CN115175893A - 2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-胺盐的固体形式 - Google Patents

Abstract

本发明提供了2‑((4‑((S)‑2‑(5‑氯吡啶‑2‑基)‑2‑甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯‑4‑基)哌啶‑1‑基)甲基)‑1‑(((S)‑氧杂环丁烷‑2‑基)甲基)‑1H‑苯并[d]咪唑‑6‑甲酸,1,3‑二羟基‑2‑(羟基甲基)丙烷‑2‑胺盐的固体形式，例如，水合物(例如一水合物)结晶形式(例如形式2或形式3)或无定形形式；以及药物组合物，及其在哺乳动物诸如人中治疗由GLP‑1R调节的疾病、病症或障碍的用途。

Description

2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧 杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2- 基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸, 1,3-二羟基-2-(羟基甲 基)丙烷-2-胺盐的固体形式

技术领域

本发明提供了2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸,1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-胺盐的固体形式(例如结晶形式)；其制备方法；药物组合物、剂型、及其在哺乳动物诸如人中治疗由GLP-1R调节的疾病、病症或障碍的用途。

发明背景

由于其日渐增加的患病率以及相关的健康风险，糖尿病是重要的公众健康关注点。此疾病的特征在于由胰岛素产生、胰岛素作用、或二者的缺陷导致的血糖的高水平。识别了糖尿病的两种主要形式，即1型和2型。1型糖尿病(T1D)在身体的免疫系统破坏胰腺β细胞时而发展出，所述胰腺β细胞是身体内制造激素胰岛素(其调节血糖)的仅有的细胞。为了生存，患有1型糖尿病的人必须通过注射或泵施用胰岛素。2型糖尿病(一般称为T2DM)通常开始于胰岛素抗性或当胰岛素未充分产生以维持可接受的葡萄糖水平时。

目前，各种药理学方案可供用于治疗高血糖症及后来用于治疗T2DM (Hampp, C.等人，Use of Antidiabetic Drugs in the U.S., 2003-2012，Diabetes Care 2014, 37,1367-1374)。这些可以分成六大类，各类通过不同的主要机制起作用：(A)胰岛素分泌促进剂，包括磺酰脲类(例如，格列吡嗪、格列美脲、格列本脲)、格列奈类(例如，那格列奈、瑞格列奈)、二肽基肽酶IV (DPP-IV)抑制剂(例如，西格列汀、维格列汀、阿格列汀、度格列汀、利拉利汀、沙格列汀)和胰高血糖素-样肽-1受体(GLP-1R)激动剂(例如，利拉鲁肽、阿必鲁肽、艾塞那肽、利司那肽、杜拉鲁肽、索马鲁肽)，它们通过作用于胰腺β-细胞而增强胰岛素分泌。磺酰脲类和格列奈类具有有限的功效及耐受性，引起体重增加并经常诱发低血糖症。DPP-IV抑制剂具有有限的功效。市场上销售的GLP-1R激动剂是通过皮下注射施用的肽。利拉鲁肽另外被批准用于治疗肥胖。(B)双胍类(例如，二甲双胍)被认为主要通过降低肝脏葡萄糖产生而起作用。双胍类经常引起胃肠紊乱和乳酸性酸中毒，这进一步限制它们的使用。(C)α-葡萄糖苷酶的抑制剂(例如，阿卡波糖)降低肠道葡萄糖吸收。这些药剂经常引起胃肠紊乱。(D)噻唑烷二酮类(例如，吡格列酮、罗格列酮)作用于在肝脏、肌肉和脂肪组织中的特定受体(过氧化物酶体增生物活化的受体γ)。它们调节脂类代谢，随后增强这些组织对胰岛素作用的应答。这些药物的频繁使用可以导致体重增加，并可以诱发水肿及贫血。(E)胰岛素单独地或与上述药剂联合用于更严重的病例，且频繁使用也可以导致体重增加及带有低血糖症风险。(F)钠-葡萄糖连接的转运蛋白协同转运蛋白2 (SGLT2)抑制剂(例如，达格列净、恩格列净、卡格列净、埃格列净)抑制葡萄糖在肾脏中的重吸收并从而降低血液中的葡萄糖水平。此新兴药物类别可能与酮症酸中毒和泌尿道感染相关。

但是，除了GLP-1R激动剂和SGLT2抑制剂以外，所述药物具有有限的功效且未解决最重要的问题：不断衰退的β细胞功能及相关的肥胖。

肥胖是一种慢性疾病，其在现代社会高度普遍且与众多医学问题相关联，所述医学问题包括高血压、高胆固醇血症和冠心病。其进一步与T2DM和胰岛素抗性高度相关，后者通常伴随高胰岛素血症或高血糖症或二者。另外，T2DM与冠状动脉疾病的二至四倍的增加的风险相关联。目前，高效消除肥胖的唯一治疗是减重手术，但是此治疗昂贵且有风险。药理学干预通常不太有效且与副作用相关联。因此，显然需要更有效的药理学干预，其具有更少的副作用且方便施用。

尽管T2DM最常与高血糖症和胰岛素抗性相关联，但是与T2DM相关联的其它疾病包括肝脏胰岛素抗性、葡萄糖耐量减低、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病变、肥胖、血脂异常、高血压、高胰岛素血症和非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。

NAFLD是代谢综合征的肝脏表现，并且是包括脂肪变性、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、纤维化、肝硬化及最终肝细胞癌的一系列肝病症。NAFLD和NASH被认为是主要的脂肪肝疾病，因为它们导致具有升高的肝脂质的最大比例的个体。NAFLD/NASH的严重程度是基于脂质的存在、炎症细胞浸润、肝细胞气球样变及纤维化程度。尽管并非所有患有脂肪变性的个体都进展成NASH，但是相当一部分确实如此。

GLP-1是肠内L细胞响应于食物摄取所分泌的30个氨基酸长度的肠降血糖素激素。GLP-1已经被表明以生理学和葡萄糖依赖性方式刺激胰岛素分泌、降低胰高血糖素分泌、抑制胃排空、降低食欲及刺激β-细胞增殖。在非临床实验中，GLP-1通过刺激对葡萄糖依赖性胰岛素分泌重要的基因的转录及通过促进β-细胞新生而促进持续的β-细胞能力(Meier,等人. Biodrugs. 2003; 17 (2)： 93-102)。

在健康的个体中，GLP-1通过刺激胰腺的葡萄糖依赖性胰岛素分泌从而导致在周边的葡萄糖吸收增加，在调节餐后血糖水平中起重要作用。GLP-1还遏制胰高血糖素分泌，从而导致减少的肝葡萄糖输出。此外，GLP-1延迟胃排空并减慢小肠运动，从而延迟食物吸收。在患有T2DM的人中，GLP-1的正常的餐后升高不存在或减少(Vilsboll T, 等人，Diabetes. 2001. 50; 609-613)。

Holst (Physiol. Rev. 2007, 87, 1409)和Meier (Nat. Rev. Endocrinol.2012, 8, 728)描述了GLP-1受体激动剂诸如GLP-1、利拉鲁肽和艾塞那肽-4具有通过降低空腹和餐后葡萄糖(FPG和PPG)以改善患有T2DM的患者的血糖控制的3种主要药理学活性：(i)增加的葡萄糖依赖性的胰岛素分泌(改善的第一阶段和第二阶段)，(ii)在高血糖病症下的胰高血糖素抑制活性，(iii)胃排空速率的延迟，从而导致膳食衍生的葡萄糖的延迟吸收。

仍然需要对心脏代谢疾病及相关疾病的容易施用的预防和/或治疗。

2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸(在本文中被称作“化合物1”)是GLP1激动剂。

在2019年6月10日提交的美国专利申请No.16/436,311的实施例10和2019年6月11日提交的国际申请No.PCT/IB2019/054867的实施例10中制备了化合物1 (以游离酸和作为其tris盐的形式二者)，它们中的每一篇特此通过引用整体并入本文。其中，将化合物1指定为2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-甲酸, DIAST-X2：

其中在化合物结构的左侧部分上的手性中心被标记为“abs”以指示手性中心只有一种立体构型（即，相对于该手性中心不是外消旋体）。

另外，美国专利申请No.16/436,311和国际申请No.PCT/IB2019/054867报道了化合物1的tris盐的无水结晶形式（设计为形式A）。

众所周知，固体形式，例如特定药物（包括、例如，脱水物、水合物、溶剂化物等）的结晶形式经常是药物的制备容易度、稳定性、溶解度、贮存稳定性、配制容易度、处理容易度和体内药理学和/或功效的重要决定因素。当相同的物质组成以不同的晶格排列结晶时，会出现不同的结晶形式，从而导致特定多晶型物形式特有的不同热力学性能和稳定性。在可以产生两种或更多种结晶形式的情况下，合乎需要的是，具有一种方法来制造纯形式的每种结晶形式。在决定哪种结晶形式是优选的时，必须对比晶体形式的众多性能，并基于许多物理性能变量选择优选的晶体形式。完全可能的是，在其中某些方面诸如制备容易度、稳定性等被认为是关键的情况下，一种结晶形式可以是优选的。在其它情况下，为了更大的溶解度和/或优越的药代动力学，不同的结晶形式可能是优选的。此外，由于与一种纯结晶形式相关的潜在优点，当一种物质的两种或更多种结晶形式可以存在时，合乎需要的是防止或最小化多结晶形式的转化（即，一种晶体形式转化为另一种；或一种晶体形式与无定形形式之间的转化）。这样的多结晶形式转化可以发生在含有结晶形式的制剂的制备过程中以及在含有晶体形式的药物剂型的储存过程中。因为一直在寻求表现出例如更好生物利用度或更好稳定性的改进的药物制剂，所以持续需要现有药物分子的新的或更纯的固体（例如结晶）形式。本文所述的化合物1的tris盐的新型固体（例如结晶）形式针对这个目的和其它重要的目的。

发明概述

本发明提供了固体形式，例如2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸，tris盐的水合物(例如一水合物)结晶形式(例如形式2或形式3)或无定形形式，其根据本文提供的粉末X-射线衍射数据、¹³C固态NMR数据和/或任选的单晶光谱数据进行表征。

本发明进一步提供了组合物，其含有本发明的水合物(例如一水合物)结晶形式(例如形式2或形式3)。

本发明进一步提供了一种用于制备本发明的水合物(例如一水合物)结晶形式(例如形式2或形式3)的方法，例如，一种用于制备形式3的方法，其包括将化合物1的tris盐的无水结晶形式(例如形式A)在混合溶剂中制浆以形成一水合物结晶形式，其中所述混合溶剂包含水和乙腈。

本发明进一步提供了一种用于治疗疾病或障碍的方法，其包括给需要这样的治疗的哺乳动物施用治疗有效量的本发明的水合物(例如一水合物)结晶形式(例如形式2或形式3)，其中所述疾病或障碍选自T1D、T2DM、前驱糖尿病、特发性T1D、LADA、EOD、YOAD、MODY、营养不良相关的糖尿病、妊娠糖尿病、高血糖症、胰岛素抗性、肝胰岛素抗性、葡萄糖耐量减低、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、肾脏疾病、糖尿病性视网膜病变、脂肪细胞功能障碍(Adipocyte dysfunction)、内脏脂肪沉积、睡眠呼吸暂停、肥胖、进食障碍、由其它药剂的使用引起的体重增加、过度糖渴求、血脂异常、高胰岛素血症、NAFLD、NASH、纤维化、伴有纤维化的NASH、肝硬化、肝细胞癌、心血管疾病、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、外周血管病、高血压、内皮功能障碍、受损的血管顺应性、充血性心力衰竭、心肌梗塞、中风、出血性中风、缺血性中风、创伤性脑损伤、肺动脉高血压、血管成形术以后的再狭窄、间歇性跛行、餐后脂血症、代谢性酸中毒、酮病、关节炎、骨质疏松症、帕金森病、左心室肥大、外周动脉疾病、黄斑变性、白内障、肾小球硬化症、慢性肾衰竭、代谢综合征、X综合征、经前期综合征、心绞痛、血栓形成、动脉粥样硬化、短暂缺血发作、血管再狭窄、糖代谢异常(Impaired glucosemetabolism)、空腹血糖受损的病症(conditions of impaired fasting plasmaglucose)、高尿酸血症、痛风、勃起功能障碍、皮肤和结缔组织障碍、银屑病、足部溃疡、溃疡性结肠炎、高载脂蛋白B脂蛋白血症、阿尔茨海默氏病、精神分裂症、认知受损(impairedcognition)、炎性肠病、短肠综合征、克罗恩氏病、结肠炎、肠易激综合征、多囊性卵巢综合征和成瘾。

本发明进一步提供了2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸tris盐的无定形形式，其药物组合物，及其在治疗由GLP-1R调节的疾病或障碍中的用途。

附图简述

图1显示了在配备Cu辐射源的Bruker AXS D8 Endeavor衍射仪上进行的化合物1的tris盐的无水结晶形式(形式A)的观察到的粉末X-射线衍射图样。

图2显示了在定位进Bruker-BioSpin Avance III 500 MHz (¹H频率) NMR波谱仪中的Bruker-BioSpin CPMAS探针上进行的化合物1的tris盐的形式A的观察到的¹³C ssNMR图样。由散列的标记和灰色阴影框标示的峰是旋转边带。

图3显示了化合物1的tris盐的一水合物结晶形式(形式2)的示例性单晶结构。

图4显示了化合物1的tris盐的形式2的计算的/模拟的PXRD图样，其基于来自其单晶X-射线数据分析的信息。

图5显示了化合物1的tris盐的一水合物结晶形式(形式3)的示例性单晶结构。

图6显示了在配备Cu辐射源的Bruker AXS D8 Endeavor衍射仪上进行的化合物1的tris盐的形式3的观察到的粉末X-射线衍射图样。

图7显示了在定位进Bruker-BioSpin Avance III 500 MHz (¹H频率) NMR波谱仪中的Bruker-BioSpin CPMAS探针上进行的化合物1的tris盐的形式3的观察到的¹³C ssNMR图样。由散列的标记和灰色阴影框标示的峰是旋转边带。

发明详述

在第一方面，本发明提供了化合物1的tris盐的水合物(例如一水合物)结晶形式，其可以通过其关于例如单晶X-射线数据、粉末X-射线衍射图样(PXRD)的独特固态特征和其它固态方法诸如固态NMR来鉴定。本文中公开的化合物1的tris盐的水合物结晶形式是指在结晶物质/复合物的晶格中包括化合物1的tris盐和水(水合物水)二者的结晶物质/复合物。

在第二方面，本发明提供了化合物1的tris盐的一水合物结晶形式，在本文中指定为形式2。化合物1的tris盐的一水合物结晶形式(形式2)可以通过其关于例如单晶X-射线数据、粉末X-射线衍射图样(PXRD)的独特固态特征和其它固态方法来鉴定。

形式2可以通过化合物1的tris盐在溶剂中的溶液的缓慢溶剂蒸发以沉淀形式2来制备，其中所述溶剂是约3%至约10% (例如约2%至约5%，或约3%至约4%，v/v)的在质子性有机溶剂(其可与水混溶，例如，醇诸如甲醇或乙醇)中的水。在某些实施方案中，通过化合物1的tris盐在溶剂中的溶液的缓慢溶剂蒸发来制备形式2，其中所述溶剂是约2%至约5% (例如或约3%至约4%，v/v)的在甲醇中的水。在某些实施方案中，原位产生化合物1的tris盐的溶液，例如，通过将化合物1在质子性有机溶剂(其可与水混溶，例如醇诸如甲醇)中的溶液与tris的水溶液混合。

形式2具有与在图4中所示基本上相同的计算的/模拟的PXRD图样。图4中的PXRD图样的模拟峰位置和强度提供在表E2-5中。形式2的一些特征性PXRD峰（表示为2θ±0.2º2θ）是在7.1、7.6、10.7和19.4 (衍射角)处。在某些实施方案中，形式2具有包含至少一个峰的粉末X-射线衍射图样(PXRD)，按照2θ±0.2º2θ，所述峰是在7.1、7.6、10.7和19.4处。在某些实施方案中，形式2具有包含至少两个峰的PXRD，按照2θ±0.2º2θ，所述峰是在7.1、7.6、10.7和19.4处。在某些实施方案中，形式2具有包含至少两个峰的PXRD，按照2θ±0.2º2θ，所述峰是在7.1和10.7处。在某些实施方案中，形式2具有包含至少两个峰的PXRD，按照2θ±0.2º2θ，所述峰是在7.1和7.6处。在某些实施方案中，形式2具有包含至少三个峰的PXRD，按照2θ±0.2º2θ，所述峰是在7.1、7.6和10.7处。在某些实施方案中，形式2具有包含至少三个峰的PXRD，按照2θ±0.2º2θ，所述峰是在7.1、7.6和19.4处。在某些实施方案中，形式2具有包含至少四个峰的PXRD，按照2θ±0.2º2θ，所述峰是在7.1、7.6、10.7和19.4处。

在第三方面，本发明提供了化合物1的tris盐的一水合物结晶形式，在本文中指定为形式3。化合物1的tris盐的一水合物结晶形式(形式3)可以通过其关于例如单晶X-射线数据、PXRD、¹³C ssNMR的独特固态特征和其它固态方法来鉴定。

形式3可以通过浆至浆转化来制备。将形式A (化合物1的tris盐的无水形式)在溶剂系统中的浆搅拌足够长的阶段以将形式A转化成形式3，其中所述溶剂系统包括非质子性有机溶剂(例如乙腈或四氢呋喃)和水。在某些实施方案中，所述溶剂系统包括乙腈和水，且在所述溶剂系统中水与乙腈的比率是从约2：98至约15：85 (例如约8：92 v/v)。在某些实施方案中，溶剂系统(按mL计)与形式A (按克计)的比率是约10：1至约40：1，例如，约15：1至约30：1，或约25：1至约35：1。所述浆至浆转化可以在室温在充分混合/搅拌下进行。起始材料形式A的制备(及其物理特征性性质)显示在实施例1中。通过PXRD可以监测/评估形式A向形式3的转化。

可替换地，通过乙腈向化合物1的tris盐在溶剂系统中的浓(例如饱和)溶液中的蒸汽扩散可以制备形式3，其中所述溶剂系统是乙腈和水的混合物，且所述溶剂系统中水的百分比大于约10%（按体积计），例如约15%。在某些实施方案中，可以原位产生在饱和溶液和浓(例如饱和)溶液中的化合物1的tris盐，例如，通过将化合物1在乙腈中的溶液与tris的水溶液混合(例如，约1：1摩尔比)。可替换地，在本文描述的蒸汽扩散方法中可以将乙腈用另一种非质子性有机溶剂(其可与水混溶，例如四氢呋喃)替换[即，通过非质子性溶剂向化合物1的tris盐在溶剂系统中的浓(例如饱和)溶液中的蒸汽扩散可以制备形式3，其中所述溶剂系统是非质子性有机溶剂和水的混合物]。

形式3具有与在图6中所示基本上相同的PXRD图样。图6中PXRD图样的峰位置和强度提供在表E3-5中。形式3的一些特征性PXRD峰，表示为2θ±0.2º2θ，是在3.7、7.4、9.9、14.8和20.6 (衍射角)处。在某些实施方案中，形式3具有包含至少一个、两个、三个或四个峰的PXRD，按照2θ±0.2º2θ，所述峰是在3.7、7.4、9.9、14.8和20.6处。在某些实施方案中，形式3具有包含至少两个或三个峰的PXRD，按照2θ±0.2º2θ，所述峰是在3.7、7.4、9.9、14.8和20.6处。在某些实施方案中，形式3具有包含两个峰的PXRD，按照2θ±0.2º2θ，所述峰是在7.4和14.8处。在某些实施方案中，形式3具有包含三个峰的PXRD，按照2θ±0.2º2θ，所述峰是在3.7、7.4和14.8处。在某些实施方案中，形式3具有包含四个峰的PXRD，按照2θ±0.2º2θ，所述峰是在3.7、7.4、14.8和20.6处。在某些实施方案中，形式3具有包含五个峰的PXRD，按照2θ±0.2º2θ，所述峰是在3.7、7.4、9.9、14.8和20.6处。在某些实施方案中，形式3具有包含峰的PXRD，按照2θ±0.2º2θ，所述峰是在3.7、7.4、9.9、11.1、14.8、18.2、20.6、23.5、24.3和24.6处。

形式3具有与在图7中所示基本上相同的¹³C ssNMR谱。如在图7中所示的形式3的¹³C化学位移(±0.2 ppm)在表E3-6中列出。形式3的一些特征性¹³C ssNMR化学位移，表示为ppm，是在42.8、54.7、128.2、138.4和156.6±0.2 ppm处。

在某些实施方案中，形式3具有包含在54.7和138.4±0.2 ppm的化学位移的¹³CssNMR谱。在某些实施方案中，形式3具有包含在54.7、138.4和156.6 ppm±0.2 ppm的化学位移的¹³C ssNMR谱。

在第四方面，本发明进一步提供了化合物1的tris盐的无定形形式。化合物1的tris盐的无定形形式不产生区别性的粉末X-射线衍射图样(即，其PXRD不具有如在形式A或形式3的PXRD中的尖锐峰)。化合物1的tris盐的无定形形式可以例如通过冻干法(从化合物1的tris盐的溶液开始)制备。

本发明的任何固体形式可以是基本上纯的。如本文中使用的，关于特定固体形式（例如结晶形式）的术语“基本上纯的”意指，特定固体形式（例如结晶形式）包括按重量计小于15%、小于10%、小于5%、小于3%或小于1%的化合物1的tris盐的任何其它物理形式。

术语“基本上相同”当用于描述X-射线粉末衍射图样时意在包括这样的图样：其中峰是在±0.2º2θ的标准偏差内。

术语“基本上相同”当用于描述¹³C ssNMR谱时意在包括这样的¹³C ssNMR谱：其中化学位移是在±0.2 ppm的标准偏差内。

术语“约”通常意指在给定的值或范围的10％以内，优选5％以内，和更优选1％以内。可替换地，当本领域技术人员考虑时，术语“约”意指在可接受的平均值标准误差内。

术语“tris”意指1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-胺，也被称作THAM、氨丁三醇或2-氨基-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇。

化合物1的tris盐意指使用1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-胺制备的化合物1的盐。tris与化合物1的羧酸部分缔合。除非另有说明，否则当提及化合物1的tris盐时，抗衡离子和化合物1的化学计量比为约1：1(即从0.9：1.0至1.0：0.9, 例如，从0.95：1.00至1.00：0.95)。化合物1的tris盐的另一化学名称是2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐，其还可以例如由以下结构之一表示。

或

。

本领域技术人员会容易理解，可以使用多种命名法来命名同一种化合物（包括同一种盐）。

当用于描述化合物（或盐）的结晶形式时，术语“一水合物”意指水合物水与化合物（或盐）的化学计量比为约1： 1 (例如，从0.9：1.0至1.1：1.0)。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含与至少一种药学上可接受的赋形剂混合的本发明的结晶形式(例如形式3)。这将包括这样的药物组合物：其包含与至少一种药学上可接受的赋形剂和本文讨论的一种或多种其它治疗剂混合的如在本文描述的任一个实施方案中定义的本发明的结晶形式(例如形式3)。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含与至少一种药学上可接受的赋形剂混合的本发明的无定形形式。这将包括这样的药物组合物：其包含与至少一种药学上可接受的赋形剂和本文讨论的一种或多种其它治疗剂混合的本发明的无定形形式。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的化合物1的tris盐和药学上可接受的载体，其中至少5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、98%或99%的化合物1的tris盐以本发明的固体形式之一(例如，形式2、形式3或无定形形式)存在。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的化合物1的tris盐和药学上可接受的载体，其中所述化合物1的tris盐以至少两种固体形式存在，例如，结晶形式和无定形形式。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的化合物1的tris盐和药学上可接受的载体，其中所述化合物1的tris盐以至少两种固体形式存在, 例如，本发明的结晶形式(例如，形式2或形式3)和无定形形式。在另一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的化合物1的tris盐和药学上可接受的载体，其中所述化合物1的tris盐以两种固体形式存在，其中之一是无定形形式且另一种是形式3。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的化合物1的tris盐和药学上可接受的载体，其中所述化合物1的tris盐以两种固体形式存在，其中之一是无定形形式且另一种是形式2。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的化合物1的tris盐和药学上可接受的载体，其中所述化合物1的tris盐以两种固体形式存在，其中之一是形式A且另一种是形式3。

本发明也包括下述实施方案：

如在本文描述的任一个实施方案中定义的本发明的固体形式(例如形式2、形式3或无定形形式)，其用作药物；

如在本文描述的任一个实施方案中定义的本发明的固体形式(例如形式2、形式3或无定形形式)，其用于预防和/或治疗本文讨论的心脏代谢和相关疾病，包括T2DM、前驱糖尿病、肥胖、NASH (例如伴有纤维化的NASH)、NAFLD和心血管疾病；

在需要这样的预防和/或治疗的对象中治疗适于用GLP-1R激动剂治疗的疾病的方法，包括给所述对象施用治疗有效量的如在本文描述的任一个实施方案中所定义的本发明的固体形式(例如形式2、形式3或无定形形式)；

如在本文描述的任一个实施方案中定义的本发明的固体形式(例如形式2、形式3或无定形形式)用于制备药物的用途，所述药物用于治疗适于用GLP-1R激动剂治疗的疾病或病症；

如在本文描述的任一个实施方案中定义的本发明的固体形式(例如形式2、形式3或无定形形式)，其用于治疗适于用GLP-1R激动剂治疗的疾病或病症；或

用于治疗适于用GLP-1R激动剂治疗的疾病或病症的药物组合物，其包含如在本文描述的任一个实施方案中所定义的本发明的固体形式(例如形式2、形式3或无定形形式)。

本发明也包括下述实施方案：

如在本文描述的任一个实施方案中定义的本发明的结晶形式(例如形式3)，其用作药物；

如在本文描述的任一个实施方案中定义的本发明的结晶形式(例如形式3)，其用于预防和/或治疗本文讨论的心脏代谢和相关疾病，包括T2DM、前驱糖尿病、肥胖、NASH (例如伴有纤维化的NASH)、NAFLD和心血管疾病；

在需要这样的预防和/或治疗的对象中治疗适于用GLP-1R激动剂治疗的疾病的方法，包括给所述对象施用治疗有效量的如在本文描述的任一个实施方案中所定义的本发明的结晶形式(例如形式3)；

如在本文描述的任一个实施方案中定义的本发明的结晶形式(例如形式3)用于制备药物的用途，所述药物用于治疗适于用GLP-1R激动剂治疗的疾病或病症；

如在本文描述的任一个实施方案中定义的本发明的结晶形式(例如形式3)，其用于治疗适于用GLP-1R激动剂治疗的疾病或病症；或

用于治疗适于用GLP-1R激动剂治疗的疾病或病症的药物组合物，其包含如在本文描述的任一个实施方案中所定义的本发明的结晶形式(例如形式3)。

本发明的固体形式的每个实施例可以单独要求保护，或者与本文描述的每一个和每种实施方案中的任何数目以任何组合组合在一起。

本发明也涉及一种药物组合物，其包含如在本文描述的任一个实施方案中定义的本发明的固体形式(例如形式2、形式3或无定形形式)，所述药物组合物用于治疗和/或预防本文讨论的心脏代谢和相关疾病，包括T2DM、前驱糖尿病、肥胖、NASH (例如伴有纤维化的NASH)、NAFLD和心血管疾病。

本发明也涉及一种药物组合物，其包含如在本文描述的任一个实施方案中定义的本发明的结晶形式(例如形式3)，所述药物组合物用于治疗和/或预防本文讨论的心脏代谢和相关疾病，包括T2DM、前驱糖尿病、肥胖、NASH (例如伴有纤维化的NASH)、NAFLD和心血管疾病。

本发明的另一个实施方案涉及如在本文描述的任一个实施方案中定义的本发明的固体形式（例如形式2、形式3或无定形形式），例如本发明的结晶形式（例如形式3），其用于治疗和/或预防适于用GLP-1R激动剂治疗的疾病和/或障碍，包括糖尿病（T1D和/或T2DM，包括前驱糖尿病）、特发性T1D（1b型）、成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）、早发型T2DM（EOD）、青年起病的非典型糖尿病（youth-onset atypical diabetes，YOAD）、成人起病的青少年糖尿病（maturity-onset diabetes of the young，MODY）、营养不良相关的糖尿病、妊娠糖尿病、高血糖症、胰岛素抗性、肝胰岛素抗性、葡萄糖耐量减低、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、肾脏疾病（例如，急性肾障碍、肾小管功能障碍、近端小管的促炎变化）、糖尿病性视网膜病变、脂肪细胞功能障碍、内脏脂肪沉积、睡眠呼吸暂停、肥胖（包括丘脑下部性肥胖和单基因性肥胖）和有关的并存病（例如，骨关节炎和尿失禁）、进食障碍（包括暴食综合征、神经性贪食和综合征性肥胖(syndromic obesity)诸如Prader-Willi和Bardet-Biedl综合征）、由其它药剂的使用引起的体重增加（例如，由类固醇和抗精神病药的使用引起）、过度糖渴求、血脂异常（包括高脂血症、高甘油三酯血症、增加的总胆固醇、高LDL胆固醇和低HDL胆固醇）、高胰岛素血症、NAFLD（包括相关的疾病诸如脂肪变性、NASH、纤维化、伴有纤维化的NASH、肝硬化和肝细胞癌）、心血管疾病、动脉粥样硬化（包括冠状动脉疾病）、外周血管病、高血压、内皮功能障碍、受损的血管顺应性、充血性心力衰竭、心肌梗塞（例如坏死和细胞凋亡）、中风、出血性中风、缺血性中风、创伤性脑损伤、肺动脉高血压、血管成形术以后的再狭窄、间歇性跛行、餐后脂血症、代谢性酸中毒、酮病、关节炎、骨质疏松症、帕金森病、左心室肥大、外周动脉疾病、黄斑变性、白内障、肾小球硬化症、慢性肾衰竭、代谢综合征、X综合征、经前期综合征、心绞痛、血栓形成、动脉粥样硬化、短暂缺血发作、血管再狭窄、糖代谢异常、空腹血糖受损的病症、高尿酸血症、痛风、勃起功能障碍、皮肤和结缔组织障碍、银屑病、足部溃疡、溃疡性结肠炎、高载脂蛋白B脂蛋白血症、阿尔茨海默氏病、精神分裂症、认知受损、炎性肠病、短肠综合征、克罗恩氏病、结肠炎、肠易激综合征、多囊性卵巢综合征和成瘾（例如，酒精和/或药物滥用）。

室温： RT (15至25℃)。

甲醇： MeOH。

乙醇： EtOH。

异丙醇： iPrOH。

乙酸乙酯： EtOAc。

四氢呋喃： THF。

甲苯： PhCH₃。

碳酸铯： Cs₂CO₃。

双(三甲基硅烷基)氨基锂： LiHMDS。

叔丁醇钠： NaOtBu。

叔丁醇钾： KOtBu。

二异丙基氨基锂： LDA。

三乙胺： NEt₃。

N,N-二异丙基乙基胺： DIPEA。

碳酸钾： K₂CO₃。

二甲基甲酰胺： DMF。

二甲基乙酰胺： DMAc。

二甲亚砜： DMSO。

N-甲基-2-吡咯烷酮： NMP。

氢化钠： NaH。

三氟乙酸： TFA。

三氟乙酸酐： TFAA。

乙酸酐： Ac₂O。

二氯甲烷： DCM。

1,2-二氯乙烷： DCE。

盐酸： HCl。

1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯： DBU。

硼烷-二甲硫醚复合物：BH₃-DMS。

硼烷-四氢呋喃复合物：BH₃-THF。

氢化铝锂： LAH。

乙酸： AcOH。

乙腈： MeCN。

对甲苯磺酸： pTSA。

二亚苄基丙酮： DBA。

2,2′-双(二苯基膦基)-1,1′-联萘： BINAP。

1,1′-二茂铁二基-双(二苯基膦)： dppf。

1,3-双(二苯基膦基)丙烷： DPPP。

3-氯过苯甲酸： m-CPBA。

叔丁基甲基醚： MTBE。

甲磺酰基： Ms。

N-甲基吡咯烷酮： NMP。

薄层色谱： TLC。

超临界流体色谱： SFC。

4-(二甲基氨基)吡啶： DMAP。

叔丁基氧基羰基： Boc。

三苯基膦： Ph₃P。

1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐： HATU。

石油醚： PE。

2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐： HBTU。

2-氨基-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇： tris。

三(二亚苄基丙酮)二钯： Pd₂(dba)₃

¹H核磁共振(NMR)谱在所有情况下与提出的结构一致。特征性化学位移(δ)以相对于氘代溶剂中的残余质子信号的百万分率(CHCl₃在7.27 ppm；CD₂HOD在3.31 ppm；MeCN在1.94 ppm；DMSO在2.50 ppm)给出，且使用主要峰的命名的常规缩写进行报告：例如，s，单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，宽峰。符号^表示¹H NMR峰面积是假定的，因为所述峰被水峰部分地遮蔽。符号^^表示¹H NMR峰面积是假定的，因为所述峰被溶剂峰部分地遮蔽。

使用ACD/ChemSketch 2012, ChemDraw, File Version C10H41, Build 69045(Advanced Chemistry Development, Inc., Toronto, Ontario, 加拿大)提供的命名规则，命名下面描述的化合物和中间体。由ACD/ChemSketch 2012提供的命名规则是本领域技术人员众所周知的，且据信，由ACD/ChemSketch 2012提供的命名规则通常与IUPAC(International Union for Pure and Applied Chemistry)推荐的有机化学命名以及CAS索引规则相一致。人们将注意到，化学名称可能只有圆括号，或可能具有圆括号和方括号。根据命名规则，立体化学的描述符也可以置于名称本身内的不同位置。本领域普通技术人员会认识到这些格式变体且理解它们提供相同的化学结构。

药学上可接受的盐包括酸加成盐和碱盐。

合适的酸加成盐从形成无毒盐的酸形成。例子包括乙酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环拉酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、羟苯酰苯酸盐（hibenzate）、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、蔗糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐、1,5-萘二磺酸盐和昔萘酸盐。

合适的碱盐从形成无毒盐的碱形成。例子包括铝盐、精氨酸盐、苄星青霉素盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、双(2-羟基乙基)胺(二乙醇胺)盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、2-氨基乙醇(乙醇胺)盐、钾盐、钠盐、2-氨基-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(tris或氨丁三醇)盐和锌盐。

也可以形成酸和碱的半盐，例如，半硫酸盐和半钙盐。关于合适的盐的综述，参见Stahl和Wermuth的Handbook of Pharmaceutical Salts： Properties, Selection, andUse (Wiley-VCH, 2002)。

可以通过以下三种方法中的一种或多种制备药学上可接受的盐：

(i)使化合物与期望的酸或碱反应；

(ii)使用期望的酸或碱，从化合物的合适前体除去酸或碱不稳定的保护基，或将合适的环状前体(例如，内酯或内酰胺)开环；或

(iii)通过与适当的酸或碱反应或借助于合适的离子交换柱，将化合物的一种盐转化为另一种盐。

所有三种反应通常在溶液中进行。得到的盐可以沉淀出并通过过滤进行收集，或可以通过蒸发溶剂来回收。得到的盐的离子化程度可以从完全离子化至几乎未离子化而变化。

化合物和药学上可接受的盐可以以未溶剂化形式和溶剂化形式存在。术语“溶剂化物”在本文中用于描述包含化合物或其盐与一种或多种药学上可接受的溶剂分子（例如，乙醇）的分子复合物。当所述溶剂是水时，使用术语“水合物”。例如，本文中公开的化合物1的tris盐的水合物结晶形式是指在结晶物质/复合物的晶格中包括化合物1的tris盐和水(水合物水)二者的结晶物质/复合物。

当前公认的有机水合物的分类系统是定义分离位点、通道或金属-离子配位水合物的系统-参见K.R.Morris的Polymorphism in Pharmaceutical Solids (H. G.Brittain编, Marcel Dekker, 1995)。分离位点水合物是其中水分子通过插入有机分子而彼此分离免于直接接触的水合物。在通道水合物中，水分子位于晶格通道中，在那里它们紧挨着其它水分子。在金属-离子配位水合物中，水分子键合至金属离子。

当紧密地结合溶剂或水时，复合物可以具有与湿度无关的充分定义的化学计量学。但是，当微弱地结合溶剂或水时，如在通道溶剂化物和吸湿化合物中，水/溶剂含量可能取决于湿度和干燥条件。在这样的情况下，非化学计量学将是常态。

在本发明的范围内还包括多组分复合物(与盐和溶剂化物不同)，其中药物和至少一种其它组分以化学计量的或非化学计量的量存在。这类复合物包括笼形包合物(药物-主体包合络合物)和共晶。后者通常定义为通过非共价相互作用结合在一起的中性分子组分的结晶复合物，但也可以是中性分子与盐的复合物。通过熔融结晶、通过从溶剂重结晶或通过将所述组分在一起物理碾磨，可以制备共晶-参见O. Almarsson和M. J. Zaworotko的Chem Commun, 17, 1889-1896 (2004)。关于多组分复合物的一般综述，参见Haleblian的JPharm Sci, 64 (8), 1269-1288 (1975年8月)。

本发明的化合物可以以从完全无定形到完全结晶的固态连续体存在。术语“无定形的”是指这样的状态：其中所述物质在分子水平缺乏长程有序，且根据温度可以表现出固体或液体的物理性能。通常，这样的物质不产生特征性X-射线衍射图样，并且尽管表现出固体的性能，但更正式地被描述为液体。在加热时，发生从固体至液体性能的改变，其特征在于状态的改变，通常为二级的(“玻璃化转变”)。术语“结晶性的”是指这样的固相，其中所述物质具有在分子水平的规律有序内部结构，并且产生具有确定峰的特征性X-射线衍射图样。这样的物质在充分加热时也将表现出液体的性能，但是从固体至液体的变化的特征在于相变，通常为一级的(“熔点”)。

化合物当经受合适条件时也可以以介晶态(中间相或液晶)存在。介晶态是在真正结晶状态与真正液体状态（熔化或溶液）之间的中间体。作为温度变化的结果出现的介晶现象被描述为“热致性的（thermotropic）”，而作为加入第二种组分诸如水或另一种溶剂的结果出现的介晶现象被描述为“溶致性的（lyotropic）”。具有形成溶致中间相的潜力的化合物被描述为“两亲的”并且由分子组成，所述分子具有离子(诸如-COO^-Na⁺、-COO^-K⁺或-SO₃ ^-Na⁺)或非离子(诸如-N^-N⁺(CH₃)₃)极性头基。关于更多信息，参见N. H. Hartshorne和A.Stuart的Crystals and the Polarizing Microscope, 第4版(Edward Arnold, 1970)。

一些化合物可能表现出多晶现象和/或一种或多种异构现象(例如光学异构现象、几何异构现象或互变异构现象)。本发明的结晶形式也可以用同位素标记。这样的变体暗含于通过参考其结构特征进行定义的化合物1或其盐，且因此在本发明的范围内。

含有一个或多个不对称碳原子的化合物可以作为两种或更多种立体异构体存在。在化合物含有烯基或亚烯基基团的情况下，几何顺/反(或Z/E)异构体是可能的。在结构异构体经由低能量屏障可互相转化的情况下，可以存在互变异构的异构现象(“互变异构现象”)。这在含有例如亚氨基、酮或肟基团的化合物中可以呈质子互变异构现象的形式，或在含有芳族部分的化合物中可以呈所谓的价互变异构现象的形式。结果就是，单一化合物可以表现出超过一种类型的异构现象。

化合物1的某些药学上可接受的盐还可以含有光学活性的(例如d-乳酸盐或l-赖氨酸)或外消旋的(例如dl-酒石酸盐或dl-精氨酸)抗衡离子。

通过本领域技术人员众所周知的常规技术，例如，色谱和分步结晶，可以分离顺式/反式异构体。

用于制备/分离单独的对映异构体的常规技术包括从合适的光学纯的前体手性合成，或使用例如手性高压液相色谱(HPLC)拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)。可替换地，可以通过酶促拆分来分离含有手性酯的外消旋前体(参见，例如，A. C. L. M.Carvaho等人的Int J Mol Sci 29682-29716 (2015))。在化合物含有酸性或碱性部分的情况下，可以使用光学纯的碱或酸(诸如1-苯基乙胺或酒石酸)形成盐。得到的非对映异构体混合物可以通过分步结晶分离，且一种或两种非对映异构的盐可以通过技术人员众所周知的方式转化成对应的纯对映异构体。可替换地，外消旋体(或外消旋前体)可以与合适的光学活性化合物(例如，醇、胺或苄基氯)共价反应。得到的非对映异构体混合物可以通过技术人员众所周知的方式通过色谱和/或分步结晶分离，以产生分离的非对映异构体，其为具有2个或更多个手性中心的单一对映异构体。使用色谱(通常为HPLC)，在不对称树脂上使用含有烃的流动相(通常为庚烷或己烷，含有按体积计0至50%(通常2%至20%)的异丙醇和按体积计0至5%的烷基胺(通常为0.1% 的二乙胺))，可以得到呈对映异构富集形式的手性化合物(及其手性前体)。浓缩洗脱液，得到富集的混合物。可以采用使用亚临界流体和超临界流体的手性色谱。在本发明的某些实施方案中有用的手性色谱方法是本领域已知的(参见，例如，Smith, Roger M., Loughborough University, Loughborough, UK;Chromatographic Science Series (1998), 75 (SFC with Packed Columns), 第223-249页, 和其中引用的参考文献)。在本文的某些相关实施例中，柱得自ChiralTechnologies, Inc, West Chester, Pennsylvania, USA，其为Daicel^®ChemicalIndustries, Ltd., Tokyo, Japan的子公司。

当任何外消旋体结晶时，两种不同类型的晶体是可能的。第一类是上文所述的外消旋化合物(真外消旋体)，其中产生一种均质形式的晶体，其含有等摩尔量的两种对映异构体。第二类是外消旋混合物或聚集物(conglomerate)，其中两种形式的晶体以等摩尔量产生，各自包含单一对映异构体。尽管在外消旋混合物中存在的两种晶体形式具有相同的物理性能，但它们与真正外消旋体相比可能具有不同的物理性能。通过本领域技术人员已知的常规技术，可以分离外消旋混合物-参见，例如，E. L. Eliel和S. H. Wilen的Stereochemistry of Organic Compounds (Wiley, 1994)。

必须强调的是，在本文中以单一互变异构形式绘制化合物1及其盐，所有可能的互变异构形式都被包括在本发明的范围内。

本发明包括所有药学上可接受的同位素标记的化合物1或其盐，其中一个或多个原子被具有相同原子数的原子替代，但是原子质量或质量数不同于在自然界中占优势的原子质量或质量数。

适用于包含在本发明化合物中的同位素的例子包括以下元素的同位素：氢，诸如²H和³H，碳，诸如¹¹C、¹³C和¹⁴C，氯，诸如³⁶Cl，氮，诸如¹³N和¹⁵N，和氧，诸如¹⁵O、¹⁷O和¹⁸O。

某些同位素标记的化合物1或其盐，例如掺入放射性同位素的那些，可用在药物和/或底物组织分布研究中。考虑到它们易于掺入和检测方便，放射性同位素氚（即³H）和碳-14（即¹⁴C）对于该目的是特别有用的。

用较重的同位素诸如氘（即²H）取代可能提供某些由更大代谢稳定性引起的治疗益处，例如，增加的体内半衰期或减小的剂量需求。

用正电子发射同位素诸如¹¹C、¹⁸F、¹⁵O和¹³N取代可以用于正电子发射断层摄影术(PET)研究中以检查底物受体占有率。

通过本领域技术人员已知的常规技术，或通过与附随实施例和制备中所述的那些类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替以前使用的未标记的试剂，通常可以制备同位素标记的化合物。

根据本发明的药学上可接受的溶剂化物包括这样的溶剂化物：其中结晶的溶剂可以是同位素取代的，例如D₂O、d₆-丙酮、d₆-DMSO。

施用和用量

通常，以有效治疗本文所述的病症的量施用本发明的化合物（以结晶形式）。本发明的化合物可以作为化合物本身施用，或可替换地，作为药学上可接受的盐施用。为了施用和用量

目的，化合物本身或其药学上可接受的盐将简单地称为本发明的化合物。

本发明的化合物通过任何合适的途径以适合这样的途径的药物组合物的形式施用，并且以对意图的治疗有效的剂量施用。可以口服地、直肠地、阴道地、胃肠外地或局部地施用本发明的化合物。

可以口服施用本发明的化合物。口服施用可以包括吞咽，从而化合物进入胃肠道；或者可以采用含服或舌下施用，使化合物直接从口腔进入血流。

在另一个实施方案中，本发明的化合物还可以直接施用到血流中、肌肉中或内脏器官中。胃肠外施用的适宜手段包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌肉内和皮下。用于胃肠外施用的合适装置包括针(包括显微操作针)注射器、无针注射器和输注技术。

在另一个实施方案中，本发明的化合物还可以局部施用于皮肤或粘膜，也就是说，真皮地或透皮地施用。在另一个实施方案中，本发明的化合物还可以鼻内地或通过吸入施用。在另一个实施方案中，本发明的化合物可以直肠地或阴道地施用。在另一个实施方案中，本发明的化合物还可以直接施用至眼或耳。

本发明的化合物和/或含有所述化合物的组合物的给药方案是基于多种因素，包括患者的类型、年龄、体重、性别和医学病症；病症的严重程度；施用途径；和所用具体化合物的活性。因而，给药方案可以宽泛地变化。在一个实施方案中，为了治疗本文讨论的指出病症，本发明的化合物的总每日剂量通常是约0.001至约100 mg/kg (即，mg本发明的化合物/kg体重)。在另一个实施方案中，本发明的化合物的总每日剂量是约0.01至约30 mg/kg，且在另一个实施方案中，是约0.03至约10 mg/kg，且在另一个实施方案中，是约0.1至约3mg/kg。不罕见的是，本发明的化合物的施用在一天内将重复多次(通常不多于4次)。如果需要的话，每天多次剂量通常可用于增加总日剂量。

对于口服施用，可以以含有0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、30.0 50.0、75.0、100、125、150、175、200、250和500毫克活性成分的片剂的形式提供组合物，以对症调节对患者的剂量。药物通常含有约0.01 mg至约500 mg活性成分，或在另一个实施方案中，约1 mg至约100 mg活性成分。静脉内地，在恒速输注过程中，剂量可以在约0.01至约10 mg/kg/分钟的范围内。

根据本发明的合适对象包括哺乳动物对象。在一个实施方案中，人类是合适的对象。人对象可为任一性别且处于任何发育阶段。

药物组合物

在另一个实施方案中，本发明包括药物组合物。这样的药物组合物包含与药学上可接受的载体一起提供的本发明的化合物。还可存在其它药理学活性物质。本文中使用的“药学上可接受的载体”包括生理学上相容的任意的和所有的溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。药学上可接受的载体的例子包括水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等中的一种或多种，及其组合，且可以在所述组合物中包括等渗剂，例如，糖、氯化钠或多元醇诸如甘露醇或山梨醇。药学上可接受的物质诸如润湿剂，或微量的辅助物质诸如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其提高抗体或抗体部分的贮存期限或有效性。

本发明的组合物可以是多种形式。这些包括，例如，液体、半固体和固体剂型，诸如液体溶液(例如，可注射的和可输注的溶液)、分散体或混悬剂、片剂、丸剂、粉剂、脂质体和栓剂。形式取决于意图的施用模式和治疗应用。

典型的组合物是可注射的或可输注的溶液的形式，诸如与通常用于用抗体被动免疫接种人类的那些组合物类似的组合物。一种施用模式是胃肠外(例如静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内)。在另一个实施方案中，通过静脉内输注或注射施用抗体。在另一个实施方案中，通过肌肉内或皮下注射施用抗体。

固体剂型的口服施用可以例如呈离散单元诸如硬或软胶囊剂、丸剂、扁囊剂、锭剂或片剂，各自含有预定量的至少一种本发明的化合物。在另一个实施方案中，口服施用可以呈粉末或颗粒形式。在另一个实施方案中，口服剂型是舌下的，诸如例如，锭剂。在这样的固体剂型中，本发明的化合物常常与一种或多种佐剂组合。这样的胶囊剂或片剂可以含有控释制剂。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，剂型也可以包含缓冲剂或可以用肠溶包衣制备。

在另一个实施方案中，口服施用可以呈液体剂型。用于口服施用的液体剂型包括，例如，药学上可接受的乳剂、溶液、混悬剂、糖浆剂和酏剂，其含有本领域常用的惰性稀释剂(例如，水)。这样的组合物也可以包含助剂诸如润湿剂、乳化剂、助悬剂、调味剂(例如，甜味剂)和/或芳香剂。

在另一个实施方案中，本发明包含胃肠外剂型。“胃肠外施用”包括，例如，皮下注射、静脉内注射、腹膜内地、肌肉内注射、胸骨内注射和输注。使用合适的分散剂、润湿剂和/或助悬剂，可以根据已知的技术配制可注射的制剂(即，无菌的可注射的水性或油性混悬剂)。

在另一个实施方案中，本发明包含局部剂型。“局部施用”包括，例如，透皮施用，诸如经由透皮贴剂或离子透入装置，眼内施用，或鼻内或吸入施用。用于局部施用的组合物也包括例如局部凝胶、喷雾剂、软膏剂和乳膏剂。局部制剂可以包括增强活性成分通过皮肤或其它受影响区域的吸收或穿透的化合物。当通过透皮装置施用本发明的化合物时，将使用贴剂完成施用，所述贴剂属于蓄池和多孔膜类型或属于固体基质类型。用于此目的的典型制剂包括凝胶、水凝胶、洗剂、溶液、乳膏剂、软膏剂、扑粉剂、敷料、泡沫、薄膜、皮肤贴剂、糯米纸囊剂、植入物、海绵、纤维、绷带和微乳剂。也可以使用脂质体。典型的载体包括醇、水、矿物油、液体矿脂、白矿脂、甘油、聚乙二醇和丙二醇。可以掺入穿透促进剂- 参见，例如，B.C. Finnin和T. M. Morgan, J. Pharm. Sci., 第88卷, 第955-958页, 1999。

适合局部施用至眼的制剂包括例如滴眼剂，其中本发明的化合物溶解或悬浮于合适的载体中。适于眼或耳施用的典型制剂可以呈在等渗的、调节过pH的无菌盐水中微粒化的悬浮液或溶液的滴剂的形式。适于眼和耳施用的其它制剂包括软膏剂、可生物降解的(即，可吸收的凝胶海绵、胶原)和不可生物降解的(即，有机硅)植入物、糯米纸囊剂、透镜和微粒或囊状系统，诸如类脂囊泡或脂质体。聚合物诸如交联的聚丙烯酸、聚乙烯醇、透明质酸，纤维质聚合物例如羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素或甲基纤维素，或杂多糖聚合物例如结冷胶, 可以与防腐剂诸如苯扎氯铵一起掺入。这样的制剂还可以通过离子透入法递送。

对于鼻内施用或通过吸入施用，本发明的化合物方便地以溶液或混悬剂的形式从由患者挤压或泵送的泵式喷雾容器递送，或者使用合适的推进剂从加压容器或喷雾器作为气溶胶喷雾形式递送。适合用于鼻内施用的制剂通常以干粉(单独，作为混合物，例如，与乳糖的干掺合物；或作为混合组分颗粒，例如与磷脂诸如磷脂酰胆碱混合)的形式从干粉吸入器施用，或者作为气溶胶喷雾从加压容器、泵、喷雾器、雾化器(优选用电流体动力学产生细雾的雾化器)或造雾器施用，其中用或不用合适的推进剂，诸如1,1,1,2-四氟乙烷或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷。对于鼻内应用，粉末可以包含生物粘附剂例如壳聚糖或环糊精。

在另一个实施方案中，本发明包含直肠剂型。这样的直肠剂型可以呈例如栓剂的形式。可可脂是传统的栓剂基质，但可以在适当时使用各种替代物。

还可以使用药物领域已知的其它载体材料和施用模式。通过任何众所周知的药学技术诸如有效的制剂和施用程序，可以制备本发明的药物组合物。关于有效的制剂和施用程序的上述考虑是本领域众所周知的，并且描述于标准教科书中。在例如以下文献中讨论了药物的制剂：Hoover, John E., Remington’s Pharmaceutical Sciences, MackPublishing Co., Easton, Pennsylvania, 1975；Liberman等人, 编, PharmaceuticalDosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980；和Kibbe等人, 编, Handbookof Pharmaceutical Excipients (第3版), American Pharmaceutical Association,Washington, 1999。

共同施用

本发明的化合物可以单独使用，或与其它治疗剂联合使用。本发明提供了如本文定义的用途、方法或组合物中的任一种，其中本文任何实施方案的化合物、或其药学上可接受的盐、或所述化合物或盐的药学上可接受的溶剂化物与本文讨论的一种或多种其它治疗剂联合使用。这将包括用于治疗适于用GLP-1R激动剂治疗的疾病或病症的药物组合物，其包含如在本文描述的任一个实施方案中定义的本发明的结晶形式和本文讨论的一种或多种其它治疗剂。

两种或更多种化合物的“联合”施用意指，所有化合物在时间上充分紧密地施用，使得每种化合物可以在相同的时间范围产生生物学效应。一种药剂的存在可能改变其它一种或多种化合物的生物学效应。可以同时地、并行地或依次地施用两种或更多种化合物。另外，可以如下进行同时施用：在施用前混合化合物，或通过在相同时间点、但在相同或不同的施用部位作为单独剂型施用化合物。

短语“并行施用”、“共同施用”、“同时施用”和“同时地施用”意指联合施用所述化合物。

在另一个实施方案中，本发明提供了治疗方法，其包括与一种或多种其它药物联合施用本发明的化合物，其中所述一种或多种其它药物可以选自本文讨论的药剂。

在一个实施方案中，将本发明的化合物与抗糖尿病剂一起施用，所述抗糖尿病剂包括、但不限于双胍(例如，二甲双胍)、磺酰脲(例如，甲苯磺丁脲、格列本脲、格列齐特、氯磺丙脲、妥拉磺脲、醋酸己脲、格列吡脲、格列美脲或格列吡嗪)、噻唑烷二酮(例如，吡格列酮、罗格列酮或洛贝格列酮)、glitazar (例如，沙罗格列扎、阿格列扎、莫格列扎或替格列扎)、美格列奈(例如，那格列奈、瑞格列奈)、二肽基肽酶4 (DPP-4)抑制剂(例如，西格列汀、维格列汀、沙格列汀、利拉利汀、吉格列汀、安奈格列汀、替格列汀、阿格列汀、曲格列汀、度格列汀或奥格列汀)、格列酮(例如，吡格列酮、罗格列酮、巴格列酮、利格列酮或洛贝格列酮)、钠-葡萄糖连接的转运蛋白2 (SGLT2)抑制剂(例如，恩格列净、卡格列净、达格列净、依格列净(ipragliflozin)、依格列净(Ipragliflozin)、托格列净、依碳酸舍格列净、依碳酸瑞格列净或埃格列净)、SGLTL1抑制剂、GPR40激动剂(FFAR1/FFA1激动剂，例如法格列凡(fasiglifam))、葡萄糖依赖性的促胰岛素肽(GIP)及其类似物、α葡萄糖苷酶抑制剂(例如伏格列波糖、阿卡波糖或米格列醇)或胰岛素或胰岛素类似物，包括特别指明的药剂的药学上可接受的盐以及所述药剂和盐的药学上可接受的溶剂化物。

在另一个实施方案中，将本发明的化合物与抗肥胖剂一起施用，所述抗肥胖剂包括、但不限于肽YY或其类似物、神经肽Y受体2型(NPYR2)激动剂、NPYR1或NPYR5拮抗剂、大麻素受体1型(CB1R)拮抗剂、脂肪酶抑制剂(例如，奥利司他)、human proislet peptide(HIP)、黑皮质素受体4激动剂(例如，赛美拉肽)、黑色素聚集激素受体1拮抗剂、类法尼醇X受体(FXR)激动剂(例如奥贝胆酸)、唑尼沙胺、芬特明(单独或与托吡酯组合)、去甲肾上腺素/多巴胺再摄取抑制剂(例如，安非他酮)、阿片受体拮抗剂(例如，纳曲酮)、去甲肾上腺素/多巴胺再摄取抑制剂和阿片受体拮抗剂的组合(例如，安非他酮和纳曲酮的组合)、GDF-15类似物、西布曲明、胆囊收缩素激动剂、胰淀素及其类似物(例如，普兰林肽)、瘦素及其类似物(例如，metroleptin)、5-羟色胺能药剂(例如，Iorcaserin)、甲硫氨酸氨肽酶2(MetAP2)抑制剂(例如，beloranib或ZGN-1061)、苯甲曲秦、安非拉酮、苄非他明、SGLT2抑制剂(例如，恩格列净、卡格列净、达格列净、依格列净(ipragliflozin)、依格列净(Ipragliflozin)、托格列净、依碳酸舍格列净、依碳酸瑞格列净或埃格列净)、SGLTL1抑制剂、双重SGLT2/SGLT1抑制剂、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)调节剂、AMP-活化的蛋白激酶(AMPK)活化剂、生物素、MAS受体调节剂或胰高血糖素受体激动剂(单独或与另一种GLP-1R激动剂组合，例如，利拉鲁肽、艾塞那肽、杜拉鲁肽、阿必鲁肽、利司那肽或索马鲁肽)，包括特别指明的药剂的药学上可接受的盐以及所述药剂和盐的药学上可接受的溶剂化物。

在另一个实施方案中，将本发明的化合物与下列的一种或多种联合施用：治疗NASH的药剂(包括、但不限于PF-05221304)，FXR激动剂(例如，奥贝胆酸)，PPARα/δ激动剂(例如，elafibranor)，合成的脂肪酸-胆汁酸缀合物(例如，aramchol)，胱天蛋白酶抑制剂(例如，恩利卡生)，抗-赖氨酰基氧化酶同系物2 (LOXL2)单克隆抗体(例如，simtuzumab)，半乳糖凝集素3抑制剂(例如，GR-MD-02)，MAPK5抑制剂(例如，GS-4997)，趋化因子受体2(CCR2)和CCR5的双重拮抗剂(例如，cenicriviroc)，成纤维细胞生长因子21 (FGF21)激动剂(例如，BMS-986036)，白三烯D4 (LTD4)受体拮抗剂(例如，泰鲁司特)，烟碱酸类似物(例如，ARI 3037MO)，ASBT抑制剂(例如，volixibat)，乙酰辅酶A羧化酶(ACC)抑制剂(例如，NDI010976或PF-05221304)，己酮糖激酶(KHK)抑制剂，二酰甘油基酰基转移酶2 (DGAT2)抑制剂，CB1受体拮抗剂，抗-CB1R抗体，或细胞凋亡信号调节激酶1 (ASK1)抑制剂，包括特别指明的药剂的药学上可接受的盐以及所述药剂和盐的药学上可接受的溶剂化物。

可以与本发明的化合物联合使用用于治疗本文描述的疾病或障碍(例如NASH)的某些具体化合物包括：

4-(4-(1-异丙基-7-氧代-1,4,6,7-四氢螺[吲唑-5,4'-哌啶]-1'-羰基)-6-甲氧基吡啶-2-基)苯甲酸，其是选择性ACC抑制剂的一个例子且在美国专利No.8,859,577的实施例9中以游离酸的形式制备，所述美国专利No.8,859,577是国际申请No.PCT/IB2011/054119的美国国家阶段，其公开内容特此通过引用整体并入本文用于所有目的。4-(4-(1-异丙基-7-氧代-1,4,6,7-四氢螺[吲唑-5,4'-哌啶]-1'-羰基)-6-甲氧基吡啶-2-基)苯甲酸的晶体形式，包括无水单-tris形式(形式1)和单-tris盐的三水合物(形式2)，描述于国际PCT申请No.PCT/IB2018/058966中，其公开内容特此通过引用整体并入本文用于所有目的；

(S)-2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-(四氢呋喃-3-基)嘧啶-5-甲酰胺或其药学上可接受的盐和它的结晶固体形式(形式1和形式2)是在美国专利No.10,071,992的实施例1中描述的DGAT2抑制剂的一个例子，其公开内容特此通过引用整体并入本文用于所有目的；

[(1R,5S,6R)-3-{2-[(2S)-2-甲基氮杂环丁烷-1-基]-6-(三氟甲基)嘧啶-4-基}-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]乙酸或其药学上可接受的盐(包括其结晶性游离酸形式)是己酮糖激酶抑制剂的一个例子，并描述在美国专利No.9,809,579的实施例4中，其公开内容特此通过引用整体并入本文用于所有目的；和

FXR激动剂Tropifexor或其药学上可接受的盐描述在美国专利No.9,150,568的实施例1-1B中，其公开内容特此通过引用整体并入本文用于所有目的。

这些药剂和本发明的化合物可以与药学上可接受的媒介物诸如盐水、林格氏溶液、右旋糖溶液等组合。特定给药方案，即，剂量、时机和重复，将取决于特定个体和该个体的医疗史。

可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，并且可以包含缓冲剂诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；盐诸如氯化钠；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白，诸如血清白蛋白、明胶或Ig；亲水聚合物诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖类、二糖类和其它碳水化合物类，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂诸如EDTA；糖类诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；形成盐的抗衡离子诸如钠；金属络合物(例如，Zn-蛋白复合物)；和/或非离子型表面活性剂，诸如TWEEN^TM、PLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG)。

通过本领域已知的方法制备含有这些药剂和/或本发明的化合物的脂质体，诸如在美国专利No.4,485,045和4,544,545中所述的方法。在美国专利No.5,013,556中公开了具有增强的循环时间的脂质体。特别有用的脂质体可以通过反相蒸发方法用脂质组合物产生，所述脂质组合物包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG-衍生化的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)。将脂质体通过限定孔径的过滤器挤出以产生具有期望直径的脂质体。

这些药剂和/或本发明的化合物也可以被包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊（分别例如羟基甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲基酯)微胶囊）中，在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊剂)中或在大乳剂中。这样的技术公开在Remington, The Science and Practice ofPharmacy, 第20版, Mack Publishing (2000)中。

可以使用持续释放制剂。持续释放制剂的合适例子包括含有式I、II、III、IV或V的化合物的固体疏水聚合物的半透性基质，该基质为成型制品的形式，例如薄膜或微胶囊。持续释放基质的例子包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟基乙基-甲基丙烯酸酯)或'聚(乙烯醇))、聚丙交酯(美国专利No.3,773,919)、L-谷氨酸和7-乙基-L-谷氨酸盐的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-羟乙酸共聚物诸如在LUPRON DEPOT^TM (由乳酸-羟乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)中使用的那些、乙酸异丁酸蔗糖酯和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。

要用于静脉内施用的制剂必须是无菌的。这容易通过例如通过无菌过滤膜的过滤来实现。本发明的化合物通常置于具有无菌接入口的容器中，例如，具有可被皮下注射针刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶。

使用商购可得的脂肪乳剂可以制备合适的乳剂，诸如Intralipid^TM、Liposyn^TM、Infonutrol^TM、Lipofundin^TM和Lipiphysan^TM。可以将活性成分溶解在预混合的乳剂组合物中，或可替换地可以将它溶解在油(例如，大豆油、红花油、棉籽油、芝麻油、玉米油或扁桃仁油)中，且在与磷脂(例如，卵磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)和水混合后形成乳剂。应当理解，可以加入其它成分，例如甘油或葡萄糖，以调节乳剂的张力。合适的乳剂通常含有至多20%油，例如，5至20%。脂肪乳剂可以包含0.1至1.0 μm、特别是0.1至0.5 μm的脂肪微滴，并且具有在5.5至8.0范围内的pH。

乳剂组合物可以是通过将本发明的化合物与Intralipid^TM或其组分(大豆油、卵磷脂、甘油和水)混合而制备的那些。

用于吸入或吹入的组合物包括：在药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液和混悬剂，以及粉末。液体或固体组合物可以含有如上文所列出的合适的药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，所述组合物通过口服或鼻呼吸途径施用，用于局部或全身作用。在优选地无菌的药学上可接受的溶剂中的组合物可以通过使用气体雾化。雾化的溶液可以从雾化装置直接吸入或者所述雾化装置可以连接至面罩、幕或间歇性正压呼吸机。溶液、混悬剂或粉末组合物可以从以适当方式递送制剂的装置施用，优选地口服地或经鼻地施用。

试剂盒

本发明的另一个方面提供了包含本发明的固体形式（例如结晶形式诸如形式3）的试剂盒或包含本发明的固体形式（例如结晶形式诸如形式3）的药物组合物。除了本发明的固体形式（例如结晶形式诸如形式3）或其药物组合物以外，试剂盒还可以包括诊断剂或治疗剂。试剂盒也可以包括用于诊断或治疗方法中的说明。在某些实施方案中，试剂盒包括本发明的结晶形式和诊断剂。在其它实施方案中，试剂盒包括本发明的结晶形式或其药物组合物。

在另一个实施方案中，本发明包含适合用于进行本文所述的治疗方法的试剂盒。在一个实施方案中，试剂盒含有第一剂型，其包含足以实现本发明的方法的量的一种或多种本发明的固体形式(例如结晶形式诸如形式3)。在另一个实施方案中，试剂盒包含足以实现本发明的方法的量的一种或多种本发明的固体形式(例如结晶形式诸如形式3)以及用于所述剂量的容器。

制备

通过下文所述的通用和具体方法，使用合成有机化学领域的技术人员的普通一般知识，可以制备化合物1、其tris盐和化合物1的tris盐的结晶形式。这样的普通一般知识可以参见标准参考书诸如Comprehensive Organic Chemistry, Barton和Ollis编,Elsevier； Comprehensive Organic Transformations： A Guide to Functional GroupPreparations, Larock, John Wiley and Sons；和Compendium of Organic SyntheticMethods, 第I-XII卷(Wiley-Interscience出版)。本文中使用的起始材料是商购可得的，或可以通过本领域已知的常规方法制备。

在本发明的化合物、盐和结晶形式的制备中，应当指出，本文所述的某些制备方法可能需要保护远程官能团(例如，前体中的伯胺、仲胺、羧基)。对这样的保护的需要将随远程官能团的性质和制备方法的条件而异。本领域技术人员容易确定对这样的保护的需要。这样的保护/去保护方法的使用也属于本领域的技术。关于保护基及其用途的一般描述，参见T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, NewYork, 1991。

例如，某些化合物含有伯胺或羧酸官能团，其若未被保护则可能干扰在分子的其它部位的反应。因此，这样的官能团可以被适当的保护基保护，所述保护基可以在后续步骤中除去。用于胺和羧酸的保护的适当保护基包括常用于肽合成的那些保护基(诸如，用于胺类的N-叔丁氧基羰基(Boc)、苄氧基羰基(Cbz)和9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)，以及用于羧酸类的低级烷基酯或苄基酯)，其在所描述的反应条件下通常不具有化学反应性且通常可以在不化学改变化合物中的其它官能团的情况下被除去。

下文所述的方案意图提供在本发明的化合物的制备中所采用的方法的一般描述。本发明的某些化合物可以含有单个或多个具有立体化学命名(R)或(S)的手性中心。本领域技术人员显而易见，不论物质是对映异构体富集的还是外消旋的，所有的合成转化可以以类似的方式进行。此外，对期望的光学活性物质的拆分，可以在顺序中的任何期望点处使用公知的方法(诸如本文中和化学文献中所述的方法)进行。例如，可以使用手性色谱方法分离中间体以及最终产物。可替换地，手性盐可以被利用来分离对映异构地富集的中间体和最终的化合物。

实施例

下文举例说明本发明的非限制性化合物（包括其固体形式）的合成。

通常在惰性气氛（氮或氩）下进行实验，特别是在采用对氧或水分敏感的试剂或中间体的情况下。通常不经进一步纯化地使用商业溶剂和试剂。在适当时采用无水溶剂，通常为来自Acros Organics的AcroSeal^®产品、来自Sigma-Aldrich的Aldrich^®Sure/Seal™，或者来自EMD Chemicals的DriSolv^®产品。在其它情况下，将商业溶剂通过用4Å分子筛填充的柱，直至达到下述对水的QC标准：a)对于二氯甲烷、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺和四氢呋喃，<100 ppm；b)对于甲醇、乙醇、1,4-二氧杂环己烷和二异丙胺，<180 ppm。对于非常敏感的反应，用金属钠、氢化钙或分子筛进一步处理溶剂，并且在即将使用前蒸馏。通常将产品在真空下干燥，然后转移至进一步反应或进行生物学试验。从液相色谱-质谱(LCMS)、大气压化学电离(APCI)或气相色谱-质谱(GCMS)仪器报告质谱数据。符号♦表示在质谱图中观察到氯同位素图样。

在本发明的化合物的制备过程中，使用手性分离来分离某些中间体的对映异构体或非对映异构体。当手性分离完成时，将分离的对映异构体根据其洗脱顺序指定为ENT-1或ENT-2 (或DIAST-1或DIAST-2)。在某些实施方案中，指定为ENT-1或ENT-2的对映异构体可以用作起始材料以制备其它对映异构体或非对映异构体。在这样的情况下，将制备得到的对映异构体根据其起始材料分别指定为ENT-X1和ENT-X2；类似地，将制备的非对映异构体根据其起始材料分别指定为DIAST-X1和DIAST-X2 (或DIAST-)。在采用多种中间体的合成中，类似地使用DIAST-Y和DIAST-Z命名法。

通常用LCMS跟踪通过可检测中间体进行的反应，并且在加入后续试剂之前使之进行至完全转化。对于参照在其它实施例或方法中的程序的合成，反应条件（反应时间和温度）可以变化。一般而言，在反应后进行薄层色谱或质谱，并且在适当时进行后处理。纯化可以在实验之间变化：一般而言，选择用于洗脱液/梯度的溶剂和溶剂比率以提供适当的R_f或保留时间。在这些制备和实施例中的全部起始材料都是商购可得的，或可以通过本领域已知的或如本文中所述的方法制备。

制备P7

4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-甲酸叔丁 酯(P7)

步骤1. 2-(4-溴-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-2-基)-5-氯吡啶(C11)的合成

将5-氯-2-乙炔基吡啶(1.80 g, 13.1 mmol)、3-溴苯-1,2-二酚(2.47 g, 13.1mmol)、和十二羰基三钌(167 mg, 0.261 mmol)在甲苯(25 mL)中的混合物脱气1分钟，然后在100℃加热16小时。将反应混合物用乙酸乙酯(30 mL)稀释并通过硅藻土垫过滤；将滤液在真空中浓缩并使用硅胶色谱(梯度： 0%至1%的在石油醚中的乙酸乙酯)纯化，以提供作为黄色油的C11。收率：1.73 g, 5.30 mmol, 40%。LCMS m/z 325.6 (观察到溴-氯同位素图样) [M+H]⁺。¹H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.63 (dd, J = 2.4, 0.7 Hz, 1H), 7.71(dd, ABX图样的组分, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.60 (dd, ABX图样的组分, J = 8.4,0.7 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 6.76 (dd, ABX图样的组分, J =7.8, 1.4 Hz, 1H), 6.72 (dd, ABX图样的组分, J = 8.0, 7.8 Hz, 1H), 2.10 (s,3H)。

步骤2. 4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]-3,6-二 氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(C12)的合成

将[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II) (388mg, 0.530 mmol)加入C11(1.73 g, 5.30 mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1.64 g, 5.30 mmol)和碳酸铯(5.18 g, 15.9 mmol)在1,4-二氧杂环己烷(35 mL)和水(6 mL)中的悬浮液中。将反应混合物在90℃搅拌4小时，然后将它用乙酸乙酯(30 mL)和水(5 mL)稀释。将有机层在真空中浓缩并对残余物进行硅胶色谱(梯度：0%至5%的在石油醚中的乙酸乙酯)，提供作为黄色胶质的C12。收率：1.85 g, 4.31 mmol,81%。LCMS m/z 451.0♦[M+Na⁺]。¹H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.62 (dd, J = 2.5, 0.8Hz, 1H), 7.69 (dd, ABX图样的组分, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.57 (dd, ABX图样的组分, J = 8.4, 0.8 Hz, 1H), 6.84 - 6.79 (m, 2H), 6.78 - 6.73 (m, 1H), 6.39 -6.33 (br m, 1H), 4.13 - 4.07 (m, 2H), 3.68 - 3.58 (m, 2H), 2.60 - 2.51 (br m,2H), 2.07 (s, 3H), 1.49 (s, 9H)。

步骤3. 4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1- 甲酸叔丁酯(P7)的合成

将C12 (2.61 g, 6.08 mmol)和三(三苯基膦)氯化铑(I) (Wilkinson氏催化剂；563 mg, 0.608 mmol)在甲醇(100 mL)中的溶液在真空下脱气，然后用氢气净化；将该抽真空-净化循环进行共三次。然后将反应混合物在60℃在氢(50 psi)下搅拌16小时，然后将其过滤。将滤液在真空中浓缩，并将残余物使用硅胶色谱(梯度：0%至10%的在石油醚中的乙酸乙酯)纯化；将得到的物质与来自在C12上进行的类似氢化的物质(110 mg, 0.256 mmol)合并，以提供作为淡黄色胶质的P7。合并收率：2.05 g, 4.76 mmol, 75%。LCMS m/z 431.3♦[M+H]⁺。¹H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.62 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.69 (dd, ABX图样的组分, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.57 (d, AB四重峰的一半, J = 8.4 Hz, 1H), 6.79(dd, ABC图样的组分, J = 7.8, 7.7 Hz, 1H), 6.72 (dd, ABC图样的组分, J = 7.8,1.3 Hz, 1H), 6.68 (br d, ABC图样的组分, J = 7.9 Hz, 1H), 4.32 - 4.12 (br m,2H), 2.91 - 2.73 (m, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.90 - 1.62 (m, 4H), 1.48 (s, 9H)。

制备P8和P9

4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-甲酸叔丁 酯, ENT-1 (P8)和

4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-甲酸叔丁 酯, ENT-2 (P9)

使用SFC {柱：Phenomenex Lux Amylose-1, 5 μm；流动相：9：1二氧化碳/[含有0.2% (7 M的在甲醇中的氨)的2-丙醇]}，将P7 (500 mg, 1.16 mmol)分离成其组分对映异构体。将首先洗脱的对映异构体指定为ENT-1 (P8)，并将第二洗脱的对映异构体指定为ENT-2 (P9)。

P8收率：228 mg, 0.529 mmol, 46%。保留时间4.00分钟{柱：Phenomenex LuxAmylose-1, 4.6 x 250 mm, 5 μm；流动相A： 二氧化碳；流动相B： [含有0.2% (7 M的在甲醇中的氨)的2-丙醇]；梯度： 5% B保持1.00分钟，然后历时8.00分钟从5%至60% B；流速：3.0 mL/分钟；背压：120巴}。

P9收率：229 mg, 0.531 mmol, 46%。保留时间4.50分钟(分析条件与P8所用的分析条件相同)。

制备P15

2-(氯甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-甲酸甲酯(P15)

该整个顺序以大规模进行。一般而言，在反应之前以及添加试剂之后，将反应器抽真空到-0.08至-0.05 MPa，然后用氮气充填至常压。通常将此过程重复3次，然后评估氧含量以确保它≤1.0%。对于有机层的萃取和洗涤的过程，通常将混合物搅拌15至60分钟，然后使其在层分离之前静置15至60分钟。

步骤1. (2S)-2-[(苄氧基)甲基]氧杂环丁烷(C25)的合成

该反应以大约相同规模的三个批次进行。给2000 L玻璃衬里的反应器装入2-甲基丙烷-2-醇(774.7 kg)。将叔丁醇钾(157.3 kg, 1402 mol)经固体加料漏斗加入，并将混合物搅拌30分钟。然后将三甲基碘化亚砜(308.2 kg, 1400 mol)以相同方式加入，并将反应混合物在55℃至65℃加热2至3小时，此后以5至20 kg/小时的速率加入(2S)-2-[(苄氧基)甲基]氧杂环丙烷(92.1 kg, 561 mol)。将反应混合物在55℃至65℃维持25小时以后，将它冷却至25℃至35℃，并通过硅藻土(18.4 kg)过滤。将滤饼用叔丁基甲基醚(3 x 340 kg)冲洗，并将合并的滤液转移至5000 L反应器，用纯净水(921 kg)处理，并在15℃至30℃搅拌15至30分钟。然后将有机层使用氯化钠(230.4 kg)在纯净水(920.5 kg)中的溶液洗涤两次，并在减压下(≤−0.08 MPa)在≤45℃浓缩。加入正庚烷(187 kg)，并将得到的混合物在减压下(≤−0.08 MPa)在≤45℃浓缩；将有机相使用硅胶色谱(280 kg)纯化，氯化钠(18.5 kg)在柱顶上。将粗制物质使用正庚烷(513 kg)加载到柱上，然后用正庚烷(688.7 kg)和乙酸乙酯(64.4 kg)的混合物洗脱。将三批次合并，提供作为85%纯的浅黄色油的C25 (189.7kg, 906 mmol, 54%)。¹H NMR (400 MHz, 氯仿-d), 仅C25峰：δ7.40 - 7.32 (m, 4H),7.32 - 7.27 (m, 1H), 4.98 (dddd, J = 8.1, 6.7, 4.9, 3.7 Hz, 1H), 4.72 - 4.55(m, 4H), 3.67 (dd, ABX图样的组分, J = 11.0, 4.9 Hz, 1H), 3.62 (dd, ABX图样的组分, J = 11.0, 3.7 Hz, 1H), 2.72 - 2.53 (m, 2H)。

步骤2. (2S)-氧杂环丁烷-2-基甲醇(C26)的合成

将10% 炭载钯(30.7 kg)通过加料漏斗加入到在3000 L不锈钢高压釜反应器中的85%纯的C25 (来自前一步；185.3 kg, 884.8 mol)在四氢呋喃(1270 kg)中的10℃至30℃溶液中。将加料漏斗用纯净水和四氢呋喃(143 kg)冲洗，并将冲洗液加入反应混合物中。在已经将反应器内容物用氮气净化以后，将它们类似地用氢气净化，将压力增加到0.3至0.5MPa，然后排气至0.05 MPa。将该氢气净化重复5次，此后将氢气压力增加到0.3至0.4 MPa。然后将反应混合物加热到35℃至45℃。13小时（在这期间将氢气压力维持在0.3至0.5 MPa）以后，将混合物排气至0.05 MPa，并如下用氮气净化五次：将压力增加到0.15至0.2 MPa，然后排气至0.05 MPa。在已经将混合物冷却到10℃至25℃以后，将它过滤，并将反应器用四氢呋喃(2 x 321 kg)冲洗。将滤饼用该冲洗液浸泡两次然后过滤；在≤40℃在减压下(≤−0.06 MPa)浓缩，提供在四氢呋喃(251 kg)中的C26 (62.2 kg, 706 mol, 80%)。

步骤3. 4-甲基苯磺酸 (2S)-氧杂环丁烷-2-基甲酯(C27)的合成

将4-(二甲基氨基)吡啶(17.5 kg, 143 mol)加入C26 (来自前一步；62.2 kg,706 mol)在四氢呋喃(251 kg)中和三乙胺(92.7 kg, 916 mol)在二氯甲烷(1240 kg)中的10℃至25℃溶液中。30分钟以后，将对甲苯磺酰氯(174.8 kg, 916.9 mol)以20至40分钟的间隔逐份加入，并将反应混合物在15℃至25℃搅拌16小时20分钟。加入纯净水(190 kg)；搅拌以后，将有机层用碳酸氢钠水溶液(使用53.8 kg的碳酸氢钠和622 kg的纯净水制备)洗涤，然后用氯化铵水溶液(使用230 kg的氯化铵和624 kg的纯净水制备)洗涤。用纯净水(311 kg)最终洗涤以后，将有机层通过已经预负载硅胶(60.2 kg)的不锈钢Nutsche过滤器过滤。将滤饼用二氯甲烷(311 kg)浸泡20分钟，然后过滤；将合并的滤液在减压下(≤−0.05MPa)和≤40℃浓缩直到剩余330至400 L。然后在15℃至30℃加入四氢呋喃(311 kg)，并将混合物以相同方式浓缩至330至400 L的终体积。将四氢呋喃添加和浓缩进行重复，再次达到330至400 L的体积，提供C27 (167.6 kg, 692 mmol, 98%)在四氢呋喃(251.8 kg)中的浅黄色溶液。¹H NMR (400 MHz, 氯仿-d), 仅C27峰： δ 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 2H),7.34 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 4.91 (ddt, J = 8.0, 6.7, 3.9 Hz, 1H), 4.62 - 4.55(m, 1H), 4.53 - 4.45 (m, 1H), 4.14 (d, J = 3.9 Hz, 2H), 2.75 - 2.63 (m, 1H),2.60 - 2.49 (m, 1H), 2.44 (s, 3H)。

步骤4. (2S)-2-(叠氮基甲基)氧杂环丁烷(C28)的合成

在3000 L玻璃衬里的反应器中在10℃至25℃合并N,N-二甲基甲酰胺(473 kg)、叠氮化钠(34.7 kg, 534 mol)和碘化钾(5.2 kg, 31 mol)。加入在四氢呋喃(125.4 kg)中的C27 (83.5 kg, 344.6 mol)以后，将反应混合物加热到55℃至65℃保持17小时40分钟, 此后将它冷却到25℃至35℃，并用氮气从底部阀鼓泡15分钟。然后加入叔丁基甲基醚(623kg)和纯净水(840 kg)，并将得到的水层用叔丁基甲基醚(312 kg和294 kg)萃取两次。将合并的有机层用纯净水(2 x 419 kg)洗涤，同时将温度维持在10℃至25℃，提供在以上有机层溶液(1236.8 kg)中的C28 (31.2 kg, 276 mol, 80%)。

步骤5. 1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲胺(C29)的合成

将10% 炭载钯(3.7 kg)通过加料漏斗加入在3000 L不锈钢高压釜反应器中的C28[来自前一步；1264 kg (31.1 kg的C28, 275 mol)]在四氢呋喃(328 kg)中的10℃至30℃溶液中。将加料漏斗用四氢呋喃(32 kg)冲洗，并将冲洗液加入反应混合物。在已经将反应器内容物用氮气净化以后，将它们类似地用氢气净化，将压力增加到0.05至0.15 MPa，然后排气到0.03至0.04 MPa。将该氢气净化重复5次，此后将氢气压力增加到0.05至0.07 MPa。使反应温度升高到25℃至33℃，并将氢气压力在0.05至0.15 MPa维持22小时，期间每3至5小时更换氢气。然后将混合物如下用氮气净化五次：将压力增加到0.15至0.2 MPa，然后排气至0.05 MPa。过滤后，使用四氢呋喃(92 kg和93 kg)洗涤反应器，然后浸泡滤饼。将合并的滤液在减压下(≤−0.07 MPa)和≤45℃浓缩，提供在四氢呋喃(57.8 kg)中的C29 (18.0kg, 207 mol, 75%)。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆), 仅C29峰δ4.62 (ddt, J = 7.6, 6.6,5.1 Hz, 1H), 4.49 (ddd, J = 8.6, 7.3, 5.6 Hz, 1H), 4.37 (dt, J = 9.1, 5.9 Hz,1H), 2.69 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 2.55 - 2.49 (m, 1H), 2.39 (m, 1H)。

步骤6. 4-硝基-3-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]氨基}苯甲酸甲酯(C30)的合成

将碳酸钾(58.1 kg, 420 mol)加入在100 L玻璃衬里的反应器中的3-氟-4-硝基苯甲酸甲酯(54.8 kg, 275 mol)在四氢呋喃(148 kg)中的溶液中，并将混合物搅拌10分钟。加入C29 (29.3 kg, 336 mol)在四氢呋喃(212.9 kg)中的溶液，并将反应混合物在20℃至30℃搅拌12小时，此后加入乙酸乙酯(151 kg)，并将混合物通过硅胶(29 kg)过滤。将滤饼用乙酸乙酯(150 kg和151 kg)冲洗，并将合并的滤液在减压下(≤−0.08 MPa)和≤45℃浓缩到222至281 L的体积。在已经将混合物冷却到10℃至30℃以后，加入正庚烷(189kg)，进行搅拌20分钟，并将混合物在减压下(≤−0.08 MPa)和≤45℃浓缩至222 L的体积。再次将正庚烷(181 kg)以100至300 kg/小时的参考速率加入混合物，并继续搅拌20分钟。对混合物取样，直到残余四氢呋喃≤5%且残余乙酸乙酯为10%至13%。将混合物加热到40℃至45℃并搅拌1小时，此后将它以每小时5℃至10℃的速率冷却到15℃至25℃，然后在15℃至25℃搅拌1小时。使用不锈钢离心机过滤，提供滤饼，将其用乙酸乙酯(5.0 kg)和正庚烷(34 kg)的混合物冲洗，然后与四氢呋喃(724 kg)一起在10℃至30℃搅拌15分钟；过滤得到主要由C30组成的黄色固体(57.3 kg, 210 mol, 76%)。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) 8.34(t, J = 5.8 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.13(dd, J = 8.9, 1.8 Hz, 1H), 4.99 (dddd, J = 7.7, 6.7, 5.3, 4.1 Hz, 1H), 4.55(ddd, J = 8.6, 7.3, 5.8 Hz, 1H), 4.43 (dt, J = 9.1, 6.0 Hz, 1H), 3.87 (s,3H), 3.67 - 3.61 (m, 2H), 2.67 (dddd, J = 11.1, 8.6, 7.7, 6.2 Hz, 1H), 2.57 -2.47 (m, 1H)。

步骤7. 2-(氯甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-甲酸甲酯 (P15)的合成

在3000 L高压釜反应器中，在10℃至30℃将C30 (来自前一步；51.8 kg, 190mol)在四氢呋喃(678 kg)中的溶液用10% 炭载钯(5.2 kg)处理。将加料管用四氢呋喃(46kg)冲洗并将冲洗液加入反应混合物。在已经将反应器内容物用氮气净化以后，将它们类似地用氢气净化，将压力增加到0.1至0.2 MPa，然后排气到0.02至0.05 MPa。将该氢气净化重复5次，此后将氢气压力增加到0.1至0.25 MPa。将反应混合物在20℃至30℃搅拌，且每2至3小时将混合物用氮气净化三次，然后用氢气净化五次；在每次最终的氢气交换以后，将氢气压力增加到0.1至0.25 MPa。11.25小时总反应时间以后，将反应混合物排气至常压，并如下用氮气净化五次：将压力增加到0.15至0.2 MPa，然后排气至0.05 MPa。然后将它过滤，并将滤饼用四氢呋喃(64 kg和63 kg)冲洗两次；将合并的冲洗液和滤液在减压下(≤−0.08MPa)和≤40℃浓缩到128至160 L的体积。加入四氢呋喃(169 kg)，并将混合物再次浓缩到128至160 L的体积；将该过程重复共4次，提供中间体4-氨基-3-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]氨基}苯甲酸甲酯的溶液。

将四氢呋喃(150 kg)加入该溶液，随后加入2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(35.1 kg,227 mol)和对甲苯磺酸一水合物(1.8 kg, 9.5 mol)。在已经将反应混合物搅拌25分钟以后，将它在40℃至45℃加热5小时，此后将它在减压下浓缩到135至181 L的体积。加入2-丙醇(142 kg)，并将混合物再次浓缩到135至181 L的体积，此后加入2-丙醇(36.5 kg)和纯净水(90 kg)，并继续搅拌直到得到溶液。将其用串联的液体过滤器过滤，然后用纯净水(447kg)以150至400 kg/小时的参考速率在20℃至40℃处理。在已经将混合物冷却到20℃至30℃以后，将它搅拌2小时，并将固体经离心过滤进行收集。将滤饼用2-丙醇(20.5 kg)和纯净水(154 kg)的溶液冲洗；干燥以后，得到作为白色固体的P15 (32.1 kg, 109 mol, 57%)。¹H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.14 - 8.11 (m, 1H), 8.01 (dd, J = 8.5, 1.1 Hz,1H), 7.79 (br d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.26 - 5.18 (m, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.66 -4.58 (m, 2H), 4.53 (dd, ABX图样的组分, J = 15.7, 2.7 Hz, 1H), 4.34 (dt, J =9.1, 6.0 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.82 - 2.71 (m, 1H), 2.48 - 2.37 (m, 1H)。

可替换地，使用在美国专利No.10,208,019中描述的方法(参见该专利第58列的中间体23)，可以制备P15，其特此通过引用整体并入本文。

实施例1

2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基} 甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-甲酸, DIAST-X2 (化合物1) [从 P9]

步骤1. 5-氯-2-[2-甲基-4-(哌啶-4-基)-1,3-苯并二氧杂环戊烯-2-基]吡啶, ENT-X2, 对甲苯磺酸盐(C58)的合成[从P9]

将P9 (228 mg, 0.529 mmol)在乙酸乙酯(2.7 mL)中的溶液用对甲苯磺酸一水合物(116 mg, 0.610 mmol)处理，并将反应混合物在50℃加热16小时。然后将它在室温搅拌过夜，此后将沉淀物经过滤进行收集，并用乙酸乙酯和庚烷的混合物(1：1, 2 x 20 mL)冲洗，以提供作为白色固体的C58。收率：227 mg, 0.451 mmol, 85%。LCMS m/z 331.0♦[M+H]⁺。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆)： δ 8.73 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.61 - 8.46 (br m, 1H),8.35 - 8.18 (br m, 1H), 8.02 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.5 Hz,1H), 7.47 (d, J = 7.8, 2H), 7.11 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.89 - 6.81 (m, 2H),6.72 (五重峰, J = 4.0 Hz, 1H), 3.45 - 3.27 (m, 2H，假定的；部分地被水峰遮蔽),3.10 - 2.91 (m, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.97 - 1.80 (m, 4H)。

步骤2. 2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌 啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-甲酸甲酯, DIAST-Y2 (C59)的合成[从P9]

将N,N-二异丙基乙胺(0.234 mL, 1.34 mmol)加入C58 (225 mg, 0.447 mmol)在乙腈(2.2 mL)中的溶液中。已经将该混合物在45℃搅拌5分钟以后，加入P15 (120 mg,0.407 mmol)，并继续在45℃搅拌16小时，此后再次加入P15 (11 mg, 37 μmol)。搅拌另外3小时以后，将反应混合物用水(2.5 mL)处理，并将其冷却至室温。加入更多的水(5 mL)，并将得到的浆搅拌2小时，此后将固体经过滤收集并用乙腈和水的混合物(15：85, 3 x 5 mL)洗涤以提供作为灰白色固体的C59 (252 mg)。该物质含有一些N,N-二异丙基乙胺（通过¹HNMR分析），并直接用于下一步。LCMS m/z 589.1♦[M+H]⁺。¹H NMR (400 MHz, 氯仿-d) 8.61(d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz,1H), 7.74 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.67 (dd, ABX图样的组分, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H),7.59 - 7.51 (m, 1H), 6.82 - 6.75 (m, 1H), 6.74 - 6.66 (m, 2H), 5.28 - 5.19(m, 1H), 4.75 (dd, ABX图样的组分, J = 15.3, 6.0 Hz, 1H), 4.68 (dd, ABX图样的组分, J = 15.3, 3.4 Hz, 1H), 4.67 - 4.58 (m, 1H), 4.41 (ddd, J = 9.1, 5.9,5.9 Hz, 1H), 3.95 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.07 - 2.89 (m, 2H), 2.81 - 2.69 (m,2H), 2.53 - 2.41 (m, 1H), 2.37 - 2.22 (m, 2H), 2.05 (s, 3H), 1.93 - 1.74 (m,4H)。

步骤3. 2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌 啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-甲酸, DIAST-X2 (化合 物1)的合成[从P9]

将C59 (来自前一步；250 mg, ≤0.407 mmol)在甲醇(2 mL)中的悬浮液加热至40℃，此后加入氢氧化钠水溶液(1 M；0.81 mL, 0.81 mmol)。17小时以后，将反应混合物冷却至室温，并用1 M柠檬酸水溶液将pH调到5至6。将得到的混合物用水(2 mL)稀释，搅拌2小时，并用乙酸乙酯(3 x 5 mL)萃取；将合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(5 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并在真空中浓缩以提供泡沫状固体。将该物质吸纳入乙酸乙酯和庚烷的混合物(1：1, 4 mL)中，加热至50℃，然后将其冷却和搅拌过夜。过滤得到作为白色固体的化合物1。收率：179 mg，0.311 mmol，经2步76%。LCMS m/z 575.1♦[M+H]⁺。¹H NMR (400 MHz,DMSO-d ₆) δ 12.73 (br s, 1H), 8.71 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 1.5 Hz,1H), 8.00 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.64 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.83 - 6.72 (m, 3H), 5.14 - 5.06(m, 1H), 4.77 (dd, ABX图样的组分, J = 15.2, 7.2 Hz, 1H), 4.63 (dd, ABX图样的组分, J = 15.2, 2.8 Hz, 1H), 4.50 - 4.42 (m, 1H), 4.37 (ddd, J = 9.0, 5.9,5.9 Hz, 1H), 3.85 (AB四重峰, J _AB = 13.6 Hz, Δν_AB = 71.5 Hz, 2H), 3.01 (br d,J = 11.2 Hz, 1H), 2.85 (br d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.74 - 2.57 (m, 2H), 2.47 -2.38 (m, 1H), 2.29 - 2.10 (m, 2H), 2.01 (s, 3H), 1.81 - 1.64 (m, 4H)。

合成1S-1. 化合物1, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐的合成

2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基} 甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-甲酸 1,3-二羟基-2-(羟基甲基) 丙烷-2-铵盐, DIAST-X2 (化合物1, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐)的合成[从 P9]

将化合物1 (1.54 g, 2.68 mmol)在四氢呋喃(10 mL)中的混合物用2-氨基-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇的水溶液(Tris, 1.0 M；2.81 mL, 2.81 mmol)处理。24小时以后，将反应混合物与乙醇(2 x 50 mL)一起在真空中浓缩。将残余物用乙醇(15 mL)处理。搅拌20小时以后，将固体经过滤收集并用冷乙醇(5 mL)洗涤以提供作为白色固体的化合物1,1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐。收率：1.41 g, 2.03 mmol, 76%。LCMS m/z 575.3♦[M+H]⁺。¹H NMR (600 MHz, DMSO-d ₆) δ 8.71 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.21 (br s,1H), 8.00 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.79 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.60 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.82 - 6.73 (m, 3H), 5.13 - 5.07 (m,1H), 4.74 (dd, J = 15.3, 7.2 Hz, 1H), 4.61 (dd, J = 15.3, 2.9 Hz, 1H), 4.49 -4.43 (m, 1H), 4.37 (ddd, J = 9.0, 5.9, 5.9 Hz, 1H), 3.93 (d, J = 13.6 Hz,1H), 3.75 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.01 (br d, J = 11.3 Hz, 1H), 2.86 (br d, J =11.4 Hz, 1H), 2.73 - 2.59 (m, 2H), 2.48 - 2.37 (m, 1H), 2.27 - 2.20 (m, 1H),2.19 - 2.12 (m, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.82 - 1.66 (m, 4H)。mp = 184℃至190℃。

合成1S-2. 化合物1, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐的替代合成

将化合物1 (8.80克，15.3 mmol)在2-甲基四氢呋喃(90 ml)中的混合物在旋转蒸发器上在37℃水浴中在真空中浓缩，以将总体积减小至~54 ml。将异丙醇(90ml)加入混合物，然后再次将得到的混合物浓缩至~54 ml的体积。将异丙醇(135 ml)加入混合物，随后加入tris胺水溶液(3M；5.0ml, 0.98当量)。将得到的混合物/溶液在环境温度搅拌；且固体沉淀物在~15min内开始形成。然后将混合物在环境温度搅拌另外5小时。将得到的混合物/浆冷却至0℃，并将冷却的浆搅拌约另外2小时。将浆过滤，并用冷异丙醇(3 x 15 ml)洗涤。将收集的固体在收集漏斗上风干约90min，然后转移至真空干燥箱过夜干燥。在50℃/23inHg真空(有轻微氮气流出)~16小时以后，得到8.66克作为白色固体的化合物1, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐；UPLC为99.8面积% (收率：12.5 mmol, 81%)。得到LCMS和¹HNMR数据，其与在上面所示合成1S-1中的数据基本上相同。

化合物1, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐的形式A (也被称作无水的化 合物1的tris盐的形式A)的粉末X-射线衍射(PXRD)数据的获取

将化合物1的tris盐的白色固体(来自合成1S-1和合成1S-2二者)进行PXRD分析并发现是结晶物质(将其指定为形式A)。使用配备Cu辐射源的Bruker AXS D8 Endeavor衍射仪进行粉末X-射线衍射分析。将发散狭缝设定在15 mm连续照明。通过PSD-Lynx Eye检测器检测衍射的辐射，将检测器PSD开口设定在2.99度。将X-射线管电压和电流强度分别设定至40 kV和40 mA。使用0.01度的步长和1.0秒的步长时间，在Theta-Theta测角仪中从3.0至40.0度2θ在Cu波长(CuK_ᾱ= 1.5418λ)收集数据。将防散射屏设定至1.5 mm的固定距离。在数据收集期间，使样品旋转。通过将它们置于硅低背景样品架制备样品，并且在收集期间使其旋转。使用Bruker DIFFRAC Plus软件收集数据，并且通过EVA diffract plus软件进行分析。在峰搜索之前，未处理PXRD数据文件。使用EVA软件中的峰搜索算法，将用1的域值选择的峰用于进行初步峰指定。为了确保有效性，手动进行调节；目视检查自动化指定的输出，并且将峰位置调节至峰最大值。通常选择具有≥3%的相对强度的峰。一般而言，不选择未解析的峰或与噪音一致的峰。USP中所规定的与来自PXRD的峰位置有关的典型误差为至多±0.2°2-θ(USP-941)。来自合成1S-2所得到的形式A的样品的PXRD的以度2θ以及相对强度(具有≥3.0%的相对强度)表示的衍射峰的列表提供于上面在表E1-1中。

表E1-1

。

通过本文所述的方法得到的化合物1的tris盐的无水(脱水物)结晶形式被指定为形式A。形式A可以通过其关于例如粉末X-射线衍射图样(PXRD)的独特固态特征和其它固态方法诸如¹³C固态NMR来鉴定。

在某些实施方案中，形式A表现出包含至少两个特征峰的粉末X-射线衍射图样，按照2θ，所述特征峰选自7.7±0.2°；15.2±0.2°；15.7±0.2º；和17.6±0.2º处。在某些实施方案中，形式A表现出包含至少三个特征峰的粉末X-射线衍射图样，按照2θ，所述特征峰选自7.7±0.2°；15.2±0.2°；15.7±0.2º；和17.6±0.2º处。在某些实施方案中，形式A表现出包含特征峰的粉末X-射线衍射图样，按照2θ，所述特征峰选自7.7±0.2°；15.2±0.2°；15.7±0.2º；和17.6±0.2º处。

在某些实施方案中，形式A表现出包含特征峰的粉末X-射线衍射图样，按照2θ，所述特征峰是在7.7±0.2°和17.6±0.2°处。

在某些实施方案中，形式A表现出包含峰的粉末X-射线衍射图样，按照2θ，所述峰是在7.7±0.2°；15.2±0.2°；和17.6±0.2°处。

在某些实施方案中，形式A表现出包含峰的粉末X-射线衍射图样，按照2θ，所述峰是在7.7±0.2°；15.2±0.2°；和15.7±0.2º处。

在某些实施方案中，形式A表现出包含峰的粉末X-射线衍射图样，按照2θ，所述峰是在7.7±0.2°；15.2±0.2°；15.7±0.2º；和17.6±0.2º处。

在某些实施方案中，形式A表现出基本上如在图1中所示的粉末X-射线衍射图样。

化合物1的1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐的形式A的固态NMR分析

在定位进Bruker-BioSpin Avance III 500 MHz (¹H频率) NMR波谱仪中的CPMAS探针上进行固态NMR (ssNMR)分析。将化合物1的1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐的形式A的样品填充进4 mm转子。使用15.0 kHz的魔角旋转速率。

使用质子去耦交叉极化魔角旋转(CPMAS)实验收集¹³C ssNMR谱。在波谱采集期间施加80-90 kHz的调相质子去耦场。将交叉极化接触时间设定至2 ms和3-8秒的再循环延迟。调整扫描次数以获得足够的信噪比，为每个API收集2048次扫描。使用在结晶性金刚烷的外标准品上的¹³C CPMAS实验参考¹³C化学位移标度，将其高场共振设定至29.5 ppm。

使用Bruker-BioSpin TopSpin版本3.6软件进行自动峰挑选。通常，将3% 相对强度的阈值用于初步峰选择。目视检查自动化峰挑选的输出以确保有效性并在必要时手动进行调整。尽管本文报告了特定固态NMR峰(ssNMR)值，但是由于仪器、样品和样品制备的差异，这些峰值确实存在一定范围。由于峰位置固有的变化，这在ssNMR领域中是常见的实践。对于结晶固体，¹³C化学位移x-轴值的典型变异性是在±0.2 ppm的量级。本文报告的ssNMR峰高是相对强度。固态NMR强度可以随CPMAS实验参数的实际设置和样品的热经历而变化。化学位移数据依赖于试验条件(即旋转速度和样品架)、参考物质和数据处理参数以及其它因素。通常，将ss-NMR结果精确至约±0.2 ppm内。得到了形式A的代表性¹³C ssNMR谱，其显示在图2中。形式A的¹³C化学位移[ppm]±0.2 ppm在表E1-2中列出。

表E1-2.观察到的碳化学位移

。

实施例2

化合物1的1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐的形式2

化合物1的1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐的形式2的制备

在小瓶中将化合物1 (49.7 mg)与甲醇(0.828 mL)混合并加热至50℃。然后加入Tris的储备溶液(30.25 μL, 3M)，并将得到的混合物缓慢地冷却至室温。然后将混合物在室温缓慢地蒸发(将小瓶置于通风橱中并将帽稍微留缝以允许溶剂蒸发)。通过在甲醇/水混合溶剂中缓慢蒸发，形成化合物1的tris盐的晶体(并将该结晶形式指定为形式2)。

单晶X-射线分析

将化合物1的tris盐的形式2的样品进行试验用于单晶分析。在室温在Bruker D8Venture衍射仪上进行数据收集。数据收集包括omega和phi扫描。

通过在单斜系（Monoclinic）类空间群P2₁中使用SHELX软件套件的固有定相来解决结构。随后通过全矩阵最小二乘法方法精修结构。使用各向异性位移参数发现并精修所有非氢原子。

末端环（C1-C2-C3-C4-C5—Cl1）是无序的。对该组试验了紊乱模型，但没有令人满意地精修。CIF_Check模块基于上述段生成水平“A”。

从傅里叶差分图中发现了位于氮和氧上的氢原子，并在限制距离的情况下进行了精修。剩余的氢原子被放置在计算好的位置，并被允许骑在它们的载体原子上。最后的精修包括所有氢原子的各向同性位移参数。

由于从O5至N5的质子转移，确认了TRIS盐。此外，所述结构包含一个水分子（并因此是一水合物）。使用PLATON (Spek 2010)进行使用似然法(Hooft 2008)对绝对结构的分析，具有C22的已知立体化学信息（并因此，确定了C6的立体化学信息）。使用SHELXTL绘图包绘制精修结构(图3)。根据精修结构，形式2是化合物1的tris盐的一水合物，其结构可以表示为如下所示：

最终的R-指数是6.6%。最终的差分傅里叶揭示没有丢失或错位的电子密度。

在表E2-1中总结了相关晶体、数据收集和精修。原子坐标、键长、键角和位移参数在表E2-2至E2-4中列出。

表E2-1.形式2的晶体数据和结构精修

表E2-2. 形式2的原子坐标(x 10⁴)和等效各向同性位移参数(Ųx 10³)。将U(eq)定义为正交化U^ij张量的迹线的三分之一。

表E2-3. 形式2的键长[Å]和键角[°]。

用于产生等效原子的对称性转化：

表E2-4. 形式2的各向异性位移参数(Ųx 10³)。各向异性位移因子指数呈以下形式：

计算的/模拟的PXRD数据

使用本文上述通过单晶X-射线分析获得的信息，可以计算/模拟形式2的PXRD峰位置和强度（参见图4，使用Bruker DIFFRAC.EVA版本5.0.0.22）。下面提供了按照度2θ和相对强度（具有≥3.0%的相对强度）表示的形式2的计算的/模拟的PXRD衍射峰的列表。

表E2-5：形式2的计算的PXRD峰位置和强度

。

实施例3. 化合物1的tris盐的形式3

化合物1的tris盐的形式3的制备(浆至浆转化)

将化合物1的tris盐的无水形式形式A (1.177克)加入50 mL EasyMax®反应器。然后加入乙腈和水的混合溶剂(27.9 mL乙腈和2.4 mL水)。将得到的混合物(浆)用架式桨搅拌器（overhead paddle stirring）在室温(约25℃)搅拌两天。然后将混合物冷却至0℃并搅拌约1小时。然后将混合物通过滤纸抽滤进行过滤，并将收集的固体(饼)用2-3 mL冷乙腈(0℃)冲洗2次。将得到的饼在空气中在漏斗上干燥一小时。将饼/漏斗转移至真空干燥箱进行进一步干燥(50℃/~22 以HgVacuum计，有轻微氮气流出)。约5小时以后，得到1.115克白色固体(设计为形式3)。

化合物1, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐的形式3的替代制备

替代性地，通过乙腈向化合物1, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐在乙腈/15% 水(v/v)中的饱和溶液中的蒸汽扩散，制备化合物1的tris盐的形式3的单晶。

单晶X-射线分析

将化合物1的tris盐的形式3的样品进行试验用于单晶X-射线分析。在代表性晶体上在室温在Bruker D8 Venture衍射仪上进行数据收集。数据收集包括omega和phi扫描。

通过在单斜系空间群P2₁中使用SHELX软件套件(SHELXTL，版本5.1, Bruker AXS,1997)的固有定相来解决结构。随后通过全矩阵最小二乘法方法精修结构。使用各向异性位移参数发现并精修所有非氢原子。

从傅里叶差分图中发现了位于氮和氧上的氢原子，并在限制距离的情况下进行了精修。剩余的氢原子被放置在计算好的位置，并被允许骑在它们的载体原子上。最后的精修包括所有氢原子的各向同性位移参数。

使用PLATON (参见A.L. Spek, J. Appl. Cryst. 2003, 36, 7-13)进行使用似然法(参见R.W.W. Hooft等人. J. Appl. Cryst. (2008)。41. 96-103)对绝对结构的分析。假设提交的样品是对映异构纯的，指定绝对结构（用在两个手性中心上的立体化学信息）。

最终的R-指数是5.1%。最终的差分傅里叶揭示没有丢失或错位的电子密度。使用SHELXTL绘图包(SHELXTL，版本5.1, Bruker AXS, 1997)绘制精修结构(图5)。通过Flack的方法(参见H.D. Flack, Acta Cryst. 1983, A39, 867-881)确定绝对构型。根据精修结构，形式3是化合物1的tris盐的一水合物：

且该水合物形式的化学名称(包括立体化学信息)是：

2-({4-[(2S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-甲酸, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐,一水合物。

在表E3-1中总结了相关晶体、数据收集和精修。原子坐标、键长、键角和位移参数在表E3-2至E3-4中列出。

表E3-1. 形式3的晶体数据和结构精修

。

表E3-2. 形式3的原子坐标(x 10⁴)和等效各向同性位移参数(Ųx 10³)。将U(eq)定义为正交化U^ij张量的迹线的三分之一。

表E3-3. 形式3的键长[Å]和键角[°]

用于产生等效原子的对称性转化：

表E3-4. 形式3的各向异性位移参数(Ųx 10³)。各向异性位移因子指数呈以下形式：

化合物1, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐的形式3 (也被称作化合物1的 tris盐的一水合物的形式3)的粉末X-射线衍射(PXRD)数据的获取

将形式3的样品(例如，根据本文描述的方法制备的化合物1的tris盐的白色固体)进行PXRD分析并发现是结晶物质(将其指定为形式3)。

使用配备Cu辐射源(K-α平均值)的Bruker AXS D8 Endeavor衍射仪进行粉末X-射线衍射分析。将发散狭缝设定在15 mm连续照明。通过PSD-Lynx Eye检测器检测衍射的辐射，将检测器PSD开口设定在2.99度。将X-射线管电压和电流强度分别设定至40 kV和40mA。使用0.00999度的步长和1.0秒的步长时间，在3.0至40.0度2-θ的Cu波长在Theta-Theta测角仪中收集数据。将防散射屏设定至1.5 mm的固定距离。将样品在收集过程中以15/min旋转。通过将它们置于硅低背景样品架制备样品，并且在收集期间使其旋转。使用BrukerDIFFRAC Plus软件收集数据，并通过EVA diffract plus软件进行分析。在特定实验中使用的样品架由文件名中的代号给出：DW=深井架，SD=小草皮架，和FP=平板架。

在峰搜索之前，未处理PXRD数据文件。使用EVA软件中的峰搜索算法，将用1的阈值和0.3的宽度值选择的峰用于进行初步峰分配。目视检查自动化分配的输出以确保有效性，并在必要时手动进行调整。通常选择具有≥3%的相对强度的峰。没有选择未解析的峰或与噪音一致的峰。USP中所规定的与PXRD的峰位置有关的典型误差为至多±0.2°2-θ(USP-941)。下面提供了来自形式3的样品的按照度2θ和相对强度（具有≥3.0%的相对强度）表示的PXRD衍射峰的列表，。

表E3-5. 形式3的PXRD峰和相对强度

。

化合物1的Tris盐的形式3(一水合物)的固态NMR分析

在定位进Bruker-BioSpin Avance III 500 MHz (¹H频率) NMR波谱仪中的CPMAS探针上进行固态NMR (ssNMR)分析。将化合物1的1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-铵盐一水合物的形式3的样品填充进4 mm转子。使用15.0 kHz的魔角旋转速率。

使用质子去耦交叉极化魔角旋转(CPMAS)实验收集¹³C ssNMR谱。在波谱采集期间施加80-90 kHz的调相质子去耦场。将交叉极化接触时间设定至2 ms和3-8秒的再循环延迟。调整扫描次数以获得足够的信噪比，为每个API收集2048次扫描。使用在结晶性金刚烷的外标准品上的¹³C CPMAS实验参考¹³C化学位移标度，将其高场共振设定至29.5 ppm。

使用Bruker-BioSpin TopSpin版本3.6软件进行自动峰挑选。通常，将3% 相对强度的阈值用于初步峰选择。目视检查自动化峰挑选的输出以确保有效性并在必要时手动调整。尽管本文报告了特定固态NMR峰值，但是由于仪器、样品和样品制备的差异，这些峰值确实存在一定范围。由于峰位置固有的变化，这在固态NMR领域中是常见的实践。对于结晶固体，¹³C化学位移x-轴值的典型变异性是在±0.2 ppm的量级。本文报告的固态NMR峰高是相对强度。固态NMR强度可以随CPMAS实验参数的实际设置和样品的热史而变化。化学位移数据依赖于试验条件(即旋转速度和样品架)、参考物质和数据处理参数以及其它因素。通常，将ss-NMR结果精确至约±0.2 ppm内。

表E3-6. 观察到的碳化学位移(特征峰标有星号)。

实施例AA. CHO GLP-1R克隆H6–测定1

利用测量细胞中的cAMP水平的HTRF (均相时间分辨荧光) cAMP检测试剂盒(cAMPHI Range Assay Kit；CisBio目录号62AM6PEJ)，用基于细胞的功能测定来确定GLP-1R介导的激动剂活性。所述方法是由细胞产生的天然cAMP与用染料d2标记的外源cAMP之间的竞争性免疫测定。通过用穴状化合物标记的mAb抗-cAMP使示踪剂结合可视化。在标准或实验样品中，特定信号(即，能量转移)与标准或实验样品中的cAMP浓度成反比。

将人GLP-1R编码序列(NCBI参考序列NP_002053.3，包括天然存在的变体Gly168Ser)亚克隆进pcDNA3 (Invitrogen)中，并且分离稳定地表达受体的细胞系(指定为克隆H6)。使用¹²⁵I-GLP-1_7-36 (Perkin Elmer)的饱和结合分析(过滤测定程序)显示，从该细胞系衍生出的质膜表达高GLP-1R密度(K_d：0.4 nM，B_max：1900 fmol/mg蛋白)。

将细胞从冷冻保存移出，重新悬浮在40 mL的Dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水(DPBS -Lonza目录号17-512Q)中，并且在22℃在800 x g离心5分钟。然后将细胞沉淀物重新悬浮在10 mL生长培养基[含有HEPES、L-Gln的DMEM/F12 1：1混合物500 mL (DMEM/F12 Lonza目录号12-719F), 10% 热灭活的胎牛血清(Gibco目录号16140-071), 5 mL的100X Pen-Strep(Gibco目录号15140-122), 5 mL的100X L-谷氨酰胺(Gibco目录号25030-081)和500 μg/mL遗传霉素(G418) (Invitrogen #10131035)]中。将1 mL在生长培养基中的细胞悬浮液样品在Becton Dickinson ViCell上计数以测定细胞生存力及每mL细胞计数。然后将剩余细胞悬浮液用生长培养基调整，以使用Matrix Combi Multidrop试剂分配器递送2000个活细胞/孔，并将细胞分配进白色384孔组织培养物处理过的测定板(Corning 3570)中。然后将测定板在37℃在加湿环境中在5% 二氧化碳中温育48小时。

将不同浓度的每种待测化合物（在DMSO中）在含有100 μM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX；Sigma目录号I5879)的测定缓冲液(HBSS，含有钙/镁(Lonza/BioWhittaker目录号10-527F)/0.1% BSA (Sigma Aldrich目录号A7409-1L)/20 mM HEPES (Lonza/BioWhittaker目录号17-737E))中稀释。最终的DMSO浓度是1%。

48小时以后，从测定板孔移出生长培养基，并且将细胞在37℃在加湿环境中在5%二氧化碳中用20 μL的在测定缓冲液中连续稀释的化合物处理30分钟。在30分钟温育以后，将10 μL标记的d2 cAMP和10 μL的抗-cAMP抗体(二者都在细胞裂解缓冲液中1：20稀释；如生产商的测定方案中所述)加入测定板的每个孔。然后将板在室温温育并且在60分钟以后，使用330 nm的激发以及615和665 nm的发射，用Envision 2104多标记板读数器读出HTRF信号的变化。通过从cAMP标准曲线内插(如生产商的测定方案中所述)，将原始数据转化成nMcAMP，并且相对于被包括在每个板上的完全激动剂GLP-1_7-36的饱和浓度(1 μM)确定效应百分比。使用4-参数逻辑剂量响应方程式，从用曲线拟合程序分析的激动剂剂量-响应曲线进行EC₅₀测定。

实施例BB. CHO GLP-1R克隆C6–测定2

利用测量细胞中的cAMP水平的HTRF (均相时间分辨荧光) cAMP检测试剂盒(cAMPHI Range Assay Kit; Cis Bio目录号62AM6PEJ)，用基于细胞的功能测定来确定GLP-1R介导的激动剂活性。所述方法是由细胞产生的天然cAMP与用染料d2标记的外源cAMP之间的竞争性免疫测定。通过用穴状化合物标记的mAb抗-cAMP，使示踪剂结合可视化。在标准或实验样品中，特定信号(即，能量转移)与标准或实验样品中的cAMP浓度成反比。

将人GLP-1R编码序列(NCBI参考序列NP_002053.3，包括天然存在的变体Leu260Phe)亚克隆进pcDNA5-FRT-TO中，并如生产商(ThermoFisher)所述，使用Flp-In™T-Rex™System分离稳定地表达低受体密度的克隆CHO细胞系。使用¹²⁵I-GLP-1 (PerkinElmer)的饱和结合分析(过滤测定程序)表明，相对于克隆H6细胞系，从该细胞系(指定为克隆C6)衍生出的质膜表达低GLP-1R密度(K_d：0.3 nM，B_max：240 fmol/mg蛋白)。

将细胞从冷冻保存移出，重新悬浮在40 mL的Dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水(DPBS -Lonza目录号17-512Q)中，并且在22℃在800 x g离心5分钟。抽吸DPBS，并将细胞沉淀物重新悬浮在10 mL的完全生长培养基(含有HEPES、L-Gln的DMEM：F12 1：1混合物，500 mL(DMEM/F12 Lonza目录号12-719F)，10% 热灭活的胎牛血清(Gibco目录号16140-071), 5mL的100X Pen-Strep (Gibco目录号15140-122), 5 mL的100X L-谷氨酰胺(Gibco目录号25030-081), 700 μg/mL潮霉素(Invitrogen目录号10687010)和15 μg/mL杀稻瘟素(Gibco目录号R21001)中。将1 mL在生长培养基中的细胞悬浮液样品在Becton Dickinson ViCell上计数以测定细胞生存力及每mL细胞计数。然后将剩余细胞悬浮液用生长培养基调整，以使用Matrix Combi Multidrop试剂分配器递送1600个活细胞/孔，并将细胞分配进白色384孔组织培养物处理过的测定板(Corning 3570)中。然后将测定板在37℃在加湿环境(95%O₂, 5% CO₂)中温育48小时。

将不同浓度的每种待测化合物（在DMSO中）在含有100 μM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX；Sigma目录号I5879)的测定缓冲液[HBSS，含有钙/镁(Lonza/BioWhittaker目录号10-527F)/0.1% BSA (Sigma Aldrich目录号A7409-1L)/20 mM HEPES (Lonza/BioWhittaker目录号17-737E)]中稀释。化合物/测定缓冲液混合物中的最终DMSO浓度是1%。

48小时以后，从测定板孔移出生长培养基，并且将细胞在37℃在加湿环境(95%O₂, 5% CO₂)中用20 μL的在测定缓冲液中连续稀释的化合物处理30分钟。在30分钟温育以后，将10 μL标记的d2 cAMP和10 μL的抗-cAMP抗体(二者都在细胞裂解缓冲液中1：20稀释；如生产商的测定方案中所述)加入测定板的每个孔。然后将板在室温温育并且在60分钟以后，使用330 nm的激发以及615和665 nm的发射，用Envision 2104多标记板读数器读出HTRF信号的变化。通过从cAMP标准曲线内插(如生产商的测定方案中所述)，将原始数据转化成nM cAMP，并且相对于被包括在每个板上的完全激动剂GLP-1的饱和浓度(1 μM)确定效应百分比。使用4-参数逻辑剂量响应方程式，从用曲线拟合程序分析的激动剂剂量-响应曲线进行EC₅₀测定。

在表X-1中，将测定数据呈现至两(2)位有效数字，作为基于列出的重复的数目(数目)的几何平均值(EC₅₀)和算术平均值(Emax)。空白单元格意指没有该实施例的数据或未计算Emax。

表X-1. 化合物1的生物活性。

本文提及的所有专利、专利申请和参考文献特此通过引用整体并入本文。

Claims (32)

1.2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-胺盐的水合物结晶形式。

2.权利要求1所述的水合物结晶形式，其中所述水合物结晶形式是一水合物结晶形式。

3.权利要求2所述的水合物结晶形式，其中所述结晶形式是形式2，且其中形式2具有包含至少两个峰的粉末X-射线衍射图样(PXRD)，按照2θ，所述峰是在7.1±0.2º、7.6±0.2º、10.7±0.2º和19.4±0.2º处。

4.权利要求3所述的一水合物结晶形式，其中形式2具有包含至少三个峰的粉末X-射线衍射图样(PXRD)，按照2θ，所述峰是在7.1±0.2º、7.6±0.2º、10.7±0.2º和19.4±0.2º处。

5.权利要求4所述的一水合物结晶形式，其中形式2具有包含峰的粉末X-射线衍射图样(PXRD)，按照2θ，所述峰是在7.1±0.2º、7.6±0.2º、10.7±0.2º和19.4±0.2º处。

6.2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-胺盐的一水合物结晶形式(形式3)，其中形式3具有包含至少两个峰的PXRD，按照2θ，所述峰是在3.7±0.2º、7.4±0.2º、9.9±0.2º、14.8±0.2º和20.6±0.2º处。

7.权利要求6所述的一水合物结晶形式，其中所述PXRD包含峰，按照2θ，所述峰是在3.7±0.2º、7.4±0.2º和14.8±0.2º处。

8.权利要求6所述的一水合物结晶形式，其中所述PXRD包含峰，按照2θ，所述峰是在3.7±0.2º、7.4±0.2º、14.8±0.2º和20.6±0.2º处。

9.权利要求6所述的一水合物结晶形式，其中所述PXRD包含峰，按照2θ，所述峰是在3.7±0.2º、7.4±0.2º、9.9±0.2º、14.8±0.2º和20.6±0.2º处。

10.权利要求6至9中的任一项所述的一水合物结晶形式，其中所述一水合物结晶形式具有包含在54.7±0.2 ppm和138.4±0.2 ppm的化学位移的¹³C ssNMR谱。

11.权利要求10所述的一水合物结晶形式，其中所述¹³C ssNMR谱包含在54.7±0.2ppm、138.4±0.2 ppm和156.6 ppm±0.2 ppm的化学位移。

12.权利要求10所述的一水合物结晶形式，其中所述¹³C ssNMR谱包含在42.8±0.2ppm、54.7±0.2 ppm、128.2±0.2 ppm、138.4±0.2 ppm和156.6±0.2 ppm的化学位移。

13.权利要求1-12中的任一项所述的水合物结晶形式，其中所述水合物结晶形式是基本上纯的。

14.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-13中的任一项所述的水合物结晶形式和药学上可接受的载体。

15.一种药物组合物，其包含治疗有效量的2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-胺盐(“化合物1的tris盐”)和药学上可接受的载体，其中至少5%的化合物1的tris盐以权利要求1-13中的任一项所述的水合物结晶形式存在。

16.权利要求15所述的药物组合物，其中至少10%的化合物1的tris盐以权利要求1-13中的任一项所述的水合物结晶形式存在。

17.权利要求15所述的药物组合物，其中至少30%的化合物1的tris盐以权利要求1-13中的任一项所述的水合物结晶形式存在。

18.权利要求15所述的药物组合物，其中至少50%的化合物1的tris盐以权利要求1-13中的任一项所述的水合物结晶形式存在。

19.权利要求15所述的药物组合物，其中至少80%的化合物1的tris盐以权利要求1-13中的任一项所述的水合物结晶形式存在。

20.权利要求15所述的药物组合物，其中至少90%的化合物1的tris盐以权利要求1-13中的任一项所述的水合物结晶形式存在。

21.权利要求15所述的药物组合物，其中至少95%的化合物1的tris盐以权利要求1-13中的任一项所述的水合物结晶形式存在。

22.2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-胺盐的无定形形式。

23.权利要求22所述的无定形形式，其中所述无定形形式是基本上纯的。

24.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求22或23所述的无定形形式和药学上可接受的载体。

25.一种药物组合物，其包含治疗有效量的2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-胺盐(“化合物1的tris盐”)和药学上可接受的载体，其中至少5%的化合物1的tris盐以权利要求22或23所述的无定形形式存在。

26.一种药物组合物，其包含治疗有效量的2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-胺盐(“化合物1的tris盐”)和药学上可接受的载体，其中所述化合物1的tris盐包含化合物1的tris盐的结晶形式和化合物1的tris盐的无定形形式。

27.一种药物组合物，其包含治疗有效量的2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸, 1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-胺盐(“化合物1的tris盐”)和药学上可接受的载体，其中所述化合物1的tris盐包含权利要求1-13中的任一项所述的水合物结晶形式和权利要求22或23所述的无定形形式。

28.一种用于治疗疾病或障碍的方法，所述方法包括给需要这样的治疗的哺乳动物施用治疗有效量的权利要求1-13中的任一项所述的水合物结晶形式，其中所述疾病或障碍选自T1D、T2DM、前驱糖尿病、特发性T1D、LADA、EOD、YOAD、MODY、营养不良相关的糖尿病、妊娠糖尿病、高血糖症、胰岛素抗性、肝胰岛素抗性、葡萄糖耐量减低、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、肾脏疾病、糖尿病性视网膜病变、脂肪细胞功能障碍、内脏脂肪沉积、睡眠呼吸暂停、肥胖、进食障碍、由其它药剂的使用引起的体重增加、过度糖渴求、血脂异常、高胰岛素血症、NAFLD、NASH、纤维化、伴有纤维化的NASH、肝硬化、肝细胞癌、心血管疾病、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、外周血管病、高血压、内皮功能障碍、受损的血管顺应性、充血性心力衰竭、心肌梗塞、中风、出血性中风、缺血性中风、创伤性脑损伤、肺动脉高血压、血管成形术以后的再狭窄、间歇性跛行、餐后脂血症、代谢性酸中毒、酮病、关节炎、骨质疏松症、帕金森病、左心室肥大、外周动脉疾病、黄斑变性、白内障、肾小球硬化症、慢性肾衰竭、代谢综合征、X综合征、经前期综合征、心绞痛、血栓形成、动脉粥样硬化、短暂缺血发作、血管再狭窄、糖代谢异常、空腹血糖受损的病症、高尿酸血症、痛风、勃起功能障碍、皮肤和结缔组织障碍、银屑病、足部溃疡、溃疡性结肠炎、高载脂蛋白B脂蛋白血症、阿尔茨海默氏病、精神分裂症、认知受损、炎性肠病、短肠综合征、克罗恩氏病、结肠炎、肠易激综合征、多囊性卵巢综合征和成瘾。

29.一种用于治疗疾病或障碍的方法，所述方法包括给需要这样的治疗的哺乳动物施用治疗有效量的权利要求22或23所述的无定形形式，其中所述疾病或障碍选自T1D、T2DM、前驱糖尿病、特发性T1D、LADA、EOD、YOAD、MODY、营养不良相关的糖尿病、妊娠糖尿病、高血糖症、胰岛素抗性、肝胰岛素抗性、葡萄糖耐量减低、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、肾脏疾病、糖尿病性视网膜病变、脂肪细胞功能障碍、内脏脂肪沉积、睡眠呼吸暂停、肥胖、进食障碍、由其它药剂的使用引起的体重增加、过度糖渴求、血脂异常、高胰岛素血症、NAFLD、NASH、纤维化、伴有纤维化的NASH、肝硬化、肝细胞癌、心血管疾病、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、外周血管病、高血压、内皮功能障碍、受损的血管顺应性、充血性心力衰竭、心肌梗塞、中风、出血性中风、缺血性中风、创伤性脑损伤、肺动脉高血压、血管成形术以后的再狭窄、间歇性跛行、餐后脂血症、代谢性酸中毒、酮病、关节炎、骨质疏松症、帕金森病、左心室肥大、外周动脉疾病、黄斑变性、白内障、肾小球硬化症、慢性肾衰竭、代谢综合征、X综合征、经前期综合征、心绞痛、血栓形成、动脉粥样硬化、短暂缺血发作、血管再狭窄、糖代谢异常、空腹血糖受损的病症、高尿酸血症、痛风、勃起功能障碍、皮肤和结缔组织障碍、银屑病、足部溃疡、溃疡性结肠炎、高载脂蛋白B脂蛋白血症、阿尔茨海默氏病、精神分裂症、认知受损、炎性肠病、短肠综合征、克罗恩氏病、结肠炎、肠易激综合征、多囊性卵巢综合征和成瘾。

30.一种用于治疗疾病或障碍的方法，所述方法包括给需要这样的治疗的哺乳动物施用治疗有效量的2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸的1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-胺盐(“化合物1的tris盐”)，其中所述化合物1的tris盐包含化合物1的tris盐的结晶形式和化合物1的tris盐的无定形形式，且其中所述疾病或障碍选自T1D、T2DM、前驱糖尿病、特发性T1D、LADA、EOD、YOAD、MODY、营养不良相关的糖尿病、妊娠糖尿病、高血糖症、胰岛素抗性、肝胰岛素抗性、葡萄糖耐量减低、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、肾脏疾病、糖尿病性视网膜病变、脂肪细胞功能障碍、内脏脂肪沉积、睡眠呼吸暂停、肥胖、进食障碍、由其它药剂的使用引起的体重增加、过度糖渴求、血脂异常、高胰岛素血症、NAFLD、NASH、纤维化、伴有纤维化的NASH、肝硬化、肝细胞癌、心血管疾病、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、外周血管病、高血压、内皮功能障碍、受损的血管顺应性、充血性心力衰竭、心肌梗塞、中风、出血性中风、缺血性中风、创伤性脑损伤、肺动脉高血压、血管成形术以后的再狭窄、间歇性跛行、餐后脂血症、代谢性酸中毒、酮病、关节炎、骨质疏松症、帕金森病、左心室肥大、外周动脉疾病、黄斑变性、白内障、肾小球硬化症、慢性肾衰竭、代谢综合征、X综合征、经前期综合征、心绞痛、血栓形成、动脉粥样硬化、短暂缺血发作、血管再狭窄、糖代谢异常、空腹血糖受损的病症、高尿酸血症、痛风、勃起功能障碍、皮肤和结缔组织障碍、银屑病、足部溃疡、溃疡性结肠炎、高载脂蛋白B脂蛋白血症、阿尔茨海默氏病、精神分裂症、认知受损、炎性肠病、短肠综合征、克罗恩氏病、结肠炎、肠易激综合征、多囊性卵巢综合征和成瘾。

31.一种用于治疗疾病或障碍的方法，所述方法包括给需要这样的治疗的哺乳动物施用治疗有效量的2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸的1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-胺盐(“化合物1的tris盐”)，其中所述化合物1的tris盐包含权利要求1-13中的任一项所述的水合物结晶形式和权利要求22或23所述的无定形形式，且其中所述疾病或障碍选自T1D、T2DM、前驱糖尿病、特发性T1D、LADA、EOD、YOAD、MODY、营养不良相关的糖尿病、妊娠糖尿病、高血糖症、胰岛素抗性、肝胰岛素抗性、葡萄糖耐量减低、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、肾脏疾病、糖尿病性视网膜病变、脂肪细胞功能障碍、内脏脂肪沉积、睡眠呼吸暂停、肥胖、进食障碍、由其它药剂的使用引起的体重增加、过度糖渴求、血脂异常、高胰岛素血症、NAFLD、NASH、纤维化、伴有纤维化的NASH、肝硬化、肝细胞癌、心血管疾病、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、外周血管病、高血压、内皮功能障碍、受损的血管顺应性、充血性心力衰竭、心肌梗塞、中风、出血性中风、缺血性中风、创伤性脑损伤、肺动脉高血压、血管成形术以后的再狭窄、间歇性跛行、餐后脂血症、代谢性酸中毒、酮病、关节炎、骨质疏松症、帕金森病、左心室肥大、外周动脉疾病、黄斑变性、白内障、肾小球硬化症、慢性肾衰竭、代谢综合征、X综合征、经前期综合征、心绞痛、血栓形成、动脉粥样硬化、短暂缺血发作、血管再狭窄、糖代谢异常、空腹血糖受损的病症、高尿酸血症、痛风、勃起功能障碍、皮肤和结缔组织障碍、银屑病、足部溃疡、溃疡性结肠炎、高载脂蛋白B脂蛋白血症、阿尔茨海默氏病、精神分裂症、认知受损、炎性肠病、短肠综合征、克罗恩氏病、结肠炎、肠易激综合征、多囊性卵巢综合征和成瘾。

32.权利要求28至31中的任一项所述的方法，其中所述疾病或障碍选自肥胖、NAFLD、NASH、伴有纤维化的NASH、T2D和心血管疾病。

Images