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CN116283988B - 一种单萜吲哚类生物碱及其制备方法、用途 - Google Patents

一种单萜吲哚类生物碱及其制备方法、用途 Download PDF

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CN116283988B CN202310278324.0A CN202310278324A CN116283988B CN 116283988 B CN116283988 B CN 116283988B CN 202310278324 A CN202310278324 A CN 202310278324A CN 116283988 B CN116283988 B CN 116283988B
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Abstract

本发明提供一种单萜吲哚类生物碱及其制备方法、用途，属于天然产物提取技术领域。该单萜吲哚类生物碱提取分离自马钱子，其化学结构式如式Ⅰ所示。经鉴定，该化合物为protostrychnine型生物碱，分子式为C21H25N2O3。经细胞实验验证，本发明提供的化合物protostrychnineA能够显著降低RAW264.7细胞上清液分泌的TNF‑α、IL‑1、IL‑6和NO的浓度，表明其具有较佳的抗炎活性，

Description

一种单萜吲哚类生物碱及其制备方法、用途
技术领域
本发明涉及天然产物提取技术领域，具体涉及一种单萜吲哚类生物碱及其制备方法、用途。
背景技术
马钱子，是马钱科马钱属植物马钱(Strychnos nux-vomica L.)的干燥种子，又名番木鳖、苦实等。主产于印度、越南、缅甸等国，我国的云南、广东、广西等地为主要栽培区。其药用部位为马钱的干燥种子，即药用马钱子，马钱子作为中药始载于《本草纲目》，谓之“状似马之连钱，故名马钱”。马钱子性寒、味苦、有剧毒，具有通筋活络、祛风除湿、散结消肿等疗效。现代临床常以马钱子治疗类风湿性关节炎、中风偏瘫、神经麻痹、多发性神经炎等疾病，是具有较大开发潜力的中药，尤其在治疗恶性肿瘤方面，效果明显且没有其它抗癌药常有的骨髓抑制、免疫抑制等不良反应，因而具有非常广阔的开发前景。
现代医学研究证明马钱子中发挥药理作用的为其结构特定的单萜吲哚类生物碱，但对马钱子中的单萜吲哚类生物碱的定向分离却没有形成一个完整的体系，且大量关于药理作用、制剂及临床应用的研究仍停留在马钱子总生物碱的水准上。因此，对马钱子中单萜吲哚类生物碱成分的深入研究是十分必要的。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种从马钱子中提取分离得到的新单萜吲哚类生物碱及制备方法，该化合物结构新颖、抗炎活性佳，且其制备方法成本低廉，操作简单，能够分离得到较高纯度的化合物。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
本发明提供一种单萜吲哚类生物碱，其化学结构式如式Ⅰ所示：
本发明还提供一种所述单萜吲哚类生物碱的制备方法，包括以下步骤：
S1、将马钱子用体积分数为80～95％乙醇溶液回流提取，收集提取液；
S2、将所述提取液调pH至1～3，用氯仿萃取，收集酸水液；
S3、将所述酸水液调pH至9～12，依次用氯仿和正丁醇萃取，得到正丁醇萃取物；
S4、将所述正丁醇萃取物溶解后，用二氯甲烷-甲醇-二乙胺洗脱系统经硅胶柱梯度洗脱，对流出液进行薄层色谱检测，合并主斑点相同的馏分，得到四个馏分，分别为Fr.A、Fr.B、Fr.C、Fr.D；
S5、将所述Fr.B溶解后，用甲醇-水洗脱系统经ODS柱进行梯度洗脱，对流出液进行薄层色谱检测，合并主斑点相同的馏分，得到三个馏分，分别为Fr.B1、Fr.B2、Fr.B3；
S6、将所述Fr.B3溶解后，用二氯甲烷-甲醇-二乙胺经正向硅胶柱进行等度洗脱，对流出液用薄层色谱法检测，合并主斑点相同的馏分，得到四个馏分，分别为Fr.B3-1、Fr.B3-2、Fr.B3-3、Fr.B3-4；
S7、将所述Fr.B3-1溶解后，过滤，用甲醇-水-氨水洗脱系统经高效液相色谱柱进行等度洗脱，收集含有单萜吲哚类生物碱的流出液，即得所述单萜吲哚类生物碱。
优选地，S1中，马钱子与乙醇溶液的用量比为1g：6～10mL。
优选地，S1中，所述提取液的具体制备过程为：将马钱子用体积分数为80～95％乙醇溶液回流提取1～3次，每次1～2h，对提取得到的溶液进行过滤，滤液回收至无醇味，再用40～55℃的水混悬，过滤，得到所述提取液。
优选地，S4中，二氯甲烷-甲醇-二乙胺洗脱系统中，用二氯甲烷和甲醇依次以体积比12∶1、8∶1、5∶1、3∶1、1∶1、0∶1进行梯度洗脱，且每个洗脱梯度中二氯甲烷和甲醇的总体积与二乙胺的体积比均为100∶0.3。
优选地，S4中，所述主斑点相同的馏分是二氯甲烷与甲醇的体积比为8∶1及5∶1的洗脱馏分。
优选地，S5中，所述甲醇-水洗脱系统中，用水和甲醇依次以体积比1∶0、9∶1、4∶1、7∶3、3∶2、1∶1、2∶3、3∶7、0∶1进行梯度洗脱。
优选地，S5中，所述主斑点相同的馏分是水和甲醇体积比为1∶1的洗脱馏分。
优选地，S7中，所述甲醇-水-氨水洗脱系统中，氨水的质量浓度为25～28％，甲醇、水与氨水的体积比为50∶50∶0.2。
本发明还提供一种单萜吲哚类生物碱在制备抗炎药物中的用途。
对比现有技术，本发明的有益效果为：
1、本发明提供一种单萜吲哚类生物碱，该化合物是从马钱子中提取分离得到。经细胞实验证明，该化合物能够降低LPS诱导RAW264.7细胞上清液中炎症因子的含量，提示该化合物具有一定的抗炎活性，对炎症性疾病具有潜在的治疗效果。
2、本发明利用酸提碱沉法并采用不同极性的有机溶剂将马钱子提取液分为酸性氯仿层、碱性氯仿层及碱性正丁醇层，再将正丁醇层依次经硅胶柱、ODS反相柱、凝胶柱洗脱，收集的相同馏分经HPLC色谱柱等度洗脱，分离得到本发明提供的单萜吲哚类生物，命名为protostrychnine A。
3、本发明在第一次硅胶柱分离时使用含二乙胺的二氯甲烷-甲醇系统为流动相，该流动相体系成本低廉，简单易得；其中，在流动相中加入二乙胺，可以克服硅胶的酸性，防止硅胶与生物碱成分吸附过紧而导致的拖尾甚至不足以洗脱。
4、本发明在最后高效液相色谱分离时使用含氨水的甲醇-水系统为流动相，在流动相中加入氨水，不仅能够提高分离效率，而且氨水可以通过减压蒸馏除去，避免对化合物图谱信号干扰，便于解析出正确的结构，有利于后续补充图谱。
5、本发明提供的方法，操作简便，原料成本低，且分离后的化合物纯度高，利于药物研发后进行大规模推广使用。
附图说明
图1为本发明分离得到的化合物的高分辨质谱图谱；
图2为本发明分离得到的化合物的紫外图谱；
图3为本发明分离得到的化合物的红外图谱；
图4为本发明分离得到的化合物的1H-NMR图谱(600MHz)；
图5为本发明分离得到的化合物的13C-NMR图谱(150MHz)；
图6为本发明分离得到的化合物的DEPT图谱；
图7为本发明分离得到的化合物的HSQC图谱；
图8为本发明分离得到的化合物的HMBC图谱；
图9为本发明分离得到的化合物的1H-1H COSY图谱；
图10为本发明分离得到的化合物的NOESY图谱；
图11为本发明化合物的偶联相关图；
图12为本发明化合物的制备流程图；
图13为本发明化合物对LPS诱导RAW264.7细胞上清液中炎症因子的影响；A、TNF-α，B、IL-1，C、IL-6，D、NO。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明下述各实施例中，温水是温度为40～55℃的水。本发明实施例中，硅胶柱的目数为100～200目。本发明下述各实施例中所述实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可在市场上购买得到。
本发明下述实施例中，不同洗脱系统中溶剂的比例为体积比，不同洗脱系统中涉及的分数为体积分数。
本发明所用氨水为色谱级纯氨水，其质量浓度≥25％。
本发明提取分离过程中高效液相色谱分离时的液相色谱柱采用C18HPLC柱，紫外检测器采用PDA二极管阵列检测器。
本发明下述各实施例中，所述单萜吲哚类生物碱的分子式为C21H25N2O3，其分子结构式如式Ⅰ所示：
该单萜吲哚类生物碱的制备流程具体包括以下步骤：
1)将干燥的马钱子粉碎，置乙醇中加热回流提取，滤液干燥至无醇味，得总浸膏；浸膏用温水混悬，加盐酸调至酸性，用氯仿萃取；剩余酸水液用氢氧化钠调pH至碱性，分别用氯仿和正丁醇溶液萃取，得到不同溶剂部位浸膏；
2)正丁醇部位浸膏依次过硅胶柱、ODS柱、正相硅胶柱，分别用二氯甲烷-甲醇-二乙胺洗脱系统、甲醇-水洗脱系统、甲醇洗脱系统，最后将过柱部分经半制备型HPLC分离，以甲醇-水-氨水系统洗脱得该化合物(protostrychnine A)。
下面结合具体实施例对从马钱子中提取分离的单萜吲哚类生物碱的制备过程进行具体说明。
实施例1
一种从马钱子中提取分离的单萜吲哚类生物碱的制备方法，如图12所示，包括以下步骤：
S1、将干燥的马钱子50kg干燥，粉碎，按料液比1g：6mL加入95％(v/v)的乙醇，加热回流提取3次，每次回流提取2h，合并3次提取液，过滤，将滤液回收乙醇至无醇味，得马钱子总浸膏；
S2、将S1的马钱子总浸膏，加温水(40℃)混悬，经两层纱布过滤得滤液；
S3、将S2得到的滤液用10％HCl溶液调至pH＝2，混匀，静置一夜，用氯仿萃取6次，萃取液浓缩干燥，得pH＝2的氯仿层浸膏和酸水液；
S4、将S3得到的酸水液用5％氢氧化钠溶液调至pH＝9.0，混匀，静置一夜，然后依次用氯仿和正丁醇萃取，将各萃取液浓缩干燥得到pH＝9的氯仿层126.4g和正丁醇层173.9g；
S5、将活性部分即S4中的正丁醇层用甲醇溶解，按质量比1∶1.2干法与硅胶拌样，上样于径高比1∶8的硅胶柱，用二氯甲烷-甲醇-二乙胺洗脱系统进行梯度洗脱：依次用12∶1的二氯甲烷-甲醇10L、8∶1的二氯甲烷-甲醇17L、5∶1的二氯甲烷-甲醇13L、3∶1的二氯甲烷-甲醇18L、1∶1的二氯甲烷-甲醇7L、纯甲醇3L进行梯度洗脱，其中，每个梯度洗脱液中均添加二乙胺，且每个梯度洗脱液中二氯甲烷和甲醇的总体积与二乙胺的体积之比均为100∶0.3。对流出液进行薄层色谱法检测，合并主斑点相同的馏分后，蒸干溶剂，得到Fr.A、Fr.B、Fr.C、Fr.D四个部分。其中，主斑点相同的馏分是二氯甲烷与甲醇的体积比为8∶1→5∶1的洗脱馏分；
S6、将S5中的洗脱产物Fr.B部分(16.8g)用甲醇溶解，按质量比1∶1.2干法与十八烷基硅烷键合硅胶拌样，上样于径高比1∶7的ODS柱，依次用0∶1的甲醇-水4L、10％甲醇-水4L、20％的甲醇-水4L、30％的甲醇-水4L、40％的甲醇-水4L、50％的甲醇-水4L、60％的甲醇-水4L、70％的甲醇-水4L、100％的甲醇4L进行梯度洗脱，对流出液进行薄层色谱法检测，合并主斑点相同的馏分后，蒸干溶剂，得到Fr.B1、Fr.B2、Fr.B3三个部分。其中，主斑点相同的馏分是甲醇与水的体积比为1∶1的洗脱馏分；
S7、将S6中的Fr.B3部分用甲醇溶解，湿法上样于径高比1∶20的正相硅胶柱，依次用80∶1的二氯甲烷-甲醇2L、50∶1的二氯甲烷-甲醇2L、30∶1的二氯甲烷-甲醇2L、20∶1的二氯甲烷-甲醇2L、8∶1的二氯甲烷-甲醇2L进行梯度洗脱，对流出液用薄层色谱法检测，合并馏分，蒸干溶剂，得到Fr.B3-1、Fr.B3-2、Fr.B3-3、Fr.B3-4四个部分；
S8、将S7中的洗脱产物Fr.B3-1用色谱甲醇溶解，过0.45μm微孔滤膜，在流速2.0mL/min下，经半制备HPLC进一步纯化，用色谱甲醇-水-氨水(体积比50∶50∶0.2)洗脱系统进行等度洗脱，收集保留时间为22.9min时的流出液，蒸干溶剂，最终得到该化合物2.5mg。其中，高效液相色谱分离时的液相色谱柱采用C18 HPLC柱，紫外检测器采用PDA二极管阵列检测器。
实施例2
一种从马钱子中提取分离的单萜吲哚类生物碱的制备方法，包括以下步骤：
S1、将干燥的马钱子50kg干燥，粉碎，按料液比1g∶8mL加入95％(v/v)的乙醇，加热回流提取3次，每次回流提取1h，合并3次提取液，过滤，将滤液回收乙醇至无醇味，得马钱子总浸膏；
S2、将S1的马钱子总浸膏，加温水(45℃)混悬，经两层纱布过滤得滤液；
S3、将S2得到的滤液用10％HCl溶液调至pH＝2，混匀，静置一夜，用氯仿萃取3次，萃取液浓缩干燥，得pH＝2的氯仿层浸膏和酸水液；
S4、将S3得到的酸水液用5％氢氧化钠溶液调至pH＝9.0，混匀，静置一夜，然后依次用氯仿和正丁醇萃取，将各萃取液浓缩干燥得到pH＝9的氯仿层121.8g和正丁醇层169.7g；
S5、将活性部分即S4中的正丁醇层用甲醇溶解，按质量比1∶1.2干法与硅胶拌样，上样于径高比1∶8的硅胶柱，用二氯甲烷-甲醇-二乙胺洗脱系统进行梯度洗脱：依次用12∶1的二氯甲烷-甲醇10L、8∶1的二氯甲烷-甲醇17L、5∶1的二氯甲烷-甲醇13L、3∶1的二氯甲烷-甲醇18L、1∶1的二氯甲烷-甲醇7L、纯甲醇3L进行梯度洗脱，其中，每个梯度洗脱液中均添加二乙胺，且每个梯度洗脱液中二氯甲烷和甲醇的总体积与二乙胺的体积之比均为100∶0.3。对流出液进行薄层色谱法检测，合并主斑点相同的馏分后，蒸干溶剂，得到Fr.A、Fr.B、Fr.C、Fr.D四个部分。其中，主斑点相同的馏分是二氯甲烷与甲醇的体积比为8∶1→5∶1的洗脱馏分；
S6、将S5中的洗脱产物Fr.B部分(15.4g)用甲醇溶解，质量比1∶1.2干法与十八烷基硅烷键合硅胶拌样，上样于径高比1∶7的ODS柱，依次用0∶1的甲醇-水4L、10％甲醇-水4L、20％的甲醇-水4L、30％的甲醇-水4L、40％的甲醇-水4L、50％的甲醇-水4L、60％的甲醇-水4L、70％的甲醇-水4L、100％的甲醇4L进行梯度洗脱，对流出液进行薄层色谱法检测，合并主斑点相同的馏分后，蒸干溶剂，得到Fr.B1、Fr.B2、Fr.B3三个部分。其中，主斑点相同的馏分是甲醇与水的体积比为1∶1的洗脱馏分；
S7、将S6中的Fr.B1部分用甲醇溶解，湿法上样于径高比1∶20的正相硅胶柱，依次用80∶1的二氯甲烷-甲醇2L、50∶1的二氯甲烷-甲醇2L、30∶1的二氯甲烷-甲醇2L、20∶1的二氯甲烷-甲醇2L、8∶1的二氯甲烷-甲醇2L进行梯度洗脱，对流出液用薄层色谱法检测，合并馏分，蒸干溶剂，得到Fr.B3-1、Fr.B3-2、Fr.B3-3、Fr.B3-4四个部分；
S8、将S7中的洗脱产物Fr.B3-1用色谱甲醇溶解，过0.45μm微孔滤膜，在流速2.0mL/min下，经半制备HPLC进一步纯化，用色谱甲醇-水-氨水(体积比为50∶50∶0.2)洗脱系统进行等度洗脱，收集保留时间为22.9min时的流出液，蒸干溶剂，最终得到该化合物2.5mg。其中，高效液相色谱分离时的液相色谱柱采用C18 HPLC柱，紫外检测器采用PDA二极管阵列检测器。
实施例3
一种从马钱子中提取分离的单萜吲哚类生物碱的制备方法，包括以下步骤：
S1、将干燥的马钱子50kg干燥，粉碎，按料液比1g∶10mL加入95％(v/v)的乙醇，加热回流提取3次，每次回流提取1.5h，合并3次提取液，将滤液回收乙醇至无醇味，得马钱子总浸膏；
S2、将S1的马钱子总浸膏，加温水(55℃)混悬，经两层纱布过滤得滤液；
S3、将S2得到的滤液用5％HCl溶液调至pH＝2，混匀，静置一夜，用氯仿萃取5次，萃取液浓缩干燥，得pH＝2的氯仿层浸膏和酸水液；
S4、将S3得到的酸水液用10％氢氧化钠溶液调至pH＝9.0，混匀，静置一夜，然后依次用氯仿和正丁醇萃取，将各萃取液浓缩干燥得到pH＝9的氯仿层131.2g和正丁醇层175.1g；
S5、将活性部份即S4中的正丁醇层用甲醇溶解，按质量比1∶1.2干法与硅胶拌样，上样于径高比1∶8的硅胶柱，用二氯甲烷-甲醇-二乙胺洗脱系统进行梯度洗脱：依次用12∶1的二氯甲烷-甲醇10L、8∶1的二氯甲烷-甲醇17L、5∶1的二氯甲烷-甲醇13L、3∶1的二氯甲烷-甲醇18L、1∶1的二氯甲烷-甲醇7L、纯甲醇3L进行梯度洗脱，其中，每个梯度洗脱液中均添加二乙胺，且每个梯度洗脱液中二氯甲烷和甲醇的总体积与二乙胺的体积之比均为100∶0.3。对流出液进行薄层色谱法检测，合并主斑点相同的馏分后，蒸干溶剂，得到Fr.A、Fr.B、Fr.C、Fr.D四个部分。其中，主斑点相同的馏分是二氯甲烷与甲醇的体积比为8∶1→5∶1的洗脱馏分；
S6、将S5中的洗脱产物Fr.B部分(17.2g)用甲醇溶解，按质量比1∶1.2干法与十八烷基硅烷键合硅胶拌样，上样于径高比1∶7的ODS柱，依次用0∶1的甲醇-水4L、10％甲醇-水4L、20％的甲醇-水4L、30％的甲醇-水4L、40％的甲醇-水4L、50％的甲醇-水4L、60％的甲醇-水4L、70％的甲醇-水4L、100％的甲醇4L进行梯度洗脱，对流出液进行薄层色谱法检测，合并主斑点相同的馏分后，蒸干溶剂，得到Fr.B1、Fr.B2、Fr.B3三个部分。其中，主斑点相同的馏分是甲醇与水的体积比为1∶1的洗脱馏分；
S7、将S6中的Fr.B1部分用甲醇溶解，湿法上样于径高比1∶20的正相硅胶柱，依次用80∶1的二氯甲烷-甲醇2L、50∶1的二氯甲烷-甲醇2L、30∶1的二氯甲烷-甲醇2L、20∶1的二氯甲烷-甲醇2L、8∶1的二氯甲烷-甲醇2L进行梯度洗脱，对流出液用薄层色谱法检测，合并馏分，蒸干溶剂，得到Fr.B3-1、Fr.B3-2、Fr.B3-3、Fr.B3-4四个部分；
S8、将S7中的洗脱产物Fr.B3-1用色谱甲醇溶解，过0.45μm微孔滤膜，在流速2.0mL/min下，经半制备HPLC进一步纯化，用色谱甲醇-水-氨水(体积比为50∶50∶0.2)洗脱系统进行等度洗脱，收集保留时间为22.9min时的流出液，蒸干溶剂，最终得到该化合物2.7mg。
实施例4
一种从马钱子中提取分离的单萜吲哚类生物碱的制备方法，与实施例1的不同仅在于S3不同，具体为：将S2得到的滤液用5％HCl溶液调至pH＝1，混匀，静置一夜，用氯仿萃取5次，萃取液浓缩干燥，得pH＝1的氯仿层浸膏和酸水液。
实施例5
一种从马钱子中提取分离的单萜吲哚类生物碱的制备方法，与实施例1的不同仅在于S4不同，具体为：将S3得到的酸水液用10％氢氧化钠溶液调至pH＝12.0，混匀，静置一夜，然后依次用氯仿和正丁醇萃取，将各萃取液浓缩干燥得到pH＝12的氯仿层131.0g和正丁醇层172.4g。
上述实施例1～5制备的化合物经鉴定，为从马钱子中提取分离得到的一个新单萜吲哚类生物碱(Protostrychnine A，原士的宁A)，有关具体测定和实验结果如下：
Protostrychnine A，无色油状，易溶于甲醇。碘化铋钾显阳性。
图1为该化合物的高分辨质谱(HRESIMS)图谱。由图1的高分辨质谱(HRESIMS)得出，该化合物准分子离子峰为m/z 353.18295[M+H]+(计算值C21H25N2O3，353.18597)，结合图4和图5的1H-NMR、13C-NMR推测其分子式为C21H25N2O3。
图2为该化合物的紫外(UV)图谱，图3为该化合物的红外(IR)图谱。由图2～3可以看出，UV图谱在203nm、254nm处有最大吸收，IR图谱在3315cm-1、1658cm-1、1477cm-1处有吸收峰，说明该化合物中存在羟基、羰基和苯环。
图4的1H-NMR(CD3OD,600MHz)谱中给出4个苯环氢信号δH 7.36(1H,d,J＝7.5Hz,H-1),7.25(1H,dd,J＝7.7,1.0Hz,H-2),7.16(1H,t,J＝7.4,1.0Hz,H-3),7.96(1H,d,J＝8.0Hz,H-4)，1个特征性C-C双键上的氢信号δH 5.72(1H,m,H-22)。
图5的13C-NMR及图6的DEPT谱(CD3OD,150MHz)显示有21个碳，特征性碳信号包括1个羰基碳信号δC 172.33(C-10)，苯环的6个碳信号δC123.62(C-1),129.27(C-2),126.12(C-3),116.82(C-4),142.10(C-5),136.60(C-6)，C-C双键的2个碳信号δC 143.86(C-21),124.04(C-22)。此外，还有5个次甲基碳信号δC 67.69(C-8),67.33(C-12),53.99(C-13),31.12(C-14),64.05(C-16)，6个亚甲基碳信号δC 43.88(C-11),31.64(C-15),47.02(C-17),54.42(C-18),58.20(C-20),57.18(C-23)，1个季碳信号δC 52.74(C-7)。据此，推测所得化合物为protostrychnine型生物碱。
该化合物Protostrychnine A的1H-NMR and 13C-NMR的相关数据见表1。
表1化合物的1H-NMR and 13C-NMR的相关数据
图7为该化合物的HSQC图谱；图8为该化合物的HMBC图谱；图9为该化合物的1H-1HCOSY图谱；图10为该化合物的NOESY图谱。
图9的1H-1H COSY谱中δ1.49(H-13)分别与δ4.24(H-8)、δ4.39(H-12)、δ3.15(H-14)相关，说明C-13分别与C-8、C-12、C-14相连；δ2.95(H-11α)与δ4.39(H-12)相关，说明C-11与C-12相连；δ2.03(H-15β)分别与δ3.15(H-14)和δ3.61(H-16)相关，说明C-15分别与C-14和C-16相连；δ2.03,2.64(H-17)与δ2.92,3.14(H-18)相关，说明C-17与C-18相连；δ2.98,4.30(H-23)与δ5.72(H-22)相关，说明C-22与C-23相连。
图8的HMBC谱中δ4.24(H-8)与δ142.10(C-5)和δ172.33(C-10)相关，结合C-8(δ67.69)的化学位移，可推出C-8通过氮原子与C-5、C-10相连；δ4.24(H-8)、δ1.75,2.03(H-15)与δ52.74(C-7)相关，δ3.15(H-14)、δ3.61(H-16)、δ2.03(H-17α)与δ67.69(C-8)相关，可推出C-7与C-8、C-16、C-17相连；δ3.28,3.46(H-20)、δ5.72(H-22)与δ31.12(C-14)相关，δ1.75,2.03(H-15)和δ3.98,4.30(H-23)与δ143.86(C-21)相关，可推出C-21与C-14、C-20、C-22相连；δ2.92,3.14(H-18)、δ3.46(H-20α)与δ64.05(C-16)相关，结合C-18(δ54.42)与C-20(δ58.20)的化学位移，可推出C-16通过氮原子分别与C-18和C-20相连；δ2.61,2.95(H-11)和δ4.39(H-12)与δ172.33(C-10)相关，可推出C-10与C-11相连。
图10的NOESY谱中δ4.24(H-8)分别与δ2.61(H-11β)和δ2.64(H-17β)相关，δ4.39(H-12)分别与δ2.95(H-11α)和δ3.15(H-14)相关。
综上，确定该化合物为protostrychnine骨架类型生物碱。对比所得化合物与protostrychnine(原番木鳖碱)的1H-NMR数据，发现二者的主要区别是所得化合物δ4.24(H-8)的化学位移明显高于protostrychnine中δ3.82(H-8)的化学位移，说明所得化合物中H-8受到吸电子基团的作用，推测所得化合物与protostrychnine中C-12所连羟基的构象相反。
对比二者的NOESY谱，发现所得化合物中δ4.39(H-12)与δ4.24(H-8)不相关，但与δ3.15(H-14)相关；protostrychnine中δ3.97(H-12)与δ3.09(H-14)不相关，但与δ3.82(H-8)相关，证实上述推断。因此，确定了化合物的平面结构，该化合物的分子结构式如下所示：
图11为该化合物的偶联相关图。由图11可见，该化合物的相对构型可通过氢谱和NOESY谱确定。H-8的耦合常数为10.7Hz，说明H-8与H-13位于反式直立键上。NOESY谱中，H-16与H-17α，H-8与H-17β，H-8与H-11β，H-11α与H-12，H-12与H-14都存在相关信号，且H-12与H-11β不相关，说明H-11α、H-12、H-14、H-16和H-17α位于环的同侧，为α取向；H-8、H-11β、OH-12和H-17β为β取向。同时，由生源途径可确定C-7、C-12和C-16的绝对构型分别为R、S和S。因此，所得化合物的绝对构型为(7R,8S,12S,13R,14R,16S)。
本发明获得的protostrychnine A具有显著的抗炎活性，实验方法与结果如下：
1、实验材料
小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞株购自ATCC数据库。待测化合物protostrychnine A溶解于DMSO中，得到母液备用。
2、实验方法
将100μL处于对数生长期的RAW264.7接种至96孔细胞培养板内，在含有10％胎牛血清和青链霉素混合液的DMEM培养基中进行贴壁培养。24h后加入50μL浓度为20μM的待测化合物(protostrychnine A)溶液，继续在37℃、5％CO2培养箱中培养。阳性对照药为地塞米松，阴性对照组为DMSO。1h后加入50μL 1mg/mL的LPS溶液对RAW264.7细胞进行刺激诱导。24h后根据试剂盒操作说明检测细胞上清液中TNF-α、IL-1、IL-6和NO的浓度。
3、实验结果
结果如图13所示。
由图13可知，LPS组与DMSO组相比，可显著增加RAW264.7细胞上清液分泌的TNF-α、IL-1、IL-6和NO。与LPS组比较，protostrychnine A能够降低上述炎症因子的浓度，活性显著优于阳性药物地塞米松组(Dexamethasone)，表明此化合物具有一定的抗炎活性，对炎症性疾病具有潜在的治疗效果。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种单萜吲哚类生物碱的用途，所述单萜吲哚类生物碱的化学结构式如式Ⅰ所示，其特征在于，所述单萜吲哚类生物碱在制备抗炎药物中的用途，
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