CN118059241A - 一种用于伤口愈合的压电复合膜及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明适用于膜分离材料技术领域，提供了一种用于伤口愈合的压电复合膜及其制备方法和应用。本发明合成的一种利用LIPUS激活的DA/PVDF压电复合膜，可促进伤口愈合。在超声刺激下，该膜能够产生稳定的局部电刺激；并且该膜通过多巴胺的修饰使其更有利于细胞粘附，有助于细胞在膜表面形成连续的细胞层；在超声刺激下，该膜的细胞活力、迁移率明显增加，尤其在高功率超声处理下，显示出显著的增强效果；在动物实验中，该膜在超声刺激下显著提高了创面的愈合效果，促进伤口部位的I型胶原蛋白沉积，体现了其在伤口愈合过程中的结构重塑优势；并且超声刺激下该膜的体内生物安全性好。
Description
技术领域
本发明属于膜分离材料技术领域，尤其涉及一种用于伤口愈合的压电复合膜及其制备方法和应用和应用。
背景技术
皮肤作为人体最大的器官，极易受到外部威胁的伤害。皮肤伤口愈合包括止血和炎症、新组织形成和组织重塑。不同形式的电刺激可主动调节内源性细胞行为，通过增强神经胶质细胞、成纤维细胞的增殖和分化，以及增加三磷酸腺苷和蛋白质的形成来促进伤口愈合。而临床电刺激设备会给患者带来高昂的费用。因此，我们需要一种非侵入性、无线、能主动控制细胞行为的新方法，以调节皮肤细胞再生并使其参与伤口愈合。
PVDF 具有优异的压电特性、生物相容性和低杨氏模量带来的柔韧性。PVDF 是一种压电聚合物，具有α-β五种结晶构象。PVDF 的 β 相采用全反式构象，因此偶极矩最大，压电容量最高。然而在机械拉伸或温度波动过程中，β相含量较高的 PVDF 可能会由于热运动而发生部分去极化，从而恢复到热力学稳定的非压电相。并且如果伤口位于难以发生形变的区域，PVDF 薄膜产生的电刺激将大大减弱，因此在伤口愈合应用中将会受到很大限制。
超声波能以机械波的形式向伤口部位输送能量，对压电材料产生机械刺激并使其变形，随后在伤口附近产生类似于内源性电场的电微环境。低强度脉冲超声（LIPUS）是一种特殊的超声波，比其他类型的超声波更安全，LIPUS 产生的热效应极小。LIPUS 设备操作简单方便，其强度远远低于大多数传统临床设备产生的超声波强度，因此有可能成为家庭康复设备。 同时，LIPUS 还具有非侵入性和穿透性的优势。
多巴胺（DA）是酪氨酸的衍生物，因其含有儿茶酚基团和羟基等官能团而备受关注，这些官能团可与不同支架材料中的多种分子结合形成功能界面。 DA 的强粘附性、良好的生物相容性和清除 ROS 的能力有利于伤口闭合和组织工程。与其他压电填料（如有机改性纳米粘土、金属纳米颗粒、功能化多壁碳纳米管、石墨烯及其衍生物）相比，这种压电填料具有极其优秀的生物相容性。因此，提出一种利用LIPUS激活的 DA/PVDF压电复合膜及其制备方法和应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于伤口愈合的压电复合膜及其制备方法和应用和应用，旨在解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种用于伤口愈合的压电复合膜的制备方法，包括以下步骤：
步骤S1、将PVDF粉末溶解于DMF/丙酮混合溶剂中，并将多巴胺粉末加入混合溶液；
步骤S2、将步骤S1的混合溶液通过超声震荡充分混合后，使用磁力搅拌器，在70℃条件下搅拌12 h，形成均匀的DA/PVDF混合溶液；
步骤S3、利用标准的实验室设置，以滤布作为支撑材料，采用静电纺丝技术将均匀的DA/PVDF溶液纺丝，制备得到DA/PVDF压电复合膜，室温干燥备用。
进一步的，所述步骤S1中，PVDF粉末的质量浓度为150 mg/ml；DMF/丙酮混合溶剂的体积比v/v为7:3；多巴胺粉末的质量浓度为1.5 mg/ml。
进一步的，所述步骤S2中，超声震荡的时间为90 min。
进一步的，所述步骤S3中，标准的实验室设置包括一个连接到电源的喷丝仪、一个注射器泵和一个接地的集电极。
进一步的，所述步骤S3中，静电纺丝过程的输送速率为1.0 mL/h，外加电压为18kV，喷丝仪与集电极之间的距离为15 cm，空气湿度为37。
一种如上述所述的制备方法制得的用于伤口愈合的压电复合膜。
一种如上述所述的用于伤口愈合的压电复合膜在制备促进伤口愈合的生物活性材料中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明提供了一种利用LIPUS激活的DA/PVDF压电复合膜（以下简称为DA/PVDF膜），可促进伤口愈合。在超声刺激下，DA/PVDF膜的电输出显著增强，这表明该膜能够产生稳定的局部电刺激；并且DA/PVDF膜通过多巴胺的修饰使其更有利于细胞粘附，有助于细胞在膜表面形成连续的细胞层。另外，在超声刺激下，DA/PVDF膜的细胞活力、迁移率明显增加，尤其在高功率超声处理下，显示出显著的增强效果。此外，在动物实验中，DA/PVDF膜在超声刺激下显著提高了创面的愈合效果，比单独的LIPUS治疗或其他商业对照组效果更好，促进伤口部位的I型胶原蛋白沉积，体现了其在伤口愈合过程中的结构重塑优势。同时，超声刺激下DA/PVDF膜的体内生物安全性好，为伤口愈合提供了一种创新的且安全有效的治疗方法。
附图说明
图1为本发明DA/PVDF膜的制备和表征结果图；其中，a为PVDF膜和DA/PVDF膜的纳米纤维微观结构；b为PVDF膜和DA/PVDF膜的相关直径分布；c为PVDF膜和DA/PVDF膜的FTIR分析结果图。
图2为本发明DA/PVDF膜的压电性能表征结果图；其中，a为PVDF膜暴露在功率为1.0 W/cm2的低频脉冲超声波下产生的输出电压；b为DA/PVDF膜暴露在功率为1.0 W/cm2的低频脉冲超声波下产生的输出电压；c为DA/PVDF膜暴露在功率为0-1.0 W/cm2的低频脉冲超声波下产生的输出电压；d为DA/PVDF膜置于小鼠皮肤上，暴露于低频脉冲超声波下的输出电压实验图。
图3为本发明DA/PVDF膜对细胞黏附的影响结果图；其中，a为L929细胞在LIPUS on(1.0 W/cm2)和LIPUS off条件的刺激下，PVDF和DA/PVDF纳米纤维支架上培养24 h后的激光共聚焦影像；b为在LIPUS（1.0 W/cm2）刺激条件下，PVDF膜及DA/PVDF膜在固定在小鼠背部伤口24 h的SEM影像；c为在LIPUS（1.0 W/cm2）刺激条件下，PVDF膜及DA/PVDF膜在固定在小鼠背部伤口24 h的另一SEM影像。
图4为本发明DA/PVDF膜对细胞增殖和迁移的影响结果图；其中，a为将L929成纤维细胞接种在PVDF膜、DA/PVDF膜中，不同的超声功率强度下（0 W/cm2、0.2 W/cm2、0.4 W/cm2、0.6 W/cm2、0.8 W/cm2、1.0 W/cm2）细胞活力的变化；b为孵育3天后，不同的超声功率强度下（0 W/cm2、1.0 W/cm2）细胞活力的变化；c为划痕实验的细胞迁移率统计图；d为下室中细胞数量统计图；e为下室中迁移的细胞图像。
图5为本发明DA/PVDF膜对小鼠全层皮肤缺损模型再生修复的影响结果图；其中，a为体内分组第0、3、7、14天不同时间节点的小鼠背部创面照片；b为不同组伤口愈合的速率；c为不同组胶原蛋白的统计结果；d为14天时不同组创面周围组织的H&E染色图像；e为不同组创面周围组织的Masson染色图像在伤口愈合的重塑阶段。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下结合具体实施例对本发明的具体实现进行详细描述。
本发明一个实施例提供的一种用于伤口愈合的压电复合膜的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将PVDF粉末（mW=5.34 kDA）以150 mg/ml溶解于DMF/丙酮混合溶剂中（7:3v/v）中，并将多巴胺（DA）粉末(98％)以1.5 mg/ml加入混合溶液。
步骤二、将步骤一中混合溶液超声震荡90 min使其充分混合后，使用磁力搅拌器，在70℃条件下搅拌12 h，形成均匀的DA/PVDF混合溶液。
步骤三、标准的实验室设置包括一个连接到高压电源的喷丝仪、一个注射器泵和一个接地的集电极。静电纺丝过程的输送速率为1.0 mL/h，外加电压为18 kV，喷丝仪与集电极之间的距离为15 cm，空气湿度为37。以滤布作为支撑材料，采用静电纺丝技术将均匀的DA/PVDF溶液纺丝，制备得到DA/PVDF膜，室温干燥备用。
步骤四、将DA/PVDF膜暴露在功率为1.0 W/cm2的低频脉冲超声波下，测量出其可产生450 mV的输出功率。
作为本发明的一种优选实施例，将上述步骤四中的DA/PVDF膜置于小鼠皮肤上，然后暴露于低频脉冲超声波下，DA/PVDF膜可以产生稳定的输出电压以调节伤口修复。
实施例1、DA/PVDF膜的表征；
采用上述步骤一至步骤三制得DA/PVDF膜，在实施例中，添加了1.0 wt％的DA分子后，采用扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope，SEM）观察其微观形貌结构，纳米粒度仪（Nanoparticle Size Analyzer）分析其粒径。
使用傅里叶变换红外光谱仪（Fourier-Transform Infrared Spectroscopy，FTIR）对DA/PVDF膜进行化学结构表征。
结果显示，电纺得到的DA/PVDF膜的直径分布均匀（≈732±232 nm），与原始PVDF膜（≈712.34±163.42 nm）相似。图1中a展示了DA/PVDF膜的纳米纤维微观结构，图1中b展示了DA/PVDF膜的相关直径分布，验证了膜的制备方法。图1中c为FTIR 的分析结果，显示PVDF膜及DA/PVDF膜在840 cm-1处均有一个明显的峰值，归因于极性β相，其中1.0 wt％DA的PVDF膜的特征峰最强。非极性α相的特征峰如763 cm-1、796 cm-1在两种纳米纤维膜中均未出现明显强峰，这可能是由于静电纺丝的作用。
实施例2、DA/PVDF膜的压电性能表征；
1.在0-1.0 W/cm2范围内，研究了DA/PVDF膜的电输出。在输出测量中，超声频率设置为1 MHz。
2.研究了不同功率强度的低频脉冲超声波对DA/PVDF膜输出性能的影响。
3.将DA/PVDF膜置于小鼠皮肤上，然后暴露于低频脉冲超声波下，记录其输出电压。
结果显示，PVDF膜暴露在功率为1.0 W/cm2的低频脉冲超声波下可产生350 mV的输出电压（图2中a），在添加了1.0 wt％的DA时，DA/PVDF膜的输出功率提升到450 mV，提升约1.3倍（图2中b）。当功率强度从0 W/cm2增加到1.0W/cm2时，DA/PVDF膜的电输出均大幅增加(图2中c)。
图2中d为DA/PVDF膜置于小鼠皮肤上，暴露于低频脉冲超声波下的输出电压，显示DA/PVDF膜可以产生输出电压为（~50mV），表明在超声刺激下将电势传递到伤口部位是可行的。因此，低频脉冲超声响应性DA/PVDF膜可能适用于生物医学应用。
实施例3、DA/PVDF膜对细胞黏附的影响；
1.将小鼠成纤维细胞L929细胞系接种于PVDF和DA/PVDF膜（1x1 cm2）上，接种密度每组5x104个细胞，待细胞附着后使用LIPUS（1.0 W/cm2）对PVDF组及DA/PVDF组进行刺激，每组5 min，随后培养24 h。
2.24 h后使用钙黄绿素/碘化丙啶试剂盒（AM/PI，solarbio，中国）对L929细胞系进行活染色和死染色，接下来用4％多聚甲醛固定，然后PBS洗涤三次后，在30℃下用37.4 μM的钙黄绿素和5 μM的碘化丙啶孵育2 min，随后PBS洗涤三次，死细胞和活细胞分别显示红色和绿色荧光。
3.采用激光共聚焦显微镜（（FLUOVIEW FV1000 奥林巴斯 中国）和SEM观察L929细胞在PVDF膜和DA/PVDF膜上的生长状态。扫描电镜和激光共聚焦图像均清晰展示了DA/PVDF膜对细胞粘附的影响，DA的存在加速了L929细胞的附着过程。这些结果表明，DA/PVDF纳米纤维膜在促进细胞附着方面具有显著的优势，可望在组织工程和生物医学应用中发挥重要作用。
图3中a为L929细胞在LIPUS on(1.0 W/cm2)和LIPUS off条件的刺激下，PVDF和DA/PVDF纳米纤维支架上培养24 h后的激光共聚焦影像。由于我们的PVDF样品是疏水的，细胞与样品的黏附很弱。经过DA修饰的电纺丝PVDF膜则更利于细胞粘附，在联合LIPUS的刺激后，这种细胞黏附进一步增强。
图3中b和c为在LIPUS（1.0 W/cm2）刺激条件下，PVDF膜及DA/PVDF膜在固定在小鼠背部伤口24 h的SEM影像。为了验证DA/PVDF膜在LIPUS刺激下对伤口部位细胞真实的招募情况，我们将PVDF膜及DA/PVDF膜固定在小鼠背部伤口，使用LIPUS（1.0W/cm2）对小鼠背部的纳米纤维膜进行刺激（5 min/24h），24 h后取样并进行电镜扫描。结果显示，在经过LIPUS刺激后（1.0 W/cm2）相比于PVDF组，DA/PVDF膜上可观察到更广泛的细胞黏附，同时细胞呈伸长和伸展的形态，并混合形成连续的细胞层。扫描电镜和激光共聚焦图像均显示，DA/PVDF纳米纤维膜在LIPUS（1.0 W/cm2）的刺激下有利于细胞粘附并加速这一过程。
实施例4、DA/PVDF膜对细胞增殖和迁移的影响；
为评估LIPUS刺激下DA/PVDF膜对细胞增殖和迁移的影响，进行了体外细胞增殖和迁移实验。
1.将L929成纤维细胞接种在PVDF膜、DA/PVDF膜中，并进行连续培养3天。对照组为直接接种在聚苯乙烯板（TCPS）上培养的细胞。
2.使用CCK-8检测了在不同的超声功率强度下（0-1.0 W/cm2）细胞活力的变化，结果代表其对细胞增值性能的影响。
3.进行细胞划痕实验研究在超声刺激下的细胞迁移行为。将L929细胞分别接种在PVDF膜、DA/PVDF膜和孔板中培养，24 h后采用200 μL的移液管尖端在培养板或薄膜上划一条直线，将贴壁的L929细胞直接划伤，并将其分为超声处理组和未经超声处理组。可见不同组的划痕边缘以不同的速度逐渐向空白区迁移，细胞迁移率（M%）表示为不同时间划痕面积的变化，使用Image J软件对划痕面积进行量化。用公式计算： M%=（A0-AT）×100%/A0，其中A0为划痕后立即测量的初始划痕面积，AT为划痕后不同时间(t=24 h）。
4.进行Transwell实验研究在超声刺激下的细胞迁移行为。将Transwell孔板上方小室中分为未处理组，PVDF组和DA/PVDF组，PVDF组和DA/PVDF组分别覆盖PVDF膜和DA/PVDF膜，确保与下室分隔开。将L929成纤维细胞接种于上室，进行超声刺激处理或不处理。孵育24 h后，取下小室，采用结晶紫对其染色，使用显微镜拍摄下室中迁移的细胞图像，使用Image J等软件进行细胞数量的定量分析。
CCK8结果如图4中a和b所示，未经LIPUS处理（0 W/cm2）时，与对照组相比，PVDF膜及DA/PVDF膜上的细胞活力略有升高，其中DA/PVDF组优于普通PVDF组。在调整LIPUS的功率为0.2 W/cm2、0.6 W/cm2、0.8 W/cm2时，DA/PVDF膜相比于对照组细胞活力有所增加，但是在0.4 W/cm2的激发条件下，DA/PVDF膜上的细胞活力与对照组相比略有下降。总的来说，在这些功率条件下，DA/PVDF膜上的细胞活力未表现出显著性差异。然而，在高功率超声处理（即1.0 W/cm2）下，接种在细胞膜上的细胞活力增加。孵育3天后（图4中b），当调整LIPUS功率强度为1.0 W/cm2时，DA/PVDF膜上的细胞活力是空白组的1.14倍，结果具有显著性差异（P＜0.5）。DA/PVDF膜可以响应超声波将电刺激传递到成纤维细胞上，并上调生长因子的水平，从而促进细胞增殖。
划痕实验的结果如图4中c所示，当调整LIPUS功率强度为1.0 W/cm2时，超声刺激下的DA/PVDF膜在24 h后几乎完全愈合，细胞迁移率最高（14.62 %）。相比之下，未经超声处理的细胞膜的细胞迁移率要低得多，为4.63 %。超声刺激也提高了PVDF膜的划痕愈合效果，细胞迁移率（11.70 %），较DA/PVDF组效果要弱。超声处理下细胞膜产生的电场可以促进边缘细胞的迁移。当超声功率强度为1.0 W/cm2时，DA/PVDF组的细胞迁移率明显高于PVDF组和对照组（由图4中e可以看出）。
图4中d和e为Transwell的实验结果，与划痕结果相似，当调整LIPUS功率强度为1.0 W/cm2时，空白组和PVDF组中很少有细胞被招募到下室（P＞0.5），相比之下，DA/PVDF组的下腔室中有更多的细胞（图4中e）。
以上结果表明，超声波可以刺激细胞膜，促进细胞的增殖和迁移行为。
实施例5 、DA/PVDF膜对小鼠全层皮肤缺损模型再生修复的影响；
1.根据损伤的深度，皮肤缺损可分为表皮皮肤伤口、浅层部分厚度皮肤伤口、深部部分厚度皮肤伤口和全层皮肤伤口，利用小鼠背部全层创面模型评价了超声激活的压电薄膜对创面愈合行为的影响。
2.体内分组如下：单纯缺损组(Control组)、 Fibrin处理组（商业对照组）、 LIPUS组、DA/PVDF组、DA/PVDF + LIPUS组。具体步骤如下：准备6周大的小鼠(体重18±1g)，麻醉后，将小鼠背部脱毛，用剪刀在背部建立约10*10 mm大小的全层皮肤剪切伤口，在其伤口上按照分组分别对其进行相应处理。
3.记录并分析其伤口愈合速率，14天后对小鼠进行安乐死，收集伤口周围皮肤，进行组织学切片HE染色，马松染色（Masson's trichrome staining）分析胶原纤维沉积情况。
图5中a为体内分组第0、3、7、14天不同时间节点的小鼠背部创面照片。图5中b为不同组伤口愈合的速率，相对创面面积定义为At/A0的百分比，其中A0为初始创面面积，At为不同天数（如t = 0、3、7、14）测量的创面面积。如图5中a所示，空白对照组创面愈合缓慢，第3天仍然还保留了较大的创口面积（~77.47%），第7天的伤口面积约为69.38％，14天后仍有较大的创口未完全愈合（~17.30％）。当在伤口部位单独应用LIPUS超声时，伤口部位的愈合率仅稍高于对照组。在第3天时，LIPUS组的伤口面积约为74.26％，第7天（~68.20％）及14天（~17.71％）时的伤口面积与对照组非常近似。因此，单纯的LIPUS治疗愈合效果较低。当在伤口部位应用DA/PVDF膜后，3天的伤口面积（~60.43％）与对照组有显著性差异，7天时的愈合效果较好（~40.23％），然而在第14天，DA/PVDF膜组伤口愈合较为缓慢（伤口面积约19.75％），因此，在单一使用DA/PVDF膜时，仅加速了伤口的初期愈合（3天，7天）。与其他组相比，DA/PVDF在超声刺激下的创面面积在前3天明显减少（~38.34％），令人惊讶的是，DA/PVDF+LIPUS组的7天（~15.20％）及14天（~5.54％）的愈合效率甚至优于商业纤维蛋白胶组的第3天（~46.13％），第7天（~32.50％），第14天（~18.62％），结果具有显著性差异（P＜0.5）。这些结果表明使用LIPUS+压电薄膜给予伤口刺激能够高效促进伤口愈合。
图5中d显示了14天时不同组创面周围组织的H&E染色图像。在DA/PVDF+LIPUS组的真皮组织中形成了完整的表皮，而其他组则存在部分再生上皮过度增厚。此外，DA/PVDF+LIPUS组在结构重塑方面比其他组更快，如皮肤附件毛囊和皮脂腺更新。
图5中e为不同组创面周围组织的Masson染色图像在伤口愈合的重塑阶段，胶原纤维沉积并从III型重塑为I型。同时，胶原纤维沿张力直线排列，靠近交联在一起。Masson三色染色显示，对照组在伤口愈合早期（3~7天）胶原纤维较少。胶原蛋白的统计结果也表明（图5中c），DA/PVDF+LIPUS组的I型胶原蛋白在伤口部位的沉积明显高于其他组。在伤口愈合的后期（14天），随着胶原纤维的沉积增多，DA/PVDF+LIPUS组的胶原纤维排列更为有序（图5中d）。而对照组胶原纤维呈不规则和螺旋状。这些结果表明，LIPUS是一种有效、安全的治疗方法。DA/PVDF压电薄膜和LIPUS的结合显著加速了伤口愈合过程。
综上所述，本发明提供的一种利用LIPUS激活的DA/PVDF膜，在超声刺激下能够产生稳定的局部电刺激，通过多巴胺的修饰使其更有利于细胞粘附，有助于细胞在膜表面形成连续的细胞层。另外，在超声刺激下，DA/PVDF膜的细胞活力、迁移率明显增加，尤其在高功率超声处理下，显示出显著的增强效果。此外，在动物实验中，DA/PVDF膜在超声刺激下显著提高了创面的愈合效果，促进伤口部位的I型胶原蛋白沉积，显示了在伤口愈合过程中的结构重塑优势，为伤口愈合提供了一种创新的且安全有效的治疗方法。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些均不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。
Claims (7)
1.一种用于伤口愈合的压电复合膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤S1、将PVDF粉末溶解于DMF/丙酮混合溶剂中，并将多巴胺粉末加入混合溶液；
步骤S2、将步骤S1的混合溶液通过超声震荡充分混合后，使用磁力搅拌器，在70℃条件下搅拌12 h，形成均匀的DA/PVDF混合溶液；
步骤S3、利用标准的实验室设置，以滤布作为支撑材料，采用静电纺丝技术将均匀的DA/PVDF混合溶液纺丝，制备得到DA/PVDF压电复合膜，室温干燥备用。
2.根据权利要求1所述的用于伤口愈合的压电复合膜的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，PVDF粉末的质量浓度为150 mg/ml；DMF/丙酮混合溶剂的体积比v/v为7:3；多巴胺粉末的质量浓度为1.5 mg/ml。
3.根据权利要求1所述的用于伤口愈合的压电复合膜的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，超声震荡的时间为90 min。
4.根据权利要求1所述的用于伤口愈合的压电复合膜的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，标准的实验室设置包括一个连接到电源的喷丝仪、一个注射器泵和一个接地的集电极。
5.根据权利要求4所述的用于伤口愈合的压电复合膜的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，静电纺丝过程的输送速率为1.0 mL/h，外加电压为18 kV，喷丝仪与集电极之间的距离为15 cm，空气湿度为37。
6.一种根据权利要求1-5任一所述的制备方法制得的用于伤口愈合的压电复合膜。
7.一种根据权利要求6所述的用于伤口愈合的压电复合膜在制备促进伤口愈合的生物活性材料中的应用。
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