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CN117677396A - Il-38特异性抗体 - Google Patents

Il-38特异性抗体 Download PDF

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CN117677396A
CN117677396A CN202280032511.4A CN202280032511A CN117677396A CN 117677396 A CN117677396 A CN 117677396A CN 202280032511 A CN202280032511 A CN 202280032511A CN 117677396 A CN117677396 A CN 117677396A
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CN
China
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seq
amino acid
acid sequence
sequence shown
cdr2
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Pending
Application number
CN202280032511.4A
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English (en)
Inventor
M·K·罗宾逊
K·隆格伦
B·哈曼
P·A·尼基丁
F·沈
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yimi Rumei Co ltd
Original Assignee
Yimi Rumei Co ltd
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Publication date
Application filed by Yimi Rumei Co ltd filed Critical Yimi Rumei Co ltd
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Abstract

本发明涉及对人白介素‑38(IL‑38)具有特异性的抗体，包括分离的抗体，或其抗原结合片段。此处所述的抗体或其抗原结合片段部分或完全阻断、抑制或中和IL 38的生物活性。此处所述的方法涉及抑制受肿瘤生长和/或转移影响的个体中的肿瘤生长或转移。

Description

IL-38特异性抗体
相关申请的交叉引用
本申请要求2021年3月28日提交的美国临时申请63/167,105和2021年8月24日提交的美国临时申请63/236,454的优先权权益，将其中的每一个的内容通过引用以其整体特此并入。
ASCII文本文件序列表的提交
将以下提交的ASCII文本文件的内容通过引用以其整体并入本文：计算机可读形式(CRF)的序列表(文件名：224192000340SEQLIST.TXT，记录日期：2022年3月25日，大小：61,255字节)。
技术领域
本发明涉及与IL38结合的抗体。
背景技术
人适应性免疫系统通过细胞(T细胞)和体液(B细胞)过程做出反应。体液反应导致选择和克隆扩增这样的B细胞，所述B细胞表达能够与抗原结合的表面结合免疫球蛋白(Ig)分子。体细胞超突变和类别转换的过程与克隆扩增一致地发生。这些过程共同导致分泌的抗体，这些分泌的抗体针对靶抗原是亲和力成熟的，并且含有属于五个一般类别之一(也称为同种型(M、D、A、G或E))的恒定结构域。每一类抗体(IgM、IgD、IgA、IgG和IgE)以不同的方式与细胞免疫系统相互作用。针对靶抗原是亲和力成熟的抗体的标志可以包括：1)核苷酸和随后的氨基酸相对于种系基因的变化；2)对靶抗原的高结合亲和力；3)与其他蛋白质相比对靶抗原的结合选择性。
充分理解的是，肿瘤患者可以产生针对肿瘤抗原的免疫反应。那些抗原可能是由于肿瘤内导致突变蛋白质的遗传变化或向免疫系统异常呈递原本正常的蛋白质而产生的。异常呈递可以通过以下过程发生：包括但不限于新生儿蛋白的异位表达、蛋白质过表达至高水平、选择性剪接、细胞内蛋白错误定位至细胞表面、或细胞的裂解。翻译后修饰(如蛋白质的异常糖基化，可能由于酶(诸如但不限于糖基转移酶)的表达的变化而发生)也可能导致产生由体液免疫系统识别的非自身抗原。
已经证明与疾病相关的蛋白质(包括与癌症相关的蛋白质)选择性结合的抗体可以成功地以导致治疗功效的方式调节其靶蛋白的功能。人免疫系统针对突变的或在其他方面异常的蛋白质产生抗体反应的能力表明，患者的免疫反应可能包括能够识别和调节关键肿瘤驱动物功能的抗体。
肿瘤微环境对于肿瘤细胞逃避免疫系统的检测和消除是必需的。这是通过几种机制实现的，这些机制包括抑制性免疫细胞的募集、免疫检查点分子(像PD-1)的表达以及免疫抑制细胞因子的存在。因此，一些免疫肿瘤疗法旨在靶向负责肿瘤微环境中免疫抑制屏障的关键分子。成功的免疫肿瘤疗法可以导致细胞毒性T细胞和NK细胞的浸润，以及Th1细胞因子的上调和成功的抗肿瘤反应的诱导。
细胞因子IL-1家族(其中IL-38是其成员)通过与膜结合受体结合并与其形成复合物而引发下游信号传导事件。IL-1受体复合物的例子呈现于图1中。可以预测与其他细胞因子(如肿瘤坏死因子α(TNFa))一样，抗体与细胞因子上的一个或多个表位的结合干扰细胞因子与它们的同源受体形成复合物的能力(Hu等人,JBC,2013)。预测IL-1的残基(在图1中以球形表示)在IL-1与受体白介素-1受体2(IL-1R2)和白介素-1受体辅助蛋白(IL-1RAP)之间形成相互作用面。IL-1的这一预测的受体结合区内的残基可以包含抗体可结合的表位。抗体与这些表位的结合将被预测为阻断IL-1与其同源受体的结合并拮抗或抑制细胞因子的生物功能。IL-1与IL-38之间的同源性表明IL-38上存在一个或多个相应的表位。抗体与该一个或多个表位的结合将被预测为拮抗或抑制IL-38的功能。
细胞因子的IL-1家族在调节肿瘤发展期间以及治疗期间的炎症方面起重要作用(Baker等人,2019)。虽然一些IL-1家族成员促进炎症，但是其他家族成员可以抑制炎症。IL-38是阻断通过IL-1家族受体(包括IL-36R和IL1RALP1)的信号传导的拮抗剂，并通过抑制炎症充当免疫检查点(Veerdonk等人,2017)。具体地，IL-38显示出减少炎性细胞因子的产生，所述炎性细胞因子可以在有效的抗肿瘤反应中发挥关键作用。此外，从凋亡的肿瘤细胞分泌的IL-38可以在体外抑制巨噬细胞和T细胞反应(Mora等人,2016)。类似地，在患有肺腺癌的患者中已经显示IL-38表达与较差的预后相关以及与PDL1表达相关(Takada等人,2017)。然而，在非小细胞肺癌中已经报道了相互矛盾的证据，其中IL-38的较低表达与较差的预后相关(Wang等人,2018)。IL-38可以充当肿瘤微环境内的免疫抑制细胞因子，因此阻断IL-38信号传导可以触发有效的抗肿瘤反应(图2)。
发明内容
在一些方面，本发明涉及IL-38细胞因子在各种癌症中的作用的发现。因此，在一些实施方案中，本文提供了特异性结合并抑制有效治疗癌症的IL-38的抗体。在一些实施方案中，与IL-38特异性结合的所述抗体包含M3的CDR序列。在一些实施方案中，与IL-38特异性结合的所述抗体包含含有SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ IDNO:24中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列的VL CDR3。在一些实施方案中，与IL-38特异性结合的所述抗体包含含有SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述癌症选自头颈部鳞状细胞癌(HNSC)、食管癌(ESCA)、肺鳞状细胞癌(LUSC)、宫颈癌(CESC)、膀胱癌(BLCA)、皮肤黑色素瘤(SKCM)、前列腺腺癌(PRAD)、胃食管癌、宫颈鳞状细胞癌、宫颈鳞状细胞癌、皮肤鳞状细胞癌、基底细胞癌、皮肤黑色素瘤、肺腺癌、宫颈腺癌、膀胱尿路上皮癌和前列腺腺癌以及肺腺癌(LUAD)。
本发明涉及对人白介素-38(IL-38)具有特异性的抗体(包括分离的抗体)或其抗原结合片段，所述抗体含有SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的可变重链(VH)氨基酸序列内含有的和/或SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:9的可变轻链(VH)氨基酸序列内含有的至少一个互补决定区(CDR)的至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个或至少8个任选连续氨基酸。
更具体地，本发明的抗体或抗原结合片段的CDR可以含有以下氨基酸序列的至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、或至少8个任选连续氨基酸：SEQ ID NO:23、28、33、38、43、48、53或15的VH CDR1氨基酸序列；
SEQ ID NO:24、29、34、39、44、49、54或16的VH CDR2氨基酸序列；
SEQ ID NO:25、30、35、40、45、50、55或17的VH CDR3氨基酸序列；
SEQ ID NO:58、63、68、73、78、83或18的VL CDR1氨基酸序列；
SEQ ID NO:59、64、69、74、79、84或19的VL CDR2氨基酸序列；和/或
SEQ ID NO:60、65、70、75、80、85或20的VL CDR3氨基酸序列。
本发明的抗体或其抗原结合片段部分或完全阻断、抑制或中和IL 38的生物活性。因此，本发明的方法包括通过向受肿瘤生长和/或转移影响的个体施用治疗有效量的包含所述抗体或其抗原结合片段的组合物来抑制所述个体的肿瘤生长或转移从而进行治疗的方法，其中本发明的抗体或其抗原结合片段部分或完全阻断、抑制或中和促进或维持肿瘤生长和/或转移的IL-38的生物活性。
将PCT申请号PCT/US2020/044260的披露内容以其整体并入本文。
附图说明
图1是使用PyMol可视化的白介素-1(IL-1)受体复合物的共晶结构(RCSB PDB文件编号3O4O)的表示。共晶包含IL-1β、白介素-1受体2型(IL-1R2)和白介素-1受体辅助蛋白(IL-1RAP)。IL-1R2和IL-1RAP分别以黑色和浅灰色图形描绘。IL-1β以中灰色带描绘。以球形描绘的IL-1β残基是预测在IL-1R2或IL-1RAP的4埃之内的那些残基。
图2是描绘阻断IL-38功能可以如何引起可导致抗肿瘤反应的炎症反应的图。
图3是示出在基于LICOR的筛选中PR087-29B5杂交瘤产生的抗体的结合的图。
图4是示出PR087-29B5以点印迹形式与重组人IL-38的选择性剂量依赖性结合的图。
图5是通过流式细胞术显示出IMM20130与各种细胞系的结合的图。
图6是示出对于不同时间点，在凋亡条件下培养的癌细胞系的条件培养基中的IL-38浓度的图。
图7是示出基于TCGA数据库的数据的RNA表达分析的一组图，其比较了前列腺腺癌(PRAD)、结直肠腺癌(COAD)、肺腺癌(LUAD)、皮肤黑色素瘤(SKCM)、子宫体子宫内膜癌(UCEC)、头颈部鳞状细胞癌(HNSC)和胰腺腺癌(PAAD)中的IL-38表达水平与免疫细胞谱系特异性标记物。
图8是在条件培养基中来自LPS刺激的THP-1巨噬细胞的IL-6和TNFα表达的图。
图9是当用IL-38处理时在LPS刺激的巨噬细胞中被下调的标记物的mRNA表达的图。
图10是对于所指示的时间点，用LPS刺激的THP-1巨噬细胞中Jnk和STAT3的磷酸化状态的图。
图11是示出用IL-38、IMM20130和同种型对照的各种组合处理的LPS刺激的THP-1细胞的IL-6产生的图。
图12是示出用IL-38和抗IL-38多克隆抗体的各种组合处理的LPS刺激的THP-1细胞的IL-6产生的图。
图13是示出单克隆杂交瘤上清液与板结合的重组IL-38的结合的图。
图14是示出单克隆杂交瘤上清液的拯救百分比(由它们在IL-38处理的LPS刺激的细胞中恢复IL-6产生的能力来定义)的图。
图15是示出不同浓度的选定抗人IL-38抗体的结合动力学的图。
图16A是示出测试先导候选抗体在IL-38处理的LPS刺激的THP-1细胞中恢复IL-6产生的能力的剂量反应的图。
图16B是示出测试先导候选抗体在IL-38处理的LPS刺激的THP-1细胞中恢复GM-CSF产生的能力的剂量反应的图。
图17是静脉内和腹膜内给药10mg/kg的C57BL/6小鼠中先导候选抗体的血浆水平随时间而变的图。
图18是在用CD1-M3、紫杉醇或组合处理的C57BL/6小鼠中植入的B16.F10肿瘤的生长曲线。
图19是在用CD1-M3处理的B16.F10肿瘤中通过流式细胞术表征肿瘤浸润的髓样群体和淋巴细胞群体的图。
图20是在用CD1-M3处理的FVB小鼠中植入的MMTV-PyMT肿瘤的生长曲线以及示出这些肿瘤内的IL-6水平的图。
图21是在用CD1-M3、CD1-M8、CD1-M26和NZB-M8处理的scid小鼠中植入的A549肿瘤的生长曲线。
图22是在用CD1-M3、CD1-M8、CD1-M26和NZB-M8处理的A549肿瘤中通过流式细胞术表征肿瘤浸润的髓样群体的图。
图23是示出基于TCGA数据库的数据的RNA表达分析的一组图，其检查了头颈部鳞状细胞癌(HNSC)、食管癌(ESCA)、肺鳞状细胞癌(LUSC)、宫颈癌(CESC)、膀胱癌(BLCA)、皮肤黑色素瘤(SKCM)、前列腺腺癌(PRAD)和肺腺癌(LUAD)中的IL-38表达水平。
图24描绘了IMM20130结合和特异性的鉴定和分析。图24A描绘了使用Immunome平台从原代患者B细胞分离IMM20130的概述。图24B描绘了使用生物膜层干涉测量法(BLI)分析的IMM20130与重组人IL-38蛋白的结合。图24C描绘了通过蛋白质微阵列评估的IMM20130的特异性。示出了前200种蛋白质的结合信号和基于结合信号的S得分。图24D描绘了通过流式细胞术测得的IMM20130与癌细胞系的基于细胞的结合。
图25描绘了在多种肿瘤类型中表达并且与较低的免疫细胞浸润相关的IL-38。使用肿瘤和正常组织RNAseq数据来研究多种癌症中的IL-38表达。将样品的IL-38表达归一化，并且基于高(方框外)和低(方框内)表达进行细分。根据10％-15％的正常组织的值设置阈值。每个图中的数字表示所有肿瘤样品中IL-38阳性样品的频率。
图26描绘了对每个分开的肿瘤类型计算的免疫细胞共表达特征分析(IMMSig)，以确定IL38阳性肿瘤样品与IL38阴性肿瘤样品之间的免疫细胞肿瘤浸润的差异。
图27描绘了IMM20324结合人IL-38并且通过中和受体结合在体外抑制原代人免疫细胞功能。图27A描绘了IMM20324与过表达小鼠或人IL-38的HEK293细胞的细胞内结合。图27B描绘了IMM20324与板结合的重组全长人IL38的基于ELISA的结合分析。图27C描绘了IMM20324对IL38与IL-36R和IL1RAPL1受体的结合的剂量依赖性抑制。图27D描绘了IMM20324在体外逆转IL-38介导的对THP-1细胞中IL-6分泌的抑制。IMM20324在体外逆转IL-38介导的对THP-1细胞中GM-CSF分泌的抑制。
图28描绘了在未经处理的小鼠中IMM20324的体内有利PK。图28A描绘了在未经处理的C57BL/6雌性小鼠中通过静脉内(IV)和腹膜内(IP)途径施用抗体后IMM20324的体内单剂量药代动力学分析。显示的剂量为10mg/kg。图28B描绘了通过腹膜内注射重复施用抗体后血清IMM20324浓度的分析。以mg/kg(mpk)计的标记剂量向各组每周给药一次(QW)或每周给药两次(BIW)。
图29描绘了IMM20324在小鼠中是良好耐受的。图29A描绘了在整个研究持续时间内监测来自每个处理组的动物的平均体重。图29B描绘了在研究终止时评估每个处理组所包括的动物的平均脾脏重量。图29C描绘了在施用IMM20324后血清中循环细胞因子水平的评估。在研究终止后对血液进行取样。
图30描绘了IMM20324在体内抑制B16.F10肿瘤生长。根据肿瘤体积在第0天对小鼠进行随机分组，并且将其用10mg/Kg或50mg/Kg剂量的IMM20324或同种型对照每三天腹膜内处理，持续6个总剂量。每3天测量肿瘤体积。将肿瘤生长曲线用指数模型拟合。图30A描绘了在研究持续时间内来自指示组的单独动物的生长曲线。图30B描绘了单独动物在第10天的中期肿瘤体积，*p<0.05。图30C描绘了在研究持续时间内计算的平均肿瘤生长速率。图30D根据肿瘤生长曲线的拟合计算出肿瘤体积达到1500mm3时的天数。
图31A-图31D描绘了IMM20324抑制肿瘤生长并且在体内引发针对EMT6肿瘤的免疫记忆。根据肿瘤体积在第0天对小鼠进行随机分组，并且将其用三种不同剂量的IMM20324或媒介物对照每周处理两次，持续6个总剂量。图31A描绘了直到第44天指示组中每只小鼠的单独生长曲线。图31B描绘了第15天的单独肿瘤体积。在图31C中，在原发性肿瘤完全消退后，将EMT6细胞植入IMM20324处理的小鼠的对侧侧腹。在二次激发期间未施用另外的抗体。将二次EMT6肿瘤生长曲线与未处理的年龄匹配的小鼠进行比较。图31D描绘了再激发小鼠的存活曲线，其显示了每组的存活％。*p<0.05。
图32A-图32C显示IMM20324处理剂量依赖性地抑制体内B16.F10肿瘤生长。将C57BL/6小鼠在右侧腹接种B16.F10黑色素瘤细胞。在第0天，根据肿瘤体积对小鼠进行随机分组，并且将其用3mg/Kg、10mg/Kg或30mg/Kg剂量的IMM20324或30mg/Kg同种型对照或10mg/Kg抗PD-L1每三天腹膜内处理，持续4个总剂量。每3天测量肿瘤体积。图32A显示在荷B16.F10肿瘤小鼠中IMM20324在单剂量后实现了剂量依赖性暴露。图32B描绘了在不同处理组中在第11天的最终肿瘤体积。图32C描绘了在第4剂量后24小时血清中IMM20324的浓度(ng/ml)。
图33示出了最终血清中IMM20324的浓度与肿瘤中的CXCR3配体趋化因子CXCL9/MIG(图33A)和CXCL10/IP10(图33B)呈负相关。
图34示出了最终血清中IMM20324的浓度与肿瘤中的CC家族趋化因子CCL3/MIP1α(图34A)和CCL4/MIP1β(图34B)呈负相关。
图35示出了最终血清中IMM20324的浓度与肿瘤中的CCL11/嗜酸性粒细胞趋化因子呈负相关。
图36示出了原发性人头颈癌样品中IL-38的细胞质表达分析和细胞核表达分析。将石蜡包埋、福尔马林固定的肿瘤切片用IMM20130抗IL38小鼠抗体染色，并且用多克隆抗小鼠二抗检测。仅注意到在细胞质或细胞核区室中的染色。由委员会认证的病理学家对标记的切片进行染色强度和定位的评分。将样品(x轴)基于分期进行排序。
图37示出了基于疾病分期比较了原发性人头颈癌样品中IL-38的细胞质表达和细胞核表达。将石蜡包埋、福尔马林固定的肿瘤切片用IMM20130抗IL38小鼠抗体染色，用多克隆抗小鼠二抗检测。对于每个癌症分期，绘制了在细胞质或细胞核区室中显示染色的样品的频率。
图38示出了原发性宫颈鳞状细胞癌样品中IL-38的细胞质表达分析和细胞核表达分析。将石蜡包埋、福尔马林固定的肿瘤切片用IMM20130抗IL38小鼠抗体染色，并且用多克隆抗小鼠二抗检测。仅注意到在细胞质或细胞核区室中的染色。由委员会认证的病理学家对标记的切片进行染色强度和定位的评分。将样品(x轴)基于分期进行排序。
图39示出了基于疾病分期比较了原发性人宫颈鳞状细胞癌样品中IL-38的细胞质表达和细胞核表达。将石蜡包埋、福尔马林固定的肿瘤切片用IMM20130抗IL38小鼠抗体染色，用多克隆抗小鼠二抗检测。在细胞质或细胞核区室中的染色可确定阳性样品与阴性样品。
图40示出了原发性肺癌样品中IL-38的细胞质表达分析和细胞核表达分析。将石蜡包埋、福尔马林固定的肿瘤切片用IMM20130抗IL38小鼠抗体染色，并且用多克隆抗小鼠二抗检测。仅注意到在细胞质或细胞核区室中的染色。由委员会认证的病理学家对标记的切片进行染色强度和定位的评分。将样品(x轴)基于分期进行排序。
图41示出了基于疾病分期比较了原发性肺癌样品中IL-38的细胞质表达和细胞核表达。将石蜡包埋、福尔马林固定的肿瘤切片用IMM20130抗IL38小鼠抗体染色，用多克隆抗小鼠二抗检测。在细胞质或细胞核区室中的染色可确定阳性样品与阴性样品。
图42示出了通过免疫组织化学进行的原发性肺癌样品中IL-38的细胞质表达分析和细胞核表达分析。将石蜡包埋、福尔马林固定的肿瘤切片用IMM20130抗IL38小鼠抗体染色，用多克隆抗小鼠二抗检测。在细胞质或细胞核区室中的染色可确定阳性样品与阴性样品。将肺肿瘤根据病理学肿瘤类型进行分选。
图43示出了不同肺癌子集中IL-38的相对染色强度。将肿瘤切片用IMM20130抗IL38小鼠抗体染色，并且用多克隆抗小鼠二抗检测。使用0(无表达)至6(强表达)强度等级进行病理学评分。数据示出了每个子集的平均强度得分+/-SEM。
图44示出了黑色素瘤中IL-38的相对染色强度。将黑色素瘤切片用商业小鼠抗人IL-38抗体(H127c；Thermo Scientific)或IMM20130染色，并且用多克隆抗小鼠二抗检测。使用0(阴性)至4(强表达)强度等级进行病理学评分。将样品按分期排序。
图45示出了原发性人黑色素瘤样品中IL-38的相对染色强度。将肿瘤切片用IMM20130抗IL38小鼠抗体染色，并且用多克隆抗小鼠二抗检测。使用0(阴性)至4(强表达)强度等级进行病理学评分。数据示出了每个子集的平均强度得分+/-SEM。
图46A-图46D示出了头颈部鳞状细胞癌中IL-38表达的深入分析。图46A-图46C显示IL-38表达(Y轴，Log2(TPM+1))与CD8+T细胞(图46A)、巨噬细胞(图46B)和NK细胞(图46C)的估计浸润(X轴)呈负相关。图46D示出了相比于HPV阳性群体，HPV阴性群体中的IL-38表达显著更高。
具体实施方式
本文所述的发明涉及与白介素-38(IL 38)特异性结合的抗体。因此，本发明包括对IL-38具有特异性的抗体的组合物、使用对IL-38具有特异性的抗体的方法以及制备和配制对IL-38具有特异性的抗体的方法。使用本发明的抗体的方法可以包括治疗有需要的个体的方法。因此，在治疗方法中使用本发明的抗体的方法可以包括施用本发明的抗体组合物的方法。本发明的方法还可以包括在体内和体外诊断方法中使用抗体。本发明的诊断方法可以作为多步骤治疗方法中的一个步骤包括在内。
根据本发明的抗体可以是完整的免疫球蛋白、或免疫球蛋白的变体、或免疫球蛋白的一部分。天然存在的免疫球蛋白具有两条重(H)链和两条轻(L)链，每条链都含有恒定区和可变区并且通过二硫键相互连接。有两种类型的轻链，称为lambda(“λ”)和kappa(“κ”)。有五种主要的重链类别(也称为同种型)：IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，它们决定了抗体分子的功能活性。除了其可变结构域外，IgA、IgD或IgG重链还具有三个恒定结构域(CH1、CH2、CH3)。IgM和IgE重链具有四个恒定结构域(CH1、CH2、CH3、CH4)。
轻链可变区和重链可变区含有被三个高变区(称为互补决定区(“CDR”))中断的“框架”区。CDR主要负责与抗原表位的结合。不同轻链或重链的框架区的序列在物种内相对保守，并用于在三维空间中定位和比对CDR。每条链的三个CDR通常称为CDR1、CDR2和CDR3，从N末端开始依次编号，并且通常由特定CDR所在的链来鉴定。因此，重链CDR被命名为H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3；同样，轻链CDR被命名为L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3。由每个重链和轻链的一个恒定结构域和一个可变结构域构成的抗原结合片段被称为Fab片段。F(ab)'2片段含有两个Fab片段，并且可以通过在其铰链区下方切割免疫球蛋白分子而产生。
本发明的抗体的氨基酸序列还可以含有以下的变体：SEQ.ID.NO.2、4、7、10、12、14-20、22-25、27-30、32-35、37-40、42-45、47-50、52-55、57-60、62-65、67-70、72-75、77-80、82-85、87-90和92-95的氨基酸序列中的一个或多个；或由SEQ.ID.NO.1、3、5、6、8、9、11、13、21、26、31、36、41、46、51、56、61、66、71、76、81、86和91编码的氨基酸序列的一个或多个。抗体变体通常含有氨基酸序列修饰，并且可以出于任何原因(包括例如以改善特异性、亲和力或稳定性(即半衰期))进行氨基酸序列修饰。本发明的抗体变体的例子包括但不限于抗体的片段、氨基酸取代、氨基酸缺失、嵌合抗体和前述的任何组合。
本发明的含有一个或多个氨基酸取代的变体抗体通常含有相对于SEQ.ID.NO.2、4、7、10、12、14-20、22-25、27-30、32-35、37-40、42-45、47-50、52-55、57-60、62-65、67-70、72-75、77-80、82-85、87-90和92-95的氨基酸序列；或由SEQ.ID.NO.1、3、5、6、8、9、11、13、21、26、31、36、41、46、51、56、61、66、71、76、81、86和91编码的氨基酸序列中的一个或多个，不超过15个、不超过12个、不超过10个、不超过9个、不超过8个、不超过7个、不超过6个、不超过5个、不超过4个、不超过3个、不超过2个或不超过1个保守氨基酸取代；和/或相对于SEQ.ID.NO.2、4、7、10、12、14-20、22-25、27-30、32-35、37-40、42-45、47-50、52-55、57-60、62-65、67-70、72-75、77-80、82-85、87-90和92-95的氨基酸序列或由SEQ.ID.NO.1、3、5、6、8、9、11、13、21、26、31、36、41、46、51、56、61、66、71、76、81、86和91编码的氨基酸序列中的一个或多个，不超过5个、不超过4个、不超过3或不超过2个非保守氨基酸取代或不超过1个非保守氨基酸取代。
保守氨基酸取代是用具有类似侧链的氨基酸残基替代氨基酸残基的取代。本领域已经定义了具有类似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电的极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-支链侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳香族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)。如本文所述，本发明的变体抗体可以包括用氨基酸类似物以及氨基酸取代的氨基酸。本发明的抗体可以含有一个或多个氨基酸序列，所述一个或多个氨基酸序列与以下具有至少85％序列同一性：SEQ.ID.NO.2、4、7、10、12、14-20、22-25、27-30、32-35、37-40、42-45、47-50、52-55、57-60、62-65、67-70、72-75、77-80、82-85、87-90和92-95的氨基酸序列的一个或多个或由SEQ.ID.NO.1、3、5、6、8、9、11、13、21、26、31、36、41、46、51、56、61、66、71、76、81、86和91编码的氨基酸序列的一个或多个的氨基酸序列。因此，本发明的抗体可以具有这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以下具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性：SEQ.ID.NO.2、4、7、10、12、14-20、22-25、27-30、32-35、37-40、42-45、47-50、52-55、57-60、62-65、67-70、72-75、77-80、82-85、87-90和92-95的氨基酸序列的一个或多个或由SEQ.ID.NO.1、3、5、6、8、9、11、13、21、26、31、36、41、46、51、56、61、66、71、76、81、86和91编码的氨基酸序列的一个或多个的氨基酸序列。如本文所用，术语“序列同一性”是指两个或更多个氨基酸序列之间的相似性。序列同一性通常根据氨基酸序列之间的同一性百分比(或相似性或同源性)来测量；百分比越高，比较的序列彼此越相似。
本发明的一些抗体的VH框架区的氨基酸序列可以含有SEQ ID NO:22、27、32、37、42、47、52、87、2或7的序列或其片段。类似地，相同或不同抗体的VL框架区的氨基酸序列可以含有SEQ ID NO:57、62、67、72、77、82、92、4或10的序列或其抗原结合片段。
本发明的抗体含有至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个CDR。本发明的抗体中的CDR的氨基酸序列可以通过本领域的已知方法和CDR的定义来确定，所述CDR的定义包括例如：ImMunoGeneTics数据库(“IMGT”)编号系统(Lefranc,M.-P.等人,Nucleic Acids Research,27,209-212(1999))；North,B.等人描述的一种或多种CDR定义(A new clustering of antibody CDR loop conformations,J Mol Biol(2011))；Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)描述的一种或多种CDR定义；Chothia等人,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)描述的一种或多种CDR定义；和MacCallum等人,J.Mol.Biol.262:732-745(1996)描述的一种或多种CDR定义。
本发明的一些抗体或抗原结合片段的CDR中的一种或多种含有以下中的至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、或至少8、至少9、至少10、至少11或至少12个连续氨基酸：选自SEQID NO:23、28、33、38、43、48、53、88或15的氨基酸序列的VH CDR1；选自SEQ ID NO:24、29、34、39、44、49、54、89或16的氨基酸序列的VH CDR2；选自SEQ ID NO:25、30、35、40、45、50、55、90或17的氨基酸序列的VH CDR3；选自SEQ ID NO:58、63、68、73、78、83、93或18的氨基酸序列的VL CDR1；选自SEQ ID NO:59、64、69、74、79、84、94或19的氨基酸序列的VL CDR2；和选自SEQ ID NO:60、65、70、75、80、85、95或20的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明的抗体含有以下中的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个：SEQ ID NO:23的VH CDR1、SEQ ID NO:24的VH CDR2、SEQID NO:25的VH CDR3、SEQ ID NO:58的VL CDR1、SEQ ID NO:59的VL CDR2和SEQ ID NO:60的VL CDR3。
在其他实施方案中，本发明的抗体含有以下中的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个：SEQ ID NO:28的VH CDR1、SEQ ID NO:29的VH CDR2、SEQID NO:30的VH CDR3、SEQ ID NO:58的VL CDR1、SEQ ID NO:59的VL CDR2和SEQ ID NO:60的VL CDR3。
在其他实施方案中，本发明的抗体含有以下中的至少四个、至少五个或至少六个：SEQ ID NO:33的VH CDR1、SEQ ID NO:34的VH CDR2、SEQ ID NO:35的VH CDR3、SEQ ID NO:63的VL CDR1、SEQ ID NO:64的VL CDR2和SEQ ID NO:65的VL CDR3。
在其他实施方案中，本发明的抗体含有以下中的至少四个、至少五个或至少六个：SEQ ID NO:38的VH CDR1、SEQ ID NO:39的VH CDR2、SEQ ID NO:40的VH CDR3、SEQ ID NO:68的VL CDR1、SEQ ID NO:69的VL CDR2和SEQ ID NO:70的VL CDR3。
在其他实施方案中，本发明的抗体含有以下中的至少四个、至少五个或至少六个：SEQ ID NO:43的VH CDR1、SEQ ID NO:44的VH CDR2、SEQ ID NO:45的VH CDR3、SEQ ID NO:73的VL CDR1、SEQ ID NO:74的VL CDR2和SEQ ID NO:75的VL CDR3。
在其他实施方案中，本发明的抗体含有以下中的至少四个、至少五个或至少六个：SEQ ID NO:48的VH CDR1、SEQ ID NO:49的VH CDR2、SEQ ID NO:50的VH CDR3、SEQ ID NO:78的VL CDR1、SEQ ID NO:79的VL CDR2和SEQ ID NO:80的VL CDR3。
在其他实施方案中，本发明的抗体含有以下中的至少四个、至少五个或至少六个：SEQ ID NO:53的VH CDR1、SEQ ID NO:54的VH CDR2、SEQ ID NO:55的VH CDR3、SEQ ID NO:83的VL CDR1、SEQ ID NO:84的VL CDR2和SEQ ID NO:85的VL CDR3。
在其他实施方案中，本发明的抗体含有以下中的至少四个、至少五个或至少六个：SEQ ID NO:15的VH CDR1、SEQ ID NO:16的VH CDR2、SEQ ID NO:17的VH CDR3、SEQ ID NO:18的VL CDR1、SEQ ID NO:19的VL CDR2和SEQ ID NO:20的VL CDR3。
在其他实施方案中，本发明的抗体含有以下中的至少四个、至少五个或至少六个：SEQ ID NO:88的VH CDR1、SEQ ID NO:89的VH CDR2、SEQ ID NO:90的VH CDR3、SEQ ID NO:93的VL CDR1、SEQ ID NO:94的VL CDR2和SEQ ID NO:95的VL CDR3。
根据本发明的抗体是单克隆抗体，这意味着抗体是由单一抗体的基因或其部分已经被转染到其中的单克隆B淋巴细胞群、克隆杂交瘤细胞群或克隆细胞群产生的。单克隆抗体通过本领域技术人员已知的方法产生，例如通过由骨髓瘤细胞与免疫脾细胞融合制备杂交抗体形成细胞。
根据本发明的单克隆抗体通常也是人源化单克隆抗体。更具体地，根据本发明的“人”抗体(也称为“完全人”抗体)是包含人框架区和来自人免疫球蛋白的CDR的抗体。例如，抗体的框架和CDR来自同一来源的人重链或人轻链氨基酸序列，或两者。可替代地，框架区可以源自一种人抗体，并且被工程化为包含来自不同人抗体的CDR。“人源化取代”是氨基酸取代，其中存在于抗体(如IL-38抗体)的VH或VL结构域中特定位置处的氨基酸残基被参考人VH或VL结构域中等效位置处的氨基酸残基替代。参考人VH或VL结构域可以是由人种系编码的VH或VL结构域。可以在本文定义的抗体的框架区和/或CDR中进行人源化取代。“人源化变体”是本发明的变体抗体，其相对于参考抗体含有一个或多个“人源化取代”，其中参考抗体的一部分(例如VH结构域和/或VL结构域或其含有至少一个CDR的部分)具有源自非人物种的氨基酸，并且“人源化取代”发生在源自非人物种的氨基酸序列中。
根据本发明的抗体也可以是“抗原结合片段”。抗原结合片段是指免疫球蛋白或抗体的多肽片段，该片段结合抗原或与完整抗体(即，与它们所来源的完整抗体)竞争抗原结合(即，与IL-38特异性结合)。如本文所用，术语抗体分子的“片段”包括抗体的抗原结合片段，例如抗体轻链可变结构域(VL)、抗体重链可变结构域(VH)、单链抗体(scFv)、F(ab')2片段，Fab片段、Fd片段、Fv片段和单结构域抗体片段(Dab)。片段可以例如经由完整或完全抗体或抗体链的化学或酶促处理或者通过重组方式获得。被认为是根据本发明的抗体的免疫球蛋白变体的例子包括单结构域抗体(如VH结构域抗体)、Fab片段、Fab'片段、F(ab)'2片段、单链Fv蛋白(“scFv”)和二硫键稳定的Fv蛋白(“dsFv”)。VH单结构域抗体是由重链可变结构域组成的免疫球蛋白片段。Fab片段含有单价抗原结合免疫球蛋白片段，该片段可以通过用木瓜蛋白酶消化整个抗体来产生从而得到完整的轻链和一条重链的一部分。类似地，Fab'片段还含有单价抗原结合免疫球蛋白片段，该片段可以通过用胃蛋白酶消化整个抗体，然后进行还原来产生从而得到完整的轻链和重链的一部分。每个免疫球蛋白分子获得两个Fab'片段。(Fab')2片段是两个Fab'片段的二聚体，其可以通过用胃蛋白酶处理整个抗体而不随后还原来获得，因此Fab'单体通过两个二硫键保持在一起。Fv片段是含有轻链可变区和重链可变区的基因工程化片段，表示为两条链。单链(“sc”)抗体(如scFv片段)是含有轻链的VL区、重链的VH区的基因工程分子，通过合适的多肽接头连接为基因融合的单链分子。单链抗体的二聚体(如scFV2抗体)是scFV的二聚体，并且也可以称为“微型抗体”。dsFv变体还含有免疫球蛋白的VL区和VH区，但是链已经突变以引入二硫键来稳定链的缔合。
本领域技术人员将认识到，可以产生抗体的保守变体。在抗体片段(如dsFv片段)或scFv片段中使用的此类保守变体将保留在VH区与VL区之间正确折叠和稳定所需的关键氨基酸残基，并将保留残基的电荷特征，以保留分子的低pI和低毒性。
根据本发明的抗体还可以包含“标记的”免疫球蛋白CH3结构域，以促进针对内源性抗体背景的生物学检测。更具体地，标记的CH3结构域是异质抗体表位，其已经掺入人IgG衍生的CH3结构域的AB、EF或CD结构环中的一个或多个中。优选将CH3标签掺入IgG1亚类抗体的结构环境中，根据本发明，其他人IgG亚类(包括IgG2、IgG3和IgG4)也是可用的。表位标记的CH3结构域(也称为“CH3支架”)通常可以以免疫球蛋白Fc部分的形式掺入本发明的具有重链恒定区的任何抗体中。CH3支架标签的例子以及将其掺入抗体中的方法披露于国际专利申请PCT/US2019/032780中。用于检测表位标记的CH3支架的抗体以及本发明的包含表位标记的CH3支架的抗体在本文中总体上称为“检测抗体”。
根据本发明的抗体的治疗和诊断有效性与所述抗体对其靶抗原的结合亲和力相关。结合亲和力可以通过由Frankel等人,Mol.Immunol.,16:101-106,1979所述的Scatchard方法的修改来计算。可替代地，结合亲和力可以通过抗体与其抗原的解离速率来测量。可以使用各种方法(包括例如表面等离子体共振(SPR)、竞争放射免疫测定、ELISA和流式细胞术)来测量结合亲和力。“特异性结合”抗原的抗体是一种以高亲和力结合抗原并且不会显著结合其他不相关抗原的抗体。
抗体与其抗原的高亲和力结合是由抗体的一个或多个CDR与抗原靶标的表位(也称为抗原决定簇)的结合相互作用介导的。表位是分子上具有抗原性(意味着它们能够引发特定的免疫反应)的特定化学基团或肽序列。由根据本发明的抗体特异性结合的表位可以由包含在IL-38内的氨基酸的线性序列形成。这种表位被称为“线性表位”，并且它可以保持关于根据本发明的抗体与变性形式的IL-38的特异性结合的功能性。可替代地，根据本发明的抗体的特异性结合可以取决于IL-38靶标的特定三维结构，使得表位的贡献残基不一定呈线性序列。换句话说，根据本发明的抗体的表位可以是“构象表位”。
IL-38可以存在于各种癌细胞(包括上皮来源的癌细胞)的表面上，或者由癌细胞、正常上皮细胞或免疫系统的细胞分泌到细胞外环境中。因此，本文所述的抗体可以包含在组合物中，这些组合物可用于诊断或治疗IL-38起到调节疾病进展作用的各种疾病的方法中。这些包括但不限于癌症，包括但不限于诸如以下的癌症：食管癌、膀胱癌、宫颈癌、前列腺癌、乳腺癌、肾癌、结直肠癌、胰腺癌、黑色素瘤、子宫癌、头颈癌和肺癌(鳞状细胞癌或腺癌)。
根据本发明的抗体的治疗和诊断用途可以包括免疫缀合物的用途。如本文所述，免疫缀合物是嵌合分子，所述嵌合分子包含与根据本发明的抗体连接的效应分子。如本文所提及的，效应分子是旨在对所述免疫缀合物靶向的细胞具有期望效果的免疫缀合物的部分，或者效应分子可以用于增加根据本发明的抗体的半衰期或生物利用度。效应分子的一般例子包括治疗剂(如毒素和化学治疗药物)、诊断剂(如可检测标记物)以及半衰期和生物利用度增强分子(如脂质或聚乙二醇)。
可以使用本领域技术人员已知的任何数量的方式(包括共价和非共价附接方式)，将效应分子与根据本发明的抗体缀合。将效应分子与抗体附接的程序可以根据效应物的化学结构而变化。多肽通常含有多种官能团，如羧酸(COOH)基团、游离胺(-NH2)和巯基(SH)基团，这些基团可用于与抗体上的合适官能团反应以导致效应分子的结合。可替代地，根据本发明的抗体可以被衍生化以暴露或附接另外的反应官能团。衍生化可能涉及用于将抗体与效应分子连接的许多已知接头分子中的任一种的附接。
接头分子能够与抗体和效应分子形成共价键。合适的接头包括但不限于直链或支链碳接头、杂环碳接头或肽接头。如果效应分子是多肽，则接头可以通过多肽的侧基(如通过与半胱氨酸的二硫键连接)与多肽的组成氨基酸连接，或与末端氨基酸的α碳氨基和羧基连接。重组技术可以用于将两个或更多个多肽(包括接头肽)制成一个连续的多肽分子。
效应分子也可以包含在直接附接或连接的包封系统中，该包封系统保护效应分子免于直接暴露于循环系统。制备与抗体附接的脂质体的方式是本领域技术人员熟知的(参见例如，美国专利号4,957,735；和Connor等人,Pharm Ther 28:341-365,1985)。
根据本发明的免疫缀合物的效应分子通常可用于治疗癌症以及通常以异常细胞生长为特征的疾病。因此，根据本发明的免疫缀合物的效应分子可以是化学治疗剂，包括：小分子药物；核酸，如反义核酸、用于与单链或双链DNA共价交联的衍生化寡核苷酸和形成三链体的寡核苷酸；蛋白质；肽；氨基酸和氨基酸衍生物；糖蛋白；放射性同位素；脂质；碳水化合物；重组病毒；和毒素，诸如但不限于，相思豆毒素、蓖麻毒素、假单胞菌外毒素(“PE”，如PE35、PE37、PE38和PE40)、白喉毒素(“DT”)、肉毒杆菌毒素、皂草素、局限曲菌素(restrictocin)、多花白树毒素、三角梅核糖体失活蛋白(bouganin)及其经修饰的毒素。
在一些情况下，希望当免疫缀合物已经到达其靶位点时，从抗体释放效应分子。因此，在这些情况下，免疫缀合物将包含在靶位点附近可切割的连接。可以通过酶促活性或免疫缀合物在靶细胞内或靶位点附近所经受的条件来促进接头的切割以从根据本发明的抗体释放效应分子。可替代地，在特异性结合其靶抗原之后，根据本发明的抗体可以被表达靶抗原的细胞内化。
根据本发明的治疗性抗体(包括治疗性免疫缀合物)可以在预防、治疗或改善受试者的疾病的方法中使用。在本发明的某些实施方案中，根据本发明的抗体可以用于预防、治疗或改善受试者的癌症。例如，根据本发明的抗体可以用于预防、治疗或改善癌症，包括但不限于食管癌、膀胱癌、宫颈癌、前列腺癌、乳腺癌、肾癌、结肠癌、胰腺癌、黑色素瘤、子宫癌、头颈癌和肺癌(鳞状细胞癌或腺癌)。
“预防”疾病是指抑制疾病的全面发展。“治疗”是指在疾病或病理学病症开始发展后改善其体征或症状的治疗干预。“改善”是指疾病的体征或症状的数量或严重程度的减少。关于根据本发明的抗体用于预防、治疗或改善癌症、疾病的体征或症状的用途可能与肿瘤负荷或转移的数量或大小相关。
用于预防、治疗或改善癌症的方法可能需要向受试者施用包含有效量的根据本发明的抗体的组合物，以抑制肿瘤生长或转移，所述方法包括选择患有这样的癌症的受试者，所述癌症的特征在于表达所述抗体的抗原靶标或者以其他方式呈递根据本发明的抗体的细胞膜相关靶抗原的肿瘤细胞。例如，根据本发明的抗体可以经由与肿瘤细胞的靶抗原结合而接触肿瘤细胞，以调节、抑制或中和靶抗原的功能。根据本发明的抗体也可以在与肿瘤细胞表面上的靶抗原结合后递送细胞毒性疗法。
根据本发明的抗体可以结合流体中的靶抗原，所述流体诸如但不限于血液或血液衍生物像血浆和血清、或肿瘤微环境中的流体。与细胞膜附接的靶抗原的情况一样，根据本发明的抗体与分泌的靶抗原的结合可以导致靶抗原的生物功能的调节、抑制或中和。因此，根据本发明的抗体在溶液中与其靶抗原的结合可以例如在体内调节、抑制或中和其靶抗原的活性或膜结合囊泡的活性。
还存在根据本发明的抗体的用途，其中抗体结合与细胞外基质(“ECM”)或ECM蛋白相关的靶抗原。例如，根据本发明的抗体可以与靶抗原结合，所述靶抗原本身与使内皮细胞迁移或分化的ECM相关，或者预期会遇到调节、抑制或中和其靶标。ECM相关靶抗原的存在可能与各种疾病状态(包括与肿瘤微环境中ECM相关靶抗原的存在相关的疾病)相关。
如上所述，可以施用本文公开的抗体以减缓或抑制原发性肿瘤的生长或抑制各种类型肿瘤的转移。例如，可以施用根据本发明的抗体以减缓或抑制癌症的生长或转移，所述癌症包括但不限于食管癌、膀胱癌、宫颈癌、前列腺癌、乳腺癌、肾癌、结直肠癌、胰腺癌、黑色素瘤、子宫癌、头颈癌和肺癌(鳞状细胞癌或腺癌)。在这些应用中，将治疗有效量的抗体以足以抑制癌细胞的生长、复制或转移或者抑制癌症的体征或症状的量施用于受试者。合适的受试者可以包括被诊断患有如下癌症的那些，在所述癌症中肿瘤细胞表达根据本发明的抗体的靶抗原。根据本发明的抗体的治疗有效量将取决于癌症的严重程度和患者健康的总体状态。抗体的治疗有效量是提供一种或多种症状的主观缓解或临床医生或其他合格的专业人员指出的客观可识别的改善的量。
施用于有需要的受试者的根据本发明的抗体被配制成组合物。更具体地，所述抗体可以被配制用于全身施用或局部施用，如肿瘤内施用。例如，根据本发明的抗体可以被配制用于肠胃外施用，如静脉内施用。组合物可以以单位剂型制备以用于施用于受试者。施用的数量和时间由治疗临床医生自行决定，以实现预期结局。
根据本发明的抗体的施用还可以伴随其他抗癌剂或治疗性治疗(如肿瘤的手术切除)的施用。可以将任何合适的抗癌剂与本文公开的抗体组合施用。示例性抗癌剂包括但不限于化学治疗剂，例如像有丝分裂抑制剂、烷基化剂、抗代谢药、插入性抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶、拓扑异构酶抑制剂、抗存活剂、生物反应调节剂、免疫调节剂、抗激素(例如抗雄激素)和抗血管生成剂。其他抗癌治疗包括放射疗法和特异性靶向癌细胞的其他抗体。
用于施用的组合物可以包括抗体溶解于药学上可接受的载体(如水性载体)中的溶液。通常，所述载体的性质将取决于所采用的特定施用方式。例如，肠胃外配制品通常包含可注射流体，所述可注射流体包括药学上和生理学上可接受的流体，如作为媒介物的水、生理盐水、平衡盐溶液、右旋糖水溶液或甘油。对于固体组合物(如粉剂、丸剂、片剂或胶囊剂形式)，常规的无毒固体载体可以包括，例如，药用级的甘露糖醇、乳糖、淀粉或硬脂酸镁。除了生物中性载体外，要施用的药物组合物可以含有少量无毒辅助物质，如润湿剂或乳化剂、防腐剂和pH缓冲剂等，例如乙酸钠或脱水山梨糖醇单月桂酸酯。前述载体溶液是无菌的，并且通常不含不需要的物质，并且可以通过常规的、熟知的灭菌技术进行灭菌。所述组合物可以含有模拟生理条件所需的药学上可接受的辅助物质，如pH调节剂和缓冲剂以及张力调节剂，如乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙和乳酸钠。抗体在这些配制品中的浓度可以广泛变化，并且将主要根据所选择的特定施用方式和受试者的需要，基于流体体积、粘度、体重等进行选择。
用于施用根据本发明的抗体的选择包括但不限于通过缓慢输注施用，或经由静脉推注或团注施用。可以将用于抗体施用的其他选择针对眼内施用进行优化。在施用之前，可以以冻干形式提供根据本发明的抗体组合物，并将其在施用前在无菌溶液中再水化至所需浓度。然后可以将抗体溶液添加到含有0.9％氯化钠USP的输液袋中，并且在一些情况下以0.5至15mg/kg体重的剂量施用。在施用根据本发明的抗体组合物的一个例子中，施用较高负荷剂量，随后施用较低水平的维持剂量。例如，可以在大约90分钟的时间段内输注4mg/kg的初始负荷剂量，然后如果先前的剂量是良好耐受的，则每周在30分钟时间段内输注维持剂量2mg/kg，持续4-8周。
根据本发明的抗体组合物也可以是控制释放配制品。控制释放的肠胃外配制品，例如，可以制成植入物或油性注射剂。颗粒系统(包括微球、微粒、微胶囊、纳米胶囊、纳米球和纳米颗粒)也可以用于递送根据本发明的抗体组合物。如本文所提及的，微胶囊含有根据本发明的抗体作为中心核心组分。在微球中，根据本发明的抗体分散在整个颗粒中。小于约1μm的颗粒、微球和微胶囊通常分别称为纳米颗粒、纳米球和纳米胶囊。
如上所述，根据本发明的抗体也可用于诊断或监测病理学病症的存在，诸如但不限于食管癌、膀胱癌、宫颈癌、前列腺癌、乳腺癌、肾癌、结直肠癌、胰腺癌、黑色素瘤、子宫癌、头颈癌和肺癌(鳞状细胞癌或腺癌)。更具体地，本发明的方法可用于检测根据本发明的抗体的抗原靶标的表达。检测可以是体外的或体内的。任何组织样品可用于体外诊断检测，包括但不限于来自活检、尸检和病理学标本的组织。生物样品包括组织切片，例如，用于组织学目的的冷冻切片。生物样品还包括体液，如血液、血清、血浆、痰、脊髓液或尿液。
方法通过以下来确定受试者是否患有疾病：使来自受试者的样品与根据本发明的抗体接触；并且检测所述抗体与存在于所述样品中的其靶抗原的结合。与对照样品中抗体的结合相比，抗体与样品中的其靶抗原结合的增加将受试者鉴定为患有与IL-38表达相关的疾病，如癌症或表达IL-38的任何其他类型的疾病。通常，对照样品是来自未患疾病的受试者的样品。
诊断方法的灵敏度和特异性不同。诊断测定的“灵敏度”是测试呈阳性的患病个体的百分比(真阳性的百分比)。诊断测定的“特异性”是一减去假阳性率，其中假阳性率被定义为那些未患病但检测呈阳性的个体的比例。尽管特定的诊断方法可能无法提供对病症的确定的诊断，但只要所述方法提供有助于诊断的正面指示就足够了。“预后”是患上病理学病症(如胰腺癌或转移)的可能性(例如严重程度)。
本发明的抗体可以与可检测标记连接以形成免疫缀合物，所述免疫缀合物可用作诊断剂。如本文所提及的，可检测标记是与根据本发明的抗体直接或间接缀合的化合物或组合物，目的是促进检测与疾病的存在相关的分子，例如像作为根据本发明的抗体的抗原靶标的肿瘤细胞抗原。可用于此类目的的可检测标记是本领域熟知的，并且包括：放射性同位素，如35S、11C、13N、15O、18F、19F、锝-99m("99mTc)、124I、131I、89Zr、3H、14C、15N、90Y、111In和125I；荧光团；化学发光剂；酶标记，如辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、萤光素酶、碱性磷酸酶；生物素基基团；由第二报告物识别的预定多肽表位，如亮氨酸拉链对序列、二抗的结合位点、金属结合结构域、表位标签；和磁性剂，如钆螯合物。根据本发明的标记抗体也可以称为“标记抗体”，或者更具体地称为“放射性标记抗体”。对于根据本发明的一些抗体，标记通过不同长度的间隔臂附接以减少潜在的空间位阻。
在某些应用中，包括使用根据本发明的抗体的步骤的诊断方法可以是免疫测定。虽然免疫测定的细节可以随所采用的特定形式而变化，但是检测生物样品中根据本发明的抗体的抗原靶标的方法通常包括以下步骤：在免疫学反应性条件下，使生物样品与抗体(所述抗体与抗原特异性反应)接触以形成免疫复合物。可以直接或间接检测所产生的免疫复合物的存在。换句话说，根据本发明的抗体在诊断方法中可以用作一抗(1°Ab)，并且对根据本发明的抗体具有特异性的标记抗体用作2°Ab。在间接检测免疫复合物的情况下，根据本发明的抗体用于诊断方法的用途还将包括使用标记的二抗(2°Ab)来检测一抗(根据本发明的抗体)与其靶抗原的结合。用于二抗的合适的可检测标记包括如上所述的用于直接标记根据本发明的抗体的标记。在根据本发明的诊断方法中使用的2°Ab也可以是如上所定义的“检测器抗体”，其用于与根据本发明的含有CH3表位标签的抗体联合使用，如国际专利申请号PCT/US2019/032780中所述。
根据本发明的抗体也可用于荧光激活细胞分选(FACS)。细胞群的FACS分析采用多个颜色通道、低角度和钝角光散射检测通道和阻抗通道以及更高水平的检测，以分离或分选细胞(参见美国专利号5,061,620)。
如上所述，在根据本发明的抗体的诊断应用中使用的试剂可以提供于试剂盒中，以用于检测生物样品(如血液样品或组织样品)中根据本发明的抗体的抗原靶标。可以使用这样的试剂盒来确认受试者的癌症诊断。例如，可以使用包含根据本发明的抗体的诊断试剂盒对从活检物获得的组织样品中的肿瘤细胞进行组织学检查。在更具体的例子中，试剂盒可以包含根据本发明的抗体，所述抗体可以用于检测通过进行肺活检获得的组织或细胞中的肺癌细胞(腺癌或鳞状细胞癌)。在可替代的具体例子中，试剂盒可以包含根据本发明的抗体，所述抗体可以用于检测组织活检物中的胰腺癌细胞。在可替代的具体例子中，试剂盒可以包含根据本发明的抗体，所述抗体可以用于检测组织活检物中的食管癌细胞。在可替代的具体例子中，试剂盒可以包含根据本发明的抗体，所述抗体可以用于检测组织活检物中的宫颈癌细胞。在可替代的具体例子中，试剂盒可以包含根据本发明的抗体，所述抗体可以用于检测组织活检中的膀胱癌细胞。在可替代的具体例子中，试剂盒可以包含根据本发明的抗体，所述抗体可以用于检测组织活检物中的黑色素瘤癌症细胞。在可替代的具体例子中，试剂盒可以包含根据本发明的抗体，所述抗体可以用于检测组织活检物中的前列腺癌细胞。在可替代的具体例子中，试剂盒可以包含根据本发明的抗体，所述抗体可以用于检测组织活检物中的头颈癌细胞。用于检测根据本发明的抗体的抗原靶标的试剂盒典型地将包含单克隆抗体形式的根据本发明的抗体或其抗原结合片段(如scFv片段、VH结构域或Fab)。抗体可以是未标记的或被可检测标记物(如荧光标记、放射性标记或酶标记)标记的，如上所述。试剂盒通常还包含说明书材料，其公开了根据本发明的抗体的使用方式。说明书材料可以以电子形式(如便携式硬盘驱动器)编写，并且材料也可以是可视的，如视频文件。说明书材料还可以指提供说明书的应用软件程序(如移动设备或计算机“app”)的网站或链接。试剂盒还可以包含另外的组分以促进设计试剂盒所为的特定应用。例如，试剂盒还可以含有检测标记的手段(如针对酶标记的酶底物、用于检测荧光标记的滤光器组、适当的二级标记如二抗等)。缓冲液和其他试剂，其通常用于使用根据本发明的抗体用于诊断目的的方法中。
根据本发明的抗体可以通过各种重组表达系统产生。换句话说，抗体可以通过在培养的活细胞中表达编码其氨基酸序列的核酸序列来产生。根据本发明的“分离的”抗体是这样的抗体，其已经与其他生物组分环境(如细胞、蛋白质和细胞器)基本上分离或从其中纯化出来。例如，如果将抗体纯化至：i)如通过劳里法(Lowry method)所确定的，按蛋白质的重量计大于95％、96％、97％、98％或99％，以及可替代地按重量计大于99％；ii)足以获得通过使用旋杯式序列分析仪所测的至少15个残基的N末端或内部氨基酸序列的程度；iii)在还原或非还原条件下使用考马斯蓝或银染色通过SDS-PAGE测得的同质性，则可以分离得到抗体。分离的抗体也可以是在重组细胞内原位的根据本发明的抗体，因为抗体的自然环境的至少一种组分将不存在。然而，通常通过至少一个纯化步骤制备分离的抗体。
通过将细胞用根据本发明的抗体的适当的核苷酸编码序列转化或转染，可以利用多种宿主表达载体系统来表达根据本发明的抗体。宿主表达细胞的例子包括但不限于：细菌，如大肠杆菌(E.coli)和枯草芽孢杆菌(B.Subtilis)，可以将其用重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体中含有的抗体编码序列转染；酵母，如酵母属(Saccharomyces)和毕赤酵母属(Pichia)，用含有抗体编码序列的重组酵母表达载体转化；昆虫细胞系统，用含有抗体编码序列的重组病毒表达载体(如杆状病毒)感染；植物细胞系统，用含有抗体编码序列的重组病毒表达载体(如花椰菜花叶病毒(“CaMV”)或烟草花叶病毒(“TMV”))感染；和哺乳动物细胞系统，诸如但不限于COS、中国仓鼠卵巢(“CHO”)细胞、ExpiCHO、幼仓鼠肾(“BHK”)细胞、HEK293、Expi293、3T3、NSO细胞，具有这样的重组表达构建体，其含有源自哺乳动物细胞基因组(如金属硫蛋白启动子或延伸因子Iα启动子)或源自哺乳动物病毒(如腺病毒晚期启动子和痘苗病毒7.5K启动子)的启动子。例如，与并入了小鼠和大鼠延伸因子1α启动子的双启动子载体联合(以分别表达重链和轻链片段)的哺乳动物细胞(如人胚肾293(HEK293)或其衍生物(如Expi293))是用于根据本发明的抗体的有效表达系统，可以根据所表达的抗体分子的预期用途而有利地选择所述表达系统。可替代地，在巨细胞病毒(CMV)增强子和启动子序列的控制下表达来自单独质粒的重链和轻链片段的双载体系统是抗体与CHO细胞、HEK细胞或其衍生物联合的有效表达系统。
当要生产大量的根据本发明的抗体以用于产生抗体的药物组合物时，指导表达高水平的易于纯化的融合蛋白产物的载体可能是可取的。此类载体包括但不限于：pUR278载体(Ruther等人EMBO J.2:1791(1983))，在该载体中，抗体编码序列可以单独连接到载体的具有lac Z编码区的框内，从而产生融合蛋白；plN载体(Inouye和Inouye,Nucleic AcidsRes.13:3101-3109(1985)。
还可以选择宿主表达细胞系统，该系统调节编码根据本发明的抗体的一种或多种插入序列的表达，或者根据需要修饰和处理基因产物。例如，对蛋白质产物的修饰(包括糖基化)和加工(如切割)可能对蛋白质功能而言是重要的。确实，不同宿主细胞具有翻译后加工和修饰蛋白质和基因产物的特征和特定机制。为此，可以使用具有用于正确加工初级转录物以及根据本发明的基因产物的糖基化和磷酸化的合适的细胞机器的真核宿主细胞。
用于产生根据本发明的抗体的载体包含编码该特定抗体的至少一部分的核酸分子。例如，这样一种核酸序列可以包含对应于其中包含VH和VL结构域的任何多核苷酸序列的DNA序列，包括密码子优化序列，或其部分。因此，编码根据本发明的抗体的至少一部分的第一核酸是根据本发明的核酸，所述第一核酸与第二核酸序列可操作地连接，所述第二核酸序列与第一核酸序列(如启动子)具有功能关系。如果连接的启动子序列影响编码序列的转录或表达，则存在可操作连接。通常，可操作地连接的DNA序列是连续的，并且可以连接两个或更多个蛋白质编码区在同一阅读框内。
当包含根据本发明的DNA序列的核酸基本上与环境中的其他生物组分(如细胞、其他染色体和染色体外DNA和RNA、蛋白质和细胞器)分离或从其中纯化出来时，它可以被认为是根据本发明的“分离的核酸”。例如，已经通过标准纯化方法纯化的核酸是分离的核酸。
根据本发明的核酸还包括编码根据本发明的抗体的核苷酸的简并变体。更具体地，“简并变体”是指这样的多核苷酸，其编码根据本发明的抗体，但是由于遗传密码而是简并的。根据本发明，如果所编码的抗体的氨基酸序列特异性地结合根据本发明的抗体的抗原靶标，则所有简并核苷酸序列被包括在内。
实施方案
1.一种分离的白介素-38(IL-38)结合抗体或其抗原结合片段，所述分离的白介素-38(IL-38)结合抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:87或SEQ ID NO:7的可变重链(VH)氨基酸序列内含有的和/或SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:92、SEQ IDNO:4或SEQ ID NO:9的可变轻链(VL)氨基酸序列内含有的至少一个互补决定区(CDR)的至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个或至少8个任选连续氨基酸。
2.根据实施方案1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR是通过North方法或通过Kabat方法定义的。
3.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
以下各项的至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个或至少8个氨基酸：
选自SEQ ID NO:23、28、33、38、43、48、53、88或15的氨基酸序列的VH CDR1；
选自SEQ ID NO:24、29、34、39、44、49、54、89或16的氨基酸序列的VH CDR2；
选自SEQ ID NO:25、30、35、40、45、50、55、90或17的氨基酸序列的VH CDR3；
选自SEQ ID NO:58、63、68、73、78、83、93或18的氨基酸序列的VL CDR1；
选自SEQ ID NO:59、64、69、74、79、84、94或19的氨基酸序列的VL CDR2；和
选自SEQ ID NO:60、65、70、75、80、85、95或20的氨基酸序列的VL CDR3。
4.根据实施方案3所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个选自以下的CDR：SEQ ID NO:33的VH CDR1、SEQ ID NO:34的VH CDR2、SEQ IDNO:35的VH CDR3、SEQ ID NO:63的VL CDR1、SEQ ID NO:64的VL CDR2和SEQ ID NO:65的VLCDR3。
5.根据实施方案3所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个选自以下的CDR：SEQ ID NO:38的VH CDR1、SEQ ID NO:39的VH CDR2、SEQ IDNO:40的VH CDR3、SEQ ID NO:68的VL CDR1、SEQ ID NO:69的VL CDR2和SEQ ID NO:70的VLCDR3。
6.根据实施方案3所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个选自以下的CDR：SEQ ID NO:43的VH CDR1、SEQ ID NO:44的VH CDR2、SEQ IDNO:45的VH CDR3、SEQ ID NO:73的VL CDR1、SEQ ID NO:74的VL CDR2和SEQ ID NO:75的VLCDR3。
7.根据实施方案3所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个选自以下的CDR：SEQ ID NO:48的VH CDR1、SEQ ID NO:49的VH CDR2、SEQ IDNO:50的VH CDR3、SEQ ID NO:78的VL CDR1、SEQ ID NO:79的VL CDR2和SEQ ID NO:80的VLCDR3。
8.根据实施方案3所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个选自以下的CDR：SEQ ID NO:53的VH CDR1、SEQ ID NO:54的VH CDR2、SEQ IDNO:55的VH CDR3、SEQ ID NO:83的VL CDR1、SEQ ID NO:84的VL CDR2和SEQ ID NO:85的VLCDR3。
9.根据实施方案3所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个选自以下的CDR：SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16的VH CDR2、SEQ ID NO:17的VHCDR3、SEQ ID NO:18的VL CDR1、SEQ ID NO:19的VL CDR2和SEQ ID NO:20的VL CDR3。
10.根据实施方案3所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个选自以下的CDR：SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89的VH CDR2、SEQ ID NO:90的VHCDR3、SEQ ID NO:93的VL CDR1、SEQ ID NO:94的VL CDR2和SEQ ID NO:95的VL CDR3。
11.根据实施方案1-10中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述IL-38是多蛋白复合物的组分。
12.根据实施方案1-11中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段部分或完全阻断、抑制或中和IL-38的生物活性。
13.根据实施方案1-12中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述IL-38存在于体液中。
14.根据实施方案13所述的抗体或抗原结合片段，其中所述体液是血液或血液衍生物。
15.根据实施方案14所述的抗体或抗原结合片段，其中所述血液衍生物是血浆或血清。
16.根据实施方案1-15中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述IL-38与细胞外基质(“ECM”)或ECM蛋白相关。
17.根据实施方案16所述的抗体或抗原结合片段，其中所述IL-38存在于肿瘤微环境中。
18.根据实施方案1-17中任一项所述的抗原结合片段，其中所述抗原结合片段是分离的可变重链(VH)单结构域单克隆抗体。
19.根据实施方案1-17中任一项所述的抗原结合片段，其中所述抗原结合片段是单链(sc)Fv-Fc片段。
20.根据实施方案1-17中任一项所述的抗原结合片段，其中所述分离的抗原结合片段包括Fv、scFv、Fab、F(ab')2或Fab'片段、双抗体或其半衰期可能已经增加的任何片段。
21.根据实施方案1-20中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含CH3支架，所述CH3支架包含衍生自免疫球蛋白Fc区的CH3结构域的野生型氨基酸序列的至少一种修饰。
22.根据实施方案1-21中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是单克隆的。
23.根据实施方案1-22中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是人的、人源化的或双特异性的。
24.一种抑制受试者的肿瘤生长或转移的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含根据实施方案1-23中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段部分或完全阻断、抑制或中和IL-38的生物活性。
1A.一种治疗个体的癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用与IL-38结合的抗体，其中所述抗体包含
含有SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3以及含有SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；
含有SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3以及含有SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；
含有SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3以及含有SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；
含有SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3以及含有SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；
含有SEQ ID NO:27中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3以及含有SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；
含有SEQ ID NO:37中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3以及含有SEQ ID NO:67中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；
含有SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3以及含有SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；
含有SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3以及含有SEQ ID NO:77中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；
含有SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3以及含有SEQ ID NO:62中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；
含有SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3以及含有SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；
含有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3以及含有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3。
2A.根据实施方案1A所述的方法，其中所述抗体包含
含有SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:58中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:18中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:93中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:94中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:63中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:65中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:78中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:79中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:68中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:69中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:44中所示的氨基酸序列的VH CDR2、SEQ ID NO:45的VH CDR3、含有SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列的VL CDR3；或
含有SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的VH CDR3、SEQ ID NO:58的VL CDR1、含有SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的VH CDR1、SEQ ID NO:54的VH CDR2、含有SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:83中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:84中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:85中所示的氨基酸序列的VL CDR3。
3A.根据实施方案1A或2A所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体包含
含有SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的轻链可变区；
含有SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的轻链可变区；
含有SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列的轻链可变区；以及
含有SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
4A.根据实施方案1A-3A中任一项所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体包含
含有SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:58中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:18中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:93中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:94中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列的VL CDR3。
5A.根据实施方案4A所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体包含
含有SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:58中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列的VL CDR3。
6A.根据实施方案5A所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体包含
含有SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
7A.根据实施方案1A、2A、4A或5A中任一项所述的方法，其中所述CDR是通过North方法或Kabat方法定义的。
8A.根据实施方案1A-7A中任一项所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体是人源化抗体。
9A.根据实施方案1A-4A中任一项所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体是人抗体。
10A.根据实施方案1A-9A中任一项所述的方法，其中所述癌症表达高水平的IL-38。
11A.根据实施方案1A-10A中任一项所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体部分或完全阻断、抑制或中和IL-38的生物活性。
12A.根据实施方案1A-11A中任一项所述的方法，其中所述个体是人。
13A.根据实施方案1A-12A中任一项所述的方法，其中一种或多种促炎性细胞因子的水平增加。
14A.根据权利要求1A-13A中任一项所述的方法，其中IL-6、CCL4、CCL3、CXCL1、CXCL10或GM-CSF中的一种或多种的水平增加。
15A.根据实施方案1A-14A中任一项所述的方法，其中所述癌症是I期、II期、III期或IV期癌症。
16A.根据实施方案1A-15A中任一项所述的方法，其中将与IL-38特异性结合的所述抗体以约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约25mg/kg、30mg/kg、约15mg/kg或约50mg/kg的剂量施用。
17A.根据实施方案1A-16A中任一项所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体是双特异性抗体。
18A.根据实施方案1A-17A中任一项所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体是分离的可变重链(VH)单结构域单克隆抗体、(sc)Fv-Fc、Fv、scFv、Fab、F(ab')2、Fab'片段、双特异性抗体或双抗体。
19A.根据实施方案1A-18A中任一项所述的方法，其中所述癌症是鳞状细胞癌或腺癌。
20A.根据实施方案1A-19A中任一项所述的方法，其中所述癌症选自胃食管癌、膀胱癌、宫颈癌、前列腺癌、乳腺癌、肾癌、结直肠癌、胰腺癌、黑色素瘤、子宫癌、头颈癌、肺癌和皮肤癌。
21A.根据实施方案1A-20A中任一项所述的方法，其中所述癌症选自头颈部鳞状细胞癌(HNSC)、食管癌(ESCA)、肺鳞状细胞癌(LUSC)、宫颈癌(CESC)、膀胱癌(BLCA)、皮肤黑色素瘤(SKCM)、前列腺腺癌(PRAD)、胃食管癌、宫颈鳞状细胞癌、宫颈鳞状细胞癌、皮肤鳞状细胞癌、基底细胞癌、皮肤黑色素瘤、肺腺癌、宫颈腺癌、膀胱尿路上皮癌和前列腺腺癌以及肺腺癌(LUAD)。
22A.根据实施方案21A所述的方法，其中所述癌症是肺鳞状细胞癌(LUSC)。
23A.根据实施方案21A所述的方法，其中所述癌症是胃食管癌。
24A.根据实施方案21A所述的方法，其中所述癌症是头颈部鳞状细胞癌。
25A.一种与IL-38特异性结合的分离的抗体，所述与IL-38特异性结合的分离的抗体包含
含有SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3以及含有SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3。
26A.根据实施方案25A所述的与IL-38特异性结合的分离的抗体，其中所述抗体包含
含有SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:93中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:94中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列的VL CDR3。
27A.一种与IL-38特异性结合的分离的抗体，所述与IL-38特异性结合的分离的抗体包含
含有SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的轻链可变区；或
含有SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
28A.根据实施方案27A所述的与IL-38特异性结合的抗体，所述与IL-38特异性结合的抗体包含
含有SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
29A.根据实施方案26A所述的与IL-38特异性结合的抗体，其中所述CDR是通过North方法或Kabat方法定义的。
30A.根据实施方案25A-29A中任一项所述的与IL-38特异性结合的抗体，其中所述与IL-38特异性结合的抗体是人源化抗体。
31A.根据实施方案25A-30A中任一项所述的与IL-38特异性结合的抗体，其中所述与IL-38特异性结合的抗体部分或完全阻断、抑制或中和IL-38的生物活性。
32A.根据实施方案25A-31A中任一项所述的与IL-38特异性结合的抗体，其中所述与IL-38特异性结合的抗体是分离的可变重链(VH)单结构域单克隆抗体、(sc)Fv-Fc、Fv、scFv、Fab、F(ab')2、Fab'片段、双特异性抗体或双抗体。
33A.一种组合物，所述组合物包含根据实施方案25A-32A中任一项所述的抗体。
34A.一种或多种核酸，所述一种或多种核酸编码根据实施方案25A-32A中任一项所述的抗体。
35A.一种载体，所述载体包含根据实施方案34A所述的一种或多种核酸。
36A.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据实施方案34A所述的核酸或根据实施方案35A所述的载体。
37A.根据实施方案36A所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是CHO细胞。
实施例
以下实施例描述了IMM20130(一种与IL-38上的表位结合的抗体)的分离和表征；IL-38的免疫抑制作用的评价；另外的抗IL-38抗体的产生；以及它们在体外和体内的表征。在某些情况下，IL-38可以是可溶的，或与细胞膜(包括在细胞表面)缔合，包括在多蛋白复合物的情况下。
实施例1.产生结合完整人癌细胞的表面的抗体的人杂交瘤的分离。PR087-29B5杂交瘤细胞是从头颈癌患者的淋巴结分离的人B细胞与B56T融合配偶体融合产生的。基本上如USPTO#EP2242836“Method of making hybrid cells that express usefulantibodies”中所述，通过电融合进行人B细胞与B56T的融合。融合后，将杂交瘤铺板并使其生长约两周。然后收集来自IgG/A阳性杂交瘤的条件培养基，并将其针对抗体与癌细胞系表面结合的能力进行筛选。使用荧光团标记的抗人IgG二抗和针对96孔板配置的LI-COROdysseyTMSa成像系统检测PR087-29B5产生的Ab与活的完整癌细胞系池的结合。在筛选之前，将癌细胞以相等的比例混合，并将池等分到96孔板中，并使其贴壁24小时。将杂交瘤上清液与细胞一起孵育，并相对于阳性对照评估与癌细胞系的结合，所述阳性对照包含相等比率的抗基础免疫球蛋白、抗EGFR和抗ERBB2(BCH)抗体的混合物。将BCH阳性对照与细胞以66.6、22.2和7.4ng/mL的每种抗体一起孵育。也将抗整合素(ITGA3)抗体(20ng/mL)用作阳性对照。将仅二抗用作阴性对照。对照的组合提供了跨细胞系池和LI-COR仪器的检测范围两者的绝对信号强度的范围。BCH(7.4ng/mL)阳性对照展现出背景信号的大约160％的信号，其中背景被定义为在仅二抗对照的四个孔中发现的信号的平均值。跨这四个孔的信号的标准差为8.5％。PR087-29B5没有展现出高于背景水平的信号，而是呈现为低水平点状染色模式(图3)，其被选择用于后续随访。
实施例2.PR087-29B5杂交瘤产生包含IGHV1/IGLV2可变结构域的IgG。编码PR087-29B5的可变重链(VH)和可变轻链(VL)结构域的核苷酸序列是通过RT-PCR扩增从PR087-29B5杂交瘤系的细胞中分离的RNA并且使所得抗体cDNA经受测序反应获得的。SEQ ID NO:1对应于从杂交瘤分离的PR087-29B5的VH的核苷酸序列，并且SEQ ID NO:3对应于VL的核苷酸序列。SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4对应于从杂交瘤分离的PR087-29B5的VH和VL的相应氨基酸序列。基于与已知种系基因序列的同源性预测IGHV1-18和IGKV3-20基因分配，并将其用于生成VH和VL的5’端，以产生由SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:8(其分别编码氨基酸序列SEQ IDNO:7和SEQ ID NO:10)表示的全长编码序列。使用双质粒系统来促进含有具有IgG1重链和κ轻链恒定结构域的PR087-29B5的可变结构域的抗体的重组表达。对SEQ ID NO:5进行密码子优化，并且合成对应于SEQ ID NO:6的核苷酸片段(其编码对应于SEQ ID NO:7的氨基酸序列)以促进包含PR087-29B5的VH结构域的抗体的表达。还对SEQ ID NO:8进行密码子优化，并且合成对应于SEQ ID NO:9的核苷酸片段(其编码SEQ ID NO:10)，以促进包含PR087-29B5的VL结构域的抗体的表达。表达PR087-29B5的重链或轻链的载体是通过合成VH和VL结构域并将它们克隆到双载体系统中产生的，该双载体系统编码由对应于SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14的氨基酸序列组成的全长IgG1抗体。使用标准条件，通过瞬时转染到哺乳动物细胞系(如中国仓鼠卵巢(CHO)和人胚肾(HEK))中，重组表达含有PR087-29B5 VH和VL结构域的抗体。使用本领域普通技术人员熟知的技术，通过亲和力色谱从条件培养基纯化重组抗体，称为IMM20130。
实施例3.IMM20130 Ab结合IL-38上的表位。为了鉴定由IMM20130结合的靶抗原，将抗体在CDI HuProt阵列(靶蛋白以其天然构象印在其中)上进行筛选。更具体地，将IMM20130(1微克/mL)在天然CDI HuProt阵列上在4℃下孵育过夜。洗涤载玻片，并且用Alexa-647缀合的抗H+L二抗检测IMM20130结合。从任何分析中消除由二抗结合的非特异性命中。通过Z得分(用于确定与每个载玻片上的重复试样结合的再现性)和S得分(用于确定在相对于可能靶标的选择性方面的差异)的组合分析与靶蛋白的选择性结合。在排名第一与排名第二的命中之间的S得分>3被认为是对第一命中具有高度特异性。
在天然阵列上发现与IL1F10/IL-38选择性结合的IMM20130。IL-38表现为CDI阵列上的第一命中，其中Z得分为119.635并且S得分为51.643。参见表1。
表1.呈蛋白质微阵列形式的IMM20130与人蛋白质组的结合
通过点印迹分析确认IMM20130与重组IL-38的结合。将渐增剂量的重组人IL-38(NovusBio，目录号NBP2-22645)印在硝酸纤维素上并且与IMM20130一起孵育。如图4所示，IMM20130以剂量依赖性方式与IL-38相互作用。将商业抗IL-38抗体用作测定的阳性对照，并且将相同同种型的抗登革热病毒抗体用作阴性对照。将重组蛋白STIP1(原始CDI阵列中较低水平命中)用作非特异性对照。
通过表面等离子体共振(SPR)定量IMM20130与IL-38(NovusBio，目录号NBP2-22645)的结合。简言之，将IMM20130在SPR运行缓冲液(10mM HEPES(pH 7.4)、150mM NaCl、0.0005％Tween-20、0.2％牛血清白蛋白)中稀释至150nM和25nM的终浓度，并且在抗人Fc包被的CM5传感芯片上以四种不同的表面密度捕获。表面密度范围为600至3200RU。将IL-38(NovusBio，目录号NBP2-22645)在SPR运行缓冲液中稀释至600nM的浓度，并且在四个不同的IMM20130密度表面上运行3倍稀释系列。收集25℃下的数据。将来自所有四个表面的数据拟合到1:1相互作用模型中，产生了表2中所描绘的速率常数。
表2.IMM20130与人IL-38的结合的SPR量化
IMM20130也与几种内源性表达细胞系的表面特异性结合(图5)。将活细胞用IMM20130或同种型对照和荧光染料缀合的抗人二抗染色。碘化丙啶用于排除死细胞。将数据表示为MFI相对于同种型对照的倍数变化。由于IL-38可以在凋亡条件下分泌(Mora等人,2016)，因此测试了几种IMM20130结合癌细胞系分泌IL-38的能力。将癌细胞用20ng/mL TNFα和10μg/mL放线酮处理所指示的时间段。对于0h和4h的时间点，将细胞在处理后在普通RPMI中培养16小时。对于16h的时间点，将细胞与TNFa和放线酮在普通RPMI中培养整整16小时。通过直接ELISA使用改编自Mora等人2016的方案测定上清液中IL-38的浓度。简言之，将100μL上清液添加到高结合96孔板(Corning)中，并且与普通RPMI中重组IL-38(Adipogen，目录号AG-40A-0191-C050)的七个两倍稀释液的标准曲线进行比较。将板在4℃下孵育过夜。将孔用PBS2％BSA封闭，用PBS 0.05％Tween洗涤3次，并且在室温下与大鼠抗人IL-38抗体(R&D Systems)一起孵育2小时。洗涤3次后，在室温下将孔与生物素化的抗大鼠二抗(Invitrogen)一起孵育2小时。洗涤3次后，添加PBS2％BSA中的链霉亲和素-HRP(R&DSystems)，持续20分钟。洗涤3次后，将100μL稀释于磷酸柠檬酸盐/过硼酸钠缓冲液中的OPD底物添加到每个孔中，显影5-30分钟，并且在450nm处测量吸光度。确实，多种癌细胞系在诱导凋亡的条件下分泌IL-38(图6)，从而将肿瘤细胞鉴定为潜在的IL-38来源。
使用TCGA数据库评估跨各种肿瘤类型的IL-38RNA表达(图23)。与来自同一器官的正常组织相比，多种癌症(包括头颈部鳞状细胞癌(HNSC)、食管癌(ESCA)、肺鳞状细胞癌(LUSC)，宫颈癌(CESC)、膀胱癌(BLCA)、皮肤黑色素瘤(SKCM)、前列腺腺癌(PRAD)和肺腺癌(LUAD))显示出具有过表达IL-38的肿瘤子集。基于正常组织中IL-38表达的第90百分位数，将来自同一器官的肿瘤样品分为两个单独的组：高IL-38表达肿瘤和低IL-38表达肿瘤。器官之间的表达水平不同，并且每个器官中被分类为高IL-38表达肿瘤的肿瘤百分比也不同。图7中的Y轴表示富集得分，其中较高的数字与较高的IL-38RNA表达相关。评估的每种组织类型的值不同。图7中的百分比表示每个解剖位置中被分类为高IL-38表达肿瘤的肿瘤百分比。在肺癌的情况下，分别分析了鳞状细胞癌和腺癌亚型，并显示出相似的趋势。
实施例4.IL-38是一种抑制炎症反应的促肿瘤发生免疫抑制细胞因子。在使用IMM20130评估各种癌细胞系中IL-38的表达之后，使用TCGA数据库评估IL-38对肿瘤微环境的影响。使用来自上述指定的适应证的TCGA Firehouse Legacy数据集进行基因表达分析。指示每个数据集中的样品数量以及每个分析的R平方值。使用RNA_Seq_v2_mRNA_median_Zscore数据进行数据分析。在多种癌症类型中，IL-38的表达与和对于有效的抗肿瘤反应必需的免疫细胞类型(包括T细胞和髓样细胞)相关联的基因表达降低相关(图7)，这表明IL-38可以在抑制免疫细胞浸润到肿瘤微环境中发挥重要作用。在头颈癌、食管癌、宫颈癌、黑色素瘤和肺鳞状细胞癌中观察到类似的结果。
为了鉴定IL-38如何抑制免疫系统，使用THP-1单核细胞系(ATCC，目录号TIB-202)建立了体外模型。通过用100nM PMA培养72小时，使THP-1单核细胞分化为巨噬细胞。分化后，去除PMA，将巨噬细胞用PBS洗涤，并且在有或没有1μg/mL重组全长人IL-38(Adipogen，目录号AG-40A-0191-C050)的普通RPMI中培养24小时。为了刺激巨噬细胞并诱导炎性细胞因子的产生，添加10ng/mL LPS，持续另外的24小时。收获上清液并且根据制造商的说明，使用CBA人炎性细胞因子试剂盒(BD Biosciences，目录号551811)测量细胞因子表达。用IL-38处理THP-1巨噬细胞导致几种炎性细胞因子(即IL-6和TNFα)的减少(图8)。为了更全面地理解IL-38对巨噬细胞炎症反应的影响，使用NanostringPanCancer IO 360基因表达检测组套测定THP-1细胞的重要炎性标记物的RNA表达。如图8所述，使THP-1细胞分化并且刺激所述THP-1细胞。LPS刺激后，收获细胞并且使用RNeasy试剂盒(Qiagen)分离RNA。使用nCounter平台(Nanostring Technologies)利用NanostringsPanCancer IO 360基因表达检测组套来评估基因表达。使用nSolver软件进行数据分析。使用LPS刺激的样品来将基因表达相对于1归一化。在IL-38处理的细胞中，几种重要的炎性标记物(包括促炎性M1巨噬细胞标记物(CD80、IL-6)和对免疫细胞募集重要的趋化因子(CXCL10、CXCL13))减少(图9)。
为了确定IL-38如何抑制THP-1细胞中的炎症反应，测量关键信号传导蛋白的磷酸化。使用图8中描述的体外系统，对于不同时间点将用IL-38预处理的分化的THP-1巨噬细胞用10ng/mL LPS刺激。刺激后，将细胞用磷酸酶和蛋白酶抑制剂在含1％Triton的裂解缓冲液(Cell Signaling)中裂解。将20μg/泳道加载到4％至12％聚丙烯酰胺凝胶(Invitrogen)上并且转移到硝酸纤维素膜上。将膜用识别p-STAT3和GAPDH的兔抗人抗体和小鼠抗人p-Jnk抗体(Cell Signaling)探测过夜。然后，将膜与荧光抗兔和抗小鼠二抗(LI-CORBiosciences)一起孵育1小时。使用LI-COR成像系统扫描印迹，并且在Image Studio软件(LI-COR Biosciences)中进行量化。在IL-38处理的THP-1巨噬细胞中，Jnk的磷酸化受损(图10)。相反，在用LPS刺激之前，在IL-38处理的THP-1巨噬细胞中，STAT3的磷酸化增加。
实施例5.阻断IL-38功能的抗IL-38抗体的产生。使用图8中建立的体外系统来测试IMM20130阻断IL-38功能的能力。用100nM PMA使THP-1单核细胞分化为巨噬细胞，持续72小时。分化后，将1μg/mL IL-38(Adipogen，目录号AG-40A-0191-C050)和10μg/mL指示抗体在室温下在普通RPMI中孵育1小时。将巨噬细胞用PBS洗涤，并且用所指示的含IL-38/抗体的培养基培养24小时。随后，将细胞用10ng/mL LPS刺激24小时，收获上清液，并且使用Human IL-6DuoSet ELISA试剂盒(R&D Systems)测量IL-6产生。对IL-38的抑制应导致IL-38处理的LPS刺激的THP-1细胞的IL-6产生恢复至与LPS刺激的细胞可比较的水平。然而，IMM20130不能恢复这些细胞的IL-6产生(图11)。作为对照，还测试了针对IL-38蛋白的不同部分产生的两种多克隆抗体(Lifespan Biosciences，目录号LS-C135753和LS-C201139)在此系统中恢复IL-6产生的能力。针对IL-38的C末端的一部分产生的一种多克隆抗体成功地恢复了IL-38处理的LPS刺激的THP-1巨噬细胞的IL-6产生(图12)，这表明IMM20130与IL-38表位结合不阻断IL-38功能。
尽管IMM20130并未阻断IL-38的功能，但是它确实将IL-38鉴定为炎症反应的重要调节因子和有希望的癌症靶标。因此，启动抗体产生运动以分离得到也阻断IL-38功能的抗IL-38抗体。将NZB/w和CD-1小鼠用全长重组IL-38免疫。在免疫接种后第21天，使用HRP缀合的抗小鼠二抗(Jackson ImmunoResearch Laboratories，目录号115-035-071)通过实施例2中所述的直接ELISA测定小鼠血清中抗IL-38抗体的存在。将抗IL-38血清滴度最高的动物的脾脏与骨髓瘤细胞系融合以产生多克隆杂交瘤文库。通过ELISA确认多克隆上清液具有抗IL-38抗体后，将单独杂交瘤进行单细胞分选并且在96孔板中培养，以产生含抗体的单克隆上清液。用所指示的对照对来自NZB/w和CD-1小鼠衍生的杂交瘤的单克隆上清液进行直接IL-38ELISA，如图6中所述。多个单克隆上清液含有抗IL-38抗体(图13)。还测试了选定的IL-38结合单克隆上清液在图11中所述的体外系统中阻断IL-38功能的能力。使用每种单克隆上清液的两种制剂来测量IL-6产生。阻断效率是通过将LPS刺激的THP-1细胞的IL-6产生归一化为100％，并且将IL-38处理的LPS刺激的THP-1细胞的IL-6产生归一化为0％来确定的。因此，每个单克隆上清液的拯救百分比计算为[(含有单克隆上清液、LPS和IL-38的样品)-(LPS、IL-38对照)]/[(仅LPS对照)-(LPS、IL-38对照)]的IL-6产生。对于多个单克隆上清液观察到高阻断效率(图14)，并且选择这些用于进一步开发。
使用ForteBio抗小鼠Fc(AMC)生物传感器和在ForteBio动力学缓冲液中连续稀释的可溶性重组人(Adipogen，目录号40A-0191-C050)或小鼠(Lifespan Biosciences，目录号LS-G3934)IL-38蛋白在Octet Qke仪器上测试了含抗体的溶液，包括小鼠杂交瘤上清液和纯化的抗体。将抗体加载到AMC探针，在动力学缓冲液中封闭1min(基线)，并且浸入适当的IL-38溶液中。在28℃下测量IL-38与目的抗体的缔合，持续180秒。随后将生物传感器浸入含动力学缓冲液的孔中，并且测量蛋白质解离，持续600s。如表3所示对原始痕迹进行分析。使用ForteBio’s Data Analysis 9软件的1∶1内置模型鉴定KD、Kon和Kdis值。选定的抗人IL-38抗体的结合动力学示于图15中。
表3.先导候选抗IL-38抗体的结合特征。
为了证实对IL-38的特异性，使用天然HuProt阵列(CDI Laboratories)在高特异性交叉反应性测定中分析了几种先导候选抗体(CD1-M3、CD1-M8、NZB-M8)。将1/mL抗体在冷室中孵育过夜，洗涤，并且用抗人二抗进行探测。测量每个斑点的荧光强度(F635)作为结合的指标。CDI软件基于Z得分量化了抗体对每个斑点的特异性。Z得分被定义为[F635-(阵列上的平均F635)]/(阵列上的F635的标准差)。S得分被定义为给定蛋白质的Z得分与次高蛋白质的Z得分之间的差。对于CD1-M3和CD1-M8，分别以139.533和142.421的Z得分选择性地结合到天然阵列上的IL-38(表4)。
表4.呈蛋白质微阵列形式的先导候选抗体与人蛋白质组的结合。
然而，NZB-M8将IFNγ鉴定为最高命中，以及IL-38鉴定为第7命中，这表明对IL-38的保真度较低。由于IL-38是IL-1家族成员，因此还将抗体结合与其他IL-1家族成员进行了比较。尽管IL-38与其他IL-1家族成员之间具有同源性，但是未鉴定出交叉反应性(表5)。
从单克隆抗体上清液分离CD1-M3、CD1-M8和CD1-M26，并对其进行PBS纯化。使用每种抗体的半对数稀释液在图11中所述的建立的体外系统中测试这些抗体。根据制造商的说明，使用人IL-6和人GM-CSF DuoSet ELISA试剂盒(R&D Systems)评估IL-6和GM-CSF产生。所有先导抗体都能够恢复IL-38处理的LPS刺激的THP-1巨噬细胞的IL-6和GM-CSF产生(图16A-图16B)。
表5.呈蛋白质微阵列形式的先导候选抗体与IL-1家族成员的结合。
实施例6.评价抗IL-38抗体在体内肿瘤模型中的作用。在证实CD1-M3、CD1-M8和CD1-M26在体外结合并阻断IL-38功能之后，在药代动力学研究中评估了它们在小鼠血浆中持续存在的能力。在0h，将6-7周龄C57BL/6小鼠以10mg/kg腹膜内和静脉内给药(每组n＝9)。在两个时间点，对每只小鼠进行眼球后放血，并且在最后一个时间点进行最终放血。使用K2 EDTA管分离血浆，并且经由直接IL-38ELISA测定抗体。将100μL的在PBS中的IL-38(对于CD1-M3、M8，为50ng/mL；对于CD1-M26，为600ng/mL)添加到96孔高结合板的每个孔中，并且将板在4℃下孵育过夜。在用PBS 0.05％Tween洗涤3次后，在室温下将板用PBS2％BSA封闭1h。在洗涤3次之后，将100μL的在PBS2％BSA中稀释的小鼠血浆添加到每个孔中。为了生成标准曲线，将CD1-M3、M8、M26抗体掺入到从500ng/mL开始用PBS2％BSA稀释的未处理小鼠血浆中。将板在室温下孵育2h，并且洗涤3次。将100μL的在PBS2％BSA中1:2000稀释的HRP缀合的抗小鼠抗体添加到每个孔中，并且在室温下孵育2h。洗涤3次后，将100μL稀释于磷酸柠檬酸盐/过硼酸钠缓冲液中的OPD底物添加到每个孔中，显影5-30分钟，并且在450nm处测量吸光度。在10mg/kg剂量之后，所有抗体在给药后不久达到100,000ng/mL血浆浓度，其随时间缓慢下降(图17)。在一周的研究中，静脉内和腹膜内施用CD1-M3、CD1-M8和CD1-M26导致相似的血浆水平。
在选定的先导候选抗体中，CD1-M3是唯一能够结合人和小鼠IL-38的抗体。因此，在几种同系肿瘤模型中测试此抗体，其中可以在具有免疫能力的小鼠中评价肿瘤微环境中的阻断IL-38。在第一项研究中，将2x105个B16.F10细胞植入6-8周龄C57BL/6雌性小鼠的侧腹中。当平均肿瘤大小达到85mm3时，将小鼠随机分组到指示组(n＝10)。如所指示的，将小鼠用CD1-M3和/或紫杉醇处理，并且每周用卡尺测量3次肿瘤体积。与媒介物对照相比，用抗CD1-M3处理导致肿瘤体积的小的减小(图18)。当与化学治疗剂紫杉醇组合时，CD1-M3处理也减小了肿瘤体积。
由于报道的IL-38在抑制炎性免疫反应中的作用，因此进行了另一项研究以评价CD1-M3对肿瘤浸润的髓样群体和淋巴细胞群体的作用。将2x105个B16.F10细胞植入7-8周龄C57BL/6雌性小鼠的侧腹中。当平均肿瘤大小达到104mm3时，将小鼠随机分组到媒介物组和CD1-M3处理组，并且以10mg/mL IP QWx2给药。在第9天，第2剂量后24小时，对小鼠实施安乐死，并且将肿瘤解离为单细胞悬浮液。使用两个流式细胞术检测组套评估淋巴细胞群体和髓样群体。T细胞检测组套包括ombie NIR活力染料(Biolegend)以及识别CD3、CD4、CD8、CD45、CD25、PD-1、CD69、FoxP3、CD49b/CD335、TCRgd的荧光染料缀合的抗体。髓样检测组套包括Zombie NIR活力染料(Biolegend)以及识别CD45、CD11b、CD11c、CD24、Ly-6C、Ly-6G、F4/80、MHCII和CD206的荧光染料缀合的抗体。使用Precision Count beads(BioLegend)计算细胞数，并将其根据肿瘤大小进行归一化。将所有群体对单个活CD45+细胞设门。群体如下进行定义：Treg-CD4+CD25+FoxP3+；NK细胞-CD3-CD49b+CD335+；NKT细胞-CD3+CD49b+CD335+；G-MDSC-CD11b+Ly6G+；M-MDSC-CD11b+Ly6C+；巨噬细胞-CD11b+F4/80+(不包括MDSC)；M1-CD206-MHCII+巨噬细胞；M2-CD206+巨噬细胞；树突细胞-CD24+F4/80-CD11c+MHCII+。将百分比变化计算为[(细胞/克CD1-M3样品)-(细胞/克媒介物对照组)]/(细胞/克媒介物对照组)x100％。值得注意的是，CD1-M3处理导致肿瘤浸润T细胞(包括CD4、CD8和γδT细胞)增加(图19，上图)。与媒介物对照相比，B细胞群体也增加。CD1-M3不影响肿瘤内CD8T细胞上激活标记物CD69的表达，然而，它确实降低了表达PD-1的CD8 T细胞的量(图19，下图)。
评价的第二同系模型是MMTV-PyMT原位小鼠模型。将106个MMTV-PyMT细胞原位植入雌性FVB小鼠的乳腺脂肪垫中。当平均肿瘤大小达到150mm3时，将小鼠随机分组到各组(n＝10)并按指示给药。每2-3天用卡尺测量肿瘤体积，并且在第9天，第2剂量后24小时结束研究。与媒介物对照相比，CD1-M3处理再次导致肿瘤体积的小的减小(图20，上图)。由于CD1-M3可以在体外恢复IL-38处理的巨噬细胞的IL-6产生，因此在此研究中评价了肿瘤内细胞因子水平。使用珠打浆匀浆器(Omni International)将快速冷冻的肿瘤在含有0.5％NP-40的裂解缓冲液中匀浆。通过Pierce BCA蛋白质测定试剂盒(ThermoFisher)测量蛋白质浓度并且对其进行归一化。在基于Luminex的平台上测量细胞因子浓度。与显示出用CD1-M3恢复IL-6产生的体外数据相似，在CD1-M3处理的小鼠中，瘤内IL-6增加。
为了评价仅结合人IL-38的另外的先导候选抗体，还在免疫缺陷型scid小鼠中评价了异种移植模型。将5x106个A549细胞植入7-8周龄雌性scid小鼠中，这些细胞先前已经显示在凋亡条件下分泌IL-38。当平均肿瘤大小达到134mm3时，将小鼠随机分组到各组并按指示给药。每2-3天用卡尺测量肿瘤体积，并且在第9天，第2剂量后24小时结束研究。在先导候选抗体处理之后，未观察到肿瘤体积的显著减少(图21)。这可能是由于在此模型中缺乏T细胞和B细胞，这两种细胞在B16.F10肿瘤中增加(图19)。通过从图21收获肿瘤并将其解离为单细胞悬浮液，在scid小鼠中评价仍存在于这些小鼠中的髓样区室，并且如图19中所述进行流式细胞术。总体而言，CD1-M3轻微增加了多发性骨髓瘤群体，而CD1-M8、CD1-M26和NZB-M8大部分导致了这些群体的轻微减少(图22)。
实施例7.从头颈癌患者的B细胞库鉴定IMM20130。IMM20130是从人B细胞杂交瘤分离的，该人B细胞杂交瘤是通过来自未经治疗的头颈癌患者的淋巴结的记忆B细胞的融合产生的(示意性地示于图24a)。此抗体是由与hIGKV3-20轻链配对的hIGHV1-18构成的经类别转换的IgG。它含有中等水平的体细胞超变，分别与种系重链序列和轻链序列具有93％和98％同源性。生物膜层干涉测量法(BLI)分析显示IMM20310与人全长IL-38结合，其亲和力为13.6nM(图24b)。使用天然人蛋白的结合混杂性分析显示出对人IL-38蛋白的精妙的特异性和选择性(图24c)。通过流式细胞术进行与人癌细胞系的结合，并鉴定出多个IL-38表达系(包括A549)，这些表达系先前已经显示在凋亡条件下分泌IL-38。然而，在功能实验中，IMM20130无法逆转IL-38介导的对LPS刺激的THP-1细胞对IL-6产生的抑制，这表明它没有阻断IL-38与其同源受体的结合。总之，尽管IMM20130不能治疗性地用于阻断IL-38功能，但是这些数据证明了免疫系统在癌症中靶向IL-38，并且将IL-38鉴定为潜在的目的靶标。
THP-1巨噬细胞的LPS刺激。通过用100nM PMA培养72小时，使THP-1单核细胞分化为巨噬细胞。分化后，通过用PBS洗涤去除PMA。然后将THP-1巨噬细胞在有或没有1μg/mL重组全长人IL-38(Adipogen)的普通RPMI中培养24小时。在有指示的情况下，在室温下将IMM抗体或商业多克隆抗IL-38抗体(Lifespan Biosciences)与人IL-38一起预孵育1小时，然后添加到THP-1巨噬细胞中。为了诱导炎性细胞因子的产生，添加10ng/mL LPS，持续另外的24小时。收获上清液并且根据制造商的说明使用人IL-6Duoset ELISA(R&D Systems)测量细胞因子表达。
通过生物膜层干涉测量法(BLI)测量的抗IL-38抗体与IL-38的亲和力。使用生物膜层干涉测量方法(BLI)在Octet Qke仪器(ForteBio)上进行初始筛选和结合实验。将抗体以5mg/mL浓度加载在抗人Fc探针上，并且对PBS中0.5％无Ig的BSA中的可溶性IL-38人蛋白的连续稀释液进行探测。基线和基线2步骤测量60s，加载120s，缔合90-120s以及解离240-360s。使用10mM甘氨酸缓冲液(pH 1.7)进行再生。使用ForteBio Data Analysis软件V9.0.0.14利用1:1(抗体与分析物)相互作用模型分析实验数据。使用基于卡方值的最接近拟合进行数据拟合，该卡方值描述了实验曲线与拟合曲线之间的偏差。拟合算法寻求最小化卡方。
流式细胞术。进行流式细胞术以评估与肿瘤细胞系的结合。简言之，使用非酶促分离缓冲液收获贴壁细胞，并且将其在37℃下孵育10-30分钟。释放后，将细胞在完全培养基中洗涤，并且用可固定的活/死染料染色。使用IMM20324在4℃下进行一抗结合。通过用多克隆AF647山羊抗小鼠IgG2a二抗染色进行检测。将样品在Attune NxT流式细胞仪(LifeTechnologies)上进行分析，并且使用FlowJo X(BD BioSciences)进行分析。使用S形、4PL、log函数在Prism V9中生成结合曲线。
实施例8.IL-38在鳞状细胞癌中过表达并且与不良的免疫浸润相关。为了证实IL-38与其他肿瘤类型的相关性，我们从癌症基因组图谱(Cancer Genome Atlas，TCGA)中收集了RNAseq数据。将来自6种不同癌症类型的肿瘤分为IL-38阳性和阴性肿瘤，并且与正常组织进行比较。在所有肿瘤中，分析的IL-38表达显著高于正常邻近组织。当比较阳性和阴性头颈部肿瘤时，鳞状细胞癌的显著部分(23％)表达IL-38(图25)，这支持了IL-38在抗体来源的适应证中的相关性。有趣的是，IL-38转录物在多种另外的肿瘤类型中也可检测到，这些肿瘤类型特别是食管癌、鳞状细胞癌、宫颈鳞状细胞癌(其中每一种的患病率>40％)以及皮肤黑色素瘤、肺腺癌(图25)。在其他癌症类型(包括宫颈腺癌、膀胱尿路上皮癌和前列腺腺癌)中也观察到阳性。有趣的是，鳞状细胞癌在IL-38阳性患者样品中展现出最高的IL-38表达和最高的频率。
为了在Tempus数据集(Beaubier N,Bontrager M,Huether R,Igartua C,Lau D,Tell R,Bobe AM,Bush S,Chang AL,Hoskinson DC,Khan AA.Integrated genomicprofiling expands clinical options for patients with cancer.NatureBiotechnology.2019Nov；37(11):1351-60)中证实不同癌症类型的IL-38mRNA转录物的表达，使用Tempus平台收集来自真实世界数据库的RNA测序数据。在60多种癌症类型中，IL-38mRNA表达频率高的前3种癌症是胃食管鳞状细胞癌、头颈部鳞状细胞癌和肺鳞状细胞癌(表6)。有趣的是，在HPV阴性群体中，IL-38mRNA表达显著更高(图46D)，与HPV阳性群体相比，HPV阴性群体预后差且更难治疗。这些结果证实了来自TCGA分析的发现，即IL-38在鳞状细胞癌中过表达。
表6描绘了基于Tempus数据库的IL-38mRNA表达分析和肿瘤样品中IL-38mRNA表达的频率。
TPM：每百万读取中的转录物。Stdev：标准差。
由于IL-38与炎症的抑制相关，因此我们还将免疫细胞谱系特异性基因表达与IL-38表达相关联。在多种肿瘤类型中，IL-38表达与T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和DC的IMMSig富集得分呈负相关，这表明IL-38表达与免疫浸润呈负相关(图26)。这些数据表明，靶向人肿瘤中的IL-38可以增强免疫浸润、炎性细胞因子表达并诱导生产性抗肿瘤免疫。
为了证实在Tempus数据集中的肿瘤中IL-38表达与免疫细胞的浸润呈负相关，使用Tempus的专有算法生成每个肿瘤样品中不同免疫细胞群体的富集得分(Reiman等人Pacific Symposium on Biocomputing(2019))。计算IL-38表达水平与富集得分的皮尔森相关性，并描绘于表7中。在头颈部鳞状细胞癌中，IL-38表达与总免疫细胞、CD8+T细胞(图46A)、巨噬细胞(图46B)和NK细胞(图46C)呈负相关。在肺鳞状细胞癌中，IL-38表达与总免疫细胞、CD8+T细胞和巨噬细胞呈负相关。在胃食管鳞状细胞癌中也观察到类似的趋势。这些结果证实了来自TCGA分析的发现：高IL-38mRNA表达与较少免疫细胞群体浸润相关，这证实了我们的假设，即IL-38是抑制性细胞因子并且阻断免疫细胞迁移到肿瘤中。
表7.在选定的癌症中，IL-38表达与免疫细胞浸润呈负相关。
总之，在头颈癌患者中IMM20130的发现、在多种肿瘤类型中IL-38表达的证实以及IL-38的免疫调节功能表明IL-38可能是影响肿瘤微环境和抗肿瘤反应的关键免疫检查点。我们假设针对IL-38的抗体可以通过促进先天免疫来抑制肿瘤生长。
TCGA分析。从癌症基因组图谱(TCGA)门户网站下载多种肿瘤类型的RNAseq数据。在散点图中描绘了单独样品中的IL-38表达。基于第90百分位数的正常样品中IL-38的表达水平来选择不同肿瘤类型中的IL-38表达阈值。IL-38表达水平高于阈值的样品被视为IL-38阳性样品。相反，IL-38表达水平低于阈值的样品被视为IL-38阴性样品。针对IL-38阳性样品和IL-38阴性样品，计算每个免疫细胞群体的IMMsig得分的富集。
Tempus分析。收集来自超过60种不同类型的癌症的全基因组RNA测序数据。IL-38阳性样品被定义为在测序读段中检测到多于一个拷贝的IL-38mRNA。
实施例9.IMM20324的发现。为了鉴定具有治疗潜力的中和抗IL-38抗体，通过将CD-1小鼠用重组人IL-38免疫接种来产生小鼠杂交瘤。在多种IL-38结合物中，选择IMM20324，因为其对人IL-38的高亲和力、体外中和效力以及与食蟹猴和鼠IL-38的交叉反应性。IMM20324以高亲和力与人和食蟹猴IL-38结合，以轻微较低的亲和力与小鼠IL-38结合(图27a)。与IMM20130类似，IMM20324对天然人蛋白阵列中的IL-38展现出强特异性，而与其他IL-1家族成员或其他非相关蛋白没有结合。IMM20324以剂量依赖性方式与板结合的重组IL-38结合，其EC50值为4.3ng/mL(图27b)。IMM20324还以剂量依赖性方式中和重组人IL-38与板结合的IL1RAPL1-Fc或人IL-36R-Fc的结合，其IC50值分别为190ng/mL和220ng/mL(图27c)。使用LPS刺激的THP-1细胞，在基于细胞的测定中评估IMM20324阻断IL-38的功能的能力(图27d)。在此测定中，IL-38抑制在LPS处理后的IL-6的产生。IMM20324添加显著增加了IL-6产生，尽管不是完全恢复。总之，这些数据证明IMM20324与IL-38结合，阻止IL-38结合其推定的受体并抑制人单核细胞系中的功能。
通过表面等离子体共振(SPR)测量的抗IL-38抗体与IL-38的亲和力。将样品在运行缓冲液(HBS-EP+1mg/mL BSA)中稀释。将抗体加载到蛋白A捕获传感芯片(Cytiva)中。将IL-38蛋白(NovoPro)在5个连续三倍稀释液中从270nM稀释至0.33nM。在运行BiacoreInsight Evaluation软件V3.0.12.15655的Biacore 8K仪器上，在25℃下使用30mL/min的流速进行实验。缔合步骤测量300s，解离1500s。使用10mM甘氨酸缓冲液(pH1.7)进行再生。用双重参考减法(即首先减去参考反应，然后减去零浓度传感图以补偿参考通道与活性通道之间的漂移和小差异)，在假设1:1(抗体与抗体)结合的情况下进行分析。使用Langmuir(1:1)结合分析处理数据。该模型描述了1:1相互作用，并且通常用于初始评价。使用基于卡方值的最接近拟合进行数据拟合，该卡方值描述了实验曲线与拟合曲线之间的偏差。拟合算法寻求最小化卡方。
抗体与板结合的重组人IL-38的结合。将重组人IL-38(全长，Adipogen)在PBS中稀释至0.1μg/ml的终浓度，分配到高结合板(Corning)中并且在4℃下孵育过夜。然后将板用洗涤缓冲液(PBS+0.05％Tween)洗涤三次，并且在室温(RT)下用封闭缓冲液(PBS+2％BSA)封闭1h。将抗IL-38抗体在RT下孵育2h，然后用洗涤缓冲液洗涤三次。将HRP缀合的兔抗小鼠二抗(Southern Biotech)在RT下孵育2h，然后用洗涤缓冲液洗涤三次。将OPD底物(Sigma)在黑暗中在RT下孵育10-15min，然后添加终止溶液(2N硫酸，R&D Systems)。使用EnSpire读板仪(型号：2300-0000，PerkinElmer)通过在450nm处测量吸光度来确定与样品/标准品结合的hu-IL-38的量。
人IL-38与IL1RAPL1或IL-36R的结合的中和。将人IL1RAPL1-Fc(SinoBiological，#10177-H02H)和人IL-36R-Fc(R&D Systems)在包被缓冲液(50mM碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液，pH 9.4)中以0.5μg/mL的终浓度稀释，并且在RT下在MSD高结合板(MSD)上包被约两小时。将重组人IL-38(Adipogen)在测定稀释剂(1％BSA，0.1％Tween 20，在1xPBS中)中稀释。对于抗体测试，将抗IL-38抗体与IL-38在RT下预孵育约一小时。将IL-38或抗体-IL-38混合物转移到预包被的MSD板中并且在RT下孵育约两小时。洗涤后，将MSD板与终浓度为100ng/mL的生物素化的小鼠抗人IL-38(克隆H127C，Thermo Fisher)和终浓度为100ng/mL的磺基-标签-链霉亲和素(MSD)在RT下孵育1小时。使用Meso Sector S 600读板仪检测IL-38与板结合的IL1RAPL1-Fc或人IL-36R-Fc的结合。使用GraphPad Prism 9.0.1版绘制数据。采用“[抑制剂]与反应-可变斜率的关系(四参数)”方法拟合剂量反应曲线。
实施例10.IMM20324显示出有利的PK曲线并且在C57BL/6小鼠中是良好耐受的。由于IMM20324与小鼠IL-38结合，我们使用同系小鼠模型来评估药代动力学和抗肿瘤活性。在单次10mg/kg剂量的IMM20324之后，当腹膜内和静脉内施用后一周血浆浓度保持在高于10mg/mL(图28a；表8)。
表8.通过静脉内和腹膜内施用途径给药后IMM20324的药代动力学。
当每周一次或两次施用多个剂量持续3周时，IMM20324的血清浓度进一步增加(图28b)。重要的是，IMM20324的血浆水平与给药时间表相关，因为接受更高和更频繁剂量的IMM20324的组的血浆水平最高。IMM20324也是良好耐受的，因为在整个研究中所有小鼠的体重都正常增加(图29a)。在第21天，处死小鼠，并且对器官的总体分析显示无明显异常，并且脾脏无显著肿大(图29b)。为了确定这些小鼠中是否发生了炎性细胞因子的全身性上调，进行了血浆的基于Luminex的多重分析。总体而言，在任何组中炎性细胞因子均没有显著增加，然而，一些个别的小鼠在IMM20324处理后确实展现出几种细胞因子和趋化因子的少量增加(图29c)。总之，这些数据表明，在施用后，IMM20324显示出良好的全身稳定性，并且具有有限的毒性。
IMM20324的药代动力学和耐受性分析。对于单剂量药代动力学分析，向6-7周龄的C57BL/6雌性小鼠腹膜内或静脉内给予10mg/kg剂量的IMM20324。在每个时间点，眼球后或通过心脏穿刺在K2-EDTA管中收集来自三只小鼠的血液，并将血浆分离。对于多剂量耐受性研究，将5-6周龄的C57BL/6雌性小鼠随机分配到各组并且按指示给药，并且每周测量两次体重。在第21天，在K2-EDTA管中收集血液并且将血浆分离。取出所有小鼠的脾脏并且称重。
通过直接IL-38ELISA确定IMM20324的血浆浓度。在4℃下将25ng/mL人IL-38(Adipogen，#AG-40A-0191-C050)包被在高结合96孔板(Corning，#3369)的每个孔中过夜。在室温下将孔用PBS+2％BSA封闭1小时，然后用PBS+0.05％Tween洗涤3次。将血浆样品在PBS中稀释，在室温下添加到每个孔中持续2小时，然后将孔用PBS+0.05％Tween洗涤3次。在室温下将抗小鼠IgG-HRP添加到每个孔中持续2小时，然后将孔用PBS+0.05％Tween洗涤3次。向每个孔中添加在磷酸柠檬酸盐/过硼酸钠缓冲液中稀释的OPD底物(Sigma，#P8287)，显影5-30分钟，并且在450nm处测量吸光度。
实施例11.IMM20324作为单一药剂在B16.F10同系小鼠模型中显示出抗肿瘤治疗功效。靶向PD-1/PD-L1轴的抗体在具有高免疫细胞浸润的肿瘤中最成功。B16.F10黑色素瘤同系小鼠模型被认为是一种快速生长且免疫学上的冷肿瘤。先前的报告显示，抗PD-1/PD-L1处理在此模型中显示出有限的功效。为了测试抗IL-38是否可以半治疗地在这些免疫学上的冷肿瘤中诱导抗肿瘤反应，从肿瘤体积达到75mm3时开始每三天腹膜内施用IMM20324。在10mg/kg和50mg/kg剂量的IMM20324处理之后，在整个研究持续时间内观察到肿瘤大小显著降低(图30a；表9)。
表9.B16.F10同系模型中IMM20324处理的线性混合效应建模。
在第10天，10mg/kg组中的15只小鼠中有15只以及50mg/kg IMM20324处理的组中的15只小鼠中有14只的肿瘤体积低于同种型对照组中观察到的肿瘤体积的平均值(图30b)。最终，IMM20324处理导致在给药期间或整个研究持续时间内肿瘤体积达到1500mm3的时间延迟(图30c)。总之，IMM20324处理在免疫学上冷的B16.F10黑色素瘤同系肿瘤中有效。
PK/PD分析。将C57BL/6小鼠在右侧腹接种B16.F10黑色素瘤细胞。在第0天，根据肿瘤体积对小鼠进行随机分组，并且将其用3mg/Kg、10mg/Kg或30mg/Kg剂量的IMM20324或30mg/Kg同种型对照或10mg/Kg抗PD-L1每三天腹膜内处理，持续4个总剂量。每3天测量肿瘤体积。IMM20324在荷瘤小鼠中的半衰期为190-222小时，这支持每三天给药(图32A)。在以所描绘的剂量每三天进行抗体治疗(总共4次给药)后，IMM20324显示出对肿瘤生长的剂量依赖性抑制。以30mg/Kg剂量的IMM20324的作用与阳性对照(10mg/Kg的抗mPD-L1)是可比较的(图32B)。在更高剂量组的小鼠中，观察到第4剂量后24h最终血清中更高的IMM20324浓度。血清中IMM20324的最终肿瘤体积和最终暴露存在负关联的趋势(图32C)。在肿瘤中表达的趋化因子可以募集不同的免疫细胞并且启动抗肿瘤免疫反应。较高的趋化因子浓度与较小的最终肿瘤体积相关(数据未显示)。在IMM20324处理之后，从快速冷冻B16.F10肿瘤中提取总蛋白。通过小鼠细胞因子/趋化因子31-plex Discovery Assay Array测量肿瘤提取物中的趋化因子。在肿瘤中，IMM20324处理显示出趋化因子的暴露依赖性增加。最终血清中IMM20324的浓度(第4剂量后24h)与CXCR3配体(CXCL9/MIG或CXCL10/IP10(图33))和CCR配体(CCL3/MIP1α、CCL4/MIP1β(图34)和CCL11/嗜酸性粒细胞趋化因子(图35))呈负相关。这些数据表明，用IMM20324阻断体内IL-38导致趋化因子产生的增加和免疫细胞潜在募集到肿瘤中。这些发现也与TCGA和Tempus分析的发现一致，即在肿瘤中IL-38负调节免疫浸润。
B16.F10同系肿瘤模型。将2.5x105个B16.F10细胞植入6周龄C57BL/6雌性小鼠的侧腹中。当平均肿瘤体积达到50-100mm3约8天后，将小鼠随机分配到指示处理组中，并且施用第一剂量的CD1-M3。在研究持续时间内，每周两次用数字卡尺测量肿瘤，并且通过(最长直径)x(最短直径)2/2计算肿瘤体积。根据IACUC方案，当肿瘤体积达到3000mm3时处死小鼠。
肿瘤生长速率和时间-肿瘤体积的分析。使用生长指数模型(肿瘤体积＝a*exp(b*天数))拟合每只动物的肿瘤生长曲线，该模型提供最高的R2和最低的AIC值。然后通过用拟合的肿瘤生长曲线截取肿瘤体积来计算达到预测的肿瘤体积的时间。使用以下公式使用滞后的时间差和滞后的肿瘤体积差计算以百分比计的肿瘤增长速率：
天数差异＝时间点-滞后(时间点)
生长差异＝体积-滞后(体积)
肿瘤生长速率％＝(生长差异/天数差异)/滞后(体积)*100
最后，使用线性混合效应模型，使用肿瘤体积作为结局，并且以处理组为纳入时间差异的固定变量，分析处理组之间的肿瘤体积比较值。由于这是嵌套的实验设计，因此将单独动物控制为随机效果。结果允许在有或没有纳入时间差异的情况下将每个处理组的比较值与对照进行比较。此LME分析是在所有时间点完成的。
细胞因子和趋化因子的分析。使用Eve Technologies Corp.(艾伯塔卡尔加里)的LuminexTM200系统(Luminex，美国德克萨斯州奥斯汀)进行多重分析。根据制造商的方案，使用Eve Technologies的Mouse Cytokine 32-Plex Discovery(MilliporeSigma，美国马萨诸塞州伯灵顿)在样品中同时测量三十二种标记物。32-plex由以下组成：嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、GM-CSF、IFNγ、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-10、IL-12(p40)、IL-12(p70)、IL-13、IL-15、IL-17、IP-10、KC、LIF、LIX、MCP-1、M-CSF、MIG、MIP-1α、MIP-1β、MIP-2、RANTES、TNFα和VEGF。对于32-plex，这些标记物的测定灵敏度范围为0.3-30.6pg/mL。单独的分析物灵敏度值可以在MilliporeSigmaMAP方案中获得。
实施例12.IMM20324在一部分荷EMT6肿瘤小鼠中诱导长期抗肿瘤免疫并且保护其免受肿瘤再激发。还测试了IMM20324抑制EMT6乳腺癌同系小鼠模型的肿瘤生长的能力。在第15天，一半的IMM20324处理的小鼠显示肿瘤生长降低(图31a；表10)，并且在施用所有剂量后，几只IMM20324处理的小鼠没有可检测的肿瘤(图31b)。
表10.EMT6同系模型中IMM20324处理的线性混合效应建模。
为了确定IMM20324处理是否诱导保护性抗肿瘤记忆反应，然后在不进行另外的IMM20324给药的情况下，将治愈的小鼠在对侧侧腹用EMT6肿瘤细胞再激发。与未经处理的年龄匹配的对照组相比，所有测试的治愈小鼠在接种后数周未展现出明显的肿瘤生长(图31c)，导致存活率显著增加(图31d)。
综上所述，上述结果表明，用IMM20324阻断IL-38的免疫抑制功能可以恢复炎性细胞因子产生。此外，IMM20324处理可以在免疫学上的冷肿瘤(如B16.F10)中诱导显著的肿瘤消退，这是由适应性免疫细胞介导的。
EMT6同系肿瘤模型。将5x105个EMT6细胞植入6-8周龄BALB/c雌性小鼠的侧腹中。当平均肿瘤体积达到50-100mm3约8天后，将小鼠随机分配到指示处理组中，并且施用第一剂量的CD1-M3。在研究持续时间内，每周两次用数字卡尺测量肿瘤，并且通过(最长直径)x(最短直径)2x0.52计算肿瘤体积。根据IACUC方案，当肿瘤体积达到3000mm3时处死小鼠。
肿瘤生长速率和时间-肿瘤体积的分析如上所述进行。
实施例13.通过免疫组织化学(IHC)检测的肿瘤样品中的IL-38蛋白表达。为了评价原发性癌症样品中的IL-38蛋白表达，使用免疫组织化学利用IL-38特异性抗体评估包含来自多种癌症适应证的肿瘤的肿瘤微阵列的IL-38表达。根据RNA表达数据选择癌症类型，并且阵列由来自每种适应证的多个子类型的肿瘤和处于不同分期的肿瘤构成。在抗原修复和阻断后，使用IMM20130抗IL38小鼠抗体(其用辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗来检测)进行染色。由委员会认证的病理学家使用0(无表达)至6(强表达)等级对图像进行阳性评分。注意到表达有细胞质的或细胞核的。在其他区室中未观察到染色。
头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)样品的分析显示在多个样品中表达，这与先前的RNA表达分析一致。细胞质表达强度通常为弱至中等，而细胞核染色更强，并且存在于较高频率的样品中(图36)。尽管与此疾病的后期分期相比，I期样品中的细胞核染色较低，但是此组在其包含的样品数量方面受到限制(图37)。在疾病的特定分期未观察到细胞质表达方面的差异。宫颈鳞状细胞癌(CSCC)显示出与在大量样品中注意到的表达(主要在肿瘤细胞的细胞核区室中)相似的染色模式(图38)。与在细胞质中观察到的表达相比，细胞核中的表达具有更高的强度。除了在IIIa期样品中较低之外，细胞核染色的强度普遍较高(图39)。在Ia期和IIb期，细胞质染色变化更大，并且表达最高。对肺癌肿瘤组织的分析显示出高频率的阳性组织，结果再次表明，与细胞质表达相比，细胞核染色具有更高的强度(图40)。在不同的分期，细胞核表达一直很高。相比之下，在I期样品中未观察到细胞质表达，但是细胞质表达在疾病后期的肿瘤中是等同的(图41)。基于肺癌亚型的表达分析显示出在大多数亚型中的少数亚型(包括腺癌和鳞状细胞癌)中明显的细胞质染色(图42)。相比之下，细胞核表达(虽然存在于肺癌的所有子类型中)在小细胞未分化癌和鳞状细胞癌中强度最高，图43。
还使用IMM20130和H127c(可商购的小鼠抗人IL-38抗体(Thermo Scientific))两者评估由人黑色素瘤样品构成的肿瘤微阵列的IL-38表达。使用0(无表达)与5(强表达)之间的等级进行评分。在此研究中未对定位进行评分。在单独样品中，两种抗体在强度方面显示出一些差异。用IMM20130观察到更高百分比的阳性样品，并且这些样品的强度水平更高，这表明此抗体比H127c更敏感。此数据证实了IMM20130对IL-38表达的量化的准确性。
总体而言，IHC数据与RNA表达数据显示出良好的相关性，并支持以下结论：在多种癌症适应证中IL-38表达是肿瘤细胞的特征。
序列表
<110> 伊米若梅有限公司
<120> IL-38特异性抗体
<130> 22419-20003.40
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
<150> US 63/236,454
<151> 2021-08-24
<150> US 63/167,105
<151> 2021-03-28
<160> 106
<170> 用于Windows的FastSEQ 4.0版
<210> 1
<211> 355
<212> DNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> 克隆PR087-29B5 IL38 VH核酸
<400> 1
gtgaaggtct cctgcaaggc ttctggttac agctttatca actatggcat cacctgggtg 60
cgccaggtcc ctggacaagg gcttgagtgg atgggatgga tcagcgctta caatgttaag 120
acaaagtatg caccgaagtt ccagggcaga gtcaacatga atacagacac atccacgagg 180
acagcctaca tggagctgag gagcctgaga tctgacgaca cggccgtcta ttactgtgcg 240
agagataggg attacgattt ttggagtggt tcggcttttg atatctgggg ccaagggaca 300
atggtcaccg tctcttcagc ctccaccaag ggcccatcgg tcttccccct ggcgc 355
<210> 2
<211> 118
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> 克隆PR087-29B5 IL38 VH氨基酸
<400> 2
Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Asn Tyr Gly
1 5 10 15
Ile Thr Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
20 25 30
Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Val Lys Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
35 40 45
Gly Arg Val Asn Met Asn Thr Asp Thr Ser Thr Arg Thr Ala Tyr Met
50 55 60
Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
65 70 75 80
Arg Asp Arg Asp Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Ala Phe Asp Ile Trp
85 90 95
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
100 105 110
Ser Val Phe Pro Leu Ala
115
<210> 3
<211> 308
<212> DNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> 克隆PR087-29B5 IL38 VL核酸
<400> 3
aagagtcacc ctctcctgca gggccagtca gagtattagc accaactact tagcctggta 60
ccagcagaaa cctggccagg ctcccagtct actcatctat ggtgcatcca gcagggccac 120
tggcatccca gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag 180
cagactggag cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacctcc 240
gaggactttt ggccagggga ccaagctgga gatcagacga actgtggctg caccatctgt 300
cttcatct 308
<210> 4
<211> 102
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> 克隆PR087-29B5 IL38 VL氨基酸
<400> 4
Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Asn Tyr
1 5 10 15
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu Ile
20 25 30
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
35 40 45
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
50 55 60
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Pro
65 70 75 80
Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Arg Arg Thr Val Ala
85 90 95
Ala Pro Ser Val Phe Ile
100
<210> 5
<211> 369
<212> DNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38 VH核酸
<400> 5
caggttcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta cagcttcatc aactacggca tcacctgggt ccgacaggtg 120
ccaggacaag gcttggaatg gatgggctgg atcagcgcct acaacgtcaa gaccaaatac 180
gcccctaagt tccagggccg cgtgaacatg aacaccgaca ccagcaccag aaccgcctac 240
atggaactgc ggagcctgag atccgatgac accgccgtgt actactgcgc cagagacaga 300
gactacgact tttggagcgg cagcgccttc gatatctggg gccagggaac aatggtcacc 360
gtgtctagt 369
<210> 6
<211> 369
<212> DNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38 VH密码子优化的表达片段核酸
<400> 6
caggttcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta cagcttcatc aactacggca tcacctgggt ccgacaggtg 120
ccaggacaag gcttggaatg gatgggctgg atcagcgcct acaacgtcaa gaccaaatac 180
gcccctaagt tccagggccg cgtgaacatg aacaccgaca ccagcaccag aaccgcctac 240
atggaactgc ggagcctgag atccgatgac accgccgtgt actactgcgc cagagacaga 300
gactacgact tttggagcgg cagcgccttc gatatctggg gccagggaac aatggtcacc 360
gtgtctagt 369
<210> 7
<211> 123
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38 VH氨基酸
<400> 7
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Val Lys Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Asn Met Asn Thr Asp Thr Ser Thr Arg Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Asp Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 324
<212> DNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38 VL核酸
<400> 8
gagatcgtgc tgacacagag ccctggcaca ctgtcactgt ctccaggcga gagagtgacc 60
ctgagctgta gagccagcca gagcatcagc accaactacc tggcctggta tcagcagaag 120
cctggacagg ctcctagcct gctgatctac ggcgcctctt ctagagccac aggcatcccc 180
gatagattca gcggctctgg cagcggcacc gatttcaccc tgacaatcag cagactggaa 240
cccgaggact tcgccgtgta ctactgtcag cagtacggca gcagccctcc tagaacattt 300
ggccagggca ccaagctgga aatc 324
<210> 9
<211> 327
<212> DNA
<213> 智人 (Homosapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38 VL密码子优化的表达片段核酸
<400> 9
gagatcgtgc tgacacagag ccctggcaca ctgtcactgt ctccaggcga gagagtgacc 60
ctgagctgta gagccagcca gagcatcagc accaactacc tggcctggta tcagcagaag 120
cctggacagg ctcctagcct gctgatctac ggcgcctctt ctagagccac aggcatcccc 180
gatagattca gcggctctgg cagcggcacc gatttcaccc tgacaatcag cagactggaa 240
cccgaggact tcgccgtgta ctactgtcag cagtacggca gcagccctcc tagaacattt 300
ggccagggca ccaagctgga aatcaag 327
<210> 10
<211> 109
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38 VL氨基酸
<400> 10
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 1365
<212> DNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38 HC核酸
<400> 11
caggttcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta cagcttcatc aactacggca tcacctgggt ccgacaggtg 120
ccaggacaag gcttggaatg gatgggctgg atcagcgcct acaacgtcaa gaccaaatac 180
gcccctaagt tccagggccg cgtgaacatg aacaccgaca ccagcaccag aaccgcctac 240
atggaactgc ggagcctgag atccgatgac accgccgtgt actactgcgc cagagacaga 300
gactacgact tttggagcgg cagcgccttc gatatctggg gccagggaac aatggtcacc 360
gtgtctagtg ccagcaccaa gggcccttcc gtgtttccac tggccccctc ctctaaatcc 420
acatctggcg gcaccgccgc cctgggctgt ctggtgaagg actacttccc agagcctgtg 480
acagtgtcct ggaactctgg cgccctgaca tccggcgtgc acacatttcc agccgtgctg 540
cagagctccg gcctgtacag cctgtctagc gtggtgacag tgccctcctc tagcctgggc 600
acacagacct atatctgcaa cgtgaatcac aagccaagca ataccaaggt ggacaagaag 660
gtggagccca agtcctgtga taagacacac acctgccccc cttgtcctgc tcccgagctg 720
ctgggcggcc ctagcgtgtt cctgtttcca cccaagccta aggacaccct gatgatctcc 780
cggacacccg aggtgacctg cgtggtggtg gacgtgtctc acgaggatcc tgaggtgaag 840
ttcaactggt atgtggatgg cgtggaggtg cacaatgcca agaccaagcc cagagaggag 900
cagtacaact ctacatatag ggtggtgagc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 960
aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc aataaggccc tgcccgcccc catcgagaag 1020
acaatcagca aggccaaggg ccagcctcgg gagccacagg tgtacaccct gcctccatcc 1080
agagacgagc tgacaaagaa ccaggtgtct ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatcct 1140
agcgatatcg ccgtggagtg ggagtccaat ggccagccag agaacaatta caagaccaca 1200
ccccctgtgc tggactccga tggctccttc tttctgtatt ccaagctgac cgtggataag 1260
tctcggtggc agcagggcaa cgtgttcagc tgttccgtga tgcacgaagc cctgcataat 1320
cactatactc agaaatccct gtccctgtca cctggaaagt gataa 1365
<210> 12
<211> 453
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38 HC氨基酸
<400> 12
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Val Lys Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Asn Met Asn Thr Asp Thr Ser Thr Arg Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Asp Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 13
<211> 654
<212> DNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38 LC核酸
<400> 13
gagatcgtgc tgacacagag ccctggcaca ctgtcactgt ctccaggcga gagagtgacc 60
ctgagctgta gagccagcca gagcatcagc accaactacc tggcctggta tcagcagaag 120
cctggacagg ctcctagcct gctgatctac ggcgcctctt ctagagccac aggcatcccc 180
gatagattca gcggctctgg cagcggcacc gatttcaccc tgacaatcag cagactggaa 240
cccgaggact tcgccgtgta ctactgtcag cagtacggca gcagccctcc tagaacattt 300
ggccagggca ccaagctgga aatcaagagg acagtggccg ccccaagcgt gttcatcttt 360
cccccttccg acgagcagct gaagtctggc accgccagcg tggtgtgcct gctgaacaac 420
ttctaccctc gggaggccaa ggtccagtgg aaggtggata acgccctgca gtctggcaat 480
agccaggagt ccgtgaccga gcaggactct aaggatagca catattccct gtctagcacc 540
ctgacactga gcaaggccga ttacgagaag cacaaggtgt atgcctgtga agtcacccat 600
caggggctgt catcacccgt cactaagtca ttcaatcgcg gagaatgctg ataa 654
<210> 14
<211> 216
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38 LC氨基酸
<400> 14
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 15
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38 VH-CDR1氨基酸
<400> 15
Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Asn Tyr Gly Ile Thr
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<210> 16
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38VH-CDR2氨基酸
<400> 16
Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Val Lys Thr Lys
1 5 10
<210> 17
<211> 16
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38VH-CDR3氨基酸
<400> 17
Ala Arg Asp Arg Asp Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Ala Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 18
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38 VL-CDR1氨基酸
<400> 18
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 19
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38 VL-CDR2氨基酸
<400> 19
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 20
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<220>
<223> IMM20130 IL38 VL-CDR3氨基酸
<400> 20
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Pro Arg Thr
1 5 10
<210> 21
<211> 352
<212> DNA
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M3 IL38-C VH核酸
<400> 21
gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaaaata 60
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catggaaaga gccttgagtg gattggagat attaatccta acaatggtgg tactatctac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcttccag cacagcctac 240
atggagctcc gcagcctgac atctgaggac actgcagtct attactgttc aagaccctat 300
tatggttact ttgcttactg gggccaaggg actctggtca ctgtctctgc ag 352
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Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
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Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ser Arg Pro Tyr Tyr Gly Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
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<220>
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<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M3 IL38-C VH CDR2氨基酸
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Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ile
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<211> 10
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<220>
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Ser Arg Pro Tyr Tyr Gly Tyr Phe Ala Tyr
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<211> 337
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<220>
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<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
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Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
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65 70 75 80
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<212> PRT
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<220>
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Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Ala Gly Phe Val Tyr
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<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
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<212> DNA
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<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
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<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
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<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
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<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
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tcaggagcct cccccaaact ctggatctat ggcgcatcca acctggcttc tggagtccct 180
gctcggttca gtggcagtgg gtctgggacc tcctactctc tcacaatcat cagcgtggag 240
gatgaagatg ctgccaccta ttactgccag cagtatcata gtggagcgct cacgttcgga 300
ggggggacca agctggagat gaaac 325
<210> 67
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M27 IL38-C VL氨基酸
<400> 67
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Pro Cys Ser Ala Met Ser Ser Val Ser Ser Arg
20 25 30
Tyr Leu His Trp Asn Gln Gln Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ile Ser Val Glu
65 70 75 80
Asp Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Gly Ala
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys
100 105
<210> 68
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M27 IL38-C VL CDR1氨基酸
<400> 68
Ser Ala Met Ser Ser Val Ser Ser Arg Tyr Leu His
1 5 10
<210> 69
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M27 IL38-C VL CDR2氨基酸
<400> 69
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M27 IL38-C VL CDR3氨基酸
<400> 70
Gln Gln Tyr His Ser Gly Ala Leu Thr
1 5
<210> 71
<211> 322
<212> DNA
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M2 IL38-N VL核酸
<400> 71
gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60
ctcacatgtc gaccaagtgg gaatgttcac aattatttag catggtatca gcagaaacag 120
ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat gcaaaaacct tagcagatgg tgtgccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc aggaacacaa tattctctca agatcaacag cctgcagcct 240
gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggagta ctccattcac gttcggctcg 300
gggacaaagt tggaaataaa ac 322
<210> 72
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M2 IL38-N VL氨基酸
<400> 72
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Pro Ser Gly Asn Val His Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 73
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M2 IL38-N VL CDR1氨基酸
<400> 73
Arg Pro Ser Gly Asn Val His Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 74
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M2 IL38-N VL CDR2氨基酸
<400> 74
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp
1 5
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<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
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Gln His Phe Trp Ser Thr Pro Phe Thr
1 5
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<212> DNA
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M8 IL38-N VL核酸
<400> 76
gatattgtga tgactcaggc tgcaccctct gtatctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 60
atctcctcca ggtctagtaa gagtctcctg catagtaatg gcaacactta cttgtattgg 120
ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcag ctcctgatat atcggatgtc caaccttgcc 180
tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctgctttcac actgagaatc 240
agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaatatct agaatatcct 300
ttcacgttcg gctcggggac aaagctggaa ataaaac 337
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<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M8 IL38-N VL氨基酸
<400> 77
Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Tyr
85 90 95
Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 78
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M8 IL38-N VL CDR1氨基酸
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Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 79
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M8 IL38-N VL CDR2氨基酸
<400> 79
Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 80
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M8 IL38-N VL CDR3氨基酸
<400> 80
Met Gln Tyr Leu Glu Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 81
<211> 325
<212> DNA
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M12 IL38-N VL核酸
<400> 81
gaaaatgtgc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga aaaggtcacc 60
atgacctgca gggccagctc aagtgtaagt tccagttact tgcactggta ccagcagaag 120
tcaggtgcct cccccaaact ctggatttat agcacatcca acttggcttc tggagtccct 180
gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagtgtggag 240
gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtacggtg attttccact cacgttcgga 300
ggggggacca agctggaaat aaaac 325
<210> 82
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M12 IL38-N VL氨基酸
<400> 82
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asp Phe Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 83
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M12 IL38-N VL CDR1氨基酸
<400> 83
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His
1 5 10
<210> 84
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M12 IL38-N VL CDR2氨基酸
<400> 84
Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 85
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M12 IL38-N VL CDR3氨基酸
<400> 85
Gln Gln Tyr Gly Asp Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 86
<211> 343
<212> DNA
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M26 IL38-C VH核酸
<400> 86
caggtccagc tgcagcagcc tggggctgag atggtgaggg ctggggcttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc aactactgga tgcactgggt aaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggtaag attgatcctt ctgatagtga aactcactac 180
aatcaaaagt tcaaggacaa ggccacattg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca acagcctgac atctgaagac tctgcggtct attattgtca actctatctt 300
atggactact ggggtcaagg aacctcagtc accgtctcct cag 343
<210> 87
<211> 114
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M26 IL-38C VH氨基酸
<400> 87
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Met Val Arg Ala Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Lys Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gln Leu Tyr Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 88
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M26 IL38-C VH CDR1氨基酸
<400> 88
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Trp
1 5
<210> 89
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M26 IL38-C VH CDR2氨基酸
<400> 89
Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr
1 5
<210> 90
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M26 IL38-C VH CDR3氨基酸
<400> 90
Gln Leu Tyr Leu Met Asp Tyr
1 5
<210> 91
<211> 336
<212> DNA
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M26 IL38-C VL核酸
<400> 91
gacgttgtgt tgacacagtc tcttctctcc ttagctgtat ctctggggga gagggcttcc 60
atcttttgca gatttagtca gagcctttca aacagcaatg gaaagtccta tttatattgg 120
ttcctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acagggtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagccaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ttcaaggtgc acatgttcct 300
catacgttcg gatcggggac caagctggaa ataaaa 336
<210> 92
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M26 IL38-C VL氨基酸
<400> 92
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Leu Leu Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Asn Arg Gly Ala Lys Ser Ser Ile Tyr Phe Leu Cys Tyr Arg Trp
20 25 30
Phe Phe Ser Leu Gln Gln Ser Lys Leu Pro Ser Gly Asn Gln Ser Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ala His Val Pro His Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 93
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M26 IL38-C VL CDR1氨基酸
<400> 93
Gln Ser Leu Ser Asn Ser Asn Gly Lys Ser Tyr
1 5 10
<210> 94
<211> 3
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M26 IL38-C VL CDR2氨基酸
<400> 94
Arg Val Ser
1
<210> 95
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠属物种 (Mus sp.)
<220>
<223> 克隆M26 IL38-C VL CDR3氨基酸
<400> 95
Phe Gln Gly Ala His Val Pro His Thr
1 5
<210> 96
<211> 117
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 96
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Pro His Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Pro Tyr Tyr Gly Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 97
<211> 117
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 97
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Pro Tyr Tyr Gly Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 98
<211> 117
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 98
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Pro Tyr Tyr Gly Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 99
<211> 117
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 99
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Pro Tyr Tyr Gly Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 100
<211> 117
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 100
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Pro Tyr Tyr Gly Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 101
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 101
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
His Glu Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 102
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 102
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
His Glu Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 103
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 103
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
His Glu Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 104
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 104
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
His Glu Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 105
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 105
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
His Glu Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 106
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 106
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
His Glu Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110

Claims (37)

1.一种治疗个体的癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用与IL-38结合的抗体，其中所述抗体包含
含有SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及含有SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；
含有SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及含有SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；
含有SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及含有SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；
含有SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及含有SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；
含有SEQ ID NO:27中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及含有SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；
含有SEQ ID NO:37中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及含有SEQ ID NO:67中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；
含有SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及含有SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；
含有SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及含有SEQ ID NO:77中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；
含有SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及含有SEQ ID NO:62中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；
含有SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及含有SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；
含有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及含有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体包含
含有SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:94中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:63中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:65中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:78中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:79中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:68中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:69中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:44中所示的氨基酸序列的VH CDR2、SEQ ID NO:45的VH CDR3、含有SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列的VLCDR1、含有SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列的VL CDR3；或
含有SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的VH CDR3、SEQ ID NO:58的VLCDR1、含有SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的VH CDR1、SEQ ID NO:54的VH CDR2、含有SEQID NO:55中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:83中所示的氨基酸序列的VLCDR1、含有SEQ ID NO:84中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:85中所示的氨基酸序列的VL CDR3。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体包含
含有SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列的轻链可变区；
含有SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的轻链可变区；
含有SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列的轻链可变区；以及
含有SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体包含含有SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ IDNO:60中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的VL CDR3；
含有SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:94中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列的VL CDR3。
5.根据权利要求4所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体包含
含有SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列的VL CDR3。
6.根据权利要求5所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体包含
含有SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
7.根据权利要求1、2、4、或5中任一项所述的方法，其中所述CDR是通过North方法或Kabat方法定义的。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体是人源化抗体。
9.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体是人抗体。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述癌症表达高水平的IL-38。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体部分或完全阻断、抑制或中和IL-38的生物活性。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述个体是人。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中一种或多种促炎性细胞因子的水平增加。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中IL-6、CCL4、CCL3、CXCL1、CXCL10或GM-CSF中的一种或多种的水平增加。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述癌症是I期、II期、III期或IV期癌症。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中将与IL-38特异性结合的所述抗体以约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约25mg/kg、30mg/kg、约15mg/kg或约50mg/kg的剂量施用。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体是双特异性抗体。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中与IL-38特异性结合的所述抗体是分离的可变重链(VH)单结构域单克隆抗体、(sc)Fv-Fc、Fv、scFv、Fab、F(ab')2、Fab'片段、双特异性抗体或双抗体。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述癌症是鳞状细胞癌或腺癌。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述癌症选自胃食管癌、膀胱癌、宫颈癌、前列腺癌、乳腺癌、肾癌、结直肠癌、胰腺癌、黑色素瘤、子宫癌、头颈癌、肺癌和皮肤癌。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述癌症选自头颈部鳞状细胞癌(HNSC)、食管癌(ESCA)、肺鳞状细胞癌(LUSC)、宫颈癌(CESC)、膀胱癌(BLCA)、皮肤黑色素瘤(SKCM)、前列腺腺癌(PRAD)、胃食管癌、宫颈鳞状细胞癌、宫颈鳞状细胞癌、皮肤鳞状细胞癌、基底细胞癌、皮肤黑色素瘤、肺腺癌、宫颈腺癌、膀胱尿路上皮癌和前列腺腺癌以及肺腺癌(LUAD)。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述癌症是肺鳞状细胞癌(LUSC)。
23.根据权利要求21所述的方法，其中所述癌症是胃食管癌。
24.根据权利要求21所述的方法，其中所述癌症是头颈部鳞状细胞癌。
25.一种与IL-38特异性结合的分离的抗体，所述与IL-38特异性结合的分离的抗体包含含有SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列的重链可变区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及含有SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列的轻链可变区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。
26.根据权利要求25所述的与IL-38特异性结合的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:94中所示的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ IDNO:95中所示的氨基酸序列的VL CDR3。
27.一种与IL-38特异性结合的分离的抗体，所述与IL-38特异性结合的分离的抗体包含含有SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的轻链可变区；或
含有SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
28.根据权利要求27所述的与IL-38特异性结合的抗体，所述与IL-38特异性结合的抗体包含
含有SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
29.根据权利要求26所述的与IL-38特异性结合的抗体，其中所述CDR是通过North方法或Kabat方法定义的。
30.根据权利要求25-29中任一项所述的与IL-38特异性结合的抗体，其中与IL-38特异性结合的所述抗体是人源化抗体。
31.根据权利要求25-30中任一项所述的与IL-38特异性结合的抗体，其中与IL-38特异性结合的所述抗体部分或完全阻断、抑制或中和IL-38的生物活性。
32.根据权利要求25-31中任一项所述的与IL-38特异性结合的抗体，其中与IL-38特异性结合的所述抗体是分离的可变重链(VH)单结构域单克隆抗体、(sc)Fv-Fc、Fv、scFv、Fab、F(ab')2、Fab'片段、双特异性抗体或双抗体。
33.一种组合物，所述组合物包含根据权利要求25-32中任一项所述的抗体。
34.一种或多种核酸，所述一种或多种核酸编码根据权利要求25-32中任一项所述的抗体。
35.一种载体，所述载体包含根据权利要求34所述的一种或多种核酸。
36.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据权利要求34所述的核酸或根据权利要求35所述的载体。
37.根据权利要求36所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是CHO细胞。
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