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CN115197864B - 一种假单胞菌及应用其降解单环芳香烃的方法 - Google Patents

一种假单胞菌及应用其降解单环芳香烃的方法 Download PDF

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CN115197864B CN202111666475.0A CN202111666475A CN115197864B CN 115197864 B CN115197864 B CN 115197864B CN 202111666475 A CN202111666475 A CN 202111666475A CN 115197864 B CN115197864 B CN 115197864B
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Guangzhou Changpeiyou Food Research Co ltd
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Abstract

本发明公开了一种假单胞菌及应用其降解单环芳香烃的方法，属于环境污染微生物处理技术领域。本发明芳香烃降解菌CX20属于假单胞菌(Pseudomonas.sp)，保藏于广东省微生物研究所，保存编号为GDMCC.No 61305。该菌为革兰氏阴性菌，生物学特性为非发酵型，专性需氧，菌体形态为无芽孢杆菌，菌落呈圆形，浅黄色不透明，表面光滑湿润，有光泽，边缘光滑，中央凸起，直径2～3mm。该菌株对甲苯、间二甲苯和对二甲苯均具有较好的降解能力，说明该菌株具有较宽的底物利用能力。该菌株适于工业废水废气中芳香烃类物质的降解，具有广阔的应用前景。

Description

一种假单胞菌及应用其降解单环芳香烃的方法
技术领域
本发明涉及一株芳香烃降解菌，特别是涉及一种假单胞菌及应用其降解芳香烃的方法， 芳香烃主要为单环芳香烃类化合物，属于环境污染物生物处理技术领域。
背景技术
随着社会工业化和城市化进程的不断推进，基于挥发性有机物(VOCs，Volatileorganic compounds)带来的环境问题也日益严重。如何控制挥发性有机物的排放以及挥发性有机物 的治理已经成为近年来研究的热点之一。挥发性有机物中的芳香烃类化合物给人们的安全 健康带来较大威胁，如苯、甲苯、二甲苯能够对中枢神经系统产生麻痹作用，引起急性中 毒，且对皮肤黏膜有刺激作用，其中苯已是明确的易致癌物。
利用物理和化学方法处理二甲苯可以达到较好的效果，但其成本高，易造成二次污染。 相对于传统处理方法，生物治理法因其运行成本低、建设简单，无二次污染等优点而备受 国内外关注，逐渐成为当前挥发性有机物治理的主流。目前，生物治理法已被广泛应用到 恶臭和VOCs等废气的治理领域。但该技术在实际应用中仍然存在很多问题，其中一个问 题是生物法处理低浓度的有机废气效果较好，但是处理高浓度的废气效果却很低，而且一 种菌株往往只能针对一种有机污染物，对其他污染物收效甚微。因此，迫切需要一种高效 且广谱的降解菌，针对高浓度芳香烃废气具有较好的效果，而且对多种不同芳香烃类物质 都有较好的降解效果，以提高有生物处理系统对目标污染物的去除效果。
发明内容
本发明的主要目的就是针对现有技术存在的问题，提供一种能高效降解甲苯和二甲苯 等多种单环芳香烃的假单胞菌及应用其降解芳香烃的方法，使其应用于化工废水废气的处 理。
本发明目的通过如下技术方案实现：
一种假单胞菌，为假单胞菌(Pseudomonas.sp)，保存编号为GDMCC.No 61305。
应用假单胞菌降解单环芳香烃的方法：所述的假单胞菌(Pseudomonas.sp)以单环芳香 烃为碳源，摇床培养降解单环芳香烃。
为进一步实现本发明目的，优选地，所述的摇床培养温度为25-30℃。
优选地，所述的摇床培养的转速控制为120-160r/min。
优选地，所述的摇床培养的时间为24-72h。
优选地，所述的单环芳香烃为苯、甲苯和二甲苯中的一种或多种。
优选地，所述的单环芳香烃为二甲苯为间二甲苯和对二甲苯。
优选地，所述的摇床培养是将假单胞菌接种到含有碳源底物的无机盐培养基中，控制 初始pH为7-8培养。
优选地，所述的无机盐培养基为含N、P、S、K、Ca、Mg和微量元素的培养基，微量 元素包括Fe、Cu、Zn、Co。
优选地，所述的假单胞菌的接种量为4-6wt％；所述的碳源的浓度为365.6mg/L以下。
本发明的假单胞菌(Pseudomonas.sp)命名为假单胞菌CX20或假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)。
现有的VOC生物处理系统，通常是经过长达数十天时间的环境诱导逐渐建立起来的微 生态系统，其中存在大量的能利用挥发性有机物的细菌，某些菌株可能有较强的生物转化 能力。以苯系物(主要是单环芳烃)为唯一碳源，对VOC生物处理系统中的微生物进行富 集、驯化，并进行分离纯化，有望获得转化率高的菌株。所获得的高转化菌株，可进一步在发酵罐中进行纯培养，并直接投入VOC生物处理系统，从而极大地提高其处理效率。
菌株筛选来自某公司的VOC处理系统中生物滴滤池中的填料固形物，经过驯化、分离 纯化筛选得到的。
菌株的筛选方法：用洁净试管取活性污泥样品，4℃保存，用以二甲苯为唯一碳源的驯 化培养基驯化培养，驯化一周后取50微升培养液均匀涂布于平板筛选培养基，挑选在平板 培养基上单独的且长势良好的菌落划线分离，重复三次后得到纯培养菌株。
其中驯化培养基为通用的无机盐培养基，主要含N、P、S、K、Ca、Mg和微量元素的 培养基，微量元素包括Fe、Cu、Zn、Co。优选用如下配方：KH2PO4 338.8mg,(NH4)2SO4 234.O mg,Na2CO3 100.0mg,CaCl2·2H2O 5.16mg,MgSO4·7H2O 59.3mg，Na2HPO4·12H2O 890.7mg，FeSO4·7H2O 0.37mg,1mL微量元素母液(FeCl2·4H2O 1500mg,CoCl2·6H2O 190mg,ZnCl270mg,MnSO4·7H2O 100mg，NiCl2·6H2O 24mg,Na2MoO4·2H2O 24mg,MnCl2·4H2O 6mg,CuCl2·2H2O 2mg,蒸馏水1000mL，蒸馏水1000mL，固体培养基加1.5％琼脂。
菌株的培养条件：温度25-30℃，初始pH 7～8，摇床转速为150rpm。
假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)降解菌能以100-210mg/L的甲苯、二甲苯等挥发性有机污染物为碳源，并在25-30℃温度下、120-160r/min摇床培养的24-72h，菌体 数量达到108cfu/mL以上。
假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)对甲苯和二甲苯有很强的耐受能力。当甲苯 浓度低于130.5mg/L时，CX20在48h内能够完全降解甲苯，而后随着甲苯浓度的不断增加， 其降解率逐渐下降，但当其浓度达到261mg/L时，甲苯的降解率仍然为52.55％，当甲苯浓 度高达365.6mg/L时，甲苯的降解率为20％。从菌体生长状况来看，当甲苯浓度低于208.8mg/L，菌体浓度随底物浓度的增加而增加，峰值为2.13×108cfu/mL。
菌株CX20对间二甲苯和对二甲苯的耐受能力也很强。当间二甲苯浓度低于129mg/L 时，菌株能够在48h内完全降解培养基中的间二甲苯，当间二甲苯浓度在129～180.6mg/L之间时，菌株对其降解率在80％～90％之间，只有当间二甲苯浓度超过193.5mg/L时，间二甲苯的降解率才急速下降。当对二甲苯浓度低于180.6mg/L时，菌株能够在48h内完全降 解培养基中的对二甲苯，而当对二甲苯浓度超过193.5mg/L时，对二甲苯的降解率才急速 下降。从菌株的生长状况来看，底物为间二甲苯时菌株最高生长浓度为2.53×108cfu/mL； 底物为对二甲苯时菌株最高生长浓度为1.07×108cfu/mL。
假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)在降解单环芳烃时，碳源在100-210mg/L的初始浓度下，CX20在24-72h内对甲苯、间二甲苯和对二甲苯的降解率为60-100％，同时 对于邻二甲苯、苯和乙酸丁酯也有一定的降解效果。
本发明提供的假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)与现有技术的单环芳香烃降解 株相比，具有以下优点：
1)本发明假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)能降解废水中的甲苯、对二甲苯、间二甲苯等多种芳香烃类化合物，尤其适合油漆车间的应用。
2)本发明对甲苯、间二甲苯、对二甲苯等多种芳香烃类化合物具有较高的降解效率， 当底物浓度约为100mg/L，对甲苯和对二甲苯的降解率在99.9％以上，间二甲苯的降解率 在88％以上，当甲苯浓度为在206mg/L时，假单胞菌CX20在24h内对甲苯降解率达到了70％。
3)本发明对甲苯、间二甲苯、对二甲苯等多种芳香烃类化合物降解速率快且生长良好， 菌体浓度在48h时达到了1.80×108cfu/mL。
附图说明
图1为本发明所述降解菌假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)的宏观菌落图。
图2为本发明所述降解菌假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)的油镜显微照片。
图3为本发明所述降解菌假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)系统发育分析树。
图4为本发明所述降解菌假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)在苯、甲苯、(邻、间、对)二甲苯和乙酸正丁酯六种单一底物无机盐培养基中的降解图。
图5为本发明所述降解菌假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)对不同浓度甲苯的 利用情况。
图6为本发明所述降解菌假单胞菌对不同浓度间二甲苯的利用情况。
图7为本发明所述降解菌假单胞菌对不同浓度对二甲苯的利用情况。
图8为本发明所述降解菌假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)在含206mg/L浓度的甲苯单一底物无机盐培养基中的72h随时间降解曲线与菌体浓度变化图。
具体实施方式
以下通过具体实施例结合附图对本发明作进一步的详述。
实施例1：假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)的驯化与筛选
取广东韶关某地生物滤池中的活性污泥样品5mL接种于含100mL驯化培养基的250mL锥形瓶中，然后加入一定量的二甲苯为唯一碳源，密封瓶口，防止二甲苯挥发，在 30℃，摇床转速为150rpm培养2d，然后以5％的接种量转接与新鲜培养基以相同培养条 件继续驯化，培养基中添加的二甲苯含量依次增加，培养基中二甲苯的浓度依次为10mg/L、30mg/L、50mg/L、80mg/L、120mg/L。驯化完成后取最后一次驯化培养物按梯度稀释后 取100μL涂布在平板筛选培养基上，以封口膜密封，放入30℃恒温培养箱中倒置培养1d 后，再将培养皿正置培养1d。挑选在平板培养基上单独的且长势良好的菌落划线分离，重 复三次后得到纯培养菌株。纯培养菌株菌落呈圆形，浅黄色不透明，表面光滑湿润有光泽， 边缘光滑，中央凸起，直径2～3mm，见图1。
实施例2：假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)生理生化试验
采用10×100油镜观察上述假单胞菌CX20的形态如图2所示，由图可知该菌为短杆状，无芽孢细菌。
通过对该菌进行革兰氏染色、接触酶试验、淀粉水解试验、酯酶活性试验、甲基红试 验等等生理生化试验，确定该菌为革兰氏阴性、接触酶试验阳线、柠檬酸盐试验阳线、淀粉水解试验阴性、酯酶试验阴性、甲基红试验阴性、V-P试验阴性、吲哚试验阴性、硝酸 盐还原试验阴性。
实施例3：假单胞菌CX20(Pseudomonas.sp CX20)的鉴定
使用硅胶膜离心柱法，按照细菌基因组提取试剂盒操作手册详述的步骤提取分离菌株 DNA，通过16S rDNA通用引物27F:5′SEQ.ID.NO2：-AGA GTT TGA TCCTGC TCA G-3′ 和1492R:5′SEQ.ID.NO3：-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3′进行PCR扩增，PCR扩增 体系如下：50μL PCR反应体系含有DNA 1μL，上游引物2μL，下游引物2μL，2×PCR Mix 20μL，超纯水25μL。然后使用0.5×TBE缓冲液制备1％(w/v)琼脂糖凝胶加入Gold view 核酸染料，取适量PCR产物点样并进行琼脂糖凝胶电泳，然后照胶观察。确认目标条带清 晰明亮且在正确的分子量范围后，使用PCR产物纯化试剂盒从PCR反应液中回收DNA片 段。将回收得到的DNA片段送到生工生物工程(广州)公司进行DNA测序，将测得的DNA 序列复制到NCBI上(nationalcenter of biotechnology information)进行BLAST(basic local alignment searchtool)比对。经过比对鉴定出该细胞为香鱼假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)。然后使用MEGA-6软件构建菌株的系统发育树，见图3，可进一步确定 该菌株为香鱼假单胞菌。本发明假单胞菌(Pseudomonas.sp)的16S rRNA核苷酸序列具 体见SEQ.ID.NO1。
本发明假单胞菌(Pseudomonas.sp)于2020年11月20日保藏于广东省微生物菌种保 藏中心，保藏地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保存编号为GDMCC.No61305，保藏日期为2020年11月20日。
实施例4生长态细胞菌株在苯、甲苯、三种二甲苯和乙酸正丁酯六种单一底物降解方面的应用
将处于对数生长期的降解菌假单胞菌CX20按5wt％的接种量接种到含单一底物(分别 为苯、甲苯、三种二甲苯、乙酸丁酯)的100mg/L的无机盐培养基中，控制初始pH为7.0， 在30℃，140r/min摇床培养48h，利用顶空气相色谱测定培养液中的苯、甲苯、二甲苯、乙酸丁酯的含量，以加等量无菌水的空白作为参照，计算环境损失量。需要说明的时该无机盐培养基可以时本发明通用的无机盐培养基，为含N、P、S、K、Ca、Mg和微量元素的 培养基，微量元素包括Fe、Cu、Zn、Co。优选无机盐培养基组成：KH2PO4 1g,K2HPO4·3H2O 1g,(NH4)2SO4 0.5g,MgSO4·7H20 0.36g,KNO3 0.5g,CaCl20.001g，1mL微量元素母液 (FeCl2·4H2O 1500mg,CoCl2·6H2O 190mg,ZnCl2 70mg,MnSO4·7H2O 100mg，NiCl2·6H2O 24mg,Na2MoO4·2H2O 24mg,MnCl2·4H2O 6mg,CuCl2·2H2O 2mg，蒸馏水1000mL)琼脂 粉17g，蒸馏水1000mL,121℃高压蒸汽灭菌15min。
降解菌假单胞菌CX20对单一底物的降解效果如图4所示，CX20对甲苯的降解效果最好，在100mg/L的初始浓度下在48h完全降解，其次对间二甲苯和对二甲苯也有较强的 降解效果，在100mg/L的初始浓度下降解率分别为88.34％、99.89％，而对于邻二甲苯、苯 和乙酸丁酯也有一定的降解效果，降解率为3.76％，7.25％和18.07％。
实施例5菌株对甲苯、二甲苯的耐受情况
为探究菌株CX20对甲苯和二甲苯的耐受性，设置了一系列浓度梯度进行降解实验， 甲苯浓度(mg/L)：104.4，130.5，156.6，208.8，261，313.2，365.4，417.6；二甲苯浓度(mg/L)：103.2，129，154.8，167.7，180.6，193.5，206.4，258。实验条件同实施例4。
菌株CX20对不同浓度甲苯的耐受性如图5所示。当甲苯浓度低于130.5mg/L，CX20在48h内能够完全降解甲苯，而后随着甲苯浓度的不断增加，其降解率也不断下降；当甲 苯浓度达到261mg/L时，其降解率下降到52.55％；当甲苯浓度超过365.6mg/L时，甲苯的 降解率不到20％。从菌体生长状况来看，当甲苯浓度低于208.8mg/L，菌体浓度随底物浓 度的增加而增加，峰值为2.13×108cfu/mL，说明在此浓度下范围内甲苯对菌种的生长具有 促进作用，是菌种生长的主要营养限制条件。而当底物浓度在208.8～313.2mg/L之间，菌体 浓度开始不断下降，表明此浓度范围的甲苯对于菌种的生长已经有一定的抑制作用，原因 可能是甲苯对菌株具有一定的细胞毒性作用，从而抑制了菌株的生长，进而导致菌株对底 物的降解率也随之下降。
菌株CX20对间二甲苯(图6)和对二甲苯(图7)的利用情况类似。底物为间二甲苯时，当浓度低于129mg/L时，菌株能够完全降解培养基中的间二甲苯，当间二甲苯浓度在129～180.6mg/L之间时，菌株对其降解率在80％～90％之间，而当间二甲苯浓度超过193.5mg/L时，间二甲苯的降解率急速下降至5％以下。底物为对二甲苯时，菌株能够在48h内完全降解180.6mg/L浓度以下的对二甲苯，而当对二甲苯浓度超过193.5mg/L时，对二 甲苯的降解率也急速下降。从菌株的生长状况来看，其变化规律类似。当目标底物浓度低 于180.6mg/L，菌体浓度随底物浓度的增加而增加，并达到峰值。底物为间二甲苯时菌株最 高生长浓度为2.53×108cfu/mL；底物为对二甲苯时菌株最高生长浓度为1.07×108cfu/mL。菌株的生长规律总体来说一致，但当底物为间二甲苯时菌株的生长状况明显优于对二甲苯。 而当底物浓度超过193.5mg/L时，菌种在两种底物存在下都基本不生长，与二甲苯降解率 的变化规律一致。
实施例6：生长态细胞菌株在206mg/L浓度下的甲苯单一底物无机盐培养基中的随时 间降解变化
将处于对数生长期的降解菌假单胞菌CX20按5％的接种量接种到含单一底物甲苯的 206mg/L的无机盐培养基中，控制初始pH为7.0，在30℃，140r/min摇床培养，每隔12h 利用顶空气相色谱测定培养液中的甲苯的含量，同时测定OD600以计算菌浓度，绘制甲苯 浓度与菌浓度随时间变化曲线，加等量无菌水的空白作为参照，计算环境损失量。
如图8所示，CX20在以206mg/L的甲苯唯一碳源培养基中能稳定生长，菌浓度在48h达到最高，为1.80×108cfu/mL，甲苯含量在前24小时内急剧下降，而后趋于稳定，在50mg/L左右，降解效率最高达75.06％。
序列表
申请人：广州理格致生物科技有限公司
申请名称：一种假单胞菌及应用其降解单环芳香烃的方法
1、假单胞菌(Pseudomonas.sp)的16S rRNA核苷酸序列
GCAGTCGAGCGGATGACGGGAGCTTGCTCCTTGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAA TGCCTAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGACAACGTTTCGAAAGGAACGCTAATACCG CATACGTCCTACGGGAGAAAGCAGGGGACCTTCGGGCCTTGCGCTATCAGATGAGCCT AGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGATCCGTAACTGG TCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAG GCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGT GTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCAGTAAGTT AATACCTTGCTGTTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTAACTCTGTGCCAGC AGCCGCGGTAATACAGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTTGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATC CAAAACTGGCAAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGA AATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACT GACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCAC GCCGTAAACGATGTCAACTAGCCGTTGGAATCCTTGAGATTTTAGTGGCGCAGCTAAC GCATTAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGA CGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACC TTACCAGGCCTTGACATGCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACT CTGACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTC CCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTACCAGCACGTTATGGTGGGCACTCTAAG GAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCC CTTACGGCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAGAGGGTTGCCAAGCCG CGAGGTGGAGCTAATCTCACAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCG ACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGAATCAGAATGTCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGC
2、PCR扩增用26s rDNA序列通用引物27F:5′：-AGA GTT TGA TCCTGC TCA G-3′
3、PCR扩增用26s rDNA序列通用引物1492R:5′：-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3′
序列表
<110> 广州理格致生物科技有限公司
<120> 一种假单胞菌及应用其降解单环芳香烃的方法
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1340
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 假单胞菌（Pseudomonas.sp）的16S rRNA核苷酸序列
<400> 1
gcagtcgagc ggatgacggg agcttgctcc ttgattcagc ggcggacggg tgagtaatgc 60
ctaggaatct gcctggtagt gggggacaac gtttcgaaag gaacgctaat accgcatacg 120
tcctacggga gaaagcaggg gaccttcggg ccttgcgcta tcagatgagc ctaggtcgga 180
ttagctagtt ggtggggtaa tggctcacca aggcgacgat ccgtaactgg tctgagagga 240
tgatcagtca cactggaact gagacacggt ccagactcct acgggaggca gcagtgggga 300
atattggaca atgggcgaaa gcctgatcca gccatgccgc gtgtgtgaag aaggtcttcg 360
gattgtaaag cactttaagt tgggaggaag ggcagtaagt taataccttg ctgttttgac 420
gttaccgaca gaataagcac cggctaactc tgtgccagca gccgcggtaa tacagagggt 480
gcaagcgtta atcggaatta ctgggcgtaa agcgcgcgta ggtggtttgt taagttggat 540
gtgaaagccc cgggctcaac ctgggaactg catccaaaac tggcaagcta gagtacggta 600
gagggtggtg gaatttcctg tgtagcggtg aaatgcgtag atataggaag gaacaccagt 660
ggcgaaggcg accacctgga ctgatactga cactgaggtg cgaaagcgtg gggagcaaac 720
aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacgatgtc aactagccgt tggaatcctt 780
gagattttag tggcgcagct aacgcattaa gttgaccgcc tggggagtac ggccgcaagg 840
ttaaaactca aatgaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg 900
aagcaacgcg aagaacctta ccaggccttg acatgcagag aactttccag agatggattg 960
gtgccttcgg gaactctgac acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat 1020
gttgggttaa gtcccgtaac gagcgcaacc cttgtcctta gttaccagca cgttatggtg 1080
ggcactctaa ggagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg tggggatgac gtcaagtcat 1140
catggccctt acggcctggg ctacacacgt gctacaatgg tcggtacaga gggttgccaa 1200
gccgcgaggt ggagctaatc tcacaaaacc gatcgtagtc cggatcgcag tctgcaactc 1260
gactgcgtga agtcggaatc gctagtaatc gcgaatcaga atgtcgcggt gaatacgttc 1320
ccgggccttg tacacaccgc 1340
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 27F
<400> 2
agagtttgat cctgctcag 19
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 1492R
<400> 3
ggttaccttg ttacgactt 19

Claims (9)

1.一株芳香烃降解菌，其特征在于，该菌株为假单胞菌(Pseudomonas.sp)，编号为CX20，保藏编号为GDMCC.No 61305。
2.应用假单胞菌降解单环芳香烃的方法，其特征在于，权利要求1所述的假单胞菌(Pseudomonas.sp)以单环芳香烃为碳源，摇床培养降解单环芳香烃；所述的单环芳香烃为苯、甲苯和二甲苯中的一种或多种。
3.根据权利要求2所述的应用假单胞菌降解单环芳香烃的方法，其特征在于，所述的摇床培养温度为25-30℃。
4.根据权利要求2所述的应用假单胞菌降解单环芳香烃的方法，其特征在于，所述的摇床培养的转速控制为120-160r/min。
5.根据权利要求2所述的应用假单胞菌降解单环芳香烃的方法，其特征在于，所述的摇床培养的时间为24-72h。
6.根据就权利要求2所述的应用假单胞菌降解单环芳香烃的方法，其特征在于，所述的二甲苯为间二甲苯和对二甲苯。
7.权利要求2-4任一项所述的应用假单胞菌降解单环芳香烃的方法，其特征在于，所述的摇床培养是将假单胞菌接种到含有碳源底物的无机盐培养基中，控制初始pH为7-8培养。
8.根据就权利要求7所述的应用假单胞菌降解单环芳香烃的方法，其特征在于，所述的无机盐培养基为含N、P、S、K、Ca、Mg和微量元素的培养基，微量元素包括Fe、Cu、Zn、Co。
9.根据就权利要求7所述的应用假单胞菌降解单环芳香烃的方法，其特征在于，所述的假单胞菌的接种量为4-6wt％；所述的碳源的浓度为365.6mg/L以下。
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"生物滴滤池的微生物多样性分析及 VOC 降解菌的筛选";李理等;华南理工大学学报;第49卷(第11期);全文 *

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