CN116879450A - 一种利用超临界流体色谱系统分离纯化芦可替尼前体的方法 - Google Patents
一种利用超临界流体色谱系统分离纯化芦可替尼前体的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116879450A CN116879450A CN202310924582.1A CN202310924582A CN116879450A CN 116879450 A CN116879450 A CN 116879450A CN 202310924582 A CN202310924582 A CN 202310924582A CN 116879450 A CN116879450 A CN 116879450A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- supercritical fluid
- pyrrolo
- pyrazol
- pyrimidin
- trimethylsilyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000004808 supercritical fluid chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 239000002243 precursor Substances 0.000 title claims abstract description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 99
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 claims abstract description 60
- 125000004527 pyrimidin-4-yl group Chemical group N1=CN=C(C=C1)* 0.000 claims abstract description 60
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 50
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims abstract description 32
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 25
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 claims abstract description 25
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims abstract description 18
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 26
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 10
- 239000002137 L01XE24 - Ponatinib Substances 0.000 claims description 3
- PHXJVRSECIGDHY-UHFFFAOYSA-N ponatinib Chemical compound C1CN(C)CCN1CC(C(=C1)C(F)(F)F)=CC=C1NC(=O)C1=CC=C(C)C(C#CC=2N3N=CC=CC3=NC=2)=C1 PHXJVRSECIGDHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001131 ponatinib Drugs 0.000 claims description 3
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 19
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 18
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- HFNKQEVNSGCOJV-OAHLLOKOSA-N ruxolitinib Chemical compound C1([C@@H](CC#N)N2N=CC(=C2)C=2C=3C=CNC=3N=CN=2)CCCC1 HFNKQEVNSGCOJV-OAHLLOKOSA-N 0.000 description 4
- 239000002144 L01XE18 - Ruxolitinib Substances 0.000 description 3
- LPNBBFKOUUSUDB-UHFFFAOYSA-M p-toluate Chemical compound CC1=CC=C(C([O-])=O)C=C1 LPNBBFKOUUSUDB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229960000215 ruxolitinib Drugs 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- -1 4- (7H-pyrrolo [2,3-d ] pyrimid-4-yl) -1H-pyrazol-1-yl Chemical group 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N Hydroxyurea Chemical compound NC(=O)NO VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 208000017733 acquired polycythemia vera Diseases 0.000 description 1
- 208000024340 acute graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229960001330 hydroxycarbamide Drugs 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010028537 myelofibrosis Diseases 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000037244 polycythemia vera Diseases 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011519 second-line treatment Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
- G01N30/52—Physical parameters
- G01N30/54—Temperature
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用超临界流体色谱系统分离纯化芦可替尼前体的方法，包括以下步骤：将3‑(4‑{7‑[(2‑三甲基硅基)乙氧基]甲基‑7H‑吡咯并[2，3‑d]嘧啶‑4‑基}‑1H‑吡唑‑1‑基)‑3‑环戊基丙腈样品溶解在甲醇中，超声助溶，利用超临界流体色谱系统分离纯化，得到样品的R型异构；所述超临界流体色谱系统的流动相包括超临界二氧化碳和甲醇，固定相包括硅胶；所述硅胶的表面涂覆直链淀粉‑三[3，5‑二甲基氨基甲酸酯]衍生物或纤维素‑三[3，5‑二甲基氨基甲酸酯]衍生物中的一种或几种。本发明能够快速高效的得到R型异构；可用于工业放大生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用超临界流体色谱系统分离纯化芦可替尼前体的方法，属于色谱领域。
背景技术
3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的R型异构体是芦可替尼(Ruxolitinib)的前体，芦可替尼的中文化学名为(R)-3-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，英文化学名称为(R)-3-(4-(7H-pyrrolo[2，3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-3-cyclopentylpropanenitrle。
芦可替尼为一种高选择性的激酶抑制剂，由美国因塞特公司研发，是用于治疗骨髓纤维化的孤儿药；2014年经FDA批准用于治疗对羟基脲应答不足或不能耐受的真性红细胞增多症；2019年FDA批准用于治疗12岁以上儿童及成人患者的急性移植物抗宿主病；2021年FDA批准用于12岁以上儿童及成人患者慢性GVHD的二线治疗。
现有3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的的R型和S型异构体拆分多使用化学拆分法或使用手性色谱柱在高效液相色谱系统中进行拆分。化学拆分存在拆分难度大，样品回收率低等缺点；高效液相色谱使用手性色谱柱拆分能够提高拆分效率，具有时间短，收率高的特点，但存在溶剂使用量大，单位时间内拆分量低等缺点。
发明内容
发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供了一种快速高效的利用超临界流体色谱系统分离纯化芦可替尼前体的方法。
技术方案：为解决上述技术问题，本发明提供了一种利用超临界流体色谱系统分离纯化芦可替尼前体的方法，包括以下步骤：将3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈样品溶解在甲醇中，超声助溶，利用超临界流体色谱系统分离纯化，得到芦可替尼前体；所述超临界流体色谱系统的流动相包括超临界二氧化碳和甲醇，固定相包括硅胶；所述硅胶的表面涂覆直链淀粉-三[3，5-二甲基氨基甲酸酯]衍生物或纤维素-三[3，5-二甲基氨基甲酸酯]衍生物中的一种或几种。
其中，所述纤维素-三[3，5-二甲基氨基甲酸酯]衍生物包括纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]。
其中，所述直链淀粉-三[3，5-二甲基氨基甲酸酯]衍生物包括直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]。
其中，在超临界流体色谱系统洗脱过程中，超临界二氧化碳和甲醇的体积比为100～50：0～50。
其中，所述超临界流体色谱系统的流速为3～10mL/min。
其中，所述超临界色谱柱系统的柱温度为30～45℃。
其中，所述3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈样品在甲醇中的浓度为10～500mg/mL。
其中，所述超临界流体色谱系统的色谱柱为NuciferaAD 10μm 10×250mm、Nucifera OD 5μm 4.6×250mm、NuciferaAS 5μm 4.6×250mm、NuciferaOJ 5μm 4.6×250mm、Nucifera AD 5μm 4.6×250mm。
其中，所述超临界二氧化碳在通过泵时的温度为2～10℃，密度为890～950kg/m3。
其中，所述超临界流体色谱系统的背压为8～12MPa。
其中，所述超临界流体色谱系统的进样体积为100～200μL。
工作原理：使用超临界二氧化碳和有机相体系将样品带入到色谱柱中，通过样品和色谱柱中手性填料的相互作用对R型异构体和S型异构体进行分离，化合物通过与手性填料的手性作用、偶极作用、氢键作用、π-π作用等作用力，并且在三个作用力同时发生作用时，才能够得到R型异构体和S型异构体的分离。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：1、能够快速高效的得到3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的R型异构；2、可用于工业放大生产。
附图说明
图1为实施例1中利用超临界流体色谱仪分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈溶液得到的分离谱图；
图2为实施例2中利用超临界流体色谱分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈溶液得到的分离谱图；
图3为实施例3中利用超临界流体色谱仪分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈溶液得到的分离谱图；
图4为实施例4中利用超临界流体色谱仪分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈溶液得到的分离谱图；
图5为实施例5中利用超临界流体色谱仪分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈溶液得到的分离谱图；
图6为实施例5中收集到的3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的R型异构体和标准溶液的HPLC谱图；
图7为对比例1中利用超临界流体色谱仪分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈溶液得到的分离谱图；
图8为对比例2中利用超临界流体色谱仪分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈溶液得到的分离谱图；
图9为对比例3中利用超临界流体色谱仪分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈溶液得到的分离谱图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的技术方案作进一步说明。
实施例1
本实施例选用的色谱仪为江苏汉邦科技有限公司的超临界流体色谱仪(SFC)，型号为SFC-Lab20，色谱柱规格为Nucifera AD 5μm 4.6×250mm，流动相体系的流速为3mL/min，背压设定12MPa，3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液的浓度为500mg/mL，进样体积为100μL，检测波长为220nm。
表1-1为实施例1使用超临界流体色谱(SFC)分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈消旋体的条件。
表1实施例1中SFC分离条件
实施例1对应的具体步骤为：将3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈溶解在甲醇中，超声助溶，配置成500mg/mL的3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的甲醇溶液，在江苏汉邦科技股份有限公司SFC-Lab20超临界流体色谱仪上，选用NuciferaAD 5μm 4.6×250mm作为色谱柱，固定相为硅胶表面涂覆直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]，按照表1控制流动相中超临界二氧化碳和甲醇的体积比、总流速，背压和色谱柱柱温，同时确保二氧化碳进入泵时的温度为8℃，对3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈消旋体进行分离，其分离效果图如图1所示。从图1可以看出：NuciferaAD 5μm色谱柱可以实现3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的完全分离。
实施例2
选用的色谱仪为江苏汉邦科技股份有限公司的超临界流体色谱仪，色谱柱规格为NuciferaOD 5μm 4.6×250mm，流动相体系的流速为3mL/min，背压为12MPa，3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液的浓度为10mg/mL，进样体积为100μL，检测波长为220nm。
表2-1为实施例2使用超临界流体色谱(SFC)分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈消旋体的条件。
表2实施例2中SFC分离条件
实施例2对应的具体步骤为：将3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈样品溶解在甲醇中，超声助溶，配置成浓度为500mg/mL的3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液，在江苏汉邦科技股份有限公司SFC-Lab20超临界流体色谱仪上，选用Nucifera OD 5μm 4.6×250mm作为色谱柱，固定相为硅胶表面涂覆纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]，按照表2控制流动相中超临界二氧化碳和甲醇的体积比、总流速，背压和色谱柱柱温，同时确保二氧化碳进入泵时的温度为5℃；对3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈消旋体进行分离，其分离效果图如图2所示。从图2可以看出：Nucifera OD 5μm可以实现3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的完全分离。
实施例3
选用的色谱仪为江苏汉邦科技股份有限公司的超临界流体色谱仪，色谱柱规格为NuciferaAS 5μm 4.6×250mm，流动相体系的流速为3mL/min，背压设定12MPa，3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液的浓度为200mg/mL，进样体积为100μL，检测波长为220nm。
表3为实施例3使用超临界流体色谱(SFC)分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈消旋体的条件。
表3-1实施例3中SFC分离条件
实施例3对应的具体步骤为：将3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈溶解在甲醇中，超声助溶，配置成浓度为500mg/mL的3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液，在江苏汉邦科技股份有限公司SFC-Lab20超临界流体色谱仪上，选用Nucifera AS 5μm 4.6×250mm的色谱柱，固定相为硅胶表面涂覆纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]，按照表3控制流动相中超临界二氧化碳和甲醇的体积比、总流速，背压和色谱柱柱温，同时确保二氧化碳进入泵时的温度为8℃；对3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈消旋体进行分离，其分离效果图如图3所示。从图3可以看出Nucifera AS 5μm可以实现3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的完全分离。
实施例4
选用的色谱仪为江苏汉邦科技股份有限公司超临界流体色谱仪，色谱柱规格为NuciferaOJ 5μm 4.6×250mm，流动相体系的流速为3mL/min，背压设定12MPa，3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液的浓度为100mg/mL，进样体积为100μL，检测波长为220nm。
表4为实施例4的使用超临界流体色谱(SFC)分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈消旋体的条件。
表4实施例4中SFC分离条件
实施例4对应的具体步骤为：将3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈样品溶解在甲醇中，超声助溶，配置成浓度为500mg/mL的3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液，在江苏汉邦科技股份有限公司超临界流体色谱仪上，选用Nucifera OJ 5μm 4.6×250mm的色谱柱，固定相为硅胶表面涂覆直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]，按照表4控制流动相中超临界二氧化碳和甲醇的体积比、总流速，背压和色谱柱柱温，同时确保二氧化碳进入泵时的温度为8℃。对3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈消旋体进行分离，其分离效果图如图4所示。从图4可以看出：Nucifera OJ 5μm可以实现3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的完全分离。
实施例5
选用的色谱仪为江苏汉邦科技股份有限公司的超临界流体色谱仪，色谱柱规格为NuciferaAD 10μm 10×250mm，流动相体系的流速为10mL/min，背压设定12MPa，3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液的浓度为500mg/mL，进样体积为300uL，检测波长为220nm。
表5为实施例5使用超临界流体色谱(SFC)分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的条件。
表5实施例5中SFC分离条件
实施例5对应的具体步骤为：将3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈样品溶解在甲醇中，超声助溶，配置成500mg/mL的3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液，在江苏汉邦科技股份有限公司的SFC-Lab20超临界流体色谱仪上，选用Nucifera AD 10μm 10×250mm的色谱柱，固定相为硅胶表面涂覆直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]。按照表5控制流动相中超临界二氧化碳和低级醇的体积比、总流速，背压和色谱柱柱温，同时确保二氧化碳进入泵时的温度为8℃。对3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈消旋体进行分离，其分离效果图如图5所示。从图5可以看出：按照小试摸索的工艺，在NuciferaAD 10μm 10×250mm小试放大，放大效果较好，完全成线性关系，为工业生产奠定基础。其中，图6为本实施例收集到的3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的R型异构体和标准溶液的HPLC谱图。
对比例1
选用的色谱仪为江苏汉邦科技股份有限公司超临界流体色谱仪，色谱柱规格为NuciferaOJ 5μm 4.6×250mm，流动相体系的流速为3mL/min，背压设定12MPa，3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液的浓度为500mg/mL，进样体积为100μL，检测波长为220nm。
表6为对比例1的使用超临界流体色谱(SFC)分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的条件。
表6对比例1中SFC分离条件
对比例1对应的具体步骤为：将3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈样品溶解在甲醇中，超声助溶，配置成浓度为500mg/mL的3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液，在江苏汉邦科技股份有限公司超临界流体色谱仪上，选用Nucifera OJ 5μm 4.6×250mm的色谱柱，固定相为硅胶表面涂覆直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]，按照表6控制流动相中超临界二氧化碳和乙醇的体积比、总流速，背压和色谱柱柱温，同时确保二氧化碳进入泵时的温度为8℃。对3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈消旋体进行分离，其分离效果图如图7所示。从图7可以看出：Nucifera OJ 5μm在使用乙醇作为夹带剂时峰展宽较大分离效果较差。
对比例2
选用的色谱仪为江苏汉邦科技股份有限公司超临界流体色谱仪，色谱柱规格为NuciferaOJ 5μm 4.6×250mm，流动相体系的流速为3mL/min，背压设定12MPa，3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液的浓度为500mg/mL，进样体积为100uL，检测波长为220nm。
表7为对比例2的使用超临界流体色谱(SFC)分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的条件。
表7对比例2中SFC分离条件
对比例2对应的具体步骤为：将3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈样品溶解在甲醇中，超声助溶，配置成浓度为500mg/mL的3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液，在江苏汉邦科技股份有限公司超临界流体色谱仪上，选用Nucifera OJ 5μm 4.6×250mm的色谱柱，固定相为硅胶表面涂覆直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]，按照表7控制流动相中超临界二氧化碳和乙醇的体积比、总流速，背压和色谱柱柱温，同时确保二氧化碳进入泵时的温度为8℃。对3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈进行分离，其分离效果图如图8所示。从图8可以看出：Nucifera OJ 5μm在使用乙醇作为夹带剂时柱温45℃是出峰时间延迟，峰展宽较大分离效果较差。
对比例3
选用的色谱仪为江苏汉邦科技股份有限公司超临界流体色谱仪，色谱柱规格为NuciferaOJ 5μm 4.6×250mm，流动相体系的流速为3mL/min，背压设定12MPa，3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液的浓度为500mg/mL，进样体积为100μL，检测波长为220nm。
表8为对比例3的使用超临界流体色谱(SFC)分离3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈的条件。
表8对比例3中SFC分离条件
对比例3对应的具体步骤为：将3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈样品溶解在甲醇中，超声助溶，配置成浓度为500mg/mL的3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈甲醇溶液，在江苏汉邦科技股份有限公司超临界流体色谱仪上，选用Nucifera OJ 5μm 4.6×250mm的色谱柱，固定相为硅胶表面涂覆直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]，按照表8控制流动相中超临界二氧化碳和异丙醇的体积比、总流速，背压和色谱柱柱温，同时确保二氧化碳进入泵时的温度为8℃。对3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈消旋体进行分离，其分离效果图如图9所示。从图9可以看出：Nucifera OJ 5μm在使用异丙醇作为夹带剂时峰拖尾较大峰位置重排分离效果较差不利于分离制备。
Claims (9)
1.一种利用超临界流体色谱系统分离纯化芦可替尼前体的方法，其特征在于，包括以下步骤：将3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈样品溶解在甲醇中，超声助溶，利用超临界流体色谱系统分离纯化，得到芦可替尼前体；所述超临界流体色谱系统的流动相包括超临界二氧化碳和甲醇，固定相包括硅胶；所述硅胶的表面涂覆直链淀粉-三[3，5-二甲基氨基甲酸酯]衍生物或纤维素-三[3，5-二甲基氨基甲酸酯]衍生物中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在超临界流体色谱系统洗脱过程中，超临界二氧化碳和甲醇的体积比为100～50：0～50。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超临界流体色谱系统的流速为3～10mL/min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超临界色谱柱系统的柱温度为30～45℃。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述3-(4-{7-[(2-三甲基硅基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈样品在甲醇中的浓度为10～500mg/mL。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超临界流体色谱系统的色谱柱为NuciferaAD 10μm 10×250mm、Nucifera OD 5μm 4.6×250mm、NuciferaAS 5μm 4.6×250mm、NuciferaOJ 5μm 4.6×250mm、Nucifera AD 5μm 4.6×250mm。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超临界二氧化碳在通过泵时的温度为2～10℃，密度为890～950kg/m3。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超临界流体色谱系统的背压为8～12MPa。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超临界流体色谱系统的进样体积为100～200μL。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310924582.1A CN116879450A (zh) | 2023-07-25 | 2023-07-25 | 一种利用超临界流体色谱系统分离纯化芦可替尼前体的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310924582.1A CN116879450A (zh) | 2023-07-25 | 2023-07-25 | 一种利用超临界流体色谱系统分离纯化芦可替尼前体的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116879450A true CN116879450A (zh) | 2023-10-13 |
Family
ID=88269714
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310924582.1A Pending CN116879450A (zh) | 2023-07-25 | 2023-07-25 | 一种利用超临界流体色谱系统分离纯化芦可替尼前体的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116879450A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118290527A (zh) * | 2024-05-07 | 2024-07-05 | 江苏汉邦科技股份有限公司 | 使用超临界流体色谱制备VcMMAE的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20190382418A1 (en) * | 2017-01-20 | 2019-12-19 | Leo Pharma A/S | Bicyclic amines as novel jak kinase inhibitors |
| US20210355117A1 (en) * | 2017-03-10 | 2021-11-18 | Pfizer Inc. | Novel imidazo[4,5-c]quinoline derivatives as lrrk2 inhibitors |
| CN113820413A (zh) * | 2021-09-17 | 2021-12-21 | 重庆华邦胜凯制药有限公司 | 高效液相色谱法分离测定磷酸芦可替尼及杂质的方法 |
| CN114853760A (zh) * | 2021-02-03 | 2022-08-05 | 南京正大天晴制药有限公司 | 一种芦可替尼中间体的制备方法 |
-
2023
- 2023-07-25 CN CN202310924582.1A patent/CN116879450A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20190382418A1 (en) * | 2017-01-20 | 2019-12-19 | Leo Pharma A/S | Bicyclic amines as novel jak kinase inhibitors |
| US20210355117A1 (en) * | 2017-03-10 | 2021-11-18 | Pfizer Inc. | Novel imidazo[4,5-c]quinoline derivatives as lrrk2 inhibitors |
| CN114853760A (zh) * | 2021-02-03 | 2022-08-05 | 南京正大天晴制药有限公司 | 一种芦可替尼中间体的制备方法 |
| CN113820413A (zh) * | 2021-09-17 | 2021-12-21 | 重庆华邦胜凯制药有限公司 | 高效液相色谱法分离测定磷酸芦可替尼及杂质的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| QIN LIN ET AL.: "Design, synthesis, and biological evaluation of novel ruxolitinib and baricitinib analogues for potential use against COVID-19", CHEM BIOL DRUG DES., 31 December 2022 (2022-12-31) * |
| 刘晓飞 等: "4-苯基-吡咯并[2, 3-d]嘧啶类JAK2激酶抑制剂的设计、合成和抗肿瘤活性", 中国药科大学学报, no. 02, 25 April 2017 (2017-04-25) * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118290527A (zh) * | 2024-05-07 | 2024-07-05 | 江苏汉邦科技股份有限公司 | 使用超临界流体色谱制备VcMMAE的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10214552B2 (en) | Method for purifying beta-nicotinamide mononucleotide | |
| CN116879450A (zh) | 一种利用超临界流体色谱系统分离纯化芦可替尼前体的方法 | |
| JP2001122869A (ja) | 液体クロマトグラフィを用いて精製されたトコトリエノール類及びトコフェロール類を製造する方法 | |
| CN103304613B (zh) | 一种从瓜蒌皮中分离纯化4种核苷类化学成分的方法 | |
| CN102002079B (zh) | 一种降低林可霉素b组分含量的生产工艺 | |
| WO2008107887A3 (en) | (1r,1'r)-atracurium salts separation process | |
| CN103304490A (zh) | 一种从瓜蒌皮中分离纯化5种嘌呤及嘧啶碱基的方法 | |
| CN109851631B (zh) | 一种高纯度磷脂酰胆碱的分离纯化方法 | |
| CN112480028B (zh) | 一种手性拆分异丙嗪的方法 | |
| US20170066702A1 (en) | Process for the isolation of 1,2,5,6-hexanetetrol from sorbitol hydrogenolysis reaction mixtures using simulated moving bed chromatography | |
| Zhao et al. | Aqueous two-phase extraction combined with chromatography: New strategies for preparative separation and purification of capsaicin from capsicum oleoresin | |
| CN109406685B (zh) | 一种分离卡非佐米和其异构体的高效液相色谱方法 | |
| CN107987087A (zh) | 中压制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法 | |
| US20140155658A1 (en) | Method for desorbing and regenerating butanol-adsorbing hydrophobic macroporous polymer adsorbent | |
| CN108250273A (zh) | 纽莫康定高效分离纯化方法 | |
| CN102276570B (zh) | 一种提纯表没食子儿茶素没食子酸酯（egcg）的方法 | |
| Nishioka et al. | Enantiomeric separation of chiral amines and amino alcohols using acetylated β-cyclodextrin stationary phase by high-performance liquid chromatography | |
| US6683220B2 (en) | Process for the preparation of optically pure or enriched racemic tetralone | |
| CN107955013B (zh) | 一种苯并吡喃酮类化合物亥茅酚的制备方法和检测其中光学异构体的方法 | |
| CN112745368A (zh) | 一种多柔比星提纯工艺 | |
| CN105418631A (zh) | 一种用高效液相色谱分离纯化奈马菌素的方法 | |
| JP2000159694A (ja) | 光学異性体の分離方法 | |
| US8076511B2 (en) | Preparative-scale separation of enantiomers of chiral carboxylic acids | |
| CN114874206B (zh) | 山莨菪碱的顺式异构体的分离方法 | |
| US20170320800A1 (en) | Process for the isolation of reaction products from sugar alcohol or anhydrosugar alcohol hydrogenolysis reaction mixtures using simulated moving bed chromatography |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |