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CN116041421B - 一种肿瘤靶向激活的铂类化合物、其制备方法及应用 - Google Patents

一种肿瘤靶向激活的铂类化合物、其制备方法及应用 Download PDF

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CN116041421B
CN116041421B CN202310342087.XA CN202310342087A CN116041421B CN 116041421 B CN116041421 B CN 116041421B CN 202310342087 A CN202310342087 A CN 202310342087A CN 116041421 B CN116041421 B CN 116041421B
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Abstract

本发明公开了一种肿瘤靶向激活的铂类化合物、其制备方法及应用，所述肿瘤靶向激活的铂类化合物以包含铂元素的药物为前体，添加R1和Ract基团进行修饰，最后通过酶或酸激活的方式释放。本方法制备得到的产物相比于现有临床药物，不仅具有更好的整体靶向性和安全性，对癌细胞的杀伤效果也有显著提升，具有良好的抗肿瘤药效，同时还显著改善了铂类药物的水溶性。

Description

一种肿瘤靶向激活的铂类化合物、其制备方法及应用
技术领域
本发明涉及生物医药合成技术领域，具体涉及一种肿瘤靶向激活的铂类化合物、其制备方法及应用。
背景技术
自从1967年人们发现顺铂有抗癌活性以来，铂金属抗癌药物的应用和研究得到了迅速的发展，现在已形成以第一代顺铂、第二代卡铂和第三代奥沙利铂为主导的二价铂类癌症临床用药。目前，二价铂类已经成为临床癌症治疗不可或缺的化疗药物。顺铂水溶性差、对正常组织的毒副作用大、进入人体后容易被清除以及容易引起耐药性。与顺铂相比，卡铂具有很好的化学稳定性，溶解度高出16倍，且肾毒性比顺铂低很多。
细胞毒性是迄今为止应用临床的顺铂类抗癌药物的共性，为了解决其严重的毒副作用和耐药性问题，人们一直在尝试寻找新的铂药，主要有以下几种策略：研制新型的铂类药物纳米载药制剂或者胶束制剂，开发新型的铂类药物，对现有的铂类药物进行修饰等等。
基于癌细胞表面存在的大量糖功能受体，利于癌细胞对能量的摄入的原理，公开号为CN109678909B的发明专利，利用糖基化修饰得到了四价铂类化合物，糖基化修饰改善了药物的溶解性，具有一定的靶向性，降低了毒副作用，然而用糖基化修饰的药物仍有一系列问题，如不同糖基类型、糖基数量与药物传递系统的靶向性没有明确的关系，糖基化药物进入体内后糖基配体是否会受到各种生理屏障、代谢酶的清除，从而限制其靶向性。
白蛋白是最丰富的血浆蛋白质，其生理功能是多重的，就药物递送而言最重要的是，白蛋白作为用于多种分子如胆红素或金属离子的生理学载体而言具有非常强的结合性质，已知的是，由于毛细血管的泄露和淋巴回流缺陷的联合，白蛋白在恶性组织中聚集，也称为高通透性和滞留效应（Enhanced permeability and retention，EPR）。因此，增加药物与血清白蛋白结合将药物递送靶向至肿瘤组织是有效增强药物靶向性的途径。基于这一原理，C·科沃尔公开了一种用于癌症疗法的单马来酰亚胺官能化的铂化合物，但是单马来酰亚胺与白蛋白的结合能力有限，且不确定其作用机理，如在哪里释放断裂，因此该类型铂化合物的靶向性也有一定的局限性。
因此，本领域需要一种新型的肿瘤靶向激活的铂类化合物，提高肿瘤靶向性的同时还能够保持铂类化合物本身的低毒副作用等特性。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种肿瘤靶向激活的铂类化合物、其制备方法及应用，能够提高肿瘤靶向性的同时，还能够优化铂类化合物本身的毒副作用。
一种肿瘤靶向激活的铂类化合物，所述铂类化合物结构为：
R1-Ract-D；
其中，R1为修饰基团、具有靶向定位的靶向基团中的至少一种；
Ract为激活基团，所述激活基团为具有酶激活、酸性激活中的至少一种基团；
D为包含铂元素的药物。
具体地，所述Ract为酶激活基团时，所述D选自以下化合物中的一种：
（X1）、 （X2）、 （X3）、 （X4）、
（X5）、 （X6）、 （X7）、 （X8）。
具体地，所述Ract为酶激活基团时，所述酶激活基团的结构如下：
；
其中，所述酶激活基团的羧基端与D连接，所述酶激活基团的氨基端与R1连接。
具体地，所述Ract为酸性激活基团时，所述D选自如下化合物中的一种：
（X9）、 （X10）、 （X11）、 （X12）、
（X13）、 （X14） 。
具体地，所述Ract为酸性激活基团时，所述酸性激活基团的结构选自如下化合物中的一种：
；
（Ract1）、 （Ract2）；
其中，所述酸性激活基团的双键端与D连接，所述酸性激活基团的氨基端与R1连接。
具体地，所述Ract为酶激活与酸性基团共同激活时，所述激活基团的结构选自如下几种化合物中的一种：
（Ract3）、 （Ract4）；
其中，所述激活基团的双键端与D连接，所述激活基团的氨基端与R1连接；
所述D选自如下化合物中的一种：
（X9）、 （X10）、 （X11）、 （X12）、
（X13）、 （X14） 。
具体地，所述修饰基团包括具有调节化合物水溶性作用的修饰基团和在肿瘤微环境中激活的修饰基团；
当所述R1为具有调节化合物水溶性作用的修饰基团时，所述R1选自碳链或PEG链，所述碳链为直链或环状碳链，所述直链的长度为2-8个碳原子，所述PEG链的长度为2-24个PEG分子；
当所述R1为在肿瘤微环境中的激活修饰基团时，所述R1选自MI或MI-R2-，其中，MI为马来酰亚胺基团；
其中，R2为具有调节药物水溶性作用的修饰基团，所述R2选自碳链或PEG链，所述碳链为直链或环状碳链，所述直链的长度为2-8个碳原子，所述PEG链的长度为2-24个PEG分子。
具体地，当所述R1为具有靶向定位的靶向基团时，所述R1选自靶向基团、靶向基团与具有调节药物水溶性作用的修饰基团的结合基团、或靶向基团与在肿瘤微环境中的激活修饰基团结合基团中的一种；
其中，靶向基团选自如下基团中的一种：
、、、 ；
其中，具有调节药物水溶性作用的修饰基团选自碳链或PEG链，所述碳链为直链或环状碳链，所述直链的长度为2-8个碳原子，所述PEG链的长度为2-24个PEG分子；
肿瘤微环境中的激活修饰基团，所述R1选自MI或MI-R2-，其中，MI为马来酰亚胺基团；
其中R2为具有调节药物水溶性作用的修饰基团，所述R2选自碳链或PEG链，所述碳链为直链或环状碳链，所述直链的长度为2-8个碳原子，所述PEG链的长度为2-24个PEG分子。
本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-8中任一项所述的肿瘤靶向激活的铂类化合物或其药学上可接受的盐和可接受的载体。
本发明还提供了一种肿瘤靶向激活的铂类化合物的制备方法，包括以下步骤：
1）、以铂类化合物为前体，添加R1基团，所述R1基团为修饰基团和具有靶向定位的靶向基团中的至少一种，所述修饰基团包括具有调节化合物水溶性作用的修饰基团和在肿瘤微环境中激活的修饰基团；
2）、添加Ract基团，所述Ract基团为激活基团，所述Ract为具有酶激活、酸性激活中的至少一种基团。
具体地，所述肿瘤靶向激活的铂类化合物，最终通过酶和/或酸性方式激活，释放出所述铂类化合物。
具体地，所述Ract为酶激活基团时，所述前体选自以下化合物中的一种：
（X1）、 （X2）、 （X3）、 （X4）、
（X5）、 （X6）、 （X7）、 （X8）。
具体地，所述Ract为酶激活基团时，所述酶激活基团的结构如下：
；
其中，所述酶激活基团的羧基端与前体连接，所述酶激活基团的氨基端与R1连接。
具体地，所述Ract为酸性激活基团时，所述前体选自如下化合物中的一种：
（X9）、 （X10）、 （X11）、 （X12）、
（X13）、 （X14） 。
具体地，所述Ract为酸性激活基团时，所述酸性激活基团的结构选自如下化合物中的一种：
；
（Ract1）、 （Ract2）；
其中，所述酸性激活基团的双键端与前体连接，所述酸性激活基团的氨基端与R1连接。
具体地，所述Ract为酶激活与酸性基团共同激活时，所述激活基团的结构选自如下几种化合物中的一种：
（Ract3）、 （Ract4）；
其中，所述激活基团的双键端与前体连接，所述激活基团的氨基端与R1连接；
其中，所述铂类化合物选自如下化合物中的一种：
（X9）、 （X10）、 （X11）、 （X12）、
（X13）、 （X14） 。
具体地，所述修饰基团包括具有调节化合物水溶性作用的修饰基团和在肿瘤微环境中激活的修饰基团；
当所述R1为具有调节化合物水溶性作用的修饰基团时，所述R1选自碳链或PEG链，所述碳链为直链或环状碳链，所述直链的长度为2-8个碳原子，优选地，所述直链的长度为4-8个碳原子，更优选地，所述直链的长度为4-6个碳原子，所述PEG链的长度为2-24个PEG分子，优选地，所述PEG链的长度为6-20个PEG分子，更优选地，所述PEG链的长度为10-16个PEG分子；
当所述R1为在肿瘤微环境中的激活修饰基团时，所述R1选自马来酰亚胺MI或MI-R2-；
其中，R2为具有调节药物水溶性作用的修饰基团，所述R2选自碳链或PEG链，所述碳链为直链或环状碳链，所述直链的长度为2-8个碳原子，优选地，所述直链的长度为4-8个碳原子，更优选地，所述直链的长度为4-6个碳原子，所述PEG链的长度为2-24个PEG分子，优选地，所述PEG链的长度为6-20个PEG分子，更优选地，所述PEG链的长度为10-16个PEG分子。
具体地，当所述R1为具有靶向定位的靶向基团时，所述R1选自靶向基团、靶向基团与具有调节药物水溶性作用的修饰基团的结合基团、或靶向基团与在肿瘤微环境中的激活修饰基团结合基团中的一种；
其中，靶向基团选自如下基团中的一种：
、、、 ；
其中，具有调节药物水溶性作用的修饰基团选自碳链或PEG链，所述碳链为直链或环状碳链，所述直链的长度为2-8个碳原子，优选地，所述直链的长度为4-8个碳原子，更优选地，所述直链的长度为4-6个碳原子，所述PEG链的长度为2-24个PEG分子，优选地，所述PEG链的长度为6-20个PEG分子，更优选地，所述PEG链的长度为10-16个PEG分子；
肿瘤微环境中的激活修饰基团，选自MI或MI-R2-，其中，MI为马来酰亚胺基团；
其中R2为具有调节药物水溶性作用的修饰基团，所述R2选自碳链或PEG链，所述碳链为直链或环状碳链，所述直链的长度为2-8个碳原子，优选地，所述直链的长度为4-8个碳原子，更优选地，所述直链的长度为4-6个碳原子，所述PEG链的长度为2-24个PEG分子，优选地，所述PEG链的长度为6-20个PEG分子，更优选地，所述PEG链的长度为10-16个PEG分子。
本发明还公开了一种根据前述的肿瘤靶向激活的铂类化合物在制备治疗癌症的药物中的应用，所述癌症包括胃肠癌、结肠直肠癌、结肠癌、肝癌、肝细胞癌、胰腺癌、胆道癌、胃癌、泌尿生殖系统癌症、膀胱癌、睾丸癌、宫颈癌、恶性间皮瘤、骨原性肉瘤、食管癌、喉癌、前列腺癌、激素抵抗性前列腺癌、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、乳癌、三阴性乳癌、血液癌症、白血病、急性原始淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤、弥散性大B-细胞淋巴瘤、卵巢癌、脑癌、成神经细胞瘤、尤因肉瘤、肾癌、表皮样癌、皮肤癌、黑色素瘤和口癌。
与现有技术相比，本发明的有益效果包括但不限于：
1. 本发明提供的肿瘤靶向激活的铂类化合物，其结构通式为R1-Ract-D；经过R1基团的结构修饰，提升了化合物的水溶性和对肿瘤的整体靶向性，经过Ract基团的修饰，本发明提供的铂类化合物进入体内后，将前体铂类化合物释放，使其直接进入到肿瘤内部，从而提升了药物对肿瘤的靶向性，且在肿瘤靶向能力高的同时，优化铂类化合物的毒副作用；
2. 本发明提供的肿瘤靶向能力高的铂类化合物的制备方法合成的肿瘤靶向激活的铂类化合物，经验证，本方法制备得到的产物能被Legumain酶或者FAP酶切割并释放含铂元素的小分子化合物，相比于临床药物如卡铂等，不仅具有更好的肿瘤靶向性，对癌细胞的杀伤效果也有显著提升，具有良好的抗肿瘤药效，同时还显著改善了铂类药物的水溶性，降低化合物本身的毒副作用。
附图说明
图1是实施例二十一中，本发明提供的铂类化合物在4T1细胞中的毒性实验结果图；
图2是实施例二十二中，本发明提供的铂类化合物在MDA-MB-231细胞中的毒性实验结果图；
图3是实施例二十三中，本发明提供的铂类化合物在SK-OV3细胞中的毒性实验结果图；
图4是实施例二十四中，本发明提供的铂类化合物在CT-26模型中的给药天数-肿瘤体积变化图；
图5是实施例二十四中，本发明提供的铂类化合物在CT-26模型中的小鼠体重变化图；
图6是实施例二十六中，不同剂量的铂类化合物与卡铂在CT-26模型中的给药天数-肿瘤体积变化图；
图7是实施例二十七中，不同类型的铂类化合物与顺铂、奥沙利铂在CT-26模型中的给药天数-肿瘤体积变化图；
图8是实施例二十七中，不同类型的铂类化合物与顺铂、奥沙利铂在CT-26模型中的小鼠体重变化图；
图9是实施例二十八中，本发明提供的铂类化合物与Anti-mPD-1联用在MC38肿瘤模型治疗中的给药天数-肿瘤体积变化图；
图10是实施例二十八中，本发明提供的铂类化合物与Anti-mPD-1联用在MC38肿瘤模型治疗中的小鼠体重变化图。
具体实施方式
下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。以下实施例中所使用的材料、仪器和试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例中所使用的技术手段，如无特殊说明，均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例一
铂类化合物的抗癌作用机制被越来越多的科研工作者所重视，普遍认为的就是金属-细胞作用的多靶模型，主要的靶分子就是DNA，实验研究证明铂类药物进入人体内后，首先遇到细胞膜，第一步，需要完成跨膜转移，药物能否穿过膜运转进入细胞主要是由细胞膜的结构和药物的化学特性来决定的。第二步是水合解离。经第一步进入细胞内的药物，在一定条件下和水结合并随后解离成带二价正电荷的水合氨络离子，第三步是靶向迁移，进入细胞内经水合解离后的带二价正电荷的水合氨络离子铂因静电引力作用，会迅速地向带有负电荷的位于细胞核的靶目标遗传物质DNA迁移，最后一步是DNA加合［Pt(NH3)2(H2O)2］2+中的配位基水很容易被DNA中的碱基嘌呤所取代形成加合物，从而导致DNA复制障碍。
根据化合物的作用机理来看，首先要解决的是跨膜转移，药物能否跨膜转移主要是由细胞膜的结构和化合物的化学特性来决定的，因此首先应解决前体药物的水溶性问题，即：
以铂类化合物为前体，添加具有调节化合物水溶性作用的修饰基团和在肿瘤微环境中激活的修饰基团；调节化合物水溶性的基团选自碳链或PEG链，肿瘤微环境中的激活修饰基团选自MI或MI-R2-基团，其中，MI为马来酰亚胺基团，R2可以选择具有调节化合物水溶性作用的修饰基团，提升化合物水溶性，更有利于化合物跨膜转移后，经酶和/或酸性方式激活，将含铂元素的药物进行释放，从而靶向的针对肿瘤细胞起作用。
解决水溶性问题后，添加Ract基团，Ract基团为激活基团，具有酶激活、酸性激活中的至少一种基团，肿瘤靶向激活的铂类化合物，最终通过酶和/或酸性方式激活，释放出所述铂类化合物，从而通过靶向激活的方式提升药物的整体靶向性。当Ract基团为具有酶激活、酶激活和酸性激活时，激活酶为Legumain酶或者FAP酶。
下述实施例将逐一介绍本原理下的多类型的铂类化合物，均可通过靶向激活的方式提升铂类化合物的定位性，从而更好的起到靶向杀灭肿瘤细胞的作用。
本发明提供的肿瘤靶向激活的铂类化合物包括但不限于以下结构：
、、、、、、、、、、、。
以下实施例中所用原料的编号、名称和来源如下表1所示：
表1：实施例相关化合物中文名称及来源
下述实施例中，4T1细胞为小鼠乳腺癌细胞，MDA-MB-231细胞为人乳腺癌细胞，SK-OV3为人卵巢癌细胞，CT-26模型为小鼠结肠癌细胞模型。
实施例二 APPA-Pt的合成
1. 化合物 1-Ⅰ的合成
将丙二酸二叔丁酯（10g，46.2mmol）溶于干燥的N,N-二甲基甲酰胺（200mL）中，冰浴搅拌下缓慢分批加入钠氢（3.6g，90.0mmol，60%），冰浴下搅拌20分钟。反应液缓慢滴加N-(3-溴丙基)邻苯二甲酰亚胺（12.8g，47.8mmol）的40mL N,N-二甲基甲酰胺溶液，撤去冰浴，反应液室温（20oC）搅拌18h。反应液加水（500mL）淬灭，甲基叔丁基醚萃取（200mL*2）。合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸干得化合物 1-Ⅰ无色油状物（10.4g，收率55.8%）。
2. 化合物 1-Ⅱ的合成
将化合物 1-Ⅰ（8.2g，20.4mmol）溶于无水乙醇（300mL）中，加入85%水合肼（3.6mL），反应液升温至70oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液冷却至室温（25oC），过滤，滤液减压蒸干。残余物溶于0.5M氢氧化钠水溶液（100mL），用二氯甲烷萃取（150mL*2），合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸干得化合物 1-Ⅱ黄色油状物（4.6g，收率82.5%）
3. 化合物 APPA-Pt 的合成
将顺式二碘二氨合铂（2g，4.16mmol）加入到水（20mL）中，加入硝酸银（1.37g，8.08mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。将化合物 1-II（500mg，1.83mmol）溶于1,4-二氧六环（10mL）中，加入4M HCl/1,4-二氧六环（5mL，20mmol），反应液室温25oC反应1小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干，残余物加入8mL水，用1M NaOH水溶液调pH至5-6，滴加入上述铂的滤液。反应液室温20oC反应5小时。反应液过滤，得APPA-Pt黄色固体（110 mg，收率6.8%）。MS m/z (ESI):389.3[M+H]+。
本实施例得到的APPA-Pt，作为本发明提供的肿瘤靶向激活的铂类化合物的前体药物，应用于后续化合物的合成。
实施例三 6PEG-AAN-APPA-Pt的合成
1.化合物 1-Ⅱ的合成见实施例二。
2.化合物 1-Ⅳ的合成
将化合物 1-Ⅲ（10.0g，26.0mmol）溶于二氯甲烷（150mL）中，冰浴冷却下加入N-羟基丁二酰亚胺（3.6g，31.3mmol）和二环己基碳二亚胺（6.9g，33.8mmol），反应液室温25oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液过滤，加入水（150mL）萃取，水相二氯甲烷（150mL）萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化（DCM:MeOH=20:1）得化合物1-Ⅳ白色固体（9.6g，收率77.3%）。
4. 化合物 1-Ⅴ的合成
将化合物 1-Ⅳ（10.0g，20.8mmol）溶于四氢呋喃（150mL）中，冰浴冷却下加入H-Asn(Trt)-OH（8.0g，20.8mmol）和二异丙基乙胺（8.0g，62.5mmol），反应液室温25oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干，加入水（200mL），二氯甲烷萃取（150mL*2），合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸干。残余物用叔丁醇甲醚打浆得化合物 1-Ⅴ白色固体（12.0g，收率78.1%）。
5. 化合物 1-Ⅵ的合成
将化合物 1-Ⅴ（8.0g，10.8mmol）和化合物 1-Ⅱ（4.0g，14.6mmol）溶于二氯甲烷（150mL）中，冰浴冷却下加入苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU）（6.0g，15.8mmol）和二异丙基乙胺（4.0g，31.0mmol），反应液室温25oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液加入水（300mL），分液，水相二氯甲烷萃取（150mL*2），合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化（DCM:MeOH=20:1）得化合物 1-Ⅵ白色固体（9.6g，收率89.4%）。
6. 化合物 1-Ⅶ的合成
将化合物 1-Ⅵ（9.6g，9.66mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（100mL）中，加入哌啶（10mL），反应液室温25oC反应1小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化（DCM:MeOH=15:1）得化合物 1-Ⅶ淡黄色泡沫状固体（4.2g，收率56.4%）。
7. 化合物 1-Ⅷ的合成
将化合物 1-Ⅶ（300mg，0.39mmol）溶于二氯甲烷（15mL）中，加入五甘醇单甲醚乙酸（180mg，0.58mmol），苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU）（250mg，0.66mmol）和二异丙基乙胺（300mg，2.33mmol）。反应液室温20oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化（DCM:MeOH=20:1）得化合物 1-Ⅷ白色固体（300mg，收率72.3%）。
8. 化合物 1-Ⅸ的合成
化合物 1-Ⅷ（300mg，0.28mmol）溶于二氯甲烷（8mL）中，加入三氟乙酸（5mL），反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物用叔丁醇甲醚和乙酸乙酯分别打浆，晾干得化合物 1-Ⅸ白色固体（180mg，收率83.1%）。
9. 化合物 6PEG-AAN-APPA-Pt 的合成
将顺式二碘二氨合铂（130mg，0.27mmol）加入到水（10mL）中，加入硝酸银（92mg，0.54mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。化合物 1-Ⅸ（180mg，0.25mmol）溶于水（5mL）中，用0.5M氢氧化钠水溶液调pH至6-7，滴加入上述滤液。反应液室温20oC反应2小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得6PEG-AAN-APPA-Pt白色固体（59mg，收率25.2%）。MS m/z (ESI):937.8[M+H]+。
实施例四 Glu-Pt-DACH的合成
1.化合物2-Ⅰ的合成
将氯亚铂酸钾（600mg，1.45mmol）溶于20mL水中，加入左旋-反式-1,2-环己二胺（180mg，1.58mmol）。反应液室温25oC搅拌5小时。反应液过滤，固体晾干得化合物2-Ⅰ黄色固体（470mg，收率85.3%）。
2.化合物Glu-Pt-DACH的合成
将化合物2-Ⅰ（300mg，0.79mmol）加入到水（15mL）中，加入硫酸银（246mg，0.79mmol）。反应液避光，室温25oC搅拌18h。反应液过滤。将L-谷氨酸（116mg，0.79mmol）溶于水（10mL）中，加入氢氧化钡（135.4mg，0.79mmol），滴加入上述滤液，室温25oC搅拌5小时。反应液过滤，滤液冻干。残余物用甲醇打浆得产物Glu-Pt-DACH黄色固体（170mg，收率47.5%）。MS m/z (ESI):455.5[M+H]+。
本实施例得到的Glu-Pt-DACH，作为本发明提供的肿瘤靶向激活的铂类化合物的前体药物，应用于后续化合物的合成。
实施例五 6PEG-AAN-Glu-Pt的合成
1.化合物 3-Ⅰ的合成
将化合物1-Ⅴ（2.0g，2.7mmol）和L-谷氨酸二叔丁酯盐酸盐（750mg，2.5mmol）加入到二氯甲烷（100mL）中，冰浴冷却下加入苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU）（1.4g，3.7mmol）和二异丙基乙胺（1.5g，11.6mmol），反应液室温25oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液加入水（100mL），分液，水相二氯甲烷萃取（100mL*2），合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化（DCM:MeOH=20:1）得化合物 3-Ⅰ白色固体（1.8g，收率71.7%）。
2.化合物 3-Ⅱ的合成
将化合物 3-Ⅰ（1.8g，1.8mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（10mL）中，加入哌啶（0.8mL），反应液室温25oC反应1小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化（DCM:MeOH=15:1）得化合物 3-Ⅱ白色固体（1.3g，收率94.8%）。
3.化合物 3-Ⅲ的合成
将化合物 3-Ⅱ（400mg，0.53mmol）溶于二氯甲烷（30mL）中，加入五甘醇单甲醚乙酸（200mg，0.64mmol），苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU）（270mg，0.71mmol）和二异丙基乙胺（350mg，2.7mmol）。反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化（DCM:MeOH=20:1）得化合物 3-Ⅲ无色油状物（420mg，收率75.2%）。
4.化合物 3-Ⅳ的合成
化合物 3-Ⅲ（420mg，0.40mmol）溶于二氯甲烷（5mL）中，加入三氟乙酸（5mL），反应液室温20oC反应1小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物用乙酸乙酯打浆，得化合物 3-Ⅳ黄色固体（230mg，收率82.6%）。
5.化合物6PEG-AAN-Glu-Pt的合成
将顺式二碘二氨合铂（250mg，0.52mmol）加入到水（10mL）中，加入硝酸银（171mg，1.01mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。化合物3-Ⅳ（100mg，0.14mmol）溶于水（5mL）中，用0.5M氢氧化钠水溶液调pH至6-7，滴加入上述滤液。反应液室温25oC反应2小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得6PEG-AAN-Glu-Pt白色固体（13 mg，收率10.0%）。MS m/z (ESI):923.6[M+H]+。
实施例六 6PEG-AAN-Glu-Pt-DACH的合成
将实施例四中得到的化合物2-Ⅰ（95mg，0.25mmol）加入到水（10mL）中，加入硫酸银（80mg，0.25mmol）。反应液避光，室温30oC搅拌20h。反应液过滤。将化合物3-Ⅳ（50mg，0.072mmol）溶于水（5mL）中，加入氢氧化钡（75mg，0.44mmol），滴加入上述滤液，室温30oC搅拌1小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得6PEG-AAN-Glu-Pt-DACH白色固体（8 mg，收率11.1%）。MS m/z (ESI):1003.7[M+H]+。
实施例七 EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt的合成
1.化合物 5-Ⅰ的合成
将化合物 1-Ⅶ（200mg，0.26mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（6mL）中，加入EMC-6PEG-OSu（180mg，0.30mmol）和二异丙基乙胺（100mg，0.78mmol）。反应液室温20oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。得化合物 5-Ⅰ粗品黄色油状物（300mg），直接用于下一步。
2.化合物 5-Ⅱ的合成
化合物 5-Ⅰ（上步所得粗品）溶于二氯甲烷（10mL）中，加入三氟乙酸（5mL），反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物用叔丁醇甲醚打浆，得化合物 5-Ⅱ白色固体（150mg，收率63.8%两步）。
3.化合物 EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt 的合成
将顺式二碘二氨合铂（250mg，0.52mmol）加入到水（10mL）中，加入硝酸银（171mg，1.01mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。化合物5-Ⅱ （150mg，0.166mmol）溶于水（5mL）中，用0.5M氢氧化钠水溶液调pH至6-7，滴加入上述滤液。反应液室温20oC反应2小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt白色固体（35 mg，收率18.6%）。MS m/z (ESI):1131.6[M+H]+。
实施例八 6PEG-PPGP-APPA-Pt的合成
1.化合物 6-Ⅱ的合成
将化合物6-Ⅰ（2.0g，3.4mmol）和化合物 1-Ⅱ（1.0g，3.65mmol）溶于二氯甲烷（50mL）中，冰浴冷却下加入苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU）（1.9g，5.0mmol）和二异丙基乙胺（2.0g，15.5mmol），反应液室温25oC反应4小时。TLC检测反应完全。反应液（50mL）水洗，分液，水相二氯甲烷萃取（50mL*2），合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化（DCM:MeOH=20:1）得化合物 6-Ⅱ白色固体（2.2g，收率76.7%）。
2.化合物 6-Ⅲ的合成
将化合物 6-Ⅱ（500mg，0.59mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（10mL）中，加入哌啶（1mL），反应液室温25oC反应1小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。所得粗品6-III直接用于下一步。
3.化合物 6-Ⅳ的合成
将化合物 6-Ⅲ（上步所得粗品）溶于二氯甲烷（30mL）中，加入五甘醇单甲醚乙酸（300mg，0.97mmol），苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU）（450mg，1.19mmol）和二异丙基乙胺（300mg，2.33mmol）。反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液水洗，分液，水相二氯甲烷萃取（50mL*2），合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸干得化合物 6-Ⅳ粗品棕色油状物（550mg）。
4.化合物 6-Ⅴ的合成
化合物 6-Ⅳ（550mg上步所得粗品）溶于二氯甲烷（20mL）中，加入三氟乙酸（6mL），反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物用叔丁醇甲醚打浆，晾干得化合物6-Ⅴ类白色固体（350mg，收率74%三步）。
5.化合物 6PEG-PPGP-APPA-Pt 的合成
将顺式二碘二氨合铂（250mg，0.52mmol）加入到水（10mL）中，加入硝酸银（171mg，1.01mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。化合物6-Ⅴ（150mg，0.19mmol）溶于水（5mL）中，用0.5M氢氧化钠水溶液调pH至6-7，滴加入上述滤液。反应液室温20oC反应2小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得6PEG-PPGP-APPA-Pt白色固体（110 mg，收率56.3%）。MS m/z (ESI):1029.9[M+H]+。
实施例九 EMC-6PEG-AAN-NCBP的合成
1.化合物 7-II 的合成
将化合物7-I（1.0g，4.66mmol）和叔丁基亚磺酰胺（600mg，4.95mmol）溶于无水四氢呋喃（10mL）中，加入钛酸四乙酯（600mg，2.63mmol）。反应液升温至65oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液冷却至室温，加水（50mL）淬灭，二氯甲烷萃取（50mL*2），合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干得化合物 7-II 白色固体（1.4g，收率95.3%）。
2.化合物 7-III 的合成
化合物 7-II（1.4g，4.41mmol）溶于无水乙醇（20mL）中，加入硼氢化钠（300mg，7.93mmol），反应液室温20oC反应1小时。TLC检测反应完全。反应液加入50mL水，减压蒸去乙醇，残余物二氯甲烷萃取（50mL*2），合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸干得化合物7-III 白色固体（1.4g，收率99.4%）。
3.化合物 7-IV 的合成
化合物 7-III（1.4g，4.38mmol）加入到4M HCl/1,4-dioxane（15mL）中，反应液室温20oC反应1小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干，残余物用叔丁醇甲醚打浆，固体减压蒸干得化合物 7-IV 白色固体（850mg，收率77.1%）。
4.化合物 7-V 的合成
将化合物 1-Ⅴ（1.0g，1.35mmol）和化合物 7-IV（360mg，1.43mmol）溶于二氯甲烷（30mL）中，冰浴冷却下加入苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU）（750mg，2.0mmol）和二异丙基乙胺（700mg，5.42mmol），反应液室温20oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液加入水（100mL），分液，水相二氯甲烷萃取（50mL*2），合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化（DCM:MeOH=20:1）得化合物 7-V 白色固体（1.1g，收率87.0%）。
5.化合物 7-VI 的合成
将化合物 7-V（500mg，0.53mmol）溶于四氢呋喃（20mL）和水（5mL）的混合溶剂中，加入一水合氢氧化锂（200mg，4.76mmol），反应液室温20oC反应1小时。TLC检测反应完全。反应液用浓盐酸调PH至3-4，减压蒸去四氢呋喃，残余物冻干得产物粗品黄色固体（626 mg）。
6.化合物 7-VII 的合成
将化合物 7-VI（626mg粗品）溶于N,N-二甲基甲酰胺（20mL）中，加入EMC-6PEG-OSu（240mg，0.40mmol）和二异丙基乙胺（200mg，1.55mmol）。反应液室温20oC反应1小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。得化合物 7-VII 粗品黄色油状物（900mg），直接用于下一步。
7.化合物 7-VIII 的合成
化合物 7-VII粗品（900mg）溶于二氯甲烷（15mL）中，加入三氟乙酸（10mL），反应液室温20oC反应1小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物用叔丁醇甲醚和乙酸乙酯分别打浆，晾干得化合物 7-VIII 黄色固体（420mg，收率87.9%三步）。
8.化合物 EMC-6PEG-AAN-NCBP 的合成
将顺式二碘二氨合铂（500mg，1.04mmol）加入到水（10mL）中，加入硝酸银（342mg，2.01mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。化合物 7-VIII（200mg，0.22mmol）溶于水（5mL）中，用0.5M氢氧化钠水溶液调pH至6-7，滴加入上述滤液。反应液室温20oC反应18小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得EMC-6PEG-AAN-NCBP白色固体（80 mg，收率32.2%）。MS m/z (ESI):1129.8[M+H]+。
实施例十 EMC-12PEG-AAN-APPA-Pt的合成
1.化合物8-Ⅰ的合成
将化合物1-Ⅶ（300mg，0.39mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（6mL）中，加入EMC-12PEG-OSu（360mg，0.42mmol）和二异丙基乙胺（0.2 mL，1.16mmol）。反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。得化合物8-Ⅰ粗品黄色油状物（590mg），直接用于下一步。
2.化合物8-Ⅱ的合成
化合物8-Ⅰ（上步所得粗品）溶于二氯甲烷（5mL）中，加入三氟乙酸（5mL），反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物少量乙酸乙酯（2mL）溶解，再用叔丁醇甲醚（10mL）打浆，得化合物8-Ⅱ白色粘稠固体（450 mg, 粗品）。
3.化合物EMC-12PEG-AAN-APPA-Pt的合成
将顺式二碘二氨合铂（1.2g，2.48mmol）加入到水（15mL）中，加入硝酸银（129mg，0.76mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。化合物8-Ⅱ（450mg，0.39mmol）溶于水（7mL）中，用0.5M氢氧化钠水溶液调PH至6-7，滴加入上述滤液。反应液室温20oC反应18小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得EMC-12PEG-AAN-APPA-Pt黄色固体（65 mg，收率12.2%三步）。MS m/z (ESI):1397.2[M+H]+。
实施例十一 EMC-2PEG-AAN-APPA-Pt的合成
1.化合物9-Ⅰ的合成
将化合物 1-Ⅶ（100mg，0.13mmol）溶于二氯甲烷（7mL）中，加入EMC-2PEG-OSu（100mg，0.24mmol），和二异丙基乙胺（0.2 mL，1.23mmol）。反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。得化合物9-Ⅰ粗品黄色油状物(140mg)，直接用于下一步。
2.化合物9-Ⅱ的合成
化合物9-Ⅰ（140mg，0.13mmol）溶于二氯甲烷（2mL）中，加入三氟乙酸（2mL），反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物用叔丁醇甲醚和乙酸乙酯分别打浆，晾干得化合物9-Ⅱ白色固体（100mg，粗品）。
3.化合物EMC-2PEG-AAN-APPA-Pt 的合成
将顺式二碘二氨合铂（250mg，0.52mmol）加入到水（7mL）中，加入硝酸银（175mg，1.03mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。化合物9-Ⅱ（100mg，0.14mmol）溶于水（3mL）中，用0.5M氢氧化钠水溶液调pH至6-7，滴加入上述滤液。反应液室温20oC反应2小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得EMC-2PEG-AAN-APPA-Pt白色固体（40 mg，收率30.4%三步）。MS m/z (ESI):955.2[M+H]+。
实施例十二 LA-AAN-APPA-Pt的合成
1.化合物 10-I 的合成
将乳糖酸(LA) （180mg，0.50mmol）在甲醇（10mL）中加热回流1小时至完全溶解，取含有0.5% Et3N的甲醇溶液4mL溶解 1-Ⅶ（200mg，0.26mmol）溶液直接加入上述乳糖酸溶液中，反应液在60°C搅拌1小时，反应停止后，送高效液相制备分离得化合物 10-I白色固体（190mg，收率84.0%）。
2.化合物 10-II 的合成
将化合物 10-I（190mg，0.22mmol）溶于二氯甲烷（20mL）中，加入三氟乙酸（6mL），反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物用叔丁醇甲醚打浆，晾干得化合物10-II 类白色固体（145mg，收率87.7%）。
3.化合物 LA-AAN-APPA-Pt 的合成
将顺式二碘二氨合铂（250mg，0.52mmol）加入到水（10mL）中，加入硝酸银（171mg，1.01mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。化合物10-II （145mg，0.19mmol）溶于水（5mL）中，用0.5M氢氧化钠水溶液调pH至6-7，滴加入上述滤液。反应液室温20oC反应2小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得LA-AAN-APPA-Pt白色固体（55mg，收率29.4%）。MS m/z (ESI):985.2[M+H]+。
实施例十三 RGDC-AAN-APPA-Pt的合成
1.化合物 4-I 的合成
将化合物 1-VII（200mg，0.26mmol），Boc-RGDC（150mg，0.27mmol）和HBTU（150mg，0.40mmol）溶于二氯甲烷（30mL）中，加入三乙胺（100mg，0.99mmol）。反应液室温20oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干，残余物高压反相制备HPLC纯化得化合物 4-I 白色固体（160mg，收率47.2%）。
2.化合物 4-II 的合成
化合物 4-I（160mg，0.12mmol）溶于二氯甲烷（15mL）中，加入三氟乙酸（10mL），反应液室温20oC反应1小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物用叔丁醇甲醚和乙酸乙酯分别打浆，晾干得化合物 4-II 黄色固体（110mg，收率100%）。
3.化合物 RGDC-AAN-APPA 的合成
将顺式二碘二氨合铂（500mg，1.04mmol）加入到水（10mL）中，加入硝酸银（342mg，2.01mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。化合物 4-II（110mg，0.12mmol）溶于水（5mL）中，用0.5M氢氧化钠水溶液调pH至6-7，滴加入上述滤液。反应液室温20oC反应18小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得RGDC-AAN-APPA白色固体（22mg，收率17.0%）。MS m/z (ESI):1077.8[M+H]+。
实施例十四 SMCC-AAN-APPA-Pt的合成
1.化合物11-Ⅰ的合成
将化合物1-Ⅶ（300mg，0.39mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（6mL）中，加入SMCC（145mg，0.43mmol）和二异丙基乙胺（0.2 mL，1.16mmol）。反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。得化合物5-Ⅰ粗品黄色油状物（580mg），直接用于下一步。
2.化合物11-Ⅱ的合成
化合物11-Ⅰ（上步所得粗品）溶于二氯甲烷（10mL）中，加入三氟乙酸（5mL），反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物少量乙酸乙酯（2mL）溶解，再用叔丁醇甲醚（10mL）打浆，得化合物11-Ⅱ白色粘稠固体（220 mg, 收率：80.4%两步）。
3.化合物SMCC-AAN-APPA-Pt的合成
将顺式二碘二氨合铂（500mg，1.04mmol）加入到水（10mL）中，加入硝酸银（342mg，2.01mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。化合物 11-II（220mg，0.35mmol）溶于水（5mL）中，用0.5M氢氧化钠水溶液调pH至6-7，滴加入上述滤液。反应液室温20oC反应18小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得SMCC-AAN-APPA-Pt白色固体（85mg，收率28.1%）。MS m/z (ESI):864.9[M+H]+。
实施例十五 EMC-6PEG-AAN-PIMMA-APPA-Pt的合成
1.化合物15-Ⅰ的合成
将化合物1-V（300mg，0.41mmol）和对氨基苯甲醛（60mg，0.50mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（15mL）中，加入HBTU（230mg，0.61mmol）和二异丙基乙胺（0.2 mL，1.16mmol）。反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化得化合物15-I黄色固体（300mg），收率：87.8%。
2.化合物15-Ⅱ的合成
化合物15-Ⅰ（300mg，0.36mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（15mL）中，加入DBU（0.15mL），反应液室温20oC反应5小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化得化合物15-II黄色固体（210mg），收率：94.1%。
3.化合物 15-III的合成
将化合物 15-II（210mg，0.34mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（15mL）中，加入EMC-6PEG-OSu（220mg，0.37mmol）和二异丙基乙胺（100mg，0.78mmol）。反应液室温20oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。得化合物 15-III粗品黄色油状物（350mg），直接用于下一步。
4.化合物 15-IV的合成
化合物 15- III（上步所得粗品）溶于二氯甲烷（10mL）中，加入三氟乙酸（5mL），反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化得化合物 15-IV白色固体（280mg，收率95.3%两步）。
5.化合物 15-V的合成
将化合物 15-IV（280mg，0.32mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（15mL）中，加入化合物1-II（100mg，0.37mmol）和三氟乙酸（1滴）。反应液室温20oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。得化合物 15-V粗品黄色油状物（320mg），直接用于下一步。
6.化合物 15-VI的合成
化合物 15-V（上步所得粗品）溶于二氯甲烷（10mL）中，加入六氟异丙醇（3mL），反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物用MTBE打浆得15-VI黄色固体（180mg，收率55.9%两步）。
7.化合物 EMC-6PEG-AAN-PIMMA-APPA-Pt的合成
将顺式二碘二氨合铂（250mg，0.52mmol）加入到水（10mL）中，加入硝酸银（171mg，1.01mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。化合物15-VI （180mg，0.179mmol）溶于水（5mL）中，用0.5M氢氧化钠水溶液调pH至6-7，滴加入上述滤液。反应液室温20oC反应2小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得EMC-6PEG-AAN-4-(iminomethyl)aniline-APPA-Pt白色固体（18 mg，收率8.2%）。MS m/z (ESI):1235.6[M+H]+。
实施例十六 EMC-6PEG-AAN-PIMEA-APPA-Pt的合成
1.化合物16-Ⅰ的合成
将化合物1-V（300mg，0.41mmol）和对氨基苯乙酮（70mg，0.52mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（15mL）中，加入HBTU（230mg，0.61mmol）和二异丙基乙胺（0.2 mL，1.16mmol）。反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化得化合物16-I黄色固体（290mg），收率：82.6%。
2.化合物16-Ⅱ的合成
化合物16-Ⅰ（290mg，0.34mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（15mL）中，加入DBU（0.15mL），反应液室温20oC反应5小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化得化合物16-II黄色固体（210mg），收率：97.6%。
3.化合物 16-III的合成
将化合物 16-II（210mg，0.33mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（15mL）中，加入EMC-6PEG-OSu（220mg，0.37mmol）和二异丙基乙胺（100mg，0.78mmol）。反应液室温20oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。得化合物 16- III粗品黄色油状物（380mg），直接用于下一步。
4.化合物 16-IV的合成
化合物 16- III（上步所得粗品）溶于二氯甲烷（10mL）中，加入三氟乙酸（5mL），反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物过硅胶柱纯化得化合物 16-IV白色固体（260mg，收率89.7%两步）。
5.化合物 16-V的合成
将化合物 16-IV（260mg，0.30mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（15mL）中，加入化合物1-II（100mg，0.37mmol）和三氟乙酸（1滴）。反应液室温20oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。得化合物 16-V粗品黄色油状物（350mg），直接用于下一步。
6.化合物 16-VI的合成
化合物 16-V（上步所得粗品）溶于二氯甲烷（10mL）中，加入六氟异丙醇（3mL），反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物用MTBE打浆得16-VI黄色固体（180mg，收率59.6%两步）。
7.化合物 EMC-6PEG-AAN-PIMEA-APPA-Pt 的合成
将顺式二碘二氨合铂（250mg，0.52mmol）加入到水（10mL）中，加入硝酸银（171mg，1.01mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。化合物16-VI （180mg，0.176mmol）溶于水（5mL）中，用0.5M氢氧化钠水溶液调pH至6-7，滴加入上述滤液。反应液室温20oC反应2小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得EMC-6PEG-AAN- PIMEA -APPA-Pt白色固体（15 mg，收率6.8%）。MS m/z (ESI):1249.9[M+H]+。
实施例十七 EMC-6PEG- PIMMA -APPA-Pt的合成
1.化合物 17-I的合成
将化合物 对氨基苯甲醛（45mg，0.37mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（15mL）中，加入EMC-6PEG-OSu（220mg，0.37mmol）和二异丙基乙胺（100mg，0.78mmol）。反应液室温20oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。得化合物 17-I粗品黄色油状物（250mg），直接用于下一步。
2.化合物 17-II的合成
将化合物 17-I（250mg，上步所得粗品）溶于N,N-二甲基甲酰胺（15mL）中，加入化合物1-II（100mg，0.37mmol）和三氟乙酸（1滴）。反应液室温20oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。得化合物 17-II粗品黄色油状物（350mg），直接用于下一步。
3.化合物 17-III的合成
化合物 17-II（上步所得粗品）溶于二氯甲烷（10mL）中，加入六氟异丙醇（3mL），反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物用MTBE打浆得17-III黄色固体（120mg，收率43.2%两步）。
4.化合物EMC-6PEG-PIMMA-APPA-Pt 的合成
将顺式二碘二氨合铂（250mg，0.52mmol）加入到水（10mL）中，加入硝酸银（171mg，1.01mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。化合物17-III（120mg，0.16mmol）溶于水（5mL）中，用0.5M氢氧化钠水溶液调pH至6-7，滴加入上述滤液。反应液室温20oC反应2小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得EMC-6PEG-PIMMA-APPA-Pt白色固体（19 mg，收率11.9%）。MS m/z (ESI):978.8[M+H]+。
实施例十八 EMC-6PEG- PIMEA-APPA-Pt的合成
1.化合物 18-I的合成
将化合物 对氨基苯乙酮（50mg，0.37mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（15mL）中，加入EMC-6PEG-OSu（220mg，0.37mmol）和二异丙基乙胺（100mg，0.78mmol）。反应液室温20oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。得化合物 18-I粗品黄色油状物（250mg），直接用于下一步。
2.化合物 18-II的合成
将化合物 18-I（250mg，上步所得粗品）溶于N,N-二甲基甲酰胺（15mL）中，加入化合物1-II（100mg，0.37mmol）和三氟乙酸（1滴）。反应液室温20oC反应3小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。得化合物 18-II粗品黄色油状物（350mg），直接用于下一步。
3.化合物 18-III的合成
化合物 18-II（上步所得粗品）溶于二氯甲烷（10mL）中，加入六氟异丙醇（3mL），反应液室温20oC反应2小时。TLC检测反应完全。反应液减压蒸干。残余物用MTBE打浆得18-III黄色固体（120mg，收率42.4%三步）。
4.化合物 EMC-6PEG-PIMEA-APPA-Pt 的合成
将顺式二碘二氨合铂（250mg，0.52mmol）加入到水（10mL）中，加入硝酸银（171mg，1.01mmol）。反应液避光，室温20oC反应18小时。反应液过滤。化合物18-III （120mg，0.157mmol）溶于水（5mL）中，用0.5M氢氧化钠水溶液调pH至6-7，滴加入上述滤液。反应液室温20oC反应2小时。反应液过滤，滤液用反相高压柱纯化得EMC-6PEG-PIMEA-APPA-Pt 白色固体（11 mg，收率7.1%）。MS m/z (ESI):992.3[M+H]+。
实施例十九 制备人血白蛋白偶联的HSA-EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt药物
配制EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt(5mg)使用DMSO(100μL)溶解。HSA用华兰生物的20%的人血红蛋白（实测含量140.47mg/mL）。化合物与HSA以3：1（4.8 μmol/mL，1.6 μmol/mL）结合，在PBS缓冲液中，于25℃水浴2h反应，取出反应液，利用加压超滤膜过滤没结合化合物，并加生理盐水稀释并过滤3次，获得半成品。使用例如层析方法来分离人血白蛋白偶联的铂类瘤药物，诸如DEAE离子交换、凝胶过滤和羟基磷灰石层析。半成品及时分装、旋冻、冻干。制品的冻干工艺可根据机器性能特点制定，但应保证制品制备质量及保存质量符合要求。实验比较了不同PEG链长度，不同pH及不同时间的铂类药物与HAS的结合情况。结果表明，除了正常的HAS与铂类药物的结合物（13-I），还会产生铂上配位的一分子氨基，被白蛋白上的基团置换的产物（13-II），如表2所示。
表2：不同pH偶联条件下13-I和13-II的比例
表3：13-I和13-II的比例研究
根据上表2和表3可知，0901-1，0902-1，20220214-1为反应液反应完成后再在37oC放置48h后再处理。20220214和20220214-1为用除去蛋白的血浆替换PBS缓冲液作为反应溶剂。由此可以判断13-II是在体外环境下生成的，而EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt在体内环境下，与血浆蛋白结合时并不会产生13-II。
用同样的条件把白蛋白与EMC-6PEG-AAN-NCBP和SMCC-AAN-APPA-Pt等化合物进行偶联，全都得到正常偶联的产物，并未发现铂与白蛋白上的氨基配位（即与13-II类似分子）的情况，因此，本发明提供的化合物在体内环境下，与血浆蛋白结合时均不会产生13-II或与13-II类似的分子结构。
实施例二十 铂类化合物的酶激活实验
Legumain酶切实验：
1)缓冲液配置：50 mM MES，250 mM氯化钠，用0.5M氢氧化钠调pH5.0。
2)Legumain选用1mg/mL的浓度。
3)用缓冲液将化合物配制成0.5µmol/mL浓度。
4)准确移取50 µL的0.5µmol/mL化合物和50µL的缓冲液于离心管中，加入100 µL的Legumain，37oC反应2h。用LC-MS检测反应液。
FAP酶切实验：
1)缓冲液配置：50 mM Tris，1M氯化钠，1mg/mL BAS，调PH至7.5。
2)FAP酶选用1mg/mL的浓度。
3)用缓冲液将化合物配制成0.2µmol/mL浓度。
4)准确移取50 µL的0.2µmol/mL化合物和150µL的FAP酶于离心管中，37oC反应2h。用LC-MS检测反应液。
表4：酶切条件及产物
由上表可以看出，肽链AAN能被Legumain切割，并释放含铂的小分子药物。肽链PPGP能被FAP酶切割并释放含铂的小分子药物，能够靶向肿瘤细胞，减少药物的毒性对人体造成的损害。
实施例二十一 铂类化合物在4T1细胞中的毒性实验比较
用完全培养基(RPMI1640 + 10%胎牛血清+ 1XP/S +丙酮酸钠1 mM溶液)培养4T1细胞，在37℃、5%CO2的培养箱中培养至细胞生长至足够数量，收集4T1细胞，300g离心5min，用适当体积 10% RMPI1640培养基重悬细胞，调整密度至每毫升50000个细胞 。在96孔培养板中加入含有不同浓度药物的细胞培养液100μL，并设置不加药物只加相应药物溶剂的对照孔（0.1%DMSO），以及只加培养基不含细胞的调零孔（Blank），每组设3个平行孔。之后把细胞计数后的4T1细胞接种于96孔培养板上，每孔100μL细胞悬液，CT26细胞的接种浓度为5000个细胞(100μL)/孔。然后将板子置于37℃，二氧化碳（5%）培养箱中培养48小时。48小时后，每孔加入20 μL MTT（浓度为5 mg/ml），继续孵育4 h。然后将培养液轻轻吸出，每孔加入150 μL DMSO作溶剂溶解，溶解后用酶标仪测定490 nm处的吸光度。
计算细胞的存活率及药物对细胞的半数抑制浓度。细胞存活率%=（OD试验-OD空白对照）/（OD试验对照-OD空白对照）*100%。存活率(%)用Excel软件进行计算，用Prism 5软件绘制药物对细胞的剂量-响应曲线，各指标用均值来表示，变异系数(CV)评估数据的一致性。
依据上述实验方法，将待测药物的最大起始浓度设为1000μM，Legumain激活后和白蛋白复合物起始浓度设为100μM，以1：4比例进行梯度稀释成9个剂量组（每组3个重复），所有加药孔的药物溶剂(DMSO)浓度均控制在0.1%，只加药物溶剂(0.1%DMSO)作为试验对照组(Control)，以及未加细胞只加培养基的空白组(Blank)，然后依据以下方法计算各剂量组相对于对照组(Control)的肿瘤细胞存活率（%）：
各剂量组细胞存活率（%）=（OD剂量组-OD空白组）/（OD 0.1%DMSO - OD空白组）*100%
以此为数据，用Prism 5软件绘制药物对细胞的剂量-响应曲线，并用软件计算出各个药物对应的EC50，结果如表5所示。
表5：铂类化合物在4T1细胞中的毒性
如表5所示，以上铂类药物EC50都比卡铂高或接近，而用Legumain激活后(其中6PEG-PPGP-APPA-Pt为FAP酶激活)EC50都大幅降低。因此，表5中所提供的铂类药物相较卡铂在体外的活性更高，即表5中所提供的铂类药物相较卡铂的毒性更低，而在肿瘤微环境下，即由Legumain酶或FAP酶激活之后进入肿瘤细胞而释放，表5中所提供的铂类药物在Legumain酶或FAP酶激活后的毒性更高，因此在靶向肿瘤细胞后的毒性更强，更容易杀死肿瘤细胞，而不影响肿瘤微环境之外的细胞，患者在进行治疗时，增大治疗的安全性以及肿瘤靶向性。其中，表5中的部分药物（如EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt(without enzyme)和EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt(with enzyme)与卡铂在4T1细胞中不同药物浓度下的细胞生存率展示对比如图1所示。
实施例二十二 铂类化合物在MDA-MB-231细胞中的毒性实验比较
用完全培养基(RPMI1640 + 10%胎牛血清+ 1XP/S +丙酮酸钠1 mM溶液)培养MDA-MB-231细胞，在37℃、5%CO2的培养箱中培养至细胞生长至足够数量，收集MDA-MB-231细胞，300g离心5min，用适当体积 10% RMPI1640培养基重悬细胞，调整密度至每毫升50000个细胞 。在96孔培养板中加入含有不同浓度药物的细胞培养液100μL，并设置不加药物只加相应药物溶剂的对照孔（0.1%DMSO），以及只加培养基不含细胞的调零孔（Blank），每组设3个平行孔。之后把细胞计数后的MDA-MB-231细胞接种于96孔培养板上，每孔100μL细胞悬液，CT26细胞的接种浓度为5000个细胞(100μL)/孔。然后将板子置于37℃，二氧化碳（5%）培养箱中培养48小时。48小时后，每孔加入20 μL MTT（浓度为5 mg/ml），继续孵育4 h。然后将培养液轻轻吸出，每孔加入150 μLDMSO作溶剂溶解，溶解后用酶标仪测定490 nm处的吸光度。
计算细胞的存活率及药物对细胞的半数抑制浓度：
细胞存活率%=（OD试验-OD空白对照）/（OD试验对照-OD空白对照）*100%。
存活率(%)用Excel软件进行计算，用Prism 5软件绘制药物对细胞的剂量-响应曲线，各指标用均值来表示，变异系数(CV)评估数据的一致性。
依据上述实验方法，将待测药物的最大起始浓度设为1000μM，Legumain激活后和白蛋白复合物起始浓度设为100μM，以1：4比例进行梯度稀释成9个剂量组（每组3个重复），所有加药孔的药物溶剂(DMSO)浓度均控制在0.1%，只加药物溶剂(0.1%DMSO)作为试验对照组(Control)，以及未加细胞只加培养基的空白组(Blank)，然后依据以下方法计算各剂量组相对于对照组(Control)的肿瘤细胞存活率（%）：
各剂量组细胞存活率（%）=（OD剂量组-OD空白组）/（OD 0.1%DMSO - OD空白组）*100%
以此为数据，用Prism 5软件绘制药物对细胞的剂量-响应曲线，并用软件计算出各个药物对应的EC50，结果如表6所示。
表6：铂类化合物在MDA-MB-231细胞中的毒性
如表6所示，以上铂类药物EC50都比卡铂高，而用Legumain激活后(其中6PEG-PPGP-APPA-Pt为FAP酶激活)EC50都大幅降低。因此，表6中所提供的铂类药物相较卡铂在体外的活性更高，即表6中所提供的铂类药物相较卡铂的毒性更低，而在肿瘤微环境下，即由Legumain或FAP酶激活之后进入肿瘤细胞而释放，表6中所提供的铂类药物在Legumain或FAP酶激活后的毒性更高，因此在靶向肿瘤细胞后的毒性更强，更容易杀死肿瘤细胞，而不影响肿瘤微环境之外的细胞，患者在进行治疗时，增大治疗的安全性以及肿瘤靶向性。其中，表6中的部分药物（如EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt(without enzyme)和EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt(with enzyme)与卡铂在MDA-MB-231细胞中不同药物浓度下的细胞生存率展示对比如图2所示。
实施例二十三 铂类化合物在SK-OV3细胞中的毒性实验比较
用完全培养基(RPMI1640 + 10%胎牛血清+ 1XP/S +丙酮酸钠1 mM溶液)培养SK-OV3细胞，在37℃、5%CO2的培养箱中培养至细胞生长至足够数量，收集SK-OV3细胞，300g离心5min，用适当体积 10% RMPI1640培养基重悬细胞，调整密度至每毫升50000个细胞 。在96孔培养板中加入含有不同浓度药物的细胞培养液100μL，并设置不加药物只加相应药物溶剂的对照孔（0.1%DMSO），以及只加培养基不含细胞的调零孔（Blank），每组设3个平行孔。之后把细胞计数后的SK-OV3细胞接种于96孔培养板上，每孔100 μL细胞悬液，CT26细胞的接种浓度为5000个细胞(100 µL)/孔。然后将板子置于37℃，二氧化碳（5%）培养箱中培养48小时。48小时后，每孔加入20 μL MTT（浓度为5 mg/ml），继续孵育4 h。然后将培养液轻轻吸出，每孔加入150 µL DMSO作溶剂溶解，溶解后用酶标仪测定490 nm处的吸光度。
计算细胞的存活率及药物对细胞的半数抑制浓度。细胞存活率%=（OD试验-OD空白对照）/（OD试验对照-OD空白对照）*100%。存活率(%)用Excel软件进行计算，用Prism 5软件绘制药物对细胞的剂量-响应曲线，各指标用均值来表示，变异系数(CV)评估数据的一致性。
依据上述实验方法，将待测药物的最大起始浓度设为1000μM，Legumain激活后和白蛋白复合物起始浓度设为100 μM，以1：4比例进行梯度稀释成9个剂量组（每组3个重复），所有加药孔的药物溶剂(DMSO)浓度均控制在0.1%，只加药物溶剂(0.1%DMSO)作为试验对照组(Control)，以及未加细胞只加培养基的空白组(Blank)，然后依据以下方法计算各剂量组相对于对照组(Control)的肿瘤细胞存活率（%）：
各剂量组细胞存活率（%）=（OD剂量组-OD空白组）/（OD 0.1%DMSO - OD空白组）*100%
以此为数据，用Prism 5软件绘制药物对细胞的剂量-响应曲线，并用软件计算出各个药物对应的EC50，结果如表7所示。
表7：铂类化合物在SK-OV3细胞中的毒性
如表7所示，以上铂类药物EC50都比卡铂高，而用Legumain激活后(其中6PEG-PPGP-APPA-Pt为FAP酶激活)EC50都大幅降低。因此，表7中所提供的铂类药物相较卡铂在体外的活性更高，即表7中所提供的铂类药物相较卡铂的毒性更低，而在肿瘤微环境下，即由Legumain酶或FAP酶激活之后进入肿瘤细胞而释放，表7中所提供的铂类药物在Legumain酶或FAP酶激活后的毒性更高，因此在靶向肿瘤细胞后的毒性更强，更容易杀死肿瘤细胞，而不影响肿瘤微环境之外的细胞，患者在进行治疗时，增大治疗的安全性以及肿瘤靶向性。其中，表7中的部分药物（如EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt(without enzyme)和EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt(with enzyme)与卡铂在SK-OV3细胞中不同药物浓度下的细胞生存率展示对比如图3所示。
综合实施例二十一、实施例二十二和实施例二十三结果可知，与现有铂类药物相比，在不同的细胞模型中，本发明提供的铂类化合物的在无Legumain表达的正常组织中安全性得到了显著提升，而在Legumain高表达的肿瘤组织中，具有较高的毒性，因此该类含铂药物具有肿瘤靶向性。
实施例二十四 6PEG-AAN-PABC-NCBP，6PEG-AAN-APPA-Pt，EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt和6PEG-PPGP-APPA-Pt 在CT26肿瘤模型治疗中的药效研究
试验目的：研究上述化合物在CT26肿瘤模型中的抗肿瘤药效。
试验药物：6PEG-AAN-PABC-NCBP，6PEG-AAN-APPA-Pt，EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt和6PEG-PPGP-APPA-Pt，6PEG-AAN-Glu-Pt-DACH，LA-AAN-APPA-Pt，RGDC-AAN-APPA-Pt，SMCC-AAN-APPA-Pt卡铂和对照组，剂量25.3μmol/kg。
试验动物：6-8周龄BALB/c小鼠，全为雌鼠。
制备肿瘤模型：
1）CT26细胞购置于ATCC，细胞在包含10%胎牛血清的DMEM培养基中于37℃，5% CO2中培养。每三天进行一次传代，并使用15代以内的细胞。
2）肿瘤的产生。将5×106个相应的细胞皮下注射到裸鼠的背部。肿瘤达到至少100mm3后，将小鼠随机分组，每组5只。然后开始治疗，治疗开始的当天是第一天。
3）治疗过程。药物以等摩尔剂量25.3μmol/kg的剂量施用。对照组给予5%葡萄糖。每周给药一次，持续四周。
如图4-5所示，图4为给药天数-肿瘤体积变化图，图5显示了小鼠的体重变化情况。
下表列出对应化合物与对照组对肿瘤抑制的影响数据
表8：对应化合物与对照组对肿瘤抑制的影响
根据上述数据可以看出，八种铂类药物都表现出了一定的抗肿瘤活性，其中LA-AAN-APPA-Pt和RGDC-AAN-APPA-Pt 抑瘤率达到了71.54%和76.76%，效果最好。
实施例二十五 EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt，6PEG-PPGP-APPA-Pt，LA-AAN-APPA-Pt和RGDC-AAN-APPA-Pt的小鼠MTD（最大耐受量）测试
试验目的：测出EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt，6PEG-PPGP-APPA-Pt，LA-AAN-APPA-Pt和RGDC-AAN-APPA-Pt在小鼠中的MTD，以便后续对该化合物进行更全面的评价。
试验动物：6-8周龄BALB/c小鼠，全为雌鼠。
试验方法：小鼠随机分组，每组三只，分别一次性注射不同剂量的铂类药物，每组小鼠平均体重变化情况见表9（单位克）。
表9： 铂类药物的MTD实验
按表9实验结果，各药物的MTD如表10所示：
表10：铂类药物的MTD(单位mg/kg)
实施例二十六 不同剂量的EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt，6PEG-PPGP-APPA-Pt，LA-AAN-APPA-Pt和RGDC-AAN-APPA-Pt与卡铂在CT26肿瘤模型治疗中的药效对比研究
试验目的：比较EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt，6PEG-PPGP-APPA-Pt，LA-AAN-APPA-Pt和RGDC-AAN-APPA-Pt与卡铂在CT26肿瘤模型中的抗肿瘤药效差异。
试验药物：EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt，6PEG-PPGP-APPA-Pt，LA-AAN-APPA-Pt和RGDC-AAN-APPA-Pt（13.5μmol/kg，53.9μmol/kg和79.6μmol/kg），卡铂（53.9μmol/kg）和对照组，剂量25.3μmol/kg。
试验动物：6-8周龄BALB/c小鼠，全为雌鼠。
制备肿瘤模型：
1）CT26细胞购置于ATCC，细胞在包含10%胎牛血清的DMEM培养基中于37℃，5% CO2中培养。每三天进行一次传代，并使用15代以内的细胞。
2）肿瘤的产生。将5×106个相应的细胞皮下注射到裸鼠的背部。肿瘤达到至少100mm3后，将小鼠随机分组，每组5只。然后开始治疗，治疗开始的当天是第一天。
3）治疗过程。药物以EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt，6PEG-PPGP-APPA-Pt，LA-AAN-APPA-Pt和RGDC-AAN-APPA-Pt（13.5μmol/kg，53.9μmol/kg和79.6μmol/kg），卡铂（53.9μmol/kg）的剂量施用。对照组给予5%葡萄糖。每十天给药一次，共给药三次。
如图6所示，为给药天数-肿瘤体积变化图。
下表列出对应化合物与对照组对肿瘤抑制的影响数据：
表11：对应化合物与对照组对肿瘤抑制的影响
卡铂在小鼠中MTD约为320μmol/kg，EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt低剂量（13.5μmol/kg）与卡铂（53.9μmol/kg）都约为六分之一的MTD，6PEG-PPGP-APPA-Pt低剂量（13.5μmol/kg）约是十一分之一的MTD，LA-AAN-APPA-Pt低剂量（13.5μmol/kg）约是九分之一的MTD，RGDC-AAN-APPA-Pt低剂量（13.5μmol/kg）约是八分之一的MTD。而抑瘤率如表11所示，四种铂类化合物在同等毒性剂量下抑瘤率都高于卡铂，而高剂量组肿瘤都接近治愈。因此EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt，6PEG-PPGP-APPA-Pt，LA-AAN-APPA-Pt和RGDC-AAN-APPA-Pt对比卡铂有较大优势。
实施例二十七 EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt，EMC-6PEG-AAN-NCBP，6PEG-PPGP-APPA-Pt，LA-AAN-APPA-Pt，RGDC-AAN-APPA-Pt与顺铂和奥沙利铂在CT26肿瘤模型治疗中的药效对比研究
试验目的：比较EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt，EMC-6PEG-AAN-NCBP，6PEG-PPGP-APPA-Pt，LA-AAN-APPA-Pt，RGDC-AAN-APPA-Pt与顺铂和奥沙利铂在CT26肿瘤模型中的抗肿瘤药效差异。
试验药物：EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt（13.5μmol/kg, 1/6MTD），EMC-6PEG-AAN-NCBP（39.8μmol/kg），6PEG-PPGP-APPA-Pt（13.5μmol/kg, 1/11MTD），LA-AAN-APPA-Pt（13.5μmol/kg, 1/9MTD），RGDC-AAN-APPA-Pt（13.5μmol/kg, 1/8MTD），顺铂（3.3μmol/kg,1/6MTD;10.0μmol/kg,1/2 MTD），奥沙利铂（12.6μmol/kg，1/2 MTD）和对照组。
试验动物：6-8周龄BALB/c小鼠，全为雌鼠。
制备肿瘤模型：
1）CT26细胞购置于ATCC，细胞在包含10%胎牛血清的DMEM培养基中于37℃，5% CO2中培养。每三天进行一次传代，并使用15代以内的细胞。
2）肿瘤的产生。将5×106个相应的细胞皮下注射到裸鼠的背部。肿瘤达到至少100mm3后，将小鼠随机分组，每组5只。然后开始治疗，治疗开始的当天是第一天。
3）治疗过程。药物以EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt（13.5μmol/kg），EMC-6PEG-AAN-NCBP（39.8μmol/kg），6PEG-PPGP-APPA-Pt（13.5μmol/kg），LA-AAN-APPA-Pt（13.5μmol/kg），RGDC-AAN-APPA-Pt（13.5μmol/kg），顺铂（3.3μmol/kg，10.0μmol/kg），奥沙利铂（12.6μmol/kg）的剂量施用。对照组给予5%葡萄糖。每十天给药一次，给药三次。
如图7所示，为给药天数-肿瘤体积变化图，如图8所示，显示了小鼠体重变化。
下表8列出对应化合物与对照组对肿瘤抑制的影响数据
表12：对应化合物与对照组对肿瘤抑制的影响
根据上述数据可以看出，EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt， 6PEG-PPGP-APPA-Pt，LA-AAN-APPA-Pt，RGDC-AAN-APPA-Pt在等摩尔和等毒性条件下抑瘤率都好于奥沙利铂和顺铂，其中LA-AAN-APPA-Pt和RGDC-AAN-APPA-Pt抑瘤率最高。
实施例二十八 EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt，6PEG-PPGP-APPA-Pt，LA-AAN-APPA-Pt，RGDC-AAN-APPA-Pt与Anti-mPD-1联用在MC38肿瘤模型治疗中的药效研究
试验目的：研究上述化合物在CT26肿瘤模型中的抗肿瘤药效。
试验药物：EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt，6PEG-PPGP-APPA-Pt，LA-AAN-APPA-Pt和RGDC-AAN-APPA-Pt，剂量13.3μmol/kg。
试验动物：C57小鼠，7-8周龄，雌性，购自上海灵畅生物科技有限公司。
制备肿瘤模型：
1）细胞培养：MC38细胞购自于中科院细胞库，细胞在包含10%胎牛血清的DMEM培养基中于37℃，5% CO2培养箱中培养。每三天进行一次传代，并使用15代以内的细胞。
2）细胞接种：用DMEM基础培养基调细胞浓度1.0×107/mL，接种于小鼠右侧腋部皮下，0.1mL/只，
3）治疗：当肿瘤体积达到100mm3~200mm3，将小鼠随机分为4组并开始治疗，每组6只，分别为vehicle对照组，Anti-mPD-1单用组，EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt，6PEG-PPGP-APPA-Pt，LA-AAN-APPA-Pt，RGDC-AAN-APPA-Pt单用组和EMC-6PEG-AAN-APPA-Pt，6PEG-PPGP-APPA-Pt，LA-AAN-APPA-Pt和RGDC-AAN-APPA-Pt分别与Anti-mPD-1联用组，分组当天设为D0。
如图9所示，为给药天数-肿瘤体积变化图，如图10所示，为小鼠体重变化情况。
下表列出对应化合物与对照组对肿瘤抑制的影响数据：
表13：对应化合物与对照组对肿瘤抑制的影响
实验结果表明，与溶媒对照组相比，Anti-mPD-1单用组，铂类药物单用组和铂类药物与Anti-mPD-1联用组都表现出一定的抑瘤效果，而铂类药物与Anti-mPD-1联用组都达到了80%以上，甚至90%抑瘤率，接近治愈。联用组药效优于各单用组。
实施例二十九 含有铂类化合物的药物组合物
本发明所提供的铂类化合物、或其药学上可接受的盐和可接受的载体，在临床使用时可以与药物联用进行治疗，如在治疗上皮性卵巢癌时，可利用本发明所提供的铂类化合物、或其药学上可接受的盐和可接受的载体与紫杉醇联用，或与紫杉醇和贝伐珠单抗联用，效果显著。在治疗恶性生殖细胞肿瘤时，可利用本发明所提供的铂类化合物、或其药学上可接受的盐和可接受的载体与紫杉醇联用，或与博来霉素、依托泊苷联用，效果显著。如在治疗少见卵巢恶性肿瘤时，可利用本发明所提供的铂类化合物、或其药学上可接受的盐和可接受的载体与卡倍他滨、贝伐珠单抗联用，或与5-氟尿嘧啶、四氢叶酸和贝伐珠单抗联用，效果显著。在治疗胃癌时，可利用本发明所提供的铂类化合物、或其药学上可接受的盐和可接受的载体与曲妥珠单抗、5-氟尿嘧啶或卡倍他滨联用，或与紫杉醇/多烯紫杉醇和卡倍他滨/替吉奥联用，效果显著。
以上列举为效果显著的药物联用，另外，在进行癌症治疗过程中，下述癌症如胃肠癌、结肠直肠癌、结肠癌、肝癌、肝细胞癌、胰腺癌、胆道癌、胃癌、泌尿生殖系统癌症、膀胱癌、睾丸癌、宫颈癌、恶性间皮瘤、骨原性肉瘤、食管癌、喉癌、前列腺癌、激素抵抗性前列腺癌、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、乳癌、三阴性乳癌、血液癌症、白血病、急性原始淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤、弥散性大B-细胞淋巴瘤、卵巢癌、脑癌、成神经细胞瘤、尤因肉瘤、肾癌、表皮样癌、皮肤癌、黑色素瘤和口癌，目前临床上使用的联用药物中，大都使用顺铂、卡铂或奥沙利铂与药物联合治疗，在治疗上述癌症时，利用本发明提供的铂类化合物、或其药学上可接受的盐和可接受的载体与治疗上述癌症中所使用的药物进行联用，同样有治疗效果，并且相较使用顺铂、卡铂或奥沙利铂的毒性降低，且对肿瘤的靶向性增强，从而效果更佳。
综上所述，上述各实施例仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，皆应包含在本发明的保护范围内。

Claims (4)

1.一种肿瘤靶向激活的铂类化合物，其特征在于，所述铂类化合物结构为：
R1-Ract-D；
其中，R1为修饰基团、具有靶向定位的靶向基团中的至少一种；
Ract为激活基团，所述激活基团为酶激活基团；
D为包含铂元素的药物；
所述酶激活基团的结构如下：
；
其中，所述酶激活基团的羧基端与D连接，所述酶激活基团的氨基端与R1连接；
所述D选自以下化合物中的一种：
；
所述修饰基团包括具有调节化合物水溶性作用的修饰基团和在肿瘤微环境中激活的修饰基团；
当所述R1为具有调节化合物水溶性作用的修饰基团时，所述R1选自PEG链，所述PEG链的长度为2-24个PEG分子；
当所述R1为在肿瘤微环境中的激活修饰基团时，所述R1选自MI或MI-R2-，其中，MI为马来酰亚胺基团，R2为具有调节药物水溶性作用的修饰基团，所述R2选自PEG链，所述PEG链的长度为2-24个PEG分子；
当所述R1为具有靶向定位的靶向基团时，所述R1选自靶向基团、靶向基团与具有调节药物水溶性作用的修饰基团的结合基团、或靶向基团与在肿瘤微环境中的激活修饰基团结合基团中的一种；
其中，靶向基团选自如下基团中的一种：
；
其中，具有调节药物水溶性作用的修饰基团选自PEG链，所述PEG链的长度为2-24个PEG分子；
其中，肿瘤微环境中的激活修饰基团选自MI或MI-R2-，其中，MI为马来酰亚胺基团，R2为具有调节药物水溶性作用的修饰基团，所述R2选自PEG链，所述PEG链的长度为2-24个PEG分子。
2.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求1所述的肿瘤靶向激活的铂类化合物或其药学上可接受的盐和可接受的载体。
3.一种肿瘤靶向激活的铂类化合物的制备方法，其特征在于，所述肿瘤靶向激活的铂类化合物的制备方法用于制备权利要求1中所述的肿瘤靶向激活的铂类化合物，包括以下步骤：
1）、以铂类化合物为前体，添加R1基团，所述R1基团为修饰基团和具有靶向定位的靶向基团中的至少一种，所述修饰基团包括具有调节化合物水溶性作用的修饰基团和在肿瘤微环境中激活的修饰基团；
2）、添加Ract基团，所述Ract基团为酶激活基团。
4.一种根据权利要求1所述的肿瘤靶向激活的铂类化合物在制备治疗癌症的药物中的应用，其特征在于，所述癌症包括胃肠癌、结肠直肠癌、结肠癌、肝癌、胰腺癌、胆道癌、胃癌、泌尿生殖系统癌症、膀胱癌、睾丸癌、宫颈癌、恶性间皮瘤、骨原性肉瘤、食管癌、喉癌、前列腺癌、激素抵抗性前列腺癌、肺癌、乳癌、血液癌症、淋巴瘤、卵巢癌、脑癌、成神经细胞瘤、尤因肉瘤、肾癌、表皮样癌、皮肤癌和口癌。
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