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CN115184620B - 一种pla2r抗体的量子点荧光检测试纸条、试剂盒及其应用 - Google Patents

一种pla2r抗体的量子点荧光检测试纸条、试剂盒及其应用 Download PDF

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CN115184620B CN202211112919.0A CN202211112919A CN115184620B CN 115184620 B CN115184620 B CN 115184620B CN 202211112919 A CN202211112919 A CN 202211112919A CN 115184620 B CN115184620 B CN 115184620B
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Abstract

本发明提供一种PLA2R抗体的量子点荧光检测试纸条、试剂盒及其应用，属于分析化学和检测技术领域。本发明通过对PLA2R抗体的检测相关试剂等进行优化组合，从而获得具有高灵敏度及良好贮藏稳定性的检测产品，并且能够对多种血液样本，如全血、血清以及血浆实现一致性检测，因此具有良好的实际应用之价值。

Description

一种PLA2R抗体的量子点荧光检测试纸条、试剂盒及其应用
技术领域
本发明属于分析化学和检测技术领域，具体涉及一种PLA2R抗体的量子点荧光检测试纸条、试剂盒及其应用。
背景技术
本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
膜性肾病(membranous nephropathy，MN) 是成人肾病综合征中最主要的病 理类型之一，MN主要表现为严重的蛋白尿、低白蛋白血症、水肿和高脂血症，其病理表现是肾小球基底膜增厚伴上皮细胞下免疫复合物沉积，免疫荧光表现 是以IgG4为主、伴C3沿毛细血管壁颗粒样沉积。膜性肾病按发病原因可分为特发性膜性肾病和继发性膜性肾病。
继发性膜性肾病（SMN）继发于很多系统性疾病，如系统性红斑狼疮，类风湿性关节炎，乙肝病毒感染，以及药物、毒物、肿瘤或环境因素等，引起继发性膜性肾病的药物主要有一些金制剂、汞、青霉胺、布洛芬、双氯芬酸等。特发性膜性肾病（IMN）病因不明, 多认为是与免疫机制有关的主动过程, 很可能是内源性抗原引起局部或原位免疫复合物形成的自身免疫性疾病。
肾活检结果分析显示IMN是国内老年原发性肾小球疾病最常见的原因，约占全部MN的2/3，诊断IMN需进行肾活检病理检查，为有创性操作。2009年Beck等在成人IMN患者血清中检测到抗肌肉型磷脂酶A2受体（PLA2R）的自身抗体，表明PLA2R可能是成人IMN的重要靶抗原，抗PLA2R抗体可能是具有诊断意义的生物标志物。
近年很多研究证实，M型磷脂酶A2受体（PLA2R）是IMN发病中的主要自身抗原，而抗PLA2R抗体与IMN的诊断鉴别、疾病活动性、复发及预后等有关，对临床诊治MN具有指示意义。抗磷脂酶A2受体抗体与足细胞上的相应抗原结合，形成原位免疫复合物，继而通过旁路途径激活补体，形成C5b-9膜攻击复合物，损伤足细胞，破坏肾小球滤过屏障，产生蛋白尿，因此，PLA2R的血清抗体水平与患者临床病情和药物疗效有关。
研究发现，PLA2R属于甘露醇家族的成员之一，是一种相对分子质量为18500的Ⅰ型跨膜糖蛋白，PLA2R有两个亚型，即N型PLA2R和M型PLA2R，广泛分布于人体各器官。PLA2R由短胞内段（C端）和长胞外段组成，胞外段包含8个串联的c型凝集素样区域、N末端的半耽氧酸富含区域、1个Ⅱ型纤维蛋白样区域。2009年Beck等发现了一种M型跨膜磷脂酶A2受体的抗体，作为鉴别IMN的特异性血清标记物，并且抗PLA2R抗体在IMN的发生、发展中起到重要作用。
检测血清抗PLA2R抗体方法有3种，分别是酶联免疫吸附法（ELISA）、化学发光免疫分析法、间接免疫荧光试验法（IIF）。目前临床上比较认可的PLA2R抗体检测方法是欧盟公司生产的间接免疫荧光法，但是发明人发现，这种检测方法操作繁琐且时间周期长，对检验人员的操作水平要求较高，主要进行定性或者半定量检测，限制了其在临床科室的应用。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供一种PLA2R抗体的量子点荧光检测试纸条、试剂盒及其应用。本发明通过对PLA2R抗体的检测相关试剂等进行优化组合，从而获得具有高灵敏度及良好贮藏稳定性的检测产品，并且能够对多种血液样本，如全血、血清以及血浆实现一致性检测。基于上述研究成果，从而完成本发明。
具体的，本发明涉及以下技术方案：
本发明的第一个方面，提供一种PLA2R抗体的量子点荧光检测试纸条，所述量子点荧光检测试纸条包括底板，底板上覆盖层析结构，所述层析结构按照样品流动方向依次设置滤血膜、结合垫、检测垫和吸水垫，上述各部件相邻处交叠连接。
考虑到全血样本中含有45%的血细胞，血细胞（绝大部分为红细胞）若破裂或者流过视窗会对检测结果产生影响，使检测值出现较大偏差，因此，在试纸条加样孔端增加滤血膜（滤血膜经过预处理），截住红细胞，减少对检测结果的不利影响。所述滤血膜中包含抗红细胞抗体（RBC），用于过滤掉全血样本中的红细胞；所述滤血膜的预处理采用喷涂RBC预处理液的方式进行制备，所述预处理液的配方如下：0.07~0.13M的PBS缓冲液（pH7~8）中，含有1.8~3.0%KCl、1~3%酪蛋白钠、1~3%PVP-K30、0.4~1.0%S19和160~240μg/mL抗红细胞抗体(RBC)，采用如上配方的预处理液喷涂后干燥得到所述滤血膜；为了保留RBC的活性，上述干燥优选采用低温干燥的方式，如冷冻干燥方式，本发明研究发现，采用预喷涂滤血膜后冻干的方式，不仅能够最大程度保留RBC的活性，还能够封闭滤血膜上的空余位点，避免吸附血液样本中的目标物（PLA2R抗体），从而达到提高灵敏度的目的。
所述检测垫上沿层析方向依次设置检测检测线及质控线，所述检测线处包被有PLA2R抗原，所述质控线处包被有羊抗鸡IgY抗体。
上述试纸条中，所述滤血膜、结合垫及检测垫依次搭接，所述吸水垫与检测垫接壤部分搭接在检测垫上；进一步优选的方案中，所述滤血膜为玻璃纤维素膜；所述结合垫为玻璃纤维素膜；所述检测垫为硝酸纤维素膜；所述吸水垫为具有良好吸水性能的材料，如玻纤材质、棉浆材质或玻纤和棉浆的混合材质，优选的材质为棉浆材质，或采用市售吸水材料，例如吸水纸。
优选的，所述试纸条中，其底板采用具有一定硬度的疏水材料；进一步的，所述底板为PVC板。
进一步的，所述试纸条采用如下方法制备得到：
1）制备包被膜：将硝酸纤维素膜（NC膜）固定并划线，取抗PLA2R抗原和羊抗鸡IgY分别包被于NC膜的检测线和质控线的位置并进行干燥；将上述NC膜浸泡于洗涤剂（0.07~0.13M的MOPS缓冲液（pH6.8~pH7.6）中，含有0.3~1.0%Tween80，0.03~0.06%酪蛋白钠）中，超声洗涤去除未结合的抗原，然后取出进行二次干燥，将底板（PVC板）对应位置的粘纸撕去，然后将NC膜非点样面粘贴于PVC板的对应位置，即为所制备的包被膜；
2）制备结合垫：将量子点标记PLA2R抗体和量子点标记鸡IgY混匀，喷于玻璃纤维垫上，干燥后可得到所述的结合垫。
其中，所述量子点标记PLA2R抗体或量子点标记鸡IgY采用如下方法制备得到：
a：取硒化镉量子点，加入到MES缓冲液中，活化处理；然后向其中依次加入EDC和NHS，再加入PLA2R抗体或鸡IgY抗体进行避光反应；
b：向步骤a中的量子点标记液中加入酪蛋白和甘氨酸，室温下避光搅拌反应进行封闭；
c：取步骤b中的标记后混合液离心，并用PBS缓冲液作为洗脱液进行洗脱；
d：应用复溶液对步骤c中得到的标记后溶液进行稀释，并混匀，即得到量子点标记的PLA2R抗体或量子点标记鸡IgY；
其中，所述复溶液其配方具体为：0.05-0.2MTris-HCl缓冲液，含有0.1-1%PVP K-30，0.1-1%BSA，1-5%甘油，1-5%海藻糖。
3）制备滤血膜：
a：配制预处理液：0.07~0.13M的PBS缓冲液（pH7~8）中，含有1.8~3.0%KCl、1~3%酪蛋白钠、1~3%PVP-K30、0.4~1.0%S19和160~240μg/mL抗红细胞抗体(RBC)；
b：应用步骤a中所配制的预处理液，浸泡处理滤血膜；
c：将步骤b中的预处理滤血膜进行冻干处理，即得；
4）组装：
将底板上对应位置的粘纸撕去，将吸水垫粘贴在包被膜的NC膜上方，部分覆盖NC膜；将结合垫粘贴在NC膜下方，部分覆盖结合垫；将滤血膜粘贴在结合垫下方，部分覆盖结合垫，即可得到组装好的大板。
5）切条装壳：设置试纸条宽度后，进行裁切，即为制备好的试纸条。
进一步的，将步骤5）制备的试纸条正向放入卡壳中，压壳封装，即得具有壳体保护的检测卡。
本发明的第二个方面，提供一种PLA2R抗体的量子点荧光检测试剂盒，所述试剂盒至少包含第一方面所述PLA2R抗体的量子点荧光检测试纸条，以及用于稀释待测血液样本（包括但不限于全血、血清以及血浆）的样本稀释液。
所述样本稀释液中至少包括血清、聚乙烯吡咯烷酮、非离子型表面活性剂及抑菌剂；
所述血清为可采用胎牛血清、新生牛血清或小牛血清；进一步优选的方案中，采用新生牛血清，包括但不限于高级新生牛血清、标准新生牛血清或普通新生牛血清。
优选的，所述聚乙烯吡咯烷酮的分子量为8000-700000，包括聚乙烯吡咯烷酮高聚物或聚乙烯吡咯烷酮的衍生物；具体的实例中，所述聚乙烯吡咯烷酮可采用PVP K-10、PVPK-30或PVP K-90。
优选的，所述非离子型表面活性剂选自S17、S18、S19、S21、S22和S24中的一种或几种的组合；进一步优选的，所述非离子型表面活性剂为S17。
优选的，所述抑菌剂为ProClin300（CAS No. 96118-96-6）。
在本发明的一个具体实施方式中，所述样本稀释液具体配方如下：
0.05-0.2M的HEPES缓冲液（pH7.4）中，含有1.0-3.0%NaCl，5-10%新生牛血清，0.5-2%PVP K-30，0.1-1%S17和0.01-0.1%Proclin300。
本发明的第三个方面，提供一种检测血液中PLA2R抗体含量的方法，所述检测方法基于第一方面所述试纸条或第二方面所述试剂盒获得受试者血液样本中PLA2R抗体的浓度。
优选的，所述检测方法具体步骤如下：取待测血液样本滴加至样本稀释液中，混匀后，滴加至试纸条的滤血膜上，待其展板后，再对检测垫中检测线及质控线处荧光含量进行检测。
进一步的，所述荧光含量检测的方式包括但不限于荧光免疫分析仪、流式、荧光显微镜、共聚焦显微镜、全内反射或双光子显微镜等进行荧光检测。
进一步的，所述血液样本展板时间为4~6min。
本发明的第四个方面，提供上述试纸条、试剂盒或检测方法在如下任意一种或多种中的应用：
1）PLA2R抗体检测；
2）特发性膜性肾病诊断或辅助诊断。
需要说明的是，本发明技术方案中的预处理液、洗涤剂、复溶液、样本稀释液使用的原料组分中出现的百分比均为质量百分比。
以上一个或多个技术方案的有益技术效果：
1、上述技术方案中提供的检测试纸条中，在现有检测线包被的基础上，增加了洗涤过程，提高了检测灵敏度，实现了检测荧光值增强且灵敏度大大提升。
2、试纸条加样孔位置设置滤血装置：滤血膜经过含RBC缓冲液预处理后，采用冷冻干燥方式，最大程度保留了RBC的活性，还能够封闭滤血膜上的空余位点，避免其吸附血液样本中的目标物（PLA2R抗体），从而达到有效过滤红细胞的目的，实现了全血样本的检测，且全血样本与血清及血浆样本的检测结果有良好的一致性。
另外，上述试纸条具有良好的稳定性，可在常温下进行运输和保存，因此具有良好的实际应用之价值。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明实施例中试纸条结构示意图；
其中，1-滤血膜，2-结合垫，3-NC膜，4-吸水垫，5-底板（PVC板），6-检测线，7-质控线。
图2为本发明实施例中试纸条外部壳体结构示意图；
其中，8-加样孔，9-观察窗（视窗）。
图3为本发明实施例中试纸条PLA2R抗体标准曲线及回归方程。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。下列具体实施方式中如果未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域技术内的生物学的常规方法和条件，这种技术和条件在文献中有完整解释。
本发明提供一种用于血液中PLA2R抗体的检测试剂盒，该检测试剂盒包括试纸条和样本缓冲液，其以血液样本作为检测对象，基于ELISA竞争法对待检样本中的PLA2R抗体进行量子点荧光检测。与现有检测方法的显著不同之处在于，本发明采用竞争法进行检测，检测线（T线）包被有过量的PLA2R抗原，质控线（C线）包被有过量的羊抗鸡IgY；为了提高检测灵敏度和特异性，抗原包被之后增加了洗涤步骤，通过洗涤剂（所述洗涤剂包含缓冲体系、表面活性剂和蛋白）对包被T、C线后的NC膜进行洗涤去掉过量未结合的PLA2R抗原和鸡IgY，并封闭NC膜的空余位点。检测血液样本时，可以有效增加荧光强度，提升检测灵敏度。
本试剂盒采用竞争法，主体反应部分为结合垫和检测垫：检测垫的硝酸纤维素膜（NC膜）上依次设置检测线和质控线，其中检测线上包被有重组PLA2R抗原，质控线上包被有羊抗鸡IgY；结合垫上包被有量子点标记PLA2R抗体与量子点标记鸡IgY。检测时，加入待检样本后，由于层析作用，结合垫上的标记抗体随着样本溶液沿硝酸纤维素膜向前移动，其中的量子点标记PLA2R抗体与血液样本中的待测PLA2R抗体，竞争结合检测线包被的PLA2R抗原；未结合的样本溶液继续前移，其中的量子点标记鸡IgY被质控线抗体羊抗鸡IgY捕获，并形成C峰，完成质控校准反应。
展板完毕后将检测卡放入检测仪器，检测线区域的荧光值T随PLA2R抗体浓度的增加而降低，通过标准曲线计算即可得出待测样本中PLA2R抗体的含量。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例
一种PLA2R抗体的量子点荧光检测试剂盒，包括检测试纸条结构如图1所示，所述试纸条包括底板5及层析结构，底板5承载层析结构。
所述层析结构自加样端向样品层析方向具有滤血膜1、结合垫2、NC膜3及吸水垫4，所述滤血膜1、结合垫2、NC膜3依次搭接，所述吸水垫4接触NC膜3的部分搭在NC膜3上。
本实施例中，应用上述检测试剂盒的PLA2R抗体的量子点荧光检测方法，具体步骤如下：
1）制备包被膜：
（A）过量包被：将NC膜非点样面固定于划膜喷金仪的既定位置，取浓度为分别为1.3mg/mL的抗PLA2R抗原和0.8mg/mL的羊抗鸡IgY，应用三维划线喷金仪进行划线，将PLA2R和羊抗鸡IgY分别包被于NC膜的检测线T和质控线C的位置，37℃干燥8h。
（B）洗涤：将上述过量包被的NC膜浸泡于洗涤剂（0.1M的MOPS缓冲液（pH7.2）中，含有0.5%Tween80，0.05%酪蛋白钠）中，超声洗涤1min去除未结合的抗原，然后取出进行二次干燥，37℃8h。将底板（PVC板）对应位置的粘纸撕去，然后将NC膜非点样面粘贴于PVC板的对应位置，即为所制备的包被膜。
2）制备结合垫
（A）量子点标记PLA2R抗体
a：取10μl硒化镉量子点，加入到4mL离子强度为50mM的MES缓冲液（pH6.5）中，向其中加入20mg/mL EDC、20mg/mL NHS各15μl，再加入5mg/mL的PLA2R抗体130μL，室温下避光反应3h；
b：向步骤a中制备的量子点标记液中，加入终浓度为6mg/mL的酪蛋白和1mg/ml的甘氨酸，室温下避光搅拌反应1h进行封闭；
c：取步骤b中的标记后混合液转移至200KD超滤管中进行离心，以3000g/min离心15min，确保离心后液体体积小于原体积的1/10；用50mM PBS缓冲液（pH7.4）作为洗脱液，洗脱5次，确保每次离心后液体体积小于原体积的1/10；
d：应用复溶液对步骤c中得到的标记后溶液进行稀释，并混匀，即分别得到量子点标记PLA2R抗体；
（B）量子点标记鸡IgY
a：取10μl硒化镉量子点，加入到4mL离子强度为50mM的MES缓冲液（pH6.5）中，向其中加入20mg/mL EDC、20mg/mL NHS各15μl，分别加入5mg/mL的鸡IgY抗体100μL，室温下避光反应3h；
b：向步骤a中制备的量子点标记液中，加入终浓度为6mg/mL的酪蛋白和1mg/ml的甘氨酸，室温下避光搅拌反应1h进行封闭；
c：取步骤b中的标记后混合液转移至200KD超滤管中进行离心，以3000g/min离心15min，确保离心后液体体积小于原体积的1/10；用50mM PBS缓冲液（pH7.4）作为洗脱液，洗脱5次，确保每次离心后液体体积小于原体积的1/10；
d：应用复溶液对步骤c中得到的标记后溶液进行稀释，并混匀，即分别得到量子点标记鸡IgY。
上述复溶液配方为：0.1MTris-HCl缓冲液，0.5%PVPK-30，0.5%BSA，2%甘油，2%海藻糖。
（C）喷垫
将复溶后的量子点标记PLA2R抗体和量子点标记鸡IgY按比例混匀，应用三维划线喷金仪按3μl/cm喷于玻璃纤维垫上，37℃干燥4h，即可得到所述的结合垫。
3）滤血膜预处理
a：配制预处理液：0.1M的PBS缓冲液（pH7.4）中，含有2.0%KCl、2%酪蛋白钠、2%PVP-K30、0.6 %S19和200μg/ml抗红细胞抗体(RBC)；
b：应用步骤a中所配制的预处理液，浸泡处理滤血膜，室温1h；
c：将步骤b中的预处理滤血膜用冻干机进行干燥，即得预处理的滤血膜；
4）组装：
将底板上对应位置的粘纸撕去，将吸水纸粘贴在NC膜上方对应位置，覆盖NC膜1mm；将结合垫粘贴在NC膜下方，覆盖结合垫1mm；将滤血膜粘贴在结合垫下方，覆盖结合垫2mm，即可得到组装好的大板。
5）切条装壳：应用微电脑自动斩切机，设置好试纸条宽度后，进行裁切，即为制备好的试纸条，将试纸条装入壳体组装形成图2所示的检测卡，并放入铝箔袋袋中密封，即得到单人份PLA2R抗体的检测卡。
6）配制样本稀释液。按照最优配方，0.1M的HEPES缓冲液（pH7.4）中，含有1.2%NaCl，6%新生牛血清，1%PVP K-30，0.8%S17和0.05%Proclin300。
7）用于检测样本中PLA2R抗体时，所述检测方法包括以下步骤：
a.吸取50μL待测样本（血清/血浆/全血）加入100μL样本稀释液中，混匀备用。
b.向上述检测卡加样孔中加入50μL稀释后样本，展板待5min后，插入荧光免疫分析仪，对检测卡的荧光信号强度进行检测，检测线和质控线的荧光值分别以T、C表示，最终得到的检测结果以比值形式提供（即T/C作为输出结果），将检测结果比值代入到标准曲线中，如图3所示，所述PLA2R抗体的标准曲线回归方程为：y=2.36149-2.52957x，其中，r2=0.99583；并对待测样本中PLA2R抗体浓度进行拟合。
对比例1
制备方法同实施例1，区别在于PLA2R抗体检测试剂盒制备包被膜时，T、C线进行过量包被后没有增加洗涤步骤。
对比例2
制备方法同实施例1，区别在于PLA2R抗体检测试剂盒的检测试纸条的滤血膜部分没有经过预处理。
效果验证
1、实施例与对比例检测临床样本
实施例1中的检测结果与临床诊断IMN结果的阴阳相符率可达100%，而对比例1与对比例2中的阴阳相符率分别为85%和75%。
表1 PLA2R抗体检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE001
2、检测灵敏度验证
本发明中试纸条的技术指标包括：
准确度：相对偏差不超过±10%；
重复性：CV不超过±10%；
检出限：PLA2R抗体 检出限不高于3 RU/mL；
线性范围：PLA2R抗体 线性范围[3, 50] RU/mL。
、试纸条稳定性验证
以已知PLA2R抗体浓度为18RU/mL的样本对3个不同批次的试纸条进行测试，结果如下表2所示：
表2 试纸条稳定性验证结果
Figure 683117DEST_PATH_IMAGE002
表明其具有良好常温贮藏稳定性，操作简便，可实现常温运输。
最后应该说明的是，以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。上述虽然对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。

Claims (6)

1.一种PLA2R抗体的量子点荧光检测试纸条，其特征在于，所述量子点荧光检测试纸条包括底板，底板上覆盖层析结构，所述层析结构按照样品流动方向依次设置滤血膜、结合垫、检测垫和吸水垫，上述各部件相邻处交叠连接；
其中，所述滤血膜的预处理采用喷涂RBC预处理液的方式进行制备，所述预处理液的配方如下：0.07~0.13M的PBS缓冲液中，含有1.8~3.0%KCl、1~3%酪蛋白钠、1~3% PVP-K30、0.4~1.0%S19和160~240μg/mL抗红细胞抗体；所述预处理液的原料组分中出现的百分比均为质量百分比；
所述检测垫上沿层析方向依次设置检测检测线及质控线，所述检测线处包被有PLA2R抗原，所述质控线处包被有羊抗鸡IgY抗体；
所述试纸条采用如下方法制备得到：
1）制备包被膜：将硝酸纤维素膜固定并划线，取抗PLA2R抗原和羊抗鸡IgY分别包被于NC膜的检测线和质控线的位置并进行干燥；将上述NC膜浸泡于洗涤剂中，超声洗涤去除未结合的抗原，然后取出进行二次干燥，将底板对应位置的粘纸撕去，然后将NC膜非点样面粘贴于PVC板的对应位置，即为所制备的包被膜；所述洗涤剂配方为：0.07~0.13M的MOPS缓冲液中，含有0.3~1.0%Tween80，0.03~0.06%酪蛋白钠；所述洗涤剂的原料组分中出现的百分比均为质量百分比；
2）制备结合垫：将量子点标记PLA2R抗体和量子点标记鸡IgY混匀，喷于玻璃纤维垫上，干燥后可得到所述的结合垫；
3）制备滤血膜：
a：配制预处理液：0.07~0.13M的PBS缓冲液中，含有1.8~3.0%KCl、1~3%酪蛋白钠、1~3%PVP-K30、0.4~1.0%S19和160~240μg/mL抗红细胞抗体；所述预处理液的原料组分中出现的百分比均为质量百分比；
b：应用步骤a中所配制的预处理液，浸泡处理滤血膜；
c：将步骤b中的预处理滤血膜进行冻干处理，即得；
4）组装：
将底板上对应位置的粘纸撕去，将吸水垫粘贴在包被膜的NC膜上方，部分覆盖NC膜；将结合垫粘贴在NC膜下方，部分覆盖结合垫；将滤血膜粘贴在结合垫下方，部分覆盖结合垫，即可得到组装好的大板；
5）切条装壳：设置试纸条宽度后，进行裁切，即为制备好的试纸条。
2.如权利要求1所述的量子点荧光检测试纸条，其特征在于，所述滤血膜、结合垫及检测垫依次搭接；
所述滤血膜为玻璃纤维素膜；所述结合垫为玻璃纤维素膜；所述检测垫为硝酸纤维素膜；所述吸水垫为吸水纸；所述底板为PVC板。
3.如权利要求1所述的量子点荧光检测试纸条，其特征在于，所述步骤2）中，所述量子点标记PLA2R抗体或量子点标记鸡IgY采用如下方法制备得到：
a：取硒化镉量子点，加入到MES缓冲液中，活化处理；然后向其中依次加入EDC和NHS，再加入PLA2R抗体或鸡IgY抗体进行避光反应；
b：向步骤a中的量子点标记液中加入酪蛋白和甘氨酸，室温下避光搅拌反应进行封闭；
c：取步骤b中的标记后混合液离心，并用PBS缓冲液作为洗脱液进行洗脱；
d：应用复溶液对步骤c中得到的标记后溶液进行稀释，并混匀，即得到量子点标记的PLA2R抗体或量子点标记鸡IgY；
其中，所述复溶液其配方具体为：0.05-0.2MTris-HCl缓冲液中，含有0.1-1%PVP K-30，0.1-1%BSA，1-5%甘油，1-5%海藻糖；所述复溶液的原料组分中出现的百分比均为质量百分比。
4.如权利要求1所述的量子点荧光检测试纸条，其特征在于，所述制备方法还包括将步骤5）制备的试纸条正向放入卡壳中，压壳封装，即得具有壳体保护的试纸条。
5.一种PLA2R抗体的量子点荧光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒至少包含权利要求1-4任一项所述PLA2R抗体的量子点荧光检测试纸条，以及用于稀释待测血液样本的样本稀释液；
所述样本稀释液中至少包括血清、聚乙烯吡咯烷酮、非离子型表面活性剂及抑菌剂。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液具体配方如下：
0.05-0.2M的HEPES缓冲液中，含有1.0-3.0%NaCl，5-10%新生牛血清，0.5-2%PVP K-30，0.1-1%S17和0.01-0.1%Proclin300；所述样本稀释液的原料组分中出现的百分比均为质量百分比。
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