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CN114846028A - 抗cd45抗体及其结合物 - Google Patents

抗cd45抗体及其结合物 Download PDF

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CN114846028A
CN114846028A CN202080086243.5A CN202080086243A CN114846028A CN 114846028 A CN114846028 A CN 114846028A CN 202080086243 A CN202080086243 A CN 202080086243A CN 114846028 A CN114846028 A CN 114846028A
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CN
China
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seq
amino acid
acid sequence
set forth
antibody
Prior art date
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Pending
Application number
CN202080086243.5A
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English (en)
Inventor
A.博伊塔诺
M.库克
C.麦克多纳
R.帕尔乔杜里
R.潘沃
B.R.佩尔斯
P.F.维德布姆
P.A.克鲁伊特
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dianthus Therapeutics Inc
Original Assignee
Magenta Therapeutics Inc
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Filing date
Publication date
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Abstract

本文揭示特异性结合至人类CD45之抗CD45抗体、其抗原结合片段及抗体药物结合物(ADC)。该等抗体及ADC可用于包括耗尽患者之CD45+细胞之方法在内之治疗方法中。本文所述之组合物及方法可例如藉由耗尽CD45+癌细胞或自体免疫细胞群体用于直接治疗病症。本文所述之组合物及方法亦可用于使患者为进行造血干细胞移植疗法作好准备，及藉由在移植程序之前选择性耗尽内源CD45+细胞来改良造血干细胞移植物之植入。

Description

抗CD45抗体及其结合物
相关申请案
本申请案主张于2019年11月1日提出申请之美国临时申请案第62/929,137号；于2019年11月1日提出申请之美国临时申请案第62/929,194号；于2019年11月1日提出申请之美国临时申请案第62/929,207号；于2019年11月1日提出申请之美国临时申请案第62/929,288号；于2019年11月1日提出申请之美国临时申请案第62/929,601号；于2019年11月1日提出申请之美国临时申请案第62/929,283号；于2019年11月1日提出申请之美国临时申请案第62/929,347号；于2019年11月26日提出申请之美国临时申请案第62/940,742号；于2020年2月18日提出申请之美国临时申请案第62/978,147号；于2020年4月24日提出申请之美国临时申请案第63/015,348号；于2020年6月30日提出申请之美国临时申请案第63/046,046号；于2020年6月30日提出申请之美国临时申请案第63/046,164号；及于2020年9月29日提出申请之美国临时申请案第63/084,903号的优先权。前述优先权申请案中每一者的全部内容皆以引用方式并入本文中。
序列表
本申请案含有序列表，其已以ASCII格式以电子方式提交且全文皆以引用方式并入本文中。该ASCII拷贝创建于2020年10月29日，命名为2020-10-29_M103034 1525WO_SL_ST25.txt且大小为233个千字节。
技术领域
本文阐述抗CD45抗体、其抗原结合片段及其抗体药物结合物。亦阐述藉由投与抗CD45抗体、其抗原结合片段或其抗体药物结合物(ADC)治疗患有多种病状、尤其例如血液疾病、代谢失调、癌症及自体免疫疾病之患者，其中抗体、其抗原结合片段或ADC能够结合靶细胞(例如造血干细胞、免疫细胞或其他类型细胞)上之CD45。
背景技术
CD45亦称为C型蛋白酪胺酸磷酸酶受体(PTPRC)，其系在人类中由PTPRC基因编码之酶(Kaplan等人，PNAS 87:7000-7004(1990))。CD45系蛋白酪胺酸磷酸酶(PTP)家族之成员，该蛋白酪胺酸磷酸酶家族包括调控多个细胞过程(包括细胞生长、分化、有丝分裂周期及致癌转型)之信号传导分子。CD45含有细胞外结构域、单次跨膜区段及两个串联细胞质内催化结构域，且因此属于受体型PTP家族。CD45系存在于分化造血细胞(红血球及浆细胞除外)上之多个同功型中之I型跨膜蛋白(Holmes,Immunology 117:145-55(2006))。已显示CD45系T细胞及B细胞抗原受体信号传导之调控子。其经由其细胞外结构域(共刺激之形式)直接与抗原受体复合物之组分相互作用、或经由其细胞质结构域活化抗原受体信号传导所需之多种Src家族激酶起作用。CD45亦抑制JAK激酶，且因此用作细胞介素受体信号传导之负调控子。
CD45存在于造血细胞之表面上，该等造血细胞包括HSC、白血球及破骨细胞，该等破骨细胞具有造血起源(Shivtiel等人，J Exp Med 205:2381(2008))。人类中CD45内之缺失突变与重度免疫缺失相关。此主要归因于在T细胞上不存在CD45，其中该CD45通常系丰富的且为调节抗原反应期间之SFK活性所必需。CD45缺陷性(CD45-/-)小鼠骨髓含有正常数量之造血细胞，但最原始的HSC之数量减少，且其因应G-CSF之动员受损。部分地，此缺点系HSC固有的；在不具CD45介导之SFK活性下调的情况下，整联蛋白介导之黏附较高且HSC更可能保留在干细胞生态位中。CD45-/-HSC亦缺乏G-CSF刺激之动员及向趋化介素CXCL12/SDF-1之归巢，此对移植后之细胞植入具有负面影响。该等缺陷可藉由补充SFK抑制剂来恢复，此指示此作用通常系由CD45来完成。同样，CD45-/-接受者亦显示正常HSC之缺陷性植入及后续动员，此指示CD45在干细胞生态位中以及在HSC中之作用(Shivtiel等人，J Exp Med 205:2381(2008))。
尽管在医学领域取得了进步，但仍需要治疗造血系统之病状，尤其例如特定血球之疾病、代谢失调、癌症及自体免疫疾患。尽管造血干细胞(HSC)具有显著治疗潜力，但阻碍其临床应用之限制因素系难以确保HSC移植物在宿主中之植入。具体而言，涉及靶向内源HSC上之细胞表面抗原之抗体之造血干细胞疗法可触发不需要的免疫刺激及效应功能，从而阻碍外源HSC移植物之植入。由于CD45在例如HSC及白血球上表现，故其呈递包括调理疗法、免疫复位及疾病治疗在内之疗法之靶。
发明内容
鉴于CD45在细胞生物学中之重要作用，需要抗CD45抗体及其片段。本文阐述抗CD45抗体、其抗原结合片段及其抗体药物结合物(ADC)。抗CD45抗体、其抗原结合片段及其抗体药物结合物(ADC)可结合至造血干细胞(HSC)且可用作例如HSC移植之调理剂。具体而言，本文所述之抗CD45抗体、其抗原结合片段及其ADC可用于特异性耗尽例如宿主HSC、免疫细胞(例如白血球)或致病性细胞。另外，本文所述之抗CD45抗体、其抗原结合片段及其ADC可用于治疗患有白血病或淋巴瘤之患者，或用于治疗患有自体免疫疾病(例如多发性硬化及硬皮症)之患者。本文所述之抗CD45抗体、其抗原结合片段及ADC满足对促进外源造血干细胞移植物植入之组合物及方法之需要，使得在移植后保留该等细胞之多功效及造血功能。
在第一态样中，本发明提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含：(a)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:2中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ IDNO:3中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:4中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:6中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:7中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ ID NO:8中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；(b)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:12中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:13中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:14中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:16中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:17中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ ID NO:18中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；(c)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:22中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:23中所示之胺基酸序列中所示之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:24中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:26中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ IDNO:27中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ ID NO:28中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；(d)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:33中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:34中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:36中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:37中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQID NO:38中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；(e)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:42中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:43中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:44中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:46中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:47中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ ID NO:48中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；(f)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:52中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:53中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:54中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:56中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:57中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ ID NO:58中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；(g)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:62中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:63中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ IDNO:64中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:66中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:67中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ ID NO:68中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；(h)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:72中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:73中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:74中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:76中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:77中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ ID NO:78中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；(i)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:82中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:83中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:84中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:86中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:87中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ IDNO:88中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；或(j)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:92中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:93中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:94中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:96中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:97中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ ID NO:98中所示之胺基酸序列之CDR3结构域。
在另一态样中，本文提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含：重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:119中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:120中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:121中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:122中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:123中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ ID NO:124中所示之胺基酸序列之CDR3结构域。
在另一态样中，本发明提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含：(a)包含如SEQ ID NO:1中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:5中所示之胺基酸序列之轻链可变区；(b)包含如SEQ ID NO:11中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:15中所示之胺基酸序列之轻链可变区；(c)包含如SEQ ID NO:21中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:25中所示之胺基酸序列之轻链可变区；(d)包含如SEQ ID NO:31中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:35中所示之胺基酸序列之轻链可变区；(e)包含如SEQ ID NO:41中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:45中所示之胺基酸序列之轻链可变区；(f)包含如SEQ ID NO:51中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:55中所示之胺基酸序列之轻链可变区；(g)包含如SEQ ID NO:61中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:65中所示之胺基酸序列之轻链可变区；(h)包含如SEQ ID NO:71中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:75中所示之胺基酸序列之轻链可变区；(i)包含如SEQ ID NO:81中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:85中所示之胺基酸序列之轻链可变区；或(j)包含如SEQ ID NO:91中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:95中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在上文所提及态样之一些实施例中，经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分包含Fc区。在某些实施例中，Fc区系人类IgG1 Fc区或人类IgG4 Fc区。
在一些实施例中，抗体系单株抗体。
在一些实施例中，抗体系包含恒定区之完整抗体。
在一些实施例中，抗体系IgG。在特定实施例中，IgG系IgG1或IgG4。
在上文所提及态样之一些实施例中，抗体包含恒定区，其中恒定区包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个或至少五个选自由以下组成之群之胺基酸取代：L234A、L235A、D265C、H310A及H435A(根据EU索引编号)。在特定实施例中，恒定区包含胺基酸取代L234A、L235A及D265C(根据EU索引编号)。
在一些实施例中，本揭示案之经分离之抗CD45抗体包含恒定区，其中恒定区包含(a)如SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105或SEQ ID NO:106中所示之重链胺基酸序列；及(b)如SEQ ID NO:101中所示之轻链胺基酸序列。
在另一态样中，本发明提供经分离之抗CD45抗体，其包含：(a)如SEQ ID NO:9中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:10中所示之轻链胺基酸序列；(b)如SEQ ID NO:19中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:20中所示之轻链胺基酸序列；(c)如SEQ ID NO:29中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:30中所示之轻链胺基酸序列；(d)如SEQ ID NO:39中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:40中所示之轻链胺基酸序列；(e)如SEQ IDNO:49中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:50中所示之轻链胺基酸序列；(f)如SEQID NO:59中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:60中所示之轻链胺基酸序列；(g)如SEQ ID NO:69中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:70中所示之轻链胺基酸序列；(h)如SEQ ID NO:79中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:80中所示之轻链胺基酸序列；(i)如SEQ ID NO:89中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:90中所示之轻链胺基酸序列；或(j)如SEQ ID NO:99中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:100中所示之轻链胺基酸序列。
在另一态样中，本发明提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其在位于CD45片段1(SEQ ID NO:114)、CD45片段2(SEQ ID NO:115)、CD45片段3(SEQ ID NO:116)、CD45片段4(SEQ ID NO:117)及/或CD45片段5(SEQ ID NO:118)内之抗原决定基处特异性结合至人类CD45。
在上述态样之一些实施例中，经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分特异性结合至(a)人类CD45之位于CD45片段2内之抗原决定基，及人类CD45之位于片段4内之抗原决定基；(b)人类CD45之位于CD45片段1内之抗原决定基，及人类CD45之位于CD45片段3内之抗原决定基；或(c)人类CD45之位于CD45片段5内之抗原决定基。
在一些实施例中，经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分特异性结合至(a)一或多个选自由人类CD45中之405T、407K、419Y、425K、481R、505R及509H(参照SEQ ID NO:113编号)组成之群之残基；或(b)一或多个选自由人类CD45中之486R、493Y及502T(参照SEQ IDNO:113编号)组成之群之残基。
在一些实施例中，本揭示案之经分离之抗CD45抗体或抗原结合部分特异性结合人类CD45，且与食蟹猴CD45交叉反应。
在一些实施例中，本揭示案之经分离之抗CD45抗体或抗原结合部分结合至人类CD45且解离速率(K解离)为1×10-2至1×10-3、1×10-3至1×10-4、1×10-4至1×10-5、1×10-5至1×10-6、1×10-6至1×10-7或1×10-7至1×10-8，如藉由生物层干涉(BLI)所量测。
在一些实施例中，本揭示案之经分离之抗CD45抗体或抗原结合部分结合至人类CD45且KD为约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约10nM或更小或约0.1nM或更小，如藉由生物层干涉(BLI)所测定。
在另一态样中，本文提供医药组合物，其包含本发明之抗体或其抗原结合部分及医药学上可接受之载剂。
在另一态样中，本文提供经分离核酸，其包含编码本发明之抗体或其抗原结合部分之核酸序列。
在另一态样中，本文提供载体，其包含本发明之经分离核酸。
在另一态样中，本文提供宿主细胞，其包含本发明之经分离核酸或本发明之载体。在一些实施例中，宿主细胞系中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
在另一态样中，本文提供医药组合物，其包含任一上文所提及态样之抗体或其抗原结合部分，其用于耗尽人类患者中之CD45+细胞群体。
在另一态样中，本文提供藉由向人类患者投与任一上文所提及态样之抗体或其抗原结合部分来耗尽人类患者中之CD45+细胞群体之方法。在一些实施例中，CD45+细胞系CD3+、CD19+、CD33+、CD34+或CD45+/B2M+。在其他实施例中，CD45+细胞系造血干细胞(HSC)。在其他实施例中，CD45+细胞系HSC、T细胞、B细胞及/或骨髓细胞。
在上述态样之一些实施例中，CD45+细胞系自患者之骨髓及/或自患者之外周血耗尽。
在上述态样之一些实施例中，患者需要造血干细胞移植物。在上述态样之一些实施例中，该方法进一步包括向患者投与包含造血干细胞之移植物。在某些实施例中，移植物为同种异体的。在替代实施例中，移植物为自体的。
在另一态样中，本发明提供抗体药物结合物(ADC)，其包含经由连接体结合至细胞毒素之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其中抗CD45抗体或其抗原结合部分系任一上文所提及态样之抗体或其抗原结合部分。
在上述态样之一些实施例中，抗体藉助抗体恒定结构域中之半胱胺酸残基结合至细胞毒素。在某些实施例中，半胱胺酸残基系藉助抗体恒定区中之胺基酸取代来引入。在特定实施例中，胺基酸取代系D265C及/或V205C(EU编号)。
在上述态样之一些实施例中，ADC之药物对抗体比率(DAR)为1、2、3、4、5、6、7或8。
在上述态样之一些实施例中，细胞毒素系RNA聚合酶抑制剂、DNA 嵌入剂、DNA烷基化剂、DNA交联剂、破坏蛋白质合成之剂、破坏微管动力学之剂或破坏有丝分裂纺锤体之剂。
在上述态样之一些实施例中，细胞毒素系选自由以下组成之群：毒伞肽(amatoxin)、蒽环、奥里斯他汀(auristatin)、卡奇霉素(calicheamicin)、去三角梅蛋白(deBouganin)、白喉毒素(diphtheria toxin)、倍癌霉素(duocarmycin)、吲哚啉并苯并二氮呯(IGN)、吲哚啉并苯并二氮呯二聚体、伊立替康(irinotecan)、美登素(maytansine)、类美登素(maytansinoid)、假单胞菌外毒素A、吡咯并苯并二氮呯(PBD)、吡咯并苯并二氮呯二聚体、肥皂草毒素(saporin)及SN-38。在某些实施例中，细胞毒素系RNA聚合酶抑制剂。在某些实施例中，RNA聚合酶抑制剂系毒伞肽。
在一些实施例中，ADC系由式Ab-Z-L-Am表示，其中Ab系抗体或其抗原结合部分，L系连接体，Z系化学部分，且Am系毒伞肽。在某些实施例中，Am-L-Z系由式(I)表示：
Figure BDA0003690274480000111
其中R1系H、OH、ORA或ORC；
R2系H、OH、ORB或ORC；
RA及RB(若存在)与其所结合之氧原子一起组合形成视情况经取代之5员杂环烷基；
R3系H、RC或RD；
R4、R5、R6及R7各自独立地系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8系OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9系H、OH、ORC或ORD；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC系-L-Z；
RD系视情况经取代之C1-C6烷基、视情况经取代之C1-C6杂烷基、视情况经取代之C2-C6烯基、视情况经取代之C2-C6杂烯基、视情况经取代之C2-C6炔基、视情况经取代之C2-C6杂炔基、视情况经取代之环烷基、视情况经取代之杂环烷基、视情况经取代之芳基或视情况经取代之杂芳基；
L系视情况经取代之C1-C6伸烷基、视情况经取代之C1-C6伸杂烷基、视情况经取代之C2-C6伸烯基、视情况经取代之C2-C6伸杂烯基、视情况经取代之C2-C6伸炔基、视情况经取代之C2-C6伸杂炔基、视情况经取代之伸环烷基、视情况经取代之伸杂环烷基、视情况经取代之伸芳基、视情况经取代之伸杂芳基、肽、二肽、-(C＝O)-、二硫化物、腙或其组合；且
Z系自存在于L上之反应性取代基与存在于抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基之间的偶合反应形成之化学部分，
其中Am包含恰好一个RC取代基。
在一些实施例中，L-Z系
Figure BDA0003690274480000121
在一些实施例中，ADC系由以下中之一者表示：
Figure BDA0003690274480000122
其中X系-S-、-S(O)-或-SO2-。
在一些实施例中，ADC具有式
Figure BDA0003690274480000131
其中Ab表示抗CD45抗体之连接点。
在其他实施例中，ADC具有式
Figure BDA0003690274480000132
其中Ab表示抗CD45抗体之连接点。
在替代实施例中，ADC具有式
Figure BDA0003690274480000141
其中Ab表示抗CD45抗体之连接点。
在其他实施例中，ADC具有式
Figure BDA0003690274480000142
其中Ab表示抗CD45抗体之连接点。
在其他实施例中，ADC具有式
Figure BDA0003690274480000143
其中Ab表示抗CD45抗体之连接点。
在本文所揭示ADC之一些实施例中，细胞毒素系吡咯并苯并二氮呯(PBD)。在某些实施例中，细胞毒素系PBD二聚体。在特定实施例中，PBD二聚体系由下式表示
Figure BDA0003690274480000151
其中波形线指示与ADC之连接体之连接点。
在本文所揭示ADC之一些实施例中，连接体包含以下中之一或多者：肽、寡糖、-(CH2)p-、-(CH2CH2O)q-、-(C＝O)(CH2)r-、-(C＝O)(CH2CH2O)t-、-(NHCH2CH2)u-、-PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB，其中p、q、r、t及u中之每一者系1-12之整数，其在每次出现时均经独立选择。
在本文所揭示ADC之一些实施例中，连接体具有以下结构：
Figure BDA0003690274480000152
其中R1系CH3(Ala)或(CH2)3NH(CO)NH2(Cit)。
在本文所揭示ADC之一些实施例中，连接体在结合至抗CD45抗体及包括反应性取代基Z’(一起呈L-Z’形式)之前具有以下结构：
Figure BDA0003690274480000153
在某些实施例中，R1系CH3。
在本文所揭示ADC之一些实施例中，细胞毒素-连接体结合物在结合至抗CD45抗体及包括反应性取代基Z’(一起呈Cy-L-Z’形式)之前为具有以下结构之泰斯润(tesirine)：
Figure BDA0003690274480000161
在一些实施例中，本文所揭示之ADC具有结构
Figure BDA0003690274480000162
其中Ab系抗CD45抗体或其抗原结合部分，且S表示存在于抗CD45抗体或其抗原结合部分中或引入抗CD45抗体或其抗原结合部分中之硫原子。
在本文所揭示ADC之一些实施例中，细胞毒素系吲哚啉并苯并二氮呯(IGN)。在某些实施例中，细胞毒素系IGN二聚体或IGN假二聚体。
在一些实施例中，细胞毒素系由下式表示之IGN假二聚体：
Figure BDA0003690274480000163
其中波形线指示与ADC连接体之共价连接点。
在一些实施例中，连接体包含二肽、二硫化物、C1-C12烷基、C＝O或其组合。
在一些实施例中，连接体包含
Figure BDA0003690274480000171
在一些实施例中，细胞毒素-连接体结合物在结合至抗CD45抗体或其抗原结合部分及包括反应性取代基Z’(一起呈Cy-L-Z’形式)之前具有以下结构：
Figure BDA0003690274480000172
在另一态样中，本发明提供医药组合物，其包含上文所述之ADC及医药学上可接受之载剂。
在另一态样中，本文提供藉由向人类患者投与有效量之上文所述之抗CD45ADC来耗尽患者中之CD45+细胞群体之方法。
在上述态样之一些实施例中，CD45+细胞系CD3+、CD19+、CD33+、CD34+或CD45+/B2M+。在某些实施例中，CD45+细胞系造血干细胞(HSC)。在其他实施例中，CD45+细胞系HSC、T细胞、B细胞及/或骨髓细胞。
在上述态样之一些实施例中，CD45+细胞系自患者之骨髓及/或自患者之外周血耗尽。
在上述态样之一些实施例中，患者需要造血干细胞移植物。
在上述态样之一些实施例中，该方法进一步包括向患者投与包含造血干细胞之移植物。
在另一态样中，本发明提供藉由在需要造血干细胞(HSC)移植之人类患者接受包含造血干细胞之移植物之前向患者投与上文所述之ADC来耗尽患者中之CD45+细胞群体之方法。
在另一态样中，本发明提供包括以下之方法：(a)向人类患者投与足以耗尽患者中之CD45+细胞群体之量之上文所述之ADC；及(b)随后向患者投与包含造血干细胞之移植物。
在一些实施例中，移植物为同种异体的。在其他实施例中，移植物为自体的。
在一些实施例中，包含造血干细胞之移植物系在ADC之浓度实质上已自患者血液清除后投与患者。
在一些实施例中，造血干细胞或其子代能够在将造血干细胞移植至患者中后定位于造血组织及/或重建造血。
在一些实施例中，在移植至患者中后，造血干细胞引起选自由以下组成之群之细胞群体之恢复：巨核细胞、凝血细胞、血小板、红血球、肥大细胞、骨髓母细胞、嗜碱性球、嗜中性球、嗜酸性球、微胶质细胞、颗粒球、单核球、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀手细胞、T淋巴球及B淋巴球。
在一些实施例中，患者患有血液疾病、代谢失调、癌症或自体免疫病症或重度合并性免疫缺失疾病(SCID)。在某些实施例中，患者患有癌症。在特定实施例中，癌症系血液癌。在具体实施例中，血液癌系急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴性白血病或多发性骨髓瘤。
在某些实施例中，患者患有自体免疫病症。在特定实施例中，自体免疫病症系多发性硬化、1型糖尿病或硬皮症。在其他实施例中，自体免疫病症系选自由以下组成之群：多发性硬化、人类全身性狼疮、类风湿性关节炎、发炎性肠病、治疗牛皮癣、1型糖尿病、急性弥漫性脑脊髓炎、爱迪生氏病(Addison's disease)、普秃、关节黏连性脊椎炎、抗磷脂抗体症候群、再生不良性贫血、自体免疫溶血性贫血、自体免疫肝炎、自体免疫内耳疾病、自体免疫淋巴球增生性症候群、自体免疫卵巢炎、巴洛病(Balo disease)、贝切特氏病(Behcet'sdisease)、大疱性类天疱疮、心肌病、恰加斯氏病(Chagas'disease)、慢性疲劳免疫功能障碍症候群、慢性发炎性去髓鞘型多发性神经病变、克隆氏病(Crohn's disease)、瘢痕性类天疱疮、乳糜泻-疱疹样皮肤炎、冷凝集素病、CREST症候群、迪戈斯病(Degos disease)、盘状狼疮、自主神经障碍、子宫内膜异位症、特发性混合型冷凝球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、古德巴斯德症候群(Goodpasture's syndrome)、格雷氏病(Grave's disease)、格林-巴利症候群(Guillain-Barre syndrome)、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、化脓性汗腺炎、特发性及/或急性血小板减少紫斑症、特发性肺纤维化、IgA神经病变、间质性膀胱炎、青少年关节炎、川崎病(Kawasaki's disease)、扁平苔藓、莱姆病(Lyme disease)、梅尼埃病(Meniere disease)、混合结缔组织疾病、重症肌无力、神经性肌强直、眼阵挛肌阵挛症候群、视神经炎、沃德氏甲状腺炎(Ord's thyroiditis)、寻常天疱疮、恶性贫血、多发性软骨炎、多发性肌炎及皮肌炎、原发性胆汁性肝硬化、结节性多动脉炎、多线体症候群、风湿性多肌痛、原发性无γ球蛋白血症、雷诺氏现象(Raynaud phenomenon)、莱特氏症候群(Reiter's syndrome)、风湿热、类肉瘤病、硬皮症、薛格连氏症候群(
Figure BDA0003690274480000191
syndrome)、僵体症候群、高安氏动脉炎(Takayasu's arteritis)、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、眼色素层炎、血管炎、白斑病、阴唇痛症及华格纳氏肉芽肿(Wegener's granulomatosis)。
另外，本发明亦包含以下实施例：
在一个实施例中，本发明提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链，该重链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:2中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:3中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:4中所示之胺基酸序列之CDR3；且包含轻链，该轻链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:6中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:7中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:8中所示之胺基酸序列之CDR3。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:1中所示之胺基酸序列之重链可变区。
在其他实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:5中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:1中所示之胺基酸序列之重链可变区；及含有如SEQ ID NO:5中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:9中所示之胺基酸序列之重链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:10中所示之胺基酸序列之轻链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:9中所示之胺基酸序列之重链；及含有如SEQ ID NO:10中所示之胺基酸序列之轻链。
在一个实施例中，本发明提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链，该重链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:12中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:13中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:14中所示之胺基酸序列之CDR3；且包含轻链，该轻链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:16中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:17中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:18中所示之胺基酸序列之CDR3。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:11中所示之胺基酸序列之重链可变区。
在其他实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:15中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:11中所示之胺基酸序列之重链可变区；及
含有如SEQ ID NO:15中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:19中所示之胺基酸序列之重链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:20中所示之胺基酸序列之轻链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:19中所示之胺基酸序列之重链；及含有如SEQ ID NO:20中所示之胺基酸序列之轻链。
在一个实施例中，本发明提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链，该重链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:22中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:23中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:24中所示之胺基酸序列之CDR3；且包含轻链，该轻链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:26中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:27中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:28中所示之胺基酸序列之CDR3。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:21中所示之胺基酸序列之重链可变区。
在其他实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:25中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:21中所示之胺基酸序列之重链可变区；及
含有如SEQ ID NO:25中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:29中所示之胺基酸序列之重链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:30中所示之胺基酸序列之轻链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:29中所示之胺基酸序列之重链；及含有如SEQ ID NO:30中所示之胺基酸序列之轻链。
在一个实施例中，本发明提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链，该重链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:33中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:34中所示之胺基酸序列之CDR3；且包含轻链，该轻链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:36中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:37中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:38中所示之胺基酸序列之CDR3。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:31中所示之胺基酸序列之重链可变区。
在其他实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:35中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:31中所示之胺基酸序列之重链可变区；及
含有如SEQ ID NO:35中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:39中所示之胺基酸序列之重链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:40中所示之胺基酸序列之轻链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:39中所示之胺基酸序列之重链；及含有如SEQ ID NO:40中所示之胺基酸序列之轻链。
在一个实施例中，本发明提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链，该重链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:42中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:43中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:44中所示之胺基酸序列之CDR3；且包含轻链，该轻链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:46中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:47中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:48中所示之胺基酸序列之CDR3。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:41中所示之胺基酸序列之重链可变区。
在其他实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:45中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:41中所示之胺基酸序列之重链可变区；及
含有如SEQ ID NO:45中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:49中所示之胺基酸序列之重链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:50中所示之胺基酸序列之轻链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:49中所示之胺基酸序列之重链；及含有如SEQ ID NO:50中所示之胺基酸序列之轻链。
在一个实施例中，本发明提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链，该重链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:52中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:53中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:54中所示之胺基酸序列之CDR3；且包含轻链，该轻链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:56中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:57中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:58中所示之胺基酸序列之CDR3。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:51中所示之胺基酸序列之重链可变区。
在其他实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:55中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:51中所示之胺基酸序列之重链可变区；及
含有如SEQ ID NO:55中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:59中所示之胺基酸序列之重链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:60中所示之胺基酸序列之轻链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:59中所示之胺基酸序列之重链；及含有如SEQ ID NO:60中所示之胺基酸序列之轻链。
在一个实施例中，本发明提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链，该重链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:62中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:63中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:64中所示之胺基酸序列之CDR3；且包含轻链，该轻链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:66中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:67中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:68中所示之胺基酸序列之CDR3。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:61中所示之胺基酸序列之重链可变区。
在其他实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:65中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:61中所示之胺基酸序列之重链可变区；及
含有如SEQ ID NO:65中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:69中所示之胺基酸序列之重链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:70中所示之胺基酸序列之轻链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:69中所示之胺基酸序列之重链；及含有如SEQ ID NO:70中所示之胺基酸序列之轻链。
在一个实施例中，本发明提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链，该重链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:72中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:73中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:74中所示之胺基酸序列之CDR3；且包含轻链，该轻链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:76中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:77中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:78中所示之胺基酸序列之CDR3。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:71中所示之胺基酸序列之重链可变区。
在其他实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:75中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:71中所示之胺基酸序列之重链可变区；及
含有如SEQ ID NO:75中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:79中所示之胺基酸序列之重链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:80中所示之胺基酸序列之轻链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:79中所示之胺基酸序列之重链；及含有如SEQ ID NO:80中所示之胺基酸序列之轻链。
在一个实施例中，本发明提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链，该重链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:82中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:83中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:84中所示之胺基酸序列之CDR3；且包含轻链，该轻链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:86中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:87中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:88中所示之胺基酸序列之CDR3。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:81中所示之胺基酸序列之重链可变区。
在其他实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:85中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:81中所示之胺基酸序列之重链可变区；及
含有如SEQ ID NO:85中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:89中所示之胺基酸序列之重链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:90中所示之胺基酸序列之轻链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:89中所示之胺基酸序列之重链；及含有如SEQ ID NO:90中所示之胺基酸序列之轻链。
在一个实施例中，本发明提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链，该重链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:92中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:93中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:94中所示之胺基酸序列之CDR3；且包含轻链，该轻链包含可变区，该可变区包含具有如SEQ ID NO:96中所示之胺基酸序列之CDR1、具有如SEQ ID NO:97中所示之胺基酸序列之CDR2、具有如SEQ ID NO:98中所示之胺基酸序列之CDR3。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:91中所示之胺基酸序列之重链可变区。
在其他实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:95中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:91中所示之胺基酸序列之重链可变区；及
含有如SEQ ID NO:95中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:99中所示之胺基酸序列之重链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:100中所示之胺基酸序列之轻链。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:99中所示之胺基酸序列之重链；及含有如SEQ ID NO:100中所示之胺基酸序列之轻链。
在一个实施例中，本文所述之抗CD45抗体系完整的。
在某些实施例中，抗CD45抗体片段系选自由Fab、F(ab’)2及scFv组成之群。
在其他实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分系人类抗体或其结合片段。
在其他实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含Fc区，该Fc区包含至少一个胺基酸取代，为H435或I235/H310/H435(EU编号)。在一个实施例中，Fc区包含H435胺基酸取代，为H435A(EU编号)。在其他实施例中，Fc区包含示为I235A/H310A/H435A(EU编号)之I235/H310/H435胺基酸取代。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分系IgG，例如IgG1或IgG4。
本文亦阐述包含抗CD45抗体(或抗原结合片段)之抗体药物结合物(ADC)，其中抗体(或CD45结合片段)经由连接体结合至细胞毒素。
在一个实施例中，抗CD45 ADC包含结合至细胞毒素(RNA聚合酶抑制剂)之抗CD45抗体。在一个实施例中，RNA聚合酶抑制剂系毒伞肽。
在一个实施例中，抗CD45 ADC包含细胞毒素，其为由式(IA)表示之毒伞肽
Figure BDA0003690274480000291
其中R1系H、OH、ORA或ORC；
R2系H、OH、ORB或ORC；
RA及RB与其所结合之氧原子一起组合形成视情况经取代之5员杂环烷基；
R3系H、RC或RD；
R4、R5、R6及R7各自独立地系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8系OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9系H、OH、ORC或ORD；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC系-L-Z；
RD系视情况经取代之C1-C6烷基、视情况经取代之C1-C6杂烷基、视情况经取代之C2-C6烯基、视情况经取代之C2-C6杂烯基、视情况经取代之C2-C6炔基、视情况经取代之C2-C6杂炔基、视情况经取代之环烷基、视情况经取代之杂环烷基、视情况经取代之芳基或视情况经取代之杂芳基；
L系视情况经取代之C1-C6伸烷基、视情况经取代之C1-C6伸杂烷基、视情况经取代之C2-C6伸烯基、视情况经取代之C2-C6伸杂烯基、视情况经取代之C2-C6伸炔基、视情况经取代之C2-C6伸杂炔基、视情况经取代之伸环烷基、视情况经取代之伸杂环烷基、视情况经取代之伸芳基或视情况经取代之伸杂芳基；且Z系自存在于L上之反应性取代基与存在于抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基之间的偶合反应形成之化学部分，
其中Am包含恰好一个RC取代基。
在一个实施例中，抗CD45 ADC具有式
Figure BDA0003690274480000311
其中Ab表示抗CD45抗体之连接点。
在一个实施例中，抗CD45 ADC具有式
Figure BDA0003690274480000321
其中Ab表示抗CD45抗体之连接点。
在一个实施例中，抗CD45 ADC包含细胞毒素，其为瓢菌素(amanitin)(例如α-瓢菌素、β-瓢菌素、γ-瓢菌素、ε-瓢菌素)、鹅膏素(amanin)、鹅膏素酰胺、鹅膏无毒环肽(amanullin)、一羟鹅膏毒肽羧酸(amanullinic acid)及原鹅膏无毒环肽。
在一个实施例中，抗CD45 ADC包含选自由以下组成之群之细胞毒素：假单胞菌外毒素A、去三角梅蛋白、白喉毒素、肥皂草毒素、美登素、类美登素、奥里斯他汀(例如MMAE或MMAF)、蒽环、卡奇霉素、伊立替康、SN-38、倍癌霉素、吡咯并苯并二氮呯、吡咯并苯并二氮呯二聚体、吲哚啉并苯并二氮呯及吲哚啉并苯并二氮呯二聚体。
在一个实施例中，抗CD45 ADC包含含有苯并二氮呯部分之细胞毒素。在一些实施例中，抗CD45 ADC包含吡咯并苯并二氮呯(「PBD」)。在一些实施例中，抗CD45 ADC包含吲哚啉并苯并二氮呯(「IGN」)。
在一个实施例中，抗CD45 ADC包含抗CD45抗体，其藉助抗体Fc结构域中之半胱胺酸残基结合至毒素。在一个实施例中，半胱胺酸残基系藉助抗体Fc结构域中之胺基酸取代来引入。在一个实施例中，胺基酸取代系D265C及/或V205C(EU编号)。
在某些实施例中，抗CD45 ADC之药物对抗体比率(DAR)为1、2、3、4、5、6、7或8。
本发明亦包括医药组合物，其包含本文所述之抗CD45抗体或ADC及医药学上可接受之载剂。
本文所述之抗CD45抗体、片段及ADC可用于人类患者之治疗方法中，包括(但不限于)同种异体或自体移植之前之调理治疗。
在一个实施例中，本文揭示耗尽人类患者中之造血干细胞(HSC)群体之方法，该方法包括向患者投与有效量之本文所述之抗CD45抗体、片段或ADC。在某些实施例中，该方法进一步包括向患者投与包含造血干细胞之移植物。
在其他实施例中，本文揭示包括向人类患者投与包含造血干细胞之移植物(同种异体或自体)之方法，其中患者先前已投与足以耗尽患者中之造血干细胞群体之量之本文所述之抗CD45抗体、片段或ADC。在某些实施例中，造血干细胞系CD45+细胞。
在其他实施例中，本文所述之抗CD45抗体、片段或ADC用于治疗患有血液疾病、代谢失调、癌症或自体免疫疾病或重度合并性免疫缺失疾病(SCID)之人类患者。
在一个实施例中，将本文所述之抗CD45抗体、片段或ADC投与人类患者以治疗人类患者之白血病。
在其他实施例中，本文揭示包括向人类患者投与包含造血干细胞之移植物之方法，其中患者先前已投与足以耗尽患者中之免疫细胞群体之量之本文所述之抗CD45抗体、片段或ADC。在一个实施例中，免疫细胞系CD137+、CD2+或CD5+细胞。在其他实施例中，免疫细胞系T细胞。
附图说明
图1以图表方式描绘活体外结合分析之结果，其中针对与人类CD45或食蟹猴CD45之结合评价亲和力成熟抗CD45抗体及其相应亲代抗体(亲代1-4)之结合。亲代1对应于本文所述之Ab1。结合系藉由与经纯化之人类CD45或食蟹猴CD45胞外结构域一起培育之所指示经纯化IgG(感觉相关)之生物层干涉(BLI)来量测。图2以图表方式描绘用于评价所指示抗CD45抗体(Ab5及Ab7)与REH细胞、人类PBMC细胞及食蟹猴(「cyno」)PBMC细胞之结合之活体外细胞结合分析的结果。在此研究中使用Ab5及Ab7之Fc变异体Ab5_D265C_LALA_H435A及A7_D265C_LALA_H435A。具有Fc经修饰区(D265C LALA H435A)之非靶向同型IgG评价为对照。
图3描绘使用抗CD45抗体Ab5之CD45抗原决定基定位研究之结果。描绘CD45上之Ab5相互作用位点之示意图，其中注明围绕Ab5-抗原决定基之胺基酸序列(SEQ ID NO:115及SEQ ID NO:117)。接触残基突出显示为405T、407K、419Y、425K、481R、505R及509H，其中残基编号参照由SEQ ID NO:113表示之人类CD45片段。
图4以图表方式描绘评价自Ab5构筑之抗CD45抗体-药物结合物(ADC)在人类CD34+骨髓细胞中之内化之活体外内化分析的结果。Ab5之Fc变异体Ab5D265C.LALA.H435A结合至毒伞肽(毒伞肽1(AM1))以形成Ab5-AM1D265C.LALA.H435A。抗CD45 ADC结合至水溶性、明亮的光敏性且pH反应性之pHAb染料。内化后，结合抗体可移动至酸性胞内体/溶酶体，其中pHAb染料在563nM处发射且可藉由流式细胞术侦测。将人类骨髓CD34+细胞在冰上培育2小时，与饱和浓度之ADC一起培育0小时、2小时、24小时、48小时或72小时。左图以图表方式描绘pHAb随时间之水平。使用荧光团标记之抗IgG分子藉由流式细胞术来评价所结合之表面hIgG1，根据其计算随时间之表面IgG之百分比，如右图中所描绘。
图5A及5B以图表方式描绘活体外细胞株杀伤分析之结果，其显示自Ab4及Ab5构筑之抗CD45 ADC可有效地杀伤活体外CD45+细胞株(Jurkat(急性T细胞白血病细胞株，ATCC编号TIB-152)、SKNO-1(急性骨髓性白血病细胞株JCRB1170)及REH-1(B细胞非霍奇金氏淋巴瘤(B cell non-Hodgkin's lymphoma)细胞株，ATCC编号CRL-3004))。Ab4及Ab5之Fc变异体Ab4 D265C.LALA.H435A及Ab5D265C.LALA.H435A结合至毒伞肽(毒伞肽1(AM1)或毒伞肽2(AM2))以形成Ab4-AM2 D265C.LALA.H435A(「Ab4-AM2」)及Ab5-AM1 D265C.LALA.H435A(「Ab5-AM1」)。在图5A中，在Ab5-AM1或对照非靶向同型匹配之ADC(「同型-AM1」)存在下将SKNO1、Jurkat、REH(CD45+)或REH(CD45-/-)细胞株培养7天，且根据藉由Celltiter Glo之发光(y轴)随抗体浓度(x轴)之变化量测细胞活力。在图5B中，在Ab4-AM2或对照非靶向同型匹配之ADC(「同型-AM2」)存在下将SKNO1、Jurkat或REH(CD45+)细胞株培养7天且基于藉由Celltiter Glo之发光(y轴)随抗体浓度(x轴)之变化量测细胞活力。
图6A-6C以图表方式描绘活体外原代细胞杀伤分析之结果，其显示自Ab2、Ab4或Ab5构筑之抗CD45 ADC可有效地杀伤活体外原代人类或食蟹猴外周血单核细胞(PBMC)或人类造血干细胞(HSC)。Ab2、Ab4及Ab5之Fc变异体Ab2D265C.LALA.H435A、Ab4D265C.LALA.H435A、Ab5 D265C.LALA.H435A结合至毒伞肽(毒伞肽1(AM1)或毒伞肽2(AM2))以形成Ab2-AM2D265C.LALA.H435A(「Ab2-AM2」)、Ab4-AM2 D265C.LALA.H435A(「Ab4-AM2」)及Ab5-AM1 D265C.LALA.H435A(「Ab5-AM1」)。在图6A中，将人类PBMC培养7天在CD45-AM结合物(Ab5-AM1)或对照非靶向同型匹配之ADC(「同型-AM1」)且藉由Celltiter Glo量测随抗体浓度(x轴)变化之细胞活力(y轴)。在图76B及图6C中，将原代人类CD34+骨髓细胞与抗CD45-ADC(图6B中之Ab5-AM1；图6C中之Ab2-AM2或Ab4-AM2)或同型-AM一起培养5天，且藉由流式细胞术测定随抗体浓度(x轴)变化之活CD34+CD90+HSC计数(y轴)。
图7以图表方式描绘活体外原代细胞杀伤分析之结果，其显示自Ab2构筑之抗CD45ADC可有效地杀伤活体外未经刺激(非驱动)及经刺激(驱动)之外周血单核细胞(PBMC)。Ab2之Fc变异体Ab2 D265C.LALA.H435A结合至毒伞肽2(AM2)以形成Ab2-AM2D265C.LALA.H435A(「Ab2-AM2」)。在CD45-AM结合物(Ab2-AM2)或对照非靶向同型匹配之ADC(「同型-AM2」)存在下将经刺激及未经刺激之PBMC培养4天且藉由Celltiter Glo量测随抗体浓度(x轴)变化之细胞活力(y轴)。
图8以图表方式描绘活体外杀伤分析之结果，其显示自Ab6构筑之抗CD45 ADC可有效地杀伤活体外巨噬细胞。Ab6之Fc变异体Ab6 D265C.LALA.H435A结合至毒伞肽1(AM1)以形成Ab6-AM1 D265C.LALA.H435A(「Ab6-AM1」)。在CD45-AM结合物(Ab6-AM1)或对照非靶向同型匹配之ADC(「同型-AM1」)存在下将巨噬细胞培养6天且以藉由Celltiter Glo之发光(RLU；y轴)随抗体浓度(x轴)之变化量测细胞活力。
图9以图表方式描绘评价自Ab5构筑之抗CD45 ADC在人类血清(顶图)或食蟹猴(「cyno」)血清(底图)中之稳定性之血清稳定性分析的结果。Ab5之Fc变异体Ab5D265C.LALA.H435A结合至毒伞肽1(AM1)以形成Ab5-AM1D265C.LALA.H435A(「Ab5-AM1」)。为确定此ADC在血清中是否稳定，将ADC在人类或食蟹猴(cyno)血清中在37℃下预培育0或72小时，然后评价ADC对REH细胞之细胞杀伤。藉由Cell-titer Glo评价随血清处理之ADC浓度(x轴)变化之REH细胞之细胞活力％(y轴)。
图10A-10E以图表方式描绘活体内细胞耗尽分析之结果，其显示自Ab2、Ab3、Ab5及Ab7构筑之短半衰期抗CD45 ADC选择性耗尽人类化NSG小鼠中之人类HSC及免疫细胞。Ab2D265C.LALA.H435A、Ab3 D265C.LALA.H435A、Ab5D265C.LALA.H435A及Ab7D265C.LALA.H435A(Ab2、Ab3、Ab5及Ab7之Fc变异体)结合至毒伞肽1(AM1)或毒伞肽2(AM2)以形成Ab2D265C.LALA.H435A-AM2(「Ab2-AM2」)、Ab3 D265C.LALA.H435A-AM2(「Ab3-AM2」)、Ab5 D265C.LALA.H435A-AM1(「Ab5-AM1」)及Ab7D265C.LALA.H435A-AM1(「Ab7-AM1」)。PBS治疗之小鼠评价为对照。图10A显示在投与抗CD45-ADC(Ab2-AM2、Ab3-AM2、AbA-AM2)后14天小鼠中人类CD3+T细胞、CD19+B细胞及CD33+骨髓细胞相对于基线之百分比。图10B显示在投与抗CD45-ADC(Ab2-AM2或Ab3-AM2)后0天、7天及14天外周血中人类CD45+细胞之百分比。图10C显示在投与抗CD45-ADC(Ab2-AM2或Ab3-AM2)后14天人类化NSG小鼠骨髓中人类CD45细胞(左图)及人类HSC(右图)之绝对数量。图10D以图表方式描绘在投与抗CD45 ADC(Ab2-AM2及Ab3-AM2)后14天人类化NSG小鼠骨髓中HSC(CD34+细胞、CD34+CD38-及CD34+CD117+细胞)之百分比及绝对数量。图10E以图表方式描绘在投与抗CD45-ADC(Ab5-AM1或Ab7-AM1)后14天外周血中人类CD45细胞之百分比(相对于基线)、骨髓中人类CD45细胞之绝对数量及人类化NSG小鼠骨髓中HSC(CD34+CD38-细胞)之绝对数量。
图11A及11B以图表方式描绘活体内细胞耗尽分析之结果，其显示自Ab4、Ab5及Ab7构筑之短半衰期抗CD45-毒伞肽ADC可有效地耗尽活体内非人类灵长类动物HSC及免疫细胞。Ab4 D265C.LALA.H435A、Ab5 D265C.LALA.H435A及Ab7 D265C.LALA.H435A(Ab4、Ab5及Ab7之Fc变异体)结合至毒伞肽1(AM1)以形成Ab4 D265C.LALA.H435A-AM2(「Ab4-AM1」)、Ab5D265C.LALA.H435A-AM1(「Ab5-AM1」)及Ab7D265C.LALA.H435A-AM1(「Ab7-AM1」)。图11A以图表方式描绘在投与抗CD45ADC(0.5mg/kg或2mg/kg之Ab5-AM1或Ab7-AM1)后72小时食蟹猴外周血中淋巴细胞之绝对数量。图11B以图表方式描绘在投与抗CD45 ADC(1mg/kg之Ab4-AM1或0.5或2mg/kg之Ab5-AM1)后第7天食蟹猴骨髓中白血球、HSC及淋巴球之水平。
图12以图表方式描绘食蟹猕猴中自Ab4构筑之短半衰期抗CD45 ADC之药物动力学分析之结果。Ab4之Fc变异体Ab4 D265C.LALA.H435A结合至毒伞肽1(AM1)或毒伞肽2(AM2)以形成Ab4 D265C.LALA.H435A-AM1(「Ab4-AM1」)及Ab4 D265C.LALA.H435A-AM2(「Ab4-AM2」)。监测随时间(x轴)变化之每一ADC之平均血浆药物浓度(y轴)。
图13以图表方式描绘评价源自实例15之亲代纯系A、B及C之人类化纯系与膜及胞质蛋白之混合物的结合之多特异性试剂(PSR)分析之结果。
图14以图表方式描绘用于评价抗CD45抗体AbA、AbB及AbC(实例15中所鉴别)与人类PBMC细胞及食蟹猴(「cyno」)PBMC细胞之结合之活体外细胞结合分析之结果。
图15描绘使用实例15中所鉴别之抗CD45抗体AbA之CD45抗原决定基定位研究之结果。描绘CD45上之AbA相互作用位点之示意图，其中注明包围AbA抗原决定基之胺基酸序列(SEQ ID NO:117)。接触残基突出显示为486R、493Y及502T，其中残基编号参照由SEQ IDNO:113表示之人类CD45片段。
图16以图表方式描绘评价自AbA构筑之抗CD45抗体-药物结合物(ADC)在人类CD34+骨髓细胞中之内化之活体外内化分析的结果。AbA之Fc变异体AbA_D265C_LALA_H435A结合至毒伞肽(毒伞肽1)以形成抗CD45 ADC AbA_D265C_LALA_H435A-AM1。抗CD45 ADC结合至水溶性、明亮的、光敏性且pH反应性之pHAb染料。内化后，结合抗体可移动至酸性胞内体/溶酶体，其中pHAb染料在563nM处发射且可藉由流式细胞术侦测。将人类骨髓CD34+细胞在冰上培育2小时，与饱和浓度之ADC一起培育0小时、2小时、24小时、48小时或72小时。左图以图表方式描绘pHAb随时间之水平。使用荧光团标记之抗IgG分子藉由流式细胞术来评价所结合之表面hIgG1，根据其计算随时间之表面IgG之百分比，如右图中所描绘。
图17A及17B以图表方式描绘活体外原代细胞杀伤分析之结果，其显示自AbA构筑之抗CD45 ADC可有效地杀伤活体外原代人类或食蟹猴外周血单核细胞(PBMC)。AbA之Fc变异体AbA_D265C_LALA_H435A结合至两种毒伞肽中之一者，即毒伞肽1(AM1)或毒伞肽2(AM2)，以形成AbA_D265C_LALA_H435A-AM1或AbA_D265C_LALA_H435A-AM2。在所指示CD45-AM结合物(AbA_D265C_LALA-H435A-AM1(图17A)或AbA_D265C_LALA-H435A-AM2(图17B))或对照非靶向同型匹配之ADC(「同型-AM1」或「同型-AM2」)存在下将人类PBMC培养7天且藉由Celltiter Glo量测随抗体浓度(x轴)变化之细胞活力(y轴)。
图18以图表方式描绘活体外原代细胞杀伤分析之结果，其显示自AbA构筑之抗CD45 ADC可有效地杀伤活体外人类造血干细胞(HSC)。AbA之Fc变异体AbA_D265C_LALA_H435A及AbA_D265C_LALA_IHH结合至毒伞肽1(AM1)、毒伞肽2(AM2)或PBD以形成AbA_D265C_LALA_H435A-AM1、AbA_D265C_LALA_H435A-AM2或AbA_D265C_LALA_IHH-PBD。在所指示ADC(AbA_D265C_LALA_H435A-AM1及AbA_D265C_LALA_IHH-PBD)或同型对照存在下将原代人类CD34+骨髓细胞培养5天。藉由流式细胞术测定随抗体浓度(x轴)变化之活CD34+CD90+HSC计数(y轴)。
图19以图表方式描绘活体外杀伤分析之结果，其显示自AbA构筑之抗CD45ADC可有效地杀伤活体外巨噬细胞。AbA之Fc变异体AbA_D265C_LALA_H435A结合至毒伞肽1(AM1)以形成CD45 ADC AbA_D265C_LALA_H435A-AM1。在ADC(AbA_D265C_LALA_H435A-AM1)或对照非靶向同型匹配之ADC(「同型-AM1」)存在下将巨噬细胞培养6天且以藉由Celltiter Glo之发光(RLU；y轴)随抗体浓度(x轴)之变化量测细胞活力。
图20以图表方式描绘用抗CD45抗体药物结合物(AbA-PBD)治疗之人类化NSG小鼠中活体内耗尽分析之结果，其中评价外周血中人类细胞之耗尽。向hNSG小鼠投与所指示单剂量之媒剂(PBS)、同型对照-PBD(「Iso-PBD」)或CD45-PBD(AbA-PBD)。在所指示时间点收集外周血且评估总人类造血细胞含量(hβ2M+)、骨髓细胞含量(CD33+)、B细胞含量(CD19+)及T细胞含量(CD3+)。结果呈现为正规化至基线之耗尽％。
图21以图表方式描绘用抗CD45-ADC(AbA-PBD)治疗之人类化NSG小鼠中活体内耗尽分析之结果，其中评价骨髓中人类细胞之耗尽。向hNSG小鼠投与所指示单剂量之媒剂(PBS)、同型-PBD或CD45-PBD(AbA-PBD)。在治疗后第14天收集BM样品且评估人类祖细胞/HSC含量。结果呈现为人类细胞之百分比及绝对数量/股骨。
图22以图表方式描绘用抗CD45-ADC(AbA-PBD)治疗之人类化NSG小鼠中活体内耗尽分析之结果，其中在治疗后14天评价人类CD45+细胞、双阳性(DP)胸腺细胞、成熟CD4+单阳性(SP)胸腺细胞或成熟CD8+单阳性(SP)胸腺细胞之耗尽。向hNSG小鼠投与所指示单剂量之媒剂(PBS)、同型-PBD或CD45-PBD(AbA-PBD)。
图23以图表方式描绘用抗CD45抗体药物结合物(AbA-IGN)治疗之人类化NSG小鼠中活体内耗尽分析之结果之结果，其中评价外周血中人类细胞之耗尽。向hNSG小鼠投与所指示单剂量之媒剂(PBS)、同型对照-IGN(「Iso-IGN」)或CD45-IGN(AbA-IGN)。在所指示时间点收集外周血且评估总人类造血细胞含量(hβ2M+)、骨髓细胞含量(CD33+)、B细胞含量(CD19+)及T细胞含量(CD3+)。结果呈现为正规化至基线之耗尽％。
图24以图表方式描绘用CD45-IGN治疗之人类化NSG小鼠中活体内耗尽分析之结果之结果，其中评价骨髓中人类细胞之耗尽。向hNSG小鼠投与所指示单剂量之媒剂(PBS)、同型-IGN或CD45-IGN。在治疗后第14天收集BM样品且评估人类祖细胞/HSC含量。结果呈现为人类细胞之百分比及绝对数量/股骨。
图25以图表方式描绘用AbA-IGN治疗之人类化NSG小鼠中活体内耗尽分析之结果，其中评价人类CD45+细胞、双阳性(DP)胸腺细胞、成熟CD4+单阳性(SP)胸腺细胞或成熟CD8+单阳性(SP)胸腺细胞之耗尽。向hNSG小鼠投与所指示单剂量之媒剂(PBS)、同型-IGN或AbA-IGN。
图26以图表方式描绘活体内细胞耗尽分析之结果，其显示自AbA构筑之抗CD45-毒伞肽ADC可有效地耗尽活体内非人类灵长类动物HSC及免疫细胞。AbA之Fc变异体(引入Fc区之修饰以缩短半衰期)AbA_D265C_LALA_H435A结合至毒伞肽1(AM1)或毒伞肽2(AM2)以形成AbA_D265C_LALA_H435A-AM1(「CD45 ADC-AM1」)或AbA_D265C_LALA_H435A-AM2(「CD45 ADC-AM2」)。在投与所指示ADC之单一1mg/kg注射后所指示时间(第6天、第14天、第20天及第28天)量测食蟹猴骨髓中白血球、HSC及免疫细胞(B细胞、T细胞及骨髓细胞)之水平。
图27以图表方式描绘食蟹猕猴中自AbA构筑之抗CD45 ADC之药物动力学分析之结果。AbA之Fc变异体(引入Fc区之修饰以缩短半衰期)AbA_D265C_LALA_H435A结合至毒伞肽1(AM1)或毒伞肽2(AM2)以形成AbA_D265C_LALA_H435A-AM1(「CD45 ADC-AM1」)或AbA_D265C_LALA_H435A-AM2(「CD45 ADC-AM2」)。监测随时间(x轴)变化之每一ADC之平均血浆药物浓度(y轴)。
图28以图表方式描绘活体内鼠类研究之结果，其显示单剂量之AbA-AM ADC对患者源性肿瘤具有肿瘤细胞减灭作用且在一组模拟未经治疗之疾病及难治性疾病之模型中将存活期延长超过标准护理。将AML[AML#1(源自未经治疗之患者)、AML#2(源自在同种异体HSCT后经高度预治疗之复发性难治性患者)]及T-ALL(源自在DHAP化学疗法后进展之患者)之患者源性异种移植物(PDX)模型以及永生化细胞株之细胞株源性ALL模型(REH-Luc)全身性接种至免疫缺失型小鼠(NSG-SGM3或NSG)中。在PDX(n＝3-5只/组)及CDX小鼠之外周肿瘤负荷达到外周血中之2-16％母细胞时或在REH-luc模型(n＝10只/组)植入后第5天开始治疗。比较单剂量之抗CD45-ADC(1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg或10mg/kg)与媒剂(PBS)或同型-AM(6mg/kg或10mg/kg)，且与Ara-c(30mg/kg QD×5,IV)、地塞米松(dexamethasone，5mg/kgQ3D×9,IP)或多柔比星(doxorubicin，3mg/kg QW×3,IV)之经临床验证之标准护理方案相当。显示研究期间之肿瘤负荷。
图29A-29C以图表方式描绘活体内鼠类研究之结果，其显示在REH-荧光素酶ALL异种移植物模型中，短半衰期CD45-ADC(AbA-AM)增加中值存活期。图29A以图表方式描绘在所指示治疗组中小鼠之随植入后天数变化之存活率％。图29B以图表方式描绘在所指示治疗组中在研究时程内REH-荧光素酶之辐射水平(平均值±SEM)。图29C系所有治疗组在植入后第22-23天捕获之代表性生物发光信号假彩色影像。
图30A及30B以图表方式描绘活体内鼠类研究之结果，其显示在T-ALL PDX模型中，短半衰期CD45-ADC(AbA-AM)减少外周白血病细胞，从而引起肿瘤生长延迟。图30A以图表方式描绘在所指示治疗组中小鼠之随植入后天数变化之存活率％。图30B以图表方式描绘在每一所指示治疗组中小鼠之随植入后天数变化之外周血中之肿瘤负荷％(hCD45+)。
图31A-31D以图表方式描绘活体内鼠类研究之结果，其显示在两种患者源性AML模型中，短半衰期CD45-DC(AbA-AM)可有效地耗尽人类白血病细胞。图31A及31B以图表方式描绘在所指示治疗组中PDX模型AML#1小鼠(图31A)或PDX模型AML#2小鼠(图31B)之随植入后天数变化之存活率％。图31A及31B中每一者之插图描绘每一AML PDX模型之流式细胞术分析以评价患病小鼠之脾细胞上之CD117及CD45细胞表面表现。图31C及31D以图表方式描绘在每一所指示治疗组中PDX模型AML#1小鼠(图31C)及PDX模型AML#2小鼠(图31D)之随植入后天数变化之外周血中之肿瘤负荷％(hCD45+)。
图32描绘抗CD45抗体Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6及Ab7之重链可变区与轻链可变区之多序列比对。每一可变区之CDR以粗体指示。
具体实施方式
本文揭示新颖抗CD45抗体、其抗原结合片段及其结合物(例如抗体药物结合物；ADC)，其系有用的原因在于例如其在人类CD45与非人类灵长类动物CD45之间交叉反应。另外，本文所述之抗CD45抗体及其片段可用作治疗剂，例如治疗白血病或用作移植调理剂。因此，本文包括可用于造血干细胞疗法中之抗造血细胞抗体(抗CD45抗体)。举例而言，本文之抗体或ADC可用于调理程序中，其中患者为接受包括造血干细胞之移植物作好准备。该等程序促进造血干细胞移植物之植入。根据本文所述之方法，可藉由向患者投与能够结合CD45(例如由造血细胞(例如造血干细胞或成熟免疫细胞(例如T细胞)表现之CD45)之抗CD45ADC、抗体或其抗原结合片段来调理患者以进行造血干细胞移植疗法。如本文所述，抗CD45抗体可共价结合至细胞毒素以形成抗体药物结合物(ADC)。向需要造血干细胞移植疗法之患者投与能够结合CD45之ADC可促进造血干细胞移植物之植入，例如藉由选择性耗尽内源造血干细胞，从而产生由外源造血干细胞移植物填充之空位。
以下部分提供具有独特性质(例如与人类及非人类灵长类动物CD45之交叉反应性)之新颖抗CD45抗体及其片段。以下部分亦提供可投与患者(例如患有癌症或自体免疫疾病之患者或需要造血干细胞移植疗法之患者)以促进造血干细胞移植物植入之抗CD45抗体或其结合物，以及向患者投与该等治疗剂(例如在造血干细胞移植之前)之方法的描述。
定义
如本文所用之术语「约」系指在所述值上下5％内之值。举例而言，术语「约100nM」指示95-105nM之范围。
如本文所用之术语「同种异体」在移植背景下用于定义自供体移植至接受者之移植物(例如细胞、组织或器官移植物)，其中接受者系与供体相同之物种之不同个体。
如本文所用之术语「自体」在移植背景下系指其中供体及接受者为同一个体(individual)、即同一个体(subject)之移植物。
如本文所用之术语「异种」在移植背景下系指其中供体及接受者为不同物种之移植物。
如本文所用之术语「免疫细胞」意欲包括(但不限于)具有造血起源且在免疫反应中起作用之细胞。免疫细胞包括(但不限于)T细胞及自然杀手(NK)细胞。自然杀手细胞为此项技术中所熟知。在一个实施例中，自然杀手细胞包括诸如NK-92细胞等细胞株。NK细胞株之其他实例包括NKG、YT、NK-YS、HANK-1、YTS细胞及NKL细胞。免疫细胞可为同种异体或自体的。
如本文所用之术语「抗体」系指特异性结合至特定抗原或与特定抗原具有免疫反应性之免疫球蛋白分子。抗体包括(但不限于)单株抗体、多株抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)及抗体片段，只要展现期望抗原结合活性即可。
通常，抗体包含含有抗原结合区之重链及轻链。每一重链包含重链可变区(本文中缩写为HCVR或VH)及重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域，CH1、CH2及CH3。每一轻链包含轻链可变区(本文中缩写为LCVR或VL)及轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域CL。VH区及VL区可进一步细分成超变区(称为互补决定区(CDR))及较为保守之区(称为框架区(FR))，二者间杂排列。每一VH及VL由三个CDR及四个FR构成，其自胺基末端至羧基末端以下列顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链及轻链可变区含有与抗原相互作用之结合结构域。抗体之恒定区可调介免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统之各种细胞(例如效应细胞)及经典补体系统之第一组分(Clq))之结合。
如本文所用之术语抗体之「抗原结合片段」或「抗原结合部分」系指抗体之保留特异性结合至靶抗原之能力之一或多个部分。抗体之抗原结合功能可藉由全长抗体之片段来实施。抗体片段可为例如Fab、F(ab’)2、scFv、双价抗体、三价抗体、亲和体、奈米抗体、适配体或结构域抗体。术语抗体之「抗原结合片段」涵盖之结合片段之实例包括(但不限于)：(i)Fab片段，其系由VL、VH、CL及CH1结构域组成之单价片段；(ii)F(ab')2片段，其系含有在铰链区藉由二硫桥连接之两个Fab片段之二价片段；(iii)由VH及CH1结构域组成之Fd片段；(iv)由抗体单臂之VL及VH结构域组成之Fv片段，(v)包括VH及VL结构域之dAb；(vi)由VH结构域组成之dAb片段(例如，参见Ward等人，Nature 341:544-546,1989)；(vii)由VH或VL结构域组成之dAb；(viii)经分离之互补决定区(CDR)；及(ix)可视情况藉由合成连接体连结之两个或更多个(例如两个、三个、四个、五个或六个)经分离CDR之组合。另外，尽管Fv片段之两个结构域VL及VH系由单独基因编码，但可使用重组方法藉由连接体将该两个结构域链接在一起，该连接体使其能够以其中VL及VH区配对形成单价分子之单一蛋白链制得(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird等人，Science 242:423-426,1988及Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883,1988)。该等抗体片段可使用熟习此项技术者已知之习用技术来获得，且可以与完整抗体相同之方式筛选片段之效用。抗原结合片段可藉由重组DNA技术、酶或化学裂解完整免疫球蛋白或在某些情形下藉由此项技术中已知之化学肽合成程序来产生。
如本文所用之「完整」或「全长」抗体系指具有藉由二硫键互连之两种重链(H)多肽及两种轻链(L)多肽之抗体。在某些实施例中，毒素可结合至具有本文所述之重链及/或轻链胺基酸序列之完整抗CD45抗体。
如本文所用之术语「单株抗体」系指藉由此项技术中可获得或已知之任何方法自单一纯系(包括任何真核、原核或噬菌体纯系)获得之抗体，且不限于经由杂交瘤技术产生之抗体。可用于本揭示案之单株抗体可使用此项技术中已知之众多种技术来制备，包括使用杂交瘤、重组及噬菌体展示技术或其组合。
如本文所用之术语「Fc区」、「Fc结构域」及「IgG Fc结构域」系指免疫球蛋白(例如IgG分子)之与藉由IgG分子之木瓜酶消化获得之可结晶片段相关联之部分。Fc区包含IgG分子之藉由二硫键连接之两条重链之C末端半部分。其不具抗原结合活性，但含有碳水化合物部分以及补体及Fc受体(包括FcRn受体)之结合位点(参见下文)。举例而言，Fc结构域含有整个第二恒定结构域CH2(IgG1之EU位置231-340处之残基)及第三恒定结构域CH3(人类IgG1之EU位置341-447处之残基)。如本文所述，Fc结构域包括「较低铰链区」(IgG1之EU位置233-239处之残基)。
Fc可指单独的此区，或抗体、抗体片段或Fc融合蛋白之背景下之此区。已在Fc结构域之多个位置(包括但不限于EU位置270、272、312、315、356及358)观察到多型性，且因此在呈现于本申请案中之序列与此项技术中已知之序列之间可存在轻微差别。因此，「野生型IgG Fc结构域」或「WT IgG Fc结构域」系指任何天然IgG Fc区(即任何对偶基因)。可在多个序列数据库中(例如在Uniprot数据库(www.uniprot.org)上)分别以登录号P01857(IGHG1_人类)、P01859(IGHG2_人类)、P01860(IGHG3_人类)及P01861(IGHG1_人类)发现人类IgG1、IgG2、IgG3及IgG4之重链序列。
如本文所用之术语「经修饰Fc区」或「变异体Fc区」系指包含在Fc结构域内之任一位置引入之一或多个胺基酸取代、缺失、插入或修饰之IgG Fc结构域。在某些态样中，与不包含一或多个胺基酸取代之野生型Fc结构域相比，变异体IgG Fc结构域包含可减小或消除对FcγR及/或C1q之结合亲和力之一或多个胺基酸取代。另外，Fc结合相互作用为多种效应功能及下游信号传导事件(包括但不限于抗体依赖性细胞介导之细胞毒性(ADCC)及补体依赖性细胞毒性(CDC))所必需。因此，在某些态样中，相对于原本具有相同胺基酸序列但不包含一或多个胺基酸取代、缺失、插入或修饰(例如在Fc区之相应位置含有天然胺基酸残基之未经修饰之Fc区)之相应抗体，包含变异体Fc结构域之抗体(例如抗体、融合蛋白或结合物)可展现改变的对至少一或多种Fc配位体(例如FcγR)之结合亲和力。
变异体Fc结构域系根据构成其之胺基酸修饰来定义。对于本文关于Fc区所论述之所有胺基酸取代，编号始终系根据如Kabat中之EU索引。因此，例如，D265C系相对于亲代Fc结构域，EU位置265之天冬胺酸(D)经半胱胺酸(C)取代之Fc变异体。应注意，提供取代之顺序系任意的。
如本文所用之术语「Fcγ受体」或「FcγR」系指结合IgG抗体Fc区且由FcγR基因编码之蛋白质家族之任一成员。在人类中，此家族包括(但不限于)FcγRI(CD64)，包括同种型FcγRIa、FcγRIb及FcγRIc；FcγRII(CD32)，包括同功型FcγRIIa(包括异型H131及R131)、FcγRIIb(包括FcγRIIb-1及FcγRIIb-2)及FcγRIIc；及FcγRIII(CD16)，包括同功型FcγRIIIa(包括异型V158及F158)及FcγRIIIb(包括异型FcγRIIIb-NA1及FcγRIIIb-NA2)以及任何未发现之人类FcγR或FcγR同功型或异型。FcγR可来自任一生物体，包括(但不限于)人类、小鼠、大鼠、兔及猴。小鼠FcγR包括(但不限于)FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)、FcγRIII(CD16)及FcγRIII-2(CD16-2)以及任何未发现之小鼠FcγR或FcγR同功型或异型。
如本文所用之术语「效应功能」系指源自Fc结构域与Fc受体之相互作用之生物化学事件。效应功能包括(但不限于)ADCC、ADCP及CDC。如本文所用之「效应细胞」意指表现一或多种Fc受体且调介一或多种效应功能之免疫系统之细胞。效应细胞包括(但不限于)单核球、巨噬细胞、嗜中性球、树突细胞、嗜酸性球、肥大细胞、血小板、B细胞、大颗粒淋巴球、兰格罕氏细胞(Langerhans'cell)、自然杀手(NK)细胞及γ-δT细胞，且可来自任何生物体，包括(但不限于)人类、小鼠、大鼠、兔及猴。
如本文所用之术语「沉默的」、「经沉默」或「沉默」系指具有本文所述之经修饰Fc区之抗体，其相对于包含未经修饰之Fc区之相同抗体与Fcγ受体(FcγR)之结合具有减少的与FcγR之结合(例如相对于包含未经修饰之Fc区之相同抗体与FcγR之结合，与FcγR之结合减少至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％，如藉由例如BLI所量测)。在一些实施例中，Fc沉默抗体不具可侦测到之FcγR结合。具有经修饰Fc区之抗体与FcγR之结合可使用此项技术中已知之多种技术来测定，该等技术系例如(但不限于)平衡方法(例如酶联免疫吸附分析(ELISA)；KinExA,Rathanaswami等人，AnalyticalBiochemistry，第373卷:52-60,2008；或放射性免疫分析(RIA))或表面电浆子共振分析或其他基于动力学机制之分析(例如BIACORE.RTM.分析或OctetTM分析(forteBIO))及其他方法，例如间接结合分析、竞争性结合分析荧光共振能量转移(FRET)、凝胶电泳及层析(例如凝胶过滤)。该等及其他方法可在一或多种所检查组分上利用标记及/或采用多种侦测方法，包括(但不限于)发色、荧光、发光或同位素标记。结合亲和力及动力学之详细描述可参见Paul,W.E.编辑，Fundamental Immunology，第4版，Lippincott-Raven,Philadelphia(1999)，其针对抗体-免疫原相互作用。竞争性结合分析之一个实例系放射性免疫分析，其包括在递增量之未标记抗原存在下一起培育经标记抗原与所关注抗体，及侦测结合至经标记抗原之抗体。所关注抗体对特定抗原之亲和力及结合解离速率可根据藉由斯卡乍得图(scatchard plot)分析之资料来测定。与第二抗体之竞争亦可使用放射性免疫分析来测定。在此情形下，在递增量之未标记之第二抗体存在下将抗原与结合至经标记化合物之所关注抗体一起培育。
如本文所用之术语「包含未经修饰之Fc区之相同抗体」系指缺少所列举胺基酸取代(例如D265C、H435A)、但原本具有与其比较之Fc经修饰抗体相同之胺基酸序列之抗体。
术语「抗体依赖性细胞介导之细胞毒性」或「ADCC」系指一种形式之细胞毒性，其中包含Fc结构域之多肽(例如抗体)结合至某些细胞毒性细胞(例如主要为NK细胞/嗜中性球及巨噬细胞)上存在之Fc受体(FcR)上，并使得该等细胞毒性效应细胞能够特异性结合至带有抗原之「靶细胞」且随后用细胞毒素杀伤靶细胞。(Hogarth等人，Nature review DrugDiscovery 2012,11:313)除抗体及其片段外，其涵盖包含Fc结构域之其他多肽(例如Fc融合蛋白及Fc结合蛋白)，具有特异性结合至带有抗原之靶细胞之能力将能够实现细胞介导之细胞毒性。
为简明起见，源自包含Fc结构域之多肽之活性之细胞介导之细胞毒性在本文中亦称为ADCC活性。可分析本揭示案之任何特定多肽调介ADCC对靶细胞之溶解之能力。为评价ADCC活性，将所关注多肽(例如抗体)与免疫效应细胞组合添加至靶细胞中，引起靶细胞之细胞溶解。细胞溶解通常系藉由标记(例如放射性受质、荧光染料或天然细胞内蛋白)自所溶解细胞之释放来侦测。可用于该等分析之效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)及自然杀手(NK)细胞。活体外ADCC分析之特定实例阐述于Bruggemann等人，J.Exp.Med.166:1351(1987)；Wilkinson等人，J.Immunol.Methods 258:183(2001)；Patel等人，J.Immunol.Methods 184:29(1995)中。另选地或另外，可例如在例如Clynes等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95:652(1998)中所揭示之动物模型中在活体内评价所关注抗体之ADCC活性。
如本文所用之术语「调理(condition)」及「调理(conditioning)」系指使患者为接受移植物(例如含有造血干细胞之移植物)作好准备之过程。该等程序促进造血干细胞移植物之植入(例如如根据自在调理程序及后续造血干细胞移植后之患者分离之血液样品内活造血干细胞之量持续增加推断出)。根据本文所述之方法，可藉由向患者投与能够结合由造血干细胞表现之CD45之ADC、抗体或其抗原结合片段来调理患者用于造血干细胞移植疗法。如本文所述，抗体可共价结合至细胞毒素以形成药物-抗体结合物。向需要造血干细胞移植疗法之患者投与能够结合前述抗原之抗体、其抗原结合片段或ADC可促进造血干细胞移植物之植入，例如藉由选择性耗尽内源造血干细胞，从而产生由外源造血干细胞移植物填充之空位。
如本文所用之术语「有效量」或「治疗有效量」系指在治疗、预防、改善或减轻患者疾病或病症之症状之背景下足以达成期望结果之治疗剂(例如抗CD45 ADC)之量。举例而言，在一些实施例中，抗CD45抗体或ADC之治疗有效量系足以减少或耗尽患者中之CD45+细胞群体之量。在其他实施例中，抗CD45抗体或ADC之治疗有效量系足以调理患者以接受造血干细胞移植物之量。在该等实施例中，治疗有效量可为例如足以选择性耗尽患者之内源造血干细胞之量，及/或足以促进造血干细胞移植物植入患者中之量。在其他实施例中，抗CD45抗体或ADC之治疗有效量系足以对人类患者之自体免疫疾病或癌症具有效应之量。
如本文所用之术语「半衰期」系指在个体(例如人类个体)中体内之血浆抗体药物浓度减小一半或50％所花费之时间。血清浓度之此50％减小反映药物循环之量。
如本文所用之词组「自血液实质上清除」系指向患者投与治疗剂(例如抗CD45抗体或其抗原结合片段)后，自患者分离之血液样品中治疗剂之浓度使得治疗剂藉由习用方法无法侦测到(例如，使得在高于用于侦测治疗剂之装置或分析之噪声临限值时无法侦测到治疗剂)时的时间点。可使用此项技术中已知之多种技术来侦测抗体或抗体片段，例如此项技术中已知或本文所述之基于ELISA之侦测分析。可用于侦测抗体或抗体片段之其他分析尤其包括此项技术中已知之免疫沈淀技术及免疫墨点法分析。
如本文所用之术语「特异性结合(specific binding)」或「特异性结合(specifically binding)」系指抗体识别及结合至特定蛋白质结构(抗原决定基)而非普通蛋白质之能力。若抗体特异性针对抗原决定基「A」，则在含有经标记「A」及抗体之反应中，含有抗原决定基A(或游离的未标记之A)之分子将减少结合至抗体之经标记A之量。举例而言，若抗体在经标记时可由相应未标记之抗体竞争远离其靶，则抗体「特异性结合」至靶。在一个实施例中，若抗体对靶之KD为至少约10-4M、10-5M、10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M或更小(更小意指小于10-12之数值，例如10-13)，则抗体特异性结合至靶，例如CD45。在一个实施例中，如本文所用之术语「特异性结合至CD45(specific binding to CD45)」或「特异性结合至CD45(specifically binds to CD45)」系指结合至CD45且解离常数(KD)如藉由表面电浆子共振所测定为1.0×10-7M或更小之抗体。在一个实施例中，KD(M)系根据标准生物层干涉(BLI)来测定。在一个实施例中，K解离(1/s)系根据标准生物层干涉(BLI)来测定。然而，应理解，抗体可能够特异性结合至序列相关之两种或更多种抗原。举例而言，在一个实施例中，抗体可特异性结合至人类及非人类(例如小鼠、食蟹猴或非人类灵长类动物)CD45类似物。因此，如本文所用之「特异性结合至人类CD45」之抗体欲指结合至人类CD45(及可能地来自一或多个非人类物种、例如食蟹猴之CD45)但实质上不与非CD45蛋白结合之抗体。较佳地，抗体结合至人类CD45且KD为1×10-7M或更小，KD为5×10-8M或更小，KD为3×10-8M或更小，KD为1×10-8M或更小，或KD为5×10-9M或更小。
如本文所用之术语「人类抗体」意欲包括具有源自人类生殖系免疫球蛋白序列之可变区之抗体。在人类抗体含有恒定区之实施例中，恒定区同样可源自人类生殖系免疫球蛋白序列。人类抗体可包括并非由人类生殖系免疫球蛋白序列编码之胺基酸残基(例如藉由活体外或基因重排期间之随机或位点特异性诱变或藉由活体内体细胞突变引入之突变)。然而，如本文所用之术语「人类抗体」不欲包括其中源自另一哺乳动物物种(例如小鼠)之生殖系之CDR序列已移植至人类框架序列上之抗体。人类抗体可在人类细胞(例如藉由重组表现)中产生，或藉由能够表现功能重排之人类免疫球蛋白(例如重链及/或轻链)基因之非人类动物或原核或真核细胞来产生。当人类抗体系单链抗体时，其可包括未在天然人类抗体中发现之连接体肽。举例而言，Fv可含有联结重链可变区及轻链可变区之连接体肽，例如2个至约8个甘胺酸或其他胺基酸残基。人类抗体可藉由此项技术中已知之多种方法(包括噬菌体展示方法或酵母展示方法)使用源自人类免疫球蛋白序列之抗体文库来制得。人类抗体亦可使用基因转殖小鼠来产生，该等基因转殖小鼠无法表现功能性内源免疫球蛋白，但可表现人类免疫球蛋白基因(参见例如PCT公开案第WO 1998/24893号；第WO 1992/01047号；第WO1996/34096号；第WO 1996/33735号；美国专利第5,413,923号；第5,625,126号；第5,633,425号；第5,569,825号；第5,661,016号；第5,545,806号；第5,814,318号；第5,885,793号；第5,916,771号；及第5,939,598号)。
术语「嵌合抗体」欲指其中可变区序列源自一个物种且恒定区序列源自另一物种之抗体，例如其中可变区序列源自大鼠抗体且恒定区序列源自人类抗体之抗体。
非人类(例如鼠类或大鼠)抗体之「人类化」形式系含有源自非人类免疫球蛋白之最小序列之免疫球蛋白。一般而言，人类化抗体将包含实质上所有的至少一个、且通常两个可变结构域，其中所有或实质上所有的CDR区对应于非人类免疫球蛋白之彼等CDR区且所有或实质上所有的FR区系人类免疫球蛋白序列之彼等FR区。人类化抗体亦可包含通常人类免疫球蛋白共有序列之免疫球蛋白恒定区(Fc)之全部或一部分。抗体人类化之方法为此项技术中已知。例如，参见Riechmann等人，1988,Nature 332:323-7；颁予Queen等人之美国专利第5,530,101号；第5,585,089号；第5,693,761号；第5,693,762；及第6,180,370号；EP239400；PCT公开案WO 91/09967；美国专利第5,225,539号；EP592106；EP519596；Padlan,1991,Mol.Immunol.,28:489-498；Studnicka等人，1994,Prot.Eng.7:805-814；Roguska等人，1994,Proc.Natl.Acad.Sci.91:969-973；及美国专利第5,565,332号。
亦提供本文所述SEQ ID NO中所示之序列之「保守序列修饰」。保守序列修饰包括核苷酸及胺基酸序列修饰，其不会消除本文所提供含有由核苷酸序列编码之胺基酸序列之抗体或其抗原结合部分与其同源抗原(例如CD45)之结合。该等保守序列修饰包括保守核苷酸及胺基酸取代以及核苷酸及胺基酸添加及缺失。举例而言，可藉由此项技术中已知之标准技术(例如定点诱变及PCR介导之诱变)将修饰引入本文所述之SEQ ID NO中。保守序列修饰包括保守胺基酸取代，其中胺基酸残基经具有相似侧链之胺基酸残基替代。此项技术中已定义具有相似侧链之胺基酸残基家族。该等家族包括具有碱性侧链之胺基酸(例如离胺酸、精胺酸、组胺酸)、具有酸性侧链之胺基酸(例如天冬胺酸、麸胺酸)、具有不带电极性侧链之胺基酸(例如甘胺酸、天冬酰胺、麸酰胺酸、丝胺酸、苏胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、具有非极性侧链之胺基酸(例如丙胺酸、缬胺酸、白胺酸、异白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、具β分枝侧链之胺基酸(例如苏胺酸、缬胺酸、异白胺酸)及具有芳族侧链之胺基酸(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、组胺酸)。因此，抗CD73抗体中预测之非必需胺基酸残基较佳经来自同一侧链家族之另一胺基酸残基替代。鉴别不会消除抗原结合之核苷酸及胺基酸保守取代之方法为此项技术中所熟知(例如，参见Brummell等人，Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi等人，Protein Eng.12(10):879-884(1999)；及Burks等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:412-417(1997))。
如本文所用之术语「植入潜力」用于指造血干细胞及祖细胞在组织中再建群体之能力，无论该等细胞系自然循环的抑或藉由移植提供。该术语涵盖围绕或引起植入之所有事件，例如细胞之组织归巢及细胞在所关注组织内之定植。植入效率或植入率可使用如熟习此项技术者已知之任何临床上可接受之参数来评估或量化且可包括例如评价竞争性群体再建单元(CRU)；已归巢、定植或植入干细胞之组织中之标记物之纳入或表现；或经由疾病进展、造血干细胞及祖细胞之存活期或接受者之存活期评估个体之进展。植入亦可藉由量测移植后时段中外周血中之白血球计数来确定。植入亦可藉由量测骨髓抽吸样品中供体细胞对骨髓细胞之恢复来评价。
如本文所用之术语「造血干细胞」(「HSC」)系指具有自我更新及分化成包含不同谱系之成熟血球之能力之不成熟血球，该等不同谱系包括(但不限于)颗粒球(例如前髓细胞、嗜中性球、嗜酸性球、嗜碱性球)、红血球(例如网状红血球、红血球)、凝血细胞(例如巨核母细胞、产生血小板之巨核细胞、血小板)、单核球(例如单核球、巨噬细胞)、树突细胞、微胶质细胞、破骨细胞及淋巴球(例如NK细胞、B细胞及T细胞)。该等细胞可包括CD34+细胞。CD34+细胞系表现CD34细胞表面标记物之不成熟细胞。在人类中，认为CD34+细胞包括具有上文所定义干细胞性质之细胞亚群，而在小鼠中，HSC系CD34-。另外，HSC亦指长期群体再建性HSC(LT-HSC)及短期群体再建性HSC(ST-HSC)。LT-HSC及ST-HSC系基于功能潜力及细胞表面标记物表现来分化。举例而言，人类HSC系CD34+、CD38-、CD45RA-、CD90+、CD49F+及lin-(就成熟谱系标记物(包括CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD10、CD11B、CD19、CD20、CD56、CD235A)而言呈阴性)。在小鼠中，骨髓LT-HSC系CD34-、SCA-1+、C-kit+、CD135-、Slamfl/CD150+、CD48-及lin-(就成熟谱系标记物(包括Ter119、CD11b、Gr1、CD3、CD4、CD8、B220、IL7ra)而言呈阴性)，而ST-HSC系CD34+、SCA-1+、C-kit+、CD135-、Slamfl/CD150+及lin-(就成熟谱系标记物(包括Ter119、CD11b、Gr1、CD3、CD4、CD8、B220、IL7ra)而言呈阴性)。另外，在稳态条件下，ST-HSC比LT-HSC更少静止且更易增殖。然而，LT-HSC具有更大的自我更新潜力(即，其在整个成年期存活，且可经由连续接受者连续移植)，而ST-HSC具有有限的自我更新(即，其仅在有限的时间段存活，且不具连续移植潜力)。可将该等HSC中之任一者用于本文所述之方法中。ST-HSC尤其有用之原因在于，其为高度增殖的且因此可更快地产生分化的子代。
如本文所用之术语「造血干细胞功能潜力」系指造血干细胞之功能性质，其包括1)多功效(其系指分化成多种不同血液谱系之能力，该多个不同血液谱系包括(但不限于)颗粒球(例如前髓细胞、嗜中性球、嗜酸性球、嗜碱性球)、红血球(例如网状红血球、红血球)、凝血细胞(例如巨核母细胞、产生血小板之巨核细胞、血小板)、单核球(例如单核球、巨噬细胞)、树突细胞、微胶质细胞、破骨细胞及淋巴球(例如NK细胞、T细胞及B细胞)，2)自我更新(其系指造血干细胞产生具有与母细胞等效之潜力之子代细胞之能力，且另外此能力在个体之整个生命中可重复出现而不会耗竭)，及3)造血干细胞或其子代再引入移植物接受者中、随后其归巢至造血干细胞生态位且重建生产性及持续性造血之能力。
如本文所用之术语「个体」及「患者」系指接受如本文所述之特定疾病或疾患之治疗之生物体，例如人类。在一些实施例中，本文所提供方法中提及之个体或患者系人类个体。
如本文所用之术语「接受者」系指接受移植物(例如含有造血干细胞群体之移植物)之患者。投与接受者之经移植细胞可为例如自体、同基因或同种异体细胞。
如本文所用之「以治疗」或「治疗」系指任何疾病结果之任何改良，例如延长存活期、降低发病率及/或减轻为替代治疗方式之副产物之副作用；如在此项技术中容易了解，完全根除疾病系较佳的，但并非治疗行为的要求。举例而言，治疗可指降低疾病症状之严重程度及/或频率、消除疾病症状及/或该等症状之潜在病因、降低疾病症状及/或其潜在病因之频率或可能性及改良或补救直接或间接由疾病引起之损伤。有益或期望临床结果包括(但不限于)在如本文所述之抗体调理疗法及后续造血干细胞移植疗法后促进外源造血细胞植入患者中。其他有益结果包括在调理疗法且随后向患者投与外源造血干细胞移植物后，需要造血干细胞移植物之患者中造血干细胞之细胞计数或相对浓度之增加。本文所述疗法之有益结果亦可包括在调理疗法及后续造血干细胞移植疗法后，一或多种造血谱系细胞(例如巨核细胞、凝血细胞、血小板、红血球、肥大细胞、骨髓母细胞、嗜碱性球、嗜中性球、嗜酸性球、微胶质细胞l细胞、颗粒球、单核球、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀手细胞、T淋巴球或B淋巴球)之细胞计数或相对浓度之增加。其他有益结果可包括致病性细胞群体(例如癌细胞群体(例如CD45+白血病细胞)或自体免疫细胞群体(例如CD45+自体免疫淋巴球，例如表现与自身抗原交叉反应之T细胞受体之CD45+T细胞))之量减小。就本发明之方法系关于预防病症而言，应理解术语「预防」无需完全阻断疾病状态。相反，如本文所用之术语预防系指熟习此项技术者鉴别易患病症之群体之能力，使得可在疾病发作之前投与本发明之化合物。该术语暗示不能完全避免疾病状态。
如本文所用之「需要」造血干细胞移植物之患者包括展现一或多种血球类型之缺失或缺陷之患者以及患有干细胞病症、自体免疫疾病、癌症或本文所述之其他病状之患者。造血干细胞通常展现1)多功效，且可因此分化成多种不同的血液谱系，包括(但不限于)颗粒球(例如前髓细胞、嗜中性球、嗜酸性球、嗜碱性球)、红血球(例如网状红血球、红血球)、凝血细胞(例如巨核母细胞、产生血小板之巨核细胞、血小板)、单核球(例如单核球、巨噬细胞)、树突细胞、微胶质细胞、破骨细胞及淋巴球(例如NK细胞、B细胞及T细胞)，2)自我更新，且可因此产生具有与母细胞等效之潜力之子代细胞，及3)再引入移植物接受者中、随后其归巢至造血干细胞生态位且重建生产性及持续性造血之能力。因此，可将造血干细胞投与造血谱系之一或多种细胞类型缺失或缺陷之患者以使活体内缺失或缺陷性细胞群体复原。举例而言，患者可患有癌症，且缺陷可由投与选择性或非特异性耗尽癌细胞群体之化学治疗剂或其他药剂引起。另外或另选地，患者可患有血红素病(例如非恶性血红素病)，例如镰状细胞贫血症、地中海贫血、范康尼贫血(Fanconi anemia)、再生不良性贫血及伟-尔二氏症候群(Wiskott-Aldrich syndrome)。个体可为患有腺苷去胺酶重度合并性免疫缺失疾病(ADA SCID)、HIV/AIDS、异染性白质失养症、戴-布二氏贫血(Diamond-Blackfan anemia)及舒-戴二氏症候群群(Schwachman-Diamond syndrome)之个体。个体可患有遗传性血液病症(例如镰状细胞贫血症)或自体免疫病症或受该病症之影响。另外或另选地，个体可患有恶性病(例如神经胚细胞瘤或血液癌)或受该疾病之影响。例如，个体可患有白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些实施例中，个体患有急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴性白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。在一些实施例中，个体患有骨髓发育不良症候群。在一些实施例中，个体患有自体免疫疾病，例如硬皮症、多发性硬化、溃疡性结肠炎、克隆氏病、1型糖尿病或本文所述之另一自体免疫病状。在一些实施例中，个体需要嵌合抗原受体T细胞(CART)疗法。在一些实施例中，个体患有代谢储积症或以其他方式受该疾病之影响。个体可患有选自由以下组成之群之代谢失调或以其他方式受该病症之影响：肝糖储积病、黏多糖症、高歇氏病(Gaucher's Disease)、胡尔勒病(Hurlers Disease)、鞘脂贮积病、异染性白质失养症或可受益于本文所揭示治疗及疗法之任何其他疾病或病症，包括(但不限于)重度合并性免疫缺失疾病、威-奥二氏症候群(Wiscott-Aldrich syndrome)、高免疫球蛋白M(IgM)症候群、切-希二氏病(Chediak-Higashi disease)、遗传性淋巴组织球血症、骨硬化症、成骨不全、储积病、重型地中海贫血、镰状细胞疾病、全身性硬化、全身性红斑狼疮、多发性硬化、幼年型类风湿性关节炎及「Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant Disease」，ASH Education Book,1:319-338(2000)中所述之彼等疾病或病症，该文献关于可藉由投与造血干细胞移植疗法治疗之病状之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。另外或另选地，「需要」造血干细胞移植物之患者可为患有或未患前述病状中之一者、但仍展现造血谱系内一或多个内源细胞类型之降低的水平(例如与其他健康个体相比)之患者，该一或多个内源细胞类型为例如巨核细胞、凝血细胞、血小板、红血球、肥大细胞、成肌细胞、嗜碱性球、嗜中性球、嗜酸性球、微胶质细胞、颗粒球、单核球、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀手细胞、T淋巴球及B淋巴球。熟习此项技术者可容易地例如藉助流式细胞术及荧光活化细胞分选(FACS)方法以及此项技术中已知之其他程序确定一个体之一或多个前述细胞类型或其他血球类型之水平相对于其他健康个体是否降低。
如本文所用之词组「干细胞病症」广泛地指可藉由调理个体之靶组织、及/或藉由消除靶组织中之内源干细胞群体(例如自个体之骨髓组织消除内源造血干细胞或祖细胞群体)、及/或藉由将干细胞植入或移植于个体之靶组织中来治疗或治愈之任何疾病、病症或疾患。举例而言，已显示I型糖尿病系藉由造血干细胞移植物来治愈且可受益于根据本文所述之组合物及方法之调理。可使用本文所述之组合物及方法治疗之其他病症包括(但不限于)镰状细胞贫血症、地中海贫血、范康尼贫血、再生不良性贫血、伟-尔二氏症候群、ADASCID、HIV/AIDS、异染性白质失养症、戴-布二氏贫血及舒-戴二氏症候群群。可使用本文所述之患者调理及/或造血干细胞移植物方法治疗之其他疾病包括遗传性血液病症(例如镰状细胞贫血症)及自体免疫病症，例如硬皮症、多发性硬化、溃疡性结肠炎及克隆氏病。可使用本文所述之调理及/或移植方法治疗之其他疾病包括恶性病，例如神经胚细胞瘤或血液癌，例如白血病、淋巴瘤及骨髓瘤。例如，癌症可为急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴性白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。可使用本文所述之调理及/或移植方法治疗之其他疾病包括骨髓发育不良症候群。在一些实施例中，个体患有代谢储积症或以其他方式受该疾病之影响。举例而言，个体可患有选自由以下组成之群之代谢失调或以其他方式受该病症之影响：肝糖储积病、黏多糖症、高歇氏病、胡尔勒病、鞘脂贮积病、异染性白质失养症或可受益于本文所揭示治疗及疗法之任何其他疾病或病症，包括(但不限于)重度合并性免疫缺失疾病、威-奥二氏症候群、高免疫球蛋白M(IgM)症候群、切-希二氏病、遗传性淋巴组织球血症、骨硬化症、成骨不全、储积病、重型地中海贫血、镰状细胞疾病、全身性硬化、全身性红斑狼疮、多发性硬化、幼年型类风湿性关节炎及「Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant Disease」，ASH Education Book,1:319-338(2000)中所述之彼等疾病或病症，该文献关于可藉由投与造血干细胞移植疗法治疗之病状之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。
如本文所用之术语「载体」包括核酸载体，例如质体、DNA载体、质体、RNA载体、病毒或其他适宜复制子。本文所述之表现载体可含有多核苷酸序列以及例如用于表现蛋白质及/或将该等多核苷酸序列整合至哺乳动物细胞之基因体中之其他序列组件。可用于表现本发明抗体及抗体片段之某些载体包括含有引导基因转录之调控序列(例如启动子及增强子区域)之质体。其他可用于表现抗体及抗体片段之载体含有增强该等基因之转译速率或改良源自基因转录之mRNA之稳定性或核输出之多核苷酸序列。该等序列组件可包括例如5’及3’非转译区及多聚腺苷酸化信号位点以引导表现载体上所携带之基因之有效转录。本文所述之表现载体亦可含有编码用于选择含有该载体之细胞之标记物之多核苷酸。适宜标记物之实例包括编码抗生素(例如胺苄青霉素(ampicillin)、氯霉素(chloramphenicol)、康霉素(kanamycin)及诺尔丝菌素(nourseothricin))抗性之基因。
如本文所用之术语「结合物」或「抗体药物结合物」或「ADC」系指连接至细胞毒素或毒素之抗体，在通篇中可互换使用。在一个实施例中，ADC系藉由化学键结一种分子(例如抗体或其抗原结合片段)之反应性官能基与另一分子(例如本文所述之细胞毒素)之适当反应性官能基来形成。在一些实施例中可用于本文所提供结合物中之细胞毒素之非限制性实例包括小有机分子(例如MW1500Da或更小)、生物分子(例如蛋白质)、药物填充奈米粒子或放射性核素。结合物可包括两种彼此结合之分子之间、例如抗体与细胞毒素之间的连接体。可用于形成结合物之连接体之实例包括含肽连接体，例如含有天然或非天然胺基酸(例如D-胺基酸)之彼等连接体。连接体可使用本文所述及此项技术中已知之多种策略来制备。端视其中之反应性组分，连接体可例如藉由酶水解、光解、酸性条件下之水解、碱性条件下之水解、氧化、二硫化物还原、亲核裂解或有机金属裂解来裂解(参见例如Leriche等人，Bioorg.Med.Chem.,20:571-582,2012)。
术语「结合」、「结合至」或「与……结合」在至少两种分子结合在一起之含义上使用时系指一种分子(例如抗体)连接至第二分子(例如毒素)或与该第二分子组合。抗CD45抗体及其片段可结合至其他分子，包括毒素、标记剂(例如荧光黄或生物素)、药物负载奈米粒子。所结合分子可经由共价或非共价相互作用结合。在某些实施例中，抗CD45抗体或其片段结合至蛋白毒素以形成蛋白融合物，例如scFv-毒素嵌合体。在一些实施例中，所结合分子可经由与所结合分子相关之第一相互作用部分(例如生物素)与第二相互作用部分(例如链霉抗生物素蛋白)之非共价相互作用偶合。
如本文所用之「药物对抗体比率」或「DAR」系指连接至结合物抗体之药物(例如毒伞肽)之数量。ADC之DAR可介于1至8范围内，但端视抗体上之链接位点数，更高负载亦系可能的。在某些实施例中，结合物之DAR为1、2、3、4、5、6、7或8。
如本文所用之术语「微管结合剂」系指藉由破坏细胞中之有丝分裂及间期细胞功能所必需之微管网络起作用之化合物。微管结合剂之实例包括(但不限于)美登素、类美登素及其衍生物(例如本文所述或此项技术中已知之彼等衍生物)、长春花生物碱(例如长春碱(vinblastine)、硫酸长春碱、长春新碱(vincristine)、硫酸长春新碱、长春地辛(vindesine)及长春瑞滨(vinorelbine))、紫杉烷(taxane)(例如多西他赛(docetaxel)及太平洋紫杉醇(paclitaxel))、巨环内酯(macrolide)(例如迪莫利德(discodermolide)、秋水仙碱(cochicine)及埃博霉素(epothilone)及其衍生物，例如埃博霉素B或其衍生物)。
如本文所用之术语「毒伞肽」系指由白蕈(Amanita phalloides)洋菇或其衍生物(例如能够抑制RNA聚合酶II活性之变异体或其衍生物)产生之肽之毒伞肽家族之成员。可与本文所述之组合物及方法结合使用之毒伞肽包括本文所述之化合物，例如α-瓢菌素、β-瓢菌素、γ-瓢菌素、ε-瓢菌素、鹅膏素、鹅膏素酰胺、鹅膏无毒环肽、一羟鹅膏毒肽羧酸或原鹅膏无毒环肽。如本文所述，毒伞肽可例如藉助连接体部分(L)结合至抗体或其抗原结合片段(因此形成ADC)。下文阐述例示性毒伞肽结合方法及可用于该等方法中之连接体。本文亦阐述根据组合物及方法可用于结合至抗体或抗原结合片段之含例示性连接体之毒伞肽。
如本文所用之术语「酰基」系指-C(＝O)R，其中R系氢(「醛」)、C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C3-C7碳环基、C6-C20芳基、5-10员杂芳基或5-10员杂环基，如本文所定义。非限制性实例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、苯甲酰基及丙烯酰基。
如本文所用之术语「C1-C12烷基」系指具有1至12个碳原子之直链或具支链饱和烃。代表性C1-C12烷基包括(但不限于)-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基及-正己基；而具支链C1-C12烷基包括(但不限于)-异丙基、-第二丁基、-异丁基、-第三丁基、-异戊基及2-甲基丁基。C1-C12烷基可为未经取代或经取代。
如本文所用之术语「烯基」系指含有正常、二级或三级碳原子及至少一个不饱和位点(即碳-碳sp2双键)之C2-C12烃。实例包括(但不限于)：伸乙基或乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-异丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、第三丁烯基、己烯基及诸如此类。烯基可为未经取代或经取代。
如本文所用之「炔基」系指含有正常、二级或三级碳原子及至少一个不饱和位点(即碳-碳sp三键)之C2-C12烃。实例包括(但不限于)炔及炔丙基、丁炔基、戊炔基、己炔基及诸如此类。炔基可为未经取代或经取代。
如本文所用之「芳基」系指C6-C20碳环芳族基团。芳基之实例包括(但不限于)苯基、萘基及蒽基。芳基可为未经取代或经取代。
如本文所用之「芳基烷基」系指其中键结至碳原子、通常末端或sp3碳原子之一个氢原子经芳基替代之非环状烷基。典型的芳基烷基包括(但不限于)苄基、2-苯基乙-1-基、2-苯基乙烯-1-基、萘基甲基、2-萘基乙-1-基、2-萘基乙烯-1-基、萘并苄基、2-萘并苯基乙-1-基及诸如此类。芳基烷基包含6至20个碳原子，例如芳基烷基之烷基部分(包括链烷基、烯基或炔基)为1至6个碳原子且芳基部分为5至14个碳原子。烷芳基可为未经取代或经取代。
如本文所用之「环烷基」系指可为单环或二环之饱和碳环基团。环烷基包括具有3至7个碳原子(如单环)或7至12个碳原子(如二环)之环。单环环烷基之实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基及环辛基。环烷基可为未经取代或经取代。
如本文所用之「环烯基」系指可为单环或二环之不饱和碳环基团。环烯基包括具有3至6个碳原子(如单环)或7至12个碳原子(如二环)之环。单环环烯基之实例包括1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基及1-环己-3-烯基。环烯基可为未经取代或经取代。
如本文所用之「杂芳烷基」系指其中键结至碳原子、通常末端或sp3碳原子之一个氢原子经杂芳基替代之非环状烷基。典型的杂芳基烷基包括(但不限于)2-苯并咪唑基甲基、2-呋喃基乙基及诸如此类。杂芳基烷基包含6至20个碳原子，例如杂芳基烷基之烷基部分(包括链烷基、烯基或炔基)为1至6个碳原子且杂芳基部分为5至14个碳原子及1至3个选自N、O、P及S之杂原子。杂芳基烷基之杂芳基部分可为具有3至7个环成员(2至6个碳原子及1至3个选自N、O、P及S之杂原子)之单环，或具有7至10个环成员(4至9个碳原子及1至3个选自N、O、P及S之杂原子)之二环，例如：二环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统。
如本文所用之「杂芳基」及「杂环烷基」分别系指其中一或多个环原子为杂原子(例如氮、氧及硫)之芳族或非芳族环系统。杂芳基或杂环烷基包含2至20个碳原子及1至3个选自N、O、P及S之杂原子。杂芳基或杂环烷基可为具有3至7个环成员(2至6个碳原子及1至3个选自N、O、P及S之杂原子)之单环或具有7至10个环成员(4至9个碳原子及1至3个选自N、O、P及S之杂原子)之二环，例如：二环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统。杂芳基及杂环烷基可为未经取代或经取代。
杂芳基及杂环烷基阐述于Paquette,Leo A.；「Principles of ModernHeterocyclic Chemistry」(W.A.Benjamin,New York,1968)，具体而言第1章、第3章、第4章、第6章、第7章及第9章；「The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series ofMonographs」(John Wiley&Sons,New York,1950至今)，具体而言第13卷、第14卷、第16卷、第19卷及第28卷；及J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566。
杂芳基之实例包括例如(但不限于)吡啶基、噻唑基、四氢噻吩基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、噻萘基、吲哚基、假吲哚基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、异恶唑基、吡嗪基、嗒嗪基、吲嗪基、异吲哚基、3H-吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、酞嗪基、萘啶基、喹喏啉基、喹唑啉基、
Figure BDA0003690274480000652
啉基、喋啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、啡啶基、吖啶基、嘧啶基、啡啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、呋呫基、吩恶嗪基、异色烷基、色烷基、咪唑啶基、咪唑啉基、吡唑啶基、吡唑啉基、苯并三唑基、苯并异恶唑基及靛红酰基。
杂环烷基之实例包括例如(但不限于)二氢吡啶基、四氢吡啶基(六氢吡啶基)、四氢噻吩基、六氢吡啶基、4-六氢吡啶酮基、吡咯啶基、2-吡咯啶酮基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、双-四氢呋喃基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、八氢异喹啉基、六氢吡嗪基、奎宁环基及吗啉基。
举例而言但不限于，碳键结之杂芳基及杂环烷基键结于吡啶之位置2、3、4、5或6，嗒嗪之位置3、4、5或6，嘧啶之位置2、4、5或6，吡嗪之位置2、3、5或6，呋喃、四氢呋喃、硫呋喃、噻吩、吡咯或四氢吡咯之位置2、3、4或5，恶唑、咪唑或噻唑之位置2、4或5，异恶唑、吡唑或异噻唑之位置3、4或5，氮丙啶之位置2或3，氮杂环丁烷之位置2、3或4，喹啉之位置2、3、4、5、6、7或8，或异喹啉之位置1、3、4、5、6、7或8。更通常，碳键结之杂环包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-嗒嗪基、4-嗒嗪基、5-嗒嗪基、6-嗒嗪基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基。
举例而言但不限于，氮键结之杂芳基及杂环烷基键结于氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯啶、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑啶、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、六氢吡啶、六氢吡嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑之位置1，异吲哚或异吲哚啉之位置2，吗啉之位置4，及咔唑或β-咔啉之位置9。更通常，氮键结之杂环包括1-氮丙啶基、1-氮杂环丁烷基(1-azetedyl)、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基及1-六氢吡啶基。
如本文所用且如应用于上述烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、环烷基、杂芳基、杂环基及诸如此类中之任一者之「经取代」意指一或多个氢原子各自独立地经取代基替代。典型的取代基包括(但不限于)-X、-R、-OH、-OR、-SH、-SR、NH2、-NHR、-N(R)2、-N+(R)3、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-NCO、-NCS、-NO、-NO2、-N3、-NC(＝O)H、-NC(＝O)R、-C(＝O)H、-C(＝O)R、-C(＝O)NH2、-C(＝O)N(R)2、-SO3-、-SO3H、-S(＝O)2R、-OS(＝O)2OR、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2N(R)2、-S(＝O)R、-OP(＝O)(OH)2、-OP(＝O)(OR)2、-P(＝O)(OR)2、-PO3、-PO3H2、-C(＝O)X、-C(＝S)R、-CO2H、-CO2R、-CO2-、-C(＝S)OR、-C(＝O)SR、-C(＝S)SR、-C(＝O)NH2、-C(＝O)N(R)2、-C(＝S)NH2、-C(＝S)N(R)2、-C(＝NH)NH2及-C(＝NR)N(R)2；其中每一X在每次出现时系独立地选自F、Cl、Br及I；且每一R在每次出现时系独立地选自C1-C12烷基、C6-C20芳基、C3-C14杂环烷基或杂芳基、保护基团及前药部分。当基团阐述为「视情况经取代」时，该基团可在每次出现时独立地经一或多个上述取代基取代。
应理解，端视上下文，某些基团命名惯例可包括单基团或二基图。举例而言，当取代基需要两个与分子剩余部分之连接点时应理解，取代基为二基团。举例而言，鉴别为需要两个连接点之烷基之取代基包括二基团，例如-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-及诸如此类。其他基团命名惯例明确指示，基团为二基团，例如「伸烷基」、「伸烯基、「伸芳基」、「伸杂环烷基」及诸如此类。
除非另外指明，否则当取代基描绘为二基团(即具有两个与分子剩余部分之连接点)时应理解，取代基可以任何定向构形连接。
「异构现象」意指具有相同分子式、但其原子键结之序列或其原子之空间排列不同之化合物。其原子之空间排列不同之异构物称为「立体异构物」。彼此不为镜像之立体异构物称为「非镜像异构物」，且彼此为不可重迭镜像之立体异构物称为「镜像异构物」或有时称为「光学异构物」。
键结至四个不同取代基之碳原子称为「手性中心」。「手性异构物」意指具有至少一个手性中心之化合物。具有一个以上手性中心之化合物可以个别非镜像异构物或以非镜像异构物之混合物(称为「非镜像异构混合物」)形式存在。当存在一个手性中心时，立体异构物之特征可在于该手性中心之绝对构形(R或S)。绝对构形系指连接至手性中心之取代基之空间排列。根据Cahn、Ingold及Prelog.之序列规则(Cahn等人，Angew.Chem.Inter.编辑，1966,5,385；勘误表511；Cahn等人，Angew.Chem.1966,78,413；Cahn及Ingold,J.Chem.Soc.1951(London),612；Cahn等人，Experientia 1956,12,81；Cahn,J.Chem.Educ.1964,41,116)，对所考虑连接至手性中心之取代基进行分级。含有等量相反手性之个别镜像异构形式之混合物称为「外消旋混合物」。
本说明书及申请专利范围中所揭示之化合物可包含一或多个不对称中心，且可存在每一化合物之不同非镜像异构物及/或镜像异构物。除非另有说明，否则本说明书及申请专利范围中任何化合物之描述意欲包括所有镜像异构物、非镜像异构物及其混合物。另外，除非另有说明，否则本说明书及申请专利范围中任何化合物之描述意欲包括个别镜像异构物以及镜像异构物之任何混合物、外消旋或其他形式。当化合物之结构描绘为特定镜像异构物时应理解，本申请案之揭示内容并不限于该特定镜像异构物。因此，本文涵盖本揭示案之每一结构式之镜像异构物、光学异构物及非镜像异构物。在本说明书中，为方便起见，在一些情形下，化合物之结构式表示某一异构物，但本揭示案包括所有异构物，例如几何异构物、基于不对称碳之光学异构物、立体异构物、互变异构物及诸如此类，应理解并非所有异构物可具有相同的活性水平。化合物可以不同互变异构形式存在。除非另有说明，否则本揭示案之化合物意欲包括所有互变异构形式。当化合物之结构描绘为特定互变异构物时应理解，本申请案之揭示内容并不限于该特定互变异构物。
若适用，本文所述任一式之化合物包括化合物自身以及其盐及其溶剂合物。例如，盐可在本揭示案化合物上之阴离子与带正电之基团(例如胺基)之间形成。适宜阴离子包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硫酸氢根、胺基磺酸根、硝酸根、磷酸根、柠檬酸根、甲磺酸根、三氟乙酸根、麸胺酸根、葡糖醛酸根、戊二酸根、苹果酸根、马来酸根、琥珀酸根、富马酸根、酒石酸根、甲苯磺酸根、柳酸根、乳酸根、萘磺酸根及乙酸根(例如三氟乙酸根)。术语「医药学上可接受之阴离子」系指适于形成医药学上可接受之盐之阴离子。同样，盐亦可在本揭示案化合物上之阳离子与带负电之基团(例如羧酸根)之间形成。适宜阳离子包括钠离子、钾离子、镁离子、钙离子及铵阳离子，例如四甲基铵离子。一些适宜经取代铵离子之实例系衍生自以下之彼等铵离子：乙胺、二乙胺、二环己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、六氢吡嗪、苄胺、苯基苄胺、胆碱、葡甲胺及胺丁三醇以及胺基酸，例如离胺酸及精胺酸。本揭示案之化合物亦包括含有四级氮原子之彼等盐。适宜无机阴离子之实例包括(但不限于)衍生自以下无机酸之彼等阴离子：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、亚硝酸、磷酸及亚磷酸。适宜有机阴离子之实例包括(但不限于)衍生自以下有机酸之彼等阴离子：2-乙酰氧基苯甲酸、乙酸、抗坏血酸、天冬胺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、肉桂酸、柠檬酸、乙二胺四乙酸、乙二磺酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、麸胺酸、乙醇酸、羟基马来酸、羟基萘甲酸、羟乙基磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、黏酸、油酸、草酸、棕榈酸、帕莫酸、泛酸、苯乙酸、苯基磺酸、丙酸、丙酮酸、柳酸、硬脂酸、琥珀酸、对胺基苯磺酸、酒石酸、甲苯磺酸及戊酸。适宜聚合有机阴离子之实例包括(但不限于)衍生自以下聚合酸之彼等阴离子：单宁酸、羧甲基纤维素。
另外，本揭示案之化合物(例如化合物之盐)可以水合或非水合(无水)形式或以与其他溶剂分子之溶剂合物形式存在。水合物之非限制性实例包括单水合物、二水合物等。溶剂合物之非限制性实例包括乙醇溶剂合物、丙酮溶剂合物等。「溶剂合物」意指含有化学计量或非化学计量量之溶剂之溶剂加成形式。一些化合物具有将固定莫耳比之溶剂分子捕获于结晶固态中、因此形成溶剂合物之趋势。若溶剂系水，则所形成之溶剂合物系水合物；且若溶剂系醇，则所形成之溶剂合物系醇化物。水合物系藉由组合一或多个分子之水与一分子之其中水保留其分子状态为H2O之物质来形成。水合物系指例如单水合物、二水合物、三水合物等。
另外，由本文所揭示之式表示之化合物或其盐可存在晶体多型性。应注意，任何晶体形式、晶体形式混合物或其酸酐或水合物包括在本揭示案之范围内。
抗CD45抗体
本文涵盖能够结合CD45之抗体或其抗原结合片段，其可作为单独治疗剂或作为结合物(ADC)用于例如，(i)治疗特征在于CD45+细胞之癌症及自体免疫疾病，及(ii)促进移植的造血干细胞植入需要移植疗法之患者中。该等治疗活性可例如藉由结合经分离之抗CD45抗体、其抗原结合片段或ADC、且随后诱导细胞死亡引起，该等经分离之抗CD45抗体、其抗原结合片段或ADC结合至在细胞(例如癌细胞、自体免疫细胞或造血干细胞)表面上表现之CD45。内源造血干细胞之耗尽可提供移植的造血干细胞可归巢且随后建立生产性造血之生态位。以此方式，移植的造血干细胞可成功地植入患者中，例如患有本文所述之干细胞病症之人类患者。另外，耗尽有需要之患者中之白血球与HSC移植物之组合可重设患者之免疫系统，从而治愈例如自体免疫疾病之患者。
CD45，亦称为白血球共享抗原及受体型酪胺酸蛋白磷酸酶C，其系T及B细胞抗原受体介导之信号传导所必需之造血细胞特异性跨膜蛋白酪胺酸磷酸酶。CD45包括大细胞外结构域及含磷酸酶之胞质结构域。CD45可作为正及负调控子起作用，此端视刺激之性质及所涉及之细胞类型而定。尽管在CD45基因中可能存在大量超突变，但在人类中通常仅鉴别出六个同功型。同功型系RA、RO、RB、RAB、RBC及RABC(Hermiston等人，2003「CD45：a criticalregulator of signaling thresholds in immune cells」，Annu Rev Immunol.2:107-137。)。CD45RA在幼稚T细胞上表现，且CD45RO在活化及记忆T细胞、一些B细胞亚组、活化单核球/巨噬细胞及颗粒球上表现。CD45RB在外周B细胞、幼稚T细胞、胸腺细胞、巨噬细胞(弱表现)及树突细胞上表现。CD45RABC之胺基酸序列在本文中提供为SEQ ID NO:112。CD45RA之胺基酸序列在本文中提供为SEQ ID NO:107。CD45RO之胺基酸序列在本文中提供为SEQID NO:108。CD45RB之胺基酸序列在本文中提供为SEQ ID NO:109。CD45RAB之胺基酸序列在本文中提供为SEQ ID NO:110。SEQ ID NO:RBC之胺基酸序列在本文中提供为SEQ ID NO:111。
如下文所述，在某些实施例中，新颖抗人类CD45(hCD45)抗体系藉由筛选展示全人类抗体之酵母展示文库来鉴别。在筛选中鉴别出7种人类抗体(命名为抗体1(Ab1)、抗体2(Ab2)、抗体3(Ab3)、抗体4(Ab4)、抗体5(Ab5)、抗体6(Ab6)及抗体7(Ab7))，其结合至人类CD45(所有同功型)，且与非人类灵长类动物之CD45(例如食蟹猴CD45及/或恒河猴CD45)交叉反应。
在其他实施例中，人类化及亲和力成熟抗体系自三种大鼠抗CD45抗体制备。以此方式，鉴别出三种额外抗体(命名为抗体A(AbA)、抗体B(AbB)及抗体C(AbC)，其结合至人类CD45(所有同功型)，且与非人类灵长类动物之CD45交叉反应(例如食蟹猴CD45及/或恒河猴CD45)。所鉴别抗体具有诊断及治疗特征，如本文所述。
因此，本文提供抗体或其抗原结合部分，其特异性结合至人类CD45且与非人类灵长类动物之CD45交叉反应。
在一个实施例中，本发明提供抗体或其抗原结合部分，其结合至人类CD45(SEQ IDNO:112)及食蟹猴CD45(SEQ ID NO:145)及/或恒河猴CD45(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分可结合至人类CD45且KD为约100nM或更小，例如约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约10nM或更小或约0.1nM或更小，如藉由生物层干涉(BLI)所测定。在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分可结合至食蟹猴CD45且KD为约100nM或更小，例如约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约10nM或更小或约0.1nM或更小，如藉由生物层干涉(BLI)所测定。在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分可结合至恒河猴CD45且KD为约100nM或更小，例如约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约10nM或更小或约0.1nM或更小，如藉由生物层干涉(BLI)所测定。在一些实施例中，抗体系全人类抗体或其抗原结合部分。在其他实施例中，抗体系人类化抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，抗体系嵌合抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，抗体系去免疫抗体或其抗原结合部分。
人类CD45之细胞外区域包括黏蛋白样结构域及四个纤连蛋白样结构域(d1、d2、d3及d4)。不希望受限于任何理论，认为抗体Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6及Ab7与人类CD45之位于d3及d4纤连蛋白样结构域内之残基相互作用。具体而言，该等抗体可与SEQ ID NO:115中所示之人类CD45片段及SEQ ID NO:117中所示之人类CD45片段相互作用。本文所述之交联研究表明，抗体可与一或多个在人类CD45、食蟹猴CD45及恒河猴CD45之间保守之CD45胺基酸残基特异性相互作用。该等残基包括405T、407K、419Y、425K及505R(参照SEQ ID NO:113中所示之hCD45片段编号)。另外，该等抗体可与人类CD45中之残基481R及/或509H(参照SEQID NO:113中所示之hCD45片段编号)相互作用。因此，在一些实施例中，本文提供抗体或其抗原结合部分，其在位于d3及/或d4纤连蛋白样结构域中之抗原决定基处结合至人类CD45。在一些实施例中，本文提供抗体或其抗原结合部分，其在位于人类CD45之CD45片段2(SEQID NO:115)及/或CD45片段4(SEQ ID NO:117)内之抗原决定基处结合至CD45。在一些实施例中，本文提供抗体或其抗原结合部分，其在位于人类CD45之CD45片段1(SEQ ID NO:114)及/或CD45片段3(SEQ ID NO:116)内之抗原决定基处结合至CD45。在一些实施例中，本文提供抗体或其抗原结合部分，其在包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个或至少五个在人类CD45、食蟹猴CD45及/或恒河猴CD45中保守之胺基酸残基之抗原决定基处结合至CD45。举例而言，在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分可结合至人类CD45中之以下胺基酸残基中之至少一者、至少两者、至少三者、至少四者或所有五者：405T、407K、419Y、425K及505R(参照SEQ ID NO:113中所示之hCD45片段编号)。在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分可结合至人类CD45中之以下胺基酸残基中之一或多者、两者或更多者、三者或更多者、四者或更多者、五者或更多者、六者或更多者或七者：405T、407K、419Y、425K、481R及505R、509H(参照SEQ ID NO:113中所示之hCD45片段编号)。本文亦提供抗体或其抗原结合部分，其与Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6及/或Ab7竞争结合至人类CD45(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分亦可与Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6及/或Ab7竞争结合至食蟹猴CD45(SEQ ID NO:145)及/或恒河猴CD45(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，抗体系全人类抗体或其抗原结合部分。在其他实施例中，抗体系人类化抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，抗体系嵌合抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，抗体系去免疫抗体或其抗原结合部分。
不希望受限于任何理论，认为本文所述之抗体AbA亦结合至CD45之d4纤连蛋白样结构域，但不与Ab1-Ab7中之任一者竞争结合至CD45。本文所述之抗原决定基定位实验表明，AbA在该分子中与Ab1-Ab7相对之面结合至d4纤连蛋白样结构域。具体而言，认为此抗体与SEQ ID NO:118中所示之人类CD45片段相互作用。本文所述之交联研究表明，AbA可与一或多个在人类CD45、食蟹猴CD45及恒河猴CD45之间保守之CD45胺基酸残基特异性相互作用。该等残基包括493Y及502T(参照SEQ ID NO:113中所示之hCD45片段编号)。另外，此抗体可与人类CD45中之残基486R(参照SEQ ID NO:113中所示之hCD45片段编号)相互作用。因此，在一些实施例中，本文提供抗体或其抗原结合部分，其在位于d4纤连蛋白样结构域中之抗原决定基处结合至人类CD45。在一些实施例中，本文提供抗体或其抗原结合部分，其在位于人类CD45之CD45片段5(SEQ ID NO:118)内之抗原决定基处结合至CD45。在一些实施例中，本文提供抗体或其抗原结合部分，其在包含至少一个或至少两个在人类CD45、食蟹猴CD45及/或恒河猴CD45中保守之胺基酸残基之抗原决定基处结合至CD45。举例而言，在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分可结合至人类CD45中之以下胺基酸残基中之一或两者：493Y及502T(参照SEQ ID NO:113中所示之hCD45片段编号)。在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分可结合至人类CD45中之以下胺基酸残基中之一或多者、两者或更多者或三者：486R、493Y及502T(参照SEQ ID NO:113中所示之hCD45片段编号)。本文亦提供抗体或其抗原结合部分，其与AbA竞争结合至人类CD45(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分亦可与AbA竞争结合至食蟹猴CD45(SEQ ID NO:145)及/或恒河猴CD45(SEQ IDNO:146)。在一些实施例中，抗体系全人类抗体或其抗原结合部分。在其他实施例中，抗体系人类化抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，抗体系嵌合抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，抗体系去免疫抗体或其抗原结合部分。
在其他实施例中，本文提供抗体或其抗原结合部分，其结合至人类CD45之与AbB相同之抗原决定基。在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分与食蟹猴CD45及/或恒河猴CD45交叉反应。本文亦提供抗体或其抗原结合部分，其与AbB竞争结合至人类CD45(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分亦可与AbB竞争结合至食蟹猴CD45(SEQ IDNO:145)及/或恒河猴CD45(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，抗体系全人类抗体或其抗原结合部分。在其他实施例中，抗体系人类化抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，抗体系嵌合抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，抗体系去免疫抗体或其抗原结合部分。
在其他实施例中，本文提供抗体或其抗原结合部分，其结合至人类CD45之与AbC相同之抗原决定基。在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分与食蟹猴CD45及/或恒河猴CD45交叉反应。本文亦提供抗体或其抗原结合部分，其与AbC竞争结合至人类CD45(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分亦可与AbC竞争结合至食蟹猴CD45(SEQ IDNO:145)及/或恒河猴CD45(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，抗体系全人类抗体或其抗原结合部分。在其他实施例中，抗体系人类化抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，抗体系嵌合抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，抗体系去免疫抗体或其抗原结合部分。
抗CD45抗体Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、AbA、AbB及AbC之各个结合区之胺基酸序列阐述于表27中。在多个态样中，本发明提供抗体，其包含表27中所述抗体之重链及/或轻链CDR序列。在一些态样中，本发明提供抗体，其包含表27中所述抗体之重链可变区及/或轻链可变区。在一些态样中，本发明提供抗体，其包含表27中所述抗体之重链及/或轻链。下文阐述本文所提供抗体及其抗原结合部分之其他特征。
Ab1
抗体1(Ab1)与人类CD45、食蟹猴CD45及恒河猴CD45交叉反应，且可结合人类CD45之多个同功型。
抗CD45 Ab1之各个结合区之胺基酸序列阐述于表27中。本发明包括例如包含如表27中所示之CDR之基于Ab1之抗CD45抗体。
在一个实施例中，本发明提供抗CD45抗体或其抗原结合片段，其包含抗原结合区，例如对应于Ab1之彼等CDR及/或可变区之CDR及/或可变区。Ab1之重链可变区(VH)胺基酸序列示于SEQ ID NO:1中(参见表27)。Ab1之VH CDR结构域胺基酸序列示于SEQ ID NO:2(VHCDR1)；SEQ ID NO:3(VH CDR2)及SEQ ID NO:4(VH CDR3)中。Ab1之轻链可变区(VL)胺基酸序列阐述于SEQ ID NO:5中(参见表27)。Ab1之VL CDR结构域胺基酸序列示于SEQ ID NO:6(VL CDR1)；SEQ ID NO:7(VL CDR2)及SEQ ID NO:8(VL CDR3)中。
因此，在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，该重链可变区包含含有如SEQ ID NO:2中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQID NO:3中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:4中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及/或轻链可变区，该可变区包含含有如SEQ ID NO:6中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:7中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ ID NO:8中所示之胺基酸序列之CDR3结构域。在某些实施例中，抗CD45抗体包含本文所述之CDR(SEQ ID No:2至4及6至8)，其中CDR包含保守胺基酸取代(或2个、3个、4个或5个胺基酸取代)，同时保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab1之特异性)。
在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含含有如SEQ IDNO:1中所示之胺基酸序列之重链可变区，及/或含有如SEQ ID NO:5中所示之胺基酸序列之轻链可变区。在某些实施例中，抗体可包含经修饰重链(HC)可变区，该经修饰重链可变区包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:1变异体之HC可变结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:1之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:1之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:1之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:1至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab1之特异性)，或具有相对于另一Ab1重链可变区之生物活性增强的生物活性。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)可变区，该经修饰轻链可变区包含含有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:5变异体之LC可变结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:5之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:5之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:5之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:5至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab1之特异性)，或具有相对于另一Ab1轻链可变区之生物活性增强的生物活性。
包含Ab1之CDR及/或可变区序列之抗体可呈全长抗体、双特异性抗体、双可变结构域抗体、多链或单链抗体及/或特异性结合人类CD45之结合片段之形式，包括(但不限于)Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、scFv(单链Fv)、替代抗体(包括代用轻链构筑体)、单结构域抗体、骆驼化抗体及诸如此类。其亦可具有或源自任一同型，包括例如IgA(例如IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM。在一些实施例中，抗45抗体系IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。
在一些实施例中，包含Ab1之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含重链恒定区及/或轻链恒定区。在一些实施例中，恒定区系人类IgG1恒定区、人类IgG2恒定区、人类IgG3恒定区或人类IgG4恒定区。在一些实施例中，重链恒定区可为经修饰恒定区。例示性恒定区取代及/或修饰阐述于本文中，且包括(但不限于)以下位置中之一或多者处之取代：234、235、265及435(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含Ab1之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含含有以下取代中之一或多者之IgG1重链恒定区：L234A、L235A、D265C及H435A(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含Ab1之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105或SEQID NO:106中所示之重链恒定区。在一些实施例中抗体包含SEQ ID NO:101中所示之轻链恒定区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:9中所示之胺基酸序列之重链。在某些实施例中，抗体包含经修饰重链(HC)区，该经修饰重链区包含含有SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:9变异体之HC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:9之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:9之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:9之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ IDNO:9至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab1之特异性)，或具有相对于另一Ab1重链区之生物活性增强的生物活性。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:10中所示之胺基酸序列之轻链。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)区，该经修饰轻链区包含含有SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:10变异体之LC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:10之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:10之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:10之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:10至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab1之特异性)，或具有相对于另一Ab1轻链区之生物活性增强的生物活性。
在一些实施例中，包含Ab1之CDR区及/或可变区之抗体可纳入抗体-药物结合物中，如本文所述。另外，包含Ab1之CDR区及/或可变区之抗体可用于本文所述之方法中，例如用于耗尽个体中之CD45+细胞。
Ab2
抗体2(Ab2)与人类CD45、食蟹猴CD45及恒河猴CD45交叉反应，且可结合人类CD45之多个同功型。
抗CD45 Ab2之各个结合区之胺基酸序列阐述于表27中。本发明包括例如包含如表27中所示之CDR之基于Ab2之抗CD45抗体。
在一个实施例中，本发明提供抗CD45抗体或其抗原结合片段，其包含抗原结合区，例如对应于Ab2之彼等CDR及/或可变区之CDR及/或可变区。Ab2之重链可变区(VH)胺基酸序列示于SEQ ID NO:11中(参见表27)。Ab2之VH CDR结构域胺基酸序列示于SEQ ID NO:12(VHCDR1)；SEQ ID NO:13(VH CDR2)及SEQ ID NO:14(VH CDR3)中。Ab2之轻链可变区(VL)胺基酸序列阐述于SEQ ID NO:15中(参见表27)。Ab2之VL CDR结构域胺基酸序列示于SEQ IDNO:16(VL CDR1)；SEQ ID NO:17(VL CDR2)及SEQ ID NO:18(VL CDR3)中。
因此，在一些实施例中本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，该重链可变区包含含有如SEQ ID NO:12中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQID NO:13中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:14中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及/或轻链可变区，该轻链可变区包含含有如SEQ ID NO:16中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:17中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQID NO:18中所示之胺基酸序列之CDR3结构域。在某些实施例中，抗CD45抗体包含本文所述之CDR(SEQ ID NO:12至14及16至18)，其中CDR包含保守胺基酸取代(或2个、3个、4个或5个胺基酸取代)，同时保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab2之特异性)。
在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含含有如SEQ IDNO:11中所示之胺基酸序列之重链可变区，及/或含有如SEQ ID NO:15中所示之胺基酸序列之轻链可变区。在某些实施例中，抗体可包含经修饰重链(HC)可变区，该经修饰重链可变区包含含有SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:11变异体之HC可变结构域，该变异体(i)与SEQ IDNO:11之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:11之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ IDNO:11之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:11至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab2之特异性)，或具有相对于另一Ab2重链可变区之生物活性增强的生物活性。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)可变区，该经修饰轻链可变区包含含有SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:15变异体之LC可变结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:15之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:15之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:15之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:15至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab2之特异性)，或具有相对于另一Ab2轻链可变区之生物活性增强的生物活性。
包含Ab2之CDR及/或可变区序列之抗体可呈全长抗体、双特异性抗体、双可变结构域抗体、多链或单链抗体及/或特异性结合人类CD45之结合片段之形式，包括(但不限于)Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、scFv(单链Fv)、替代抗体(包括代用轻链构筑体)、单结构域抗体、骆驼化抗体及诸如此类。其亦可具有或源自任一同型，包括例如IgA(例如IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM。在一些实施例中，抗45抗体系IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。
在一些实施例中，包含Ab2之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含重链恒定区及/或轻链恒定区。在一些实施例中，恒定区系人类IgG1恒定区、人类IgG2恒定区、人类IgG3恒定区或人类IgG4恒定区。在一些实施例中，重链恒定区可为经修饰恒定区。例示性恒定区取代及/或修饰阐述于本文中，且包括(但不限于)以下位置中之一或多者处之取代：234、235、265及435(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含Ab2之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含含有以下取代中之一或多者之IgG1重链恒定区：L234A、L235A、D265C及H435A(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含Ab2之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105或SEQID NO:106中所示之重链恒定区。在一些实施例中抗体包含SEQ ID NO:101中所示之轻链恒定区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:19中所示之胺基酸序列之重链。在某些实施例中，抗体包含经修饰重链(HC)区，该经修饰重链区包含含有SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:19变异体之HC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:19之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:19之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:19之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:19至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab2之特异性)，或具有相对于另一Ab2重链区之生物活性增强的生物活性。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:20中所示之胺基酸序列之轻链。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)区，该经修饰轻链区包含含有SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:20变异体之LC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:20之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:20之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:20之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:20至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab2之特异性)，或具有相对于另一Ab2轻链区之生物活性增强的生物活性。
在一些实施例中，包含Ab2之CDR区及/或可变区之抗体可纳入抗体-药物结合物中，如本文所述。另外，包含Ab2之CDR区及/或可变区之抗体可用于本文所述之方法中，例如用于耗尽个体中之CD45+细胞。
Ab3
抗体3(Ab3)与人类CD45、食蟹猴CD45及恒河猴CD45交叉反应，且可结合人类CD45之多个同功型。
抗CD45 Ab3之各个结合区之胺基酸序列阐述于表27中。本发明包括例如包含如表27中所示之CDR之基于Ab3之抗CD45抗体。
在一个实施例中，本发明提供抗CD45抗体或其抗原结合片段，其包含抗原结合区，例如对应于Ab3之彼等CDR及/或可变区之CDR及/或可变区。Ab3之重链可变区(VH)胺基酸序列示于SEQ ID NO:21中(参见表27)。Ab3之VH CDR结构域胺基酸序列示于SEQ ID NO:22(VHCDR1)；SEQ ID NO:23(VH CDR2)及SEQ ID NO:24(VH CDR3)中。Ab3之轻链可变区(VL)胺基酸序列阐述于SEQ ID NO:25中(参见表27)。Ab3之VL CDR结构域胺基酸序列示于SEQ IDNO:26(VL CDR1)；SEQ ID NO:27(VL CDR2)及SEQ ID NO:28(VL CDR3)中。
因此，在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，该重链可变区包含含有如SEQ ID NO:22中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQID NO:23中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:24中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及/或轻链可变区，该轻链可变区包含含有如SEQ ID NO:26中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:27中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQID NO:28中所示之胺基酸序列之CDR3结构域。在某些实施例中，抗CD45抗体包含本文所述之CDR(SEQ ID NO:22至24及26至28)，其中CDR包含保守胺基酸取代(或2个、3个、4个或5个胺基酸取代)，同时保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab3之特异性)。
在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含含有如SEQ IDNO:21中所示之胺基酸序列之重链可变区，及/或含有如SEQ ID NO:25中所示之胺基酸序列之轻链可变区。在某些实施例中，抗体可包含经修饰重链(HC)可变区，该经修饰重链可变区包含含有SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:21变异体之HC可变结构域，该变异体(i)与SEQ IDNO:21之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:21之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ IDNO:21之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:21至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab3之特异性)，或具有相对于另一Ab3重链可变区之生物活性增强的生物活性。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)可变区，该经修饰轻链可变区包含含有SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:25变异体之LC可变结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:25之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:25之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:25之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:25至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab3之特异性)，或具有相对于另一Ab3轻链可变区之生物活性增强的生物活性。
包含Ab3之CDR及/或可变区序列之抗体可呈全长抗体、双特异性抗体、双可变结构域抗体、多链或单链抗体及/或特异性结合人类CD45之结合片段之形式，包括(但不限于)Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、scFv(单链Fv)、替代抗体(包括代用轻链构筑体)、单结构域抗体、骆驼化抗体及诸如此类。其亦可具有或源自任一同型，包括例如IgA(例如IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM。在一些实施例中，抗45抗体系IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。
在一些实施例中，包含Ab3之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含重链恒定区及/或轻链恒定区。在一些实施例中，恒定区系人类IgG1恒定区、人类IgG2恒定区、人类IgG3恒定区或人类IgG4恒定区。在一些实施例中，重链恒定区可为经修饰恒定区。例示性恒定区取代及/或修饰阐述于本文中，且包括(但不限于)以下位置中之一或多者处之取代：234、235、265及435(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含Ab3之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含含有以下取代中之一或多者之IgG1重链恒定区：L234A、L235A、D265C及H435A(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含Ab3之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105或SEQID NO:106中所示之重链恒定区。在一些实施例中抗体包含SEQ ID NO:101中所示之轻链恒定区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:29中所示之胺基酸序列之重链。在某些实施例中，抗体包含经修饰重链(HC)区，该经修饰重链区包含含有SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:29变异体之HC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:29之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:29之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:29之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:29至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab3之特异性)，或具有相对于另一Ab3重链区之生物活性增强的生物活性。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:30中所示之胺基酸序列之轻链。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)区，该经修饰轻链区包含含有SEQ ID NO:30或SEQ ID NO:30变异体之LC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:30之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:30之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:30之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:30至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab3之特异性)，或具有相对于另一Ab3轻链区之生物活性增强的生物活性。
在一些实施例中，包含Ab3之CDR区及/或可变区之抗体可纳入抗体-药物结合物中，如本文所述。另外，包含Ab3之CDR区及/或可变区之抗体可用于本文所述之方法中，例如用于耗尽个体中之CD45+细胞。
Ab4
抗体4(Ab4)与人类CD45、食蟹猴CD45及恒河猴CD45交叉反应，且可结合人类CD45之多个同功型。
抗CD45 Ab4之各个结合区之胺基酸序列阐述于表27中。本发明包括例如包含如表27中所示之CDR之基于Ab4之抗CD45抗体。
在一个实施例中，本发明提供抗CD45抗体或其抗原结合片段，其包含抗原结合区，例如对应于Ab4之彼等CDR及/或可变区之CDR及/或可变区。Ab4之重链可变区(VH)胺基酸序列示于SEQ ID NO:31中(参见表27)。Ab4之VH CDR结构域胺基酸序列示于SEQ ID NO:32(VHCDR1)；SEQ ID NO:33(VH CDR2)及SEQ ID NO:34(VH CDR3)中。Ab4之轻链可变区(VL)胺基酸序列阐述于SEQ ID NO:35中(参见表27)。Ab4之VL CDR结构域胺基酸序列示于SEQ IDNO:36(VL CDR1)；SEQ ID NO:37(VL CDR2)及SEQ ID NO:38(VL CDR3)中。
因此，在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，该重链可变区包含含有如SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQID NO:33中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:34中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及/或轻链可变区，该轻链可变区包含含有如SEQ ID NO:36中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:37中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQID NO:38中所示之胺基酸序列之CDR3结构域。在某些实施例中，抗CD45抗体包含本文所述之CDR(SEQ ID NO:32至34及36至38)，其中CDR包含保守胺基酸取代(或2个、3个、4个或5个胺基酸取代)，同时保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab4之特异性)。
在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含含有如SEQ IDNO:31中所示之胺基酸序列之重链可变区，及/或含有如SEQ ID NO:35中所示之胺基酸序列之轻链可变区。在某些实施例中，抗体可包含经修饰重链(HC)可变区，该经修饰重链可变区包含含有SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:31变异体之HC可变结构域，该变异体(i)与SEQ IDNO:31之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:31之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ IDNO:31之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:31至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab4之特异性)，或具有相对于另一Ab4重链可变区之生物活性增强的生物活性。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)可变区，该经修饰轻链可变区包含含有SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:35变异体之LC可变结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:35之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:35之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:35之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:35至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab4之特异性)，或具有相对于另一Ab4轻链可变区之生物活性增强的生物活性。
包含Ab4之CDR及/或可变区序列之抗体可呈全长抗体、双特异性抗体、双可变结构域抗体、多链或单链抗体及/或特异性结合人类CD45之结合片段之形式，包括(但不限于)Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、scFv(单链Fv)、替代抗体(包括代用轻链构筑体)、单结构域抗体、骆驼化抗体及诸如此类。其亦可具有或源自任一同型，包括例如IgA(例如IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM。在一些实施例中，抗45抗体系IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。
在一些实施例中，包含Ab4之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含重链恒定区及/或轻链恒定区。在一些实施例中，恒定区系人类IgG1恒定区、人类IgG2恒定区、人类IgG3恒定区或人类IgG4恒定区。在一些实施例中，重链恒定区可为经修饰恒定区。例示性恒定区取代及/或修饰阐述于本文中，且包括(但不限于)以下位置中之一或多者处之取代：234、235、265及435(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含Ab4之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含含有以下取代中之一或多者之IgG1重链恒定区：L234A、L235A、D265C及H435A(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含Ab4之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105或SEQID NO:106中所示之重链恒定区。在一些实施例中抗体包含SEQ ID NO:101中所示之轻链恒定区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:39中所示之胺基酸序列之重链。在某些实施例中，抗体包含经修饰重链(HC)区，该经修饰重链区包含含有SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:39变异体之HC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:39之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:39之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:39之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:39至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab4之特异性)，或具有相对于另一Ab4重链区之生物活性增强的生物活性。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:40中所示之胺基酸序列之轻链。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)区，该经修饰轻链区包含含有SEQ ID NO:40或SEQ ID NO:40变异体之LC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:40之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:40之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:40之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:40至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab4之特异性)，或具有相对于另一Ab4轻链区之生物活性增强的生物活性。
在一些实施例中，包含Ab4之CDR区及/或可变区之抗体可纳入抗体-药物结合物中，如本文所述。另外，包含Ab4之CDR区及/或可变区之抗体可用于本文所述之方法中，例如用于耗尽个体中之CD45+细胞。
Ab5
抗体5(Ab5)与人类CD45、食蟹猴CD45及恒河猴CD45交叉反应，且可结合人类CD45之多个同功型。
抗CD45 Ab5之各个结合区之胺基酸序列阐述于表27中。本发明包括例如包含如表27中所示之CDR之基于Ab5之抗CD45抗体。
在一个实施例中，本发明提供抗CD45抗体或其抗原结合片段，其包含抗原结合区，例如对应于Ab5之彼等CDR及/或可变区之CDR及/或可变区。Ab5之重链可变区(VH)胺基酸序列示于SEQ ID NO:41中(参见表27)。Ab5之VH CDR结构域胺基酸序列示于SEQ ID NO:42(VHCDR1)；SEQ ID NO:43(VH CDR2)及SEQ ID NO:44(VH CDR3)中。Ab5之轻链可变区(VL)胺基酸序列阐述于SEQ ID NO:45中(参见表27)。Ab5之VL CDR结构域胺基酸序列示于SEQ IDNO:46(VL CDR1)；SEQ ID NO:47(VL CDR2)及SEQ ID NO:48(VL CDR3)中。
因此，在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，该重链可变区包含含有如SEQ ID NO:42中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQID NO:43中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:44中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及/或轻链可变区，该轻链可变区包含含有如SEQ ID NO:46中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:47中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQID NO:48中所示之胺基酸序列之CDR3结构域。在某些实施例中，抗CD45抗体包含本文所述之CDR(SEQ ID NO:42至44及46至48)，其中CDR包含保守胺基酸取代(或2个、3个、4个或5个胺基酸取代)，同时保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab5之特异性)。
在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含含有如SEQ IDNO:41中所示之胺基酸序列之重链可变区，及/或含有如SEQ ID NO:45中所示之胺基酸序列之轻链可变区。在某些实施例中，抗体可包含经修饰重链(HC)可变区，该经修饰重链可变区包含含有SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:41变异体之HC可变结构域，该变异体(i)与SEQ IDNO:41之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:41之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ IDNO:41之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:41至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab5之特异性)，或具有相对于另一Ab5重链可变区之生物活性增强的生物活性。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)可变区，该经修饰轻链可变区包含含有SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:45变异体之LC可变结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:45之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:45之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:45之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:45至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab5之特异性)，或具有相对于另一Ab5轻链可变区之生物活性增强的生物活性。
包含Ab5之CDR及/或可变区序列之抗体可呈全长抗体、双特异性抗体、双可变结构域抗体、多链或单链抗体及/或特异性结合人类CD45之结合片段之形式，包括(但不限于)Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、scFv(单链Fv)、替代抗体(包括代用轻链构筑体)、单结构域抗体、骆驼化抗体及诸如此类。其亦可具有或源自任一同型，包括例如IgA(例如IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM。在一些实施例中，抗45抗体系IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。
在一些实施例中，包含Ab5之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含重链恒定区及/或轻链恒定区。在一些实施例中，恒定区系人类IgG1恒定区、人类IgG2恒定区、人类IgG3恒定区或人类IgG4恒定区。在一些实施例中，重链恒定区可为经修饰恒定区。例示性恒定区取代及/或修饰阐述于本文中，且包括(但不限于)以下位置中之一或多者处之取代：234、235、265及435(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含Ab5之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含含有以下取代中之一或多者之IgG1重链恒定区：L234A、L235A、D265C及H435A(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含Ab5之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105或SEQID NO:106中所示之重链恒定区。在一些实施例中抗体包含SEQ ID NO:101中所示之轻链恒定区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:49中所示之胺基酸序列之重链。在某些实施例中，抗体包含经修饰重链(HC)区，该经修饰重链区包含含有SEQ ID NO:49或SEQ ID NO:9变异体之HC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:49之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:49之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:49之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:49至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab5之特异性)，或具有相对于另一Ab5重链区之生物活性增强的生物活性。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:50中所示之胺基酸序列之轻链。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)区，该经修饰轻链区包含含有SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:50变异体之LC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:50之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:50之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:50之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:50至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab5之特异性)，或具有相对于另一Ab5轻链区之生物活性增强的生物活性。
在一些实施例中，包含Ab5之CDR区及/或可变区之抗体可纳入抗体-药物结合物中，如本文所述。另外，包含Ab5之CDR区及/或可变区之抗体可用于本文所述之方法中，例如用于耗尽个体中之CD45+细胞。
Ab6
抗体6(Ab6)与人类CD45、食蟹猴CD45及恒河猴CD45交叉反应，且可结合人类CD45之多个同功型。
抗CD45 Ab6之各个结合区之胺基酸序列阐述于表27中。本发明包括例如包含如表27中所示之CDR之基于Ab6之抗CD45抗体。
在一个实施例中，本发明提供抗CD45抗体或其抗原结合片段，其包含抗原结合区，例如对应于Ab6之彼等CDR及/或可变区之CDR及/或可变区。Ab6之重链可变区(VH)胺基酸序列示于SEQ ID NO:51中(参见表27)。Ab6之VH CDR结构域胺基酸序列示于SEQ ID NO:52(VHCDR1)；SEQ ID NO:53(VH CDR2)及SEQ ID NO:54(VH CDR3)中。Ab6之轻链可变区(VL)胺基酸序列阐述于SEQ ID NO:55中(参见表27)。Ab6之VL CDR结构域胺基酸序列示于SEQ IDNO:56(VL CDR1)；SEQ ID NO:57(VL CDR2)及SEQ ID NO:58(VL CDR3)中。
因此，在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，该重链可变区包含含有如SEQ ID NO:52中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQID NO:53中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:54中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及/或轻链可变区，该轻链可变区包含含有如SEQ ID NO:56中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:57中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQID NO:58中所示之胺基酸序列之CDR3结构域。在某些实施例中，抗CD45抗体包含本文所述之CDR(SEQ ID NO:52至54及56至58)，其中CDR包含保守胺基酸取代(或2个、3个、4个或5个胺基酸取代)，同时保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab6之特异性)。
在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含含有如SEQ IDNO:51中所示之胺基酸序列之重链可变区，及/或含有如SEQ ID NO:55中所示之胺基酸序列之轻链可变区。在某些实施例中，抗体可包含经修饰重链(HC)可变区，该经修饰重链可变区包含含有SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:51变异体之HC可变结构域，该变异体(i)与SEQ IDNO:51之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:51之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ IDNO:51之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:51至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab6之特异性)，或具有相对于另一Ab6重链可变区之生物活性增强的生物活性。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)可变区，该经修饰轻链可变区包含含有SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:55变异体之LC可变结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:55之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:55之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:55之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:55至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab6之特异性)，或具有相对于另一Ab6轻链可变区之生物活性增强的生物活性。
包含Ab6之CDR及/或可变区序列之抗体可呈全长抗体、双特异性抗体、双可变结构域抗体、多链或单链抗体及/或特异性结合人类CD45之结合片段之形式，包括(但不限于)Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、scFv(单链Fv)、替代抗体(包括代用轻链构筑体)、单结构域抗体、骆驼化抗体及诸如此类。其亦可具有或源自任一同型，包括例如IgA(例如IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM。在一些实施例中，抗45抗体系IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。
在一些实施例中，包含Ab6之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含重链恒定区及/或轻链恒定区。在一些实施例中，恒定区系人类IgG1恒定区、人类IgG2恒定区、人类IgG3恒定区或人类IgG4恒定区。在一些实施例中，重链恒定区可为经修饰恒定区。例示性恒定区取代及/或修饰阐述于本文中，且包括(但不限于)以下位置中之一或多者处之取代：234、235、265及435(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含Ab6之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含含有以下取代中之一或多者之IgG1重链恒定区：L234A、L235A、D265C及H435A(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含Ab6之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105或SEQID NO:106中所示之重链恒定区。在一些实施例中抗体包含SEQ ID NO:101中所示之轻链恒定区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:59中所示之胺基酸序列之重链。在某些实施例中，抗体包含经修饰重链(HC)区，该经修饰重链区包含含有SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:59变异体之HC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:59之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:59之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:59之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:59至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab6之特异性)，或具有相对于另一Ab6重链区之生物活性增强的生物活性。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:60中所示之胺基酸序列之轻链。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)区，该经修饰轻链区包含含有SEQ ID NO:60或SEQ ID NO:60变异体之LC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:60之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:60之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:60之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:60至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab6之特异性)，或具有相对于另一Ab6轻链区之生物活性增强的生物活性。
在一些实施例中，包含Ab6之CDR区及/或可变区之抗体可纳入抗体-药物结合物中，如本文所述。另外，包含Ab6之CDR区及/或可变区之抗体可用于本文所述之方法中，例如用于耗尽个体中之CD45+细胞。
Ab7
抗体7(Ab7)与人类CD45、食蟹猴CD45及恒河猴CD45交叉反应，且可结合人类CD45之多个同功型。
抗CD45 Ab7之各个结合区之胺基酸序列阐述于表27中。本发明包括例如包含如表27中所示之CDR之基于Ab7之抗CD45抗体。
在一个实施例中，本发明提供抗CD45抗体或其抗原结合片段，其包含抗原结合区，例如对应于Ab7之彼等CDR及/或可变区之CDR及/或可变区。Ab7之重链可变区(VH)胺基酸序列示于SEQ ID NO:61中(参见表27)。Ab7之VH CDR结构域胺基酸序列示于SEQ ID NO:62(VHCDR1)；SEQ ID NO:63(VH CDR2)及SEQ ID NO:64(VH CDR3)中。Ab7之轻链可变区(VL)胺基酸序列阐述于SEQ ID NO:65中(参见表27)。Ab7之VL CDR结构域胺基酸序列示于SEQ IDNO:66(VL CDR1)；SEQ ID NO:67(VL CDR2)及SEQ ID NO:68(VL CDR3)中。
因此，在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，该重链可变区包含含有如SEQ ID NO:62中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQID NO:63中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:64中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及/或轻链可变区，该轻链可变区包含含有如SEQ ID NO:66中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:67中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQID NO:68中所示之胺基酸序列之CDR3结构域。在某些实施例中，抗CD45抗体包含本文所述之CDR(SEQ ID NO:62至64及66至68)，其中CDR包含保守胺基酸取代(或2个、3个、4个或5个胺基酸取代)，同时保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab7之特异性)。
在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含含有如SEQ IDNO:61中所示之胺基酸序列之重链可变区，及/或含有如SEQ ID NO:65中所示之胺基酸序列之轻链可变区。在某些实施例中，抗体可包含经修饰重链(HC)可变区，该经修饰重链可变区包含含有SEQ ID NO:61或SEQ ID NO:61变异体之HC可变结构域，该变异体(i)与SEQ IDNO:61之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:61之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ IDNO:61之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:61至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab7之特异性)，或具有相对于另一Ab7重链可变区之生物活性增强的生物活性。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)可变区，该经修饰轻链可变区包含含有SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:65变异体之LC可变结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:65之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:65之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:65之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:65至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab7之特异性)，或具有相对于另一Ab7轻链可变区之生物活性增强的生物活性。
包含Ab7之CDR及/或可变区序列之抗体可呈全长抗体、双特异性抗体、双可变结构域抗体、多链或单链抗体及/或特异性结合人类CD45之结合片段之形式，包括(但不限于)Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、scFv(单链Fv)、替代抗体(包括代用轻链构筑体)、单结构域抗体、骆驼化抗体及诸如此类。其亦可具有或源自任一同型，包括例如IgA(例如IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM。在一些实施例中，抗45抗体系IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。
在一些实施例中，包含Ab7之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含重链恒定区及/或轻链恒定区。在一些实施例中，恒定区系人类IgG1恒定区、人类IgG2恒定区、人类IgG3恒定区或人类IgG4恒定区。在一些实施例中，重链恒定区可为经修饰恒定区。例示性恒定区取代及/或修饰阐述于本文中，且包括(但不限于)以下位置中之一或多者处之取代：234、235、265及435(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含Ab7之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含含有以下取代中之一或多者之IgG1重链恒定区：L234A、L235A、D265C及H435A(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含Ab7之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105或SEQID NO:106中所示之重链恒定区。在一些实施例中抗体包含SEQ ID NO:101中所示之轻链恒定区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:69中所示之胺基酸序列之重链。在某些实施例中，抗体包含经修饰重链(HC)区，该经修饰重链区包含含有SEQ ID NO:69或SEQ ID NO:69变异体之HC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:9之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:69之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:69之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:69至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab7之特异性)，或具有相对于另一Ab7重链区之生物活性增强的生物活性。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:70中所示之胺基酸序列之轻链。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)区，该经修饰轻链区包含含有SEQ ID NO:70或SEQ ID NO:70变异体之LC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:70之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:70之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:70之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:70至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链区保留抗体之CD45特异性(即类似于Ab7之特异性)，或具有相对于另一Ab7轻链区之生物活性增强的生物活性。
在一些实施例中，包含Ab7之CDR区及/或可变区之抗体可纳入抗体-药物结合物中，如本文所述。另外，包含Ab7之CDR区及/或可变区之抗体可用于本文所述之方法中，例如用于耗尽个体中之CD45+细胞。
AbA
抗体A(AbA)与人类CD45、食蟹猴CD45及恒河猴CD45交叉反应，且可结合人类CD45之多个同功型。
抗CD45 AbA之各个结合区之胺基酸序列阐述于表27中。本发明包括例如包含如表27中所示之CDR之基于AbA之抗CD45抗体。
在一个实施例中，本发明提供抗CD45抗体或其抗原结合片段，其包含抗原结合区，例如对应于AbA之彼等CDR及/或可变区之CDR及/或可变区。AbA之重链可变区(VH)胺基酸序列示于SEQ ID NO:71中(参见表27)。AbA之VH CDR结构域胺基酸序列示于SEQ ID NO:72(VHCDR1)；SEQ ID NO:73(VH CDR2)及SEQ ID NO:74(VH CDR3)中。AbA之轻链可变区(VL)胺基酸序列阐述于SEQ ID NO:75中(参见表27)。AbA之VL CDR结构域胺基酸序列示于SEQ IDNO:76(VL CDR1)；SEQ ID NO:77(VL CDR2)及SEQ ID NO:78(VL CDR3)中。
因此，在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，该重链可变区包含含有如SEQ ID NO:72中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQID NO:73中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:74中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及/或轻链可变区，该轻链可变区包含含有如SEQ ID NO:76中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:77中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQID NO:78中所示之胺基酸序列之CDR3结构域。在某些实施例中，抗CD45抗体包含本文所述之CDR(SEQ ID NO:72至74及76至78)，其中CDR包含保守胺基酸取代(或2个、3个、4个或5个胺基酸取代)，同时保留抗体之CD45特异性(即类似于AbA之特异性)。
在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含含有如SEQ IDNO:71中所示之胺基酸序列之重链可变区，及/或含有如SEQ ID NO:75中所示之胺基酸序列之轻链可变区。在某些实施例中，抗体可包含经修饰重链(HC)可变区，该经修饰重链可变区包含含有SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:71变异体之HC可变结构域，该变异体(i)与SEQ IDNO:71之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:71之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ IDNO:71之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:71至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于AbA之特异性)，或具有相对于另一AbA重链可变区之生物活性增强的生物活性。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)可变区，该经修饰轻链可变区包含含有SEQ ID NO:75或SEQ ID NO:75变异体之LC可变结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:75之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:75之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:75之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:75至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于AbA之特异性)，或具有相对于另一AbA轻链可变区之生物活性增强的生物活性。
包含AbA之CDR及/或可变区序列之抗体可呈全长抗体、双特异性抗体、双可变结构域抗体、多链或单链抗体及/或特异性结合人类CD45之结合片段之形式，包括(但不限于)Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、scFv(单链Fv)、替代抗体(包括代用轻链构筑体)、单结构域抗体、骆驼化抗体及诸如此类。其亦可具有或源自任一同型，包括例如IgA(例如IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM。在一些实施例中，抗45抗体系IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。
在一些实施例中，包含AbA之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含重链恒定区及/或轻链恒定区。在一些实施例中，恒定区系人类IgG1恒定区、人类IgG2恒定区、人类IgG3恒定区或人类IgG4恒定区。在一些实施例中，重链恒定区可为经修饰恒定区。例示性恒定区取代及/或修饰阐述于本文中，且包括(但不限于)以下位置中之一或多者处之取代：234、235、265及435(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含AbA之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含含有以下取代中之一或多者之IgG1重链恒定区：L234A、L235A、D265C及H435A(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含AbA之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105或SEQID NO:106中所示之重链恒定区。在一些实施例中抗体包含SEQ ID NO:101中所示之轻链恒定区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:79中所示之胺基酸序列之重链。在某些实施例中，抗体包含经修饰重链(HC)区，该经修饰重链区包含含有SEQ ID NO:79或SEQ ID NO:79变异体之HC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:79之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:79之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:79之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:79至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链区保留抗体之CD45特异性(即类似于AbA之特异性)，或具有相对于另一AbA重链区之生物活性增强的生物活性。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:80中所示之胺基酸序列之轻链。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)区，该经修饰轻链区包含含有SEQ ID NO:80或SEQ ID NO:80变异体之LC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:80之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:80之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:80之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:80至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链区保留抗体之CD45特异性(即类似于AbA之特异性)，或具有相对于另一AbA轻链区之生物活性增强的生物活性。
在一些实施例中，包含AbA之CDR区及/或可变区之抗体可纳入抗体-药物结合物中，如本文所述。另外，包含AbA之CDR区及/或可变区之抗体可用于本文所述之方法中，例如用于耗尽个体中之CD45+细胞。
AbB
抗体B(AbB)与人类CD45、食蟹猴CD45及恒河猴CD45交叉反应，且可结合人类CD45之多个同功型。
抗CD45 AbB之各个结合区之胺基酸序列阐述于表27中。本发明包括例如包含如表27中所示之CDR之基于AbB之抗CD45抗体。
在一个实施例中，本发明提供抗CD45抗体或其抗原结合片段，其包含抗原结合区，例如对应于AbB之彼等CDR及/或可变区之CDR及/或可变区。AbB之重链可变区(VH)胺基酸序列示于SEQ ID NO:81中(参见表27)。AbB之VH CDR结构域胺基酸序列示于SEQ ID NO:82(VHCDR1)；SEQ ID NO:83(VH CDR2)及SEQ ID NO:84(VH CDR3)中。AbB之轻链可变区(VL)胺基酸序列阐述于SEQ ID NO:85中(参见表27)。AbB之VL CDR结构域胺基酸序列示于SEQ IDNO:86(VL CDR1)；SEQ ID NO:87(VL CDR2)及SEQ ID NO:88(VL CDR3)中。
因此，在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，该重链可变区包含含有如SEQ ID NO:82中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQID NO:83中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:84中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及/或轻链可变区，该轻链可变区包含含有如SEQ ID NO:86中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:87中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQID NO:88中所示之胺基酸序列之CDR3结构域。在某些实施例中，抗CD45抗体包含本文所述之CDR(SEQ ID NO:82至84及86至88)，其中CDR包含保守胺基酸取代(或2个、3个、4个或5个胺基酸取代)，同时保留抗体之CD45特异性(即类似于AbB之特异性)。
在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含含有如SEQ IDNO:81中所示之胺基酸序列之重链可变区，及/或含有如SEQ ID NO:85中所示之胺基酸序列之轻链可变区。在某些实施例中，抗体可包含经修饰重链(HC)可变区，该经修饰重链可变区包含含有SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:81变异体之HC可变结构域，该变异体(i)与SEQ IDNO:81之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:81之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ IDNO:81之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:81至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于AbB之特异性)，或具有相对于另一AbB重链可变区之生物活性增强的生物活性。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)可变区，该经修饰轻链可变区包含含有SEQ ID NO:85或SEQ ID NO:85变异体之LC可变结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:85之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:85之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:85之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:85至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于AbB之特异性)，或具有相对于另一AbB轻链可变区之生物活性增强的生物活性。
包含AbB之CDR及/或可变区序列之抗体可呈全长抗体、双特异性抗体、双可变结构域抗体、多链或单链抗体及/或特异性结合人类CD45之结合片段之形式，包括(但不限于)Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、scFv(单链Fv)、替代抗体(包括代用轻链构筑体)、单结构域抗体、骆驼化抗体及诸如此类。其亦可具有或源自任一同型，包括例如IgA(例如IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM。在一些实施例中，抗45抗体系IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。
在一些实施例中，包含AbB之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含重链恒定区及/或轻链恒定区。在一些实施例中，恒定区系人类IgG1恒定区、人类IgG2恒定区、人类IgG3恒定区或人类IgG4恒定区。在一些实施例中，重链恒定区可为经修饰恒定区。例示性恒定区取代及/或修饰阐述于本文中，且包括(但不限于)以下位置中之一或多者处之取代：234、235、265及435(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含AbB之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含含有以下取代中之一或多者之IgG1重链恒定区：L234A、L235A、D265C及H435A(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含AbB之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105或SEQID NO:106中所示之重链恒定区。在一些实施例中抗体包含SEQ ID NO:101中所示之轻链恒定区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:89中所示之胺基酸序列之重链。在某些实施例中，抗体包含经修饰重链(HC)区，该经修饰重链区包含含有SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:89变异体之HC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:89之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:89之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:89之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:89至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链区保留抗体之CD45特异性(即类似于AbB之特异性)，或具有相对于另一AbB重链区之生物活性增强的生物活性。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:90中所示之胺基酸序列之轻链。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)区，该经修饰轻链区包含含有SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:90变异体之LC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:90之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:90之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:90之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:90至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链区保留抗体之CD45特异性(即类似于AbB之特异性)，或具有相对于另一AbB轻链区之生物活性增强的生物活性。
在一些实施例中，包含AbB之CDR区及/或可变区之抗体可纳入抗体-药物结合物中，如本文所述。另外，包含AbB之CDR区及/或可变区之抗体可用于本文所述之方法中，例如用于耗尽个体中之CD45+细胞。
AbC
抗体C(AbC)与人类CD45、食蟹猴CD45及恒河猴CD45交叉反应，且可结合人类CD45之多个同功型。
抗CD45 AbC之各个结合区之胺基酸序列阐述于表27中。本发明包括例如包含如表27中所示之CDR之基于AbC之抗CD45抗体。
在一个实施例中，本发明提供抗CD45抗体或其抗原结合片段，其包含抗原结合区，例如对应于AbC之彼等CDR及/或可变区之CDR及/或可变区。AbC之重链可变区(VH)胺基酸序列示于SEQ ID NO:91中(参见表27)。AbC之VH CDR结构域胺基酸序列示于SEQ ID NO:92(VHCDR1)；SEQ ID NO:93(VH CDR2)及SEQ ID NO:94(VH CDR3)中。AbC之轻链可变区(VL)胺基酸序列阐述于SEQ ID NO:95中(参见表27)。AbC之VL CDR结构域胺基酸序列示于SEQ IDNO:96(VL CDR1)；SEQ ID NO:97(VL CDR2)及SEQ ID NO:98(VL CDR3)中。
因此，在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，该重链可变区包含含有如SEQ ID NO:92中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQID NO:93中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:94中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及/或轻链可变区，该轻链可变区包含含有如SEQ ID NO:96中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:97中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQID NO:98中所示之胺基酸序列之CDR3结构域。在某些实施例中，抗CD45抗体包含本文所述之CDR(SEQ ID NO:92至94及96至98)，其中CDR包含保守胺基酸取代(或2个、3个、4个或5个胺基酸取代)，同时保留抗体之CD45特异性(即类似于AbC之特异性)。
在一些实施例中，本文提供抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含含有如SEQ IDNO:991中所示之胺基酸序列之重链可变区，及/或含有如SEQ ID NO:95中所示之胺基酸序列之轻链可变区。在某些实施例中，抗体可包含经修饰重链(HC)可变区，该经修饰重链可变区包含含有SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:91变异体之HC可变结构域，该变异体(i)与SEQ IDNO:91之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:91之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ IDNO:91之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:91至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于AbC之特异性)，或具有相对于另一AbC重链可变区之生物活性增强的生物活性。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)可变区，该经修饰轻链可变区包含含有SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:95变异体之LC可变结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:95之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:95之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:95之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:95至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链可变区保留抗体之CD45特异性(即类似于AbC之特异性)，或具有相对于另一AbC轻链可变区之生物活性增强的生物活性。
包含AbC之CDR及/或可变区序列之抗体可呈全长抗体、双特异性抗体、双可变结构域抗体、多链或单链抗体及/或特异性结合人类CD45之结合片段之形式，包括(但不限于)Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、scFv(单链Fv)、替代抗体(包括代用轻链构筑体)、单结构域抗体、骆驼化抗体及诸如此类。其亦可具有或源自任一同型，包括例如IgA(例如IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM。在一些实施例中，抗45抗体系IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。
在一些实施例中，包含AbC之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含重链恒定区及/或轻链恒定区。在一些实施例中，恒定区系人类IgG1恒定区、人类IgG2恒定区、人类IgG3恒定区或人类IgG4恒定区。在一些实施例中，重链恒定区可为经修饰恒定区。例示性恒定区取代及/或修饰阐述于本文中，且包括(但不限于)以下位置中之一或多者处之取代：234、235、265及435(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含AbC之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含含有以下取代中之一或多者之IgG1重链恒定区：L234A、L235A、D265C及H435A(根据Kabat之EU索引)。在一些实施例中，包含AbC之CDR及/或可变区序列之抗体可进一步包含SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105或SEQID NO:106中所示之重链恒定区。在一些实施例中抗体包含SEQ ID NO:101中所示之轻链恒定区。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:99中所示之胺基酸序列之重链。在某些实施例中，抗体包含经修饰重链(HC)区，该经修饰重链区包含含有SEQ ID NO:99或SEQ ID NO:99变异体之HC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:99之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:99之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:99之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:99至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰重链区保留抗体之CD45特异性(即类似于AbC之特异性)，或具有相对于另一AbC重链区之生物活性增强的生物活性。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包含含有如SEQ ID NO:100中所示之胺基酸序列之轻链。在某些实施例中，抗体包含经修饰轻链(LC)区，该经修饰轻链区包含含有SEQ ID NO:100或SEQ ID NO:100变异体之LC结构域，该变异体(i)与SEQ ID NO:100之不同之处在于1个、2个、3个、4个或5个胺基酸取代、添加或缺失；(ii)与SEQ ID NO:100之不同之处在于至多5个、4个、3个、2个或1个胺基酸取代、添加或缺失；(iii)与SEQ ID NO:100之不同之处在于1-5个、1-3个、1-2个、2-5个或3-5个胺基酸取代、添加或缺失，及/或(iv)包含与SEQ ID NO:100至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致之胺基酸序列，其中在(i)-(iv)中之任一者中，胺基酸取代可为保守胺基酸取代或非保守胺基酸取代；且其中经修饰轻链区保留抗体之CD45特异性(即类似于AbC之特异性)，或具有相对于另一AbC轻链区之生物活性增强的生物活性。
在一些实施例中，包含AbC之CDR区及/或可变区之抗体可纳入抗体-药物结合物中，如本文所述。另外，包含AbC之CDR区及/或可变区之抗体可用于本文所述之方法中，例如用于耗尽个体中之CD45+细胞。
共有CDR
Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6及Ab7之CDR胺基酸序列之比较如图32提供。该等抗体结合至人类CD45上之相同抗原决定基，且在其CDR区中共享某些共有残基。共有的重链胺基酸CDR序列呈现于SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:120及SEQ ID NO:121中；且共有的轻链胺基酸CDR序列呈现于SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:123及SEQ ID NO:124中。
因此，在一些实施例中，本文提供经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，该重链可变区包含含有如SEQ ID NO:119中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:120中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:121中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，该轻链可变区包含含有如SEQ ID NO:122中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:123中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ ID NO:124中所示之胺基酸序列之CDR3结构域。在一些实施例中，前述抗体可进一步包含重链恒定区及/或轻链恒定区。举例而言，在一些实施例中，前述抗体可进一步包含选自SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105或SEQ ID NO:106中之任一者中所示之重链恒定区及/或SEQ ID NO:101中所示之轻链恒定区。
Fc经修饰之抗体
本文涵盖能够结合CD45且具有允许Fc沉默之Fc修饰之抗体或其抗原结合片段，其中该等抗体或其抗原结合片段可作为单独治疗剂使用或作为ADC用于耗尽有需要之患者中表现CD45之细胞。举例而言，在一些实施例中，本文所涵盖之该等抗体或其抗原结合片段可用于耗尽某些细胞类型，包括HSC及白血球。因此，在某些实施例中，本文所涵盖之抗体或其抗原结合片段可用于调理患者以进行HSC移植。在一些实施例中，本文所涵盖之抗体或其抗原结合片段可藉由例如耗尽患者中之HSC及白血球并向患者投与HSC移植物用于重设患者之免疫系统。在一些实施例中，本文所涵盖之抗体或其抗原结合片段可藉由自患者消除致病性CD45+细胞用于治疗与CD45阳性细胞相关之疾病，包括(但不限于)癌症及自体免疫疾病。
举例而言，本文涵盖能够结合造血干细胞表现之抗原(例如CD45)且具有允许Fc沉默之Fc修饰之抗体或其抗原结合片段，其中该等抗体或其抗原结合片段可作为单独治疗剂使用或作为ADC用于(i)治疗特征在于CD45+造血干细胞之癌症及自体免疫疾病；及(ii)促进移植的造血干细胞植入需要移植疗法之患者中。该等治疗活性可例如藉由结合抗CD45抗体或其抗原结合片段且随后诱导细胞死亡引起，该抗CD45抗体或其抗原结合片段结合至由造血细胞(例如造血干细胞或成熟免疫细胞(例如T细胞))表现之，例如癌细胞、自体免疫细胞或造血干细胞。内源造血干细胞之耗尽可提供移植的造血干细胞可归巢且随后建立生产性造血之生态位。以此方式，移植的造血干细胞可成功地植入患者中，例如患有本文所述之干细胞病症之人类患者。本文所涵盖Fc经修饰之抗体及ADC不仅允许选择性耗尽内源造血干细胞，且亦对外源造血干细胞移植物具有减小的细胞毒性效应，由此进一步促进造血干细胞移植物之植入。
本文所述之抗体或结合片段亦可包括改变抗体及/或片段之性质之修饰及/或突变，例如延长或缩短半衰期或增加或减小ADCC之彼等修饰及/或突变。在一个实施例中，提供包含一或多个经放射性标记之胺基酸之抗体。经放射性标记之抗体可用于诊断及治疗目的(结合至经放射性标记之分子系另一可能的特征)。用于多肽之标记之非限制性实例包括(但不限于)3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc及125I、131I及186Re。用于制备经放射性标记之胺基酸及相关肽衍生物之方法为此项技术中已知(参见例如Junghans等人，CancerChemotherapy and Biotherapy 655-686(第2版，Chafner及Longo编辑，Lippincott Raven(1996))及美国专利第4,681,581号、美国专利第4,735,210号、美国专利第5,101,827号、美国专利第5,102,990号(U.S.RE35,500)、美国专利第5,648,471号及美国专利第5,697,902号。举例而言，放射性同位素可藉由氯胺T方法结合。
在一个实施例中，抗CD45抗体或其结合片段包含经修饰Fc区，其中该经修饰Fc区相对于野生型Fc区包含至少一个胺基酸修饰，使得该分子具有改变的FcγR(FcγR)亲和力或与FcγR(FcγR)之结合。经由结晶学研究已知Fc区内之某些胺基酸位置以制造与FcγR之直接接触。特定而言，胺基酸234-239(铰链区)、胺基酸265-269(B/C环)、胺基酸297-299(C'/E环)及胺基酸327-332(F/G)环。(参见Sondermann等人，2000Nature,406:267-273)。本文所述之抗体可包含变异体Fc区，其包含基于结构及结晶学分析制造与FcγR之直接接触之至少一个残基之修饰。在一个实施例中，抗CD45抗体(或其片段)之Fc区包含根据如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public HealthService,NH1,MD(1991)中之EU索引之胺基酸265处之胺基酸取代，该文献以引用方式明确并入本文中。「如Kabat中之EU索引」系指人类IgG1 EU抗体之编号。在一个实施例中，Fc区包含D265A突变。在一个实施例中，Fc区包含D265C突变。在一些实施例中，抗体(或其片段)之Fc区包含根据如Kabat中之EU索引之胺基酸234处之胺基酸取代。
在一个实施例中，Fc区包含D265、V205、H435、I253及/或H310之胺基酸位置处之突变。举例而言，该等位置处之特定突变包括D265C、V205C、H435A、I253A及/或H310A。
在一个实施例中，Fc区包含L234A突变。在一些实施例中，抗CD45抗体(或其片段)之Fc区包含根据如Kabat中之EU索引之胺基酸235处之胺基酸取代。在一个实施例中，Fc区包含L235A突变。在另一实施例中，Fc区包含L234A及L235A突变。在另一实施例中，Fc区包含D265C、L234A及L235A突变。在另一实施例中，Fc区包含D265C、L234A、L235A及H435A突变。在另一实施例中，Fc区包含D265C及H435A突变。
在一些实施例中，本文之抗CD45抗体包含含有以下修饰中之一者或以下修饰之组合之Fc区：D265A、D265C、D265C/H435A、D265C/LALA、D265C/LALA/H435A、D265C/N297G、D265C/N297G/H435A、D265C(IgG2*)、D265C(IgG2)/H435A、D265C/N297Q/H435A、D265C/N297Q、EPLVLAdelG/H435A、N297A、N297G或N297Q(根据Kabat之EU索引)。
经修饰Fc区与Fcγ受体之间之结合或亲和力可使用此项技术中已知之多种技术来测定，该等技术系例如(但不限于)平衡方法(例如酶联免疫吸附分析(ELISA)；KinExA,Rathanaswami等人，Analytical Biochemistry，第373卷:52-60,2008；或放射性免疫分析(RIA))或表面电浆子共振分析或其他基于动力学机制之分析(例如BIACORE.RTM.分析或OctetTM分析(forteBIO))及其他方法，例如间接结合分析、竞争性结合分析荧光共振能量转移(FRET)、凝胶电泳及层析(例如凝胶过滤)。该等及其他方法可在一或多种所检查组分上利用标记及/或采用多种侦测方法，包括(但不限于)发色、荧光、发光或同位素标记。结合亲和力及动力学之详细描述可参见Paul,W.E.编辑，Fundamental Immunology，第4版，Lippincott-Raven,Philadelphia(1999)，其针对抗体-免疫原相互作用。竞争性结合分析之一个实例系放射性免疫分析，其包括在递增量之未标记抗原存在下一起培育经标记抗原与所关注抗体，及侦测结合至经标记抗原之抗体。所关注抗体对特定抗原之亲和力及结合解离速率可根据藉由斯卡乍得图分析之资料来测定。与第二抗体之竞争亦可使用放射性免疫分析来测定。在此情形下，在递增量之未标记之第二抗体存在下将抗原与结合至经标记化合物之所关注抗体一起培育。
在一个实施例中，相对于包含未经修饰之Fc区之一致抗体与Fcγ受体之结合(例如如藉由生物层干涉(BLI)所评价)，具有本文所述Fc修饰(例如D265C、L234A、L235A及/或H435A)之抗体与Fcγ受体之结合减少至少70％、减少至少80％、减少至少90％、减少至少95％、减少至少98％、减少至少99％或减少约100％。
Fc区与Fcγ受体之结合相互作用为多种效应功能及下游信号传导事件所必需，包括(但不限于)抗体依赖性细胞介导之细胞毒性(ADCC)及补体依赖性细胞毒性(CDC)。因此，在某些态样中，包含经修饰Fc区(例如包含L234A、L235A及/或D265C突变)之抗体具有实质上减小或消除之效应功能。效应功能可使用此项技术中已知之多种方法、例如藉由量测因应所关注抗体之细胞反应(例如肥大细胞脱粒或细胞介素释放)来分析。举例而言，使用此项技术中之标准方法，可分析Fc经修饰抗体例如藉由人类外周血单核细胞触发肥大细胞脱粒之能力或触发细胞介素释放之能力。
因此，在一个实施例中，Fc区包含引起半衰期缩短之突变(例如相对于具有未经修饰之Fc区之抗体)。具有短半衰期之抗体在其中预期抗体起短期治疗(例如本文所述之调理步骤)之作用之某些情况下可能有利，其中投与抗体后进行HSC。通常，抗体将在递送HSC之前实质上清除，该等HSC亦通常表现靶抗原(例如CD45)，但并非抗CD45抗体之靶，此与内源干细胞不同。在一个实施例中，Fc区包含位置435处之突变(根据Kabat之EU索引)。在一个实施例中，突变系H435A突变。
在一个实施例中，本文所述之抗CD45抗体之半衰期(例如在人类中)等于或小于24小时、等于或小于23小时、等于或小于22小时、等于或小于21小时、等于或小于20小时、等于或小于19小时、等于或小于18小时、等于或小于17小时、等于或小于16小时、等于或小于15小时、等于或小于14小时、等于或小于13小时、等于或小于12小时或等于或小于11小时。
在一个实施例中，本文所述之抗CD45抗体之半衰期(例如在人类中)为约1-2小时、约1-3小时、约1-5小时、约1-10小时、约5-10小时、约5-15小时、约10-15小时、约10-20小时、约15-20小时、约15-25小时或约20-25小时。
在一些态样中，Fc区包含两个或更多个赋予缩短的半衰期且降低抗体之效应功能之突变。在一些实施例中，Fc区包含引起半衰期缩短之突变及可制造与FcγR之直接接触之至少一个残基之突变(例如如基于结构及结晶学分析)。在一个实施例中，Fc区包含H435A突变、L234A突变及L235A突变。在一个实施例中，Fc区包含H435A突变及D265C突变。在一个实施例中，Fc区包含H435A突变、L234A突变、L235A突变及D265C突变。
在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段藉助抗体或其抗原结合片段之Fc结构域中之半胱胺酸残基结合至细胞毒素(例如毒伞肽)。在一些实施例中，藉助抗体或其抗原结合片段之Fc结构域之突变引入半胱胺酸残基。例如，半胱胺酸残基可选自由以下组成之群：Cys118、Cys239及Cys265。在一个实施例中，抗CD45抗体(或其片段)之Fc区包含根据如Kabat中之EU索引之胺基酸265处之胺基酸取代。在一个实施例中，Fc区包含D265C突变。在一个实施例中，Fc区包含D265C及H435A突变。在一个实施例中，Fc区包含D265C、L234A及L235A突变。在一个实施例中，Fc区包含D265C、L234A、L235A及H435A突变。
应注意，除非另外指明，否则Fc胺基酸位置系参照EU编号索引。
前述公开案中之每一者关于抗CD45抗体之揭示内容皆以引用方式并入本文中。可与本文所述之组合物及方法结合使用之抗体及抗原结合片段包括上述抗体及其抗原结合片段，以及上述彼等非人类抗体及抗原结合片段之变异体，及结合与上述彼等抗体及其抗原结合片段相同之抗原决定基之抗体或抗原结合片段，如例如藉助竞争性抗原结合分析所评价。
工程改造抗体以包括本文之任一Fc修饰之方法为此项技术中所熟知。该等方法包括(但不限于)藉由编码抗体或至少抗体之恒定区之所制备DNA分子之定点(或寡核苷酸介导之)诱变、PCR诱变及盒式诱变制备。定点诱变为此项技术中所熟知(例如，参见Carter等人，Nucleic Acids Res.,13:4431-4443(1985)及Kunkel等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:488(1987))。PCR诱变亦适于制造起始多肽之胺基酸序列变异体。参见Higuchi,PCRProtocols，第177-183页(Academic Press,1990)；及Vallette等人，Nuc.Acids Res.17:723-733(1989)。制备序列变异体、盒式诱变之另一方法系基于Wells等人，Gene,34:315-323(1985)所述之技术。
核酸、载体及宿主细胞
本文亦提供核酸分子(例如DNA或mRNA)，其包含编码本文所述之抗CD45抗体或其抗原结合部分之核酸序列。
因此，在一些实施例中，本文提供经分离核酸分子，其编码包含Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、AbA、AbB或AbC之重链CDR1、CDR2及CDR3之重链可变区。在其他实施例中，本文提供经分离核酸分子，其编码Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、AbA、AbB或AbC之重链可变区。在其他实施例中，本文提供经分离核酸分子，其编码Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、AbA、AbB或AbC之重链。
在一些实施例中，本文提供经分离核酸分子，其编码包含Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、AbA、AbB或AbC之轻链CDR1、CDR2及CDR3之轻链可变区。在其他实施例中，本文提供经分离核酸分子，其编码Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、AbA、AbB或AbC之轻链可变区。在其他实施例中，本文提供经分离核酸分子，其编码Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、AbA、AbB或AbC之轻链。
在一些实施例中，本文提供经分离核酸分子，其编码包含Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、AbA、AbB或AbC之重链CDR1、CDR2及CDR3之重链可变区，及包含Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、AbA、AbB或AbC之轻链CDR1、CDR2及CDR3之轻链可变区。在其他实施例中，本文提供经分离核酸分子，其编码Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、AbA、AbB或AbC之重链可变区及轻链可变区。在其他实施例中，本文提供经分离核酸分子，其编码Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、AbA、AbB或AbC之重链及轻链。
编码抗体重链之核酸或其一部分可存在于与编码抗体轻链之核酸或其一部分相同之核酸分子(例如表现载体)中。另选地，重链及轻链序列可存在于单独核酸分子(例如单独表现载体)上。
在一个实施例中，本发明提供经分离核酸分子，其包含：
(a)SEQ ID NO:125中所示之核酸序列；
(b)SEQ ID NO:126中所示之核酸序列；
(c)SEQ ID NO:127中所示之核酸序列；
(d)SEQ ID NO:128中所示之核酸序列；
(e)SEQ ID NO:129中所示之核酸序列；
(f)SEQ ID NO:130中所示之核酸序列；
(g)SEQ ID NO:131中所示之核酸序列；
(h)SEQ ID NO:132中所示之核酸序列；
(i)SEQ ID NO:133中所示之核酸序列；
(j)SEQ ID NO:134中所示之核酸序列；
(k)SEQ ID NO:135中所示之核酸序列；
(l)SEQ ID NO:136中所示之核酸序列；
(m)SEQ ID NO:137中所示之核酸序列；
(n)SEQ ID NO:138中所示之核酸序列；
(o)SEQ ID NO:139中所示之核酸序列；
(p)SEQ ID NO:140中所示之核酸序列；
(q)SEQ ID NO:141中所示之核酸序列；
(r)SEQ ID NO:142中所示之核酸序列；
(s)SEQ ID NO:143中所示之核酸序列；及/或
(t)SEQ ID NO:144中所示之核酸序列；
其中经分离核酸编码抗CD45抗体或其一部分。
在另一实施例中，本发明提供经分离核酸分子，其包含：
(a)SEQ ID NO:150中所示之核酸序列；
(b)SEQ ID NO:151中所示之核酸序列；
(c)SEQ ID NO:152中所示之核酸序列；
(d)SEQ ID NO:153中所示之核酸序列；
(e)SEQ ID NO:154中所示之核酸序列；
(f)SEQ ID NO:155中所示之核酸序列；
(g)SEQ ID NO:156中所示之核酸序列；
(h)SEQ ID NO:157中所示之核酸序列；
(i)SEQ ID NO:158中所示之核酸序列；
(j)SEQ ID NO:159中所示之核酸序列；
(k)SEQ ID NO:160中所示之核酸序列；及/或
(l)SEQ ID NO:161中所示之核酸序列；
其中经分离核酸编码抗CD45抗体或其一部分。
抗体可使用例如如美国专利第4,816,567号中所述之重组方法及组合物来产生。在一个实施例中，提供编码本文所述之抗CD45抗体之经分离核酸。该核酸可编码包含抗体(例如抗体之轻链及/或重链)VL之胺基酸序列及/或包含抗体VH之胺基酸序列。在另一实施例中，提供一或多种包含该核酸之载体(例如表现载体)。在另一实施例中，提供包含该核酸之宿主细胞。在一个该实施例中，宿主细胞包含(例如已转型有)：(1)载体，其包含编码包含抗体VL之胺基酸序列及包含抗体VH之胺基酸序列的核酸，或(2)第一载体，其包含编码包含抗体VL之胺基酸序列的核酸；及第二载体，其包含编码包含抗体VH之胺基酸序列的核酸。在一个实施例中，宿主细胞为真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施例中，提供制造抗CLL-1抗体之方法，其中该方法包括在适于表现抗体之条件下培养包含编码如上文所提供抗体之核酸之宿主细胞，及视情况自宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收抗体。
为重组产生抗CD45抗体，分离编码例如如上文所提供抗体之核酸且插入一或多种载体中以进一步在宿主细胞中选殖及/或表现。该核酸可容易地使用习用程序来分离及测序(例如藉由使用能够特异性结合至编码抗体重链及轻链之基因之寡核苷酸探针)。
适用于选殖或表现编码抗体之载体之宿主细胞包括本文所述之原核或真核细胞。举例而言，抗体可在细菌中、具体而言在无需糖基化及Fc效应功能时产生。关于抗体片段及多肽在细菌中之表现参见例如美国专利第5,648,237号、第5,789,199号及第5,840,523号。(亦参见Charlton,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo编辑，HumanaPress,Totowa,N.J.,2003)，第245-254页，阐述抗体片段在大肠杆菌(E.coli)中之表现。)在表现后，可自可溶性部分中之细菌细胞团分离抗体且可进一步纯化。
亦可使用脊椎动物细胞作为宿主。举例而言，可使用适于悬浮液生长之哺乳动物细胞株。有用哺乳动物宿主细胞株之其他实例系由SV40转型之猴肾CV1株(COS-7)；人类胚肾株(如例如Graham等人，J.Gen Virol.36:59(1977)中所述之293或293细胞)；幼小仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠赛特利细胞(如例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述之TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人类子宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；水牛鼠肝细胞(BRL3A)；人类肺细胞(W138)；人类肝细胞(Hep G2)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562)；如例如Mather等人，Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述之TRI细胞；MRC 5细胞；及FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞株包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216(1980))；及骨髓瘤细胞株，例如Y0、NS0及Sp2/0。关于适于抗体产生之某些哺乳动物宿主细胞株之综述参见例如Yazaki及Wu,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo编辑，Humana Press,Totowa,N.J.)，第255-268页(2003)。
在一个实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合片段包含具有与本文所揭示之SEQ IDNo至少95％、96％、97％或99％一致之胺基酸序列之可变区。另选地，抗CD45抗体或其抗原结合片段包含含有本文所揭示之SEQ ID No之CDR，及本文所述可变区之具有与本文所揭示之SEQ ID No至少95％、96％、97％或99％一致之胺基酸序列之框架区。
在一个实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合片段包含具有本文所揭示之胺基酸序列之重链可变区及重链恒定区。在另一实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合片段包含具有本文所揭示之胺基酸序列之轻链可变区及轻链恒定区。在另一实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合片段包含具有本文所揭示之胺基酸序列之重链可变区、轻链可变区、重链恒定区及轻链恒定区。
鉴别抗体之方法
本文提供可用于例如耗尽患者中之CD45+细胞之新颖抗CD45抗体。该等抗体可用于例如调理方法中以进行干细胞移植。根据本文所提供之揭示内容，可鉴别出其他抗CD45抗体。
可使用高通量筛选能够结合造血干细胞表现之CD45之抗体或抗体片段文库的方法来鉴别可用于治疗癌症、自体免疫疾病及调理需要如本文所述之造血干细胞疗法之患者(例如人类患者)之抗CD45抗体。可使用该等方法来鉴别本文所述抗CD45抗体之改良形式。该等方法包括此项技术中已知之活体外展示技术，尤其例如噬菌体展示、细菌展示、酵母展示、哺乳动物细胞展示、核糖体展示、mRNA展示及cDNA展示。
使用噬菌体展示来分离结合生物相关分子之抗体或抗原结合片段综述于例如Felici等人，Biotechnol.Annual Rev.1:149-183,1995；Katz,AnnualRev.Biophys.Biomol.Struct.26:27-45,1997；及Hoogenboom等人，Immunotechnology 4:1-20,1998中，该等文献中之每一者关于活体外展示技术之揭示内容皆以引用方式并入本文中。已构筑随机化组合肽文库来选择结合细胞表面抗原之多肽，如Kay,Perspect.DrugDiscovery Des.2:251-268,1995及Kay等人，Mol.Divers.1:139-140,1996中所述，该等文献中之每一者关于发现抗原结合分子之揭示内容皆以引用方式并入本文中。蛋白质(例如多聚体蛋白质)已成功地噬菌体展示为功能分子(参见例如EP 0349578；EP 4527839；及EP0589877，以及Chiswell及McCafferty,Trends Biotechnol.10:80-84 1992，该等文献中之每一者关于使用活体外展示技术发现抗原结合分子之揭示内容皆以引用方式并入本文中。另外，已以活体外展示格式表现功能性抗体片段，例如Fab及scFv片段(参见例如McCafferty等人，Nature 348:552-554,1990；Barbas等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:7978-7982,1991；及Clackson等人，Nature 352:624-628,1991，该等文献中之每一者关于用于发现抗原结合分子之活体外展示平台之揭示内容皆以引用方式并入本文中)。亦可在例如HuMAb-
Figure BDA0003690274480001251
或XenoMouseTM中产生人类抗CD45抗体。该等技术尤其可用于鉴别及改良能够结合造血干细胞表现之CD45之抗体、抗体或片段之亲和力，该等抗体、抗体或片段进而用于耗尽需要造血干细胞移植疗法之患者(例如人类患者)中之内源造血干细胞。
除活体外展示技术外，可使用计算建模技术来设计及鉴别能够结合造血干细胞表现之抗原(例如CD45)之抗体。举例而言，使用计算建模技术，熟习此项技术者可筛选抗体或抗体片段之文库，以寻找能够结合造血干细胞表现之抗原(例如CD45)上之特定抗原决定基(例如抗原之细胞外抗原决定基)之分子。
可使用其他技术来鉴别能够结合造血干细胞表现之CD45且例如藉由受体介导之胞吞作用由细胞内化之抗体或抗体片段。举例而言，上述活体外展示技术可适用于筛选结合CD45且随后内化之抗体或抗体片段。噬菌体展示代表一种可与此筛选范例结合使用之技术。为鉴别可由造血干细胞内化之抗CD45抗体或抗体片段，熟习此项技术者可使用Williams等人，Leukemia 19:1432-1438,2005中所述之噬菌体展示技术，该文献之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。举例而言，可使用此项技术中已知之诱变方法产生重组噬菌体文库，其编码抗体、抗体片段(尤其例如scFv片段、Fab片段、双价抗体、三价抗体及10Fn3结构域)或含有随机化胺基酸盒之配位体(例如在一或多个或所有CDR或其等效区域或抗体或抗体片段中)。抗体或抗体片段之框架区、铰链、Fc结构域及其他区域可经设计使其在人类中不具免疫原性，例如藉助具有人类生殖系抗体序列或相对于人类生殖系抗体仅展现最小变化之序列。
使用本文所述或此项技术中已知之噬菌体展示技术，可将含有共价结合至噬菌体粒子之随机化抗体或抗体片段之噬菌体文库与CD45一起培育，例如藉由首先将噬菌体文库与封闭剂(例如乳蛋白、牛血清白蛋白及/或IgG)一起培育以去除编码展现非特异性蛋白结合之抗体或抗体片段之噬菌体及编码结合Fc结构域之抗体或其片段之噬菌体，且然后将噬菌体文库与表现CD45之细胞群体(例如造血干细胞)一起培育。可将噬菌体文库与造血干细胞一起培育足以允许抗CD45抗体或抗体片段结合同源细胞表面抗原且随后由造血干细胞内化之时间(例如在4℃下保持30分钟至6小时，例如在4℃下保持1小时)。随后可藉由例如用pH 2.8之冷(4℃)0.1M甘胺酸缓冲液洗涤细胞来去除含有不展现足以容许结合至造血干细胞并由造血干细胞内化之CD45亲和力之抗体或抗体片段之噬菌体。结合至已由造血干细胞内化之抗体或抗体片段之噬菌体可例如藉由溶解细胞并自细胞培养基回收内化的噬菌体来鉴别。然后可例如藉由使用此项技术中已知之方法将细菌细胞与回收之噬菌体在2×YT培养基中一起培育使噬菌体在细菌细胞中扩增。然后可例如藉由测定编码插入噬菌体基因体内之抗体或抗体片段之基因之核酸序列表征自此培养基回收之噬菌体。随后可藉由(例如抗体片段、例如scFv片段之)化学合成或藉由(例如全长抗体之)重组表现重新制备经编码之抗体或抗体片段。
所制备抗体或抗体片段之内化能力可例如使用此项技术中已知之放射性核种内化分析来评价。举例而言，可藉由纳入放射性同位素(例如18F、75Br、77Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、211At、67Ga、111In、99Tc、169Yb、186Re、64Cu、67Cu、177Lu、77As、72As、86Y、90Y、89Zr、212Bi、213Bi或225Ac)将使用本文所述或此项技术中已知之活体外展示技术鉴别之抗CD45抗体或抗体片段官能化。例如，可使用珠粒(例如含有亲电子卤素试剂之聚苯乙烯珠粒，例如碘化珠粒，Thermo Fisher Scientific,Inc.,Cambridge,MA)将放射性卤素(例如18F、75Br、77Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、211At)纳入抗体或抗体片段中。可将经放射性标记之抗体、其片段或ADC与造血干细胞一起培育足以容许内化之时间(例如在4℃下培育30分钟至6小时，例如在4℃下培育1小时)。然后洗涤细胞以去除未内化之抗体或其片段(例如使用pH 2.8之冷(4℃)0.1M甘胺酸缓冲液)。可藉由侦测与所回收洗涤缓冲液之发射之辐射(例如γ-辐射)相比所得造血干细胞之发射之辐射(例如γ-辐射)来鉴别内化的抗体或抗体片段。亦可使用前述内化分析来表征ADC。
抗体可使用例如如美国专利第4,816,567号中所述之重组方法及组合物来产生。在一个实施例中，提供编码本文所述之抗CD45抗体之经分离核酸。该核酸可编码包含抗体(例如抗体之轻链及/或重链)VL之胺基酸序列及/或包含抗体VH之胺基酸序列。在另一实施例中，提供一或多种包含该核酸之载体(例如表现载体)。在另一实施例中，提供包含该核酸之宿主细胞。在一个该实施例中，宿主细胞包含(例如已转型有)：(1)载体，其包含编码包含抗体VL之胺基酸序列及包含抗体VH之胺基酸序列的核酸，或(2)第一载体，其包含编码包含抗体VL之胺基酸序列的核酸；及第二载体，其包含编码包含抗体VH之胺基酸序列的核酸。在一个实施例中，宿主细胞为真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施例中，提供制造抗CLL-1抗体之方法，其中该方法包括在适于表现抗体之条件下培养包含编码如上文所提供抗体之核酸之宿主细胞，及视情况自宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收抗体。
为重组产生抗CD45抗体，分离编码例如如上文所述抗体之核酸且插入一或多种载体中以进一步在宿主细胞中选殖及/或表现。该核酸可容易地使用习用程序来分离及测序(例如藉由使用能够特异性结合至编码抗体重链及轻链之基因之寡核苷酸探针)。
适用于选殖或表现编码抗体之载体之宿主细胞包括本文所述之原核或真核细胞。举例而言，抗体可在细菌中、具体而言在无需糖基化及Fc效应功能时产生。关于抗体片段及多肽在细菌中之表现参见例如美国专利第5,648,237号、第5,789,199号及第5,840,523号。(亦参见Charlton,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo编辑，HumanaPress,Totowa,N.J.,2003)，第245-254页，阐述抗体片段在大肠杆菌中之表现。)在表现后，可自可溶性部分中之细菌细胞团分离抗体且可进一步纯化。
亦可使用脊椎动物细胞作为宿主。举例而言，可使用适于悬浮液生长之哺乳动物细胞株。有用哺乳动物宿主细胞株之其他实例系由SV40转型之猴肾CV1株(COS-7)；人类胚肾株(如例如Graham等人，J.Gen Virol.36:59(1977)中所述之293或293细胞)；幼小仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠赛特利细胞(如例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述之TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人类子宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；水牛鼠肝细胞(BRL3A)；人类肺细胞(W138)；人类肝细胞(Hep G2)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562)；如例如Mather等人，Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述之TRI细胞；MRC 5细胞；及FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞株包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；及骨髓瘤细胞株，例如Y0、NS0及Sp2/0。关于适于抗体产生之某些哺乳动物宿主细胞株之综述参见例如Yazaki及Wu,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo编辑，Humana Press,Totowa,N.J.)，第255-268页(2003)。在一个实施例中，宿主细胞为真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如Y0、NS0、Sp20细胞)。
抗体药物结合物(ADC)
本文所述之抗CD45抗体或其抗原结合片段可经由连接体结合(连接)至细胞毒素。在一些实施例中，细胞毒性分子结合至如本文所揭示之细胞内化抗体或其抗原结合片段，使得在细胞摄取抗体或其片段后，细胞毒素可进入其细胞内靶且调介造血细胞死亡。
细胞毒素
多种细胞毒素可经由用于本文所述疗法中之连接体结合至抗CD45抗体。具体而言，抗CD45 ADC包括结合(即藉由连接体共价连接)至细胞毒性部分(或细胞毒素)之抗CD45抗体(或其抗原结合片段)。在多个实施例中，细胞毒性部分在结合于结合物中时展现降低的细胞毒性或无细胞毒性，但在自连接体裂解后恢复细胞毒性。在多个实施例中，细胞毒性部分维持细胞毒性且不自连接体裂解。在一些实施例中，细胞毒性分子结合至如本文所揭示之细胞内化抗体或其抗原结合片段，使得在细胞摄取抗体或其片段后，细胞毒素可进入其细胞内靶，且例如调介T细胞死亡。
因此，本发明之ADC可具有通式
Ab-(Z-L-D)n
其中抗体或其抗原结合片段(Ab)经由化学部分(Z)结合(共价连接)至连接体(L)，结合至细胞毒性部分(「药物」D或「Cy」)。
因此，抗CD45抗体或其抗原结合片段可结合至多个药物部分，如整数n所指示，其表示每抗体之细胞毒素之平均数，其可介于例如约1至约20之范围内。在一些实施例中，n为1至4。在一些实施例中，n为1。来自结合反应之ADC制剂中每抗体之药物部分之平均数可藉由习用方法(例如质谱术、ELISA分析及HPLC)来表征。亦可根据n测定ADC之定量分布。在一些情况下，均质ADC(其中n系具有其他药物负载之ADC之某一值)之分离、纯化及表征可藉由诸如反相HPLC或电泳之方法来达成。
对于一些抗CD45 ADC，其可能受到抗体上连接位点数量之限制。举例而言，当连接为半胱胺酸硫醇时，抗体可具有仅一个或几个半胱胺酸硫醇基，或可具有仅一个或几个具有足够反应性之硫醇基，连接体可经由该仅一个或几个具有足够反应性之硫醇基连接。通常，抗体不含许多可连接至药物部分之游离及反应性半胱胺酸硫醇基；抗体中之半胱胺酸硫醇残基主要以二硫化物桥形式存在。在某些实施例中，抗体可用还原剂(例如二硫苏糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP))在部分或完全还原条件下还原，以产生反应性半胱胺酸硫醇基。在某些实施例中，较高药物负载(DAR)(例如n>5)可引起某些抗体-药物结合物之聚集、不溶性、毒性或细胞通透性损失。
在某些实施例中，少于理论最大值之药物部分在结合反应期间结合至抗体。抗体可含有例如不与药物-连接体中间体或连接体试剂反应之离胺酸残基，如下文所论述。仅最具反应性之离胺酸基团可与胺反应性连接体试剂反应。在某些实施例中，抗体经受变性条件以显露反应性亲核基团，例如离胺酸或半胱胺酸。
可以不同方式控制ADC之负载(药物/抗体比率)，例如藉由：(i)限制相对于抗体莫耳浓度过量之药物-连接体中间体或连接体试剂，(ii)限制结合反应时间或温度，(iii)用于半胱胺酸硫醇修饰之部分或限制性还原条件，(iv)藉由重组技术工程改造抗体之胺基酸序列，使得改变半胱胺酸残基之数量及位置以控制连接体-药物连接之数量及/或位置。
适用于本文所述组合物及方法之细胞毒素包括尤其此项技术中已知之DNA嵌入剂(例如蒽环)、能够破坏有丝分裂纺锤体装置之剂(例如长春花生物碱、美登素、类美登素及其衍生物)、RNA聚合酶抑制剂(例如毒伞肽，例如α-瓢菌素及其衍生物)及能够破坏蛋白质生物合成之剂(例如展现rRNA N-糖苷酶活性之剂，例如肥皂草毒素及蓖麻毒蛋白A链)。
在一些实施例中，细胞毒素系微管结合剂(例如美登素或类美登素)、毒伞肽、假单胞菌外毒素A、去三角梅蛋白、白喉毒素、肥皂草毒素、奥里斯他汀、蒽环、卡奇霉素、伊立替康、SN-38、倍癌霉素、吡咯并苯并二氮呯、吡咯并苯并二氮呯二聚体、吲哚啉并苯并二氮呯、吲哚啉并苯并二氮呯二聚体或其变异体或本文所述或此项技术中已知之另一细胞毒性化合物。
在一些实施例中，抗体-药物结合物之细胞毒素系RNA聚合酶抑制剂。在一些实施例中，RNA聚合酶抑制剂系毒伞肽或其衍生物。在一些实施例中，如本文揭示之抗体-药物结合物之细胞毒素系毒伞肽或其衍生物，例如α-瓢菌素、β-瓢菌素、γ-瓢菌素、ε-瓢菌素、鹅膏素、鹅膏素酰胺、鹅膏无毒环肽、一羟鹅膏毒肽羧酸、原鹅膏无毒环肽或其衍生物。
关于可用于本发明组合物及方法中之抗CD45 ADC中可用之细胞毒素之其他细节阐述于下文中。
毒伞肽
在一些实施例中，抗体-药物结合物之细胞毒素系毒伞肽或其衍生物，其为RNA聚合酶抑制剂。在一些实施例中，如本文揭示之抗体-药物结合物之细胞毒素系毒伞肽或其衍生物，例如α-瓢菌素、β-瓢菌素、γ-瓢菌素、ε-瓢菌素、鹅膏素、鹅膏素酰胺、鹅膏无毒环肽、一羟鹅膏毒肽羧酸、原鹅膏无毒环肽或其衍生物。
例示性毒伞肽之结构由下式IV表示；实例亦揭示于例如Zanotti等人，Int.J.Peptide Protein Res.30,1987,450-459中。
Figure BDA0003690274480001321
下表提供其他毒伞肽结构：
名称 R<sub>1</sub> R<sub>2</sub> R<sub>3</sub>、R<sub>4</sub> R<sub>5</sub> R<sub>6</sub>、R<sub>7</sub> R<sub>8</sub> R<sub>9</sub>
α-瓢菌素 OH OH H OH H NH<sub>2</sub> OH
β-瓢菌素 OH OH H OH H OH OH
γ-瓢菌素 OH H H OH H NH<sub>2</sub> OH
ε-瓢菌素 OH H H OH H OH OH
鹅膏素 OH OH H H H OH OH
鹅膏素酰胺 OH OH H H H NH<sub>2</sub> OH
鹅膏无毒环肽 H H H OH H NH<sub>2</sub> OH
一羟鹅膏毒肽羧酸 H H H OH H OH OH
原鹅膏无毒环肽 H H H OH H NH<sub>2</sub> H
可与本文所述之组合物(例如抗CD45 ADC)及方法结合使用之毒伞肽包括根据(但不限于)式(V)之化合物，
Figure BDA0003690274480001331
其中：
R1系H、OH或ORA；
R2系H、OH或ORB；
RA及RB(若存在)与其所结合之氧原子一起组合形成视情况经取代之5员杂环烷基；
R3系H或RD；
R4系H、OH、ORD或RD；
R5系H、OH、ORD或RD；
R6系H、OH、ORD或RD；
R7系H、OH、ORD或RD；
R8系OH、NH2或ORD；
R9系H、OH或ORD；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；且
RD系视情况经取代之烷基(例如C1-C6烷基)、视情况经取代之杂烷基(例如C1-C6杂烷基)、视情况经取代之烯基(例如C2-C6烯基)、视情况经取代之杂烯基(例如C2-C6杂烯基)、视情况经取代之炔基(例如C2-C6炔基)、视情况经取代之杂炔基(例如C2-C6杂炔基)、视情况经取代之环烷基、视情况经取代之杂环烷基、视情况经取代之芳基或视情况经取代之杂芳基。
例如，在一个实施例中，可与本文所述之组合物及方法结合使用之毒伞肽包括式(VA)之化合物
Figure BDA0003690274480001341
其中R4、R5、X及R8各自系如上文所定义。
例如，在一个实施例中，可与本文所述之组合物及方法结合使用之毒伞肽包括下式(VB)之化合物：
Figure BDA0003690274480001342
其中：
R1系H、OH或ORA；
R2系H、OH或ORB；
RA及RB(若存在)与其所结合之氧原子一起组合形成视情况经取代之5员杂环烷基；
R3系H或RD；
R4系H、OH、ORD或RD；
R5系H、OH、ORD或RD；
R6系H、OH、ORD或RD；
R7系H、OH、ORD或RD；
R8系OH、NH2或ORD；
R9系H、OH或ORD；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；且
RD系视情况经取代之烷基(例如C1-C6烷基)、视情况经取代之杂烷基(例如C1-C6杂烷基)、视情况经取代之烯基(例如C2-C6烯基)、视情况经取代之杂烯基(例如C2-C6杂烯基)、视情况经取代之炔基(例如C2-C6炔基)、视情况经取代之杂炔基(例如C2-C6杂炔基)、视情况经取代之环烷基、视情况经取代之杂环烷基、视情况经取代之芳基或视情况经取代之杂芳基。
在一个实施例中，可与本文所述之组合物及方法结合使用之毒伞肽亦包括下式(VC)之化合物：
Figure BDA0003690274480001351
其中：
R1系H、OH或ORA；
R2系H、OH或ORB；
RA及RB(若存在)与其所结合之氧原子一起组合形成视情况经取代之5员杂环烷基；
R3系H或RD；
R4系H、OH、ORD或RD；
R5系H、OH、ORD或RD；
R6系H、OH、ORD或RD；
R7系H、OH、ORD或RD；
R8系OH、NH2或ORD；
R9系H、OH或ORD；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；且
RD系视情况经取代之烷基(例如C1-C6烷基)、视情况经取代之杂烷基(例如C1-C6杂烷基)、视情况经取代之烯基(例如C2-C6烯基)、视情况经取代之杂烯基(例如C2-C6杂烯基)、视情况经取代之炔基(例如C2-C6炔基)、视情况经取代之杂炔基(例如C2-C6杂炔基)、视情况经取代之环烷基、视情况经取代之杂环烷基、视情况经取代之芳基或视情况经取代之杂芳基。
可用于本文所述结合物中之毒伞肽之其他实例包括WO 2020/216927中所示之彼等毒伞肽，该专利之内容以引用方式并入本文中。在一个实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合片段经由连接体结合至毒伞肽，其中ADC具有式(VI)之结构
Figure BDA0003690274480001371
或其立体异构物；
其中：
Q系S；
L系连接体；
Z系藉由存在于L上之反应性取代基与存在于抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基之间的偶合反应形成之化学部分；且
Ab系抗CD45抗体或其抗原结合片段。在一个实施例中，连接体系可裂解连接体。在另一实施例中，连接体系不可裂解连接体。在一个实施例中，其中L包含-(CH2)n-单元，其中n系2-6之整数。在一个实施例中，L系-(CH2)n-，其中n系6。在一个实施例中，一起呈Ab-Z-L形式之Ab、Z及L系由下式表示：
Figure BDA0003690274480001372
其中S系存在于抗CD45抗体或其抗原结合片段中之半胱胺酸残基之硫原子。
在一个实施例中，ADC包含结合至毒伞肽之抗CD45抗体，ADC具有式(VII)之结构：
Figure BDA0003690274480001381
或其立体异构物。
在一个实施例中，ADC包含结合至毒伞肽之抗CD45抗体，ADC具有式(VIIA)之结构：
Figure BDA0003690274480001382
在一个实施例中，ADC包含结合至毒伞肽之抗CD45抗体，ADC具有式(VIIB)之结构：
Figure BDA0003690274480001391
制造毒伞肽之合成方法阐述于美国专利第9,676,702号中，该美国专利以引用方式并入本文中。
在其他实施例中，本文所述之抗CD45抗体或其抗原结合片段可结合至毒伞肽以形成由式Ab-Z-L-Am表示之结合物，其中Ab系抗CD45抗体或其抗原结合片段，L系连接体，Z系化学部分且Am系毒伞肽。毒伞肽或其衍生物上之许多位置可用作共价键结连接部分L、且因此键结抗体或其抗原结合片段之位置。在一些实施例中，Am-L-Z系由式(I)表示
其中R1系H、OH、ORA或ORC；
R2系H、OH、ORB或ORC；
RA及RB(若存在)与其所结合之氧原子一起组合形成视情况经取代之5员杂环烷基；
R3系H、RC或RD；
R4系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8系OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9系H、OH、ORC或ORD；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC系-L-Z；
RD系视情况经取代之烷基(例如C1-C6烷基)、视情况经取代之杂烷基(例如C1-C6杂烷基)、视情况经取代之烯基(例如C2-C6烯基)、视情况经取代之杂烯基(例如C2-C6杂烯基)、视情况经取代之炔基(例如C2-C6炔基)、视情况经取代之杂炔基(例如C2-C6杂炔基)、视情况经取代之环烷基、视情况经取代之杂环烷基、视情况经取代之芳基或视情况经取代之杂芳基；
L系连接体，例如视情况经取代之伸烷基(例如C1-C6伸烷基)、视情况经取代之伸杂烷基(C1-C6伸杂烷基)、视情况经取代之伸烯基(例如C2-C6伸烯基)、视情况经取代之伸杂烯基(例如C2-C6伸杂烯基)、视情况经取代之伸炔基(例如C2-C6伸炔基)、视情况经取代之伸杂炔基(例如C2-C6伸杂炔基)、视情况经取代之伸环烷基、视情况经取代之伸杂环烷基、视情况经取代之伸芳基、视情况经取代之伸杂芳基、肽、二肽、-(C＝O)-、二硫化物、腙或其组合；
且
Z系自存在于L上之反应性取代基与存在于结合靶抗原(例如CD45)之抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基之间的偶合反应形成之化学部分。
在一些实施例中，Am含有恰好一个RC取代基。
在一些实施例中，L-Z系
Figure BDA0003690274480001401
其中S系表示存在于结合靶抗原之抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基之硫原子(例如半胱胺酸残基之-SH基团)。
在一些实施例中，结合物系由式III、IIIA或IIIB中之一者表示：
Figure BDA0003690274480001411
其中X系S，SO或SO2，且显示Ab指示Ab连接点。
在一些实施例中，Am-L-Z-Ab系
Figure BDA0003690274480001421
其中显示Ab指示Ab连接点。
在一些实施例中，Am-L-Z-Ab系
Figure BDA0003690274480001422
其中显示Ab指示Ab连接点。
在一些实施例中，Am-L-Z-Ab系
Figure BDA0003690274480001431
其中显示Ab指示Ab连接点。
在一些实施例中，Am-L-Z-Ab前体Am-L-Z’系
Figure BDA0003690274480001432
其中马来酰亚胺与发现于抗体中之半胱胺酸上之硫醇基反应。
在一些实施例中，Am-L-Z-Ab前体Am-L-Z’系
Figure BDA0003690274480001433
其中马来酰亚胺与发现于抗体中之半胱胺酸上之硫醇基反应。
在一些实施例中，Am-L-Z系由式(IA)表示
Figure BDA0003690274480001441
其中R1系H、OH、ORA或ORC；
R2系H、OH、ORB或ORC；
RA及RB(若存在)与其所结合之氧原子一起组合形成视情况经取代之5员杂环烷基；
R3系H、RC或RD；
R4系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8系OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9系H、OH、ORC或ORD；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC系-L-Z；
RD系视情况经取代之烷基(例如C1-C6烷基)、视情况经取代之杂烷基(例如C1-C6杂烷基)、视情况经取代之烯基(例如C2-C6烯基)、视情况经取代之杂烯基(例如C2-C6杂烯基)、视情况经取代之炔基(例如C2-C6炔基)、视情况经取代之杂炔基(例如C2-C6杂炔基)、视情况经取代之环烷基、视情况经取代之杂环烷基、视情况经取代之芳基或视情况经取代之杂芳基；
L系连接体，例如视情况经取代之伸烷基(例如C1-C6伸烷基)、视情况经取代之伸杂烷基(C1-C6伸杂烷基)、视情况经取代之伸烯基(例如C2-C6伸烯基)、视情况经取代之伸杂烯基(例如C2-C6伸杂烯基)、视情况经取代之伸炔基(例如C2-C6伸炔基)、视情况经取代之伸杂炔基(例如C2-C6伸杂炔基)、视情况经取代之伸环烷基、视情况经取代之伸杂环烷基、视情况经取代之伸芳基、视情况经取代之伸杂芳基、肽、二肽、-(C＝O)-、二硫化物、腙或其组合；
Z系自存在于L上之反应性取代基与存在于结合CD45之抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基之间的偶合反应形成之化学部分；且
其中Am含有恰好一个RC取代基。
在一些实施例中，L-Z系
Figure BDA0003690274480001451
在一些实施例中，Am-L-Z系由式(IB)表示
Figure BDA0003690274480001461
其中R1系H、OH、ORA或ORC；
R2系H、OH、ORB或ORC；
RA及RB(若存在)与其所结合之氧原子一起组合形成视情况经取代之5员杂环烷基；
R3系H、RC或RD；
R4系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8系OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9系H、OH、ORC或ORD；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC系-L-Z；
RD系视情况经取代之烷基(例如C1-C6烷基)、视情况经取代之杂烷基(例如C1-C6杂烷基)、视情况经取代之烯基(例如C2-C6烯基)、视情况经取代之杂烯基(例如C2-C6杂烯基)、视情况经取代之炔基(例如C2-C6炔基)、视情况经取代之杂炔基(例如C2-C6杂炔基)、视情况经取代之环烷基、视情况经取代之杂环烷基、视情况经取代之芳基或视情况经取代之杂芳基；
L系连接体，例如视情况经取代之伸烷基(例如C1-C6伸烷基)、视情况经取代之伸杂烷基(C1-C6伸杂烷基)、视情况经取代之伸烯基(例如C2-C6伸烯基)、视情况经取代之伸杂烯基(例如C2-C6伸杂烯基)、视情况经取代之伸炔基(例如C2-C6伸炔基)、视情况经取代之伸杂炔基(例如C2-C6伸杂炔基)、视情况经取代之伸环烷基、视情况经取代之伸杂环烷基、视情况经取代之伸芳基、视情况经取代之伸杂芳基、肽、二肽、-(C＝O)-、二硫化物、腙或其组合；
Z系自存在于L上之反应性取代基与存在于结合CD45之抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基之间的偶合反应形成之化学部分；且
其中Am含有恰好一个RC取代基。
在一些实施例中，L-Z系
Figure BDA0003690274480001471
在一些实施例中，RA及RB(若存在)与其所结合之氧原子一起组合形成下式之5员杂环烷基：
Figure BDA0003690274480001472
其中Y系-(C＝O)-、-(C＝S)-、-(C＝NRE)-或-(CRERE’)-；且
RE及RE’各自独立地系视情况经取代之C1-C6伸烷基-RC、视情况经取代之C1-C6伸杂烷基-RC、视情况经取代之C2-C6伸烯基-RC、视情况经取代之C2-C6伸杂烯基-RC、视情况经取代之C2-C6伸炔基-RC、视情况经取代之C2-C6伸杂炔基-RC、视情况经取代之伸环烷基-RC、视情况经取代之伸杂环烷基-RC、视情况经取代之伸芳基-RC或视情况经取代之伸杂芳基-RC。
在一些实施例中，Am-L-Z系由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1系H、OH、ORA或ORC；
R2系H、OH、ORB或ORC；
RA及RB(若存在)与其所结合之氧原子一起组合形成：
Figure BDA0003690274480001481
R3系H或RC；
R4系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8系OH、NH2、ORC或NHRC；
R9系H或OH；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；且
其中RC及RD各自系如上文所定义。
在一些实施例中，Am-L-Z系由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1系H、OH、ORA或ORC；
R2系H、OH、ORB或ORC；
RA及RB(若存在)与其所结合之氧原子一起组合形成：
Figure BDA0003690274480001482
R3系H或RC；
R4及R5各自独立地系H、OH、ORC、RC或ORD；
R6及R7各自系H；
R8系OH、NH2、ORC或NHRC；
R9系H或OH；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；且
其中RC系如上文所定义。
在一些实施例中，Am-L-Z系由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1系H、OH或ORA；
R2系H、OH或ORB；
RA及RB(若存在)与其所结合之氧原子一起组合形成：
Figure BDA0003690274480001491
R3、R4、R6及R7各自系H；
R5系ORC；
R8系OH或NH2；
R9系H或OH；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；且
其中RC系如上文所定义。该等毒伞肽结合物阐述于例如美国专利申请公开案第2016/0002298号中，该美国专利申请公开案之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，Am-L-Z系由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1及R2各自独立地系H或OH；
R3系RC；
R4、R6及R7各自系H；
R5系H、OH或OC1-C6烷基；
R8系OH或NH2；
R9系H或OH；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；且
其中RC系如上文所定义。该等毒伞肽结合物阐述于例如美国专利申请公开案第2014/0294865号中，该美国专利申请公开案之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，Am-L-Z系由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1及R2各自独立地系H或OH；
R3、R6及R7各自系H；
R4及R5各自独立地系H、OH、ORC或RC；
R8系OH或NH2；
R9系H或OH；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；且
其中RC系如上文所定义。该等毒伞肽结合物阐述于例如美国专利申请公开案第2015/0218220号中，该美国专利申请公开案之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，Am-L-Z系由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1及R2各自独立地系H或OH；
R3、R6及R7各自系H；
R4及R5各自独立地系H或OH；
R8系OH、NH2、ORC或NHRC；
R9系H或OH；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；且
其中RC系如上文所定义。该等毒伞肽结合物阐述于例如美国专利第9,233,173号及第9,399,681号以及US 2016/0089450中，该等美国专利中每一者之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，Am-L-Z-Ab前体Am-L-Z’系
Figure BDA0003690274480001511
可根据本文所述之组合物及方法用于结合至抗体或其抗原结合片段之其他毒伞肽阐述于例如WO 2016/142049；WO 2016/071856；WO 2017/149077；WO 2018/115466；及WO2017/046658中，该等文献之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，Am-L-Z系由式(II)、式(IIA)或式(IIB)表示
Figure BDA0003690274480001512
其中X系S、SO或SO2；R1系H或经由化学部分Z共价结合至抗体或其抗原结合片段之连接体，该化学部分Z系自存在于连接体上之反应性取代基Z’与存在于抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基之间的偶合反应形成；且R2系H或经由化学部分Z共价结合至抗体或其抗原结合片段之连接体，该化学部分Z系自存在于连接体上之反应性取代基Z’与存在于抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基之间的偶合反应形成；其中当R1系H时，R2系连接体，且当R2系H时，R1系连接体。
在一些实施例中，R1系连接体且R2系H，且一起呈L-Z形式之连接体及化学部分系
Figure BDA0003690274480001521
在一些实施例中，R1系连接体且R2系H，且一起呈L-Z形式之连接体及化学部分系
Figure BDA0003690274480001522
在一个实施例中，Am-L-Z-Ab系：
Figure BDA0003690274480001523
在一个实施例中，Am-L-Z-Ab系：
Figure BDA0003690274480001531
在一些实施例中，Am-L-Z-Ab前体Am-L-Z’系以下中之一者：
Figure BDA0003690274480001532
；其中马来酰亚胺与发现于抗体中之半胱胺酸上之硫醇基反应以形成结合物Am-L-Z-Ab。
在一些实施例中，细胞毒素系α-瓢菌素。在一些实施例中，α-瓢菌素经由连接体L连接至抗CD45抗体。在一些实施例中，α-瓢菌素系式V化合物。连接体L可连接至式V之α-瓢菌素之几个可能位置中之任一者(例如R1-R9中之任一者)以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB之α-瓢菌素-连接体结合物。在一些实施例中，连接体包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施例中，连接体包括选自Val-Ala及Val-Cit之二肽。在一些实施例中，连接体包括对胺基苄基(PAB)。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施例中，连接体包括-((C＝O)(CH2)n-单元，其中n系1-6之整数。
在一些实施例中，连接体包括-(CH2)n-单元，其中n系2-6之整数。在一些实施例中，连接体系-PAB-Cit-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，连接体系-PAB-Ala-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，一起呈L-Z形式之连接体L及化学部分Z系
Figure BDA0003690274480001541
在一些实施例中，细胞毒素系β-瓢菌素。在一些实施例中，β-瓢菌素经由连接体L连接至抗CD45抗体。在一些实施例中，β-瓢菌素系式V之化合物。连接体L可连接至式V之β-瓢菌素之几个可能位置中之任一者(例如R1-R9中之任一者)以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB之β-瓢菌素-连接体结合物。在一些实施例中，连接体包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施例中，连接体包括选自Val-Ala及Val-Cit之二肽。在一些实施例中，连接体包括对胺基苄基(PAB)。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施例中，连接体包括-(C＝O)(CH2)n-单元，其中n系1-6之整数。
在一些实施例中，连接体包括-(CH2)n-单元，其中n系2-6之整数。在一些实施例中，连接体系-PAB-Cit-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，连接体系-PAB-Ala-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，一起呈L-Z形式之连接体L及化学部分Z系
Figure BDA0003690274480001542
在一些实施例中，细胞毒素系γ-瓢菌素。在一些实施例中，γ-瓢菌素经由连接体L连接至抗CD45抗体。在一些实施例中，γ-瓢菌素系式V化合物。连接体L可连接至式V之γ-瓢菌素之几个可能位置中之任一者(例如R1-R9中之任一者)以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB之γ-瓢菌素-连接体结合物。在一些实施例中，连接体包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施例中，连接体包括选自Val-Ala及Val-Cit之二肽。在一些实施例中，连接体包括对胺基苄基(PAB)。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施例中，连接体包括-(C＝O)(CH2)n-单元，其中n系1-6之整数。
在一些实施例中，连接体包括-(CH2)n-单元，其中n系2-6之整数。在一些实施例中，连接体系-PAB-Cit-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，连接体系-PAB-Ala-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，一起呈L-Z形式之连接体L及化学部分Z系
Figure BDA0003690274480001551
在一些实施例中，细胞毒素系ε-瓢菌素。在一些实施例中，ε-瓢菌素经由连接体L连接至抗CD45抗体。在一些实施例中，ε-瓢菌素系式V化合物。连接体L可连接至式V之ε-瓢菌素之几个可能位置中之任一者(例如R1-R9中之任一者)以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB之ε-瓢菌素-连接体结合物。在一些实施例中，连接体包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施例中，连接体包括选自Val-Ala及Val-Cit之二肽。在一些实施例中，连接体包括对胺基苄基(PAB)。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施例中，连接体包括-(C＝O)(CH2)n-单元，其中n系1-6之整数。
在一些实施例中，连接体包括-(CH2)n-单元，其中n系2-6之整数。在一些实施例中，连接体系-PAB-Cit-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，连接体系-PAB-Ala-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，一起呈L-Z形式之连接体L及化学部分Z系
Figure BDA0003690274480001561
在一些实施例中，细胞毒素系鹅膏素。在一些实施例中，鹅膏素经由连接体L连接至抗CD45抗体。在一些实施例中，鹅膏素系式V化合物。连接体L可连接至式V之鹅膏素之几个可能位置中之任一者(例如R1-R9中之任一者)以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB之鹅膏素-连接体结合物。在一些实施例中，连接体包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施例中，连接体包括选自Val-Ala及Val-Cit之二肽。在一些实施例中，连接体包括对胺基苄基(PAB)。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施例中，连接体包括-(C＝O)(CH2)n-单元，其中n系1-6之整数。
在一些实施例中，连接体包括-(CH2)n-单元，其中n系2-6之整数。在一些实施例中，连接体系-PAB-Cit-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，连接体系-PAB-Ala-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，一起呈L-Z形式之连接体L及化学部分Z系
Figure BDA0003690274480001562
在一些实施例中，细胞毒素系鹅膏素酰胺。在一些实施例中，鹅膏素酰胺经由连接体L连接至抗CD45抗体。在一些实施例中，鹅膏素酰胺系式V化合物。连接体L可连接至式V之鹅膏素酰胺之几个可能位置中之任一者。在一些实施例中，连接体包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施例中，连接体包括选自Val-Ala及Val-Cit之二肽。在一些实施例中，连接体包括对胺基苄基(PAB)。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施例中，连接体包括-(C＝O)(CH2)n-单元，其中n系1-6之整数。
在一些实施例中，连接体包括-(CH2)n-单元，其中n系2-6之整数。在一些实施例中，连接体系-PAB-Cit-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，连接体系-PAB-Ala-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，一起呈L-Z形式之连接体L及化学部分Z系
Figure BDA0003690274480001571
在一些实施例中，细胞毒素系鹅膏无毒环肽。在一些实施例中，鹅膏无毒环肽经由连接体L连接至抗CD45抗体。在一些实施例中，鹅膏无毒环肽系式V之化合物。连接体L可连接至式V之鹅膏无毒环肽之几个可能位置中之任一者(例如R1-R9中之任一者)以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB之鹅膏无毒环肽-连接体结合物。在一些实施例中，连接体包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施例中，连接体包括选自Val-Ala及Val-Cit之二肽。在一些实施例中，连接体包括对胺基苄基(PAB)。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施例中，连接体包括-(C＝O)(CH2)n-单元，其中n系1-6之整数。
在一些实施例中，连接体包括-(CH2)n-单元，其中n系2-6之整数。在一些实施例中，连接体系-PAB-Cit-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，连接体系-PAB-Ala-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，一起呈L-Z形式之连接体L及化学部分Z系
Figure BDA0003690274480001581
在一些实施例中，细胞毒素系一羟鹅膏毒肽羧酸。在一些实施例中，一羟鹅膏毒肽羧酸经由连接体L连接至抗CD45抗体。在一些实施例中，一羟鹅膏毒肽羧酸系式V之化合物。连接体L可连接至式V之一羟鹅膏毒肽羧酸之几个可能位置中之任一者(例如R1-R9中之任一者)以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB之一羟鹅膏毒肽羧酸-连接体结合物。在一些实施例中，连接体包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施例中，连接体包括选自Val-Ala及Val-Cit之二肽。在一些实施例中，连接体包括对胺基苄基(PAB)。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施例中，连接体包括-(C＝O)(CH2)n-单元，其中n系1-6之整数。
在一些实施例中，连接体包括-(CH2)n-单元，其中n系2-6之整数。在一些实施例中，连接体系-PAB-Cit-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，连接体系-PAB-Ala-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，一起呈L-Z形式之连接体L及化学部分Z系
Figure BDA0003690274480001591
在一些实施例中，细胞毒素系原鹅膏无毒环肽。在一些实施例中，原鹅膏无毒环肽经由连接体L连接至抗CD45抗体。在一些实施例中，原鹅膏无毒环肽系式V化合物。连接体L可连接至式V之原鹅膏无毒环肽之几个可能位置中之任一者(例如R1-R9中之任一者)以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB之原鹅膏无毒环肽-连接体结合物。在一些实施例中，连接体包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施例中，连接体包括选自Val-Ala及Val-Cit之二肽。在一些实施例中，连接体包括对胺基苄基(PAB)。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施例中，连接体包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施例中，连接体包括-(C＝O)(CH2)n-单元，其中n系1-6之整数。
在一些实施例中，连接体包括-(CH2)n-单元，其中n系2-6之整数。在一些实施例中，连接体系-PAB-Cit-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，连接体系-PAB-Ala-Val-(C＝O)(CH2)n-。在一些实施例中，一起呈L-Z形式之连接体L及化学部分Z系
Figure BDA0003690274480001592
制造毒伞肽之合成方法阐述于美国专利第9,676,702号中，该美国专利以引用方式并入本文中。
用于本文所述组合物及方法之抗体及抗原结合片段可使用此项技术中已知或本文所述之结合技术结合至毒伞肽(例如α-瓢菌素)或其变异体。例如，识别并结合靶抗原之抗体及其抗原结合片段(抗CD45抗体)可结合至毒伞肽(例如α-瓢菌素)或其变异体，如US2015/0218220中所述，该文献关于例如毒伞肽(例如α-瓢菌素)及其变异体以及可用于共价结合之共价连接体之揭示内容系以引用方式并入本文中。
奥里斯他汀
本文所述之抗CD45抗体或其抗原结合片段可结合至为奥里斯他汀之细胞毒素(美国专利第5,635,483号；第5,780,588号)。奥里斯他汀系干扰微管动力学、GTP水解以及核及细胞分裂之抗有丝分裂剂(Woyke等人(2001)Antimicrob.Agents and Chemother.45(12):3580-3584)且具有抗癌(美国专利第5,663,149号)及抗真菌剂活性(Pettit等人(1998)Antimicrob.Agents Chemother.42:2961-2965)。(美国专利第5,635,483号；第5,780,588号)。奥里斯他汀药物部分可经由肽药物部分之N(胺基)末端或C(羧基)末端连接至抗体(WO02/088172)。
例示性奥里斯他汀实施例包括N末端连接之单甲基奥里斯他汀药物部分DE及DF，揭示于Senter等人，Proceedings of the American Association for Cancer Research，第45卷，摘要编号623，2004年3月28日呈送，该文献之揭示内容之全文皆以引用方式明确并入本文中。
例示性奥里斯他汀实施例系MMAE，其中波形线指示共价连接至抗体-连接体结合物(如本文所述之-L-Z-Ab或-L-Z′)之连接体之点。
Figure BDA0003690274480001601
另一例示性奥里斯他汀实施例系MMAF，其中波形线指示共价连接至抗体-连接体结合物(如本文所述之-L-Z-Ab或-L-Z′)之连接体之点，如US2005/0238649中所揭示：
Figure BDA0003690274480001611
奥里斯他汀可根据以下专利之方法制备：美国专利第5,635,483号；美国专利第5,780,588号；Pettit等人(1989)J.Am.Chem.Soc.111:5463-5465；Pettit等人(1998)Anti-Cancer Drug Design 13:243-277；Pettit,G.R.等人，Synthesis,1996,719-725；Pettit等人(1996)J.Chem.Soc.Perkin Trans.15:859-863；及Doronina(2003)Nat.Biotechnol.21(7):778-784。
类美登素
本文所述之抗体及其抗原结合片段可结合至为微管结合剂之细胞毒素。在一些实施例中，微管结合剂系美登素、类美登素或类美登素类似物。类美登素系结合微管且藉由抑制微管蛋白聚合起作用之有丝分裂抑制剂。美登素首次系自东非灌木齿叶美登木(eastAfrican shrub Maytenus serrata)分离而来(美国专利第3,896,111号)。随后，发现某些微管亦产生类美登素，例如美登醇及C-3美登醇酯(美国专利第4,151,042号)。合成美登醇及其衍生物及类似物揭示于例如美国专利第4,137,230号；第4,248,870号；第4,256,746号；第4,260,608号；第4,265,814号；第4,294,757号；第4,307,016号；第4,308,268号；第4,308,269号；第4,309,428号；第4,313,946号；第4,315,929号；第4,317,821号；第4,322,348号；第4,331,598号；第4,361,650号；第4,364,866号；第4,424,219号；第4,450,254号；第4,362,663号；及第4,371,533号中。类美登素药物部分系抗体药物结合物中有吸引力的药物部分，此乃因其(i)相对容易地藉由发酵或化学修饰、发酵产物之衍生化制备，(ii)易于用适于经由非二硫化物连接体结合至抗体之官能基衍生化，(iii)在血浆中稳定，及(iv)对多种肿瘤细胞株有效。
适宜类美登素之实例包括美登醇、合成美登醇及美登醇类似物及衍生物之酯。本文包括抑制微管形成且对哺乳动物细胞有高度毒性之任何细胞毒素，如类美登素、美登醇及美登醇类似物及衍生物。
适宜美登醇酯之实例包括具有经修饰芳族环之彼等美登醇酯及在其他位置具有修饰之彼等美登醇酯。该等适宜类美登素揭示于美国专利第4,137,230号；第4,151,042号；第4,248,870号；第4,256,746号；第4,260,608号；第4,265,814号；第4,294,757号；第4,307,016号；第4,308,268号；第4,308,269号；第4,309,428号；第4,313,946号；第4,315,929号；第4,317,821号；第4,322,348号；第4,331,598号；第4,361,650号；第4,362,663号；第4,364,866号；第4,424,219；4,450,254号；第4,322,348号；第4,362,663号；第4,371,533号；第5,208,020号；第5,416,064号；第5,475,092号；第5,585,499号；第5,846,545号；第6,333,410号；第7,276,497号；及第7,473,796号中，该等美国专利中之每一者关于类美登素及其衍生物之揭示内容皆以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，本揭示案之抗体-药物结合物(ADC)利用含硫醇之类美登素(DM1)(之前称为N2′-去乙酰基-N2′-(3-巯基-1-侧氧基丙基)-美登素)作为细胞毒性剂。DM1系由以下结构式表示：
Figure BDA0003690274480001621
在另一实施例中，本发明之结合物利用含硫醇之类美登素N2′-去乙酰基-N2′(4-甲基-4-巯基-1-侧氧基戊基)-美登素(例如DM4)作为细胞毒性剂。DM4系由以下结构式表示：
Figure BDA0003690274480001631
包含含有空间位阻硫醇键之侧链之另一类美登素系N2′-去乙酰基-N-2′(4-巯基-1-侧氧基戊基)-美登素(称为DM3)，由以下结构式表示：
Figure BDA0003690274480001632
美国专利第5,208,020号及第7,276,497号中所教示之类美登素中之每一者亦可用于本揭示案之结合物中。就此而言，5,208,020及7,276,697之整个揭示内容皆以引用方式并入本文中。
类美登素上之许多位置可用作共价键结连接部分且因此键结抗体或其抗原结合片段之位置(如本文所述之-L-Z-Ab或-L-Z′)。举例而言，预期具有羟基之C-3位置、经羟基甲基修饰之C-14位置、经羟基修饰之C-15位置及具有羟基之C-20位置皆系可用的。在一些实施例中，C-3位置用作共价键结连接体部分之位置，且在一些特定实施例中，美登醇之C-3位置用作共价键结连接部分之位置。此项技术中已知许多用于制造抗体-类美登素结合物之连接基团，包括例如美国专利第5,208,020号、第6,441,163号及欧洲专利第0425235B1号；Chari等人，Cancer Research 52:127-131(1992)；及U.S.2005/0169933 A1中所揭示之彼等连接基团，该等文献之揭示内容皆以引用方式明确并入本文中。本文阐述并例示其他连接基团。
本发明亦包括类美登素及结合物之多种异构物及混合物。本发明之某些化合物及结合物可以多种立体异构、镜像异构及非镜像异构形式存在。产生该等抗体-类美登素结合物之若干描述提供于美国专利第5,208,020号；第5,416,064号；第6,333,410号；第6,441,163号；第6,716,821号；及第7,368,565号中，该等美国专利中之每一者之全文皆并入本文中。
蒽环
在其他实施例中，本文所述之抗体及其抗原结合片段可结合至为蒽环分子之细胞毒素。蒽环系展现细胞毒性活性之抗生素化合物。研究已指示，蒽环可藉由多种不同机制起作用来杀伤细胞，包括：1)将药物分子嵌入细胞DNA中，由此抑制DNA依赖性核酸合成；2)由自由基之药物产生，该等自由基随后与细胞大分子反应以引起细胞损伤，或3)药物分子与细胞膜之相互作用[例如，参见C.Peterson等人，「Transport And Storage OfAnthracycline In Experimental Systems And Human Leukemia」，AnthracyclineAntibiotics In Cancer Therapy；N.R.Bachur,「Free Radical Damage」id.第97-102页]。由于其细胞毒性潜力，已将蒽环用于治疗多种癌症，例如白血病、乳癌、肺癌、卵巢腺癌及肉瘤[例如，参见P.H-Wiernik,Anthracycline:Current Status And New Developments第11页]。常用蒽环包括多柔比星、泛艾霉素(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)及道诺霉素(daunomycin)。在一些实施例中，细胞毒素系选自由以下组成之群之蒽环：道诺霉素、多柔比星、泛艾霉素及伊达比星。蒽环之代表性实例包括(但不限于)道诺霉素(正定霉素(Cerubidine)；Bedford Laboratories)、多柔比星(阿德力霉素(Adriamycin)；BedfordLaboratories；亦称为盐酸多柔比星、羟基-道诺霉素及Rubex)、泛艾霉素(Ellence；Pfizer)及伊达比星(Idamycin；Pfizer Inc.)
认为蒽环类似物多柔比星(阿德力霉素)藉由嵌入且抑制使DNA展开以供转录之拓朴异构酶II之进展与DNA相互作用。多柔比星使拓朴异构酶II复合物在其已使DNA链断裂以供复制后稳定，从而防止DNA双螺旋释放且由此终止复制过程。多柔比星及道诺霉素(DAUNOMYCIN)系原型细胞毒性天然产物蒽环化学治疗剂(Sessa等人(2007)Cardiovasc.Toxicol.7:75-79)。
适用于本文中之蒽环之一个非限制性实例系PNU-159682(「PNU」)。PNU展现为亲代奈莫柔比星(nemorubicin)之3000倍之细胞毒性(Quintieri等人，Clinical CancerResearch 2005,11,1608-1617)。PNU系由以下结构式表示：
Figure BDA0003690274480001651
蒽环(例如PNU)上之多个位置可用作共价键结连接部分且因此键结如本文所述之抗CD45抗体或其抗原结合片段之位置。举例而言，连接体可经由羟基甲基酮侧链之修饰引入。
在一些实施例中，细胞毒素系由以下结构式表示之PNU衍生物：
Figure BDA0003690274480001652
其中波形线指示与如本文所述之ADC连接体之共价连接点。
在一些实施例中，细胞毒素系由以下结构式表示之PNU衍生物：
Figure BDA0003690274480001661
其中波形线指示与如本文所述之ADC连接体之共价连接点。
苯并二氮呯
在其他实施例中，本文所述之抗CD45抗体或其抗原结合片段可结合至包含苯并二氮呯部分(例如PBD或IGN，如本文所述)之细胞毒素。
吡咯并苯并二氮呯(PBD)
在一些实施例中，如本文所述结合CD45之抗体或其抗原结合片段可结合至为吡咯并苯并二氮呯(「PBD」)之细胞毒素或包含PBD之细胞毒素。PBD系由某些放线菌产生之天然产物且已显示为序列选择性DNA烷基化化合物。PBD细胞毒素包括(但不限于)安曲霉素(anthramycin)、二聚体PBD及例如Hartley,JA(2011).「The development ofpyrrolobenzodiazepines as antitumor agents」Expert Opin.Inv.Drug,20(6),733-744；及Antonow,D.及Thurston,D.E.(2011)「Synthesis of DNA-interactive pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines(PBDs)」.Chem.Rev.111:2815-2864中所揭示之彼等PBD细胞毒素。
PBD具有以下一般结构：
Figure BDA0003690274480001662
其取代基之数量、类型及位置、其芳族(「A」)环及吡咯并(「C」)环以及C环之饱和度有所不同。在二氮呯B环中之N10-C11位置处存在亚胺(N＝C)、甲醇胺(NH-CH(OH))或甲醇胺甲醚(NH-CH(OMe))。此位置系负责DNA烷基化之亲电子部分。所有已知天然产物PBD在手性C11a位置具有(S)-构形，此在自C环朝向A环观察时为其提供右捻。此为与B型DNA之小沟之等螺旋性提供适宜三维形状，从而使其结合位点处紧密配合(Kohn,AntibioticsIII.Springer-Verlag,New York，第3-11页(1975)；Hurley及Needham-VanDevanter,Acc.Chem.Res.,19,230-237(1986))。PBD在小沟中形成加合物之能力使其能够干扰DNA加工，从而产生抗肿瘤活性。
先前已揭示，该等分子之生物活性可经由挠性伸烷基连接体将两个PBD单元经由其C8-羟基官能基连结在一起来加强(Bose,D.S.等人，J.Am.Chem.Soc.,114,4939-4941(1992)；Thurston,D.E.等人，J.Org.Chem.,61,8141-8147(1996))。认为PBD二聚体形成序列选择性DNA损伤，例如回文5'-Pu-GATC-Py-3’链间交联(Smellie,M.等人，Biochemistry,42,8232-8239(2003)；Martin、C.等人，Biochemistry,44,4135-4147)，认为其主要负责其生物活性。有利的二聚体吡咯并苯并二氮呯化合物已阐述于Gregson等人(Chem.Commun.1999,797-798；「化合物」，及Gregson等人(J.Med.Chem.2001,44,1161-1174；「化合物4a」)。此化合物亦称为SG2000，具有以下结构式：
Figure BDA0003690274480001671
通常，对吡咯啶烯烃部分之修饰提供共价键结连接部分且因此键结抗体或其抗原结合片段(分别为如本文所述之-L-Z'及-L-Z-Ab)之手柄。另选地，连接体可在位置N10处连接。
在一些实施例中，细胞毒素系由以下结构式表示之吡咯并苯并二氮呯二聚体：
Figure BDA0003690274480001681
其中n系2至5之整数。此式之化合物(其中n系3)称为DSB-120(Bose等人，J.Am.Chem.Soc.1992,114,4939-4941)。
在一些实施例中，细胞毒素系由以下结构式表示之吡咯并苯并二氮呯二聚体：
Figure BDA0003690274480001682
其中n系2至5之整数。此式之化合物(其中n系3)称为SJG-136(Gregson等人，J.Med.Chem.2001,44,737-748)。此式之化合物(其中n系5)称为DRG-16(Gregson等人，Med.Chem.2004；47:1161-1174)。
在一些实施例中，细胞毒素系由以下结构式表示之吡咯并苯并二氮呯二聚体：
Figure BDA0003690274480001683
其中波形线指示与如本文所述之ADC连接体之共价连接点。基于此PBD之ADC揭示于例如Sutherland等人，Blood 2013 122:1455-1463中，该文献之全文皆以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，细胞毒素系由以下结构式表示之PBD二聚体：
Figure BDA0003690274480001684
其中n系3或5，且其中波形线指示与如本文所述之ADC连接体之共价连接点。
在一些实施例中，细胞毒素系由以下结构式表示之PBD二聚体：
Figure BDA0003690274480001691
其中波形线指示与如本文所述之ADC连接体之共价连接点。
在具体实施例中，细胞毒素可为PBD二聚体，其与连接体及反应性部分Z’(各自如本文所述)一起可由以下结构表示：
Figure BDA0003690274480001692
此特定细胞毒素-连接体结合物称为泰斯润(SG3249)，且已阐述于例如Howard等人，ACS Med.Chem.Lett.2016,7(11),983-987中，该文献之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，细胞毒素-连接体结合物在结合至抗体及包括反应性取代基Z’(一起呈Cy-L-Z’形式)之前具有以下结构：
Figure BDA0003690274480001693
此特定细胞毒素-连接体结合物称为泰利润(talirine)，且已与ADC凡达斯单抗(Vadastuximab)泰利润(SGN-CD33A)一起阐述于例如Mantaj等人，Angewandte ChemieInternational Edition English 2017,56,462至488中，该文献之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。
吲哚啉并苯并二氮呯(IGN)
在一些实施例中，如本文所述结合CD45之抗体或其抗原结合片段可结合至为吲哚啉并苯并二氮呯(「IGN」)之细胞毒素或包含IGN之细胞毒素。在一些实施例中，IGN细胞毒素系吲哚啉并苯并二氮呯二聚体或吲哚啉并苯并二氮呯假二聚体。
吲哚啉并苯并二氮呯二聚体代表对癌细胞具有高活体外功效(低pM范围IC50值)之相对较新的细胞毒素化学类别。与PBD二聚体SJG-136类似，IGN二聚体结合至DNA之小沟，且经由二聚体中之两个亚胺官能基共价结合至鸟嘌呤残基，从而引起DNA交联。IGN二聚体(IGN 6；用苯环替代PBD部分之亚甲基)展示为SJG-136之约10倍之活体外功效，此可能归因于与DNA IGN形成加合物之速率较快(例如，参见Miller等人，「A New Class of Antibody-Drug Conjugates with Potent DNA Alkylating Activity」Mol.Cancer Ther.2016,15(8),1870-1878)。相反，IGN假二聚体包含单个反应性吲哚啉并苯并二氮呯亚胺；二聚体细胞毒素中之第二吲哚啉并苯并二氮呯以还原(胺)形式存在。因此，IGN假二聚体经由存在于二聚体中之单一亚胺部分使DNA烷基化，且不交联DNA。
在一些实施例中，细胞毒素系具有下式结构之IGN假二聚体：
Figure BDA0003690274480001701
其中波形线指示连接体之连接点。
在一些实施例中，细胞毒素-连接体结合物在结合至抗体及包括反应性取代基Z’(一起呈Cy-L-Z’形式)之前具有以下结构：
Figure BDA0003690274480001711
此细胞毒素-连接体结合物在本文中称为DGN549，且存在于ADC IMGN632中，二者揭示于例如国际专利申请公开案第WO2017004026号中，该国际专利申请公开案以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，细胞毒素系具有下式结构之吲哚啉并苯并二氮呯假二聚体：
Figure BDA0003690274480001712
其中波形线指示连接体之连接点。此IGN假二聚体细胞毒素在本文中称为DGN462，其揭示于例如美国专利申请公开案第20170080102号中，该美国专利申请公开案以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，细胞毒素-连接体结合物在结合至抗体且包括化学部分Z(一起呈Cy-L-Z形式)之前具有以下结构：
Figure BDA0003690274480001721
其中波形线指示与抗体(例如抗CD45抗体或其片段)之连接点。此细胞毒素-连接体结合物存在于例如美国专利申请公开案第20170080102中所揭示之ADC IMGN779中，该美国专利申请公开案先前以引用方式并入本文中。
卡奇霉素
在其他实施例中，本文所述之抗体及其抗原结合片段可结合至为烯二炔抗肿瘤抗生素(例如卡奇霉素、奥佐米星)之细胞毒素。抗生素之卡奇霉素家族能够产生亚皮莫耳浓度之双链DNA断裂。关于卡奇霉素家族之结合物之制备参见美国专利第5,712,374号；第5,714,586号；第5,739,116号；第5,767,285号；第5,770,701号；第5,770,710号；第5,773,001号；及第5,877,296号(皆颁予American Cyanamid Company)。可使用之卡奇霉素之结构类似物包括(但不限于)例如以下文献中所揭示之彼等结构类似物：Hinman等人，CancerResearch 53:3336-3342(1993)；Lode等人，Cancer Research 58:2925-2928(1998)；及上文所提及颁予American Cyanamid之美国专利。
例示性卡奇霉素命名为γ1，其在本文中简称为γ，且具有以下结构式：
Figure BDA0003690274480001722
在一些实施例中，卡奇霉素系γ-卡奇霉素衍生物或N-乙酰基γ-卡奇霉素衍生物。可使用之卡奇霉素之结构类似物包括(但不限于)例如以下文献中所揭示之彼等结构类似物：Hinman等人，Cancer Research 53:3336-3342(1993)；Lode等人，Cancer Research58:2925-2928(1998)；及上文所提及之美国专利。卡奇霉素含有甲基三硫醚部分，其可与适宜硫醇反应以形成二硫化物，同时引入可用于经由连接体连接卡奇霉素衍生物与如本文所述之抗CD45抗体或其抗原结合片段之官能基。关于卡奇霉素家族之结合物之制备参见美国专利第5,712,374号；第5,714,586号；第5,739,116号；第5,767,285号；第5,770,701号；第5,770,710号；第5,773,001号；及第5,877,296号(皆颁予American Cyanamid Company)。可使用之卡奇霉素之结构类似物包括(但不限于)例如以下文献中所揭示之彼等结构类似物：Hinman等人，Cancer Research53:3336-3342(1993)；Lode等人，Cancer Research 58:2925-2928(1998)；及上文所提及颁予American Cyanamid之美国专利。
在一个实施例中，如本文揭示ADC之细胞毒素系由下式表示之卡奇霉素二硫化物衍生物：
Figure BDA0003690274480001731
其中波形线指示连接体之连接点。
核糖体不活化蛋白(RIP)
在一些实施例中，核糖体不活化蛋白(RIP)结合至本文所述之抗CD45抗体或其片段之细胞毒素。核糖体不活化蛋白系通常不可逆地作用于核糖体之蛋白质合成抑制剂。RIP发现于植物以及细菌中。RIP之实例包括(但不限于)肥皂草毒素、蓖麻毒蛋白、相思子素(abrin)、白树素(gelonin)、假单胞菌属外毒素(或外毒素A)、天花粉蛋白、丝瓜素(luffin)、凝集素及白喉毒素。
可用于本文所揭示之抗CD45抗体结合物及方法中之RIP之另一实例系Shiga毒素(Stx)或Shiga样毒素(SLT)。Shiga毒素(Stx)系发现于痢疾志贺杆菌(Shigelladysenteriae)1及大肠杆菌之一些血清群(包括血清型O157:H7及O104:H4)(在大肠杆菌中称为Stx1)中之强效细菌毒素。除Stx1外，一些大肠杆菌菌株产生第二种Stx(Stx2)，其具有与Stx/Stx1相同之作用模式，但抗原性不同。SLT系由大肠杆菌产生之相似或相同毒素之历史术语。由于已鉴别出每一毒素之亚型，但现将每一群之原型毒素命名为Stx1a或Stx2a。Stx1a及Stx2a展现不同细胞类型之细胞毒性差异，以不相似之方式结合至受体类似物或模拟物，诱导差异趋化介素反应，且具有若干不同的结构特征。
Shiga毒素家族之成员系指结构及功能相关之天然蛋白质毒素、尤其自痢疾志贺杆菌(S.dysenteriae)及大肠杆菌分离之毒素家族之任一成员(Johannes L,Romer W,NatRev Microbiol 8:105-16(2010))。举例而言，Shiga毒素家族涵盖自痢疾志贺杆菌血清型1分离之真正的Shiga毒素(Stx)、自肠出血性大肠杆菌之血清型分离之Shiga样毒素1变异体(SLT1或Stx1或SLT-1或Slt-I)及自肠出血性大肠杆菌之血清型分离之Shiga样毒素2变异体(SLT2或Stx2或SLT-2)。SLT1之仅一个残基不同于Stx，且二者称为志贺细胞毒素或志贺毒素(VT)(O'Brien A等人，Curr Top Microbiol Immunol 180:65-94(1992))。尽管SLT1及SLT2变异体经报导彼此在胺基酸序列层级上仅为约53％-60％相似，但其共享Shiga毒素家族成员共有之酶活性及细胞毒性机制(Johannes,Nat Rev Microbiol 8:105-16(2010))。
Shiga毒素家族之成员通常具有两个次单元；A次单元及B次单元。毒素之B次单元结合至细胞膜之组分，称为糖脂球形三酰神经酰胺(Gb3)。次单元B与Gb3之结合会诱导狭窄的管状膜内陷，其驱动细菌摄取至细胞中之向内膜管之形成。Shiga毒素(非成孔毒素)经由高基网(Golgi network)及ER转移至胞质液。毒素自高基体输送至ER。Shiga毒素藉由类似于蓖麻毒蛋白之机制用于抑制靶细胞内之蛋白质合成(Sandvig及van Deurs(2000)EMBOJ19(220:5943)。进入细胞后，毒素之A次单元自核糖体60S次单元之28S RNA裂解特定腺嘌呤核碱基，由此终止蛋白质合成(Donohue-Rolfe等人(2010)Reviews of InfectiousDiseases 13(增刊).4(7):S293-297)。
如本文所用对Shiga家族毒素之提及系指结构及功能相关之天然蛋白质毒素(例如自痢疾志贺杆菌及大肠杆菌分离之毒素)之Shiga毒素家族之任一成员。举例而言，Shiga毒素家族涵盖自痢疾志贺杆菌血清型1分离之真正的Shiga毒素(Stx)、自肠出血性大肠杆菌之血清型分离之Shiga样毒素1变异体(SLT1或Stx1或SLT-1或Slt-I)及自肠出血性大肠杆菌之血清型分离之Shiga样毒素2变异体(SLT2或Stx2或SLT-2)。如本文所用之「Shiga家族毒素之次单元A」或「Shiga家族毒素次单元A」系指来自Shiga毒素家族之任一成员(包括Shiga毒素或Shiga样毒素)之次单元A。
在一个实施例中，抗CD45 ADC包含结合至Shiga家族毒素次单元A或Shiga家族毒素次单元A之具有细胞毒性活性(即核糖体抑制活性)之部分的抗CD45抗体。Shiga毒素次单元A细胞毒性活性包括例如核糖体不活化、蛋白质合成抑制、N-糖苷酶活性、多核苷酸:腺苷糖苷酶活性、RNAse活性及DNAse活性。用于Shiga毒素效应物活性之分析之非限制性实例量测蛋白质合成抑制活性、去嘌呤活性、细胞生长之抑制、细胞毒性、超螺旋DNA松弛活性及核酸酶活性。
在某些实施例中，抗CD45抗体或其抗原结合片段结合至Shiga家族毒素A次单元或其具有核糖体抑制活性之片段。Shiga家族毒素次单元A之实例系Shiga样毒素1次单元A(SLT-1A)，其胺基酸序列提供于下文中KEFTLDFSTAKTYVDSLNVIRSAIGTPLQTISSGGTSLLMIDSGSGDNLFAVDVRGIDPEEGRFNNLRLIVERNNLYVTGFVNRTNNVFYRFADFSHVTFPGTTAVTLSGDSSYTTLQRVAGISRTGMQINRHSLTTSYLDLMSHSGTSLTQSVARAMLRFVTVTAEALRFRQIQRGFRTTLDDLSGRSYVMTAEDVDLTLNWGRLSSVLPDYHGQDSVRVGRISFGSINAILGSVALILNCHHHASRVARMASDEFPSMCPADGRVRGITHNKILWDSSTLGAILMRRTISS(SEQ ID NO:147)。
Shiga家族毒素次单元A之另一实例系Shiga毒素次单元A(StxA)，其胺基酸序列提供于下文中
KEFTLDFSTAKTYVDSLNVIRSAIGTPLQTISSGGTSLLMIDSGTGDNLFAVDVRGIDPEEGRFNNLRLIVERNNLYVTGFVNRTNNVFYRFADFSHVTFPGTTAVTLSGDSSYTTLQRVAGISRTGMQINRHSLTTSYLDLMSHSGTSLTQSVARAMLRFVTVTAEALRFRQIQRGFRTTLDDLSGRSYVMTAEDVDLTLNWGRLSSVLPDYHGQDSVRVGRISFGSINAILGSVALILNCHHHASRVARMASDEFPSMCPADGRVRGITHNKILWDSSTLGAILMRRTISS(SEQID NO:148)。
Shiga家族毒素次单元A之另一实例系Shiga样毒素2次单元A(SLT-2A)，其胺基酸序列提供于下文中
DEFTVDFSSQKSYVDSLNSIRSAISTPLGNISQGGVSVSVINHVLGGNYISLNVRGLDPYSERFNHLRLIMERNNLYVAGFINTETNIFYRFSDFSHISVPDVITVSMTTDSSYSSLQRIADLERTGMQIGRHSLVGSYLDLMEFRGRSMTRASSRAMLRFVTVIAEALRFRQIQRGFRPALSEASPLYTMTAQDVDLTLNWGRISNVLPEYRGEEGVRIGRISFNSLSAILGSVAVILNCHSTGSYSVRSVSQKQKTECQIVGDRAAIKVNNVLWEANTIAALLNRKPQDLTEPNQ(SEQ ID NO:149)。
在某些环境中，天然Shiga家族毒素次单元A可包含含有其胺基末端约22个胺基酸之信号序列之前体形式，去除该等信号序列以产生成熟Shiga家族毒素A次单元且可为熟习此项技术者所识别。Shiga家族毒素次单元A之细胞毒性片段或截短形式亦可用于本文所揭示之ADC及方法中。
在某些实施例中，Shiga家族毒素次单元A与天然Shiga毒素A次单元相差至多1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、15个、20个、25个、30个、35个、40个或更多个胺基酸残基(但相差不超过保留至少85％、90％、95％、99％或更大胺基酸序列一致性之胺基酸残基)。在一些实施例中，Shiga家族毒素次单元A与天然Shiga家族毒素A次单元相差至多1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、15个、20个、25个、30个、35个、40个或更多个胺基酸残基(但相差不超过保留至少85％、90％、95％、99％或更大胺基酸序列一致性之胺基酸残基)。因此，源自Shiga毒素家族成员之A次单元之多肽区可包含相对于原始序列之添加、缺失、截短或其他变化形式，只要维持与天然Shiga家族毒素次单元A至少85％、90％、95％、99％或更大的胺基酸序列一致性即可。
因此，在某些实施例中，Shiga家族毒素次单元A包含与天然Shiga家族毒素次单元A具有至少55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％、99.5％或99.7％总体序列一致性之胺基酸序列(例如SLT-1A(SEQ ID NO:147)、StxA(SEQ ID NO:148)及/或SLT-2A(SEQ ID NO:149))或基本上由其组成。
适于作为细胞毒素之适宜Shiga毒素及RIP揭示于例如US20180057544中，该专利之全文皆以引用方式并入本文中。
其他细胞毒素
在其他实施例中，本文所述之抗体及其抗原结合片段可结合至与上文所揭示之彼等细胞毒素不同或除上文所揭示之彼等细胞毒素外之细胞毒素。适用于本文所述之组合物及方法之其他细胞毒素包括(但不限于)5-乙炔基尿嘧啶、阿比特龙(abiraterone)、酰基富烯(acylfulvene)、腺环戊醇(adecypenol)、阿多来新(adozelesin)、阿地介白素(aldesleukin)、六甲蜜胺(altretamine)、胺莫司汀(ambamustine)、阿米多(amidox)、阿米福汀(amifostine)、胺基乙酰丙酸、胺柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那格雷(anagrelide)、阿那曲唑(anastrozole)、穿心莲内酯(andrographolide)、血管生成抑制剂、安雷利克斯(antarelix)、抗背部化形态演发蛋白-1(anti-dorsalizingmorphogenetic protein-1)、抗雄激素、前列腺癌、抗雌激素、抗瘤酮(antineoplaston)、反义寡核苷酸、甘胺酸阿非迪霉素(aphidicolin glycinate)、凋亡基因调节剂、凋亡调控剂、类嘌呤酸、阿苏拉尼(asulacrine)、阿他美坦(atamestane)、阿莫司汀(atrimustine)、海洋环肽1(axinastatin 1)、海洋环肽2、海洋环肽3、阿扎司琼(azasetron)、阿扎毒素(azatoxin)、重氮酪胺酸(azatyrosine)、浆果赤霉素(baccatin)III衍生物、巴拉醇(balanol)、巴马司他(batimastat)、BCR/ABL拮抗剂、苯并二氢卟吩(benzochlorin)、苯甲酰基星形孢菌素(benzoylstaurosporine)、β内酰胺衍生物、β-阿利辛(β-alethine)、β克拉霉素B(betaclamycin B)、桦木酸(betulinic acid)、bFGF抑制剂、比卡鲁胺(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、双氮丙啶基精胺、双奈法德(bisnafide)、比斯他西A(bistratene A)、比折来新(bizelesin)、布瑞福特(breflate)、博来霉素(bleomycin)A2、博来霉素B2、溴匹立明(bropirimine)、布度钛(budotitane)、丁硫胺酸亚砜亚胺、卡泊三醇(calcipotriol)、卡弗他丁C(calphostin C)、喜树碱(camptothecin)衍生物(例如10-羟基-喜树碱)、卡培他滨(capecitabine)、甲酰胺-胺基-三唑、羧胺三唑、卡折来新(carzelesin)、酪蛋白激酶抑制剂、栗精胺(castanospermine)、天蚕抗菌肽B(cecropinB)、西曲瑞克(cetrorelix)、二氢卟吩(chlorin)、氯喹喏啉磺酰胺、西卡前列素(cicaprost)、顺式-卟啉、克拉屈滨(cladribine)、氯米芬(clomifene)及其类似物、克霉唑(clotrimazole)、克里霉素A(collismycin A)、克里霉素B、康布瑞塔卡汀A4(combretastatin A4)、康布瑞塔卡汀类似物、科纳基尼(conagenin)、克拉贝司丁816(crambescidin 816)、克立那托(crisnatol)、念珠藻素8(cryptophycin 8)、念珠藻素A衍生物、库拉辛A(curacin A)、环戊蒽醌(cyclopentanthraquinone)、环普拉他(cycloplatam)、西泼霉素(cypemycin)、阿糖胞苷十八烷基磷酸盐(cytarabineocfosfate)、溶细胞因子、磷酸己烷雌酚(cytostatin)、达昔单抗(dacliximab)、地西他滨(decitabine)、去氢膜海鞘素B(dehydrodidemnin B)、2’脱氧助间型霉素(DCF)、德舍瑞林(deslorelin)、右异环磷酰胺(dexifosfamide)、右雷佐生(dexrazoxane)、右维拉帕米(dexverapamil)、地吖醌(diaziquone)、膜海鞘素B(didemnin B)、地多克斯(didox)、二乙基去甲精胺(diethylnorspermine)、二氢-5-氮杂胞嘧啶核苷、二氢紫杉醇、多喜霉素(dioxamycin)、二苯基螺莫司汀(diphenyl spiromustine)、迪莫利德、二十二烷醇(docosanol)、多拉司琼(dolasetron)、脱氧氟尿苷(doxifluridine)、屈洛昔芬(droloxifene)、屈大麻酚(dronabinol)、倍癌霉素SA、依布硒(ebselen)、依考莫司汀(ecomustine)、依地福新(edelfosine)、依决洛单抗(edrecolomab)、依氟鸟胺酸(eflornithine)、榄香烯(elemene)、乙嘧替氟(emitefur)、埃博霉素、埃坡西龙(epithilone)、爱普列特(epristeride)、雌莫司汀及其类似物、依托泊苷(etoposide)、4'-磷酸依托泊苷(亦称为etopofos)、依西美坦(exemestane)、法屈唑(fadrozole)、法扎拉滨(fazarabine)、芬维A胺(fenretinide)、非格司亭(filgrastim)、非那雄胺(finasteride)、夫拉平度(flavopiridol)、氟卓斯汀(flezelastine)、夫卢丝龙(fluasterone)、氟达拉滨(fludarabine)、盐酸氟多若辛(fluorodaunorunicin hydrochloride)、福酚美克(forfenimex)、福美坦(formestane)、福司曲星(fostriecin)、福莫司汀(fotemustine)、德克萨卟啉钆(gadolinium texaphyrin)、硝酸镓、加洛他滨(galocitabine)、加尼瑞克(ganirelix)、明胶酶抑制剂、吉西他滨(gemcitabine)、麸胱甘肽抑制剂、海普沙凡(hepsulfam)、高三尖杉酯碱(homoharringtonine)(HHT)、金丝桃素(hypericin)、伊班膦酸(ibandronic acid)、艾多昔芬(idoxifene)、伊屈孟酮(idramantone)、依莫福新(ilmofosine)、伊洛马司他(ilomastat)、咪唑并吖啶酮(imidazoacridone)、咪喹莫特(imiquimod)、免疫刺激剂肽、碘苄胍(iobenguane)、碘多柔比星、番薯酮醇(ipomeanol)、伊立替康、伊罗普拉(iroplact)、伊索拉定(irsogladine)、异苯嘎唑(isobengazole)、加斯诺利(jasplakinolide)、卡哈立得F(kahalalide F)、三乙酸片螺素-N(lamellarin-Ntriacetate)、兰瑞肽(lanreotide)、雷拉霉素(leinamycin)、来格司亭(lenograstim)、硫酸香菇多糖(lentinan sulfate)、来托他丁(leptolstatin)、来曲唑(letrozole)、亲脂性铂化合物、利索里胺7(lissoclinamide7)、洛铂(lobaplatin)、洛美曲索(lometrexol)、氯尼达明(lonidamine)、洛索蒽醌(losoxantrone)、洛索立宾(loxoribine)、勒托替康(lurtotecan)、德克萨卟啉镥(lutetium texaphyrin)、利索茶碱(lysofylline)、马索罗酚(masoprocol)、乳腺丝胺酸蛋白酶抑制剂(maspin)、基质金属蛋白酶抑制剂、米诺加醇(menogaril)、美巴龙(merbarone)、美替瑞林(meterelin)、蛋胺酸酶、甲氧氯普胺(metoclopramide)、MIF抑制剂、米非司酮(ifepristone)、米替福新(miltefosine)、米立司亭(mirimostim)、普卡霉素(mithracin)、米托胍腙(mitoguazone)、二溴卫矛醇(mitolactol)、丝裂霉素及其类似物、米托萘胺(mitonafide)、米托蒽醌、莫法罗汀(mofarotene)、莫拉司亭(molgramostim)、印度洋海绵B(mycaperoxide B)、美拉普龙(myriaporone)、N-乙酰基地那林(N-acetyldinaline)、N-取代之苯甲酰胺、那法瑞林(nafarelin)、那瑞替喷(nagrestip)、纳帕维(napavin)、萘萜二醇(naphterpin)、那托司亭(nartograstim)、奈达铂(nedaplatin)、奈莫柔比星、奈立膦酸(neridronic acid)、尼鲁米特(nilutamide)、尼萨霉素(nisamycin)、尼图仑(nitrullyn)、奥曲肽(octreotide)、奥克西农(okicenone)、奥那司酮(onapristone)、昂丹司琼(ondansetron)、奥拉辛(oracin)、奥马铂(ormaplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、奥索诺霉素(oxaunomycin)、太平洋紫杉醇及其类似物、帕洛胺(palauamine)、棕榈酰基根瘤菌素(palmitoylrhizoxin)、帕米膦酸(pamidronic acid)、人参炔三醇(panaxytriol)、帕诺米芬(panomifene)、副球菌素(parabactin)、帕泽普汀(pazelliptine)、培门冬酶、培地辛(peldesine)、木聚硫钠(pentosan polysulfate sodium)、喷司他汀(pentostatin)、喷曲唑(pentrozole)、全氟溴烷(perflubron)、培磷酰胺、苯连氮霉素(phenazinomycin)、必医你舒(picibanil)、吡柔比星(pirarubicin)、吡曲克辛(piritrexim)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、波弗霉素(porfiromycin)、嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂、雷替曲塞(raltitrexed)、根瘤菌素(rhizoxin)、罗谷亚胺(rogletimide)、罗希吐碱(rohitukine)、卢比吉农B1(rubiginoneB1)、如波西(ruboxyl)、沙芬戈(safingol)、塞妥平(saintopin)、肌肉叶绿醇A(sarcophytol A)、沙格司亭(sargramostim)、索布佐生(sobuzoxane)、索纳明(sonermin)、膦门冬酸(sparfosic acid)、穗霉素D(spicamycin D)、螺莫司汀(spiromustine)、密挤青霉酰胺(stipiamide)、索非罗新(sulfinosine)、他莫司汀(tallimustine)、替加氟(tegafur)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、原糖松草碱(thaliblastine)、噻可拉林(thiocoraline)、替拉扎明(tirapazamine)、托泊替康(topotecan)、托普森亭(topsentin)、曲西立滨(triciribine)、三甲曲沙(trimetrexate)、藜芦胺(veramine)、长春瑞滨、长春磷汀(vinxaltine)、伏罗唑(vorozole)、折尼铂(zeniplatin)及亚苄维C(zilascorb)。
连接体
如本文所用之术语「连接体」意指包含共价连接抗CD45抗体与细胞毒素以形成抗CD45抗体药物结合物(ADC)(各自如本文所述)之原子之共价键或链之二价化学部分。适宜连接体具有两个反应性末端，一个用于结合至抗体且另一个用于结合至细胞毒素。连接体之抗体结合反应性末端(反应性部分，Z′)通常系能够经由抗体上之半胱胺酸硫醇或离胺酸胺基结合至抗体之位点，且通常系硫醇反应性基团(例如双键，如在马来酰亚胺中)或脱离基(例如氯、溴、碘或R-硫基，或胺反应性基团，例如羧基)；同时连接体之抗体结合反应性末端通常系能够经由与细胞毒素上之碱性胺或羧基形成酰胺键结合至细胞毒素之位点，且因此通常系羧基或碱性胺基。当使用术语「连接体」阐述呈结合形式之连接体时，一或两个反应性末端将为不存在(例如已转化成化学部分Z之反应性部分Z′)或不完全的(例如仅为羧酸之羰基)，此乃因在连接体及/或细胞毒素之间及在连接体及/或抗体或其抗原结合片段之间形成键。该等结合反应进一步阐述于下文中。
可使用多种连接体将所述抗体或抗体片段结合至细胞毒性分子。在一些实施例中，连接体系可在细胞内条件下裂解，使得连接体之裂解自细胞内环境中之抗体释放药物单元。在其他实施例中，连接体单元系不可裂解的且药物系例如藉由抗体降解释放。可用于本ADC之连接体较佳在细胞外稳定，防止ADC分子聚集且保持ADC在水性介质中自由溶解并处于单体状态。在运输或递送至细胞中之前，ADC较佳系稳定的且保持完整，即抗体保持与药物部分连接。连接体在靶细胞外系稳定的且可以一定有效之速率在细胞内裂解。有效的连接体将：(i)维持抗体之特异性结合性质；(ii)允许细胞内递送结合物或药物部分；(iii)保持稳定及完整，即不裂解，直至结合物已递送或运输至其靶向位点；及(iv)维持细胞毒性部分之细胞毒性、细胞杀伤效应或细胞生长抑制效应。ADC之稳定性可藉由标准分析技术(例如质谱术、HPLC及分离/分析技术LC/MS)来量测。抗体及药物部分之共价连接需要连接体具有两个反应性官能基，即在反应意义上为二价。已知可用于连接两个或更多个功能或生物活性部分(例如肽、核酸、药物、毒素、抗体、半抗原及报导基因基团)之二价连接体试剂，且已阐述其所得结合物之方法(Hermanson,G.T.(1996)Bioconjugate Techniques；Academic Press:New York，第234-242页)。
适宜可裂解连接体包括可例如藉由酶水解、光解、酸性条件下之水解、碱性条件下之水解、氧化、二硫化物还原、亲核裂解或有机金属裂解裂解之彼等连接体(参见例如Leriche等人，Bioorg.Med.Chem.,20:571-582,2012，其关于适于共价结合之连接体之揭示内容系以引用方式并入本文中)。适宜可裂解连接体可包括例如化学部分，例如肼、二硫化物、硫醚或二肽。
可在酸性条件下水解之连接体包括例如腙、缩胺基脲、缩胺基硫脲、顺乌头酰胺、原酸酯、缩醛、缩酮或诸如此类。(例如参见美国专利第5,122,368号；第5,824,805号；第5,622,929号；Dubowchik及Walker,1999,Pharm.Therapeutics 83:67-123；Neville等人，1989,Biol.Chem.264:14653-14661，该等文献中之每一者关于适于共价结合之连接体之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。该等连接体在中性pH条件(例如血液中之彼等条件)下相对稳定，但在低于pH 5.5或5.0(溶酶体之大致pH)下不稳定。
可在还原条件下裂解之连接体包括例如二硫化物。多种二硫化物连接体为此项技术中已知，包括例如可使用SATA(S-乙酰基硫代乙酸N-琥珀酰亚胺基酯)、SPDP(3-(2-吡啶基二硫代)丙酸N-琥珀酰亚胺基酯)、SPDB(3-(2-吡啶基二硫代)丁酸N-琥珀酰亚胺基酯)及SMPT(N-琥珀酰亚胺基-氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫代)甲苯)、SPDB及SMPT形成之彼等二硫化物连接体(例如，参见Thorpe等人，1987,Cancer Res.47:5924-5931；Wawrzynczak等人，Immunoconjugates:Antibody Conjugates in Radioimagery andTherapy of Cancer(C.W.Vogel编辑，Oxford U.Press,1987))。亦参见美国专利第4,880,935号，该美国专利关于适于共价结合之连接体之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。
易于酶水解之连接体可为例如藉由细胞内肽酶或蛋白酶(包括但不限于溶酶体或胞内体蛋白酶)裂解之含肽连接体。使用细胞内蛋白水解释放治疗剂之一个优点在于，该剂通常在结合且结合物之血清稳定性通常较高时减弱。在一些实施例中，肽基连接体之长度为至少两个胺基酸或至少三个胺基酸。例示性胺基酸连接体包括二肽、三肽、四肽或五肽。适宜肽之实例包括含有胺基酸(例如缬胺酸、丙胺酸、瓜胺酸(Cit)、苯丙胺酸、离胺酸、白胺酸及甘胺酸)之彼等肽。包含胺基酸连接体组分之胺基酸残基包括彼等天然胺基酸以及最小胺基酸及非天然胺基酸类似物，例如瓜胺酸。例示性二肽包括缬胺酸-瓜胺酸(vc或val-cit)及丙胺酸-苯丙胺酸(af或ala-phe)。例示性三肽包括甘胺酸-缬胺酸-瓜胺酸(gly-val-cit)及甘胺酸-甘胺酸-甘胺酸(gly-gly-gly)。在一些实施例中，连接体包括二肽，例如Val-Cit、Ala-Val或Phe-Lys、Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Phe-Arg或Trp-Cit。含有二肽(例如Val-Cit或Phe-Lys)之连接体揭示于例如美国专利第6,214,345号中，该美国专利关于适于共价结合之连接体之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。在一些实施例中，连接体包括选自Val-Ala及Val-Cit之二肽。
适于结合本文所述之抗体或抗体片段与细胞毒性分子之连接体包括能够藉由1,6-消除过程释放细胞毒素之彼等连接体。能够进行此消除过程之化学部分包括对-胺基苄基(PAB)、6-马来酰亚胺基己酸、pH敏感性碳酸盐及如Jain等人，Pharm.Res.32:3526-3540,2015中所述之其他试剂，该文献关于适于共价结合之连接体之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，连接体包括「自消性」基团，例如上文所提及之PAB或PABC(对胺基苄基氧基羰基)，其揭示于例如Carl等人，J.Med.Chem.(1981)24:479-480；Chakravarty等人(1983)J.Med.Chem.26:638-644；US6214345；US20030130189；US20030096743；US6759509；US20040052793；US6218519；US6835807；US6268488；US20040018194；W098/13059；US20040052793；US6677435；US5621002；US20040121940；W02004/032828)。能够进行此过程之其他该等化学部分(「自消性连接体」)包括胺基甲酸亚甲基酯及杂芳基，例如胺基噻唑、胺基咪唑、胺基嘧啶及诸如此类。含有该等杂环自消性基团之连接体揭示于例如美国专利公开案第20160303254号及第20150079114号以及美国专利第7,754,681号；Hay等人(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9:2237；US 2005/0256030；de Groot等人(2001)J.Org.Chem.66:8815-8830；及US 7223837中。在一些实施例中，二肽系与自消性连接体组合使用。
适用于本文中之连接体可进一步包括一或多个选自以下之基团：C1-C6伸烷基、C1-C6伸杂烷基、C2-C6伸烯基、C2-C6伸杂烯基、C2-C6伸炔基、C2-C6伸杂炔基、C3-C6伸环烷基、伸杂环烷基、伸芳基、伸杂芳基及其组合，其各自视情况经取代。该等基团之非限制性实例包括(CH2)p、(CH2CH2O)p及-(C＝O)(CH2)p-单元，其中p系1-6之整数，其在每次出现时均经独立选择。
适宜连接体可含有具有溶解度增强性质之基团。连接体(包括(CH2CH2O)p单元(聚乙二醇PEG))例如可增强溶解度，与经胺基、磺酸、膦酸或磷酸残基取代之烷基链一样。包括该等部分之连接体揭示于例如美国专利第8,236,319号及第9,504,756号中，该等美国专利中之每一者关于适于共价结合之连接体之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。其他溶解度增强基团包括例如酰基及胺甲酰基磺酰胺基团，其具有以下结构：
Figure BDA0003690274480001861
其中a系0或1；且
R10系选自由以下组成之群：氢、C1-C24烷基、C3-C24环烷基、C1-C24(杂)芳基、C1-C24烷基(杂)芳基及C1-C24(杂)芳基烷基、C1-C24烷基、C3-C24环烷基、C2-C24(杂)芳基、C3-C24烷基(杂)芳基及C3-C24(杂)芳基烷基，其各自可视情况经取代及/或视情况杂有一或多个选自O、S及NR11R12之杂原子，其中R11及R12系独立地选自由氢及C1-C4烷基组成之群；或R10系细胞毒素，其中细胞毒素视情况经由间隔体部分连接至N。含有该等基团之连接体揭示于例如美国专利第9,636,421号及美国专利申请公开案第2017/0298145号中，该等美国专利关于适于共价结合至细胞毒素及抗体或其抗原结合片段之连接体之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，连接体可包括以下中之一或多者：肼、二硫化物、硫醚、二肽、对胺基苄基(PAB)、杂环自消性基团、视情况经取代之C1-C6烷基、视情况经取代之C1-C6杂烷基、视情况经取代之C2-C6烯基、视情况经取代之C2-C6杂烯基、视情况经取代之C2-C6炔基、视情况经取代之C2-C6杂炔基、视情况经取代之C3-C6环烷基、视情况经取代之杂环烷基、视情况经取代之芳基、视情况经取代之杂芳基、溶解度增强基团、酰基、-(C＝O)-或-(CH2CH2O)p-基团，其中p系1-6之整数。熟习此项技术者将意识到，一或多个所列出基团可以二价(二基)种类(例如C1-C6伸烷基及诸如此类)形式存在。
在一些实施例中，连接体L包含部分*-L1L2-**，其中：
L1系不存在或系-(CH2)mNR13C(＝O)-、-(CH2)mNR13-、-(CH2)mX3(CH2)m-、
Figure BDA0003690274480001871
L2系不存在或系-(CH2)m-、-NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-X4、-(CH2)mNR13C(＝O)X4、-(CH2)mNR13C(＝O)-、-((CH2)mO)n(CH2)m-、-((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-、-NR13((CH2)mO)nX3(CH2)m-、-NR13((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-、-X1X2C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)m(O(CH2)m)n-、-(CH2)mNR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mNR13(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mO)n(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)n-、-(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mNR13(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)-、-(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-、-(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-((CH2)mO)n(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13-、-(CH2)mX3-、-C(R13)2(CH2)m-、-(CH2)mC(R13)2NR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)NR13-、-(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)-、-C(R13)2(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(R13)2NR13-、-C(R13)2(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mC(R13)2NR13-、-C(R13)2(CH2)mOC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)O(CH2)mC(R13)2NR13-、-(CH2)mX3(CH2)mNR13-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR13-、-(CH2)mNR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nNR13-、-(CH2)m(O(CH2)m)nNR13-、-(CH2CH2O)n(CH2)m-、-(CH2)m(OCH2CH2)n、-(CH2)mO(CH2)m-、-(CH2)mS(＝O)2-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mS(＝O)2-、-(CH2)mX3(CH2)mS(＝O)2-、-(CH2)mX2X1C(＝O)-、-(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)X2X1C(＝O)-、-(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mNR13C(＝O)((CH2)mO)n(CH2)m-、-(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)NR13(CH2)m-或-(CH2)mX3(CH2)mNR13C(＝O)-；
其中
X1系
Figure BDA0003690274480001881
X2系
Figure BDA0003690274480001891
X3系
Figure BDA0003690274480001892
且
X4系
Figure BDA0003690274480001893
其中
R13在每次出现时系独立地选自H及C1-C6烷基；
m在每次出现时系独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10；
n在每次出现时系独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13及14；且
其中单星号(*)指示与细胞毒素(例如毒伞肽)之连接点，且双星号(**)指示与反应性取代基Z'或化学部分Z之连接点，条件系L1及L2皆存在。
在一些实施例中，连接体包括对胺基苄基(PAB)。在一个实施例中，对胺基苄基布置于连接体中之细胞毒性药物与蛋白酶裂解位点之间。在一个实施例中，对胺基苄基系对胺基苄基氧基羰基单元之一部分。在一个实施例中，对胺基苄基系对胺基苄基酰胺基单元之一部分。
在一些实施例中，连接体包含PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB。
在一些实施例中，连接体包含肽、寡糖、-(CH2)p-、-(CH2CH2O)p-、PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB中一或多者之组合。
在一些实施例中，连接体包括-((CH2)n，其中n系6。在一些实施例中，L-Z系
Figure BDA0003690274480001901
其中S系硫原子，其表示存在于抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基，
在一些实施例中，连接体包含-(C＝O)(CH2)p-单元，其中p系1-6之整数。
在一个具体实施例中，连接体包含以下结构
Figure BDA0003690274480001902
其中波形线指示与细胞毒素及反应性部分Z′之连接点。在另一具体实施例中，连接体包含以下结构
Figure BDA0003690274480001903
其中波形线指示与细胞毒素及反应性部分Z′之连接点。该等PAB-二肽-丙酰基连接体揭示于例如专利申请公开案第WO2017/149077号中，其全文皆以引用方式并入本文中。另外，WO2017/149077中所揭示之细胞毒素以引用方式并入本文中。
在某些实施例中，ADC之连接体系马来酰亚胺基己酰基-Val-Ala-对胺基苄基(mc-Val-Ala-PAB)。
在某些实施例中，ADC之连接体系马来酰亚胺基己酰基-Val-Cit-对胺基苄基(mc-vc-PAB)。
在一些实施例中，连接体包含
Figure BDA0003690274480001911
在一些实施例中，连接体包含MCC(4-[N-马来酰亚胺基甲基]环己烷-1-甲酸酯)。
在一些实施例中，连接体包含((CH2)mO)n(CH2)m-基团，其中n及m系各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10；及杂芳基，其中杂芳基系三唑。在一些实施例中，((CH2)mO)n(CH2)m-基团及三唑一起包含
Figure BDA0003690274480001912
其中n系1至10，且波形线指示与其他连接体组分、化学部分Z或毒伞肽之连接点。可用于本文所述方法及组合物中之其他连接体阐述于US 2019/0144504中，其以引用方式并入本文中。
熟习此项技术者将意识到，本文所揭示化学基团、部分及特征中之任一或多者可以多种方式组合以形成可用于结合如本文所揭示之抗体及细胞毒素之连接体。可与本文所述之组合物及方法结合使用之其他连接体阐述于例如美国专利申请公开案第2015/0218220号中，其揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。
在某些实施例中，使为连接体前体之中间体与药物部分在适当条件下反应。在某些实施例中，反应性基团用于药物及/或中间体或连接体上。随后使药物与中间体或衍生药物之间之反应产物与抗体或抗原结合片段在适当条件下反应。另选地，首先使连接体或中间体与抗体或衍生抗体反应，且然后与药物或衍生药物反应。现将更全面地阐述该等结合反应。
多种不同反应可用于共价连接连接体或药物-连接体结合物与抗体或其抗原结合片段。抗体分子上之适宜连接点包括离胺酸之胺基、麸胺酸及天冬胺酸之游离羧酸基团、半胱胺酸之硫氢基及芳族胺基酸之多个部分。例如，可使用碳二亚胺反应进行非特异性共价连接以连接化合物上之羧基(或胺基)与抗体部分上之胺基(或羧基)。另外，亦可使用双功能剂(例如二醛或亚胺基酯)来连接化合物上之胺基与抗体部分上之胺基。席夫碱反应(Schiff base reaction)亦可用于连接药物与结合剂。此方法涉及含有二醇或羟基之药物之高碘酸盐氧化，因此形成醛，醛然后与结合剂反应。连接系经由与结合剂之胺基形成席夫碱来进行。亦可使用异硫氰酸酯作为共价连接药物与结合剂之偶合剂。其他技术为熟习此项技术者已知且在本揭示案之范围内。
可用于结合至如本文所述抗体或抗原结合片段之连接体包括(但不限于)含有如下表1中所描绘藉由偶合反应形成之化学部分Z之连接体。曲线分别表示与抗体或抗原结合片段及细胞毒性分子之连接点。
表1.在抗体-药物结合物之形成中藉由偶合反应形成之例示性化学部分Z
Figure BDA0003690274480001921
Figure BDA0003690274480001931
Figure BDA0003690274480001941
Figure BDA0003690274480001951
熟习此项技术者将意识到，连接至连接体之反应性取代基Z′及抗体或其抗原结合片段上之反应性取代基在共价偶合反应中接合以产生化学部分Z，且将识别反应性部分Z′。因此，可与本文所述之方法结合使用之抗体-药物结合物可藉由抗体或其抗原结合片段与如本文所述连接体或细胞毒素-连接体结合物之反应来形成，该连接体或细胞毒素-连接体结合物包括适于与抗体或其抗原结合片段上之反应性取代基反应之反应性取代基Z′，以形成化学部分Z。
在一些实施例中，Z'系-NR13C(＝O)CH＝CH2、-N3、-SH、-S(＝O)2(CH＝CH2)、-(CH2)2S(＝O)2(CH＝CH2)、-NR13S(＝O)2(CH＝CH2)、-NR13C(＝O)CH2R14、-NR13C(＝O)CH2Br、-NR13C(＝O)CH2I、-NHC(＝O)CH2Br、-NHC(＝O)CH2I、-ONH2、-C(O)NHNH2、-CO2H、-NH2、-NH(C＝O)、-NC(＝S)，
Figure BDA0003690274480001961
Figure BDA0003690274480001971
其中
R13在每次出现时系独立地选自H及C1-C6烷基；
R14系-S(CH2)nCHR15NHC(＝O)R13；
R15系R13或-C(＝O)OR13；
R16在每次出现时系独立地选自H、C1-C6烷基、F、Cl及-OH；
R17在每次出现时系独立地选自H、C1-C6烷基、F、Cl、-NH2、-OCH3、-OCH2CH3、-N(CH3)2、-CN、-NO2及-OH；且
R18在每次出现时系独立地选自H、C1-C6烷基、F、经-C(＝O)OH取代之苄基氧基、经-C(＝O)OH取代之苄基、经-C(＝O)OH取代之C1-C4烷氧基及经-C(＝O)OH取代之C1-C4烷基。
连接体及抗体或其抗原结合片段上之适宜反应性取代基之实例包括亲核剂/亲电子剂对(例如硫醇/卤烷基对、胺/羰基对或硫醇/α,β-不饱和羰基对及诸如此类)、二烯/亲二烯物对(尤其例如迭氮化物/炔烃对或二烯/α,β-不饱和羰基对)及诸如此类。反应性取代基之间形成化学部分Z之偶合反应包括(但不限于)硫醇烷基化、羟基烷基化、胺烷基化、胺或羟胺缩合、肼形成、酰胺化、酯化、二硫化物形成、环加成(尤其例如[4+2]狄尔斯-阿尔德环加成(Diels-Alder cycloaddition)、[3+2]惠斯根环加成(Huisgen cycloaddition))、亲核芳族取代、亲电子芳族取代及此项技术中已知或本文所述之其他反应方式。较佳地，连接体含有用于与抗体或其抗原结合片段上之亲核官能基反应之亲电子官能基。
可存在于如本文所揭示抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基包括(但不限于)亲核基团，例如(i)N末端胺基，(ii)侧链胺基，例如离胺酸，(iii)侧链硫醇基，例如半胱胺酸，及(iv)其中抗体经糖基化之糖羟基或胺基。可存在于如本文所揭示抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基包括(但不限于)丝胺酸、苏胺酸及酪胺酸残基之羟基部分；离胺酸残基之胺基部分；天冬胺酸及麸胺酸残基之羧基部分；及半胱胺酸残基之硫醇部分，以及非天然胺基酸之炔丙基、迭氮基、卤芳基(例如氟芳基)、卤杂芳基(例如氟杂芳基)、卤烷基及卤杂烷基部分。在一些实施例中，存在于如本文所揭示抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基包括胺或硫醇部分。某些抗体具有可还原链间二硫化物，即半胱胺酸桥。可藉由用还原剂(例如DTT(二硫苏糖醇))处理使抗体具有反应性以与连接体试剂结合。因此，在理论上，每个半胱胺酸桥将形成两种反应性硫醇亲核剂。可经由离胺酸与2-亚胺基硫杂环戊烷(乔特试剂(Traut's reagent))之反应使胺转化成硫醇将其他亲核基团引入抗体中。可藉由引入一个、两个、三个、四个或更多个半胱胺酸残基(例如制备包含一或多个非天然半胱胺酸胺基酸残基之突变体抗体)将反应性硫醇基引入抗体(或其片段)中。美国专利第7,521,541号教示藉由引入反应性半胱胺酸胺基酸来工程改造抗体。
在一些实施例中，连接至连接体之反应性部分Z′系与存在于抗体上之亲电子基团具有反应性之亲核基团。可用于抗体上之亲电子包括(但不限于)醛及酮羰基。亲核基团之杂原子可与抗体上之亲电子基团反应且与抗体形成共价键。有用的亲核基团包括(但不限于)酰肼、肟、胺基、羟基、肼、缩胺基硫脲、羧酸肼及芳基酰肼。
在一些实施例中，Z系存在于抗体或其抗原结合片段内之反应性亲核取代基(例如胺及硫醇部分)与反应性亲电子取代基Z′之间之反应产物。例如，Z′尤其可为迈克尔受体(例如马来酰亚胺)、活化酯、缺电子之羰基化合物及醛。
例如，适于合成ADC之连接体包括(但不限于)反应性取代基Z′，例如马来酰亚胺或卤烷基。该等反应性取代基可藉由尤其例如Liu等人，18:690-697,1979中所述之试剂(例如4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-L-甲酸琥珀酰亚胺基酯(SMCC)、碘乙酸N-琥珀酰亚胺基酯(SIA)、磺基-SMCC、间-马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺基酯(MBS)、磺基-MBS及碘乙酸琥珀酰亚胺基酯)连接至连接体，该文献关于用于化学结合之连接体之揭示内容系以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，连接至连接体L之反应性取代基Z′系马来酰亚胺、迭氮化物或炔烃。含马来酰亚胺之连接体之实例系不可裂解之基于马来酰亚胺基己酰基之连接体，其尤其可用于结合微管破坏剂，例如奥里斯他汀。该等连接体阐述于Doronina等人，Bioconjugate Chem.17:14-24,2006，其关于用于化学结合之连接体之揭示内容系以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，反应性取代基Z′系-(C＝O)-或-NH(C＝O)-，使得连接体可分别藉由酰胺或脲部分连结至抗体或其抗原结合片段，该酰胺或脲部分源自-(C＝O)-或-NH(C＝O)-基团与抗体或其抗原结合片段之胺基之反应。
在一些实施例中，反应性取代基系N-马来酰亚胺基、卤化N-烷基酰胺基、磺酰基氧基N-烷基酰胺基、碳酸根基、磺酰卤基、硫醇基或其衍生物、包含炔基之内部碳-碳三键、(杂)环炔基、二环[6.1.0]壬-4-炔-9-基、包含烯基之内部碳-碳双键、环烯基、四嗪基、迭氮基、膦基、氧化腈基、硝酮基、腈亚胺基、重氮基、酮基、(O-烷基)羟基胺基、肼基、卤化N-马来酰亚胺基、1,1-双((磺酰基甲基)甲基羰基或其消除衍生物、羰基卤基或联烯酰胺(allenamide)基，其各自可视情况经取代。在一些实施例中，反应性取代基包含环烯烃基、环炔烃基或视情况经取代之(杂)环炔基。
含有适于与抗体或其抗原结合片段上之反应性残基反应之反应性取代基Z′之毒伞肽-连接体结合物之非限制性实例包括(但不限于)7'C-(4-(6-(马来酰亚胺基)己酰基)六氢吡嗪-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)六氢吡啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰基)六氢吡嗪-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷羰基)六氢吡嗪-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰基)六氢吡嗪-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(2-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(2-(3-羧丙酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(2-(2-溴乙酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(2-(3-(吡啶-2-基二硫基)丙酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(2-(4-(马来酰亚胺基)丁酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(2-(马来酰亚胺基)乙酰基)六氢吡嗪-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(3-(马来酰亚胺基)丙酰基)六氢吡嗪-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(4-(马来酰亚胺基)丁酰基)六氢吡嗪-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(3-((6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)甲基)吡咯啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(3-((6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰胺基)甲基)吡咯啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(3-((4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)甲基)吡咯啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(3-((6-((4-(马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)甲基)吡咯啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(2-(6-(2-(胺基氧基)乙酰胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(2-(4-(2-(胺基氧基)乙酰胺基)丁酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(4-(2-(胺基氧基)乙酰胺基)丁酰基)六氢吡嗪-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(6-(2-(胺基氧基)乙酰胺基)己酰基)六氢吡嗪-1-基)-毒伞肽；7'C-((4-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)六氢吡啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(6-(马来酰亚胺基)己酰基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；(R)-7'C-((3-((6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)甲基)吡咯啶-1-基)甲基)-毒伞肽；(S)-7'C-((3-((6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)甲基)吡咯啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)乙基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((3-((6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰胺基)-S-甲基)吡咯啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((3-((6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰胺基)-R-甲基)吡咯啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((3-((4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)-S-甲基)吡咯啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((3-((4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)-R-甲基)吡咯啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((3-((6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)甲基)吡咯啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(3-羧丙酰胺基)乙基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(马来酰亚胺基)乙酰基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(3-(马来酰亚胺基)丙酰基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(4-(马来酰亚胺基)丁酰基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(2-(马来酰亚胺基)乙酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(4-(马来酰亚胺基)丁酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((3-((6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)甲基)氮杂环丁-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((3-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)乙基)氮杂环丁-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((3-((4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)甲基)氮杂环丁-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((3-(2-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)乙基)氮杂环丁-1基)甲基)-毒伞肽；7'C-((3-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)乙基)氮杂环丁-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-(((2-(6-(马来酰亚胺基)-N-甲基己酰胺基)乙基)(甲基)胺基)甲基)-毒伞肽；7'C-(((4-(6-(马来酰亚胺基)-N-甲基己酰胺基)丁基(甲基)胺基)甲基)-毒伞肽；7'C-((2-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)乙基)氮丙啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((2-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)乙基)氮丙啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(6-(6-(2-(胺基氧基)乙酰胺基)己酰胺基)己酰基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(1-(胺基氧基)-2-侧氧基-6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十七-17-酰基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(2-(胺基氧基)乙酰胺基)乙酰基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(3-(2-(胺基氧基)乙酰胺基)丙酰基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(4-(2-(胺基氧基)乙酰胺基)丁酰基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(6-(2-(胺基氧基)乙酰胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(2-(2-(胺基氧基)乙酰胺基)乙酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(4-(2-(胺基氧基)乙酰胺基)丁酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(20-(胺基氧基)-4,19-二侧氧基-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十级烷基)六氢吡啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-(((2-(6-(2-(胺基氧基)乙酰胺基)-N-甲基己酰胺基)乙基)(甲基)胺基)甲基)-毒伞肽；7'C-(((4-(6-(2-(胺基氧基)乙酰胺基)-N-甲基己酰胺基)丁基)(甲基)胺基)甲基)-毒伞肽；7'C-((3-((6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)甲基)吡咯啶-1-基)-S-甲基)-毒伞肽；7'C-((3-((6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)-R-甲基)吡咯啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(2-溴乙酰胺基)乙基)六氢吡嗪-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(2-溴乙酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)甲基)-毒伞肽；7'C-((4-(2-(3-(吡啶-2-基二硫基)丙酰胺基)乙基)六氢吡啶-1-基)甲基)-毒伞肽；6'O-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己基)-毒伞肽；6'O-(5-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)戊基)-毒伞肽；6'O-(2-((6-(马来酰亚胺基)己基)氧基)-2-侧氧基乙基)-毒伞肽；6'O-((6-(马来酰亚胺基)己基)胺甲酰基)-毒伞肽；6'O-((6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己基)胺甲酰基)-毒伞肽；6'O-(6-(2-溴乙酰胺基)己基)-毒伞肽；7'C-(4-(6-(迭氮基)己酰胺基)六氢吡啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(己-5-炔酰基胺基)六氢吡啶-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡嗪-1-基)-毒伞肽；7'C-(4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰胺基)乙基)六氢吡嗪-1-基)-毒伞肽；6'O-(6-(6-(11,12-二去氢-5,6-二氢-二苯并[b,f]偶氮辛酰-5-基)-6-侧氧基己酰胺基)己基)-毒伞肽；6'O-(6-(己-5-炔酰基胺基)己基)-毒伞肽；6'O-(6-(2-(胺基氧基)乙酰胺基)己基)-毒伞肽；6'O-((6-胺基氧基)己基)-毒伞肽；及6'O-(6-(2-碘乙酰胺基)己基)-毒伞肽。
在一些实施例中，化学部分Z系选自表1。在一些实施例中，化学部分Z系
Figure BDA0003690274480002041
其中S系硫原子，其表示存在于结合CD45(例如来自半胱胺酸残基之-SH基团)之抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基。
在一些实施例中，连接体反应性取代基结构L-Z’在与抗体或其抗原结合片段结合之前系：
Figure BDA0003690274480002051
在一些实施例中，如本文所揭示之毒伞肽结合至具有下式之连接体反应性部分-L-Z′：
Figure BDA0003690274480002052
在一些实施例中，如本文所揭示之毒伞肽结合至具有下式之连接体反应性部分-L-Z′：
Figure BDA0003690274480002053
尤其可与本文所述之组合物及方法结合使用之前述连接体部分及毒伞肽-连接体结合物阐述于例如美国专利申请公开案第2015/0218220号及专利申请公开案第WO2017/149077号中，该等专利申请公开案之揭示内容之全文皆以引用方式并入本文中。
抗体-药物结合物之制备
在如本文所揭示之ADC中，抗CD45抗体或其抗原结合片段经由如本文所揭示之连接体L及化学部分Z结合至一或多个细胞毒性药物部分(D)，例如约1至约20个药物部分/抗体。本揭示案之ADC可藉由若干途径、采用熟习此项技术者已知之有机化学反应、条件及试剂来制备，包括：(1)使抗体或其抗原结合片段之反应性取代基与二价连接体试剂反应以形成如上文所述之Ab-Z-L，然后与药物部分D反应；或(2)使药物部分之反应性取代基与二价连接体试剂反应以形成D-L-Z′，然后与如上文所述抗体或其抗原结合片段之反应性取代基反应。用于制备ADC之其他方法阐述于本文中。
在另一态样中，抗CD45抗体或其抗原结合片段具有可经化学修饰以引入一或多个硫氢基之一或多个离胺酸残基。然后经由如上文所述之硫氢基之硫原子结合形成ADC。可用于修饰离胺酸之试剂包括(但不限于)S-乙酰基硫代乙酸N-琥珀酰亚胺基酯(SATA)及2-亚胺基硫杂环戊烷盐酸盐(乔特试剂)。
在另一态样中，抗CD45抗体或其抗原结合片段可具有可经化学修饰以具有一或多个硫氢基之一或多个碳水化合物基团。然后经由如上文所述之硫氢基之硫原子结合形成ADC。
在另一态样中，抗CD45抗体可具有可经氧化以提供醛(-CHO)基团之一或多个碳水化合物基团(参见例如Laguzza等人，J.Med.Chem.1989,32(3),548-55)。然后经由如上文所述之相应醛结合形成ADC。用于修饰用来连接或缔合细胞毒素之蛋白质之其他方案阐述于Coligan等人，Current Protocols in Protein Science，第2卷，John Wiley&Sons(2002)中，该文献以引用方式并入本文中。
用于结合连接体-药物部分与细胞靶向蛋白质(例如抗体、免疫球蛋白或其片段)之方法参见例如美国专利第5,208,020号；美国专利第6,441,163号；WO2005037992；WO2005081711；及WO2006/034488，所有该等专利之全文皆以引用方式明确并入本文中。
另选地，包含抗体及细胞毒性剂之融合蛋白可例如藉由重组技术或肽合成来制得。DNA之长度可包含编码结合物之彼此相邻之两个部分或由编码不会破坏结合物之期望性质之连接体肽之区域分开的各别区域。
本文所述之ADC可以多种剂量形式投与患者(例如患有免疫疾病或癌症之人类患者)。例如，本文所述之ADC可以水溶液(例如含有一或多种医药学上可接受之赋形剂之水溶液)形式投与患有免疫疾病或癌症之患者。适用于本文所述组合物及方法之医药学上可接受之赋形剂包括黏度改质剂。水溶液可使用此项技术中已知之技术来灭菌。
包含如本文所述抗CD45 ADC之医药调配物系藉由以冻干调配物或水溶液形式混合该ADC与一或多种视情况选用之医药学上可接受之载剂(Remington's PharmaceuticalSciences第16版，Osol,A.编辑(1980))来制备。医药学上可接受之载剂通常在所用剂量及浓度下对接受者无毒，且包括(但不限于)：缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐及其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸及甲硫胺酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六羟季铵；氯化苄烷铵；氯化本索宁；酚、丁醇或苄醇；对羟苯甲酸烷基酯，例如对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；及间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，例如聚乙烯基吡咯啶酮；胺基酸，例如甘胺酸、麸酰胺酸、天冬酰胺、组胺酸、精胺酸或离胺酸；单糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，例如钠；金属错合物(例如Zn-蛋白质复合物)；及/或非离子型表面活性剂，例如聚乙二醇(PEG)。
治疗方法
CD45系在整个造血及免疫系统中广泛表现之重要细胞表面分子。本文阐述抗CD45抗体及抗CD45 ADC，其可用于治疗患有白血病及淋巴瘤之患者以及患有自体免疫疾病(例如多发性硬化及硬皮症)之患者。另外，目前需要促进外源造血干细胞移植物植入、使得在移植后保留该等细胞之多功效及造血功能之组合物及方法。本文所揭示之组合物进一步提供对此挑战性问题之解决方法。
因此，本文揭示治疗多种病症(尤其例如造血谱系中之细胞类型之疾病、癌症、自体免疫疾病、代谢失调及干细胞病症)之方法。本文所述之组合物及方法可(i)直接耗尽产生病状之细胞群体，例如癌细胞(例如白血病细胞)及自体免疫细胞(例如自体反应性T细胞)群体，及/或(ii)耗尽内源造血干细胞群体以藉由提供移植的细胞可归巢之生态位促进移植的造血干细胞之植入。前述活性可藉由投与能够结合由内源致病性细胞或造血干细胞表现之抗原之ADC、抗体或其抗原结合片段来达成。在直接治疗疾病之情形下，此投与可使产生所关注病状之细胞量减少。在使患者为进行造血干细胞移植疗法作好准备之情形下，此投与可选择性耗尽内源造血干细胞群体，由此在造血组织(例如骨髓)中产生空位，该空位随后可由移植的外源造血干细胞填充。本发明部分地基于以下发现：可将能够结合由造血干细胞表现之CD45之ADC、抗体或其抗原结合片段投与患者来实现上述两种活性。结合由造血干细胞表现之抗原(例如CD45)之ADC、抗体或其抗原结合片段可投与患有癌症或自体免疫疾病之患者以直接耗尽癌性细胞或自体免疫细胞群体，且亦可投与需要造血干细胞移植疗法之患者以促进移植的造血干细胞之存活及植入潜力。
如本文所述，可向需要治疗之个体投与造血干细胞移植疗法以使一或多种血球类型群体建立或群体再建。造血干细胞通常展现多功效，且因此可分化成多种不同的血液谱系，包括(但不限于)颗粒球(例如前髓细胞、嗜中性球、嗜酸性球、嗜碱性球)、红血球(例如网状红血球、红血球)、凝血细胞(例如巨核母细胞、产生血小板之巨核细胞、血小板)、单核球(例如单核球、巨噬细胞)、树突细胞、微胶质细胞、破骨细胞及淋巴球(例如NK细胞、B细胞及T细胞)。造血干细胞另外能够自我更新，且因此可产生具有与母细胞等效潜力之子代细胞，且特征亦在于再引入移植物接受者中、随后其归巢至造血干细胞生态位并重建生产性及持续性造血之能力。
因此，造血干细胞可投与造血谱系之一或多种细胞类型缺失或缺陷之患者以使活体内缺失或缺陷性细胞群体复原，由此治疗与内源血球群体缺失或耗尽相关之病状。因此，本文所述之组合物及方法可用于治疗非恶性血红素病(例如选自由以下组成之群之血红素病：镰状细胞贫血症、地中海贫血、范康尼贫血、再生不良性贫血及伟-尔二氏症候群)。另外或另选地，本文所述之组合物及方法可用于治疗免疫缺失，例如先天性免疫缺失。另外或另选地，本文所述之组合物及方法可用于治疗获得性免疫缺失(例如选自由HIV及AIDS组成之群之获得性免疫缺失)。本文所述之组合物及方法可用于治疗代谢失调(例如选自由以下组成之群之代谢失调：肝糖储积病、黏多糖症、高歇氏病、胡尔勒病、鞘脂贮积病及异染性白质失养症)。
另外或另选地，本文所述之组合物及方法可用于治疗恶性病或增生性病症，例如血液癌、骨髓增生性疾病。在癌症治疗之情形下，可将本文所述之组合物及方法投与患者以在造血干细胞移植疗法之前耗尽内源造血干细胞群体，在该情形下移植的细胞可归巢至由内源细胞耗尽步骤产生之生态位且建立生产性造血。此进而可使在癌细胞根除期间(例如在全身性化学疗法期间)耗尽之细胞群体复原。可使用本文所述之组合物及方法治疗之例示性血液癌包括(但不限于)急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴性白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤及非霍奇金氏淋巴瘤以及其他癌性疾患，包括神经胚细胞瘤。
可使用本文所述之组合物及方法治疗之其他疾病包括(但不限于)腺苷去胺酶缺乏及重度合并性免疫缺失疾病、高免疫球蛋白M症候群、切-希二氏病、遗传性淋巴组织球血症、骨硬化症、成骨不全、储积病、重型地中海贫血、全身性硬化、全身性红斑狼疮、多发性硬化及幼年型类风湿性关节炎。
本文所述之抗体或其抗原结合片段及结合物可用于诱导实体器官移植物耐受性。例如，本文所述之组合物及方法可用于耗尽或消除靶组织之细胞群体(例如用于耗尽骨髓干细胞生态位之造血干细胞)。在靶组织细胞之该耗尽后，可将来自器官供体之干细胞或祖细胞群体(例如来自器官供体之造血干细胞)投与移植物接受者，且在植入该等干细胞或祖细胞后，可达成暂时性或稳定的混合嵌合体，由此实现长期移植器官耐受性而无需其他免疫抑制剂。举例而言，本文所述之组合物及方法可用于诱导实体器官移植物接受者中之移植物耐受性(尤其例如肾移植物、肺移植物、肝移植物及心脏移植物)。本文所述之组合物及方法非常适于与诱导实体器官移植物耐受性结合使用，例如，此乃因低百分比之暂时性或稳定的供体植入足以诱导移植器官之长期耐受性。
另外，本文所述之组合物及方法可用于直接治疗癌症，例如特征在于为CD45+之细胞之癌症。例如，本文所述之组合物及方法可用于治疗例如展现CD45+白血病细胞之患者之白血病。藉由耗尽CD45+癌性细胞，例如白血病细胞，本文所述之组合物及方法可用于直接治疗多种癌症。可以此方式治疗之例示性癌症包括血液癌，例如急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴性白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤及非霍奇金氏淋巴瘤。
另外，本文所述之组合物及方法可用于治疗自体免疫病症。例如，可将抗体或其抗原结合片段投与个体，例如患有自体免疫病症之人类患者，以杀伤CD45+免疫细胞。举例而言，CD45+免疫细胞可为自体反应性淋巴球，例如表现特异性结合自身抗原并引起针对自身抗原之免疫反应之T细胞受体之T细胞。藉由耗尽自身反应性CD45+，本文所述之组合物及方法可用于治疗自体免疫病状，例如下文所述之彼等自体免疫病状。另外或另选地，本文所述之组合物及方法可藉由在造血干细胞移植疗法之前耗尽内源造血干细胞群体用于治疗自体免疫疾病，在该情形下移植的细胞可归巢至由内源细胞耗尽步骤产生之生态且建立生产性造血。此进而可使在自体免疫细胞根除期间耗尽之细胞群体复原。
可使用本文所述之组合物及方法治疗之自体免疫疾病包括(但不限于)牛皮癣、牛皮癣关节炎、1型糖尿病(1型糖尿病)、类风湿性关节炎(RA)、人类全身性狼疮(SLE)、多发性硬化(MS)、发炎性肠病(IBD)、淋巴球性结肠炎、急性弥漫性脑脊髓炎(ADEM)、爱迪生氏病、普秃、关节黏连性脊椎炎、抗磷脂抗体症候群(APS)、再生不良性贫血、自体免疫溶血性贫血、自体免疫肝炎、自体免疫内耳疾病(AIED)、自体免疫淋巴球增生性症候群(ALPS)、自体免疫卵巢炎、巴洛病、贝切特氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、恰加斯氏病、慢性疲劳免疫功能障碍症候群(CFIDS)、慢性发炎性去髓鞘型多发性神经病变、克隆氏病、瘢痕性类天疱疮、乳糜泻-疱疹样皮肤炎、冷凝集素病、CREST症候群、迪戈斯病、盘状狼疮、自主神经障碍、子宫内膜异位症、特发性混合型冷凝球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、古德巴斯德症候群、格雷氏病、格林-巴利症候群(GBS)、桥本氏甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性及/或急性血小板减少紫斑症、特发性肺纤维化、IgA神经病变、间质性膀胱炎、青少年关节炎、川崎病、扁平苔藓、莱姆病、梅尼埃病、混合结缔组织疾病(MCTD)、重症肌无力、神经性肌强直、眼阵挛肌阵挛症候群(OMS)、视神经炎、沃德氏甲状腺炎、寻常天疱疮、恶性贫血、多发性软骨炎、多发性肌炎及皮肌炎、原发性胆汁性肝硬化、结节性多动脉炎、多线体症候群、风湿性多肌痛、原发性无γ球蛋白血症、雷诺氏现象、莱特氏症候群、风湿热、类肉瘤病、硬皮症、薛格连氏症候群、僵体症候群、高安氏动脉炎、颞动脉炎(亦称为「巨细胞动脉炎」)、溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎、眼色素层炎、血管炎、白斑病、阴唇痛症(「外阴前庭炎」)及华格纳氏肉芽肿。
在一些实施例中，移植物为同种异体的。在一些实施例中，移植物为自体的。
在一些实施例中，移植物为骨髓移植物、外周血移植物或脐带血移植物。
在一些实施例中，移植物包括造血细胞(例如造血干细胞)。
在本文所述之任一实施例中，移植物可为任一实体器官或皮肤移植物。在一些实施例中，移植物系选自由以下组成之群：肾移植物、心脏移植物、肝移植物、胰脏移植物、肺移植物、肠移植物及皮肤移植物。
投与及给药途径
本文所述之抗体、其抗原结合片段或ADC可以多种剂量形式投与患者(例如患有癌症、自体免疫疾病或需要造血干细胞移植疗法之人类患者)。例如，本文所述之抗体、其抗原结合片段或ADC可以水溶液(例如含有一或多种医药学上可接受之赋形剂之水溶液)形式投与患有癌症、自体免疫疾病或需要造血干细胞移植疗法之患者。用于本文所述组合物及方法之医药学上可接受之赋形剂包括黏度改质剂。水溶液可使用此项技术中已知之技术来灭菌。
包含抗CD45抗体或其结合物(例如如本文所述之ADC)之医药调配物系藉由以冻干调配物或水溶液形式混合该抗体或ADC与一或多种视情况选用之医药学上可接受之载剂(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.编辑(1980))来制备。医药学上可接受之载剂通常在所用剂量及浓度下对接受者无毒，且包括(但不限于)：缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐及其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸及甲硫胺酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六羟季铵；氯化苄烷铵；氯化本索宁；酚、丁醇或苄醇；对羟苯甲酸烷基酯，例如对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；及间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，例如聚乙烯基吡咯啶酮；胺基酸，例如甘胺酸、麸酰胺酸、天冬酰胺、组胺酸、精胺酸或离胺酸；单糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，例如钠；金属错合物(例如Zn-蛋白质复合物)；及/或非离子型表面活性剂，例如聚乙二醇(PEG)。
本文所述之抗体、抗原结合片段或ADC可藉由多种途径(例如经口、经皮、皮下、鼻内、静脉内、肌内、眼内或非经肠)来投与。最适于在任何给定情形下投与之途径将端视所投与之具体抗体或抗原结合片段、患者、医药调配方法、投与方法(例如投与时间及投与途径)、患者之年龄、体重、性别、所治疗疾病之严重程度、患者之饮食及患者之排泄速率而定。
本文所述抗体或其抗原结合片段之有效剂量可介于例如每单次(例如浓注)投与、多次投与或连续投与约0.001至约100mg/kg体重范围内，或达成抗体或其抗原结合片段之最佳血清浓度(例如0.0001-5000μg/mL之血清浓度)。剂量可每天、每周或每月向患有癌症、自体免疫疾病或经历为接受造血干细胞移植物作好准备之调理疗法之个体(例如人类)投与一或多次(例如2-10次)。在造血干细胞移植之前之调理程序之情形下，抗体或其抗原结合片段可在最佳植入外源造血干细胞之时间(例如在投与外源造血干细胞移植物之前1小时至1周(例如1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天或7天)或更长时间)投与患者。
使用本文所揭示之方法，熟习此项技术之医师可向需要造血干细胞移植疗法之人类患者投与能够结合由造血干细胞表现之CD45之ADC、抗体或其抗原结合片段。以此方式，可在投与外源造血干细胞移植物之前耗尽内源造血干细胞群体以促进造血干细胞移植物之植入。抗体可共价结合至毒素，例如本文所述或此项技术中已知之细胞毒性分子。例如，抗CD45抗体或其抗原结合片段可共价结合至细胞毒素，例如假单胞菌外毒素A、去三角梅蛋白、白喉毒素、毒伞肽(例如γ-瓢菌素、α-瓢菌素)、肥皂草毒素、美登素、类美登素、奥里斯他汀、蒽环、卡奇霉素、伊立替康、SN-38、倍癌霉素、吡咯并苯并二氮呯、吡咯并苯并二氮呯二聚体、吲哚啉并苯并二氮呯、吲哚啉并苯并二氮呯二聚体或其变异体。此结合可使用本文所述或此项技术中已知之共价键形成技术来实施。随后可例如藉由在移植外源造血干细胞(例如自体、同基因或同种异体造血干细胞)之前向患者静脉内投与抗体、其抗原结合片段或药物-抗体结合物来投与患者。
抗CD45抗体、其抗原结合片段或ADC可在造血干细胞移植疗法之前以足以使内源造血干细胞之量减少例如10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更大之量投与。造血干细胞计数之减少可使用此项技术中已知之习用技术、例如藉由FACS分析在调理疗法期间以不同间隔自患者抽吸之血液样品中表现特征性造血干细胞表面抗原之细胞来监测。例如，熟习此项技术之医师可在调理疗法期间之不同时间点自患者抽吸血液样品，且藉由使用结合至造血干细胞标记物抗原之抗体实施FACS分析以阐明样品中造血干细胞之相对浓度来确定内源造血干细胞减少之程度。根据一些实施例，当造血干细胞之浓度因应抗CD45抗体、其抗原结合片段或ADC之调理疗法达到最小值时，医师可结束调理疗法，且可开始使患者为进行造血干细胞移植疗法作准备。
抗CD45抗体、其抗原结合片段或ADC可以含有一或多种医药学上可接受之赋形剂(例如黏度改质剂)之水溶液投与患者。水溶液可使用本文所述或此项技术中已知之技术来灭菌。抗体、其抗原结合片段或药物-抗体结合物可在向患者投与造血干细胞移植物之前以例如0.001mg/kg至100mg/kg之剂量投与患者。在一个实施例中，抗体、其抗原结合片段或药物-抗体结合物可以约0.1mg/kg至约0.3mg/kg之剂量投与患者。在一个实施例中，抗体、其抗原结合片段或药物-抗体结合物可以约0.15mg/kg至约0.3mg/kg之剂量投与患者。在一个实施例中，抗体、其抗原结合片段或药物-抗体结合物可以约0.15mg/kg至约0.25mg/kg之剂量投与患者。在一个实施例中，抗体、其抗原结合片段或药物-抗体结合物可以约0.2mg/kg至约0.3mg/kg之剂量投与患者。在一个实施例中，抗体、其抗原结合片段或药物-抗体结合物可以约0.25mg/kg至约0.3mg/kg之剂量投与患者。在一些实施例中，抗体、其抗原结合片段或药物-抗体结合物可以约0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg或1.0mg/kg之剂量投与患者。
在其他实施例中，抗体、其抗原结合片段或药物-抗体结合物可以约0.001mg/kg至约10mg/kg、约0.01mg/kg至约9.5mg/kg、约0.1mg/kg至约9mg/kg、约0.1mg/kg至约8.5mg/kg、约0.1mg/kg至约8mg/kg、约0.1mg/kg至约7.5mg/kg、约0.1mg/kg至约7mg/kg、约0.1mg/kg至约6.5mg/kg、约0.1mg/kg至约6mg/kg、约0.1mg/kg至约5.5mg/kg、约0.1mg/kg至约5mg/kg、约0.1mg/kg至约4.5mg/kg、约0.1mg/kg至约4mg/kg、约0.5mg/kg至约3.5mg/kg、约0.5mg/kg至约3mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg、约1mg/kg至约9mg/kg、约1mg/kg至约8mg/kg、约1mg/kg至约7mg/kg、约1mg/kg至约6mg/kg、约1mg/kg至约5mg/kg、约1mg/kg至约4mg/kg或约1mg/kg至约3mg/kg之剂量投与患者。
抗CD45抗体、其抗原结合片段或ADC可在最佳促进外源造血干细胞植入之时间(例如在投与外源造血干细胞移植物之前约1小时至约1周(例如约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天或7天)或更长时间)投与患者。
在结束调理疗法后，患者随后可接受例如来自实施调理疗法之同一医师或来自不同医师之外源造血干细胞之输注(例如静脉内输注)。医师可例如以约1×103至约1×109个造血干细胞/kg之剂量向患者投与自体、同基因或同种异体造血干细胞之输注。医师可例如藉由自患者抽吸血液样品且测定投与移植物后造血干细胞或造血谱系细胞(例如巨核细胞、凝血细胞、血小板、红血球、肥大细胞、骨髓母细胞、嗜碱性球、嗜中性球、嗜酸性球、微胶质细胞、颗粒球、单核球、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀手细胞、T淋巴球及B淋巴球)浓度之增加来监测造血干细胞移植物之植入。此分析可在例如造血干细胞移植疗法后约1小时至约6个月或更长时间(例如约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周或更长时间)来实施。移植疗法后造血干细胞或造血谱系细胞之浓度相对于移植疗法前相应细胞类型之浓度已增加(例如增加约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、500％或更大)之发现提供以下一种指示：用抗CD45抗体或其抗原结合片段或ADC治疗已成功地促进移植的造血干细胞移植物之植入。
因投与抗CD45抗体、其抗原结合片段或ADC而引起之造血干细胞移植物植入可以多种经验量测来表现。例如，移植的造血干细胞之植入可藉由评价投与抗CD45抗体或其抗原结合片段且随后投与造血干细胞移植物后存在于患者骨髓内之竞争性群体再建单元(CRU)之量来评估。另外，可藉由将报导基因(例如催化化学反应产生荧光、发色或发光产物之酶)纳入载体(供体造血干细胞已经该载体转染)中、且随后监测造血干细胞已归巢之组织(例如骨髓)中之相应信号来观察造血干细胞移植物之植入。亦可藉由评估例如如藉由此项技术中已知之荧光活化细胞分选(FACS)分析方法测定之造血干细胞及祖细胞之量及存活来观察造血干细胞植入。亦可藉由量测移植后时段中外周血中之白血球计数及/或藉由量测骨髓抽出样品中供体细胞对骨髓细胞之恢复来确定植入。
实例
提出以下实施例以向熟习此项技术者提供如何使用、制造及评估本文所述之组合物及方法之描述，且意欲纯粹例示本发明，而不欲限制发明者认为其发明之范围。
实例1.抗CD45抗体Ab1-Ab7之鉴别
筛选全人类文库且鉴别抗人类CD45抗体Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6及Ab7。前述抗体中之每一者能够于CD45表现细胞上内化。以下实例提供关于文库筛选及所得抗体之其他细节。
酵母展示
筛选展示全人类抗体(天然或合成)之酵母展示文库与人类CD45(同功型CD45RABC；Uniprot:P08575-3)及非人类灵长类动物(NHP)CD45之胞外结构域之结合。选择编码结合至重组CD45抗原之抗体之酵母细胞。根据此项技术中已知之技术分离代表来自所选酵母细胞之抗体之核酸序列。
具体而言，实施筛选以鉴别人类及NHP交叉反应性抗CD45抗体。第一次筛选产生约55种抗体，但该等抗体仅结合至人类CD45且不与NHP CD45抗原交叉反应。第二次筛选成功地产生82种人类反应性纯系，其中17种对人类及恒河猴CD45具有反应性，其中8种对人类、恒河猴及食蟹猴CD45重组抗原具有三重交叉反应性。
在八种三重交叉反应性(人类、恒河猴、食蟹猴CD45反应性)抗体中，藉助使重链及轻链中之CDR1、CDR2、CDR3序列多样化并根据此项技术中已知之方法选择改良的亲和力，选择具有不同CDR3重链序列之四种人类IgG抗体用于几轮亲和力成熟以进一步改良亲和力。随后在四种输入抗体之亲和力成熟后，鉴别总共55种具有改良亲和力及变异体序列之人类IgG抗体。在输入至亲和力成熟过程中之四种亲代抗体中，仅一种抗体产生子代变异体，其藉由对人类及食蟹猴外周单核细胞(PBMC)实施之结合分析验证为活细胞上之真交叉反应性纯系(参见图1)。
如图1中所显示，相对于亲代抗体，源自Ab1之子代变异体具有改良之人类CD45结合，如藉由Octet结合分析所评估。另外，源自Ab1之亲和力成熟子代变异体显示与人类CD45及食蟹猴CD45之种间交叉反应性(图1)。相反，源自其他三种亲代抗体之抗体具有较差交叉反应性(图1)。
表现源自Ab1之所选子代变异体且进一步筛选所得抗体以鉴别能够在CD45表现细胞上内化之抗CD45抗体。适用于产生及筛选抗体展示文库之例示性方法及试剂可参见例如Boder E.T.及Wittrup K.D.,Yeast surface display for directed evolution ofprotein expression,affinity,and stability,Methods Enzymol,328:430-44(2000)以及Boder E.T.及Wittrup K.D.,Yeast surface display for screening combinatorialpolypeptide libraries,Nat Biotechnol.15(6):553-7(1997年6月)。
根据前述筛选过程，基于期望抗原及活细胞结合性质选择五种人类IgG抗体，包括在亲和力成熟(Ab1)之前鉴别之一种抗体及在亲和力成熟后鉴别之四种抗体(Ab2、Ab3、Ab4及Ab6)。在Ab4中引入后续位点特异性取代，以产生Ab5。类似地，在Ab3中引入位点特异性取代，以产生Ab7。七种所选抗体之重链及轻链之可变区及CDR区之胺基酸序列提供于表27中。七种抗体包括以下抗体：抗体1(Ab1)、抗体2(Ab2)、抗体3(Ab3)、抗体4(Ab4)、抗体5(Ab5)、抗体6(Ab6)及抗体7(Ab7)。
Ab1-7之其他表征提供于实例2至14中。
实例2.抗CD45抗体之活体外稳定性分析
在不同应力条件下评价在实例1中鉴别之抗体之稳定性。该等研究鉴别可易于形成可影响抗体异质性及/或结合之转译后修饰之VH/VL框架及CDR胺基酸。
藉由将Ab3及Ab4在4℃、25℃及40℃下培育15天、然后藉由亲水相互作用层析(HIC)分析抗体来实施两周稳定性分析。简言之，将25微克之所指示抗体注射至Waters ARCHPLC/UPLC系统上之Tosoh TSKgel Phenyl-5PW 7.5mm ID×7.5cm 10微米管柱(目录号07573)上。抗体之HIC溶析曲线展现随热应力增加之相对亲水之前峰。此亲水前峰指示潜在转译后修饰(例如氧化或去酰胺)位点。随后实施肽定位以鉴别在暴露于应力(高pH、低pH及氧化压力)后每一抗体中经修饰之胺基酸。肽定位分析鉴别在CDR-L1(N30位置)中因应高pH条件(例如pH 8或更大)之天冬酰胺之潜在去酰胺位点。
比较在亲和力成熟后鉴别之其他纯系表明丝胺酸可在CDR-L1之N30位置具有耐受性。因此，产生Ab3及Ab4之变异体，其中CDR-L1中之天冬酰胺(例如在位置30B)经丝胺酸取代。所得抗体分别命名为Ab7及Ab5。在暴露于高pH处理后在Ab5之HIC曲线中未观察到对应于去酰胺种类之前峰，确认此取代去除此潜在去酰胺位点。
实例3.抗CD45抗体之活体外结合分析
研究实例1及2中所述之抗体以确定其与人类CD45之结合特征且评估其与恒河猴及食蟹猴CD45交叉反应之能力。
在25℃下在补充有0.1％w/v牛血清白蛋白之1×PBS中使用Pall ForteBio OctetRed96使用生物层干涉(BLI)实施抗体结合研究。将每种经纯化人类抗体固定至抗人类Fc生物传感器(AHQ；Pall ForteBio 18-5001)上且与50nM之经纯化人类、恒河猴或食蟹猴CD45胞外结构域(用于亲和力成熟纯系Ab2-Ab7)以及100nM人类CD45及300nM恒河猴或食蟹猴CD45(用于亲代纯系Ab1)一起培育。
藉由使用如藉由ForteBio数据分析软件第10版计算之1:1结合模型将每一IgG局部完全拟合至经纯化人类、食蟹猴或恒河猴CD45胞外结构域来测定表观单价亲和力(KD)、表观缔合速率(K缔合)及表观解离速率(K解离)。每一抗体之KD、K缔合及Kdis显示于表2中。相对于亲代纯系Ab1，亲和力成熟子代纯系(Ab 2-Ab 7)展示改良之人类CD45结合。另外，该等结果指示，Ab5及Ab7之N_30_S取代不会改变CD45结合。应注意，所选抗体Ab2-Ab7中之每一者能够与人类、食蟹猴及恒河猴CD45交叉反应。使用确认结合
表2.所指示IgG与人类CD45胞外结构域、食蟹猴CD45胞外结构域或恒河猴CD45胞外结构域之单价亲和力(KD)、表观缔合速率(K缔合)及表观解离速率(K解离或Kdis)
Figure BDA0003690274480002211
*具有N_S胺基酸取代之纯系
实例4.抗CD45抗体之活体外REH及PBMC细胞结合活性
在此实例中评价在实例1及2鉴别之所选抗CD45抗体(Ab5及Ab7)之活体外REH及PBMC细胞结合。每一抗体之Fc区经胺基酸取代D265C LALA H435A修饰。
将REH-1(B细胞非霍奇金氏淋巴瘤细胞株，ATCC编号CRL-3004)细胞或原代人类或食蟹猴外周血单核细胞(PBMC)在细胞培养基与滴定剂量之Ab5及Ab7在37℃下一起培育过夜。用经荧光标记之AF488抗人类IgG二级抗体使用流式细胞术侦测所结合抗CD45抗体。藉由使用GraphPad Prism拟合数据来确定IC50。
如表3及图2中所显示，Ab5及Ab7在人类与食蟹猴PBMC之间显示相似的IC50，此展示与活细胞上之人类及食蟹猴CD45之交叉反应性结合。抗体亦显示与表现人类CD45之REH-1细胞株之强效结合。
表3.EC50(nM)
抗体 REH 人类 食蟹猴
Ab5(D265C LALA H435A) 0.3 1.4 1.3
Ab7(D265C LALA H435A) 0.2 1.0 1.3
实例5.抗原决定基定位
使用交联质谱对由在实例1及2中鉴别之抗CD45抗体(Ab5)结合之抗原决定基进行定位。交联实验允许藉由高质量MALDI质谱直接分析非共价相互作用。藉由混合含有非共价相互作用之蛋白质样品与特殊开发之交联混合物(Bich,C等人，Anal.Chem.,2010,82(1)，第172-179页)，可以高灵敏度特异性侦测非共价复合物。藉由交联产生之共价结合允许相互作用种类在样品制备过程及MALDI离子化中存活。特殊高质量侦测系统允许在高质量范围内表征相互作用。
为以高分辨率确定Ab5之抗原决定基，将蛋白质复合物与氘化交联剂一起培育且使其经受多酶裂解。蛋白质复合物系结合至人类CD45之Ab5变异体抗体(具有与Ab5相同之抗原决定基)。富集交联肽后，藉由高分辨率质谱(nLC-LTQ-Orbitrap MS)分析样品且使用XQuest及Stavrox软件分析所产生之数据。
在具有氘化d0d12之蛋白质复合物CD45/Ab5之胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、ASP-N、弹性蛋白酶及嗜热菌蛋白酶蛋白分解后，nLC-orbitrap MS/MS分析指示，Ab5抗原决定基包括肽TEKDCLNLDKNLIKYDLQNLK(SEQ ID NO:114)及RPPRDRNGPHERYHLEVEAGNTLVRNESH(SEQ IDNO:116)中之残基，且具体而言与人类CD45上对应于SEQ ID NO:113(CD45同功型之对应于NP_002829.3之片段)之405T、407K、419Y、425K、481R、505R及509H的胺基酸相互作用。该等结果图解说明于图3中，显示对应于SEQ ID NO:115及117之CD45胺基酸片段涵盖Ab5之抗原决定基(例如如SEQ ID NO:114及SEQ ID NO:116中所述之抗原决定基)及特异性相互作用位点。
CD45包括黏蛋白样结构域、d1-d4纤连蛋白样结构域以及跨膜及磷酸酶结构域。基于本结果，Ab5似乎与CD45之纤连蛋白样结构域之d3及d4相互作用。Ab5抗原决定基之残基405T、407K、419Y、425K及505R在人类、食蟹猴及恒河猴CD45中较为保守，此与Ab5(及源自Ab1之纯系)结合至人类、恒河猴及食蟹猴CD45之能力一致。
实例6.抗CD45抗体结合物之细胞内化
为进行此研究，在人类骨髓细胞之活体外内化分析中评价在实例1及2鉴别之抗CD45抗体(Ab5)。具有经修饰Fc区(D265C LALA H435A)之Ab5结合至毒伞肽(毒伞肽1(AM1))以形成抗体药物结合物(Ab5-AM1)。除非另有说明，否则如通篇中所用之AM1系由本文所述之式VI表示。
抗CD45 ADC结合至水溶性、明亮的、光敏性且pH反应性之pHAb染料。内化后，结合抗体可移动至酸性胞内体/溶酶体，其中pHAb染料在563nM处发射且可藉由流式细胞术侦测。使用此方法，在CD34+人类骨髓细胞中评价Ab5-AM1 ADC之内化。
藉由将CD34+人类骨髓细胞在冰上培育2小时、与饱和浓度之ADC一起培育0小时、2小时、24小时、48小时或72小时来实施此分析。随时间评价pHAb之水平(如藉由gMFI所量测)(图4；左图)。在时程结束时，使用经荧光团标记之抗IgG分子藉由流式细胞术来评价结合表面hIgG1。包括不与人类CD34+细胞结合之结合至毒伞肽1之同型IgG(同型-AM1)作为非内化对照。由于0h时间点表示CD45之饱和结合，故藉由比较每一时间点之结合表面IgG之几何平均荧光强度(gMFI)与相同ADC在0小时之gMFI来计算内化的ADC％(图4；右图)。
如图4中所显示，在细胞中侦测到之pHAb之水平随时间增加(图4，左图)，此对应于ADC内化％随时间之增加(图4，右图)。Ab5-AM1之内化％显著高于同型-AM1之内化％，此指示人类CD34+骨髓细胞使Ab5-AM1内化，而不使同型对照内化。该等结果指示，人类CD34+骨髓细胞使Ab5-AM1内化。
实例7.使用活体外细胞株杀伤分析之抗CD45抗体结合物之分析
评价在实例1及2中鉴别之抗CD45抗体(Ab2-Ab7)之抗体-药物结合物(ADC)对Jurkat(急性T细胞白血病细胞株，ATCC编号TIB-152)、SKNO-1(急性骨髓性白血病细胞株JCRB1170)及REH-1(B细胞非霍奇金氏淋巴瘤细胞株，ATCC编号CRL-3004)细胞株及REHCD45-/-基因剔除细胞株之活体外杀伤。具有经修饰Fc区(D265C LALA H435A或D265C.LALA.H435A-SG3249)之抗CD45抗体各自结合至两种毒伞肽中之一者(毒伞肽1(AM1)或毒伞肽2(AM2))或PBD(泰斯润)以形成ADC。除非另外指明，否则如通篇所用之AM2系由式III表示，其中X系S。
为进行使用细胞株之活体外杀伤分析，使细胞根据ATCC指南生长。更特定而言，将细胞在CD45-ADC或同型对照-ADC存在下培养7天。然后藉由量测与活细胞相关之三磷酸腺苷(ATP)含量之Cell-titer Glo分析来量测细胞活力。在细胞株杀伤分析后，量化细胞毒性之水平且使用GraphPad Prism计算IC50。
表4及表5以及图5A及图5B中所述之结果指示，所测试抗CD45-ADC中之每一者可有效地杀伤活体外CD45表现细胞株(例如Jurkat、REH-1或SKNO-1细胞)。
表4.活体外Jurkat、REH及SKNO-1细胞株杀伤分析-IC50值
Figure BDA0003690274480002241
Figure BDA0003690274480002251
表5.活体外REH细胞株杀伤分析-IC50值
ADC REH IC50(M)
Ab4-AM2(D265C.LALA.H435A) 6.6E-11
Ab4-AM1(D265C.LALA.H435A) 2.8E-10
Ab5-AM1(D265C.LALA.H435A) 4.3E-11
Ab6-AM1(D265C.LALA.H435A) 2.5E-10
Ab3-AM1(D265C.LALA.H435A) 4.8E-11
Ab7-AM1(D265C.LALA.H435A) 6.9E-11
Ab5-PBD(D265C.LALA.H435A-SG3249) 2.3E-12
实例8.使用活体外PBMC及HSC杀伤分析之抗CD45抗体结合物之分析
评价在实例1及2中鉴别之抗CD45抗体(Ab2-Ab7)之抗体-药物结合物(ADC)对活体外原代人类或食蟹猴外周血单核细胞(PBMC)或人类造血干细胞(HSC)之杀伤。在此研究中，具有经修饰Fc区(D265C LALA H435A或D265C.LALA.H435A-SG3249)之抗CD45抗体各自结合至两种毒伞肽中之每一者(毒伞肽1(AM1)或毒伞肽2(AM2))或PBD，以形成ADC。
PBMC系由淋巴球(T细胞、B细胞、自然杀手细胞)及单核球之异质细胞群体组成之CD45表现细胞。为进行使用细胞株之活体外杀伤分析，将PBMC在含有10％胎牛血清之RPMI1640中在CD45-ADC或同型对照-ADC存在下培养7天。然后藉由Cell-titer Glo分析量测细胞活力。在PBMC杀伤分析后，量化细胞毒性之水平且使用GraphPad Prism计算IC50。
图6A及表6中所述之结果指示，抗CD45-ADC中之每一者可有效地杀伤活体外人类及食蟹猴PBMC。描绘Ab5-AM1之人类及食蟹猴杀伤之例示图显示于图6A及表7中。Ab5-AM1展现对原代PBMC之强效杀伤且对于人类PBMC之IC50为8.5pM，对于食蟹猴PBMC之IC50为9.1pm，此指示人类及食蟹猴PBMC对Ab5-AM1同样敏感。
表6.活体外细胞株杀伤分析-IC50值
Ab1源性ADC 人类PBMC IC50(M)
Ab2-AM2(D265C LALA H435A) 5.5E-12
Ab3-AM2(D265C LALA H435A) 1.0E-09
Ab4-AM2(D265C.LALA.H435A) 2.5E-11
Ab2-AM1(D265C.LALA.H435A) 1.1E-11
Ab4-AM1(D265C.LALA.H435A) 2.6E-11
Ab5-AM1(D265C.LALA.H435A) 8.5E-12
Ab6-AM1(D265C.LALA.H435A) 3.0E-11
Ab3-AM1(D265C.LALA.H435A) 7.1E-12
Ab7-AM1(D265C.LALA.H435A) 3.7E-12
Ab5-PBD(D265C.LALA.H435A-SG3249) 1.3E-10
表7.使用Ab5-AM1之活体外人类及食蟹猴PBMC细胞杀伤分析-IC50值
Figure BDA0003690274480002261
为进行使用人类HSC之活体外杀伤分析，将原代人类CD34+骨髓细胞与Ab2-AM2、Ab4-AM2、Ab5-AM1或同型ADC一起培养5天。藉由流式细胞术测定随抗体浓度变化之活CD34+CD90+HSC计数。如图6B中所显示，Ab5-AM1展现对人类HSC之强效杀伤且具有0.49nm IC50。如图6C中所显示及表8中所汇总，Ab2-AM2及Ab4-AM2亦杀伤活体外HSC。
表8.活体外HSC细胞杀伤分析-IC50值
ADC DAR CD34 CD90(IC50 pM)
Ab2-AM2 D265C.LALA.H435A 1.8 14
Ab4-AM2 D265C.LALA.H435A 1.6 9
同型-AM2 D265C.H435A 2
实例9.活体外经刺激驱动PBMC对未经刺激非驱动PBMC上之抗CD45ADC细胞杀伤活性之分析
评价包括实例1中所述之抗CD45抗体(Ab2)之抗体-药物结合物(ADC)杀伤活体外经生长刺激及未经刺激之原代人类外周血单核细胞(PBMC)之能力。为进行此研究，具有经修饰Fc区(D265C LALA H435A)之Ab2结合至毒伞肽2(AM2))以形成Ab2-AM2。
将冷冻保存之人类PBMC解冻且分成两份。一半细胞以2:1之细胞对珠粒比率用CD3CD28 Dyna珠粒刺激且另一半细胞不经刺激。将两种细胞以5000个细胞/孔平铺于384孔板中且用ADC处理4天，然后藉由Cell Titer-Glo量测细胞活力。
图7中所述之结果指示具有毒伞肽2酬载之抗CD45-ADC可有效地杀伤活体外未经刺激(非驱动)及经刺激(驱动)之CD45表现人类PBMC。下表9提供量化此细胞杀伤分析中所获得之EC50值之额外数据。
表9.活体外HSC PBMC杀伤分析(经刺激对未经刺激)-IC50值
Figure BDA0003690274480002271
实例10.使用活体外原代单核球源性巨噬细胞分析之抗CD45 ADC之分析
评价包括实例1中所述之抗CD45抗体(Ab6)之抗体-药物结合物(ADC)对原代单核球源性巨噬细胞之活体外杀伤。为进行此研究，将具有经修饰Fc区(D265C LALA H435A)之Ab6结合至毒伞肽1(AM1))以形成Ab6-AM1。
将人类PBMC平铺且使用重组M-CSF分化7天。然后将该等细胞提取，进行巨噬细胞标记物评价，且以5×10^3个细胞/孔平铺于384平底板中用于细胞杀伤分析。用Ab6-AM1之10点稀释将细胞处理6天，然后使用Cell Titer Glo评价其活力。
如图8中所显示，人类单核球源性巨噬细胞对Ab6-AM1之杀伤较为敏感。
实例11.使用活体外细胞杀伤分析之抗CD45抗体结合物血清稳定性之分析
评价包括实例1及2中所述之抗CD45抗体(Ab5)之抗体-药物结合物(ADC)在血清中之稳定性。为进行此研究，将Ab5结合至毒伞肽1(AM1)以形成ADC。
将ADC在人类或食蟹猴血清中在37℃下预培育0小时或72小时。在血清中培育后，将ADC滴定且添加至生长培养基中之REH细胞中。将细胞培育7天且藉由Cell-Titer-Glo评价细胞活力。
如图9中所显示，在人类或食蟹猴血清中培育72小时后，Ab5-AM1展示与0小时相比相似的杀伤，此指示ADC在人类及食蟹猴血清中系稳定的。
实例12.在人类化NSG小鼠中使用短半衰期抗CD45 ADC之活体内造血干细胞(HSC)及免疫细胞耗尽分析
评价在实例1及2中鉴别之所选抗CD45抗体(Ab2、Ab3、Ab5及Ab7)之抗体-药物结合物(ADC)在人类化NSG小鼠(Jackson Laboratories)中之活体内HSC及免疫细胞耗尽。在此研究中，具有Fc区修饰(即D265C LALA H435A胺基酸取代)之Ab2、Ab3、Ab5及Ab7各自结合至两种毒伞肽中之一者(毒伞肽1(AM1)或毒伞肽2(AM2))以形成ADC(Ab2-AM2、Ab3-AM2、Ab5-AM1、Ab7-AM1)。引入Fc区之H435A胺基酸取代以缩短每一抗体之半衰期。
将Ab5-AM1及Ab7-AM1作为1mg/kg、3mg/kg或6mg/kg之单次注射投与人类化小鼠模型。将Ab2-AM2(DAR 1.8)及Ab3-AM2(DAR 2.0)作为1mg/kg、2mg/kg或3mg/kg之单次注射投与人类化小鼠模型。在第14天收集骨髓且藉由流式细胞术测定CD34+细胞之绝对数量。亦在第7天及第14天收集血液且藉由流式细胞术检查。
经治疗或对照治疗之小鼠相对于基线之人类CD3+T细胞、CD19+B细胞及CD33+骨髓细胞之百分比显示于图10A中。用Ab2-AM2及Ab3-AM2治疗之人类化NSG小鼠显示在单次投与治疗方案后，人类CD3+T细胞、CD19+B细胞及CD33+骨髓细胞相对于基线之显著耗尽(图10A)。该等结果指示，Ab2-AM2及Ab3-AM2耗尽免疫细胞(骨髓、T细胞及B细胞)。
另外，如图10B-10E中所显示，在单次投与ADC后14天与对照相比，用1mg/kg、3mg/kg或6mg/kg ADC Ab2-AM2、Ab3-AM2、Ab5-AM1或Ab7-AM1之单次注射治疗之人类化NSG小鼠显示外周血及骨髓中靶标人类CD45细胞(包括人类HSC)之显著耗尽。
该等结果指示，所选短半衰期抗CD45 ADC以剂量依赖性方式有效地耗尽外周及骨髓中之靶标人类细胞。
实例13：短半衰期抗CD45-毒伞肽抗体药物结合物有效地耗尽活体内非人类灵长类动物HSC及免疫细胞
评价实例1及2中所述之所选抗CD45抗体(Ab4、Ab5及Ab7)之抗体-药物结合物(ADC)在非人类灵长类动物(NHP)中之活体内HSC及免疫细胞耗尽。在此研究中，具有Fc区修饰(即Fc区中之D265C LALA H435A胺基酸取代)之Ab4、Ab5及Ab7结合至毒伞肽1(AM1)以形成ADC(Ab4-AM1、Ab5-AM1、Ab7-AM1)。引入Fc区之修饰以缩短每一抗体之半衰期。
在雄性食蟹猴中以单一递增剂量(3只/组)评估NHP HSC及免疫耗尽。藉由流式细胞术监测骨髓中之HSC含量以及外周血及骨髓中之免疫耗尽。
如图11A中所显示，在外周血中在投用抗CD45 ADC(0.5mg/kg或2mg/kg之Ab5-AM1及Ab7-AM1)后72小时观察到淋巴球之中靶剂量依赖性减少(>90％耗尽)。另外，在骨髓中在投用抗CD45 ADC(1mg/kg之Ab4-AM1以及0.5及2mg/kg之Ab5-AM1；图11B)后第7天观察到WBC、HSC及淋巴球之中靶剂量依赖性减少。
该等结果指示，短半衰期抗CD45 ADC Ab4-AM1、Ab5-AM1及Ab7-AM1展现活体内NHPHSC及免疫细胞之强效消除。
实例14：NHP中短半衰期抗CD45抗体药物结合物之药物动力学分析及血清稳定性
在非人类灵长类动物中评价包括实例1中所述之抗CD45抗体(Ab4)之抗体-药物结合物(ADC)之药物动力学。在此研究中，具有Fc区修饰(即Fc区中之D265C LALA H435A胺基酸取代)之Ab4结合至两种毒伞肽中之一者(毒伞肽1(AM1)或毒伞肽2(AM2))以形成ADC(Ab4-AM1、Ab4-AM2)。引入Fc区之修饰以缩短抗体之半衰期。
市售ELISA套组适用于量测雄性食蟹猴中之血浆药物浓度。简言之，用抗人类IgG捕获抗体包被板。将样品及标准品(ADC)在稀释剂中于分析之动态范围内稀释且在板上培育。培育后，将板与抗IgG-HRP一起培育(以计算总抗体)或与抗毒伞肽-HRP一起培育(以计算ADC)。最后，添加HRP受质TMB，然后添加终止溶液。色彩之强度与所结合IgG之量(以计算总抗体)或IgG/毒伞肽之量(以计算ADC)成正比。
如图12中所显示，基于抗毒伞肽侦测之PK与基于抗IgG侦测之PK之迭加指示ADC具有血清稳定性。药物动力学分析之结果进一步汇总于表10中。抗CD45 ADC以3.2-7.4h之半衰期快速清除，此指示ADC具有短活体内半衰期。
表10.PK汇总
Figure BDA0003690274480002301
Figure BDA0003690274480002311
实例15.人类化抗CD45单株抗体之制备
使用人类CD45(特定而言人类CD45 RO之细胞外区域)来免疫大鼠以获得抗人类CD45抗体。产生表现人类CD45RO、人类全长CD45(RABC)、食蟹猴RABC及小鼠CD45 RABC之细胞株，且使用流式细胞术评价216种抗体纯系与CD45之结合。
实施Octet生物层干涉(BLI)结合实验以鉴别交叉反应性mAb。基于抗体结合人类CD45RO及CD45RABC以及非人类灵长类动物(食蟹猴)CD45RABC之能力选择纯系。将三种纯系(亲代纯系A、亲代纯系B及亲代纯系C)鉴别为与人类及非人类灵长类动物CD45 RABC具有良好交叉反应性。亲代纯系A、B及C之序列阐述于国际公开案第WO 2020/092654 A1号中(例如参见WO 2020/092654 A1之SEQ ID NO:1-30)，其全文皆以引用方式并入本文中。
将人类化及亲和力成熟用于三种所选交叉反应性mAb中之任一者。获得来自亲代纯系A之13种人类化纯系、来自亲代纯系B之11种人类化纯系及来自亲代纯系C之5种人类化纯系。
亦使用多特异性试剂(PSR)结合分析测试来自亲代纯系A、B及C之人类化及亲和力成熟纯系与膜及胞质蛋白之混合物之非特异性结合，其中评价生物素化细胞溶解物与每一抗体之非特异性结合。结果阐述于图13中。如图13中所显示，亲代纯系A之人类化及亲和力成熟变异体具有低水平之非特异性结合(如低PSR得分所证实)。亲代纯系B及C之人类化变异体通常具有较高水平之非特异性结合。然而，在亲和力成熟后，选择与用纯系A之变异体观察到之非特异性结合水平相比具有显著降低的非特异性结合水平之变异体(图13)。
随后将人类化及亲和力成熟纯系表现为IgG1抗体且测试对人类CD45细胞之结合及活性。藉由BLI评估AbA、AbB及AbC与人类CD45 RABC、食蟹猴(cyno)CD45 RABC及恒河猴CD45RABC之单价结合程度，且藉由流式细胞术确认与人类及食蟹猴PBMC之结合。
根据此筛选过程，基于期望特征(包括与人类及食蟹猴CD45之交叉反应性及低非特异性结合)选择3种人类化IgG1抗体。该等抗体包括AbA(亲代纯系A之人类化及亲和力成熟变异体)、AbB(亲代纯系B之亲和力成熟变异体)及AbC(亲代纯系C之亲和力成熟变异体)。3种所选抗体之重链及轻链之可变区及CDR区之胺基酸序列提供于表27中。
实例16.抗CD45抗体之活体外结合分析
研究实例15中所述之人类化及亲和力成熟抗CD45抗体(AbA、AbB及AbC)以确定其与人类CD45之结合特征及其与食蟹猴(cyno)CD45交叉反应之能力。为评价人类化纯系与人类CD45 RABC及食蟹猴CD45 RABC之单价结合程度，藉由OCTET生物层干涉(BLI)评估AbA、AbB及AbC中之每一者及各别亲代纯系A、B及C。
简言之，在25℃下在补充有0.1％w/v牛血清白蛋白之1×PBS中使用PALLFORTEBIO OCTET RED96使用生物层干涉(BLI)实施抗体结合研究。将每一经纯化抗体固定至抗人类Fc生物传感器(AHQ；PALL FORTEBIO 18-5001)上且与100nM之经纯化人类CD45胞外结构域或300nM之食蟹猴CD45胞外结构域一起培育。
藉由使用如藉由FORTEBIO数据分析软件第10版计算之1:1结合模型之局部完全拟合来测定表观单价亲和力(KD)、表观缔合速率(K缔合)及表观解离速率(KDIS或K解离)。每一抗体与经纯化人类或食蟹猴CD45胞外结构域之KD、K缔合及KDIS显示于表11中。如表11中所述，人类化纯系AbA及AbB之结合亲和力类似于各别亲代纯系A及B之亲和力，而人类化纯系AbC显示为亲代纯系C之4倍之改良之亲和力。所选人类化抗体AbA、AbB及AbC中之每一者能够与人类及食蟹猴CD45交叉反应。另外，人类化及亲和力成熟抗体AbB具有显著改良之多特异性结合得分(图13)，此指示AbB相对于亲代纯系B具有显著较低之非特异性抗原结合。
表11.所指示IgG与人类或食蟹猴CD45胞外结构域之KD、K缔合及KDIS
Figure BDA0003690274480002331
实例17.抗CD45抗体之活体外PBMC细胞结合活性
评价实例15中所述之人类化及亲和力成熟抗CD45抗体(AbA、AbB、AbC)与CD45表现细胞之结合。为此，将原代人类或食蟹猴(cyno)外周血单核细胞(PBMC)在细胞培养基中与滴定剂量之抗CD45抗体在37℃下一起培育过夜。简言之，使用抗CD45抗体之4个浓度点，且最高浓度为6.25nM，向下滴定4倍以建立对数期剂量反应曲线。使用经荧光标记之AF488抗人类IgG二级抗体使用流式细胞术侦测所结合抗CD45抗体。藉由使用GRAPHPAD PRISM拟合数据来确定IC50。使用同型IgG作为对照。
使用上述方法，测定人类化纯系AbA、AbB及AbC之PBMC结合活性。结果阐述于图14及表12中。如图14中所述，与同型对照相比，人类化纯系AbA、AbB及AbC显示与人类PBMC及食蟹猴PBMC之强结合。亦如图14及表12中所述，AbA、AbB及AbC在每一细胞类型中以低nM EC50结合CD45，因此展示与活细胞上之人类及食蟹猴CD45之交叉反应性结合。然而，在人类中观察到高于食蟹猴PBMC之总结合信号。
表12.人类化纯系与人类或食蟹猴PBMC之结合
Figure BDA0003690274480002341
然后，使用上述方法，比较人类化纯系AbA、AbB及AbC与人类及食蟹猴PBMC之结合以及各别亲代纯系A、B及C与人类及食蟹猴PBMC之结合。如表13中所显示，人类化纯系AbA及AbB与人类及食蟹猴PBMC之结合类似于各别亲代纯系A及B与人类及食蟹猴PBMC之结合，而人类化纯系AbC显示与亲代纯系C相比之结合改良。
表13.人类化纯系及亲代嵌合体与人类或食蟹猴PBMC之结合
Figure BDA0003690274480002342
Figure BDA0003690274480002351
然后，使用上述方法，测定人类化纯系AbA之Fc变异体(即AbA_D265C_LALA_H435A)、AbB之Fc变异体(即AbB_D265C_LALA_H435A)及AbC之Fc变异体(即AbC_D265C_LALA_H435A)之PBMC结合活性。该等抗体含有Fc取代D265C、L234A/L235A(「LALA」)及H435A。结果显示于表14中。与同型对照相比，人类化纯系之Fc变异体显示与人类PBMC及食蟹猴PBMC之强结合。亦如表14中所显示，人类化纯系之Fc变异体在每一细胞类型中以低nM EC50结合CD45，因此展示与活细胞上之人类及食蟹猴CD45之交叉反应性结合。然而，在人类中观察到高于食蟹猴PBMC之总结合信号。因此，表14中所述之结果指示，D265C、L234A/L235A(LALA)及H435A修饰不会影响人类化纯系之PBMC结合。
表14.人类化纯系之Fc变异体与人类或食蟹猴PBMC之结合
Figure BDA0003690274480002352
实例18.AbA之抗原决定基定位
使用交联质谱对由AbA结合之抗原决定基进行定位。交联实验允许藉由高质量MALDI质谱直接分析非共价相互作用。藉由混合含有非共价相互作用之蛋白质样品与特殊开发之交联混合物(Bich等人，Anal Chem 82:172-179(2010))，可以高灵敏度特异性侦测非共价复合物，如上文实例5中所述。
为以高分辨率确定AbA之抗原决定基，将蛋白质复合物与氘化交联剂一起培育且使其经受多酶裂解。蛋白质复合物系结合至人类CD45之AbA变异体抗体(具有与AbA相同之抗原决定基)。富集交联肽后，藉由高分辨率质谱(nLC-LTQ-Orbitrap MS)分析样品且使用XQUEST及STAVROX软件分析所产生之数据。
具有氘化d0d12之蛋白质复合物CD45/AbA之胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、ASP-N、弹性蛋白酶及嗜热菌蛋白酶蛋白分解后，nLC-orbitrap MS/MS分析指示，AbA抗原决定基包括肽RNGPHERYHLEVEAGNT(SEQ ID NO:118)中之残基，且具体而言与人类CD45上对应于SEQ IDNO:113(CD45同功型之对应于NP_002829.3之片段)之486R、493Y及502T之胺基酸相互作用。该等结果图解说明于图15中。图15阐述含有AbA之抗原决定基、具体而言区域RNGPHERYHLEVEAGNT(SEQ ID NO:118)之胺基酸片段。
基于本结果，AbA与CD45之纤连蛋白d4结构域相互作用，该CD45之纤连蛋白d4结构域在选择式剪接之CD45同功型(例如RO、RA、RB、RC、RABC等)中较为保守。AbA抗原决定基之残基493Y及502T在人类、食蟹猴及恒河猴CD45中较为保守，此与AbA之物种交叉反应性一致。
实例19.AbA Fc变异体(AbA_D265C_LALA_H435A)ADC之内化
AbA之Fc变异体(「AbA_D265C_LALA_H435A」)结合至毒伞肽(AM1)以形成抗体药物结合物(ADC)(「AbA_D265C_LALA_H435A-AM1」)。在活体外抗体内化分析中评价AbA_D265C_LALA_H435A-AM1之内化能力。
为进行此分析，将抗CD45 ADC结合至pHAb染料。内化后，所结合抗体/ADC移动至酸性胞内体/溶酶体，其中可藉由PE通道中之流式细胞术侦测pHAb染料，如上文所述。使用此方法，使用人类CD34+骨髓细胞评价活体外AbA_D265C_LALA_H435A毒伞肽ADC之内化。
将CD34+人类骨髓细胞在冰上培育2小时，与饱和浓度之ADC一起培育0小时、2小时、24小时、48小时或72小时。随时间评价pHAb之水平(如藉由gMFI所量测)。在时程结束时，使用经荧光团标记之抗IgG分子藉由流式细胞术来评价结合表面人类IgG1(hIgG1)。包括不与人类CD34+细胞结合之结合至毒伞肽1之同型IgG(同型-AM1)作为非内化对照。由于0h时间点表示CD45之饱和结合，故藉由比较每一时间点之结合表面IgG之几何平均荧光强度(gMFI)与相同ADC在0小时之gMFI来计算内化的ADC％。结果阐述于图16中。
如图16中所显示，在细胞中侦测到之pHAb之水平随时间增加(图16，左图)，此对应于ADC内化％随时间之增加(图16，右图)。AbA_D265C_LALA_H435A-AM1 ADC之内化％显著高于同型-AM1之内化％，此指示人类CD34+骨髓细胞使AbA_D265C_LALA_H435A-AM1内化，而不使同型对照内化。
实例20.使用活体外细胞株杀伤分析之CD45 ADC之分析
AbA之Fc变异体(例如AbA_D265C_LALA_H435A、AbA_D265C_LALA_IHH及AbA_S239C_LALA_IHH)结合至吡咯并苯并二氮呯(PBD)或结合至两种毒伞肽中之一者(即毒伞肽1(AM1)或毒伞肽2(AM2))以形成以下ADC：AbA_D265C_LALA_IHH-PBD、AbA_S239C_LALA_IHH-PBD、AbA_D265C_LALA_H435A-AM1或AbA_D265C_LALA_H435A-AM2。以下实例阐述活体外细胞杀伤分析以测试该等ADC杀伤活体外CD45阳性癌细胞株(例如SKNO-1(急性骨髓性白血病细胞株JCRB1170)、Jurkat(急性T细胞白血病细胞株，ATCC编号TIB-152)及REH-1(B细胞非霍奇金氏淋巴瘤细胞株，ATCC编号CRL-3004))之能力。
为进行使用SKNO-1、Jurkat及REH-1细胞株之活体外杀伤分析，使细胞根据ATCC指南生长。更特定而言，将细胞在CD45 ADC(例如AbA_D265C_LALA_IHH-PBD、AbA_S239C_LALA_IHH-PBD、AbA_D265C_LALA_H435A-AM1或AbA_D265C_LALA_H435A-AM2)或同型对照-ADC(即结合至毒伞肽之IgG1同型(「同型-AM」)或结合至PBD之IgG1同型(「同型-PBD」))存在下培养(在补充有10％FBS及1％Pen-Strep之RPMI-1640(1X)培养基中)7天。然后藉由量测与活细胞相关之三磷酸腺苷(ATP)含量之CELL-TITER GLO分析来量测细胞活力。藉由CELL-TITERGLO(CTG)量测随抗体浓度(x轴)变化之活细胞％(y轴)。在细胞株杀伤分析后，量化细胞毒性之水平且使用GRAPHPAD PRISM计算IC50。结果阐述于表15中。
如表15中所述，多种所测试抗CD45 ADC中之每一者可有效地杀伤活体外CD45表现细胞株(即SKNO-1、Jurkat及REH-1细胞株)。
表15.活体外细胞株杀伤分析
Figure BDA0003690274480002381
Figure BDA0003690274480002391
实例21.使用活体外PBMC杀伤分析之CD45 ADC之分析
评价实例15中所述之人类化抗CD45抗体之抗体-药物结合物(ADC)杀伤活体外原代外周血单核细胞(PBMC)之能力。
AbA之Fc变异体AbA_D265C_LALA_H435A结合至毒伞肽AM1或AM2以形成ADC AbA_D265C_LALA_H435A-AM1及AbA_D265C_LALA_H435A-AM2。藉由活体外PBMC杀伤分析评价该等ADC杀伤原代人类或食蟹猴PBMC之能力。PBMC系由淋巴球(T细胞、B细胞、自然杀手细胞)及单核球之异质细胞群体组成之CD45表现细胞。为进行使用人类或食蟹猴PBMC之活体外杀伤分析，将PBMC在含有10％胎牛血清之RPMI-1640培养基中在CD45 ADC或同型对照-ADC(即结合至AM1之IgG1同型(「同型-AM1」)或结合至AM2之IgG1同型(「同型-AM2」)之抗体)存在下培养7天。然后藉由CELL-TIT ER GLO(CTG)分析量测细胞活力。在PBMC杀伤分析后，量化细胞毒性之水平且使用GRAPHPAD PRISM计算IC50。结果阐述于图17A-17B、表16及表17中。
如图17A-17B、表16及表17中所述，AM1结合或AM2结合之抗CD45 ADC中之每一者可有效地杀伤活体外人类及食蟹猴PBMC。下表16及17提供关于细胞杀伤分析之量化之额外数据。如根据图17A-17B、表16及表17所证实，人类及食蟹猴PBMC对AM1结合之CD45 ADC及AM2结合之CD45 ADC同样敏感。
表16.活体外PBMC杀伤分析：结合至AM1之ADC
Figure BDA0003690274480002401
表17.活体外PBMC杀伤分析：结合至AM2之ADC
Figure BDA0003690274480002402
另外，AbA之Fc变异体结合至PBD(AbA_D265C_LALA_IHH-PBD)，且AbC之Fc变异体结合至AM1(AbC_D265C_LALA_H435A-AM1)。评价该等ADC以及前述段落中所述之ADC(AbA_D265C_LALA_H435A-AM1及AbA_D265C_LALA_H435A-AM2)杀伤原代人类PBMC及REH细胞株之能力。结果提供于下表18中。
如表18中所述，PBD结合之ADC显示对REH细胞较高之功效，而AM1结合或AM2结合之ADC显示对PBMC较高之功效。
表18.活体外细胞杀伤分析：结合至AM1、AM2或PBD之ADC
Figure BDA0003690274480002403
Figure BDA0003690274480002411
然后，测试实例15中所述之人类化抗CD45抗体之抗体-药物结合物(ADC)杀伤活体外经生长刺激及未经刺激之原代人类PBMC之能力。将冷冻保存之人类PBMC解冻且分成两份。一半细胞以2:1之细胞对珠粒比率用CD3CD28 DYNA BEADS刺激且另一半细胞未经刺激。将经刺激及未经刺激之细胞以5000个细胞/孔之浓度平铺于384孔板中，且用不同浓度之CD45 ADC(AbA_D265C_LALA_H435A-AM2)或同型对照ADC(同型-AM2)处理4天，然后藉由CELLTITER-GLO(CTG)分析量测细胞活力。在细胞杀伤分析后，量化细胞毒性之水平且使用GRAPHPAD PRISM计算IC50。代表性结果阐述于表19中。
如表19中所述，AbA_D265C_LALA_H435A-AM2可有效地杀伤活体外未经刺激(非驱动)及经刺激(驱动)之CD45表现人类PBMC。
表19.活体外PBMC杀伤分析：结合至AM1、PBD或IGN之ADC
Figure BDA0003690274480002412
实例22.使用活体外HSC杀伤分析之CD45 ADC之分析
然后，测试实例15中所述之所选抗CD45人类IgG抗体之抗体-药物结合物(ADC)杀伤活体外人类造血干细胞(HSC)之能力。
AbA之Fc变异体结合至AM1、AM2或PBD以分别形成ADC AbA_D265C_LALA_H435A-AM1、AbA_D265C_LALA_H435A-AM2及AbA_D265C_LALA_IHH-PBD。评价该等ADC杀伤人类骨髓(BM)HSC之能力。将CD34+人类BM细胞在含有SCF、IL-6、FLT3及TPO之SFEM培养基中在前述ADC中之一者存在下或在含有偶合至AM1(同型-AM1)、AM2(「同型-AM2」)或PBD(「同型-PBD」)之同型对照抗体之同型对照-ADC存在下培养5天。藉由7-AAD量测CD34+CD90+人类BM HSC之活力。在细胞杀伤分析后，量化细胞毒性之水平且使用GRAPHPAD PRISM计算IC50值。结果阐述于图18中，其提供显示结合至AM1、AM2或PBD之AbA ADC对人类CD34+CD90+BM HSC之杀伤之代表性结果。IC50值提供于表20及表21中。
该等结果确认AbA ADC可有效地杀伤人类骨髓HSC。
表20.活体外BM HSC杀伤分析：结合至AM1或PBD之ADC
Figure BDA0003690274480002421
表21.活体外BM HSC杀伤分析：结合至AM2之ADC
ADC DAR CD34CD90(IC50 pM)
AbA_D265C_LALA_H435A-AM2 2.2 280
同型-AM2 2
实例23.使用活体外原代单核球源性巨噬细胞(MDM)分析之CD45 ADC之分析
然后，测试含有结合至AM1之AbA之Fc变异体(AbA_D265C_LALA_H435A-AM1)之抗体-药物结合物(ADC)杀伤活体外人类单核球源性巨噬细胞(MDM)之能力。简言之，将人类PBMC平铺且使用重组M-CSF分化7天。然后将该等细胞提取，进行巨噬细胞标记物评价，且以5×103个细胞/孔之浓度平铺于384孔平底板中用于C100杀伤分析。然后用CD45 ADC(即AbA_D265C_LALA_H435A-AM1)或同型对照-ADC(即结合至毒伞肽1之IgG1同型(「同型-AM1」))之10点稀释物将细胞处理7天，然后使用CELL TITER GLO(CTG)分析评价其活力。结果阐述于图19中。
如图19中所述，人类MDM对AbA_D265C_LALA_H435A-AM1之杀伤敏感。
实例24.人类化NSG小鼠模型中抗CD45-PBD ADC之活体内效能
在此实例中评价包含能够特异性结合结合至PBD细胞毒素(泰斯润)之人类CD45之抗体(AbA)之抗CD45抗体药物结合物(ADC)(「CD45-PBD」)。ADC之抗CD45抗体包括Fc区中之胺基酸取代L234A L235A D265C及H435A。
评价CD45-PBD耗尽人类化NSG小鼠中外周血淋巴球/骨髓(BM)HSC或成熟单阳性(SP)胸腺细胞之能力(图20)。向hNSG小鼠投与所指示单剂量之媒剂(PBS)、结合至PBD之同型对照抗体(「Iso-PBD」)或CD45-PBD。CD45-PBD系以0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg或6mg/kgADC之单剂量投与小鼠。Iso-PBD系以1mg/kg、3mg/kg或6mg/kg ADC之单剂量投与小鼠。
在第0天、第7天及第14天收集外周血且评估总人类造血细胞含量(hβ2M+)、骨髓细胞含量(CD33+)、B细胞含量(CD19+)及T细胞含量(CD3+)。外周血研究之结果呈现于图20中。该等结果指示，在外周血中在CD45-PBD之耐受剂量下达成人类细胞之剂量依赖性耗尽。无法耐受大于或等于3mg/kg之CD45-PBD剂量。
为评价骨髓耗尽，在治疗后第14天自小鼠收集骨髓样品且评估人类祖细胞/HSC含量。骨髓研究之结果阐述于图21中，且呈现为人类细胞％(「％」)或细胞之绝对数量/股骨(「计数」)。该等结果指示，在CD45-PBD处理后，CD45-PBD调介骨髓中人类祖细胞及HSC之靶向剂量依赖性及深度耗尽。同型-PBD在骨髓中在3mg/kg及6mg/kg之升高剂量下具有显著的平台毒性。
然后，评价CD45-PBD对双阳性(DP)胸腺细胞及成熟单阳性(SP)胸腺细胞之耗尽。将hNSG小鼠随机化且用递增剂量之同型-PBD、CD45-PBD或媒剂(PBS)治疗。胸腺细胞耗尽研究之结果显示于图22中。在用CD45-PBD治疗之动物中观察到人类CD45+细胞及人类双阳性(DP)胸腺细胞之剂量依赖性耗尽。在CD45-PBD之耐受剂量下观察到成熟CD4及CD8 SP胸腺细胞之不完全靶向耗尽。在同型-PBD之升高剂量下观察到之双阳性(DP)胸腺细胞之耗尽与PBD之已知平台毒性一致。
实例25：人类化NSG小鼠模型中抗CD45-IGN ADC之活体内效能
在此实例中评价包含能够特异性结合结合至IGN细胞毒素(DGN549)之人类CD45之抗体(AbA)之抗CD45抗体药物结合物(ADC)(「CD45-IGN」)。ADC之抗CD45抗体包括Fc区中之胺基酸取代L234A L235A D265C及H435A。
向hNSG小鼠投与单剂量之媒剂(PBS)、结合至IGN之同型对照抗体(「Iso-IGN」)或CD45-IGN。CD45-IGN系以0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg或6mg/kg ADC之单剂量投与小鼠。Iso-IGN系以1mg/kg、3mg/kg或6mg/kg ADC之单剂量投与小鼠。
在第0天、第7天及第14天收集外周血且评估总人类造血细胞含量(hβ2M+)、骨髓细胞含量(CD33+)、B细胞含量(CD19+)及T细胞含量(CD3+)。外周血研究之结果呈现于图23中。该等结果指示，在投与单剂量之CD45-IGN后在外周血中达成人类细胞之剂量依赖性耗尽。CD45-IGN在所有测试剂量下耐受良好。
藉由在治疗后第14天自小鼠收集骨髓样品来评价骨髓耗尽。评估样品之人类祖细胞/HSC含量。骨髓研究之结果阐述于图24中，且呈现为人类细胞％(「％」)或细胞之绝对数量/股骨(「计数」)。该等结果指示，在CD45-IGN处理后，CD45-IGN调介骨髓中人类祖细胞及HSC之靶向剂量依赖性及深度耗尽。同型-IGN在任何测试剂量下不具显著效应。
亦评价CD45-IGN对双阳性(DP)胸腺细胞及成熟单阳性(SP)胸腺细胞之耗尽。将hNSG小鼠随机化且用递增剂量之同型-IGN、CD45-IGN或媒剂对照(PBS)治疗。胸腺细胞耗尽研究之结果显示于图25中。在用CD45-IGN治疗之动物中观察到人类CD45+细胞及人类双阳性(DP)胸腺细胞之剂量依赖性耗尽。另外，在匹配剂量下与同型-IGN相比，经由CD45-IGN靶向产生较深度之CD4及CD8 SP胸腺细胞耗尽，此展示CD45-IGN ADC达成人类胸腺细胞之稳健及靶向耗尽。
实例26.CD45 ADC耗尽活体内非人类灵长类动物(NHP)HSC及免疫细胞
测试包含能够特异性结合人类CD45之抗体(AbA)之抗CD45抗体药物结合物(ADC)自非人类灵长类动物(NHP)耗尽活体内造血干细胞(HSC)及免疫细胞之能力。含有缩短半衰期之Fc区H435A修饰之AbA之Fc变异体(AbA_D265C_LALA_H435A)结合至毒伞肽AM1或毒伞肽AM2以分别形成CD45 ADC AbA_D265C_LALA_H435A-AM1(「CD45 ADC-AM1」)及AbA_D265C_LALA_H435A-AM2(「CD45 ADC-AM2」)。在NHP中活体内测试该等CD45 ADC之HSC及免疫细胞耗尽效能。
向雄性食蟹猴投与1mg/kg之CD45 ADC-AM1、CD45 ADC-AM2或媒剂对照(PBS)之单次注射。在所指示时间藉由流式细胞术监测骨髓中之HSC含量及外周血中之免疫细胞耗尽。在整个研究中评估血液学及临床化学。结果阐述于图26中。
如图26中所述，在用CD45 ADC治疗后在NHP之BM中观察到WBC、HSC及淋巴球之中靶耗尽。总之，含有具有缩短抗体半衰期之Fc区修饰之AbA之ADC CD45 ADC-AM1及CD45 ADC-AM2展现活体内NHP HSC及免疫细胞之强效消除。
实例27.NHP中CD45 ADC之药物动力学分析及血清稳定性
测试含有抗CD45抗体AbA之ADC以评价非人类灵长类动物中之血清稳定性及药物动力学。市售ELISA套组适用于量测雄性食蟹猴中CD45ADC-AM1及CD45 ADC-AM2(阐述于实例26中)之血浆药物浓度。
简言之，用抗人类IgG捕获抗体包被ELISA板。将血浆样品及标准品(CD45 ADC)在稀释剂中于分析之动态范围内稀释且在板上培育。培育后，将板与抗IgG-HRP一起培育(以计算总抗体)或与抗毒伞肽-HRP一起培育(以计算CD45 ADC)。最后，添加HRP受质TMB，然后添加终止溶液。色彩强度与所结合IgG之量(以计算总抗体)或IgG/毒伞肽之量(以计算AM1结合或AM2结合之CD45 ADC)成正比。结果阐述于图27及表22中。
基于抗毒伞肽侦测之PK与基于抗IgG侦测之PK之迭加指示ADC在NHP活体内具有血清稳定性。CD45 ADC以3.79-14.4h之半衰期快速清除，此指示CD45 ADC具有短的活体内半衰期。
表22.平均CD45 ADC PK
Figure BDA0003690274480002461
实例28.单剂量之AbA-AM对患者源性肿瘤具有肿瘤细胞减灭作用且在多个血液恶性病临床前模型中将存活期延长超过标准护理
此实例中所述之靶向抗体药物结合物(ADC)方法经设计以藉由特异性耗尽CD45+细胞改良当前调理方案之安全性。在此研究中使用包含结合至毒伞肽之AbA(AbA-AM)之抗人类CD45靶向之短半衰期ADC。毒伞肽经由式(I)之R5位置之连接体结合至AbA。对于allo-HSCT调理可靶向CD45，此乃因CD45在所有造血细胞(红血球、浆细胞及血小板除外)及大多数血液恶性病上表现。鉴于抗CD45-AM之靶向特异性，抗CD45-AM因组合HSCT之有效调理与带有靶之肿瘤细胞耗尽可向白血病患者提供双重益处。
为证明AbA-AM具有抗白血病活性，在人类白血病异种移植物鼠类模型中测试ADC。评估一组模型以仿真未经治疗且难治性之疾病：AML患者源性异种移植物(PDX)模型(来自未经治疗之患者及同种异体HCT后复发之患者；皆为FLT-3+NPM1+)、来自永生化细胞株之ALL细胞(REH-Luc)及T-ALL患者源性异种移植物(PDX)模型(来自在DHAP化学疗法后进展之患者)。
AML#1源自未经治疗之患者(J000106134)且AML#2源自在同种异体HSCT后高度预治疗之复发性难治性患者(J000106132)。T-ALL源自在DHAP化学疗法后进展之患者。将细胞株源性ALL转导以表现萤火虫荧光素酶。将每一肿瘤类型之细胞全身性接种至免疫缺失型小鼠(NSG-SGM3或NSG)中。
在PDX(n＝3-5只/组)及CDX小鼠之外周肿瘤负荷达到外周血中之2-16％母细胞时或在REH-luc模型(n＝10只/组)植入后第5天开始治疗。比较单剂量之抗CD45-ADC(1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg或10mg/kg)与媒剂(PBS)或同型-AM(6mg/kg或10mg/kg)，且与Ara-c(30mg/kg QD×5,IV)、地塞米松(5mg/kg Q3D×9,IP)或多柔比星(3mg/kg QW×3,IV)之经临床验证之标准护理方案相当。研究时程内之肿瘤负荷显示于图28中。
在REH-荧光素酶模型人类ALL之细胞株源性(CDX)模型中，单一剂量之AbA-AM耐受良好，且与媒剂(PBS)、同型-AM或标准护理(SoC)多柔比星相比，肿瘤细胞减灭作用可延迟肿瘤生长并将中值存活期延长至至少两倍(2.2-2.8×)(图28；左下图及图29B)。如图29A及表23中所显示，与PBS或同型-ADC治疗之对照相比，在ALL接种后第5天单次注射AbA-AM(1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg)使存活期延长55-66天之中值，且与在临床上用作ALL之标准护理之多柔比星相似(n＝10只小鼠/组)。使用IVIS成像系统(PerkinElmer)量测生物发光信号。在研究时程内捕获辐射(平均值±SEM)。在植入后第22-23天捕获所有治疗组之代表性生物发光信号假彩色影像，如图29C中所显示。
表23.REH-荧光素酶ALL异种移植物模型中之中值存活期
Figure BDA0003690274480002481
对数秩测试
Figure BDA0003690274480002482
与PBS或同型-ADC相比，p≤0.001；
Figure BDA0003690274480002483
与多柔比星相比，p<0.05
在T-ALL患者源性异种移植物(PDX)模型中，与PBS(28天)或同型-ADC(28天)治疗之对照或地塞米松(47天，n＝5只小鼠/组；图30A及表24)相比，在T-ALL接种后第5天单次注射短半衰期CD45-ADC(3mg/kg或6mg/kg之AbA-AM)可使存活期延长66-67天之中值。另外，如图30B中所显示，在T-ALL PDX模型中，与媒剂、同型-ADC相比，AbA-AM治疗显著降低外周肿瘤负荷，从而延迟肿瘤生长，且与两种经临床验证之标准护理(分别为Ara-C及地塞米松)相当。该等结果指示，用单剂量之短半衰期CD45-ADC治疗会减少外周白血病细胞从而延迟肿瘤生长，且使中值存活期加倍。
表24.T-ALL PDX模型中之中值存活期
Figure BDA0003690274480002491
对数秩测试，与*PBS或同型ADC相比p≤0.009；
Figure BDA0003690274480002492
地塞米松；
Figure BDA0003690274480002493
与Ara-C相比
在来自未经治疗及同种异体HCT后复发之患者之AML患者源性异种移植物(PDX)模型中，治疗开始于在外周侦测到2％-16％之母细胞时(n＝3-5只小鼠/组/AML PDX模型)。用单次静脉内剂量之抗人类CD45-ADC(AbA-AM)、同型-ADC或媒剂(PBS)治疗小鼠。每天一次连续五天静脉内投与Ara-c。如图31A及31B(及表25及26)中所显示，与PBS对照相比，用单次静脉内剂量之ADC(抗CD45-ADC(AbA-AM)、同型-ADC)、媒剂(PBS)治疗之PDX AML小鼠使得抗CD45-ADC之接受者之存活期延长。另外，如图31C及31D中所显示，在两种患者源性异种移植物模型中，与媒剂(PBS)或同型-ADC相比，单剂量之短半衰期CD45-ADC可有效地降低人类急性骨髓性白血病细胞之肿瘤负荷，且与经临床验证之标准护理方案(Ara-c)相当。
表25.PDX模型(AML#1)之中值存活期
Figure BDA0003690274480002501
对数秩测试
Figure BDA0003690274480002503
与PBS或同型-ADC相比，p≤0.02；
Figure BDA0003690274480002504
与Ara-C相比，p≤0.005
表26.PDX模型(AML#2)之中值存活期
Figure BDA0003690274480002502
对数秩测试
Figure BDA0003690274480002505
与PBS相比，p≤0.008；
Figure BDA0003690274480002506
与同型ADC相比，p≤0.008；*与Ara-C相比，p≤0.012。
该等结果展示，与对照及经临床验证之标准护理相比，单剂量投与短半衰期CD45-ADC(AbA-AM)耐受良好，且能够藉由在多种异种移植物模型(ALL、T-All、AML)中强效靶向白血病细胞降低肿瘤负荷，并显著延长所建立白血病异种移植物模型(细胞株及患者源性)之中值存活期。
与媒剂、同型-AM相比，PDX AML及T-ALL中之AbA-AM治疗显著降低外周肿瘤负荷，从而延迟肿瘤生长，且与两种经临床验证之标准护理(分别为Ara-C及地塞米松；图28)相当。如针对移植物适应症所设计，ADC与野生型抗体对照相比具有缩短的半衰期(16h对79h)。
人类化鼠类异种移植物模型中之该等数据证明，短半衰期AbA-AM ADC系强效的靶向抗白血病剂。该等不具遗传毒性之ADC可用于降低疾病负荷并诱导移植后患者中之持久缓解，尤其是具有高复发风险之接受降低强度之调理之彼等患者。
本揭示案通篇中提及之序列提供于表27中。
表27.序列表
Figure BDA0003690274480002511
Figure BDA0003690274480002521
Figure BDA0003690274480002531
Figure BDA0003690274480002541
Figure BDA0003690274480002551
Figure BDA0003690274480002561
Figure BDA0003690274480002571
Figure BDA0003690274480002581
Figure BDA0003690274480002591
Figure BDA0003690274480002601
Figure BDA0003690274480002611
Figure BDA0003690274480002621
Figure BDA0003690274480002631
Figure BDA0003690274480002641
Figure BDA0003690274480002651
Figure BDA0003690274480002661
Figure BDA0003690274480002671
Figure BDA0003690274480002681
Figure BDA0003690274480002691
Figure BDA0003690274480002701
Figure BDA0003690274480002711
Figure BDA0003690274480002721
Figure BDA0003690274480002731
Figure BDA0003690274480002741
Figure BDA0003690274480002751
Figure BDA0003690274480002761
Figure BDA0003690274480002771
Figure BDA0003690274480002781
Figure BDA0003690274480002791
Figure BDA0003690274480002801
Figure BDA0003690274480002811
Figure BDA0003690274480002821
Figure BDA0003690274480002831
Figure BDA0003690274480002841
Figure BDA0003690274480002851
Figure BDA0003690274480002861
Figure BDA0003690274480002871
Figure BDA0003690274480002881
Figure BDA0003690274480002891
Figure BDA0003690274480002901
其他实施例
本说明书中提及之所有公开案、专利及专利申请案皆以引用方式并入本文中，如同每个独立的公开案或专利申请案皆具体地及个别地指示以引用方式并入一般。
尽管已结合本发明之具体实施例阐述了本发明，但应理解，本发明能够进一步修改，且本申请案意欲覆盖本发明之任何变化、使用或改编，该等变化、使用或改编通常遵循本发明之原理，并且包括在本发明所属领域之已知或习惯实践内之自本发明之该等偏离，且可应用于上文所述之基本特征，并在申请专利范围之范围内。
其他实施例在申请专利范围内。
序列表
<110> MAGENTA THERAPEUTICS, INC.
<120> 抗CD45抗体及其结合物
<130> M103034 1525WO
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<151> 2020-06-30
<150> 63/046,164
<151> 2020-06-30
<150> 63/015,348
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<160> 161
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 1
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
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Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn
1 5
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
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Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 4
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 5
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg
85 90 95
Arg Arg Thr Pro Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
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Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 7
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 8
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Pro Phe Thr
1 5 10
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<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225 230 235 240
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
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Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
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Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
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420 425 430
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435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 10
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg
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Arg Arg Thr Pro Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
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Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
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165 170 175
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195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
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Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
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Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
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Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
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Gly
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<223> 人工序列之描述：合成肽
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Ala Phe Asp Ile
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
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Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser
1 5
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 18
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Trp Ser
1 5
<210> 19
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225 230 235 240
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 20
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 20
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Asn
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
85 90 95
Arg Thr Pro Trp Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 21
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Gly Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ile Ser Gly Ala Thr Ile Thr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 22
Phe Thr Phe Gly Gly Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 23
Tyr Ile Ser Ile Ser Gly Ala Thr Ile Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 24
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 24
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
<210> 25
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 25
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Asn
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
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Arg Thr Pro Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 26
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 26
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 27
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 27
Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser
1 5
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 28
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Pro Phe Thr
1 5 10
<210> 29
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 29
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Gly Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ile Ser Gly Ala Thr Ile Thr Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
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Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala
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Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
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Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
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Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
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Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
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Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 30
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 30
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Asn
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
85 90 95
Arg Thr Pro Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
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Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
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Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 31
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 31
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 32
Phe Thr Phe Glu Ala Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 33
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 33
Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 34
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 34
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
<210> 35
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 35
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Asn
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
85 90 95
Arg Thr Pro Trp Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 36
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 36
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 37
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 37
Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser
1 5
<210> 38
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 38
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Trp Ser
1 5
<210> 39
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 39
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
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Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
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Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
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Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
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Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
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Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
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Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
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Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
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Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
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Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 40
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 40
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Asn
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
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Arg Thr Pro Trp Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
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Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 41
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 41
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 42
Phe Thr Phe Glu Ala Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 43
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 43
Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 44
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 44
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
<210> 45
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 45
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
85 90 95
Arg Thr Pro Trp Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 46
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 46
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 47
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 47
Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser
1 5
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 48
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Trp Ser
1 5
<210> 49
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225 230 235 240
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 50
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 50
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
85 90 95
Arg Thr Pro Trp Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 51
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 51
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 52
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 52
Phe Thr Phe Glu Ala Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 53
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 53
Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 54
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 54
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
<210> 55
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 55
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
85 90 95
Arg Thr Pro Trp Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 56
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 56
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 57
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 57
Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser
1 5
<210> 58
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 58
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Trp Ser
1 5
<210> 59
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 59
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225 230 235 240
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 60
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 60
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
85 90 95
Arg Thr Pro Trp Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 61
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 61
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Gly Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ile Ser Gly Ala Thr Ile Thr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 62
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 62
Phe Thr Phe Gly Gly Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 63
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 63
Tyr Ile Ser Ile Ser Gly Ala Thr Ile Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 64
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 64
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
<210> 65
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 65
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
85 90 95
Arg Thr Pro Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 66
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 66
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 67
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 67
Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser
1 5
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 68
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Pro Phe Thr
1 5 10
<210> 69
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 69
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Gly Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ile Ser Gly Ala Thr Ile Thr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225 230 235 240
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 70
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 70
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
85 90 95
Arg Thr Pro Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 71
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 71
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Arg Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Glu Arg Trp Ala Gly Ala Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 72
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 72
Phe Thr Phe Asn Asn Tyr Trp Met Thr
1 5
<210> 73
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 73
Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Arg Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 74
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 74
Ala Arg Asp Glu Arg Trp Ala Gly Ala Met Asp Ala
1 5 10
<210> 75
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 75
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Asn
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Thr Asn Asn Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Tyr Gln His Asn Ser Arg Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 76
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 76
Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Asn Leu Asp
1 5 10
<210> 77
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 77
Glu Thr Asn Asn Leu Gln Thr
1 5
<210> 78
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 78
Tyr Gln His Asn Ser Arg Phe Thr
1 5
<210> 79
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 79
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Arg Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Glu Arg Trp Ala Gly Ala Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 80
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 80
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Asn
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Thr Asn Asn Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Tyr Gln His Asn Ser Arg Phe Thr
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Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 81
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 81
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Phe
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Trp Met Ala Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Val Lys Phe His His Tyr Ser Gly Gly Gly Asp Ala Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 82
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 82
Phe Thr Phe Thr Asn Phe Trp Met Ala
1 5
<210> 83
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 83
Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 84
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 84
Val Lys Phe His His Tyr Ser Gly Gly Gly Asp Ala
1 5 10
<210> 85
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 85
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ser Ser Arg Trp Thr
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 86
Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr Leu Asp
1 5 10
<210> 87
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 87
Tyr Thr Asn Asn Leu His Thr
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 88
Leu Gln His Ser Ser Arg Trp Thr
1 5
<210> 89
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 89
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Phe
20 25 30
Trp Met Ala Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
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Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
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Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
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Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 90
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 90
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
His Tyr Thr Asn Asn Leu His Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ser Ser Arg Trp Thr
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
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Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
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Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
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Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
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Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 91
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 91
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
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Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
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Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Leu Tyr Tyr Tyr Asp Gly Gly Gly Asp Ala Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 92
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 92
Phe Thr Phe Asn Asn Tyr Trp Met Thr
1 5
<210> 93
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 93
Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 94
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 94
Ala Arg Leu Tyr Tyr Tyr Asp Gly Gly Gly Asp Ala
1 5 10
<210> 95
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 95
Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Asn Thr Asn Asn Leu His Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ile Ser Arg Trp Thr
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<210> 96
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 96
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Leu Asp
1 5 10
<210> 97
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 97
Asn Thr Asn Asn Leu His Thr
1 5
<210> 98
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 98
Leu Gln His Ile Ser Arg Trp Thr
1 5
<210> 99
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 99
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
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Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Leu Tyr Tyr Tyr Asp Gly Gly Gly Asp Ala Trp Gly Gln Gly
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
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Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
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Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
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Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
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Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
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Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
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Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
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Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 100
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 100
Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr
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Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 101
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 101
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
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100 105
<210> 102
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 102
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
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35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
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65 70 75 80
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Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
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Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 103
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 103
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
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50 55 60
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65 70 75 80
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Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 104
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 104
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
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His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
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Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 105
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 105
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1 5 10 15
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35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
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Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
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165 170 175
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195 200 205
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225 230 235 240
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245 250 255
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275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 106
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 106
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
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His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
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Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
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305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 107
<211> 1211
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 107
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1 5 10 15
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435 440 445
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485 490 495
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565 570 575
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645 650 655
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660 665 670
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675 680 685
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Lys Glu Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met Ile Phe Gln Arg Lys Val
945 950 955 960
Lys Val Ile Val Met Leu Thr Glu Leu Lys His Gly Asp Gln Glu Ile
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<210> 108
<211> 1145
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 108
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Lys Val Gln Arg Asn Gly Ser Ala Ala Met Cys His Phe Thr Thr Lys
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Tyr Gly Tyr Val Val Lys Leu Arg Arg Gln Arg Cys Leu Met Val Gln
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785 790 795 800
Ile Gly Asn Gln Glu Glu Asn Lys Ser Lys Asn Arg Asn Ser Asn Val
805 810 815
Ile Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Pro Leu Lys His Glu Leu Glu Met
820 825 830
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835 840 845
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850 855 860
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Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met Ile Phe Gln Arg Lys Val Lys Val
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900 905 910
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915 920 925
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930 935 940
Leu Arg His Ser Lys Arg Lys Asp Ser Arg Thr Val Tyr Gln Tyr Gln
945 950 955 960
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965 970 975
Ile Ser Met Ile Gln Val Val Lys Gln Lys Leu Pro Gln Lys Asn Ser
980 985 990
Ser Glu Gly Asn Lys His His Lys Ser Thr Pro Leu Leu Ile His Cys
995 1000 1005
Arg Asp Gly Ser Gln Gln Thr Gly Ile Phe Cys Ala Leu Leu Asn
1010 1015 1020
Leu Leu Glu Ser Ala Glu Thr Glu Glu Val Val Asp Ile Phe Gln
1025 1030 1035
Val Val Lys Ala Leu Arg Lys Ala Arg Pro Gly Met Val Ser Thr
1040 1045 1050
Phe Glu Gln Tyr Gln Phe Leu Tyr Asp Val Ile Ala Ser Thr Tyr
1055 1060 1065
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1070 1075 1080
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1085 1090 1095
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Gly Ser
1145
<210> 109
<211> 1192
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 109
Met Thr Met Tyr Leu Trp Leu Lys Leu Leu Ala Phe Gly Phe Ala Phe
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180 185 190
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195 200 205
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Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly Asn Met Ile Phe Asp Asn Lys Glu Ile
225 230 235 240
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245 250 255
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Gly Pro His Glu Arg Tyr His Leu Glu Val Glu Ala Gly Asn Thr Leu
515 520 525
Val Arg Asn Glu Ser His Lys Asn Cys Asp Phe Arg Val Lys Asp Leu
530 535 540
Gln Tyr Ser Thr Asp Tyr Thr Phe Lys Ala Tyr Phe His Asn Gly Asp
545 550 555 560
Tyr Pro Gly Glu Pro Phe Ile Leu His His Ser Thr Ser Tyr Asn Ser
565 570 575
Lys Ala Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ile Val Thr Ser Ile
580 585 590
Ala Leu Leu Val Val Leu Tyr Lys Ile Tyr Asp Leu His Lys Lys Arg
595 600 605
Ser Cys Asn Leu Asp Glu Gln Gln Glu Leu Val Glu Arg Asp Asp Glu
610 615 620
Lys Gln Leu Met Asn Val Glu Pro Ile His Ala Asp Ile Leu Leu Glu
625 630 635 640
Thr Tyr Lys Arg Lys Ile Ala Asp Glu Gly Arg Leu Phe Leu Ala Glu
645 650 655
Phe Gln Ser Ile Pro Arg Val Phe Ser Lys Phe Pro Ile Lys Glu Ala
660 665 670
Arg Lys Pro Phe Asn Gln Asn Lys Asn Arg Tyr Val Asp Ile Leu Pro
675 680 685
Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Glu Leu Ser Glu Ile Asn Gly Asp Ala Gly
690 695 700
Ser Asn Tyr Ile Asn Ala Ser Tyr Ile Asp Gly Phe Lys Glu Pro Arg
705 710 715 720
Lys Tyr Ile Ala Ala Gln Gly Pro Arg Asp Glu Thr Val Asp Asp Phe
725 730 735
Trp Arg Met Ile Trp Glu Gln Lys Ala Thr Val Ile Val Met Val Thr
740 745 750
Arg Cys Glu Glu Gly Asn Arg Asn Lys Cys Ala Glu Tyr Trp Pro Ser
755 760 765
Met Glu Glu Gly Thr Arg Ala Phe Gly Asp Val Val Val Lys Ile Asn
770 775 780
Gln His Lys Arg Cys Pro Asp Tyr Ile Ile Gln Lys Leu Asn Ile Val
785 790 795 800
Asn Lys Lys Glu Lys Ala Thr Gly Arg Glu Val Thr His Ile Gln Phe
805 810 815
Thr Ser Trp Pro Asp His Gly Val Pro Glu Asp Pro His Leu Leu Leu
820 825 830
Lys Leu Arg Arg Arg Val Asn Ala Phe Ser Asn Phe Phe Ser Gly Pro
835 840 845
Ile Val Val His Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr Gly Thr Tyr Ile
850 855 860
Gly Ile Asp Ala Met Leu Glu Gly Leu Glu Ala Glu Asn Lys Val Asp
865 870 875 880
Val Tyr Gly Tyr Val Val Lys Leu Arg Arg Gln Arg Cys Leu Met Val
885 890 895
Gln Val Glu Ala Gln Tyr Ile Leu Ile His Gln Ala Leu Val Glu Tyr
900 905 910
Asn Gln Phe Gly Glu Thr Glu Val Asn Leu Ser Glu Leu His Pro Tyr
915 920 925
Leu His Asn Met Lys Lys Arg Asp Pro Pro Ser Glu Pro Ser Pro Leu
930 935 940
Glu Ala Glu Phe Gln Arg Leu Pro Ser Tyr Arg Ser Trp Arg Thr Gln
945 950 955 960
His Ile Gly Asn Gln Glu Glu Asn Lys Ser Lys Asn Arg Asn Ser Asn
965 970 975
Val Ile Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Pro Leu Lys His Glu Leu Glu
980 985 990
Met Ser Lys Glu Ser Glu His Asp Ser Asp Glu Ser Ser Asp Asp Asp
995 1000 1005
Ser Asp Ser Glu Glu Pro Ser Lys Tyr Ile Asn Ala Ser Phe Ile
1010 1015 1020
Met Ser Tyr Trp Lys Pro Glu Val Met Ile Ala Ala Gln Gly Pro
1025 1030 1035
Leu Lys Glu Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met Ile Phe Gln Arg
1040 1045 1050
Lys Val Lys Val Ile Val Met Leu Thr Glu Leu Lys His Gly Asp
1055 1060 1065
Gln Glu Ile Cys Ala Gln Tyr Trp Gly Glu Gly Lys Gln Thr Tyr
1070 1075 1080
Gly Asp Ile Glu Val Asp Leu Lys Asp Thr Asp Lys Ser Ser Thr
1085 1090 1095
Tyr Thr Leu Arg Val Phe Glu Leu Arg His Ser Lys Arg Lys Asp
1100 1105 1110
Ser Arg Thr Val Tyr Gln Tyr Gln Tyr Thr Asn Trp Ser Val Glu
1115 1120 1125
Gln Leu Pro Ala Glu Pro Lys Glu Leu Ile Ser Met Ile Gln Val
1130 1135 1140
Val Lys Gln Lys Leu Pro Gln Lys Asn Ser Ser Glu Gly Asn Lys
1145 1150 1155
His His Lys Ser Thr Pro Leu Leu Ile His Cys Arg Asp Gly Ser
1160 1165 1170
Gln Gln Thr Gly Ile Phe Cys Ala Leu Leu Asn Leu Leu Glu Ser
1175 1180 1185
Ala Glu Thr Glu Glu Val Val Asp Ile Phe Gln Val Val Lys Ala
1190 1195 1200
Leu Arg Lys Ala Arg Pro Gly Met Val Ser Thr Phe Glu Gln Tyr
1205 1210 1215
Gln Phe Leu Tyr Asp Val Ile Ala Ser Thr Tyr Pro Ala Gln Asn
1220 1225 1230
Gly Gln Val Lys Lys Asn Asn His Gln Glu Asp Lys Ile Glu Phe
1235 1240 1245
Asp Asn Glu Val Asp Lys Val Lys Gln Asp Ala Asn Cys Val Asn
1250 1255 1260
Pro Leu Gly Ala Pro Glu Lys Leu Pro Glu Ala Lys Glu Gln Ala
1265 1270 1275
Glu Gly Ser Glu Pro Thr Ser Gly Thr Glu Gly Pro Glu His Ser
1280 1285 1290
Val Asn Gly Pro Ala Ser Pro Ala Leu Asn Gln Gly Ser
1295 1300 1305
<210> 113
<211> 552
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 113
Gln Ser Pro Thr Pro Ser Pro Thr Gly Leu Thr Thr Ala Lys Met Pro
1 5 10 15
Ser Val Pro Leu Ser Ser Asp Pro Leu Pro Thr His Thr Thr Ala Phe
20 25 30
Ser Pro Ala Ser Thr Phe Glu Arg Glu Asn Asp Phe Ser Glu Thr Thr
35 40 45
Thr Ser Leu Ser Pro Asp Asn Thr Ser Thr Gln Val Ser Pro Asp Ser
50 55 60
Leu Asp Asn Ala Ser Ala Phe Asn Thr Thr Gly Val Ser Ser Val Gln
65 70 75 80
Thr Pro His Leu Pro Thr His Ala Asp Ser Gln Thr Pro Ser Ala Gly
85 90 95
Thr Asp Thr Gln Thr Phe Ser Gly Ser Ala Ala Asn Ala Lys Leu Asn
100 105 110
Pro Thr Pro Gly Ser Asn Ala Ile Ser Asp Val Pro Gly Glu Arg Ser
115 120 125
Thr Ala Ser Thr Phe Pro Thr Asp Pro Val Ser Pro Leu Thr Thr Thr
130 135 140
Leu Ser Leu Ala His His Ser Ser Ala Ala Leu Pro Ala Arg Thr Ser
145 150 155 160
Asn Thr Thr Ile Thr Ala Asn Thr Ser Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Ser
165 170 175
Glu Thr Thr Thr Leu Ser Pro Ser Gly Ser Ala Val Ile Ser Thr Thr
180 185 190
Thr Ile Ala Thr Thr Pro Ser Lys Pro Thr Cys Asp Glu Lys Tyr Ala
195 200 205
Asn Ile Thr Val Asp Tyr Leu Tyr Asn Lys Glu Thr Lys Leu Phe Thr
210 215 220
Ala Lys Leu Asn Val Asn Glu Asn Val Glu Cys Gly Asn Asn Thr Cys
225 230 235 240
Thr Asn Asn Glu Val His Asn Leu Thr Glu Cys Lys Asn Ala Ser Val
245 250 255
Ser Ile Ser His Asn Ser Cys Thr Ala Pro Asp Lys Thr Leu Ile Leu
260 265 270
Asp Val Pro Pro Gly Val Glu Lys Phe Gln Leu His Asp Cys Thr Gln
275 280 285
Val Glu Lys Ala Asp Thr Thr Ile Cys Leu Lys Trp Lys Asn Ile Glu
290 295 300
Thr Phe Thr Cys Asp Thr Gln Asn Ile Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly
305 310 315 320
Asn Met Ile Phe Asp Asn Lys Glu Ile Lys Leu Glu Asn Leu Glu Pro
325 330 335
Glu His Glu Tyr Lys Cys Asp Ser Glu Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys
340 345 350
Phe Thr Asn Ala Ser Lys Ile Ile Lys Thr Asp Phe Gly Ser Pro Gly
355 360 365
Glu Pro Gln Ile Ile Phe Cys Arg Ser Glu Ala Ala His Gln Gly Val
370 375 380
Ile Thr Trp Asn Pro Pro Gln Arg Ser Phe His Asn Phe Thr Leu Cys
385 390 395 400
Tyr Ile Lys Glu Thr Glu Lys Asp Cys Leu Asn Leu Asp Lys Asn Leu
405 410 415
Ile Lys Tyr Asp Leu Gln Asn Leu Lys Pro Tyr Thr Lys Tyr Val Leu
420 425 430
Ser Leu His Ala Tyr Ile Ile Ala Lys Val Gln Arg Asn Gly Ser Ala
435 440 445
Ala Met Cys His Phe Thr Thr Lys Ser Ala Pro Pro Ser Gln Val Trp
450 455 460
Asn Met Thr Val Ser Met Thr Ser Asp Asn Ser Met His Val Lys Cys
465 470 475 480
Arg Pro Pro Arg Asp Arg Asn Gly Pro His Glu Arg Tyr His Leu Glu
485 490 495
Val Glu Ala Gly Asn Thr Leu Val Arg Asn Glu Ser His Lys Asn Cys
500 505 510
Asp Phe Arg Val Lys Asp Leu Gln Tyr Ser Thr Asp Tyr Thr Phe Lys
515 520 525
Ala Tyr Phe His Asn Gly Asp Tyr Pro Gly Glu Pro Phe Ile Leu His
530 535 540
His Ser Thr Ser Tyr Asn Ser Lys
545 550
<210> 114
<211> 21
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 114
Thr Glu Lys Asp Cys Leu Asn Leu Asp Lys Asn Leu Ile Lys Tyr Asp
1 5 10 15
Leu Gln Asn Leu Lys
20
<210> 115
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 115
Cys Tyr Ile Lys Glu Thr Glu Lys Asp Cys Leu Asn Leu Asp Lys Asn
1 5 10 15
Leu Ile Lys Tyr Asp Leu Gln Asn Leu Lys Pro Tyr Thr Lys Tyr
20 25 30
<210> 116
<211> 29
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 116
Arg Pro Pro Arg Asp Arg Asn Gly Pro His Glu Arg Tyr His Leu Glu
1 5 10 15
Val Glu Ala Gly Asn Thr Leu Val Arg Asn Glu Ser His
20 25
<210> 117
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 117
Cys Arg Pro Pro Arg Asp Arg Asn Gly Pro His Glu Arg Tyr His Leu
1 5 10 15
Glu Val Glu Ala Gly Asn Thr Leu Val Arg Asn Glu Ser His Lys
20 25 30
<210> 118
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 118
Arg Asn Gly Pro His Glu Arg Tyr His Leu Glu Val Glu Ala Gly Asn
1 5 10 15
Thr
<210> 119
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> S、E或G
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> S、A或G
<400> 119
Phe Thr Phe Xaa Xaa Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 120
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> S、L或I
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> S或G
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> S或A
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Y、H或T
<400> 120
Tyr Ile Ser Xaa Ser Xaa Xaa Thr Ile Xaa Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 121
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> D或T
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> R或D
<400> 121
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Xaa Ser Ser Xaa Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
<210> 122
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> H或不存在
<400> 122
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Xaa Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 123
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> L或F
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> N或S
<400> 123
Xaa Gly Ser Xaa Arg Ala Ser
1 5
<210> 124
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> P或W
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> F或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> T或F
<400> 124
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 125
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 125
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggtgga 300
caatactact acgacagcag cagatacggt gaggtagcat tcgacatatg gggtcagggt 360
acaatggtca ccgtctcctc a 381
<210> 126
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 126
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcagagaag acgcactcct 300
cctttcactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaa 339
<210> 127
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 127
gaagtgcagc ttgtggagtc cggtggcgga ctggtccagc cgggcggatc tctgagactt 60
tcgtgtgccg cctcgggatt caccttcgaa gcgtattcca tgaactgggt cagacaggcc 120
cccggaaagg gcctggaatg ggtgtcgtac attagcctgt cgggggccac catccattac 180
gccgatagcg tgaagggccg gttcacaatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctctac 240
ctccaaatga acagcctgcg cgctgaggac actgctgtgt actattgcgc gaggggtggc 300
cagtactact acgactcaag cgactacggc gaagtggcat tcgatatctg gggacagggg 360
accatggtca ccgtcagctc c 381
<210> 128
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 128
gatatcgtga tgacacagtc ccctctgtcc ctccctgtga cccccggaga accagcctct 60
atttcctgcc ggtcctccca atccctggtg tccaacggtt ataactacct ggattggtac 120
ttgcaaaagc ccggacagag cccccagctg ctcatctact tcggaagctc acgcgcgagc 180
ggggtgccgg ataggttttc gggatccgga agcggcaccg acttcacgct gaagatctcg 240
agagtcgagg ccgaggacgt gggcgtgtac tactgtatgc agcggcggcg caccccctgg 300
tccttcggcg gcggaactaa ggtcgagatc aag 333
<210> 129
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 129
caagtgcagc ttgtggagtc cggtggcgga ctggtcaagc cgggcggatc tctgagactt 60
tcgtgtgccg cctcgggatt caccttcggc ggatattcca tgaactgggt cagacaggcc 120
cccggaaagg gcctggaatg ggtgtcgtac attagcatct cgggggccac catcacttac 180
gccgatagcg tgaagggccg gttcacaatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctctac 240
ctccaaatga acagcctgcg cgctgaggac actgctgtgt actattgcgc gaggggtggc 300
cagtactact acgactcaag cgactacggc gaagtggcat tcgatatctg gggacagggg 360
accatggtca ccgtcagctc c 381
<210> 130
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 130
gatatcgtga tgacacagtc ccctctgtcc ctccctgtga cccccggaga accagcctct 60
atttcctgcc ggtcctccca atccctggtg tccaacggtt ataactacct ggattggtac 120
ttgcaaaagc ccggacagag cccccagctg ctcatctact tcggaagctc acgcgcgagc 180
ggggtgccgg ataggttttc gggatccgga agcggcaccg acttcacgct gaagatctcg 240
agagtcgagg ccgaggacgt gggcgtgtac tactgtatgc agcggcggcg caccccgccc 300
ttcaccttcg gcggcggaac taaggtcgag atcaag 336
<210> 131
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 131
gaagtgcagc ttgtggagtc cggtggcgga ctggtccagc cgggcggatc tctgagactt 60
tcgtgtgccg cctcgggatt caccttcgaa gcgtattcca tgaactgggt cagacaggcc 120
cccggaaagg gcctggaatg ggtgtcgtac attagcctgt cgggggccac catccattac 180
gccgatagcg tgaagggccg gttcacaatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctctac 240
ctccaaatga acagcctgcg cgctgaggac actgctgtgt actattgcgc gaggggtggc 300
cagtactact acacctcaag cgactacggc gaagtggcat tcgatatctg gggacagggg 360
accatggtca ccgtcagctc c 381
<210> 132
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 132
gatatcgtga tgacacagtc ccctctgtcc ctccctgtga cccccggaga accagcctct 60
atttcctgcc ggtcctccca atccctggtg tccaacggtt ataactacct ggattggtac 120
ttgcaaaagc ccggacagag cccccagctg ctcatctact tcggaagctc acgcgcgagc 180
ggggtgccgg ataggttttc gggatccgga agcggcaccg acttcacgct gaagatctcg 240
agagtcgagg ccgaggacgt gggcgtgtac tactgtatgc agcggcggcg caccccctgg 300
tccttcggcg gcggaactaa ggtcgagatc aag 333
<210> 133
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 133
gaagtgcagc ttgtggagtc cggtggcgga ctggtccagc cgggcggatc tctgagactt 60
tcgtgtgccg cctcgggatt caccttcgaa gcgtattcca tgaactgggt cagacaggcc 120
cccggaaagg gcctggaatg ggtgtcgtac attagcctgt cgggggccac catccattac 180
gccgatagcg tgaagggccg gttcacaatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctctac 240
ctccaaatga acagcctgcg cgctgaggac actgctgtgt actattgcgc gaggggtggc 300
cagtactact acacctcaag cgactacggc gaagtggcat tcgatatctg gggacagggg 360
accatggtca ccgtcagctc c 381
<210> 134
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 134
gatatcgtga tgacacagtc ccctctgtcc ctccctgtga cccccggaga accagcctct 60
atttcctgcc ggtcctccca atccctggtg tcctcgggtt ataactacct ggattggtac 120
ttgcaaaagc ccggacagag cccccagctg ctcatctact tcggaagctc acgcgcgagc 180
ggggtgccgg ataggttttc gggatccgga agcggcaccg acttcacgct gaagatctcg 240
agagtcgagg ccgaggacgt gggcgtgtac tactgtatgc agcggcggcg caccccctgg 300
tccttcggcg gcggaactaa ggtcgagatc aag 333
<210> 135
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 135
gaggtgcagc tggtcgaaag cggaggaggg ctggtgcagc ctggaggatc cctgcggctc 60
tcatgtgccg cctccggctt taccttcgaa gcctactcca tgaactgggt cagacaggct 120
cccgggaagg gactggaatg ggtcagctac atttcgctgt ccggagccac catccactac 180
gctgactcag ttaagggacg cttcaccatc tcccgggata atgcaaagaa ctccctgtac 240
ctccaaatga attcactgag ggccgaggac actgccgtgt actactgcgc ccggggaggt 300
caatactatt acacctcctc cgactacggc gaagtggcct tcgatatctg gggccaagga 360
accctcgtga ctgtctcctc c 381
<210> 136
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 136
gacatcgtgc tgacccagtc accgctttcc ttgcccgtga ctcctgggga accggcctcc 60
atttcgtgcc ggtccagcca gtccctggtg tcctccggct acaattacct ggattggtac 120
ctccaaaagc ccggacagtc cccacaactg ctcatctact tcgggagctc aagggcctca 180
ggagtgccgg atcgcttctc gggttccgga agcgggactg acttcactct gaaaatcagc 240
cgcgtggaag cagaggacgt gggcgtgtac tactgcatgc agcgcaggag aaccccctgg 300
tcctttggcg gtggaacgaa ggtcgaaatc aag 333
<210> 137
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 137
caagtgcagc ttgtggagtc cggtggcgga ctggtcaagc cgggcggatc tctgagactt 60
tcgtgtgccg cctcgggatt caccttcggc ggatattcca tgaactgggt cagacaggcc 120
cccggaaagg gcctggaatg ggtgtcgtac attagcatct cgggggccac catcacttac 180
gccgatagcg tgaagggccg gttcacaatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctctac 240
ctccaaatga acagcctgcg cgctgaggac actgctgtgt actattgcgc gaggggtggc 300
cagtactact acgactcaag cgactacggc gaagtggcat tcgatatctg gggacagggg 360
accatggtca ccgtcagctc c 381
<210> 138
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 138
gatatcgtga tgacacagtc ccctctgtcc ctccctgtga cccccggaga accagcctct 60
atttcctgcc ggtcctccca atccctggtg tcctccggtt ataactacct ggattggtac 120
ttgcaaaagc ccggacagag cccccagctg ctcatctact tcggaagctc acgcgcgagc 180
ggggtgccgg ataggttttc gggatccgga agcggcaccg acttcacgct gaagatctcg 240
agagtcgagg ccgaggacgt gggcgtgtac tactgtatgc agcggcggcg caccccgccc 300
ttcaccttcg gcggcggaac taaggtcgag atcaag 336
<210> 139
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 139
gaagtgcagc ttctggagtc cggtggcgga ctggtccagc cgggcggatc tctgagactt 60
tcgtgtgccg cctcgggatt caccttcaac aactattgga tgacctgggt cagacaggcc 120
cccggaaagg gcctggaatg ggtgtcgtca attagctcct cggggggatc catctactac 180
cctgatcgcg tgaagggccg gttcacaatc tcccgggaca acagcaagaa caccctctac 240
ctccaaatga acagcctgcg cgctgaggac actgctgtgt actattgcgc gagggacgag 300
agatgggccg gcgcaatgga tgcctgggga caggggacca ccgtcaccgt cagctcc 357
<210> 140
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 140
gatattcaga tgacccagtc cccatcatcc ctgtccgcct ccgtgggcga ccgcgtgacg 60
atcacttgca aagccagcca gaatatcaac aagaacctgg attggtacca acagaagccg 120
gggaaggccc ctaagctgct gatctacgaa accaacaact tgcaaactgg cgtgccgtca 180
aggttcagcg gttccgggtc gggcaccgac ttcaccctga ccatttcctc gctgcaaccc 240
gaggacttcg cgacctacta ctgctatcag cacaacagcc ggttcacctt cggacagggc 300
accaagctcg agatcaag 318
<210> 141
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 141
gaagtgcagc tcgtggagtc gggtggaggc cttgtgcaac cgggaggatc cctgcggctc 60
tcctgcgccg catcaggctt cacgttcacc aacttttgga tggcctggat tagacaggca 120
ccggggaagg gactggaatg ggtggcgtcc attagctcgt ccggaggatc catctactat 180
cctgactcag tgaaggacag gtttaccatc tcccgggaca acagcaagaa cactctgtac 240
ctccaaatga actcgctgcg cgccgaggac accgccgtgt actactgcgt gaagttccat 300
cactactccg gcggaggaga tgcctgggga cagggtactc tcgtgactgt gtcgtcc 357
<210> 142
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 142
gacatccaga tgacccagag cccctcctcc ctgtccgcgt ctgtgggcga ccgcgtgacc 60
attacgtgca aagcttccca gaacattaac aagtacctgg attggtacca gcagaagcct 120
ggaaaggccc ccaagctgtt gatccactac acaaacaacc tccacactgg tatcccgtcc 180
cggttctcgg ggtccggatc gggaactgac tacaccctga ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatttcg ccacctatta ctgcctgcaa cactcctcgc gctggacctt cggcgggggt 300
actaaggtcg agatcaag 318
<210> 143
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 143
gaagtgcagc tcgtggagtc gggtggaggc cttgtgcaac cgggaggatc cctgcggctc 60
tcctgcgccg catcaggctt cacgttcaac aactactgga tgacttgggt cagacaggca 120
ccggggaagg gactggaatg ggtgtccagc attagctcgt ccggaggatc catctactat 180
ccggactcag tgaaggacag gtttaccatc tcccgggaca acgcaaagaa ctccctgtac 240
ctccaaatga actcgctgcg cgccgaggac atggccgtgt actactgcgc gaggctgtac 300
tactacgatg gggggggcga tgcctgggga cagggaaccc tagtgactgt gtcgtcc 357
<210> 144
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 144
ggaatccaga tgacacagag cccgtctagc ctgtcagcat ccgtggggga cagggtcacc 60
atcacctgta aagccagcca ggatattaac aagtacctgg actggtacca gcagaagccc 120
gggaaggccc cgaagctcct gatctacaac accaacaact tgcacaccgg aattccgtcc 180
cgcttttcgg gatcgggatc cgggaccgat tacaccctga ctatctcctc cctgcaaccc 240
gaggacttcg ccacttacta ttgcctccaa cacatttccc ggtggacttt cggcggcggc 300
accaaggtcg agatcaag 318
<210> 145
<211> 1310
<212> PRT
<213> 长尾猕猴(Macaca fascicularis)
<400> 145
Met Thr Met Cys Leu Trp Leu Lys Leu Leu Ala Phe Val Phe Ala Phe
1 5 10 15
Leu Asp Thr Glu Val Phe Val Thr Gly Gln Gly Ser Thr Leu Ser Pro
20 25 30
Thr Gly Arg Arg Thr Thr Lys Met Pro Ser Val Pro Leu Ser Ser Asp
35 40 45
Pro Leu Pro Thr His Thr Thr Ala Phe Ser Pro Ala Ser Ile Ser Glu
50 55 60
Arg Glu Asn Asp Phe Ser Glu Thr Thr Pro Ser Leu Ser Ser Asp Asn
65 70 75 80
Thr Ser Thr Gln Val Ser Pro Asp Ser Leu Asp Asn Ala Ser Ala Phe
85 90 95
Asn Thr Thr Gly Val Ser Ser Ala Leu Thr Pro His Leu Pro Thr His
100 105 110
Ala Asp Ser Gln Thr Pro Ser Thr Gly Thr Asp Thr Gln Thr Pro Ser
115 120 125
Gly Ser Ala Ala Asn Thr Thr Leu Ser Pro Thr Pro Arg Ser Asn Asp
130 135 140
Ile Ser Asp Val Pro Gly Glu Arg Ser Thr Ala Ser Thr Phe Pro Thr
145 150 155 160
Asp Pro Ile Ser Pro Leu Ala Thr Thr Leu Ile Pro Ala Arg Asn Ser
165 170 175
Ser Ala Ala Leu Pro Ala Arg Thr Ser Asn Thr Thr Ile Thr Ala Asn
180 185 190
Thr Ser Val Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Glu Thr Thr Thr Pro Ser Pro
195 200 205
Ser Gly Ser Thr Val Ile Ser Thr Pro Thr Ile Ala Thr Thr Thr Ser
210 215 220
Lys Pro Thr Cys Ala Glu Lys Tyr Ala Thr Ile Pro Val Asp Tyr Leu
225 230 235 240
Tyr Asn Asn Lys Thr Lys Leu Phe Thr Ala Lys Leu Asn Val Asn Glu
245 250 255
Asn Val Glu Cys Thr Asn Asn Asn His Thr His Asn Ile Cys Thr Asn
260 265 270
Asn Glu Val Leu Asn Leu Pro Glu Cys Lys Glu Met Asn Val Phe Val
275 280 285
Ser His Asn Ser Cys Thr Asp Arg His Lys Glu Leu Lys Leu Asp Val
290 295 300
Pro Pro Glu Val Glu Lys Phe Gln Leu Asp Asp Cys Thr Pro Asp Val
305 310 315 320
Glu Ala Asn Thr Thr Ile Cys Leu Lys Trp Lys Ile Ile Glu Thr Phe
325 330 335
Ala Cys Asp Lys Ser Lys Ile Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly Asn Lys
340 345 350
Thr Tyr Asn Lys Glu Gly Ile Tyr Leu Glu Asn Leu Glu Pro Glu Tyr
355 360 365
Glu Tyr Lys Cys Asp Ser Glu Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys Tyr Ile
370 375 380
Asn Ile Thr Lys Leu Ile Lys Thr Asp Phe Gly Ile Pro Gly Gln Pro
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Gln Asn Val Val Cys Arg His Glu Asp Ala His Gln Gly Val Ile Thr
405 410 415
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420 425 430
Asn Lys Pro Ala Lys Lys Cys Leu Ile Leu Asp Lys His Leu Thr Thr
435 440 445
Tyr His Leu Gln Asn Leu Lys Pro Tyr Thr Asn Tyr Ser Leu Ser Leu
450 455 460
His Ala Tyr Ile Ile Ala Lys Val Gln Arg Asn Gly Thr Ala Ala Thr
465 470 475 480
Cys Asn Phe Thr Thr Glu Ser Ala Pro Pro Ser Gln Val Gln Asn Met
485 490 495
Ile Val Ser Thr Ser Asp Asn Ser Met His Val Lys Cys Glu Val Pro
500 505 510
Arg Asp Val Asn Gly Pro Thr Gly Leu Tyr His Leu Glu Val Glu Ala
515 520 525
Gly Asn Thr Leu Val Arg Asn Leu Ser Gln Ser Lys Cys Asp Phe Ser
530 535 540
Val Asn Asn Leu Gln Tyr Ser Thr Tyr Tyr Asn Leu Lys Ala Tyr Tyr
545 550 555 560
His Asn Gly Lys Tyr Ser Gly Glu Pro Val Ile Leu Arg Glu Ser Thr
565 570 575
Ser Tyr Asn Ser Lys Ala Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ile
580 585 590
Val Thr Ser Ile Ala Leu Leu Val Val Leu Tyr Lys Ile Tyr Asp Leu
595 600 605
His Lys Lys Arg Ser Cys Asn Leu Asp Glu Gln Gln Glu Leu Val Glu
610 615 620
Arg Asp Asp Glu Lys Gln Leu Met Asn Val Glu Pro Ile His Ala Asp
625 630 635 640
Ile Leu Leu Glu Thr Tyr Lys Arg Lys Ile Ala Asp Glu Gly Arg Leu
645 650 655
Phe Leu Ala Glu Phe Gln Ser Ile Pro Arg Val Phe Ser Lys Phe Pro
660 665 670
Ile Lys Glu Ala Arg Lys Pro Phe Asn Gln Asn Lys Asn Arg Tyr Val
675 680 685
Asp Ile Leu Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Glu Leu Ser Glu Ile Asn
690 695 700
Gly Asp Ala Gly Ser Asn Tyr Ile Asn Ala Ser Tyr Ile Asp Gly Phe
705 710 715 720
Lys Glu Pro Arg Lys Tyr Ile Ala Ala Gln Gly Pro Arg Asp Glu Thr
725 730 735
Val Asp Asp Phe Trp Arg Met Ile Trp Glu Gln Lys Ala Thr Val Ile
740 745 750
Val Met Val Thr Arg Cys Glu Glu Gly Asn Arg Asn Lys Cys Ala Glu
755 760 765
Tyr Trp Pro Ser Met Glu Glu Gly Thr Arg Ala Phe Gly Asp Ile Val
770 775 780
Val Lys Ile Asn Gln His Lys Arg Cys Pro Asp Tyr Ile Ile Gln Lys
785 790 795 800
Leu Asn Ile Val Asn Lys Lys Glu Lys Ala Thr Gly Arg Glu Val Thr
805 810 815
His Ile Gln Phe Thr Ser Trp Pro Asp His Gly Val Pro Glu Asp Pro
820 825 830
His Leu Leu Leu Lys Leu Arg Arg Arg Val Asn Ala Phe Ser Asn Phe
835 840 845
Phe Ser Gly Pro Ile Val Val His Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr
850 855 860
Gly Thr Tyr Ile Gly Ile Asp Ala Met Leu Glu Gly Leu Glu Ala Glu
865 870 875 880
Asn Lys Val Asp Val Tyr Gly Tyr Val Val Lys Leu Arg Arg Gln Arg
885 890 895
Cys Leu Met Val Gln Val Glu Ala Gln Tyr Ile Leu Ile His Gln Ala
900 905 910
Leu Val Glu Tyr Asn Gln Phe Gly Glu Thr Glu Val Asn Leu Ser Glu
915 920 925
Leu His Pro Tyr Leu His Asn Met Lys Lys Arg Asp Pro Pro Ser Glu
930 935 940
Pro Ser Pro Leu Glu Ala Glu Phe Gln Arg Leu Pro Ser Tyr Arg Ser
945 950 955 960
Trp Arg Thr Gln His Ile Gly Asn Gln Glu Glu Asn Lys Asn Lys Asn
965 970 975
Arg Asn Ser Asn Val Ile Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Pro Leu Lys
980 985 990
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995 1000 1005
Ser Asp Asp Asp Ser Asp Ser Glu Glu Pro Ser Lys Tyr Ile Asn
1010 1015 1020
Ala Ser Phe Ile Met Ser Tyr Trp Lys Pro Glu Val Met Ile Ala
1025 1030 1035
Ala Gln Gly Pro Leu Lys Glu Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met
1040 1045 1050
Ile Phe Gln Arg Lys Val Lys Val Ile Val Met Leu Thr Glu Leu
1055 1060 1065
Lys His Gly Asp Gln Glu Ile Cys Ala Gln Tyr Trp Gly Glu Gly
1070 1075 1080
Lys Gln Thr Tyr Gly Asp Ile Glu Val Asp Met Lys Asp Thr Asn
1085 1090 1095
Lys Ser Ser Thr Tyr Thr Leu Arg Val Phe Glu Leu Arg His Ser
1100 1105 1110
Lys Arg Lys Asp Ser Arg Thr Val Tyr Gln Tyr Gln Tyr Thr Asn
1115 1120 1125
Trp Ser Val Glu Gln Leu Pro Ala Glu Pro Lys Glu Leu Val Ser
1130 1135 1140
Leu Ile Gln Val Leu Lys Glu Lys Leu Pro Gln Lys Asn Phe Ser
1145 1150 1155
Glu Gly Asn Lys His His Lys Ser Thr Pro Leu Leu Ile His Cys
1160 1165 1170
Arg Asp Gly Ser Gln Gln Thr Gly Ile Phe Cys Ala Leu Leu Asn
1175 1180 1185
Leu Leu Glu Ser Ala Glu Thr Glu Glu Val Val Asp Ile Phe Gln
1190 1195 1200
Val Val Lys Ala Leu Arg Lys Ala Arg Pro Gly Met Val Ser Thr
1205 1210 1215
Phe Glu Gln Tyr Gln Phe Leu Tyr Asp Ile Ile Ala Ser Thr Tyr
1220 1225 1230
Pro Ala Gln Asn Gly Gln Val Lys Lys Asn Asn His Gln Glu Asp
1235 1240 1245
Lys Ile Glu Phe Asp Asn Glu Val Asp Lys Val Lys Gln Asp Ala
1250 1255 1260
Asn Cys Val Asn Pro Leu Gly Ala Thr Glu Lys Leu Pro Glu Ala
1265 1270 1275
Lys Glu Gln Ala Thr Gly Ser Glu Pro Thr Ser Gly Thr Glu Gly
1280 1285 1290
Pro Glu His Ser Val Asn Gly Pro Ala Ser Pro Ala Leu Asn Gln
1295 1300 1305
Gly Ser
1310
<210> 146
<211> 1310
<212> PRT
<213> 恒河猕猴(Macaca mulatta)
<400> 146
Met Thr Met Cys Leu Trp Leu Lys Leu Leu Ala Phe Val Phe Ala Phe
1 5 10 15
Leu Asp Thr Glu Val Phe Val Thr Gly Gln Gly Ser Thr Leu Ser Pro
20 25 30
Thr Gly Arg Arg Thr Thr Lys Met Pro Ser Val Pro Leu Ser Ser Asp
35 40 45
Pro Leu Pro Thr His Thr Thr Ala Phe Ser Pro Ala Ser Ile Ser Glu
50 55 60
Arg Glu Asn Asp Phe Ser Glu Thr Thr Pro Ser Leu Ser Ser Asp Asn
65 70 75 80
Thr Ser Thr His Val Ser Pro Asp Ser Leu Asp Asn Ala Ser Ala Phe
85 90 95
Asn Thr Thr Gly Val Ser Ser Ala Leu Thr Pro His Leu Pro Thr His
100 105 110
Ala Asp Ser Gln Thr Pro Ser Thr Gly Thr Asp Thr Gln Thr Pro Ser
115 120 125
Gly Ser Ala Ala Asn Thr Thr Leu Ser Pro Thr Pro Arg Ser Asn Asp
130 135 140
Ile Ser Asp Val Pro Gly Glu Arg Ser Thr Ala Ser Thr Phe Pro Thr
145 150 155 160
Asp Pro Ile Ser Pro Leu Ala Thr Thr Leu Ile Pro Ala Arg Asn Ser
165 170 175
Ser Ala Ala Leu Pro Ala Arg Thr Ser Asn Thr Thr Ile Thr Ala Asn
180 185 190
Thr Ser Val Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Glu Thr Thr Thr Pro Ser Pro
195 200 205
Ser Gly Ser Thr Val Ile Ser Thr Pro Thr Ile Ala Thr Thr Thr Ser
210 215 220
Lys Pro Thr Cys Ala Glu Lys Tyr Ala Thr Ile Pro Val Asp Tyr Leu
225 230 235 240
Tyr Asn Asn Lys Thr Lys Leu Phe Thr Ala Lys Leu Asn Val Asn Glu
245 250 255
Asn Val Glu Cys Thr Asn Asn Asn His Thr His Asn Ile Cys Thr Asn
260 265 270
Asn Glu Val Leu Asn Leu Pro Glu Cys Lys Glu Met Asn Val Phe Val
275 280 285
Ser His Asn Ser Cys Thr Asp Arg His Lys Glu Leu Lys Leu Asp Val
290 295 300
Pro Pro Glu Val Glu Lys Phe Gln Leu Asp Asp Cys Thr Pro Asp Val
305 310 315 320
Glu Ala Asn Thr Thr Ile Cys Leu Lys Trp Lys Ile Ile Glu Thr Phe
325 330 335
Ala Cys Asp Lys Ser Lys Ile Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly Asn Lys
340 345 350
Thr Tyr Asn Lys Glu Gly Ile Tyr Leu Glu Asn Leu Glu Pro Glu Tyr
355 360 365
Glu Tyr Lys Cys Asp Ser Glu Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys Tyr Ile
370 375 380
Asn Ile Thr Lys Leu Ile Lys Thr Asp Phe Gly Ile Pro Gly Gln Pro
385 390 395 400
Gln Asn Val Val Cys Arg His Glu Asp Ala His Gln Gly Val Ile Thr
405 410 415
Trp Asn Pro Pro Gln Arg Ser Phe His Asn Phe Thr Leu Cys Tyr Val
420 425 430
Ser Lys Thr Ala Lys Lys Cys Leu Ser Leu Asp Lys His Leu Thr Thr
435 440 445
Tyr His Leu Gln Asn Leu Lys Pro Tyr Thr Asn Tyr Ser Leu Ser Leu
450 455 460
His Ala Tyr Ile Ile Ala Lys Val Gln Arg Asn Gly Thr Ala Ala Thr
465 470 475 480
Cys Asn Phe Thr Thr Glu Ser Ala Pro Pro Ser Gln Val Gln Asn Met
485 490 495
Ile Val Ser Thr Ser Asp Asn Ser Met Arg Val Lys Cys Glu Ala Pro
500 505 510
Arg Asp Val Asn Gly Pro Thr Glu Leu Tyr Leu Leu Glu Val Glu Ala
515 520 525
Gly Asn Thr Leu Val Arg Asn Leu Ser Gln Ser Glu Cys Asp Phe Ser
530 535 540
Val Asn Asn Leu Gln Tyr Ser Thr Tyr Tyr Asn Leu Lys Ala Tyr Tyr
545 550 555 560
His Asn Gly Lys Tyr Ser Gly Glu Pro Val Ile Leu Arg Glu Ser Thr
565 570 575
Ser Tyr Asn Ser Lys Ala Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ile
580 585 590
Val Thr Ser Ile Ala Leu Leu Val Val Leu Tyr Lys Ile Tyr Asp Leu
595 600 605
His Lys Lys Arg Ser Cys Asn Leu Asp Glu Gln Gln Glu Leu Val Glu
610 615 620
Arg Asp Asp Glu Lys Gln Leu Met Asn Val Glu Pro Ile His Ala Asp
625 630 635 640
Ile Leu Leu Glu Thr Tyr Lys Arg Lys Ile Ala Asp Glu Gly Arg Leu
645 650 655
Phe Leu Ala Glu Phe Gln Ser Ile Pro Arg Val Phe Ser Lys Phe Pro
660 665 670
Ile Lys Glu Ala Arg Lys Pro Phe Asn Gln Asn Lys Asn Arg Tyr Val
675 680 685
Asp Ile Leu Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Glu Leu Ser Glu Ile Asn
690 695 700
Gly Asp Ala Gly Ser Asn Tyr Ile Asn Ala Ser Tyr Ile Asp Gly Phe
705 710 715 720
Lys Glu Pro Arg Lys Tyr Ile Ala Ala Gln Gly Pro Arg Asp Glu Thr
725 730 735
Val Asp Asp Phe Trp Arg Met Ile Trp Glu Gln Lys Ala Thr Val Ile
740 745 750
Val Met Val Thr Arg Cys Glu Glu Gly Asn Arg Asn Lys Cys Ala Glu
755 760 765
Tyr Trp Pro Ser Met Glu Glu Gly Thr Arg Ala Phe Gly Asp Val Val
770 775 780
Val Lys Ile Asn Gln His Lys Arg Cys Pro Asp Tyr Ile Ile Gln Lys
785 790 795 800
Leu Asn Ile Val Asn Lys Lys Glu Lys Ala Thr Gly Arg Glu Val Thr
805 810 815
His Ile Gln Phe Thr Ser Trp Pro Asp His Gly Val Pro Glu Asp Pro
820 825 830
His Leu Leu Leu Lys Leu Arg Arg Arg Val Asn Ala Phe Ser Asn Phe
835 840 845
Phe Ser Gly Pro Ile Val Val His Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr
850 855 860
Gly Thr Tyr Ile Gly Ile Asp Ala Met Leu Glu Gly Leu Glu Ala Glu
865 870 875 880
Asn Lys Val Asp Val Tyr Gly Tyr Val Val Lys Leu Arg Arg Gln Arg
885 890 895
Cys Leu Met Val Gln Val Glu Ala Gln Tyr Ile Leu Ile His Gln Ala
900 905 910
Leu Val Glu Tyr Asn Gln Phe Gly Glu Thr Glu Val Asn Leu Ser Glu
915 920 925
Leu His Pro Tyr Leu His Asn Met Lys Lys Arg Asp Pro Pro Ser Glu
930 935 940
Pro Ser Pro Leu Glu Ala Glu Phe Gln Arg Leu Pro Ser Tyr Arg Ser
945 950 955 960
Trp Arg Thr Gln His Ile Gly Asn Gln Glu Glu Asn Lys Asn Lys Asn
965 970 975
Arg Asn Ser Asn Val Ile Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Pro Leu Lys
980 985 990
His Glu Leu Glu Met Ser Lys Glu Ser Asp His Asp Ser Asp Glu Ser
995 1000 1005
Ser Asp Asp Asp Ser Asp Ser Glu Glu Pro Ser Lys Tyr Ile Asn
1010 1015 1020
Ala Ser Phe Ile Met Ser Tyr Trp Lys Pro Glu Val Met Ile Ala
1025 1030 1035
Ala Gln Gly Pro Leu Lys Glu Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met
1040 1045 1050
Ile Phe Gln Arg Lys Val Lys Val Ile Val Met Leu Thr Glu Leu
1055 1060 1065
Lys His Gly Asp Gln Glu Ile Cys Ala Gln Tyr Trp Gly Glu Gly
1070 1075 1080
Lys Gln Thr Tyr Gly Asp Ile Glu Val Asp Met Lys Asp Thr Asn
1085 1090 1095
Lys Ser Ser Thr Tyr Thr Leu Arg Val Phe Glu Leu Arg His Ser
1100 1105 1110
Lys Arg Lys Asp Ser Arg Thr Val Tyr Gln Tyr Gln Tyr Thr Asn
1115 1120 1125
Trp Ser Val Glu Gln Leu Pro Ala Glu Pro Lys Glu Leu Val Ser
1130 1135 1140
Leu Ile Gln Val Leu Lys Glu Lys Leu Pro Gln Lys Asn Ser Ser
1145 1150 1155
Glu Gly Asn Lys His His Lys Ser Thr Pro Leu Leu Ile His Cys
1160 1165 1170
Arg Asp Gly Ser Gln Gln Thr Gly Ile Phe Cys Ala Leu Leu Asn
1175 1180 1185
Leu Leu Glu Ser Ala Glu Thr Glu Glu Val Val Asp Ile Phe Gln
1190 1195 1200
Val Val Lys Ala Leu Arg Lys Ala Arg Pro Gly Met Val Ser Thr
1205 1210 1215
Phe Glu Gln Tyr Gln Phe Leu Tyr Asp Ile Ile Ala Ser Thr Tyr
1220 1225 1230
Pro Ala Gln Asn Gly Gln Val Lys Lys Asn Asn His Gln Glu Asp
1235 1240 1245
Lys Ile Glu Phe Asp Asn Glu Val Asp Lys Val Lys Gln Asp Ala
1250 1255 1260
Asn Cys Val Asn Pro Leu Gly Ala Thr Glu Lys Leu Pro Glu Ala
1265 1270 1275
Lys Glu Gln Ala Thr Gly Ser Glu Pro Thr Ser Gly Thr Glu Gly
1280 1285 1290
Pro Glu His Ser Val Asn Gly Pro Ala Ser Pro Ala Leu Asn Gln
1295 1300 1305
Gly Ser
1310
<210> 147
<211> 293
<212> PRT
<213> 大肠杆菌(Escherichia coli)
<400> 147
Lys Glu Phe Thr Leu Asp Phe Ser Thr Ala Lys Thr Tyr Val Asp Ser
1 5 10 15
Leu Asn Val Ile Arg Ser Ala Ile Gly Thr Pro Leu Gln Thr Ile Ser
20 25 30
Ser Gly Gly Thr Ser Leu Leu Met Ile Asp Ser Gly Ser Gly Asp Asn
35 40 45
Leu Phe Ala Val Asp Val Arg Gly Ile Asp Pro Glu Glu Gly Arg Phe
50 55 60
Asn Asn Leu Arg Leu Ile Val Glu Arg Asn Asn Leu Tyr Val Thr Gly
65 70 75 80
Phe Val Asn Arg Thr Asn Asn Val Phe Tyr Arg Phe Ala Asp Phe Ser
85 90 95
His Val Thr Phe Pro Gly Thr Thr Ala Val Thr Leu Ser Gly Asp Ser
100 105 110
Ser Tyr Thr Thr Leu Gln Arg Val Ala Gly Ile Ser Arg Thr Gly Met
115 120 125
Gln Ile Asn Arg His Ser Leu Thr Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Met Ser
130 135 140
His Ser Gly Thr Ser Leu Thr Gln Ser Val Ala Arg Ala Met Leu Arg
145 150 155 160
Phe Val Thr Val Thr Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln Arg
165 170 175
Gly Phe Arg Thr Thr Leu Asp Asp Leu Ser Gly Arg Ser Tyr Val Met
180 185 190
Thr Ala Glu Asp Val Asp Leu Thr Leu Asn Trp Gly Arg Leu Ser Ser
195 200 205
Val Leu Pro Asp Tyr His Gly Gln Asp Ser Val Arg Val Gly Arg Ile
210 215 220
Ser Phe Gly Ser Ile Asn Ala Ile Leu Gly Ser Val Ala Leu Ile Leu
225 230 235 240
Asn Cys His His His Ala Ser Arg Val Ala Arg Met Ala Ser Asp Glu
245 250 255
Phe Pro Ser Met Cys Pro Ala Asp Gly Arg Val Arg Gly Ile Thr His
260 265 270
Asn Lys Ile Leu Trp Asp Ser Ser Thr Leu Gly Ala Ile Leu Met Arg
275 280 285
Arg Thr Ile Ser Ser
290
<210> 148
<211> 293
<212> PRT
<213> 痢疾志贺杆菌(Shigella dysenteriae)
<400> 148
Lys Glu Phe Thr Leu Asp Phe Ser Thr Ala Lys Thr Tyr Val Asp Ser
1 5 10 15
Leu Asn Val Ile Arg Ser Ala Ile Gly Thr Pro Leu Gln Thr Ile Ser
20 25 30
Ser Gly Gly Thr Ser Leu Leu Met Ile Asp Ser Gly Thr Gly Asp Asn
35 40 45
Leu Phe Ala Val Asp Val Arg Gly Ile Asp Pro Glu Glu Gly Arg Phe
50 55 60
Asn Asn Leu Arg Leu Ile Val Glu Arg Asn Asn Leu Tyr Val Thr Gly
65 70 75 80
Phe Val Asn Arg Thr Asn Asn Val Phe Tyr Arg Phe Ala Asp Phe Ser
85 90 95
His Val Thr Phe Pro Gly Thr Thr Ala Val Thr Leu Ser Gly Asp Ser
100 105 110
Ser Tyr Thr Thr Leu Gln Arg Val Ala Gly Ile Ser Arg Thr Gly Met
115 120 125
Gln Ile Asn Arg His Ser Leu Thr Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Met Ser
130 135 140
His Ser Gly Thr Ser Leu Thr Gln Ser Val Ala Arg Ala Met Leu Arg
145 150 155 160
Phe Val Thr Val Thr Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln Arg
165 170 175
Gly Phe Arg Thr Thr Leu Asp Asp Leu Ser Gly Arg Ser Tyr Val Met
180 185 190
Thr Ala Glu Asp Val Asp Leu Thr Leu Asn Trp Gly Arg Leu Ser Ser
195 200 205
Val Leu Pro Asp Tyr His Gly Gln Asp Ser Val Arg Val Gly Arg Ile
210 215 220
Ser Phe Gly Ser Ile Asn Ala Ile Leu Gly Ser Val Ala Leu Ile Leu
225 230 235 240
Asn Cys His His His Ala Ser Arg Val Ala Arg Met Ala Ser Asp Glu
245 250 255
Phe Pro Ser Met Cys Pro Ala Asp Gly Arg Val Arg Gly Ile Thr His
260 265 270
Asn Lys Ile Leu Trp Asp Ser Ser Thr Leu Gly Ala Ile Leu Met Arg
275 280 285
Arg Thr Ile Ser Ser
290
<210> 149
<211> 297
<212> PRT
<213> 大肠杆菌(Escherichia coli)
<400> 149
Asp Glu Phe Thr Val Asp Phe Ser Ser Gln Lys Ser Tyr Val Asp Ser
1 5 10 15
Leu Asn Ser Ile Arg Ser Ala Ile Ser Thr Pro Leu Gly Asn Ile Ser
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Val Ser Val Ile Asn His Val Leu Gly Gly Asn
35 40 45
Tyr Ile Ser Leu Asn Val Arg Gly Leu Asp Pro Tyr Ser Glu Arg Phe
50 55 60
Asn His Leu Arg Leu Ile Met Glu Arg Asn Asn Leu Tyr Val Ala Gly
65 70 75 80
Phe Ile Asn Thr Glu Thr Asn Ile Phe Tyr Arg Phe Ser Asp Phe Ser
85 90 95
His Ile Ser Val Pro Asp Val Ile Thr Val Ser Met Thr Thr Asp Ser
100 105 110
Ser Tyr Ser Ser Leu Gln Arg Ile Ala Asp Leu Glu Arg Thr Gly Met
115 120 125
Gln Ile Gly Arg His Ser Leu Val Gly Ser Tyr Leu Asp Leu Met Glu
130 135 140
Phe Arg Gly Arg Ser Met Thr Arg Ala Ser Ser Arg Ala Met Leu Arg
145 150 155 160
Phe Val Thr Val Ile Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln Arg
165 170 175
Gly Phe Arg Pro Ala Leu Ser Glu Ala Ser Pro Leu Tyr Thr Met Thr
180 185 190
Ala Gln Asp Val Asp Leu Thr Leu Asn Trp Gly Arg Ile Ser Asn Val
195 200 205
Leu Pro Glu Tyr Arg Gly Glu Glu Gly Val Arg Ile Gly Arg Ile Ser
210 215 220
Phe Asn Ser Leu Ser Ala Ile Leu Gly Ser Val Ala Val Ile Leu Asn
225 230 235 240
Cys His Ser Thr Gly Ser Tyr Ser Val Arg Ser Val Ser Gln Lys Gln
245 250 255
Lys Thr Glu Cys Gln Ile Val Gly Asp Arg Ala Ala Ile Lys Val Asn
260 265 270
Asn Val Leu Trp Glu Ala Asn Thr Ile Ala Ala Leu Leu Asn Arg Lys
275 280 285
Pro Gln Asp Leu Thr Glu Pro Asn Gln
290 295
<210> 150
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 150
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcgaa gcatatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtctca gtggtgccac catacactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt attactgcgc cagaggtgga 300
caatactact acgacagcag tgattacggt gaggtagcat tcgacatatg gggtcagggt 360
acaatggtca ccgtctcctc a 381
<210> 151
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 151
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctggtc agtaatggat acaactattt ggattggtac 120
ctgcagaagc cagggcagtc tccacagctc ctgatctatt tcggttcttc ccgggcctcc 180
ggggtccctg acaggttcag tggcagtgga tcaggcacag attttacact gaaaatcagc 240
agagtggagg ctgaggatgt tggggtttat tactgcatgc agagaagacg cactccttgg 300
tcttttggcg gagggaccaa ggttgagatc aaa 333
<210> 152
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 152
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcgga ggatatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtatca gtggtgccac cataacctac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggtgga 300
caatactact acgacagcag cgattatggt gaggtagcat tcgacatatg gggtcagggt 360
acaatggtca ccgtctcctc a 381
<210> 153
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 153
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctggtc agtaatggat acaactattt ggattggtac 120
ctgcagaagc cagggcagtc tccacagctc ctgatctatt tcggttcttc ccgggcctcc 180
ggggtccctg acaggttcag tggcagtgga tcaggcacag attttacact gaaaatcagc 240
agagtggagg ctgaggatgt tggggtttat tactgcatgc agagaagacg cactcctcct 300
ttcacttttg gcggagggac caaggttgag atcaaa 336
<210> 154
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 154
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcgaa gcatatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtctca gtggtgccac catacactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt attactgcgc cagaggtgga 300
caatactact acacgagcag tgattacggt gaggtagcat tcgacatatg gggtcagggt 360
acaatggtca ccgtctcctc a 381
<210> 155
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 155
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctggtc agtaatggat acaactattt ggattggtac 120
ctgcagaagc cagggcagtc tccacagctc ctgatctatt tcggttcttc ccgggcctcc 180
ggggtccctg acaggttcag tggcagtgga tcaggcacag attttacact gaaaatcagc 240
agagtggagg ctgaggatgt tggggtttat tactgcatgc agagaagacg cactccttgg 300
tcttttggcg gagggaccaa ggttgagatc aaa 333
<210> 156
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 156
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcgggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttaat aattattgga tgacatgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatct attagttcca gtggtggtag catttactac 180
cccgacaggg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc aagagacgag 300
agatgggcag gtgctatgga tgcctggggg caagggacca cggtcaccgt ctcctca 357
<210> 157
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 157
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgca aggcaagtca gaatattaac aagaatttag actggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgag acgaataact tgcaaacagg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgttatcag cataattcta gatttacttt tggccagggg 300
accaagctgg agatcaaa 318
<210> 158
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 158
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttacc aatttttgga tggcgtggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagt attagttcaa gtggtggtag catctactac 180
cctgactccg tgaaggaccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgt caagtttcac 300
cactattcag gcggcggcga tgcttggggc caagggaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 159
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 159
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgca aagcaagtca gaatattaac aagtatttag attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatccattac actaacaact tgcacaccgg gattccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat tatactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtctgcag cacagttcca gatggacatt cggcggaggg 300
accaaggtgg agatcaaa 318
<210> 160
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 160
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcaat aactattgga tgacgtgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatcc attagtagta gtggcggtag tatatactac 180
cctgactctg tgaaggatcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac atggcggtgt actactgcgc caggttgtac 300
tactacgacg ggggagggga tgcgtggggc caaggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 161
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 161
ggcatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgca aggcgagtca ggacattaat aagtatttag attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctacaat acaaacaatt tgcatacagg gatcccatca 180
aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tatactctta ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacatatta ctgtcttcaa cacatatcta gatggacgtt cggcggaggg 300
accaaggtgg agatcaaa 318

Claims (89)

1.一种经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含：
(a)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:2中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:3中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:4中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:6中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:7中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ ID NO:8中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；
(b)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:12中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:13中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:14中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:16中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:17中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ IDNO:18中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；
(c)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:22中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:23中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:24中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:26中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:27中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ IDNO:28中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；
(d)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:33中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:34中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:36中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:37中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ IDNO:38中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；
(e)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:42中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:43中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:44中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:46中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:47中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ IDNO:48中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；
(f)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:52中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:53中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:54中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:56中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:57中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ IDNO:58中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；
(g)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:62中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:63中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:64中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:66中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:67中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ IDNO:68中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；
(h)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:72中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:73中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:74中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:76中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:77中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ IDNO:78中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；
(i)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:82中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:83中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:84中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:86中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:87中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ IDNO:88中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；或
(j)重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:92中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:93中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:94中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:96中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:97中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ IDNO:98中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；
2.一种经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含
重链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:119中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:120中所示之胺基酸序列之CDR2结构域及含有如SEQ ID NO:121中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；及轻链可变区，其包含含有如SEQ ID NO:122中所示之胺基酸序列之CDR1结构域、含有如SEQ ID NO:123中所示之胺基酸序列之CDR2结构域；及含有如SEQ IDNO:124中所示之胺基酸序列之CDR3结构域；
3.一种经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其包含
(a)包含如SEQ ID NO:1中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:5中所示之胺基酸序列之轻链可变区；
(b)包含如SEQ ID NO:11中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:15中所示之胺基酸序列之轻链可变区；
(c)包含如SEQ ID NO:21中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:25中所示之胺基酸序列之轻链可变区；
(d)包含如SEQ ID NO:31中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:35中所示之胺基酸序列之轻链可变区；
(e)包含如SEQ ID NO:41中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:45中所示之胺基酸序列之轻链可变区；
(f)包含如SEQ ID NO:51中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:55中所示之胺基酸序列之轻链可变区；
(g)包含如SEQ ID NO:61中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:65中所示之胺基酸序列之轻链可变区；
(h)包含如SEQ ID NO:71中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:75中所示之胺基酸序列之轻链可变区；
(i)包含如SEQ ID NO:81中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:85中所示之胺基酸序列之轻链可变区；
(j)包含如SEQ ID NO:91中所示之胺基酸序列之重链可变区，及包含如SEQ ID NO:95中所示之胺基酸序列之轻链可变区。
4.如权利要求1至3中任一项之经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分包含Fc区。
5.如权利要求4之经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其中该Fc区系人类IgG1 Fc区或人类IgG4 Fc区。
6.如权利要求1至5中任一项之经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其中该抗体系单株抗体。
7.如权利要求1至6中任一项之经分离之抗CD45抗体，其中该抗体系包含恒定区之完整抗体。
8.如权利要求1至7中任一项之经分离之抗CD45抗体，其中该抗体系IgG。
9.权利要求8之经分离之抗CD45抗体，其中该IgG系IgG1或IgG4。
10.如权利要求1至9中任一项之经分离之抗CD45抗体，其中该抗体包含恒定区，且其中该恒定区包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个或至少五个选自由以下组成之群之胺基酸取代：L234A、L235A、D265C、H310A及H435A(根据EU索引编号)。
11.如权利要求10之经分离之抗CD45抗体，其中该恒定区包含胺基酸取代L234A、L235A及D265C(根据EU索引编号)。
12.如权利要求1至11中任一项之经分离之抗CD45抗体，其包含恒定区，其中该恒定区包含
(a)如SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105或SEQ ID NO:106中所示之重链胺基酸序列；及
(b)如SEQ ID NO:101中所示之轻链胺基酸序列。
13.一种经分离之抗CD45抗体，其包含
(a)如SEQ ID NO:9中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:10中所示之轻链胺基酸序列；
(b)如SEQ ID NO:19中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:20中所示之轻链胺基酸序列；
(c)如SEQ ID NO:29中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:30中所示之轻链胺基酸序列；
(d)如SEQ ID NO:39中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:40中所示之轻链胺基酸序列；
(e)如SEQ ID NO:49中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:50中所示之轻链胺基酸序列；
(f)如SEQ ID NO:59中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:60中所示之轻链胺基酸序列；
(g)如SEQ ID NO:69中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:70中所示之轻链胺基酸序列；
(h)如SEQ ID NO:79中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:80中所示之轻链胺基酸序列；
(i)重链如SEQ ID NO:89中所示之胺基酸序列，及如SEQ ID NO:90中所示之轻链胺基酸序列；或
(j)如SEQ ID NO:99中所示之重链胺基酸序列，及如SEQ ID NO:100中所示之轻链胺基酸序列。
14.一种经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其在位于CD45片段1(SEQ ID NO:114)、CD45片段2(SEQ ID NO:115)、CD45片段3(SEQ ID NO:116)、CD45片段4(SEQ ID NO:117)及/或CD45片段5(SEQ ID NO:118)内之抗原决定基处特异性结合至人类CD45。
15.如权利要求14之经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分特异性结合至
(a)人类CD45之位于CD45片段2内之抗原决定基，及人类CD45之位于片段4内之抗原决定基；
(b)人类CD45之位于CD45片段1内之抗原决定基，及人类CD45之位于CD45片段3内之抗原决定基；或
(c)人类CD45之位于CD45片段5内之抗原决定基。
16.如权利要求14或15之经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分特异性结合至
(a)一或多个选自由人类CD45中之405T、407K、419Y、425K、481R、505R及509H组成之群之残基(参照SEQ ID NO:113编号)；或
(b)一或多个选自由人类CD45中之486R、493Y及502T组成之群之残基(参照SEQ ID NO:113编号)。
17.如权利要求1至16中任一项之经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其特异性结合人类CD45，且与食蟹猴CD45交叉反应。
18.如权利要求1至17中任一项之经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分结合至人类CD45且解离速率(K解离)为1×10-2至1×10-3、1×10-3至1×10-4、1×10-4至1×10-5、1×10-5至1×10-6、1×10-6至1×10-7或1×10-7至1×10-8，如藉由生物层干涉(BLI)所量测。
19.如权利要求1至18中任一项之经分离之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分结合至人类CD45且KD为约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约10nM或更小或约0.1nM或更小，如藉由生物层干涉(BLI)所测定。
20.一种医药组合物，其包含如权利要求1至19中任一项之抗体或其抗原结合部分及医药学上可接受之载剂。
21.一种经分离核酸，其包含编码如权利要求1至13中任一项之抗体或其抗原结合部分之核酸序列。
22.一种载体，其包含如权利要求21之经分离核酸。
23.一种宿主细胞，其包含如权利要求21之经分离核酸或如权利要求22之载体。
24.如权利要求23之宿主细胞，其中该细胞系中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或HEK293T细胞。
25.一种医药组合物，其包含如权利要求1至19中任一项之抗体或其抗原结合部分，用于耗尽人类患者中之CD45+细胞群体。
26.一种耗尽人类患者中之CD45+细胞群体之方法，其包括向该人类患者投与如权利要求1至19中任一项之抗体或其抗原结合部分。
27.如权利要求26之方法，其中该等CD45+细胞系CD3+、CD19+、CD33+、CD34+或CD45+/B2M+。
28.如权利要求26之方法，其中该等CD45+细胞系造血干细胞(HSC)、T细胞、B细胞及/或骨髓细胞。
29.如权利要求26之方法，其中该等CD45+细胞系癌细胞。
30.如权利要求26至29中任一项之方法，其中该等CD45+细胞系自该患者之骨髓及/或自该患者之外周血耗尽。
31.如权利要求26至30中任一项之方法，其中该患者需要造血干细胞移植物。
32.如权利要求26至31中任一项之方法，其进一步包括向该患者投与包含造血干细胞之移植物。
33.如权利要求31或32之方法，其中该移植物为同种异体的。
34.如权利要求31或32之方法，其中该移植物为自体的。
35.一种抗体药物结合物(ADC)，其包含经由连接体结合至细胞毒素之抗CD45抗体或其抗原结合部分，其中该抗CD45抗体或其抗原结合部分系如权利要求1至19中任一项之抗体或其抗原结合部分。
36.如权利要求35之ADC，其中该抗体藉助该抗体之恒定结构域中之半胱胺酸残基结合至该细胞毒素。
37.如权利要求36之ADC，其中该半胱胺酸残基系藉助该抗体之该恒定区中之胺基酸取代来引入。
38.如权利要求37之ADC，其中该胺基酸取代系D265C及/或V205C(EU编号)。
39.如权利要求35至38中任一项之ADC，其中该ADC具有1、2、3、4、5、6、7或8之药物对抗体比率(DAR)。
40.如权利要求35至39中任一项之ADC，其中该细胞毒素系RNA聚合酶抑制剂、DNA嵌入剂、DNA烷基化剂、DNA交联剂、破坏蛋白质合成之剂、破坏微管动力学之剂或破坏有丝分裂纺锤体之剂。
41.如权利要求35至40中任一项之ADC，其中该细胞毒素系选自由以下组成之群：毒伞肽(amatoxin)、蒽环、奥里斯他汀(auristatin)、卡奇霉素(calicheamicin)、去三角梅蛋白(deBouganin)、白喉毒素(diphtheria toxin)、倍癌霉素(duocarmycin)、吲哚啉并苯并二氮呯(IGN)、吲哚啉并苯并二氮呯二聚体、伊立替康(irinotecan)、美登素(maytansine)、类美登素(maytansinoid)、假单胞菌外毒素A、吡咯并苯并二氮呯(PBD)、吡咯并苯并二氮呯二聚体、肥皂草毒素(saporin)及SN-38。
42.如权利要求40之ADC，其中该细胞毒素系RNA聚合酶抑制剂。
43.如权利要求42之ADC，其中该RNA聚合酶抑制剂系毒伞肽。
44.如权利要求43之ADC，其中该ADC系由式Ab-Z-L-Am表示，其中Ab系如权利要求1至19中任一项之抗体或其抗原结合部分，L系连接体，Z系化学部分，且Am系毒伞肽。
45.如权利要求44之ADC，其中毒伞肽-连接体结合物系由式(I)表示：
Figure FDA0003690274470000101
其中R1系H、OH、ORA或ORC；
R2系H、OH、ORB或ORC；
RA及RB(若存在)与其所结合之氧原子一起组合形成视情况经取代之5员杂环烷基；
R3系H、RC或RD；
R4、R5、R6及R7各自独立地系H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8系OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9系H、OH、ORC或ORD；
X系-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC系-L-Z；
RD系视情况经取代之C1-C6烷基、视情况经取代之C1-C6杂烷基、视情况经取代之C2-C6烯基、视情况经取代之C2-C6杂烯基、视情况经取代之C2-C6炔基、视情况经取代之C2-C6杂炔基、视情况经取代之环烷基、视情况经取代之杂环烷基、视情况经取代之芳基或视情况经取代之杂芳基；
L系视情况经取代之C1-C6伸烷基、视情况经取代之C1-C6伸杂烷基、视情况经取代之C2-C6伸烯基、视情况经取代之C2-C6伸杂烯基、视情况经取代之C2-C6伸炔基、视情况经取代之C2-C6伸杂炔基、视情况经取代之伸环烷基、视情况经取代之伸杂环烷基、视情况经取代之伸芳基、视情况经取代之伸杂芳基、肽、二肽、-(C＝O)-、二硫化物、腙或其组合；
且
Z系自存在于L上之反应性取代基与存在于该抗体或其抗原结合片段内之反应性取代基之间的偶合反应形成之化学部分，
其中Am包含恰好一个RC取代基。
46.如权利要求45之ADC，其中L-Z系
Figure FDA0003690274470000111
47.如权利要求43或44之ADC，其中该ADC系由以下中之一者表示：
Figure FDA0003690274470000112
其中X系-S-、-S(O)-或-SO2-。
48.如权利要求43或44之ADC，其中该ADC具有式
Figure FDA0003690274470000121
其中Ab表示该抗CD45抗体之连接点。
49.如权利要求43或44之ADC，其中该ADC具有式
Figure FDA0003690274470000122
其中Ab表示该抗CD45抗体之该连接点。
50.如权利要求43或44之ADC，其中该ADC具有式
Figure FDA0003690274470000131
其中Ab表示该抗CD45抗体之该连接点。
51.如权利要求43或44之ADC，其中该ADC具有式
Figure FDA0003690274470000132
其中Ab表示该抗CD45抗体之该连接点。
52.如权利要求43或44之ADC，其中该ADC具有式
Figure FDA0003690274470000133
其中Ab表示该抗CD45抗体之该连接点。
53.如权利要求41之ADC，其中该细胞毒素系吡咯并苯并二氮呯(PBD)。
54.如权利要求53之ADC，其中该细胞毒素系PBD二聚体。
55.如权利要求54之ADC，其中该PBD二聚体系由下式表示：
Figure FDA0003690274470000141
其中波形线指示与该ADC之该连接体之连接点。
56.如权利要求53至55中任一项之ADC，其中该连接体包含以下中之一或多者：肽、寡糖、-(CH2)p-、-(CH2CH2O)q-、-(C＝O)(CH2)r-、-(C＝O)(CH2CH2O)t-、-(NHCH2CH2)u-、-PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB，其中p、q、r、t及u中之每一者系1-12之整数，其在每次出现时均经独立选择。
57.如权利要求53至55中任一项之ADC，其中该连接体具有结构
Figure FDA0003690274470000142
其中R1系CH3(Ala)或(CH2)3NH(CO)NH2(Cit)。
58.如权利要求53至57中任一项之ADC，其中该连接体在结合至该抗体及包括反应性取代基Z’(一起呈L-Z’形式)之前具有以下结构：
Figure FDA0003690274470000143
其中R1系CH3(Ala)或(CH2)3NH(CO)NH2(Cit)。
59.如权利要求58之ADC，其中R1系CH3。
60.如权利要求53至59中任一项之ADC，其中该细胞毒素-连接体结合物在结合至该抗体及包括该反应性取代基Z’(一起呈Cy-L-Z’形式)之前为具有以下结构之泰斯润(tesirine)：
Figure FDA0003690274470000151
61.如权利要求53至60中任一项之ADC，其具有以下结构：
Figure FDA0003690274470000152
其中Ab系该抗CD45抗体或其抗原结合部分，且S表示存在于该抗体或其抗原结合部分中或引入该抗体或其抗原结合部分中之硫原子。
62.如权利要求41之ADC，其中该细胞毒素系吲哚啉并苯并二氮呯(IGN)。
63.如权利要求62之ADC，其中该细胞毒素系IGN二聚体或IGN假二聚体。
64.如权利要求62或63之ADC，其中该细胞毒素系由下式表示之IGN假二聚体：
Figure FDA0003690274470000153
其中波形线指示与该ADC之该连接体之共价连接点。
65.如权利要求62至64中任一项之ADC，其中该连接体包含二肽、二硫化物、C1-C12烷基、C＝O或其组合。
66.如权利要求62至65中任一项之ADC，其中该连接体包含
Figure FDA0003690274470000161
67.如权利要求62至66中任一项之ADC，其中该细胞毒素-连接体结合物在结合至该抗体或其抗原结合部分及包括该反应性取代基Z’(一起呈Cy-L-Z’形式)之前具有以下结构：
Figure FDA0003690274470000162
68.一种医药组合物，其包含如权利要求35至67中任一项之ADC及医药学上可接受之载剂。
69.一种耗尽人类患者中之CD45+细胞群体之方法，该方法包括向该患者投与有效量之如权利要求35至67中任一项之ADC。
70.如权利要求69之方法，其中该等CD45+细胞系CD3+、CD19+、CD33+、CD34+或CD45+/B2M+。
71.如权利要求69之方法，其中该等CD45+细胞系造血干细胞(HSC)。
72.如权利要求69之方法，其中该等CD45+细胞系HSC、T细胞、B细胞及/或骨髓细胞。
73.如权利要求69至72中任一项之方法，其中该等CD45+细胞系自该患者之骨髓及/或自该患者之外周血耗尽。
74.如权利要求69至73中任一项之方法，其中该患者需要造血干细胞移植物。
75.如权利要求69至74中任一项之方法，其进一步包括向该患者投与包含造血干细胞之移植物。
76.一种耗尽需要造血干细胞(HSC)移植物之人类患者中之CD45+细胞群体之方法，该方法包括在该患者接受包含造血干细胞之移植物之前向该患者投与如权利要求35至67中任一项之ADC。
77.一种方法，其包括
(a)向人类患者投与足以耗尽该患者中之CD45+细胞群体之量之如权利要求35至67中任一项之ADC；及
(b)随后向该患者投与包含造血干细胞之移植物。
78.如权利要求74至77中任一项之方法，其中该移植物为同种异体的。
79.如权利要求74至77中任一项之方法，其中该移植物为自体的。
80.如权利要求74至79中任一项之方法，其中包含造血干细胞之移植物系在该ADC之浓度已自该患者之血液实质上清除后投与该患者。
81.如权利要求74至80中任一项之方法，其中该等造血干细胞或其子代能够在将该等造血干细胞移植至该患者中后定位至造血组织及/或重建造血。
82.如权利要求74至81中任一项之方法，其中在移植至该患者中后，该等造血干细胞引起选自由以下组成之群之细胞群体之恢复：巨核细胞、凝血细胞、血小板、红血球、肥大细胞、骨髓母细胞、嗜碱性球、嗜中性球、嗜酸性球、微胶质细胞、颗粒球、单核球、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀手细胞、T淋巴球及B淋巴球。
83.如权利要求69至82中任一项之方法，其中该患者患有血液疾病、代谢失调、癌症或自体免疫病症或重度合并性免疫缺失疾病(SCID)。
84.如权利要求83之方法，其中该患者患有癌症。
85.如权利要求84之方法，其中该癌症系血液癌。
86.如权利要求85之方法，其中该血液癌系急性骨髓白血病、急性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴性白血病或多发性骨髓瘤。
87.如权利要求83之方法，其中该患者患有自体免疫病症。
88.如权利要求87之方法，其中该自体免疫病症系多发性硬化、1型糖尿病或硬皮症。
89.如权利要求87之方法，其中该自体免疫病症系选自由以下组成之群：多发性硬化、人类全身性狼疮、类风湿性关节炎、发炎性肠病、治疗牛皮癣、1型糖尿病、急性弥漫性脑脊髓炎、爱迪生氏病(Addison's disease)、普秃、关节黏连性脊椎炎、抗磷脂抗体症候群、再生不良性贫血、自体免疫溶血性贫血、自体免疫肝炎、自体免疫内耳疾病、自体免疫淋巴球增生性症候群、自体免疫卵巢炎、巴洛病(Balo disease)、贝切特氏病(Behcet'sdisease)、大疱性类天疱疮、心肌病、恰加斯氏病(Chagas' disease)、慢性疲劳免疫功能障碍症候群、慢性发炎性去髓鞘型多发性神经病变、克隆氏病(Crohn's disease)、瘢痕性类天疱疮、乳糜泻-疱疹样皮肤炎、冷凝集素病、CREST症候群、迪戈斯病(Degos disease)、盘状狼疮、自主神经障碍、子宫内膜异位症、特发性混合型冷凝球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、古德巴斯德症候群(Goodpasture's syndrome)、格雷氏病(Grave's disease)、格林-巴利症候群(Guillain-Barre syndrome)、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、化脓性汗腺炎、特发性及/或急性血小板减少紫斑症、特发性肺纤维化、IgA神经病变、间质性膀胱炎、青少年关节炎、川崎病(Kawasaki's disease)、扁平苔藓、莱姆病(Lyme disease)、梅尼埃病(Meniere disease)、混合结缔组织疾病、重症肌无力、神经性肌强直、眼阵挛肌阵挛症候群、视神经炎、沃德氏甲状腺炎(Ord's thyroiditis)、寻常天疱疮、恶性贫血、多发性软骨炎、多发性肌炎及皮肌炎、原发性胆汁性肝硬化、结节性多动脉炎、多线体症候群、风湿性多肌痛、原发性无γ球蛋白血症、雷诺氏现象(Raynaud phenomenon)、莱特氏症候群(Reiter's syndrome)、风湿热、类肉瘤病、硬皮症、薛格连氏症候群(
Figure FDA0003690274470000191
syndrome)、僵体症候群、高安氏动脉炎(Takayasu's arteritis)、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、眼色素层炎、血管炎、白斑病、阴唇痛症及华格纳氏肉芽肿(Wegener's granulomatosis)。
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吕俊廷;杨志刚;管有洪;林忠顺;萧杏贤;刘德;石曼;王文珊;: "急性髓系白血病治疗前后白血病干细胞的变化", 中国实验血液学杂志, no. 03, 20 June 2018 (2018-06-20), pages 34 - 40 *

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