CN116287247A - 线粒体凋亡相关基因多态性在急性髓系白血病蒽环类化疗反应和易感性预测中的应用 - Google Patents
线粒体凋亡相关基因多态性在急性髓系白血病蒽环类化疗反应和易感性预测中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于生物医药和分子生物学技术领域，具体涉及线粒体凋亡相关基因多态性在急性髓系白血病蒽环类化疗反应和易感性预测中的应用。本发明采用CRISPR/Cas9筛选系统寻找AML蒽环类药物耐药相关基因，筛选出BCL2L11等八个线粒体凋亡相关基因。进一步结果显示PLAUR基因中的SNP rs4251864与蒽环类诱导化疗后完全缓解的增加有关。SOD2中的rs4880与对两程化疗后的反应相关，而BCL2L11中的rs3789068与AML的易感性相关。本发明AML中线粒体凋亡相关基因的SNPs与蒽环类化疗反应的相关性的研究结果为预测AML患者的治疗结果提供了重要的参考，具有良好的实际应用之价值。
Description
技术领域
本发明属于生物医药和分子生物学技术领域，具体涉及线粒体凋亡相关基因多态性在急性髓系白血病蒽环类化疗反应和易感性预测中的应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
急性髓系白血病(AML)是一种异质性髓系恶性肿瘤，其特征是未分化的髓系细胞不受控制的克隆增殖。临床上需要尽快进行诱导化疗缓解，以挽救患者的生命。虽然蒽环类联合阿糖胞苷类化疗方案仍是AML(非M3)的一线治疗方案，但该联合方案的完全缓解(CR)率仅约70-80％。原发性化疗耐药和复发仍然是AML患者死亡的主要原因。因此，临床医生一直在寻求进一步提高CR率的策略。实现这一目标的重要一步是能够提前评估患者对诱导化疗的敏感性。例如，对于化疗不敏感或有原发性耐药的患者，可以提前选择其他新的靶向治疗方法。出于这个原因，我们选择以蒽环类药物为目标，寻找能够提前预测和评估患者对这类药物易感性的指标。
为了更准确地探索影响蒽环类药物抗AML活性的生物指标，我们在THP-1细胞暴露于蒽环类药物去甲氧柔红霉素(IDA)后，对候选基因进行了CRISPR/Cas9筛选。随后，我们通过功能通路富集分析鉴定了与线粒体凋亡通路相关的候选分子，该通路已被证明参与AML的发病机制、治疗和预后。恶性髓系细胞凋亡的阻断或逃逸被认为是AML的特征之一。例如，抗凋亡蛋白b细胞淋巴瘤2(BCL2)在AML中高表达。BCL2抑制剂Venetoclax在AML治疗中表现出良好的疗效，已成为老年AML患者的一线治疗选择。此外，肿瘤蛋白TP53是线粒体凋亡通路分子之一，是AML治疗效果差、生存预后差的重要指标。因此，线粒体通路相关分子与AML密切相关，可能存在预测蒽环类化疗反应或易感性的分子。
AML是一种异质性疾病。除了AML发病机制的差异外，其治疗方面对化疗药物敏感性也存在个体差异。AML患者的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)作为个体遗传变异，被认为是个体对化疗药物敏感的重要原因之一。一些基因多态性已被发现与AML易感性和对药物的反应有关。例如，研究发现p-糖蛋白编码ABCB1基因的SNPs可以预测AML患者的化疗结果。此外，阿糖胞苷代谢酶编码基因的SNPs也与AML的治疗效果有关。然而，发明人发现，关于线粒体凋亡相关基因多态性在急性髓系白血病蒽环类化疗反应和易感性预测的研究仍然匮乏。
发明内容
针对上述现有技术的不足，发明人经长期的技术与实践探索，提供线粒体凋亡相关基因多态性在急性髓系白血病蒽环类化疗反应和急性髓系白血病易感性预测中的应用。本发明使用CRISPR-Cas9筛选相关基因并结合相关SNP位点进行研究，发现线粒体凋亡通路相关分子的基因SNP与AML蒽环类诱导化疗反应和易感性相关。基于上述研究成果，从而完成本发明。
为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的第一个方面，提供一种预测急性髓系白血病蒽环类化疗反应和/或易感性的生物标志物，所述生物标志物选自下列线粒体凋亡相关基因中的任意一个或多个：BCL2L11、CASP8、TP63、TP53BP2、PLAUR、SOD2、BNIP3L和MMP9；
更具体的，所述生物标志物选自上述线粒体凋亡相关基因的SNP位点，包括但不限于rs724710、rs3789068、rs1045485、rs4488809、rs10937405、rs10916264、rs798755、rs1538140、rs4251864、rs5746136、rs8031、rs1055806和rs1056628。
本发明的第二个方面，提供检测上述生物标志物的物质在制备预测急性髓系白血病蒽环类化疗反应和/或易感性产品中的应用。
其中，所述预测急性髓系白血病蒽环类化疗反应至少包括对急性髓系白血病患者施用蒽环类药物进行化疗反应后的完全缓解情况。
所述急性髓系白血病患者包括难治性急性髓系白血病患者，所述难治性急性髓系白血病患者具体为标准剂量化疗两个疗程后仍未完全缓解的患者。
本发明的第三个方面，提供一种用于预测急性髓系白血病蒽环类化疗反应和/或易感性的系统，所述系统包括：
a)分析模块，所述分析模块包含：用于确定受试者的待测样品中选自上述生物标志物表达情况的检测物质，以及；
b)评估模块，所述分析模块包含：根据a)中确定的所述生物标志物表达情况对所述受试者进行评估。
本发明第四个方面，提供一种计算机可读存储介质，其上存储有程序，该程序被处理器执行时实现如本发明第三方面所述系统的功能。
本发明第五个方面，提供一种电子设备，包括存储器、处理器及存储在存储器上并可在处理器上运行的程序，所述处理器执行所述程序时实现如本发明第三方面所述系统的功能。
本发明的第六个方面，提供上述第一方面所述生物标志物作为靶点用于筛选急性髓系白血病药物的用途。
与现有技术方案相比，上述一个或多个技术方案具有如下有益效果：
上述技术方案采用CRISPR/Cas9筛选系统寻找AML蒽环类药物耐药相关基因，筛选出BCL2L11、CASP8、TP63、TP53BP2、PLAUR、SOD2、BNIP3L和MMP9等线粒体凋亡相关基因。然后，提取了AML患者和健康个体的DNA，并研究了这些基因的单核苷酸多态性对患者化疗反应、AML易感性和总生存期的影响。结果显示PLAUR基因中的SNP rs4251864与蒽环类诱导化疗后完全缓解的增加有关。SOD2中的rs4880与对两程化疗后的反应相关，而BCL2L11中的rs3789068与AML的易感性相关。上述技术方案AML中线粒体凋亡相关基因的SNPs与蒽环类化疗反应的相关性的研究结果为预测AML患者的治疗结果提供了重要的参考，具有良好的实际应用之价值。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明实施例中线粒体凋亡相关基因影响IDA对急性髓系白血病细胞的杀伤作用。(A)在THP-1细胞中筛选crispsr/Cas9的靶基因。这一筛选过程是基于低剂量IDA组和未治疗组之间sgRNA水平的变化。(B)用IDA或PBS处理7天的THP-1细胞生长情况。(C)生物学重复和处理条件之间归一化sgRNA读计数的等级相关性。(D)对筛选出的基因进行GO富集分析，发现与线粒体凋亡通路相关的比例最高。(E)从线粒体凋亡相关基因中筛选出影响IDA疗效的潜在基因。标记阳性(抗性)和阴性选择(敏感性)的基因。
图2为本发明实施例中在敏感和耐药细胞系中鉴定基因的mRNA表达水平。(A)在THP-1敏感(S)和耐药(R)细胞系中鉴定基因的mRNA表达水平。(B)鉴定基因在Kasumi-1敏感和耐药细胞系中的mRNA表达水平。
图3为本发明实施例中PLAUR和SOD2的mRNA在AML合并CR患者中的表达。(A)GA、AA、GG基因型AML患者PLAUR mRNA的表达(n＝12,n＝11和n＝4)；(B)AT和AA基因型AML患者中SOD2 mRNA的表达(n＝13和n＝12)。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
本发明的一种典型具体实施方式中，提供一种预测急性髓系白血病蒽环类化疗反应和/或急性髓系白血病易感性的生物标志物，所述生物标志物选自下列线粒体凋亡相关基因中的任意一个或多个：BCL2L11、CASP8、TP63、TP53BP2、PLAUR、SOD2、BNIP3L和MMP9；
更具体的，所述生物标志物选自上述线粒体凋亡相关基因的SNP位点，包括但不限于rs724710、rs3789068、rs1045485、rs4488809、rs10937405、rs10916264、rs798755、rs1538140、rs4251864、rs5746136、rs8031、rs1055806和rs1056628。
本发明通过研究发现，上述八个线粒体凋亡相关基因中，BCL2L11、CASP8、TP63和TP53BP2为抗性(耐药)基因，其在在蒽环类药物(去甲氧柔红霉素)诱导THP-1和kasumi-1耐药细胞系中表达水平均升高，而PLAUR、SOD2、BNIP3L和MMP9为敏感性基因，其在敏感细胞系中表达水平均降低。
进一步研究表明，rs4251864在共显性和隐性模型下与AML易感性显著相关。此外，在共显性模型下，rs4251864与AML易感性相关。在调整性别和年龄并进行FDR校正后，发现隐性GA基因型rs4251864与AML易感性显著相关；rs8031与难治性AML(标准剂量化疗两个疗程后仍未完全缓解的患者)的易感性显著相关；同时rs4251864GA基因型在诱导化疗第一疗程后与高完全缓解率相关。rs8031的AT基因型与两疗程诱导化疗后较高的完全缓解率相关。进一步研究表明，BCL2L11中rs3789068共显性GG基因型和rs3789068的G等位基因与AML易感性相关。
所述预测急性髓系白血病蒽环类化疗反应至少包括对急性髓系白血病患者施用蒽环类药物进行化疗反应后的完全缓解情况进行预测。
所述急性髓系白血病患者包括难治性急性髓系白血病患者，所述难治性急性髓系白血病患者具体为标准剂量化疗两个疗程后仍未完全缓解的患者，其通常预后差，生存时间短。
本发明的又一具体实施方式中，提供检测上述生物标志物的物质在制备预测急性髓系白血病蒽环类化疗反应和/或易感性产品中的应用。
其中，所述预测急性髓系白血病蒽环类化疗反应至少包括对急性髓系白血病患者施用蒽环类药物进行化疗反应后的完全缓解情况。
所述急性髓系白血病患者包括难治性急性髓系白血病患者，所述难治性急性髓系白血病患者具体为标准剂量化疗两个疗程后仍未完全缓解的患者。
所述检测上述生物标志物的物质包括但不限于基于质谱法、DNA微阵列法、测序法、等位基因特异性探针杂交、限制性片段分析、寡核苷酸连接检测、单链构象多态性分析、等位基因特异性扩增检测的物质，本领域技术人员可根据现有已知技术采用适宜的方法实现，在此不再赘述。
所述产品包括但不限于检测所述标志物表达水平的引物、探针、基因芯片、核酸制剂、试剂盒以及相关装置、设备等。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种用于预测急性髓系白血病蒽环类化疗反应和/或易感性的系统，所述系统包括：
a)分析模块，所述分析模块包含：用于确定受试者的待测样品中选自上述生物标志物表达情况的检测物质，以及；
b)评估模块，所述分析模块包含：根据a)中确定的所述生物标志物表达情况对所述受试者进行评估。
其中，所述待测样本可为人源样本，更具体的，所述待测样本包括受试者骨髓来源的单个核细胞。
所述检测上述生物标志物的物质包括但不限于基于质谱法、DNA微阵列法、测序法、等位基因特异性探针杂交、限制性片段分析、寡核苷酸连接检测、单链构象多态性分析、等位基因特异性扩增检测的物质，在此不再赘述。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种计算机可读存储介质，其上存储有程序，该程序被处理器执行时实现上述系统的功能。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种电子设备，包括存储器、处理器及存储在存储器上并可在处理器上运行的程序，所述处理器执行所述程序时实现上述系统的功能。
本发明的又一具体实施方式中，提供上述生物标志物作为靶点用于筛选急性髓系白血病药物的用途。
本发明的又一具体实施方式中，可以利用候选药物使用前和使用后对这些生物标志物的影响，从而确定候选药物是否可以用于预防或治疗弥漫大B细胞淋巴瘤。
以下结合具体实例对本发明作进一步的说明，以下实例仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。如果实施例中未注明的实验具体条件，通常按照常规条件，或按照销售公司所推荐的条件；在本发明没有特别限定，均可通过商业途径购买得到。
实施例
材料与方法
患者与对照组
从2011年6月至2021年12月，山东大学齐鲁医院血科共招募279例新诊断的AML(非M3)患者。所有患者(中位年龄:49岁；范围:13-87岁)根据世界卫生组织分类系统和国家综合癌症网络(NCCN)指南标准进行诊断。根据2017年欧洲白血病网络标准评估AML的治疗反应。总生存期(OS)定义为存活患者从诊断到死亡或最后一次随访日期的时间。此外，321名健康个体(中位年龄:40岁；年龄:20-88岁)作为对照组(表1)。
表1.AML患者的临床特点.
AML,急性髓系白血病；FAB,法美英分型；CR,完全缓解；N/A,未提供.
CRISPR/Cas9筛选
使用CRISPR-pooltm SAM载体(GeneChem,上海,中国)进行CRISPR/Cas9筛选时，使用了CRISPR筛选文库，其中包含70290个sgRNAs，靶向23430个基因和对照基因，平均每个基因有3个sgRNAs。首先用MS2-P65-HSF-Hygro慢病毒转染THP-1细胞，然后用500μg/mLhygromycin B(#V900372；Sigma-Aldrich，北京，中国)。随后用sgRNA-dCas9-VP64-blasticidin慢病毒感染这些细胞，感染倍数约为0.25，覆盖率为300倍，培养2天。然后，用4μg/mL囊尾蚴素(#203351；Millipore,北京，中国)培养72h，培养5天，以保持300×覆盖率，直到筛选测定。将第0天作为测序基线后，将THP-1细胞分为两组:一组在没有药物治疗的情况下生长，作为未治疗对照组，另一组在持续存在低剂量去甲氧柔红霉素(3ng/mL)的情况下生长。筛选期7d。收集两组细胞进行高通量sgRNA测序，筛选出两组细胞间sgRNA表达水平差异较大的基因(图1)。
DNA提取和基因分型
使用商业DNA提取试剂盒(TianGen,Beijing,China)从骨髓来源的单个核细胞中提取基因组DNA。用分光光度计检测提取的DNA的浓度和纯度。使用飞行时间质谱(MassARRAY)系统(华大基因科技，深圳，中国)检测所选SNP的基因型，并使用多重聚合酶链反应(PCR)、单碱基延伸反应、树脂纯化和质谱分析。RNA提取和实时RT-PCR
通过TRIzol试剂(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)从单个核细胞中提取总RNA，并通过PrimeScript RT reagent Kit Perfect Real Time(Takara Bio,Japan)将其转化为cDNA。定量PCR在LightCycler 480II Real-Time PCR系统(Roche,Switzerland)上按照标准方案进行。在反应结束时，测量循环阈值(CT)，并测量三个独立重复的平均CT。GAPDH作为内参基因。
结果
基因和单核苷酸多态性
收集用IDA处理7天的THP-1细胞和未处理的对照细胞进行高通量sgRNA测序。两组细胞间sgRNA表达水平高度变化的基因被认为可能导致IDA耐药。首先，我们对差异表达基因进行了功能通路富集分析，发现大部分集中在线粒体凋亡相关通路。然后，从这些途径中筛选出8个最有可能的基因(BCL2L11、CASP8、TP63、TP53BP2、PLAUR、SOD2、BNIP3L和MMP9)。测序结果的分析是生物信息学技术人员和研究团队的合作成果。结合前期研究结果，我们进一步筛选出8个相关基因中共13个SNPs进行分析(表2)。
表2.选择的基因和SNP位点
*不符合Hardy-Weinberg平衡(HWE)或者不适合进行HapMap的SNP位点。
为进一步验证所选基因对蒽环类药物敏感性的影响，采用RT-PCR方法验证筛选基因在蒽环类药物(IDA)诱导THP-1和kasumi-1耐药细胞系的表达情况。CRISPR/Cas9筛选的4个耐药基因在两种耐药细胞系中表达水平均升高，而4个敏感基因在敏感细胞系中表达水平均降低，这一结果与CRISPR/Cas9筛选的结果一致(图2)。
基因多态性与蒽环类诱导化疗反应相关性
279例AML患者中，190例(68.1％)接受了蒽环类诱导化疗。在首次诱导化疗后，108例(56.84％，108/190)患者达到CR，为评估SNPs与第一个疗程诱导化疗反应之间的关系，将190例患者根据药物反应分为CR组和非CR组。卡方检验或Fisher's精确检验初步筛选显示，纤溶酶原激活物和尿激酶受体(PLAUR)基因中的rs4251864在共显性和隐性模型下与AML易感性显著相关(P＝0.003和P＝0.007)。此外，在共显性模型下，单因素logistic回归分析也显示rs4251864与AML易感性相关(P＝0.015)。在调整性别和年龄并进行FDR校正后，发现隐性GA基因型rs4251864与AML易感性显著相关，CR增加(P＝0.015)(表3)。
表3.AML首程含蒽环类诱导化疗后反应与snp位点的相关性
基因多态性与两疗程蒽环类化疗敏感性的相关性
标准剂量化疗两个疗程后仍未完全缓解的患者被定义为难治性AML，通常预后差，生存时间短。180例接受两个疗程蒽环类化疗的患者分为CR组和非CR组。在第一个疗程的化疗后，161例患者接受了第二个疗程的化疗。在第二个化疗疗程结束时，129例患者达到CR，而另外32例患者没有达到CR。卡方检验或Fisher精确检验的初步筛选显示，在共显性和隐性模式下，超氧化物歧化酶2(SOD2)基因中的rs8031 SNP与难治性AML的易感性显著相关(P＝0.006和P＝0.006)。单因素logistic回归分析也显示rs8031与难治性AML易感性相关(P＝0.015和P＝0.011)。经性别和年龄校正后，rs8031共显性AT和隐性TT基因型与难治性AML易感性显著相关(P＝0.015和P＝0.011)。FDR校正后的结果也有统计学意义(表4)。
表4.两程化疗后反应与snp的相关性
基因多态性与化疗反应相关位点的验证
为了验证PLAUR rs4251864的GA基因型与含蒽环类药物的首次诱导化疗反应之间的关系，我们选取了12例首次诱导化疗后达到CR的GA基因型患者和11例未达到CR的患者，通过RT-PCR检测骨髓单核细胞PLAUR的mRNA表达。结果发现，rs4251864GA基因型在CR患者中的表达高于无CR患者(P＝0.014)。这也证实了rs4251864GA基因型在诱导化疗第一疗程后与高CR率相关。然后选择9例rs8031 AT基因型患者在化疗2个疗程后达到CR,4例未达到CR，通过RT-PCR检测SOD2的mRNA表达。研究发现，CR患者中SOD2的表达高于无CR患者(P＝0.005)。这证实了SOD2 rs8031的AT基因型与2疗程诱导化疗后较高的CR率相关(图3)。
基因多态性与AML易感性的相关性
我们使用四种遗传模型(共显性、显性、隐性和等位基因)分析了所选snp与AML易感性之间的关联，并分析了每个位点与AML之间的关系。卡方检验或Fisher精确检验初步筛选显示，bcl-2样蛋白11(BCL2L11)基因(共显性、显性和等位基因模型)中的snprs3789068、BCL2L11(等位基因模型)中的snp rs724710、肿瘤蛋白P53结合蛋白2(TP53BP2)基因(共显性模型)中的snp rs798755、PLAUR(显性和等位基因模型)中的snp rs4251864与AML易感性显著相关(P<0.05)。单因素logistic回归分析显示，以下SNPs与AML易感性相关:共显性、显性和等位基因模式下BCL2L11中的rs3789068(P<0.05)；BCL2L11等位基因模型下rs724710表达(P＝0.027)；PLAUR基因在显性和等位基因模型下表达rs4251864(P＝0.045和P＝0.043)。所有上述单因素logistic回归分析均对性别和年龄进行了调整。经过FDR校正后，BCL2L11中共显性GG基因型和rs3789068的G等位基因被发现与AML易感性相关(q<0.05)(表5)。
表5.SNP位点与AML易感性
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种预测急性髓系白血病蒽环类化疗反应和/或易感性的生物标志物，所述生物标志物选自下列线粒体凋亡相关基因中的任意一个或多个：BCL2L11、CASP8、TP63、TP53BP2、PLAUR、SOD2、BNIP3L和MMP9；
进一步的，所述生物标志物选自上述线粒体凋亡相关基因的SNP位点，包括rs724710、rs3789068、rs1045485、rs4488809、rs10937405、rs10916264、rs798755、rs1538140、rs4251864、rs5746136、rs8031、rs1055806和rs1056628。
2.如权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述预测急性髓系白血病蒽环类化疗反应至少包括对急性髓系白血病患者施用蒽环类药物进行化疗反应后的完全缓解情况进行预测；
所述急性髓系白血病患者包括难治性急性髓系白血病患者，所述难治性急性髓系白血病患者具体为标准剂量化疗两个疗程后仍未完全缓解的患者。
3.检测权利要求1或2所述生物标志物的物质在制备预测急性髓系白血病蒽环类化疗反应和/或易感性产品中的应用。
4.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述预测急性髓系白血病蒽环类化疗反应至少包括对急性髓系白血病患者施用蒽环类药物进行化疗反应后的完全缓解情况；
所述急性髓系白血病患者包括难治性急性髓系白血病患者，所述难治性急性髓系白血病患者具体为标准剂量化疗两个疗程后仍未完全缓解的患者。
5.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述检测生物标志物的物质包括基于质谱法、DNA微阵列法、测序法、等位基因特异性探针杂交、限制性片段分析、寡核苷酸连接检测、单链构象多态性分析、等位基因特异性扩增检测的物质；
所述产品包括检测所述生物标志物表达情况的引物、探针、基因芯片、核酸制剂、试剂盒以及相关装置、设备。
6.一种用于预测急性髓系白血病蒽环类化疗反应和/或易感性的系统，所述系统包括：
a)分析模块，所述分析模块包含：用于确定受试者的待测样品中选自上述生物标志物表达情况的检测物质，以及；
b)评估模块，所述分析模块包含：根据a)中确定的所述生物标志物表达情况对所述受试者进行评估。
7.如权利要求6所述系统，其特征在于，所述待测样本为人源样本，更具体的，所述待测样本包括受试者骨髓来源的单个核细胞；
所述检测上述生物标志物的物质包括基于质谱法、DNA微阵列法、测序法、等位基因特异性探针杂交、限制性片段分析、寡核苷酸连接检测、单链构象多态性分析、等位基因特异性扩增检测的物质。
8.一种计算机可读存储介质，其上存储有程序，其特征在于，该程序被处理器执行时实现权利要求6或7所述系统的功能。
9.一种电子设备，包括存储器、处理器及存储在存储器上并可在处理器上运行的程序，其特征在于，所述处理器执行所述程序时实现权利要求6或7所述系统的功能。
10.权利要求1或2所述生物标志物作为靶点用于筛选急性髓系白血病药物的用途。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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