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CN118647607A - 嘧啶杂环化合物，其制法与医药上的用途 - Google Patents

嘧啶杂环化合物，其制法与医药上的用途 Download PDF

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CN118647607A
CN118647607A CN202280076515.2A CN202280076515A CN118647607A CN 118647607 A CN118647607 A CN 118647607A CN 202280076515 A CN202280076515 A CN 202280076515A CN 118647607 A CN118647607 A CN 118647607A
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ring
alkyl
alkylene
membered
compound
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陆洪福
彭晶晶
丁晓
刘金鑫
刘颖涛
任峰
周福生
蒋涛
梁涛
兰炯
吕强
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Yingsi Intelligent Technology Intellectual Property Co ltd
Original Assignee
Insilicon Intelligent Technology Shanghai Co ltd
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Abstract

一种嘧啶杂环化合物，其制法与医药上的用途。具体地，结构如式(A)所示的嘧啶杂环化合物或其药学上可接受的盐，各基团定义如说明书中所定义；包含所述化合物的药物组合物以及所述化合物在治疗细胞增殖性疾病(例如癌症)等中的用途。

Description

嘧啶杂环化合物，其制法与医药上的用途
本发明要求申请日为2021年12月22日的中国专利申请CN202111583828.0的优先权、申请日为2022年01月27日中国专利申请CN202210098381.6的优先权、申请日为2022年05月23日的中国专利申请CN202210562007.7的优先权、申请日为2022年12月07日的中国专利申请CN202211568373.X的优先权。本申请引用上述中国专利申请的部分或者全部。
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及嘧啶杂环化合物，其制法与医药上的用途。
背景技术
细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)/周期蛋白复合物被鉴定为RNA聚合酶II转录机制的保守组分。目前存在20种哺乳动物CDK。在哺乳动物CDK中，CDK7具有坚实的激酶活性，且仅有CDK7具有调控细胞周期进程和转录的双重功能。在胞质溶胶中，CDK7作为异源三聚体复合物存在并且被认为起着CDK1/2/4/6激活激酶(CAK)的作用，由此CDK7对CDK1/2/4/6中的保守残基的磷酸化是完全催化性CDK活性和细胞周期进程所必需的。在细胞核中，CDK7形成RNA聚合酶II转录因子复合物的激酶核心，并且负责磷酸化RNA聚合酶II的C-末端结构域(CTD)，这是基因转录起始的必要步骤。CDK7的两个功能(即CAK和CTD磷酸化)一起支持细胞增殖、细胞周期和转录的关键方面。
CDK7作为总体转录的调控因子，可作为治疗许多疾病和综合症的治疗性靶点。CDK7可在转录调控区中和多个转录因子、辅因子、染色质调控因子以及非编码RNA中的相互作用以调控转录。而这些转录因子、辅因子、染色质调控物或非编码RNA的突变可以导致癌症、自身免疫病、神经系统障碍、发育综合症、糖尿病、心血管疾病和肥胖症等疾病。其中一些转录因子可控制RNA聚合酶II介导的转录起始和延伸，并且当它们的表达或功能改变时，可以产生侵袭性肿瘤细胞(例如c-Myc引起的)或某些形式的自身免疫性(例如AIRE引起的)。因此，CDK7激酶可通过调控总体转录过程来促进与肿瘤相关的某些转录因子的异常表达，以及通过调控细胞周期关键激酶的磷酸化以促进肿瘤发展。更重要的是，与癌细胞中其他管家基因相比，CDK7更显著地调控致癌转录因子的表达。CDK7的抑制可以差异性影响某些癌基因和管家基因的转录，因此可以确保治疗窗口。通过调控CDK7介导的磷酸化修饰来进行转录调控和细胞周期调控，可用于治疗包括癌症在内的增殖异常疾病。作为转录的总体调控因子，CDK7也可作为治疗疾病如炎症、病毒复制例如HIV、EBV、癌症和心脏肥大的治疗靶点。
CDK家族成员激酶结构域的高度序列和结构相似性阻碍了CDK7选择性抑制剂的发现。因此，开发选择性CDK7抑制剂，对于临床应用有重要价值。
发明内容
本发明第一方面提供了式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐；
其中，
为
环A为无；或环A选自下组：3至14元碳环、3至14元杂环、5至12元杂芳基、C 5-12芳基；环A为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；所述3至14元杂环具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；所述5至12元杂芳基具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；
L 3为无、C 1-6亚烷基、C 2-6亚烯基或环B(结构为 )；其中，所述C 1-6亚烷基上的1、2、3、4或5个氢原子可以任选地各自独立地被R 13取代；所述C 2-6亚烯基上的1、2、3、4或5个氢原子可以任选地各自独立地被R 13取代；
环B选自下组：3至14元碳环、3至14元杂环、5至12元杂芳基、C 5-12芳基；环B为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；所述3至14元杂环具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；所述5至12元杂芳基具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；
L 1为无、C 1-6亚烷基、C 2-6亚烯基、-O-、-NR 10-、-C＝N-、C 5-12芳基、5至12元杂芳基、-C(O)-、-C(O)-NR 10-或-NR 10-C(O)-；其中，所述C 1-6亚烷基上的1、2、3、4或5个氢原子可以任选地各自独立地被R 13取代；所述C 2-6亚烯基上的1、2、3、4或5个氢原子可以任选地各自独立地被R 13取代；所述5至12元杂芳基具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；所述C 5-12芳基、5至12元杂芳基各自独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；
L 2选自下组：
-(O) m2-(CR 13R 14) m1-(NR 12) m3-、
-(NR 11) m2-(CR 13R 14) m1-(NR 12) m3-、
-(O) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7元碳环基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7元碳环基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(O) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7元杂环基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7元杂环基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(O) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(O) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10C(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10C(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(O) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(O) m2-(CR 13R 14) m5-O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(O) m2-(CR 13R 14) m5-OC(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-OC(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(O) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(O) m2-(CR 13R 14) m5-(CH＝CH) m7-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
-(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-(CH＝CH) m7-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-；
各个R 10各自独立地氢、C 1-6烷基、氘代C 1-6烷基、-3至7元碳环基、-C(O)-C 1-6烷基、-C(O)-C 1-4烷基-C 1-6烷氧基、-C(O)-3至7元碳环基、-C 1-4烷基-羟基、-C 1-4烷基-氰基、-C 1-4烷基-C 1-6烷氧基、-C 1-4烷基-NHC(O)-C 1-6烷基、-C 1-4烷基-NHC(O)-C 1-4烷基-C 1-6烷氧基、-C 1-4烷基-NHC(O)-3至7元碳环基或-C 1-4烷基-NRR’；
各个3至7元杂环基各自独立地具有1、2或3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；所述3至7元碳环各自独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；
各个3至7元碳环基各自独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；
各个R 11各自独立地为氢、C 1-6烷基或氘代C 1-6烷基；
各个R 12各自独立地为氢、C 1-6烷基或氘代C 1-6烷基；
各个R 13各自独立地为氢、氰基、羟基、卤素、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷氧基、-3至7元碳环基、-C 0-6亚烷基-NRR’、-C 1-6亚烷基-羟基或-C 0-6亚烷基-氰基；
各个R 14各自独立地为氢、氰基、羟基、卤素、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷氧基、-3至7元碳环基、-C 0-6亚烷基-NRR’、-C 1-6亚烷基-羟基或-C 0-6亚烷基-氰基；
各个m1各自独立地为1、2、3、4、5或6；
各个m2各自独立地为0或1；
各个m3各自独立地为0或1；
各个m4各自独立地为1或2；
各个m5各自独立地为0、1、2、3、4、5或6；
各个m6各自独立地为0、1、2、3、4、5或6；
各个m7各自独立地为1或2；
R 1为氢、卤素、氰基、C 1-6烷基或3至14元碳环基；所述C 1-6烷基、3至14元碳环基独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自下组的基团所取代：氧代、羟基、卤素、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基；
R 2为氢、卤素、氰基、C 1-6烷基或3至14元碳环基；所述C 1-6烷基、3至14元碳环基独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自下组的基团所取代：氧代、羟基、卤素、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基；
X 2为N或C(R 3)；
X 1为N或C(R 4)；
Y为N或C(R 4)；
Z为N或C(R 3)；
各个R 3独立地为氢、卤素、氰基、C 1-6烷基或卤代C 1-6烷基；
各个R 4独立地为氢、卤素、羟基、氰基、-C 2-4亚烯基-苯基、-C 2-4亚炔基-苯基、-S(O)-OH、-S(O) 2-OH、-S-(C 1-6烷基)、C 1-6烷基、-O-C 1-6烷基、-C 1-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 1-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-NRR’、-C 0-6亚烷基-C(O)OH、-C 0-6亚烷基-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-C(O)-NRR’、-C 0-6亚烷基-NR-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-S(O) 2-NRR’、-C 0-6亚烷基-NR-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-NR-S(O) 2-NRR’、-C 0-6亚烷基-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6亚烷基-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)、-C 0-6亚烷基-P(O)-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6亚烷基-3至14元碳环基、-C 0-6亚烷基-3至14元杂环基、-C 0-6亚烷基-5至12元杂芳基、-C 0-6亚烷基-C 5-12芳基、-C 0-6亚烷基-C(O)-3至14元杂环基、-C 0-6亚烷基-C(O)-5至12元杂芳基、-O-C 0-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 0-6亚烷基-3至14元碳环基、-O-C 0-6亚烷基-3至14元杂环基、-O-C 0-6亚烷基-5至12元杂芳基、-O-C 0-6亚烷基-C 5-12芳基、-S(O)-C 1-6烷基；其中，所述C 1-6烷基、C 0-6亚烷基、C 2-4亚烯基、3至14元碳环基、3至14元杂环基、5至12元杂芳基、C 5-12芳基独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；所述3至14元杂环具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；所述5至12元杂芳基具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；
所述S1组的基团包括：氧代、卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基、-O-C 1-6烷基、-C 1-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 1-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-NRR’、-C 0-6亚烷基-C(O)OH、-C 0-6亚烷基-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-C(O)-NRR’、-C 0-6亚烷基-NR-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-S(O) 2-NRR’、-C 0-6亚烷基-NR-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-NR-S(O) 2-NRR’、-C 0-6亚烷基-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6亚烷基-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)、-C 0-6亚烷基-P(O)-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6亚烷基-3至14元碳环基、-C 0-6亚烷基-3至14元杂环基、-C 0-6亚烷基-5至12元杂芳基、-C 0-6亚烷基-C 5-12芳基、-C 0-6亚烷基-C(O)-3至14元杂环基、-C 0-6亚烷基-C(O)-5至12元杂芳基、-O-C 0-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 0-6亚烷基-3至14元碳环基、-O-C 0-6亚烷基-3至14元杂环基、-O-C 0-6亚烷基-5至12元杂芳基、-O-C 0-6亚烷基-C 5-12芳基、-S(O)-C 1-6烷基；
R、R’各自独立地为氢、C 1-6烷基或氘代C 1-6烷基；或者R、R’任选与和它们相连的氮原子共同构成3至14元杂环基或5至12元杂芳基；其中，所述杂环基、杂芳基各自独立地除了已有的氮原子外还包含0、1或2个选自N、O、S的杂原子；
上述各基团中，所述C 0-6亚烷基上任意同一个碳原子上的2个氢原子还可以任选地同时被3至7元碳环或3至7元杂环螺环取代；
上述各基团中，所述C 1-6亚烷基上任意同一个碳原子上的2个氢原子还可以任选地同时被3至7元碳环或3至7元杂环螺环取代。
在一些实施方案中，R 1为氢、卤素、氰基、C 1-4烷基或3至7元碳环基；所述C 1-4烷基、3至7元碳环基独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自下组的基团所取代：氧代、羟基、卤素、C 1-3烷基、卤代C 1-3烷基。
在一些实施方案中，R 1为氢、卤素、氰基、C 1-4烷基(例如甲基)、卤代C 1-4烷基(例如三氟甲基)、3至7元碳环基或卤代3至7元碳环基。
在一些实施方案中，R 2为氢、卤素、氰基、C 1-4烷基或3至7元碳环基；所述C 1-4烷基、3至7元碳环基独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自下组的基团所取代：氧代、羟基、卤素、C 1-3烷基、卤代C 1-3烷基。
在一些实施方案中，R 2为氢、卤素、氰基、C 1-4烷基(例如甲基)、卤代C 1-4烷基(例如三氟甲基)、3至7元碳环基或卤代3至7元碳环基。
在一些实施方案中，X 1为N。
在一些实施方案中，X 1为C(R 4)；其中，R 4为氢、卤素、羟基、氰基、-C 2-4亚烯基-苯基、-C 2-4亚炔基-苯基、-S(O)-OH、-S(O) 2-OH、-S-(C 1-6烷基)或R 8；R 8为C 1-6烷基、-O-C 1-6烷基、-C 1-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 1-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-NRR’、-C 0-6亚烷基-C(O)OH、-C 0-6亚烷基-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-C(O)-NRR’、-C 0-6亚烷基-NR-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-S(O) 2-NRR’、-C 0-6亚烷基-NR-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-NR-S(O) 2-NRR’、-C 0-6亚烷基-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6亚烷基-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)、-C 0-6亚烷基-P(O)-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6亚烷基-3至14元碳环基、-C 0-6亚烷基-3至14元杂环基、-C 0-6亚烷基-5至12元杂芳基、-C 0-6亚烷基-C 5-12芳基、-C 0-6亚烷基-C(O)-3至14元杂环基、-C 0-6亚烷基-C(O)-5至12元杂芳基、-O-C 0-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 0-6亚烷基-3至14元碳环基、-O-C 0-6亚烷基-3至14元杂环基、-O-C 0-6亚烷基-5至12元杂芳基、-O-C 0-6亚烷基-C 5-12芳基、-S(O)-C 1-6烷基；其中，所述C 1-6烷基、C 0-6亚烷基、C 2-4亚烯基、3至14元碳环基、3至14元杂环基、5至12元杂芳基、C 5-12芳基独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；所述3至14元杂环具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；所述5至12元杂芳基具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；R、R’、S1组的基团定义同前。
在一些实施方案中，X 1为C(R 4)；其中，R 4为-C 0-6亚烷基-NRR’、-C 0-6亚烷基-C(O)OH、-C 0-6亚烷基-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-C(O)-NRR’、-C 0-6亚烷基-NR-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-S(O) 2-NRR’、-C 0-6亚烷基-NR-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-NR-S(O) 2-NRR’、-C 0-6亚烷基-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6亚烷基-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)或-C 0-6亚烷基-P(O)-(C 1-6烷基) 2；其中，所述C 1-6烷基、C 0-6亚烷基独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；R、R’、S1组的基团定义同前。
在一些实施方案中，X 1为C(R 4)；其中，R 4为-C 0-6亚烷基-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6亚烷基-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)或-C 0-6亚烷基-P(O)-(C 1-6烷基) 2；其中，所述C 1-6烷基、C 0-6亚烷基独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；S1组的基团定义同前。
在一些实施方案中，X 1为C(R 4)；其中，R 4为-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)或-P(O)-(C 1-6烷基) 2；其中，所述C 1-6烷基独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；S1组的基团定义同前。
在一些实施方案中，X 1为C(R 4)；其中，R 4为氢、卤素或氰基。
在一些实施方案中，X 1为C(R 4)；其中，R 4为-P(O)O-(CH 3) 2、-P(O)-(CH 3)(O-CH 3)或-P(O)-(CH 3) 2。
在一些实施方案中，X 2为C(R 3)；R 3为氢。
在一些实施方案中，Y为C(R 4)；R 4为氢。
在一些实施方案中，Z为C(R 3)；R 3为氢。
如本文提及的，C 0-6亚烷基上或C 0-6亚烷基上，同一个碳原子上的2个氢原子同时被3至7元碳环或3至7元杂环螺环取代，是指该碳原子上的2个氢原子被二价形式的取代基取代后，该二价形式的取代基与该碳原子共同形成3至7元碳环或3至7元杂环。例如，-CH 2-上碳原子上的2个氢原子被环丙基环螺环取代，是指-CH 2-上碳原子上的2个氢原子被二价形式的乙基(即亚乙基)取代后，该亚乙基与该碳原子共同形成环丙基。以此类推。
在一些实施方案中，
所述式(A)化合物为式(I-A)化合物；
式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、环B各自定义同前；
或
所述式(A)化合物为式(I-B)化合物；
式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、R 13、R 14各自定义同前；m0为1、2、3、4、5或6；
或
所述式(A)化合物为式(A1)化合物；
式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、环B各自定义同前；
或
所述式(A)化合物为式(A2)化合物；
式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、R 13、R 14各自定义同前；m0为1、2、3、4、5或6。
在一些实施方案中，所述式(A)化合物为式(Ia)化合物、式(Ib)化合物、式(Ic)化合物、式(Id)化合物、式(Ie)化合物或式(If)化合物；
各式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、环B各自定义同前。
在一些实施方案中，
所述式(A)化合物为式(II-A)化合物；
式中，R 1、R 2、L 1、L 2、环A、环B、X 1各自定义同前；
或
所述式(A)化合物为式(II-B)化合物；
式中，X 1、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、R 13、R 14各自定义同前；m0为1、2、3、4、5或6；
或
所述式(A)化合物为式(A3)化合物；
式中，X 1、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、环B各自定义同前；
或
所述式(A)化合物为式(A4)化合物；
式中，X 1、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、R 13、R 14各自定义同前；m0为1、2、3、4、5或6。
在一些实施方案中，所述式(A)化合物为式(IIa)化合物、式(IIb)化合物、式(IIc)化合物、式(IId)化合物、式(IIe)化合物或式(IIf)化合物；
各式中，X 1、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、环B各自定义同前。
在一些实施方案中，
所述式(A)化合物为式(III-A)化合物；
式中，L 1、L 2、环A、环B、X 1各自定义同前；
或
所述式(A)化合物为式(III-B)化合物；
式中，X 1、L 1、L 2、环A、R 13、R 14各自定义同前；m0为1、2、3、4、5或6；
或
所述式(A)化合物为式(A5)化合物；
式中，X 1、L 1、L 2、环A、环B各自定义同前；
或
所述式(A)化合物为式(A6)化合物；
式中，X 1、L 1、L 2、环A、R 13、R 14各自定义同前；m0为1、2、3、4、5或6。
在一些实施方案中，所述式(A)化合物为式(III-1)化合物或式(III-2)化合物；
各式中，L 1、L 2、环A、环B、X 1各自定义同前。
在一些实施方案中，所述式(A)化合物为式(III-a)化合物、式(III-b)化合物、式(III-c)化合物或式(III-d)化合物；
各式中，L 1、L 2、环A、环B、X 1各自定义同前。
在一些实施方案中，所述式(A)化合物为式(IV-a)化合物、式(IV-b)化合物或式(IV-c)化合物；
各式中，L 1、L 2、环B、X 1各自定义同前。
在一些实施方案中，环A为无；或环A选自下组：3至6元碳环、3至6元杂环、5至6元杂芳基、苯基，所述环A为未取代的或被1、2或3个选自OH、C 1-6烷基、卤素取代，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，环A为无；或环A选自下组：环丁环、环戊环、环己环、哌啶环、哌嗪环、四氢吡咯环、吡唑环、咪唑环；环A为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，环A为无；或环A选自下组：环丁环、环戊环、环己环、哌啶环、哌嗪环、四氢吡咯环、吡唑环、咪唑环；环A为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；所述S组的基团包括：羟基、甲基、卤素，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，环A为无；或环A选自下组：
其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，环A为无；或环A选自下组：
在一些实施方案中，环B选自下组：3至6元碳环、3至6元杂环，所述环B为未取代的或被1、2或3个选自OH、C 1-6烷基、卤素取代，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，环B选自下组：环丁环、环戊环、环己环、哌啶环、哌嗪环、四氢吡咯环、吡唑环、咪唑环；环B为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，环B选自下组： 其余变量如本发明所定义
在一些实施方案中，环B选自下组：
在一些实施方案中，L 2为-NR 11-(CR 13R 14) m1-NR 12-；R 11、R 12独立地为氢或甲基；各个R 13、R 14独立地为氢、卤素或甲基；m1为1、2、3、4、5或6，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-O-(CR 13R 14) m1-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14独立地为氢、卤素或甲基；m1为1、2、3、4、5或6，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-NR 11-(CR 13R 14) m1-；R 11为氢或甲基；各个R 13、R 14独立地为氢、卤素或甲基；m1为1、2、3、4、5或6，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-(CR 13R 14) m1-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14独立地为氢、卤素或甲基；m1为1、2、3、4、5或6，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-(CR 13R 14) m1-；各个R 13、R 14独立地为氢、卤素或甲基；m1为1、2、3、4、5或6，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-NR 11-(CR 13R 14) m5-3至7元碳环-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12独立地为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4；所述3至7元碳环为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-O-(CR 13R 14) m5-3至7元碳环-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4；所述3至7元碳环为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-(CR 13R 14) m5-3至7元碳环-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4；所述3至7元碳环为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代。在一些实施方案中，所述3至7元碳环为环丁基、环戊基或环己基，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-NR 11-(CR 13R 14) m5-3至7元杂环-(CR 13R 14) m6-NR 12；R 11、R 12独立地为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4；所述3至7元杂环为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-O-(CR 13R 14) m5-3至7元杂环-(CR 13R 14) m6-NR 12；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4；所述3至7 元杂环为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-(CR 13R 14) m5-3至7元杂环-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4；所述3至7元杂环为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-NR 11-(CR 13R 14) m5-NR 10-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12独立地为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；R 10为氢或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-O-(CR 13R 14) m5-NR 10-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；R 10为氢或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-(CR 13R 14) m5-NR 10-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；R 10为氢或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-NR 11-(CR 13R 14) m5-NR 10C(O)-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12独立地为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；R 10为氢或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-O-(CR 13R 14) m5-NR 10C(O)-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；R 10为氢或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-(CR 13R 14) m5-NR 10C(O)-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；R 10为氢或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-NR 11-(CR 13R 14) m5-C(O)NR 10-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12独立地为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；R 10为氢或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-O-(CR 13R 14) m5-C(O)NR 10-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；R 10为氢或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-(CR 13R 14) m5-C(O)NR 10-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；R 10为氢或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-NR 11-(CR 13R 14) m5-O-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12独立地为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-O-(CR 13R 14) m5-O-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-(CR 13R 14) m5-O-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-NR 11-(CR 13R 14) m5-OC(O)-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12独立地为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-O-(CR 13R 14) m5-OC(O)-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-(CR 13R 14) m5-OC(O)-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-NR 11-(CR 13R 14) m5-C(O)O-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12独立地为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-O-(CR 13R 14) m5-C(O)O-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-(CR 13R 14) m5-C(O)O-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-NR 11-(CR 13R 14) m5-CH＝CH-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12独立地为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-O-(CR 13R 14) m5-CH＝CH-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2为-(CR 13R 14) m5-CH＝CH-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12为氢或甲基；各个R 13、R 14各自独立地为氢、卤素或甲基；m5为0、1、2、3或4；m6为0、1、2、3或4，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，所述S1组的基团包括：氧代、羟基、氰基、卤素、甲基、乙基、丙基，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，所述3至7元碳环为环丙基、环丁基、环戊基或环己基，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，所述3至7元杂环为氮杂环丁基、氧杂环丁基、四氢吡咯基、四氢呋喃基、哌啶基或哌嗪基，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2选自下组之一：
其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 2选自下组： 其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 1为无、-O-、-N(CH 3)-、-CH＝CH-、-C＝N-、-CH 2-、-CH(CH 3)、-CH 2CH 2-、-CH(CH 3)CH 2-、-CH 2CH 2CH 2-、-CH 2CH 2CH(CH 3)-、-C(O)-、-NH-C(O)-、-N(CH 3)-C(O)-、-C(O)-N(CH 3)--C(O)-NH-CH 2-或-C(O)-NH-，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，L 1为-N(CD 3)-、-CH(CD 3)、-N(CD 3)-C(O)-或-C(O)-N(CD 3)，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，X 1为N或C(R 4)；其中，R 4为氢、卤素、氰基、-S(O) 2CH 3或-P(O)(CH 3) 2，其余变量如本发明所定义。
在一些实施方案中，式(A)化合物选自下表(I)中化合物之一：
表(I)
本发明第二方面提供了一种药物组合物，其包含第一方面所述的化合物、其立体异构体、前药或其药学上可接受的盐以及药学可接受的载体。
如本文所用，术语“本发明活性物质”或“本发明化合物”是指第一方面所述的化合物、其立体异构体、前药或其药学上可接受的盐。
如本文所用，术语“药学可接受的载体”是指能够递送有效量的本发明活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者受试者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体，包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。
所述药物组合物可以以下的任意方式施用：口服，喷雾吸入，直肠用药，鼻腔用药，颊部用药，局部用药，非肠道用药，如皮下，静脉，肌内，腹膜内，鞘内，心室内，胸骨内和颅内注射或输入，或借助一种外植储器用药。其中优选口服、腹膜内或静脉内给药方式。当口服用药时，本发明的化合物可制成任意口服可接受的制剂形式，包括但不限于片剂、胶囊、水溶液或水悬浮液。片剂使用的载体一般包括乳糖和玉米淀粉，另外也可加入润滑剂如硬脂酸镁。胶囊制剂使用的稀释剂一般包括乳糖和干燥玉米淀粉。水悬浮液制剂则通常是将活性成分与适宜的乳化剂和悬浮剂混合使用。如果需要，以上口服制剂形式中还可加入一些甜味剂、芳香剂或着色剂。当局部用药时，特别是治疗局部外敷容易达到的患面或器官，如眼睛、皮肤或下肠道神经性疾病时，可根据不同的患面或器官将本发明化合物制成不同的局部用药制剂形式，当眼部局部施用时，本发明的化合物可配制成一种微粉化悬浮液或溶液的制剂形式，所使用载体为等渗的一定pH的无菌盐水，其中可加入也可不加防腐剂如氯化苄基烷醇盐。对于眼用，也可将化合物制成膏剂形式如凡士林膏。当皮肤局部施用时，本发明的化合物可制成适当的软膏、洗剂或霜剂制剂形式，其中将活性成分悬浮或溶解于一种或多种载体中。软膏制剂可使用的载体包括但不限于：矿物油，液体凡士林，白凡士林，丙二醇，聚氧化乙烯，聚氧化丙烯，乳化蜡和水；洗剂或霜剂可使用的载体包括但不限于：矿物油，脱水山梨糖醇单硬脂酸酯，吐温60，十 六烷酯蜡，十六碳烯芳醇，2-辛基十二烷醇，苄醇和水。本发明的化合物还可以无菌注射制剂形式用药，包括无菌注射水或油悬浮液或无菌注射溶液。可使用的载体和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外灭菌的非挥发油也可用作溶剂或悬浮介质，如单甘油酯或二甘油酯。
在另一个方面，本发明提供了第一方面所述的化合物、其立体异构体、前药或其药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防CDK7相关疾病的药物中的用途。
在另一个方面，本发明提供了第一方面所述的化合物、其立体异构体、前药或其药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。
在另一个方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的第一方面所述的化合物、其立体异构体、前药或其药学上可接受的盐，或上述的任意组合，或施用第二方面所述的药物组合物的步骤。
在另一个方面，本发明提供了第一方面所述的化合物、其立体异构体、前药或其药学上可接受的盐在制备CDK7抑制剂中的用途。
在一些实施方案中，所述CDK7相关疾病为增殖性疾病(例如肿瘤或癌症)、传染性疾病、免疫疾病、自身免疫疾病和炎性疾病。
在一些实施方案中，所述肿瘤或癌症包括实体瘤、血液瘤。在一些实施方案中，所述肿瘤或癌症包括黑色素瘤、骨癌(例如骨肉瘤、尤文氏肉瘤)、乳腺癌(例如激素受体阳性(HR+)乳腺癌(例如雌激素受体阳性(ER+)或孕酮受体阳性(PR+)乳腺癌)、激素受体阴性乳腺癌、三阴性乳腺癌(TNBC；ER-/PR-/HER2-))、结直肠癌、脑癌、肺癌(例如小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、胰腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、食道癌、胃癌、胆管癌、前列腺癌、肝癌、肾细胞癌、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性成淋巴细胞白血病(ALL)、T-细胞急性成淋巴细胞白血病(T-ALL)、慢性髓细胞白血病(CML)、急性骨髓性白血病(AML)、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤。
在一些实施方案中，所述传染性疾病包括AIDS、霍乱、结膜炎、登革热、脑炎、肠病毒感染(例如，脊髓灰质炎、非脊髓灰质炎)、大肠杆菌感染、口蹄疫、肝炎、带状疱疹、流感、麻疹等。
在一些实施方案中，所述免疫疾病和/或自身免疫疾病包括哮喘、糖尿病、风湿性疾病、AIDS、移植器官和组织的排斥、鼻炎、慢性阻塞性肺病、骨质疏松症、溃疡性结肠炎、红斑狼疮、过敏症、类风湿性关节炎、重症肌无力、克罗恩病、银屑病等。
在一些实施方案中，所述炎性疾病选自中枢神经系统(CNS)的炎性疾病、炎性风湿性疾病、血管的炎性疾病、中耳的炎性疾病、炎性肠病、皮肤的炎性疾病、葡萄膜炎炎性疾病和咽喉的炎性疾病。
如本文所用，术语“受试者”是指动物，特别是哺乳动物，优选人。
如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。在本发明的实施方式中，在根据本发明对患者进行治疗时，给定药物的量取决于诸多因素，如具体的给药方案、疾病或病症类型及其严重性、需要治疗的受治疗者或宿主的独特性(例如体重)，但是，根据特定的周围情况，包括例如已采用的具体药物、给药途径、治疗的病症、以及治疗的受治疗者或宿主，施用剂量可由本领域已知的方法常规决定。通常，就成人治疗使用的剂量而言，施用剂量典型地在0.02-5000mg/天，例如约1-1500mg/天的范围。该所需剂量可以方便地被表现为一剂、或同时给药的(或在短时间内)或在适当的间隔的分剂量，例如每天二、三、四剂或更多分剂。本领域技术人员可以理解的是，尽管给出了上述剂量范围，但具体的有效量可根据患者的情况并结合医师诊断而适当调节。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在制药上可接受的并且具有母体化合物药理学活性的本发明化合物的盐。这类盐包括：与无机酸或与有机酸形成的酸加成的盐，所述的无机酸诸如硝酸， 磷酸，碳酸等；所述的有机酸诸如丙酸，己酸，环戊丙酸，乙醇酸，丙酮酸，葡糖酸，硬脂酸，粘康酸等；或在母体化合物上存在的酸性质子被金属离子，例如碱金属离子或碱土金属离子取代时形成的盐；或与有机碱形成的配位化合物，所述的有机碱诸如乙醇胺，二乙醇胺，三乙醇胺，N-甲基葡糖胺等。本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈等非水介质。除了盐的形式，本发明所提供的化合物还存在前药形式。本文所描述的化合物的前药容易地在生理条件下发生化学变化从而转化成本发明的化合物。此外，前体药物可以在体内环境中通过化学或生化方法被转换到本发明的化合物。
如本文所用，术语“立体异构体”包括构象异构体和构型异构体，其中构型异构体主要包括顺反异构体和旋光异构体。本发明所述化合物可以以立体异构体的形式存在，并因此涵盖所有可能的立体异构体形式，包括但不限于顺反异构体、互变异构体、对映异构体、非对映异构体、阻转异构体等，本发明所述化合物也可以以前述的立体异构体的任何组合或任何混合物，例如内消旋体、外消旋体、阻转异构体的等量混合物等形式存在。例如单一对映异构体，单一非对映异构体或以上的混合物，或单一阻转异构体或其混合物。当本发明所述的化合物含有烯烃双键时，除非特别说明，否则其包括顺式异构体和反式异构体，以及其任何组合。本发明的阻转异构体为基于分子内旋转受限制而产生的轴向或平面手性的立体异构体。式(A)化合物具有源于不对称碳、轴向不对称等的光学异构体，必要时单一异构体可通过本领域已知的方法，例如结晶或手性色谱等方法进行拆分获得。
如本文所用，术语“烃基”指直链或支链饱和脂肪族烃基基团。术语“C 1-6烃基”指具有1至6个碳原子的直链或支链烃基。例如包括C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基等。
如本文所用，术语“C 1-6烷基”指具有1至6个碳原子的直链或支链烷基。优选是C 1-4烷基，更优选是C 1-3烷基。具体实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基，及其各种支链异构体等。
如本文所用，术语“烯基”指在链的任何位点上具有一个或多个碳-碳双键的如上定义的烷基，术语“C 2-6烯基”指具有2至6个碳原子和至少一个(例如1至2个)碳-碳双键的烯基。优选为C 2-4烯基(即具有2至4个碳原子和1至2个碳-碳双键的烯基)。具体实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基、戊烯基、己烯基、丁间二烯基等。
如本文所用，术语“炔基”指在链的任何位点上具有一个或多个碳-碳三键的如上定义的烷基，术语“C 2-6炔基”指具有2至6个碳原子和至少一个(例如1至2个)碳-碳三键的炔基。更优选为C 2-4炔基(即具有2至4个碳原子和1至2个碳-碳三键的炔基)。具体实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-、2-或3-丁炔基等。
如本文所用，术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
如本文所用，术语“卤代”指氟代、氯代、溴代或碘代。
如本文所用，术语“卤代烃基”指一个或多个(如1、2、3、4或5个)氢原子被卤素取代的烃基，其中烃基的定义如上所述。术语“卤代C 1-6烷基”指具有1至6个碳原子的卤代烷基。优选为卤代C 1-4烷基，更优选为卤代C 1-3烷基。具体实例包括但不限于一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、一氯乙基、1,2- 二氯乙基、三氯乙基、一溴乙基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氟乙基、二氟乙基、三氟乙基等。
如本文所用，术语“氘代烃基”指一个或多个(如1、2、3、4或5个)氢原子被氘原子取代的烃基，其中烃基的定义如上所述。术语“氘代C 1-6烷基”指具有1至6个碳原子的氘代烷基。优选为氘代C 1-4烷基，更优选为氘代C 1-3烷基。具体实例包括但不限于一氘代甲基、二氘代甲基、三氘代甲基等。
如本文所用，术语“碳环基”和“碳环”可互换使用，指饱和或部分不饱和的单环或多环的环状烃基。术语“3至14元碳环基”或“C 3-14碳环基”指具有3至14个碳原子的饱和或部分不饱和单环或多环的环状烃基。例如包括单环碳环基(例如3至7元碳环基或“C 3-7碳环基”)或多环碳环基(例如螺碳环基、稠碳环基和桥碳环基等)。
术语“3至7元碳环基”或“C 3-7碳环基”可以互换使用，均指具有3至7个环碳原子的饱和或部分不饱和的单环环状烃基。优选3至6元单环碳环基，优选4至6元单环碳环基，更优选为3、4、5、6单环碳环基。单环碳环基的具体实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
术语“螺碳环基”和“螺碳环基环”指两个或两个以上的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)形成的多环环状烃基。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺碳环基分为单螺碳环基、双螺碳环基和多螺碳环基。术语“6至12元螺碳环基”指具有6至12个环碳原子的多环环状烃基，其中共用螺原子的单环为3至7元单环碳环。优选为7至12元螺碳环基，更优选为7至12元单螺碳环基。更优选为7元(4元单环碳环基环/4元单环碳环基环)、8元(4元单环碳环基环/5元单环碳环基环)、9元(4元单环碳环基环/6元单环碳环基环，5元单环碳环基环/5元单环碳环基环)、10元(5元单环碳环基环/6元单环碳环基环)或11元(6元单环碳环基环/6元单环碳环基环)单螺碳环基。螺碳环基的具体实例包括但不限于： 这些螺碳环基可通过任意一个环原子与分子其余部分连接。
术语“稠碳环基”和“稠碳环基环”指两个或两个以上的单环通过共享毗邻的一对碳原子形成的多环环状烃基。根据形成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠碳环基。术语“5至12元稠碳环基”指具有5至12个环碳原子的多环环状烃基，其中共享毗邻碳原子对的单环为3至7元单环碳环。优选为7至12元稠碳环基。更优选为7至10元双稠碳环基。最优选为8元(5元单环碳环基环与5元单环碳环基环稠合)、9元(5元单环碳环基环与6元单环碳环基环稠合)或10元(6元单环碳环基环与6元单环碳环基环稠合)双稠碳环基。稠碳环基的具体实例包括但不限于：
这些稠碳环基可通过任意一个环原子与分子其余部分连接。
术语“桥碳环基”和“桥碳环基环”指两个或两个以上的单环之间通过共用两个不直接连接的碳原子形成的多环环状烃基。根据形成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥碳环基。术语“5至12元桥碳环基”指具有5至12个环碳原子的多环环状烃基，其中任意两个环共用两个不直接连接的碳原子。优选为7至12元桥碳环基。桥碳环基的具体实例包括但不限于：
这些桥碳环基可通过任意一个环原子与分子其余部分连接。
所述碳环基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环基环上，其中与母体结构连接在一起的环为碳环基环，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。在本发明中，上述各类碳环基可以是任选取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个本申请中所记载的取代基团。
如本文所用，术语“杂环基”和“杂环”可互换使用，指饱和或部分不饱和单环或多环的环状烃基，例如包括单环杂环基、螺杂环基、稠杂环基和桥杂环基。本发明中所述杂环基的环碳原子可任选地被1、2或3个氧代基取代形成环酮、环内酯或环内酰胺结构。术语“3至14元杂环基”指具有3至14个环原子的饱和或部分不饱和单环或多环的环状烃基，其中一个或多个(优选为1、2、3或4个)环原子为选自氮、氧或S(＝O) m’(其中m’是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。其中当环原子为氮原子时，其可以是被取代的或未取代的(即N或NR，R为氢或本文已经定义过的其他取代基)。本发明所述的3至14元杂环基包括单环杂环基(例如3至7元杂环基)、螺杂环基、稠杂环基和桥杂环基。
术语“3至7元杂环基”和“3至7元杂环基环”指具有3至7个环原子，其中1、2或3个环原子为选自氮、氧或S(＝O) m’(其中m’是整数0至2)的杂原子的饱和或部分不饱和单环环状烃基。优选为具有4至7个环原子，其中1或2个环原子为杂原子的4至7元单环杂环基。更优选为具有5或6个环原子，其中1或2个环原子为杂原子的5或6元单环杂环基。当杂原子为氮原子时，氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，R为氢或本文已经定义过的其他取代基)。当杂原子为硫原子时，硫原子可以为任选地被氧化(即S(＝O) m’，m’是整数0至2)。所述单环杂环基的环碳原子可任选地被1、2或3个氧代基取代形成环酮、环内酯或环内酰胺结构。单环的杂环基的具体实例包括但不限于氮丙环、环氧乙烷、氮杂环丁烷、氮杂环丁烷-2-酮、噁唑烷、吡咯烷-2-酮、吡咯烷-2,5-二酮、1,3-二氧戊环、二氢呋喃-2(3H)-酮、二氢呋喃-2,5-二酮、哌啶-2-酮、哌啶-2,6-二酮、四氢-2H-吡喃-2-酮、咪唑烷、四氢呋喃、四氢噻吩、四氢吡咯、1,3-二氧戊环-2-酮、噁唑烷-2-酮、咪唑烷-2-酮、哌啶、哌嗪、哌嗪-2-酮、吗啉、吗啉-3-酮、吗啉-2-酮、硫代吗啉-3-酮1,1-二氧化物、硫代吗啉、硫代吗啉-1,1-二氧化物、四氢吡喃、1,2-二氢氮杂环丁二烯、1,2-二氢氧杂环丁二烯、2,5-二氢-1H-吡咯、2,5-二氢呋喃、2,3-二氢呋喃、2,3-二氢-1H-吡咯、3,4-二氢-2H-吡喃、1,2,3,4-四氢吡啶、3,6-二氢-2H-吡喃、1,2,3,6-四氢吡啶、1,3-噁嗪烷、六氢嘧啶、1,4-二噁烷、四氢嘧啶-2(1H)-酮、1,4-二噁烷-2-酮、5,6-二氢-2H-吡喃-2-酮、5,6-二氢嘧啶-4(3H)-酮、3,4-二氢吡啶-2(1H)-酮、5,6-二氢吡啶-2(1H)-酮、5,6-二氢嘧啶-4(1H)-酮、嘧啶-4(3H)-酮、嘧啶-4(1H)-酮、4,5-二氢-1H-咪唑、2,3-二氢-1H-咪唑、2,3-二氢噁唑、1,3-二氧杂环戊烯、2,3-二氢噻吩、2,5-二氢噻吩、3,4-二氢-2H-1,4-噁嗪、3,4-二氢-2H-1,4-噻嗪1,1-二氧化物、1,2,3,4-四氢吡嗪、1,3-二氢-2H-吡咯-2-酮、1,5-二氢-2H-吡咯-2-酮、1H-吡咯-2,5-二酮、呋喃-2(3H)-酮、呋喃-2(5H)-酮、1,3-二氧杂环戊烯-2-酮、噁唑-2(3H)-酮、1,3-二氢-2H-咪唑-2-酮、呋喃-2,5-二酮、3,6-二氢吡啶-2(1H)-酮、吡啶-2,6-(1H，3H)-二酮、5,6-二氢-2H-吡喃-2-酮、3,6-二氢-2H-吡喃-2-酮、3,4-二氢-2H-1,3-噁嗪、3,6-二氢-2H-1,3-噁嗪、1,2,3,4-四氢嘧啶等。
上述单环杂环基环上相连的2个环原子，包括C-C、N-C均可任选地与本发明所定义的单环碳环基环、单环杂环基环、单芳基环、5或6元单环杂芳基环等碳环基、杂环基、芳基或杂芳基稠合形成稠合多环。与其他环形成稠合环的单环杂环基上相连的2个环原子优选地为C-C。
术语“螺杂环基”和“螺杂环基环”指两个或两个以上的饱和或部分不饱和单环之间共用一个碳原子(称螺原子)形成的多环杂环基，其中一个或多个(如1、2或3个)环原子为选自氮、氧或S(＝O) m’(其中m’是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。当杂原子为氮原子时，氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，R为氢或本文已经定义过的其他取代基)。每个单环中可以含有一个或多个双键，但没 有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基。术语“7至14元螺杂环基”指具有7至14个环原子的螺杂环基，其中1或2个环原子为杂原子。优选为7元(4元单环杂环基环/4元单环杂环基环或4元单环杂环基环/4元单环碳环基或4元单环碳环基环/4元单环杂环基环)、8元(4元单环杂环基环/5元单环杂环基环)、9元(4元单环杂环基环/6元单环杂环基环，5元单环杂环基环/5元单环杂环基环)、10元(5元单环杂环基环/6元单环杂环基环)或11元(6元单环杂环基环/6元单环杂环基环)单螺杂环基。螺杂环基的具体实例包括但不限于：
这些螺杂环基可通过任意一个合适的环原子与分子其余部分连接。
术语“稠杂环基”和“稠杂环基环”指两个或两个以上的饱和或部分不饱和单环通过共享毗邻的一对环原子形成的多环杂环基，其中一个或多个(如1、2或3个)环原子为选自氮、氧或S(＝O) m’(其中m’是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。当杂原子为氮原子时，氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，R为氢或本文已经定义过的其他取代基)。每个单环中可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。共享的毗邻环原子对可以是C-C或N-C。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基。术语“5至14元稠杂环基”指具有5至14个环原子的稠杂环基。优选为具有6至10个环原子，其中1或2个环原子为杂原子的6至10元稠杂环基。更优选为具有8至10个环原子，其中1或2个环原子为杂原子的8至10元稠杂环基。最优选为8元(5元单环杂环基环与5元单环杂环基环稠合)、9元(5元单环杂环基环与6元单环杂环基环稠合)或10元(6元单环杂环基环与6元单环杂环基环稠合)双环稠杂环基。稠杂环基的具体实例包括但不限于：
这些稠杂环基可通过任意一个合适的环原子与分子其余部分连接。
术语“桥杂环基”和“桥杂环基环”指两个或两个以上的饱和或部分不饱和单环通过共用两个不直接连接的环原子形成的多环杂环基，其中一个或多个(如1、2或3个)环原子为选自氮、氧或S(＝O) m’(其中m’是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。根据形成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥碳环基。术语“5至14元桥杂环基”指具有5至14个环原子的饱和或部分不饱和多环杂环基团，其中任意两个环共用两个不直接连接的环原子，每个单环中可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为5至10元桥杂环基。桥杂环基的具体实例包括但不限于：
这些桥杂环基可通过任意一个合适的环原子与分子其余部分连接。
在本发明中，上述各类杂环基可以是任选取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个本申请中所记载的取代基团。
如本文所用，术语“芳基”，“芳基环”和“芳环”可互换使用，指全碳单环、全碳非稠合多环(环与环通过共价键连接，非稠合)或全碳稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，基团中至少一个环为芳香性的，即具有共轭的π电子体系。术语“C 5-12芳基”是指具有5至12个环原子的芳基，优选为C 6-10芳基。本发明中C 5-12芳基包括单环芳基(例如苯基)、非稠合多环芳基(例如联苯基)和芳香稠合多环。
在一些实施方案中，当C 5-12芳基为芳香稠合多环时，所述的芳香稠合多环可以为单芳基环与一个或多个单芳基环稠合形成的多环基团，其非限制性实例包括萘基，蒽基等。
在一些实施方案中，当C 5-12芳基为芳香稠合多环时，所述的芳香稠合多环也可以为单芳基环(如苯基)与一个或多个非芳香环稠合形成的多环基团，其中与母体结构连接的环为芳香环或非芳香环。所述非芳香环包括但不限于3至7元单环杂环基环(优选为5或6元单环杂环基环，所述单环杂环基环的环碳原子可被1至2个氧代基取代，形成环内酰胺或环内酯结构)，3至7元单环碳环基环(优选为5或6元单环碳环基环，所述单环碳环基环的环碳原子可被1或2个氧代基取代，形成环酮结构)。上述单芳基环与一个或多个非芳香环稠合的多环基团可通过氮原子或碳原子与其他基团或母体结构连接，与母体结构连接的环为单芳基环或非芳香环。
如本文所用，术语“杂芳基”，“杂芳基环”和“杂芳环”可互换使用，指环原子被至少一个独立选自氮、氧或硫的杂原子取代的单环或稠合多环(即共享毗邻环原子对，共享的毗邻环原子对可以是C-C或N-C)基团，其中氮和硫原子可任选地被氧化，氮原子可任选地被季铵化。所述杂芳基具有共享的6、10或14个π电子，基团中至少一个环是芳族的。术语“5至12元杂芳基”指具有5至12个环原子，其中1、2、3或4个环原子为选自氮、氧或S(＝O) m’(其中m’是整数0至2)的杂原子的杂芳基。优选为具有5至10个环原子，其中1、2、3或4个环原子为杂原子的5至10元杂芳基。本文的杂芳基可以为单环杂芳基(例如5或6元单环杂芳基)、稠合双环杂芳基(例如8至10元双环杂芳基)或稠合三环杂芳基。
如本文所用，术语“5或6元单环杂芳基”或“5或6元杂芳基”指具有5或6个环原子，其中1、2或3个环原子为选自氮、氧或S(＝O) m’(其中m’是整数0至2)的杂原子的单环杂芳基。单环杂芳基的具体实例包括但不限于噻吩、呋喃、噻唑、异噻唑、咪唑、噁唑、吡咯、吡唑、三唑、1,2,3-三唑、1,2,4-三唑、1,2,5-三唑、1,3,4-三唑、四唑、异噁唑、噁二唑、1,2,3-噁二唑、1,2,4-噁二唑、1,2,5-噁二唑、1,3,4-噁二唑、噻二唑、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪等。
如本文所用，术语“8至10元双环杂芳基”指具有8至10个环原子，其中1、2、3、4或5个环原子为选自氮、氧或S(＝O) m’(其中m’是整数0至2)的杂原子的稠合双环杂芳基。所述稠合双环杂芳基既可以是单芳基环(如苯基)与单环杂芳基环(优选为5或6元单环杂芳基环)稠合形成的双环基团，也可以是单环杂芳基环(优选为5或6元单环杂芳基环)与单环杂芳基环(优选为5或6元单环杂芳基环)稠合形成的双环基团。
上述单环杂芳基环上任意相连的2个环原子，包括C-C、N-C、N-N均可与本发明所定义的单环碳环基环、单环杂环基环、单芳基环、5或6元单环杂芳基环等碳环基、杂环基、芳基或杂芳基稠合形成稠合多环。所述8至10元双环杂芳基的非限制性实例包括：苯并[d]异噁唑、1H-吲哚、异吲哚、1H-苯并[d]咪唑、苯并[d]异噻唑、1H-苯并[d][1,2,3]三唑、苯并[d]噁唑、苯并[d]噻唑、吲唑、苯并呋喃、苯并[b]噻吩、喹啉、异喹啉、喹唑啉、喹喔啉、噌啉、吡啶并[3,2-d]嘧啶、吡啶并[2,3-d]嘧啶、吡啶并 [3,4-d]嘧啶、吡啶并[4,3-d]嘧啶、1,8-萘啶、1,7-萘啶、1,6-萘啶、1,5-萘啶、吡唑并[1,5-a]嘧啶、咪唑并[1,2-b]哒嗪等。
上述单环杂芳基，或苯环与单环杂芳基环稠合形成的双环杂芳基，或单环杂芳基环与单环杂芳基环稠合形成的双环杂芳基可通过氮原子或碳原子与其他基团或母体结构连接。双环杂芳基具体实例包括但不限于： 这些基团可通过任意一个合适的环原子与分子其余部分连接。与母体结构连接的环可以为单环杂芳基环或苯环。
在一些实施方案中，所述的稠合双环杂芳基或稠合三环杂芳基可以是单环杂芳基环(优选为5或6元单环杂芳基环)与一个或多个非芳香环稠合形成的多环基团，其中与母体结构连接的环为单环杂芳基环或非芳香环。所述非芳香环包括但不限于3至6元单环杂环基环(优选为5或6元单环杂环基环，所述单环杂环基环的环碳原子可被1至2个氧代基取代，形成环内酰胺或环内酯结构)，3至6元单环碳环基环(优选为5或6元单环碳环基环，所述单环碳环基环的环碳原子可被1或2个氧代基取代，形成环酮结构)等。上述单环杂芳基环与一个或多个非芳香环稠合形成的多环基团可通过氮原子或碳原子与其他基团或母体结构连接，与母体结构连接的环为单环杂芳基环或非芳香环。例如，术语“8至10元杂芳基杂环基”或“8至10元杂芳基杂环基环”指5或6元单环杂芳基环与一个5或6元单环杂环基环稠合形成的8至10元稠合双环杂芳基，即由5或6元单环杂芳基上相邻两个取代基团与其所连接的环原子形成一个稠合的5或6元单环杂环基环，所述5或6元单环杂环基环如上文中所定义。又例如，如本文所用，术语“8至10元杂芳基碳环基”或“8至10元杂芳基碳环基环”指5或6元单环杂芳基环与一个5或6元单环碳环基环稠合形成的8至10元稠合双环杂芳基，即由5或6元单环杂芳基上相邻两个取代基团与其所连接的环原子形成一个稠合的5或6元单环碳环基环，所述5或6元单环碳环基环如上文中所定义。“8至10元杂芳基杂环基”或“8至10元杂芳基碳环基”非限制性实例包括： 上述基团可以通过其任意合适的环原子与分子其他部分连接。
在本发明中，上述各类杂芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个本申请中所记载的取代基团。
如本文所用，术语“羟基”指-OH。
如本文所用，术语“氨基”指-NH 2。
如本文所用，术语“氰基”指-CN。
如本文所用，术语“硝基”指-NO 2。
如本文所用，术语“苄基”指-CH 2-苯。
如本文所用，术语“氧代基”指＝O。
如本文所用，术语“亚烷基”表示烷基的二价结合形式。例如，“C 0-6亚烷基”表示具有0至6个碳原子的亚烷基。例如，“C 1亚烷基”表示具有1个碳原子的亚烷基，例如-CH 2-。例如，“C 2亚烷基”表示具有2个碳原子的亚烷基，例如-CH 2CH 2-。以此类推。
如本文所用，术语“亚烯基”表示烯基的二价结合形式。例如，“C 2-6亚烯基”表示具有2至6个碳原子的亚烯基。例如，“C 2亚烯基”表示具有2个碳原子的亚烯基，例如-CH＝CH-。以此类推。
如本文所用，术语“取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧代基(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧代基取代不会发生在芳香基上。术语“任选取代”或“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
如本文所用，术语“无”表示其连接的两个基团直接相连，比如 当环A为无时，L 1和L 2直接相连，为“L 1-L 2”。
当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。
当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如 中，L选自-C(O)-NH-，此时-C(O)-NH-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接苯环和环戊烷构成 也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接苯环和环戊烷构成 所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
本发明式(A)所示的化合物可使用本领域已知的合成方法或使用本领域已知的方法与本发明记载的方法组合制备得到。本发明给出的溶剂、温度和其它反应条件均为示例性的，可根据本领域熟知的方法而变化。本发明所记载的实施例化合物可根据其具体结构，使用适当的起始原料按照实施例中记载的方法合成，也可以使用与实施例中记载的类似方法合成得到。用于合成本发明实施例化合物的起始原料可通过已知合成方法或文献记载的类似方法制备得到或从商业来源获得。化合物可根据需要， 进一步通过本领域熟知的方法，例如结晶、色谱法等拆分得到其立体异构体，其拆分条件是本领域技术人员通过常规手段或有限试验而容易获得的。作为进一步说明，本发明式(A)化合物可利用以下的方法合成，其中每个步骤中的溶剂、温度及其它反应条件可与下述实施例中记载的相同或类似，或使用本领域已知的反应条件。
具体实施方式
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式。优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1化合物Z1的合成
步骤一：三口烧瓶中加入[2-(2-羟基乙氧基)乙基]氨基甲酸苄酯(5.0g,20.92mmol)和二氯甲烷(25mL)，搅拌并加入三乙胺(6.34g,62.76mmol)和4-二甲氨基吡啶(510mg,4.18mmol)。混合物降温至0℃并缓慢加入对甲苯磺酰氯(3.97g,20.92mmol)。室温搅拌反应2小时，LC-MS监测原料反应完全。将混合物倒入饱和的碳酸氢钠(100mL)并用二氯甲烷萃取(50mLX3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥并浓缩。粗品用硅胶柱纯化(乙酸乙酯/石油醚：20％～50％)得油状产品2-(2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(3.84g,收率:46.7％)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.79(d,J＝8.4Hz,2H),7.42–7.28(m,7H),5.10(s,3H),4.35–4.07(m,2H),3.68–3.58(m,2H),3.47(t,J＝5.0Hz,2H),3.32(dd,J＝10.4,5.2Hz,2H),2.41(s,3H).
步骤二：2-(2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(1000mg,2.542mmol)和(S)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(394mg,2.12mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(15.0mL)溶液中于室温下加入碘化钾(0.056mL,0.508mmol)和碳酸钾(702.54mg,5.083mmol)固体。反应混合物搅拌下于70℃反应16 小时。反应完毕倒入冰水(100mL)中，并用乙酸乙酯萃取数次(50mLX3)。合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚：10％～100％)得黄色油状产品(S)-(2-(2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)吡咯烷-1-基)乙氧基)乙基)氨基甲酸苄酯(630mg,1.314mmol,收率:51.70％)。LCMS m/z(ESI):[M+H] +＝408.2。
步骤三：室温下(S)-(2-(2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)吡咯烷-1-基)乙氧基)乙基)氨基甲酸苄酯(730mg,1.791mmol)的二氯甲烷(6.0mL)溶液中，加入三氟乙酸(4.0mL,53.85mmol)。反应混合物室温下搅拌3小时，反应完全。反应液浓缩并加入乙酸乙酯(50mLX3)和饱和碳酸氢钠(50mLX3)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用硅胶柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷：0～10％)得黄色油状产品化合物(S)-(2-(2-(3-氨基吡咯烷-1-基)乙氧基)乙基)氨基甲酸苄酯(520mg,1.66mmol,收率:92.55％)。LCMS m/z(ESI):[M+H] +＝308.2。
步骤四：室温下，2,4二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(7.44g,34.29mmol)的1,2-二氯乙烷(30.0mL)溶液中加入三氯化铝(12.9g,85.62mmol)。升温到90℃反应30分钟。6-甲酸甲酯吲哚(5.0g,28.54mmol)的1,2-二氯乙烷(30.0mL)溶液缓慢滴加到反应液中。反应混合物继续于90℃反应18小时。冷却并倒入冰水(200mL)中，并用乙酸乙酯(100mLX3)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用硅胶柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷：0～10％)得黄色固体3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.5g,6.26mmol,收率:21.92％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.50(s,1H),9.08(d,J＝3.4Hz,1H),8.39(d,J＝8.4Hz,1H),8.28(d,J＝2.6Hz,1H),8.20(t,J＝6.4Hz,1H),7.89–7.77(m,1H),3.89(s,3H).
步骤五：室温氮气保护下，化合物3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(450mg,1.27mmol)和化合物(S)-(2-(2-(3-氨基吡咯烷-1-基)乙氧基)乙基)氨基甲酸苄酯(583mg,1.9mmol)的二氧六环(6mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(1.56ml,9.4mmol)。反应混合物升温到120℃反应4小时。冷却并倒入冰水(50mL)中，并用乙酸乙酯萃取(50mL*3)。合并有机相，饱和食盐水洗(100mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用硅胶柱纯化(甲醇/二氯甲烷：0～10％)得黄色油状产品甲基(R)-3-(2-((1-(2-(2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(286mg,0.32mmol,收率:25.25％)。LCMS m/z(ESI):[M+H] +＝627.3。
步骤六：室温下，化合物甲基(R)-3-(2-((1-(2-(2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(660mg,1.05mmol)的甲醇(50mL)溶液中加入10％钯碳(100mg,0.945mmol)。反应混合物在氢气气氛中搅拌反应4小时左右。过滤并浓缩，粗品用硅胶柱纯化(甲醇/二氯甲烷：0～20％)得灰黑色油状产品(R)-3-(2-((1-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(460mg,0.65mmol,收率:62.08％)。LCMS m/z(ESI):[M+H] +＝493.0。
步骤七：室温氮气保护下，化合物(R)-3-(2-((1-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(386mg,0.76mmol)的甲醇/水(10/5mL)溶液中加入氢氧化锂(197.3mg,4.7mmol)。反应混合物升温到70℃反应3小时。冷却并浓缩。粗品反相柱纯化(乙腈/水：0～70％)得白色固体产品(R)-3-(2-((1-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(106mg,0.19mmol,收率:24.03％)。LCMS m/z(ESI):[M+H] +＝479.2。
步骤八：室温氮气保护下，N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(126mg,0.33mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.11ml,0.66mmol)。混合物搅拌下加入化合物(R)-3-(2-((1-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚 -6-羧酸(106mg,0.22mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1ml)溶液。反应物室温下反应30分钟。倒入冰水(50mL)中，并用乙酸乙酯(50mLX3)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗干燥，浓缩。粗品制备纯化(色谱柱:Waters Xbridge C18 10um OBD 19*250mm；流动相:水/乙腈(0.1％碳酸氢铵)；流速:20mL/min；检测波长:254nm/214nm；柱温:室温)得产品(4 3S)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-7-氧杂-3,10-二氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(3,1)-吡咯烷环十一烷-11-酮((4 3S)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-7-oxa-3,10-diaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(3,1)-pyrrolidinacycloundecaphan-11-one)(Z1,2.3mg,收率:2.25％)。LCMS m/z(ESI):[M+H] +＝461.2。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.91(s,1H),8.58(s,1H),8.22(d,J＝8.6Hz,1H),8.06(s,1H),7.87(s,1H),7.61(s,2H),7.39(s,1H),4.08(s,1H),3.57(s,3H),3.25(s,3H),3.08(s,2H),2.71(d,J＝82.0Hz,3H),2.00(d,J＝90.2Hz,3H). 19F NMR(400MHz,DMSO)δ-56.63。
实施例2化合物Z2的合成
步骤一：室温下，4-氨基-1-丁醇(3.0g,33.7mmol)的乙醇(30mL)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(3.67g,16.856mmol)。反应混合物室温搅拌反应4小时。反应液浓缩，粗品用乙酸乙酯(100mL*3)和碳酸氢钠(150mL)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥并浓缩。粗品用硅胶柱纯化(乙酸乙酯/石油醚：0～100％)得无色油状产品(4-羟基丁基)氨基甲酸叔丁酯(5.8g,30.69mmol,收率:91％)。
步骤二：氮气保护下，于-70℃的二甲基亚砜(3.7ml)的二氯甲烷(50ml)的反应溶液中滴加草酰氯(13ml,23mmol,2M二氯甲烷)，滴完继续搅拌5分钟。在-70℃下滴加(4-羟基丁基)氨基甲酸叔丁酯(4.1g,21.6mmol)的二氯甲烷(35.0mL)溶液。反应混合物逐渐升温到0℃并搅拌25分钟。反应完毕倒入冰水中，并用乙酸乙酯(50mLX3)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗(150mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品硅胶柱纯化(乙酸乙酯/石油醚：0～50％)得黄色油状产品(4-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(4.0g,24.59mmol,收率:84.55％)。
步骤三：室温氮气保护下，化合物3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.0g,5.62mmol)和化合物((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基甲酸叔丁酯(1.02g,5.06mmol)的N-甲基吡咯烷酮(30mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(2.78ml,16.78mmol)。反应混合物升温到140℃反应0.5小时。冷却并倒入冰水中，并用乙酸乙酯萃取(50mLX3)。合并有机相，饱和食盐水洗(150mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用硅胶柱纯化(甲醇/二氯甲烷：0～10％)得到灰色固体3-(2-(((1S,3S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基) 环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.0g,3.84mmol,收率:68.47％)。LCMS m/z(ESI):[M+H] +＝519.2。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.11(s,1H),8.64–8.51(m,1H),8.48–8.31(m,1H),8.15(d,J＝5.8Hz,1H),8.01(d,J＝21.1Hz,2H),7.88–7.69(m,1H),7.06–6.83(m,1H),4.44(s,1H),4.07–3.81(m,4H),2.16–1.77(m,4H),1.51(d,J＝33.4Hz,2H),1.41–1.34(m,9H).
步骤四：室温下化合物3-(2-(((1S,3S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(520mg,1.0mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中，加入三氟乙酸(1.0mL,13.56mmol)。反应混合物室温下搅拌1小时，反应完全。反应液浓缩并加入乙酸乙酯(50mLX3)和饱和碳酸氢钠(100mL)萃取。合并有机相，饱和食盐水(100mL)洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到黄色油状粗品甲基3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(520mg,1.66mmol,收率:92.55％)，不经纯化直接用于下一步反应。LCMS m/z(ESI):[M+H] +＝419.1。
步骤五：室温下化合物甲基3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(480mg,1.0mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中，加入化合物(4-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(192.86mg,1.03mmol)。混合物室温下搅拌30分钟后加入氰基硼氢化钠(143.84mg,2.29mmol)。反应混合物室温下搅拌2小时，反应完全。反应液浓缩并加入乙酸乙酯(50mLX 3)和饱和碳酸氢钠(100mL)萃取。合并有机相，饱和食盐水(100mL)洗，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷：0～10％)后得到黄色固体化合物甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(356mg,0.6mmol,收率:52.66％)。LCMS m/z(ESI):[M+H] +＝590.2。
步骤六：室温下化合物甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(356mg,0.76mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中，加入三氟乙酸(0.5mL,6.75mmol)。反应混合物室温下搅拌1小时，反应完全。反应液浓缩并加入乙酸乙酯(50mLX3)和饱和碳酸氢钠(100mL)萃取。合并有机相，饱和食盐水(100mL)洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到黄色油状粗品化合物3-(2-(((1S,3S)-3-((4-氨基丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(387mg,0.47mmol,78.54％)，不经纯化直接用于下一步反应。LCMS m/z(ESI):[M+H] +＝490.2。
步骤七：室温氮气保护下，化合物3-(2-(((1S,3S)-3-((4-氨基丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(384mg,0.78mmol)的四氢呋喃/水(10/5mL)溶液中加入氢氧化锂(98.54mg,2.35mmol)。反应混合物搅拌反应0.5小时。冷却并浓缩。粗品用反相柱纯化(乙腈/水：0～70％)得白色固体产品3-(2-(((1S,3S)-3-((4-氨基丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(208mg,0.44mmol,收率:55.76％)。LCMS m/z(ESI):[M+H] +＝476.2。
步骤八：室温氮气保护下，N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(239mg,0.63mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.139ml,0.84mmol)。混合物搅拌下加入化合物3-(2-(((1S,3S)-3-((4-氨基丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(106mg,0.22mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5ml)溶液。反应物室温下反应30分钟。倒入冰水(50mL)中，并用乙酸乙酯(50mL*3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(100mL)洗，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品制备纯化(色谱柱:Waters Xbridge C18 10um OBD 19*250mm；流动相:水/乙腈(0.1％碳酸氢铵)；流速:20mL/min；检测波长:254nm/214nm；柱温:25℃)得产品(4 1S,4 3S)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮((4 1S,4 3S)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one)(Z2,1.02mg,收率：0.35％)。LCMS m/z(ESI):[M+H] +＝458.2。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.39(s,1H),7.79(s,1H),7.47(s,1H),7.34–7.24(m,1H),7.23–7.07(m,1H),2.95(s,2H),2.27(d,J＝23.4Hz,2H),2.08(d,J＝8.5Hz, 2H),1.41(m,4H),1.19(m,6H)。 19F NMR(377MHz,CD 3OD)δ-59.28(s).
实施例3化合物Z3的合成
步骤一：氮气保护下，于-30℃向3-N-叔丁氧羰基-6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.0]己烷(5g,26.99mmol)和溴化亚铜(I)二甲硫醚络合物(60.739mL,121.48mmol)的四氢呋喃(150mL)溶液中缓慢滴加烯丙基氯化镁(60.739mL,121.48mmol,2M/L),该反应液在氮气保护下于-10℃搅拌反应1小时。反应液用10％氯化铵水溶液(100mL)和乙酸乙酯(100mL)淬灭，然后于室温下搅拌1小时。反应液用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干。得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1～55/45)层析纯化得到黄色油状物(3R,4S)-3-羟基-4-烯丙基吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯(1.55g,收率:25.26％)。LCMS m/z(ESI):[M+H-56] +＝172。
步骤二：氮气保护下，于0℃向(3R,4S)-3-羟基-4-烯丙基吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯(1.5g,6.60mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(8mL)溶液中加入氢化钠(0.32g,7.92mmol，60％纯度)，该反应液在氮气保护下于室温搅拌反应0.5小时。溴化苄(0.947mL,7.92mmol)加入其中，得到的反应液于室温下搅拌过夜。将反应液倒入水(50mL)中，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干燥。得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1～9/1)层析纯化得到黄色油状物(3R,4S)-3-苄氧基-4-烯丙基吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯(0.9g,收率:42.96％)。LCMS m/z(ESI):[M+H-56] +＝262,[M+H-100] +＝218。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.38–7.25(m,5H),5.82–5.66(m,1H),5.11–4.97(m,2H),4.60–4.44(m,2H),3.83–3.72(m,1H),3.64–3.49(m,2H),3.42–3.32(m,1H),3.20–3.03(m,1H),2.37–2.25(m,1H),2.24–2.14(m,1H),2.09–1.93(m,1H),1.45(s,9H).
步骤三：向(3R,4S)-3-苄氧基-4-烯丙基吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯(800mg,2.52mmol)和高碘酸钠(1.62g,7.56mmol)的乙腈(15mL)和水(6mL)的混合溶液中加入锇酸钾(92.86mg,0.25mmol)，该反应液室温搅拌反应2小时。向反应液中加水(10mL)并用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干燥。得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1～55/45)层析纯化得到黄色油状物(3R,4S)-3-苄氧基-4-(2-乙醛基)吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯(500mg，收率:62.11％).LCMS:MS m/z(ESI):[M+H-56] +＝264,[M+H-100] +＝220。
步骤四：向(3R,4S)-3-苄氧基-4-(2-乙醛基)吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯(480mg,1.50mmol)和3-(2-(((1S,3S)-3-氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(630mg,1.50mmol)的1,2-二氯乙烷(15mL)溶液中加入少量的醋酸(0.086mL,1.50mmol)，该反应液室温搅拌反应0.5小时。醋酸硼氢化 钠(951mg,4.51mmol)加入其中，得到的反应液于室温下搅拌过夜。向反应液中加水(20mL)中，并用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1～95/5)层析纯化得到黄色油状物3-(2-(((1S,3S)-3-((2-((3S,4R)-4-(苄氧基)-1-(叔丁氧羰基)吡咯基-3-基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(460mg,收率:42.37％).LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝723。
步骤五：向3-(2-(((1S,3S)-3-((2-((3S,4R)-4-(苄氧基)-1-(叔丁基氧羰基)吡咯基-3-基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(480mg,0.66mmol)的四氢呋喃(2mL)和甲醇(2mL)的混合溶液中加入氢氧化锂(139mg,3.32mmol)的水(2mL)溶液，该反应液室温搅拌反应过夜。反应液用0.5M的盐酸水溶液酸化至pH＝3-4，并用乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1～85/15)层析纯化得到黄色油状物3-(2-(((1S,3S)-3-((2-((3S,4R)-4-(苄氧基)-1-(叔丁氧羰基)吡咯基-3-基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(460mg,收率:98.2％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝709。
步骤六：在0℃下向3-(2-(((1S,3S)-3-((2-((3S,4R)-4-(苄氧基)-1-(叔丁基氧羰基)吡咯基-3-基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(390mg,0.55mmol)中加入盐酸/二氧六环(10mL,4N)溶液，该反应液室温搅拌反应1小时。反应液浓缩至干燥，得到黄色固体3-(2-(((1S,3S)-3-((2-((3S,4R)-4-(苄氧基)吡咯基-3-基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(320mg,收率:95.55％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝609。
步骤七：向3-(2-(((1S,3S)-3-((2-((3S,4R)-4-(苄氧基)吡咯基-3-基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(320mg,0.53mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(180mL)溶液中依次加入五氟苯酚(194mg,1.05mmol)和N,N'-二环己基碳二亚胺(217mg,1.05mmol)，该反应液室温搅拌反应过夜。反应液浓缩至干，得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1～90/10)层析纯化得到棕色固体(4 1S,4 3S,8 3S,8 4R)-8 4-(苄氧基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5-二氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-8(3,1)-吡咯烷-4(1,3)-环戊烷环壬烷-9-酮(100mg,收率:32.26％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝591。
步骤八：在0℃下向(4 1S,4 3S,8 3S,8 4R)-8 4-(苄氧基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5-二氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-8(3,1)-吡咯烷-4(1,3)-环戊烷环壬烷-9-酮(30mg,0.05mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中缓慢滴加三氯化硼(0.25mL,1M)溶液，该反应液在氮气保护下于0℃搅拌反应1.5小时。反应液用甲醇(0.1mL)淬灭，并且浓缩至干燥，得到的粗品经制备HPLC(色谱柱:Xbridge Prep C18 10um OBO TM 19*250nm；流动相:乙腈/水(0.05％氨水)；流速:20ml/min)纯化得到(4 1S,4 3S,8 3S,8 4R)-8 4-(羟基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5-二氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-8(3,1)-吡咯烷-4(1,3)-环戊烷环壬烷-9-酮((4 1S,4 3S,8 3S,8 4R)-8 4-hydroxy-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5-diaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-8(3,1)-pyrrolidina-4(1,3)-cyclopentanacyclononaphan-9-one)(Z3,2.6mg,收率:8.0％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝501。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.79–8.19(m,2H),7.86(d,J＝76.7Hz,1H),7.51–7.45(m,1H),7.25–7.15(m,1H),4.64–4.48(m,1H),4.29–4.18(m,1H),4.15–3.87(m,2H),3.58–3.37(m,1H),3.26–3.18(m,1H),2.86–2.67(m,1H),2.59–2.47(m,1H),2.29–2.19(m,2H),2.13–1.96(m,2H),1.88–1.74(m,1H),1.70–1.58(m,2H),1.56–1.44(m,1H),1.36–1.09(m,2H)。
实施例4化合物Z4的合成
步骤一：向叔丁基((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基甲酸酯(1g,5.0mmol)的四氢呋喃(25mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(2.61g,20.0mmol)和2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.10g,5.0mmol)，该反应液在25℃搅拌反应14小时。LCMS检测反应完全后，将反应液直接浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1～15/1)层析纯化得到N-[(1S,3S)-3-{[4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]氨基甲酸叔丁酯(0.76g,收率:40％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝381.2,t R＝1.56min。
步骤二：1H-吲哚-6-羧酸甲酯(3.00g,17.12mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液，0℃时，加入1-碘-吡咯烷-2,5-二酮(4.62g,20.55mmol)。将反应在室温下搅拌3小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)显示反应完成。用乙酸乙酯(200mL×3)和水(60ml)萃取。然后加入饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)得到化合物3-碘-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(3.5g,收率:67.89％)。
步骤三：向3-碘-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(3.50g,11.62mmol)的二氯甲烷(35mL)溶液中加入三乙胺(3.23mL,23.25mmol)、4-二甲氨基吡啶(0.36g,2.91mmol)，0℃时，加入二碳酸二叔丁酯(2.99mL,13.95mmol)。将反应在室温下搅拌18小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)显示反应完成。反应液用二氯甲烷(200mL×3)和水(60ml)萃取，加入饱和氯化钠溶液洗涤，加入无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)得到化合物1-(叔丁基)6-甲基3-碘-1H-吲哚-1,6-二甲酸酯(3.8g,收率:81.48％)。
步骤四：向1-(叔丁基)6-甲基3-碘-1H-吲哚-1,6-二甲酸酯(3.60g,8.97mmol)在二氧六环(36mL)中 的溶液中加入醋酸钾(1.76g,17.95mmol)、二氯化钯(0.66g,0.91mmol)和4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷(1.95mL,13.46mmol)，在70℃下搅拌3小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)显示反应完成。收集混合物，真空浓缩。粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20:1)得到化合物1-(叔丁基)6-甲基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-1H-吲哚-1,6-二甲酸酯(2.5g,产率:69.43％)。
步骤五：向1-(叔丁基)6-甲基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-1H-吲哚-1,6-二甲酸酯(2.3g,5.73mmol)在二氧六环和水溶液(23mL)中的溶液中加入碳酸钾(1.58g,11.46mmol)、二氯化钯(0.28g,0.38mmol)和N-[(1S,3S)-3-{[4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]氨基甲酸叔丁酯(1.46g,3.82mmol)，反应100℃下搅拌3小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)显示反应完成。收集混合物，真空浓缩。粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯洗脱＝3:1)得到化合物1-(叔丁基)6-甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1,6-二甲酸酯(2.2g,收率:90％)。
步骤六：向含有1-(叔丁基)6-甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1,6-二甲酸酯(2.20g,3.55mmol)的烧瓶中加入二氧六环(15mL,3.55mmol)，然后加入氯化氢(15mL,3.55mmol)。混合物在25℃下搅拌2小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示反应完成。浓缩，将所得固体用甲基叔丁基醚溶解，过滤，得淡黄色固体化合物3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.6g,粗品,盐酸盐)。ES-API:[M+H] +＝419.2。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.17(s,1H),8.60(d,J＝15.4Hz,1H),8.38(d,J＝30.4Hz,1H),8.05(s,2H),7.78(d,J＝24.6Hz,1H),4.53(d,J＝6.1Hz,1H),3.88(s,3H),3.56(s,2H),2.16(s,2H),2.00(d,J＝9.2Hz,3H),1.63(s,2H),1.23(s,2H).
步骤七：向3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.00g,2.38mmol)的1,2-二氯乙烷(10mL)溶液中加入硼氢化钠(0.39mL,11.92mmol)、叔丁基4-(2-氧乙基)哌啶-1-羧酸酯(0.54g,2.38mmol)，将反应在室温下搅拌过夜。反应液用二氯甲烷(60mL×3)和碳酸氢钠饱和溶液萃取，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品用薄层层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝30:1)得到甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(300mg,收率:19.46％)。ES-API:[M+H] +＝630.31。
步骤八：向甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(150mg,0.24mmol)在四氢呋喃/甲醇/水(1:1:1)中的溶液中加入氢氧化锂(0.02mL,0.71mmol)，将反应在室温下搅拌过夜。用稀盐酸将反应物的pH值调至酸性。反应用乙酸乙酯(6mL×3)和水(2ml)稀释，然后加入饱和氯化钠溶液进行分离。收集有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(150mg，收率:98.79％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.26(d,J＝14.1Hz,1H),9.16(s,3H),8.85(s,1H),8.58(s,1H),8.32(s,1H),8.16–7.98(m,3H),7.76(d,J＝17.5Hz,1H),4.52(s,1H),3.21(d,J＝12.1Hz,4H),2.84(d,J＝29.6Hz,5H),2.19(d,J＝6.3Hz,3H),1.78(s,3H),1.60(s,4H),1.28(d,J＝40.2Hz,9H).
步骤九：向含有3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(330mg,0.52mmol)的烧瓶中加入二氧六环(3mL,0.52mmol)，然后加入氯化氢(3mL)。混合物在25℃下搅拌2小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝7:1)显示反应完成。真空浓缩有机层。将所得固体用甲基叔丁基醚溶解，过滤，得淡黄色固体化合物3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(350mg,收率:126.00％)。ES-API: [M+H] +＝517.4。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.54(s,1H),9.39(d,J＝41.9Hz,3H),9.13(s,1H),8.59(d,J＝12.7Hz,1H),8.37(dd,J＝40.4,8.0Hz,1H),8.07(d,J＝60.1Hz,3H),7.76(dd,J＝33.4,8.0Hz,1H),4.51(s,1H),3.18(d,J＝11.9Hz,3H),2.91–2.71(m,4H),2.20(dd,J＝13.6,6.8Hz,3H),1.79(d,J＝8.9Hz,3H),1.66(d,J＝19.7Hz,4H),1.37(d,J＝9.5Hz,2H).
步骤十：向3-(2-((1S,3S)-3-((2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)环戊基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(90mg,0.17mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(72mg,0.19mmol)和N,N-二异丙基乙胺(88mg,0.68mmol)，该反应液室温搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩至干，得到的粗品经反相制备(色谱柱:Ultimate XBC18,50*250mm,10um(PARP-06)；流速:70mL/min；流动相:乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；柱温:25℃)得到(4 1S,4 3S)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5-二氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-8(4,1)-哌啶-4(1,3)-环戊烷环壬烷-9-酮((4 1S,4 3S)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5-diaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-8(4,1)-piperidina-4(1,3)-cyclopentanacyclononaphan-9-one)(Z4)的三氟乙酸盐(1.7mg,收率:1.3％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝499.2,t R＝1.22min。 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.64(d,J＝8.0Hz,1H),8.56(s,1H),8.12(s,1H),7.52(s,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,1H),4.53–4.50(m,1H),4.48–4.37(m,1H),3.72(s,1H),3.26–3.19(m,1H),3.09–2.97(m,1H),2.80–2.55(m,3H),2.42–2,40(m,2H),2.11–1.97(m,2H),1.92–1.60(m,8H),1.36–1.29(m,1H).
实施例5化合物Z5的合成
步骤一：在室温下，向3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(270mg,0.55mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(5mL)中依次加入叔丁基(4-溴丁基)氨基甲酸酯(138mg,0.55mmol)和N,N-二异丙基乙胺(284mg,2.20mmol)，反应液在氮气保护下于80℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入10％氯化铵水溶液(100mL)并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝2/1～1/1)层析纯化得到白色固体甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(170mg,收率:46％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝667.3,t R＝1.28min.
步骤二：向甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(170mg,0.26mmol)的四氢呋喃(2mL)和甲醇(2mL)的混合溶液中加入氢氧化锂(66.0mg,1.56mmol)的水(2mL)溶液，该反应液在40℃搅拌反应过夜。 LCMS检测反应完全后，反应液用1.0M的盐酸水溶液酸化至pH＝3-4，用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到白色固体3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(160mg,收率:94％)，不经纯化直接用于下一步反应。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝653.2,t R＝1.12min.
步骤三：在25℃下向3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(160mg,0.25mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入盐酸/甲醇(5mL,4N)溶液，该反应液在25℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩得到白色固体3-(2-(((1S,3S)-3-((4-氨基丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(120mg,收率:87％)。LCMS:MS m/z(ESI):553.2[M+H] +,t R＝1.00min.
步骤四：向3-(2-(((1S,3S)-3-((4-氨基丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(120mg,0.22mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(91.2mg,0.24mmol)和N,N-二异丙基乙胺(114mg,0.88mmol)，该反应液在80℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱:Ultimate XBC18,50*250mm,10um(PARP-06)；流动相:乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速:70mL/min；柱温:25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one)(Z5)的三氟乙酸盐(17.2mg,收率:17％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝535.2,t R＝1.55min. 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.00(s,1H),8.61(s,1H),8.53–8.31(m,3H),8.18(d,J＝4.0Hz,1H),8.13–8.05(m,1H),8.00(s,1H),7.29-7.26(m,1H),4.34–4.20(m,1H),2.85–2.75(m,1H),2.73–2.57(m,4H),2.20-2.12(m,2H),1.95–1.85(m,6H),1.81–1.52(m,6H),1.50–1.40(m,1H).
实施例6化合物Z6的合成
步骤一：在-78℃下向2-溴-3-硝基苯甲酸(10.0g,40.6mmol)的四氢呋喃(150mL)溶液中缓慢滴加乙烯基溴化镁的四氢呋喃溶液(1M,163mL,163mmol)，滴加完再在氮气保护下于-78℃继续搅拌反应3小时，然后自然升至室温搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，向反应液中缓慢加入饱和氯化铵水溶液(300mL)淬灭，并用1M的盐酸调节pH 4-5，然后用二氯甲烷(300mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝30/1)层析纯化得到黄色固体7-溴-1H-吲哚-6-羧酸(9.4g,收率:96.5％)。LCMS:m/z(ESI):239.8[M+H] +,t R＝1.21min.
步骤二：在25℃下向7-溴-1H-吲哚-6-羧酸(9.40g,39.2mmol)的N,N二甲基甲酰胺(80mL)溶液中加入碘甲烷(6.66g,46.9mmol)和碳酸钾(10.8g,78.3mmol)。该反应液在氮气保护下在25℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(200mL)，然后用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)层析纯化得到黄色固体7-溴-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(3.90g,收率:37％)。LCMS:m/z(ESI):254.0[M+H] +,t R＝1.46min. 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.63(s,1H),7.62(dd,J＝13.6,5.6Hz,2H),7.51(d,J＝8.0Hz,1H),6.66(d,J＝3.2Hz,1H),3.87(s,3H).
步骤三：在25℃下，向闷罐中依次加入三(二亚苄基丙酮)二钯(242mg,0.393mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(455mg,0.787mmol)和1,4-二氧六环(20mL)溶液，在氮气保护下搅拌30分钟，然后再依次加入7-溴-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.0g,7.87mmol)、磷酸钾(1.67g,7.87mmol)和二甲基氧化膦(0.61g,7.87mmol)。该反应液在110℃搅拌14小时。LCMS检测反应完全后，反应液直接浓缩得到，得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝1/1～纯乙酸乙酯)层析纯化得到黄色固体7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.00g,收率:51％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝252.0,t R＝1.30 min。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.12(s,1H),7.86(d,J＝8.4Hz,1H),7.69(dd,J＝8.4,3.6Hz,1H),7.65(t,J＝2.8Hz,1H),6.59(s,1H),3.88(s,3H),1.95(s,3H),1.92(s,3H).
步骤四：在氮气气氛中，在干燥的50mL三口瓶中，加入三氯化铝(1.06g,7.96mmol)，然后用注射器加入7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.00g,3.98mmol)的1.2-二氯乙烷(10mL)溶液，在80℃搅拌30分钟，然后加入2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(0.95g,4.38mmol)的1.2-二氯乙烷(1mL)溶液，该反应液在80℃下反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(20mL)，然后用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到的粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3/5)纯化得到白色固体3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(800mg,收率:47％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝432.0,t R＝1.58min。 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.15(s,1H),8.83(s,1H),8.77(dd,J＝8.8,1.6Hz,1H),8.20(d,J＝2.0Hz,1H),8.07(dd,J＝8.8,4.0Hz,1H),3.96(s,3H),2.10(d,J＝14.4Hz,6H).
步骤五：在10mL微波管中，依次加入3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(770mg,1.78mmol)，N-甲基吡咯烷酮(4mL)、N,N-二异丙基乙胺(0.59mL,3.57mmol)和叔丁基((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基甲酸酯(392mg,1.96mmol)，该反应液80℃搅拌溶清，然后130℃微波反应2小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(20mL)，然后用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到的粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得到类白色固体甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(500mg,收率:58％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝595.8,t R＝1.58min。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.67(s,1H),8.59(s,2H),8.16(s,1H),8.01–7.68(m,2H),6.78(s,1H),4.46(dd,J＝13.8,6.8Hz,1H),3.94(s,3H),2.23–2.10(m,2H),2.00(d,J＝14.2Hz,6H),1.96–1.87(m,3H),1.66–1.47(m,2H),1.40(s,9H).
步骤六：室温下，将甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(400mg,0.67mmol)溶于氯化氢/二氧六环(5mL,4M)和甲醇(2mL)的混合溶液，20℃反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(40mL)，然后用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到的粗品经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30:1)纯化得到白色固体3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(160mg,收率:48％)。LCMS:m/z(ESI):496.2[M+H] +,t R＝1.40min。
步骤七：将3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(500mg,1.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，叔丁基(5-溴戊基)氨基甲酸酯(269mg,1.0mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.67mL,4.0mmol)依次加入，反应在80℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，旋干，柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/7)纯化得到类白色固体甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((5-((叔丁氧羰基)氨基)戊基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(420mg,收率:61％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝681.2,t R＝1.54min。
步骤八：将甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((5-((叔丁氧羰基)氨基)戊基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(360mg,0.53mmol)溶于水(1mL)、甲醇(1mL)和四氢呋喃(1mL)的混合体系中，然后加入一水合氢氧化锂(111mg,2.65mmol)，40℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，加入水(20mL)，用盐酸(1M)调至pH＝4-5，用二氯甲烷(20mL×9)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品3-(2-(((1S,3S)-3-((5-((叔丁氧羰基) 氨基)戊基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(320mg,收率:91％)呈白色固体，不经纯化直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝667.2,t R＝1.50min。
步骤九：将3-(2-(((1S,3S)-3-((5-((叔丁氧羰基)氨基)戊基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(320mg,0.47mmol)溶于氯化氢/甲醇(5mL,4M)中，体系在25℃搅拌4小时。LCMS检测反应完全后，溶剂旋干得到白色固体3-(2-(((1S,3S)-3-((5-氨基戊基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(260mg,收率:98％)，不经纯化直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝567.3,t R＝0.92min。
步骤十：向3-(2-(((1S，3S)-3-((5-氨基戊基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(200mg,0.35mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(134mg,0.35mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.23mL,1.41mmol)，该反应液在60℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱:Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相:乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速:70mL/min；柱温:25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,11-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十二烷-12-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,11-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one)(Z6)的三氟乙酸盐(34.3mg,收率:15％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝549.2,t R＝0.70min。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.84–11.94(m,1H),8.70–8.30(m,3H),8.30–8.07(m,3H),7.87–8.10(m,1H),7.62–7.22(m,1H),4.39–4.18(m,1H),3.50–3.05(m,1H),3.01–2.80(m,3H),2.70–2.52(m,1H),2.45–2.33(s,1H),2.22–2.01(m,2H),2.00–1.37(m,15H).
实施例7化合物Z7的合成
步骤一：在室温下，向3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(500mg,1.00mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(5mL)中依次加入(2-(2-溴乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(270mg,1.00mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.67mL,4.00mmol)，该反应液在氮气保护下于70℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入10％氯化铵水溶液(100mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝50/1～10/1)层析纯化得到黄色固体甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙氧基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(170mg,收率:46％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝683.4,t R ＝1.18min。
步骤二：向甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙氧基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(350mg,0.51mmol)的四氢呋喃(2mL)和甲醇(2mL)的混合溶液中加入氢氧化锂(86.0mg,2.05mmol)的水(2mL)溶液，该反应液在40℃搅拌下反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液用1.0M的盐酸水溶液酸化至pH＝3-4，用二氯甲烷/甲醇(10:1,60mL×6)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到黄色固体3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙氧基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(314mg，收率:92％)。粗产品无需纯化直接用于下一步反应。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝669.2,t R＝1.10min。
步骤三：在25℃下向3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙氧基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(300mg,0.45mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入盐酸/甲醇(5mL,4M)溶液，该反应液在40℃下搅拌4小时。LCMS检测反应完全后，反应液直接浓缩得到黄色固体3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(2-氨基乙氧基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(244mg,收率:96％)。粗品无需纯化直接用于下一步反应。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝569.2,t R＝0.95min。
步骤四：向3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(2-氨基乙氧基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(220mg,0.39mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(8mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(149mg,0.39mmol)和N,N-二异丙基乙胺(182mg,1.41mmol)，该反应液在60℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；色谱条件：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十二烷-12-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-8-oxa-3,5,11-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one)(Z7)的三氟乙酸盐(33.5mg,收率:16％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝551.2,t R＝0.69min。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.06–12.05(m,1H),8.69(d,J＝8.0Hz,2H),8.64–8.48(m,2H),8.13(d,J＝4.4Hz,1H),8.07(d,J＝2.4Hz,1H),7.86–7.75(m,1H),7.42(dd,J＝8.0,3.2Hz,1H),4.32–4.18(m,1H),3.82–3.72(m,5H),3.46(t,J＝7.2Hz,1H),3.31–3.17(m,2H),3.16–3.08(m,1H),2.72(dd,J＝14.4,7.2Hz,1H),2.30–2.20(m,1H),2.19–2.11(m,1H),2.02–1.86(m,6H),1.82–1.62(m,3H).
实施例8化合物Z8的合成
步骤一：在10mL微波管中，依次加入3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(810mg,1.88mmol)、N-甲基吡咯烷酮(5mL)、N,N-二异丙基乙胺(0.93mL,5.63mmol)和叔丁基((1r,3r)-3-氨基环丁基)氨基甲酸酯(384mg,2.06mmol)，反应液80℃搅拌溶清，然后在130℃微波反应2小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(20mL)，然后用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到的粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到类白色固体甲基3-(2-(((1r,3r)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(970mg,收率:89％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝582.2,t R＝1.89min。
步骤二：室温下，将甲基3-(2-(((1r,3r)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环丁基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(500mg,0.86mmol)溶于氯化氢/二氧六环(5mL,4M)和甲醇(2mL)的混合溶液，25℃反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(40mL)，然后用乙酸乙酯(30mL×10)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝10/1)层析纯化得到白色固体3-(2-(((1r,3r)-3-氨基环丁基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(220mg,收率:53％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝482.2,t R＝1.35min。
步骤三：在室温下向3-(2-(((1r,3r)-3-氨基环丁基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(300mg,0.62mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(5mL)中依次加入叔丁基(4-溴丁基)氨基甲酸酯(157mg,0.62mmol)和N,N-二异丙基乙胺(322mg,2.49mmol)，该反应液在氮气保护下于80℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入饱和氯化铵溶液(100mL)，并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝50/1到10/1)层析纯化得到黄色固体物甲基3-(2-(((1r,3r)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环丁基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(225mg,收率:55％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝653.3,t R＝1.19min。
步骤四：向甲基3-(2-(((1r,3r)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环丁基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(225mg,0.35mmol)的四氢呋喃(2mL)和甲醇(2mL)的混合溶液中加入一水合氢氧化锂(72.0mg,1.72mmol)的水(2mL)溶液，该反应液在40℃搅拌反 应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液用1.0M的盐酸水溶液酸化至pH＝3-4，并用二氯甲烷/甲醇(10:1,60mL×6)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到黄色固体3-(2-(((1r,3r)-3-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁基)氨基)环丁基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(300mg,收率95％)。粗产品无需纯化直接用于下一步反应。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝639.2,t R＝1.40min。
步骤五：向3-(2-(((1r,3r)-3-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁基)氨基)环丁基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(300mg,0.33mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入盐酸/甲醇(5mL,4M)溶液，该反应液在40℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩至干得到黄色固体3-(2-(((1r,3r)-3-((4-氨基丁基)氨基)环丁基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(270mg,收率:94％)。粗品无需纯化直接用于下一步反应。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝639.2,t R＝1.31min。
步骤六：向3-(2-(((1r,3r)-3-((4-氨基丁基)氨基)环丁基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(270mg,0.31mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(118mg,0.31mmol)和N,N-二异丙基乙胺(200mg,1.55mmol)，该反应液在70℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩至干燥，得到的粗品经反相制备(70mL/min,25℃,Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),乙腈-水(0.1％三氟醋酸))得到(4 1r,4 3r)-1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环丁烷环十一烷-11-酮((4 1r,4 3r)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclobutanacycloundecaphan-11-one)(Z8)的三氟乙酸盐(3.9mg,收率:2.4％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝551.3,t R＝1.05min。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.94(s,1H),8.79(d,J＝8.0Hz,1H),8.56(s,1H),8.29(d,J＝4.4Hz,1H),8.07–7.92(m,2H),7.42–7.32(m,1H),4.82–4.68(m,1H),4.05(s,1H),2.86–2.78(m,2H),2.36–2.28(m,2H),2.26–2.18(m,2H),2.08–1.94(m,3H),1.91(s,3H),1.87(s,3H),1.76–1.68(m,2H),1.56–1.48(m,2H).
实施例9化合物Z9的合成
步骤一：在10mL微波管中，依次加入3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(450mg,1.04mmol)，N-甲基吡咯烷酮(5mL)、N,N-二异丙基乙胺(0.52mL,3.13mmol)和叔丁基((1S,3S)-3-氨基环己基)氨基甲酸酯(235mg,1.09mmol)，该反应液80℃搅拌溶清，然后在130℃微波反应2小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(20mL)，然后用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到的粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到类白色固体甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(470mg,收率:74％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝610.2,t R＝1.98min。
步骤二：室温下，将甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(470mg,0.77mmol)溶于氯化氢/二氧六环(5mL,4M)和甲醇(2mL)的混合溶液，25℃反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(40mL)，然后用乙酸乙酯(30mL×10)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝10/1)层析纯化得到白色固体3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(310mg,收率:79％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝510.5,t R＝1.42min。
步骤三：将3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(310mg,0.61mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，叔丁基(4-溴丁基)氨基甲酸酯(153mg,0.61mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.67mL,4.0mmol)依次加入，反应在80℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，旋干，柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/7)纯化得到类黄色固体甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(200mg,收率:48％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝681.2,t R＝1.60min。
步骤四：将甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(200mg,0.29mmol)溶于水(1mL)、甲醇(1mL)和四氢 呋喃(1mL)的混合体系中，然后加入一水合氢氧化锂(61.6mg,1.47mmol)，反应在40℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，旋干溶剂得到粗品3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(180mg,收率:92％)，呈黄色固体，不经纯化直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝667.2,t R＝1.43min。
步骤五：将3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(180mg,0.27mmol)溶于氯化氢/甲醇(5mL,4M)中，体系在15℃搅拌4小时。LCMS检测反应完全后，直接将溶剂旋干得到黄色固体3-(2-(((1S,3S)-3-((4-氨基丁基)氨基)环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(120mg,收率:78％)，不经纯化直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝567.2,t R＝1.43min。
步骤六：向3-(2-(((1S，3S)-3-((4-氨基丁基)氨基)环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(120mg,0.21mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(80.4mg,0.21mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.14mL,0.84mmol)，该反应液在60℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate SFC18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相:乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速:70mL/min；柱温:25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环己烷环十一烷-11-酮((4 1S,4 3S)-1 7-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclohexanacycloundecaphan-11-one)(Z9)的三氟乙酸盐(8.2mg,收率:5.8％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝549.2,t R＝0.72min。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.87(d,1H),8.62(s,1H),8.27–8.09(m,2H),7.97(m,2H),7.88–7.76(m,2H),7.29(m,1H),4.05(m,1H),2.83(m,3H),2.71–2.58(m,2H),2.36(m,1H),1.88(m,8H),1.58(m,9H).
实施例10化合物Z10的合成
步骤一：在室温下向3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(300mg,0.61mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(3mL)中依次加入3-(叔丁氧羰基氨基)丙基溴(144mg,0.61mmol)和N,N-二异丙基乙胺(313mg,2.42mmol)，该反应液在氮气保护下于80℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入10％氯化铵水溶液(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝40/1～15/1)层析纯化得到黄色固体3-(2-(((1S,3S)-3-(3-(叔丁氧羰基氨基丙基)氨基)环戊基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(100mg,收率:25％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝653.6,t R＝1.53min.
步骤二：向3-(2-(((1S,3S)-3-(3-(叔丁氧羰基氨基丙基)氨基)环戊基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(100mg,0.16mmol)的四氢呋喃(1.5mL)和甲醇(1.5mL)的混合溶液中加入一水合氢氧化锂(33mg,0.78mmol)的水(1.5mL)溶液，该反应液在40℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液用1.0M的盐酸水溶液酸化至pH＝3-4，并用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到白色固体3-(2-(((1S,3S)-3-((3-(叔丁氧羰基)氨基)丙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(90mg,收率92％)，不经纯化直接用下一步反应。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝639.2,t R＝1.10min。
步骤三：在25℃下向3-(2-(((1S,3S)-3-((3-(叔丁氧羰基)氨基)丙基)氨基)环戊基)氨基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(90mg,0.14mmol)的甲醇(3mL)溶液中加入盐酸/甲醇(6mL,4N)溶液，该反应液在40℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩得到白色固体3-(2-(((1S,3S)-3-((3-氨丙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(70mg,收率:93％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝539.6,t R＝1.33min。
步骤四：向3-(2-(((1S,3S)-3-((3-氨丙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(65mg,0.12mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(8mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(80mg,0.21mmol)和N,N-二异丙基乙胺(300mg,2.32mmol)，该反应液在80℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XBC18,50*250mm,10um(PARP-06)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；室温：25℃)纯化得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,9-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环癸烷-10-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,9-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclodecaphan-10-one)(Z10)的三氟乙酸盐(1.6mg,收率:3％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝521.2,t R＝1.26min。
实施例11化合物Z11的合成
步骤一：在-78℃下，向2-氯-3-硝基苯甲酸(10.0g,49.6mmol)的四氢呋喃(120mL)溶液中缓慢滴加乙烯基溴化镁的四氢呋喃溶液(198mL,198mmol,1M)，滴加完再在氮气保护下于-78℃继续搅拌反应3小时。LCMS检测反应完全后，向反应液中缓慢加入饱和氯化铵水溶液(300mL)淬灭，并用1M的盐酸调节pH至4-5，然后用二氯甲烷(300mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品棕黄色固体7-氯-1H-吲哚-6-羧酸(8.03g,收率:83％)，不经纯化直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝196.0,t R＝1.53min。
步骤二：在25℃下向7-氯-1H-吲哚-6-羧酸(8.00g,40.9mmol)的N,N二甲基甲酰胺(85mL)溶液中加入碘甲烷(6.97g,49.1mmol)和碳酸钾(11.3g,81.9mmol)。该反应液在氮气保护下在25℃搅拌16小时。TLC检测反应完全后，反应液加水(200mL)，然后用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)层析纯化得到黄色固体7-氯-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(5.8g,收率:67％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝210.1,t R＝1.45min。 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ8.67(s,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,1H),7.40(m,1H),6.62(dd,J＝3.2,2.0Hz,1H),3.95(s,3H).
步骤三：在干燥50mL三口瓶中，加入三氯化铝(1.27g,9.54mmol)，在氮气保护下加入7-氯-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.00g,4.77mmol)的1.2-二氯乙烷(10mL)溶液，此体系在80℃搅拌30分钟，然后加入2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.09g,5.01mmol)的1.2-二氯乙烷(1mL)溶液，该反应液在80℃下反应16小时。TLC检测反应完全后，反应液加水(30mL)，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到的粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3/5)纯化得到白色固体7-氯-3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(0.38g, 收率:20％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝392.0,t R＝1.70min。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.86(s,1H),9.10(s,1H),8.25(d,J＝8.4Hz,1H),8.08(d,J＝2.4Hz,1H),7.73(d,J＝8.4Hz,1H),3.91(s,3H).
步骤四：在10mL微波管中，依次加入7-氯-3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(420mg,1.08mmol)，N-甲基吡咯烷酮(2mL)、N,N-二异丙基乙胺(0.53mL,3.23mmol)和叔丁基((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基甲酸酯(237mg,1.18mmol)，该反应液80℃搅拌溶清，然后在130℃微波反应2小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(20mL)，然后用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到的粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到类白色固体甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸酯(430mg,收率:72％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝554.0,t R＝2.05min。
步骤五：室温下，将甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸酯(430mg,0.72mmol)溶于氯化氢/二氧六环(4mL,4M)和甲醇(2mL)的混合溶液，15℃反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(40mL)，然后用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到的粗品经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30:1)纯化得到白色固体3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(320mg,收率:89％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝454.0,t R＝1.38min。
步骤六：将3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(320mg,0.71mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，叔丁基(4-溴丁基)氨基甲酸酯(178mg,0.71mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.58mL,3.53mmol)依次加入，反应在80℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，旋干，柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/7)纯化得到黄色固体甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸酯(230mg,收率:52％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝625.4,t R＝1.07min。
步骤七：将甲基3-(2-((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸酯(230mg,0.37mmol)溶于水(1mL)、甲醇(1mL)和四氢呋喃(1mL)的混合体系中，然后加入一水合氢氧化锂(77.2mg,1.84mmol)，反应在40℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，旋干溶剂得到粗品3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸(锂盐,340mg,收率:91％)呈黄色固体，不经纯化直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝611.4,t R＝0.98min。
步骤八：将3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基氨基)戊基氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(锂盐,340mg)溶于氯化氢/甲醇(5mL,4M)中，体系在25℃搅拌4小时。LCMS检测反应完全后，旋干溶剂得到棕色固体3-(2-(((1S,3S)-3-((4-氨基丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸(含氯化锂,300mg,收率:88％)，不经纯化直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝511.2,t R＝0.61min。
步骤九：向3-(2-(((1S,3S)-3-((4-氨基丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸(含氯化锂,290mg,0.28mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(108mg,0.28mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.24mL,1.42mmol)，该反应液在60℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备纯化(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-氯-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)- 嘧啶-4(1,3)-环戊基环十一烷-11-酮((4 1S,4 3S)-1 7-chloro-25-(trifluoromethyl)-11H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one)(Z11)的三氟乙酸盐(30.8mg,收率:22％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝493.2,t R＝1.27min。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.33(s,1H),8.64(s,1H),8.43(s,1H),8.34–8.04(m,3H),7.99(s,1H),7.78(s,1H),7.26(d,J＝8.4Hz,1H),3.60(s,2H),2.88(s,1H),2.55(s,1H),2.47–2.38(m,1H),2.30–1.95(m,3H),1.83–1.41(m,6H),1.30–1.25(m,2H).
实施例12化合物Z12的合成
步骤一：在室温下向3-(2-((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(750mg,1.52mmol)的甲醇溶液(10mL)中依次加入叔丁基((4-氧环己基)甲基)氨基甲酸酯(414mg,1.82mmol)和冰醋酸(0.1mL)，该反应液在氮气保护下于25℃搅拌反应16小时。然后加入氰基硼氢化钠(287mg,4.56mmol)，该反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完全后，向反应液加入饱和氯化铵溶液(20mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干。得到的粗品经反相制备纯化得到(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)得到白色固体甲基3-(2-((1S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)甲基环己基氨基)环戊基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸盐(P1:340mg,收率32％)。LCMS:MS m/z(ESI):707.4[M+H] +,t R＝7.43min。甲基3-(2-((1S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)甲基环己基氨基)环戊基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸盐(P2:340mg,收率:32％)。LCMS:MS m/z(ESI):707.4[M+H] +,t R＝7.53min。
步骤二：向甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸盐(P2:340mg,0.48mmol)的四氢呋喃(3mL)和甲醇(3mL)的混合溶液中加入氢氧化锂一水合物(101mg,2.40mmol)的水(3mL)溶液，该反应液在40℃搅拌反应过夜。LCMS检测反应完全后，反应液用1.0M的盐酸水溶液酸化至pH＝3-4，并用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩白色固体3-(2-(((1S,3S)-3-((4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(300mg,收率:90％)，粗品不经纯化直接用于下一步反应。LCMS:MS m/z (ESI):[M+H] +＝692.6,t R＝1.14min。
步骤三：在25℃下向3-(2-(((1S,3S)-3-((4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(300mg,0.43mmol)的甲醇(3mL)溶液中加入盐酸/二氧六环(3mL,4N)溶液，该反应液在25℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)得到白色固体3-(2-(((1S,3S)-3-((4-(氨甲基)环己基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(140mg,收率:55％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝592.8,t R＝0.94min。
步骤四：向3-(2-(((1S,3S)-3-((4-(氨甲基)环己基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(30mg,0.05mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(19mg,0.05mmol)和N,N-二异丙基乙胺(32mg,0.25mmol)，该反应液在70℃搅拌14小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XBC18,50*250mm,10um(PARP-06)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,8-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-6(1,4)-环己基-4(1,3)-环戊烷环壬烷-9-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,8-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-6(1,4)-cyclohexana-4(1,3)-cyclopentanacyclononaphan-9-one)(Z12)的三氟乙酸盐(2.0mg,收率:9％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝575.3,t R＝1.55min。 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ11.44(s,1H),8.63(s,1H),7.94(d,J＝6.8Hz,1H),7.80(s,1H),7.21(dd,J＝8.0,3.2Hz,1H),3.94–3.68(m,2H),3.17–2.94(m,3H),2.68-2.63(m,1H),2.48-2.41(m,1H),2.28(d,J＝12.8Hz,1H),2.16-2.11(m,1H),2.02-1.97(m,8H),1.94-1.85(m,1H),1.78–1.53(m,6H),1.37-1.29(m,1H),1.00-0.85(m,1H).
实施例13化合物Z13的合成
步骤一：氮气保护下，于25℃向叔丁基((1S,3S)-3-羟基环丁基)(甲基)氨基甲酯(200mg,1.0mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入戴斯-马丁试剂(843mg,2.0mmol)，该反应液在氮气保护下25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完全后，反应液用水(10mL)和乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(10mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干。得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1～5/1)层析纯化得到白色固体物{[(3-氧亚基环丁基)甲基]氨基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(170mg,收率:86％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H-56] +＝144.2,t R＝1.58min。
步骤二：氮气保护下，于25℃向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(423mg,0.85mmol)和{[(3-氧亚基环丁基)甲基]氨基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(170mg,0.85mmol)的甲醇(3mL)溶液中加入醋酸(20mg,0.33mmol)，氮气保护下25℃搅拌反应16小时。再向反应液中加入氰基硼氢化钠(268mg,4.26mmol)，该反应在氮气保护下25℃继续反应6小时。LCMS检测反应完毕。反应液用水(10mL)和乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(10mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝60/1～30/1)层析纯化得到白色固体{[(3-{[(1S,3S)-3-[(4-{7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-6-(甲氧基羰基)-1H-吲哚-3-基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基]环戊基]氨基}环丁基)甲基]氨基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(380mg,收率:67％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝679.4,t R＝1.19min。
步骤三：氮气保护下，于25℃向{[(3-{[(1S,3S)-3-[(4-{7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-6-(甲氧基羰基)-1H-吲哚-3-基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基]环戊基]氨基}环丁基)甲基]氨基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯的甲醇(4mL)、四氢呋喃(4mL)、水(4mL)混合溶液中加入一水合氢氧化锂(117mg,2.8mmol)，该反应液在氮气保护下升温至40℃搅拌反应16小时，LCMS检测反应完毕。向反应液中缓慢加入2M的盐酸溶液调节pH至4-5，并用乙酸乙酯(50mL×5)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(10mL) 洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干得到的粗品无色油状物7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[3-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂己-6-基)环丁基]氨基}环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(400mg,纯度:70％,收率:75％)，不经纯化直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝664.6,t R＝1.11min。
步骤四：向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[3-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂己-6-基)环丁基]氨基}环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(300mg,0.45mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入4M的甲醇氯化氢溶液(10mL)，该反应液在氮气保护下升温至40℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完全后，向反应液中缓慢加入饱和的碳酸氢钠溶液(30mL)中，并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干。得到的粗品经制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到白色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[3-(氨基甲基)环丁基]氨基}环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(185mg,收率:73％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝565.2,t R＝1.25min。
步骤五：向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[3-(氨基甲基)环丁基]氨基}环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(50mg,0.089mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(34mg,0.089mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.059mL,0.35mmol)，该反应液在60℃搅拌2h。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,8-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷-6(1,3)-环丁烷环壬烷-9-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,8-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentana-6(1,3)-cyclobutanacyclononaphan-9-one)(Z13)的三氟乙酸盐(2.43mg,收率:5％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝547.3,t R＝0.83min。 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.61(s,1H),8.00–7.90(m,1H),7.77(s,1H),7.16(dd,J＝8.0,2.8Hz,1H),4.00–3.90(m,1H),3.70–3.65(m,1H),3.61–3.52(m,1H),3.25–3.15(m,1H),2.90–2.80(m,1H),2.65–2.56(m,2H),2.40–2.30(m,3H),2.15–2.05(m,1H),1.99(s,3H),1.96(s,3H),1.84–1.75(m,1H),1.73–1.61(m,2H),1.56–1.40(m,2H).
实施例14化合物Z14的合成
步骤一：向{[(3S)-四氢-1H-吡咯-3-基]氨基}甲烷酸苄基酯(225mg,1.02mmol)的N,N-二甲基甲烷酰胺(6mL)溶液中依次加入[(5-溴戊基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(299mg,1.12mmol)和N,N-二异丙基乙二胺(528mg,4.08mmol)，该反应液在80℃氮气氛围下搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液用水(15mL)和乙酸乙酯(25mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(15mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝30/1～10/1)层析纯化得到黄色固体物{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂癸-10-基)四氢-1H-吡咯-3-基]氨基}甲烷酸苄基酯(373mg,收率:90％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝406.2,t R＝0.80min。
步骤二：向{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂癸-10-基)四氢-1H-吡咯-3-基]氨基}甲烷酸苄基酯(500mg,1.23mmol)的甲醇(8mL)溶液中加入钯碳(50mg,10％含量,60％含水)，反应液在25℃，氢气氛围下搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液过滤，旋干得到粗品({5-[(3S)-3-氨基四氢-1H-吡咯-1-基]戊基}氨基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(370mg,纯度约85％,收率:94％)，粗品无需进行纯化直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝272.2,t R＝0.46min。
步骤三：向({5-[(3S)-3-氨基四氢-1H-吡咯-1-基]戊基}氨基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(334mg,1.23mmol)的N,N-二甲基甲烷酰胺(8mL)中依次加入3-[2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(507mg,1.23mmol)和N,N-二异丙基乙二胺(477mg,3.69mmol)，该反应液在氮气保护下升温至80℃搅拌反应16小时，LCMS检测反应完毕。反应液用水(20mL)和二氯甲烷(30mL×5)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(20mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝30/1～10/1)层析纯化得到黄色固体物7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂癸-10-基)四氢-1H-吡咯-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(550mg,收率:67％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝667.4,t R＝0.92min。
步骤四：向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂癸-10-基)四氢-1H-吡咯-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(550mg,0.83mmol)的甲醇(3mL)、水(3mL)、四氢呋喃(3mL)混合溶液中加入一水合氢氧化锂(173mg,4.13mmol)，该反应液在氮气保护下升温至40℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完全后，减压浓缩除去溶剂得到的粗产品黄色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂癸-10-基)四氢-1H-吡咯-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(480mg，纯度约85％,收率:95％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝653.2,t R＝0.83min。
步骤五：向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂癸-10-基)四氢-1H-吡咯-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(480mg,0.70mmol)中加入4M的1,4-二氧六环氯化氢溶液(8mL)，该反应液在氮气保护下升温至40℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完全后，向反应液中缓慢加入饱和的碳酸氢钠溶液(30mL)中，并用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干。得到的粗品经反向制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到黄色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(5-氨基戊基)四氢-1H-吡咯-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(300mg,收率:77％)。LCMS:MS m/z(ESI):553.2[M+H] +,t R＝0.61min。
步骤六：向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(5-氨基戊基)四氢-1H-吡咯-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(100mg,0.18mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液 中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(69mg,0.18mmol)和N,N-二异丙基乙胺(94mg,0.12mmol)，该反应液在60℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到(4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,10-二氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(3,1)-吡咯烷环十一烷-11-酮((4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,10-diaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(3,1)-pyrrolidinacycloundecaphan-11-one)(Z14)的三氟乙酸盐(13.8mg,收率:14％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝535.2,t R＝0.63min。 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.63(s,1H),8.43(s,1H),7.97(s,1H),7.32(dd,J＝8.0,3.6Hz,1H),4.50–4.37(m,1H),3.97–3.85(m,1H),3.63–3.50(m,1H),3.26–3.20(m,1H),3.17–3.08(m,2H),3.02–2.84(m,2H),2.59–2.46(m,1H),2.23–2.12(m,1H),2.01(d,J＝3.6Hz,3H),1.98(d,J＝3.6Hz,3H),1.82–1.65(m,2H),1.52–1.37(m,4H).
实施例15化合物Z15的合成
步骤一：在25℃下，向{[(3S)-六氢吡啶-3-基]氨基}甲烷酸苄基酯(242mg,1.03mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(8mL)溶液中加入[(5-溴戊基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(250mg,0.939mmol)，N,N-二异丙基乙胺(363mg,2.82mmol)该反应液在氮气保护下于80℃搅拌反应6小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(50mL)，然后用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1～3/1)纯化得到无色油状物({5-[(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}六氢吡啶-1-基]戊基}氨基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(280mg,收率:64％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝420.4,t R＝0.80min。
步骤二：将({5-[(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}六氢吡啶-1-基]戊基}氨基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(250mg,0.596mmol)溶于甲醇(10mL)溶液中加入钯碳(100mg,10％含量,60％含水)。该反应液在氢气保护下于25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完全后，反应液过滤浓缩得到的无色油状物({5-[(3S)-3-氨基六氢吡啶-1-基]戊基}氨基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(180mg,粗品)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝286.0,t R＝0.80min。
步骤三：在室温下向({5-[(3S)-3-氨基六氢吡啶-1-基]戊基}氨基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(180mg,0.63mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液中依次加入3-[2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(272mg,0.63mmol)、N,N-二异丙基乙胺(244mg,1.89 mmol)，该反应液在氮气保护下于80℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，向反应液加入水溶液(50mL)，并用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝50/1～10/1)层析纯化得到无色油状物7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂癸-10-基)六氢吡啶-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(300mg,收率:70％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝681.1,t R＝1.11min。
步骤四：在室温下向7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂癸-10-基)六氢吡啶-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(300mg,0.441mmol)的甲醇(4mL)、水(4mL)、四氢呋喃(4mL)中加入氢氧化锂水合物(185mg,4.41mmol)，该反应液在氮气保护下于40℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，浓缩至干得到白色固体物7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂癸-10-基)六氢吡啶-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(260mg,粗品)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝667.2,t R＝0.79min。
步骤五：在室温下向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂癸-10-基)六氢吡啶-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(260mg,0.390mmol)的二氧六环(4mL)中加入盐酸二氧六环(1.95mL,4mol/L)。该反应液在氮气保护下于40℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完全后，浓缩除去盐酸，得到的粗品粗品经反相制备纯化(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)得到白色固体物7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(5-氨基戊基)六氢吡啶-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(200mg,收率:95％)。LCMS:MS m/z(ESI):567.2[M+H] +,t R＝0.82min。
步骤六：在室温下向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(5-氨基戊基)六氢吡啶-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(70mg,0.12mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(56.3mg,0.14mmol)、N,N-二异丙基乙胺(77.4mg,0.6mmol)，该反应液氮气保护于65℃反应3小时。LCMS检测反应完全后，浓缩得到的粗品经反相(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(10mmol NH 4HCO 3)；流速:70mL/min；柱温：25℃)纯化得到(4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,10-二氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(3,1)-哌啶环十一烷-11-酮((4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,10-diaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(3,1)-piperidinacycloundecaphan-11-one)(Z15)(1.2mg,收率:1.9％)。LCMS:MS m/z(ESI):549.3[M+H] +,t R＝0.81min。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ8.61(s,1H),7.91(d,J＝8.0Hz,1H),7.79(s,1H),7.22-7.19(m,1H),2.96-2.78(m,4H),2.46–2.40(m,2H),2.08-2.03(m,1H),1.96(d,J＝14.4Hz,3H),1.83(d,J＝13.6Hz,3H),1.71(s,1H),1.73–1.56(m,5H),1.38–1.14(m,6H).
实施例16化合物Z16的合成
步骤一：将7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(300mg,0.61mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，[(4-溴丁基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(153mg,0.61mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.30mL,1.83mmol)依次加入，在80℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，直接加入适量硅胶，旋干拌样，经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/7)纯化得到类白色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂壬-9-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(200mg,收率:50％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝667.2,t R＝0.91min。
步骤二：将7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂壬-9-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(150mg,0.225mmol)溶于甲醇(3mL)，然后加入多聚甲醛(45.0mg,1.13mmol)、钯炭(10mg,10％含量,60％水)和冰醋酸(0.1mL)，在70℃搅拌反应5小时。LCMS检测反应完全后，滤掉钯炭，滤液直接加入硅胶拌样，经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/7)纯化得到白色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5,10-二氮杂-3-氧杂十一烷-10-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(130mg,收率:85％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝681.2,t R＝0.93min。
步骤三：将7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5,10-二氮杂-3-氧杂十一烷-10-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(130mg,0.191mmol)溶于水(1mL)、甲醇(1mL)和四氢呋喃(1mL)的混合体系中，然后加入一水合氢氧化锂(40.1mg,0.955mmol)，在40℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，此反应液不经任何处理，直接应用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):667.4[M+H] +＝667.4,t R＝0.76min。
步骤四：向上一步的反应液中加入盐酸1,4-二氧六环溶液(5mL,4M)，体系在10℃搅拌4小时。LCMS检测反应完全后，直接将溶剂旋干，得到的粗品经反相制备(色谱柱:Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％碳酸氢铵)；流速：70mL/min；柱温：25℃)得到白色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(4-氨基丁基)(甲基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(20mg,收率:13％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝567.2,t R＝0.59min。
步骤五：向7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(4-氨基丁基)(甲基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(20mg,0.04mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(14.8mg,0.04mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.03mL,0.18mmol)，该反应液在60℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-5-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one)(Z16)的三氟乙酸盐(5.88mg,收率:30％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝549.2,t R＝0.67min。 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.57(s,1H),8.53(d,J＝7.6Hz,1H),7.99(s,1H),7.31(dd,J＝8.4,3.2Hz,1H),4.25-4.31(m,1H),3.91-4.04(m,1H),3.24–3.11(m,1H),2.86-2.91(m,2H),2.78(s,1H),2.72(s,2H),2.52-2.57(m,1H),2.38–2.22(m,2H),2.14–1.70(m,12H),1.57-1.66(m,1H),1.29-1.37(m,1H).
实施例17化合物Z19的合成
步骤一：在一个250mL三口瓶中，依次加入N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酸(20g,95.6mmol)、四氢呋喃(130mL)、氯化镁(4.55g,47.8mmol)、羰基二咪唑(15.5g,95.6mmol)、[(3-甲氧基-1,3-二氧亚基丙基)氧基]钾(12.2g,71.7mmol)，反应液用氮气置换，70℃回流4小时，TLC检测反应完全。反应液浓缩，加水(100mL)稀释，再用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，加入无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/3)纯化得到[(1-甲氧基-1,3-二氧亚基丁-4-基)氨基]甲烷酸苄基酯(3.7g,收率15％)，呈类白色固体。 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ7.42-7.26(m,5H),5.12(s,2H),4.21(d,J＝5.2Hz,2H),3.74(s,3H),3.50(s,2H).
步骤二：将[(1-甲氧基-1,3-二氧亚基丁-4-基)氨基]甲烷酸苄基酯(1.50g,5.66mmol)溶于二氯甲烷(30mL)，然后于0℃滴加二乙胺基三氟化硫(1.00g,6.22mmol)，在15℃搅拌16小时，然后于15℃补加二乙胺基三氟化硫(1.00g,6.22mmol)，然后在15℃搅拌4小时。LCMS检测反应完全后，加水(20mL)淬灭反应，再用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，加入无水硫酸钠干燥，浓缩的粗品经反相 制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)，流速：70mL/min,柱温：25℃)得到黄色油状(3,3-二氟-1-甲氧基-1-氧亚基丁-4-基)氨基]甲烷酸苄基酯(0.15g,收率9％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝288.0,t R＝0.97min.
步骤三：将(3,3-二氟-1-甲氧基-1-氧亚基丁-4-基)氨基]甲烷酸苄基酯(130mg,0.45mmol)溶于四氢呋喃(3mL)，然后于0℃滴加四氢铝锂的四氢呋喃溶液(1mL,1M)，反应在10℃搅拌2小时。LCMS检测反应完全后，加水(20mL)淬灭反应，再用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，加入无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品黄色油状物[(2,2-二氟-4-羟基丁基)氨基]甲烷酸苄基酯(100mg,收率85％)，不经纯化直接用于下一步。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝260.0,t R＝0.88min.
步骤四：将[(2,2-二氟-4-羟基丁基)氨基]甲烷酸苄基酯(120mg,0.46mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，再加入吡啶(1mL)和对甲基磺酰氯(265mg,1.39mmol)，体系在10℃搅拌3小时。LCMS检测反应完全后，直接加入硅胶，油泵旋干拌样，经硅胶柱层析(二氯甲烷100％)纯化得到黄色油状物4-甲基苯磺酸-6,6-二氟-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基酯(130mg,收率68％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝414.0,t R＝1.20min.
步骤五：在一个10mL单口瓶中，将7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(173mg,0.35mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，然后加入4-甲基苯磺酸-6,6-二氟-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基酯(120mg,0.29mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.24mL,1.45mmol)。体系在100℃搅拌20小时。LCMS检测反应完全后，加硅胶油泵旋干拌样，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得到黄色油状物7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6,6-二氟-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(81mg,收率38％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝737.2,t R＝0.96min.
步骤六：将7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6,6-二氟-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(90mg,0.12mmol)溶于水(1mL)、甲醇(1mL)和四氢呋喃(1mL)的混合体系中，然后加入一水合氢氧化锂(5.13mg,0.12mmol)，反应在40℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，过滤，滤液反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％碳酸氢铵)，流速：70mL/min,柱温：25℃)得到白色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6,6-二氟-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(30mg,收率34％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝723.2,t R＝0.87min.
步骤七：在一个10mL单口瓶中，加入7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6,6-二氟-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(18mg,0.03mmol)和三氟乙酸(3mL)。60℃搅拌1.5小时，LCMS检测反应完全后，反应液旋干得粗品2,2-二氟-4-{[(1S,3S)-3-[(4-{5-[(Z)-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]甲亚基]-4-[(1Z)-乙亚基]-1H-吡咯-3-基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基]环戊基]氨基}丁-1-胺甲酸(14mg,96％)，灰色固体，无需纯化直接用于下一步。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝589.2,t R＝0.62min.
步骤八：向2,2-二氟-4-{[(1S,3S)-3-[(4-{5-[(Z)-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]甲亚基]-4-[(1Z)-乙亚基]-1H-吡咯-3-基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基]环戊基]氨基}丁-1-胺甲酸(14mg,0.02mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(9.95mg,0.03mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.02mL,0.12mmol)。60℃搅拌16小时，LCMS检测反应完 全，反应液浓缩，粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)，流速：70mL/min,柱温：25℃)得(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-8,8-二氟-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8,8-difluoro-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z19)(1.22mg,收率9％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝571.2,t R＝0.67min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.57-8.58(m,2H),8.01(s,1H),7.32(d,J＝5.6Hz,1H),4.16-4.18(m,1H),3.86-3.87(m,1H),3.47-3.49(m,1H),2.89-2.93(m,2H),2.70-2.73(m,1H),2.48-2.27(m,4H),1.98-2.02(m,6H),1.81-1.86(m,2H),1.28-1.29(m,2H).
实施例18化合物Z27的合成
步骤一：在25℃下，向[(1-羟基丁-4-基)(甲基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(400mg,1.97mmol)的四氢呋喃(8mL)溶液中加入四溴化碳(981mg,3.74mmol)、三苯基膦(1.24g,3.74mmol)。该反应液在氮气保护下于25℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(50mL)，然后用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)纯化得到无色油状物[(1-溴丁-4-基)(甲基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(400mg,收率46％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H-56] +＝210.0,t R＝2.03min.
步骤二：将[(1-溴丁-4-基)(甲基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(240mg,0.90mmol)、3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-[甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(447mg,0.90mmol)溶于乙腈(10mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(349mg,2.71mmol)。氮气保护下于80℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的无色油状物7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂壬-9-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(220mg,收率36％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝681.4,t R＝0.96min.
步骤三：在室温条件下向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂壬-9-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(220mg，0.32mmol)的甲醇(8mL)溶液中依次加入多聚甲醛(145mg,1.62mmol)、醋酸(244mg,1.89mmol)、钯碳(20mg,10％含量,60％含水)。氢气下80℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，向反应液加入水溶液(50mL)，并用二氯甲烷(50mL×3)萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩 至干燥。得到的粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝50/1到10/1)纯化得到无色油状物7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5,10-二氮杂-3-氧杂十一烷-10-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(200mg,收率71％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝695.7,t R＝1.19min.
步骤四：在室温条件下向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5,10-二氮杂-3-氧杂十一烷-10-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(200mg,0.29mmol)的甲醇(3mL)、水(3mL)、四氢呋喃(3mL)中加入氢氧化锂水合物(121mg,2.88mmol)。氮气保护下于40℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，浓缩至干燥得到粗品白色固体物7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5,10-二氮杂-3-氧杂十一烷-10-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(180mg,收率83％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝681.4,t R＝0.93min.
步骤五：在室温条件下向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5,10-二氮杂-3-氧杂十一烷-10-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(180mg,0.26mmol)的二氧六环(4mL)中加入盐酸二氧六环(1.32mL,5.29mmol,4mol/L)。氮气保护下25℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，浓缩，粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)，流速：70mL/min,柱温：25℃)纯化得到白色固体物7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,7-二氮杂辛-2-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(80mg,收率50％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝581.2,t R＝1.00min.
步骤六：在室温条件下向7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,7-二氮杂辛-2-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(70mg,0.12mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(55mg,0.15mmol)、N,N-二异丙基乙胺(78mg,0.61mmol)。氮气保护于60℃反应18小时。LCMS检测反应完全后，浓缩，粗品经反相(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)，流速：70mL/min,柱温：25℃)制备纯化得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮2,2,2-三氟乙酸(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z27)(26mg,收率36％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝563.2,t R＝1.30min. 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.98(s,1H),9.50–9.00(m,1H),8.62(s,1H),8.25(d,J＝5.2Hz,1H),7.97(s,1H),7.23(dd,J＝11.2,1.2Hz,1H),4.22–3.84(m,2H),3.53(s,3H),3.22–3.05(m,2H),3.00(s,3H),2.92–2.84(m,1H),2.68-2.66(m,1H),2.59(d,J＝4.0Hz,2H),2.45-2.37(m,1H),2.17–2.08(m,2H),1.91–1.49(m,11H).
实施例19化合物Z58的合成
步骤一：在0℃，氮气氛围下，向2-氧亚基四氢吡咯-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(2.00g,10.8mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液中缓慢滴加甲基溴化镁(15.1mL,15.1mmol)。反应在0℃下搅拌4小时。点板检测反应完全后，加水(30mL)淬灭反应，随后用乙酸乙酯(100mL×3)进行萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干燥。得到的粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)纯化得到无色油状物[(4-氧亚基戊基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(1.20g,收率56％)。 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ3.02(t,J＝7.2Hz,2H),2.50(t,J＝7.2Hz,2H),2.13(s,3H),1.69(p,J＝7.2Hz,1H),1.43(s,9H).
步骤二：将[(4-氧亚基戊基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(122mg,0.61mmol)溶于四氢呋喃(5mL)，然后加入钛酸异丙酯(574mg,2.0mmol)、7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(250mg,0.51mmol)，反应在70℃搅拌16小时后，冷却至室温，向其中加入氰基硼氢化钠(159mg,2.53mmol)，在25℃下搅拌6小时。LCMS检测反应完全后，反应液过滤除去固体杂质，有机相浓缩得到粗产品，随后粗产品经制备薄层层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂癸-9-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(270mg,收率79％)，为黄色油状物。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝681.4,t R＝0.99min.
步骤三：将7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂癸-9-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(220mg,0.32mmol)溶于水(2mL)、甲醇(2mL)和四氢呋喃(2mL)的混合体系中，加入氢氧化锂(1个结晶水,68mg,1.62mmol)，反应在40℃搅拌14小时。LCMS检测反应完全后，此反应液不经任何处理，直接应用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝667.4,t R＝0.91min.
步骤四：向步骤三的反应液中加入氯化氢/1,4-二氧六环溶液(5mL,4M)，体系在40℃搅拌4小时。LCMS检测反应完全后，直接将溶剂旋干，得到粗品，粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)，流速：70mL/min,柱温：25℃)得到7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(5-氨基戊-2-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(150mg,收率94％)，呈白色固体。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝567.2,t R＝0.87min.
步骤五：7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(5-氨基戊-2-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(70mg,0.12mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(47mg,0.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(64mg,0.50mmol)，该反应液在80℃搅拌18h。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)，流速：70mL/min,柱温：25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-6-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-6-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z58)(10.50mg,收率15％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝549.2,t R＝0.69min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.58(s,1H),8.51–8.36(m,1H),7.97(s,1H),7.45–7.29(m,1H),4.42–4.11(m,1H),3.95–3.74(m,1H),3.30–3.17(m,1H),3.13–2.99(m,1H),2.98–2.74(m,2H),2.66–2.50(m,1H),2.36–2.27(m,1H),2.27–2.19(m,1H),2.15–2.05(m,1H),2.03–1.96(m,6H),1.95–1.85(m,1H),1.80–1.66(m,2H),1.56–1.50(m,1H),1.47–1.34(m,1H),1.26(t,J＝6.0Hz,3H).
实施例20化合物Z59的合成
步骤一：在25℃下，向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(200mg,0.71mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液中加入[(6-溴己基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(353mg,0.71mmol)、N,N-二异丙基乙胺(460mg,3.57mmol)。氮气保护下于80℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(50mL)，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)纯化得到无色油状物7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂十一烷-11-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(180mg,收率33％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝694.7,t R＝1.33min.
步骤二：在室温条件下向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂十一烷-11-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(180mg,0.26mmol)的甲醇(3mL)、水(3mL)、四氢呋喃(3mL)中加入氢氧化锂水合物(109mg,2.59mmol)。氮气保护下于40℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，浓缩至干燥得到粗品白色固体物7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂十一烷-11-基)氨基] 环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(180mg,粗品)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝681.3,t R＝0.87min.
步骤三：在室温条件下向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂十一烷-11-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(160mg,0.24mmol)的甲醇(4mL)中加入盐酸甲醇(1.12mL,4mol/L)。该反应液在氮气保护下于40℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，浓缩除去盐酸，得到的粗品经反相(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)，流速：70mL/min,柱温：25℃)制备纯化得到白色固体物7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6-氨基己基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(80mg,收率56％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝581.4,t R＝0.68min.
步骤四：在室温条件下向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6-氨基己基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(70mg,0.12mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(55.2mg,0.15mmol)、N,N-二异丙基乙胺(78mg,0.61mmol)。氮气保护于60℃反应16小时。LCMS检测反应完全后，浓缩得到的粗品经反相(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)，流速：70mL/min,柱温：25℃)纯化得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,12-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十三烷-13-酮2,2,2-三氟乙酸(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,12-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclotridecaphan-13-one(Z59)(14mg,收率18％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝563.0,t R＝0.68min. 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.99(s,1H),8.62(s,1H),8.60-8.57(m,1H),8.51(d,J＝8.4Hz,1H),8.04(s,1H),7.46(dd,J＝8.4,3.2Hz,1H),4.27-4.20(m,1H),3.73-3.71(m,1H),3.63-3.55(m,2H),3.19-3.14(m,1H),2.95-2.92(m,2H),2.18-2.05(m,2H),2.01-1.89(m,7H),1.82-1.74(m,1H),1.69-1.48(m,9H).
实施例21化合物Z60的合成
步骤一：在室温条件下，向(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十二烷-12-酮2,2,2-三氟乙酸盐(20mg,0.030mmol)的四氢呋喃溶液(5mL)中依次加入多聚甲醛(20mg,0.22mmol)和钛酸异丙酯(10.3mg,0.036mmol)。氮气保护下于60℃搅拌反应14小时。将反应液降温至30℃后，加入氰基硼氢化钠(20mg,0.318mmol)，保温反应4小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)，流速：70mL/min,柱温：25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-5-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十二烷-12-酮-2,2,2-三氟乙酸盐(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-5-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-8-oxa-3,5,11-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanac yclododecaphan-12-one(Z60)(7.8mg,收率38％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝565.2,t R＝0.73min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.58(s,1H),8.50–8.28(m,1H),7.94–7.89(m,1H),7.69–7.50(m,1H),4.28–4.15(m,1H),3.99–3.68(m,6H),3.52–3.42(m,1H),3.24–3.14(m,1H),2.97–2.85(m,3H),2.78–2.59(m,1H),2.37–2.15(m,3H),2.14–1.92(m,7H),1.87–1.70(m,2H).
实施例22化合物Z61的合成
步骤一：在25℃下，向[(6-溴己基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(300mg,1.28mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(8mL)溶液中加入{[(3S)-六氢吡啶-3-基]氨基}甲烷酸苄基酯(395mg,1.41mmol)、N,N-二异丙基乙胺(662mg,5.12mmol)。该反应液在氮气保护下于80℃搅拌反应6小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(30mL)，然后用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30/1到10/1)纯化得到无色油状物{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂十一烷-11-基)六氢吡啶-3-基]氨基}甲烷酸苄基酯(555mg,收率92％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝434.2,t R＝1.57min.
步骤二：将{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂十一烷-11-基)六氢吡啶-3-基]氨基}甲烷酸苄基酯(555mg,1.17mmol)溶于甲醇(10mL)溶液中加入钯碳(60mg,10％含量,60％含水)。该反应液在氢气保护下于25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完全后，反应液过滤浓缩，得到的无色油状物({6-[(3S)-3-氨基六氢吡啶-1-基]己基}氨基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(350mg,粗品)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝300.0,t R＝0.98min.
步骤三：在室温条件下向{6-[(3S)-3-氨基六氢吡啶-1-基]己基}氨基(280mg,0.94mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(8mL)溶液中依次加入3-[2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(404mg,0.94mmol)、N,N-二异丙基乙胺(483mg,3.74mmol)，该反应液在氮气保护下于80℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，向反应液加入水溶液(40mL)，并用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干燥。得到的粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30/1到10/1)纯化得到黄色油状物7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂十一烷-11-基)六氢吡啶-3-基]氨基}-5-(三氟甲基) 嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(473mg，收率72％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝695.4,t R＝1.15min.
步骤四：在室温条件下向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂十一烷-11-基)六氢吡啶-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(243mg,0.35mmol)的甲醇(3mL)、水(3mL)、四氢呋喃(3mL)中加入氢氧化锂水合物(74mg,1.75mmol)，该反应液在氮气保护下于40℃搅拌反应14小时。LCMS检测反应完全后，浓缩至干燥得到粗品黄色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂十一烷-11-基)六氢吡啶-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(320mg,粗品,90％纯度)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝680.8,t R＝1.21min.
步骤五：在室温条件下向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂十一烷-11-基)六氢吡啶-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(420mg,粗品,90％纯度)的甲醇(4mL)溶液中加入氯化氢/甲醇溶液(6mL,4mol/L)。该反应液在氮气保护下于40℃搅拌反应4小时。LCMS检测反应完全后，浓缩除去盐酸，得到的粗品粗品经反相(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)，流速：70mL/min,柱温：25℃)制备纯化得到白色固体物7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(6-氨基己基)六氢吡啶-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(275mg,收率85％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝581.4,t R＝0.64min.
步骤六：在室温条件下向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(6-氨基己基)六氢吡啶-3-基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(100mg,0.17mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(65.4mg,0.17mmol)、N,N-二异丙基乙胺(88.9mg,0.69mmol)，该反应液氮气保护于80℃反应16小时。LCMS检测反应完全后，浓缩得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)纯化得到(4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,11-二氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-哌啶环十二烷-12-酮(4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,11-diaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(3,1)-piperidinacyclododecaphan-12-one(Z61)(18.90mg,收率19％,三氟乙酸盐)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝563.2,t R＝0.67min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.64(s,1H),8.22(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H),7.91(s,1H),7.65(dd,J＝8.4,3.6Hz,1H),4.22–4.02(m,1H),4.01–3.49(m,3H),3.29–3.21(m,1H),3.19–3.09(m,2H),2.95–2.87(m,1H),2.87–2.69(m,1H),2.16–1.89(m,9H),1.80–1.27(m,9H).
实施例23化合物Z56的合成
步骤一：在25℃下，向{[2-(四氢-1H-吡咯-3-基)乙基]氨基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(200mg,0.93mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液中加入[(2-溴乙基)氨基]甲烷酸苄基酯(241mg,0.93mmol)、N,N-二异丙基乙胺(602mg,4.67mmol)。该反应液在氮气保护下于80℃搅拌反应5小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(20mL)，然后用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)纯化得到无色油状物({2-[1-(3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂己-6-基)四氢-1H-吡咯-3-基]乙基}氨基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(218mg,收率54％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝392.4,t R＝1.40min.
步骤二：在室温条件下向({2-[1-(3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂己-6-基)四氢-1H-吡咯-3-基]乙基}氨基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(200mg,0.51mmol)的甲醇中加入Pd/C(20mg,10％含量,60％含水)。该反应液在氢气保护下于25℃搅拌反应5小时。LCMS检测反应完全后，浓缩至干燥得到粗品白色固体物({2-[1-(2-氨基乙基)四氢-1H-吡咯-3-基]乙基}氨基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(100mg,收率53％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝258.2,t R＝0.47min.
步骤三：在室温条件下向({2-[1-(2-氨基乙基)四氢-1H-吡咯-3-基]乙基}氨基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(100mg,0.39mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中加入3-[2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(168mg,0.39mmol)、N,N-二异丙基乙胺(150mg,1.17mmol)。该反应液在氮气保护下于80℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(20mL)，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)纯化得到无色油状物7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-[2-({2-[3-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂庚-7-基)四氢-1H-吡咯-1-基]乙基}氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(220mg,收率78％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝653.2,t R＝1.41min.
步骤四：在室温条件下向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-[2-({2-[3-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂 -3-氧杂庚-7-基)四氢-1H-吡咯-1-基]乙基}氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(220mg,0.34mmol)的甲醇(3mL)、水(3mL)、四氢呋喃(3mL)中加入氢氧化锂水合物(141mg,3.37mmol)。氮气保护下于40℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，浓缩至干燥得到粗品白色固体物7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-[2-({2-[3-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂庚-7-基)四氢-1H-吡咯-1-基]乙基}氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-1H-吲哚-6-甲酸(200mg)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝638.7,t R＝1.11min.
步骤五：在室温条件下，向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-[2-({2-[3-(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂庚-7-基)四氢-1H-吡咯-1-基]乙基}氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-1H-吲哚-6-甲酸(200mg,0.31mmol)的1,4-二氧六环(4mL)中加入盐酸1,4-二氧六环(0.78mL,3.13mmol,4mol/L)。氮气保护下，40℃搅拌3小时。LCMS检测反应完全后，浓缩，粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)，流速：70mL/min,柱温：25℃)纯化得到白色固体物3-[2-({2-[3-(2-氨基乙基)四氢-1H-吡咯-1-基]乙基}氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸(70mg,收率37％)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝538.8,t R＝0.98min.
步骤六：在室温条件下向3-[2-({2-[3-(2-氨基乙基)四氢-1H-吡咯-1-基]乙基}氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸(70mg,0.11mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(51mg,0.13mmol)、N,N-二异丙基乙胺(43mg,0.33mmol)。氮气氛围下于65℃反应3小时。LCMS检测反应完全后，浓缩，粗品经反相(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)，流速：70mL/min,柱温：25℃)制备纯化得到1 7-(二甲基磷酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,9-二氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-6(1,3)-吡咯烷环十烷-10-酮1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,9-diaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-6(1,3)-pyrrolidinacyclodecaphan-10-one(Z56)(6.0mg,收率10％,三氟乙酸盐)。LCMS:MS m/z(ESI):[M+H] +＝521.3,t R＝0.71min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.65(s,1H),8.58–8.43(m,1H),8.03(s,1H),7.57(s,1H),4.09-3.82(m,3H),3.63–3.36(m,4H),3.18–2.98(m,2H),2.78-2.57(m,1H),2.49-2.35(m,1H),2.23–1.99(m,7H),1.70-1.14(m,3H).
实施例24化合物Z64的合成
步骤一：在50mL单口瓶中，向(1-羟基-6-氮杂-3-氧杂庚-6-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(300mg,1.37mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中依次加入咪唑(140mg,2.05mmol)、三苯基膦(431mg,1.64mmol)和碘单质(521mg,2.05mmol)。氮气保护下5℃搅拌2小时。LCMS检测反应完全，反应液加水(20mL)稀释，然后用二氯甲烷(10mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化得淡黄色油状物(1-碘-6-氮杂-3-氧杂庚-6-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(314mg,收率70％)。LCMS:m/z(ESI):[M-100+H] +＝230.0,t R＝1.20min.
步骤二：在50mL单口瓶中，向(1-碘-6-氮杂-3-氧杂庚-6-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(350mg,1.06mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(553mg,1.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.88mL,5.32mmol)。氮气保护下100℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(30mL)稀释，乙酸乙酯(15mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝100:6)纯化得到淡黄色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3,8-二氧杂癸-10-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(610mg,收率82％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝697.4,t R＝0.97min.
步骤三：将7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3,8-二氧杂癸-10-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(610mg,0.88mmol)溶于水(3mL)、甲醇(3mL)和四氢呋喃(3mL)的混合体系中。加入一水合氢氧化锂(184mg,4.38mmol)，40℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，得到含7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3,8-二氧杂癸-10-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸的反应液，此反应液不经处理直接用于下一步。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝683.3,t R＝0.86min.
步骤四：在上步反应液中，加入盐酸的甲醇溶液(5mL,4M)，5℃搅拌5小时。LCMS检测完全后，反应液浓缩，粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)得到白色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(6-氮杂-3-氧杂庚-1-基氨基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(260mg,2步收率51％)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝582.6,t R＝0.92min.
步骤五：向7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(6-氮杂-3-氧杂庚-1-基氨基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(260mg,0.45mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(187mg,0.49mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.37mL,2.23mmol)。60℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)得到淡黄色固体(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-11-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十二烷-12-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-11-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-8-oxa-3,5,11-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one)(Z64)(120mg,收率48％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝564.8,t R＝0.97min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.57(s,1H),8.43(br,1H),7.96(s,1H),7.44(dd,J＝8.4,3.2Hz,1H),4.36-4.39(m,1H),3.88-3.91(m,1H),3.78-3.83(m,2H),3.53-3.72(m,3H),3.67-3.42(m,1H),3.23-3.61(m,1H),3.13(s,3H),2.65-2.71(m,1H),2.32-2.39(m,1H),2.21-2.23(m,1H),2.14–1.62(m,10H).
实施例25化合物Z63的合成
步骤一：在10mL单口瓶中，向(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-11-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十二烷-12-酮三氟乙酸盐(35mg,0.06mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液中依次加入多聚甲醛(9.30mg,0.31mmol)和钛酸四异丙酯(35.2mg,0.12mmol)。该反应液在70℃搅拌16小时，将反应液降至35℃，再加入氰基硼氢化钠(7.79mg,0.12mmol)，继续35℃搅拌3小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)，流速：70mL/min,柱温：25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基))-5,11-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十二烷-12-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-5,11-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-8-oxa-3,5,11-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one)(Z63)(2mg,收率6％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):[M+H] +＝579.2,t R＝0.77min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.24-8.58(m,2H),7.88-8.01(m,1H),7.41-7.43(m,1H),4.11-4.18(m,1H),3.94-3.97(m,1H),3.79-3.85(m,3H),3.66-3.70(m,2H),3.36-3.41(m,1H),3.13-3.18(m,4H),2.86(s,2H),2.55-2.73(m,2H),2.25-2.32(m,3H),1.82-1.97(m,9H).
实施例26化合物Z23的合成
步骤一：25℃下，向7-溴-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(1.0g,3.9mmol)的N,N二甲基甲酰胺(10mL)溶液中，加入四(三苯基膦)钯(0.45g,0.39mmol)和氰化锌(0.46g,3.9mmol)。氮气吹一分钟放入微波150℃反应1小时。LCMS检测反应完全后，向反应液中缓慢加入水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，粗品经过柱机(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)层析纯化得7-氰基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(黄色固体,800mg,收率81％)。LCMS:m/z(ESI):201.2[M+H] +,t R＝1.22min.
步骤二：25℃下，向7-氰基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(800mg,4.0mmol)的N,N二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入N-碘代丁二酰亚胺(1.35g,6.0mmol)。置换氮气，40℃搅拌3小时，LCMS检测反应完全。向反应液加入水(30mL)，乙酸乙酯(40mL×2)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(40mL×4)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)层析纯化得7-氰基-3-碘-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(灰白色固体,740mg,收率51％)。LCMS:m/z(ESI):327.0[M+H] +,t R＝1.95min.
步骤三：25℃下，向7-氰基-3-碘-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(740mg,2.27mmol)和4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(871mg,6.81mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中，依次加入三(二亚苄基丙酮)二钯(312mg,0.34mmol)、2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(108mg,0.227mmol)和三乙胺(689mg,6.81mmol)。置换氮气，90℃条件下反应14小时，LCMS检测反应完全。向反应液中加入水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/1)层析纯化，得到6-甲酰基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲哚-7-甲腈甲烷(黄色固体,600mg,收率81％)LCMS:m/z(ESI):327.2[M+H] +,t R＝1.26min.
步骤四：25℃下，向6-甲酰基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲哚-7-甲腈甲烷(600mg,1.84mmol)和{[(1S,3S)-3-{[4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]氨基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(583mg,1.53mmol)的四氢呋喃溶液(10mL)中依次加入氯[(正丁基二(1-金刚烷基)膦)-2-(2-氨基联苯)]钯(II)(102mg,0.153mmol)和磷酸钾(976mg,4.6mmol)的水(2mL)溶液。置换氮气，60℃反应14小时，LCMS检测反应完全。向反应液中加入水(20mL)，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，粗品经过柱机(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)层析纯化，得7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-({[(2-甲基丙-2-基)氧基]羰基}氨基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(黄色油状,580mg,收率69％)。LCMS:m/z(ESI):544.8[M+H] +,t R＝1.66min.
步骤五：25℃下，向7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-({[(2-甲基丙-2-基)氧基]羰基}氨基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(500mg,0.92mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液加入三氟醋酸(2.5mL)。20℃反应3小时，LCMS检测反应完全。反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(30mL)，二氯甲烷和甲醇(5:1)的混合溶液(50mL×6)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得粗品7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(黄色油状,500mg,纯度75％,收率92％)。LCMS:MS m/z(ESI):445.2[M+H] +,t R＝0.79min.
步骤六：室温下，向7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(100mg,0.225mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(2mL)中，依次加入[(4-溴丁基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(56mg,0.225mmol)和N,N-二异丙基乙胺(116mg,0.9mmol)。置换氮气，80℃搅拌反应16小时，LCMS检测反应完全。反应液加入饱和氯化铵溶液(10mL)，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝20/1到10/1)层析纯化，得7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂壬-9-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(黄色油状,70mg,收率40％)。LCMS:MS m/z(ESI):615.8[M+H] +,t R＝1.28min.
步骤七：向7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂壬-9-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(70mg,0.09mmol)的四氢呋喃(3mL)和甲醇(3mL)的混合溶液中加入一水合氢氧化锂(19.0mg,0.45mmol)的水(3mL)溶液。40℃搅拌反应12h，LCMS检测反应完全。反应液直接浓缩，粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18-08,50*250mm,10um(PARP-02),流动相:乙腈-水(0.1％碳酸氢铵),流速:70mL/min,柱温:25℃)得7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂壬-9-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(白色固体,30mg,收率55％)。LCMS:MS m/z(ESI):602.2[M+H] +,t R＝0.86min.
步骤八：向7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂壬-9-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(20mg,0.033mmol)的二氯甲烷(0.9mL)溶液中加入三氟醋酸(0.1mL)。15℃搅拌反应45分钟。LCMS检测反应完全后，向反应液中加入N,N-二异丙基乙胺调节pH＝8。浓缩得7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(4-氨基丁基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(黄色油状物,12mg,收率72％)。粗产品直接用于下一步反应。LCMS:MS m/z(ESI):502.0[M+H] +,t R＝1.20min.
步骤九：向7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(4-氨基丁基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(12mg,0.02mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中，依次加入2-(7-氮杂苯并三氮 唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(15mg,0.04mmol)和N,N-二异丙基乙胺(21mg,0.16mmol)。80℃搅拌14h，LCMS检测反应完全。浓缩，粗品经反相制备(色谱柱:Ultimate XB-C18-08,50*250mm,10um(PARP-02),流动相:乙腈-水(0.1％碳酸氢铵),流速:70mL/min,柱温:25℃)得(4 1S,4 3S)-11-氧杂-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,11-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-1 7-甲腈(4 1S,4 3S)-11-oxo-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphane-1 7-carbonitrile(Z23,0.8mg,收率7％)。LCMS:MS m/z(ESI):484.2[M+H] +,t R＝0.84min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.73(d,J＝8.4Hz,1H),8.53(s,1H),7.96(s,1H),7.46(d,J＝8.4Hz,1H),4.18-4.13(m,1H),3.28-3.23(m,1H),3.11-3.00(m,1H),2.91-2.80(m,1H),2.52-2.48(m,1H),2.34-2.08(m,4H),1.84-1.73(m,1H),1.72-1.61(m,1H),1.56-1.39(m,5H).
实施例27化合物Z62的合成
步骤一：在0℃，氮气氛围下，向三苯基膦(129mg,0.49mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中依次加入[(4-羟基丁基)(甲基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(100mg,0.49mmol)、碘单质(125mg,0.49mmol)、咪唑(50mg,0.74mmol)。0℃下搅拌5分钟后升温到室温，反应在室温下搅拌4小时。LCMS反应完全后，加水(10mL)稀释，二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥有机相，过滤浓缩。得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)层析纯化，得到无色油状物[(4-碘丁基)(甲基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(120mg,收率78％)。LCMS:m/z(ESI):258.0[M+H-56] +,t R＝1.63min.
步骤二：将7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(27mg,0.054mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)。依次加入[(4-碘丁 基)(甲基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(20mg,0.065mmol)、N,N-二异丙基乙胺(28mg,0.218mmol)。80℃搅拌16小时，LCMS检测反应完全。反应液过滤除去固体杂质，有机相浓缩得粗产品，经制备TLC(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂壬-9-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(黄色固体,28mg,收率75％)。LCMS:m/z(ESI):681.3[M+H] +,t R＝1.17min.
步骤三：将7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂壬-9-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(110mg,0.162mmol)溶于水(2mL)、甲醇(2mL)和四氢呋喃(2mL)的混合体系中。加入氢氧化锂(1个结晶水,34mg,0.808mmol)。40℃搅拌6小时。LCMS检测反应完全后，旋干除去溶剂得粗产品7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂壬-9-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(黄色固体,110mg,收率94％)，直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):667.4[M+H] +,t R＝1.04min.
步骤四：向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂壬-9-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(110mg,0.164mmol)中加入氯化氢/甲醇溶液(5mL,4M)，体系在40℃搅拌4小时。LCMS检测反应完全后，旋干，粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)得7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[4-(甲基氨基)丁基]氨基}环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(白色固体,80mg,收率94％)。LCMS:m/z(ESI):567.3[M+H] +,t R＝0.83min.
步骤五：向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[4-(甲基氨基)丁基]氨基}环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(60mg,0.106mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(40mg,0.106mmol)和N,N-二异丙基乙胺(68mg,0.530mmol)。80℃搅拌4h，LCMS检测反应完全后。浓缩，粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)得(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-10-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-10-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z62,16mg,收率28％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):549.2[M+H] +,t R＝0.84min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.72-8.36(m,2H),8.05-7.89(m,1H),7.36-7.19(m,1H),3.86-3.73(m,1H),3.23-3.13(m,1H),3.11(s,3H),3.08-2.98(m,1H),2.83-2.63(m,3H),2.41-2.06(m,4H),2.00-1.55(m,12H).
实施例28化合物Z68-1和Z68-2的合成
步骤一：在5℃下，向4-((苄氧基)羰基)氨基)-3-氧代丁酸甲酯(5.0g,18.9mmol)的四氢呋喃(100mL)溶液中加入氢化铝锂的四氢呋喃溶液(28.3mL,1M,28.3mmol)。该反应液在氮气保护下于5℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完全后，反应液加饱和氯化铵水溶液(100mL)，乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，粗品经过柱机(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到0/1)层析纯化，得到无色油状物苄基(2,4-二羟基丁基)氨基甲酸酯(1.2g,收率27％)。LCMS:m/z(ESI):239.8[M+H] +,t R＝0.99min.
步骤二：在5℃下，向苄基(2,4-二羟基丁基)氨基甲酸酯(1.2g,5.02mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入咪唑(0.68g,10.04mmol)、叔丁基二苯基氯硅烷(1.38g,5.02mmol)。氮气保护下于5℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(50mL)，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，粗品经过柱机(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/1)层析纯化，得到无色油状物苄基(4-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-羟基丁基)氨基甲酸酯(2.2g,收率92％)。LCMS:m/z(ESI):400.2[M+H] +,t R＝1.69min.
步骤三：将苄基(4-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-羟基丁基)氨基甲酸酯(2.2g,4.61mmol)溶于二氯甲烷(30mL)，然后于0℃缓慢加入二乙氨基三氟化硫(1.1g,6.92mmol)，该反应在5℃搅拌3小时。TLC检测反应完全后，加水(20mL)淬灭，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，粗品经过柱机(石油醚/乙酸乙酯＝15/1到1/1)层析纯化，得到无色油状物苄基(4-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-氟丁基)氨基甲酸酯(0.7g,收率29％)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ7.80–7.18(m,16H),5.04(s,2H),4.77(d,J＝50.4Hz,1H),3.74(d,J＝5.6H,2H),3.32–3.22(m,2H),1.85–1.70(m,2H),0.99(s,9H).
步骤四：将苄基(4-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-氟丁基)氨基甲酸酯(700mg,1.46mmol)溶于N,N- 二甲基甲酰胺(5mL)中，再加入氟化铯(888mg,5.84mmol)。该反应在5℃搅拌18小时。LCMS检测反应完全后，加水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，粗品经过柱机(石油醚/乙酸乙酯＝15/1到0/1)层析纯化，得到无色油状物苄基(2-氟-4-羟基丁基)氨基甲酸酯(300mg,收率85％)。LCMS:m/z(ESI):242.0[M+H] +,t R＝1.13min.
步骤五：50mL单口瓶中，将苄基(2-氟-4-羟基丁基)氨基甲酸酯(300mg,1.24mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入咪唑(126mg,1.86mmol)、三苯基膦(390mg,1.50mmol)和单质碘(381mg,1.50mmol)。该反应在10℃搅拌1小时。TLC点板检测反应完全后，直接加入硅胶，油泵旋干拌样，经过柱机(石油醚/乙酸乙酯＝20/1到3/1)层析纯化，得到无色油状物苄基(2-氟-4-碘丁基)氨基甲酸酯(330mg,收率76％)。
步骤六：将3-(2-((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(220mg,0.44mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入苄基(2-氟-4-碘丁基)氨基甲酸酯(156mg,0.44mmol)和N,N-二异丙基乙胺(286mg,2.20mmol)。100℃搅拌18小时。LCMS检测反应完全后，直接加入硅胶，油泵旋干拌样，经过柱机(二氯甲烷/甲醇＝40/1到5/1)层析纯化，得到白色固体甲基3-(2-((1S,3S)-3-((苄氧基)羰基)氨基)-3-氟丁基氨基)环戊基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(290mg,收率92％)。LCMS:m/z(ESI):719.2[M+H] +,t R＝1.12min.
步骤七：将甲基3-(2-((1S,3S)-3-((苄氧基)羰基)氨基)-3-氟丁基氨基)环戊基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(290mg,0.40mmol)溶于甲醇(5mL)、四氢呋喃(5mL)和水(5mL)的混合体系中，加入一水合氢氧化锂(84mg,2.00mmol)。该反应于40℃搅拌18小时，LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到粗品白色固体3-(2-((1S,3S)-3-((苄氧基)羰基)氨基)-3-氟丁基氨基)环戊基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(300mg)。LCMS:m/z(ESI):705.2[M+H] +,t R＝0.94min.
步骤八：向3-(2-((1S,3S)-3-((苄氧基)羰基)氨基)-3-氟丁基氨基)环戊基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(300mg,0.43mmol)的反应瓶中加入三氟乙酸(5mL)，60℃搅拌3h。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)，得到白色固体3-(2-((1S,3S)-3-((4-氨基-3-氟丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(140mg,收率57％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):571.2[M+H] +,t R＝0.97min.
步骤九：在室温条件下向3-(2-((1S,3S)-3-((4-氨基-3-氟丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(70mg,0.12mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(55mg,0.15mmol)、N,N-二异丙基乙胺(78mg,0.61mmol)。氮气保护于60℃反应18小时。LCMS检测反应完全后，浓缩得到粗品(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-8-氟-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮。
步骤十：将上一步反应得到的粗品经反相(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)制备纯化得到两个异构体化合物。其中一个异构体化合物任意指定为(4 1S,4 3S,8R)-1 7-(二甲基磷酰基)-8-氟-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮 (4 1S,4 3S,8R)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8-fluoro-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-py rimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z68-1,4mg,收率6％,三氟乙酸盐)，白色固体物。LCMS:MS m/z(ESI):553.2[M+H] +,t R＝1.07min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.57(s,1H),8.45–8.42(m,1H),7.96(s,1H),7.32(dd,J＝8.0,3.2Hz,1H),4.80-4.61(m,1H),4.22-4.08(m,1H),3.88-3.78(m,1H),3.28-3.17(m,2H),2.96-2.86(m,1H),2.85–2.64(m,2H),2.40-2.26(m,2H),2.11–1.94(m,8H),1.92–1.69(m,3H)。另一个异构体化合物任意指定为(4 1S,4 3S,8S)-1 7-(二甲基磷酰基)-8-氟-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(4 1S,4 3S,8S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8-fluoro-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z68-2,3mg,收率5％,三氟乙酸盐)。LCMS:MS m/z(ESI):553.3[M+H] +,t R＝1.08min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.57(s,1H),8.50(d,J＝8.0Hz,1H),7.99(s,1H),7.28(dd,J＝8.0,3.2Hz,1H),4.83-4.73(m,1H),4.27–4.09(m,1H),3.88-3.78(m,1H),3.27–3.08(m,2H),2.92-2.72(m,2H),2.67–2.51(m,1H),2.40–2.17(m,2H),2.08–1.71(m,11H).
实施例29化合物Z66的合成
步骤一：250mL三口瓶中，依次加入N-[(苄基氧基)羰基]-N-甲基甘氨酸(10.8g,48.4mmol)、四氢呋喃(100mL)和羰基二咪唑(7.8g,48.4mmol)。反应液用氮气置换，10℃搅拌12小时，加入氯化镁(2.3g,24.2mmol)和丙二酸单甲酯钾盐(7.6g,48.4mmol)，升温至60℃搅拌6小时，TLC检测反应完全。反应液浓缩，加水(100mL)稀释，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，经过柱机(乙酸乙酯/石油醚＝50/50)层析纯化得(3,5-二氧亚基-7-氮杂-2-氧杂辛-7-基)甲 烷酸苄基酯(5.8g,收率43％)，呈淡黄色油状液体。 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ7.47–7.21(m,5H),5.13–5.06(m,2H),4.29–4.25(m,2H),3.70–3.64(m,3H),2.94–2.91(m,3H).
步骤二：将(3,5-二氧亚基-7-氮杂-2-氧杂辛-7-基)甲烷酸苄基酯(5.8g,20.8mmol)溶于二氯甲烷(50mL)，0℃滴加二乙胺基三氟化硫(5.0g,31.2mmol)。25℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，加水(40mL)淬灭，二氯甲烷(50mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流速:乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速:70mL/min,柱温:25℃)，得到类白色固体(5,5-二氟-3-氧亚基-7-氮杂-2-氧杂辛-7-基)甲烷酸苄基酯(1.4g,收率22％)。LCMS:m/z(ESI):301.8[M+H] +,t R＝1.48min.
步骤三：将(5,5-二氟-3-氧亚基-7-氮杂-2-氧杂辛-7-基)甲烷酸苄基酯(1.4g,4.7mmol)溶于四氢呋喃(20mL)，0℃滴加四氢铝锂的四氢呋喃溶液(4.7mL,1M)，10℃搅拌2小时。LCMS检测反应完全后，加水(20mL)淬灭，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，经过柱机(乙酸乙酯/石油醚＝80/20)层析纯化，得[(2,2-二氟-4-羟基丁基)(甲基)氨基]甲烷酸苄基酯(1.0g,收率80％)，呈无色油状液体。LCMS:m/z(ESI):274.2[M+H] +,t R＝1.14min.
步骤四：向[(2,2-二氟-4-羟基丁基)(甲基)氨基]甲烷酸苄基酯(400mg,1.46mmol)的吡啶(5mL)溶液中，加入对甲基磺酰氯(558mg,2.93mmol)，10℃搅拌3小时。LCMS检测反应完全后，直接加入硅胶，油泵旋干拌样，经过柱机(二氯甲烷100％)层析纯化得到黄色油状物4-甲基苯磺酸-6,6-二氟-4-甲基-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基酯(370mg,收率59％)。LCMS:m/z(ESI):428.2[M+H] +,t R＝1.44min.
步骤五：将7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(426mg,0.86mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(7mL)中，加入4-甲基苯磺酸-6,6-二氟-4-甲基-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基酯(350mg,0.82mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.68mL,4.09mmol)。100℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，加硅胶油泵旋干拌样，经过柱机(二氯甲烷:甲醇＝100:6)层析纯化得到黄色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6,6-二氟-4-甲基-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(350mg,收率57％)。LCMS:m/z(ESI):751.3[M+H] +,t R＝1.15min.
步骤六：将7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6,6-二氟-4-甲基-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(330mg,0.46mmol)溶于水(3mL)、甲醇(3mL)和四氢呋喃(3mL)的混合体系中，加入一水合氢氧化锂(96.6mg,2.30mmol)，40℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，直接浓缩，得7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6,6-二氟-4-甲基-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸，无需任何处理直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):737.4[M+H] +,t R＝1.43min.
步骤七：向7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6,6-二氟-4-甲基-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(350mg,0.48mmol)中加入三氟乙酸(5mL)。60℃搅拌1.5小时，LCMS检测完全后，浓缩，粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)得白色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[3,3-二氟-4-(甲基氨基)丁基]氨基}环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(215mg,两步收率81％)。LCMS:m/z (ESI):603.2[M+H] +,t R＝0.78min.
步骤八：向7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[3,3-二氟-4-(甲基氨基)丁基]氨基}环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(215mg,0.36mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(149mg,0.39mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.30mL,1.78mmol)。60℃搅拌16h，LCMS检测反应完全，浓缩，粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)得(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-8,8-二氟-10-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8,8-difluoro-10-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z66,22mg,收率11％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):585.2[M+H] +,t R＝0.87min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.45-8.65(m,2H),7.93(s,1H),7.26(s,1H),4.00-4.38(m,1H),3.96-3.47(m,3H),3.25(s,3H),3.01-2.52(m,3H),2.52-2.09(m,4H),2.08-1.51(m,9H).
实施例30化合物Z65的合成
步骤一：在一个10mL单口瓶中，向(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-8,8-二氟-10-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(14mg,0.02mmol,三氟乙酸盐)的四氢呋喃(3mL)溶液中依次加入多聚甲醛(9mg,0.10mmol)和钛酸四异丙酯(28mg,0.10mmol)。70℃搅拌14小时，将反应液降至25℃，加入氰基硼氢化钠(4mg,0.06mmol)，25℃搅拌2小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)得(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-8,8-二氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8,8-difluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z65,2mg,收率14％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):599.2[M+H] +,t R＝1.31min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.86–8.41(m,2H),8.00(s,1H),7.23(dd,J＝8.0,3.2Hz,1H),4.28–4.06(m,1H),3.92-3.76(m,1H),3.68-3.47(m,2H),3.25(s,3H),2.90-2.77(m,1H),2.46-2.38(m,1H),2.33-2.16(m,5H),2.13–1.94(m,6H),1.90–1.86(m,3H),1.78–1.55(m,3H).
实施例31化合物Z72和Z75的合成
步骤一：在室温条件下向7-溴-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.0g,7.9mmol)的二甲基亚砜(15mL)溶液中加入L-脯氨酸(0.18g,1.6mmol)、碘化亚酮(0.95g,0.8mmol)和甲基亚硫酸钠(1.1g,9.5mmol)。氮气保护下于90℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全后，向反应液中缓慢加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭，并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1～2/1)层析纯化，得到白色固体7-(甲磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.4g,收率70％)。LCMS:m/z(ESI):254.0[M+H] +,t R＝1.10min.
步骤二：在室温下向7-(甲磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.4g,5.5mmol)的N,N二甲基甲酰胺(15mL)溶液中加入N-碘代丁二酰亚胺(1.5g,6.6mmol)。该反应液在氮气保护下在室温搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(30mL)，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝20/1～1:1)层析纯化，得到3-碘-7-(甲磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.8g,收率86％)。LCMS:m/z(ESI):380.0[M+H] +,t R＝1.25min.
步骤三：在室温条件下，向封管中依次加入3-碘-7-(甲磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.8g,4.7mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0.44g,0.47mmol)、2-二环己基膦-2,4,6-三异丙基联苯(0.45g,0.94mmol)、频哪醇硼烷(0.91g,7.1mmol)、三乙胺(1.4g,14.1mmol)和四氢呋喃(15mL)溶液。氮气保护下于90℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液直接旋蒸浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1～2/1)层析纯化，得到白色固体甲基7-(甲磺酰基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊烷-2-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(1.1g,收率61％).LCMS:m/z(ESI):380.2[M+H] +,t R＝1.35min.
步骤四：在室温条件下，向干燥的50mL单口瓶中依次加入甲基7-(甲磺酰基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊烷-2-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(1.1g,2.9mmol)、氯[(正丁基二(1-金刚烷基)膦)-2-(2-氨基联苯)]钯(II)(0.19g,0.29mmol)、磷酸钾(1.8g,8.7mmol)、叔丁基((1S,3S)-3-((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)环戊基)氨基甲酸酯(1.1g,2.9mmol)、四氢呋喃(25mL)和水(5mL)的混合溶液。该反应在氮气保护下于60℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液直接旋蒸浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1～0/1)层析纯化，得到白色固体甲基3-(2-((1S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(0.57g,收率33％).LCMS:m/z(ESI):598.2[M+H] +,t R＝1.38min.
步骤五：室温下，将甲基3-(2-((1S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(570mg,0.95mmol)溶于氯化氢/乙酸乙酯(5mL,4M)和乙酸乙酯(3mL)的混合溶液中，30℃下反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(30mL)，然后用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经过柱机(二氯甲烷/甲醇＝20:1)层析纯化，得到白色固体3-(2-((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(300mg,收率64％)。LCMS:m/z(ESI):498.3[M+H] +,t R＝1.12min.
步骤六：室温下，向3-(2-((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(300mg,0.60mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中依次加入叔丁基(2-(2-碘乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸酯(197mg,0.60mmol)和N,N-二异丙基乙胺(310mg,2.40mmol)，80℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(30mL)，然后用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经过柱机(二氯甲烷/甲醇＝30:1)层析纯化，得到白色固体甲基3-(2-((1S,3S)-3-((2-(2-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)乙氧基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(180mg,收率43％)。LCMS:m/z(ESI):699.4[M+H] +,t R＝1.29min.
步骤七：将甲基3-(2-((1S,3S)-3-((2-(2-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)乙氧基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(180mg,0.26mmol)溶于水(3mL)、甲醇(3mL)和四氢呋喃(3mL)的混合体系中，然后加入一水合氢氧化锂(55mg,1.3mmol)，40℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，将反应液用旋蒸直接旋干，得到粗产品3-(2-((1S,3S)-3-((2-(2-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)乙氧基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(176mg,收率100％)，无需任何纯化直接用于下一步。LCMS:m/z(ESI):685.3[M+H] +,t R＝1.21min.
步骤八：将3-(2-((1S,3S)-3-((2-(2-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)乙氧基)乙基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(176mg,0.26mmol)溶于甲醇(5mL)中，然后加入盐酸/甲醇(5mL,4M)，40℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经 反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)，得到白色固体3-(2-((1S,3S)-3-((2-(甲氨基)乙氧基)乙基)氨基)环戊基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(110mg,收率72％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):585.2[M+H] +,t R＝0.78min.
步骤九：向3-(2-((1S,3S)-3-((2-(甲氨基)乙氧基)乙基)氨基)环戊基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸(110mg,0.16mmol,三氟乙酸盐)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(61mg,0.16mmol)和N,N-二异丙基乙胺(83mg,0.64mmol)，60℃搅拌16h。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)，得到白色固体(4 1S,4 3S)-11-甲基-1 7-(甲基磺酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十二烷-12-酮(4 1S,4 3S)-11-methyl-1 7-(methylsulfonyl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-8-oxa-3,5,11-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one(Z72,55mg,收率51％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):567.2[M+H] +,t R＝1.12min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.59(s,1H),8.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.86(s,1H),7.39(d,J＝8.0,1H),4.48–4.10(m,1H),4.05–3.89(m,1H),3.86-3.70(m,2H),3.68-3.60(m,1H),3.57–3.39(m,3H),3.33(s,3H),3.25-3.16(m,2H),3.16–3.09(m,3H),2.80–2.52(m,1H),2.44–2.25(m,1H),2.24–1.90(m,2H),1.86–1.53(m,2H).
步骤十：在一个10mL单口瓶中，向(4 1S,4 3S)-11-甲基-1 7-(甲基磺酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十二烷-12-酮(30mg,0.044mmol,三氟乙酸盐)的四氢呋喃(10mL)溶液中依次加入多聚甲醛(20mg,0.221mmol)和钛酸四异丙酯(63mg,0.221mmol)，该反应液在70℃搅拌14小时，将反应液降至30℃，加入氰基硼氢化钠(41mg,0.660mmol)，继续在30℃下搅拌2小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)，得到(4 1S,4 3S)-5,11-二甲基-1 7-(甲基磺酰基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十二烷-12-酮(4 1S,4 3S)-5,11-dimethyl-1 7-(methylsulfonyl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-8-oxa-3,5,11-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one(Z75,8mg,收率26％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):581.2[M+H] +,t R＝1.12min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.60(s,1H),8.25(d,J＝8.0Hz,1H),7.82(s,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),4.19–4.03(m,1H),3.98-3.89(m,1H),3.88–3.72(m,3H),3.70-3.52(m,2H),3.49-3.37(m,1H),3.32(s,3H),3.19-3.11(m,5H),2.87–2.82(m,3H),2.61–2.43(m,1H),2.31–2.21(m,3H),1.86-1.73(m,2H).
实施例32化合物Z76、Z77、Z78、Z79的合成
步骤一：在15℃下，向N-[(苄基氧基)羰基]甘氨酸(100.0g,478.49mmol)的四氢呋喃(1000mL)溶液中加入羰基二咪唑(85.3g,526.34mmol)。该反应液在氮气保护下于15℃搅拌反应18小时。然后向反应液中加入氯化镁(22.8g,239.25mmol)、丙二酸单甲酯钾盐(82.2g,526.34mmol)。该反应液在氮气保护下于45℃继续搅拌反应6小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(600mL)，然后用乙酸乙酯(500mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(500mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经过柱机(石油醚/乙酸乙酯＝15/1到3/1)层析纯化，得到无色油状物[(1-甲氧基-1,3-二氧亚基丁-4-基)氨基]甲烷酸苄基酯(85.3g,收率67％)。LCMS:m/z(ESI):220.0[M-44+H] +,t R＝1.58min.
步骤二：在15℃下，向[(1-甲氧基-1,3-二氧亚基丁-4-基)氨基]甲烷酸苄基酯(85.3g,321.89mmol)的四氢呋喃(900mL)溶液中分批加入硼氢化锂(14.0g,643.78mmol)。该反应液在氮气保护下于15℃搅拌反应18小时。TLC检测反应完全后，反应液加入饱和氯化铵溶液(400mL)，然后用乙酸 乙酯(600mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(600mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经过柱机(石油醚/乙酸乙酯＝5/1到1/2)层析纯化，得到无色油状物[(2,4-二羟基丁基)氨基]甲烷酸苄基酯(60.0g,收率78％)。
步骤三：在15℃下，向[(2,4-二羟基丁基)氨基]甲烷酸苄基酯(60.0g,251.05mmol)的二氯甲烷(600mL)溶液中加入咪唑(22.2g,326.37mmol)，然后慢慢滴加叔丁基二苯基氯硅烷(69.0g,251.05mmol)。该反应液在氮气保护下于15℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入饱和氯化铵溶液(400mL)，然后用乙酸乙酯(600mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(600mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经过柱机(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到2/1)层析纯化，得到无色油状物[(7-羟基-2,2-二甲基-3,3-二苯基-4-氧杂-3-硅杂辛-8-基)氨基]甲烷酸苄基酯(88.0g,收率74％)。LCMS:m/z(ESI):402.2[M-77+H] +,t R＝1.74min.
步骤四：将[(7-羟基-2,2-二甲基-3,3-二苯基-4-氧杂-3-硅杂辛-8-基)氨基]甲烷酸苄基酯(88.0g,184.49mmol)溶于二氯甲烷(900mL)中，然后室温下缓慢滴加二乙胺基三氟化硫(38.7g,239.83mmol)。该反应在15℃搅拌2小时。TLC检测反应完全后，反应液加入饱和氯化铵溶液(400mL)，然后用乙酸乙酯(600mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(600mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经过柱机(石油醚/乙酸乙酯＝30/1到5/1)层析纯化，得到无色油状物[(7-氟-2,2-二甲基-3,3-二苯基-4-氧杂-3-硅杂辛-8-基)氨基]甲烷酸苄基酯(20.5g,收率23％)。LCMS:m/z(ESI):502.2[M+Na] +,t R＝1.74min.
步骤五：将[(7-氟-2,2-二甲基-3,3-二苯基-4-氧杂-3-硅杂辛-8-基)氨基]甲烷酸苄基酯(20.5g,42.80mmol)溶于四氢呋喃(150mL)中，于室温下分批加入钠氢(5.1g,60％含量分散在矿物油中,128.40mmol)，然后再缓慢滴加碘甲烷(12.2g,85.60mmol)。该反应在15℃搅拌12小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入饱和氯化铵溶液(200mL)，然后用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经过柱机(石油醚/乙酸乙酯＝30/1到5/1)层析纯化，得到无色油状物(7-氟-2,2-二甲基-3,3-二苯基-9-氮杂-4-氧杂-3-硅杂癸-9-基)甲烷酸苄基酯(16.5g,收率78％)。LCMS:m/z(ESI):516.2[M+Na] +,t R＝1.85min.
步骤六：将(7-氟-2,2-二甲基-3,3-二苯基-9-氮杂-4-氧杂-3-硅杂癸-9-基)甲烷酸苄基酯(10.0g,20.24mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(60mL)的溶液中，然后加入氟化铯(15.4g,101.20mmol)，50℃搅拌8小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入饱和氯化铵溶液(100mL)，然后用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经过柱机(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到2/1)层析纯化，得到无色油状物[(2-氟-4-羟基丁基)(甲基)氨基]甲烷酸苄基酯(4.4g,收率85％)。LCMS:m/z(ESI):256.2[M+H] +,t R＝1.08min.
步骤七：在室温条件下，将[(2-氟-4-羟基丁基)(甲基)氨基]甲烷酸苄基酯(4.4g,17.25mmol)溶于二氯甲烷(40mL)的溶液中，然后依次加入咪唑(1.4g,20.70mmol)、三苯基膦(5.4g,20.70mmol)和单质碘(5.3g,20.70mmol)。该反应在室温下继续搅拌2小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入饱和氯化铵溶液(50mL)，然后用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经过柱机(石油醚/乙酸乙酯＝30/1到10/1)层析纯化，得到无色油状物[(2-氟-4-碘丁基)(甲基)氨基]甲烷酸苄基酯(5.0g,收率79％)。LCMS:m/z(ESI):366.0[M+H] +,t R＝1.44min.
步骤八：在一个250mL单口瓶中，将7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(5.0g,10.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(70 mL)中，然后加入[(2-氟-4-碘丁基)(甲基)氨基]甲烷酸苄基酯(3.7g,10.10mmol)和N,N-二异丙基乙胺(5.2g,40.40mmol)，100℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，直接加入硅胶，油泵旋干拌样，经过柱机(二氯甲烷:甲醇＝100:8)层析纯化得到黄色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6-氟-4-甲基-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(7.0g,收率95％)。LCMS:m/z(ESI):733.2[M+H] +,t R＝1.14min.
步骤九：将7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6-氟-4-甲基-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(7.0g,9.56mmol)溶于水(20mL)、甲醇(20mL)和四氢呋喃(20mL)的混合体系中，然后加入一水合氢氧化锂(1.6g,38.24mmol)，反应在40℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，油泵旋掉其中的溶剂，得到7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6-氟-4-甲基-3-氧亚基-1-苯基-4-氮杂-2-氧杂辛-8-基)氨基]环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(粗品含盐)，不经纯化直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):719.2[M+H] +,t R＝1.09min.
步骤十：将上步粗品，加入三氟乙酸(30mL)，60℃搅拌3小时，LCMS检测完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(70mL/min,25℃,Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),乙腈-水(0.1％三氟醋酸))得7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[3-氟-4-(甲基氨基)丁基]氨基}环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(4.0g,两步收率72％,白色固体)。LCMS:m/z(ESI):585.2[M+H] +,t R＝1.13min.
步骤十一：向7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[3-氟-4-(甲基氨基)丁基]氨基}环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(4.0g,6.85mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(60mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(2.6g,6.85mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.6g,27.4mmol)，该反应液在60℃搅拌16h。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)得到两个异构体化合物。其中一个异构体化合物任意指定为(4 1S,4 3S,8R)-1 7-(二甲基磷酰基)-8-氟-10-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(4 1S,4 3S,8R)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8-fluoro-10-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z76,0.7g,收率18％,三氟乙酸盐)，类白色固体。LCMS:m/z(ESI):567.2[M+H] +,t R＝0.86min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.55(s,1H),8.30-7.70(m,2H),7.30(m,1H),5.69-4.98(m,1H),4.28-3.95(m,1H),3.87-3.76(m,1H),3.69-3.37(m,2H),3.21(s,3H),2.89-2.78(m,1H),2.74-2.64(m,1H),2.48-2.14(m,3H),2.12-1.54(m,11H).另一个异构体化合物任意指定为(4 1S,4 3S,8S)-1 7-(二甲基磷酰基)-8-氟-10-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(4 1S,4 3S,8S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8-fluoro-10-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z77,0.8g,收率21％,三氟乙酸盐)，类白色固体。LCMS:m/z(ESI):567.2[M+H] +,t R＝0.87min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.58(s,1H),8.40(s,1H),7.93(s,1H),7.21(dd,J＝8.0,3.2Hz,1H),5.26-4.96(m,1H),4.32-3.97(m,1H),3.86-3.72(m,1H),3.54-3.31(m,2H),3.22(s,3H),2.91-2.79(m,1H),2.73-2.37(m,2H),2.36-2.16(m,2H),2.12-1.65(m,11H).
步骤十二：向(4 1S,4 3S,8R)-1 7-(二甲基磷酰基)-8-氟-10-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(Z76,220mg,0.39mmol)的四氢呋喃(20mL) 溶液中依次加入多聚甲醛(176mg,1.95mmol)和钛酸四异丙酯(554mg,1.95mmol)，该反应液在70℃搅拌16h。然后将反应冷却至10℃，向反应液中加入氰基硼氢化钠(74mg,1.17mmol)并继续搅拌2小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)，得到(4 1S,4 3S,8R)-1 7-(二甲基磷酰基)-8-氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(4 1S,4 3S,8R)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8-fluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z78,45mg,收率20％,三氟乙酸盐)，类白色固体。LCMS:m/z(ESI):581.2[M+H] +,t R＝0.92min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.57(s,1H),8.24-7.73(m,2H),7.27(s,1H),5.46-4.85(m,1H),4.49-3.80(m,2H),3.80-3.46(m,1H),3.27-3.09(m,4H),2.83-2.66(m,4H),2.58-2.47(m,1H),2.45-2.21(m,3H),2.13-1.65(m,11H).
步骤十三：向(4 1S,4 3S,8S)-1 7-(二甲基磷酰基)-8-氟-10-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(Z77,200mg,0.35mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中依次加入多聚甲醛(158mg,1.75mmol)和钛酸四异丙酯(497mg,1.75mmol)，该反应液在70℃搅拌16h。然后将反应冷却至10℃,向反应液中加入氰基硼氢化钠(66mg,1.05mmol)并继续搅拌2小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸),流速：70mL/min,柱温：25℃)，得到(4 1S,4 3S,8S)-1 7-(二甲基磷酰基)-8-氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(4 1S,4 3S,8S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8-fluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z79,30mg,收率15％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):581.2[M+H] +,t R＝0.92min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.57(s,2H),8.22-7.91(m,1H),7.56-7.05(m,1H),5.27-4.99(m,1H),4.37-4.19(m,1H),4.07-3.82(m,1H),3.74-3.44(m,1H),3.41-3.35(m,1H),3.24(s,3H),2.88-2.64(m,3H),2.57-2.44(m,1H),2.40-2.23(m,3H),2.16-1.64(m,12H).
实施例33化合物Z84的合成
步骤一：在室温下向7-溴-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(5.0g,19.8mmol)的N,N二甲基甲酰胺(30mL)溶液中加入N-碘代丁二酰亚胺(6.7g,29.7mmol)。该反应在氮气保护下于40℃下搅拌2小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入饱和氯化铵溶液(40mL)，然后用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝20/1～1:1)层析纯化，得到类白色固体7-溴-3-碘-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(6.5g,收率87％)。LCMS:m/z(ESI):379.8[M+H] +,t R＝1.32min.
步骤二：在室温条件下，向封管中依次加入7-溴-3-碘-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(6.5g,17.2mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(1.6g,1.7mmol)、2-二环己基膦-2,4,6-三异丙基联苯(0.8g,1.7mmol)、频哪醇硼烷(6.5g,51.6mmol)、三乙胺(5.2g,51.6mmol)和四氢呋喃(60mL)。氮气保护下于90℃搅拌15小时。LCMS检测反应完全后，反应液直接旋蒸浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1～2/1)层析纯化，得到类白色固体7-溴-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.4g,收率37％)。LCMS:m/z(ESI):380.0[M+H] +,t R＝1.48min.
步骤三：在室温条件下，向干燥的100mL单口瓶中依次加入7-溴-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.4g,6.3mmol)、双三苯基磷二氯化钯(0.44g,0.63mmol)、碳酸钾(1.7g,12.6mmol)、叔丁基((1S，3S)-3-((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)环戊基)氨基甲酸酯(2.4g,6.3mmol)、二氧六环(30mL)和水(6mL)的混合溶液。该反应在氮气保护下于90℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液直接旋蒸浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1～0/1) 层析纯化，得到白色固体甲基7-溴-3-(2-(((1S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸盐(1.4g,收率37％)。LCMS:m/z(ESI):598.2[M+H] +,t R＝1.46min.
步骤四：室温下，将甲基7-溴-3-(2-(((1S,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸盐(1.4g,2.3mmol)溶于氯化氢/乙酸乙酯(15mL,4M)和乙酸乙酯(10mL)的混合溶液中，40℃下反应16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，然后用二氯甲烷(40mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经过柱机(二氯甲烷/甲醇＝20:1)层析纯化，得到白色固体甲基3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-溴-1H-吲哚-6-羧酸酯(0.8g,收率69％)。LCMS:m/z(ESI):498.0[M+H] +,t R＝1.08min.
步骤五：室温下，向甲基3-(2-(((1S,3S)-3-氨基环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-溴-1H-吲哚-6-羧酸酯(500mg,1.0mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中依次加入叔丁基(4-碘丁基)(甲基)氨基甲酸酯(344mg,1.1mmol)和N,N-二异丙基乙胺(645mg,5.0mmol)，70℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(30mL)，然后用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经过柱机(二氯甲烷/甲醇＝30:1)层析纯化，得到白色固体甲基7-溴-3-(2-(((1S，3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸盐(60mg,收率9％)。LCMS:m/z(ESI):683.2[M+H] +,t R＝1.32min.
步骤六：将甲基7-溴-3-(2-(((1S,3S)-3-((4-(叔丁氧羰基)(甲基)氨基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸盐(60mg,0.09mmol)溶于水(3mL)、甲醇(3mL)和四氢呋喃(3mL)的混合体系中，然后加入一水合氢氧化锂(19mg,0.45mmol)，40℃搅拌6小时。LCMS检测反应完全后，将反应液用旋蒸直接旋干，得到粗产品7-溴-3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(60mg,收率大于100％)，粗品无需任何纯化直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):669.2[M+H] +,t R＝1.34min.
步骤七：将7-溴-3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(60mg,0.09mmol)溶于甲醇(5mL)中，然后加入盐酸/甲醇(5mL,4M)，20℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速:70mL/min；柱温：25℃)纯化得到白色固体7-溴-3-(2-(((1S，3S)-3-((4-(甲胺基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(30mg,收率59％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):569.3[M+H] +,t R＝8.51min.
步骤八：向7-溴-3-(2-(((1S,3S)-3-((4-(甲胺基)丁基)氨基)环戊基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(30mg,0.053mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(19mg,0.05mmol)和N,N-二异丙基乙胺(32mg,0.25mmol)。该反应于60℃搅拌18小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到白色固体(8S,11S)-20-溴-17-甲基-3-(三氟甲基)-5,7,12,17,22,28-六氮杂五环[17.4.3.1 2,6.1 8,11.0 21,24]二十八-1(23),2(3),4,6(28),19(20),21(24),25-七烯-18-酮(12mg,收率41％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):551.2[M+H] +,t R＝0.87min.
步骤九：在一个50mL单口瓶中，向(8S,11S)-20-溴-17-甲基-3-(三氟甲基)-5,7,12,17,22,28-六氮杂 五环[17.4.3.1 2,6.1 8,11.0 21,24]二十八-1(23),2(3),4,6(28),19(20),21(24),25-七烯-18-酮(12mg,0.022mmol,三氟乙酸盐)的四氢呋喃(5mL)溶液中依次加入多聚甲醛(10mg,0.11mmol)和钛酸四异丙酯(31mg,0.11mmol)，该反应液在60℃搅拌14小时，将反应液降至30℃，加入氰基硼氢化钠(7mg,0.11mmol)，继续在30℃下搅拌4小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到白色固体(8S,11S)-20-溴-12,17-二甲基-3-(三氟甲基)-5,7,12,17,22,28-六氮杂五环[17.4.3.1 2,6.1 8,11.0 21,24]二十八-1(23),2(3),4,6(28),19(20),21(24),25-七烯-18-酮(5mg,收率40％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):567.2[M+H] +,t R＝0.86min.
步骤十：在室温条件下，向微波管中依次加入(8S,11S)-20-溴-12,17-二甲基-3-(三氟甲基)-5,7,12,17,22,28-六氮杂五环[17.4.3.1 2,6.1 8,11.0 21,24]二十八-1(23),2(3),4,6(28),19(20),21(24),25-七烯-18-酮(5mg,0.009mmol)、四三苯基磷钯(2mg,0.002mmol)、氰化锌(3mg,0.027mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液。氮气保护下于150℃微波反应1小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水；流速：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到(4 1S,4 3S)-5,10-二甲基-11-氧杂-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-1 7-甲腈((4 1S,4 3S)-5,10-dimethyl-11-oxo-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphane-1 7-carbonitrile)(Z84,1.6mg,收率35％)。LCMS:m/z(ESI):512.2[M+H] +,t R＝0.85min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.59(d,J＝8.4Hz,1H),8.54(s,1H),7.94(s,1H),7.37(d,J＝8.4Hz,1H),4.15-4.06(m,1H),3.19-3.04(m,5H),2.57-2.45(m,1H),2.41-2.32(m,1H),2.23-2.11(m,4H),2.05-1.90(m,3H),1.76-1.61(m,3H),1.47-1.36(m,3H),1.35-1.29(m,1H).
实施例34化合物Z85，Z86的合成
步骤一：室温下，向4-甲基苯磺酸-7,7-二氟-2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂壬-9-基酯(1.50g,3.81mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入甲胺甲醇溶液(30％含量,20mL)和碘化钠(60mg,0.38mmol)，50℃下搅拌14小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩除去溶剂。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1到10/1)层析纯化，得到无色油状物(4,4-二氟-2,7-二氮杂辛-2-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(1.0g,收率83％)。LCMS:m/z(ESI):253.2[M+H] +,t R＝1.09min.
步骤二：将(4,4-二氟-2,7-二氮杂辛-2-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(1.10g,3.49mmol)溶于四氢呋喃(10mL)，然后依次加入三氟乙酸乙酯(2.48g,17.4mmol)和三乙胺(1.5mL,10.5mmol)，50℃搅拌14小时，LCMS检测反应完全后，向反应液中加入乙酸乙酯(30ml)和水(20mL)，将有机相分离，浓缩。得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝100/1到5/1)层析纯化，得到无色油状物(4,4,9,9,9-五氟-7-甲基-8-氧亚基-2,7-二氮杂壬-2-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(660mg,收率54％)。LCMS:m/z(ESI):249.1[M+H-99] +,t R＝1.35min.
步骤三：将(4,4,9,9,9-五氟-7-甲基-8-氧亚基-2,7-二氮杂壬-2-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(566mg,1.63mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，然后向反应液中加入三氟乙酸(1.0mL)，25℃搅拌3小时，LCMS检测反应完全后，向反应液中加入乙酸乙酯(10mL)和饱和的碳酸氢钠溶液(5mL)，浓缩有机相得到粗品为无色油状物N-[3,3-二氟-4-(甲基氨基)丁基]-2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺(400mg,收率99％)，可直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):249.2[M+H] +,t R＝0.89min.
步骤四：将N-[3,3-二氟-4-(甲基氨基)丁基]-2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺(399mg,1.61mmol)溶于甲醇(5mL)，然后依次加入{[(3S)-1-氧亚基环戊-3-基]氨基}甲烷酸苄基酯(562mg,2.41mmol)、4A分子筛(100mg)、冰醋酸(2滴)，25℃搅拌2小时后，再向反应液中加入氰基硼氢化钠(303mg,4.82mmol)，继续在25℃下搅拌14小时。LCMS检测反应完全后，过滤除去固体杂质，得到的粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到无色油状物{[(3S)-1-(4,4,9,9,9-五氟-7-甲基-8-氧亚基-2,7-二氮杂壬-2-基)环戊-3-基]氨基}甲烷酸苄基酯(380mg,收率50％)。LCMS:m/z(ESI):466.4[M+H] +,t R＝1.33min.
步骤五：将{[(3S)-1-(4,4,9,9,9-五氟-7-甲基-8-氧亚基-2,7-二氮杂壬-2-基)环戊-3-基]氨基}甲烷酸苄基酯(330mg,2.21mmol)溶于甲醇(10mL)中，向反应液中加入钯碳(30mg,10％含量,55％含水)、冰醋酸(30mg,0.50mmol)，置换氢气，25℃搅拌2小时，TLC检测反应完全后，过滤，浓缩有机相得到粗品为无色油状N-(3,3-二氟-4-{[(3S)-3-氨基环戊基](甲基)氨基}丁基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺(310mg,收率96％)，可直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):332.2[M+H] +,t R＝0.99min.
步骤六：将N-(3,3-二氟-4-{[(3S)-3-氨基环戊基](甲基)氨基}丁基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺(310mg,0.94mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4ml)，向反应液中依次加入3-[2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(424mg,0.98mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.77mL,4.68mmol)，反应在氮气氛围下，130℃搅拌5小时，LCMS检测反应完全后，向反应液加水(10mL)，然后用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。得到的粗品反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02),流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到白色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(4,4,9,9,9-五氟-7-甲基-8-氧亚基-2,7-二氮杂壬-2-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(125mg,收率18％)。LCMS:m/z(ESI):727.4[M+H] +,t R＝1.38min.
步骤七：将7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(4,4,9,9,9-五氟-7-甲基-8-氧亚基-2,7-二 氮杂壬-2-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(125mg,0.17mmol)溶于水(1mL)、甲醇(3mL)和四氢呋喃(3mL)的混合溶剂中，加入氢氧化锂(1个结晶水,300mg,7.09mmol)，40℃搅拌14小时。LCMS检测反应完全后，将反应液浓缩，得到的粗品反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％碳酸氢铵)；流速：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到白色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(4,4-二氟-2,7-二氮杂辛-2-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(60mg,收率57％)。LCMS:m/z(ESI):617.4[M+H] +,t R＝1.13min.
步骤八：向7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(4,4-二氟-2,7-二氮杂辛-2-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(30mg,0.05mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(4mL)溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(37.7mg,0.29mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(74mg,0.20mmol)，60℃搅拌14小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％碳酸氢铵)；流速：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-7,7-二氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-7,7-difluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z85,1.51mg,收率5.2％)，白色固体。LCMS:m/z(ESI):599.2[M+H] +,t R＝0.91min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.65(d,J＝7.6Hz,1H),8.51(s,1H),8.02(d,J＝5.6Hz,1H),7.32(dd,J＝8.0,3.6Hz,1H),4.31–4.16(m,1H),3.29–3.18(m,3H),3.13(s,3H),2.88–2.77(m,1H),2.70–2.53(m,1H),2.47–2.08(m,8H),2.05–1.93(m,4H),1.91–1.81(m,3H),1.65–1.52(m,2H).
(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷酰基)-7,7-二氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-7,7-difluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z86,1.27mg,收率4.4％)。LCMS:m/z(ESI):599.3[M+H] +,t R＝0.93min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.53(s,1H),8.16–8.12(m,1H),7.83(s,1H),7.24(dd,J＝8.0,3.2Hz,1H),3.74–3.68(m,1H),3.12(s,3H),2.96–2.77(m,2H),2.68–2.41(m,4H),2.32(s,3H),2.06–1.84(m,9H),1.76–1.58(m,4H).
实施例35化合物Z87,Z88的合成
步骤一：室温下，向(2-氟-4-碘丁基)(甲基)氨基甲酸苄酯(2.07g,5.67mmol)的甲醇(20mL)溶液中加入甲胺甲醇溶液(30％含量,5.87g,56.7mmol)，50℃下搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩除去溶剂。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1到20/1)层析纯化，得到无色油状物(4-氟-2,7-二氮杂辛基-2-基)甲酸苄酯(1.50g,收率98％)。LCMS:m/z(ESI):269.2[M+H] +,t R＝1.17min.
步骤二：将(4-氟-2,7-二氮杂辛基-2-基)甲酸苄酯(1.50g,5.59mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，然后依次加入4-二甲氨基吡啶(0.07g,0.56mmol)、二碳酸二叔丁酯(1.46g,6.71mmol)，25℃搅拌14小时，LCMS检测反应完全后，反应液浓缩除去溶剂。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1到20/1)层析纯化，得到无色油状物(8-氟-2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5,10-二氮杂-3-氧杂十一烷-10-基)甲烷酸苄基酯(1.20g,收率58％)。LCMS:m/z(ESI):269.2[M+H-99] +,t R＝1.71min.
步骤三：将(8-氟-2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5,10-二氮杂-3-氧杂十一烷-10-基)甲烷酸苄基酯(1.20g,3.26mmol)溶于甲醇(20mL)中，向反应液中加入钯碳(120mg,10％含量,55％含水)。置换氢气，25℃搅拌14小时，LCMS检测反应完全后，过滤，浓缩有机相得到粗品为无色油状物(5-氟-2,7-二氮杂辛-2-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(0.70g,收率92％)，可直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI): 235.2[M+H] +,t R＝1.08min.
步骤四：将(5-氟-2,7-二氮杂辛-2-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(600mg,2.56mmol)溶于甲醇(15mL)，依次加入{[(3S)-1-氧亚基环戊-3-基]氨基}甲烷酸苄基酯(597mg,2.56mmol)、冰醋酸(30mg,0.50mmol)，25℃搅拌2小时，向反应液中加入氰基硼氢化钠(483mg,7.68mmol)，继续在25℃下搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，过滤，旋干，得到的粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到白色固体{7-[(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}环戊基]-5-氟-2,7-二氮杂辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(P1,240mg,收率20.7％)。LCMS:m/z(ESI):452.3[M+H] +,t R＝3.21min.{7-[(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}环戊基]-5-氟-2,7-二氮杂辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(P2,360mg,收率31.1％)。LCMS:m/z(ESI):452.3[M+H] +,t R＝3.22min.
步骤五：将3-氨基环戊-1-醇盐酸盐(10.0g,72.7mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，向反应液中加入苯甲氧羰酰琥珀酰亚胺(21.7g,87.2mmol)、三乙胺(14.7g,145mmol)。氮气氛围下，25℃搅拌14小时，LCMS检测反应完全，向反应液加水(100mL)，二氯甲烷(200mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1到20/1)层析纯化浓缩有机相得到无色油状物[(3-羟基环戊基)氨基]甲烷酸苄基酯(9.0g,收率53％)。LCMS:m/z(ESI):236.2[M+H] +,t R＝1.26min.
步骤六：-78℃下，向二氯甲烷(20mL)中依次加入二甲基亚砜(1.69g,21.7mmol)和草酰氯(1.38g,10.8mmol)，该反应液在-78℃搅拌1h。反应液中加入[(3-羟基环戊基)氨基]甲烷酸苄基酯(1.7g,7.23mmol)，反应液继续反应3h，反应液中加入三乙胺(3.66g,36.1mmol)。LCMS检测反应完全，向反应液加水(30mL)，二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1到30/1)层析纯化浓缩有机相得到无色油状物[(3-氧亚基环戊基)氨基]甲烷酸苄基酯(1.0g,收率59％)。LCMS:m/z(ESI):256.1[M+Na] +,t R＝1.00min.
步骤七：将{7-[(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}环戊基]-5-氟-2,7-二氮杂辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(P1,1.00g,2.21mmol)溶于甲醇(20mL)中，向反应液中加入钯碳(100mg,10％含量,55％含水)、冰醋酸(30.0mg,0.50mmol)，反应在氢气氛围下，25℃搅拌14小时。LCMS检测反应完全后，过滤除去固体杂质，浓缩有机相得到粗品为无色油状物{7-[(3S)-3-氨基环戊基]-5-氟-2,7-二氮杂辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(0.75g,90％纯度,收率96％)，可直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):318.4[M+H] +,t R＝0.99min.
步骤八：将{7-[(3S)-3-氨基环戊基]-5-氟-2,7-二氮杂辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(0.75g,90％纯度,2.13mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，向反应液中加入N,N-二异丙基乙胺(1.37g10.63mmol)、3-[2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(1.01g,2.34mmol)。氮气氛围下，130℃搅拌5小时，TLC检测反应完全后，向反应液加水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1到20/1)层析纯化浓缩有机相得到白色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(8-氟-2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5,10-二氮杂-3-氧杂十一烷-10-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(1.01g,收率67％)。
步骤九：将7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(8-氟-2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5,10-二氮杂-3-氧杂十一烷-10-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(1.01g,1.42mmol) 溶于水(5mL)、甲醇(5mL)和四氢呋喃(5mL)的混合体系中，然后加入氢氧化锂(1个结晶水,0.30g,7.09mmol)，40℃搅拌5小时。LCMS检测反应完全后，此反应液不经任何处理，直接应用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):699.4[M+H] +,t R＝0.93min.
步骤十：向步骤七的反应液中加入氯化氢/甲醇溶液(10mL,4M)，体系在40℃搅拌5小时。LCMS检测反应完全后，直接将溶剂旋干，所得粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％碳酸氢铵)；流动相：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(4-氟-2,7-二氮杂辛-2-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(530mg,收率62％)呈白色固体。LCMS:m/z(ESI):599.2[M+H] +,t R＝0.73min.
步骤十一：向7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(4-氟-2,7-二氮杂辛-2-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(100mg,0.17mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(8mL)溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(108mg,0.84mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(254mg,0.67mmol)，该反应液在60℃搅拌14h。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流动相：70mL/min；柱温：25℃)，得到(4 1S)-1 7-(二甲基磷酰基)-7-氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮((4 1S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-7-fluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one)(Z87,12.22mg；收率12.4％,三氟乙酸盐)。LCMS:m/z(ESI):581.3[M+H] +,t R＝0.85min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.70–8.16(m,2H),7.88(s,1H),7.18(dd,J＝7.6,2.4Hz,1H),4.34–4.08(m,1H),3.96–3.80(m,1H),3.35–3.25(m,1H),3.14–3.05(m,2H),3.04(s,3H),2.96–2.81(m,1H),2.71(s,3H),2.48–2.36(m,1H),2.30–2.12(m,3H),2.06–1.46(m,11H).
(4 1S)-1 7-(二甲基磷酰基)-7-氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮((4 1S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-7-fluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one)(Z88,8.24mg；三氟乙酸盐,收率8.34％)。LCMS:m/z(ESI):581.2[M+H] +,t R＝0.88min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.63–8.39(m,2H),7.92(s,1H),7.21(dd,J＝8.0,3.2Hz,1H),4.36–4.20(m,1H),3.98–3.86(m,1H),3.55–3.43(m,1H),3.13–3.00(m,5H),2.72–2.55(m,4H),2.49–2.40(m,1H),2.28–1.69(m,13H),1.63–1.44(m,1H).
实施例36化合物Z89,Z90的合成
步骤一：将{7-[(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}环戊基]-5-氟-2,7-二氮杂辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(P2,530mg,1.17mmol)溶于甲醇(10mL)中，然后向反应液中加入钯碳(53mg,10％含量,55％含水)、冰醋酸(30mg,0.50mmol)。氢气氛围下，25℃搅拌14小时，LCMS检测反应完全后，过滤除去固体杂质，浓缩有机相得到粗品为无色油状物{7-[(3S)-3-氨基环戊基]-5-氟-2,7-二氮杂辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(380mg,90％纯度,收率92％)，可直接用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):318.3[M+H] +,t R＝1.01min.
步骤二：将{7-[(3S)-3-氨基环戊基]-5-氟-2,7-二氮杂辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(380mg,90％纯度,1.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中，向反应液中加入N,N-二异丙基乙胺(696mg 5.39mmol)、3-[2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(465mg,1.08mmol)。氮气氛围下，130℃搅拌5小时，LCMS检测反应完全后，向反应液加水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1到20/1)层析纯化得到白色固体7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(8-氟-2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5,10-二氮杂-3-氧杂十一烷-10-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(440mg,收率57％)。LCMS:m/z(ESI):713.3[M+H] +,t R＝1.34min.
步骤三：将7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(8-氟-2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5,10-二氮杂-3-氧杂十一烷-10-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(330mg,0.46mmol)溶于水(3mL)、甲醇(3mL)和四氢呋喃(3mL)的混合体系中，加入氢氧化锂(1个结晶水,97mg,2.32mmol)，反应在40℃搅拌5小时。LCMS检测反应完全后，此反应液不经任何处理，直接应用于下一步反应。LCMS:m/z(ESI):699.3[M+H] +,t R＝1.22min.
步骤四：向步骤三的反应液中加入氯化氢/甲醇溶液(8mL,4M)，体系在40℃搅拌5小时。LCMS检测反应完全后，直接将溶剂旋干，得到的粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％碳酸氢铵)；流速：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到7-[二甲基(氧亚基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(4-氟-2,7-二氮杂辛-2-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(190mg,收率74％)，呈白色固体。LCMS:m/z(ESI):599.4[M+H] +,t R＝ 0.72min.
步骤五：向7-[二甲基(氧亚基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(4-氟-2,7-二氮杂辛-2-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(100mg,0.17mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(8mL)溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(172mg,1.33mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(254mg,0.67mmol)，该反应液在60℃搅拌14小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18,50*250mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％三氟醋酸)；流速：70mL/min；柱温：25℃)纯化得到产物(P1与P2,三氟乙酸盐)，分别将得到的产物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和的碳酸氢钠溶液和饱和的食盐水洗涤，将有机相浓缩，冻干得到(4 1S)-1 7-(二甲基磷酰基)-7-氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(4 1S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-7-fluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z89,17.0mg；收率17.21％)。LCMS:m/z(ESI):581.1[M+H] +,t R＝0.73min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.55(s,1H),8.10–7.90(m,1H),7.80(s,1H),7.31–7.20(m,1H),4.73–4.47(m,1H),3.92–3.59(m,1H),3.29–2.98(m,5H),2.84(m,2H),2.58–2.46(m,1H),2.38–2.17(m,4H),2.16–1.95(m,5H),1.92–1.72(m,6H),1.67–1.54(m,2H).
(4 1S)-1 7-(二甲基磷酰基)-7-氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮((4 1S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-7-fluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one)(Z90,15.0mg；收率15.18％)。LCMS:m/z(ESI):581.3[M+H] +,t R＝0.76min. 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ11.76(s,1H),8.60–8.45(m,2H),8.00–7.90(m,1H),7.13(s,1H),6.00–5.50(br,1H),4.55–4.45(s,1H),3.15–3.10(m,2H),2.99–2.90(m,3H),2.60–2.20(m,6H),2.13–1.82(m,15H).
实施例37化合物Z91的合成
步骤一：在25mL微波管中，依次加入6-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.0g,6.55mmol)、N-甲基吡咯烷酮(15mL)、氰化锌(0.77g,6.55mmol)、四(三苯基膦)钯(0.76g,0.66mmol)和锌粉(0.21g,3.28mmol)，微波150℃反应6小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝1.5/1)层析纯化，得到类白色固体1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲腈(250mg,收率26％)。LCMS:m/z(ESI):144.2[M+H] +,t R＝1.20min.
步骤二：向1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲腈(1.20g,8.38mmol)的N,N二甲基甲酰胺(25mL)溶液中加入N-碘代丁二酰亚胺(2.26g,10.1mmol)。氮气保护下在45℃搅拌2小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(50mL)，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)层析纯化，得到褐色固体3-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲腈(1.87g,收率83％)。LCMS:m/z(ESI):270.0[M+H] +,t R＝1.49min.
步骤三：室温下向3-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲腈(1.87g,6.95mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液中加入三乙胺(1.76g,17.4mmol)、4-二甲氨基吡啶(0.17g,1.39mmol)和二碳酸二叔丁酯(2.28g,10.4mmol)。室温搅拌14小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(50mL)，然后用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)层析纯化，得到黄色固体6-氰基-3-碘吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(1.90g,收率74％)。LCMS:m/z(ESI):314.0[M+H-56] +,t R＝1.77min.
步骤四：室温下向封管中依次加入6-氰基-3-碘吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(1.90g,5.15mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(470mg,0.515mmol)、四氢呋喃(20mL)、2-二环己基磷-2′,4′,6′- 三异丙基联苯(242mg,0.515mmol)、三乙胺(1.56g,15.4mmol)和4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1.98g,15.4mmol)。氮气保护下90℃搅拌14小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(20mL)，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)层析纯化，得到白色固体6-氰基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(1.30g,收率68％)。LCMS:m/z(ESI):314.4[M+H-56] +,t R＝1.61min.
步骤五：室温下向6-氰基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(1.30g,3.52mmol)的四氢呋喃(13mL)溶液中，加入{[(1S,3S)-3-{[4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]氨基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(1.34g,3.52mmol)、氯[(正丁基二(1-金刚烷基)膦)-2-(2-氨基联苯)]钯(II)(0.24g,0.352mmol)和磷酸钾(2.24g,10.6mmol)的水溶液(3mL)。该反应液在氮气保护下60℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(20mL)，然后用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)层析纯化，得到类白色固体6-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-({[(2-甲基丙-2-基)氧基]羰基}氨基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(1.20g,收率58％)。LCMS:m/z(ESI):588.2[M+H] +,t R＝1.88min.
步骤六：室温下向6-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-({[(2-甲基丙-2-基)氧基]羰基}氨基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(700mg,1.20mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入三氟乙酸(2mL)，反应液在25℃反应2小时。LCMS检测反应完全后，用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)调节pH至8左右，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经硅胶柱层析(水/甲醇＝5:1)纯化，得到黄色固体6-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(450mg,收率98％)。LCMS:m/z(ESI):388.2[M+H] +,t R＝1.18min.
步骤七：室温下向6-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(300mg,0.774mmol)的N-甲基吡咯烷酮(5mL)中，依次加入(1-碘-6-氮杂-3-氧杂庚-6-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(255mg,0.77mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.384mL,2.32mmol)，反应在80℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(30mL)，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝10:1)层析纯化，得到黄色油状物(1-{[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]氨基}-6-氮杂-3-氧杂庚-6-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(75mg,收率17％)。LCMS:m/z(ESI):589.4[M+H] +,t R＝1.45min.
步骤八：室温下向(1-{[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]氨基}-6-氮杂-3-氧杂庚-6-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(130mg,0.221mmol)的甲醇(5mL)溶液中，加入多聚甲醛(100mg,1.11mmol)、醋酸(0.1mL)、4A分子筛(130mg)，氮气保护下25℃搅拌2小时。再向反应液中加入氰基硼氢化钠(41.7mg,0.663mmol)继续反应14小时。LCMS检测反应完全后，直接过滤浓缩。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝10:1)层析纯化，得到黄色油状物{8-[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]-2,8-二氮杂-5-氧杂壬-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(100mg,收率75％)。LCMS:m/z(ESI):603.4[M+H] +,t R＝1.10min.
步骤九：室温下向{8-[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基] 氨基}环戊基]-2,8-二氮杂-5-氧杂壬-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(100mg,0.167mmol)的醋酸(4mL)溶液中加入浓盐酸(2mL)，反应液在120℃下搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，直接将溶剂旋干，得到粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18-08,25*150mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％NH 4HCO 3)；流速：25mL/min；柱温：25℃)纯化得到3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,8-二氮杂-5-氧杂壬-2-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲酸(30mg,收率35％)。LCMS:m/z(ESI):522.2[M+H] +,t R＝1.06min.
步骤十：向3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,8-二氮杂-5-氧杂壬-2-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲酸(15mg,0.029mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中，依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.048mL,0.29mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(54.7mg,0.144mmol)，该反应液在60℃搅拌4h。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18-08,25*150mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％NH 4HCO 3)；流速：25mL/min；柱温：25℃)纯化得到(4 1S,4 3S)-5,11-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(3,6)-吡咯并[2,3-b]吡啶-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十二烷-12-酮(4 1S,4 3S)-5,11-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-8-oxa-3,5,11-triaza-1(3,6)-pyrrolo[2,3-b]pyridina-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one(Z91,2.5mg,收率17％)。LCMS:m/z(ESI):504.2[M+H] +,t R＝0.77min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.66(d,J＝8.0Hz,1H),8.50(s,1H),7.92(s,1H),7.41(d,J＝8.0Hz,1H),4.31–4.13(m,1H),3.71–3.36(m,5H),3.22(m,2H),3.15(s,3H),2.72–2.56(m,1H),2.46–2.26(m,2H),2.16(s,3H),2.14–2.08(m,1H),2.00(m,1H),1.70–1.53(m,3H).
实施例38化合物Z92的合成
步骤一：室温下，向3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲腈(220mg,0.57mmol)的N-甲基吡咯烷酮(5mL)中，依次加入[(4-碘丁基)(甲基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(178mg,0.57mmol)和N,N-二异丙基乙胺(147mg,1.14mmol)。130℃搅拌16小时，LCMS检测反应完全后，反应液加水(30mL)，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝10:1)层析纯化，得到黄色油状物[(4-{[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]氨基}丁基)(甲基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(70.0mg,收率22％)。LCMS:m/z(ESI): 573.4[M+H] +,t R＝1.45min.
步骤二：室温下，向[(4-{[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]氨基}丁基)(甲基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(120mg,0.21mmol)的甲醇(6mL)溶液中，加入多聚甲醛(94.0mg,1.05mmol)、醋酸(30.0mg)、4A分子筛(120mg)，反应在氮气保护下25℃搅拌2.0小时。再向反应液中加入氰基硼氢化钠(40.0mg,0.63mmol)继续反应14小时。LCMS检测反应完全后，直接过滤浓缩。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝10:1)层析纯化，得到黄色油状物{7-[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]-2,7-二氮杂辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(120mg,收率98％)。LCMS:m/z(ESI):587.0[M+H] +,t R＝1.13min.
步骤三：在室温下，向{7-[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]-2,7-二氮杂辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(110mg,0.19mmol)的醋酸(4mL)溶液中加入浓盐酸(2mL)，120℃搅拌14小时。LCMS检测反应完全后，直接将溶剂旋干，得到粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18-08,25*150mm,10um(PARP-02)；流动相乙腈-水(0.1％NH 4HCO 3)；流速：25mL/min；柱温：25℃)纯化得到白色固体3-(2-{[(1S,3S)-3-{[4-(甲基氨基)丁基]氨基}环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲酸(54mg,收率57％)。LCMS:m/z(ESI):506.2[M+H] +,t R＝0.96min.
步骤四：向3-(2-{[(1S,3S)-3-{[4-(甲基氨基)丁基]氨基}环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲酸(40.0mg,0.08mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中，依次加入N,N-二异丙基乙胺(51.0mg,0.40mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(36.0mg,0.10mmol)，该反应液在60℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液浓缩，得到的粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18-08,25*150mm,10um(PARP-02)；流动相乙腈-水(0.1％NH 4HCO 3)；流速：25mL/min；柱温：25℃)纯化得到(4 1S,4 3S)-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吡咯并[2,3-b]吡啶-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-pyrrolo[2,3-b]pyridina-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one(Z92,4.70mg,收率12％)。LCMS:m/z(ESI):488.2[M+H] +,t R＝0.77min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.77(d,J＝8.0Hz,1H),8.56(s,1H),8.01(s,1H),7.44(d,J＝8.0Hz,1H),4.26–4.07(m,1H),3.33–3.27(m,1H),3.17(s,3H),3.14–2.98(m,2H),2.55–2.27(m,2H),2.25–2.10(m,4H),2.09–1.84(m,3H),1.80–1.63(m,3H),1.54–1.43(m,1H),1.42–1.27(m,2H).
实施例39化合物Z93的合成
步骤一：室温下，向6-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-氨基环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(2.0g,5.16mmol)的N-甲基吡咯烷酮(20mL)溶液中，依次加入4-甲基苯磺酸-7,7-二氟-2,2,5-三甲基-4-氧亚基-5-氮杂-3-氧杂壬-9-基酯(2.44g,6.20mmol)、碘化钠(0.15g,1.03mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.56mL,15.49mmol)，反应在80℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全后，反应液加水(50mL)，乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并的有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝10:1)层析纯化，得到黄色油状物[(2,2-二氟-4-{[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]氨基}丁基)(甲基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(480mg,收率15％)。LCMS:m/z(ESI):609.5[M+H] +,t R＝1.33min.
步骤二：室温下，向[(2,2-二氟-4-{[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]氨基}丁基)(甲基)氨基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(480mg,0.789mmol)的甲醇(5mL)溶液中，加入多聚甲醛(118mg,3.95mmol)、醋酸(0.1mL)、4A分子筛(480mg)，反应在氮气保护下25℃搅拌2.0小时。再向反应液中加入氰基硼氢化钠(149mg,2.37mmol)继续反应14小时。LCMS检测反应完全后，直接过滤浓缩。得到的粗品经硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝10:1)层析纯化，得到黄色油状物{7-[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]-4,4-二氟-2,7-二氮杂辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(330mg,收率67％)。LCMS:m/z(ESI):623.3[M+H] +,t R＝1.12min.
步骤三：在室温下，向{7-[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基]-4,4-二氟-2,7-二氮杂辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(330mg,0.53mmol)的醋酸(2mL)溶液中加入浓盐酸(1mL)，反应液在120℃下搅拌5小时。LCMS检测反应完全后，直接将 溶剂旋干，得到粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18-08,25*150mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％NH 4HCO 3)；流速：25mL/min；柱温：25℃)纯化得到白色固体3-(2-{[(1S,3S)-3-(5,5-二氟-2,7-二氮杂辛-2-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲酸(220mg,收率76％)。LCMS:m/z(ESI):542.2[M+H] +,t R＝1.05min.
步骤四：向3-(2-{[(1S,3S)-3-(5,5-二氟-2,7-二氮杂辛-2-基)环戊基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲酸(100mg,0.19mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中，依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.15mL,0.92mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(280mg,0.74mmol)，该反应液在60℃搅拌16小时。将反应液浓缩，得到的粗品经反相制备HPLC(色谱柱：Ultimate XB-C18-08,25*150mm,10um(PARP-02)；流动相：乙腈-水(0.1％NH 3·H 2O)；流速：25mL/min；柱温：25℃)纯化得到(4 1S,4 3S)-8,8-二氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮杂-1(3,6)-吡咯并[2,3-b]吡啶-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-环戊烷环十一烷-11-酮((4 1S,4 3S)-8,8-difluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-pyrrolo[2,3-b]pyridine-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one)(Z93,2.50mg,收率2.6％)。LCMS:m/z(ESI):524.4[M+H] +,t R＝1.10min. 1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ9.06–8.61(m,1H),8.56–8.23(m,1H),8.20–7.91(m,1H),7.71–7.32(m,1H),4.77–4.18(m,2H),4.13–3.38(m,2H),3.29–3.17(m,3H),3.15–2.38(m,3H),2.34–2.15(m,3H),2.13–1.82(m,5H),1.79–1.48(m,2H).
下表所示化合物可根据上述实施例的合成方法制备或根据已有文献的方法进行合成得到。
表A
测试例1：CDK激酶活性的体外抑制实验
CDK2/Cyclin E1购自佰翱得；批号：20150228-BP469/477/691；CDK7/Cyclin H/MAT1购自佰翺得； 批号：20190326-BP487/492/479；CDK9/Cyclin T1购自佰翺得；批号：20200727-BP488/792/691；CDK12/Cyclin K购自佰翺得；批号:20200526-BP1642/1648/691；MES购自BioRoYee(宝如亿)；批号：67GR9637；BSA购自Aladdin；批号：H1601024；ATP购自VWR；批号：97061-226；EDTA购自国药集团；批号：20200521；星胞菌素购自Selleckchem；批号：S1421。
本实验用于测定化合物对CDK2、CDK7、CDK9和CDK12激酶活性的抑制作用。本发明所进行的激酶反应在384孔板中进行测定，最终测定体积是16μl，反应温度为27℃。激酶的浓度由优化实验决定。具体实验过程如下：
1)激酶溶液配置：
激酶溶液(CDK2/Cyclin E1):激酶稀释于测定缓冲液(20mM MES pH 6.75，0.01％Tween 20，0.05mg/mL BSA，2mM MgCl 2)中得到相应2.4×浓度的酶溶液。
激酶溶液(CDK7/Cyclin H/MAT1):激酶稀释于测定缓冲液(20mM MES pH 6.75，0.01％Tween 20，0.05mg/mL BSA，6mM MgCl 2)中得到相应2.4×浓度的酶溶液。
激酶溶液(CDK9/Cyclin T1):激酶稀释于测定缓冲液(20mM MES pH 6.75，0.01％Tween 20，0.05mg/mL BSA，10mM MgCl 2)中得到相应2.4×浓度的酶溶液。
激酶溶液(CDK12/Cyclin K):激酶稀释于测定缓冲液(80mM MES pH 6.5，0.01％Tween 20，0.05mg/mL BSA，10mM MgCl 2)中得到相应2.4×浓度的酶溶液。
2)化合物溶液配置：化合物以10mM的浓度溶于二甲基亚砜(DMSO)中，使用时化合物用DMSO稀释至25nM到500μM的10个浓度梯度，分别8.3倍稀释于超纯水中，得到6X浓度的化合物溶液。
3)多肽底物及ATP溶液配置：多肽底物及ATP稀释于测定缓冲液中，得到2.4×浓度的多肽底物及ATP混合溶液。
4)激酶反应过程：
将2ul测试化合物溶液，5ul多肽底物及ATP混合溶液与5ul酶溶液混合27℃孵育(CDK2为60分钟，CDK7为70分钟，CDK9为70分钟，CDK12为280分钟)，然后通过向每种样品中加入4ul浓度为150mM的EDTA来终止反应。以含有20μM星胞菌素的测定缓冲液代替化合物溶液作为100％抑制，以DMSO代替化合物溶液作为0％抑制。每个试验至少2个平行对照。
CDK2测定中试剂的最终浓度：ATP为100μM；多肽底物(5-FAM-YSPTSPSYSPTSPSYSPTSPSKKKK)为2μM；CDK2/Cyclin E1为0.5nM；
CDK7测定中试剂的最终浓度：ATP为50μM；多肽底物(5-FAM-YSPTSPSYSPTSPSYSPTSPSKKKK)为2μM；CDK7/Cyclin H/MAT1为3nM；
CDK9测定中试剂的最终浓度：ATP为50μM；多肽底物(FITC-Ahx-GSRTPMY-NH2)为2μM；CDK9/Cyclin T1为8nM；
CDK12测定中试剂的最终浓度：ATP为30μM；多肽底物(FITC-Ahx-GSRTPMY-NH2)为2μM；CDK12/Cyclin K为50nM。
5)数据计算和分析：在Caliper EZ Reader II上通过荧光底物和磷酸化产物进行电泳分离来对反应混合物进行分析。数据使用GraphPad Prism version 9.0进行计算，IC 50值通过使用剂量反应曲线的非线性回归模型调整得到。计算公式：Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))。其中，X为剂量或浓度的log值(log of dose or concentration)；Y为随着X的增加而增加的抑制率(％inhibition,increasing as x increases)；Top为最大响应；Bottom基线响应；HillSlope为曲线斜率。由于CDK7/Cyclin H/MAT1激酶活性实验的检测下限限制，本发明化合物对的CDK7激酶活性抑制已达实验检测下限， IC 50不能准确反映化合物的激酶活性抑制能力，我们采用表面等离子体共振(SPR)方法来检测化合物的结合亲和力K D。化合物对CDK2,CDK9,CDK12激酶活性的抑制作用，以Km ATP条件下检测拟合得到的IC 50用于计算K i(Cheng and Prusoff,Biochem.Pharmacol.,22(23)3099-3108,1973)，换算公式如下:IC 50＝K i(1+[底物/K m])+[酶/2]。本发明示例化合物的结果如表1所示。
表1
编号 CDK7/CyclinH/MAT1 IC 50assay(nM) CDK2 Ki CDK9 Ki CDK12 Ki
Z1 11.0 153.7 52.25 62.65
Z2 4.58 9.8 10.6 22.74
Z5 - 25.65 95.55 26.06
Z7 - 33.4 216.8 61.35
Z65 - 30.33 257.7 61.6
Z79 - 23.29 134.25 92.8
测试例2：CDK7/Cyclin H表面等离子体共振(SPR)测定方法
CDK7/Cyclin H购自佰翱得；批号：20200309-BP487/492；MES缓冲液购自BioRoYee；批号：67GR9637；CM5传感芯片购自Cytiva；批号：10305527；HEPES缓冲液购自Cytiva；批号：32349。
本实验采用Biacore S200表面等离子共振设备(GE Healthcare)测试了CDK7/Cyclin H二聚体和化合物的动力学和亲和力参数。
在pH 6.5的10mM MES缓冲液条件下，浓度为50μg/mL的CDK7/Cyclin H二聚体在5μL/min流速下被氨基偶联至CM5传感芯片。在600秒内目的蛋白被固定到芯片通道上，一般情况下达到7000-10000响应值。在具有150mM NaCl、0.05％表面活性剂P20和2％DMSO的pH7.4的10mM HEPES缓冲液中把化合物2倍梯度稀释5步达到0.6-10nM浓度范围。每个化合物浓度循环都以100μL/min，180秒接触时间和1800秒解离时间被运行。对于每个化合物，0nM化合物对照和参比通道的结合都被扣减来移除背景信号和归一化数据。使用Biacore S200评价软件和动力学模型对化合物滴定整体拟合。最优化拟合数据，测定CDK7/Cyclin H结合速率和解离速率参数，用以下的等式来计算化合物亲和力参数K D。K D(M)＝k off(s -1)/K on(M -1s -1)；其中，K on(ka)是结合速率；K off(kd)是解离速率；s -1(每秒)和M -1s -1(每摩尔每秒)是k off和k on的单位。基于脱靶CDK的K i值相对于CDK7的直接化合物结合K D(通过SPR测量)的比率，根据以下等式确定CDK7相对于CDK2、CDK9或CDK12的化合物选择性。选择性＝K i,脱靶/K D,CDK7。结果显示：相对于CDK2/CDK9/CDK12，本发明化合物对CDK7具有优异的选择性，本发明化合物对CDK7的特异性为对其它CDK的至少100倍或300倍；甚至可以是500倍以上。部分示例化合物结果如表2所示。
表2
测试例3：HCC70肿瘤细胞增殖抑制活性实验
HCC70购自ATCC；货号：CRL-2315；RPMI1640购自Gibco；货号：11875-093；胰酶(含EDTA)购自Gibco；货号：25200-072；FBS购自Gibco；货号：10099-141C；CellTiter-Glo购自Promega；货号：G7573；DMSO购自VWR AMRESCO；货号：0231-500ML；Staurosporine购自Selleck；货号：S1421；细胞计数仪购自CHEMOMETEC；型号：NC-200；酶标仪购自PerkinElmer；型号：Envison。
HCC70为人乳腺导管癌细胞，培养于含10％FBS的RPMI-1640培养基中。取对数生长期的细胞，用胰酶-EDTA消化、收集和计数细胞，并接种2000个HCC70细胞/孔于384孔细胞板中，置于5％CO 2培养过夜。使用DMSO配制1000X的化合物3.16倍梯度浓度储液，使用培养基稀释100倍至10X化合物储液，于细胞接种后的第二天，向每个细胞培养孔中加入10X化合物储液，终浓度为1X，DMSO含量为0.1％。使用DMSO处理细胞组作为实验对照(control)，5μM Staurosporine处理细胞组为空白对照(blank)。加入化合物后继续培养细胞3天后，向每孔加入25μl CellTiter-Glo工作液，混匀，室温孵育5分钟，读取luminescence化学发光值，计算细胞增殖抑制率IR(％)＝(RLU 对照-RLU 化合物)/(RLU 对 照-RLU 空白)×100％，使用XLFit四参数法拟合化合物梯度稀释浓度和对应的细胞增殖抑制率，计算出IC 50值。结果显示，本发明化合物对HCC70人乳腺导管癌细胞增殖具有很强的抑制作用。部分化合物IC 50低于1000nM或500nM；甚至低于100nM或50nM。部分示例性化合物的结果如下表3所示。
表3
编号 HCC70 IC 50(nM) 编号 HCC70 IC 50(nM)
Z2 207.0 Z16 23.0
Z5 42.7 Z19 15.4
Z6 222.4 Z27 9.7
Z7 41.1 Z59 422
Z9 99.77 Z60 89
Z10 161.53 Z58 233
Z11 186 Z61 389.7
Z23 66.60 Z63 134.23
Z64 42.78 Z62 24.64
Z68-1 10.35 Z68-2 3.18
Z66 10.51 Z65 46.93
Z72 869.32 Z73 233.42
Z74 1250 Z78 43.97
Z79 66.5 Z76 21.91
Z77 9.87 Z84 263.1
Z85 517.14 Z86 >10000
Z89 >10000 Z90 >10000
Z87 242.9 Z88 241.1
Z91 438.5 Z92 106.76
Z93 5211.0
测试例4：OVCAR-3肿瘤细胞增殖抑制活性实验
OVCAR-3购自ATCC；货号：HTB-161；RPMI1640购自Gibco；货号：11875-093；胰酶(含EDTA)购自Gibco；货号：25200-072；FBS购自Gibco；货号：10091-148；CellTiter-Glo购自Promega；货号：G7573；Bovine insulin购自absin；货号：abs9169；DMSO购自VWR AMRESCO；货号：0231-500ML；Staurosporine购自Selleck；货号：S1421；细胞计数仪购自CHEMOMETEC；型号：NC-200；酶标仪购自PerkinElmer；型号：Envison。
OVCAR-3为人卵巢腺癌细胞，培养于含20％FBS和0.01mg/mL Bovine insulin的RPMI-1640培养基中。取对数生长期的细胞，用胰酶-EDTA消化、收集和计数细胞，并接种2000个OVCAR-3细胞/孔于384孔细胞板中，置于5％CO 2培养过夜。使用DMSO配制1000X的化合物3.16倍梯度浓度储液，使用培养基稀释100倍至10X化合物储液，于细胞接种后的第二天，向每个细胞培养孔中加入10X化合物储液，终浓度为1X，DMSO含量为0.1％。使用DMSO处理细胞组作为实验对照(control)，5μM Staurosporine处理细胞组为空白对照(blank)。加入化合物后继续培养细胞3天后，向每孔加入25μl CellTiter-Glo工作液，混匀，室温孵育5分钟，读取luminescence化学发光值，计算细胞增殖抑制率IR(％)＝(RLU 对照-RLU 化合物)/(RLU 对照-RLU 空白)×100％，使用XLFit四参数法拟合化合物梯度稀释浓度和对应的细胞增殖抑制率，计算出IC 50值。结果显示，本发明化合物对OVCAR-3为人卵巢腺癌细胞增殖具有很强的抑制作用。部分化合物IC 50低于1000nM或500nM；甚至低于100nM或50nM。部分示例性化合物的结果如下表4所示。
表4
编号 OVCAR-3 IC 50(nM) 编号 OVCAR-3 IC 50(nM)
Z23 134.85 Z63 195.06
Z64 98.6 Z62 15.91
Z68-1 35.8 Z68-2 8.84
Z66 21.24 Z65 253.96
Z73 1054 Z74 3457
Z78 62.6 Z79 84.05
Z76 31.5 Z77 11.8
Z84 198.2 Z85 1802.3
Z86 >10000 Z89 >10000
Z90 >10000 Z91 810.54
Z92 342.9 Z93 >10000
测试例5：本发明化合物的体内药代动力学实验
实验方法和条件：雄性比格犬，8～11kg，采购于江苏玛斯生物技术有限公司。分别给予3只犬静脉注射给予待测化合物0.2mg/kg或1.0mg/kg(溶剂：2％DMSO+10％Kolliphor HS 15+88％(6.818％羟丙基-β-环糊精水溶液)，0.2mg/mL或1.0mg/mL)和3只犬口服灌胃给药2mg/kg(溶剂：5％DMSO+95％(10％羟丙基-β-环糊精食盐水溶液)，0.4mg/mL)。给药后，5min，15min，30min，1h，2h，4h， 8h，24h经头静脉采血，每个样品采集约500μL。采集后置于冰上，并于15分钟内离心分离血浆待测。血浆中药物浓度的检测采用液相串联质谱法(LC/MS/MS)，测得浓度运用Phoenix WinNonlin软件计算药代动力学参数。实验结果如下表5和表6所示。
表5本发明化合物口服给药(2mg/kg)的体内药代动力学
编号 T 1/2(h) C max(ng/mL) AUC 0～inf(ng*h/mL) F(％)
Z65 4.44 6623 45620 147
化合物101 6.61 123 1591 65.8
表6本发明化合物静脉注射给药的体内药代动力学
编号 Dose(mg/kg) T 1/2(h) AUC 0～inf(ng*h/mL) V ss(L/kg) CL(mL/min/kg)
Z65 0.2 3.42 3097 0.24 1.23
化合物101 1.0 6.88 1228 7.57 14.5
可见，根据本发明化合物相对于现有技术(化合物101,WO2020093006， )其药代动力学具有显著更低的代谢清除率(CL)和更高的血浆暴露量(AUC 0～inf)。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，根据已经公开的所有教导，本领域技术人员可以对本发明技术方案的细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims (12)

  1. 式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐；
    其中，
    为
    环A为无；或环A选自下组：3至14元碳环、3至14元杂环、5至12元杂芳基、C 5-12芳基；环A为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；所述3至14元杂环具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；所述5至12元杂芳基具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；
    L 3为无、C 1-6亚烷基、C 2-6亚烯基或环B；其中，所述C 1-6亚烷基上的1、2、3、4或5个氢原子可以任选地各自独立地被R 13取代；所述C 2-6亚烯基上的1、2、3、4或5个氢原子可以任选地各自独立地被R 13取代；
    环B选自下组：3至14元碳环、3至14元杂环、5至12元杂芳基、C 5-12芳基；环B为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；所述3至14元杂环具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；所述5至12元杂芳基具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；
    L 1为无、C 1-6亚烷基、C 2-6亚烯基、-O-、-NR 10-、-C＝N-、C 5-12芳基、5至12元杂芳基、-C(O)-、-C(O)-NR 10-或-NR 10-C(O)-；其中，所述C 1-6亚烷基上的1、2、3、4或5个氢原子可以任选地各自独立地被R 13取代；所述C 2-6亚烯基上的1、2、3、4或5个氢原子可以任选地各自独立地被R 13取代；所述5至12元杂芳基具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；所述C 5-12芳基、5至12元杂芳基各自独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；
    L 2选自下组：
    -(O) m2-(CR 13R 14) m1-(NR 12) m3-、
    -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m1-(NR 12) m3-、
    -(O) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7元碳环基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7元碳环基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(O) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7元杂环基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7元杂环基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(O) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(O) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10C(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10C(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(O) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(O) m2-(CR 13R 14) m5-O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(O) m2-(CR 13R 14) m5-OC(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-OC(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(O) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(O) m2-(CR 13R 14) m5-(CH＝CH) m7-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、
    -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-(CH＝CH) m7-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-；
    各个R 10各自独立地氢、C 1-6烷基、氘代C 1-6烷基、-3至7元碳环基、-C(O)-C 1-6烷基、-C(O)-C 1-4烷基-C 1-6烷氧基、-C(O)-3至7元碳环基、-C 1-4烷基-羟基、-C 1-4烷基-氰基、-C 1-4烷基-C 1-6烷氧基、-C 1-4烷基-NHC(O)-C 1-6烷基、-C 1-4烷基-NHC(O)-C 1-4烷基-C 1-6烷氧基、-C 1-4烷基-NHC(O)-3至7元碳环基或-C 1-4烷基-NRR’；
    各个3至7元杂环基各自独立地具有1、2或3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；所述3至7元碳环各自独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；
    各个3至7元碳环基各自独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；
    各个R 11各自独立地为氢、C 1-6烷基或氘代C 1-6烷基；
    各个R 12各自独立地为氢、C 1-6烷基或氘代C 1-6烷基；
    各个R 13各自独立地为氢、氰基、羟基、卤素、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷氧基、-3至7元碳环基、-C 0-6亚烷基-NRR’、-C 1-6亚烷基-羟基或-C 0-6亚烷基-氰基；
    各个R 14各自独立地为氢、氰基、羟基、卤素、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷基、卤代C 1-6烷氧基、-3至7元碳环基、-C 0-6亚烷基-NRR’、-C 1-6亚烷基-羟基或-C 0-6亚烷基-氰基；
    各个m1各自独立地为1、2、3、4、5或6；
    各个m2各自独立地为0或1；
    各个m3各自独立地为0或1；
    各个m4各自独立地为1或2；
    各个m5各自独立地为0、1、2、3、4、5或6；
    各个m6各自独立地为0、1、2、3、4、5或6；
    各个m7各自独立地为1或2；
    R 1为氢、卤素、氰基、C 1-6烷基或3至14元碳环基；所述C 1-6烷基、3至14元碳环基独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自下组的基团所取代：氧代、羟基、卤素、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基；
    R 2为氢、卤素、氰基、C 1-6烷基或3至14元碳环基；所述C 1-6烷基、3至14元碳环基独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自下组的基团所取代：氧代、羟基、卤素、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基；
    X 2为N或C(R 3)；
    X 1为N或C(R 4)；
    Y为N或C(R 4)；
    Z为N或C(R 3)；
    各个R 3独立地为氢、卤素、氰基、C 1-6烷基或卤代C 1-6烷基；
    各个R 4独立地为氢、卤素、羟基、氰基、-C 2-4亚烯基-苯基、-C 2-4亚炔基-苯基、-S(O)-OH、-S(O) 2-OH、-S-(C 1-6烷基)、C 1-6烷基、-O-C 1-6烷基、-C 1-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 1-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-NRR’、-C 0-6亚烷基-C(O)OH、-C 0-6亚烷基-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-C(O)-NRR’、-C 0-6亚烷基-NR-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-S(O) 2-NRR’、-C 0-6亚烷基-NR-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-NR-S(O) 2-NRR’、-C 0-6亚烷基-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6亚烷基-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)、-C 0-6亚烷基-P(O)-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6亚烷基-3至14元碳环基、-C 0-6亚烷基-3至14元杂环基、-C 0-6亚烷基-5至12元杂芳基、-C 0-6亚烷基-C 5-12芳基、-C 0-6亚烷基-C(O)-3至14元杂环基、-C 0-6亚烷基-C(O)-5至12元杂芳基、-O-C 0-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 0-6亚烷基-3至14元碳环基、-O-C 0-6亚烷基-3至14元杂环基、-O-C 0-6亚烷基-5至12元杂芳基、-O-C 0-6亚烷基-C 5-12芳基、-S(O)-C 1-6烷基；其中，所述C 1-6烷基、C 0-6亚烷基、C 2-4亚烯基、3至14元碳环基、3至14元杂环基、5至12元杂芳基、C 5-12芳基独立地为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代；所述3至14元杂环具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；所述5至12元杂芳基具有1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；
    所述S1组的基团包括：氧代(＝O)、卤素、羟基、氰基、C 1-6烷基、-O-C 1-6烷基、-C 1-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 1-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-NRR’、-C 0-6亚烷基-C(O)OH、-C 0-6亚烷基-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-C(O)-NRR’、-C 0-6亚烷基-NR-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-S(O) 2-NRR’、-C 0-6亚烷基-NR-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6亚烷基-NR-S(O) 2-NRR’、-C 0-6亚烷基-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6亚烷基-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)、-C 0-6亚烷基-P(O)-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6亚烷基-3至14元碳环基、-C 0-6亚烷基-3至14元杂环基、-C 0-6亚烷基-5至12元杂芳基、-C 0-6亚烷基-C 5-12芳基、-C 0-6亚烷基-C(O)-3至14元杂环基、-C 0-6亚烷基-C(O)-5至12元杂芳基、-O-C 0-6亚烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 0-6亚烷基-3至14元碳环基、-O-C 0-6亚烷基-3至14元杂环基、-O-C 0-6亚烷基-5至12元杂芳基、-O-C 0-6亚烷基-C 5-12芳基、-S(O)-C 1-6烷基；
    R、R’各自独立地为氢、C 1-6烷基或氘代C 1-6烷基；或者R、R’任选与和它们相连的氮原子共同构成3至14元杂环基或5至12元杂芳基；其中，所述杂环基、杂芳基各自独立地除了已有的氮原子外还包含0、1或2个选自N、O、S的杂原子；
    上述各基团中，所述C 0-6亚烷基上任意同一个碳原子上的2个氢原子还可以任选地同时被3至7元碳环或3至7元杂环螺环取代；
    上述各基团中，所述C 1-6亚烷基上任意同一个碳原子上的2个氢原子还可以任选地同时被3至7元碳环或3至7元杂环螺环取代。
  2. 如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐；其特征在于，
    所述式(A)化合物为式(I-A)化合物；
    式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、环B各自如权利要求1所定义；
    或
    所述式(A)化合物为式(I-B)化合物；
    式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、R 13、R 14各自如权利要求1所定义；m0为1、2、3、4、5或6；
    或
    所述式(A)化合物为式(A1)化合物；
    式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、环B各自如权利要求1所定义；
    或
    所述式(A)化合物为式(A2)化合物；
    式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、R 13、R 14各自如权利要求1所定义；m0为1、2、3、4、5或6。
  3. 如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐；其特征在于，
    所述式(A)化合物为式(II-A)化合物；
    式中，R 1、R 2、L 1、L 2、环A、环B、X 1各自如权利要求1所定义；
    或
    所述式(A)化合物为式(II-B)化合物；
    式中，X 1、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、R 13、R 14各自如权利要求1所定义；m0为1、2、3、4、5或6；
    或
    所述式(A)化合物为式(A3)化合物；
    式中，X 1、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、环B各自如权利要求1所定义；
    或
    所述式(A)化合物为式(A4)化合物；
    式中，X 1、R 1、R 2、L 1、L 2、环A、R 13、R 14各自如权利要求1所定义；m0为1、2、3、4、5或6。
  4. 如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐；其特征在于，
    所述式(A)化合物为式(III-A)化合物；
    式中，L 1、L 2、环A、环B、X 1各自如权利要求1所定义；
    或
    所述式(A)化合物为式(III-B)化合物；
    式中，X 1、L 1、L 2、环A、R 13、R 14各自如权利要求1所定义；m0为1、2、3、4、5或6；
    或
    所述式(A)化合物为式(A5)化合物；
    式中，X 1、L 1、L 2、环A、环B各自如权利要求1所定义；
    或
    所述式(A)化合物为式(A6)化合物；
    式中，X 1、L 1、L 2、环A、R 13、R 14各自如权利要求1所定义；m0为1、2、3、4、5或6；
    或，所述式(A)化合物为式(IV-a)化合物，
    式中，X 1、L 1、L 2、环B各自如权利要求1所定义；
    或，所述式(A)化合物为式(IV-b)化合物，
    式中，X 1、L 1、L 2、环B各自如权利要求1所定义；
    式中，X 1、L 1、L 2、环B各自如权利要求1所定义。
  5. 如权利要求1-4所述的化合物或其药学上可接受的盐；其特征在于，环A为无；或环A选自下组：环丁环、环戊环、环己环、哌啶环、哌嗪环、四氢吡咯环、吡唑环、咪唑环、吡啶环；环A为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代。
  6. 如权利要求1-4所述的化合物或其药学上可接受的盐；其特征在于，环B选自下组：环丁环、环戊环、环己环、哌啶环、哌嗪环、四氢吡咯环、吡唑环、咪唑环；环B为未取代的或被1、2、3、4或5个选自S1组的基团所取代。
  7. 如权利要求1-4所述的化合物或其药学上可接受的盐；其特征在于，X 1为N或C(R 4)；其中，R 4为氢、卤素、氰基、-S(O) 2CH 3或-P(O)(CH 3) 2。
  8. 如权利要求1-4所述的化合物或其药学上可接受的盐；其特征在于，所述化合物选自表(I)。
  9. 一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-8任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；以及药学可接受的载体。
  10. 如权利要求1-8任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或如权利要求9所述的药物组合物在制备预防和/或治疗CDK7相关疾病的药物中的用途。
  11. 如权利要求1-8任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或如权利要求9所述的药物组合物在制备CDK7抑制剂中的用途。
  12. 如权利要求11所述的用途，其特征在于，所述CDK7相关疾病为增殖性疾病(例如肿瘤或癌症)、传染性疾病、免疫疾病、自身免疫疾病和炎性疾病。
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