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CN118234502A - 包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体的用于治疗肌肉减少相关疾病的组合物 - Google Patents

包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体的用于治疗肌肉减少相关疾病的组合物 Download PDF

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CN118234502A
CN118234502A CN202280057162.1A CN202280057162A CN118234502A CN 118234502 A CN118234502 A CN 118234502A CN 202280057162 A CN202280057162 A CN 202280057162A CN 118234502 A CN118234502 A CN 118234502A
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CN
China
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muscle
mesenchymal stem
stem cell
tonsil
exosomes
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Application number
CN202280057162.1A
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English (en)
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禹昭妍
李玲雅
柳京夏
赵卿娥
权智润
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Shiratoz Treatment Co ltd
Original Assignee
Shiratoz Treatment Co ltd
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Publication date
Application filed by Shiratoz Treatment Co ltd filed Critical Shiratoz Treatment Co ltd
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Abstract

本发明涉及一种用于预防、改善或治疗肌肉减少相关疾病的组合物，其包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体。本发明的组合物包含高含量的miR‑145‑5p，恢复肌肉骨骼的损失及减少，对肌肉纤维损失、肌管细胞形成的抑制具有恢复效果，调节作为肌肉量的负调节因子的激活素A的表达，增加肌肉纤维形成相关基因的表达，增加肌肉萎缩相关基因的表达，从而对预防，改善以及治疗肌肉减少相关疾病以及改善运动能力具有优异的效果。

Description

包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体的用于治疗肌肉减少相 关疾病的组合物
技术领域
本发明涉及一种用于预防或治疗肌肉减少相关疾病的药物组合物，其包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体。
本发明涉及一种用于预防或改善肌肉减少相关疾病的食品组合物，其包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体。
背景技术
骨骼肌为人体中最大部分的器官，占总体重的40-50％，还在包括能量稳态以及产热等在内的体内各种代谢功能中发挥重要作用。人类的肌肉从40岁以后开始每年减少1％以上，到80岁时减少肌肉量高达50％，老年的肌肉减少被认为是导致全身功能下降的最主要的因素。随着越来越衰老，认识到肌肉及脂肪的含量、骨骼变性等体型发生变化，由于老年肌肉减少而导致的肥胖患病率在全球范围内表现出30％以上水平的持续增加。在胰岛素分泌异常的情况下，由于无法向细胞正常提供能量而可能导致肌肉发育障碍，因此与普通人相比，肌肉减少症在糖尿病患者中增加。并且，肌肉的减少是进一步增加关节炎、腰痛、慢性疼痛的原因，可能恶化由腹部肥胖导致的尿失禁症状，由骨折引起的损伤增加老年抑郁症而导致死亡，因此老年的肌肉减少症与各种疾病相关，是降低生活质量的主要原因。
肌肉减少相关疾病会因骨骼肌的衰减而逐渐引起行走以及运动功能的障碍，日常生活活动(activities of daily living，ADL)变得困难，并且无法独立生活。而且，会引起心肺功能障碍并引发其他并发症，因此重要的是准确理解其特性并采取措施。
肌肉减少症是指骨骼肌的量以及功能下降的状态。肌肉减少症由衰老、激素异常、营养不良、缺乏身体活动、炎症以及退行性疾病等各种原因引起，已知其中癌症、衰老以及缺乏性激素可能成为主要原因。由于医疗技术的发展以及各种治疗剂的开发，老龄化人口随着全球平均寿命增加而增加，因此预测对治疗肌肉减少症的需求也将持续增加。在肌肉减少症患者中，由于作为成肌细胞的干细胞的卫星细胞的募集、活性或增殖障碍导致成肌细胞(myoblast)的数量减少，成肌细胞的增殖以及分化减少，从而导致肌肉减少症患者的肌肉在组织学水平上的肌肉纤维大小以及数量减少而表现出肌肉功能下降的症状。过去10年来，以美国以及欧洲为中心积极进行对于肌肉减少症的流行病学研究，并且近几年人们对肌肉减少症的临床重要性的关注激增。在早期研究中，主要提出肌肉减少症会因全身虚弱、活动障碍以及肌肉力量减少而导致生活质量下降，但近几年发表的研究中报道称除了生活质量以外还可能导致骨质疏松的风险显著增加。并且，肌肉减少症患者会引发糖尿病以及代谢综合征、肥胖、慢性肾衰竭、慢性肝衰竭等慢性疾病，并且最终导致死亡率也增加，因此肌肉减少症作为一种必需适当接受治疗的疾病而备受关注。最近，在美国有报道称肌肉减少症患者出现身体障碍的可能性增加约1.5倍至约3.5倍，从而每年造成185亿USD的社会成本。在韩国根据国民健康营养调查，60岁以上男性的肌肉减少症患病率为42.0％，女性为42.7％，是一种非常常见的疾病，尤其韩国是世界上老龄化速度最高的国家，因此未来必然会成为一个重要的社会问题。
肌萎缩(muscular atrophy)是一种四肢的肌肉萎缩的疾病，已知由于泛素连接酶肌肉环指蛋白1(MuRF-1)以及肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin-1)的表达增加而降解肌肉的肌球蛋白重链(Myosin heavy chain)，从而导致肌肉的大小减少的肌肉萎缩症。
与肌肉减少相关疾病相关的由脊神经、运动神经或骨骼肌纤维的退行引起的肌肉减少症是其病因尚未明确的代表性疑难病之一。根据迄今为止的研究，已知由于诱导骨骼肌收缩的运动神经退行而导致骨骼肌不进行收缩，或骨骼肌内参与肌肉的收缩的蛋白质表达减少，或上述蛋白质变性而导致无法进行正常骨骼肌的收缩，并且从长远来看，上述运动神经或骨骼肌变性为纤维组织。像这样的肌肉减少症的根本病因尚未明确，并且尚未开发出可以防止或恢复运动神经或骨骼肌的退行的方法，因此目前正在积极进行用于开发减缓上述肌肉减少症的发展的方法的研究。
目前，已知运动、补充蛋白质以及热量有助于肌肉减少症，但对于肌肉减少症患者中占大部分的老年人没有帮助，因此迫切需要肌肉减少症治疗剂。然而，目前用于肌肉减少症的治疗剂对改善肌肉减少以及增加肌肉量表现出直接效果的药物仍处于临床实验水平的阶段，目前还没有最终获得FDA批准的药剂。因此，人们一直致力于将部分选择性雄激素受体调节剂(selective androgen receptor modulator)、激活素受体拮抗剂(activinreceptor antagonist)、快速骨骼肌肌钙蛋白抑制剂(fast skeletal muscle troponininhibitor)等开发成肌肉减少症治疗剂，以治疗肌肉减少症，但目前仍处于早期临床实验水平。目前，上述肌肉减少症的治疗方法主要利用抑制作为肌肉减少症之一的由肌肉细胞的退行或进行性突变引起的肌萎缩的方法。
另一方面，扁桃体间充质干细胞(Tonsil-mesenchymal stem cell)是指来源于扁桃体的未分化干细胞，其具有自我复制能力以及分化为两个以上的新细胞的能力，扁桃体位于颈内侧以及鼻后部，主要保护身体免受从外部入侵的细菌等物质并充当淋巴上皮免疫组织。关于扁桃体间充质干细胞，已有关于其对皮肤炎症疾病的治疗功效、对慢性炎症性肠疾病的治疗功效等的报道，但目前基于其的外泌体研究尚未进行。
在这种背景下，本发明人确认到扁桃体间充质干细胞来源外泌体具有与来源于其他来源间充质干细胞的外泌体不同的特性，并且确认到基于这种特性对肌肉减少相关疾病表现出优异的治疗效果，从而完成了本发明。
发明内容
技术问题
本发明涉及一种用于预防或治疗肌肉减少相关疾病的药物组合物，其包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体。
本发明涉及一种用于预防或改善肌肉减少相关疾病的食品组合物，其包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体。
本发明涉及一种用于增加肌肉量或改善肌肉功能的食品组合物，其包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体。
技术方案
本发明提供一种用于预防或治疗肌肉减少相关疾病的药物组合物，其包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体。
在本发明中，扁桃体间充质干细胞是指来源于扁桃体的未分化干细胞，其具有自我复制能力以及分化为两个以上的新细胞的能力，扁桃体位于颈内侧以及鼻后部，主要保护身体免受从外部入侵的细菌等物质并充当淋巴上皮免疫组织。
与其他来源干细胞相比，本发明的扁桃体间充质干细胞容易从作为来源组织的扁桃体得到，并且手术后废弃的扁桃体组织可以回收再利用，初期产率非常高，因此可以自由调节能够提取待注射的外泌体的条件培养基的量。
在本发明中，扁桃体间充质干细胞的条件培养基包括通过从个体分离、培养以及通过特殊操作制备的条件培养基，并且可以提取外泌体，其能够用作治疗、诊断以及预防目的的药品或食品。
在本发明中，扁桃体间充质干细胞可以根据本领域公知的方法从扁桃体中提取。例如，可以根据韩国授权专利第10-1508413号等中记载的方法从扁桃体中提取。
扁桃体间充质干细胞的条件培养基可以为培养扁桃体间充质干细胞并去除细胞后得到的培养液、培养上清液或其浓缩物或其冻干物。
扁桃体间充质干细胞可以利用干细胞培养用培养基常规培养。扁桃体间充质干细胞培养液可以通过将从扁桃体组织中得到的扁桃体间充质干细胞在血清或无血清培养基中培养来得到。用于提取外泌体的条件培养基可以使用通过利用离心或过滤器过滤来去除干细胞以及巨大分子后得到的上清液。并且，可以直接使用所得的上清液或将通过浓缩得到的浓缩物用于提取外泌体。
用于培养扁桃体间充质干细胞的培养用培养基以及培养条件为本发明所属技术领域公知的，可以由普通技术人员适当选择或修饰并利用。
在本发明中，“外泌体(exosome)”是指从各种细胞分泌的具有膜结构的小囊泡。通过电子显微镜的研究中，观察到外泌体源自被称为多泡体(multivesicular bodies，MVBs)的细胞内特定区域并被释放、分泌到细胞外，而不是直接从细胞质膜中脱落。即，当多泡体与细胞质膜发生融合时，囊泡被释放到细胞外环境中，将其成为外泌体。目前尚未明确这种外泌体是通过某种分子机制产生的，但，已知不仅是红细胞，包括B-淋巴细胞、T-淋巴细胞、树突状细胞、血小板、巨噬细胞等在内的各种免疫细胞以及肿瘤细胞、干细胞等也在活体状态下产生并分泌外泌体。上述外泌体包括自然分泌或人工分泌的外泌体。
本发明的外泌体为扁桃体间充质干细胞来源的外泌体。
在本发明中，上述扁桃体间充质干细胞来源的外泌体的直径可以为10nm至300nm。优选地，上述外泌体的直径可以为40nm至200nm，更优选地，可以为50nm至150nm。
本发明的特征在于，上述外泌体(exosomes)的大小可以为40～200nm，上述外泌体(exosomes)可以呈现CD63以及CD81阳性。
上述外泌体可以利用本领域公知的外泌体提取方法得到，例如可以通过包括下述步骤的提取方法得到，但不限于此。
1)培养扁桃体间充质干细胞；
2)回收上述扁桃体间充质干细胞培养上清液；
3)通过离心回收的上述细胞培养上清液来去除细胞残留物；以及
4)将去除上述细胞残留物的细胞培养上清液利用选自由切向流过滤(tangentialflow filtration，TFF)、超速离心(ultracentrifugation)、尺寸排阻色谱(sizeexclusion chromatography)以及外泌体分离试剂盒(exosome isolation kit)组成的组中的一种来得到分离/纯化的外泌体。
在上述扁桃体间充质干细胞的培养中，氧条件可以为正常氧浓度，即提供21％的氧(O2)的培养条件，或者可以为不将缺氧细胞敏化剂(hypoxic cell sensitizer)添加到细胞培养基中的培养条件，但不限于此。
在上述步骤1)中，常规培养基可以使用本领域常用的所有细胞培养用培养基，可以为杜尔贝科改良鹰培养基(Dulbecco's modified eagle medium，DMEM)、最低必需培养基(minimal essential medium，MEM)或罗斯威尔公园纪念研究所1640培养基(RosewellPark Memorial Institute 1640，RPMI 1640)，但不限于此。
并且，可以根据需要在上述细胞培养基中添加一种以上辅助成分，这种辅助成分可以使用选自由包括胎牛、马或人等的血清在内的用于防止微生物的污染的如青霉素G(penicilli G)、硫酸链霉素(sterptomycin sulfate)以及庆大霉素(gentamycin)等抗生素、如两性霉素B(amphotericin B)以及制霉菌素(nystatin)等抗真菌剂(antifungalagent)以及它们的混合物组成的组中的一种以上成分。
在用于从上述扁桃体间充质干细胞提取外泌体的培养中，根据需求还可以包括更换为无血清(serum-free)、无抗生素(antibiotic-free)、无酚红(phenol red-free)的培养基并进一步培养。即可以在常规培养基中进行培养后，将培养基更换为无血清培养基并进行进一步培养后进行步骤2)。
上述步骤2)中培养上清液的回收可以为回收培养基，即条件培养基。回收的细胞培养上清液中包含从细胞残留物以及干细胞分泌的外泌体，可与通过上述步骤3)中的离心来去除细胞培养上清液中包含的细胞残留物。
去除这种细胞残留物后，可以通过将细胞培养上清液利用选自由切向流过滤(tangential flow filtration，TFF)、超速离心(ultracentrifugation)、尺寸排阻色谱(size exclusion chromatography)以及外泌体分离试剂盒(exosome isolation kit)组成的组中的一种来得到分离/纯化的外泌体。
不同于其他来源间充质干细胞的外泌体，本发明的外泌体包含大量的miR-145-5p。
hsa-miR-145-5p具有序列1的碱基序列。
GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCCU
即，本发明的药物组合物的外泌体可以包含序列1的hsa-miR-145-5p。
在本发明中，术语“预防”是指通过给药本发明的扁桃体间充质干细胞来源外泌体来抑制或延迟肌肉减少相关疾病的发病的所有行为。在本发明中，术语“治疗”是指通过本发明的扁桃体间充质干细胞来源外泌体来使肌肉减少相关疾病的症状好转或有益地改变的所有行为。在本发明中，术语“改善”是指通过将本发明的组合物给药到个体或使其摄取来使肌肉减少相关疾病的不良状况变好的所有行为。
“肌肉细胞”可以是指构成包括人类在内的哺乳动物的肌肉的细胞的总称，可以是指肌细胞(myocyte)、肌管或肌管细胞(myotube)、肌纤维或这些所有，“肌肉细胞分化”可以是指从成肌细胞(myoblast)生成肌肉细胞(肌细胞，肌管，和/或肌纤维)或与其伴随的一系列过程。
本发明的组合物对与如上所述的肌肉细胞的损失相关的症状以及疾病表现出改善的治疗以及预防效果。
在本发明中，肌肉减少相关疾病包括选自与肌肉减少相关的所有症状以及由此引起的所有疾病中的疾病或上述疾病的症状，并且是指与由于肌肉功能下降、肌肉损失或肌肉退化等原因而导致肌肉减少相关的疾病。即，肌肉减少相关疾病可能表现出由于肌肉功能下降、肌肉损失或肌肉退化的原因而导致肌肉减少的症状。
更具体地，可以为选自由肌肉减少症(sarcopenia)、肌萎缩(muscular atrophy)、肌无力(myasthenia)、肌营养不良症(muscular dystrophy)、肌强直(myotonia)、肌张力减低(hypotonia)、肌性肌无力(muscular weakness)、进行性肌萎缩(muscular dystrophy)、肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis)以及恶病质(cachexia)组成的组中的一种以上疾病。
根据本发明一实施方式，扁桃体间充质干细胞来源外泌体通过表达CD63以及CD81来表现出外泌体的特性。
根据本发明一实施方式，扁桃体间充质干细胞来源外泌体表现出具有小于100nm的直径的特性。
根据本发明一实施方式，与其他来源间充质干细胞相比，扁桃体间充质干细胞来源外泌体包含大量的has-miR-145-5p作为外泌体的组成成分。
根据本发明一实施方式，扁桃体间充质干细胞来源外泌体在肌肉减少相关疾病动物模型中表现出对体重减少和/或肌肉骨骼损失的恢复效果。
根据本发明一实施方式，扁桃体间充质干细胞来源外泌体可以增加肌肉骨骼相关细胞或肌肉骨骼的质量、体积和/或密度。
根据本发明一实施方式，扁桃体间充质干细胞来源外泌体增加肌肉细胞的分化功效。
根据本发明一实施方式，扁桃体间充质干细胞来源外泌体表现出恢复作为在肌肉减少疾病中表现出的组织学特性的肌肉纤维的损失以及增加内化的核的效果。
根据本发明一实施方式，扁桃体间充质干细胞来源外泌体抑制充当肌肉量的负调节因子并可能影响肌管细胞分化的激活素A(Activin A)的表达。
根据本发明一实施方式，扁桃体间充质干细胞来源外泌体抑制已知为肌肉萎缩基因的肌肉特异性环指蛋白1(MuRF1)以及肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin 1)的表达。
根据本发明一实施方式，扁桃体间充质干细胞来源外泌体包含大量的has-miR-145-5p，并且可以通过has-miR-145-5p直接与作为激活素A受体的激活素A受体2A型(Activin A Receptor Type 2A，ACVR2A)以及激活素A受体1B型(Activin A ReceptorType 1B，ACVR1B)结合来调节激活素A的活性。
根据本发明一实施方式，扁桃体间充质干细胞来源外泌体可以增加肌肉细胞中肌管细胞生成。
根据本发明一实施方式，扁桃体间充质干细胞来源外泌体可以通过增加与肌肉纤维形成相关的肌肉转录调节因子(MyoD)以及肌球蛋白重链1(MYH1)的表达来增加肌肉纤维生成。
根据本发明一实施方式，扁桃体间充质干细胞来源外泌体可以通过抑制ACVR2A以及ACVR1B的表达来减少激活素A的活性。
本发明的药物组合物可以根据常规方法配制成液剂、混悬液、乳剂、洗剂、软膏、冻干剂等各种剂型。
本发明的药物组合物可以根据药学领域的常规方法配制成适合于给药到患者体内的单位剂量型的药物制剂并给药，上述制剂通过单次或多次给药来包括有效的给药量。适合这种目的的剂型优选为注射剂、灌注剂等作为肠胃外给药制剂。并且，上述用于预防或治疗癌症的药物组合物可以包含药学上可接受的常规的惰性载体以及稀释剂。可以包含在本发明的药物组合物中的药学上可接受的载体以及稀释剂包括如淀粉、糖以及甘露糖醇等赋形剂、如磷酸钙等填充剂以及增量剂、如羧甲基纤维素、羟丙基纤维素等纤维素衍生物、如明胶、海藻酸盐、聚乙烯吡咯烷酮等粘合剂、如滑石粉、硬脂酸钙、氢化蓖麻油以及聚乙二醇等润滑剂、如聚维酮、交联聚维酮等崩解剂、如聚山梨醇酯、鲸蜡醇以及甘油等表面活性剂，但不限于此。上述药学上可接受的载体以及稀释剂可以对于接受移植的受体在生物学以及生理学上具有亲和性。稀释剂可以包括盐水、水溶性缓冲液、溶剂和/或分散剂(dispersion media)，但不限于此。除此以外，例如，在注射剂的情况下，还可以包含保存剂、镇痛剂、增溶剂或稳定剂等，在用于局部给药的制剂的情况下，还可以包含基剂(base)、赋形剂、润滑剂或保存剂等。本发明的组合物可以在不冷冻的状态下使用或进行冷冻供以后使用。当应进行冷冻时，可以在冷冻前将标准冷冻保存剂(例如，DMSO、甘油、细胞冷冻培养基(Cascade Biologics公司))添加到细胞群中。
并且，可以利用本领域常用的给药方法进行给药，优选地，可以直接给药到需要治疗的患者的患病部位，但不限于此。并且，上述给药可以包括利用导管的非手术给药以及切开患病部位后灌注等手术给药方法。给药量可以根据浓缩程度而改变，但可以以10μl/kg至1ml/kg体重的量给药1次或分成几次给药。例如，优选地，外泌体以约1～150μg/ml或1～100μg/ml的量包含在本发明的组合物中。并且，上述外泌体例如以1×107～1×1012/ml的粒子数量包含，并且可以根据所应用的对象适当改变其给药量来进行给药。应理解，有效成分的实际给药量应取决于所要治疗的疾病、疾病的严重程度、给药途径、患者的体重、年龄以及性别等各种相关因素，因此，上述给药量不以任何方面限制本发明的范围。
本发明提供一种肌肉减少相关疾病的治疗方法，其包括将扁桃体间充质干细胞来源外泌体给药到需要其的对象的步骤。
本发明提供一种增加以及改善肌肉运动能力的方法，其包括将扁桃体间充质干细胞来源外泌体给药到需要其的对象的步骤。
本发明提供一种抑制肌肉减少或增加肌肉的方法，其包括将扁桃体间充质干细胞来源外泌体给药到需要其的对象的步骤。
在本发明中，“扁桃体间充质干细胞来源外泌体”、“肌肉减少相关疾病”、“给药”等术语如上所述。
上述对象是指动物，典型地可以为能够通过利用本发明的扁桃体间充质干细胞来源外泌体的治疗来表现出有益的效果的哺乳动物。这种对象的优选例子可以包括如人类等灵长类。并且，像这样的对象可以包括具有肌肉减少相关疾病的症状或处于具有与此相同的症状的风险中的所有对象。
本发明还提供一种扁桃体间充质干细胞来源外泌体在制备用于治疗肌肉减少相关疾病的药剂中的用途。
本发明还提供一种用于治疗肌肉减少相关疾病的组合物，其包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体。
本发明还提供一种扁桃体间充质干细胞来源外泌体在用于治疗肌肉减少相关疾病中的用途。
本发明提供一种用于预防或改善肌肉减少相关疾病的食品组合物，其包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体。
本发明还提供一种用于增加肌肉量或改善肌肉功能的食品组合物，其包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体。
在本说明书中，“增加或改善肌肉运动能力”可以是指恢复和/或提高损失或减少的肌肉运动能力和/或加强肌肉运动能力。
“肌肉”是筋、肌肉、腱的统称，“肌肉功能”是指由肌肉的收缩而发力的能力，包括：肌力，可以使肌肉最大限度地发挥收缩力以克服阻力的能力；肌肉耐力，表现出肌肉在规定重量下可以反复收缩及舒张多久或多少次的能力；以及瞬间爆发力，在短时间内发挥巨大力量的能力。这种肌肉功能受肝脏控制，并与肌肉量成正比，“改善肌肉功能”是指更好地提高肌肉功能。
如上所述的肌肉功能的改善或肌肉量的增加由运动表现能力表示，运动表现能力是当将日常生活或体育运动中可以看到的身体动作在外形上分为跑、跳、投掷、游泳等时，表现出可以快速、有力、持久、熟练地作出上述动作的程度，运动表现能力可以由肌肉力量、敏捷性以及耐力等因素定义。这种运动表现能力的提高是指如肌肉力量、肌肉耐力等肌肉功能增加的效果，优选为肌肉力量或肌肉耐力增加。并且，还可以包括运动耐力(exerciseendurance)增加、肌肉力量增加、平衡感和/或运动适应力(exercise adaptation)增加的效。
本发明可以普遍用作常用的食品。
本发明的食品组合物可以用作保健功能性食品。上述“保健功能性食品”是指根据保健功能性食品相关法律使用对人体具有有益功能性的原料或成分制备以及加工的食品，“功能性”是指为了获得有益于保健用途的效果，如调节人体的结构以及功能所需的营养素或生理作用等而摄取。
本发明的食品组合物可以包含常规的食品添加剂，除非另有规定，否则根据食品医药安全部批准的食品添加剂法典的通则以及常规试验法等，根据相关物品的规范以及标准来判断是否适合作为上述“食品添加剂”。
例如，上述“食品添加剂法典”中列出的物品可以包括化学合成物，如酮类、甘氨酸、柠檬酸钾、烟酸以及肉桂酸等；天然添加剂，如柿子色素、甘草提取物、结晶纤维素、高粱色素以及瓜尔胶等；以及混合制剂类，如L-谷氨酸钠制剂、面类用碱添加剂、保存剂以及焦油色素制剂等。
相对于组合物的总重量，扁桃体间充质干细胞来源外泌体在本发明的食品组合物中的含量可以为0.01重量百分比至95重量百分比，优选地，可以为5重量百分比至90重量百分比。
并且，本发明的食品组合物可以制备以及加工成片剂、胶囊、粉末、颗粒、液体、药丸等形式，以预防和/或改善癌症。
例如，在胶囊形式的保健功能性食品中，硬质胶囊剂可以通过将本发明的扁桃体间充质干细胞的外泌体和赋形剂等添加剂混合后的混合物填充至常规硬质胶囊中来制备，软质胶囊剂可以通过将本发明的食品组合物和赋形剂等添加剂混合后的混合物填充至如明胶等胶囊基质中来制备。上述软质胶囊剂可以根据需要包含如甘油或山梨糖醇等增塑剂、着色剂、保存剂等。
对上述赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂、增香剂等的术语定义记载于本领域公知的文献中，包括具有相同以及相似的物质(韩国药典评注篇，文成祠，韩国药科大学协会，第五修订版，p33-48，1989)。
上述食品的种类没有特别的限制，并且包括所有常规含义的保健功能性食品。
发明的效果
本发明的扁桃体间充质干细胞来源外泌体包含高含量的miR-145-5p，恢复肌肉骨骼的损失及减少，对肌肉纤维损失以及肌管细胞形成的抑制具有恢复效果，调节作为肌肉量的负调节因子的激活素A的表达，增加肌肉纤维形成相关基因的表达，减少肌肉萎缩相关基因的表达，从而对预防、改善以及治疗肌肉减少相关疾病以及改善运动能力具有优异的效果。
附图说明
图1示出确认扁桃体间充质干细胞来源外泌体的外泌体标志物的免疫印迹的结果。
图2示出通过扫描电子显微镜(SEM)以及透射电子显微镜(TEM)确认扁桃体间充质干细胞来源外泌体的大小的结果。
图3示出确认在Bu-Cy处理动物模型中根据给药扁桃体间充质干细胞来源外泌体(T-MSC exosome)的体重变化的结果。
图4示出确认在Bu-Cy处理动物模型中根据给药扁桃体间充质干细胞来源外泌体(T-MSC exosome)的股四头肌的肌肉骨骼重量变化的结果。
图5示出确认在U-Cy处理动物模型中根据给药扁桃体间充质干细胞来源外泌体(T-MSC exosome)的组织学变化的结果。
图6示出确认在U-Cy处理动物模型中根据给药扁桃体间充质干细胞来源外泌体(T-MSC exosome)的血液中激活素A(Activin A)、肌肉特异性环指蛋白1(Murf1)以及肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin 1)的表达变化的结果。
图7示出根据用激活素A(Activin A)处理C2C12细胞的肌管细胞形成抑制效果。
图8示出确认根据用激活素A(Activin A)处理C2C12细胞的肌肉转录调节因子(MyoD)、肌球蛋白重链1(Myh1)、肌肉特异性环指蛋白1(MuF1)、肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin1)的表达变化的结果。
图9示出确认扁桃体间充质干细胞来源外泌体(T-MSC exosome)和/或沃顿氏胶来源间充质干细胞的外泌体(WJ-MSC exosome)的miR-145-5p的表达水平的结果。
图10示出通过预测miR-145-5p靶标序列来确认对ACVR2A、ACVR1B发挥作用的可能性的结果。
图11示出确认在C2C12细胞中扁桃体间充质干细胞来源外泌体(T-MSC exosome)的细胞毒性的结果。
图12示出确认根据用扁桃体间充质干细胞来源外泌体(T-MSC exosome)以及激活素A(Activin A)处理C2C12细胞的肌管细胞形成变化的结果。
图13示出确认根据用扁桃体间充质干细胞来源外泌体(T-MSC exosome)以及激活素A(Activin A)处理C2C12细胞的肌球蛋白重链1(Myh1)、ACVR2A、ACVR1B的表达变化。
图14示出确认根据用扁桃体间充质干细胞来源外泌体(T-MSC exosome)以及miR-145-5p抑制剂处理C2C12细胞的肌管细胞分化变化的结果。
图15示出确认根据用扁桃体间充质干细胞来源外泌体(T-MSC exosome)以及miR-145-5p抑制剂处理C2C12细胞的ACVR2A、ACVR1B、肌肉转录调节因子(MyoD)、肌球蛋白重链1(Myh1)、肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin 1)的表达变化的结果。
图16示出确认根据用间充质干细胞的外泌体(T-MSC exosome)以及miR-145-5p抑制剂处理U-Cy处理动物模型的体重变化的结果。
图17示出确认根据用间充质干细胞的外泌体(T-MSC exosome)以及miR-145-5p抑制剂处理U-Cy处理动物模型的股四头肌的肌肉骨骼重量变化的结果。
图18示出确认根据用间充质干细胞的外泌体(T-MSC exosome)以及miR-145-5p抑制剂处理U-Cy处理动物模型的组织学变化的结果。
图19示出确认在U-Cy处理动物模型中根据用扁桃体间充质干细胞来源外泌体(T-MSC exosome)以及miR-145-5p抑制剂处理的肌肉特异性环指蛋白1(Murf1)、肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin 1)、ACVR2A、ACVR1B的表达变化的结果。
具体实施方式
给出实施例以及制备例，以有助于本发明的理解。下述实施例以及制备例只是为了更容易地理解本发明而提供的，本发明的内容不限于实施例以及制备例。
实施例1：从扁桃体间充质干细胞中分离外泌体
生成扁桃体来源间充质干细胞-条件培养基(T-CM)，以分离外泌体。将建立的扁桃体来源间充质干细胞(T-MSC)在100mm的组织培养板中培养至约80～90％满，用磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)将细胞清洗4次，将培养基更换为无血清DMEM。培养48小时后回收培养基并以1300rpm离心5分钟，然后通过0.2μm的过滤器。通过离心过滤(临界值为3K(cut-off of3K)，Amicon Ultra-15，美国马萨诸塞州贝德福德市密理博公司(Millipore，Bedford，MA，USA))将条件培养基(CM)浓缩至原始浓度的20倍。然后，将1/5体积的ExoQuick-TC试剂(System Biosciences公司，美国加利福尼亚州帕洛阿托(Palo Alto，CA，USA))添加到T-CM中并混合。在4℃的温度下培养过夜后，将混合物在4℃的温度下以1500×g离心30分钟。去除上清液并在常温下最终离心5分钟。将外泌体沉淀物重悬于PBS中，利用BCA蛋白检测试剂盒(美国马萨诸塞州沃尔瑟姆赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA，USA))进行定量，并在-80℃的温度下保存。
实施例2：确认从扁桃体间充质干细胞中分离的外泌体
通过外泌体标志物的免疫印迹、扫描电子显微镜(SEM)以及透射电子显微镜(TEM)来确认上述实施例1中制备的外泌体。
具体地，对扁桃体间充质干细胞来源外泌体以及扁桃体间充质干细胞裂解物进行免疫印迹，以确认外泌体标志物CD63以及CD81的表达。每条泳道上样5μg的外泌体以及扁桃体间充质干细胞蛋白，将印迹膜用针对CD63(ab193349，Abcam公司，英国剑桥(Cambridge，UK))以及CD81(sc-166029，美国加利福尼亚州圣克鲁斯镇圣克鲁斯生物技术公司(SantaCruz Biotechnology，Santa Cruz，CA，USA))的抗体培养过夜。清洗后，将膜用二次抗体(抗小鼠IgG，西格玛奥德里奇(Sigma Aldrich))培养。图像利用SuperSignal West Femto超敏底物(Substrate)(赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific))显色，并利用ImageQuant LAS 3000(英国小查尔方特GE医疗(GE Healthcare，Little Chalfont，UK))进行扫描。
将其结果示于图1中。
如图1所示，确认到通过本发明的方法分离的扁桃体间充质干细胞来源外泌体表现出CD63以及CD81表达特征并表现出外泌体的特性。
并且，为了用扫描电子显微镜(SEM)进行确认，将稀释的外泌体滴在聚L-赖氨酸盖玻片上并用0.25％的戊二醛预固定(prefixed)30分钟。用PBS清洗几次后，将样品在1％的四氧化锇(osmium tetroxide)中保存30分钟，以进行最终固定。接着，用乙醇连续稀释并通过临界点干燥(CPD)清洗样品并脱水。最后，将样品置于短棒上并进行溅射镀金，然后用SEMSigma-300(ZEISS，德国)进行检查。
并且，为了用透射电子显微镜(TEM)进行确认，将纯化的外泌体以1:1000的比例稀释于PBS中。将5μl的稀释的外泌体滴在涂有碳支持有机方华(Formvar-carbon)膜的电子显微镜(EM)网格上。用2％的乙酸双氧铀对网格进行染色并利用滤纸进行去除。最后，利用H-7650TEM(日本东京日立(Hitachi，Tokyo，Japan))在80kV的电压下观察网格。以70000-20000X的倍率拍摄提供比例尺的数字图像。
将上述结果分别示于图2的((A)部分，SEM)以及((B)部分，TEM)。
如图2的扫描电子显微镜以及透射电子显微镜中所示，确认到本发明的外泌体的直径小于100nm。
实施例3：确认肌肉减少模型中通过用T-MSC外泌体处理的治疗效果
8周龄雌性BALB/c小鼠购自OrientBio(阴城郡，韩国)。所有动物均在无病原体(pathogen-free)的条件下保持21-23℃的温度以及51-54％的湿度，并在12小时的明暗周期内使得可以自由获取食物及水。以12小时的明暗周期，所有程序均得到梨花女子大学医学院动物保护以及使用委员会(EUM 20-015)的批准。
将白消安(Bu，20mg/kg/天)每天给药到雌性BALB/c小鼠持续4天，然后通过腹腔内注射每天给药环磷酰胺(Cy，100mg/kg/天)持续2天。在进行化学疗法的第3天，通过小鼠的尾侧静脉注射扁桃体间充质干细胞来源外泌体(30μg/小鼠)。最后注射环磷酰胺后的4-5天牺牲小鼠。实验期间每天检查所有小鼠并记录体重减少。在实验结束的时间点，牺牲小鼠并测定股四头肌(quadricep)的质量，并进行包括组织学以及基因学表达在内的进一步评价。
将上述结果示于图3至图6中。
图3示出在实验期间确认的小鼠的体重变化的确认结果。如图3所示，在注射Bu-Cy后到4天观察到迅速的体重减少，但注射扁桃体间充质干细胞来源外泌体的Bu-Cy小鼠表现出轻微的体重减少。
图4示出测定用于确认骨骼肌损失的股四头肌(quadricep)的质量的结果。肌肉量由于用Bu-Cy处理而减少，但本发明的外泌体显著恢复由化学疗法引起的肌肉损失。
图5示出将这种结果通过组织学分析确认的结果。具体地，用4％的甲醛固定小鼠的股四头肌(quadricep)标本并包埋在石蜡中，然后将切片(5μm的厚度)置于载玻片上并用苏木精以及伊红(H&E)染色以进行组织学评价。如图5所示，股四头肌肌肉组织表现出Bu-Cy小鼠的肌肉纤维的损失以及增加的内化的核，但扁桃体间充质干细胞来源外泌体表现出恢复肌肉损失的结果。
并且，激活素A为肌肉量的负调节因子，并且由于报道称在化学疗法期间激活素A的水平上升，因此与此同时确认已知为肌肉萎缩基因的肌肉特异性环指蛋白1(MuRF1)以及肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin1)的表达变化。具体地，为了检测循环的激活素A，在实验结束的时间点从正常BALB/c小鼠、用Bu-Cy处理的小鼠以及注射外泌体的Bu-Cy小鼠中收集血清。根据制造商的指南利用人类/大鼠/小鼠激活素A免疫分析试剂盒(R&D Systems公司，美国明尼苏达州明尼阿波利斯(Minneapolis，MN，USA))确定激活素A的水平。
并且，为了检测肌肉相关基因，采集实验用小鼠股四头肌后利用TRIzol(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific))提取RNA。根据制造商的指南利用逆转录试剂(ELPIS-Biotech，大田，韩国)合成互补DNA。如上所述进行实时PCR分析。所有基因表达值(肌肉特异性环指蛋白1(MuRF1)以及肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin 1))均针对GAPDH参考基因进行标准化。
用于上述实验的引物序列如下。
将上述结果示于图6中。如图6的(A)部分所示，用Bu-Cy处理显著增加循环的激活素A。并且，已知为肌肉萎缩基因的肌肉特异性环指蛋白1(MuRF1)以及肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin 1)的表达也一起增加(图6的(B)部分以及(C)部分)。相反，通过用外泌体处理显著减少肌肉特异性环指蛋白1(MuRF1)、肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin 1)的表达。
实施例4：确认激活素A抑制肌管细胞分
如从上述中可以确认的，激活素A影响肌肉特异性环指蛋白1(MuRF1)以及肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin 1)的表达，并确认到激活素A针对C2C12细胞向肌管细胞分化的能力的效果。
具体地，将C2C12小鼠成肌细胞在由补充有20％的胎牛血清(FBS；威健(Welgene))、100U/ml的青霉素以及100μg/ml的链霉素的杜尔贝科改良伊格尔培养基(Dulbecco’s Modified Eagle Medium，DMEM；威健(Welgene)，大邱广域市，韩国)组成的生长培养基中在5％CO2、37℃的温度下进行培养。将汇合(confluency)至90％的细胞在包含2％的马血清(horse serum，HS；美国密苏里州圣路易斯市西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO，USA))、青霉素以及链霉素的DMEM中培养5-7天以分化为肌管细胞(myotubes)。为了确认激活素A(activin A)对C2C12细胞分化的影响，在分化期的第1天用50ng/ml的激活素A处理细胞。
如图7所示，当在分化期间添加50ng/ml的激活素A时，与未处理的对照组C2C12细胞相比，肌肉纤维的形成减少。
并且，通过与实施例2相似的实时PCR分析确认肌肉转录调节因子(MyoD)、肌球蛋白重链1(Myh1)、肌肉特异性环指蛋白1(MurF1)、肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin 1)等的表达变化。
除了上述实施例2中的引物序列以外额外的引物序列信息如下。
将其结果示于图8中。
如图8所示，由于用激活素A处理导致不能很好地形成纤维的细胞表现出肌肉转录调节因子(MyoD)以及肌球蛋白重链1(MYH1)的表达显著低。并且，通过用激活素A处理上调肌肉特异性环指蛋白1(MuRF1)以及肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin 1)的表达。
通过这种结果，确认到激活素A为影响肌管细胞的分化的因子。
实施例5：确认扁桃体间充质干细胞来源外泌体的has-miR-145-5p表达
由于扁桃体间充质干细胞来源外泌体有效恢复体内的肌肉损失相关基因表达，因此确认到如miRNA等外泌体成分可以作用于肌肉量的调节。
对此，在microRNA(miRNA)的情况下，根据制造商的指南利用Exo2D for RNA检测试剂盒(assay kit)(Exosome Plus公司，京畿道，韩国)从T-CM分离外泌体RNA。然后，将miRNA进行聚腺苷酸化后，根据制造商的指南利用MystiCq MicroRNA cDNA合成混合试剂盒(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich))将其转化为互补DNA(cDNA)。利用SensiFAST SYBR Hi-ROX试剂盒(Bioline公司，英国伦敦(London，UK))在StepOnePlus仪器(美国加利福尼亚州福斯特城应用生物系统公司(Applied Biosystems，Foster City，CA，USA))中进行实时PCR分析。相对于作为对照组miRNA的RNU6-1，将MicroRNA 145-5p表达进行标准化。将该结果示于图9的(A)部分。
为了进行比较，将通过相同的方式从沃顿氏胶来源间充质干细胞中提取的外泌体用作比较例。
将其结果示于图9的(B)部分。
如图9的(B)部分所示，表现出包含外泌体miRNA、has-miR-145-5p的扁桃体间充质干细胞来源外泌体的独特特征。
即，扁桃体间充质干细胞来源外泌体表现出has-miR-145-5p的组成型表达，并且表达量显著高于沃顿氏胶(Wharton’s jelly)MSC的外泌体。
为了进一步探索可以成为肌肉量调节的基础的分子机制，利用TargetScanHuman7.2数据库(http://www.targetscan.org/vert_72/)预测可推测的miR-145-5p靶标序列。
将其结果示于图10中。
如图10的(A)部分所示，has-miR-145-5p的种子序列与ACVR2A以及ACVR1B的3’非翻译区(UTR)完美一致，因此确认到激活素A受体为has-miR-145-5p的潜在靶标。并且，如图10的(B)部分所示，同时确认到has-miR-145-5p的潜在结合位点在哺乳类ACVR2A以及ACVR1B基因之间高度保守。这种结果表明扁桃体间充质干细胞来源外泌体的has-miR-145-5p可以影响肌肉的激活素A受体介导的反应。
实施例6：确认通过用扁桃体间充质干细胞来源外泌体处理克服由激活素A诱导的肌肉分化障碍
为了确认扁桃体间充质干细胞来源外泌体保持肌肉量的效果，进行C2C12成肌细胞的肌肉分化实验。
在用外泌体处理之前，通过测定细胞存活率来确认潜在毒性，并将其示于图11中。如图11所示，与设定为100％的未处理的C2C12细胞相比，用不同浓度的扁桃体间充质干细胞来源外泌体处理的C2C12细胞具有增加100％以上的细胞存活率。
接着，确认扁桃体间充质干细胞来源外泌体是否在激活素A的存在下改善肌肉分化。
C2C12成肌细胞开始分化，在分化第1天用50ng/ml的激活素A以及不同浓度的扁桃体间充质干细胞来源外泌体(0.5μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)处理。将其结果示于图12中。
如图12所示，5天后，单独用激活素A处理的细胞表现出有限的肌管细胞(myotube)形成。相反，暴露于扁桃体间充质干细胞来源外泌体的细胞即使在激活素A的存在下也形成丰富的肌管细胞(myotube)。
并且，通过实时PCR确认作为骨骼肌标志物的肌球蛋白重链1(MYH1)、ACVR2A以及ACVR1B的表达变化，并将其示于图13中。
除了上述实施例中的引物序列以外额外的引物序列信息如下。
如图13所示，在暴露于激活素A的情况下，肌球蛋白重链1(MYH1)骨骼肌标志物的表达在用扁桃体间充质干细胞来源外泌体处理的C2C12细胞中得到恢复。尤其，扁桃体间充质干细胞来源外泌体在5μg/ml的浓度下最有效地增加肌球蛋白重链1(MYH1)表达。
并且，考虑到扁桃体间充质干细胞来源外泌体中has-miR-145-5p的丰富度与作为激活素A受体的ACVR2A以及ACVR1B的潜在相关性，确认用扁桃体间充质干细胞来源外泌体处理24小时的C2C12细胞中ACVR2A以及ACVR1B的表达。结果，表现出ACVR2A以及ACVR1B在添加扁桃体间充质干细胞来源外泌体的C2C12细胞中显著下调。
因此，确认到扁桃体间充质干细胞来源外泌体增加肌肉分化，尤其可以通过调节激活素A受体的表达来改善由激活素A引起损伤的肌肉分化。
实施例7：确认外泌体通过has-miR-145-5p活性调节肌肉对激活素A的反应
为了确认has-miR-145-5p是否在支持肌肉分化的扁桃体间充质干细胞来源外泌体中发挥核心作用，确认当使用has-miR-145-5p特异性抑制剂(百奥尼，大田)时的肌管细胞形成变化。
将其结果示于图14中。如图14所示，通过用has-miR-145-5p抑制剂处理抑制扁桃体间充质干细胞来源外泌体对肌管细胞(myotube)形成的支持效果。
并且，如图15所示，用has-miR-145-5p特异性抑制剂处理显著逆转由扁桃体间充质干细胞来源外泌体诱导的ACVR2A、ACVR1B、肌肉转录调节因子(MyoD)、肌球蛋白重链1(Myh1)基因的表达。并且，扁桃体间充质干细胞来源外泌体以依赖于has-miR-145-5p的方式下调肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin 1)的表达。
这种结果表明与扁桃体间充质干细胞来源外泌体通过has-miR-145-5p活性减少激活素A受体、ACVR2A以及ACVR1B的表达具有相关性。
实施例8：确认通过用扁桃体间充质干细胞来源外泌体处理恢复体内(in vivo)体重减少以及骨骼肌损失
在Bu-Cy治疗期间，注射补充有miR-145-5p特异性抑制剂的扁桃体间充质干细胞来源外泌体，并且与上述实施例2相似地进行实验。
将确认体重变化的结果示于图16中。
在第3天注射扁桃体间充质干细胞来源外泌体以及非特异性抑制剂(对照组(control))的小鼠自最后用Cy处理后的第2天起表现出体重减少得到显著抑制。然而，从最后用Cy处理的2天后开始这种效果在给药扁桃体间充质干细胞来源外泌体以及miR-145-5p抑制剂的小鼠中减少。尤其，扁桃体间充质干细胞来源外泌体以及miR-145-5p抑制剂的共同给药导致实验结束时体重迅速减少。
并且，如图17所示，与has-miR-145-5p抑制剂联合使用的扁桃体间充质干细胞来源外泌体还减缓每只实验小鼠的肌肉量的损失减少。
并且，如图18所示，可以确认在注射扁桃体间充质干细胞来源外泌体的小鼠中，当miR-145-5p的活性保持正常时使得由Bu-Cy诱导的肌肉纤维破坏最小化。
最后，如图19所示，在用Bu-Cy处理的小鼠中，has-miR-145-5p特异性抑制剂以及扁桃体间充质干细胞来源外泌体的共同给药逆转肌肉特异性环指蛋白1(MuRF1)以及肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin 1)萎缩基因的表达。并且，用Bu-Cy处理的小鼠表现出作为激活素A受体的ACVR2A以及ACVR1B显著增加，从而表明可以增加激活素A反应性。
通过上述结果，确认到本发明的扁桃体间充质干细胞来源外泌体对肌肉骨骼损失表现出优异的改善效果。尤其，确认到不同于其他干细胞来源外泌体，这种改善效果是基于has-miR-145-5p的高表达水平实现的，并确认到这种作用与激活素A表达水平的抑制高度相关。基于这种结果，确认到本发明的外泌体可以用作肌肉相关疾病的治疗剂。
<110> 梨花大学-产业合作基金会
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<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> hsa-miR-145-5p
<400> 1
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<220>
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<220>
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<220>
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Atrogin1 Reverse Primer
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ggcagtcgag aagtccagtc 20
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Gapdh Forward Primer
<400> 6
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Gapdh Reverse Primer
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ggagggatct cgctcctgga agatggtg 28
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<213> Artificial Sequence
<220>
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ccactccggg acatagactt g 21
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MyoD Reverse Primer
<400> 9
aaaagcgcag gtctggtgag 20
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Myh1 Forward Primer
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gcgaatcgag gctcagaaca a 21
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<220>
<223> Myh1 Reverse Primer
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gtagttccgc cttcggtctt g 21
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<220>
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ataaacggcg acattgtttt gc 22
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<212> DNA
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<220>
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tcggtgtaac aggatttgaa gtg 23
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Acvr1b Reverse Primer
<400> 15
gcagaagtca atatagcagc agt 23

Claims (12)

1.一种用于预防或治疗肌肉减少相关疾病的药物组合物，其特征在于，包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体。
2.根据权利要求1所述的用于预防或治疗肌肉减少相关疾病的药物组合物，其特征在于，扁桃体间充质干细胞来源外泌体包含序列1的hsa-miR-145-5p。
3.根据权利要求1所述的用于预防或治疗肌肉减少相关疾病的药物组合物，其特征在于，肌肉减少相关疾病表现出由于肌肉功能下降、肌肉损失或肌肉退化的原因而导致肌肉减少的症状。
4.根据权利要求1所述的用于预防或治疗肌肉减少相关疾病的药物组合物，其特征在于，肌肉减少相关疾病为选自由肌肉减少症、肌萎缩、肌无力、肌营养不良症、肌强直、肌张力减低、肌性肌无力、进行性肌萎缩、肌萎缩侧索硬化症以及恶病质组成的组中的一种以上疾病。
5.根据权利要求1所述的用于预防或治疗肌肉减少相关疾病的药物组合物，其特征在于，扁桃体间充质干细胞来源外泌体的直径为10nm至300nm。
6.根据权利要求1所述的用于预防或治疗肌肉减少相关疾病的药物组合物，其特征在于，扁桃体间充质干细胞来源外泌体抑制激活素A的表达。
7.根据权利要求1所述的用于预防或治疗肌肉减少相关疾病的药物组合物，其特征在于，组合物以1×107～1×1012/ml的粒子数包含外泌体。
8.一种用于预防或改善肌肉减少相关疾病的食品组合物，其特征在于，包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体。
9.根据权利要求8所述的用于预防或改善肌肉减少相关疾病的食品组合物，其特征在于，扁桃体间充质干细胞来源外泌体包含序列1的hsa-miR-145-5p。
10.根据权利要求8所述的用于预防或改善肌肉减少相关疾病的食品组合物，其特征在于，肌肉减少相关疾病为选自由肌肉减少症、肌萎缩、肌无力、肌营养不良症、肌强直、肌张力减低、肌性肌无力、进行性肌萎缩、肌萎缩侧索硬化症以及恶病质组成的组中的一种以上疾病。
11.一种用于增加肌肉量或改善肌肉功能的食品组合物，其特征在于，包含扁桃体间充质干细胞来源外泌体。
12.根据权利要求11所述的用于增加肌肉量或改善肌肉功能的食品组合物，其特征在于，扁桃体间充质干细胞来源外泌体包含序列1的hsa-miR-145-5p。
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