二(或第三)容器，所述第二(或第三)容器包含药学上可接受的缓冲液。从商业和用户立场，它可进一步包括所需的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、滤器、针头和注射器。
实施例与测试例
以下结合实施例和测试例进一步描述本披露，但这些实施例和测试例并非限制着本披露的范围。本披露实施例和测试例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如冷泉港的抗体技术实验手册，分子克隆手册；或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
实施例1.含有Titin链/Obscurin链的抗原结合分子
本披露的Titin链/Obscurin链可以来源于任意适宜的多肽，包括来源于WO2021139758(通过援引完整收入本文)和CN202110527339.7及将其作为优先权文件的专利(通过援引完整收入本文)中的多肽。构建双特异性抗体，其中CL为WO2021139758中的kappa轻链恒定区，Titin链和Obscurin链的氨基酸序列见表3-1和表3-2，连接子序列包括GGGGS(SEQ ID NO：90)、ASTKG(SEQ ID NO：209)或RTVAS(SEQ ID NO：210)，本实施例中的Fc1、Fc2、CH1的氨基酸序列如下所示。
>实施例1-Fc1(knob，SEQ ID NO：92)：
>实施例1-Fc2(hole，SEQ ID NO：93)：
>实施例1-CH1(SEQ ID NO：91)：
1.1 DI双特异性抗体
参照WO2021139758的实施例5，构建抗hNGF和hRANKL的DI双特异性抗体：DI-2至DI-20，其包含如下所述的第一重链、第二重链、第一轻链和第二轻链：
第一重链：从N端到C端依次为：[VH1-I]-[连接子1]-[Obscurin链]-[Fc2]，
第一轻链：从N端到C端依次为：[VL1-I]-[连接子2]-[Titin链]，
第二重链：从N端到C端依次为：[VH2-D]-[CH1]-[Fc1]，和
第二轻链：从N端到C端依次为：[VL2-D]-[CL]；
其中，VH1-I和VL1-I分别为WO2021139758中I0的重链可变区和轻链可变区，VH2-D和VL2-D分别为WO2021139758中D0的重链可变区和轻链可变区。本实施例中DI双特异性抗体中Obscurin链、Titin链、连接子1、连接子2结构见下表。
表5.DI双特异性抗体中Obscurin链/Titin链和连接子对应表
注：表格中Titin链和Obscurin链的编号见表3-1和表3-2。
采用WO2021139758的测试例4中的方法检测DI-2至DI-20双特异性抗体与其抗原的结合活性。对抗体进行热稳定性研究。研究方法：用PBS将抗体的浓度稀释至5mg/mL，采用高通量微分扫描荧光仪(UNCHAINED，规格型号：Unit)测定其热稳定性。实验结果表明，改造后的双特异性抗体对抗原的结合活性没有显著变化；并且，与DI-2相比，DI-4至DI-8、DI-10至DI-16、DI-20的Tm1(℃)、Tonset(℃)有明显的提升，双特异性抗体的热稳定性更优。
表6.DI双特异性抗体的结合活性检测
表7.DI双特异性抗体的热稳定性实验结果
采用10mM乙酸，pH5.5，9％蔗糖的缓冲液配制含DI双特异性抗体的溶液， 将溶液置于40℃恒温箱中孵育四周，结束后将抗体浓度浓缩至孵育开始时浓度，观察溶液沉淀情况。实验结果表明，DI-2双特异性抗体组溶液出现沉淀，DI-3至DI-7相比DI-2具有更好的稳定性。
表8.DI双特异性抗体的沉淀
1.2 PL双特异性抗体
构建抗hPDL1和hCTLA4的PL双特异性抗体：PL-1至PL-19，其包含如下所述的第一重链、第二重链、第一轻链和第二轻链：
第一重链：从N端到C端依次为：[VH1-P]-[连接子1]-[Obscurin链]-[Fc1]，
第一轻链：从N端到C端依次为：[VL1-P]-[连接子2]-[Titin链]，
第二重链：从N端到C端依次为：[VH2-L]-[CH1]-[Fc2]，和
第二轻链：从N端到C端依次为：[VL2-L]-[CL]；
其中，VH1-P和VL1-P分别为WO2020177733中h1831K抗体的重链可变区和轻链可变区，VH2-L和VL2-L的氨基酸序列如下所示。
>VH2-L(SEQ ID NO：191)：
>VL2-L(SEQ ID NO：192)：
本实施例中PL双特异性抗体中Obscurin链、Titin链、连接子1、连接子2结构见下表。
表9.PL双特异性抗体中Obscurin链/Titin链和连接子对应表
注：表格中Titin链和Obscurin链的编号见表3-1和表3-2。
参照WO2021139758中测试例4中的ELISA方法检测PL双特异性抗体的结合活性，其中hPDL1、hCTLA4抗原购自：Sino biology。对抗体进行热稳定性研究。方法：用PBS将抗体的浓度稀释至1.4-3mg/mL，采用高通量微分扫描荧光仪(UNCHAINED，规格型号：Unit)测定其热稳定性。实验结果表明，PL双特异性抗体对抗原仍具有良好的结合活性；并且，与PL-1相比，PL-2至PL-19的Tm1(℃)、Tagg 266(℃)、Tonset(℃)有明显的提升，双特异性抗体的热稳定性更优。
表10.PL双特异性抗体的结合活性检测
表11.PL双特异性抗体的热稳定性实验结果
1.3 HJ双特异性抗体
构建抗hIL5和hTSLP的HJ双特异性抗体：HJ-3至HJ11，其包含如下所述的第一重链、第二重链、第一轻链和第二轻链：
第一重链：从N端到C端依次为：[VH1-H]-[连接子1]-[Titin链]-[Fc1]，
第一轻链：从N端到C端依次为：[VL1-H]-[连接子2]-[Obscurin链]，
第二重链：从N端到C端依次为：[VH2-J]-[CH1]-[Fc2]，和
第二轻链：从N端到C端依次为：[VL2-J]-[CL]；
其中，VH1-H和VL1-H分别为WO2021139758中H0的重链可变区和轻链可变区，VH2-J和VL2-J分别为WO2021139758中J1的重链可变区和轻链可变区。本实施例中HJ双特异性抗体中Obscurin链、Titin链、连接子1、连接子2结构见下表。
表12.HJ双特异性抗体中Obscurin链/Titin链和连接子对应表
参照WO2021139758中测试例4中的方法检测HJ双特异性抗体的抗原结合活性。对抗体的热稳定性进行研究，方法：用10mM乙酸pH5.5、9％蔗糖的缓冲液配制HJ双特异性抗体稀释溶液，然后通过超滤浓缩的方法将双特异性抗体浓缩，获得不同浓度的HJ双特异性抗体溶液(HJ双特异性抗体的浓度见表13-2)，然后 将浓缩溶液置于40℃恒温箱中孵育，第0天(也即40℃孵育开始前，D0)，第7天(40℃孵育第7天，D7)，第14天(40℃孵育第14天，D14)，第21天(40℃孵育第21天，D21)和第28天(40℃孵育第28天，D28)检测样品的SEC纯度，40℃孵育28天后，马上取样检测样品CE-SDS纯度。实验结果表明，本披露构建的HJ双特异性抗体对抗原的结合活性没有显著变化；并且，与HJ-3相比，HJ-5至HJ-11双特异性抗体的热稳定性更优。
表13-1.HJ双特异性抗体的结合活性检测
表13-2.HJ双特异性抗体加速稳定性实验结果
实施例2.表达重组人GPRC5D和食蟹猴GPRC5D细胞系的构建和鉴定
为筛选能和细胞表面GPRC5D有较好结合的抗体，本披露构建了表达人GPRC5D或食蟹猴GPRC5D的CHOK1-humanGPRC5D、HEK293-humanGPRC5D、CHOK1-cynoGPRC5D和HEK293-cynoGPRC5D细胞株。将人GPRC5D或食蟹猴GPRC5D全长基因克隆到哺乳动物细胞表达载体pCDH上，用pVSV-G、pCMV-dR8.91和pCDH-humanGPRC5D或pCDH-cynoGPRC5D质粒共同转染HEK293T细胞(CRL-11268)包装病毒，转染48小时后，收集病毒分别感染CHOK1细胞(CCL-61)和HEK293细胞(CRL-1573)。感染72小时后通过流式分选获取高表达人GPRC5D或食蟹猴GPRC5D的单克隆细胞。
实施例3.小鼠抗人GPRC5D单克隆抗体的制备
使用CHOK1-humanGPRC5D和CHOK1-cynoGPRC5D细胞交叉免疫SJL小鼠。免疫7次后取血测定血清中抗体的效价，选择血清中抗体滴度高并且滴度趋于平台的小鼠进行脾细胞融合，将融合好的杂交瘤细胞铺在96孔细胞培养板中，置于37℃，5％CO2培养箱中进行培养。取细胞培养上清液通过mirrorball及流式细胞分选技术(FACS)进行检测。将筛选出的阳性克隆进行扩增冻存保种和二到三次亚克隆直至获得单细胞克隆。选择出的杂交瘤克隆用无血清细胞培养法进一步制备和纯化抗体。得到的杂交瘤抗体用FACS检测抗体与CHOK1-humanGPRC5D，CHOK1-cynoGPRC5D，CHOK1细胞的结合(方法见本披露测试例1)，挑选出有人猴交叉结合活性好，且没有非特异性结合的杂交瘤细胞株mAb1、mAb24、mAb30、mab45。
克隆杂交瘤细胞株mAb1、mAb24、mAb30、mab45中单克隆抗体的序列，过程如下：收集对数生长期杂交瘤细胞，用Trizol(Invitrogen，Cat#15596-018)提取RNA，反转录为cDNA。用cDNA为模板进行PCR扩增后送测序公司测序，得到的DNA序列对应的抗体的可变区氨基酸序列如下：
mAb1重链可变区的氨基酸序列：
mAb1轻链可变区的氨基酸序列：
mAb24重链可变区的氨基酸序列：
mAb24轻链可变区的氨基酸序列：
mAb30重链可变区的氨基酸序列：
mAb30轻链可变区的氨基酸序列：
mAb45重链可变区的氨基酸序列：
mAb45轻链可变区的氨基酸序列：
注：下划线部分为根据Kabat编号规则的CDR，其余部分为FR。
表14.GPRC5D抗体的CDR
注：表中CDR是根据Kabat编号系统确认的。
实施例4.抗人GPRC5D单克隆抗体的人源化设计
鼠源单克隆抗体人源化根据本领域许多文献公示的方法进行。简言之，在所获得的鼠源抗体VH/VL CDR典型结构的基础上，从人源种系数据库中搜索轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)的同源序列，将鼠源抗体的CDR区移植到人源模板上，并对VL和VH的部分残基进行突变，将鼠源抗体的恒定区替换为人恒定区，得到最终的人源化分子。
1.mAb1抗体的人源化
mAb1的人源化重链可变区的FR1、FR2、FR3采用IGHV3-21*01，FR4采用IGHJ6*01；轻链可变区的FR1、FR2、FR3采用IGKV2-29*02，FR4采用IGKJ2*01。任选地，对人源化抗体的重链可变区上第49，56，57和/或93位的氨基酸进行取代；和/或对人源化抗体的轻链可变区上第2，28，29和/或45位的氨基酸进行取代。
表15.mAb1的人源化抗体的氨基酸进行取代
注：示例性的，Q45K表示依照Kabat编号系统，将45位Q突变回K。以此类推。
抗体可变区的序列如下(下划线部分为CDR，下同)：
>hu1H1(SEQ ID NO：33)：
>hu1H2(SEQ ID NO：34)：
>hu1H3(SEQ ID NO：35)：
>hu1L1(SEQ ID NO：36)：
>hu1L2(SEQ ID NO：37)：
>hu1L3(SEQ ID NO：38)：
>hu1L4(SEQ ID NO：39)：
>hu1L5(SEQ ID NO：40)：
>hu1L6(SEQ ID NO：41)：
人源化抗体中经替换的CDR的氨基酸序列见下表：
表16.hu1替换的CDR的氨基酸序列
2.mAb24抗体的人源化
mAb24抗体的人源化重链可变区的FR1、FR2、FR3采用IGHV1-46*01，FR4采用IGHJ6*01；轻链可变区的FR1、FR2、FR3采用IGKV2-30*02，FR4采用IGKJ4*01。任选地，对人源化抗体的重链可变区上第1，24，37，69，71，73和/或93位的氨基酸进行取代；和/或对人源化抗体的轻链可变区上第4，28，29，36和/或37位的氨基酸进行取代。
表17.mAb24的人源化抗体的氨基酸取代
注：示例性的，M4L表示依照Kabat编号系统，将4位M突变回L。以此类推。
抗体可变区的序列如下：
>hu24H1(SEQ ID NO：42)：
>hu24H2(SEQ ID NO：43)：
>hu24H3(SEQ ID NO：44)：
>hu24L1(SEQ ID NO：45)：
>hu24L2(SEQ ID NO：46)：
>hu24L3(SEQ ID NO：47)：
>hu24L4(SEQ ID NO：48)：
>hu24L5(SEQ ID NO：49)：
>hu24L6(SEQ ID NO：50)：
人源化抗体中经替换的CDR的氨基酸序列见下表：
表18.hu24替换的CDR的氨基酸序列
3.mAb30抗体的人源化
mAb30抗体的人源化重链可变区的FR1、FR2、FR3采用IGHV1-3*01，FR4采用IGHJ6*01；轻链可变区的FR1、FR2、FR3采用IGKV1-12*01，FR4采用IGKJ2*01。任选地，对人源化抗体的重链可变区上第1，28，43，45，54，69，71，73和/或93位的氨基酸进行取代；和/或对人源化抗体的轻链可变区上第43，46和/或85位的氨基酸进行取代。
表19.mAb30的人源化抗体的氨基酸取代
注：示例性的，L46A表示依照Kabat编号系统，将46位L突变回A。以此类推。
抗体可变区的序列如下：
>hu30H1(SEQ ID NO：51)：
>hu30H2(SEQ ID NO：52)：
>hu30H3(SEQ ID NO：53)：
>hu30H4(SEQ ID NO：54)：
>hu30H5(SEQ ID NO：55)：
>hu30L1(SEQ ID NO：56)：
>hu30L2(SEQ ID NO：57)：
人源化抗体中经替换的CDR的氨基酸序列见下表：
表20.hu30替换的CDR的氨基酸序列
4.mAb45抗体的人源化
mAb45抗体的人源化重链可变区的FR1、FR2、FR3采用IGHV3-7*01，FR4采用IGHJ6*01；轻链可变区的FR1、FR2、FR3采用IGKV2-28*01，FR4采用IGKJ4*01。任选地，对人源化抗体的重链可变区上第30，38，49，74，75，76和/或77位的氨基酸进行取代；和/或对人源化抗体的轻链可变区上第2，28，29，45，63和/或76位的氨基酸进行取代。
表21.mAb45的人源化抗体的氨基酸取代
注：示例性的，I2V表示依照Kabat编号系统，将2位I突变回V。以此类推。
抗体可变区的序列如下：
>hu45H1(SEQ ID NO：58)：
>hu45H2(SEQ ID NO：59)：
>hu45H3(SEQ ID NO：60)：
>hu45H4(SEQ ID NO：61)：
>hu45H5(SEQ ID NO：62)：
>hu45H6(SEQ ID NO：63)：
>hu45H7(SEQ ID NO：64)：
>hu45H8(SEQ ID NO：65)：
>hu45H9(SEQ ID NO：66)：
>hu45H10(SEQ ID NO：67)：
>hu45H11(SEQ ID NO：68)：
>hu45L1(SEQ ID NO：69)：
>hu45L2(SEQ ID NO：70)：
>hu45L3(SEQ ID NO：71)：
>hu45L4(SEQ ID NO：72)：
>hu45L5(SEQ ID NO：73)：
>hu45L6(SEQ ID NO：74)：
>hu45L7(SEQ ID NO：75)：
人源化抗体中经替换的CDR的氨基酸序列见下表：
表22.hu45替换的CDR的氨基酸序列
实施例5.嵌合抗体的构建
鼠源抗GPRC5D抗体mAb1、mAb24、mAb30、mAb45的可变区序列分别与SEQ ID NO：96所示的轻链恒定区和SEQ ID NO：215所示的重链恒定区组合获得嵌合抗体Chi-1、Chi-24、Chi-30、Chi-45。示例性的，Chi-1表示包含mAb1鼠源重链可变区、轻链可变区和所述恒定区的嵌合抗体，以此类推。嵌合抗体重链恒定区和轻链恒定区序列如下：
>重链恒定区序列(SEQ ID NO：215)：
Chi-1的重链序列(SEQ ID NO：216)：
Chi-1的轻链序列(SEQ ID NO：217)：
Chi-24的重链序列(SEQ ID NO：218)：
Chi-24的轻链序列(SEQ ID NO：219)：
Chi-30的重链序列(SEQ ID NO：220)：
Chi-30的轻链序列(SEQ ID NO：221)：
Chi-45的重链序列(SEQ ID NO：222)：
Chi-45的轻链序列(SEQ ID NO：223)：
实施例6.抗GPRC5D/CD3双特异性抗体的制备及鉴定
本披露CD3结合分子可以来源于任意适宜的抗体。特别适宜的抗体描述于例如国际申请号PCT/CN2019/123548(通过援引完整收入本文)。具体地，本披露的实施例采用的是S107E。
表23.S107E的CDR
S107E可变区的序列如下：
>S107E-VH(SEQ ID NO：82)：
>S107E-VL(SEQ ID NO：83)：
将人源化的抗GPRC5D抗体可变区分别与抗CD3的抗体S107E的可变区、IgG1(CH1)、Obscurin、Titin以及IgG1突变体IgG1(AA，L234A/L235A)组合。各形成几种不同形式的双特异性抗体，分别为式2、式2-0G4S、式4、式4-0G4S和式11。
式2(即F2)为非对称结构分子，包含四条链：
链1：VH(anti-GPRC5D)-IgG1(CH1)-IgG1Fc(Knob)；
链2：VL(anti-GPRC5D)-CL；
链3(OB(A1B0)-linker1-Hole)：
VH(S107E)-linker1-Obscurin(A1B0)-IgG1Fc(Hole)；
链4(VL-linker2-Titin(A1B0))：VL(S107E)-linker2-Titin(A1B0)，其示意图如图1A所示(OB表示Obscurin)。
其中：
>linker1或linker2：GGGGS(SEQ ID NO：90)
>OB(A1B0)-linker1-Hole(SEQ ID NO：84)：
注:根据Kabat编号规则获得的CD3结合结构域CDRs用标记，重链恒定区用“斜体”标记，linker1用标记，Obscurin(A1B0)用标记，突变位点(L234A，L235A，Y349C，T366S，L368A，Y407V)用标记。
>VL-linker2-Titin(A1B0)(SEQ ID NO：85)：
注:根据Kabat编号规则获得的CD3结合结构域CDRs用标记，linker2标记，Titin(A1B0)用标记。
式2-0G4S(即F2-0G4S)为非对称结构分子，包含四条链：
链1：VH(anti-GPRC5D)-IgG1(CH1)-IgG1Fc(Knob)；
链2：VL(anti-GPRC5D)-CL；
链3(OB(A0B2)-Hole)：VH(S107E)-OB(A0B2)-IgG1Fc(Hole)；
链4(VL-Titin(A0B2))：VL(S107E)-Titin(A0B2)，其示意图如图1B所示(OB代表Obscurin)。
其中：
>OB(A0B2)-Hole(SEQ ID NO：86)：
注:根据Kabat编号规则获得的CD3结合结构域CDRs用标记，重链恒定区用“斜体”标记，Obscurin(A0B2)用标记，突变位点(L234A，L235A，Y349C，T366S，L368A，Y407V)用标记。
>VL-Titin(A0B2)(SEQ ID NO：87)：
注:根据Kabat编号规则获得的CD3结合结构域CDRs用标记，Titin(A0B2)用标记。
式4(即F4)为非对称结构分子，包含四条链：
链1(OB(A1B0)-linker3-Knob)：VH(S107E)-linker3-OB(A1B0)-IgG1Fc(Knob)；
链2(VL-linker4-Titin(A1B0))：VL(S107E)-linker4-Titin(A1B0)；
链3：VH(anti-GPRC5D)-IgG1(CH1)-IgG1Fc(Hole)；
链4：VL(anti-GPRC5D)-CL；
其示意图如图1C所示(OB代表Obscurin)。
>linker3或linker4：GGGGS(SEQ ID NO：90)
>OB(A1B0)-linker3-Knob(SEQ ID NO：88)：
注:根据Kabat编号规则获得的CD3结合结构域CDRs用标记，重链恒定区用“斜体”标记，Obscurin(A1B0)用标记，突变位点(L234A，L235A，S354C，T366W)用标记，linker3用标记。
>VL-linker4-Titin(A1B0)(SEQ ID NO：85)：
注:根据Kabat编号规则获得的CD3结合结构域CDRs用标记，Titin(A1B0)用标记，linker4用标记。
式4-0G4S(即F4-0G4S)为非对称结构分子，包含四条链：
链1(OB(A0B2)-Knob)：VH(S107E)-OB(A0B2)-IgG1Fc(Knob)；
链2(VL-Titin(A0B2))：VL(S107E)-Titin(A0B2)；
链3：VH(anti-GPRC5D)-IgG1(CH1)-IgG1Fc(Hole)；
链4：VL(anti-GPRC5D)-CL；
其示意图如图1D所示(OB代表Obscurin)。
>Ob(A0B2)-Knob(SEQ ID NO：89)：
注:根据Kabat编号规则获得的CD3结合结构域CDRs用标记，重链恒定区用“斜体”标记，Obscurin(A0B2)用标记，突变位点(L234A，L235A，S354C，T366W)用标记。
>VL-Titin(A0B2)(SEQ ID NO：87)：
注:根据Kabat编号规则获得的CD3结合结构域CDRs用标记，Titin(A0B2)用标记。
其中：
>IgG1(CH1)(SEQ ID NO：91)：
>IgG1Fc(Knob)(SEQ ID NO：92)：
>IgG1Fc(Hole)(SEQ ID NO：93)：
式11(即F11)为对称结构分子，包含两条相同的重链(链1)和两条相同的轻链(链2)。
链1(重链)：
VH(anti-GPRC5D)-IgG1(CH1)-VH(S107E)-linker5-VL(S107E)-linker6-IgG1(AA)Fc；
链2(轻链)：VL(anti-GPRC5D)-CL；其示意图如图1E所示。
其中：
>linker5：GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：94)
>linker6：GGG(SEQ ID NO：95)
>IgG1(CH1)(SEQ ID NO：91)：
>CL(SEQ ID NO：96)：
>IgG1(AA)Fc(SEQ ID NO：97)：
基于mAb1、mAb24、mAb30、mAb45抗体的人源化抗体氨基酸序列，分别构 建了如下所示的双特异性抗体。
表24.本披露的双特异性抗体
注：表24中，F11-1表示该分子采用mAb1及其人源化抗体的可变区作为GPRC5D结合域，采用式11作为分子结构；F2-1表示该分子采用mAb1及其人源化抗体的可变区作为GPRC5D结合域，采用式2作为分子结构，以此类推。
具体氨基酸序列如下：
F11-1、F11-2、F11-3的链1(>hu1H2-F11-1(SEQ ID NO：98))：
F11-4、F11-5、F11-6的链1(>hu1H3-F11-1(SEQ ID NO：99))：
F11-1、F11-4的链2(>hu1L1-CL(SEQ ID NO：100))：
F11-2、F11-5的链2(>hu1L3-CL(SEQ ID NO：101))：
F11-3、F11-6的链2(>hu1L4-CL(SEQ ID NO：102))：
F11-7、F11-8、F11-9的链1(>hu24H2-F11-1(SEQ ID NO：103))：
F11-10、F11-11、F11-12的链1(>hu24H3-F11-1(SEQ ID NO：104))：
F11-7、F11-10的链2(>hu24L2-CL(SEQ ID NO：105))：
F11-8、F11-11的链2(>hu24L5-CL(SEQ ID NO：106))：
F11-9、F11-12的链2(>hu24L6-CL(SEQ ID NO：107))：
F11-13、F11-15的链1(>hu30H4-F11-1(SEQ ID NO：108))：
F11-14、F11-16的链1(>hu30H5-F11-1(SEQ ID NO：109))：
F11-13、F11-14的链2(>hu30L1-CL(SEQ ID NO：110))：
F11-15、F11-16的链2(>hu30L2-CL(SEQ ID NO：111))：
F4-1的链3(>hu45H4-CH1-Hole(SEQ ID NO：112))：
F4-2的链3(>hu45H5-CH1-Hole(SEQ ID NO：113))：
F4-3的链3(>hu45H7-CH1-Hole(SEQ ID NO：114))：
F4-4的链3(>hu45H8-CH1-Hole(SEQ ID NO：115))：
F4-5的链3(>hu45H10-CH1-Hole(SEQ ID NO：116))：
F4-1、F4-2、F4-3、F4-4、F4-5的链4(>hu45L7-CL(SEQ ID NO：117))：
F2-0G4S-1的链1(>hu1H3-CH1-Knob(SEQ ID NO：118))：
F4-8的链3(>hu1H3-CH1-Hole(SEQ ID NO：119))：
F2-2的链1(>hu24H3-CH1-Knob(SEQ ID NO：120))：
F4-6的链3(>hu24H3-CH1-Hole(SEQ ID NO：121))：
F2-3的链1(>hu30H5-CH1-Knob(SEQ ID NO：122))：
F4-7的链3(>hu30H5-CH1-Hole(SEQ ID NO：123))：
F2-4的链1(>hu45H10-CH1-Knob(SEQ ID NO：124))：
F11-17的链1(>Chi-1-F11-1)(SEQ ID NO：224)：
F11-17的链2(>Chi-1VL-CL)(SEQ ID NO：217)：
F11-18的链1(>Chi-24-F11-1)(SEQ ID NO：225)：
F11-18的链2(>Chi-24VL-CL)(SEQ ID NO：219)：
F11-19的链1(>Chi-30-F11-1)(SEQ ID NO：226)：
F11-19的链2(>Chi-30VL-CL)(SEQ ID NO：221)：
F4-9的链3(>Chi-45-CHI-Hole)(SEQ ID NO：227)：
F4-9的链4(>Chi-45VL-CL)(SEQ ID NO：223)：
本披露所用的阳性对照分子JNJ-64407564。序列如下(来源于WO2018017786)：
>重链(anti-GPRC5D)(SEQ ID NO：125)：
>轻链(anti-GPRC5D)(SEQ ID NO：126)：
>重链(anti-CD3E)(SEQ ID NO：127)：
>轻链(anti-CD3E)(SEQ ID NO：128)：
>JNJ-64407564中人源化抗GPRC5D抗体的重链可变区(SEQ ID NO：228)：
>JNJ-64407564中人源化抗GPRC5D抗体的轻链可变区(SEQ ID NO：229)：
>JNJ7564-huIgG1的重链(SEQ ID NO：230)：
>JNJ7564-huIgG1的轻链(SEQ ID NO：231)：
测试例
测试例1.FACS测定GPRC5D/CD3双特异性抗体对GPRC5D的亲和力
为测试本披露GPRC5D/CD3双特异性抗体与GPRC5D的结合能力，本测试例用流式细胞术方法检测了GPRC5D/CD3双特异性抗体与表达GPRC5D的人多发性骨髓瘤细胞系MM.1R(CRL-2975)和表达食蟹猴GPRC5D的稳转细胞株CHOK1-cynoGPRC5D的结合能力。具体如下：上述细胞培养于10％FBS的完全培养基中，放置于37℃，5％CO2培养箱中，培养2天，按每孔细胞数1×105个将细胞加至细胞板中，300g离心5分钟，1％BSA洗一次。抗体梯度稀释8个浓度，按每孔100μL加入细胞板中，4℃孵育1小时，1％BSA洗一次，每孔加入100μL FITC-Goat Anti-human IgG Fc荧光二抗稀释液(1:400)，4℃孵育1个小时。1％BSA洗板三次，每孔加入100μL PBS读板。各抗体与相应细胞结合的EC50(nM)如下表 所示。
表25-1.嵌合抗体结合GPRC5D的能力测定
注：JNJ7564-huIgG1是由JNJ-64407564中人源化抗GPRC5D抗体的可变区序列与SEQ ID NO：96所示的轻链恒定区和SEQ ID NO：215所示的重链恒定区组合获得的抗体；“-”表示未检测到结合。
表25-2.抗体结合GPRC5D的能力测定
表25-3.抗体结合GPRC5D的能力测定
表25-4.抗体结合GPRC5D的能力测定 注：“-”表示未检测到结合。
表25-5.抗体结合GPRC5D的能力测定 注：“-”表示未检测到结合。
表25-6.抗体结合GPRC5D的能力测定 注：“-”表示未检测到结合。
结果显示，采用本披露所筛选的GPRC5D抗体构建成不同的GPRC5D单抗或GPRC5D-/CD3双特异性抗体皆有很好结合膜表面GPRC5D的能力，且与CynoGPRC5D有较好的交叉结合活性。JNJ-64407564与humanGPRC5D结合能力弱于本披露的抗体，主要体现为结合响应值很低，并且和cynoGPRC5D亲和力非常弱，几乎检测不到结合。
测试例2.ELISA测定GPRC5D/CD3双特异性抗体和GPRC5D的结合表位
为测定本披露GPRC5D/CD3双特异性抗体与GPRC5D的结合表位，合成了人GPRC5D的4个细胞外域肽，包括：氨基末端肽(N-末端肽)，E2肽，E3肽，E4肽(金斯瑞合成)。对肽进行生物素化，并形成缺乏分子内二硫键/包含分子内二硫键两种形式，序列见表26。将steptavidin(sigma，SA101)包被到Elisa板(corning 3590)，37℃静置2小时后洗板，用含5％脱脂牛奶的PBS封闭非特异结合位点，37℃静置2小时后洗板，每孔加入100μL用含1％BSA的PBS稀释的肽，37℃静置1小时后洗板，之后向每孔加入100μL用含1％BSA的PBS稀释至0.003nM-300nM的GPRC5D/CD3抗体，37℃静置1小时洗板，向其中添加goat anti-humanIgG(H+L)-HRP(Jackson ImmunoResearch，209-035-088)，37℃静置1小时之后洗板，每孔加入100μL TMB(KPL，5120-0077)，显色5分钟后加入1M H2SO4终止，并测量OD450。具体结果见表27。
表26.人GPRC5D的4个细胞外域肽序列
表27.F2-0G4S-1和F4-0G4S-1结合GPRC5D 4个细胞外域肽的能力测定 注：“-”表示未检测到结合。
结果显示，本披露的GPRC5D/CD3双特异性抗体F2-0G4S-1和F4-0G4S-1，结合人GPRC5D的氨基末端肽序列，而不管肽是否形成分子内二硫键。同时，所有检测抗体不与E2肽，E3肽和E4肽结合。这些结果表明，本披露的GPRC5D/CD3双特异性抗体F2-0G4S-1和F4-0G4S-1与GPRC5D的结合表位在人GPRC5D的氨基末端区域。
测试例3.FACS测定GPRC5D/CD3双特异性抗体与GPCRA，GPCRB家族成员的交叉结合
为测试本披露GPRC5D/CD3双特异性抗体是否与GPCRA，GPCRB家族成员有交叉结合，本测试例用流式细胞术方法检测了GPRC5D/CD3双特异性抗体分别与表达人CCR8(GPCR A家族)的CHOK1-人CCR8细胞(参照实施例2构建)及表达人GIPR(GPCR B家族)的CHOK1-人GIPR细胞(参照实施例2构建)的结合能力。具体如下：上述细胞培养于10％FBS的DMEF/12K培养基中，放置于37℃，5％CO2培养箱中，培养2天，按每孔细胞数1×105个将细胞加至细胞板中，300g离心5分钟，1％BSA洗一次。抗体梯度稀释8个浓度，按每孔100μL加入细胞板中，4℃孵育1小时，1％BSA洗一次，每孔加入100μL FITC-Goat Anti-human IgG Fc荧光二抗稀释液(1:400)，4℃孵育1个小时。1％BSA洗板三次，每孔加入100μL PBS读板。
>人CCR8抗原(SEQ ID NO：211)：
>人GIPR抗原(SEQ ID NO：212)：
结果显示，本披露的GPRC5D/CD3双特异性抗体F2-1、F2-0G4S-1、F4-6和F4-0G4S-1均不结合人CCR8及人GIPR，表明了其良好的特异性。
测试例4.本披露双特异性抗体的体外细胞毒活性
本测试例研究了本披露的双特异性抗体作为T细胞衔接分子对肿瘤细胞的杀伤活性。用表达GPRC5D的细胞系H929和不表达GPRC5D的Daudi作为靶细胞来检测本披露的双特异性抗体的靶点特异性细胞毒活性。新鲜PBMC(购自妙顺生物公司)，300g离心10分钟，弃去上清，用含有200U IL2的1640+10％FBS(A液)重悬成2E6/mL细胞悬液，置于培养瓶培养过夜。过夜活化的PBMC，收集离心后用无酚红的1640+4％FBS重悬，再次离心后重悬、计数，调整细胞数为6.25E5cells/mL，每孔加入60μL(每孔PBMC细胞数为37500)。收集靶细胞NCI-H929(ATCC，CRL-9068)，1000rpm离心3分钟，调整细胞数为1.25E5细胞/mL，每孔加入60μL(每孔靶细胞数为7500)，确保E:T比值为5:1。抗体用无酚红完全培养基稀释，起始浓度为500nM(5×终浓度)，10倍稀释9个梯度，每孔加入30μL。然后将细胞放在37℃，5％CO2的培养箱培养48小时。检测前，在只有靶细胞的其中两个孔中吸出10μL培养基，然后加入10μL Lysis Solution(10×)，裂解45min后取出培养板，1000rpm离心3分钟，吸取50μL上清于新的96孔板(#3590)中，按1:1的比例加入溶解好的50μL CytoToxReagent，室温孵育0.5h后加入50μL终止液，用FlexStation 3(Molecular Devices)检测吸收光(490nm)。具体结果见下表。
表28.抗体对NCI-H929的细胞毒活性 注：EC50的比值(相对于JNJ-64407564)＝EC50(待测抗体)/EC50(JNJ-64407564)。
结果显示，本披露的GPRC5D/CD3双特异性抗体的NCI-H929细胞毒活性比JNJ-64407564更强；并且，本披露的GPRC5D/CD3双特异性抗体F2-2、F2-3、F4-6、F4-7、F2-0G4S-1和F4-0G4S-1的细胞毒活性是GPRC5D靶点特异性的，在没有GPRC5D表达的Daudi细胞系上未检测出杀伤活性，提示本披露的GPRC5D/CD3双特异性抗体有更好的安全性。
测试例5.GPRC5D/CD3双特异性抗体的细胞因子释放水平
CD3 T细胞衔接分子会引起细胞因子风暴。因此开发CD3 T细胞衔接分子时，需要能将细胞因子，尤其是和药效无关但会引起副作用的因子IL6，保持在较低水平。本测试例研究了本披露的双特异性抗体的细胞因子IFNγ和IL6释放水平。新鲜PBMC(购自妙顺生物公司)，300g离心10分钟，弃去上清，用含有200U IL2的1640+10％FBS(A液)重悬成2E6/mL细胞悬液，置于培养瓶培养过夜。过夜活化的PBMC，收集离心后用无酚红的1640+4％FBS重悬，再次离心后重悬、计数，调整细胞数为6.25E5细胞/mL，每孔加入60μL(每孔PBMC细胞数为37500)。收集靶细胞NCI-H929(ATCC，CRL-9068)或RPMI-8226(ATCC，CRM-CCL-155)，1000rpm离心3分钟，调整细胞数为1.25E5细胞/mL，每孔加入60μL(每孔靶细胞数为7500)，确保E:T比值为5:1。抗体用无酚红完全培养基稀释，起始浓度为500nM(5×终浓度)，10倍稀释9个梯度，每孔加入30μL。然后将细胞放在37℃，5％CO2的培养箱培养48h备用。
IL6的检测采用ELISA方法。将上述细胞样品1000rpm离心3分钟，收集50μL的细胞上清用标本通用稀释液稀释6倍，IL6标准品亦稀释6倍，在检测板中加入稀释好的样品或者不同浓度标准品(100μL/孔)，用封板胶纸封住反应孔，37℃孵育90分钟后洗板5次，加入生物素化抗体工作液(100μL/孔)，用新封板胶纸封住反应孔，37℃孵育60分钟后洗板5次，加入酶结合物工作液(100μL/孔)，用新封板胶纸封住反应孔，37℃孵育30分钟后洗板5次，加入显色底物(TMB)100μL/孔，避光37℃孵育8分钟，加入反应终止液100μL/孔，混匀后即刻测量OD450值(3分钟内)。
IFNγ的检测采用HTRF方法。将上述细胞样品1000rpm离心3分钟，收集 50μL的细胞上清，平衡检测试剂盒至常温，使用检测缓冲液稀释试剂盒中的两个检测抗体(20倍稀释)。取16μL20倍稀释的样本以及IFNγ标准品于384孔板中，加入4μL稀释好的相对应的检测抗体；贴上密封材料，震荡混匀，1000rpm离心1分钟，常温孵育过夜后，1000rpm离心1分钟，取掉密封材料，使用PHERAstar多功能酶标仪读取665nm和620nm的吸收值，使用Graphpad Prism 5对数据进行处理分析。具体结果见下表。
表29-1.RPMI-8226细胞毒活性实验中的IL-6释放 注：“-”表示低于检测下限，未检测出，下同。
表29-2.RPMI-8226细胞毒活性实验中的IL-6释放
表29-3.RPMI-8226细胞毒活性实验中的IFNγ的释放
表29-4.RPMI-8226细胞毒活性实验中的IFNγ的释放
表29-5.NCI-H929细胞毒活性实验中的IL-6的释放
表29-6.NCI-H929细胞毒活性实验中的IL-6的释放
结果显示，本披露的GPRC5D/CD3双特异性抗体释放IL6和IFNγ的水平低于JNJ-64407564，特别是IL6，几乎检测不到。提示本披露的GPRC5D/CD3双特异性抗体具有更好的安全性。
体内活性生物学评价
测试例6.GPRC5D/CD3双特异性抗体在NCIH929皮下移植瘤模型中的药效
本披露使用人骨髓瘤NCI-H929细胞人PBMC NOG小鼠异种移植瘤模型，对GPRC5D/CD3双特异性抗体在抗肿瘤活性方面进行评价。
NOG小鼠，雌性，8-10周龄，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
人多发性骨髓瘤细胞株NCI-H929购自上海名劲生物科技有限公司。
将NCI-H929细胞加入含10％FBS和0.05mM 2-巯基乙醇的RPMI-1640培养基，并于5％CO2 37℃的饱和湿度培养箱中培养。收集对数生长期NCI-H929细胞，重悬于含50％基质胶的RPMI-1640培养基中，调整细胞浓度至2×107/mL。在无菌条件下，接种0.1mL细胞悬液至小鼠右侧背部皮下，接种浓度为2×106/0.1mL/鼠。肿瘤细胞接种后1天，复苏液氮冻存的hPBMC，培养于含10％HIFBS(FBS，56℃灭活30分钟)的PRMI-1640培养基中，在含5％CO2的37℃培养箱中孵育6小时。收集孵育后hPBMC，重悬于PBS缓冲液中，调整细胞浓度至2.5×107/mL。在无菌条件下，腹腔注射0.2mL细胞悬液至小鼠体内，注射浓度为5×106/0.2mL/鼠。在平均肿瘤体积达到100mm3左右时，将动物按肿瘤体积随机分组，使各组肿瘤体积差异小于均值的10％。分组当日记为Day 0，并按照动物体重开始给药。分组 后立即给药，每周1次腹腔给药，连续给药2次(IP，qW×2)，量瘤记录。 抑瘤率(％)＝1-T/C(％)。 T/C(％)＝(T-T0)/(C-C0)×100％。
肿瘤体积(V)＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示长、宽。
其中T、C为实验结束时治疗组和对照组的肿瘤体积；T0、C0为实验开始时的肿瘤体积。
具体结果见表30-1、30-2、30-3和图2，其中表中计算的抑瘤率均为最后一天的抑瘤率。
表30-1.抗体F2-1在NCIH929皮下移植瘤模型中的药效
表30-2.抗体F4-8、F4-6、F4-7和F2-4在NCIH929皮下移植瘤模型中的药效
表30-3.抗体F4-0G4S-1和F2-0G4S-1在NCIH929皮下移植瘤模型中的药效
实验结果显示，本披露的GPRC5D/CD3双特异性抗体F2-1、F2-4、F4-6、F4-7、F4-8、F2-0G4S-1和F4-0G4S-1在所述给药剂量条件下体内抑制肿瘤生长的活性高于对应剂量的JNJ-64407564。实验期间未观测到药物相关动物死亡及其他明显药物相关毒副反应。
虽然为了清楚的理解，已经借助于附图和实例详细描述了上述发明，但是描述和实例不应当解释为限制本披露的范围。本文中引用的所有专利和科学文献的公开内容通过引用完整地清楚结合。

Claims (20)

  1. 一种特异性结合GPRC5D和CD3的抗原结合分子，其包含至少一个特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和至少一个特异性结合CD3的抗原结合模块，所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块包含重链可变区GPRC5D-VH和轻链可变区GPRC5D-VL，所述特异性结合CD3的抗原结合模块包含重链可变区CD3-VH和轻链可变区CD3-VL；其中：
    (i)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：137、18、135、136或138的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
    (ii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134、10或133的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：130、12、129、131或132的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
    (iii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：140、22或139的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
    (iv)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：144、30、141、142或143的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；
    优选地，
    (i)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的 GPRC5D-LCDR3；或
    (ii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：130的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3。
  2. 根据权利要求1所述的抗原结合分子，其中所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块包含：
    (i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44、3、42或43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49、4、45、46、47、48或50的氨基酸序列；或
    (ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35、1、33或34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39、2、36、37、38、40或41的氨基酸序列；或
    (iii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55、5、51、52、53或54的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56、6或57的氨基酸序列；或
    (iv)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：67、7、58、59、60、61、62、63、64、65、66或68的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75、8、69、70、71、72、73或74的氨基酸序列；
    优选地，
    (i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列；或
    (ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；或
    (iii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列；或
    (iv)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：67氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：62的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列；或
    更优选地，
    (i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；或
    (ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列。
  3. 根据权利要求1或2所述的抗原结合分子，其中：
    所述特异性结合CD3的抗原结合模块包含重链可变区CD3-VH和轻链可变区CD3-VL，所述CD3-VH中的CD3-HCDR1、CD3-HCDR2和CD3-HCDR3分别包含SEQ ID NO：82中的CD3-HCDR1、CD3-HCDR2和CD3-HCDR3的氨基酸序列；和所述CD3-VL中的CD3-LCDR1、CD3-LCDR2和CD3-LCDR3分别包含SEQ ID NO：83中的CD3-LCDR1、CD3-LCDR2和CD3-LCDR3的氨基酸序列；
    优选地，
    所述CD3-VH具有：包含SEQ ID NO：76的氨基酸序列的CD3-HCDR1，包含SEQ ID NO：77的氨基酸序列的CD3-HCDR2，和包含SEQ ID NO：78的氨基酸序列的CD3-HCDR3；并且所述CD3-VL具有：包含SEQ ID NO：79的氨基酸序列的CD3-LCDR1，包含SEQ ID NO：80的氨基酸序列的CD3-LCDR2，和包含SEQ ID NO：81的氨基酸序列的CD3-LCDR3；
    更优选地，
    所述CD3-VH包含SEQ ID NO：82的氨基酸序列，和所述CD3-VL包含SEQ ID NO：83的氨基酸序列。
  4. 根据权利要求1至3中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子进一步包含Fc区，所述Fc区优选为IgG Fc区，进一步优选为IgG1 Fc区；更优选地，所述Fc区包含一个或多个能够减少Fc区与Fcγ受体结合的氨基酸取代；
    最优选地，所述Fc区是人IgG1 Fc区，并且在234和235位置的氨基酸为A，编号依据为EU索引。
  5. 根据权利要求4所述的抗原结合分子，其中所述Fc区包含能够相互缔合的第一亚基Fc1和第二亚基Fc2，所述Fc1和Fc2各自独立地具有一个或多个减少Fc区同源二聚化的氨基酸取代；
    优选地，所述Fc1具有根据杵臼技术的凸起结构，和所述Fc2具有根据杵臼技术的孔结构，或者所述Fc1具有根据杵臼技术的孔结构，和所述Fc2具有根据杵臼技术的凸起结构；
    更优选地，所述Fc1在366位置的氨基酸为W；和所述Fc2在366位置的氨基酸为S、在368位置的氨基酸为A、和在407位置的氨基酸为V，编号依据为 EU索引。
  6. 根据权利要求1至5中任一项所述的抗原结合分子，其中所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块是Fab；所述特异性结合CD3的抗原结合模块是经替换的Fab，或所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块是经替换的Fab，和所述特异性结合CD3的抗原结合模块是Fab；所述经替换的Fab为Fab原有的CH1和CL分别被Obscurin链和Titin链所替换，或Fab原有的CH1和CL分别被Titin链和Obscurin链所替换；
    优选地，
    所述Titin链包含选自由SEQ ID NO：145至SEQ ID NO：163组成的组的氨基酸序列，所述Obscurin链包含选自由SEQ ID NO：164至SEQ ID NO：204组成的组的氨基酸序列；
    更优选地，
    所述Titin链包含SEQ ID NO：163或161的氨基酸序列，所述Obscurin链包含SEQ ID NO：198或199的氨基酸序列；
    最优选地，
    所述Titin链包含SEQ ID NO：163的氨基酸序列，所述Obscurin链包含SEQ ID NO：198的氨基酸序列；或
    所述Titin链包含SEQ ID NO：161的氨基酸序列，所述Obscurin链包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列。
  7. 根据权利要求5或6所述的抗原结合分子，其中至少一个所述特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和至少一个特异性结合CD3的抗原结合模块通过CH1或Obscurin链的C-末端直接或通过连接子与Fc1或Fc2亚基的N-末端连接，并且在所述Fc1和Fc2亚基的N-末端通过二硫键缔合成异源二聚体。
  8. 根据权利要求1-7中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含一条具有式(a)所示结构的第一链、一条具有式(b)所示结构的第二链、一条具有式(c)所示结构的第三链和一条具有式(d)所示结构的第四链，
    (a)[GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc1]，
    (b)[GPRC5D-VL]-CL，
    (c)[CD3-VH]-[Obscurin链]-[Fc2]，
    (d)[CD3-VL]-[Titin链]，
    式(a)、(b)、(c)和(d)所示的结构是从N端至C端排列的；
    优选地，
    所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的第一链、 一条包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：86的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：87的氨基酸序列的第四链。
  9. 根据权利要求7所述的抗原结合分子，其中：
    所述抗原结合分子包含一条具有式(e)所示结构的第一链、一条具有式(d)所示结构的第二链、一条具有式(f)所示结构的第三链和一条具有式(b)所示结构的第四链，
    (e)[CD3-VH]-[Obscurin链]-[Fc1]，
    (d)[CD3-VL]-[Titin链]，
    (f)[GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc2]，
    (b)[GPRC5D-VL]-CL，
    式(e)、(d)、(f)和(b)所示的结构是从N端至C端排列的；
    优选地，
    所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：87的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的第四链。
  10. 根据权利要求7所述的抗原结合分子，其中：
    所述抗原结合分子包含一条具有式(a)所示结构的第一链、一条具有式(b)所示结构的第二链、一条具有式(g)所示结构的第三链和一条具有式(h)所示结构的第四链，
    (a)[GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc1]，
    (b)[GPRC5D-VL]-CL，
    (g)[CD3-VH]-连接子1-[Obscurin链]-[Fc2]，
    (h)[CD3-VL]-连接子2-[Titin链]，
    式(a)、(b)、(g)和(h)所示的结构是从N端至C端排列的，所述连接子1和连接子2是相同或不同的肽连接子；
    优选地，
    所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第四链；或
    所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：120的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第四链；或
    所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：122的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：84的 氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第四链；或
    所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：124的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第四链。
  11. 根据权利要求7所述的抗原结合分子，其中：
    所述抗原结合分子包含一条具有式(i)所示结构的第一链、一条具有式(j)所示结构的第二链、一条具有式(f)所示结构的第三链和一条具有式(b)所示结构的第四链，
    (i)[CD3-VH]-连接子3-[Obscurin链]-[Fc1]，
    (j)[CD3-VL]-连接子4-[Titin链]，
    (f)[GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc2]，
    (b)[GPRC5D-VL]-CL，
    式(i)、(j)、(f)和(b)所示的结构是从N端至C端排列的，所述连接子3和连接子4是相同或不同的肽连接子；
    优选地，
    所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列的第四链；或
    所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的第四链；或
    所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列的第四链；或
    所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列的第四链；或
    所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列的第四链；或
    所述抗原结合分子具有：一条包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的第一链、一条包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的第二链、一条包含SEQ ID NO：227的氨基酸序列的第三链和一条包含SEQ ID NO：223的氨基酸序列的第四链。
  12. 根据权利要求5所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含两个特异性结合GPRC5D的抗原结合模块和两个特异性结合CD3的抗原结合模块，所述 特异性结合GPRC5D的抗原结合模块是Fab；所述特异性结合CD3的抗原结合模块是scFv；
    优选地，
    所述抗原结合分子包含两条具有式(k)所示结构的第一链和两条具有式(b)所示结构的第二链，
    (k)[GPRC5D-VH]-[CH1]-[CD3-VH]-连接子5-[CD3-VL]-连接子6-[Fc的一个亚基]，
    (b)[GPRC5D-VL]-CL，
    式(k)和(b)所示的结构是从N端至C端排列的，所述连接子5和连接子6是相同或不同的肽连接子；
    更优选地，
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：98的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：98的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：101的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：98的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：99的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：99的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：101的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：99的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列的第一链和 两条包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：111的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：111的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：224的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：217的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：225的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：219的氨基酸序列的第二链；或
    所述抗原结合分子具有：两条包含SEQ ID NO：226的氨基酸序列的第一链和两条包含SEQ ID NO：221的氨基酸序列的第二链。
  13. 一种分离的抗体，其能够特异性结合GPRC5D，所述的抗体包含重链可变区GPRC5D-VH和轻链可变区GPRC5D-VL，其中：
    (i)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：137、18、135、136或138的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
    (ii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134、10或133的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：130、12、129、131或132的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
    (iii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：140、22或139的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
    (iv)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含 SEQ ID NO：29的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：144、30、141、142或143的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；
    优选地，
    (i)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3；或
    (ii)所述GPRC5D-VH具有：包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR1、包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR2和包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的GPRC5D-HCDR3，和所述GPRC5D-VL具有：包含SEQ ID NO：130的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR1、包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR2和包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的GPRC5D-LCDR3。
  14. 根据权利要求13所述的分离的抗体，其中：
    (i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44、3、42或43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49、4、45、46、47、48或50的氨基酸序列；或
    (ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35、1、33或34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39、2、36、37、38、40或41的氨基酸序列；或
    (iii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55、5、51、52、53或54的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56、6或57的氨基酸序列；或
    (iv)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：67、7、58、59、60、61、62、63、64、65、66或68的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75、8、69、70、71、72、73或74的氨基酸序列；
    优选地，
    (i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL 包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列；或
    (ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；或
    (iii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列；或
    (iv)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：67氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL 包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：62的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列，或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列；或
    所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列；或
    更优选地，
    (i)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列；或
    (ii)所述GPRC5D-VH包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列，和所述GPRC5D-VL包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列。
  15. 根据权利要求13或14所述的分离的抗体，其中所述的抗体是双特异性抗体；
    优选地，所述双特异性抗体特异性结合GPRC5D和CD3。
  16. 根据权利要求1至12任一项所述的抗原结合分子或权利要求13至15任一项所述的分离的抗体，其中所述的抗原结合分子或分离的抗体不与E2肽、E3肽和E4肽结合，其中所述的E2肽包含SEQ ID NO：206的氨基酸序列，所述的E3肽包含SEQ ID NO：207的氨基酸序列，所述的E4肽包含SEQ ID NO：208的氨基酸序列；
    优选地，所述的抗原结合分子或分离的抗体与人GPRC5D的氨基末端区域结合，其中所述的人GPRC5D的氨基末端区域包含SEQ ID NO：205的氨基酸序列。
  17. 一种药物组合物，其含有：
    治疗有效量的权利要求1至12任一项所述的抗原结合分子或权利要求13至15任一项所述的分离的抗体，以及一种或更多种药学上可接受的载体、稀释剂、缓冲剂或赋形剂；
    优选地，所述的药物组合物中还包含至少一种第二治疗剂。
  18. 分离的核酸，其编码权利要求1至12任一项所述的抗原结合分子或权利要求13至15任一项所述的分离的抗体。
  19. 一种宿主细胞，其包含如权利要求18所述的核酸。
  20. 一种治疗疾病的方法，所述方法包括向受试者施用权利要求1至12任一项所述的抗原结合分子或权利要求13至15任一项所述的分离的抗体或权利要求17所述的药物组合物的步骤；
    优选地，所述疾病是肿瘤、癌症或自身免疫疾病；
    更优选地，所述疾病是多发性骨髓瘤、复发/难治性多发性骨髓瘤、冒烟型多发性骨髓瘤、单克隆丙种球蛋白病、急性淋巴母细胞白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、浆细胞白血病、轻链型淀粉样变、前体B细胞淋巴母细胞白血病、急性髓性白血病、骨髓增生异常综合征、慢性淋巴细胞白血病、B细胞恶性肿瘤、慢性髓性白血病、毛细胞白血病、母细胞性浆细胞样树突状细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤、浆细胞白血病、间变性大细胞淋巴瘤、卵巢癌、肺癌、胃癌、前列腺癌、肾癌、肝癌、结直肠癌、食管癌、膀胱癌、宫颈癌或黑色素瘤。
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