CN114854641B

CN114854641B - 一种耐低温复合脱氮菌及在污水处理中的应用

Info

Publication number: CN114854641B
Application number: CN202210601347.6A
Authority: CN
Inventors: 李焕; 胡忠伟; 张月; 袁静; 张瑜; 李静; 张驰; 邵再波
Original assignee: Shenyang Fengjing Landscape Co ltd
Current assignee: Shenyang Fengjing Landscape Co ltd
Priority date: 2022-05-30
Filing date: 2022-05-30
Publication date: 2024-06-28
Anticipated expiration: 2042-05-30
Also published as: CN114854641A

Abstract

本发明属于污水生物脱氮、环境微生物技术领域，具体涉及一种耐低温复合脱氮菌及应用，复合脱氮菌为水生拉恩氏菌(Rahnella aquatilis)菌株WS33、假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株DT04、和假单胞菌(Pseudomonassp.)菌株DT06中至少两种菌株的混合。可以应用于低温条件下污水中高浓度无机氮污染、化学需氧量(COD)的降解去除。本发明所述的菌株WS33、DT04和DT06均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号分别为CGMCC No.22997、22998、22999。所述复合菌可用于我国寒冷地区的中高浓度生活污水、畜禽养殖废水或工业有机废水等多种水处理过程，具有适用温度范围宽、环境友好等优点。

Description

一种耐低温复合脱氮菌及在污水处理中的应用

技术领域

本发明属于环境微生物学、污水生物处理技术领域，具体涉及一种耐低温复合脱氮菌及在污水处理中的应用。

背景技术

世界范围来看，地表水等水体中氨态氮、硝态氮等无机氮浓度增加会引发富营养化等一系列污染及生态环境恶化等问题。如何有效去除污染水体中无机氮污染和有机物污染具有重要的现实意义。

以硝化细菌、反硝化细菌等为代表的微生物可以利用污水中的无机氮污染物和COD，并最终将绝大部分污染物转化成无害的氮气、CO₂等无害物从水体中脱除(简称生物脱氮技术)。与物理、化学处理技术相比，生物脱氮技术具有经济可行、环境友好等优势，是目前世界各国广泛采用的污水脱氮及COD降解的主流工艺方法。

对于降解COD及脱氮微生物来说，其生理活性常受温度影响。低温条件下，微生物脱氮与COD去除效果均受抑制而降低。绝大多数硝化细菌、反硝化细菌等脱氮微生物为中温菌，即这些微生物发挥脱氮活性的最佳温度范围为25-35℃。然而，当秋冬季温度降低时，这些脱氮微生物的活性降低、数量减少，进而导致污水系统的脱氮效率及COD降解效果明显下降，出水水质不稳定或不达标。

发掘能够耐受低温条件的脱氮菌株以提高低温季节污水的脱氮与COD 降解效果具有重要意义。围绕高效菌菌种资源的筛选与生物处理工艺的优化，国内外的多个研发机构和企业单位开展了大量的积极探索。目前现有研究大都是单菌，对于污水复杂的水质成分及多变的环境条件，单菌的适应能力弱，特别是对于水质波动等引起的冲击敏感进而导致处理效果变差。

一方面，现有生物脱氮及COD降解菌菌种资源大多为中温菌，对25℃以下的低温条件适应性差，脱氮活性和COD降解低。而已有的耐低温微生物资源极为缺乏，无法更好地满足寒冷季节污染水体的脱氮及COD降解的处理需求；另一方面，单一的耐低温脱氮菌适应复杂水质组成及环境条件波动的能力弱，有必要提高微生物的环境适应性和功能稳定性，从而保障持续的脱氮及COD降解性能。

发明内容

本发明的目的是针对污水低温季节生物脱氮效果差、低温脱氮与COD 降解菌种资源缺乏及单一菌种应对复杂环境条件能力弱的现状，提供了一种耐低温复合脱氮菌及在污水处理中的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种耐低温复合脱氮菌，复合脱氮菌为水生拉恩氏菌(Rahnella aquatilis)菌株WS33、假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株DT04、和假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株DT06中至少两种菌株的混合。

所述复合脱氮菌为水生拉恩氏菌(Rahnella aquatilis)菌株WS33、假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株DT04、和假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株DT06。

所述复合脱氮菌为水生拉恩氏菌(Rahnella aquatilis)菌株WS33、假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株DT04、和假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株DT06，按各菌株数量比例为2-5:2-8:1-3。

所述假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株DT04、水生拉恩氏菌(Rahnellaaquatilis)菌株WS33和假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株DT06，均已于 2021年8月2日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌株的保藏号分别为CGMCCNo.22998、22997、22999，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

一种所述耐低温复合脱氮菌的应用，所述耐低温复合脱氮菌在污水处理中的应用。

所述耐低温复合脱氮菌在6-30℃条件下在污水处理中的应用。

所述耐低温复合脱氮菌分别使用液体培养基进行活化，活化培养条件为：摇瓶转速80-180rpm、20-35℃、培养基初始pH为7.0-8.0，恒温振荡培,24-48h，而后将活化后菌株混合，混合后投加至待处理污染水体中。

所述液体培养基成分为：NaCl 0.5-12.0；蛋白胨0.4-12.0；酵母膏 0.2-6.0、蒸馏水1000mL，调节pH为7.2-8.0。

所述活化后各菌液混合，混合液中水生拉恩氏菌(Rahnella aquatilis) 菌株WS33、假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株DT04、和假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株DT06，按各菌株数量比例为2-5:2-8:1-3比例混合。

上述混合时，各菌液中细胞数量均不低于10⁸个/毫升。

复合菌液按0.5-10％接种量接种至待处理的无机氮污染水体中。

所述污染水体中无机氮形态为氨态氮、硝态氮和亚硝态氮；其中，氨态氮浓度范围为10-300mg/L，硝态氮浓度范围为5-800mg/L，亚硝态浓度范围为0.2-100mg/L，COD浓度范围为50-4000mg/L。

所述污水盐度(以NaCl浓度计)为0.1-30g/L，污水的pH值为6.0-9.0。

采用复合菌剂3-10天内实现无机氮、COD的有效去除。

本发明的有益效果：

(1)本发明复合菌有利于提高对温度、盐度及污染物负荷的耐受性；

(2)本发明所述复合菌能够很好地适应低温条件，能够在6℃有效去除水体中COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮；

(3)本发明菌株在6-40℃的宽温度范围下保持较高脱氮活性，可用于我国北方年均温差变化大的广大地理区域内的污水生物脱氮处理；

(4)本发明菌株在中低温条件下生长繁殖能力均较好，菌株扩培及种子液制备相对较容易，有利于工业化生产及后续应用。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明内容不仅局限于以下实施例。

本发明复合菌的3株细菌均分离筛选自黑龙江某污水处理厂活性污泥，经初步鉴定属于水生拉恩氏菌属和假单胞菌属，其在低温条件下对水体中无机氮和COD具有明显降解去除作用。

下述实施例中所需材料：

1)活性污泥：采集自黑龙江省某污水处理厂活性污泥池。

2)培养基：

富集培养基：NaCl 10.0；蛋白胨10.0；酵母膏5.0。

脱氮培养基(g/L)：CH₃COONa 8.2；NH₄Cl 0.50、KNO₃ 0.58、NaNO₂ 0.24、KH₂PO₄0.08；CaCl₂·2H₂O 0.1；MgSO₄·7H₂O 1.0；FeSO₄·7H₂O 0.006；微量元素液1mL；蒸馏水1L；pH 7.0～7.5；固体培养基添加2％的琼脂。

微量元素液(g/L)：EDTA 0.35；ZnSO₄·7H₂O 0.2；CuSO₄·5H₂O 0.1； MnSO₄·7H₂O0.1；Co(NO₃)₂·7H₂O 0.09；H₃BO₃ 0.1；Na₂MoO₄ 0.1。

以上培养基均通过灭菌锅在103.4kPa、121℃条件下灭菌20min，放凉后使用。

3)实验仪器：

恒温培养箱、恒温震荡培养箱、超净工作台、立式压力蒸汽灭菌器、凝胶成像系统、微型紫外分光光度计、PCR仪、电泳仪、涡旋振荡器等。

实施例1

(一)菌株筛选

取活性污泥20g，放入预装有100mL富集培养基的250mL锥形瓶中，然后在10℃、180rpm的恒温摇床上震荡培养48h；

48h后，取静置后的上层菌液并经10倍梯度稀释后涂布于脱氮培养基平板中；

待筛选培养基上菌落生长后，用无菌接种环挑取单菌菌落，采用平板划线分离法接种于脱氮固体培养基上，并置于10℃恒温培养箱中培养48h，待菌落长出后挑取单菌落，重复上述划线分离过程直至菌落形态单一，经脱氮效果测定，分别取铵态氮、硝态氮和COD去除率最大的菌株，编号分别为WS33、DT04和DT06。

(二)菌株鉴定与菌种保藏

分别提取WS33、DT04和DT06的基因组DNA，并送往北京六合华大基因科技有限公司进行16S rRNA基因测序。经序列比对，初步确定菌株WS33 与水生拉恩氏菌亲缘关系最近，DT04、DT06与假单胞菌属亲缘关系最近。菌株16S rRNA基因序列分别为：

WS33:

TGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGGCAGCGGAAAGTAGC TTGCTACTTTGCCGGCGAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGAAACTGCCTGATGGAGGGG GATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACCGCATGACCTCGAAAGAGCAAAGTGGGGGATCTTCGGACCTCACGCCATCGGATGTGCCCAGATGGGATTAGCTAGTAGGTGAGGTAATGGCTCACCTAG GCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCCATGCCGC GTGTGTGAAGAAGGCCTTAGGGTTGTAAAGCACTTTCAGCGAGGAGGAAGGCATCATACTTAATACGTGTGGTGATTGACGTTACTCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGT AATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGCGCTTAACGTGGGAACTGCATTTGAAACTGGCAAGCTAGAGTCT TGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACAAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGA TTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGTCGACTTGGAGGTTGTGCCCTTGAGGCGTGGCTTCCGGAGCTAACGCGTTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTACTCTTGACATCCACGGAATTCGCCAGAGATGGCTTAGTGCCTTCGGGAACCGTGAG ACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCTTTGTTGCCAGCACGTGATGGTGGGAACTCAAAGGAGACTGCCGGTGATAA ACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGAGTAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCATATACAAAGAGAAGCGAACTCGCGAGAGCAAGCGGACCTCATAAAGTATGTCGT AGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTAGATCAGAATGCTACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGA

菌株DT04的16S rRNA基因序列：

CCCGAAGGTTAGACTAGCTACTTCTGGTGCAACCCACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTAC AAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGACATTCTGATTCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGGACTACGATCGGTTTTCTGGGATTAGCTCCACCTCGCGG CTTGGCAACCCTCTGTACCGACCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGCCGTAAGGGCCATGATG ACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCCTTAGAGTGCCCACCATTACGTGCTGGTAACTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTACGGGACTTAACCCAACATCTCACGACA CGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTCTCAATGTTCCCGAAGGCACCAATCTATCTCTAGA AAGTTCATTGGATGTCAAGGCCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGC GGTCAACTTAATGCGTTAGCTGCGCCACTAAGAGCTCAAGGCTCCCAACGGCTAGTTGACATCG TTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCACCTCAGTGTCAGTATCAGTCCAGGTGGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTTCCTATATCTACGCATTTCACCG CTACACAGGAAATTCCACCACCCTCTACCATACTCTAGCTCGTCAGTTTTGAATGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCGGGGATTTCACATCCAACTTAACGAACCACCTACGCGCGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTTGCACCCTCTGTATTACCGCGGCTGCTGGCACAGAGTTAGCCGGTGCTTA TTCTGTCGGTAACGTCAAAATTGCAGAGTATTAATCTACAACCCTTCCTCCCAACTTAAAGTGCTTTACAATCCGAAGACCTTCTTCACACACGCGGCATGGCTGGATCAGGCTTTCGCCCATTGTCC AATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGACCGTGTCTCAGTTCCAGTGTGACTGATCATCCTCTCAGACCAGTTACGGATCGTCGCCTTGGTGAGCCATTACCCCACCAACTAGCTAATCC GACCTAGGCTCATCTGATAGCGCAAGGCCCGAAGGTCCCCTGCTTTCTCCCGTAGGACGTATGCGGTATTAGCGTCCGTTTCCGAACGTTATCCCCCACTACCAGGCAGATTCCTAGGCATTACTCAC CCGTCCGCCGCTCTCAAGAGAAGCAAGCTTCTCTCTACCGCTCGACTTGCATGTGTTAGTCTG

菌株DT06的16S rRNA基因序列：

CTCAGATTGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGGTAGAGAGAAGCTTGCTT CTCTTGAGAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCCTAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGATAACGTTCGGAAACGGACGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCAGGGGACCTTCGGGCCTTGCG CTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGG AGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCAGTTACCTAATACGTGATTG TTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTAACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGAG GGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTTGTTAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTCAAAACTGACTGACTAGAGTATGGTAGAGGG TGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTAATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACC CTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCAACTAGCCGTTGGAAGCCTTGAGCTTTTAGTGGCGCA GCTAACGCATTAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGG CCTTGACATCCAATGAACTTTCTAGAGATAGATTGGTGCCTTCGGGAACATTGAGACAGGTGCT GCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTACCAGCACGTAATGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGA AGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAGAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCTAATCCCATAAAACCGATCGTAGTCCGGAT CGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGAATCAGAATGTCGCGG TGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGC

菌株WS33、DT04、DT06已于2021年8月2日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌株的保藏号分别为CGMCC No.22997、22998、22999。

实施例2

取WS33、DT04、DT06菌种，分别接种至装有100mL富集培养基的250 mL锥形瓶中，均在在30℃、180rpm的恒温摇床上活化36h。36h后取活化后菌液进行平板计数，然后基于平板计数结果取适量三种菌株的活化后菌液，按照细胞数量的2:2:1的比例复配制成复合菌液。再取复合菌液按照1％接种比例接种至脱氮培养基中，然后在6℃、180rpm条件下恒温培养4天。另设接种等体积的经高温蒸汽灭菌的复合菌液为对照组，其他培养条件与接种组相同。培养期结束后，取水样测定COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮浓度。结果见表1所示。

由表1测定结果可见，4天后，接种复合菌液的处理组的COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮降解率分别为52.4％、35.9％、47.2％、30.7％；接种灭菌复合菌液的对照组水样中COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮降解率分别仅为 0.5％、0.1％、0.2％、0.2％。该结果显示，6℃低温条件下，接种复合菌的COD 降解及脱氮效果明显。

表1为复合菌在6℃条件下脱氮及去除COD效果

实施例3

取WS33、DT04、DT06菌种，分别接种至装有100mL富集培养基的250 mL锥形瓶中，均在在30℃、180rpm的恒温摇床上活化36h。36h后取活化后菌液进行平板计数，然后基于平板计数结果取适量三种菌株的活化后菌液，按照细胞数量的1:1:1的比例复配制成复合菌液。再取复合菌液按照1％接种比例接种至脱氮培养基中，然后在8℃、180rpm条件下恒温培养4天。另设接种等体积的经高温蒸汽灭菌的复合菌液为对照组，其他培养条件与接种组相同。培养期结束后，取水样测定COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮浓度。结果见表2所示。

由表2测定结果可见，4天后，接种复合菌液的处理组的COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮降解率分别为62.3％、51.7％、55.4％、36.9％；接种灭菌复合菌液的对照组水样中COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮降解率分别仅为 1.2％、0.6％、0.2％、0.1％。该结果显示，8℃低温条件下，接种复合菌的COD 降解及脱氮效果较6℃条件下有所提高，效果明显。

表2为复合菌在8℃条件下脱氮及去除COD效果

实施例4

取实施例2中活化好的复合菌液，按照1％接种比例接种至脱氮培养基中，然后在10℃、180rpm条件下恒温培养4天。另设接种等体积的经高温蒸汽灭菌的复合菌液为对照组，其他培养条件与接种组相同。培养期结束后，取水样测定氨态氮、硝态氮及亚硝态氮浓度。结果见表3所示。

由表3测定结果可见，4天后，接种复合菌液的处理组的COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮降解率分别为78.2％、65.4％、67.2％、48.1％；接种灭菌复合菌液的对照组水样中COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮降解率分别仅为 0.5％、0.1％、0.2％和0.2％。该结果显示，10℃低温条件下，接种复合菌的 COD降解及脱氮效果明显。

表3为复合菌在10℃条件下脱氮及去除COD效果

实施例5

取WS33、DT04、DT06菌种，分别接种至装有100mL富集培养基的250 mL锥形瓶中，均在在30℃、180rpm的恒温摇床上活化36h。36h后取活化后菌液进行平板计数，然后基于平板计数结果取适量三种菌株的活化后菌液，按照细胞数量的3:5:2的比例复配制成复合菌液。

取活化好的复合菌液，按照1％接种比例接种至脱氮培养基中，然后在 15℃、180rpm条件下恒温培养4天。另设接种等体积的经高温蒸汽灭菌的复合菌液为对照组，其他培养条件与接种组相同。培养期结束后，取水样测定氨态氮、硝态氮及亚硝态氮浓度。结果见表4所示。

由表4测定结果可见，4天后，接种复合菌液的处理组的COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮降解率分别为85.5％、85.8％、77.6％、61.9％；接种灭菌复合菌液的对照组水样中COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮降解率分别仅为 0.2％、0.2％、0.4％和0.0％。该结果显示，15℃低温条件下，接种复合菌的 COD降解及脱氮效果明显。

表4为复合菌在15℃条件下脱氮及去除COD效果

实施例6

取WS33、DT04、DT06菌种，分别接种至装有100mL富集培养基的250 mL锥形瓶中，均在在30℃、180rpm的恒温摇床上活化36h。36h后取活化后菌液进行平板计数，然后基于平板计数结果取适量三种菌株的活化后菌液，按照细胞数量的3:3:2的比例复配制成复合菌液。

取活化好的复合菌液，按照1.5％接种比例接种至脱氮培养基中，然后在25℃、180rpm条件下恒温培养4天。另设接种等体积的经高温蒸汽灭菌的复合菌液为对照组，其他培养条件与接种组相同。培养期结束后，取水样测定氨态氮、硝态氮及亚硝态氮浓度。结果见表5所示。

由表5测定结果可见，4天后，接种复合菌液的处理组的COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮降解率分别为98.7％、98.9％、95.4％、95.1％；接种灭菌复合菌液的对照组水样中COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮降解率分别仅为 0.2％、0.0％、0.1％和0.0％。该结果显示，25℃条件下，接种复合菌的COD 降解及脱氮效果明显。

表5为复合菌在25℃条件下脱氮及去除COD效果

实施例7

取实施例6中活化好的复合菌液，按照2％接种比例接种至脱氮培养基中，然后在40℃、180rpm条件下恒温培养4天。另设接种等体积的经高温蒸汽灭菌的复合菌液为对照组，其他培养条件与接种组相同。培养期结束后，取水样测定氨态氮、硝态氮及亚硝态氮浓度。结果见表6所示。

由表6测定结果可见，4天后，接种复合菌液的处理组的COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮降解率分别为99.4％、99.2％、98.8％、92.3％；接种灭菌复合菌液的对照组水样中COD、氨态氮、硝态氮及亚硝态氮降解率分别仅为 0.1％、0.2％、0.0％和0.0％。该结果显示，40℃低温条件下，接种复合菌的 COD降解及脱氮效果明显。表5为复合菌在40℃条件下脱氮及去除COD效果。

表6为复合菌在40℃条件下脱氮及去除COD效果

序列表

<110> 沈阳风景园林股份有限公司

<120> 一种耐低温复合脱氮菌及在污水处理中的应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1400

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

tggctcagat tgaacgctgg cggcaggcct aacacatgca agtcgagcgg cagcggaaag 60

tagcttgcta ctttgccggc gagcggcgga cgggtgagta atgtctggga aactgcctga 120

tggaggggga taactactgg aaacggtagc taataccgca tgacctcgaa agagcaaagt 180

gggggatctt cggacctcac gccatcggat gtgcccagat gggattagct agtaggtgag 240

gtaatggctc acctaggcga cgatccctag ctggtctgag aggatgacca gccacactgg 300

aactgagaca cggtccagac tcctacggga ggcagcagtg gggaatattg cacaatgggc 360

gcaagcctga tgcagccatg ccgcgtgtgt gaagaaggcc ttagggttgt aaagcacttt 420

cagcgaggag gaaggcatca tacttaatac gtgtggtgat tgacgttact cgcagaagaa 480

gcaccggcta actccgtgcc agcagccgcg gtaatacgga gggtgcaagc gttaatcgga 540

attactgggc gtaaagcgca cgcaggcggt ttgttaagtc agatgtgaaa tccccgcgct 600

taacgtggga actgcatttg aaactggcaa gctagagtct tgtagagggg ggtagaattc 660

caggtgtagc ggtgaaatgc gtagagatct ggaggaatac cggtggcgaa ggcggccccc 720

tggacaaaga ctgacgctca ggtgcgaaag cgtggggagc aaacaggatt agataccctg 780

gtagtccacg ctgtaaacga tgtcgacttg gaggttgtgc ccttgaggcg tggcttccgg 840

agctaacgcg ttaagtcgac cgcctgggga gtacggccgc aaggttaaaa ctcaaatgaa 900

ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgatgcaa cgcgaagaac 960

cttacctact cttgacatcc acggaattcg ccagagatgg cttagtgcct tcgggaaccg 1020

tgagacaggt gctgcatggc tgtcgtcagc tcgtgttgtg aaatgttggg ttaagtcccg 1080

caacgagcgc aacccttatc ctttgttgcc agcacgtgat ggtgggaact caaaggagac 1140

tgccggtgat aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaag tcatcatggc ccttacgagt 1200

agggctacac acgtgctaca atggcatata caaagagaag cgaactcgcg agagcaagcg 1260

gacctcataa agtatgtcgt agtccggatt ggagtctgca actcgactcc atgaagtcgg 1320

aatcgctagt aatcgtagat cagaatgcta cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca 1380

ccgcccgtca caccatggga 1400

<210> 2

<211> 1407

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

cccgaaggtt agactagcta cttctggtgc aacccactcc catggtgtga cgggcggtgt 60

gtacaaggcc cgggaacgta ttcaccgcga cattctgatt cgcgattact agcgattccg 120

acttcacgca gtcgagttgc agactgcgat ccggactacg atcggttttc tgggattagc 180

tccacctcgc ggcttggcaa ccctctgtac cgaccattgt agcacgtgtg tagcccaggc 240

cgtaagggcc atgatgactt gacgtcatcc ccaccttcct ccggtttgtc accggcagtc 300

tccttagagt gcccaccatt acgtgctggt aactaaggac aagggttgcg ctcgttacgg 360

gacttaaccc aacatctcac gacacgagct gacgacagcc atgcagcacc tgtctcaatg 420

ttcccgaagg caccaatcta tctctagaaa gttcattgga tgtcaaggcc tggtaaggtt 480

cttcgcgttg cttcgaatta aaccacatgc tccaccgctt gtgcgggccc ccgtcaattc 540

atttgagttt taaccttgcg gccgtactcc ccaggcggtc aacttaatgc gttagctgcg 600

ccactaagag ctcaaggctc ccaacggcta gttgacatcg tttacggcgt ggactaccag 660

ggtatctaat cctgtttgct ccccacgctt tcgcacctca gtgtcagtat cagtccaggt 720

ggtcgccttc gccactggtg ttccttccta tatctacgca tttcaccgct acacaggaaa 780

ttccaccacc ctctaccata ctctagctcg tcagttttga atgcagttcc caggttgagc 840

ccggggattt cacatccaac ttaacgaacc acctacgcgc gctttacgcc cagtaattcc 900

gattaacgct tgcaccctct gtattaccgc ggctgctggc acagagttag ccggtgctta 960

ttctgtcggt aacgtcaaaa ttgcagagta ttaatctaca acccttcctc ccaacttaaa 1020

gtgctttaca atccgaagac cttcttcaca cacgcggcat ggctggatca ggctttcgcc 1080

cattgtccaa tattccccac tgctgcctcc cgtaggagtc tggaccgtgt ctcagttcca 1140

gtgtgactga tcatcctctc agaccagtta cggatcgtcg ccttggtgag ccattacccc 1200

accaactagc taatccgacc taggctcatc tgatagcgca aggcccgaag gtcccctgct 1260

ttctcccgta ggacgtatgc ggtattagcg tccgtttccg aacgttatcc cccactacca 1320

ggcagattcc taggcattac tcacccgtcc gccgctctca agagaagcaa gcttctctct 1380

accgctcgac ttgcatgtgt tagtctg 1407

<210> 3

<211> 1400

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ctcagattga acgctggcgg caggcctaac acatgcaagt cgagcggtag agagaagctt 60

gcttctcttg agagcggcgg acgggtgagt aatgcctagg aatctgcctg gtagtggggg 120

ataacgttcg gaaacggacg ctaataccgc atacgtccta cgggagaaag caggggacct 180

tcgggccttg cgctatcaga tgagcctagg tcggattagc tagttggtga ggtaatggct 240

caccaaggcg acgatccgta actggtctga gaggatgatc agtcacactg gaactgagac 300

acggtccaga ctcctacggg aggcagcagt ggggaatatt ggacaatggg cgaaagcctg 360

atccagccat gccgcgtgtg tgaagaaggt cttcggattg taaagcactt taagttggga 420

ggaagggcag ttacctaata cgtgattgtt ttgacgttac cgacagaata agcaccggct 480

aactctgtgc cagcagccgc ggtaatacag agggtgcaag cgttaatcgg aattactggg 540

cgtaaagcgc gcgtaggtgg tttgttaagt tggatgtgaa atccccgggc tcaacctggg 600

aactgcattc aaaactgact gactagagta tggtagaggg tggtggaatt tcctgtgtag 660

cggtgaaatg cgtagatata ggaaggaaca ccagtggcga aggcgaccac ctggactaat 720

actgacactg aggtgcgaaa gcgtggggag caaacaggat tagataccct ggtagtccac 780

gccgtaaacg atgtcaacta gccgttggaa gccttgagct tttagtggcg cagctaacgc 840

attaagttga ccgcctgggg agtacggccg caaggttaaa actcaaatga attgacgggg 900

gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg 960

ccttgacatc caatgaactt tctagagata gattggtgcc ttcgggaaca ttgagacagg 1020

tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gtaacgagcg 1080

caacccttgt ccttagttac cagcacgtaa tggtgggcac tctaaggaga ctgccggtga 1140

caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcatcatgg cccttacggc ctgggctaca 1200

cacgtgctac aatggtcggt acagagggtt gccaagccgc gaggtggagc taatcccata 1260

aaaccgatcg tagtccggat cgcagtctgc aactcgactg cgtgaagtcg gaatcgctag 1320

taatcgcgaa tcagaatgtc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc 1380

acaccatggg agtgggttgc 1400

Claims

1.一种耐低温复合脱氮菌，其特征在于：

复合脱氮菌为水生拉恩氏菌（Rahnella aquatilis ）菌株WS33、假单胞菌（Pseudomonas sp.）菌株DT04、假单胞菌（Pseudomonas sp.）菌株DT06；

所述假单胞菌（Pseudomonas sp.）菌株DT04、水生拉恩氏菌（Rahnella aquatilis ）菌株WS33和假单胞菌（Pseudomonas sp.）菌株DT06，均已于2021年8月2日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌株的保藏号分别为CGMCC No.22997、22998、22999。

2.按权利要求1所述的耐低温复合脱氮菌，其特征在于：所述复合脱氮菌为水生拉恩氏菌（Rahnella aquatilis ）菌株WS33、假单胞菌（Pseudomonas sp.）菌株DT04、假单胞菌（Pseudomonas sp.）菌株DT06，按各菌株数量比例为2-5:2-8:1-3。

3.一种权利要求1所述耐低温复合脱氮菌的应用，其特征在于，所述耐低温复合脱氮菌在污水处理中的应用。

4.按权利要求3所述的应用，其特征在于，所述耐低温复合脱氮菌在6-30℃条件下在污水处理中的应用。

5.按权利要求4所述的应用，其特征在于，所述耐低温复合脱氮菌分别使用液体培养基进行活化，活化培养条件为：摇瓶转速80-180 rpm、20-35℃、培养基初始pH为7.0-8.0，恒温振荡培养24-48 h，而后将活化后菌株混合，混合后投加至待处理污染水体中。

6.按权利要求5所述的应用，其特征在于：所述活化后各菌液混合，混合液中水生拉恩氏菌（Rahnella aquatilis）菌株WS33、假单胞菌（Pseudomonas sp.）菌株DT04、和假单胞菌（Pseudomonas sp.）菌株DT06，按各菌株数量比例为2-5:2-8:1-3比例混合。

7.按权利要求3所述的应用，其特征在于，所述污水中无机氮形态为氨态氮、硝态氮和亚硝态氮；其中，氨态氮浓度范围为10-300 mg/L，硝态氮浓度范围为5-800 mg/L，亚硝态浓度范围为0.2-100 mg/L；污水中COD浓度范围为50-4000 mg/L。

8.按权利要求3所述的应用，其特征在于，所述污水盐度为0.1-30 g/L，所述污水盐度以NaCl浓度计,污水的pH值为6.0-9.0。