CN115656390B - 一种氨酚羟考酮缓释片的含量测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物分析技术领域，具体公开了一种氨酚羟考酮缓释片的含量测定方法，取氨酚羟考酮缓释片样品，加入硫酸钠溶液，加热，转移至量瓶中，加入甲醇，用溶剂定容后离心，取上清液稀释制备供试品溶液，采用液相色谱仪对对乙酰氨基酚及盐酸羟考酮进行检测，通过此方法可以准确测定氨酚羟考酮缓释片中对乙酰氨基酚及盐酸羟考酮的含量，更好的保证氨酚羟考酮缓释片的质量，具有操作简单，准确度高，重现性好的优点。

Description

一种氨酚羟考酮缓释片的含量测定方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种氨酚羟考酮缓释片的含量测定方法。

背景技术

氨酚羟考酮缓释片是一种由麻醉药品羟考酮与解热镇痛药对乙酰氨基酚组成的复方缓释制剂，是首个也是唯一一个含有固定剂量的阿片类药物与解热镇痛药组成的复方缓释制剂，2014年3月11日获得FDA批准用于急性重度疼痛的治疗，每12小时服用1次，每日用药2次。氨酚羟考酮缓释片具有速释和缓释2种成份，速释成份发挥快速起效作用，可以实现1小时内缓解疼痛，缓释成份稳定持续地释放有效成份，可以实现长达12小时的持续镇痛。相对于氨酚羟考酮普通复方制剂每6小时给药1次，每日需用药4次，缓释制剂将减少患者服药次数，使日夜遭受疼痛的急性疼痛患者不需要夜间醒来服药。

目前国内外药典收载了对乙酰氨基酚、盐酸羟考酮的单方各类制剂及复方普通片剂，但均未收载氨酚羟考酮缓释片质量标准，也未见国内外文献报道其含量测定方法，且因氨酚羟考酮缓释片的处方组成及比例与复方普通片差异较大，两个主成分的占比差异也较大，因此，开发一种氨酚羟考酮缓释片的含量测定方法具有重要意义。

发明内容

本发明提供了一种耐用性和重现性好，准确度高，操作简单的氨酚羟考酮缓释片的含量测定方法，填补了现有技术中关于氨酚羟考酮缓释片含量测定方法这一技术的空白，对氨酚羟考酮缓释片开发中保证药品的质量具有重要现实意义。

为实现上述目的，本发明提供了一种氨酚羟考酮缓释片的含量测定方法，包括如下步骤：

S1.供试品溶液的制备：取氨酚羟考酮缓释片样品，加入硫酸钠溶液，加热，转移至容量瓶中，加入甲醇，用硫酸钠溶液定容后离心，取上清液稀释制备供试品溶液；

S2.对照品溶液的制备：以对乙酰氨基酚和盐酸羟考酮为对照品，制备对照品溶液；

S3.含量检测：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定供试品溶液中对乙酰氨基酚和盐酸羟考酮的含量。

进一步地，所述步骤S1中硫酸钠溶液的质量体积百分比浓度为1-15%，优选为5-10%，更优选为8-10%，进一步优选为8%。

进一步地，所述步骤S1中供试品溶液的制备包括如下步骤：取氨酚羟考酮缓释片样品于烧杯中，加入8%硫酸钠溶液，加热至沸腾，转移至容量瓶中，加入8%的热硫酸钠溶液，超声，加入甲醇溶液，用8%硫酸钠溶液定容后离心，取上清液稀释制备供试品溶液。

进一步地，所述步骤S1中所述甲醇的用量为容量瓶体积的20-50%，优选为20-30%，更优选为20%。

进一步地，所述步骤S1中供试品溶液的制备包括如下步骤：取1片氨酚羟考酮缓释片于烧杯中，加8%硫酸钠溶液，加热至沸腾，搅拌至无大颗粒物，转移至量瓶中，用8%的热硫酸钠溶液分次润洗烧杯，洗液合并倒入量瓶中，超声，用甲醇分次润洗烧杯，甲醇用量为量瓶体积的20%，洗液合并倒入量瓶中，超声，冷却至室温后，用8%硫酸钠溶液稀释至刻度，混匀，离心后取上清液稀释制备供试品溶液。

进一步地，所述步骤S3中液相色谱仪采用的流动相为：

流动相A：0.005mol/L己烷磺酸钠溶液，流动相B：甲醇，流动相C：乙腈。

进一步地，所述流动相A、流动相B、流动相C的体积比为（70-80）:10:15，优选为75:10:15。

进一步地，所述0.005mol/L己烷磺酸钠溶液中含有0.1%三乙胺，用磷酸调节己烷磺酸钠溶液pH值至3.8-4.2，pH优选为4.0。

进一步地，所述步骤S3中液相色谱仪采用的填充剂为辛烷基硅烷键合硅胶，柱温为35-45℃，检测波长为214nm，流速为1.3-1.7ml/min。

优选地，所述步骤S3中液相色谱仪采用的填充剂为辛烷基硅烷键合硅胶（Diamonsil C8 4.6×150 mm，5μm），柱温为40℃，检测波长为214nm，流速为1.5ml/min。

进一步地，所述步骤S3中测定供试品溶液中对乙酰氨基酚和盐酸羟考酮含量的方法为外标法。

在一些具体的实施方案中，所述氨酚羟考酮缓释片的含量测定方法，包括如下步骤：

S1.供试品溶液的制备：取氨酚羟考酮缓释片1片于烧杯中，加8%硫酸钠溶液，加热至沸腾，搅拌至无大颗粒物，转移至量瓶中，用8%的热硫酸钠溶液分次润洗烧杯，洗液合并倒入量瓶中，超声，用甲醇分次润洗烧杯，甲醇用量为量瓶体积的20%，洗液合并倒入量瓶中，超声，冷却至室温后，用8%硫酸钠溶液稀释至刻度，混匀，离心后取上清液稀释制备供试品溶液；

S2.对照品溶液的制备：分别取对乙酰氨基酚、盐酸羟考酮对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制备对照品溶液；

S3.含量检测：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪中，色谱条件如下：辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Diamonsil C8 4.6×150 mm，5μm），柱温为40℃，检测波长为214nm，流动相：流动相A为0.005mol/L己烷磺酸钠，流动相B为甲醇，流动相C为乙腈，流动相A、流动相B、流动相C的体积比为75:10:15，流速为1.5ml/min；

S4.含量计算：记录色谱图中对乙酰氨基酚和盐酸羟考酮的峰面积，按外标法计算供试品中两组分的含量。

本发明取得的有益效果：

氨酚羟考酮缓释片的处方组成及比例与复方普通片差异较大，两个主成分的占比差异也较大，因此，复方普通片剂的方法不适用于氨酚羟考酮缓释片，与现有技术相比，本发明通过加热煮沸等方式对样品进行预处理，可以更准确的测定对乙酰氨基酚和盐酸羟考酮的含量，该方法耐用性和重现性好，准确度高，操作简便，为更好的控制氨酚羟考酮缓释片的质量提供了参考依据。

附图说明

图1为盐酸羟考酮的线性关系图。

图2为对乙酰氨基酚的线性关系图。

具体实施方式

为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而用于限制本发明的范围，下例实施例中未提及的具体实验方法，通常按常规实验方法进行。

以下为实施例中所涉及的仪器、样品、对照品、试剂及其色谱条件。

1.仪器

天平：METTLER XS105；METTLER XP-6；

液相色谱仪：LC2030C。

2.样品

氨酚羟考酮缓释片：成都苑东生物制药股份有限公司；规格：盐酸羟考酮5mg和对乙酰氨基酚325mg，批号211206；

对乙酰氨基酚：河北冀衡药业股份有限公司；批号Y21111；

盐酸羟考酮：Macfarlan Smith Limited；批号Y21121。

3.对照品

盐酸羟考酮：成都苑东生物制药股份有限公司；批号20160801-5-D ；含量：100.0%；

对乙酰氨基酚：中国食品药品检定研究院；批号100018-201610；含量：99.9%。

4.试剂

硫酸钠：成都市科隆化学品有限公司；批号；纯度：98%；

己烷磺酸钠：Kewell；批号GS20092605；纯度：≥98%；

三乙胺：成都市科隆化学品有限公司；批号2021111201；含量：≥99.0%；

甲醇：Kewell；批号2021071628；含量：≥99.9%；

乙腈：北京百灵威科技有限公司；批号L790W15；含量：99.9%；

磷酸：成都市科隆化学品有限公司；批号2021111501；含量：≥85.0%。

溶剂筛选实验

氨酚羟考酮缓释片处方组成中，聚氧乙烯、羟丙纤维素及微晶纤维素的占比相对较高，且其在反相色谱常用溶剂下溶解性不佳，可能会影响含量测定过程中两个主成分的提取，进而影响含量测定结果，因此，结合氨酚羟考酮缓释片处方组成比例及辅料的溶解性，本发明对影响样品制备过程的主要辅料微晶纤维素、羟丙纤维素及聚氧乙烯在多种溶剂中的溶解性进行了考察，并进一步采用混合空白辅料进行溶剂的筛选，结果见表1和表2；

表1 主要辅料分别在不同溶剂中的溶解现象

表2 空白辅料在不同溶剂中的分散情况

实验结果表明：聚氧乙烯、羟丙纤维素及微晶纤维素在液相色谱常用溶剂下的溶解性不佳，表1中所述溶剂均不能满足微晶纤维素、羟丙纤维素及聚氧乙烯这三种辅料同时溶解或分散。表2结果显示不同浓度的硫酸钠与甲醇的混合溶剂均能使辅料分散性良好。

研磨器皿吸附影响考察实验

采用10%硫酸钠溶液与甲醇为溶剂，取氨酚羟考酮缓释片进行研钵吸附考察：取本品3片，精密称定重量，于玛瑙研钵中研成细粉，取2份细粉（约相当于对乙酰氨基酚325mg，盐酸羟考酮7.5mg），精密称定，分别置250ml量瓶中，加10%硫酸钠溶液适量使样品分散均匀，加37.5ml甲醇，超声5min使样品溶解，加10%硫酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，取适量置离心管中，离心（5000r/min）5min，精密量取上清液1ml置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别作为供试品溶液1、2；研钵中剩余细粉（含贴壁细粉）全量转移至另一250ml量瓶中，自“加10%硫酸钠溶液适量使样品分散均匀……”起，按上述步骤制备，作为供试品溶液3，平行制备3组，照含量测定项下的方法测定含量，记录色谱图，结果见表3；

表3 研磨器皿吸附影响考察结果

实验结果显示：氨酚羟考酮缓释片多片研磨后，取不同位置细粉，含贴壁细粉样品盐酸羟考酮含量与均值差异小于2%，但含贴壁细粉样品中对乙酰氨基酚测定值与均值差异在2%~5%之间，可见，研磨器皿的吸附对含量测定结果影响较大，不适用取多片研磨后取细粉测定含量，可考虑取多片，分别对单片全量转移处理，以多片测得的含量均值作为最终含量结果。

氨酚羟考酮缓释片不同处理方式考察实验

采用硫酸钠与甲醇混合溶剂对氨酚羟考酮缓释片的样品的处理方式进行考察，结果见表4；

表4 氨酚羟考酮缓释片不同处理方式考察结果

实验结果显示，氨酚羟考酮缓释片的硬度较大，不适宜研磨处理，以加热煮沸的方式可很快使片剂分散，其中，采用热的8%硫酸钠溶液可有效对样品进行全量转移，且处理后样品粘度较大，不容易过滤，使用离心方式操作简便，结果的平行性较好。

实施例1氨酚羟考酮缓释片的含量测定

（1）供试品溶液的制备

取氨酚羟考酮缓释片10片，分别置100ml烧杯中，加8%硫酸钠溶液30ml，加热煮沸，搅拌至无大颗粒物，稍冷后转移至250ml量瓶中，用热的8%硫酸钠溶液分次润洗烧杯，洗液合并倒入量瓶中，超声使分散，用甲醇50ml分次润洗烧杯，洗液合并倒入量瓶中，摇匀，超声使溶解，冷却至室温后，用8%硫酸钠溶液稀释至刻度，充分振摇，超声使混匀，离心，精密量取上清液1ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；

（2） 对照品溶液的制备

分别取对乙酰氨基酚、盐酸羟考酮对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml约含对乙酰氨基酚130μg和羟考酮2μg的混合溶液；

（3） 检测含量

取上述两种溶液，分别精密量取10μl，注入液相色谱仪中，以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Diamonsil C8 4.6×150 mm，5μm），柱温为40℃，检测波长为214nm；

流动相：流动相A为0.005mol/L己烷磺酸钠溶液，含0.1%三乙胺，用磷酸调己烷磺酸钠溶液pH值至4.0，流动相B为甲醇，流动相C为乙腈；

流动相A、流动相B、流动相C的体积比为75:10:15，流速为1.5ml/min；

（4） 含量计算

记录色谱图中对乙酰氨基酚和盐酸羟考酮的峰面积，按外标法计算供试品中两组分的含量；

计算公式：

式中：A_样：供试品溶液中两主峰峰面积；

A_对：对照品溶液中两主峰峰面积；

S_样：供试品溶液稀释倍数；

S_对：对照品溶液稀释倍数；

W_对：对照品称样量，mg；

P_对：对照品含量；

标示量：盐酸羟考酮5mg和对乙酰氨基酚325mg。

实施例2 方法学验证。

专属性实验

取空白溶剂、空白辅料溶液、干扰杂质定位溶液、对照品溶液、供试品溶液和加标供试品溶液，按拟定色谱条件进行检测，记录色谱图；

实验结果表明：两个主成分保留时间约2min及4min，干扰杂质定位溶液、溶剂及空白辅料在两个主成分峰位置处均无色谱峰，表明空白溶剂和空白辅料均对主峰无干扰，各实际检出的杂质也均未对两个主成分产生干扰；供试品溶液两个主成分峰纯度也符合要求，说明方法的专属性良好。

离心影响

因本品辅料中聚氧乙烯、羟丙纤维素遇水易形成胶体状，过滤难度较大，故采用离心方式对样品进行处理。考察离心对对照品溶液的影响，以未离心的溶液作为参照，比较离心前后两组分峰面积的变化情况；

实验结果表明：经离心后，对乙酰氨基酚无吸附，盐酸羟考酮吸附率为0.02%，说明离心对两主分含量无影响，故样品处理过程中可进行离心。

线性与范围

分别取对乙酰氨基酚与盐酸羟考酮对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成系列浓度对照品溶液，按拟定方法分别测定，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，对数据进行线性回归分析，结果见表5，盐酸羟考酮和对乙酰氨基酚的线性关系图分别见图1和图2；

表5 线性验证结果

实验结果表明：盐酸羟考酮在浓度0.3977μg/ml~3.9770μg/ml（定量限~200%）之间，对乙酰氨基酚在浓度0.2847μg/ml~271.4083μg/ml（定量限~200%）之间，峰面积对浓度进行线性回归，回归曲线的相关系数r均＞0.999；Y轴截距均小于100%浓度水平溶液所对应的峰面积的2%。表明在拟定的方法下，盐酸羟考酮及对乙酰氨基酚的浓度与峰面积均呈良好的线性关系。

准确度

本品方法的准确度采用空白辅料加适量对照品储备液定量配制成不同浓度的供试品溶液的方式考察。以处方辅料量考察，配制6份100%加标供试品溶液，按拟定的色谱条件进行测定，记录色谱图，计算加标供试品溶液中两个主成分回收率及其相对标准差，实验结果见表6；

表6 准确度实验结果

实验结果表明：6份加标供试品溶液中，对乙酰氨基酚的回收率在98.9%~99.3%之间，RSD为0.2%；盐酸羟考酮的回收率均在98.8%~103.7%之间，RSD为1.7%。拟定方法下，两个组分均能被准确回收，该方法准确度良好。

重复性实验

按拟定方法分别配制供试品溶液和对照品溶液，供试品溶液平行制备6份。按拟定的色谱条件进行测定，记录色谱图，计算供试品溶液中两个主成分的含量及其相对标准差，实验结果见表7；

表7 重复性实验结果

实验结果表明：6份供试品溶液中，盐酸羟考酮含量在99.09%~103.31%之间，RSD为1.4%；对乙酰氨基酚含量在101.28%~102.71%之间，RSD为0.6%，表明该方法重复性良好。

中间精密度

由不同实验人员在不同日期，使用不同仪器，按拟定方法配制供试品溶液和对照品溶液，供试品溶液平行制备6份。按拟定的色谱条件进行测定，记录色谱图，计算供试品溶液中两个主成分的含量及其相对标准差，实验结果见表8；

表8 中间精密度实验结果

实验结果表明：12份供试品溶液中，盐酸羟考酮含量在99.09%~105.37%之间，RSD为1.5%；对乙酰氨基酚含量在100.77%~102.71%之间，RSD为0.8%。实验结果证明该方法的精密度良好。

溶液稳定性

按拟定方法分别配制供试品溶液、对照品溶液。将对照品溶液和供试品溶液作为稳定性考察对象，分别置在室温条件下放置一定时间，按拟定的色谱条件进行测定，记录色谱图，考察峰面积的变化情况，以评价溶液的稳定性，实验结果见表9；

表9 溶液稳定性实验结果

实验结果表明：对照品溶液室温放置47h，两个主成分峰面积与0h比值在0.98~1.02之间；供试品溶液室温放置40.5h，两个主成分峰面积与0h比值在0.99~1.02之间，说明上述溶液在考察时间范围内，溶液稳定较好。

耐用性

为了考察拟定色谱条件（以下简称原条件）中的色谱参数发生微小变动时，含量测定结果的准确性不受影响的程度，对氨酚羟考酮缓释片含量测定方法的耐用性进行了考察。取对照品溶液及供试品溶液，分别按照拟定的耐用性色谱条件进行测定，将各耐用性实验条件下所测得的值与原条件相比较，结果见表10和表11；

表10 耐用性实验色谱条件

表11 耐用性实验结果

注：RSD（%）= 标准偏差（SD）/平均值*100%

实验结果表明：在原色谱条件基础上，流速变动±0.2mL/min、柱温变动±5℃、流动相有机相比例变动±5%、流动相水相pH变动±0.2以及更换色谱柱时，各耐用性条件测得的供试品溶液中，对乙酰氨基酚含量在101.3%~102.0%之间，RSD为0.2%，盐酸羟考酮含量在100.8%~103.8%之间，RSD为0.9%，表明拟定方法的色谱参数在上述范围内波动时，对检测结果无影响，该方法具有较好的耐用性。

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (9)

1.一种氨酚羟考酮缓释片的含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.制备供试品溶液：取氨酚羟考酮缓释片样品于烧杯中，加入硫酸钠溶液，加热，转移至容量瓶中，加入甲醇，用硫酸钠溶液定容后离心，取上清液稀释得供试品溶液，所述硫酸钠溶液的质量体积百分比浓度为1-15％；

S2.制备对照品溶液：以对乙酰氨基酚和盐酸羟考酮为对照品，制备对照品溶液；

S3.检测含量：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定供试品溶液中对乙酰氨基酚和盐酸羟考酮的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中加热条件为加热至沸腾。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中供试品溶液的制备包括如下步骤：取氨酚羟考酮缓释片样品于烧杯中，加入8％硫酸钠溶液，加热至沸腾，转移至容量瓶中，加入8％的热硫酸钠溶液，超声，加入甲醇溶液，用8％硫酸钠溶液定容后离心，取上清液稀释得供试品溶液。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中所述甲醇的用量为容量瓶体积的20-50％。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中液相色谱仪采用的流动相为：流动相A为0.005mol/L己烷磺酸钠溶液，流动相B为甲醇，流动相C为乙腈。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述流动相A、流动相B、流动相C的体积比为(70-80):10:15。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述0.005mol/L己烷磺酸钠溶液中含有0.1％三乙胺，用磷酸调节己烷磺酸钠溶液pH值至3.8-4.2。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中液相色谱仪采用的填充剂为辛烷基硅烷键合硅胶，柱温为35-45℃，检测波长为214nm，流速为1.3-1.7ml/min。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中测定供试品溶液中对乙酰氨基酚和盐酸羟考酮含量的方法为外标法。

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