CN116297978A - Hplc法分离测定泊沙康唑z3及其杂质与溶剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于化学分析技术领域，具体涉及一种HPLC法分离测定泊沙康唑Z3及其杂质与溶剂的方法。本发明采用十八烷基硅烷键合硅胶填充剂为固定相，以六氟磷酸钾溶液和甲醇按体积比90:10制成的混合溶液作流动相A，乙腈和甲醇按体积比90:10制成的混合溶液作为流动相B，通过梯度洗脱将泊沙康唑Z3及其相关杂质和溶剂甲苯进行分离；分离后，利用检测波长为210nm的检测器进行检测。该相关杂质包括由杂质Z3e和对甲苯磺酸组成的杂质组合物和/或其它相关杂质，其它相关杂质为杂质SM3d、杂质SM3、杂质SM3i、杂质Z2、杂质Z3f和/或对甲苯磺酸甲酯；本发明方法专属性强、灵敏度高、重现性好，检测结果准确可靠。
Description
技术领域
本发明属于化学分析技术领域，具体涉及一种HPLC法分离测定泊沙康唑Z3及其杂质与溶剂的方法。
背景技术
泊沙康唑(posaconazole)属于第二代三唑类抗真菌药物，是伊曲康唑的衍生物。泊沙康唑可用于念珠菌属、隐球菌属真菌引起的真菌血症，呼吸、消化道、尿路真菌病，腹膜炎、脑膜炎等。泊沙康唑Z3为泊沙康唑合成过程中的中间体，结构式如式Ⅰ所示。根据其合成工艺路线分析，可能存在杂质SM3d、杂质SM3、杂质SM3i、杂质Z2、杂质Z3e、杂质Z3f、对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸8个杂质及溶剂甲苯，其中，杂质SM3d、杂质SM3、杂质SM3i、杂质Z2、杂质Z3e、杂质Z3f为订入质量标准杂质，能够保障泊沙康唑Z3的质量要求。而合成工艺中使用到的结晶溶剂甲苯可能会干扰杂质检测。因此，需要建立一种能够同时分离泊沙康唑Z3、甲苯及上述8个杂质共10种物质的方法；且由于大多杂质限度低，故需要建立灵敏度能够符合要求的HPLC方法。
现有资料中，申请号为202211642366.X的发明专利可以实现杂质SM3d、杂质SM3、杂质SM3i的分离检测；申请号为202211655413.4的发明专利对杂质Z2进行了分离测定；申请号为201610056478.5的发明专利公开了一种分离测定泊沙康唑中间体Z中对甲苯磺酸甲酯的方法。然而以上发明均无法实现泊沙康唑Z3、杂质SM3d、杂质SM3、杂质SM3i、杂质Z2、杂质Z3e、杂质Z3f、对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸以及溶剂甲苯的同时分离和含量检测。
目前暂无法定分析方法及文献分析方法可以将泊沙康唑Z3中可能存在的8个杂质及甲苯全部有效分离。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种基于高效液相色谱法分离泊沙康唑Z3及其8种杂质和溶剂的方法，该方法专属性高、灵敏度高，为后期泊沙康唑Z3及其8种杂质和溶剂的定性和定量检测提供了技术支持。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
基于高效液相色谱法分离泊沙康唑Z3及其相关杂质和溶剂的方法，其特征在于，所述方法为：采用十八烷基硅烷键合硅胶填充剂为固定相，以六氟磷酸钾溶液和甲醇的混合溶液作流动相A，乙腈和甲醇的混合溶液作为流动相B进行线性梯度洗脱，所述流动相A中六氟磷酸钾溶液和甲醇的体积比为90:10；所述流动相B中乙腈和甲醇的体积比为90:10；通过梯度洗脱将泊沙康唑Z3及其相关杂质和溶剂进行分离；所述泊沙康唑Z3的结构式如式Ⅰ所示；所述相关杂质包括杂质组合物和/或其它相关杂质，所述杂质组合物为如式Ⅵ所示的杂质Z3e和如式Ⅸ所示的对甲苯磺酸，所述其它相关杂质为如式Ⅱ所示的杂质SM3d、如式Ⅲ所示的杂质SM3、如式Ⅳ所示的杂质SM3i、如式Ⅴ所示的杂质Z2、如式Ⅶ所示的杂质Z3f和如式Ⅷ所示的对甲苯磺酸甲酯中的任一种或多种；所述溶剂为甲苯；
进一步，所述方法可在75分钟内依次将对甲苯磺酸、杂质SM3d、对甲苯磺酸甲酯、杂质SM3i、甲苯、杂质SM3、杂质Z2、泊沙康唑Z3、杂质Z3f和杂质Z3e的进行分离。
更进一步，可以根据被分离的快慢对组份进行定性。
进一步，所述梯度洗脱的程序为：
在0分钟，设置流动相A的体积分数为70％-74％，流动相B的体积分数为30％-26％；
在5分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％；
在30分钟，设置流动相A的体积分数为40％，流动相B的体积分数为60％；
在50分钟，设置流动相A的体积分数为28％，流动相B的体积分数为72％；
在55分钟，设置流动相A的体积分数为15％，流动相B的体积分数为85％；
在65分钟，设置流动相A的体积分数为15％，流动相B的体积分数为85％；
在65.1分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％；
在75分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％。
作为优选，所述梯度洗脱的程序为：
在0分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％；
在5分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％；
在30分钟，设置流动相A的体积分数为40％，流动相B的体积分数为60％；
在50分钟，设置流动相A的体积分数为28％，流动相B的体积分数为72％；
在55分钟，设置流动相A的体积分数为15％，流动相B的体积分数为85％；
在65分钟，设置流动相A的体积分数为15％，流动相B的体积分数为85％；
在65.1分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％；
在75分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％。
进一步，所述流动相A的pH值为4.8-5.2，优选为5.0；所述流动相A中，六氟磷酸钾溶液的浓度为0.01mol/L。
进一步，进样流速为1.4ml/min-1.6ml/min，优选为1.5ml/min；所述色谱柱柱温为33℃-37℃；优选为35℃。
进一步，所述色谱柱的规格为4.6mm×250mm，5μm。
进一步，进样体积为10μl。
本发明的目的之二在于提供一种同时检测泊沙康唑Z3及其相关杂质和溶剂的含量的方法，该方法可在75分钟内或大于75分钟的时间实现泊沙康唑Z3及其8种杂质和溶剂甲苯的含量测定。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
同时检测泊沙康唑Z3及其相关杂质和溶剂甲苯的含量的方法，采用目的一所述的方法分离所述泊沙康唑Z3及其相关杂质和溶剂后，利用检测器进行检测；设置所述检测器的检测波长为210nm。
进一步，被分离的组分的保留时间由短到长依次为：对甲苯磺酸、杂质SM3d、对甲苯磺酸甲酯、杂质SM3i、甲苯、杂质SM3、杂质Z2、泊沙康唑Z3、杂质Z3f和杂质Z3e。
作为更优选的所述的方法，所述流动相A中六氟磷酸钾溶液和甲醇的体积比为90:10；所述流动相B中乙腈和甲醇的体积比为90:10；所述流动相A的pH值为5.0，所述进样流速为1.5ml/min；所述色谱柱柱温为35℃，所述色谱柱规格为4.6mm×250mm，5μm；检测波长为210nm；
按梯度洗脱程序进行线性梯度洗脱并得到色谱图；所述梯度洗脱程序设置如下：
在0分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％；
在5分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％；
在30分钟，设置流动相A的体积分数为40％，流动相B的体积分数为60％；
在50分钟，设置流动相A的体积分数为28％，流动相B的体积分数为72％；
在55分钟，设置流动相A的体积分数为15％，流动相B的体积分数为85％；
在65分钟，设置流动相A的体积分数为15％，流动相B的体积分数为85％；
在65.1分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％；
在75分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％。
进一步，保留时间为1.7±0.5min的判定为对甲苯磺酸；保留时间为6.0±0.5min的判定为杂质SM3d；保留时间为15.3±0.5min的判定为对甲苯磺酸甲酯；保留时间为18.9±0.5min的判定为杂质SM3i；保留时间为23.7±0.5min的判定为甲苯；保留时间为28.4±0.5min的判定为杂质SM3；保留时间为31.1±0.5min的判定为杂质Z2；保留时间为49.4±0.5min的判定为泊沙康唑Z3；保留时间为61.7±0.5min的判定为杂质Z3f；保留时间为62.6±0.5min的判定为杂质Z3e。
可以根据上述保留时间对各组分进行定性检测。
进一步，以乙腈水溶液为溶剂配置待测样品；所述溶剂中，乙腈和水的体积比为60：40。
进一步，根据所述检测器检测出的峰面积使用外标法计算所述对甲苯磺酸、所述杂质SM3d、所述对甲苯磺酸甲酯、所述杂质SM3i、所述甲苯、所述杂质SM3、所述杂质Z2、所述泊沙康唑Z3、所述杂质Z3f和所述杂质Z3e的含量。
进一步，配置标准品，得标准样品色谱图；测试样品所得色谱图，按外标法以峰面积进行含量计算。
所述标准品为已知组份含量，所述测试样品组份含量为未知。
所得的标准样品色谱图可以储存于数据库中，作为智慧药厂中质量控制的图谱素材，用于帮助机器人判定其生产的产品是否合格，对不合格的产品给出可定量的改进分析建议。
本发明的有益效果在于：
本发明通过筛选色谱柱和色谱条件，建立了一种基于HPLC法分离测定泊沙康唑Z3及其杂质与溶剂的方法，该方法可同时分离对甲苯磺酸、杂质SM3d、对甲苯磺酸甲酯、杂质SM3i、甲苯、杂质SM3、杂质Z2、泊沙康唑Z3、杂质Z3f和杂质Z3e，同时测定其含量；本发明方法具有高灵敏度和高耐用性的特点，可在75分钟内将供试品主峰及供试品中可能存在的8个已知杂质及溶剂进行分离，且在色谱条件微调的情况下均能实现有效分离。本发明解决了现有技术未能解决的泊沙康唑Z3与可能存在的杂质分离测定问题；本分析方法时间短、灵敏度高、专属性强、重现性好、操作简单可行。
附图说明
图1为供试品溶液的色谱图；
图2为混合溶液的色谱图；
图3为检测限(LOD)的色谱图；
图4为耐用性-流速1.4ml/min的色谱图；
图5为耐用性-流速1.6ml/min的色谱图；
图6为耐用性-柱温33℃的色谱图；
图7为耐用性-柱温37℃的色谱图；
图8为耐用性-pH4.8的色谱图；
图9为耐用性-pH5.2的色谱图；
图10为耐用性-流动相A和流动相B的体积比为70:30的色谱图；
图11为耐用性-流动相A和流动相B的体积比为74:26的色谱图。
具体实施方式
下面将结合具体的实施例对本发明的技术方案进行更进一步地清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例。因此，基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的其他所有实施例都属于本发明的保护范围。
本发明实施例中，严格按照高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0512)进行测定。
本发明实施例中，溶剂为乙腈水溶液，溶剂中，乙腈和水的体积比为60：40。
本发明实施例中，供试品溶液的配置方法：取本品适量，精密称定，加溶剂定量稀释制成每1ml中约含2mg的溶液。
本发明实施例中，对照溶液的配置方法：精密量取供试品溶液0.5ml，置100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。
本发明实施例中，系统适用性溶液的配置方法：称取泊沙康唑Z3系统适用性对照品(含泊沙康唑Z3、杂质SM3i、杂质SM3d、杂质SM3、杂质Z2、杂质Z3f、杂质Z3e)，并量取甲苯适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中约含甲苯0.1μl和泊沙康唑Z3系统适用性对照品2mg的混合溶液。
本发明实施例中，色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Shim-packVP-ODS 4.6mm×250mm，5μm或效能相当的色谱柱)，采用流动相A和流动相B照表1进行线性梯度洗脱；流速为每分钟1.5ml；柱温为35℃；检测波长为210nm；进样体积10μl；流动相A为六氟磷酸钾溶液和甲醇的混合溶液，流动相A中，六氟磷酸钾溶液和甲醇的体积比为90:10；六氟磷酸钾溶液的浓度为0.01mol/L；流动相B为乙腈和甲醇的混合溶液，流动相B中，乙腈和甲醇的体积比为90:10。
表1.梯度洗脱程序
本发明实施例中，0.01mol/L六氟磷酸钾溶液的配置方法为：取六氟磷酸钾1.84g，加水1000ml使溶解，用磷酸调节pH值至5.0。
本发明实施例中，系统适用性要求为：系统适用性溶液色谱图中，泊沙康唑Z3峰与相邻峰分离度应符合要求。
本发明实施例中，测定法为：精密量取供试品溶液和对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
本发明实施例中，限度为：供试品溶液色谱图中，除甲苯、空白溶剂峰和梯度洗脱峰外，按加校正因子主成分自身对照法计算，各杂质含量应符合表2的规定，杂质总量不得过2.0％。供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积0.1倍的峰可忽略不计(0.05％)。
表2
| 主成分与杂质 | 相对保留时间 | 校正因子 | 杂质限度 |
| 杂质SM3d | 0.12 | 2.4 | 0.15％ |
| 杂质SM3i | 0.38 | 1.7 | 0.15％ |
| 杂质SM3 | 0.57 | 2.2 | 0.2％ |
| 杂质Z2 | 0.63 | 0.85 | 1.3％ |
| 泊沙康唑Z3 | 1.0 | - | - |
| 杂质Z3f | 1.25 | 0.81 | 0.15％ |
| 杂质Z3e | 1.27 | 0.86 | 0.4％ |
| 其他单个杂质 | - | 1.0 | 0.2％ |
注：表2的相对保留时间供参考，以系统适用性溶液的色谱图对各峰定位。
本发明实施例中，杂质含量的计算公式如下：
总杂质为各杂质之和。
Az：对照溶液中主成分峰面积；
As：供试品溶液中杂质峰面积；
F：杂质校正因子(没有校正因子的，按F＝1计)；
N：配制对照溶液的稀释倍数。
实施例1.专属性
中间体泊沙康唑Z3中可能存在的杂质：杂质SM3d、杂质SM3、杂质SM3i、杂质Z2、杂质Z3e、杂质Z3f、对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸及其溶剂化物甲苯，共9个杂质，本方法对主峰及杂质SM3d、杂质SM3、杂质SM3i、杂质Z2、杂质Z3e、杂质Z3f、对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸、甲苯在专属性试验中分离情况进行考察。
空白溶液/溶剂：乙腈水溶液，其中，乙腈和水的体积比为60：40。
杂质SM3贮备溶液：精密称取杂质SM3 25.56mg，置50ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
杂质SM3d贮备溶液：精密称取杂质SM3d 25.00mg，置50ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
杂质SM3i贮备溶液：精密称取杂质SM3i 25.96mg，置50ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
杂质Z2贮备溶液：精密称取杂质Z2 49.19mg，置50ml量瓶中，加约5ml N,N-二甲基乙酰胺溶解后用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
杂质Z3e贮备溶液：精密称取杂质Z3e 25.12mg，置50ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
杂质Z3f贮备溶液：精密称取杂质Z3e 24.97mg，置50ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
对甲苯磺酸甲酯贮备溶液：精密称取对甲苯磺酸甲酯24.36mg，置50ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
对甲苯磺酸贮备溶液：精密称取对甲苯磺酸一水合物52.04mg，置50ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
甲苯定位溶液：精密称取甲苯24.66mg，置100ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
杂质定位溶液：分别精密量取杂质对甲苯磺酸贮备溶液0.5ml、其它各已知杂质贮备溶液1.0ml，置不同25ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液：精密称取供试品50.58mg，置25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
混合溶液：精密称取供试品48.99mg，置25ml量瓶中，加适量溶剂溶解后分别精密量取对甲苯磺酸甲酯贮备液0.1ml，杂质Z3f、杂质SM3d、杂质SM3i贮备液各0.15ml，杂质SM3贮备液0.2ml，杂质Z2贮备液1.5ml、杂质Z3e贮备液0.5ml置同一量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
分别取空白溶液、各杂质定位溶液、甲苯定位溶液、供试品溶液、混合溶液各10μl，依法进样，记录色谱图，测定结果如表3和图1-2所示,图1和图2对应的积分结果如表4-5所示。结果显示，空白溶液不干扰各杂质测定；主峰与邻近杂质峰间的分离度不小于1.5，各已知杂质峰间、已知杂质与主峰间的分离度不小于1.5，专属性符合要求。
表3.专属性试验测定结果
注*：甲苯为合成中间体Z3的结晶溶剂，在中间体Z3中实际存在，故在此处对其定位，以证明他对中间体Z3有关物质测定不带来干扰。
表4.图1的积分结果表
表5.图2的积分结果表
实施例2.检测限
定量限溶液：精密量取实施例1中杂质SM3d、杂质SM3i、杂质SM3定位溶液各1.0ml，对甲苯磺酸甲酯定位溶液1.25ml，杂质Z2定位溶液0.3ml，杂质Z3e、杂质Z3f定位溶液各0.5ml及供试品对照溶液1.5ml，置同一50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
检测限溶液：精密量取定量限溶液3.0ml，置10ml量瓶，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
取检测限溶液连续进样3次，计算主峰峰高与噪声的比值(信噪比)。试验结果如表6和图3所示，图3对应的积分结果如表7所示。泊沙康唑Z3的检测限浓度为0.091μg/ml，信噪比均值为4.2；杂质SM3d的检测限浓度为0.118μg/ml，信噪比均值为6.5；杂质SM3i的检测限浓度为0.124μg/ml，信噪比均值为8.2；杂质SM3的检测限浓度为0.123μg/ml，信噪比均值为6.2；杂质Z2的检测限浓度为0.071μg/ml，信噪比均值为4.3；杂质Z3f的检测限浓度为0.058μg/ml，信噪比均值为8.3；杂质Z3e的检测限浓度为0.060μg/ml，信噪比均值为6.1。均符合信噪比S/N≥3:1要求。
表6.检测限测定结果
表7.图3的积分结果表
实施例3.色谱条件耐用性
取实施例1中配置的混合溶液，分别使用正常流动相，预定测试的不同流动相比例、柱温、柱流速进行测试，待仪器系统稳定后分别测试，记录各峰间的分离度、杂质含量、相对保留时间。试验结果如表8、图2和图4～图11所示，图4～图11对应的积分结果如表9～表16所示。色谱条件中的流速、柱温、流动相初始比例、流动相A相pH值有微小波动时，主峰及各已知杂质峰与邻近峰之间的分离度均大于1.5。
表8.色谱条件变化耐用性试验测定结果
表9.图4的积分结果表
表10.图5的积分结果表
表11.图6的积分结果表
表12.图7的积分结果表
表13.图8的积分结果表
表14.图9的积分结果表
表15.图10的积分结果表
表16.图11的积分结果表
Claims (10)
1.基于高效液相色谱法分离泊沙康唑Z3及其相关杂质和溶剂的方法，其特征在于，所述方法为：采用十八烷基硅烷键合硅胶填充剂为固定相，以六氟磷酸钾溶液和甲醇的混合溶液作流动相A，乙腈和甲醇的混合溶液作为流动相B进行线性梯度洗脱，所述流动相A中六氟磷酸钾溶液和甲醇的体积比为90:10；所述流动相B中乙腈和甲醇的体积比为90:10；通过梯度洗脱将泊沙康唑Z3及其相关杂质和溶剂进行分离；所述泊沙康唑Z3的结构式如式Ⅰ所示；所述相关杂质包括杂质组合物和/或其它相关杂质，所述杂质组合物为如式Ⅵ所示的杂质Z3e和如式Ⅸ所示的对甲苯磺酸，所述其它相关杂质为如式Ⅱ所示的杂质SM3d、如式Ⅲ所示的杂质SM3、如式Ⅳ所示的杂质SM3i、如式Ⅴ所示的杂质Z2、如式Ⅶ所示的杂质Z3f和如式Ⅷ所示的对甲苯磺酸甲酯中的任一种或多种；所述溶剂为甲苯；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：
在0分钟，设置流动相A的体积分数为70％-74％，流动相B的体积分数为30％-26％；
在5分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％；
在30分钟，设置流动相A的体积分数为40％，流动相B的体积分数为60％；
在50分钟，设置流动相A的体积分数为28％，流动相B的体积分数为72％；
在55分钟，设置流动相A的体积分数为15％，流动相B的体积分数为85％；
在65分钟，设置流动相A的体积分数为15％，流动相B的体积分数为85％；
在65.1分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％；
在75分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A的pH值为4.8-5.2；所述流动相A中，六氟磷酸钾溶液的浓度为0.01mol/L。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进样流速为1.4ml/min-1.6ml/min；所述色谱柱柱温为33℃-37℃。
5.基于权利要求1-4任一项所述的方法同时检测泊沙康唑Z3及其相关杂质和溶剂的含量的方法，其特征在于，采用权利要求1-4任一项所述的方法分离所述泊沙康唑Z3及其相关杂质和溶剂后，利用检测器进行检测；设置所述检测器的检测波长为210nm。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，被分离的组分的保留时间由短到长依次为：对甲苯磺酸、杂质SM3d、对甲苯磺酸甲酯、杂质SM3i、甲苯、杂质SM3、杂质Z2、泊沙康唑Z3、杂质Z3f和杂质Z3e。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述流动相A中六氟磷酸钾溶液和甲醇的体积比为90:10；所述流动相B中乙腈和甲醇的体积比为90:10；所述流动相A的pH值为5.0，所述进样流速为1.5ml/min；所述色谱柱柱温为35℃，所述色谱柱规格为4.6mm×250mm，5μm；检测波长为210nm；
按梯度洗脱程序进行线性梯度洗脱并得到色谱图；所述梯度洗脱程序设置如下：
在0分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％；
在5分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％；
在30分钟，设置流动相A的体积分数为40％，流动相B的体积分数为60％；
在50分钟，设置流动相A的体积分数为28％，流动相B的体积分数为72％；
在55分钟，设置流动相A的体积分数为15％，流动相B的体积分数为85％；
在65分钟，设置流动相A的体积分数为15％，流动相B的体积分数为85％；
在65.1分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％；
在75分钟，设置流动相A的体积分数为72％，流动相B的体积分数为28％。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，保留时间为1.7±0.5min的判定为对甲苯磺酸；保留时间为6.0±0.5min的判定为杂质SM3d；保留时间为15.3±0.5min的判定为对甲苯磺酸甲酯；保留时间为18.9±0.5min的判定为杂质SM3i；保留时间为23.7±0.5min的判定为甲苯；保留时间为28.4±0.5min的判定为杂质SM3；保留时间为31.1±0.5min的判定为杂质Z2；保留时间为49.4±0.5min的判定为泊沙康唑Z3；保留时间为61.7±0.5min的判定为杂质Z3f；保留时间为62.6±0.5min的判定为杂质Z3e。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，根据所述检测器检测出的峰面积使用外标法计算所述对甲苯磺酸、所述杂质SM3d、所述对甲苯磺酸甲酯、所述杂质SM3i、所述甲苯、所述杂质SM3、所述杂质Z2、所述泊沙康唑Z3、所述杂质Z3f和所述杂质Z3e的含量。
10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，配置标准品，得标准样品色谱图；测试样品所得色谱图，按外标法以峰面积进行含量计算。
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| CN117405792A (zh) * | 2023-10-24 | 2024-01-16 | 北京阳光诺和药物研究股份有限公司 | 一种泊沙康唑中基因毒性杂质的检测方法 |
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