CN118304336A - 一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物及其制备方法，本发明深入研究锁阳中潜在的活性成分，先通过乙醇提取后上AB‑8大孔吸附树脂分离纯化得到锁阳总黄酮，采用紫外分光光度法测得总黄酮含量为84.38％。另外锁阳先经过乙醇提取后，药渣再用水提醇沉法得到锁阳多糖成分。本发明通过糖水偏好测试(SPT)、强迫游泳测试(FST)、悬尾测试(TST)、社会交互作用测试(SIT)实验，检测锁阳总黄酮提取物和锁阳总多糖活性，结果表明，本发明得到的锁阳黄酮提取物和锁阳总多糖均具有很好的治疗抑郁症的功效，本发明为开发锁阳新的临床用途提供了依据。
Description
技术领域
本发明属于中药领域，具体地说，本发明涉及一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物及其制备方法与应用。
背景技术
锁阳又叫琐阳、不老药、锈铁棒、地毛球、黄骨狼、锁严子、羊锁不拉，是一种多年生肉质寄生草本植物。锁阳性温，味甘，归脾经、肾经、大肠经具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效。锁阳含鞣质、三萜皂苷、乙酰熊果酸、锁阳萜、胡萝卜苷、黄酮和多糖等成分。最新医学研究发现：锁阳能够促进人体细胞再生和新陈代谢，增强免疫调节能力，具有明显的防癌、抗病毒和延缓衰老作用。近年来，用锁阳治疗前列腺肥大和增生、治疗白血病、治疗糖尿病、治疗哮喘、治疗早泄都取得了很好的效果。
目前还没有报道锁阳具有抗抑郁的功效，本发明通过大量实验对锁阳的活性进行深入研究，发现锁阳的多糖提取物和黄酮提取物具有很好的抗抑郁的活性。
发明内容
发明目的：本发明的目的是基于锁阳目前的已有研究，深入筛选其潜在的活性成分，发现锁阳的多糖提取物和黄酮提取物具有很好的抗抑郁的活性。可用于治疗抑郁疾病，增加其临床新用途。
技术方案：为了实现以上目的，本发明采用的技术方案为：
一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物，它包括锁阳总黄酮提取物和/或锁阳多糖提取物。
作为优选方案，以上所述的一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物，锁阳总黄酮提取物是通过以下方法制备得到的：
取锁阳药材切成黄豆大颗粒，加乙醇回流提取，趁热过滤，收集滤液，浓缩至无醇味，得粗提物；
取AB-8大孔吸附树脂，用乙醇浸泡过夜，湿法装柱，然后将粗提物用蒸馏水溶解后上样，先用30～40％乙醇洗脱，再用80～90％乙醇洗脱，收集80～90％乙醇洗脱液，浓缩，冻干，得锁阳总黄酮。
作为优选方案，以上所述的一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物，锁阳总黄酮提取物是通过以下方法制备得到的：
取锁阳药材切成黄豆大颗粒，用60～65％乙醇以1:6～12的料液比回流提取1～2h，趁热过滤，收集滤液，浓缩至无醇味，得粗提物；
取AB-8大孔吸附树脂，用乙醇浸泡过夜，湿法装柱，然后将粗提物用蒸馏水溶解后上样，先用4～8倍柱体积的30％乙醇洗脱，再用4～8倍柱体积的90％乙醇洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，冻干，得锁阳总黄酮。
作为优选方案，以上所述的一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物，锁阳总黄酮提取物是通过以下方法制备得到的：
锁阳药材切成黄豆大颗粒，用65％乙醇以1:12的料液比回流提取2h，趁热过滤，收集滤液，浓缩至无醇味，得粗提物；
将AB-8大孔吸附树脂，用95％的乙醇浸泡过夜，湿法装柱，粗提物用蒸馏水溶解上样，先用4倍柱体积的30％乙醇洗脱，再用4倍柱体积的90％乙醇洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，冻干，得锁阳总黄酮。
作为优选方案，以上所述的一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物，锁阳多糖提取物是通过以下方法制备得到的：
取锁阳药材先用乙醇提取后，残渣再用蒸馏水回流提取，趁热过滤，滤液离心，取上清液旋蒸浓缩，浓缩液加入乙醇溶液，静置过夜，离心，得沉淀，冻干，得锁阳多糖提取物。
作为优选方案，以上所述的一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物，锁阳多糖提取物是通过以下方法制备得到的：
取锁阳药材经60～65％乙醇提取后，残渣以1:6～10料液比加入蒸馏水，提取1～3次，每次0.5～2h，趁热过滤，经4000～6000r/min离心10～20min，上清液旋蒸浓缩，浓缩液加入95％的乙醇溶液，静置过夜，离心，沉淀冻干，即得锁阳多糖。
作为优选方案，以上所述的一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物，锁阳多糖提取物是通过以下方法制备得到的：
取锁阳药材经65％乙醇回流提取1小时后，过滤，残渣以1:10料液比加入蒸馏水，回流提取2次，每次2h，趁热过滤，经4000r/min离心10min，上清液旋蒸浓缩，浓缩液加入5倍95％的乙醇溶液，静置过夜，离心，沉淀冻干，即得锁阳多糖。
本发明提取得到的锁阳多糖或黄酮提取物具有较好的抗抑郁活性，可将锁阳提取物与药学上可接受的载体制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、散剂、膏剂、合剂、口服液或注射剂等临床剂型。
有益效果：本发明相比现有技术具有以下优点：
本发明深入研究锁阳中潜在的活性成分，先通过乙醇提取后上AB-8大孔吸附树脂分离纯化得到锁阳黄酮，采用紫外分光光度法测得总黄酮含量为84.38％。另外锁阳先经过乙醇提取后，药渣再用水提醇沉法得到锁阳多糖成分。本发明通过糖水偏好测试(SPT)、强迫游泳测试(FST)、悬尾测试(TST)、社会交互作用测试(SIT)实验，检测锁阳黄酮提取物和锁阳总多糖活性，结果表明，本发明得到的锁阳黄酮提取物和锁阳总多糖均具有很好的防治抑郁症的功效，本发明为开发锁阳新的临床用途提供了依据。
附图说明
图1是锁阳总多糖抗抑郁活性实验结果。
图2是锁阳总黄酮抗抑郁活性实验结果。
具体实施方式
下面结合具体实施对本发明作进一步阐述，但这些实施例不应解释为限制本发明。
实施例1
一种具有抗抑郁活性的锁阳总黄酮提取物的制备方法，其包括以下步骤：
(1)取锁阳药材切成黄豆大颗粒，用体积浓度65％乙醇，以1:12的料液比回流提取2次，每次2h，趁热过滤，收集合并滤液，浓缩至无醇味，得粗提物；
(2)将AB-8大孔吸附树脂，用体积浓度95％的乙醇浸泡过夜，湿法装柱，将步骤(1)粗提物用蒸馏水溶解上样，先用4倍柱体积的30％乙醇洗脱，再用4倍柱体积的90％乙醇洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，冻干，得锁阳总黄酮(SYF)。采用氯化铝显色后，紫外分光光度法测得总黄酮含量为84.38％。
实施例2
一种具有抗抑郁活性的锁阳多糖提取物的制备方法，其包括以下步骤：
取锁阳药材，加10倍量体积浓度65％乙醇回流提取1小时后，过滤，残渣以1:10料液比加入蒸馏水，回流提取2次，每次2h，趁热过滤，经4000r/min离心10min，上清液旋蒸浓缩，浓缩液加入5倍95％的乙醇溶液，静置过夜，离心，沉淀冻干，即得锁阳多糖(SYP)。
实施例3抗抑郁药效评价
1、实验方法
(1)动物分组及给药：实验动物随机分为空白对照组(Control)、慢性社会挫败应激模型组(CSCD)、实施例1的锁阳总黄酮给药低剂量组(SYF-L，100mg/kg)、中剂量组(SYF-M，150mg/kg)、高剂量组(SYF-G，200mg/kg)，实施例2的锁阳多糖给药低剂量组(SYP-L，100mg/kg)、中剂量组(SYP-M，150mg/kg)、高剂量组(SYP-G，200mg/kg)以及阳性药对照组(艾司西酞普兰，ESC，5mg/kg)，每组12只。
(2)慢性社会挫败应激模型建立：适CD1小鼠单笼饲养7d产生领地意识。C57BL/6J小鼠适应性饲养1周，随机分为对照组和实验组，实验组C57BL/6J小鼠连续10d放入CD1小鼠笼中，被攻击10min后用一带孔透明亚克力板隔离24h，每天更换新的CD-1小鼠避免适应。10d后将实验组C57BL/6小鼠取出并单笼饲养。对照组每天与无攻击性C57BL/6小鼠接触10min后用相同的板隔离24h，每天更换新的C57BL/6小鼠。10d结束后将非应激对照组C57BL/6小鼠取出并单笼饲养。
(3)糖水偏好测试(SPT)：所有小鼠禁食禁水12h，统一单笼饲养，每只小鼠给予一瓶1％蔗糖溶液和一瓶纯水，继续禁食，中途交换糖水瓶和纯水瓶位置，记录12h内蔗糖消耗量和纯水消耗量，计算蔗糖偏好。
(4)强迫游泳测试(FST)：连续给药2周后进行测试，将小鼠放入高28cm、直径15cm的玻璃容器中，测试前小鼠适应测试环境1h，适应时间结束后取出小鼠，向烧杯内注入23-25℃的纯水，使水深达12cm，放入小鼠，立即开启Any-Maze软件开始摄像记录小鼠游泳状态6min，统计分析后4min的不动时间。
(5)悬尾测试(TST)：连续给药2周后进行测试，测试前小鼠适应测试环境1h，用医用胶带将小鼠尾巴末端1cm处粘在30cm高的悬尾箱挂钩上，保持6min。摄像机记录小鼠活动状态，Any-Maze软件记录并分析每只小鼠最后4min期间的不动时间。
(6)社会交互作用测试(SIT)：在敞箱一侧的中央放入隔板，底部有密集小孔，用来放置陌生CD1小鼠，以中央放置CD1小鼠的区域为中心，划出一矩形区域作为接触区域。通过ANY-maze软件收集测试数据，使用VisuTrack软件记录小鼠在社交互动区以及角落区的时间，社交互动比率(social interaction，SI)为：第二阶段在互动区的时间/第一阶段在互动区的时间。认为SI<1的小鼠表现出社交回避为敏感型，SI>1的小鼠表现出社交偏好为抵抗型。
2、实验结果
模型建立后，按照分组和给药设置，给药组和阳性药组给予相应剂量的药物，空白组和模型组给予等量生理盐水，连续给药2周后进行SPT、FST、TST和社会交互(SIT)试验，结果见图1和图2。
SPT测试结果显示(图1A和图2A)，锁阳多糖和锁阳黄酮提取物灌胃给药2周能够不同程度的提高CSCD诱导抑郁小鼠的糖水偏好率。与CSCD组相比，锁阳多糖高、中、低剂量组均可显著提高CSCD诱导抑郁小鼠的糖水偏好率，中剂量和高剂量给药组糖水偏好率与阳性药显示出相同的作用，均达到极显著水平(p＜0.01)；锁阳黄酮低剂量给药组与CSCD组蔗糖偏好率无显著差异(p＞0.05)，仅高剂量组显示出于阳性药组相同的作用，表明两种提取物均有一定的抗抑郁活性，但锁阳多糖抗抑郁作用优于黄酮提取物。
FST测试结果显示(图1B和图2B)，与空白对照组相比，CSCD组小鼠FST不动时间极显著延长(p＜0.01)，表明模型建立成功。给予不同剂量的锁阳多糖和锁阳黄酮提取物灌胃2周后，与CSCD组相比，除锁阳黄酮提取物低剂量组外，各剂量组小鼠的FST不动时间均显著缩短，其中锁阳多糖中剂量组和高剂量组达到极显著水平，与阳性药组(ESC)作用一致(p＜0.01)，表明锁阳多糖具有很好的抗抑郁作用。
TST测试结果显示(图1C和图2C)，与空白对照组相比，CSCD组小鼠的悬尾不动时间极显著延长(p＜0.01)，表明模型建立成功。给予高(200mg/kg)、中(150mg/kg)、低(100mg/kg)剂量的锁阳多糖和锁阳黄酮提取物灌胃2周后，与CSCD组相比，除锁阳黄酮提取物低剂量组外，均可缩短小鼠的悬尾不动时间，但相比而言，锁阳多糖中剂量组和高剂量组小鼠的悬尾不动时间极显著缩短(p＜0.01)，与阳性药组(ESC)作用一致，表明锁阳多糖具有很好的的抗抑郁作用。
SIT测试结果显示(图1D和图2D)，与对照组相比，CSCD组小鼠社交互动比率显著降低(p＜0.01)，呈现为社交回避敏感型(SI<1)；给与不同剂量的锁阳多糖和锁阳黄酮提取物后，与CSCD组相比，除锁阳黄酮提取物低剂量组外，其他给药组小鼠社交互动比率显著上升(p＜0.05或p＜0.01)。其中锁阳多糖各剂量给药组均呈现为社交偏好抵抗型(SI>1)，与阳性药组(ESC)作用一致，均达到极显著水平(p＜0.01)，表明锁阳多糖具有较好的抗抑郁作用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物，其特征在于，它包括锁阳总黄酮提取物和/或锁阳多糖提取物。
2.根据权利要求1所述的一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物，其特征在于，锁阳总黄酮提取物是通过以下方法制备得到的：
取锁阳药材切成黄豆大颗粒，加乙醇回流提取，趁热过滤，收集滤液，浓缩至无醇味，得粗提物；
取AB-8大孔吸附树脂，用乙醇浸泡过夜，湿法装柱，然后将粗提物用蒸馏水溶解后上样，先用30～40％乙醇洗脱，再用80～90％乙醇洗脱，收集80～90％乙醇洗脱液，浓缩，冻干，得锁阳总黄酮。
3.根据权利要求2所述的一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物，其特征在于，锁阳总黄酮提取物是通过以下方法制备得到的：
取锁阳药材切成黄豆大颗粒，用60～65％乙醇以1:6～12的料液比回流提取1～2h，趁热过滤，收集滤液，浓缩至无醇味，得粗提物；
取AB-8大孔吸附树脂，用乙醇浸泡过夜，湿法装柱，然后将粗提物用蒸馏水溶解后上样，先用4～8倍柱体积的30％乙醇洗脱，再用4～8倍柱体积的90％乙醇洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，冻干，得锁阳总黄酮。
4.根据权利要求3所述的一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物，其特征在于，锁阳总黄酮提取物是通过以下方法制备得到的：
锁阳药材切成黄豆大颗粒，用65％乙醇以1:12的料液比回流提取2h，趁热过滤，收集滤液，浓缩至无醇味，得粗提物；
将AB-8大孔吸附树脂，用95％的乙醇浸泡过夜，湿法装柱，粗提物用蒸馏水溶解上样，先用4倍柱体积的30％乙醇洗脱，再用4倍柱体积的90％乙醇洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，冻干，得锁阳总黄酮。
5.根据权利要求1所述的一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物，其特征在于，锁阳多糖提取物是通过以下方法制备得到的：
取锁阳药材先用乙醇提取后，残渣再用蒸馏水回流提取，趁热过滤，滤液离心，取上清液旋蒸浓缩，浓缩液加入乙醇溶液，静置过夜，离心，得沉淀，冻干，得锁阳多糖提取物。
6.根据权利要求5所述的一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物，其特征在于，锁阳多糖提取物是通过以下方法制备得到的：
取锁阳药材经60～65％乙醇提取后，残渣以1:6～12料液比加入蒸馏水，提取1～3次，每次0.5～2h，趁热过滤，经4000～6000r/min离心10～20min，上清液旋蒸浓缩，浓缩液加入95％的乙醇溶液，静置过夜，离心，沉淀冻干，即得锁阳多糖。
7.根据权利要求6所述的一种具有抗抑郁活性的锁阳提取物，其特征在于，锁阳多糖提取物是通过以下方法制备得到的：
取锁阳药材经65％乙醇回流提取1小时后，过滤，残渣以1:10料液比加入蒸馏水，回流提取2次，每次2h，趁热过滤，经4000r/min离心10min，上清液旋蒸浓缩，浓缩液加入5倍95％的乙醇溶液，静置过夜，离心，沉淀冻干，即得锁阳多糖。
8.权利要求1～7任一项所述的锁阳提取物在制备抗抑郁活性的药物中的应用。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，将锁阳提取物与药学上可接受的载体制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、散剂、膏剂、合剂、口服液或注射剂。
10.一种具有抗抑郁活性的药物，其特征在于，它包括权利要求1～6任一项所述的锁阳提取物。
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