[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

CN117024592B - 抗b7h3抗体及其用途 - Google Patents

抗b7h3抗体及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN117024592B
CN117024592B CN202311077864.9A CN202311077864A CN117024592B CN 117024592 B CN117024592 B CN 117024592B CN 202311077864 A CN202311077864 A CN 202311077864A CN 117024592 B CN117024592 B CN 117024592B
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
seq
variable region
chain variable
tumor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202311077864.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN117024592A (zh
Inventor
王誉熹
张宗梁
卢莹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
West China Hospital of Sichuan University
Original Assignee
West China Hospital of Sichuan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by West China Hospital of Sichuan University filed Critical West China Hospital of Sichuan University
Priority to CN202311077864.9A priority Critical patent/CN117024592B/zh
Publication of CN117024592A publication Critical patent/CN117024592A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN117024592B publication Critical patent/CN117024592B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种抗B7H3抗体及其用途。针对现有B7H3靶点的抗体亲和力不高等问题，本发明提供了一种高特异性和高亲和力的抗B7H3抗体或其功能性片段。本发明的抗B7H3抗体具有较强的靶向B7H3抗原的能力，特异性强，亲和力高，还能与毒素小分子药物偶联，制备具有抗肿瘤作用和抗炎性疾病的作用的药物缀合物，为肿瘤和炎性疾病的治疗提供了一种新的药物。

Description

抗B7H3抗体及其用途
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种抗B7H3抗体及其用途。
背景技术
肿瘤免疫治疗是近些年的研究热点，通过阻断PD-L1/PD-1通路或者CTLA-4信号传导通路，可以逆转T细胞的免疫抑制状态，提高患者自身免疫系统抑制或杀伤肿瘤的能力。但是目前PD-L1/PD-1通路或者CTLA-4通路的阻断剂在临床上仅对少部分患者有效，仍需探寻新的免疫治疗靶点或新的免疫治疗策略。
B7H3(CD276)是B7家族成员之一，位于人类第15号染色体。已有研究表明小鼠B7H3是一个T细胞活化的负调控因子，与正常小鼠相比，B7H3敲除鼠会发生更严重的呼吸道炎症，实验性自身免疫性脑脊髓炎发生的也更早。在人体中，B7H3起初被作为一个T细胞共刺激分子报道。但近期的研究表明人B7H3能够抑制T细胞激活过程中IFN-γ,IL-2,IL-10和IL-13的产生，对T细胞的活化具有抑制作用。至今，B7H3的受体或配体仍未探明。
通过检测各种临床样本，越来越多的研究表明B7H3在大部分正常组织呈低表达，而在多种肿瘤组织中呈高表达，且其表达水平与不良预后相关，如肺癌，结直肠癌，前列腺癌，膀胱癌，以及髓母细胞瘤等。另外，B7H3也被报道在其它多种肿瘤中呈现高表达，如胃癌、卵巢癌，胶质母细胞瘤，颅咽管瘤，宫颈癌，骨肉瘤，血液瘤，头颈部肿瘤，胰腺癌，皮肤癌，肾癌，脑膜瘤和乳腺癌。
另外，有研究表明B7H3在多种自身免疫性疾病的发病中起作用，对多种自身免疫性疾病具有潜在诊治价值，如红斑狼疮，脓毒症，关节炎，胰腺炎和I型糖尿病。
由于B7H3在多种肿瘤组织中广谱高表达，正常组织低表达，所以近些年其被认为是一个非常有潜力的肿瘤治疗靶点。本发明拟针对B7H3靶点，设计一种具有高特异性和高亲和力的抗体，并对其进行人源化，以期开发出新的癌症治疗药物。
发明内容
本发明要解决的技术问题为：针对B7H3靶点，提供一种高特异性和高亲和力的抗体。
本发明提供了一种抗B7H3抗体，包括：氨基酸序列分别为SEQ ID NO.1～3所示的CDR1、CDR2和CDR3的重链可变区，和氨基酸序列分别为SEQ ID NO.4～6所示的CDR4、CDR5和CDR6的轻链可变区。
其中，上述抗B7H3抗体，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:7，SEQ IDNO:11或SEQ ID NO:15中的任意一种。
其中，上述抗B7H3抗体，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:9，SEQ IDNO:13或SEQ ID NO:17中的任意一种。
其中，上述抗B7H3抗体，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:7，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:9；或所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:11，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:13；或所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:15，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:17。
其中，上述抗B7H3抗体为嵌合抗体或人源化抗体中的一种。
其中，上述抗B7H3抗体为Fab，Fv，sFv，F(ab')2，单链抗体，纳米抗体，结构域抗体或多特异抗体中的至少一种。
本发还明提供了一种编码上述抗B7H3抗体的核酸。进一步的，所述核酸的重链核苷酸序列为SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:16中的任意一种；所述核酸的轻链核苷酸序列为SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:18中的任意一种。
更进一步的，所述核酸的重链核苷酸序列为SEQ ID NO:8，轻链核苷酸序列为SEQID NO:10；或所述核酸的重链核苷酸序列为SEQ ID NO:12，轻链核苷酸序列为SEQ ID NO:14；或所述核酸的重链核苷酸序列为SEQ ID NO:16，轻链核苷酸序列为SEQ ID NO:18。
本发明还提供了一种包含上述核酸的表达载体。
本发明还提供了一种包含上述表达载体的宿主细胞。
本发明还提供了一种包含上述抗体的免疫缀合物。
进一步的，所述的免疫缀合物由抗B7H3抗体和毒素小分子药物偶联制备得到。
进一步的，所述的毒素小分子药物为艾瑞布林、美登素(DM1、DM4)、一甲基澳瑞他汀E、一甲基澳瑞他汀F、卡奇霉素、假单胞菌外毒素A、喜树碱类衍生物(Dxd、SN-38)、吡咯并苯并二氮杂卓(pyrrolobenzodiazepine，PBD)二聚体细胞毒素、隐粘菌素(CR55)、杜卡霉素(SYD985)、卡马霉素、鹅膏毒素、泰兰司他丁及其类似物或凋亡诱导剂(Bcl-xL抑制剂)中的至少一种。
更进一步的，所述的免疫缀合物的具体制备方法为：将抗B7H3抗体与小分子药物，采用蛋白酶裂解型连接子Mal-PEG2-Val-Cit-PAB作为连接子，采用巯基偶联的方法制备得到。
本发明还提供了一种包含上述抗体、编码抗体的核酸、表达载体、宿主细胞和免疫缀合物在制备预防或治疗癌症或炎性疾病中的用途。
其中，所述的癌症包括实体肿瘤或血液肿瘤。
进一步的，所述的癌症包括脑胶质瘤、神经母细胞瘤、髓母细胞瘤、脑膜瘤、肺癌、食管癌、胰腺癌、肝癌、胆管癌、肾癌、膀胱癌、尿管癌、前列腺癌、皮肤癌、卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、软组织肉瘤、白血病、淋巴瘤、胃癌或头颈部肿瘤中的至少一种。
进一步的，所述的炎性疾病包括红斑狼疮、强直性脊柱炎、多发性硬化、银屑病、抗磷脂抗体综合征、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、关节炎、类风湿关节炎、天疱疮、吉兰巴雷综合、克罗恩病，血管炎或自身免疫性糖尿病中的至少一种。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明针对人B7H3，通过传统杂交瘤技术制备了B7H3的特异性单克隆抗体，并对其进行了人源化。本发明同时发现了制备得到的B7H3特异性单克隆抗体具有抗肿瘤作用和抗炎性疾病的作用，为肿瘤和炎性疾病的治疗提供了一种新的药物。
附图说明
图1为使用ELISA、免疫荧光、流式细胞术筛选技术筛选获得杂交瘤克隆J65。
图2为FACS分析鼠源单抗J65对细胞内源表达的B7H3分子的结合实验。
图3为FACS分析重组鼠单抗mJ65和嵌合抗体cJ65对人源B7H3的结合实验。
图4为FACS分析人源化单抗hJ65-1和hJ65-2对人源B7H3的结合实验。
图5为人源化单抗hJ65的体外ADCC效应分析实验。
图6为使用SCID鼠模型评价嵌合抗体cJ65和人源化单抗hJ65的体内抗肿瘤分析实验。
图7为使用NSG鼠模型评价嵌合抗体cJ65和人源化单抗hJ65的体内抗肿瘤分析实验。
具体实施方式
本发明提供了一种针对B7H3靶点的高特异性和高亲和力的抗体，抗B7H3抗体。其组成包括：氨基酸序列分别为SEQ ID NO.1～3所示的CDR1、CDR2和CDR3的重链可变区，和氨基酸序列分别为SEQ ID NO.4～6所示的CDR4、CDR5和CDR6的轻链可变区。
具体的，本发明的抗B7H3抗体共三条抗体，第一条为鼠源抗体，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:7，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:9的抗体。第二条为人源化抗体1，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:11，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:13。第三条为人源化抗体2，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:15，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:17。
本发明首先利用ELISA、免疫荧光、流式细胞术等筛选技术获得鼠源抗体，再由免疫小鼠产生的鼠源抗体经由CDR序列移植，计算机模拟设计和实验验证，得到人源化抗B7H3抗体及其功能性片段。“CDR序列移植”是指通过将小鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架序列中产生的抗体。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库中获得。人源化抗体不易产生抗抗体反应(AAR)以及人抗鼠抗体反应(HAMA)，并且可以通过结合不同的抗体恒定区使得抗体具有相应的免疫效应功能，例如ADCC和CDC效应。
本发明根据CDR移植技术提供了两条抗B7H3的人源化抗体重链可变区序列SEQ IDNO:11和SEQ ID NO:15，以及轻链可变区序列SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:17。
本发明提供了产生抗B7H3抗体或其功能性片段的方法，其包括：在允许产生所述抗体或其功能性片段的条件下培养本发明的上述宿主细胞，以及回收这样产生的所述抗体或其功能性片段。
本发明提供了能够特异性结合B7H3的抗B7H3抗体及其功能片段。本发明的抗体或其功能性片段能够与人源B7H3特异性结合，而与鼠源B7H3不发生结合。
本发明的抗体可以是全长的(例如，IgG1或IgG4抗体)或可仅包含抗原结合部分(例如，Fab,F(ab')2或scFv片段)，或可以通过改变抗体恒定区的功效以影响抗体的功能。例如，通过改变抗体恒定区的糖基化修饰状态，数量或种类，从而影响抗体的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。
本发明中的术语“功能性片段”主要指的是抗体中的能够特异结合抗原的功能片段如scFv(单链抗体)、Fv、Fab、F(ab’)2、Fab’、scFv-Fc、单域抗体、类抗体、双特异性抗体、多特异抗体，或者通过化学修饰以增加半衰期的任何抗体片段。
本发明提供了可用于肿瘤治疗的应用方法。所述方法包括运用本发明抗体及其功能片段的细胞治疗产品(如嵌合抗原受体T细胞)、双特异抗体(如B7H3/CD3双特异抗体)，免疫缀合物(如抗体偶联美登素、抗体偶联艾瑞布林等)，以及包含本发明抗体及其功能片段和可药用载体的药物组合物。
本文的术语“宿主细胞”包括原核宿主细胞、真核宿主细胞以及噬菌体。所述的原核宿主细胞可以为大肠杆菌、链霉菌或枯草杆菌等。所述真核宿主细胞可以为293细胞、293T细胞、293FT细胞、CHO细胞、COS细胞、Per6，酿酒酵母、毕赤酵母、汉森酵母、假丝酵母、部分昆虫细胞以及植物细胞。293系列细胞,Per6细胞和CHO细胞是用于生产制备抗体或重组蛋白的常用哺乳动物细胞，为本领域普通技术人员所熟知。
本文术语“表达载体”是指任何重组的多核苷酸构建体，该构建体可通过转化，转染或转导的方式将目的DNA片段直接或间接(如包装成病毒)导入宿主细胞内，进行目的基因表达。其中一种类型的载体是质粒，即环状双链DNA分子，可将目的DNA片段连接至质粒环中。另一种类型的载体为病毒载体，其可将目的DNA片段连接包装至病毒基因组中(如腺病毒，腺相关病毒，逆转录病毒，慢病毒，溶瘤病毒)。这些载体进入宿主细胞后，可以进行目的基因的表达。
本领域技术人员也可以通过体外转录的方式，以本发明所述核酸序列为模板，转录成RNA，进一步通过转染，转导或转化该RNA到宿主细胞，也可以表达本发明抗体或其功能性片段，发挥本发明的生物功效。
本文使用的“有效量”是指足以显示其对于所施用对象益处的剂量。施用的实际量，以及施用的速率和时间过程会取决于所治疗者的自身情况和严重程度。治疗的处方最终由医生来做决定，通常会考虑患者的个体情况，递送部位，施用方法，疾病严重程度以及对于医生来说其它常规因素。
本文所施用的术语“对象”是指哺乳动物，如人类，但也可以是其它动物，如野生动物，家畜或实验动物。
以下提供了一些实施例以证明并进一步解释本发明的一些优选的实施方式和方面，不应被解释为限制其范围。本发明实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如冷泉港的抗体技术实验手册，分子克隆手册；或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
实施例1B7H3重组蛋白的制备
编码人源B7H3的核酸序列(NM_001024736.2)由安徽通用生物公司合成。PCR扩增并亚克隆至pcDNA3.1表达载体中(Invitrogen)。然后，将B7H3的胞外域分别亚克隆到C端携带Fc或His标签的pcDNA3.1表达载体中。其中Fc标签包括人源Fc(hFc)和鼠源Fc(mFc)。通过瞬时转染293FT，使用FreeStyleTM无血清培养基(Life Technologies)摇瓶培养5-7天，收集上清，经过离心超滤，然后通过Protein A/G或镍柱亲和层析以及分子筛色谱柱纯化携带Fc或His标签的重组B7H3蛋白。
实施例2表达人B7H3抗原的稳转细胞株制备
将编码人源B7H3的全长序列构建到携带IRES-EGFP的pcDNA3.1表达载体中。CHO-S(ATCC)细胞于CD-CHO培养基(Life Technologies)内培养；Hela细胞于含10％胎牛血清的DMEM中培养。采用Lipofectamine LTX(Life Technologies)转染试剂进行细胞转染，48小时之后进行流式分选，培养至96孔板，进行单克隆稳定细胞株筛选和鉴定，并对稳定表达B7H3的CHO和Hela细胞进行保种。
实施例3抗B7H3单克隆抗体的制备
1.动物免疫
使用5-6周龄的Balb/c雌性小鼠作为被免疫动物，免疫剂量为100μg/只。首次免疫采用100μl弗氏完全佐剂(Sigma)与等体积重组B7H3蛋白混合，充分乳化后进行皮下多点注射。每隔2周，用等体积弗氏不完全佐剂(Sigma)与重组蛋白混合，充分乳化后进行皮下多点注射。加强免疫共4次，最后一次加强免疫后第10天，割尾采血检测小鼠抗体效价。细胞融合前3天，100μg重组蛋白腹腔冲击一次。
2.细胞融合与杂交瘤筛选
无菌条件下，取小鼠脾脏，制备富含B细胞的悬液，按经典的PEG(Sigma)法，与SP2/0进行细胞融合。融合后的细胞重悬于HAT培养基进行培养。融合后第5天和第10天使用新鲜的HAT培养基进行半换液培养。融合后第11-15天进行ELISA，免疫荧光和流式分析，筛选阳性克隆。
ELISA筛选采用96孔板进行，简言之，将B7H3重组蛋白按100ng/孔的量4度过夜包被到孔板底部，使用HRP偶联抗小鼠IgG抗体和化学发光试剂(碧云天生物科技公司)进行显色，并于酶标仪在450nm波长读值。免疫荧光染色使用稳定表达B7H3的Hela细胞株，简言之，将细胞株在96孔板贴壁培养，加入50μl杂交瘤上清作为一抗，4度孵育2小时，PBS清洗3次，Cy3标记的Goat Anti-Mouse IgG(Proteintech)作为二抗，常温孵育1小时，PBS清洗3次，使用荧光显微镜采集图像。流式细胞术分析采用稳定表达B7H3的CHO细胞，简言之，离心收集细胞重悬于含有50μl杂交瘤上清的PBS缓存液中，4度孵育2小时，PBS清洗3次，FITC标记的Goat Anti-Mouse IgG(碧云天生物科技公司)作为二抗，常温孵育1小时，PBS清洗3次，上流式细胞仪(Becton-Dickinson)进行分析。
根据上述ELISA分析，免疫荧光分析和流式细胞术分析结果(图1所示)，我们最终确定了一个最优的杂交瘤克隆(命名为J65)用于后续的序列克隆和亲和力分析等实验。
实施例4杂交瘤J65对鼠源B7H3的结合分析
鼠源B7H3的cDNA克隆购自义翘神州，然后按照实施例2构建鼠源B7H3的稳定表达细胞株mB7H3-CHO。然后取杂交瘤J65上清，按照实施例3进行流式细胞分析。结果发现单克隆抗体J65不能够与鼠源B7H3结合。说明了J65只识别人B7H3蛋白，而不结合鼠B7H3蛋白，具有种属特异性。
实施例5杂交瘤抗体可变区序列克隆
收集对数生长期杂交瘤细胞，用Trizol(Invitrogen)提取RNA并反转录(PrimeScriptTM Reverse Transcriptase，Takara)。将反转录得到的cDNA采用mouse Ig-Primer Set(Novagen)进行PCR扩增后测序，最终获得J65的重链和轻链可变区序列。其中重链和轻链的可变区CDR序列如表1所示。
表1单抗J65的重链和轻链可变区含有的CDR序列
鼠单抗J65的重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO:7)：
EVQLQESGGDLVKPGGSLKLSCEASGFTFSSHGMSWIRQTPDKRLDWVATISGGGRYSYYPDNIQGRFTISRDNAKDTLYLQMSSLQSEDTALYYCARHWDGYLDYWGQGTTLTVSS。
鼠单抗J65的重链可变区核酸序列(SEQ ID NO:8)：
GAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGGGGAGACTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGAAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAGCCATGGCATGTCTTGGATTCGACAGACTCCAGACAAGAGGCTGGACTGGGTCGCAACCATTAGTGGTGGTGGTCGTTACTCCTACTATCCAGACAATATTCAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGGACACCCTGTACCTGCAAATGAGCAGTCTGCAGTCTGAGGACACAGCCCTGTATTACTGTGCAAGACATTGGGATGGTTACCTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA。
鼠单抗J65的轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO:9)：
DIVMTQTPASLSASVGETVTITCRPSENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLTEGAPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGIYYCQHHYGPPPYTFGGGTKVEIK。
鼠单抗J65的轻链可变区核酸序列(SEQ ID NO:10)：
GATATTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCCTTTCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGACCAAGCGAGAATATTTACAGTTATTTAGCGTGGTATCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCAGCTCCTGGTCTATAATGCAAAAACCCTTACAGAAGGTGCGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACACAGTTTTCTCTGAAGATCAATAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGATTTATTACTGTCAACATCACTATGGTCCTCCTCCGTACACGTTCGGAGGGGGTACCAAGGTGGAGATCAAG。
实施例6重组抗体的表达纯化
将人(IgG1)和鼠(IgG2a)重链恒定区，以及人/鼠轻链恒定区，克隆入pcDNA3.1(Invitrogen)质粒载体，然后将实施例6所述J65单抗的重链和轻链可变区序列片段克隆入相对应的携带恒定区的pcDNA3.1质粒载体中。测序正确的质粒载体通过瞬时转染293FT，使用FreeStyleTM无血清培养基(Life Technologies)摇瓶培养5-7天，收集上清，经过离心超滤，然后通过Protein A/G亲和层析以及分子筛色谱柱纯化获得抗B7H3重组单克隆抗体。重组单克隆抗体，按照实施例3所述，进行流式细胞术分析，验证与B7H3的结合。
结果如图2所示：重组鼠源单抗J65(mJ65)以及嵌合抗体J65(cJ65)均能够与细胞表面表达的B7H3结合。说明我们克隆所得的抗体可变区序列是正确的，通过构建的质粒，瞬时转染293FT，表达的重组抗体能够和B7H3蛋白结合。
实施例7重组抗体的人源化改造
鼠源抗人B7H3单克隆抗体J65人源化采用如本领域许多文献公示的CDR移植方法进行。简言之，首先根据同源性搜索与J65同源性高的人种系抗体序列，分析CDR区及其邻近的框架区氨基酸序列，然后使用人源抗体的框架区序列替代鼠源抗体框架区序列，保留CDR区和部分邻近框架区序列，最后通过计算机模拟修正部分免疫原性高的序列位点。根据此方法，我们得到了以下两条不同人源化程度的J65序列，分别命名为huJ65-1和huJ65-2。
huJ65-1重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO:11)：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSHGMHWVRQAPGKGLEWVAVISGGGRY SYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHWDGYLDYWGQGTLVTVS S。
huJ65-1重链可变区核酸序列(SEQ ID NO:12)：
GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGGGGCGGCCTGGTGCAGCCAGGGGGGTCCCTGCGCCTCTCCTGTGCCGCCAGCGGATTCACCTTCTCCTCCCACGGGATGCACTGGGTGCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTCGAATGGGTCGCCGTCATCTCCGGCGGGGGCCGCTATAGCTATTATGCAGACTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTCTACCTCCAGATGAACTCCCTCCGAGCCGAGGACACGGCCGTGTACTACTGTGCCCGCCACTGGGACGGATACCTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACCGTGTCCAGC。
huJ65-1轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO:13)：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIYSYLAWYQQKPGKAPKLLIYNAKTLTEGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHHYGPPPYTFGQGTKVEIK。
huJ65-1轻链可变区核酸序列(SEQ ID NO:14)：
GACATTCAGATGACCCAGAGCCCATCCTCCCTGTCTGCCTCTGTCGGAGATAGAGTCACCATCACCTGCAGAGCAAGTCAGAATATTTATAGCTATCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAGGCCCCCAAGTTGTTGATCTACAACGCCAAGACCCTCACCGAGGGCGTGCCAAGTCGATTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTTACCCTGACCATCTCTTCTCTGCAGCCAGAAGACTTCGCCACCTACTACTGTCAGCAGCACCACTACGGCCCACCACCATATACCTTCGGCCAGGGAACAAAGGTCGAGATCAAG。
huJ65-2重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO:15)：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSSHGMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGRYS YYPDNIQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHWDGYLDYWGQGTLVTVSS。
huJ65-2重链可变区核酸序列(SEQ ID NO:16)：
GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGGGGCGGCCTGGTGCAGCCAGGGGGGTCCCTGCGCCTCTCCTGTGAAGCCAGCGGATTCACCTTCTCCTCCCACGGGATGTCCTGGGTGCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTCGAATGGGTCGCCACCATCTCCGGAGGCGGACGCTATAGCTATTATCCAGACAACATCCAGGGCAGGTTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTCTACCTCCAGATGAACTCCCTCCGAGCCGAGGACACGGCCGTGTACTACTGTGCCCGCCACTGGGACGGATACCTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACCGTGTCCAGC。
huJ65-2轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO:17)：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRPSENIYSYLAWYQQKPGKAPKLLVYNAKTLTEGAP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYGPPPYTFGQGTKVEIK。
huJ65-2轻链可变区核酸序列(SEQ ID NO:18)：
GACATTCAGATGACCCAGAGCCCATCCTCCCTGTCTGCCTCTGTCGGAGATAGAGTCACCATCACCTGCAGACCATCCGAGAATATTTATAGCTATCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAGGCCCCCAAGTTGTTGGTGTACAACGCCAAGACCCTCACCGAGGGCGCCCCAAGTCGATTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTTACCCTGACCATCTCTTCTCTGCAGCCAGAAGACTTCGCCACCTACTACTGTCAGCACCACTACGGCCCACCACCATATACCTTCGGCCAGGGAACAAAGGTCGAGATCAAG。
然后，我们按照实施例6进行huJ65-1和huJ65-2重组抗体的表达与纯化，其中重链恒定区均采用人的IgG1恒定区，轻链恒定区均采用人的Kappa轻链恒定区。按照实施例3所述，进行流式细胞术分析，验证huJ65-1和huJ65-2与B7H3的结合。
结果如图3所示：huJ65-1和huJ65-2均能够与细胞表面表达的B7H3结合。该结果说明了我们人源化后的抗体可变区序列通过构建到表达质粒，瞬时转染293FT，表达的人源化抗体能够和B7H3蛋白结合。
实施例8体外结合亲和力和动力学实验
本实验采用表面等离子共振(SPR)方法测定，使用GE公司Biacore T100仪器进行分析。利用由Biacore提供的试剂盒，采用标准氨基偶联法将B7H3-His重组蛋白共价连接至CM5(GE)芯片上，然后将待测抗体按不同浓度梯度稀释于同样缓冲液中进样，进样后均以试剂盒内配再生试剂再生。数据的分析和采集使用Biacore 8K配套分析软件进行。所得结果如下表2。结果显示我们筛选的抗体和人源化后的抗体亲和力都很高。
表2抗体抗原体外结合亲和力和动力学分析
实施例9B7H3单克隆抗体的ADCC效应检测
效应细胞和靶细胞的准备：抽取健康捐献者外周血，分离PBMC，采用NK细胞分离试剂盒(Miltenyi NK Cell Isolation Kit)分离NK细胞，分离后的NK细胞培养于添加了10％胎牛血清(Gibco)的1640培养液，同时补充添加IL-2(100U/mL)和IL-15(10ng/mL)作为活化因子。靶细胞选用B7H3高表达的人皮肤癌细胞A375，培养于添加了10％胎牛血清(Gibco)的DMEM高糖培养液中。
51Cr释放分析：取B7H3阳性的对数生长期的A375肿瘤细胞用0.5mCi Na51CrO4于37℃标记肿瘤细胞1h，然后使用1640培养液洗涤三次并重悬于10％胎牛血清(Gibco)的1640培养液。将50μl肿瘤细胞(2×104/孔)加入96孔板中，添加2μg/ml的抗B7H3重组抗体((cJ65-1,huJ65-1和huJ65-2))，设置同型对照hIgG1。然后添加50μl效应细胞，效应细胞与靶细胞的比值分别设置为50:1，25:1和12.5:1，效应细胞与靶细胞均培养于10％胎牛血清(Gibco)的1640培养液。然后置于细胞培养箱中孵育4小时，取培养上清用γ计数仪进行检测。根据公式算出细胞杀伤比例：(待测试样品释放值-自发释放值)/(最大释放值-自发释放值)×100％。显示的数据为平均值±s.d.P值采用未配对双尾学生t检验获得。采用来自不同捐献者的NK细胞重复实验三次，获得了相似的结果，代表性结果如图4所示。
从图4可以看出，与hIgG1(阴性对照)相比，三种B7H3靶向抗体(cJ65-1,huJ65-1和huJ65-2)对B7H3阳性的A375肿瘤细胞具有显著的ADCC杀伤效应(*P<0.05)。说明了我们的抗体与抗原结合后，FC段(hIgG1)能够介导ADCC杀伤作用。
实施例11异种移植物小鼠模型抗肿瘤实验
我们采用异种移植物小鼠模型来评估B7H3靶向的抗体(cJ65-1,huJ65-1和huJ65-2)的体内抗肿瘤活性。采用两种免疫缺陷鼠模型进行评估。
SCID免疫缺陷鼠模型：将1×107个对数生长期的B7H3阳性的A375细胞接种于SCID鼠右后背部皮下。待8天左右肿瘤长至80mm3后，将荷瘤体积均匀的小鼠随机分组，每组5只小鼠。设置人IgG1为同型对照。抗体的给药方式为腹腔给药，200μg/只，每3天给药1次，共计给药4次。每3天进行小鼠称重并测量肿瘤大小。移植瘤平均体积按照公式V＝1/2(L×W2)计算，其中L代表瘤体的长度，W代表瘤体的宽度。当小鼠肿瘤体积大于1800mm3或者肿瘤表面出现明显溃破，则处死小鼠，结束动物实验。所有数据均为平均值±s.d.P值采用未配对双尾学生t检验获得。
结果如图5所示，与hIgG1(阴性对照)相比，三种B7H3靶向抗体(cJ65-1,huJ65-1和huJ65-2)对A375肿瘤细胞的生长均具有显著的抑制效果(*P<0.05)。
NSG重症免疫缺陷鼠模型：NSG重症免疫缺陷鼠购自南京大学模式动物所，接种的肿瘤细胞为B7H3阳性的卵巢癌细胞SKOV3，效应细胞为分离活化的人NK细胞。将5×106个对数生长期的SKOV3细胞接种于NSG鼠右后背部皮下，每组5只小鼠。接种后第5天，通过尾静脉每只小鼠注射2×106个NK细胞，同时腹腔注射重组抗体(200μg/只)，设置人IgG1为同型对照。之后，每3天注射重组抗体(200μg/只)1次，共计给药4次。每3天进行小鼠称重并测量肿瘤大小。移植瘤平均体积按照公式V＝1/2(L×W2)计算，其中L代表瘤体的长度，W代表瘤体的宽度。当小鼠肿瘤体积大于1800mm3或者肿瘤表面出现明显溃破，则处死小鼠，结束动物实验。所有数据均为平均值±s.d.P值采用未配对双尾学生t检验获得。
结果如图6所示，与hIgG1(阴性对照)相比，三种B7H3靶向抗体(cJ65-1,huJ65-1和huJ65-2)对SKOV3肿瘤细胞的生长均具有显著的抑制效果(*P<0.05)。说明了我们的抗体在体内能够发挥抗肿瘤作用(ADCC杀伤作用)。
实施例12B7H3靶向的抗体偶联药物的体内抗肿瘤实验
我们选用Eribulin作为偶联的药物，蛋白酶裂解型连接子Mal-PEG2-Val-Cit-PAB作为连接子，采用巯基偶联的方法完成B7H3抗体偶联药物(ADC)的制备。首先，在还原剂TCEP的作用下，B7H3抗体(cJ65-1,huJ65-1和huJ65-2)的4对链间二硫键被还原成游离巯基。该步骤抗体与TCEP的比例决定二硫键的还原程度。其次，将Eribulin-linker加入经TCEP还原的抗体中，抗体上的游离巯基与linker的马来酰亚胺基团发生迈克尔加成反应，从而得到抗体药物偶联物。偶联完成后，使用AKTA Purifier100蛋白纯化仪搭载HiTrapTMDesalting柱去除未偶联的小分子和有机溶剂，同时将ADC置换于25mM柠檬酸钠(pH 6.4)缓冲溶液中保存。根据经验，我们采用抗体与TCEP的摩尔比为1:3，抗体与Eribulin-linker的摩尔比为1:6的反应条件进行偶联。通过质谱法检测cJ65-1-Eribulin、huJ65-1-Eribulin、huJ65-2-Eribulin的偶联率分别为3.2、3.5、3.8。采用NCG重症免疫缺陷鼠模型，皮下接种5×106个NCI-H1975肺癌细胞，当皮下瘤生长至100-200mm3时进行随机分组与给药，每组5只，分为溶剂对照组，抗体cJ65-1组(10mg/kg)，huJ65-1组(10mg/kg)，huJ65-2组(10mg/kg)，cJ65-1-Eribulin组(5mg/kg)、huJ65-1-Eribulin组(5mg/kg)和huJ65-2-Eribulin组(5mg/kg)。采用尾静脉注射给药，每3-4天给药一次，共给药3次。皮下瘤平均体积按照公式V＝1/2(L×W2)计算，其中L代表瘤体的长度，W代表瘤体的宽度。当小鼠肿瘤体积大于2000mm3或者肿瘤表面出现明显溃破，则处死小鼠，结束动物实验。所有数据均为平均值±s.d.P值采用未配对双尾学生t检验获得。
结果如图7所示，与溶剂对照组，抗体cJ65-1组，huJ65-1组，huJ65-2组相比，三种B7H3靶向的抗体偶联药物(cJ65-1-Eribulin,huJ65-1-Eribulin和huJ65-2-Eribulin)对NCI-H1975肿瘤细胞的生长均具有显著的抑制效果(*P<0.05)。说明了我们的抗体偶联药物在体内能够发挥抗肿瘤作用。
本发明上述实验共同说明了，本发明获得了一种新的抗B7H3抗体，具有很强的亲和力和靶向性，其偶联药物时，能够取得抗肿瘤或者抗炎的效果，为肿瘤药物或抗炎症的药物开发提供了一种新的选择。

Claims (9)

1.抗B7H3抗体，其特征在于：包含氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的CDR1、SEQ ID NO.2所示的CDR2、SEQ ID NO.3所示的CDR3的重链可变区，和包含氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的CDR4、SEQ ID NO.5所示的CDR5、SEQ ID NO.6所示的CDR6的轻链可变区。
2.根据权利要求1所述的抗B7H3抗体，其特征在于：所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:7，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:9；或所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:15，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:17。
3.根据权利要求1所述的抗B7H3抗体，其特征在于：所述抗B7H3抗体为嵌合抗体或人源化抗体中的一种。
4.根据权利要求1所述的抗B7H3抗体，其特征在于：所述抗B7H3抗体为Fab，Fv，F(ab')2中的至少一种。
5.编码权利要求1-4任一项所述的抗B7H3抗体的核酸。
6.包含权利要求5所述的核酸的表达载体。
7.包含权利要求6所述的表达载体的宿主细胞。
8.一种免疫缀合物，其特征在于：由权利要求1-4任一项所述的抗B7H3抗体和艾瑞布林Eribulin偶联制备得到。
9.权利要求1-4任一项所述的抗体、权利要求5所述的核酸、权利要求6所述的表达载体、权利要求7所述的宿主细胞或权利要求8所述的免疫缀合物在制备治疗肺癌或卵巢癌的药物中的用途。
CN202311077864.9A 2023-08-24 2023-08-24 抗b7h3抗体及其用途 Active CN117024592B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311077864.9A CN117024592B (zh) 2023-08-24 2023-08-24 抗b7h3抗体及其用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311077864.9A CN117024592B (zh) 2023-08-24 2023-08-24 抗b7h3抗体及其用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN117024592A CN117024592A (zh) 2023-11-10
CN117024592B true CN117024592B (zh) 2024-07-12

Family

ID=88635332

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311077864.9A Active CN117024592B (zh) 2023-08-24 2023-08-24 抗b7h3抗体及其用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117024592B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118108845A (zh) * 2024-02-04 2024-05-31 四川大学华西医院 一种靶向B7-H3的CAR-γδT细胞的制备方法及应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113402610A (zh) * 2021-06-09 2021-09-17 东大生物技术(苏州)有限公司 一组b7h3单克隆抗体及其医药用途
CN114729041A (zh) * 2019-10-22 2022-07-08 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 用于治疗多种实体瘤的靶向b7h3（cd276）的高亲和力纳米抗体

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20210006637A (ko) * 2019-07-09 2021-01-19 주식회사 와이바이오로직스 B7-h3(cd276)에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
AU2021329378A1 (en) * 2020-08-19 2023-03-23 Xencor, Inc. Anti-CD28 compositions

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114729041A (zh) * 2019-10-22 2022-07-08 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 用于治疗多种实体瘤的靶向b7h3（cd276）的高亲和力纳米抗体
CN113402610A (zh) * 2021-06-09 2021-09-17 东大生物技术(苏州)有限公司 一组b7h3单克隆抗体及其医药用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN117024592A (zh) 2023-11-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11912763B2 (en) Antibody targeting CLDN18.2, bispecific antibody, ADC, and CAR, and applications thereof
Wang et al. Development of therapeutic antibodies for the treatment of diseases
AU2017317124B2 (en) Anti-CTLA4 and anti-PD-1 bifunctional antibody, pharmaceutical composition thereof and use thereof
CN113015749B (zh) 靶向cd3的抗体、双特异性抗体及其用途
JP2020504627A (ja) 抗ｐｄ−１抗体及びその使用
TW201827464A (zh) 人程序性死亡受體ｐｄ－１的單株抗體及其片段
US20220340673A1 (en) Antibody targeting bcma, bispecific antibody, and use thereof
EP4101867A1 (en) Anti-cd3 and anti-cd123 bispecific antibody and use thereof
CN113474372A (zh) 一种抗ceacam5的单克隆抗体及其制备方法和用途
CN117024592B (zh) 抗b7h3抗体及其用途
WO2022224997A1 (ja) 抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７二重特異性抗体
WO2022247826A1 (zh) 靶向pd-l1和cd73的特异性结合蛋白
WO2023071953A1 (zh) 抗cd26抗体及其应用
IL304096A (en) PD-1 binding molecule and its application
TWI833227B (zh) 靶向pd-l1和cd73的特異性結合蛋白及其應用
CN115785269B (zh) 抗pd-l1的抗体及其应用
CN118406150A (zh) 一种抗b7-h3抗体及其应用
RU2808138C1 (ru) Антитело, нацеливающееся на cd3, биспецифическое антитело и их применение
WO2023088295A1 (zh) 一种多特异性抗体及其药物用途
US20220411523A1 (en) Molecule capable of binding to human 4-1bb and its application thereof
KR20240067074A (ko) Siglec 수용체 체크 포인트 억제제 및 이를 사용하여 네오플라스틱 세포 성장을 억제하는 방법
TW202337910A (zh) 結合b7-h3的抗體及其用途
CN118852440A (zh) 一种靶向b7-h3的单克隆抗体和制备方法及其应用
CN117924488A (zh) 阻断性cd40抗体及其应用
JP2024509369A (ja) 抗ｐｄ－ｌ１抗体及びその使用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant