CN114854631B - 一株海绵来源的生防链霉菌ITBB-ZK-a5及其应用 - Google Patents
一株海绵来源的生防链霉菌ITBB-ZK-a5及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114854631B CN114854631B CN202210514994.3A CN202210514994A CN114854631B CN 114854631 B CN114854631 B CN 114854631B CN 202210514994 A CN202210514994 A CN 202210514994A CN 114854631 B CN114854631 B CN 114854631B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- streptomyces
- itbb
- biocontrol
- sponge
- strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/28—Streptomyces
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
- Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
本发明公开了一株海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB‑ZK‑a5及包括所述生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB‑ZK‑a5的防治农作物及水产养殖动物病害的生防制品,该海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB‑ZK‑a5及生防制品对多种病原菌具有防治效果。还公开了上述海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB‑ZK‑a5及包括所述生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB‑ZK‑a5的生防制品在制备具有防治病原真菌和病原细菌效果的药物方面的应用。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域,具体涉及一株海绵来源的生防链霉菌ITBB-ZK-a5及其应用。
背景技术
放线菌是一类具有重要价值的微生物资源,它们能够产生丰富多样的代谢产物,已被广泛用于农业和健康领域,因此,人们愈来愈重视从不同环境条件中挖掘具有应用潜力的新型放线菌资源。海洋特有的高盐、低营养等环境,使得海洋放线菌会具有区别于陆生种群的生理结构和功能,并形成独特的代谢途径,因此造就了丰富的海洋微生物资源,成为了巨大的农业微生物资源库和活性代谢产物库。海绵(marine sponge)属于动物界多孔动物门(Porifera),是一大类低等多细胞海洋动物,其体表有很多细小的管道,海水通过这些管道流经体内,以海水中的微生物和其他有机碎片作为食物来源,在海绵滤食过程中,许多微生物尤其是不能被消化的微生物得以在海绵体内保留,这样在海绵体内和体表就富集了大量的微生物。海绵虽然是一类非常简单、原始的海洋生物,却能产生比其他海洋生物物种更丰富的生物活性物质,主要体现在抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗疟疾、驱虫和酶抑制剂等活性。
真菌和细菌引起的病害是农业生产以及水产养殖中的最主要病害,化学农药是最常使用的防治方法,但是化学农药的广泛使用不仅会增强病菌的抗药性,而且还会对生态环境造成污染,更重要的是农药残留对人类的健康也有一定的影响。因此,寻找更加绿色、高效、安全的防治方法是全世界的共同目标。放线菌是最早发现的具有生物防治作用的一类微生物,从海绵中挖掘对真菌、细菌病害具有生防效果的共生放线菌,符合绿色环保的理念,在农作物绿色微生物农药和面向水产养殖业的绿色微生态制剂关键技术研发中起到越来越重要的作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一株海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5和包括所述生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5的防治农作物和/或水产养殖动物病害的生防制品,该海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5及其生防制品对多种病原菌具有防治效果。
本发明的目的还在于提供上述海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5或包括所述生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5的生防制品在制备具有防治病原真菌和/或病原细菌效果的药物方面的应用。
本发明的上述第一个目的可以通过以下技术方案来实现:一株海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5,其保藏编号为GDMCC No:62383,保藏日期为2022年04月14日,保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心,保藏地址为广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼,广东省科学院微生物研究所。
本申请发明人通过采集中国南海西沙群岛的海绵,分离纯化得到一株能够有效抑制多种病原菌的拮抗菌株,在本发明实施例中将其命名为生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5,简写为ITBB-ZK-a5。
本发明还提供了一种防治农作物和/或水产养殖动物病害的生防制品,包括所述海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5和/或所述海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5的发酵提取物。
本发明的上述第二个目的可以通过以下技术方案来实现:上述海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5或上述的生防制品在制备具有防治病原真菌和/或病原细菌效果的药物方面的应用。
优选的,所述病原真菌包括香蕉枯萎病菌、香蕉枯萎病菌4号生理小种、香蕉炭疽病菌、木瓜炭疽病菌、木瓜褐色蒂腐病菌、木瓜溃疡病菌、芒果炭疽病菌、辣椒炭疽病菌、辣椒棒孢叶斑病菌、豇豆灰斑病菌、豇豆茎基腐烂病菌、椰枣小孢拟盘多毛孢霉菌、椰子果腐病菌、水稻稻瘟病菌、小麦赤霉病菌、棉花黄萎病菌、橡胶炭疽病菌、黄瓜根腐病菌、火龙果果腐病菌、荔枝霜疫霉病菌和龙船花炭疽病菌中的一种或几种的组合。
优选的,所述病原细菌包括水稻白叶枯病菌、茄青枯劳尔氏菌、哈维氏弧菌、海豚链球菌和无乳链球菌中一种或几种的组合。
与现有技术相比,本发明具有以下优点:
(1)本发明获得的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5具有抗菌效果好、抑菌谱较广、防治效果稳定的特点,并且其发酵提取物中的抑菌活性组分可进一步作为生物农药被开发应用于多种农业生物病害的生物防治,该菌及其生防制品如发酵提取物在制备防治农业生物病害的绿色微生物农药的关键技术研发中具有重要潜力和较好的开发前景;
(2)本发明中的生防链霉菌株ITBB-ZK-a5及其生防制品如发酵提取物等较化学农药比,具有无残留、低毒性、对环境友好等优点,更符合当下绿色环保理念。
附图说明
图1为实施例1中筛选获得的放线菌ITBB-ZK-a5的菌落形态图;
图2为实施例2中菌株ITBB-ZK-a5及相关菌株的系统发育树;
图3为实施例3中菌株ITBB-ZK-a5用划线法对4种病原真菌的抑制效果;
图4为实施例6中菌株ITBB-ZK-a5发酵提取物在40℃、50℃、60℃水浴1h下对香蕉炭疽病菌的抑制效果的热稳定性;
图5为实施例7中菌株ITBB-ZK-a5发酵提取物在紫外灯下分别照射1h、2h、4h、6h、8h、10h对香蕉炭疽病菌的抑制效果的光稳定性。
具体实施方式
实施例1菌株分离
从中国南海西沙群岛采回的海绵样品,选用高氏合成一号培养基作为分离平板,采用稀释涂布法分离,28℃恒温培养7d后观察并挑取放线菌菌株ITBB-ZK-a5至链霉菌培养基2号(ISP2)培养基上培养纯化,并于甘油管-20℃保存。
高氏合成一号培养基按以下质量体积比例的组分配备:可溶性淀粉20.0g/L、氯化钠6.5g/L、硫酸亚铁0.01g/L、硫酸钾1.0g/L、硫酸氢二钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、海盐17.5g/L、重铬酸钾50μg/mL、pH 7.3±0.2,配制固体平板时加入琼脂20.0g/L(以1L水作为基准,其余培养基相同)。
ISP2培养基按以下质量体积比例的组分配备:酵母提取物4.0g/L、麦芽提取物10.0g/L、葡萄糖4.0g/L、海盐17.5g/L、pH 7.2±0.2,配制固体平板时加入琼脂20.0g/L。
放线菌菌株ITBB-ZK-a5在ISP2固体培养基上生长良好,28℃培养2~4d后开始产生孢子,培养5d后孢子堆颜色接近白色,其菌落形态图(培养7d)如图1所示。
实施例2菌株ITBB-ZK-a5的分子鉴定
将实施例1获得的放线菌ITBB-ZK-a5接种至ISP2固体培养基,28℃培养5d,挑取单菌落至新鲜的ISP2培养基平板上进行二次纯化培养5d,直接将带菌平板交由北京擎科生物科技有限公司昆明分公司进行16S rDNA序列测定。
菌株ITBB-ZK-a5的16S rDNA基因序列(如序列表SEQ ID NO:1所示)为:
aaaggaggtgatccagccgcaccttccggtacggctaccttgttacgacttcgtcccaatcgccagtcccaccttcgacggctccctccacaagggttgggccaccggcttcgggtgttaccgactttcgtgacgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgcagcaatgctgatctgcgattactagcgactccgacttcatggggtcgagttgcagaccccaatccgaactgagaccggctttttgagattcgctccacctcacggcttcgcagctcattgtaccggccattgtagcacgtgtgcagcccaagacataaggggcatgatgacttgacgtcgtccccaccttcctccgagttgaccccggcagtctcctgtgagtccccggcataacccgctggcaacacaggacaagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacagccatgcaccacctgtacaccgaccacaagggggcacccatctctggatgtttccggtgtatgtcaagccttggtaaggttcttcgcgttgcgtcgaattaagccacatgctccgccgcttgtgcgggcccccgtcaattcctttgagttttagccttgcggccgtactccccaggcggggaacttaatgcgttagctgcggcacggacaacgtggaatgtcgcccacacctagttcccaacgtttacggcgtggactaccagggtatctaatcctgttcgctccccacgctttcgctcctcagcgtcagtatcggcccagagatccgccttcgccaccggtgttcctcctgatatctgcgcatttcaccgctacaccaggaattccgatctcccctaccgaactctagcctgcccgtatcgaatgcagacccggagttaagccccgggctttcacatccgacgcgacaagccgcctacgagctctttacgcccaataattccggacaacgcttgcgccctacgtattaccgcggctgctggcacgtagttagccggcgcttcttctgcaggtaccgtcactcacgcttcttccctgctgaaagaggtttacaacccgaaggccgtcatccctcacgcggcgtcgctgcatcaggcttgcgcccattgtgcaatattccccactgctgcctcccgtaggagtctgggccgtgtctcagtcccagtgtggccggtcgccctctcaggccggctacccgtcgtcgccttggtaggccatcaccccaccaacaagctgataggccgcgggctcatcctgcaccgccggagctttccacacgtatcccatgcgggaacgcgtcatatccggtattagaccccgtttccagggcttgtcccagagtgcagggcagattgcccacgtgttactcacccgttcgccactaatccccggccgaaaccggttcatcgttcgacttgcatgtgttaagcacgccgccagcgttcgtcctgagccaggatcaaactctccgt1517。
将获得的序列在NCBI网站进行BLAST比对,选择相似度大于98%的菌株的16SrDNA基因序列作为参比对象,在MEGA软件中进行多序列比对,通过构建的系统发育树(如图2所示)可以看出菌株ITBB-ZK-a5与Streptomyces malaysiens AB249918.1在同一进化支上,将该菌株鉴定为链霉菌属(Streptomyces sp.),保藏号:GDMCC No:62383,保藏日期:2022年04月14日,保藏单位:广东省微生物菌种保藏中心,保藏地址:广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼,广东省科学院微生物研究所。
实施例3菌株ITBB-ZK-a5对病原真菌的抑菌持效性测试
供试病原真菌包括香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,Foc)、香蕉枯萎病菌4号生理小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense tropical race 4,Foc4)、香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)、木瓜炭疽病菌(ColletotrichumgloeosporioidesPenz.)、木瓜褐色蒂腐病菌(Phomopsis caricae-papayaeFetrak&Cif.)、木瓜可可毛色二孢霉(Lasiodiplodia theobromae)(引起木瓜溃疡病的主要病菌)、芒果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichumcapsici)、辣椒棒孢叶斑病菌(Corynespora cassiicola)、豇豆灰斑病菌(Corynespora cassiicola(Berk.et Curt.)Wei)、豇豆茎基腐烂病菌(Pythium aphanidermatum(Eds.)Fitzp.)、椰枣小孢拟盘多孢霉(Pestalotiopsis microspora)、椰子奇异根串珠霉菌(Thielaviopsisparadoxa)(引起椰子果腐病的主要病菌)、水稻稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearumschw.)、棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)、橡胶炭疽病菌(Colletotrichum acutatum)、瓜类根腐病菌(Fusarium solani)、火龙果果腐病菌(Gilbertella persicaria)、荔枝霜疫霉病菌(Peronophythora litchii)、龙船花炭疽病菌(Colletotrichum australianum)。
用划线法对实施例1获得的菌株ITBB-ZK-a5的抑菌持效性进行测试,选择放线菌-真菌共培养:将放线菌通过划线法接种至PDA固体培养皿中,28℃恒温静置培养4d,待培养皿中放线菌长势良好后,将制备的直径7mm的15种病原真菌菌块分别接种在PDA平板中央,距离菌块上下2cm处为培养4d的放线菌带,以不接放线菌的平板为对照组,28℃恒温静置培养7d、14d、30d,每个处理组重复3次,记录每个时期的抑菌率。抑制率如下表1所示,部分菌株的抑制效果如图3所示。
抑菌率(%)=[(对照组病原菌生长直径-病原菌块直径)-(处理组病原菌生长直径-病原菌块直径)]/(对照组病原菌生长直径-病原菌块直径)*100%。
表1菌株ITBB-ZK-a5的抑菌持效性结果(划线法)
从表1数据中可以看出菌株ITBB-ZK-a5在30天的对峙培养期内对15种植物病原真菌具有强抑制效果,其中对重要热带经济作物病原真菌香蕉炭疽病菌和木瓜炭疽病菌的抑制效果最好,30天内的抑制效果达到98.71±1.28%和98.07±1.92%,并且抑菌持效性也较好,而火龙果果腐病菌是相对抑制效果较低,抑制率为72.43±0.64%;总体看来,菌株ITBB-ZK-a5对15株病原真菌都具有较好的抑菌持效性。因此该菌在制备防治农作物病害的绿色微生物农药的关键技术研发中具有重要潜力和开发前景。
采用菌块对峙法对6种病原菌进行抑菌持效性测试,将7mm的放线菌菌块接种到平板两端,同时将直径7mm的6种病原真菌菌块分别接种在PDA平板中央,以不接放线菌的平板为对照组,28℃恒温静置培养7d、14d、30d,每个处理组重复3次,记录每个时期的抑菌率,如下表2所示。
表2菌株ITBB-ZK-a5的抑菌持效性结果(菌块对峙法)
从表2数据中可以看出菌株ITBB-ZK-a5在30天的对峙培养期内对6种植物病原真菌也具有较好的抑制作用,其中对重要经济作物病原真菌棉花黄萎病菌的抑制效果最好,30天内的抑制率达到85.47±1.59%,其次是对主要粮食作物病原真菌水稻稻瘟病菌的抑制率也达到79.48±2.76%,抑制率较低的是小麦赤霉病菌,抑制率为29.91±3.36%。因此该菌在制备相应病菌病害的绿色环保微生物农药药剂方面具有重要潜力和开发前景。
实施例4菌株ITBB-ZK-a5对病原细菌的抑菌谱测定
供试病原细菌包括:水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzaepv.oryzae,XOO)、茄劳氏青枯病菌(Ralstonia solanacearum)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、海豚链球菌(Streptococcus iniae)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)。
方法:实施例1获得的菌株ITBB-ZK-a5对病原细菌的抑菌谱研究,选择平板对峙法。将上述病原细菌菌液稀释至吸光值OD600=0.6~0.8,吸取100μL稀释后的病原菌液加入无菌培养皿中,再倒入15mL左右的琼脂培养基,摇匀,待培养基凝固后,在培养基左侧距边缘10mm左右处打孔加入20μL 20mg/mL的卡那霉素溶液作对照,将一个直径7mm的放线菌菌块倒置在右侧距边缘10mm左右处,28℃恒温培养24~48h后观察是否有透明抑菌圈,测量抑菌直径。抑菌结果如下表3所示。
表3菌株ITBB-ZK-a5对病原细菌的抑菌直径
从表3数据中可以看出菌株ITBB-ZK-a5对主要粮食作物细菌型病害致病菌水稻白叶枯病菌的抑制效果最为明显,抑菌直径为36mm,与阳性药物的抑菌效果相当;对重要水产养殖动物罗非鱼致病菌无乳链球菌、海豚链球菌的抑制效果与阳性药物的抑菌效果相当,此外还对重要海水水产养殖动物致病细菌哈维氏弧菌具有抑菌效果。因此该菌在水产养殖业的绿色微生态制剂关键技术研发中具有重要应用潜力和开发前景。
实施例5菌株ITBB-ZK-a5的发酵及其发酵提取物的获取
利用ISP2平板活化实施例1获得的菌株ITBB-ZK-a5,接种于TSB液体培养基中,28℃、180rpm振荡培养2d;按照10%(体积百分含量)接种量接种到3L液体发酵培养基中,28℃、180rpm振荡培养13d,得到发酵液;用等体积的乙酸乙酯(3L)萃取发酵液,并在45℃下将其减压浓缩至干品,得到提取物(5g),即为菌株ITBB-ZK-a5发酵提取物。
TSB液体培养基按以下按重量体积比例的组分配备:胰酪胨17g/L、大豆木瓜蛋白酶水解物3g/L、氯化钠5g/L、磷酸氢二钾2.5g/L、葡萄糖2.5g/L,pH7.3±0.2。
液体发酵培养基按以下按重量体积比例的组分配备:可溶性淀粉20g/L,蛋白胨5g/L,麦芽提取物3g/L,酵母提取物3g/L,葡萄糖10g/L,CaCO31 g/L,pH7.0。
实施例6菌株ITBB-ZK-a5发酵提取物抗植物病原菌的热稳定性测试
将实施例5中制备的发酵提取物用二甲基亚砜(DMSO)溶解成浓度为10mg/mL的样品液,分别置于40℃、50℃、60℃下水浴1h。以香蕉炭疽病菌为指示菌,通过平板滤纸片法测定放线菌的抑菌活性:将直径7mm的香蕉炭疽病菌菌块接种到PDA平板中央,在距离菌块上下2cm处放置一张直径7mm的滤纸片,以多菌灵(有效含量98%)、百菌清(有效含量75%)、腈菌唑(有效含量40%)作阳性对照,以不接种放线菌的香蕉炭疽病菌平板为对照组,每个处理重复3次,28℃恒温倒置培养10d,观察记录抑菌率;抑菌率如下表4所示,抑菌效果如图4所示。
表4菌株ITBB-ZK-a5发酵提取物抗植物病原菌的热稳定性
从表4的数据中可以看出,温度的提高对3种阳性药和菌株ITBB-ZK-a5的抑菌效果都有轻微的影响,菌株ITBB-ZK-a5的抑菌效果与腈菌唑的抑菌效果相当,比百菌清的抑制效果强,且对温度的变化具有较好的稳定性。
实施例7菌株ITBB-ZK-a5发酵提取物抗植物病原菌的光稳定性测试
将实施例5中制备的发酵提取物用DMSO溶解成浓度为10mg/mL的样品液,分别置于紫外灯下照射1h、2h、4h、6h、8h、10h。以香蕉炭疽病菌为指示菌,通过平板滤纸片法测定放线菌的抑制活性:制备直径7mm的香蕉炭疽病菌菌块接种到PDA平板中央,距离菌块上下2cm处放置一张直径7mm滤纸片,以多菌灵、百菌清、腈菌唑作阳性对照,以不接种放线菌的香蕉炭疽病菌平板为对照组,每个处理重复3次,28℃恒温倒置培养10d;抑菌率如下表5所示,抑菌效果如图5所示。
表5菌株ITBB-ZK-a5发酵提取物抗植物病原菌的光稳定性
从表5的数据可以看出,随着紫外光照时间的延长,菌株ITBB-ZK-a5发酵提取物的抑菌率有下降趋势,但仍然具有较好的抑菌效果,抑菌率为58%~70%左右,与腈菌唑的抑菌活性相当,比百菌清的抑制活性强。因此,菌株ITBB-ZK-a5在防治该类上述真菌和细菌引起的病害中可发挥稳定功效。
需要指出的是,上述实施例仅是对本发明的进一步说明,而不是限制,本领域技术人员在与本发明技术方案的相当的含义和范围内的任何调整或改变,都应认为是包括在本发明的保护范围内。
序列表
<110> 中国热带农业科学院热带生物技术研究所
<120> 一株海绵来源的生防链霉菌ITBB-ZK-a5及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1517
<212> DNA
<213> 生防链霉菌(Streptomyces sp)
<400> 1
aaaggaggtg atccagccgc accttccggt acggctacct tgttacgact tcgtcccaat 60
cgccagtccc accttcgacg gctccctcca caagggttgg gccaccggct tcgggtgtta 120
ccgactttcg tgacgtgacg ggcggtgtgt acaaggcccg ggaacgtatt caccgcagca 180
atgctgatct gcgattacta gcgactccga cttcatgggg tcgagttgca gaccccaatc 240
cgaactgaga ccggcttttt gagattcgct ccacctcacg gcttcgcagc tcattgtacc 300
ggccattgta gcacgtgtgc agcccaagac ataaggggca tgatgacttg acgtcgtccc 360
caccttcctc cgagttgacc ccggcagtct cctgtgagtc cccggcataa cccgctggca 420
acacaggaca agggttgcgc tcgttgcggg acttaaccca acatctcacg acacgagctg 480
acgacagcca tgcaccacct gtacaccgac cacaaggggg cacccatctc tggatgtttc 540
cggtgtatgt caagccttgg taaggttctt cgcgttgcgt cgaattaagc cacatgctcc 600
gccgcttgtg cgggcccccg tcaattcctt tgagttttag ccttgcggcc gtactcccca 660
ggcggggaac ttaatgcgtt agctgcggca cggacaacgt ggaatgtcgc ccacacctag 720
ttcccaacgt ttacggcgtg gactaccagg gtatctaatc ctgttcgctc cccacgcttt 780
cgctcctcag cgtcagtatc ggcccagaga tccgccttcg ccaccggtgt tcctcctgat 840
atctgcgcat ttcaccgcta caccaggaat tccgatctcc cctaccgaac tctagcctgc 900
ccgtatcgaa tgcagacccg gagttaagcc ccgggctttc acatccgacg cgacaagccg 960
cctacgagct ctttacgccc aataattccg gacaacgctt gcgccctacg tattaccgcg 1020
gctgctggca cgtagttagc cggcgcttct tctgcaggta ccgtcactca cgcttcttcc 1080
ctgctgaaag aggtttacaa cccgaaggcc gtcatccctc acgcggcgtc gctgcatcag 1140
gcttgcgccc attgtgcaat attccccact gctgcctccc gtaggagtct gggccgtgtc 1200
tcagtcccag tgtggccggt cgccctctca ggccggctac ccgtcgtcgc cttggtaggc 1260
catcacccca ccaacaagct gataggccgc gggctcatcc tgcaccgccg gagctttcca 1320
cacgtatccc atgcgggaac gcgtcatatc cggtattaga ccccgtttcc agggcttgtc 1380
ccagagtgca gggcagattg cccacgtgtt actcacccgt tcgccactaa tccccggccg 1440
aaaccggttc atcgttcgac ttgcatgtgt taagcacgcc gccagcgttc gtcctgagcc 1500
aggatcaaac tctccgt 1517
Claims (5)
1.一株海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5,其特征是:其保藏编号为GDMCC No:62383,保藏日期为2022年04月14日,保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心,保藏地址为广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼,广东省科学院微生物研究所。
2.一种防治农作物和/或水产养殖动物病害的生防制品,其特征是包括权利要求1所述的海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5和/或权利要求1所述的海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5的发酵提取物;所述发酵提取物是将海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5的发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取,并在45℃下将其减压浓缩至干品得到。
3.权利要求1所述的海绵来源的生防链霉菌(Streptomyces sp.)ITBB-ZK-a5或权利要求2所述的生防制品在制备具有防治病原真菌和/或病原细菌效果的药物方面的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征是:所述病原真菌包括香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.cubense,Foc、香蕉枯萎病菌4号生理小种Fusarium oxysporumf.sp.cubense tropical race 4,Foc4、香蕉炭疽病菌Colletotrichum musae、木瓜炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides Penz.、木瓜褐色蒂腐病菌Phomopsis caricae- papayae Fetrak&Cif.、木瓜可可毛色二孢霉Lasiodiplodia theobromae、芒果炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides、辣椒炭疽病菌Colletotrichum capsici、辣椒棒孢叶斑病菌Corynespora cassiicola、豇豆灰斑病菌Corynespora cassiicola (Berk.etCurt.)Wei、豇豆茎基腐烂病菌Pythium aphanidermatum(Eds.)Fitzp.、椰枣小孢拟盘多毛孢霉菌Pestalotiopsis microspora、椰子奇异根串珠霉菌Thielaviopsis paradoxa、水稻稻瘟病菌Pyricularia oryzae、小麦赤霉病菌Fusarium graminearumschw、棉花黄萎病菌Verticillium dahliae、橡胶炭疽病菌Colletotrichum acutatum、瓜类根腐病菌Fusarium solani、火龙果果腐病菌Gilbertella persicaria、荔枝霜疫霉病菌Peronophythora litchii和龙船花炭疽病菌Colletotrichum australianum中的一种或几种的组合。
5.根据权利要求3所述的应用,其特征是:所述病原细菌包括水稻白叶枯病菌Xanthomonas oryzaepv.oryzae、茄青枯劳尔氏菌Ralstonia solanacearum、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、海豚链球菌(Streptococcus iniae)和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)中一种或几种的组合。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210514994.3A CN114854631B (zh) | 2022-05-12 | 2022-05-12 | 一株海绵来源的生防链霉菌ITBB-ZK-a5及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210514994.3A CN114854631B (zh) | 2022-05-12 | 2022-05-12 | 一株海绵来源的生防链霉菌ITBB-ZK-a5及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114854631A CN114854631A (zh) | 2022-08-05 |
CN114854631B true CN114854631B (zh) | 2023-06-23 |
Family
ID=82637551
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210514994.3A Active CN114854631B (zh) | 2022-05-12 | 2022-05-12 | 一株海绵来源的生防链霉菌ITBB-ZK-a5及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114854631B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114933997B (zh) * | 2022-06-13 | 2023-06-23 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一株珊瑚来源的共生链霉菌sh001及其应用 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05221874A (ja) * | 1992-02-13 | 1993-08-31 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | 魚類の疾病防除剤 |
WO2011005042A2 (ko) * | 2009-07-08 | 2011-01-13 | 한국생명공학연구원 | 식물 병원균에 대하여 항균 활성을 갖는 신규한 스트렙토마이세스 아르젠테오루스 균주 |
CN105517557A (zh) * | 2013-04-23 | 2016-04-20 | 特雷根控股有限公司 | 具有抗微生物活性的细菌菌株以及包含所述菌株的生物控制组合物 |
CN108300681A (zh) * | 2018-04-20 | 2018-07-20 | 海南大学 | 一株娄彻氏链霉菌及其应用 |
CN113930355A (zh) * | 2021-09-15 | 2022-01-14 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一株白蚁来源的生防链霉菌w7及其应用 |
CN113999794A (zh) * | 2021-11-12 | 2022-02-01 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一株链霉菌及其应用 |
CN114933997A (zh) * | 2022-06-13 | 2022-08-23 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一株珊瑚来源的共生链霉菌sh001及其应用 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2984075C (en) * | 2015-05-01 | 2024-01-23 | Inocucor Technologies, Inc. | Microbial compositions and methods for bioprotection |
-
2022
- 2022-05-12 CN CN202210514994.3A patent/CN114854631B/zh active Active
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05221874A (ja) * | 1992-02-13 | 1993-08-31 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | 魚類の疾病防除剤 |
WO2011005042A2 (ko) * | 2009-07-08 | 2011-01-13 | 한국생명공학연구원 | 식물 병원균에 대하여 항균 활성을 갖는 신규한 스트렙토마이세스 아르젠테오루스 균주 |
CN105517557A (zh) * | 2013-04-23 | 2016-04-20 | 特雷根控股有限公司 | 具有抗微生物活性的细菌菌株以及包含所述菌株的生物控制组合物 |
CN108300681A (zh) * | 2018-04-20 | 2018-07-20 | 海南大学 | 一株娄彻氏链霉菌及其应用 |
CN113930355A (zh) * | 2021-09-15 | 2022-01-14 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一株白蚁来源的生防链霉菌w7及其应用 |
CN113999794A (zh) * | 2021-11-12 | 2022-02-01 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一株链霉菌及其应用 |
CN114933997A (zh) * | 2022-06-13 | 2022-08-23 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一株珊瑚来源的共生链霉菌sh001及其应用 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
Inhibition of bacterial carbonic anhydrases and zinc proteases: from orphan targets to innovative new antibiotic drugs;Supuran CT;Curr Med Chem;第19卷;831-844 * |
海洋链霉菌GB-2的分离筛选及其抗菌物质的研究;刘姝;中国博士学位论文全文数据库基础科学辑;A006-47 * |
海绵共附生放线菌Streptomyces sp.A01059抗稻瘟病活性物质的分离研究;彭杰等;中国农学通报;第25卷;51-54 * |
海绵共附生放线菌筛选与抑制海水养殖病原弧菌研究;杜英侠;中国学位论文全文数据库;全文 * |
西沙海绵共附生放线菌ITBB-ZK-a5的分离鉴定及抗菌活性研究;齐敏等;热带作物学报;1-11 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114854631A (zh) | 2022-08-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN107736379B (zh) | 解淀粉芽孢杆菌在防治植物真菌病害中的应用 | |
CN110257290B (zh) | 一种植物病原菌抑制剂及其所用菌株与应用 | |
KR100838103B1 (ko) | 신규한 바실러스 아밀로리퀴페션스 씨씨178 및 이를 이용한 잿빛곰팡이병 방제 | |
CN107974427B (zh) | 一株具有抑菌活性的海洋链霉菌 | |
CN107828695B (zh) | 一株高效抑制黄曲霉合成黄曲霉毒素的阴沟肠杆菌生防菌株及其应用 | |
CN112795496B (zh) | 一株多粘类芽孢杆菌及其在防治白菜茎基腐病中的应用 | |
CN108192829B (zh) | 一种藤黄轮丝链霉菌及其生物防治制剂和应用 | |
Murugappan et al. | Symbiotic influence of endophytic Bacillus pumilus on growth promotion and probiotic potential of the medicinal plant Ocimum sanctum | |
CN102250814A (zh) | 一株枯草芽孢杆菌及其在防治白粉病的生防制剂中的应用 | |
CN110172429A (zh) | 一种提高生防芽孢杆菌对植物病原真菌抑菌活性的培养基及培养方法 | |
CN107699526B (zh) | 一株防治灰霉病的放线菌菌株及其应用 | |
CN114933997B (zh) | 一株珊瑚来源的共生链霉菌sh001及其应用 | |
CN114854631B (zh) | 一株海绵来源的生防链霉菌ITBB-ZK-a5及其应用 | |
CN116286500A (zh) | 一种盐生植物内生的耐盐贝莱斯芽孢杆菌及用途 | |
CN103382449B (zh) | 广谱杀虫、抗菌活性的链霉菌株t2-10及其应用 | |
CN113999794B (zh) | 一株链霉菌及其应用 | |
CN113930355B (zh) | 一株白蚁来源的生防链霉菌w7及其应用 | |
CN107629985B (zh) | 一株对植物病原真菌具拮抗作用的植物内生细菌 | |
Shivabai et al. | Isolation of actinomycetes from soil sample using different pretreatment methods and its comparative study | |
CN107828697B (zh) | 一种多粘类芽孢杆菌生防菌株af01及其应用 | |
CN117286075A (zh) | 一株昆虫来源的生防链霉菌itbb12006及其应用 | |
CN117448231A (zh) | 一株海泥来源的生防链霉菌itbb11364及其应用 | |
CN114854632B (zh) | 一株海藻来源的共生盐孢菌hz014及其应用 | |
CN109182216B (zh) | 一株对多肉植物茎腐病具有抑制作用的海洋链霉菌scfj-05 | |
CN111394270B (zh) | 一株藤黄类诺卡氏菌及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |