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CN114656464B - 可用于治疗癌症的6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[4,3-f]异喹啉衍生物 - Google Patents

可用于治疗癌症的6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[4,3-f]异喹啉衍生物 Download PDF

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CN114656464B CN202210381693.8A CN202210381693A CN114656464B CN 114656464 B CN114656464 B CN 114656464B CN 202210381693 A CN202210381693 A CN 202210381693A CN 114656464 B CN114656464 B CN 114656464B
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tetrahydro
methyl
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杨斌
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S.J.休斯
J.W.M.尼辛克
D.H.奥多诺文
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Abstract

本发明涉及可用于治疗癌症的6，7，8，9‑四氢‑3H‑吡唑并[4，3‑f]异喹啉衍生物。本说明书涉及具有化学式(I)的化合物：并且涉及其药学上可接受的盐，涉及用于制备它们的方法和中间体，涉及包含它们的药物组合物并且涉及它们在治疗细胞增殖性障碍中的用途。

Description

可用于治疗癌症的6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉 衍生物
本申请是申请日为2017年10月13日、申请号为201780064567.7、发明名称为“可用于治疗癌症的6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉衍生物”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本说明书涉及选择性下调雌激素受体并且具有抗癌活性的某些吲唑化合物及其药学上可接受的盐。本说明书还涉及所述吲唑化合物及其药学上可接受的盐在治疗人体或动物体的方法、例如在预防或治疗癌症中的用途。本说明书还涉及在制备所述吲唑化合物中所涉及的方法和中间体化合物，并且涉及包含所述吲唑化合物的药物组合物。
背景技术
雌激素受体α(ERα、ESR1、NR3A)和雌激素受体β(ERβ、ESR2、NR3b)是类固醇激素受体，其是大的核受体家族的成员。在结构上类似于所有核受体，ERα是由六个功能域(命名为A-F)构成的(Dahlman-Wright等人，Pharmacol.Rev.[药理学评论]，2006，58：773-781)并且被分类为配体依赖性转录因子，因为在其与特定配体(雌性性别类固醇激素17b雌二醇(E2))缔合之后，该复合物结合至命名为雌激素受体元件(ERE)的基因组序列，并且与共调控因子相互作用来调节靶基因的转录。ERα基因位于6q25.1上并且编码595AA蛋白，并且由于替代性剪接和翻译起始位点，可以产生多种同种型。除了DNA结合结构域(结构域C)和配体结合结构域(结构域E)，该受体还含有N末端(A/B)结构域、连接C和E结构域的铰链(D)结构域以及C末端延伸(F结构域)。虽然ERα和ERβ的C和E结构域是相当保守的(分别为96％和55％氨基酸同一性)，但A/B、D和F结构域的保守性差(低于30％氨基酸同一性)。这两种受体都参与女性生殖道的调节和发育，并且此外在中枢神经系统、心血管系统和骨代谢中起作用。ER的基因组作用发生在细胞的核中，此时该受体直接地(直接激活或经典途径)或间接地(间接激活或非经典途径)结合ERE。在不存在配体的情况下，ER与热休克蛋白Hsp90和Hsp70缔合，并且该缔合的分子伴侣机器稳定配体结合结构域(LBD)，使得其可接近配体。配体化的ER从热休克蛋白中解离，导致受体构象变化，从而允许二聚化、DNA结合、与共激活因子或共阻抑因子相互作用并调节靶基因表达。在非经典途径中，AP-1和Sp-1是被受体的两种同种型所使用的替代性调控DNA序列以调节基因表达。在这个实例中，ER不直接与DNA相互作用，但通过与其他DNA结合的转录因子例如c-Jun或c-Fos相缔合(Kushner等人，Pure Applied Chemistry[纯粹与应用化学]2003，75：1757-1769)。ER影响基因转录的精确机制了解很少，但似乎由DNA结合的受体募集的多种核因子介导。共调控因子的募集主要是由两个蛋白表面AF2和AF1介导的，AF2和AF1分别位于E-结构域和A/B结构域中。AF1是由生长因子调控的并且其活性取决于细胞和启动子环境，然而AF2完全依赖于用于活性的配体结合。虽然这两个结构域可以独立地发挥作用，但最大ER转录活性是通过经由这两个结构域的协同相互作用实现的(Tzukerman等人，Mol.Endocrinology[分子内分泌学]，1994，8：21-30)。虽然ER被认为是转录因子，但它们还可以通过非基因组机制发挥作用，如通过在E2给予之后在对于基因组作用被认为太快的时标中在组织中的快速ER作用所证明的。负责雌激素快速作用的受体是相同的核ER还是不同的G蛋白偶联类固醇受体是仍不清楚的(Warner等人，Steroids[类固醇]200671：91-95)，但已经鉴定出越来越多的E2诱导的途径，例如MAPK/ERK途径和内皮氧化氮合酶的激活和PI3K/Akt途径。除了配体依赖性途径，ERα还已经显示通过AF-1具有配体独立性活性，AF-1通过生长因子信号传导例如胰岛素样生长因子1(IGF-1)和表皮生长因子(EGF)已经与MAPK的刺激相关联。AF-1的活性依赖于Ser118的磷酸化并且ER与生长因子信号传导之间的交互作用的实例是通过MAPK响应于生长因子如IGF-1和EGF的Ser118的磷酸化(Kato等人，.Science[科学]，1995，270：1491-1494)。
大量的在结构上不同的化合物已经显示结合至ER。一些化合物如内源性配体E2充当受体激动剂，然而其他化合物竞争性地抑制E2结合并且充当受体拮抗剂。这些化合物可以被分成2种类别，取决于它们的功能效应。选择性雌激素受体调节剂(SERM)如它莫西芬具有充当受体激动剂和拮抗剂两者的能力，取决于细胞和启动子环境连同靶向的ER同种型。例如它莫西芬在乳腺中充当拮抗剂，但在骨、心血管系统和子宫中充当部分激动剂。所有SERM似乎充当AF2拮抗剂并且通过AF1派生其部分激动剂特征。第二组(以氟维司群作为实例)被分类为完全拮抗剂，并且经由AF1和AF2结构域的完全抑制通过在针对化合物结合的配体结合结构域(LBD)中诱导独特构象变化(其导致螺旋12与LBD的其余部分之间的相互作用完全消除，从而阻断辅因子募集)能够阻断雌激素活性(Wakeling等人，Cancer Res.[癌症研究]，1991，51：3867-3873；Pike等人，Structure[结构]，2001，9：145-153)。
ERα的细胞内水平在E2的存在下通过泛素/蛋白体(Ub/26S)途径来下调。配体化的ERα的聚泛素化通过至少三种酶来催化；经泛素激活酶E1激活的泛素通过E3泛素连接酶经由异肽键与具有赖氨酸残基的E2缀合，并且然后聚泛素化的ERα被导向蛋白体用于降解。虽然ER依赖性转录调节和ER的蛋白体介导的降解是相关的(Lonard等人，Mol.Cell[分子细胞]，2000 5：939-948)，但转录本身不是ERα降解所必需的，并且转录起始复合物的组装足以靶向ERα用于核蛋白酶体的降解。此E2诱导的降解过程被认为是其响应于对细胞增殖、分化和代谢的需要而快速激活转录的能力所必需的(Stenoien等人，Mol.Cell Biol.[分子细胞生物学]，2001，21：4404-4412)。氟维司群也被分类为选择性雌激素受体下调调节剂(SERD)，它是也可以经由26S蛋白酶体途径诱导ERα的快速下调的拮抗剂的子集。相反，SERM如它莫西芬可以增加ERα水平，虽然对转录的作用类似于针对SERD所见到的。
大约70％的乳腺癌表达ER和/或孕酮受体，意味着在生长方面这些肿瘤细胞依赖激素。其他癌症如卵巢癌和子宫内膜癌也被认为在生长方面依赖于ERα信号传导。用于此类患者的疗法可以通过以下方式来抑制ER信号传导：拮抗配体结合至ER，例如它莫西芬，其被用来治疗在绝经前和绝经后两种环境中的早期和晚期ER阳性乳腺癌；拮抗和下调ERα，例如氟维司群，其被用来治疗女性乳腺癌，尽管进行了用它莫西芬或芳香酶抑制剂的疗法，但是其仍进展；或阻断雌激素合成，例如芳香酶抑制剂，其被用来治疗早期和晚期ER阳性乳腺癌。尽管这些疗法对乳腺癌治疗具有巨大的积极影响，但肿瘤表达ER的相当大数目的患者展示对现有的ER疗法的从头(de novo)抗性或对这些疗法随时间发展抗性。已经描述了几种不同机制来解释对第一次它莫西芬疗法的抗性，其主要涉及它莫西芬从充当拮抗剂向充当激动剂的转变，这是通过某些辅因子更低亲和力地结合至通过这些辅因子的过度表达被偏置(off-set)的它莫西芬-ERα复合物，或通过第二位点的形成，这些第二位点促使它莫西芬-ERα复合物与通常不结合至该复合物的辅因子的相互作用。由于表达驱动它莫西芬-ERα活性的特定辅因子的细胞的过度生长，抗性可能因此出现。还有可能其他生长因子信号传导途径直接激活该ER受体或共激活因子，以驱动独立于配体信号传导的细胞增殖。
最近，在ESR1中的突变已经在转移性ER阳性患者衍生的肿瘤样品和患者衍生的异种移植模型(PDX)中在从17％-25％变化的频率下被鉴定为可能的抗性机制。这些突变在导致突变功能蛋白的配体结合结构域中是主要地，但非排他性地；氨基酸变化的实例包括Ser463Pro、Val543Glu、Leu536Arg、Tyr537Ser、Tyr537Asn和Asp538Gly，其中在氨基酸537和538处的变化构成大多数当前描述的变化。这些突变先前在癌症基因组图谱数据库(Cancer Genome Atlas database)中表征的原发性乳腺样品的基因组中未检测到。在对于ER表达阳性的390个原发性乳腺癌样品中，在ESR1中没有检测到单突变(Cancer GenomeAtlas Network[癌症基因组图谱网络]，2012Nature[自然]490：61-70)。这些配体结合结构域突变被认为已经发展为对芳香酶抑制剂内分泌疗法的抗性响应，因为在不存在雌二醇的情况下，这些突变型受体显示出基本的转录活性。在氨基酸537和538处突变的ER的晶体结构显示两种突变体都有利于ER的激动剂构象，这是通过改变螺旋12的位置以允许共激活因子募集并且由此模拟激动剂激活的野生型ER。公开数据已经显示内分泌疗法如它莫西芬和氟维司群仍然可以结合至ER突变体并且在某种程度上抑制转录激活，并且氟维司群能够降解Try537Ser，但可能需要更高剂量用于完全受体抑制(Toy等人，Nat.Genetics[自然遗传学]2013，45：1439-1445；Robinson等人，Nat.Genetics[自然遗传学]2013，45：144601451；Li，S.等人Cell Rep.[细胞报告]4，1116-1130(2013))。因此可行的是某些具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐(如下文所述)将能够下调和拮抗突变型ER，尽管在此时期未知ESR1突变是否与改变的临床结果相关联。
不管哪种抗性机制或机制组合发生，许多仍然是依赖于ER依赖性活性，并且通过SERD机制去除受体提供了从细胞中去除ERα受体的最好方式。氟维司群是目前唯一批准用于临床用途的SERD，又尽管其机制特性，该药物的药理学特性具有有限的疗效，这是由于当前每月500mg剂量的限制，其导致与在体外乳腺细胞系实验中所见的受体的完全下调相比在患者样品中的受体小于50％的周转(turnover)(Wardell等人，Biochem.Pharm.[生化药学]，2011，82：122-130)。因此，需要新ER靶向剂，其具有所需药物特性和SERD机制以在早期、转移性和获得性抗性环境中提供增强的益处。
发明内容
已经发现本说明书的化合物具有强力抗肿瘤活性，可用于抑制由恶性疾病引起的不受控制的细胞增殖。本说明书的化合物通过(作为最低限度)充当SERD来提供抗肿瘤作用。例如，本说明书的化合物可以通过下调在许多不同乳腺癌细胞系(例如针对MCF-7、CAMA-1、BT474和/或MDA-MB-134乳腺癌细胞系)中的雌激素受体的能力展现抗肿瘤活性。此类化合物作为治疗剂可以被预期是更合适的，特别是用于治疗癌症。
本说明书的化合物与其他已知的SERD相比，还可以展现有利的物理特性(例如，较低的亲脂性、较高的水溶解度、较高的渗透性、较低的血浆蛋白结合、和/或较高的化学稳定性)、和/或有利的毒性特征(例如在hERG处降低的活性)、和/或有利的代谢或药代动力学特征。因此，此类化合物可以尤其适合作为治疗剂，特别是用于治疗癌症。
根据本说明书的一个方面，提供了一种具有化学式(I)的化合物：
其中：
A是CR2或N；
G是CR3或N；
D是CR4或N；
E是CR5或N；
Q是O、NH或NMe；
R1是CH2F、CHF2或CF3；
R2是H、F、Cl、Me、CN、OMe或OEt；
R3是H或F；
R4是H、F、CN或OMe；
R5是H或F；
R6是H、Me、CH2F、CHF2或CF3；
R7是H或Me；
R8是C1-3烷基、CH2F、CHF2、CF3或C3-4环烷基；
R9是Me、F或CH2F；
R10是Me、F、CH2F、CHF2、CF3、CH2OMe或CH2OH；
R11是H或F；或者
R10和R11连同它们附接至其上的碳原子一起形成环丙基环或氧杂环丁烷环；
R12独立地选自F或Me；
R13是H或F；并且
a是0、1或2；
或其药学上可接受的盐。
本说明书还描述了药物组合物，其包含具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，与药学上可接受的赋形剂相联合。
本说明书还描述了一种具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于作为药剂。
本说明书还描述了一种具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗癌症中使用。
本说明书还描述了具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与另一种抗肿瘤剂的组合，用于在治疗癌症中使用。
具体实施方式
通过阅读本说明书，本说明书的另外的方面对于本领域技术人员而言将是明显的。
C1-3烷基基团可以是支链或非支链的。合适的C1-3烷基基团的实例是甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基(n-Pr)或异丙基(i-Pr)。
C3-4环烷基基团是未取代的单环不饱和碳环。合适的C3-4环烷基基团的实例是环丙基和环丁基。
在一个实施例中，提供了如上文所定义的具有化学式(I)的化合物。
在一个实施例中，提供了具有化学式(I)的化合物的药学上可接受的盐。
在一个实施例中，A是CR2。
在一个实施例中，G是CR3。
在一个实施例中，A是CR2，并且G是CR3。
在一个实施例中，A是CR2，并且G是N。
在一个实施例中，A是N，并且G是CR3。
在一个实施例中，R2是H、F、Cl、Me、CN或OMe。
在一个实施例中，R2是H、F或OMe。
在一个实施例中，R2是H或F。
在一个实施例中，R2是H。
在一个实施例中，R2是F。
在一个实施例中，A是CR2，并且R2是H、F或OMe。
在一个实施例中，G是CR3，并且R3是H、F或OMe。
在一个实施例中，A是CH，并且G是CH。
在一个实施例中，A是C-F，并且G是C-F。
在一个实施例中，A是C-F，并且G是CH。
在一个实施例中，A是C-OMe，并且G是CH。
在一个实施例中，A是C-OMe，并且G是C-F。
在一个实施例中，A或G中的一个是CH，并且A或G中的另一个是N。
在一个实施例中，D是CR4。
在一个实施例中，E是CR5。
在一个实施例中，D和E两者都是CH。
在一个实施例中，D和E两者都是N。
在一个实施例中，D或E中的一个是CH，并且D或E中的另一个是N。
在一个实施例中，D或E中的一个是C-F，并且D或E中的另一个是CH。
在一个实施例中，D或E中的一个是C-OMe，并且D或E中的另一个是CH。
在一个实施例中，Q是O或NH。
在一个实施例中，Q是O。
在一个实施例中，Q是NH。
在一个实施例中，Q是NMe。
在一个实施例中，R1是CH2F或CHF2。
在一个实施例中，R1是CH2F。
在一个实施例中，R1是CHF2。
在一个实施例中，R1是CF3。
在一个实施例中，R6是H或Me。
在一个实施例中，R6是H。
在一个实施例中，R6是Me。
在一个实施例中，R7是H。
在一个实施例中，R7是Me。
在一个实施例中，R8是C1-3烷基、CHF2或环丙基。
在一个实施例中，R8是C1-3烷基或CHF2。
在一个实施例中，R8是C1-3烷基。
在一个实施例中，R8是甲基。
在一个实施例中，R8是CHF2。
在一个实施例中，R9是Me或F。
在一个实施例中，R9是Me。
在一个实施例中，R9是F。
在一个实施例中，R10是Me、F、CH2F、CH2OMe或CH2OH。
在一个实施例中，R10是Me、F、CH2OMe或CH2OH。
在一个实施例中，R10是F、CH2OMe或CH2OH。
在一个实施例中，R10是CH2OMe或CH2OH。
在一个实施例中，R10是F。
在一个实施例中，R11是F。
在一个实施例中，R11是H。
在一个实施例中，R10和R11连同它们附接至其上的碳原子一起形成环丙基环或氧杂环丁烷环。
在一个实施例中，R10和R11连同它们附接至其上的碳原子一起形成环丙基环。
在一个实施例中，R10和R11连同它们附接至其上的碳原子一起形成氧杂环丁烷环。
在一个实施例中，R10是CH2OMe或CH2OH，并且R11是F。
在一个实施例中，R10是CH2OMe或CH2OH，并且R9是Me。
在一个实施例中，R10是F，并且R9是F。
在一个实施例中，R9是Me或F，并且R2是H、F、Cl、Me、CN或OMe。
在一个实施例中，R9是Me，并且R11是F。
在一个实施例中，R9是F，并且R11是Me。
在一个实施例中，R9是F，并且R11是F。
在一个实施例中，R9是F，并且R10和R11连同它们附接至其上的碳原子一起形成环丙基环或氧杂环丁烷环。
在一个实施例中，R9是F，并且R10和R11连同它们附接至其上的碳原子一起形成环丙基环。
在一个实施例中，R9是F，并且R10和R11连同它们附接至其上的碳原子一起形成氧杂环丁烷环。
在一个实施例中，在具有化学式(I)的化合物中的基团-CH2-C(R9)(R10)(R11)选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，在具有化学式(I)的化合物中的基团-CH2-C(R9)(R10)(R11)选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，在具有化学式(I)的化合物中的基团-CH2-C(R9)(R10)(R11)选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，在具有化学式(I)的化合物中的基团-CH2-C(R9)(R10)(R11)选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，在具有化学式(I)的化合物中的基团-CH2-C(R9)(R10)(R11)选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，在具有化学式(I)的化合物中的基团-CH2-C(R9)(R10)(R11)选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，R12是Me。
在一个实施例中，R12是F。
在一个实施例中，R13是H。
在一个实施例中，R13是F。
在一个实施例中，a是0或1。
在一个实施例中，a是0。
在一个实施例中，a是1。
在一个实施例中，a是2。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物：
其中：
Q是O、NH或NMe；
R1是CH2F、CHF2或CF3；
R6是H或Me；
R7是H或Me；
R8是Me、CHF2或环丙基；
R9是Me或F；
R10是Me、F、CH2F、CH2OMe或CH2OH；
R11是H或F；或者
R10和R11连同它们附接至其上的碳原子一起形成环丙基环或氧杂环丁烷环；
R12独立地选自H或Me；
R13是H或F；
a是0、1或2；并且
环Y选自下组，该组由以下组成：
或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中环Y选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中环Y选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中环Y选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中环Y选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中环Y选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Q是NH。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Q是O。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是CH2F。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是CHF2。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R6是H。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7是H。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R8是Me。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R10是F、CH2OMe或CH2OH。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R9是F，并且R10和R11连同它们附接至其上的碳原子一起形成环丙基环或氧杂环丁烷环。在另一个实施例中，R10和R11连同它们附接至其上的碳原子一起形成环丙基环。在另一个实施例中，R10和R11连同它们附接至其上的碳原子一起形成氧杂环丁烷环。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R8是Me。
在一个实施例中，在具有化学式(IA)的化合物中的基团-CH2-C(R9)(R10)(R11)选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，在具有化学式(IA)的化合物中的基团-CH2-C(R9)(R10)(R11)选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，在具有化学式(IA)的化合物中的基团-CH2-C(R9)(R10)(R11)选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，在具有化学式(IA)的化合物中的基团-CH2-C(R9)(R10)(R11)选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R13是H。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐，其中a是0。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IB)的化合物：
其中：
Q是O、NH或NMe；
R1是CH2F、CHF2或CF3；
R6是H或Me；
R7是H或Me；
R8是Me、CHF2或环丙基；
R14选自下组，该组由以下组成：
并且环Y选自下组，该组由以下组成：
或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IB)的化合物或其药学上可接受的盐，其中环Y选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，提供了具有化学式(IB)的化合物或其药学上可接受的盐，其中环Y选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，提供了具有化学式(IB)的化合物或其药学上可接受的盐，其中环Y选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，提供了具有化学式(IB)的化合物或其药学上可接受的盐，其中环Y选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，提供了具有化学式(IB)的化合物或其药学上可接受的盐，其中环Y选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，提供了具有化学式(IB)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Q是NH。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IB)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Q是O。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IB)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是CH2F。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IB)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是CHF2。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IB)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R6是H。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IB)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7是H。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IB)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R8是Me。
在一个实施例中，在具有化学式(IB)的化合物中的基团R14选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，在具有化学式(IB)的化合物中的基团R14选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，在具有化学式(IB)的化合物中的基团R14选自下组，该组由以下组成：
在本说明书的另一个方面，提供了具有化学式(IC)的化合物：
其中：
A是CR2或N；
G是CR3或N；
D是CR4或N；
E是CR5或N；
Q是O、NH或NMe；
R1是CH2F、CHF2或CF3；
R2是H、F、Cl、Me、CN、OMe或OEt；
R3是H或F；
R4是H、F、CN或OMe；
R5是H或F；
R6是H、Me、CH2F、CHF2或CF3；
R7是H或Me；
R8是C1-3烷基、CH2F、CHF2、CF3或C3-4环烷基；
R9是Me、F或CH2F；
R10是Me、F、CH2F、CHF2、CF3、CH2OMe或CH2OH；
R11是H或F；或者
R10和R11连同它们附接至其上的碳原子一起形成环丙基环或氧杂环丁烷环；
R12独立地选自F或Me；
R13是H或F；并且
a是0、1或2；
或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了具有化学式(IC)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是H、F、Cl、Me、CN或OMe，并且R9是Me或F。
在另一个实施例中，提供了具有化学式(IC)的化合物或其药学上可接受的盐，其中在吡唑并[4，3-f]异喹啉环的位置6处的立体化学是S。
在另一个实施例中，提供了具有化学式(IC)的化合物或其药学上可接受的盐，其中在吡唑并[4，3-f]异喹啉环的位置6处的立体化学是R。
在另一个实施例中，提供了具有化学式(IC)的化合物或其药学上可接受的盐，其中在吡唑并[4，3-f]异喹啉环的位置8处的立体化学是S。
在另一个实施例中，提供了具有化学式(IC)的化合物或其药学上可接受的盐，其中在吡唑并[4，3-f]异喹啉环的位置8处的立体化学是R。
在一个实施例中，提供了具有化学式(ID)的化合物：
其中：
Q是O或NH；
R1是CH2F或CHF2；
R14选自下组，该组由以下组成：
并且环Y选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，提供了具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Q是NH。
在一个实施例中，提供了具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Q是O。
在一个实施例中，提供了具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是CH2F。
在一个实施例中，提供了具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Q是O，并且R1是CH2F。
在一个实施例中，提供了具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Q是NH，并且R1是CH2F。
在一个实施例中，提供了具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R14选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，提供了具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，其中环Y选自下组，该组由以下组成：
在一个实施例中，提供了具有化学式(I)的化合物，其中该化合物选自下组，该组由以下组成：
N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
6-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
N-(4-((6S，8R)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
3-((6S，8R)-6-(2，6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)苯基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)-2，2-二氟丙-1-醇；
N-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
(6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-6-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)-2-甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉；
N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；以及
5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-4-甲氧基吡啶-2-胺；
或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了具有化学式(I)的化合物，其中该化合物选自下组，该组由以下组成：
N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
6-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
N-(4-((6S，8R)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
3-((6S，8R)-6-(2，6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)苯基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)-2，2-二氟丙-1-醇；
N-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
(6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-6-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)-2-甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉；
N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-4-甲氧基吡啶-2-胺；
N-(4-((6S，8R)-7-((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
(6S，8R)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-6-(4-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉；
N-(4-((6S，8R)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
2，2-二氟-3-((6S，8R)-6-(5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)吡啶-2-基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇；
N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺；
5-氟-6-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
N-(3-乙氧基-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
(6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-6-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)-2-甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉；
3-((6S，8R)-6-(2，6-二氟-4-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基氨基)苯基)-8-甲基-8，9-二氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7(6H)-基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇；
6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；以及
(6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-6-(5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)吡啶-2-基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉；
或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了具有化学式(I)的化合物，其中该化合物选自下组，该组由以下组成：
1-(3-氟丙基)-N-(4-((6R，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺；
1-(3-氟丙基)-N-(3-甲氧基-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺；
2-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺；
5-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺；
2，2-二氟-3-((6S，8R)-6-(3-氟-5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)吡啶-2-基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇；
6-((6S，8R)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，9，8-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
5-氟-6-((6S，8R)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-N-甲基-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺；
N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-6-氘-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺；
N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-1-氘-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺；
N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-5-甲氧基-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺；
5-((6S，8R)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡嗪-2-胺；
2-氟-6-((6S，8R)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
6-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-5-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-2-胺；
N-(2-氟-4-((6R，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-5-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡嗪-2-胺；
6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-N-甲基吡啶-3-胺；
6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-6，8-二甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-6，8-二甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-5-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-2-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
N-(4-((6R，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
5-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡嗪-2-胺；
6-((6S，8S)-7-(2，2-二氟乙基)-8-(二氟甲基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
N-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)-N-甲基氮杂环丁烷-3-胺；
N-(2-氟-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-5-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-2-胺；
5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡嗪-2-胺；
N-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3，3，3-三氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
6-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-N-甲基吡啶-3-胺；
2，2-二氟-3-((6S，8R)-6-(5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)吡啶-2-基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇；
2，2-二氟-3-((6S，8R)-6-(3-氟-5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)吡啶-2-基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇；
2，2-二氟-3-((6S，8R)-6-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-甲氧基苯基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇；
2，2-二氟-3-((6S，8R)-1-氟-6-(5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)吡啶-2-基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇；
2，2-二氟-3-((6S，8R)-1-氟-6-(6-氟-5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)吡啶-2-基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇；
6-((6S，8R)-7-(2-氟-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
N-(4-((6S，8R)-7-(2-氟-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺；
6-((6S，8R)-7-(2-氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
6-((6S，8R)-7-(2-氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
1-(3-氟丙基)-N-(4-((6S，8R)-7-(2-氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-胺；
1-(3-氟丙基)-N-(4-((6S，8R)-7-(2-氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-胺；
N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-7-异丁基-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺；
6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
5-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，3-三氟丙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺；
(S)-6-(8，8-二甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；以及
(S)-6-(7-(2，2-二氟乙基)-8，8-二甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺
或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了具有化学式(I)的化合物，其为N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-(8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了具有化学式(I)的化合物，其选自下组，该组由以下组成：
N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺；和
N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6R，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺；
或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了具有化学式(I)的化合物，其为N-(1-(3-氟丙基)杂氮环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了具有化学式(I)的化合物，其为N-(1-(3-氟丙基)杂氮环丁烷-3-基)-6-((6R，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物选自本说明书中的任何实例。另一个特征是本说明书中所描述的任何实施例，其条件是任何具体的实例单独地被否认。另一个特征是本说明书中所描述的任何实施例，其条件是选自本说明书的化合物的实例的以上列表的任何一种或多种化合物单独地被否认。
为避免生疑，当a为1时，R12取代基可以在与其相关联的相应乙基链的任一个碳上被取代，并且当a为2时，R12取代基可以在所述乙基链的单个碳或两个碳上被取代。因此，当a为1或2时，可能有以下取代模式，每个取代模式代表另一个实施例：
因此，在另一个实施例中，a为1或2，并且R12与如下文(a)中所示的具有化学式(I)的化合物的其余部分附接：
在另一个实施例中，a为1或2，R12为甲基，并且R12与如下文(b)中所示的具有化学式(I)的化合物的其余部分附接：
为进一步避免生疑，在本说明书的化学式中使用表示不同基团之间的附着点。
具有化学式(I)的化合物具有两个或更多个手性中心，并且认识到具有化学式(I)的化合物可以在或不在另外以任何相关比例的具有化学式(I)的化合物的一种或多种其他可能的对映异构体和/或非对映异构体的条件下制备、分离和/或提供。富含对映体的/对映体纯的和/或富含非对映体的/非对映体纯的化合物的制备可以通过本领域熟知的有机化学标准技术进行，例如通过从富含对映体的或对映体纯的起始材料合成，合成过程中使用适当的富含对映体的或对映体纯的催化剂，和/或通过拆分外消旋的或部分富含的立体异构体混合物(例如通过手性色谱法)进行。
用于在药学背景下使用，可能优选的是在不存在大量其他立体异构体形式的情况下提供具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
因此，在一个实施例中，提供了组合物，其包含具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，任选地和具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的一种或多种其他立体异构体形式一起，其中具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐以非对映异构体过量(％de)≥90％存在于该组合物中。
在另一个实施例中，在以上提到的组合物中％de≥95％。
在另一个实施例中，在以上提到的组合物中％de≥98％。
在另一个实施例中，在以上提到的组合物中％de≥99％。
在另一个实施例中，提供了组合物，其包含具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，任选地和具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的一种或多种其他立体异构体形式一起，其中具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐以对映异构体过量(ee％)≥90％存在于该组合物中。
在另一个实施例中，在以上提到的组合物中％ee≥95％。
在另一个实施例中，在以上提到的组合物中％ee≥98％。
在另一个实施例中，在以上提到的组合物中％ee≥99％。
在另一个实施例中，提供了组合物，其包含具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，任选地和具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的一种或多种其他立体异构体形式一起，其中具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐以对映异构体过量(％ee)≥90％和非对映异构体过量(％de)≥90％存在于该组合物中。
在以上提到的组合物的另外的实施例中，％ee和％de可以采用如以下列出的值的任何组合：
·％ee≤5％，并且％de≥80％。
·％ee≤5％，并且％de≥90％。
·％ee≤5％，并且％de≥95％。
·％ee≤5％，并且％de≥98％。
·％ee≥95％，并且％de≥95％。
·％ee≥98％，并且％de≥98％。
·％ee≥99％，并且％de≥99％。
在另一个实施例中，提供了药物组合物，其包含具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，与药学上可接受的赋形剂相联合。
在一个实施例中，提供了药物组合物，其包含具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，与药学上可接受的赋形剂相联合，任选地进一步包含具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的一种或多种其他立体异构体形式，其中具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐以对映异构体过量(％ee)≥90％存在于该组合物中。
在另一个实施例中，在以上提到的组合物中％ee≥95％。
在另一个实施例中，在以上提到的组合物中％ee≥98％。
在另一个实施例中，在以上提到的组合物中％ee≥99％。
在一个实施例中，提供了药物组合物，其包含具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，与药学上可接受的赋形剂相联合，任选地进一步包含具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的一种或多种其他立体异构体形式，其中具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐以非对映异构体过量(％de)≥90％存在于该组合物中。
在另一个实施例中，在以上提到的组合物中％de≥95％。
在另一个实施例中，在以上提到的组合物中％de≥98％。
在另一个实施例中，在以上提到的组合物中％de≥99％。
在一个实施例中，提供了药物组合物，其包含具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，与药学上可接受的赋形剂相联合，任选地进一步包含具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的一种或多种其他立体异构体形式，其中具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐以对映异构体过量(％ee)≥90％和非对映异构体过量(％de)≥90％存在于该组合物中。
在以上提到的药物组合物的另外的实施例中，％ee和％de可以采用如以下列出的值的任何组合：
·％ee≥95％，并且％de≥95％。
·％ee≥98％，并且％de≥98％。
·％ee≥99％，并且％de≥99％。
具有化学式(I)的化合物及其药学上可接受的盐可以按无定形形式、结晶形式、或半结晶形式制备、使用或提供，并且任何给定的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐能够被形成多于一种结晶/多晶型形式，包括水合(例如半水合物、一水合物、二水合物、三水合物或其他化学计量水合物)和/或溶剂化形式。应当理解的是，本说明书涵盖了任何以及所有具有化学式(I)的化合物及其药学上可接受的盐的此类固体形式。
在另外的实施例中，提供了具有化学式(I)的化合物，其通过在以下“实例”部分所描述的方案可获得。
本说明书旨在包括存在于本发明化合物中的原子的所有同位素。同位素应理解为包括具有相同原子数但具有不同质量数的那些原子。例如，氢的同位素包括氚和氘。碳的同位素包括13C和14C。氮的同位素包括15N。在一个特定实施例中，提供了具有化学式(I)的化合物，其中R6是氘。
具有化学式(I)的化合物的合适的药学上可接受的盐例如是酸加成盐。具有化学式(I)的化合物的合适的药学上可接受的盐可以是例如具有化学式(I)的化合物的酸加成盐，例如与以下无机或有机酸的酸加成盐，这些酸为如乙酸、己二酸、苯磺酸、苯甲酸、肉桂酸、柠檬酸、D，L-乳酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富马酸、盐酸、L-酒石酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、甲烷磺酸、1，5-萘二磺酸(napadisylic acid)、磷酸、糖精、琥珀酸、硫酸、对甲苯磺酸、甲苯磺酸或三氟乙酸。
具有化学式(I)的化合物的另一种合适的药学上可接受的盐是例如在给予人体或动物体具有化学式(I)的化合物之后所述人体或动物体内所形成的盐。
具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可以作为共晶固体形式制备。应当理解的是，具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的药学上可接受的共晶体形成本说明书的一个方面。
本文所描述的特定固体形式提供了基本上与附图中示出的X射线粉末衍射图相同的X射线粉末衍射图，并且具有如本文中包括的表中所示出的不同的2-θ值。将理解的是，X射线粉末衍射图的2-θ值从一台机器到另一台机器或从一个样品到另一个样品可以轻微变化，因此这些引证的值并不被解释为是绝对的。
已知可以获得取决于测量条件(如所用设备或机器)而具有一个或多个测量误差的X射线粉末衍射图。具体来说，总体上已知X射线粉末衍射图的强度可以波动，取决于测量条件。因此，应该理解的是，本说明书的固体形式不限于提供与附图中示出的X射线粉末衍射图相同的X射线粉末衍射图的晶体，并且提供基本上与附图中示出的X射线粉末衍射图相同的X射线粉末衍射图的任何晶体落入本说明书的范围内。X射线粉末衍射领域的技术人员能够判断X射线粉末衍射图的基本一致性。
X射线粉末衍射领域的技术人员将意识到峰值的相对强度可以被例如大小超过30μm并且非统一长宽比的颗粒影响，这可能影响样品的分析。技术人员还将认识到，反射位置可以受样品在衍射计中所处的确切高度和衍射计的零点校正影响。样品的表面平面性也可能具有细微影响。因此，所呈现的衍射图数据不应视为绝对值。(Jenkins，R和Snyder，R.L.“Introduction to X-Ray Powder Diffractometry[X射线粉末衍射测定法的介绍]”约翰·威利父子公司(John Wiley&Sons)1996；Bunn，C.W.(1948)，ChemicalCrystallography[化学晶体学]，克拉伦登出版社(Clarendon Press)，伦敦；Klug，H.P.和Alexander，L.E.(1974)，X-Ray Diffraction Procedures[X射线衍射程序])。
通常，在X射线粉末衍射图中的衍射角的测量误差为大约±0.2°2-θ，并且当考虑附图中的X射线粉末衍射图时，并且当读取本文中包括的表中所包含的数据时，这样的测量误差的程度应该考虑在内。此外，应该理解强度可能波动，取决于实验条件和样品制备(优选取向)。
在本说明书中，最初发现化合物N-(1-(3-氟丙基)杂氮环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺(下文称化合物X)的形式是无定形固体。随后使用实验部分中描述的条件产生该化合物的有用的结晶多晶型形式。
因此，在本说明书的另一个方面，提供了化合物X的多晶型形式A。此多晶型形式的特征可以在于它提供使用CuKa辐射测量的以下2θ值中的至少一个：15.5°、18.6°和24.6°。
化合物X的多晶型形式A的特征在于提供基本上如图1中示出的X射线粉末衍射图。
此多晶型形式的十个X射线粉末衍射峰[角度2-θ(2θ)，强度(％)]是：21.1°(100％)、20.8°(54.3％)、14.6°(41.9％)、18.6°(41.6％)、12.3°(38.9％)、15.5°(34.1％)、24.6°(31.3％)、15.8°(30.6％)、13.4°(23.2％)和19.0°(21.7％)。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式A，其X射线粉末衍射图在约2-θ＝15.5°处具有至少一个特异峰。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式A，其X射线粉末衍射图在约2-θ＝18.6°处具有至少一个特异峰。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式A，其X射线粉末衍射图在约2-θ＝24.6°处具有至少一个特异峰。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式A，其X射线粉末衍射图在约2-θ＝15.5°和18.6°处具有至少两个特异峰。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式A，其X射线粉末衍射图在约2-θ＝21.1°、20.8°、14.6°、18.6°、12.3°、15.5°、24.6°、15.8°、13.4°和19.0°处具有特异峰。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式A，其X射线粉末衍射图与图1中示出的X射线粉末衍射图基本上相同。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式A，其X射线粉末衍射图在2-θ＝15.5°±0.2°2-θ处具有至少一个特异峰。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式A，其X射线粉末衍射图在2-θ＝18.6°±0.2°2-θ处具有至少一个特异峰。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式A，其X射线粉末衍射图在2-θ＝15.5°和18.6°处具有至少两个特异峰，其中所述值可以±0.2°2-θ。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式A，其X射线粉末衍射图在2-θ＝21.1°、20.8°、14.6°、18.6°、12.3°、15.5°、24.6°、15.8°、13.4°和19.0°处具有特异峰，其中所述值可以±0.2°2-θ。
在本说明书的另一个方面，提供了化合物X的多晶型形式E。此多晶型形式的特征可以在于它提供使用CuKa辐射测量的以下2θ值中的至少一个：14.8°、16.2°和17.9°。
化合物X的多晶型形式E的特征在于提供基本上如图8中示出的X射线粉末衍射图。
此多晶型形式的十个X射线粉末衍射峰[角度2-θ(2θ)，强度(％)]是：17.9°(100％)、14.8°(67.1％)、20.9°(60.1％)、23.1°(55.4％)、16.2°(49.3％)、20.0°(35.6％)、18.2°(32.9％)、12.3°(30.4％)、22.2°(19.0％)和13.9°(18.9％)。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式E，其X射线粉末衍射图在约2-θ＝17.9°处具有至少一个特异峰。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式E，其X射线粉末衍射图在约2-θ＝14.8°处具有至少一个特异峰。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式E，其X射线粉末衍射图在约2-θ＝17.9°处具有至少一个特异峰。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式E，其X射线粉末衍射图在约2-θ＝17.9°和14.8°处具有至少两个特异峰。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式E，其X射线粉末衍射图在约2-θ＝17.9°、14.8°、20.9°、23.1°、16.2°、20.0°、18.2°、12.3°、22.2°和13.9°处具有特异峰。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式E，其X射线粉末衍射图与图8中示出的X射线粉末衍射图基本上相同。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式E，其X射线粉末衍射图在2-θ＝17.9°±0.2°2-θ处具有至少一个特异峰。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式E，其X射线粉末衍射图在2-θ＝14.8°±0.2°2-θ处具有至少一个特异峰。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式E，其X射线粉末衍射图在2-θ＝17.9°和14.8°处具有至少两个特异峰，其中所述值可以±0.2°2-θ。
根据本说明书，提供了化合物X的多晶型形式E，其X射线粉末衍射图在2-θ＝17.9°、14.8°、20.9°、23.1°、16.2°、20.0°、18.2°、12.3°、22.2°和13.9°处具有特异峰，其中所述值可以±0.2°2-θ。
应当理解的是，具有化学式(I)的化合物的合适的药学上可接受的前药也形成本说明书的一个方面。因此，本说明书的化合物可以按前药形式给予，前药为在人体或动物体内分解以释放本说明书的化合物的化合物。前药可以用于改变本说明书的化合物的物理特性和/或药代动力学特性。当本说明书的化合物含有可以附接特性修饰基团的合适的基团或取代基时，可以形成前药。前药的实例包括具有化学式(I)的化合物的体内可裂解的酯或酰胺衍生物。
因此，本说明书的一个方面包括当通过有机合成可获得时以及当经由其前药的裂解而在人体或动物体内可获得时，如上文所定义的那些具有化学式(I)的化合物。因此，本说明书包括由有机合成方法产生的那些具有化学式(I)的化合物并且也包括在人体或动物体内经由前体化合物代谢而产生的此类化合物，即具有化学式(I)的化合物可以为合成产生的化合物或代谢产生的化合物。
具有化学式(I)的化合物的合适的药学上可接受的前药是基于合理医学判断适合给予人体或动物体而没有不希望的药理学活性且没有过度毒性的前药。
例如在以下文献中已描述不同形式的前药：-
a)Methods in Enzymology[酶学方法]，第42卷，第309-396页，由K.Widder等人编(学术出版社(Academic Press)，1985)；
b)Design of Pro-drugs[前药设计]，由H.Bundgaard编(爱思唯尔(Elsevier)，1985)；
c)A Textbook of Drug Design and Development[药物设计和开发教科书]，由Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard编，第5章“Design and Application of Pro-drugs[前药的设计和应用]”，H.Bundgaard第113-191页(1991)；
d)H.Bundgaard，Advanced Drug Delivery Reviews[高级药物递送综述]，8，1-38(1992)；
e)H.Bundgaard等人，Journal of Pharmaceutical Sciences[医药科学杂志]，77，285(1988)；
f)N.Kakeya等人，Chem.Pharm.Bull.[化学与药学通报]，32，692(1984)；
g)T.Higuchi和V.Stella，“Pro-Drugs as Novel Delivery Systems[作为新颖递送系统的前药]”，A.C.S.Symposium Series[ACS研讨会系列]，第14卷；以及
h)E.Roche(编)，“Bioreversible Carriers in Drug Design[药物设计中的生物可逆载体]”，培格曼出版社(Pergamon Press)，1987。
具有化学式(I)的化合物的体内作用可以部分地由在给予具有化学式(I)的化合物之后在人体或动物体内形成的一种或多种代谢物来发挥。如上所述，具有化学式(I)的化合物的体内作用也可以经由前体化合物(前药)的代谢来发挥。
为避免生疑，应当理解的是，如果在本说明书中某一基团通过“上文所定义”或“本文所定义”来限定，那么所述基团涵盖首次出现且最广泛的定义以及对该基团的每一个和所有替代性定义。
本说明书的另一个方面提供了用于制备具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的方法。合适的方法通过以下代表性方法变化形式来说明，其中除非另行说明，A、D、E、G、Q以及R1至R12具有上文所定义的任何含义。通过有机化学的标准程序可以获得必要的起始材料。此类起始材料的制备结合以下代表性方法变化形式并在随附实例中进行了描述。可替代地，通过与有机化学家的普通技术中说明的那些程序类似的程序可获得必要的起始材料。
具有化学式(I)的化合物(其中R13是H)可以通过以下方式制得，例如：
a)将合适的具有化学式(II)的芳基或杂芳基化合物(其中L是例如卤素(如碘)、或三氟甲磺酰基(三氟甲磺酸酯)基团、或硼酸或酯)用具有化学式(III)的醇使用合适的金属催化剂(例如RockPhos第3代预催化剂)在合适的溶剂(如甲苯或DME)中在合适的碱(如碳酸铯)和合适的温度(如90℃-120℃)的存在下醚化；在合适的温度(如10℃-30℃)下，使用酸性条件(如在1，4-二噁烷中的无水HCl)除去化学式(II)中的保护基团(PG)，如THP。
b)将合适的具有化学式(II)的芳基或杂芳基化合物(其中L是例如卤素(如碘)或三氟甲基磺酰氧基(三氟甲磺酸酯)基团)用具有化学式(IV)的胺使用合适的金属催化剂(例如BrettPhos或RuPhos、和Pd2(dba)3)在合适的溶剂(例如1，4-二噁烷)中在合适的碱(例如碳酸铯、叔丁醇钠或LiHMDS)的存在下在合适的温度(如90℃-130℃)下胺化；在合适的温度(如10℃-30℃)下，使用酸性条件(如在1，4-二噁烷中的无水HCl)除去保护基团(PG)，如THP。
c)将合适的具有化学式(V)的酚或羟基杂芳基化合物用具有化学式(III)的醇使用适当的试剂(如三苯基膦和(E)-二氮烯-1，2-二甲酸二异丙酯)在合适的溶剂(如THF)中通过光延反应烷基化；在合适的温度(如10℃-30℃)下，使用酸性条件(如在1，4-二噁烷中的无水HCl)除去化学式(VII)中的保护基团(PG)，如THP。
d)将合适的具有化学式(VI)的苯胺或杂芳基胺或者酚或羟基杂芳基化合物用具有化学式(VII)的化合物(其中LG是离去基团(如卤化物或甲磺酸酯))使用温和碱(例如DIPEA)在合适的溶剂(如DMF或MeCN)中烷基化；在合适的温度(如10℃-30℃)下，使用酸性条件(如在1，4-二噁烷中的无水HCl)除去保护基团(PG)，如THP。
e)将具有化学式(VIII)的胺用合适的具有化学式(IX)的烷基化基团(其中LG可以是卤化物，如溴化物、碘化物或氯化物，或者可以是一些其他合适的离去基团，如甲磺酸酯)在合适的溶剂(如DMF)中在合适的碱(如DIPEA)的存在下在合适的温度(如10℃-30℃)下烷基化。
具有化学式(II)的化合物(其中R6不等同于氢)可以通过以下方式例如由具有化学式(X)的化合物制得：用合适的试剂(例如双(三氟乙酰氧基)-碘苯)氧化，并且在低温(典型地-80℃至-60℃)下在合适的溶剂(例如THF)中用有机金属试剂(例如甲基溴化镁，当R6是甲基时)处理。
具有化学式(X)的化合物可以通过例如以下方式制备：具有化学式(XI)的苯胺与影响吲唑的构成的合适的试剂，如无机亚硝酸盐(如亚硝酸钠)在有机酸(如丙酸)中在低温(典型地-20℃至0℃)下或可替代地酸酐(如乙酸酐)在合适的碱(如乙酸钾)的存在下连同有机亚硝酸盐(如异戊基亚硝酸盐)任选地在冠醚(如18-冠醚-6)的存在下在合适的溶剂(如氯仿)中在合适的温度(如70℃)下反应。
具有化学式(XI)的化合物可以通过以下方式制得：具有化学式(XII)的化合物与具有化学式(XIII)的化合物在本领域已知的适合于皮克特-施彭格勒(Pictet-Spengler)反应的条件下(如在酸(如乙酸)的存在下并且在合适的溶剂(例如甲苯或水)中并且在合适的温度(如60℃-100℃))下反应。
具有化学式(XII)的化合物可以通过本领域已知的官能团相互转化制备，例如具有化学式(XIV)的卤化物由芳基卤化物(如溴化物)使用受保护的胺(如二苯基甲亚胺)在合适的催化剂和配体(如双(二苯亚甲基丙酮)钯(0)和外消旋-2，2′-双(二苯基膦基)-1，1′-联萘)的存在下在合适的碱(如叔丁醇钠)的存在下在合适的溶剂(如甲苯)中在合适的温度(如80℃-100℃)下胺化。
具有化学式(XIV)的化合物可以通过以下方式制备：
a)具有化学式(XV)的化合物与具有化学式(XVI)的醛在合适的溶剂(例如THF)中在合适的还原剂(如三乙酰氧基硼氢化钠)的存在下并且在合适的温度(如20℃-30℃)下反应；
b)(i)具有化学式(XV)的化合物与具有化学式(XVII)的酸在标准的酰胺键形成条件下(例如在酰胺偶联试剂(如HATU)和合适的碱(如三乙胺)的存在下在合适的溶剂(如DMF)中)反应，随后(ii)使用合适的还原剂(如硼烷)在合适的溶剂(如THF)中在合适的温度(如60℃-70℃)下还原生成的酰胺键；
c)具有化学式(XV)的化合物与具有化学式(XVIII)的化合物(其中LG是合适的离去基团(例如卤素原子(如溴或氯)或三氟甲磺酸酯))在合适的碱(如二异丙基乙胺)的存在下在合适的溶剂(例如DCM或二噁烷)中并且在合适的温度(如20℃-85℃)下反应。
具有化学式(XV)的化合物可以通过许多针对特别是手性胺合成的本领域已知的方法制备；
a)具有化学式(XIX)的磺酰胺化物的开环根据以下示出的方案。
步骤1：烷基化，例如正丁基锂/THF/-78℃至0℃。
步骤2：保护基团的去除，例如在MeOH/DCM中的无水HCl，室温。
b)在手性催化剂(如(1S，2S，4S，5R)-2-((R)-(烯丙氧基)(喹啉-4-基)甲基)-1-(蒽-9-基甲基)-5-乙烯基奎宁环-1-鎓溴化物)的存在下的相转移烷基化，随后是官能团操作。
步骤1：烷基化，例如手性催化剂，甲苯/KOH，0℃
步骤2：官能团相互转化。
具有化学式(XII)的化合物可以直接通过以下方式制备：
a)具有化学式(XX)的化合物与具有化学式(XVI)的醛在合适的溶剂(例如THF)中在合适的还原剂(如三乙酰氧基硼氢化钠)的存在下并且在合适的温度(如20℃-30℃)下反应；
b)(i)具有化学式(XX)的化合物与具有化学式(XVII)的酸在标准的酰胺键形成条件下(例如在酰胺偶联试剂(如HATU)和合适的碱(如三乙胺)的存在下在合适的溶剂(如DMF)中)反应，随后(ii)使用合适的还原剂(如硼烷)在合适的溶剂(如THF)中在合适的温度(如60℃-70℃)下还原生成的酰胺键；
c)具有化学式(XX)的化合物与具有化学式(XIII)的化合物(其中LG是合适的离去基团(例如卤素原子(如溴或氯)或三氟甲磺酸酯))在合适的碱(如二异丙基乙胺)的存在下在合适的溶剂(例如DCM或二噁烷)中并且在合适的温度(如20℃-85℃)下反应。
具有化学式(XX)的化合物可以通过从受保护的3-溴-2-甲基-苯胺开始的如下所示的反应顺序制备。
步骤1：烷基化，例如正丁基锂/THF/-78℃至室温
步骤2：胺保护基团的去除，例如在MeOH/DCM中的无水HCl，室温。
步骤3：苯胺保护基团的去除，例如在羟胺中回流。
具有化学式(V)的化合物可以通过包括如上所述的具有化学式(XIII)的含硼酸酯化合物的皮克特-施彭格勒环化的顺序制备，以给出具有化学式(XXI)的化合物。可以将具有化学式(XXI)的化合物在合适的溶剂(如THF)中在合适的碱(如氢氧化钠)的存在下使用合适的氧化剂(如过氧化氢)氧化成具有化学式(V)的化合物。
具有化学式(VI)的化合物(Q为NH)可以通过包括如上所述的具有化学式(XIII)的含硝基化合物的皮克特-施彭格勒环化的顺序制备，以给出具有化学式(XXII)的化合物。可以将具有化学式(XXII)的化合物在合适的溶剂(如甲醇)中在合适的催化剂(如二氧化铂)的存在下使用合适的硝基还原条件(如氢化)还原成具有化学式(VI)的化合物。
可以使用合适的金属催化剂(如RockPhos第3代预催化剂)在合适的溶剂(如甲苯或DME)中在合适的碱(如碳酸铯)的存在下在合适的温度(如90℃-120℃)下由具有化学式(II)的芳基卤化物和3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯制备具有化学式(VIII)的化合物(其中Q为O)；随后可以在合适的溶剂(如DCM)中使用酸(如三氟乙酸)除去Boc保护基团。也可以在本领域已知的适合于光延反应的条件下在合适的溶剂(例如THF)中使用适当的试剂(如三苯基膦和(E)-二氮烯-1，2-二甲酸二异丙酯)与3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯由具有化学式(V)的化合物制备具有化学式(VIII)的化合物(Q为O)。
可以使用合适的金属催化剂(例如例如RuPhos或BrettPhos和Pd2(dba)3)在合适的溶剂(例如1，4-二噁烷)中在合适的碱(例如碳酸铯、叔丁醇钠或LiHMDS)的存在下在合适的温度(如90℃-130℃)下由具有化学式(II)的芳基卤化物和3-氨基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯制备具有化学式(VIII)的化合物(其中Q为NH)；随后可以在合适的溶剂(如DCM)中使用酸(如三氟乙酸)除去Boc保护基团。
具有化学式(III)的化合物可以通过以下方式制备：
a)在合适的碱(如碳酸铯)的存在下在合适的溶剂(如乙腈)中在合适的温度(如120℃)下且在合适的容器(如密封管)中进行3-羟基氮杂环丁烷与具有化学式(IX)的化合物(其中LG为例如卤素或其他离去基团(如甲磺酰基基团))之间的烷基化反应。
b)在合适的还原剂(如三乙酰氧基硼氢化钠)的存在下在合适的溶剂(如DCM)中在合适的温度(例如10℃-30℃)下进行3-羟基氮杂环丁烷与具有化学式(XXIII)的醛或酮化合物之间的还原胺化反应。
具有化学式(IV)的化合物可以通过以下方式制备：
a)(i)在合适的碱(如DIPEA)的存在下在合适的溶剂(如1，4-二噁烷)中在合适的温度(如10℃-30℃)下进行具有化学式(XXIV)的化合物(其中PG是保护基团，例如Boc)与具有化学式(IX)的化合物(其中LG为例如卤素或其他离去基团，如甲磺酸酯)之间的烷基化反应。(ii)在合适的条件(如除去Boc的酸性条件)下除去保护基团。
b)(i)在合适的还原剂(如三乙酰氧基硼氢化钠)的存在下在合适的溶剂(如DCM)中在合适的温度(如10℃-30℃)下进行具有化学式(XXIV)的化合物与具有化学式(XXIII)的醛或酮化合物之间的还原胺化反应。(ii)在合适的条件(如除去Boc的酸性条件)下除去保护基团。
应当理解的是，上述方法变化形式中的方法步骤的其他排列也有可能。
也应了解，在上文提及的一些反应中，可能必需或希望保护化合物中的任何敏感官能团。必需或希望保护的情况和适合于保护的方法为本领域技术人员所知。常规保护基团可以根据标准规范来使用(关于说明，参见T.W.Green，Protective Groups in OrganicSynthesis[有机合成中的保护基团]，约翰·威利父子公司(John Wiley and Sons)，1991)。因此，如果反应物包括如氨基、羧基或羟基等基团，那么本文提及的一些反应中可能希望保护该基团。
用于氨基或烷基氨基基团的合适的保护基团是例如酰基基团，例如烷酰基基团，例如乙酰基；烷氧基羰基基团，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基基团；芳基甲氧基羰基基团，例如苯甲氧基羰基；或芳酰基基团，例如苯甲酰基。用于以上保护基团的去保护条件必然随着保护基团的选择而变化。因此，例如，如烷酰基或烷氧基羰基基团或芳酰基基团等酰基基团可以例如通过用如碱金属氢氧化物(例如，氢氧化锂或氢氧化钠)等合适的碱进行水解来去除。可替代地，如叔丁氧基羰基基团等烷氧基羰基基团可以例如通过用如盐酸、硫酸、甲酸、磷酸或三氟乙酸等合适的酸处理来去除，且如苯甲氧基羰基基团等芳基甲氧基羰基基团可以例如通过经如钯碳等催化剂氢化或通过用路易斯酸(如三(三氟乙酸)硼)处理来去除。用于伯氨基基团的合适的替代保护基团是例如邻苯二甲酰基团，该基团可以通过用烷基胺(例如二甲基氨基丙胺)或用肼处理来去除。
用于羟基基团的合适的保护基团是例如酰基基团，例如烷酰基基团，如乙酰基；芳酰基基团、例如苯甲酰基；芳基甲基基团，例如苯甲基；或三烷基或二芳基烷基硅烷，如TBDMS或TBDPS。用于以上保护基团的去保护条件将必然随着保护基团的选择而变化。因此，例如，酰基基团(如烷酰基或芳酰基基团)可以例如通过用合适的碱(如碱金属氢氧化物，例如氢氧化锂或氢氧化钠)进行水解来去除。可替代地，芳基甲基基团(如苯甲基基团)可以通过例如经催化剂(如钯碳)氢化来去除。
用于羧基基团的合适的保护基团是例如酯化基团，例如甲基或乙基基团，它可以例如通过用如氢氧化钠等碱进行水解来去除；或例如叔丁基基团，它可以例如通过用酸(如三氟乙酸)进行处理来去除；或例如苯甲基基团，它可以例如通过经如钯碳等催化剂氢化来去除。
这些保护基团可以在合成的任何方便的阶段使用在化学领域中熟知的常规技术来去除。
本文定义的某些中间体是新颖的，并且这些中间体是作为本说明书的另外的特征来提供的。
在一个实施例中，提供了具有化学式(XXV)的化合物或其盐：
其中L是溴、氯、碘或三氟甲磺酰基。
在另一个实施例中，L是溴。
生物学测定
使用以下测定来测量本说明书的化合物的作用。
ERα结合测定
化合物结合至分离的雌激素受体α配体结合结构域(ERα-LBD(GST))的能力在竞争测定中使用LanthaScreenTM时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)检测端点来评估。对于LanthaScreen TR-FRET端点，合适的荧光团(Fluormone ES2，赛默飞世尔公司(ThermoFisher)，产品代码P2645)和重组人雌激素受体α配体结合结构域，残基307-554(在内部表达和纯化)用来测量化合物结合。该测定原理是：将ERα-LBD(GST)加入荧光配体中以形成受体/荧光团复合物。使用铽标记的抗GST抗体(产品代码PV3551)通过结合至受体的GST标签来间接标记受体，并且通过测试化合物置换荧光配体从而导致Tb-抗GST抗体与示踪剂之间的TR-FRET信号损失的能力来检测竞争性结合。使用Beckman Coulter BioRAPTRFRD微流体工作站进行所有试剂的添加，如下来进行该测定：
1.将120nL的测试化合物声学分配到黑色低容量384孔测定板中。
2.在ES2筛选缓冲液中制备1x ERα-LBD/Tb-抗GST Ab，并且孵育15分钟。
3.将6μL的1x AR-LBD/Tb-抗GST Ab试剂分配至该测定板的每个孔中，随后将6μL的荧光团试剂分配至该测定板的每个孔中。
4.覆盖该测定板以保护这些试剂免受光照和蒸发，并且在室温下孵育4小时。
5.在337nm处激发并且使用BMG PheraSTAR测量每个孔在490nm和520nm处的荧光发射信号。
使用Labcyte Echo 550，将化合物直接从含有连续稀释化合物的化合物来源微板中(4个孔分别含有10mM、0.1mM、1mM和10nM最终化合物给予至测定微板中。Echo 550是一种液体处理机，其使用声学技术来进行DMSO化合物溶液的直接微板至微板的转移，并且该系统可以被编程以从不同来源板孔中转移多个小nL体积的化合物，以给出在该测定中所需的连续稀释的化合物，然后将其回填以跨稀释范围归一化DMSO浓度。
将总120nL的化合物加上DMSO加入每个孔中，并且将化合物以12点浓度响应形式在最终化合物浓度范围分别为10μM、2.917μM、1.042μM、0.2083μM、0.1μM、0.0292μM、0.0104μM、0.002083μM、0.001μM、0.0002917μM、0.0001042μM和0.00001μM上进行测试。将用每种化合物获得的TR-FRET剂量响应数据导出到合适的软件包(如Origin或Genedata)中，以进行曲线拟合分析。将竞争性ERα结合表示为IC50值。这是通过计算使示踪剂化合物与ERα-LBD结合减少50％所需的化合物浓度来确定的。
MCF-7ER下调测定
将化合物下调雌激素受体(ER)数目的能力在基于细胞的免疫荧光测定中使用MCF-7人导管癌乳腺细胞系来评估。将MCF-7细胞直接从含有2mM L-谷氨酰胺和5％(v/v)活性炭/葡聚糖处理胎牛血清的测定培养基(不含酚红的杜氏改良伊格尔培养基(Dulbecco′sModified Eagle′s medium，DMEM)；Sigma D5921)的冷冻小瓶(大约5×106个细胞)中复苏。使用无菌18G x 1.5英寸(1.2×40mm)宽规格的针将细胞注射一次，并且使用CoulterCounter(贝克曼公司(Beckman))来测量细胞密度。将细胞进一步稀释在测定培养基中至密度为3.75×104个细胞/mL，并且使用Thermo Scientific Matrix WellMate或ThermoMultidrop将40μL/孔加入透明底黑色组织培养处理的384孔板(柯仕达公司(Costar)，编号3712)中。在细胞接种后，将板在37℃、5％CO2下孵育过夜(Liconic转盘孵育器)。使用LabCyte EchoTM型号555化合物重新格式化仪生成测试数据，该格式化仪是自动化工作单元(集成的Echo2工作单元)的一部分。测试化合物的化合物储备溶液(10mM)用来产生384孔化合物剂量板(Labcyte P-05525-CV1)。将40μL的每种10mM化合物储备溶液分配到第一四分之一孔中，并且然后使用Hydra II(MATRIX UK)液体处理单元在DMSO中进行1∶100逐步连续稀释，以给出40μL的经稀释的化合物，分别至四分之一孔2(0.1mM)、3(1μM)和4(0.01μM)中。将40μL的DMSO加入该源板上的行P中，允许跨剂量范围归一化DMSO。为了向对照孔给以剂量，将40μL的DMSO加入行O1中，并且将在DMSO中的40μL的100μM氟维司群加入该化合物源板上的行O3中。
Echo使用声学技术来进行DMSO化合物溶液至测定板的直接微板至微板转移。该系统可以被编程以便以多个增量在微板之间转移低至2.5nL的体积，并且在这样做时在该测定板中产生一系列稀释的化合物，然后将其回填以跨稀释范围归一化DMSO浓度。使用集成的Echo2工作单元用如上制备的化合物源板将化合物分配到细胞板上，产生具有3倍稀释和一个最终10倍稀释的12点一式两份3μM至3pM剂量范围。将DMSO给予最大信号对照孔，以给出0.3％的终浓度，并且将氟维司群给予最小信号对照孔，以相应地给出100nM的终浓度。将板在37℃、5％CO2下进一步孵育18-22小时，并且然后通过添加20μL的11.1％(v/v)甲醛溶液(在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中)进行固定，给出3.7％(v/v)的最终甲醛浓度。将细胞在室温下固定20min，随后用250μL PBS/Proclin(含杀生物防腐剂的PBS)使用BioTek洗板机洗涤两次，然后将40μL的PBS/Proclin加入所有孔中并且将这些板储存在4℃下。将上述固定方法在集成的Echo2工作单元上进行。使用自动化AutoElisa工作单元来进行免疫染色。将PBS/Proclin从所有的孔中吸出并且将这些细胞用含有0.5％TweenTM20(v/v)的40μL PBS在室温下透化1小时。将这些板在含Proclin的250μL的PBS/0.05％(v/v)Tween 20(含杀生物防腐剂的PBST)中洗涤三次，并且然后添加20μL的ERα(SP1)兔单克隆抗体(赛默飞世尔公司，1∶1000在PBS/TweenTM/3％(w/v)牛血清白蛋白中)。将这些板在4℃下孵育过夜(Liconic转盘孵育器)并且然后在含Proclin的250μL的PBS/0.05％(v/v)TweenTM20(PBST)中洗涤三次。然后，将这些板与20μL/孔的山羊抗兔IgG AlexaFluor594或山羊抗兔AlexaFluor488抗体(分子探针公司(Molecular Probes)，含Hoechst，1∶5000在PBS/TweenTM/3％(w/v)牛血清白蛋白中)在室温下孵育1小时。然后，将这些板在含Proclin的250μL的PBS/0.05％(v/v)TweenTM20(含杀生物防腐剂的PBST)中洗涤三次。将20μL的PBS加入每个孔中，并且将这些板覆盖上黑色板密封件并且储存在4℃下，随后进行读取。使用Cellomics Arrayscan读取594nm(24hr时间点)或488nm(5hr时间点)处荧光来读取板，以测量每个孔中的ERα受体水平。将平均总强度针对细胞数目归一化，给出每个细胞的总强度。将数据导出到合适的软件包(如Origin)中，以进行曲线拟合分析。将ERα受体的下调表示为IC50值并且通过计算使平均最大总强度信号降低50％所需的化合物浓度来确定。
生成在表A中示出的数据(以下数据可以是来自单个实验的结果或两个或更多个实验的平均值)：
表A
1在ER下调测定中有活性的化合物在该测定中显示出下调值＞90％，除非另行说明，在这种情况下，％下调在圆括号中示出。
蛋白质印迹测定
通过蛋白质印迹使用人乳腺癌细胞系(MCF-7和CAMA-1)来评估化合物下调雌激素受体(ER)的能力。将细胞以0.5x106/孔置于在含有2mM L-谷氨酰胺和5％(v/v)活性炭处理胎牛血清(F6765，西格玛公司(Sigma))的不含酚红的RPMI的12孔组织培养处理的板中。在37℃、5％CO2下，将细胞与化合物(100nM)或媒介物对照(0.1％DMSO)孵育48h，然后用PBS洗涤一次，并且用80μl裂解缓冲液(25mM Tris/HCl、3mM EDTA、3mM EGTA、50mM NaF、2mM原钒酸钠、0.27M蔗糖、10mMβ-甘油磷酸盐、5mM焦磷酸钠、0.5％TritonX-100，pH 6.8)在冰上裂解。
在进行蛋白质测定(DC Bio-Rad蛋白质试剂盒，500-0116)之前，将细胞刮下、超声处理和离心，并且使得样品在含有1xLDS样品缓冲液(NP0007，英杰公司(Invitrogen))和1xNuPAGE样品还原剂(NP0009，英杰公司)的裂解缓冲液中达到1-2mg/ml的蛋白质浓度。将样品在95℃下煮沸10min，并且然后在-20℃下冷冻直到准备好使用。
将10-20μg蛋白质加载到26孔标准胶(BioRad 345-0034)上。在125V下，使胶在跑胶缓冲液(24mM Tris碱(西格玛公司)、192mM甘氨酸、3.5mM SDS，在蒸馏水中制成)中跑胶1hr 25min。在30V下，将胶在转移缓冲液(25mM Tris、192mM甘氨酸、20％(v/v)甲醇，pH8.3，在蒸馏水中制成)中转移2hr至硝酸纤维素膜上。将印迹用Ponceau S(P7170，西格玛公司)染色，并且根据适当的分子量标志物进行切割。
在室温下，在含有0.05％TweenTM20的磷酸盐缓冲盐水(PBS/Tween)的5％Marvel(w/v)中，将膜阻断1小时。然后在4℃下将印迹与抗ERα(SP1)兔单克隆抗体(赛默飞世尔公司，以1∶1000稀释)孵育过夜(伴随轻轻振摇)，随后用PBS/Tween洗涤若干次。将二级抗兔HRP抗体(7074，CST)(以1∶2000稀释的稀释物)在室温下孵育2h(伴随轻轻振摇)，随后用PBS/Tween洗涤若干次。所有抗体在PBS/Tween中的5％Marvel(w/v)中制成。
使用Pierce WestDura化学发光试剂(Thermo Scientific 34076)使免疫印迹显色，并且使用Syngene软件在G-box上进行显色/定量。将ERα受体的下调针对媒介物对照(0％下调)归一化，并且100nM氟维司群对照(100％下调)在相同的胶内跑胶。
表B显示了针对选定的实例生成的数据(以下数据可以是来自单个实验的结果或两个或更多个实验的平均值)：
表B
人肝细胞测定
使用以下方案评估化合物在人肝细胞中的代谢稳定性：
1.在适当的溶剂(DMSO)中制备化合物和对照化合物的10mM储备溶液。将孵育培养基(L-15培养基)置于37℃水浴中，并且在使用之前允许加温至少15分钟。
2.将80μL的乙腈加入96孔深孔板(淬灭板)的每个孔中。
3.在新的96孔板中，通过合并198μL的乙腈和2μL的10mM储备液将10mM测试化合物和对照化合物稀释至100μM。
4.从储库取出一小瓶冷冻保存的(小于-150℃)人肝细胞(从伊利诺斯州芝加哥Celsis IVT获得的LiverPoolTM10供体人肝细胞(产品编号S01205))，确保小瓶保持在低温，直到解冻过程进行。尽可能快地，通过将小瓶置于37℃水浴中并且轻轻振摇这些小瓶解冻细胞。应该将小瓶保持在水浴中，直到所有的冰晶已经溶解并且不再可见。解冻完成后，用70％乙醇喷雾小瓶，将小瓶转移至生物安全柜中。
5.打开小瓶，将内容物倒入含有解冻培养基的50mL锥形管中。将50mL锥形管置于离心机中，并且以100g旋转10分钟。旋转完成后，吸出解冻培养基并在足够的孵育培养基中重悬肝细胞，以产生约1.5x106个细胞/mL。
6.使用 Vision，计数细胞并且确定活细胞密度。具有较差生活力(＜80％生活力)的细胞是不可接受用于使用的。用孵育培养基来稀释细胞，以达到1.0x106个活细胞/mL的工作细胞密度。
7.将247.5μL的肝细胞转移至96孔细胞培养板的每个孔中。将板置于EppendorfThermomixer Comfort板摇床上，允许肝细胞温热10分钟。
8.将2.5μL的100μM测试化合物或对照化合物加入含有细胞的孵育孔中，混合以获得在0.5min处的均质悬浮液，当获得该均质悬浮液时将定义0.5min时间点。在0.5min时间处，将20μL的孵育的混合物转移至在“淬灭板”的孔中，随后进行涡旋。
9.在37℃下，以900rpm在Eppendorf Thermomixer Comfort板摇床上孵育该板。在5min、15min、30min、45min、60min、80min、100min和120min处，混合该孵育系统，并且在各个时间点处将20μL孵育的混合物的样品转移至分开的“淬灭板”中，随后进行涡旋。
10.以4,000rpm将这些淬灭板离心20分钟。将4种不同的化合物汇集到一个盒中，并且用于LC/MS/MS分析。
使用Microsoft Excel进行所有的计算。从提取的离子色谱图确定峰面积。通过Ln亲本消失百分比相对时间曲线的回归分析确定亲本化合物的体外内在清除率(体外Clint，以L/min/106个细胞计)。使用以下方程从斜率值确定体外内在清除率(体外Clint，以L/min/106个细胞计)，并且针对选定的实例在表C中示出：
体外Clint＝kV/N
V＝孵育体积(0.25mL)；
N＝每孔的肝细胞数目(0.25x106个细胞)。
表C
物理特性
logD
药物的亲脂性是重要的物理特性，其可以影响化合物的许多生物和代谢特性，例如化合物的吸收、分布、代谢、排泄和毒性特征。在pH 7.4处，1-辛醇和缓冲水溶液之间的分配系数LogDO/W是化合物的亲脂性最常用的量度。用于LogDO/W测量的当前方法是基于传统的摇瓶技术，但是修改之处在于使用UPLC与定量质谱分析(MS)作为测量相对辛醇和水溶液浓度的方法一次测量十种混合物中的化合物。最大容量是每次实验379种项目化合物(48个具有包含三种QC化合物的10种化合物的库)。2种质量控制(QC)样品具有中LogD的环苯扎林和具有高LogD的尼卡地平用于所有库以确保良好的质量。使用具有低LogD的另外的QC样品咖啡因，并且随机置于所有的运行中。该方法已经针对先前的摇瓶方法进行了充分验证。
溶解度
为了使口服化合物到达作用部位，并且为了肠道的口服吸收，该化合物必须处于溶液状态，因此具有高固有溶解度的化合物可能更适合于药物用途。在标准条件下测量研究化合物的热力学溶解度。它是一种使用由化合物管理液体储器提供的10mM DMSO溶液的摇瓶方法，并且是一种高通量方法。在25℃下，将这些干燥的化合物在水性磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中平衡24小时，然后将具有溶解化合物的部分从残余物中分离。使用UPLC/MS/MS分析和定量这些溶液，将QC样品掺入各个测定运行中以确保该测定的质量。
人血浆蛋白结合
人血浆蛋白结合是控制可用于结合至靶标的游离(未结合)药物量的关键因素，因此在观察到的药物体内功效中起重要作用。因此，相对于具有相似效力和暴露水平的化合物，具有高游离分数(低水平的血浆蛋白结合)的化合物可以展现出增强的功效。在人血浆中的自动平衡透析测定使用RED(快速平衡透析)装置和样品处理。该测定通常运行两至三天(包括结果的递送)。透析18小时后，制备用于通过液相色谱法和质谱分析法分析的血浆和缓冲液样品。通常一式一份地测试样品，并且通过LC/MSMS通过使用在血浆中的7点校准曲线定量。将化合物汇集在最多10种化合物的血浆库中。在每个运行中使用三种参考化合物普萘洛尔、美托洛尔和华法林。在每个库中华法林被用作对照，并且在每个运行中将普萘洛尔和美托洛尔随机放置。将内部Excel宏用于针对机器人和质谱仪的文件的准备，并且还用于计算在血浆中未结合的分数(fu％)。
表D显示了针对选定的实例生成的logD、溶解度和血浆蛋白结合的数据(以下数据可以是来自单个实验的结果或两个或更多个实验的平均值)：
表D
NT＝未测试。
hERG结合测定
hERG(人ether go go相关基因)钾通道对心脏正常的电活动至关重要。心律失常可以通过多种药物阻断hERG通道来诱导。这种副作用是临床前安全性试验中药物失效的常见原因[Sanguinetti等人，Nature.[自然]，2006，440，463-469.]，因此hERG通道阻断活性的最小化可能是候选药物的理想特性。
hERG结合测定的目的是使用Nanion Syncropatch 384PE自动膜片钳系统上的组成型表达CHO细胞系评估测试化合物对由人ether go go相关基因(hERG)编码的电压依赖性钾通道的影响。
除非另行说明，如下进行该测定，所有试剂均在室温下使用。
试剂制备包括：
1.用于灌注芯片下侧的内部“IC700”溶液(以mM计)，KF 130、KCl 20、MgCl2 1、EGTA 10和HEPES 10(均为西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)；pH 7.2-7.3，使用10MKOH，320mOsm)并补充25μM七叶素。
2.外部和细胞缓冲液(以mM计)，NaCl 137、KCl 4、HEPES 10、D-葡萄糖10、CaCl22、MgCl2 1(pH 7.4，NaOH)
3.用于在添加测试化合物之前建立稳定的基线的NMDG“参考”缓冲液，NaCl 80、KCl 4、CaCl2 2、MgCl2 1、NMDG Cl 60、D-葡萄糖一水合物5、HEPES 10(pH 7.4NaOH298mOsm)
4.用于改进细胞密封质量的密封增强剂，NaCl 80、KCl 3、CaCl2 10、HEPES 10、MgCl2 1(pH 7.4NaOH)
细胞制备：
1.如果使用细胞培养；将细胞在使用前在30℃下孵育大约4-6天。测定日使用accutase转移(lift)细胞并在20ml细胞缓冲液中重悬至密度为0.8至1e6个细胞/ml。
2.如果使用测定即用冷冻小瓶；在37℃下快速解冻两个冷冻小瓶，并慢慢吸移到23ml外部溶液中
3.在开始测定之前，将所有细胞制备物在设定为10℃的振摇细胞库(hotel)上孵育15min
化合物制备：
使用Labcyte Echo将所有化合物一式四份地声学分配。使用10mM储备溶液产生6个化合物源板，每个化合物源板具有不同的浓度，以允许向细胞给予累积剂量(0.03167mM，随后是0.1mM，然后是0.3167mM、1mM、3.167mM、10mM)。将90μl参考缓冲液加入含有600nl化合物的源板的每个孔中，最终化合物浓度分别为0.1μM、0.39μM、1.2μM、3.9μM、12.5μM和39.6μM。
hERG测定(所有分配步骤均使用Nanion syncropatch上设置的液体处理进行)
1.用40μl外部缓冲液填充384孔中等电阻4孔芯片，并向板的下侧灌注内部缓冲液。
2.将20μl细胞分配到芯片的每个孔中，随后是20μl密封增强剂。
3.从每个孔中取出40μl试剂到洗涤站，剩余体积为40μl
4.分配40μl参考缓冲液，3min后为40μl的去除步骤，重复此步骤。
5.分配40μl化合物板1(0.03167mM)，在去除40μl之前“实时”记录3min暴露。对于增加浓度的另外5个后续化合物板重复此步骤，以在Syncropatch芯片的每个孔中产生累积浓度-效应曲线。
使用电压步骤方案引发hERG介导的电流，所述方案由以下组成：-80mV的连续保持电压，500ms步进至60mV，随后每15秒500ms步进至-40mV。由Nanion软件通过以下方式自动从泄漏减去迹线(leak-subtracted trace)测量hERG电流幅值：每15秒取-40mV处hERG“尾”电流的峰值，并取每个浓度取的这些响应的最后三个以产生浓度-效应曲线。
使用Genedata内的APC包进行结果计算。对于以中性和抑制剂对照孔组为参考的孔数据的常规归一化，GeneData测定分析仪使用以下等式将信号值针对所需的信号范围归一化：
x是孔的测量原始信号值
<cr>是板上中心参考(中性)孔的测量信号值的中值
<sr>是板上比例参考(抑制剂)孔的测量信号值的中值
CR是中心参考(中性)的期望中值归一化值
SR是比例参考(抑制剂)的期望中值归一化值
表E显示了选定的实例的hERG结合数据(以下数据可以是来自单个实验的结果或两个或更多个实验的平均值)：
表E
渗透性
为了使口服吸收最大化，药物必须具有足够的跨膜通量以及避免P-糖蛋白的外流。用于预测口服吸收的最广泛使用的系统是通过人结肠腺癌细胞系Caco-2的单层测定化合物的渗透速率。
人Caco-2双向渗透性A至B和B至A
使用自动测定来确定Caco-2细胞中化合物的双向渗透性(流出和摄取)，在pH7.4下进行2小时。通过LC/MS/MS分析样品以估计化合物在Caco-2细胞单层上的表观渗透系数(Papp)，并且结果以x10-6cm/s为单位引用。
流出率(ER)可以使用以下等式确定：
ER＝Papp(B-A)/Papp(A-B)
其中Papp(B-A)指示基底侧至顶端方向的表观渗透系数，且Papp(A-B)指示顶端至基底侧方向的表观渗透系数。
人Caco-2被动渗透性A至B Papp
使用自动测定来确定化合物在Caco-2细胞单层中的被动渗透性，进行2小时，顶端pH为6.5且基底侧pH为7.4。通过Caco-2细胞中三种主要流出转运蛋白ABCB1(P-gp)、ABCG2(BCRP)和ABCC2(MRP2)的化学抑制进行Caco-2AB抑制测定。用抑制剂混合物(50μM奎尼丁、20μM柳氮磺胺吡啶和100μM苯溴马隆)进行顶端和基底侧的孵育。通过LC/MS/MS分析样品以估计化合物在Caco-2细胞单层上的表观渗透系数(Papp)，并且结果以x10-6cm/s为单位引用。
表F显示了针对选定的实例生成的渗透性数据(以下数据可以是来自单个实验的结果或两个或更多个实验的平均值)：
表F
NT＝未测试。
在小鼠中人亲本MCF7异种移植物抗肿瘤功效
为了确定实例17对MCF7异种移植物生长的影响，进行了以下研究。在植入之前，使MCF7细胞(ATCC)以指数期在体外生长。简而言之，在可恢复的麻醉下，将体重为18g或更多的雄性SCID小鼠(Envigo UK)在背部皮下植入雌激素小丸(0.5mg，从美国创新研究公司(Innovative Research of America)发货21天)。一天后，将小鼠在左肋皮下接种5百万个MCF7细胞，制备成在1∶1RPMI(Gibco，生命技术公司(Life Technologies))和基质胶(康宁公司(Corning))中的0.1ml细胞悬浮液。当肿瘤达到约250mm3时，将小鼠随机分成9只小鼠的组(媒介物对照为12只小鼠)并开始接受药物治疗。在媒介物(40％四乙二醇(v/v)、7.5％Captisol(w/v)，在注射用水中)中制备化合物，并以10ml/kg的体积口服给药，每天一次，持续21天，按0.5mg/kg至50mg/kg。每周测量肿瘤两次，并使用椭圆公式(pi/6x宽x宽x长)计算肿瘤体积。数据表示肿瘤体积相对于在随机化当天肿瘤体积的几何平均值。误差条是95％置信区间(Graphpad Prism)。此研究证明10mg/kg及以上的剂量使肿瘤消退(图12)。
在小鼠中人Y537S ESR1突变型MCF7异种移植物抗肿瘤功效
为了确定实例17对从经遗传工程化以表达Y537S ESR1的MCF7细胞衍生的异种移植物生长的影响，进行了以下研究。通过基因组编辑产生Y537S ESR1MCF7细胞并仅表达Y537S ESR1(Ladd等人，Oncotarget[肿瘤靶标]，2016，7：54120-54136)。简而言之，将体重为18g或更多的雄性SCID小鼠(Envigo UK)在左肋皮下接种5百万个Y537S ESR1MCF7细胞，制备为在1∶1RPMI(Gibco，生命技术公司)和基质胶(康宁公司)中的0.1ml细胞悬浮液。当肿瘤达到约250mm3时，将小鼠随机分成9只小鼠的组(媒介物对照为12只小鼠)并开始接受药物治疗。在媒介物(40％四乙二醇(v/v)、7.5％Captisol(w/v)，在注射用水中)中制备化合物，并以10ml/kg的体积口服给药，每天一次，持续22天，按0.5mg/kg至50mg/kg。每周测量肿瘤两次，并使用椭圆公式(pi/6x宽x宽x长)计算肿瘤体积。数据表示肿瘤体积相对于在随机化当天肿瘤体积的几何平均值。误差条是95％置信区间(Graphpad Prism)。此研究证明10mg/kg及以上的剂量使肿瘤消退(图13)。
在小鼠中人ESR1突变型乳腺癌患者衍生的异种移植物CTC174抗肿瘤功效
为了确定实例17对ESR1突变型患者衍生的异种移植物CTC174生长的影响，在雌性NSG小鼠的乳腺脂肪垫中植入CTC174片段。CTC174衍生自从患有转移性ER+乳腺癌的患者分离的循环肿瘤细胞，并且已显示在0.33等位基因频率下携带ESR1中的D538G突变(Ladd等人，Oncotarget[肿瘤靶标]，2016，7：54120-54136)。简而言之，在可恢复的麻醉下，在雌性卵巢切除NOD/SCID(Cg-Prkdcscid Il2rgtmlWjl/SzJ)(NSG)小鼠(6-7周龄-杰克逊实验室(The Jackson Laboratory))的第三乳腺脂肪垫中植入约50mm3的CTC174异种移植物片段。当肿瘤达到约200mm3时，将小鼠随机分成10只小鼠的组并开始接受药物治疗。在媒介物(40％四乙二醇(v/v)、7.5％Captisol(w/v)，在注射用水中)中制备化合物，并以10ml/kg的体积口服给药，每天一次，持续32天，按0.8mg/kg至40mg/kg。每周测量肿瘤两次，并使用椭圆公式(pi/6x宽x宽x长)计算肿瘤体积。数据表示肿瘤体积相对于在随机化当天肿瘤体积的几何平均值。误差条是95％置信区间(Graphpad Prism)。此研究证明10mg/kg及以上的剂量几乎完全抑制肿瘤生长(图14)。
在小鼠中人ESR1突变型乳腺癌患者衍生的异种移植物CTC174抗肿瘤药物组合功 效
为了确定实例17与CDK4/6抑制剂帕布昔利布或mTORC1/2抑制剂维塞替布(vistusertib)(AZD2014)组合对ESR1突变型患者衍生的异种移植物CTC174生长的影响，在雌性NSG小鼠的乳腺脂肪垫中植入CTC174片段。CTC174衍生自从患有转移性ER+乳腺癌的患者分离的循环肿瘤细胞，并且已显示在0.33等位基因频率下携带ESR1中的D538G突变(Ladd等人，Oncotarget[肿瘤靶标]，2016，7：54120-54136)。简而言之，在可恢复的麻醉下，在雌性NOD/SCID(Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)(NSG)小鼠(6-7周龄-杰克逊实验室)的第三乳腺脂肪垫中植入约30mm3的CTC174异种移植物片段。当肿瘤达到约500mm3时，将小鼠随机分成10只小鼠的组并开始接受药物治疗。在媒介物(40％四乙二醇(v/v)、7.5％Captisol(w/v)，在注射用水中)中制备实例17，并以10ml/kg的体积口服给药，每天一次，持续23天，按10mg/kg。在媒介物(1％聚山梨醇酯80)中制备帕布昔利布和维塞替布。帕布昔利布以10ml/kg的体积口服给药，每天一次，持续23天，按50mg/kg。维塞替布以10ml/kg的体积口服给药，每天两次，以服用2天停用5天的时间表，持续23天，按10mg/kg。向媒介物处理组给予10ml/kg40％四乙二醇(v/v)、7.5％Captisol(w/v)(在注射用水中)，每天口服一次，持续23天。每周测量肿瘤两次，并使用椭圆公式(pi/6x宽x宽x长)计算肿瘤体积。数据表示肿瘤体积相对于在随机化当天肿瘤体积的几何平均值。误差条是95％置信区间(GraphpadPrism)。此研究证明实例17与帕布昔利布(图15)或与维塞替布(AZD2014)(图16)组合产生比单独给药的任一药剂更大的效果。
根据本说明书的另一个方面，提供了药物组合物，其包含如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，与药学上可接受的赋形剂相联合。
用于片剂配制品的合适的药学上可接受的赋形剂包括例如惰性稀释剂、成粒剂和崩解剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂以及抗氧化剂。另外合适的药学上可接受的赋形剂可以是螯合剂。片剂配制品可以未包衣或包衣，以改变它们的崩解性和随后活性成分在胃肠道内的吸收，或改良它们的稳定性和/或外观，在任一种情况下，均使用本领域熟知的常规包衣剂和程序。
口服使用的组合物可以可替代地呈硬明胶胶囊的形式，其中活性成分与惰性固体状稀释剂混合；或作为软明胶胶囊，其中活性成分与水或油混合。
水性悬浮液通常含有呈细粉形式的活性成分以及一种或多种悬浮剂、分散剂或润湿剂。水性悬浮液还可以含有一种或多种防腐剂、抗氧化剂、着色剂、调味剂和/或甜味剂。
油性悬浮液可以通过将活性成分悬浮于植物油中或矿物油中来配制。油性悬浮液还可以含有增稠剂。可以添加甜味剂(如上文所列的甜味剂)和调味剂，以提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过添加抗氧化剂来保存。
适合于通过添加水制备水性悬浮液的可分散粉末和颗粒通常含有该活性成分以及分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂。也可以存在如甜味剂、调味剂和着色剂等另外赋形剂。
本说明书的药物组合物还可以呈水包油乳液的形式。油相可以是植物油或矿物油或任何这些油的混合物。乳液还可以含有甜味剂、调味剂和防腐剂。
糖浆和酏剂可以用甜味剂配制，并且还可以含有缓和剂、防腐剂、调味剂和/或着色剂。
这些药物组合物还可以呈无菌可注射水性或油性悬浮液的形式，它可以根据已知程序使用上述适当分散剂或润湿剂和悬浮剂中的一种或多种来配制。无菌可注射制剂还可以是于无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂系统中的无菌可注射溶液或悬浮液。
用于经吸入给予的组合物可以呈常规加压气雾剂的形式，该加压气雾剂经安排以分配作为含有细粉状固体的气雾剂或者液滴的活性成分。可以使用如挥发性氟化烃或烃等常规气雾剂推进剂，并且适宜地安排气雾剂装置以分配定量的活性成分。干粉吸入器也可以是合适的。
有关配制品的另外的信息，请读者参考综合医药化学(Comprehensive MedicinalChemistry)(Corwin Hansch；编辑委员会主席)，培格曼出版社(Pergamon Press)1990的第5卷中的第25.2章。
与一种或多种赋形剂组合以产生单一剂型的活性成分的量将必要地变化，取决于所治疗宿主和特定给药途径。例如，向人口服给药将通常需要例如从1mg至2g活性剂(更适合地从100mg至2g，例如从250mg至1.8g，如从500mg至1.8g，特别是从500mg至1.5g，适宜地从500mg至1g)与适当且适宜量的赋形剂混合给予，这些赋形剂可以在总组合物的按质量计从约3％至约98％内变化。将理解的是，如果需要大剂量，那么可能需要多各剂型，例如两个或更多个片剂或胶囊，其中活性成分的剂量宜在其间划分。典型地，单位剂型将含有约10mg至0.5g的本说明书的化合物，尽管单位剂型可以含有高达1g。适宜地，单一固体剂型可以含有1mg与300mg之间的活性成分。
为实现治疗或预防目的的本说明书的化合物的剂量大小自然将根据疾病病况的性质和严重程度、动物或患者的年龄和性别以及给药途径，根据熟知的医学原则而变化。
在使用本说明书的化合物以实现治疗或预防目的时，通常将给予化合物以致接受例如每公斤体重1mg至每公斤体重100mg的范围内的日剂量，如果需要那么分次给药。通常，当采用肠胃外途径时，将给予更低剂量。因此，例如，对于静脉内给药来说，通常将使用介于例如每公斤体重1mg至每公斤体重25mg范围内的剂量。类似地，对于经吸入给药来说，将使用介于例如每公斤体重1mg至每公斤体重25mg范围内的剂量。然而，口服给药(确切地说以片剂形式)是优选的。
在本说明书的一个方面，本说明书的化合物或其药学上可接受的盐是作为片剂给予的，这些片剂包含10mg至100mg的本说明书的化合物(或其药学上可接受的盐)，其中一个或多个片剂是按需给予的以达到所需的剂量。
如上所述，已知经由ERα的信号传导通过以下作用中的一种或多种引起肿瘤形成：介导癌症和其他细胞的增殖、介导血管生成事件以及介导癌细胞的运动性、迁移性和侵袭性。我们已发现，本说明书的化合物具有强力抗肿瘤活性，该活性据相信借助于对抗和下调涉及信号转导步骤的ERα而获得，这些信号转导步骤引起肿瘤细胞增殖和存活以及使肿瘤细胞转移的侵袭性和迁移能力。
因此，本说明书的化合物可以具有作为抗肿瘤剂的价值，特别是作为哺乳动物癌细胞增殖、存活、活动、播散和侵袭的选择性抑制剂，从而抑制肿瘤生长和存活并抑制转移性肿瘤生长。确切地说，本说明书的化合物可以具有在抑制和/或治疗实体瘤疾病方面作为抗增殖剂和抗侵袭剂的价值。确切地说，本说明书的化合物可以有用于预防或治疗对ERα的抑制敏感且涉及信号转导步骤的那些肿瘤，这些信号转导步骤引起肿瘤细胞增殖和存活以及使肿瘤细胞转移的迁移能力和侵袭性。另外，本说明书的化合物可以用于预防或治疗单独或部分地通过对抗和下调ERα来介导的那些肿瘤，即这些化合物可以用于在需要这种治疗的温血动物中产生ERα抑制作用。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在如人等温血动物中作为药剂。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在如人等温血动物中产生抗增殖作用。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在如人等温血动物中作为抑制和/或治疗实体瘤疾病的抗侵袭剂。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐用于在如人等温血动物中产生抗增殖作用的用途。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药剂的用途，该药剂用于在如人等温血动物中产生抗增殖作用。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药剂的用途，该药剂用于在如人等温血动物中作为抑制和/或治疗实体瘤疾病的抗侵袭剂。
根据本说明书的另一个方面，提供了用于在需要这种治疗的如人等温血动物中产生抗增殖作用的方法，该方法包括向所述动物体给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据本说明书的另一个方面，提供了用于通过在需要这种治疗的如人等温血动物中抑制和/或治疗实体瘤疾病来产生抗侵袭作用的方法，该方法包括向所述动物体给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在预防或治疗如人等温血动物的癌症中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药剂的用途，该药剂用于在预防或治疗如人等温血动物的癌症中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了用于预防或治疗需要这种治疗的如人等温血动物的癌症的方法，该方法包括向所述动物体给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在预防或治疗如人等温血动物的实体瘤疾病中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药剂的用途，该药剂用于在预防或治疗如人等温血动物的实体瘤疾病中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了用于预防或治疗需要这种治疗的如人等温血动物的实体瘤疾病的方法，该方法包括向所述动物体给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在预防或治疗对涉及信号转导步骤的ERα的抑制敏感的那些肿瘤中使用，这些信号转导步骤引起肿瘤细胞的增殖、存活、侵袭性和迁移能力。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药剂的用途，该药剂用于在预防或治疗对涉及信号转导步骤的ERα的抑制敏感的那些肿瘤中使用，这些信号转导步骤引起肿瘤细胞的增殖、存活、侵袭性和迁移能力。
根据本说明书的另一个方面，提供了用于预防或治疗对涉及信号转导步骤的ERα的抑制敏感的那些肿瘤的方法，这些信号转导步骤引起肿瘤细胞的增殖、存活、侵袭性和迁移能力，该方法包括向所述动物体给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在提供对ERα的抑制作用中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药剂的用途，该药剂用于在提供对ERα的抑制作用中使用。
根据本说明书的另一个方面，还提供了用于提供对ERα的抑制作用的方法，该方法包括给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在提供对ERα的选择性抑制作用中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药剂的用途，该药剂用于在提供对ERα的选择性抑制作用中使用。
根据本说明书的另一个方面，还提供了用于提供对ERα的选择性抑制作用的方法，该方法包括给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
本文描述了这样的化合物，其可以结合至ERα配体结合结构域并且是选择性雌激素受体降解剂。在基于生物化学和细胞的测定中，本说明书的化合物证明是强力雌激素受体结合剂并且降低ERα的细胞水平并且因此可以用于治疗雌激素敏感性疾病或病症(包括已经对内分泌疗法形成抗性的疾病)，即用于在治疗乳腺癌和妇科癌症(包括子宫内膜癌、卵巢癌和宫颈癌)及表达ERα突变蛋白的癌症中使用，这些突变蛋白可以是从头突变或由于用之前的内分泌疗法(如芳香酶抑制剂)治疗已经产生的。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗乳腺癌或妇科癌症中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗乳腺癌中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗乳腺癌中使用，其中该癌症已经对一种或多种其他内分泌疗法形成抗性。
根据本说明书的另一个方面，提供了用于治疗乳腺癌或妇科癌症的方法，该方法包括给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据本说明书的另一个方面，提供了用于治疗乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌的方法，该方法包括给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据本说明书的另一个方面，提供了用于治疗乳腺癌的方法，该方法包括给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据本说明书的另一个方面，提供了用于治疗乳腺癌的方法，其中该癌症已经对一种或多种其他内分泌疗法形成抗性，该方法包括给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药剂的用途，该药剂用于在治疗乳腺癌或妇科癌症中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药剂的用途，该药剂用于在治疗乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药剂的用途，该药剂用于在治疗乳腺癌中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药剂的用途，该药剂用于在治疗乳腺癌中使用，其中该癌症已经对一种或多种其他内分泌疗法形成抗性。
在本说明书的一个特征中，待治疗的癌症为乳腺癌。在这个特征的另一个方面，该乳腺癌为雌激素受体+ve(ER+ve)。在这个方面的一个实施例中，具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物与另一种抗癌剂(如本文所定义的抗激素剂)组合给药。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗ER+ve乳腺癌中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了用于治疗ER+ve乳腺癌的方法，该方法包括给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据本说明书的另一个方面，提供了如上文所定义的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药剂的用途，该药剂用于在治疗ER+ve乳腺癌中使用。
如上所述，具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物的体内作用可以部分地由在给予具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物之后在人体或动物体内形成的一种或多种代谢物来发挥。
因此，本说明书还涵盖用于抑制患者体内的ER-α的方法，该方法包括向患者给予有效抑制该患者体内的ER-α的量的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
因此，本说明书还涵盖用于抑制患者体内的ER-α的方法，该方法包括向患者给予有效抑制该患者体内的ER-α的量的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
本文所定义的抗癌治疗可以作为单独疗法施用，或除本说明书的化合物外，还可以涉及常规外科手术或放射疗法或化学疗法。这种化学疗法可以包括以下抗肿瘤剂类别中的一种或多种：-
(i)其他抗增殖/抗肿瘤药物及其组合，如用于医学肿瘤学，如烷基化剂(例如顺铂、奥沙利铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、替莫唑胺亚硝基脲)；抗代谢物(例如吉西他滨和抗叶酸剂，如氟嘧啶类，像5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、阿糖胞苷和羟基脲)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类，像阿霉素、博来霉素、多柔比星、道诺霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、更生霉素和光神霉素)；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱类，像长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨，以及紫杉烷类，像泰素和多西他赛和保罗激酶(polokinase)抑制剂)；和拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素类，像依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、拓扑替康以及喜树碱)；
(ii)抗激素剂，如抗雌激素(例如它莫西芬、氟维司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和艾多昔芬(iodoxyfene))、孕激素(例如乙酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑(vorazole)和依西美坦)；
(iii)生长因子功能和它们的下游信号传导途径的抑制剂：包括任何生长因子或生长因子受体靶的Ab调节剂，由Stern等人Critical Reviews in Oncology/Haematology[肿瘤学/血液病学中的关键综述]，2005，54，第11-29页综述；还包括此类靶标的小分子抑制剂，例如激酶抑制剂-实例包括抗erbB2抗体曲妥珠单抗[HerceptinTM]、抗EGFR抗体帕尼单抗、抗EGFR抗体西妥昔单抗[爱必妥、C225]和酪氨酸激酶抑制剂，这些酪氨酸激酶抑制剂包括erbB受体家族的抑制剂，如表皮生长因子家族受体(EGFR/erbBl)酪氨酸激酶抑制剂如吉非替尼或埃罗替尼、erbB2酪氨酸激酶抑制剂如拉帕替尼、和混合型erb1/2抑制剂如阿法替尼(afatanib)；类似策略可用于其他类别的生长因子和它们的受体，例如：肝细胞生长因子家族或它们的受体(包括c-met和ron)的抑制剂；胰岛素和胰岛素生长因子家族或它们的受体(IGFR、IR)的抑制剂，血小板衍生生长因子家族或它们的受体(PDGFR)的抑制剂，以及由其他受体酪氨酸激酶如c-kit、AnLK和CSF-1R介导的信号传导的抑制剂；还包括在PI3激酶信号传导途径中靶向信号传导蛋白的调节剂，例如PI3激酶同种型(如PI3K-α/β/γ)和ser/thr激酶(如AKT、mTOR(如AZD2014)、PDK、SGK、PI4K或PIP5K)的抑制剂；还包括以上未列出的丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂，例如，如维罗非尼等raf抑制剂，如司美替尼(AZD6244)等MEK抑制剂，如伊马替尼或尼罗替尼等Abl抑制剂，如依鲁替尼等Btk抑制剂，如福他替尼(fostamatinib)等Syk抑制剂，极光激酶抑制剂(例如AZD1152)，如JAK、STAT和IRAK4等其他ser/thr激酶的抑制剂，以及细胞周期素依赖性激酶抑制剂，例如CDK1、CDK7、CDK9和CDK4/6的抑制剂，如帕布昔利布；
iv)DNA损伤信号传导途径的调节剂，例如PARP抑制剂(例如奥拉帕尼)、ATR抑制剂或ATM抑制剂；
v)细胞凋亡和细胞死亡途径的调节剂，如Bcl家族调节剂(例如ABT-263/Navitoclax、ABT-199)；
(vi)抗血管生成剂，如抑制血管内皮生长因子的作用的那些药剂，[例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗(AvastinTM)和例如VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂，如索拉非尼、阿西替尼、帕唑帕尼、舒尼替尼和凡德他尼(以及通过其他机制起作用的化合物(例如利诺胺、整合素αvβ3功能的抑制剂和血管抑素))]；
(vii)血管破坏剂，如考布他汀A4；
(viii)抗侵袭剂，例如c-Src激酶家族抑制剂，像(达沙替尼，J.Med.Chem.[药物化学杂志]，2004，47，6658-6661)和伯舒替尼(SKI-606)，以及金属蛋白酶抑制剂，像马立马司他、尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂受体功能的抑制剂或针对乙酰肝素酶的抗体]；
(ix)免疫疗法方法，包括例如增加患者肿瘤细胞的免疫原性的离体和体内方法，如以如白介素2、白介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子等细胞因子转染，减少T细胞无变应性的方法，使用如细胞因子转染的树突状细胞等经转染免疫细胞的方法，使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法，以及使用抗独特型抗体的方法。特定实例包括靶向PD-1(例如BMS-936558)或CTLA4(例如伊匹单抗(ipilimumab)和曲美单抗(tremelimumab))的单克隆单抗；
(x)基于反义或RNAi的疗法，例如针对所列靶标的那些疗法。
(xi)基因疗法方法，包括例如置换异常基因(如异常p53或异常BRCA1或BRCA2)的方法；GDEPT(基因定向酶前药疗法)方法，如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌性硝基还原酶的那些方法；以及增强患者对化学疗法或放射疗法的耐受性的方法(如多重耐药性基因疗法)。
因此，在一个实施例中，提供了具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐以及另外的抗肿瘤物质，用于联合治疗癌症。
根据本说明书的这个方面，提供了适合用于在治疗癌症中使用的组合，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐和另一种抗肿瘤剂，特别是在上文的(i)-(xi)下所列的抗肿瘤剂中的任一种。具体来说，在以上(i)-(xi)下所列的抗肿瘤剂为要治疗的特定癌症的护理标准；本领域技术人员将理解“护理标准”的含义。
因此，在本说明书的另一个方面，提供了具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与另一种抗肿瘤剂的组合，特别是选自在上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂。
在本说明书的另一个方面，提供了具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与另一种抗肿瘤剂的组合，特别是选自在以上(i)下所列的抗肿瘤剂。
在本说明书的另一个方面，提供了具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐以及在以上(i)下所列的抗肿瘤剂中的任一种。
在本说明书的另一个方面，提供了适合用于在治疗癌症中使用的组合，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐和紫杉烷类，例如像泰素或多西他赛，适宜地为多西他赛。
在本说明书的另一个方面，提供了具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与另一种抗肿瘤剂的组合，特别是选自在上文的(ii)下所列的一者的抗肿瘤剂。
在本说明书的另一个方面，提供了适合用于在治疗癌症中使用的组合，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐和在以上(ii)下所列的抗激素剂中的任一种，例如在以上(ii)中所列的抗雌激素中的任一种、或例如在以上(ii)中所列的芳香酶抑制剂。
在本说明书的另一个方面，提供了适合用于在治疗癌症中使用的组合，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐和mTOR抑制剂，如AZD2014。
在本说明书的另一个方面，提供了适合用于在治疗癌症中使用的组合，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐和PI3Kα抑制剂，如化合物1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1，3，4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮或其药学上可接受的盐。
在本说明书的另一个方面，提供了适合用于在治疗癌症中使用的组合，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐和CDK4/6抑制剂，如帕布昔利布。
在一个方面，具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与在以上(ii)中所列的抗肿瘤剂或mTOR抑制剂(如AZD2014)或PI3K-α抑制剂(如化合物1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1，3，4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮)或CDK4/6抑制剂(如帕布昔利布)的上述组合适合用于在治疗乳腺癌或妇科癌症(如乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌，特别是乳腺癌，例如ER+ve乳腺癌)中使用。
在本文，当使用术语“组合”时，应当理解的是这是指同时、分开或顺序给药。在本说明书的一个方面，“组合”是指同时给药。在本说明书的另一个方面，“组合”是指分开给药。在本说明书的另一个方面，“组合”是指顺序给药。在顺序的或分开的给药的情况下，在给予第二组分上的延迟不应该如此以致失去该组合的有益效果。当分开或顺序地给予两种或更多种组分的组合时，将理解的是针对每种组分的剂量方案可以是不同于并且独立于其他组分。适宜地，本说明书的化合物每日给予一次。
根据本说明书的另一个方面，提供了药物组合物，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与选自在上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合，与药学上可接受的赋形剂相联合。
根据本说明书的另一个方面，提供了药物组合物，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与在以上(ii)下所列的抗激素剂中的任一种(例如在以上(ii)中所列的抗雌激素中的任一种、或例如在以上(ii)中所列的芳香酶抑制剂)的组合，与药学上可接受的赋形剂相联合。
在本说明书的另一个方面，提供了药物组合物，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐和mTOR抑制剂如AZD2014，与药学上可接受的赋形剂相联合。
在本说明书的另一个方面，提供了药物组合物，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐和PI3Kα抑制剂如化合物1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1，3，4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮，与药学上可接受的赋形剂相联合。
在本说明书的另一个方面，提供了药物组合物，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐和CDK4/6抑制剂(如帕布昔利布)，与药学上可接受的赋形剂相联合。
根据本说明书的另一个方面，提供了药物组合物，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与选自在上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合，与药学上可接受的赋形剂相联合，用于在治疗癌症中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了药物组合物，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与在以上(ii)下所列的抗激素剂中的任一种(例如在以上(ii)中所列的抗雌激素中的任一种、或例如在以上(ii)中所列的芳香酶抑制剂)的组合，与药学上可接受的赋形剂相联合，用于在治疗癌症中使用。
在本说明书的另一个方面，提供了药物组合物，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐和mTOR抑制剂如AZD2014，与药学上可接受的赋形剂相联合，用于在治疗癌症中使用。
在本说明书的另一个方面，提供了药物组合物，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐和PI3Kα抑制剂如化合物1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1，3，4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮，与药学上可接受的赋形剂相联合，用于在治疗癌症中使用。
在本说明书的另一个方面，提供了药物组合物，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐和CDK4/6抑制剂(如帕布昔利布)，与药学上可接受的赋形剂相联合，用于在治疗癌症中使用。
在一个方面，具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与在以上(ii)中所列的抗肿瘤剂或mTOR抑制剂(如AZD2014)或PI3K-α抑制剂(如化合物1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1，3，4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮)或CDK4/6抑制剂(如帕布昔利布)的上述药物组合物适合用于在治疗乳腺癌或妇科癌症(如乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌，特别是乳腺癌，例如ER+ve乳腺癌)中使用。
根据本说明书的另一个特征，提供了具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与选自与在上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合用于制造药剂的用途，该药剂用于在治疗如人等温血动物的癌症中使用。
根据本说明书的另一个方面，提供了具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与在以上(ii)下所列的抗激素剂中的任一种(例如在以上(ii)中所列的抗雌激素中的任一种、或例如在以上(ii)中所列的芳香酶抑制剂)的组合用于制造药剂的用途，该药剂用于在治疗如人等温血动物的癌症中使用。
在本说明书的另一个方面，提供了具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与mTOR抑制剂如AZD2014的组合用于制造药剂的用途，该药剂用于在治疗如人等温血动物的癌症中使用。
在本说明书的另一个方面，提供了具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与PI3Kα抑制剂如化合物1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1，3，4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮的组合用于制造药剂的用途，该药剂用于在治疗如人等温血动物的癌症中使用。
在本说明书的另一个方面，提供了具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与CDK4/6抑制剂(如帕布昔利布)的组合用于制造药剂的用途，该药剂用于在治疗如人等温血动物的癌症中使用。
在一个方面，具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与在以上(ii)中所列的抗肿瘤剂或mTOR抑制剂(如AZD2014)或PI3K-α抑制剂(如化合物1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1，3，4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮)或CDK4/6抑制剂(如帕布昔利布)的组合的上述用途适合用于在制造药剂中使用，该药剂用于在治疗乳腺癌或妇科癌症(如乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌，特别是乳腺癌，例如ER+ve乳腺癌)中使用。
因此，在本说明书的另一个特征中，提供了治疗需要这种治疗的如人等温血动物的癌症的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与选自于在上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合。
根据本说明书的另一个方面，提供了治疗需要这种治疗的如人等温血动物的癌症的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与选自在以上(ii)下所列的抗激素剂中的任一种(例如在以上(ii)中所列的抗雌激素中的任一种、或例如在以上(ii)中所列的芳香酶抑制剂)的组合。
在本说明书的另一个方面，提供了治疗需要这种治疗的如人等温血动物的癌症的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与mTOR抑制剂如AZD2014的组合。
在本说明书的另一个方面，提供了治疗需要这种治疗的如人等温血动物的癌症的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与PI3Kα抑制剂如化合物1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1，3，4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮的组合。
在本说明书的另一个方面，提供了治疗需要这种治疗的如人等温血动物的癌症的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与CDK4/6抑制剂(如帕布昔利布)的组合。
在治疗癌症的上述组合、药物组合物、用途和方法的一个方面，是用于治疗乳腺癌或妇科癌症(如乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌，特别是乳腺癌，例如ER+ve乳腺癌)的方法。
根据本说明书的另一个方面，提供了试剂盒，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与选自在上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合。
根据本说明书的另一个方面，提供了试剂盒，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐与选自在上文的(i)或(ii)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合。
根据本说明书的另一个方面，提供了试剂盒，其包含：
a)处于第一单位剂型的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐；
b)处于第二单位剂型的选自在上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂；以及
c)用于容纳所述第一和第二剂型的容器装置。
根据本说明书的另一个方面，提供了试剂盒，其包含：
a)处于第一单位剂型的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐；
b)处于第二单位剂型的选自在上文的(i)-(ii)下所列的一者的抗肿瘤剂；以及
c)用于容纳所述第一和第二剂型的容器装置。
根据本说明书的另一个方面，提供了试剂盒，其包含：
a)处于第一单位剂型的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐；
b)处于第二单位剂型的选自在以上(ii)中所列的抗肿瘤剂、mTOR抑制剂(如AZD2014)、PI3Kα抑制剂(如化合物1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1，3，4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮)和CDK4/6抑制剂(如帕布昔利布)；以及
c)用于容纳所述第一和第二剂型的容器装置。
可以在典型地根据常见处方方案进行的护理疗法标准之上添加如上所述的组合疗法。
虽然具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物主要具有作为用于在温血动物(包括人)中使用的治疗剂的价值，但它们也有用在需要抑制ER-α的任何时候。因此，它们有用于作为用于在开发新生物测试以及寻找新药理学药剂中使用的药理学标准。
个人化医疗
本说明书的另一个方面是基于鉴别编码ERα的基因的状态与用具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物进行治疗的潜在易感性之间的联系。具体来说，ERα基因状态可以指示患者不太可能响应于现有的激素疗法(如芳香酶抑制剂)，至少部分是因为一些ERα突变被认为是作为对现有治疗的抗性机制而出现。SERD(特别是可以按潜在较大剂量而没有过度不便地口服给予的SERD)然后有利地用来治疗可能对其他疗法有抗性的具有ERα突变的患者。因此，这提供了机会、方法和工具用于选择用具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物进行治疗的患者，特别是癌症患者。本说明书涉及患者选择工具和方法(包括个人化药物)。该选择是基于待治疗的肿瘤细胞是具有野生型还是突变型ERα基因。ERα基因状态因此可以被用作生物标志物，以表明选择用SERD进行治疗可以是有利的。为避免生疑，如本文所述的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物被认为对抗野生型和突变型ERα基因(至少是在提交本申请日鉴定的ERα基因中的那些突变)是同样有活性的。
明确需要将针对以下患者富集或用于选择这些患者的生物标志物：这些患者的肿瘤将对SERD(例如具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物)进行的治疗有响应。鉴别对一种药剂比另一种最可能有响应的患者的患者选择生物标志物在癌症治疗中为理想的，因为它们减少患有非响应性肿瘤的患者的不必要治疗，从而减少此类药剂的潜在副作用。
生物标志物可以描述为“作为正常生物过程、致病过程或对治疗性干预的药理学响应的指示剂客观地测量且评估的特性”。生物标志物为与特定病症或疾病相关联的任何可鉴别且可测量的指示剂，其中在生物标志物的存在或含量与该病症或疾病的一些方面(包括该病症或疾病的存在、水平或变化水平、类型、阶段、易感性或对用于治疗该病症或疾病的药物的响应性)之间存在相关性。相关性可以为定性的、定量的或定性且定量的。典型地，生物标志物为化合物、化合物片段或化合物组。此类化合物可以为在生物体中发现或通过生物体产生的任何化合物，包括蛋白质(和肽)、核酸和其他化合物。
生物标志物可以具有预测能力，并且因此可以用于预测或检测特定病症或疾病的存在、水平、类型或阶段(包括特定微生物或毒素的存在或水平)、对特定病症或疾病的易感性(包括遗传易感性)或对特定治疗(包括药物治疗)的响应。据认为在药物发现和开发的未来，生物标志物将通过改良研究与开发程序的效率而发挥日益重要的作用。生物标志物可以用作诊断剂、疾病进展监测剂、治疗监测剂和临床结果预测剂。例如，不同生物标志物研究项目试图鉴别出特定癌症以及特定心血管疾病和免疫疾病的标志物。据相信新的经验证的生物标志物的开发将使医疗和药物开发成本显著降低，并且使多种疾病和病症的治疗显著改善。
为了最佳设计临床试验并且为了从这些试验获得最多信息，可能需要生物标志物。该标志物在替代物和肿瘤组织中可以为可测量的。这些标志物理想地也将与功效相关并且由此可以最终用于患者选择。
因此，本说明书的这个方面的根本技术问题为鉴别对用具有化学式(I)的化合物进行治疗的患者分类的方法。该技术问题通过提供在本文的权利要求书和/或说明书中所表征的实施例来解决。
含有野生型ERα的肿瘤被认为对用具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物进行的治疗(例如作为一线治疗)是敏感的。肿瘤还可以响应于用具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物作为二线、三线或后续疗法进行的治疗并且这可能是有用的，具体来说，如果这些肿瘤含有突变型ERα并且因此可以对现有疗法(如AI)有抗性的话。在抗性环境中比在野生型肿瘤中需要更高剂量的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物。
本说明书提供了测定细胞对具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物的敏感性的方法。该方法包括测定所述细胞中的ERα基因状态。如果在细胞生长测定中具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物抑制细胞数目增加(通过抑制细胞增殖和/或通过增加细胞死亡)，那么将该细胞定义为对具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物敏感。本说明书的方法有用于通过生长抑制预测哪些细胞更可能对具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物有响应。
“代表肿瘤”的样品可以为经分离的实际肿瘤样品或者可以为已进一步加工的样品，例如从肿瘤样品进行PCR扩增的核酸样品。
定义：
在这个个人化医疗部分中：
“等位基因”是指遗传基因座的特定形式，通过它的特定核苷酸或氨基酸序列与其他形式相区分。
“扩增反应”为导致靶核酸优于非靶核酸进行特异性扩增的核酸反应。聚合酶链式反应(PCR)为熟知的扩增反应。
“癌症”在本文用于指由于细胞转化成赘生性表型所出现的赘生性生长。这种细胞转化通常涉及遗传突变。
“基因”为含有关于RNA产物的经调节生物合成的所有信息的DNA区段，包括启动子、外显子、内含子以及可以位于控制表达的5′或3′侧接区域内(不在该基因的转录部分内)的其他序列元件。
“基因状态”是指基因是野生型还是不是野生型(即突变型)。
“标记”是指能够产生指示在测定样品中存在靶聚核苷酸的可检测信号的组合物。合适的标记包括放射性同位素、核苷酸发色团、酶、底物、荧光分子、化学发光部分、磁性粒子、生物发光部分等。因此，标记为通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学、电学、光学或化学手段可检测的任何组合物。
“非同义变异”是指基因编码序列中或与基因编码序列重叠的变异(变化)，导致产生不同(经改变的)多肽序列。这些变异可能影响或可能不影响蛋白质功能并且包括错义变异体(导致一个氨基酸取代另一个)、无义变异体(由于产生过早终止密码子而产生截短多肽)以及插入/缺失变异体。
“同义变异”是指不影响所编码多肽的序列的基因编码序列中的变异(变化)。这些变异可以间接地(例如通过改变基因表达)影响蛋白质功能，但在不存在相反证据的情况下，通常认为是无害的。
“核酸”是指单链或双链DNA和RNA分子，包括自然界中所发现的天然核酸和/或经修饰的具有经修饰的主链或碱基的人工核酸，如本领域已知的。
“引物”是指能够充当用于合成与待复制的核酸链互补的引物延伸产物的起始点的单链DNA寡核苷酸序列。引物的长度和序列必须使其能够引发延伸产物的合成。典型引物在与靶序列基本上互补的序列长度中含有至少约7个核苷酸，但略微更长的引物为优选的。通常，引物含有约15-26个核苷酸，但也可以采用更长或更短引物。
“多态位点”为基因座内导致在群体中发现至少两个替代性序列的位置。
“多态现象”是指在个体中在多态位点处所观察到的序列变异。多态现象包括核苷酸取代、插入、缺失以及微卫星，并且可以(但无需)引起基因表达或蛋白质功能方面可检测的差异。在不存在对表达或蛋白质功能的影响证据的情况下，包括非同义变异体在内的常见多态现象通常视为包括在野生型基因序列的定义中。人多态现象和相关注释的目录(包括验证、观察到的频率和疾病关联)由NCBI(dbSNP：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ projects/SNP/)维护。请注意，当用于基因序列的背景下时的术语“多态现象(polymorphism)”不应与当用于化合物的固态形式(即化合物的结晶或无定形性质)的背景下的术语“多晶型现象(polymorphism)”混淆。技术人员将通过其背景了解所需的含义。
“探针”是指具有与待检测的等位基因的靶序列完全互补的序列的单链序列特异性寡核苷酸。
“响应”是通过根据实体瘤响应评估准则(Response Evaluation Criteria inSolid Tumours，RECIST)进行的测量来定义，涉及将患者分成两个主要的组：显示部分响应或稳定疾病的那些患者和显示进行性疾病的迹象的那些患者。
“严格杂交条件”是指在42℃下在包含50％甲酰胺、5x SSC(750mM NaCl、75mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(pH 7.6)、5x邓哈特溶液(Denhardt’s solution)、10％硫酸葡聚糖和20pg/mI变性剪切的鲑鱼精子DNA的溶液中孵育过夜，然后在0.1x SSC中在约65℃下洗涤过滤物。
“存活”涵盖患者的整体存活和无进展存活。
“整体存活”(OS)定义为从给药开始到由于任何原因死亡的时间。“无进展存活”(PFS)定义为从给药开始到第一次出现进行性疾病或由于任何原因死亡的时间。
根据本说明书的一个方面，提供了用于选择用具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物进行治疗的患者的方法，该方法包括提供来自患者的含有肿瘤细胞的样品；确定含有患者的肿瘤细胞的样品中的ERα基因是野生型还是突变型；并且基于以上来选择用具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物进行治疗的患者。
该方法可以包括或不包括实际患者样品分离步骤。因此，根据本说明书的一个方面，提供了用于选择用具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物进行治疗的患者的方法，该方法包括确定先前从该患者分离的含有肿瘤细胞的样品中的ERα基因是野生型还是突变型；并且基于以上来选择用具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物进行治疗的患者。
在一个实施例中，如果肿瘤细胞DNA具有突变型ERα基因，那么选择该患者用具有化学式(I)的化合物进行治疗。在其他实施例中，选择其肿瘤细胞DNA具有野生型ERα基因的患者用具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物进行治疗。
为了本说明书的目的，野生型的基因状态意在指示基因的正常或恰当表达以及所编码蛋白质的正常功能。相比之下，突变型状态意在指示功能改变的蛋白质的表达，与癌症中突变型ERα基因的已知作用(如本文所述)一致。任何数目的遗传或表观遗传变化(包括但不限于突变、扩增、缺失、基因组重排或甲基化特征变化)可以导致突变型状态。然而，如果此类变化仍然引起正常蛋白质或功能上等效变异体的恰当表达，那么基因状态被视为野生型。典型地将不产生功能突变型基因状态的变异体的实例包括同义编码变异体和常见多态现象(同义或非同义)。如下文所讨论，基因状态可以通过功能测定来评估，或者它可以从与参考序列的检测偏差的性质推断。
在某些实施例中，ERα基因的野生型或突变型状态通过这些基因中非同义核酸变异的存在或不存在来确定。观察到的非同义变异对应于未标注功能作用的已知常见多态现象，不促成突变型基因状态。
ERα基因中意味着突变型状态的其他变异包括剪接位点变异，这些变异在前体mRNA加工成mRNA期间降低内含子/外显子接合点的识别。这可以导致外显子跳跃或在剪接mRNA中包括通常内含的序列(内含子滞留或采用隐含的剪接接合点)。这可以转而导致产生相对于正常蛋白质具有插入和/或缺失的异常蛋白质。因此，在其他实施例中，如果在内含子/外显子接合点处存在改变剪接位点识别序列的变异体，那么该基因具有突变型状态。
关于ESR1，基因(GenBank登录号：NG_008493)、mRNA(GenBank登录号：NM_000125)和蛋白质(GenBank登录号：NP_000116或Swiss-Prot登录：P03372)的参考序列可用。本领域技术人员将能够基于与野生型比较DNA或蛋白质序列来确定ESRl基因状态，即特定ESR1基因是野生型还是突变型。
应当清楚的是，针对ERα基因所披露的基因和mRNA序列是代表性序列。在正常个体中，每个基因存在两个拷贝(母本和父本拷贝)，这些拷贝将可能具有一些序列差异，此外在群体内将存在基因序列的许多等位基因变异体。视为野生型的其他序列包括具有以下的那些序列：核酸序列的一种或多种同义变化(这些变化不改变所编码的蛋白质序列)、改变蛋白质序列但不影响蛋白质功能的非同义常见多态现象(例如种系多态现象)和内含子非剪接位点序列变化。
存在本领域技术人员可用以确定ERα的基因状态的许多技术。基因状态可以通过测定核酸序列来确定。这可以经由对全长基因进行直接测序或分析该基因内的特定位点，例如一般突变位点。
样品
待测试基因状态的患者样品可以为从个体获得或从个体可获得的任何含有肿瘤组织或肿瘤细胞的样品。测试样品宜为从个体获得的血液、口腔拭子、活检体或其他体液或组织的样品。特定实例包括：循环肿瘤细胞、血浆或血清中的循环DNA、从卵巢癌患者的腹水液分离的细胞、患有肿瘤的患者肺内的肺痰、来自乳腺癌患者的细针抽出物、尿液、外周血、细胞刮片、毛囊、皮肤钻孔或面颊样品。
将了解，测试样品同样可以为对应于测试样品中的序列的核酸序列，换句话说，样品核酸中的所有或一部分区域可以在分析之前先使用任何便利技术(例如聚合酶链式反应(PCR))扩增。核酸可以为基因组DNA或者分级的或全细胞RNA。在特定实施例中，RNA为全细胞RNA且直接用作使用随机引物或聚A引物来标记第一链cDNA的模板。可以根据标准方法从测试样品提取该样品中的核酸或蛋白质(参见Green和Sambrook编，Molecular Cloning：ALaboratory Manual[分子克隆：实验室手册]，(2012，第4版，第1-3卷，ISBN9781936113422)，纽约州冷泉港的冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，N.Y.))。
本说明书的诊断方法可以使用先前从个体或患者获取的样品进行。此类样品可以通过冷冻保存或者固定并包埋在福尔马林-石蜡或其他介质中。可替代地，可以获得且使用含有新鲜肿瘤细胞的样品。
可以使用来自任何肿瘤的细胞应用本说明书的方法。用具有化学式(I)的化合物进行治疗的合适的肿瘤已在上文中描述。
用于检测核酸的方法
在本说明书的上下文中，可以采用突变型ERα核酸的检测来选择药物治疗。因为这些基因中的突变发生在DNA层面，所以本说明书的方法可以基于检测基因组DNA中的突变或变化、以及转录物和蛋白质本身。可能需要通过分析转录物和/或多肽来确认基因组DNA中的突变，以便确保检测到的突变实际上在受试者体内表达。
本领域技术人员将清楚，存在可以用于检测基因中一个或多个位置处变异体核苷酸的存在或不存在的大量分析程序。通常，等位基因变异的检测需要突变辨别技术、任选地扩增反应(如基于聚合酶链式反应的扩增反应)以及任选地信号生成系统。在本领域中可获得多种突变检测技术并且这些突变检测技术可以与信号生成系统组合使用，在本领域中可获得许多信号生成系统。用于检测等位基因变异的许多方法由Nollau等人，Clin.Chem.[临床化学]，1997，43，1114-1120；Anderson SM.Expert Rev Mol Diagn.[分子诊断学专家评论]，2011，11，635-642；Meyerson M.等人，Nat Rev Genet.[自然综述·遗传学]，2010，11，685-696综述；以及综述于标准教科书中，例如“Laboratory Protocols for Mutation Detection[突变检测的实验室方案]”，由U.Landegren编，牛津大学出版社(OxfordUniversity Press)，1996和“PCR”，第2版，由Newton和Graham编，拜尔斯科学出版社有限公司(BIOS Scientific Publishers Limited)，1997。
如上所述，测定患有癌症的患者中ERα基因的特定变化或多种变化的存在或不存在可以按多种方式进行。此类测试通常使用从生物样品收集的DNA或RNA进行，这些生物样品是例如组织活检体、尿液、大便、痰、血液、细胞、组织刮片、乳房抽出物或其他细胞材料，并且可以通过多种方法进行，这些方法包括但不限于PCR、与等位基因特异性探针杂交、酶突变检测、错配的化学裂解、质谱或DNA测序(包括微测序)。
合适的突变检测技术包括扩增阻碍突变系统(ARMSTM)、扩增阻碍突变系统线性延伸(ALEXTM)、竞争性寡核苷酸引发系统(COPS)、塔克曼(Taqman)、分子信标(MolecularBeacons)、限制性片段长度多态现象(RFLP)以及基于限制位点的PCR和荧光共振能量转移(FRET)技术。
在特定实施例中，用于测定生物标志物基因内的一个或多个核苷酸所用的方法选自：等位基因特异性扩增(等位基因特异性PCR)(如扩增阻碍突变系统(ARMS))、测序、等位基因辨别测定、杂交、限制性片段长度多态现象(RFLP)或寡核苷酸连接测定(OLA)。
在特定实施例中，与等位基因特异性探针杂交可以通过以下方式进行：(1)溶液中结合到具有经标记样品的固相(例如玻璃、硅、尼龙膜)的等位基因特异性寡核苷酸，例如如在许多DNA芯片应用中；或(2)溶液中的经结合样品(通常为经克隆DNA或PCR扩增的DNA)和经标记寡核苷酸(等位基因特异性或较短以便允许通过杂交来测序)。诊断测试可以涉及一组变化，通常在固体支持物上，这使得能够同时测定一种以上变化。此类杂交探针在本领域是熟知的(参见例如，Green和Sambrook编，Molecular Cloning：A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册]，(2012，第4版，第1-3卷，ISBN 9781936113422)，纽约州冷泉港的冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.))并且可以跨越两个或更多个变化位点。
因此，在一个实施例中，检测至少一个突变的存在或不存在使含有假定突变位点的ERα核酸与至少一种核酸探针接触。探针优先在选择性杂交条件下与包括变化位点且在该变化位点处含有互补核苷酸碱基的核酸序列杂交。杂交可以使用本领域技术人员已知的标记用可检测标记来检测。此类标记包括但不限于放射性、荧光、染料和酶标记。
在另一个实施例中，检测至少一个突变的存在或不存在使含有假定突变位点的ERα核酸与至少一种核酸引物接触。引物优先在选择性杂交条件下与包括变化位点且在该变化位点处含有互补核苷酸碱基的核酸序列杂交。
用作特异性扩增的引物的寡核苷酸可以携带与分子中间(因此扩增取决于差异性杂交；参见例如，Gibbs等人，1989.Nucl.Acids Res.[核酸研究]，17，2437-248)或在一个引物的3′远端处的感兴趣的突变互补的核苷酸碱基，其中在恰当的条件下，可以防止错配或减少聚合酶延伸(参见例如，Prossner，1993，Tibtech，11 238)。
在又另一个实施例中，检测至少一个突变的存在或不存在包括对至少一个核酸序列进行测序且比较所获得的序列与已知野生型核酸序列。
可替代地，至少一个突变的存在或不存在包括质谱测定至少一个核酸序列。
在一个实施例中，检测至少一种核酸变化的存在或不存在包括进行聚合酶链式反应(PCR)。使含有假设变化的靶核酸序列扩增且测定经扩增的核酸的核苷酸序列。测定经扩增的核酸的核苷酸序列包括对至少一个核酸区段进行测序。可替代地，扩增产物可以使用能够根据它们的大小分离扩增产物的任何方法来分析，包括自动化和手动凝胶电泳等。
基因组核酸中的突变有利地通过基于扩增核酸片段中的迁移率变化的技术来检测。例如，Chen等人，Anal Biochem[分析生物化学]1996，239，61-9描述了通过竞争性迁移率变化测定来检测单碱基突变。此外，基于Marcelino等人，BioTechniques[生物技术]1999，26，1134-1148的技术的测定是可商购的。
在一个特定实例中，可以使用毛细管异双链体分析以基于毛细管系统中双链体核酸的迁移率变化来检测突变的存在作为存在错配的结果。
从样品产生用于分析的核酸通常需要核酸扩增。许多扩增方法依赖于酶链式反应(如聚合酶链式反应、连接酶链式反应或自持序列复制)或来自已进行克隆的所有或一部分载体的复制。优选地，根据本说明书的扩增为指数扩增，如通过例如聚合酶链式反应所展现。
许多靶标和信号扩增方法已描述于文献中，例如这些方法的总体综述描述于Landegren，U.等人，.Science[科学]，1988 242，229-237和Lewis，R.，Genetic Engineering News[基因工程新闻]1990，10，54-55中。这些扩增方法可以用于我们说明书的方法中，并且包括聚合酶链式反应(PCR)、原位PCR、连接酶扩增反应(LAR)、连接酶杂交、Qβ噬菌体复制酶、基于转录的扩增系统(TAS)、基因组扩增与转录物测序(GAWTS)、基于核酸序列的扩增(NASBA)和原位杂交。适合用于在不同扩增技术中使用的引物可以根据本领域已知的方法制备。
聚合酶链式反应(PCR)PCR为核酸扩增方法，尤其描述于美国专利第4,683,195号和第4,683,202号中。PCR由DNA聚合酶产生的引物延伸反应的重复循环组成。使靶DNA热变性且使两个寡核苷酸杂交，这两个寡核苷酸囊括待扩增的DNA相对链上的靶序列。这些寡核苷酸变成用于与DNA聚合酶一起使用的引物。通过引物延伸拷贝DNA来制备两条链的第二拷贝。通过重复热变性、引物杂交和延伸的循环，靶DNA可以在约二至四小时内扩增一百万倍或更多。PCR为分子生物学工具，它必须与检测技术结合用于测定扩增结果。PCR的优点为它通过将靶DNA的量在大约4小时内扩增一百万至十亿倍来增加敏感性。PCR可以用于在诊断背景下扩增任何已知核酸(Mok等人，Gynaecologic Oncology[妇科肿瘤学]，1994，52：247-252)。
如扩增阻碍突变系统(ARMSTM)(Newton等人，Nucleic Acids Res.[核酸研究]，1989，17，2503-2516)等的等位基因特异性扩增技术也可以用于检测单碱基突变。在恰当的PCR扩增条件下，位于引物的3′端的单碱基错配对完全匹配的等位基因的优先扩增来说已足够(Newton等人，1989，同上)，允许辨别密切相关的种类。使用上述引物的扩增系统的基础是具有错配3′残基的寡核苷酸在恰当的条件下将不充当PCR引物。此扩增系统允许在琼脂糖凝胶电泳之后仅通过检查反应混合物来进行基因分型。
扩增产物的分析可以使用能够根据它们的大小分离扩增产物的任何方法来进行，包括自动化和手动凝胶电泳、质谱等。
核酸分离、扩增和分析的方法对本领域技术人员来说为常规的并且方案的实例可以见于例如Green和Sambrook编，Molecular Cloning：A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册]，(2012，第4版，第1-3卷，ISBN 9781936113422)，纽约州冷泉港的冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.)。PCR扩增中所用方法的尤其有用的方案来源是PCR(Basics：From Background to Bench)[PCR(基础：从背景到实验台)]，M.J.McPherson，S.G.Mailer，R.Beynon，C.Howe，Springer Verlag；第1版(2000年10月15日)，ISBN：0387916008。
本说明书还提供了预测和诊断试剂盒，其包含用于扩增ERα基因中的靶核酸的简并引物；以及说明书，该说明书包含扩增方案和结果分析。该试剂盒还可以可替代地包含用于进行扩增和扩增产物的分析的缓冲剂、酶和容器。该试剂盒也可以为包含其他工具(如DNA微阵列或其他支持物)的筛选或诊断试剂盒的组件。优选地，该试剂盒还提供了一个或多个对照模板，如从正常组织样品分离的核酸；和/或一系列代表参考基因中的不同变化的样品。
在一个实施例中，该试剂盒提供了两个或更多个引物对，每对均能够扩增参考(ERα)基因的不同区域(每个区域具有可能变化位点)，由此提供用于分析生物样品在一个反应或若干平行反应中的若干基因变化的表达的试剂盒。
该试剂盒中的引物可以经标记(例如经荧光标记)以促进检测扩增产物以及随后分析核酸的变化。该试剂盒还可以允许在一次分析中检测一种以上变化。组合试剂盒将因此包含能够扩增参考基因的不同区段的引物。这些引物可以例如使用不同的荧光标记进行差示性标记，以便在这些变化之间进行区分。
在另一个方面，本说明书提供了治疗罹患癌症的患者的方法，该方法包括：确定该患者的肿瘤细胞中的ERα基因的突变型或野生型状态，并且如果ERα基因是突变型，那么向该患者给予有效量的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物。
如本文所用，术语“有效”和“有效性”包括药理学有效性和生理学安全性两者。药理学有效性是指治疗在患者体内产生所需的生物作用的能力。生理学安全性是指由给予治疗在细胞、器官和/或生物体层面上造成的毒性程度或其他不良生理学作用(通常称为副作用)。“不太有效”意指该治疗产生治疗学上显著更低程度的药理学有效性和/或治疗学上更大程度的不良生理学作用。
根据本说明书的另一个方面，提供了具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐用以治疗其肿瘤细胞已经鉴别为具有突变型ERα基因的癌症患者的用途。
根据本说明书的另一个方面，提供了具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗具有已经鉴别为携带突变型ERα基因的肿瘤细胞的癌症。
根据本说明书的另一个方面，提供了治疗具有已经鉴别为携带突变型ERα基因的肿瘤细胞的癌症的方法，该方法包括给予有效量的具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物或其药学上可接受的盐。
在仍另外的实施例中，本说明书涉及药物组合物，其包含具有化学式(I)、(IA)、(IB)、(IC)或(ID)的化合物，用于在预防和治疗具有已经鉴别为携带突变型ERα基因的肿瘤细胞的癌症中使用。
对于所有以上方面，所测定/鉴别的ERα的突变体形式处于基因中的所有位置处。
对于所有以上方面，使用如乳腺癌等肿瘤作为一个实例，所测定/鉴别的ERα的特定突变体形式为在位置Ser463Pro、Val543Glu、Leu536Arg、Tyr537Ser、Tyr537Asn和Asp538Gly处的那些突变体形式。
附图说明
图1显示了N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的形式A的X射线粉末衍射图。
图2显示了N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的形式A的DSC/TGA热谱图。
图3显示了N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的形式B的X射线粉末衍射图。
图4显示了N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的形式C的X射线粉末衍射图。
图5显示了N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的形式C的DSC/TGA热谱图。
图6显示了N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的形式D的X射线粉末衍射图。
图7显示了N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的形式D的DSC/TGA热谱图。
图8显示了N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的形式E的X射线粉末衍射图。
图9显示了N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的形式E的DSC/TGA热谱图。
图10显示了N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的形式F的X射线粉末衍射图。
图11显示了N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的形式G的X射线粉末衍射图。
图12显示了小鼠中N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的人亲本MCF7异种移植物抗肿瘤功效研究的结果。
图13显示了小鼠中N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的人Y537SESR1突变型MCF7异种移植物抗肿瘤功效研究的结果。
图14显示了小鼠中N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的人ESR1突变型乳腺癌患者衍生的异种移植物CTC174抗肿瘤功效研究的结果。
图15显示了小鼠中N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺和帕布昔利布的组合的人ESR1突变型乳腺癌患者衍生的异种移植物CTC174抗肿瘤功效研究的结果。
图16显示了小鼠中N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺和维塞替布(AZD2014)的组合的人ESR1突变型乳腺癌患者衍生的异种移植物CTC174抗肿瘤功效研究的结果。
实例
本说明书中描述的化合物进一步在以下实例中说明。这些实例仅通过说明的方式给出并且是非限制性的。通常：
(i)除非另行说明，在环境温度(即在17℃至25℃范围内)下和在如氮气等惰性气体的气氛下进行操作；
(ii)通过旋转蒸发或利用Genevac设施或Biotage v10蒸发器在真空中进行蒸发且在通过过滤去除残余固体之后进行后处理程序；
(iii)在自动化的Teledyne IscoRf或Teledyne Isco上使用预装的RediSep Rf GoldTM硅胶柱(20-40μm，球形颗粒)、GraceResolvTM筒(二氧化硅)或Silicycle筒(40-63μm)进行快速色谱法纯化。
(iv)制备型色谱法在具有UV收集的Gilson制备型HPLC仪上进行或通过超临界流体色谱法在具有MS和UV引发收集的Waters Prep 100 SFC-MS仪上或在具有UV收集的TharMultiGram III SFC仪上进行；
(v)手性制备型色谱法在具有UV收集的Gilson仪(233注射器/级分收集器、333和334泵、155UV检测器)或用Gilson 305注射运行的Varian Prep Star仪(2x SD1泵、325UV检测器、701级分收集器)泵上进行；
(vi)产率(当存在时)并不必需为可获得的最大值；
(vii)通常，具有化学式I的终产物的结构通过核磁共振(NMR)光谱法确认；NMR化学位移值是以δ级测量的[质子磁共振光谱使用Bruker Avance 500(500MHz)或BrukerAvance 400(400MHz)仪测定]；除非另行说明，测量在环境温度下进行；使用以下缩写：s，单峰；d，二重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；dd，双二重峰；ddd，双二重峰的双重峰；dt，双三重峰；bs，宽信号
(viii)通常，具有化学式I的终产物在液相色谱法之后还通过质谱法(LCMS或UPLC)来表征；如下进行UPLC：使用配备有Waters SQ质谱仪的Waters UPLC(柱温40，UV＝220-300nm，质谱＝具有正/负转换的ESI)以1ml/min的流速使用97％A+3％B至3％A至97％B的溶剂系统进行1.50min(连同平衡回到起始条件等的总运行时间1.70min)，其中A＝在水中0.1％甲酸(用于酸工作)或在水中0.1％氨(用于碱工作)B＝乙腈。对于酸分析，使用的柱是Waters Acquity HSS T3 1.8μm2.1x50mm；对于碱分析，使用的柱是Waters Acquity BEH1.7μm 2.1x50mm；如下进行LCMS：使用配备有Waters ZQ ESCi质谱仪和PhenomenexGemini-NX(50x2.1mm5μm)柱的Waters Alliance HT(2795)以1.1ml/min的流速95％A至95％B进行4min，保持0.5min。将改性剂保持在恒定的5％C(50∶50乙腈∶含0.1％甲酸的水)或D(50∶50乙腈∶含0.1％氢氧化铵(0.88SG)的水，取决于其是酸性还是碱性方法。
(ix)通常使用SCX-2(拜泰齐公司(Biotage)，丙磺酸官能化的二氧化硅，使用三官能硅烷制造，未封端的)筒进行离子交换纯化。
(x)中间体纯度通过薄层色谱、质谱、HPLC(高效液相色谱法)和/或NMR分析来评估；
(xi）使用以下缩写：-
AcOH 乙酸
aq. 水性
Boc 叔丁氧基羰基
n-BuLi 正丁基锂
tBuOH 叔丁醇
Brettphos 2-(二环己基膦基)3，6-二甲氧基-
2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯
CDCl3 氘代氯仿
CHCl3 氯仿
Conc. 浓缩的
DCM 二氯甲烷
DIPEA 二异丙基乙胺
DMAP 二甲基氨基吡啶
DMSO 二甲亚砜
EtOH 乙醇
EtOAc 乙酸乙酯
HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1，2，3-
三唑并[4，5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐
HCl 盐酸
HPLC 高效液相色谱法
K2CO3 碳酸钾
MeOH 甲醇
MgSO4 硫酸镁
NaH 氢化钠
NaHCO3 碳酸氢钠
Na2SO4 硫酸钠
Pd2(dba)3 三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)
Rac-BINAP (±)-2，2′-双(二苯基膦基)-1，1′-联萘
rt/RT 室温
RockPhos第3代 [(2-二-叔丁基膦基-3-甲氧基-6-
预催化剂 甲基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯基)-2-(2-
氨基联苯基)]钯(II)甲磺酸盐
Ruphos 2-二环己基膦基-2′，6′-二异丙氧基-1，1′-联
苯
sat. 饱和的
SFC 超临界流体色谱法
sol. 溶液
TBAF 四正丁基氟化铵
TEA 三乙胺
THF 四氢呋喃
THP 四氢吡喃
TFA 三氟乙酸
Xantphos 4，5-双(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫吨
实例1
N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并 [4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺
将[(2-二-环己基膦基-3，6-二甲氧基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯基)-2-(2′-氨基-1，1′-联苯基)]钯(II)甲磺酸盐(BrettPhos Pd G3)(6.80mg，7.50μmol)加入(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(85mg，0.15mmol)、1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(29.7mg，0.23mmol)和叔丁醇钠(28.8mg，0.30mmol)在脱气的1，4-二噁烷(1.5mL)中的悬浮液中，并且将反应加热至90℃持续3小时。在冷却后，将反应用DCM稀释并且用水洗涤。将水层用DCM萃取，然后将合并的有机物干燥并且蒸发。将粗残余物溶于DCM(2mL)中，并且添加TFA(0.7mL)。将反应在室温下搅拌1小时，然后将它用DCM稀释，并且通过添加饱和NaHCO3溶液碱化。将各层分离，并且将水相用DCM萃取。将合并的有机物干燥并且蒸发，然后将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为EtOAc中0-20％MeOH)纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈米色固体的N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(39.0mg，49％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.09(3H，d)，1.83(2H，ddd)，2.65-2.86(4H，m)，2.96-3.08(1H，m)，3.11(1H，dd)，3.22(2H，d)，3.38(3H，s)，3.51-3.63(2H，m)，3.73-3.82(1H，m)，3.82(3H，s)，3.86(2H，q)，4.15-4.28(1H，m)，4.43(1H，t)，4.53(1H，t)，5.37(1H，s)，5.88(1H，dd)，6.14(1H，d)，6.46(1H，d)，6.80(1H，d)，7.13(1H，d)，8.04(1H，d)。m/z：ES+[M+H]+532。
如下制备(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉：
2，2-二氟-3-(三苯甲氧基)丙-1-醇的制备
将2，2-二氟丙烷-1，3-二醇(2.50g，22.3mmol)溶于DCM(61.7mL)和THF(15.4mL)中。添加DIPEA(3.93mL，22.3mmol)，随后添加(氯甲烷三基)三苯(6.22g，22.3mmol)，并且最后添加DMAP(0.288g，2.23mmol)。将反应加热至40℃持续2小时。冷却后，将反应用1N HCl溶液洗涤，然后干燥并且蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-25％EtOAc)纯化。将纯级分蒸干，以提供呈无色固体的2，2-二氟-3-(三苯甲氧基)丙-1-醇(4.43g，56％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)3.42(2H，t)，3.92(2H，t)，7.23-7.3(4H，m)，7.3-7.39(6H，m)，7.39-7.49(6H，m)。
((2，2-二氟-3-甲氧基丙氧基)甲烷三基)三苯的制备
将氢化钠(0.562g，14.0mmol)加入2，2-二氟-3-(三苯甲氧基)丙-1-醇(4.15g，11.7mmol)在THF(46mL)的溶液中，并且将反应搅拌1小时，然后将碘甲烷(0.802mL，12.9mmol)添加在THF(5mL)中。将反应再次搅拌1小时。将反应用水和盐水淬灭，然后用EtOAc萃取。将有机层干燥，并且蒸发，以提供呈浅黄色油的((2，2-二氟-3-甲氧基丙氧基)甲烷三基)三苯(4.18g，97％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)3.36(2H，t)，3.40(3H，s)，3.77(2H，t)，7.15-7.28(3H，m)，7.28-7.38(6H，m)，7.39-7.47(6H，m)。
2，2-二氟-3-甲氧基丙基三氟甲磺酸酯的制备
将三氟甲磺酸酐(1.918mL，11.40mmol)加入((2，2-二氟-3-甲氧基丙氧基)甲烷三基)三苯(4.00g，10.9mmol)在DCM(39.6mL)的溶液中。将反应搅拌30分钟，然后添加三乙基硅烷(1.934mL，11.94mmol)，并且将反应再次搅拌30分钟。将反应蒸发，并且将三氟甲磺酸酯直接用于下一阶段。
(R)-1-(3-溴-2-甲基苯基)丙-2-胺的制备
在-78℃下，将n-BuLi(26.1mL，41.8mmol)加入1，3-二溴-2-甲苯(9.95g，39.8mmol)在THF(100mL)中的溶液中。搅拌30分钟后，逐份添加(R)-叔丁基4-甲基-1，2，3-噁噻唑烷-3-甲酸酯2，2-二氧化物(10.39g，43.8mmol)，并且将反应再次搅拌30分钟，之后允许经30分钟加温至0℃。添加1N柠檬酸，并且将混合物搅拌5分钟，之后用EtOAc(x2)萃取。将合并的有机相蒸发。在室温下，将残余物在二噁烷(69.7mL，278.7mmol)的4M HCl中搅拌1小时，然后将挥发物蒸发。将残余物悬浮于二乙基乙醚中，并且用水(x2)萃取。将合并的水相通过添加2N Na2CO3进行碱化，然后用DCM(x3)萃取。将合并的有机相经MgSO4干燥并且浓缩，以提供呈黄色油的(R)-1-(3-溴-2-甲基苯基)丙-2-胺(7.55g，83％)。1H NMR(400MHz，CDCl3，27℃)1.13(3H，d)，1.43(2H，s)，2.40(3H，s)，2.61(1H，dd)，2.77(1H，dd)，3.14(1H，dq)，6.97(1H，t)，7.08(1H，d)，7.43(1H，d)。m/z(ES+)，[M+H]+＝228。
(R)-N-(1-(3-溴-2-甲基苯基)丙-2-基)-2，2-二氟-3-甲氧基丙烷-1-胺的制备
将2，2-二氟-3-甲氧基丙基三氟甲磺酸酯(3.03g，11.73mmol)(来自先前步骤的粗产物)加入(R)-1-(3-溴-2-甲基苯基)丙-2-胺(2.327g，10.2mmol)和DIPEA(2.82mL，16.32mmol)在1，4-二噁烷(34.3mL)的溶液中，并且将反应加热至80℃过夜。冷却后，将挥发物蒸发，然后将残余物溶于DCM中，并且用盐水洗涤。将有机相干燥并且蒸发，然后将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-100％EtOAc)纯化。将纯的级分蒸干，以提供呈浅黄色油的(R)-N-(1-(3-溴-2-甲基苯基)丙-2-基)-2，2-二氟-3-甲氧基丙烷-1-胺(2.330g，68％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)1.06(3H，d)，2.40(3H，s)，2.63(1H，dd)，2.82(1H，dd)，2.86-2.94(1H，m)，2.95-3.11(2H，m)，3.38(3H，s)，3.51-3.63(2H，m)，6.94-7(1H，m)，7.07(1H，dd)，7.4-7.51(1H，m)。m/z：ES+[M+H]+336。
(R)-3-(2-((2，2-二氟-3-甲氧基丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺的制备
将Pd2(dba)3(0.184g，0.20mmol)和外消旋-BINAP(0.250g，0.40mmol)加入(R)-N-(1-(3-溴-2-甲基苯基)丙-2-基)-2，2-二氟-3-甲氧基丙烷-1-胺(2.25g，6.69mmol)、苯甲酮亚胺(1.334g，7.36mmol)和叔丁醇钠(0.965g，10.0mmol)在脱气的甲苯(28.5mL)的悬浮液中，并且将反应加热至90℃持续3小时。冷却后，大部分甲苯被蒸发，然后将残余物溶于DCM中，并且用水洗涤。将水相用DCM萃取，然后将这些有机物蒸发至约50mL体积。添加2NHCl溶液(50mL)，并且将双相混合物剧烈搅拌30分钟。将各层分离，然后将水层用DCM萃取。将有机相用1N HCl反萃取。将合并的水相通过添加固体K2CO3进行碱化，然后用DCM(x3)萃取，并且将合并的DCM萃取物干燥并且蒸发，以提供呈淡棕色油的(R)-3-(2-((2，2-二氟-3-甲氧基丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(1.780g，98％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)1.06(3H，d)，2.11(3H，s)，2.59(1H，dd)，2.75(1H，dd)，2.86-2.94(1H，m)，2.94-3.12(2H，m)，3.38(3H，s)，3.53-3.63(4H，m)，6.5-6.68(2H，m)，6.86-7.01(1H，m)。m/z：ES+[M+H]+273。
(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-3，5-二甲基-1， 2，3，4-四氢异喹啉-6-胺的制备
将(R)-3-(2-((2，2-二氟-3-甲氧基丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(490mg，1.80mmol)和4-溴-2-甲氧基苯甲醛(813mg，3.78mmol)在乙酸(8.8mL)和水(0.162mL，9.00mmol)中加热至75℃过夜。冷却后，在真空下蒸发乙酸，然后将残余物溶于EtOAc(20mL)中并加入2N HCl溶液(20mL)。将双相混合物搅拌30分钟，然后分离各层。用水萃取有机相，然后通过添加2N NaOH溶液碱化水相，并用DCM(x2)萃取。将合并的DCM层干燥并且蒸发，然后将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈米色固体的(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(384mg，46％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.03(3H，d)，2.07(3H，s)，2.42(1H，dd)，2.60-2.76(2H，m)，2.99(1H，ddd)，3.34(1H，d)，3.36(3H，s)，3.52(2H，s)，3.54-3.66(1H，m)，3.76(1H，ddd)，3.87(3H，s)，5.28(1H，s)，6.47(2H，s)，6.59(1H，d)，6.88(1H，dd)，7.01(1H，d)。m/z：ES+[M+H]+469。
(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-6，7，8， 9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
在-10℃，将在水(0.2mL)中的亚销酸钠(59.8mg，0.87mmol)加入(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(370mg，0.79mmol)于丙酸(2628μL)/水(526μL)中的冷却溶液中。搅拌反应1小时，然后加入冰冷的EtOAc(20mL)。通过添加冷的饱和NaHCO3溶液淬灭反应并搅拌15分钟，之后允许加温至室温。将各层分离，并且将水相用EtOAc萃取。将合并的有机物干燥并且蒸发，然后将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈米色固体的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(252mg，67％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.10(3H，d)，2.72(1H，td)，2.85(1H，dd)，3.08(1H，ddd)，3.16(1H，dd)，3.36(3H，s)，3.48-3.66(2H，m)，3.65-3.81(1H，m)，3.90(3H，s)，5.44(1H，s)，6.59(1H，d)，6.77(1H，d)，6.89(1H，dd)，7.05(1H，d)，7.19(1H，dd)，8.07(1H，d)。m/z：ES+[M+H]+480。
(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-3-(四 氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将3，4-二氢-2H-吡喃(0.064mL，0.70mmol)加入(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(240mg，0.50mmol)和对甲苯磺酸水合物(9.51mg，0.05mmol)在DCM(2.5mL)的溶液中，并且将反应加热至40℃持续1小时。冷却后，将反应用DCM稀释，并且用饱和的NaHCO3溶液洗涤。将有机相干燥并且蒸发。使粗残余物通过硅胶塞(EtOAc/庚烷1∶1作为洗脱液)，并且蒸发滤液，以提供呈淡黄色固体且为5∶1比例的THP区域异构体(各THP区域异构体为非对映异构体混合物)的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(262mg，93％)。m/z：ES+[M+H]+564。
(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将碳酸钾(1.605g，11.61mmol)、氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(1.0g，5.81mmol)和1-氟-3-碘丙烷(1.146g，6.10mmol)悬浮于乙腈(11.61mL)中并密封在微波管中。将反应在微波反应器中加热至95℃持续15分钟。将反应冷却至室温，用EtOAc(100mL)稀释，并由饱和NaHCO3(50mL)萃取。将有机相经MgSO4干燥，过滤并蒸发，以提供呈黄色固体的(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.248g，93％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，22℃)1.44(9H，s)，1.68-1.80(2H，m)，2.56(2H，t)，2.88(2H，s)，3.66(2H，t)，4.31(1H，d)，4.43(1H，t)，4.53(1H，t)，4.90(1H，s)。
1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺的制备
将TFA(2.69ml)加入(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.248g，5.37mmol)在DCM(8.06mL)中的溶液中，并且将反应在室温搅拌1小时。蒸发挥发物并且通过离子交换色谱法(使用SCX柱)纯化。将所需产物使用1M NH3/MeOH从柱上洗脱，并且将纯级分蒸发至干燥，以提供呈无色油的1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(0.697g，98％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.66-1.83(2H，m)，1.96(3H，s)，2.54(2H，t)，2.67(2H，td)，3.58-3.70(2H，m)，4.43(1H，t)，4.52(1H，t)。
实例2
6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4， 3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺
将[(2-二-环己基膦基-3，6-二甲氧基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯基)-2-(2′-氨基-1，1′-联苯基)]钯(II)甲磺酸盐(BrettPhos Pd G3)(6.83mg，8.00μmol)和叔丁醇钠(48.0mg，0.50mmol)加入(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(107mg，0.20mmol)和1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(52.9mg，0.40mmol)于1，4-二噁烷(1.6mL)中的脱气溶液中，并且将反应加热至90℃持续5小时。在冷却后，将反应用DCM稀释并且用水洗涤。将有机相蒸发，然后溶于DCM(2mL)中，之后添加TFA(1mL)。将混合物在室温下搅拌1小时，然后用DCM稀释，并且用饱和的NaHCO3溶液洗涤。将各层分离，并且将水相用DCM萃取。将合并的有机物干燥并且蒸发，然后将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为EtOAc中0-20％MeOH)纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈米色固体的6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺(83mg，83％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)1.12(3H，d)，1.79(2H，ddd)，2.71(2H，t)，2.75-2.90(2H，m)，3.06-3.23(3H，m)，3.39(3H，s)，3.51-3.66(2H，m)，3.66-3.76(1H，m)，3.76-3.84(2H，m)，4.14(1H，s)，4.44(2H，t)，4.53(1H，t)，5.06(1H，s)，6.80(1H，dd)，6.88(1H，d)，7.13(2H，dd)，7.84(1H，d)，7.99(1H，d)。m/z：ES+[M+H]+503。
如下制备(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉：
(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-2-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-3，5-二甲基-1，2，3， 4-四氢异喹啉-6-胺的制备
将5-溴吡啶甲醛(1172mg，6.30mmol)加入(R)-3-(2-((2，2-二氟-3-甲氧基丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(817mg，3.00mmol)在乙酸(14.7mL)和水(270μL，15.0mmol)的溶液中，并且将反应加热至80℃持续2小时。冷却后，将挥发物在真空下蒸发。将残余物溶于DCM中，并且用饱和的NaHCO3溶液洗涤。将有机物蒸发至体积约20mL，并且添加2N HCl溶液(20mL)。将双相混合物搅拌15分钟，然后分离。将有机层用水萃取，然后将水相用DCM反萃取。然后将水相通过添加固体K2CO3进行碱化，然后用DCM萃取。将有机萃取物干燥并且蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化。将纯度级分蒸干，以提供呈米色固体的(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-2-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(810mg，61％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)1.07(3H，d)，2.05(3H，s)，2.49(1H，d)，2.75(2H，dd)，3.04-3.17(1H，m)，3.30-3.36(1H，m)，3.37(3H，s)，3.58-3.74(2H，m)，4.96(1H，s)，6.51(1H，d)，6.60(1H，d)，7.22(1H，d)，7.68(1H，dd)，8.55(1H，dd)。m/z：ES+[M+H]+440。
(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四 氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
在-15℃下，将在水(0.5mL)中的亚硝酸钠(133mg，1.93mmol)加入(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-2-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(771mg，1.75mmol)于丙酸(5833μL)/水(1167μL)中的冷却溶液中。将反应搅拌30分钟，然后添加已在干冰中冷却的EtOAc(50mL)。将反应通过添加2N Na2CO3淬灭直到鼓泡停止，然后将各层分离。将水层用EtOAc萃取，然后将有机层干燥并且蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化。将纯的级分蒸干，以提供呈浅黄色固体的(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(460mg，58％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)1.14(3H，d)，2.81(1H，dd)，2.88(1H，dd)，3.10-3.26(2H，m)，3.38(3H，s)，3.46-3.55(1H，m)，3.58-3.76(2H，m)，5.13(1H，s)，6.94(1H，d)，7.23(1H，dd)，7.29(1H，d)，7.72(1H，dd)，8.05(1H，d)，8.57(1H，dd)。m/z：ES+[M+H]+451。
(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-3-(四氢- 2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将3，4-二氢-2H-吡喃(0.114mL，1.25mmol)加入(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(450mg，1.00mmol)和PTSA水合物(37.9mg，0.20mmol)在DCM(5mL)的溶液中，并且将反应加热至45℃持续3小时。冷却后，将反应用DCM稀释，并且用饱和的NaHCO3溶液洗涤。将有机相干燥并且蒸发，然后将粗产物通过硅胶塞(1∶1EtOAc/庚烷)。将滤液蒸发以提供呈橘色固体的(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟-3-甲氧基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(510mg，9％)(比率约为6.5∶1的THP位置异构体)。m/z：ES+[M+H]+535。
实例3
6-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f] 异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺
将[(2-二-环己基膦基-3，6-二甲氧基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯基)-2-(2′-氨基-1，1′-联苯基)]钯(II)甲磺酸盐(BrettPhos Pd G3)(12.11mg，0.01mmol)和叔丁醇钠(85mg，0.89mmol)加入(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(177mg，0.35mmol)和1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(94mg，0.71mmol)于1，4-二噁烷(2835μL)中的脱气溶液中，并且将反应加热至90℃持续5小时。在冷却后，将反应用DCM稀释并且用水洗涤。将有机相蒸发，然后溶于DCM(2mL)中，之后添加TFA(1mL)。将混合物在室温下搅拌1小时，然后用DCM稀释，并且用饱和的NaHCO3溶液洗涤。将各层分离，并且将水相用DCM萃取。将合并的有机物干燥并蒸发，给出粗产物。将粗产物通过制备型LCMS(Waters SunFire柱，5μ二氧化硅，19mm直径，100mm长度)(使用水(含1％NH3)与MeCN的极性递减混合物作为洗脱液)纯化。将含有所需化合物的级分蒸发至干燥，以给出呈米色固体的6-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺(17.0mg，10％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)0.36-0.46(1H，m)，0.49-0.59(1H，m)，0.88-1.07(2H，m)，1.09(3H，d)，1.69-1.75(1H，m)，1.75-1.81(1H，m)，2.59(2H，t)，2.70(1H，dd)，2.86-2.96(3H，m)，3.01-3.11(1H，m)，3.37-3.44(1H，m)，3.72(2H，q)，3.78-3.88(1H，m)，3.95(1H，d)，4.04-4.13(1H，m)，4.44(1H，t)，4.53(1H，t)，4.95(1H，s)，6.75(1H，dd)，6.91(1H，d)，7.12-7.17(2H，m)，7.86(1H，d)，8.05(1H，d)，10.04(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+467。
如下制备(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉：
1-(3-溴-2-甲基苯基)-2，5-二甲基-1H-吡咯的制备
将在装备有冷凝器和迪安-斯达克(Dean-Stark)分水器的烧瓶中的3-溴-2-甲基苯胺(40g，215mmol)、己烷-2，5-二酮(25.3mL，215mmol)和对甲苯磺酸一水合物(0.409g，2.15mmol)在甲苯(300mL)的混合物在回流条件下加热2小时。然后将混合物冷却至室温，并且依次用饱和的碳酸氢钠水溶液、HCl水溶液(1N)和饱和的氯化钠水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩，已给出呈浅黄色油的粗1-(3-溴-2-甲基苯基)-2，5-二甲基-1H-吡咯(57.9g，102％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.8(6H，s)，1.9(3H，s)，5.8(2H，s)，7.2-7.4(2H，m)，7.7(1H，dd)。m/z：ES+[M+H]+264。
(R)-(1-(3-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-2-甲基苯基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯 的制备
在-78℃下，将在己烷(2.5M；89mL，221mmol)中的正丁基锂超过加入粗1-(3-溴-2-甲基苯基)-2，5-二甲基-1H-吡咯(55.7g，211mmol)在THF(400mL)的溶液中超过15分钟。30分钟后，添加(R)-4-甲基-1，2，3-氧杂噻唑啉-3-甲酸叔丁酯2，2-二氧化物(50g，211mmol)。将所得的混合物在-78℃下搅拌15分钟，并且允许经2小时加温至室温。添加柠檬酸水溶液(1N；250mL)，并且搅拌持续30分钟。将混合物用己烷萃取，并且将合并的有机层用饱和的碳酸钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将所得棕色固体粗(R)-(1-(3-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-2-甲基苯基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯不经进一步纯化用于下一步骤。m/z：ES+[M+H]+343。
(R)-1-(3-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-2-甲基苯基)丙-2-胺的制备
将在二噁烷(4M；100mL，400mmol)中的盐酸加入粗(R)-(1-(3-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-2-甲基苯基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯在MeOH(200mL)和DCM(50mL)的悬浮液中。将所得的红色溶液在室温下搅拌4小时，并且然后在减压下浓缩。将所得的棕色固体不经进一步纯化用于下一步骤。m/z：ES+[M+H]+243。
(R)-3-(2-氨丙基)-2-甲基苯胺的制备
将粗(R)-1-(3-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-2-甲基苯基)丙-2-胺二盐酸盐、羟胺水溶液(50wt％；107mL，1.74mol)和盐酸羟胺(97g，1.39mol)在乙醇(400mL)中的混合物加温至回流条件。18小时后，将反应冷却至0℃，用氢氧化钠水溶液(50wt％，153g，1.92mol)进行碱化，并且用DCM萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将所得残余物通过SFC(Princeton Chromatography DEAP柱，100mm长度，30mm直径，5μm，40℃柱温，100巴柱压，100mg/mL流速)(用含有在CO2中的0.2％NH4OH的25％甲醇洗脱)纯化，以提供呈浅琥珀酸固体的(R)-3-(2-氨丙基)-2-甲基苯胺(24g，84％)。1H NMR(500MHz，DMSO，27℃)1.05(3H，d)，1.99(3H，s)，2.55(1H，dd)，2.93(1H，dd)，3.11-3.25(1H，m)，4.77(2H，s)，6.35(1H，dd)，6.52(1H，dd)，6.81(1H，t)。未观察到烷基NH2质子。m/z：ES+[M+H]+165。
(R)-N-(1-(3-氨基-2-甲基苯基)丙-2-基)-1-氟环丙烷-1-甲酰胺的制备
将(R)-3-(2-氨丙基)-2-甲基苯胺(1.70g，10.4mmol)溶于DMF(29.9mL)中，并且用1-氟环丙烷-1-甲酸(1.00g，9.61mmol)、HATU(4.02g，10.6mmol)和TEA(2.68mL，19.22mmol)进行处理。将反应在室温下搅拌3小时，并且然后用水淬灭，并且用EtOAc萃取。将有机层用饱和的氯化钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，并且过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将所得到的残余物在真空下干燥过夜以去除残余DMF。然后将残余物吸附在二氧化硅上，并且通过快速柱硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-80％乙酸乙酯)纯化，以提供呈浅黄色固体的(R)-N-(1-(3-氨基-2-甲基苯基)丙-2-基)-1-氟环丙烷-1-甲酰胺(1.47g，61.1％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.01-1.28(7H，m)，2.02(3H，s)，2.54-2.62(1H，m)，2.83(1H，dd)，3.89-4.16(1H，m)，4.68(2H，s)，6.38(1H，d)，6.49(1H，d)，6.78(1H，t)，8.14(1H，d)m/z：ES+[M+H]+251。
(R)-3-(2-(((1-氟环丙基)甲基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺的制备
在室温下，在氮气下，将在THF(1M；35.2ml，35.2mmol)中的硼烷四氢呋喃络合物加入(R)-N-(1-(3-氨基-2-甲基苯基)丙-2-基)-1-氟环丙烷-1-甲酰胺(1.47g，5.87mmol)在THF(13.7mL)的溶液中。然后将反应在65℃加热6hr。将反应冷却至0℃，并且用MeOH(气体逸出)小心地淬灭。然后将溶液在减压下浓缩，并且在冷冻机中贮存18小时。将残余物溶于MeOH(6mL)中，并且在65℃下加热3hr。将溶液冷却至室温，并且然后在减压下浓缩。将获得的残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中0-16％甲醇)纯化，以提供呈无水油的(R)-3-(2-(((1-氟环丙基)甲基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(1.14g，82％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)0.54-0.70(2H，m)，0.79-1.02(5H，m)，1.64(1H，br.s.)，1.99(3H，s)，2.36(1H，dd)，2.69-2.97(4H，m)，4.68(2H，s)，6.36(1H，d)，6.49(1H，d)，6.79(1H，t)。m/z：ES+[M+H]+237。
(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四 氢异喹啉-6-胺的制备
将5-溴吡啶甲醛(507mg，2.72mmol)加入(R)-3-(2-(((1-氟环丙基)甲基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(322mg，1.36mmol)于乙酸(7028μL)和水(143μL)中的搅拌溶液中。将所得混合物加热至90℃，并且在此温度下搅拌5小时。浓缩混合物并溶于EtOAC(50mL)和饱和NaHCO3(25mL)中。将水层用EtOAc(2x50mL)萃取。将合并的有机物在减压下进行浓缩。将残余物溶于DCM(20mL)和1M HCl(20mL)中。将混合物剧烈搅拌30分钟。将各层分离，并且将水层用DCM(20mL)洗涤。用固体NaOH将水层碱化至＞pH 10。用DCM(3x25mL)萃取溶液。将合并的有机物干燥(相分离器筒)并浓缩，以给出粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-60％EtOAc)纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色胶体的(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(217mg，39％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)0.33-0.47(1H，m)，0.49-0.6(1H，m)，0.89-1.01(2H，m)，1.04(3H，d)，2.06(3H，s)，2.55-2.64(2H，m)，2.92-3.04(2H，m)，3.51(2H，s)，3.65-3.72(1H，m)，4.88(1H，s)，6.45(1H，d)，6.58(1H，d)，7.31(1H，dd)，7.66(1H，dd)，8.54(1H，dd)。m/z：ES+[M+H]+404。
(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢- 3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将丙酸(8291μL)中的(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(295mg，0.73mmol)冷却至-20℃。经2-3分钟逐滴添加水(829μL)中的亚硝酸钠(50.3mg，0.73mmol)。将反应混合物在-20℃下搅拌45分钟。将反应混合物用冰冷的EtOAc(30mL)稀释。将反应混合物倒入饱和NaHCO3(40mL)中。将混合物剧烈搅拌5分钟。将各层分离，并且将有机层用饱和NaHCO3(2x30mL)洗涤。将合并的水层用EtOAc(2x 30mL)反萃取。将合并的有机相干燥(Na2SO4)，并浓缩，以给出呈棕色油的粗产物。将粗材料通过快速硅胶柱色谱法(在己烷中0-45％EtOAc洗脱)纯化，以提供呈橙色固体的(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(107mg，35％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)0.35-0.44(1H，m)，0.51-0.63(1H，m)，0.92-1.07(2H，m)，1.09(2H，d)，2.69(1H，dd)，2.96(1H，dd)，3.01-3.10(1H，m)，3.33-3.49(2H，m)，3.78-3.89(1H，m)，5.03(1H，s)，6.95(1H，d)，7.19(1H，d)，7.34-7.39(1H，m)，7.68(1H，dd)，8.07(1H，d)，8.58(1H，dd)。m/z：ES+[M+H]+415和417。
(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡 喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将3，4-二氢-2H-吡喃(0.029mL，0.32mmol)加入(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(107mg，0.26mmol)和4-甲苯磺酸水合物(9.80mg，0.05mmol)在DCM(2mL)的溶液中，并且将反应加热至45℃持续3小时。进一步加入3，4-二氢-2H-吡喃(0.235mL，2.58mmol)和4-甲基苯磺酸水合物(49.0mg，0.26mmol)，并且将混合物在45℃加热16小时。将反应用DCM稀释，并且用饱和的NaHCO3溶液洗涤。将有机相干燥并且蒸发，然后将粗产物通过硅胶塞(1∶1EtOAc/庚烷)。蒸发滤液，以提供呈棕色油的(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉，其不经进一步纯化进行使用。m/z：ES+[M+H]+499。
实例4
N-(4-((6S，8R)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡 唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(非对映异构 体混合物)
将1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(50mg，0.37mmol)、(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉和(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的混合物(140mg，0.25mmol)、碳酸铯(163mg，0.50mmol)以及[(2-二-环己基膦基-3，6-二甲氧基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯基)-2-(2′-氨基-1，1′-联苯基)]钯(II)甲磺酸盐(BrettPhos Pd G3)(23mg，0.02mmol)悬浮在1，4-二噁烷(2mL)中并密封在微波管中。将反应在微波照射下加热至100℃持续4小时。将反应混合物用DCM(25mL)稀释并用水(25mL)洗涤。蒸发有机层。将残余物溶于DCM(3mL)和TFA(1mL)中。将反应混合物在室温下搅拌1小时，并且然后在DCM和2M NaOH(各20mL)之间分配。蒸发有机相，并且将粗产物通过制备型HPLC(Waters CSH C18 OBD柱，5μ二氧化硅，30mm直径，100mm长度)(使用水(含有1％NH3)和MeCN的极性渐减的混合物作为洗脱液)纯化，以提供呈胶且为非对映异构体混合物的N-(4-((6S，8R)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(26.0mg，20％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6，27℃)0.94-0.99(3H，m)，1.16-1.24(3H，m)，1.64(2H，dq)，2.39-2.47(3H，m)，2.70(2H，t)，2.74-2.84(2H，m)，3.03-3.21(2H，m)，3.24(3H，d)，3.48(2H，dd)，3.58-3.64(2H，m)，3.79(3H，d)，3.88-3.94(1H，m)，4.44(2H，dt)，5.17(1H，d)，5.88(1H，td)，5.97(1H，dd)，6.16(1H，d)，6.32-6.38(1H，m)，6.63(1H，t)，7.16(1H，dd)，8.02(1H，s)，12.91(1H，s)。19F NMR(471MHz，DMSO-d6，27℃)-218.19，-149.21，-148.22。m/z：ES+[M+H]+528。
如下制备(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉和(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的混合物；
N-((R)-1-(3-溴-2-甲基苯基)丙-2-基)-2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙-1-胺的非对 映异构体混合物的制备
将三氟甲磺酸酐(2.148ml，12.79mmol)加入溶于二氯甲烷(50mL)的((2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙氧基)甲三基)三苯(4.44g，12.18mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入三乙基硅烷(2.140ml，13.40mmol)并将混合物再搅拌30分钟。将反应浓缩，以提供粗外消旋2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基三氟甲磺酸酯将其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
在室温下，在氮气[放热]下，将DIPEA(5.36mL，30.68mmol)加入(R)-1-(3-溴-2-甲基苯基)丙-2-胺(2.80g，12.3mmol)和1，4-二噁烷(60mL)中的2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基三氟甲磺酸酯(3.12g，12.3mmol)中。将所得混合物在85℃搅拌24小时。允许将反应混合物冷却，并蒸发该反应混合物。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-60％EtOAc)纯化，以提供呈油且为非对映异构体混合物的N-((R)-1-(3-溴-2-甲基苯基)丙-2-基)-2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙-1-胺(2.480g，73％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.02-1.07(3H，m)，1.31(1.5H，d)，1.32(1.5H，d)，2.41(3H，s)，2.57-2.66(1H，m)，2.68-2.90(4H，m)，3.34(1.5H，d)，3.35(1.5H，d)，3.38-3.46(2H，m)，6.96(1H，t)，7.07(1H，d)，7.42(1H，d)。NH未看到。19F NMR(471MHz，CDCl3，27℃)-157.94，-157.53。m/z：ES+[M+H]+332/334。
3-((R)-2-((2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺的非对映异构 体混合物的制备
将三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(0.205g，0.22mmol)以及(±)-2，2′-双(二苯基膦基)-1，1′-联萘(0.279g，0.45mmol)加入N-((R)-1-(3-溴-2-甲基苯基)丙-2-基)-2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙-1-胺(2.48g，7.46mmol)、苯甲酮亚胺(1.487g，8.21mmol)以及叔丁醇钠(1.076g，11.20mmol)的非对映异构体混合物于脱气的甲苯(30mL)中的悬浮液中，并且将反应加热至90℃持续3小时。冷却后，蒸发甲苯。将所得残余物溶于DCM(250mL)中并用水(250mL)洗涤。将水层用DCM(100mL)萃取，并且将合并的有机物浓缩至大约50mL。添加2MHCl溶液(50mL)，并且将双相混合物剧烈搅拌30分钟。将各层分离，并且将水相用DCM萃取。将水相用2M NaOH水溶液碱化。将其用DCM(2x250mL)萃取，并且将合并的DCM萃取物蒸发，以给出呈油且为非对映异构体混合物的3-((R)-2-((2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(2.00g，100％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.04(3H，d)，1.31(1.5H，d)，1.32(1.5H，d)，2.11(3H，s)，2.53-2.60(1H，m)，2.70-2.89(4H，m)，3.35(2H，d)，3.36(1.5H，d)，3.43(1.5H，dd)，3.58(2H，s)，6.57(1H，d)，6.61(1H，d)，6.94(1H，t)，7.58(1H，s)。19FNMR(471MHz，CDCl3，27℃)-157.61，-157.30。m/z：ES+[M+H]+269。
(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-3，5-二甲 基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺的非对映异构体混合物的制备
将3-((2R)-2-((2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(2.00g，7.45mmol)和4-溴-2-甲氧基苯甲醛(3.37g，15.6mmol)的非对映异构体混合物在乙酸(30mL)和水(0.671mL，37.3mmol)中加热至70℃过夜。冷却后，蒸发乙酸。将残余物溶于EtOAc(40mL)中，并且添加2N HCl(40mL)。将双相混合物搅拌30分钟，然后分离各层。用水萃取有机相，然后通过添加2N NaOH溶液碱化合并的水相，并用DCM(2x200mL)萃取。将合并的DCM层蒸发，并且将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化，以提供为单个非对映异构体的第一(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.354g，10％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6，27℃)0.91(3H，d)，1.22(3H，d)，1.94(3H，s)，2.26-2.40(2H，m)，2.65-2.78(2H，m)，3.16-3.25(4H，m)，3.42(1H，dd)，3.85(3H，s)，4.61(2H，s)，5.10(1H，s)，6.24(1H，d)，6.37(1H，d)，6.61(1H，d)，6.95(1H，dd)，7.15(1H，d)。一个质子被水部分遮挡。19F NMR(471MHz，DMSO-d6，27℃)-149.65。m/z：ES+[M+H]+465/467。随后含有(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-(-2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(1.700g，49％)的非对映异构体混合物的级分19F NMR(471MHz，DMSO-d6，27℃)-149.65，-148.78。m/z：ES+[M+H]+465/467。随后含有作为单个非对映异构体的(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.274g，8％)的第二非对映异构体的级分。1H NMR(500MHz，DMSO-d6，27℃)0.91(3H，d)，1.16(3H，d)，1.93(3H，s)，2.26-2.4(2H，m)，2.63-2.74(2H，m)，3.23(3H，s)，3.35(1H，dd)，3.47(1H，dd)，3.85(3H，s)，4.60(2H，s)，5.09(1H，s)，6.24(1H，d)，6.37(1H，d)，6.61(1H，d)，6.93(1H，dd)，7.15(1H，d)。一个质子被水遮挡。19F NMR(471MHz，DMSO-d6，27℃)-148.78。m/z：ES+[M+H]+465/467。均呈胶。
(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(-2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-6， 7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的非对映异构体混合物的制备
在-10℃，将亚销酸钠(0.277g，4.02mmol)于水(1.0mL)的溶液加入(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(1.70g，3.65mmol)的非对映异构体混合物于丙酸(15mL)的溶液。搅拌反应1小时，然后加入冰冷的EtOAc(20mL)。通过添加NaHCO3水溶液(30mL)淬灭反应并搅拌15分钟，然后允许加温至室温。将有机相用NaHCO3水溶液(30mL)和盐水(20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化，以提供呈棕色固体且为非对映异构体混合物的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.950g，55％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6，27℃)0.95-0.97(3H，m)，1.14-1.23(3H，m)，2.31-2.40(1H，m)，2.78-2.88(2H，m)，3.11-3.21(2.5H，s)，3.23(1.5H，s)，3.32-3.38(1H，m)，3.40-3.52(2H，m)，3.88(1.5H，s)，3.89(1.5H，s)，5.28(1H，s)，6.59-6.69(2H，m)，6.92-6.96(1H，m)，7.16-7.22(2H，m)，8.05(1H，s)，12.96(1H，s)。19F NMR(471MHz，DMSO-d6，27℃)-149.65，-148.68。m/z：ES+[M+H]+476/478。
(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-3- (四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉和(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲 氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9- 四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的混合物的制备
将4-甲基苯磺酸水合物(0.038g，0.20mmol)加入(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.950g，1.99mmol)和3，4-二氢-2H-吡喃(0.546mL，5.98mmol)的非对映异构体混合物于DCM(30mL)的溶液中，并且将混合物在40℃加热过夜。添加更多3，4-二氢-2H-吡喃(0.546mL，5.98mmol)和4-甲基苯磺酸水合物(0.038g，0.20mmol)。继续加热7小时。添加另外部分的3，4-二氢-2H-吡喃(0.546mL，5.98mmol)和4-甲基苯磺酸水合物(0.038g，0.20mmol)，并且将反应加热过夜。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，并且用饱和的NaHCO3水溶液(50mL)洗涤。将有机相蒸发至深棕色油，并且将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-35％EtOAc)纯化，以提供呈泡沫且为非对映异构体混合物的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉和(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的混合物(0.960g，86％)。19F NMR(471MHz，DMSO-d6，27℃)-149.79，-149.74，-149.69，-149.65，-148.77，-148.73，-148.69，-148.66。m/z：ES+[M+H]+560/562。
实例5
3-((6S，8R)-6-(2，6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)苯基)-8- 甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)-2，2-二氟丙-1-醇
在室温，将THF中的TBAF(1M；160μL，0.16mmol)加入N-(4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(80mg，0.10mmol)于THF(0.5mL)的溶液中。在4小时后，将反应在减压下浓缩，并且将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中30％-90％(DCM中10％MeOH，含有1％NH4OH))纯化。在减压下浓缩产物级分，并使用相同条件再次纯化所得残余物。将产物级分再次在减压下浓缩，并且将所得残余物通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱，5μ二氧化硅，19mm直径，100mm长度)(使用水(含有0.2％氢氧化铵)和MeCN的极性递减混合物作为洗脱液(40％-70％，经7min))纯化，以提供呈白色固体的3-((6S，8R)-6-(2，6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)苯基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)-2，2-二氟丙-1-醇(17mg，31％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6，27℃)1.02(3H，d)，1.59-1.69(2H，m)，2.44(2H，t)，2.56-2.67(1H，m)，2.72(2H，t)，2.88(1H，dd)，3.02-3.13(1H，m)，3.17(1H，dd)，3.49-3.56(1H，m)，3.57-3.69(3H，m)，3.91(1H，tdt)，4.44(2H，dt)，5.08(1H，s)，5.25(1H，br.s)，6.07(2H，d)，6.64(1H，d)，6.69(1H，d)，7.20(1H，d)，8.04(1H，s)，12.95(1H，br.s)。未观察到一个H。m/z：ES+[M+H]+524。
如下制备N-(4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺：
制备3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙-1-醇
在0℃，向2，2-二氟丙-1，3-二醇(874mg，7.80mmol)于THF(32mL)的搅拌溶液中一次性添加矿物油中的NaH(60wt％；343mg，8.58mmol)。允许将反应加温至室温，并在室温下搅拌2小时。将反应混合物再冷却至0℃，并经由注射器逐滴添加叔丁基二苯基氯硅烷(2.0mL，7.8mmol)。允许将反应混合物经1小时加温至室温，然后用水淬灭并用EtOAc萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(用己烷中等度5％乙酸乙酯洗脱)纯化，以提供呈无色油的3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙-1-醇(1.94，71％)。1H NMR(300MHz，氯仿-d，27℃)δppm 1.03-1.14(9H，s)，3.87-3.93(4H，m)，7.37-7.44(6H，m)，7.64-7.66(4H，m)。
3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基三氟甲磺酸酯的制备
将3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙-1-醇(1.94g，5.55mmol)和2，6-二甲基吡啶(1.94ml，16.6mmol)于DCM(18ml)的溶液冷却至-10℃(盐/冰浴)。经10分钟缓慢逐滴添加三氟甲磺酸酐(1.88ml，11.1mmol)。将反应保持在这些条件下持续2小时。然后将反应用水、HCl水溶液(1N；100mL)和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩，以提供呈红色油的3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基三氟甲磺酸酯(2.68g，100％)。1H NMR(300MHz，氯仿-d，27℃)1.03-1.14(9H，s)，3.90(2H，t)，4.76(2H，t)，7.39-7.56(6H，m)，7.59-7.75(4H，m)。
3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基三氟甲磺酸酯的制备
将3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基三氟甲磺酸酯(1.92g，3.98mmol)加入(R)-3-(2-氨基丙基)-2-甲基苯胺(0.784g，4.77mmol)和DIPEA(1.031ml，5.97mmol)于1，4-二噁烷(15ml)的溶液中。将反应在85℃下加热18小时。在冷却后，将反应用DCM稀释并且用水洗涤。将水层用DCM萃取，并且将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中0-4％甲醇氨)纯化。将纯级分浓缩至干燥，以提供呈黄色油的(R)-3-(2-((3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(1.97g，100％)。1H NMR(300MHz，甲醇-d4，27℃)δppm 0.97-1.12(12H，m)，2.10(3H，s)，2.53-2.63(1H，m)，2.74-2.84(1H，m)，2.86-2.99(1H，m)，3.00-3.19(2H，m)，3.80(2H，td)，6.53(1H，d)，6.63(1H，d)，6.86(1H，t)，7.38-7.50(6H，m)，7.64-7.72(4H，m)。m/z：ES+[M+H]+497。
制备(1S，3R)-1-(4-溴-2，6-二氟苯基)-2-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)- 2，2-二氟丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺
将4-溴-2，6-二氟苯甲醛(1.55g，7.02mmol)加入(R)-3-(2-((3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(1.74g，3.51mmol)于乙酸(17mL)和水(0.32mL，18mmol)的溶液中，并且将反应在80℃加热过夜。将反应在减压下浓缩，并且将残余物在EtOAc和饱和NaHCO3水溶液分配。将有机层在减压下浓缩，并且通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中20％-80％乙酸乙酯)纯化，以提供呈固体的(1S，3R)-1-(4-溴-2，6-二氟苯基)-2-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(1.33g，54.5％)。
1H NMR(300MHz，氯仿-d，27℃)δppm 1.04-1.11(12H，m)，2.25-2.38(3H，m)，2.53-2.65(1H，m)，2.73(1H，q)，2.86-3.03(1H，m)，3.15-3.38(1H，m)，3.52-3.71(2H，m)，3.85-4.01(1H，m)，5.31(1H，d)，6.58-6.64(1H，m)，6.67-6.73(1H，m)，6.88-6.95(2H，m)，7.18-7.24(2H，m)，7.37-7.50(6H，m)，7.60-7.70(4H，m)。m/z：ES+[M+H]+699。
(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2- 二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
在-8℃(盐/冰浴)，将水(0.900mL)中的亚销酸钠(0.130g，1.89mmol)逐滴加入(1S，3R)-1-(4-溴-2，6-二氟苯基)-2-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(1.32g，1.89mmol)于丙酸(9mL)的溶液中，并在这些条件下搅拌20分钟。将反应用乙酸乙酯(20mL，预冷却至-10℃)稀释并在0℃通过经15min缓慢添加饱和NaHCO3水溶液(30mL，预冷却至-10℃)淬灭。允许将混合物加温至室温并在这些条件下保持18小时。将有机层分离，并且将水层用EtOAc萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液和水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中15％-50％乙酸乙酯)纯化，以提供呈浅棕色固体的(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.520g，38.8％)。1H NMR(300MHz，氯仿-d，27℃)δppm 1.07(9H，s)，1.12(3H，d)，2.72-2.92(2H，m)，3.21-3.39(2H，m)，3.51-3.66(1H，m)，3.67-3.79(1H，m)，3.86-4.00(1H，m)，5.37(1H，s)，6.81(1H，d)，6.87-6.98(2H，m)，7.25-7.29(1H，m)，7.35-7.50(6H，m)，7.59-7.70(4H，m)，8.14(1H，s)。未观察到吲哚NH。m/z：ES+[M+H]+710。
(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2- 二氟丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的 制备
将3，4-二氢-2H-吡喃(95μL，1.04mmol)加入(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(492mg，0.69mmol)和对甲苯磺酸一水合物(13mg，0.07mmol)于DCM(3.5mL)的溶液中，并且将反应在回流条件下加热6小时。冷却后，将反应用饱和NaHCO3水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中10％-30％乙酸乙酯)纯化，以提供呈浅棕色胶状固体的(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(474mg，86％)。1H NMR(300MHz，氯仿-d，27℃)1.06(9H，s)，1.19-1.25(3H，m)，1.74-1.84(3H，m)，2.09-2.20(2H，m)，2.49-2.67(1H，m)，2.84-2.96(2H，m)，3.27-3.45(2H，m)，3.61-3.87(3H，m)，4.04(2H，d)，5.52(1H，s)，5.66-5.72(1H，m)，6.78(1H，d)，6.94(2H，d)，7.32(1H，d)，7.36-7.50(6H，m)，7.60-7.68(4H，m)，8.04(1H，s)。
3-((4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲 基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯 基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的制备
将(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.474g，0.600mmol)、3-氨基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.15g，0.89mmol)、Xantphos(0.069g，0.12mmol)、Pd2(dba)3(0.06g，0.06mmol)和碳酸铯(0.389g，1.19mmol)于二噁烷(3mL)中的脱气混合物在115℃加热4小时。然后将反应在减压下浓缩，并且将所得残余物吸附在硅胶上并通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中5％-50％乙酸乙酯)纯化，以提供呈固体的3-((4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.377g，71.3％)。1H NMR(300MHz，氯仿-d，27℃)1.06(9H，s)，1.12(3H，d)，1.46(9H，s)，1.65-1.84(3H，m)，2.07-2.23(2H，m)，2.58(1H，d)，2.75-2.91(2H，m)，3.16-3.34(2H，m)，3.52-3.78(5H，m)，3.91-4.07(3H，m)，4.19-4.29(2H，m)，5.23-5.34(1H，m)，5.67(1H，dd)，5.81(2H，d)，6.81(1H，d)，7.25-7.29(1H，m)，7.35-7.48(6H，m)，7.65(4H，ddd)，8.02(1H，s)。未观察到苯胺NH。m/z：ES+[M+H]+886。
N-(4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基- 6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)氮杂环丁烷-3-胺的制备
在0℃，将TFA(328μL，4.25mmol)缓慢加入3-((4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(377mg，0.43mmol)于DCM(2mL)的溶液中。允许将反应加温至室温，并且在这些条件下搅拌1小时。然后将反应在减压下浓缩，并且将所得残余物在乙酸乙酯和饱和NaHCO3水溶液之间分配。将有机层经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中30％-70％(DCM中10％甲醇，含有1％氢氧化铵))纯化，以提供呈苍白固体的N-(4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)氮杂环丁烷-3-胺(166mg，55.6％)。1HNMR(300MHz，氯仿-d，27℃)0.96-1.20(12H，m)，2.62-3.03(2H，m)，3.10-3.42(2H，m)，3.42-3.63(3H，m)，3.63-3.80(2H，m)，3.81-4.08(3H，m)，4.15-4.28(1H，m)，4.38(1H，d)，5.23(1H，s)，5.83(2H，m)，6.80(1H，m)，7.15(1H，d)，7.32-7.53(6H，m)，7.61-7.81(4H，m)，8.06(1H，s)。未观察到吲唑NH。m/z：ES+[M+H]+702。
N-(4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基- 6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁 烷-3-胺的制备
在环境温度，将1-氟-3-碘丙烷(40mg，0.21mmol)加入N-(4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)氮杂环丁烷-3-胺(144mg，0.21mmol)和DIPEA(107μL，0.62mmol)于DMF(1mL)的溶液中。将反应在室温下搅拌3小时，然后用EtOAc(40mL)稀释，并用饱和氯化钠水溶液(3x 20mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中15％-30％(DCM中10％甲醇，含有1％氢氧化铵))纯化，以提供呈黄色固体的N-(4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(87mg，56％)。m/z：ES+[M+H]+762。
实例6
N-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3- f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺
在室温，将1-氟-3-碘丙烷(40.9μL，0.39mmol)加入N-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-胺(169mg，0.39mmol)和DIPEA(203μL，1.16mmol)于NMP(1.7mL)的溶液中。18小时后，将反应在减压下浓缩。将所得残余物通过反相快速色谱法(C18)(用水(含有0.2％氢氧化铵)和MeCN的极性递减混合物作为洗脱液洗脱)纯化。将产物级分合并，并冻干以提供呈澄清残余物的N-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(75mg，39％)。1HNMR(500MHz，DMSO-d6，27℃)0.39-0.46(1H，m)，0.47-0.54(1H，m)，0.77-0.85(2H，m)，0.91(3H，d)，1.51-1.64(2H，m)，2.38(2H，t)，2.54(1H，dd)，2.63(2H，q)，2.75-2.90(2H，m)，3.14(1H，dd)，3.52-3.64(3H，m)，3.73(3H，s)，3.79-3.88(1H，m)，4.38(2H，dt)，5.10(1H，s)，5.82-5.87(1H，m)，5.91(1H，d)，6.09(1H，d)，6.49(1H，d)，6.57(1H，d)，7.07(1H，d)，7.94(1H，s)，12.83(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+496。
如下制备N-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-胺。
(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3， 4-四氢异喹啉-6-胺的制备
将水(172mg，9.54mmol)和乙酸(7.5mL)的混合物中的(R)-3-(2-(((1-氟环丙基)甲基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(451mg，1.91mmol)和4-溴-2-甲氧基苯甲醛(410mg，1.91mmol)在80℃加热6小时。将反应在减压下浓缩，并且将所得残余物用HCl水溶液(1N；18mL)处理。将混合物在80℃下搅拌18小时。然后冷却该反应，加入饱和NaHCO3水溶液。将混合物用DCM萃取，并且将有机层在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中5％-35％乙酸乙酯)纯化，以提供呈胶状薄膜的(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(591mg，71.5％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)0.42-0.61(2H，m)，0.81-0.91(2H，m)，0.93(3H，d)，1.93(3H，s)，2.43-2.48(2H，m)，2.72-2.89(2H，m)，3.48-3.57(1H，m)，3.87(3H，s)，4.57(2H，s)，5.12(1H，s)，6.24(1H，d)，6.35(1H，d)，6.82(1H，d)，6.96(1H，d)，7.16(1H，d)。m/z：ES+[M+H]+433。
(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四 氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将乙酸(0.392ml，6.84mmol)加入CHCl3(5mL)中的(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.593g，1.37mmol)，并且将所得溶液冷却至0℃。将CHCl3(1mL)中的亚硝酸异戊酯(0.321g，2.74mmol)滴加到反应中，并且将反应在0℃下再搅拌2小时。然后缓慢加入饱和NaHCO3水溶液(20mL水中1g)。将反应在0℃下搅拌10分钟，并且然后分离各层。将有机层通过快速柱色谱法(洗脱梯度为己烷中5％-35％乙酸乙酯)纯化，以提供呈浅棕色固体的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.299g，49.2％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)δppm 0.39-0.65(2H，m)，0.77-0.96(2H，m)，1.00(3H，d)，2.52-2.63(1H，m)，2.87-3.03(2H，m)，3.21-3.28(1H，m)，3.71(1H，d)，3.92(3H，s)，5.31(1H，s)，6.65(1H，d)，6.86-6.92(1H，m)，6.97(1H，m)，7.18(1H，d)，7.23(1H，d)，8.05(1H，s)，12.94(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+444。
(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H- 吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将3，4-二氢-2H-吡喃(176μL，1.93mmol)加入(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(286mg，0.64mmol)和对甲苯磺酸一水合物(12mg，0.060mmol)于DCM(2.5ml)的溶液中。使反应经受微波条件(100℃，300W)6小时。冷却后，将反应混合物用饱和NaHCO3水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中10％-30％乙酸乙酯)纯化，以提供呈浅棕色胶状固体的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(299mg，88％)。m/z：ES+[M+H]+528。
3-((4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7， 8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁 酯的制备
将二噁烷(2.5mL)中的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(278mg，0.53mmol)、3-氨基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(136mg，0.79mmol)、碳酸铯(343mg，1.05mmol)和BrettPhos第三代预催化剂(24mg，0.030mmol)经受微波条件(100℃，300W)6小时。然后将反应在减压下浓缩，并且将所得残余物吸附在硅胶上，之后经由快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中20％-60％乙酸乙酯)纯化，以提供3-((4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(296mg，91％)。m/z：ES+[M+H]+620。
N-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3- f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-胺的制备
将二噁烷中的HCl(4M；1.2mL，4.78mmol)逐滴加入3-((4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(296mg，0.48mmol)于MeOH(3.5ml)的溶液中。在室温下搅拌过夜后，将反应在减压下浓缩，将所得残余物溶于MeOH(2mL)中。然后将此溶液装载在已用甲醇预处理过的SCX-2离子交换盒上。将盒用甲醇洗涤，然后用甲醇中7N氨洗涤。将产物级分在减压下浓缩，以提供呈苍白固体的N-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-胺(181mg，87％)。m/z：ES+[M+H]+436。
实例7
(6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-6-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧 基)-2-甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉
在室温，将1-氟-3-碘丙烷(5.79μL，0.05mmol)加入(6S，8R)-6-(4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-甲氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉三氟乙酸盐(0.030g，0.050mmol)和DIPEA(0.029mL，0.16mmol)于NMP(0.52ml)的溶液中。3小时后，将反应用EtOAc(40mL)稀释，并用饱和氯化钠水溶液(3x20mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中15％-30％(DCM中MeOH，含有1％氢氧化铵))纯化，以提供呈白色固体的(6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-6-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)-2-甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(5mg，18％)。1H NMR(500MHz，甲醇-d4，26℃)0.45-0.56(2H，m)，0.85-1.03(2H，m)，1.12(3H，d)，1.67-1.81(2H，m)，2.50-2.62(1H，m)，2.61-2.68(2H，m)，2.92(1H，dd)，3.08-3.21(3H，m)，3.25-3.28(1H，m)，3.70-3.84(3H，m)，3.86-3.91(3H，m)，4.45(2H，dt)，4.73-4.82(1H，m)，5.49(1H，br.s)，6.19(1H，d)，6.50(1H，br.s.)，6.72(1H，d)，6.79(1H，d)，7.18(1H，d)，8.05(1H，s)。没有观察到吲唑NH。m/z：ES+[M+H]+497。
如下制备N-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-胺三氟乙酸盐：
(6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-6-(2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧 杂硼烷-2-基)苯基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f] 异喹啉的制备
将(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(369mg，0.70mmol；根据实例6制备)、双(频哪醇合)二硼(266mg，1.05mmol)、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(51mg，0.070mmol)和乙酸钾(233mg，2.37mmol)于二噁烷(3.50mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫。然后将反应混合物加温至80℃。在这些条件下搅拌18小时后，将反应混合物冷却至室温，通过垫过滤，并用EtOAc(100mL)洗涤。将滤液用水(100mL)洗涤，将水层用EtOAc(2x70mL)萃取，并且将合并的有机层用水(3x70mL)和饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，之后经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-25％乙酸乙酯)纯化至呈黄色固体的(6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-6-(2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(186mg，46.3％)。m/z：ES+[M+H]+576。
4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9- 四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯酚的制备
在5℃，在空气下，将过氧化氢水溶液(33％；75μL，0.74mmol)逐滴加入(6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-6-(2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(186mg，0.32mmol)和氢氧化钠水溶液(1M；350μL，0.32mmol)于THF(2.5mL)的搅拌溶液中。将所得混合物在5℃下搅拌持续5分钟。然后将反应用水(50mL)和DCM(100mL)稀释。将各层分离，并且将水层用DCM(2x50mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中20％-50％乙酸乙酯)纯化，以提供呈黄色固体的4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯酚(94mg，62.5％)。m/z：ES+[M+H]+466。
3-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7, 8，9-四氢-3H-吡唑并[4,3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯氧基)氯杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯 的制备
将(E)-二氮烯-1，2-二甲酸二乙酯(88mg，0.20mmol)加入4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯酚(94mg，0.20mmol)、3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(35mg，0.20mmol)、三苯基膦(53mg，0.20mmol)和甲苯(2.03mL)的溶液中。然后将反应加温至110℃。15小时后，将反应冷却，在减压下浓缩并通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-30％乙酸乙酯)纯化，以提供3-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(95mg，75％)。m/z：ES+[M+H]+621。
3-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7， 8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯 三氟乙酸盐的制备
将二噁烷中HCl(4N；383μL，1.53mmol)逐滴加入3-(4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(95mg，0.15mmol)于MeOH(1mL)的溶液中，并且将反应在室温下搅拌18小时。将反应在减压下浓缩，并且将所得残余物通过反相快速色谱法(使用水(含有0.01％TFA)和MeCN的极性递减混合物作为洗脱液(20％-80％))纯化，以提供呈TFA盐的(6S，8R)-6-(4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-甲氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(30mg，36％)。1H NMR(300MHz，甲醇-d4，27℃)0.86-1.09(2H，m)，1.26-1.52(3H，m)，1.59(3H，d)，3.22-3.31(1H，m)，3.36-3.47(1H，m)，3.66(1H，dd)，4.03(3H，s)，4.07-4.27(4H，m)，4.52-4.62(2H，m)，5.14-5.27(1H，m)，6.33(1H，dd)，6.57-6.63(1H，m)，6.68(1H，d)，6.75(1H，s)，6.93(1H，d)，7.50(1H，d)，8.23(1H，s)。未观察到吲唑NH和加成H。m/z：ES+[M+H]+437。
实例8
N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑 并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氯杂环丁烷-3-胺
在环境温度，将1-氟-3-碘丙烷(5.4μl，0.050mmol)和二异丙基乙基胺(0.013mL，0.070mmol)加入N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺(22mg，0.050mmol)于NMP(0.4mL)的搅拌溶液中。16小时后，将粗反应直接通过反相制备型HPLC(Waters XBridge C18柱，19mm直径，100mm长度，5μm二氧化硅)(洗脱梯度为水中40％-70％MeCN，含有0.2％氢氧化铵(作为改性剂))纯化。将产物级分浓缩至干燥，以提供呈淡黄色固体的N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(9mg，36％)。1H NMR(500MHz，CD2Cl2，27℃)1.11(3H，d)，1.69-1.78(3H，m)，2.51-2.59(2H，m)，2.81-2.94(3H，m)，2.95-3.03(1H，m)，3.16-3.30(1H，m)，3.59-3.70(3H，m)，3.94-4.05(1H，m)，4.41(1H，t)，4.45(1H，d)，4.51(1H，t)，5.27(1H，s)，6.02(2H，d)，6.83(1H，d)，7.21(1H，d)，8.03(1H，s)，10.47(1H，br.s)。m/z：ES+[M+H]+512。
如下制备N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺；
2，2，2-三氟乙基三氟甲磺酸酯的制备
在-10℃，经5分钟，经由注射器，将三氟甲磺酸酐(3.14mL，18.6mmol)逐滴加入2，2，2-三氟乙-1-醇(1.23mL，16.9mmol)和2，6-二甲基吡啶(2.36mL，20.3mmol)于DCM(50mL)的搅拌溶液中。2小时后，将反应依次用HCl水溶液(1N；2x30mL)和饱和NaHCO3水溶液(20mL)洗涤。然后将有机层经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩，以给出呈红色油的2，2，2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(0.92g，23％)。1H NMR(300MHz，CDCl3，27℃)4.69(2H，q)。
(R)-2-甲基-3-(2-((2，2，2-三氟乙基)氨基)丙基)苯胺的制备
将2，2，2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(1.3g，2.8mmol)加入(R)-3-(2-氨基丙基)-2-甲基苯胺(0.460g，2.80mmol；根据实例3制备)和二异丙基乙胺(0.636mL，3.64mmol)于1，4-二噁烷(10mL)的搅拌溶液中。将反应在65℃加热15小时，然后冷却并在减压下浓缩。将所得残余物溶于EtOAc(50mL)中，并用饱和NaHCO3水溶液和饱和氯化钠水溶液的混合物洗涤。将水层用EtOAc(20mL)萃取，并且将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物溶于MeOH中，在减压下吸附到硅藻土上，并通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中1％-6％MeOH)纯化。将产物级分浓缩至干燥，以提供呈淡橙色胶的(R)-2-甲基-3-(2-((2，2，2-三氟乙基)氨基)丙基)苯胺(0.30g，44％)。1H NMR(300MHz，CDCl3，27℃)1.07(3H，d)，2.09(3H，s)，2.63(1H，dd)，2.76(1H，dd)，2.92-3.05(1H，m)，3.15(2H，q)，6.58(2H，d)，6.85-7.00(1H，m)。未观察到三个NH的信号。m/z：ES+[M+H]+247。
(1S，3R)-1-(4-溴-2，6-二氟苯基)-3，5-二甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-1，2，3，4- 四氢异喹啉-6-胺的制备
在90℃，将(R)-2-甲基-3-(2-((2，2，2-三氟乙基)氨基)丙基)苯胺(303mg，1.23mmol)和4-溴-2，6-二氟苯甲醛(544mg，2.46mmol)在乙酸(5mL)和水(0.111mL)的混合物中加热2小时。允许将反应缓慢冷却至环境温度并搅拌过夜。将反应在减压下浓缩，并且将所得残余物溶于EtOAc(30mL)中，并且用饱和NaHCO3水溶液(2x20mL)洗涤。将合并的水层用EtOAc(2x20mL)萃取，并且将合并的有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤并浓缩至最小体积(～20mL)。添加HCl水溶液(1N；20mL)，并且将双相混合物剧烈搅拌2小时。将各层分离并且将水层用EtOAc(20mL)萃取。通过添加固体碳酸钠使水层碱化(直至用pH条测量pH～8)，并且然后用DCM(3x20mL)萃取。将合并的DCM有机物经MgSO4干燥，过滤并在减压下蒸发，以提供40mg粗产物。同时，将合并的EtOAc萃取物用饱和氯化钠水溶液洗涤并浓缩至干燥。将所得残余物溶于THF(10mL)，并且伴随聚苯乙烯结合的甲苯磺酰基肼(1.03g，2.76mmol)搅拌14小时。过滤该混合物，并依次用THF(10mL)和MeOH(3x10mL)洗涤树脂。将滤液与先前获得的约40mg粗产物合并，并在减压下浓缩。将最终残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-30％EtOAc)纯化。将产物级分浓缩至干燥，以提供呈淡黄色固体的(1S，3R)-1-(4-溴-2，6-二氟苯基)-3，5-二甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(230mg，41％)。1H NMR(300MHz，CDCl3，27℃)1.04(3H，d)，2.42(3H，s)，2.58(1H，dd)，2.74-2.87(1H，m)，3.02-3.28(2H，m)，3.46-3.59(1H，m)，5.27(1H，s)，6.66(1H，d)，7.02(2H，d)，7.32(1H，d)，9.95-10.73(2H，br.s)。m/z：ES+[M+H]+449。
(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢- 3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
在大约-20℃(冰-NaCl浴)，经1分钟向(1S，3R)-1-(4-溴-2，6-二氟苯基)-3，5-二甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(230mg，0.51mmol)于丙酸(2mL)中的搅拌溶液中逐滴添加亚销酸钠(35mg，0.51mmol)于水(0.20mL)中的溶液。15分钟后，将反应用冰冷的EtOAc(15mL)稀释。在这些条件下剧烈搅拌该两相混合物，并通过缓慢添加固体Na2CO3中和(直至使用pH条测量的碱性)。移去冷却浴。将各相分离，并且将有机层用饱和NaHCO3水溶液(2x15mL)、饱和氯化钠水溶液(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将所得的残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中5％-35％EtOAc)纯化。将产物级分浓缩至干燥，以提供呈淡橙色薄膜的(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(104mg，45％)。1H NMR(300MHz，CDCl3，27℃)1.15(3H，d)，2.89-3.04(2H，m)，3.20-3.36(1H，m)，3.50(1H，dd)，3.61-3.75(1H，m)，5.41(1H，s)，6.80(1H，d)，7.01-7.11(2H，m)，7.23(1H，d)，8.10(1H，s)，10.24(1H，br.s)。m/z：ES+[M+H]+460。
(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-7-(2，2，2- 三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
向(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(104mg，0.23mmol)于DCM(1.5mL)的搅拌溶液中添加3，4-二氢-2H-吡喃(0.103mL，1.13mmol)和对甲苯磺酸一水合物(2mg，0.01mmol)。将反应在回流条件下保持1小时。冷却后，将反应用DCM稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得的残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-30％EtOAc)纯化。将产物级分浓缩至干燥，以提供呈淡黄色固体的(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(117mg，95％)。m/z：ES+[M+H]+544。
3-((3，5-二氟-4-((6S，8R)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-7-(2，2，2-三氟乙 基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氨基)氯杂环丁烷-1-甲酸叔丁 酯的制备
用搅拌棒将小瓶填充(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(55mg，0.10mmol)、3-氨基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(26mg，0.15mmol)、Pd2dba3(9mg，0.01mmol)、Xantphos(12mg，0.02mmol)和碳酸铯(99mg，0.30mmol)。将小瓶密封并用氮气(3x)抽空/回填，之后通过注射器添加脱气的1，4-二噁烷(1mL)。将混合物在环境温度下搅拌2分钟，然后置于已预热至90℃的加热块中。22小时后，允许将混合物冷却至室温，并且然后用EtOAc稀释。将混合物通过硅藻土过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将所得的残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-45％EtOAc)纯化。将产物级分浓缩至干燥，以提供呈淡黄色固体的3-((3，5-二氟-4-((6S，8R)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(46mg，72％)。1H NMR(300MHz，CDCl3，27℃)1.08(3H，d)，1.42(9H，s)，1.55-1.81(4H，m)，1.97-2.23(2H，m)，2.45-2.63(1H，m)，2.80-3.02(2H，m)，3.09-3.27(1H，m)，3.34-3.47(1H，m)，3.53-3.65(1H，m)，3.66-3.75(3H，m)，3.92-4.02(1H，m)，4.19-4.32(3H，m)，5.25(1H，s)，5.58-5.67(1H，m)，5.93(2H，dd)，6.81(1H，d)，7.22-7.27(1H，m)，7.98(1H，s)。用氯仿将在7.22至7.27ppm的多重峰部分重叠。m/z：ES+[M+H]+636。
N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑 并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺的制备
将3-((3，5-二氟-4-((6S，8R)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(46mg，0.08mmol)溶于甲酸(0.50mL，13mmol)，并且将搅拌溶液加温至30℃。27小时后，将反应在减压下浓缩。将所得残余物溶于5％IPA/DCM中，并用饱和NaHCO3水溶液中和。将各相分离并且将水层用5％IPA/DCM(2x4mL)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩，以提供粗N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺(38mg，111％)，被小量的部分去保护的起始材料污染，呈淡黄色薄膜。m/z：ES+[M+H]+452。
实例9
5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f] 异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-4-甲氧基吡啶-2-胺
将DMF(1mL)和DIPEA(0.022ml，0.13mmol)依次加入用N-(氮杂环丁烷-3-基)-5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-4-甲氧基吡啶-2-胺(22mg，0.050mmol)填充的烧瓶中。然后添加DMF(0.1mL)中的1-氟-3-碘丙烷(9mg，0.05mmol)。2小时后，将反应用饱和氯化钠水溶液稀释，并且将混合物在EtOAC(3x)中萃取。将合并的有机层用水洗涤并经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得粗薄膜通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中2％-10％MeOH)纯化，以给出呈干燥薄膜的5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-4-甲氧基吡啶-2-胺(9.0mg，36％)。1H NMR(500MHz，氯仿-d，27℃)δppm 0.46-0.66(2H，m)，0.85-1.05(2H，m)，1.09(3H，d)，1.64-1.78(2H，m)，2.50-2.61(3H，m)，2.83(1H，dd)，2.87-2.96(2H，m)，3.04-3.21(2H，m)，3.56-3.69(2H，m)，3.70-3.76(1H，m)，3.85(3H，s)，4.30-4.37(1H，m)，4.45(2H，dt)，4.93(1H，br d)，5.32(1H，s)，5.82(1H，s)，6.76(1H，d)，7.00(1H，d)，7.32(1H，s)，7.99(1H，s)，11.00(1H，brs)。m/z：ES+[M+H]+497
如下所述制备N-(氮杂环丁烷-3-基)-5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-4-甲氧基吡啶-2-胺
(1S，3R)-1-(6-溴-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1， 2，3，4-四氢异喹啉-6-胺的制备
将6-溴-4-甲氧基烟醛(1.46g，6.77mmol)加入(R)-3-(2-(((1-氟环丙基)甲基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(0.800g，3.39mmol)于AcOH(27ml)和水(0.305g，16.9mmol)的溶液中，并且将反应在85℃加热18小时。冷却后，将反应在减压下浓缩，并且将所得残余物用乙酸乙酯稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液碱化。将有机层与HCl水溶液(1N)合并，并且将双相混合物在室温下搅拌30分钟。用HCl水溶液(1N)洗涤有机层，然后用乙酸乙酯萃取合并的水层。然后将水层通过添加固体K2CO3进行碱化，并且用乙酸乙酯(2x)萃取。将来自经碱化的水层的合并的乙酸乙酯萃取物经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中10％-100％乙酸乙酯)纯化，以提供呈胶的(1S，3R)-1-(6-溴-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.450g，30.6％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6，27℃)δppm 0.47-0.64(2H，m)，0.87-0.98(5H，m)，1.95(3H，s)，2.42-2.48(1H，m)，2.79(1H，dd)，2.87-2.99(1H，m)，3.41-3.50(H，m)，3.92-3.97(3H，m)，4.66(2H，s)，5.11(1H，s)，6.30(1H，d)，6.39(1H，d)，7.26(1H，s)，7.64(1H，s)。一个氢被DMSO遮挡。m/z：ES+[M+H]+434。
(6S，8R)-6-(6-溴-4-甲氧基吡啶-3-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8， 9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
在-15℃(盐/冰浴)，将亚销酸钠(0.045g，0.65mmol)于水(0.75mL)的溶液逐滴加入(1S，3R)-1-(6-溴-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.270g，0.62mmol)于丙酸(3.0mL)的溶液中，并且将反应这些条件下搅拌1小时。添加冰冷的EtOAc(10mL)，随后分部分地添加饱和NaHCO3(15mL)水溶液。将各层分离，并且将有机层用饱和NaHCO3水溶液(2X)洗涤。将合并的水层(pH＝8)用EtOAc萃取，并且然后将所有合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中20％-60％乙酸乙酯)纯化，以给出呈胶的(6S，8R)-6-(6-溴-4-甲氧基吡啶-3-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.11g，41％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6，27℃)0.47-0.64(2H，m)，0.87-0.97(2H，m)，0.97-1.01(3H，m)，2.51-2.63(1H，m)，2.89(1H，dd)，2.94-3.06(1H，m)，3.23(1H，brdd)，3.54-3.67(1H，m)，3.97(3H，s)，5.28(1H，s)，6.68(1H，d)，7.21(1H，d)，7.30(1H，s)，7.68(1H，s)，8.06(1H，s)，12.98(1H，br s)。m/z：ES+[M+H]+445。
(6S，8R)-6-(6-溴-4-甲氧基-3-吡啶基)-7-[(1-氟环丙基)甲基]-8-甲基-3- [(2R)-四氢吡喃-2-基]-8，9-二氢-6H-吡唑并[4，3-f]异喹啉和(6S，8R)-6-(6-溴-4-甲氧 基吡啶-3-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢- 2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将DCM(4mL)加入用(6S，8R)-6-(6-溴-4-甲氧基吡啶-3-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(150mg，0.34mmol)和4-甲基苯磺酸水合物(71mg，0.37mmol)填充的烧瓶中。将3，4-二氢-2H-吡喃(43mg，0.51mmol)加入经搅拌的反应中，并且将反应在室温搅拌过夜。将反应用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，并且将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩以给出粗棕色胶。将其通过快速色谱法(洗脱梯度为己烷中5％-40％EtOAc)纯化，以给出呈胶的(6S，8R)-6-(6-溴-4-甲氧基-3-吡啶基)-7-[(1-氟环丙基)甲基]-8-甲基-3-[(2R)-四氢吡喃-2-基]-8，9-二氢-6H-吡唑并[4，3-f]异喹啉和(6S，8R)-6-(6-溴-4-甲氧基吡啶-3-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的混合物(151mg，85％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d，27℃)0.45-0.61(2H，m)，0.96-1.06(2H，m)，1.09(3H，d)，1.46-1.91(3H，m)，2.03-2.20(2H，m)，2.47-2.63(2H，m)，2.88(1H，ddd)，3.14(1H，dd)，3.20-3.31(1H，m)，3.64-3.79(2H，m)，3.96(3H，d)，3.98-4.06(1H，m)，5.40(1H，d)，5.64-5.71(1H，m)，6.78(1H，d)，6.99(1H，d)，7.25-7.33(1H，m)，7.76(1H，d)，8.02(1H，d)。
3-((5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7， 8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-4-甲氧基吡啶-2-基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲 酸叔丁酯和3-(5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6， 7，8，9-四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-4-甲氧基吡啶-2-基氨基)氮杂环丁烷-1-甲 酸叔丁酯的制备
将二噁烷(2.7mL)加入用(6S，8R)-6-(6-溴-4-甲氧基吡啶-3-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉和(6S，8R)-6-(6-溴-4-甲氧基吡啶-3-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的混合物(140mg，0.26mmol)、碳酸铯(172mg，0.53mmol)和3-氨基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(68mg，0.40mmol)填充的烧瓶中，并且将反应烧瓶抽空且用氮气(3x)回填。添加BrettPhos第三代预催化剂(24mg，0.030mmol)，并且将烧瓶再次抽空并用氮气(3x)回填。将反应在110℃下加热4小时。将反应冷却至室温，过滤，并且在减压下浓缩。将所得um通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中30％-100％乙酸乙酯)纯化，以给出呈干燥薄膜的3-((5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-4-甲氧基吡啶-2-基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯和3-(5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-4-甲氧基吡啶-2-基氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的混合物(53mg，32％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d，27℃)0.50-0.68(2H，m)，0.96-1.09(2H，m)，1.12(3H，d)，1.42-1.47(9H，m)，1.60-1.88(3H，m)，2.07-2.21(2H，m)，2.50-2.67(2H，m)，2.85(1H，ddd)，3.10-3.23(2H，m)，3.63-3.79(4H，m)，3.87-3.91(3H，m)，3.99-4.07(1H，m)，4.24-4.33(2H，m)，4.42-4.52(1H，m)，5.36(1H，d)，5.64-5.73(1H，m)，5.83(1H，d)，6.85(1H，d)，7.26-7.32(2H，m)，7.40(1H，d)，8.00-8.03(1H，m)。m/z：ES+[M+H]+621。
N-(氮杂环丁烷-3-基)-5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四 氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-4-甲氧基吡啶-2-胺的制备
将甲醇(0.5mL)加入用3-((5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-4-甲氧基吡啶-2-基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.047g，0.080mmol)填充的烧瓶中。添加二噁烷中的HCl(4M；0.5mL，2mmol)，并继续搅拌2小时。然后将反应在减压下浓缩，并且将所得残余物使用SCX-2盒(用甲醇中3N氨洗脱)纯化，以给出呈胶的粗N-(氮杂环丁烷-3-基)-5-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-4-甲氧基吡啶-2-胺(25mg，76％)。将产物不经进一步纯化用于下一步骤中。m/z：ES+[M+H]+437。
实例10
N-(4-((6S，8R)-7-((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四 氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺
将1，4-二噁烷(1.4mL)中的1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(47.3mg，0.36mmol)加入含有(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(100mg，0.18mmol)、叔丁醇钠(34.4mg，0.36mmol)和[(2-二-环己基膦基-3，6-二甲氧基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯基)-2-(2′-氨基-1，1′-联苯基)]钯(II)甲磺酸盐(BrettPhos Pd G3)(8.10mg，8.95μmol)的密封微波小瓶中。将小瓶用鼓泡氮气脱气10分钟，然后加热至90℃持续1小时。冷却后，将反应用EtOAc稀释，并且用水洗涤。将水相用EtOAc萃取，然后将合并的有机物蒸发。将粗残余物溶于DCM(2mL)中，并且添加TFA(1mL)。将混合物搅拌1小时，然后蒸发。将残余物溶于DCM中，并且用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用DCM萃取，然后将合并的有机物经Na2SO4干燥并且蒸发。将粗产物通过制备型HPLC(Waters Xbridge Prep C18 OBD柱，5μ二氧化硅，19mm直径，100mm长度)(使用水(含有0.1％NH3)与MeCN的极性递减混合物作为洗脱液)纯化。将含有所需化合物级分蒸发至干燥，以提供呈米色固体的N-(4-((6S，8R)-7-((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(59.0mg，63％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.07(3H，d)，1.68-1.87(2H，m)，2.62(2H，t)，2.75(1H，d)，2.83(1H，dd)，2.87-2.96(3H，m)，3.10(1H，dd)，3.27(1H，dt)，3.74(2H，q)，3.84(3H，s)，4.04-4.14(2H，m)，4.43(4H，td)，4.53(1H，t)，4.58(1H，d)，4.78(2H，td)，5.11(1H，s)，5.90(1H，dd)，6.12(1H，d)，6.48(1H，d)，6.80(1H，d)，7.15(1H，d)，8.05(1H，d)；m/z：ES+[M+H]+526。
如下制备N-(4-((6S，8R)-7-((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺：
(3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲醇的制备
将氟化铯(5.03g，33.14mmol)加入含有在乙二醇(6mL)中的(3-(溴甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲醇(2.00g，11.05mmol)的烧瓶中，并且将反应加热至150℃持续2小时。冷却后，将反应用EtOAc(30mL)和水(30mL)稀释。用二乙醚(3x30mL)和乙酸乙酯(3x30mL)萃取水层。将合并的有机物经MgSO4干燥，过滤并且蒸发，然后将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-100％EtOAc)纯化。将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供呈无色液体的(3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲醇(0.734g，55％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)3.92(2H，s)，4.52(4H，t)，4.59-4.89(2H，m)。
(3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基三氟甲磺酸酯的制备
向(3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲醇(1.00g，8.32mmol)于DCM(30.7mL)的溶液中添加三氟甲磺酸酐(1.47ml，8.74mmol)，随后添加2，6-二甲基吡啶(1.12ml，9.57mmol)，并且将反应在0℃搅拌1小时。将反应用水和1N柠檬酸溶液洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤和蒸发，以提供呈红色油的(3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基三氟甲磺酸酯(1.98g，94％)，将其不经进一步纯化直接使用。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)4.40-4.75(8H，m)。
(R)-3-(2-(((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺的制 备
将(3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基三氟甲磺酸酯(1.92g，7.61mmol)加入(R)-3-(2-氨基丙基)-2-甲基苯胺(1.00g，6.09mmol)和DIPEA(1.58ml，9.13mmol)于1，4-二噁烷(18.7mL)的溶液中，并且将反应加热至70℃持续5小时。冷却后，将反应用EtOAc稀释，并且用水洗涤。将水相用EtOAc萃取，然后将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并且蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为EtOAc中0-10％MeOH)纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈淡黄色胶的(R)-3-(2-(((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(0.673g，42％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.11(3H，d)，2.04(3H，s)，2.59-2.71(1H，m)，2.76-3.10(4H，m)，4.34-4.52(4H，m)，4.53-4.68(2H，m)，6.58(1H，d)，6.60(1H，d)，6.95(1H，t)。m/z：ES+[M+H]+267。
(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-3， 5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺的制备
将4-溴-2-甲氧基苯甲醛(645mg，3.00mmol)加入(R)-3-(2-(((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(400mg，1.5mmol)于乙酸(7.4mL)和水(135μl，7.50mmol)的溶液中。将反应加热至80℃持续4小时。冷却后，将乙酸蒸发，然后将残余物溶于DCM中，并且用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层经Na2SO4干燥、过滤并蒸发。将残余物溶于甲醇(5mL)中，然后加入盐酸羟胺(313mg，4.50mmol)和乙酸钾(588mg，6.00mmol)，并且将反应在室温下搅拌30分钟。蒸发挥发物，然后将残余物溶于DCM和水中。将各层分离，然后将水层用DCM萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并且蒸发，然后将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化。将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供呈米色固体的(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(302mg，43％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.01(3H，d)，2.07(3H，s)，2.45(1H，dd)，2.61-2.73(1H，m)，2.86(1H，d)，3.01-3.14(1H，m)，3.54(2H，s)，3.87(3H，s)，4.41-4.48(2H，m)，4.51(1H，d)，4.53-4.60(2H，m)，4.67(1H，d)，4.73-4.81(1H，m)，5.00(1H，s)，6.47(1H，s)，6.47(1H，s)，6.61(1H，d)，6.88(1H，dd)，7.01(1H，d)。m/z：ES+[M+H]+463。
(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-8- 甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
在-15℃(干冰/丙酮浴)，将水(0.5mL)中的亚销酸钠(39.1mg，0.57mmol)加入(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(250mg，0.54mmol)于丙酸(2.2mL)的冷却溶液中。搅拌30min后，添加冰冷的甲苯(15mL)，并且将反应在0℃搅拌15min并且然后加温至室温持续1小时。添加水(15mL)，并且分离各层。将水层用EtOAc(2x15mL)萃取，然后将合并的有机物用饱和氯化钠水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化。将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供呈米色固体的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(188mg，74％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.07(3H，d)，2.70(1H，d)，2.87(1H，dd)，2.97(1H，d)，3.11-3.18(1H，m)，3.18-3.27(1H，m)，3.90(3H，s)，4.42-4.52(3H，m)，4.59(1H，d)，4.63-4.87(2H，m)，5.19(1H，s)，6.63(1H，d)，6.76(1H，d)，6.88(1H，dd)，7.05(1H，d)，7.19(1H，d)，8.09(1H，d)。m/z：ES+[M+H]+474。
(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-8- 甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将3，4-二氢-2H-吡喃(67.3μl，0.74mmol)加入(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(175mg，0.37mmol)和4-甲基苯磺酸水合物(14.0mg，0.07mmol)于DCM(3.6mL)的溶液中，并且将反应在40℃搅拌2小时。冷却后，将反应用DCM稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发。使残余物通过二氧化硅塞(用EtOAc/庚烷(1∶1)洗脱)。将滤液蒸发，以提供呈米色固体的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-((3-(氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(196mg，95％)，将其直接用于下一阶段。m/z：ES+[M+H]+558。
实例11
N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡 唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺
将二噁烷中的4N HCl(0.25mL，0.99mmol)加入N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(58mg，0.10mmol)于甲醇(0.30mL)的溶液中，并且将反应在室温下搅拌2小时。蒸发挥发物，并且将残余物悬浮在饱和NaHCO3水溶液(30mL)中，用DCM(x2)萃取。将有机相经MgSO4干燥、过滤并蒸发。通过硅胶色谱法纯化粗残余物，并且使用DCM中0-10％1M NH3/MeOH梯度洗脱。将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(45.4mg，91％)。1HNMR(500MHz，CDCl3，27℃)0.47(2H，dtd)，0.95(2H，dt)，1.08(3H，d)，1.68-1.85(2H，m)，2.59(2H，s)，2.69(1H，dd)，2.91(3H，dq)，3.14(1H，dd)，3.43(1H，dd)，3.69(2H，q)，3.81(1H，dd)，4.01(1H，q)，4.28(1H，d)，4.43(1H，t)，4.53(1H，t)，5.19(1H，s)，5.96(2H，d)，6.82(1H，d)，7.15(1H，d)，8.06(1H，d)，10.36(1H，s)。m/z(ES+)，[M+H]+＝502。
如下制备N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺：
(1S，3R)-1-(4-溴-2，6-二氟苯基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3， 4-四氢异喹啉-6-胺的制备
将H2O(0.13mL，7.40mmol)和乙酸(5.79mL)的混合物中的(R)-3-(2-(((1-氟环丙基)甲基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(0.35g，1.48mmol)和4-溴-2，6-二氟苯甲醛(0.33g，1.48mmol)在80℃加热7小时。蒸发溶剂，并且将残余物用HCl(1N，10mL)处理，并在室温下搅拌1小时。向反应中加入固体Na2CO3直至反应pH＞8。用H2O(40mL)稀释该混合物并用EtOAc(2x50mL)萃取两次。将有机相经MgSO4干燥，过滤，浓缩并通过硅胶色谱法(庚烷中10％-70％EtOAc)纯化，以提供呈淡黄色胶的(1S，3R)-1-(4-溴-2，6-二氟苯基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.285g，44％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)0.44(2H，dq)，0.91-0.95(1H，m)，0.95-0.99(1H，m)，1.02(3H，d)，2.06(3H，s)，2.50-2.65(2H，m)，3.00-3.15(2H，m)，3.50(2H，s)，3.69(1H，d)，5.17(1H，s)，6.42(2H，s)，6.97(1H，d)，6.99(1H，d)。m/z(ES+)，[M+H]+＝439。
(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四 氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将(1S，3R)-1-(4-溴-2，6-二氟苯基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.280g，0.64mmol)于丙酸(2.66mL)冷却至-17℃(干冰/丙酮浴)。逐滴添加水(0.53mL)中的亚销酸钠(0.044g，0.64mmol)，并且将反应混合物在-17℃搅拌30分钟。将反应混合物用冰冷的甲苯(15mL)稀释并在4℃搅拌15分钟。然后搅拌该混合物并加温至室温持续45分钟。将反应混合物用水(2x15mL)洗涤，将合并的水相用EtOAc(2x10mL)洗涤，将合并的有机物用饱和氯化钠水溶液(1x20mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并且将滤液蒸发至橙色-棕色油。将粗材料通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-40％EtOAc)纯化，以提供呈灰白色固体的(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.216g，75％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)0.46(2H，dddd)，0.91-1.04(2H，m)，1.07(3H，d)，2.66(1H，dd)，2.95(1H，dd)，3.15(1H，dd)，3.46(1H，dd)，3.83(1H，dd)，5.32(1H，s)，6.76(1H，d)，7.00(2H，d)，7.18(1H，d)，8.09(1H，d)，10.52(1H，s)。m/z(ES+)，[M+H]+＝450。
(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H- 吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉和(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯 基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并 [4，3-f]异喹啉的制备
将微波小瓶用(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(216mg，0.48mmol)、4-甲基苯磺酸水合物(9.1mg，0.05mmol)、3，4-二氢-2H-吡喃(0.07mL，0.72mmol)和DCM(2mL)填充。将混合物在微波中在80℃下加热20分钟。添加另外的(0.035mL，0.36mmol)3，4-二氢-2H-吡喃，并且将反应加热至85℃持续另外15分钟。将反应用DCM稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤，然后将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化。将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供两种区域异构体THP-保护产物，呈淡黄色胶的(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉和(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(237mg，92％)(给出了主要异构体的数据)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)0.35-0.55(2H，m)，0.96(2H，ddd)，1.05(3H，dd)，1.58-1.84(3H，m)，1.97-2.32(3H，m)，2.64(1H，dd)，2.77(1H，dd)，3.14(1H，ddd)，3.29-3.54(1H，m)，3.62-3.91(2H，m)，3.96-4.25(1H，m)，5.26(1H，d)，5.65(1H，ddd)，6.64(1H，d)，7.00(2H，d)，7.26-7.45(1H，m)，8.13(1H，dd)。m/z(ES+)，[M+H]+＝534。
N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2- 基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3- 胺的制备
将[(2-二-环己基膦基-3，6-二甲氧基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯基)-2-(2′-氨基-1，1′-联苯基)]钯(II)甲磺酸盐(BrettPhos Pd G3)(5.0mg，5.54μmol)加入(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉和(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(37mg，0.07mmol)、1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(22.9mg，0.17mmol)和叔丁醇钠(13.3mg，0.14mmol)于脱气的1，4-二噁烷(0.58mL)的悬浮液中，并且在微波中，将反应加热至95℃持续1.5小时。将反应混合物用EtOAc稀释，通过硅藻土过滤并蒸发至干燥。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中0-10％1M NH3/MeOH)纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈无色干燥薄膜的N-(3，5-二氟-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(18.0mg，44％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)0.38-0.54(2H，m)，0.94(2H，ddd)，1.06(3H，dd)，1.67-1.82(4H，m)，2.04-2.25(4H，m)，2.59(2H，t)，2.63-2.77(2H，m)，2.89(2H，dd)，3.14(1H，s)，3.29-3.37(1H，m)，3.70(2H，q)，3.75-3.81(2H，m)，4.00(1H，q)，4.12-4.17(1H，m)，4.22(1H，d)，4.43(1H，t)，4.52(1H，t)，5.10(1H，s)，5.55-5.74(1H，m)，5.96(2H，d)，6.71(1H，d)，7.28-7.44(1H，m)，8.10(1H，dd)。m/z(ES+)，[M+H]+＝586。
实例12和13
(6S，8R)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-6-(4-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3- 基氧基)-2-甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的各非对映异 构体的制备
向用(6S，8R)-6-(4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(32mg，0.07mmol)填充的烧瓶中添加DMF(0.66mL)，随后添加DIPEA(23.9μl，0.14mmol)。向搅拌的反应中逐滴注射1-氟-3-碘丙烷(13.5mg，0.07mmol)，并且将反应在室温下搅拌过夜。将反应蒸发至干燥，并且将残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中0-10％1M NH3/MeOH)纯化。将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供为非对映异构体混合物的产物。将非对映异构体通过手性制备型SFC(Phenomonex Lux C4柱，5μ二氧化硅，30mm直径，250mm长度)(使用CO2中渐减等度40％MeOH+0.1％NH3作为洗脱液)分离，以提供呈淡黄色干燥薄膜的第一洗脱异构体(8.0mg，22％)和第二洗脱异构体(8.0mg，22％)。
异构体1：1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.06(3H，d)，1.28(3H，d)，1.72-1.83(2H，m)，2.47(1H，dd)，2.63(2H，t)，2.8-2.95(2H，m)，3.03-3.11(2H，m)，3.19(2H，s)，3.33(3H，s)，3.56(1H，dd)，3.67(1H，d)，3.79(2H，q)，3.86(3H，s)，4.44(1H，t)，4.53(1H，t)，4.74(1H，t)，5.32(1H，s)，6.10(1H，dd)，6.41(1H，d)，6.69(1H，d)，6.76(1H，d)，7.13(1H，d)，8.05(1H，d)，10.20(1H，s)。m/z(ES+)，[M+H]+＝529；
异构体2：1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.06(3H，d)，1.25(3H，d)，1.70-1.82(2H，m)，2.45-2.56(1H，m)，2.63(2H，t)，2.78-2.91(2H，m)，3.02-3.11(2H，m)，3.18(1H，d)，3.36(3H，s)，3.42(1H，dd)，3.47-3.55(1H，m)，3.62(1H，d)，3.74-3.82(2H，m)，3.86(3H，s)，4.43(1H，t)，4.53(1H，t)，4.73(1H，t)，5.36(1H，s)，6.08(1H，dd)，6.41(1H，d)，6.67(1H，d)，6.79(1H，d)，7.15(1H，d)，8.06(1H，d)，10.20(1H，s)。m/z(ES+)，[M+H]+＝529。
如下制备(6S，8R)-6-(4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉：
(6S，8R)-6-(4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2- 甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的非对映异构体混合物的制 备
将3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(102mg，0.59mmol)、(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(110mg，0.20mmol)、3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(102mg，0.59mmol)、Pd RockPhos第三代(16.6mg，0.02mmol)和碳酸铯(128mg，0.39mmol)悬浮于甲苯(1.26mL)中并密封在微波管中。将反应加热至95℃持续20小时。将反应混合物用EtOAc(25mL)稀释并通过硅藻土过滤。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-100％EtOAc)纯化。将含有不纯产物的级分蒸发至干燥，并溶于DCM(1.3mL)中，向其中滴加TFA(378μL，4.91mmol)。在室温下将反应搅拌2小时，然后将挥发物在真空中去除。将残余物用饱和NaHCO3水溶液(30mL)洗涤，并用DCM(2x 30mL)萃取。将合并的有机相经MgSO4干燥，过滤并蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中0-40％1M NH3/MeOH)纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的(6S，8R)-6-(4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(35.0mg，38％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.06(3H，dd)，1.24-1.35(3H，m)，2.49(1H，dt)，2.76-2.96(2H，m)，3.08-3.27(2H，m)，3.34(3H，d)，3.41(1H，s)，3.53-3.69(2H，m)，3.69-3.93(7H，m)，4.81-5.08(1H，m)，5.34(1H，d)，6.02-6.12(1H，m)，6.40(1H，t)，6.68(1H，s)，6.77(1H，dd)，7.13(1H，d)，8.05(1H，t)。m/z(ES+)，[M+H]+＝469。
实例14和15
N-(4-((6S，8R)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡 唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氯杂环丁烷-3-胺的各非对映异 构体的制备
将1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(175mg，1.32mmol)、(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2-氟-3-甲氧基-2-甲基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(370mg，0.66mmol)以及叔丁醇钠(127mg，1.32mmol)悬浮于1，4-二噁烷(8mL)中。将混合物脱气，并且添加[(2-二-环己基膦基-3，6-二甲氧基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯基)-2-(2′-氨基-1，1′-联苯基)]钯(II)甲磺酸盐(Brett Phos G3)(60mg，0.07mmol)。将反应加热至100℃持续3小时。将反应混合物用DCM(100mL)稀释并用水(100mL)洗涤。蒸发有机层。使用114mg(0.3mmol)芳基溴化物重复该过程。将来自这些反应的合并的粗产物悬浮于盐酸(2M，5mL)中并在室温下搅拌2小时。将反应混合物用水(10mL)稀释并且用EtOAc(10mL)洗涤。将水相用2M氢氧化钠水溶液碱化，并且用DCM(2x15mL)萃取。将合并的有机物蒸发，并且将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中0-20％MeOH)纯化。将级分蒸发至干燥，以提供为非对映异构体的混合物的粗产物，将其通过手性制备型SFC(Phenomonex Lux C4柱，5μ二氧化硅，30mm直径，250mm长度)(使用CO2中渐减等度40％MeOH+0.1％NH3作为洗脱液)分离，以提供第一洗脱异构体(42mg，19％)和第二洗脱异构体(29mg，13％)。
异构体1：1H NMR(500MHz，DMSO，27℃)0.96(3H，d)，1.20(3H，d)，2.36-2.44(1H，m)，2.65-2.85(3H，m)，2.92(4H，q)，3.05-3.22(3H，m)，3.23(3H，s)，3.24-3.27(2H，m)，3.46-3.59(2H，m)，3.78(3H，s)，4.49(2H，dd)，5.16(1H，s)，5.35(1H，t)，5.95(1H，dd)，6.23(1H，d)，6.36(1H，d)，6.63(1H，d)，7.16(1H，d)，8.02(1H，s)，12.90(1H，s)；19F NMR(471MHz，DMSO，27℃)-219.77，-149.11，m/z：ES+[M+H]+528。
异构体2：1H NMR(500MHz，DMSO，27℃)0.97(3H，d)，1.19(3H，d)，2.68-2.81(3H，m)，2.88-2.95(3H，m)，3.05-3.11(1H，m)，3.21-3.28(5H，m)，3.32-3.39(1H，m)，3.43-3.56(2H，m)，3.79(3H，s)，4.49(2H，dd)，5.17(1H，s)，5.34(1H，t)，5.93(1H，dd)，6.23(1H，d)，6.35(1H，d)，6.64(1H，d)，7.16(1H，d)，8.02(1H，s)，12.90(1H，s)；19F NMR(471MHz，DMSO，27℃)-219.76，-148.20；m/z：ES+[M+H]+528。
实例16
2，2-二氟-3-((6S，8R)-6-(5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)吡啶-2- 基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇的制备
将盐酸(2.0M，0.5mL)加入2，2-二氟-3-((6S，8R)-6-(5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)吡啶-2-基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇(0.132g，0.23mmol)中，并且将溶液在室温下搅拌3小时。将反应混合物通过离子交换色谱法(使用SCX柱)纯化。将所需产物使用1M NH3/MeOH从柱上洗脱，以提供呈白色固体的2，2-二氟-3-((6S，8R)-6-(5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)吡啶-2-基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇(0.084g，75％)。1H NMR(500MHz，DMSO，27℃)1.04(3H，d)，1.20-1.28(2H，m)1.59-1.71(2H，m)，2.60-2.70(1H，m)，2.73-2.84(3H，m)，2.99(1H，dd)，3.08-3.18(1H，m)，3.41(1H，d)，3.61-3.72(4H，m)，3.93(1H，d)，4.44(2H，dt)，4.94(1H，s)，5.42(1H，t)，6.21(1H，d)，6.78-6.82(2H，m)，6.90(1H，d)，7.21(1H，d)，7.74(1H，d)，8.03(1H，s)，12.94(1H，s)；19F NMR(471MHz，DMSO，27℃)-218.24，-108.31；m/z：ES+[M+H]+489。
如下制备2，2-二氟-3-((6S，8R)-6-(5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)吡啶-2-基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇：
(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-2-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟 丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺的制备
将(R)-3-(2-((3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(1.20g，2.42mmol)和5-溴吡啶甲醛(0.944g，5.07mmol)在乙酸(12mL)和水(0.22mL，12.08mmol)中加热至70℃持续30分钟。蒸发反应混合物，并且将残余物重新溶于乙醇(10mL)中。添加乙酸钾(0.594g，6.05mmol)和盐酸羟胺(0.252g，3.63mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后蒸发，并且将残余物在DCM(30mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)之间分配。将有机相蒸发，并且将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化，以提供呈无色胶的(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-2-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(1.090g，68％)。1HNMR(500MHz，DMSO，27℃)0.96(9H，s)，0.98(3H，d)，1.94(3H，s)，2.40(1H，dd)，2.57(1H，dd)，2.66-2.78(1H，m)，3.11-3.22(2H，m)，3.84-3.93(1H，m)，3.95-4.05(1H，m)，4.69(2H，s)，4.91(1H，s)，6.39(1H，d)，6.42(1H，d)，6.99(1H，d)，7.39-7.48(6H，m)，7.59(4H，ddd)，7.80(1H，dd)，8.51(1H，dd)；19F NMR(471MHz，DMSO，27℃)-109.84(d)，-108.39(d)；m/z：ES+[M+H]+664/666。
(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟 丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将水(1.0mL)中的亚销酸钠(119mg，1.72mmol)加入(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-2-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(1.09g，1.64mmol)和对甲苯磺酸水合物(0.94g，4.92mmol)于乙腈(6mL)的冰冷溶液中。将反应搅拌15分钟，并且然后加温至室温持续45分钟。冷却回4℃后，添加冰冷的MeCN(40mL)中的四丁基乙酸铵(2.54g，8.20mmol)，并且将反应搅拌15分钟，之后加温至室温持续另外30分钟，添加EtOAc(120mL)，随后添加2M NaOH(100mL)。用饱和氯化钠水溶液洗涤有机相，干燥(Na2SO4)并蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化，以提供呈浅棕色泡沫的(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.330g，30％)。1H NMR(500MHz，DMSO，27℃)0.97(9H，s)，1.06(3H，d)，2.75-2.91(2H，m)，2.99-3.06(1H，m)，3.34-3.41(2H，m)，3.88-4.01(2H，m)，5.12(1H，s)，6.83(1H，d)，7.12(1H，d)，7.26(1H，d)，7.39-7.45(4H，m)，7.46-7.50(2H，m)，7.56-7.62(4H，m)，7.85(1H，dd)，8.07-8.09(1H，m)，8.54(1H，dd)，13.02(1H，s)；19F NMR(471MHz，DMSO，27℃)-110.01(d)，-108.72(d)；m/z：ES+[M+H]+675/677。
(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟 丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的非对 映异构体混合物的制备
向(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.330g，0.49mmol)和3，4-二氢-2H-吡喃(0.13mL，1.47mmol)于DCM(5mL)的溶液中添加对甲苯磺酸水合物(93mg，0.49mmol)，并且将反应在40℃加热1小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，并且用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)洗涤。将有机相蒸发至深棕色油，并且将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化，以提供呈胶的(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-3-((S)-四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.330g，89％)。19F NMR(471MHz，DMSO，27℃)-110.03(d)，-108.83(d)，-108.79(d)；m/z：ES+[M+H]+759/761。
6-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-3- (四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基) 氯杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺的非对映异构体混合物的制备
将1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(0.115g，0.87mmol)、(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.330g，0.43mmol)、二环己基(2′，4′，6′-三异丙基-3，6-二甲氧基-[1，1′-联苯基]-2-基)磷烷(0.023g，0.04mmol)以及叔丁醇钠(0.125g，1.30mmol)悬浮于1，4-二噁烷(4mL)中。将混合物脱气，并添加[(2-二-环己基膦基-3，6-二甲氧基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯基)-2-(2′-氨基-1，1′-联苯基)]钯(II)甲磺酸盐(BrettPhos G3)(0.039g，0.04mmol)。将反应加热至100℃持续3小时。将反应混合物用DCM(50mL)稀释并用水(50mL)洗涤。将有机层蒸发，并且将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中0-20％MeOH)纯化，以提供呈黄色胶且为非对映异构体混合物的6-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺(0.264g，75％)。19F NMR(471MHz，DMSO，27℃)-218.19，-110.13，-109.44，-108.6-107.8；m/z：ES+[M+H]+811。
2，2-二氟-3-((6S，8R)-6-(5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)吡啶-2- 基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇的非对映异构混合物 的制备
将四丁基氟化铵(THF中1.0M，0.5mL，0.50mmol)加入6-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺(0.264g，0.33mmol)于THF(2mL)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌4小时，蒸发反应混合物，并且将残余物在DCM(20mL)和水(20mL)之间分配。将有机相蒸发，并且将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中0-20％MeOH)纯化，以提供呈无色干燥薄膜且为非对映异构体混合物的2，2-二氟-3-((6S，8R)-6-(5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)吡啶-2-基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇(0.132g，71％)。19F NMR(471MHz，DMSO，27℃)-218.19，-108.42，-108.39；m/z：ES+[M+H]+573。
实例17
N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)- 6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的制备
将1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(50mg，0.38mmol)、(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.100g，0.20mmol)、碳酸铯(128mg，0.39mmol)以及[(2-二-环己基膦基-3，6-二甲氧基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯基)-2-(2′-氨基-1，1′-联苯基)]钯(II)甲磺酸盐甲磺酸盐(Brett Phos G3)(23mg，0.02mmol)悬浮于1，4-二噁烷(2mL)中并密封在微波管中。将反应在微波照射下加热至100℃持续4小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释并用水(20mL)洗涤。蒸发有机层，并且将粗产物溶于DCM(3mL)和TFA(0.3mL)中。将反应在室温下搅拌1小时，然后将反应混合物在DCM(20mL)和2M NaOH(20mL)之间分配。将有机相蒸发，并且将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中0-20％MeOH)纯化。将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供呈无色干燥薄膜的N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺(9.0mg，10％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.14(3H，d)，1.70-1.82(2H，m)，2.62(2H，t)，2.85(1H，dd)，2.93-3.06(3H，m)，3.20-3.31(2H，m)，3.59(1H，td)，3.73(2H，dt)，4.10(2H，dd)，4.48(2H，dt)，5.03(1H，s)，6.80(1H，dd)，6.89(1H，d)，7.15(1H，d)，7.21(1H，d)，7.84(1H，dd)，8.01(1H，d)；19F NMR(471MHz，DMSO，27℃)-224.69，-75.55；m/z：ES+[M+H]+477。
如下制备(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉。
(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-3，5-二甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-1，2，3，4-四氢 异喹啉-6-胺的制备
将(R)-2-甲基-3-(2-((2，2，2-三氟乙基)氨基)丙基)苯胺(0.290g，1.18mmol)和5-溴吡啶甲醛(0.460g，2.47mmol)在乙酸(6mL)和水(0.1mL)中加热至70℃持续30分钟。蒸发反应混合物，并且将残余物溶于乙醇(10mL)中。添加乙酸钾(0.290g，2.95mmol)和盐酸羟胺(0.123g，1.77mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌30分钟。将反应混合物蒸发并且将残余物在DCM(30mL)与饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)之间分配。将有机相蒸发，并且将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化，以提供呈无色干燥薄膜的(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-3，5-二甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.264g，54％)。1H NMR(500MHz，DMSO，27℃)1.03(3H，d)，1.94(3H，s)，2.45(1H，dd)，2.67(1H，dd)，2.90(1H，dd)，3.22-3.29(1H，m)，3.49(1H，dd)，4.69(2H，s)，4.85(1H，s)，6.40-6.46(2H，m)，7.21(1H，d)，7.95(1H，dd)，8.56(1H，dd)；19F NMR(471MHz，DMSO，27℃)-69.83；m/z：ES+[M+H]+414/416。
(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-7-(2，2，2-三氟 乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3，f]异喹啉的制备
在-10℃，将水(0.2mL)中亚销酸钠(0.048g，0.70mmol)加入(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-3，5-二甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.264g，0.64mmol)于丙酸(2.5mL)的冷却溶液中。将反应搅拌1h，然后添加冰冷的EtOAc(10mL)。通过添加饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)淬灭反应并搅拌15分钟，之后允许加温至室温。将有机相干燥(Na2SO4)和蒸发，以给出呈棕色胶的粗(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.272g，0.64mmol)。将材料溶于DCM(10mL)中，加入对甲苯磺酸水合物(0.012g，0.06mmol)，并且将混合物在40℃加热2小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，并且用NaOH水溶液(2M，30mL)洗涤。将有机相蒸发至深棕色油，并且将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-40％EtOAc)纯化，以提供(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.142g，44％)。m//z：ES+[M+H]+509/511。
替代途径#1至实例17：
N-[1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基]-6-[(6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)- 3，6，8，9-四氢吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基]吡啶-3-胺的制备
在0℃，经0.5小时，将三氟乙酸(1.30L，17.04mol)加入(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0.50Kg，2.04mol)于DCM(1.50L)的搅拌溶液中。允许将混合物加温至20℃且在20℃搅拌2.5小时。将混合物加热到30℃并且继续搅拌1小时。在减压下浓缩该混合物，并且将残余物在减压下从甲苯(3x3.00L)中浓缩。将所得残余物溶于1，4-二噁烷(3.00L)中，并经45分钟用Me-THF中30％2-甲基丁-2-醇钠溶液(5.50L，13.63mol)处理，确保温度不超过29℃。添加90％w/w(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.81Kg，1.70mol)于1，4-二噁烷(1.50L)的溶液和BrettPhos Pd G3(0.077Kg，0.085mol)，并使用真空和氮气的循环(3x)，将气氛用氮气替代。将混合物加热至55℃，并且在55℃下搅拌2.5小时。允许将混合物冷却至21℃并加入水中8％NaHCO3溶液(7.16L，6.82mol)，随后加入乙酸异丙酯(4.50L)。将混合物搅拌2-3分钟，并分离各层。用水中8％NaHCO3溶液(7.16L，6.82mol)洗涤有机层，将混合物搅拌5分钟，然后分离各层。将合并的水层用乙酸异丙酯(4.50L)萃取。将合并的有机层用Silicycle(SiliaMetS-硫醇，400g，1.26mmol/g，6eq相对于Pd)处理并且将混合物搅拌16小时。通过硅藻土过滤去除固体，将滤饼用乙酸异丙酯洗涤。在减压下浓缩滤液(浴温40℃)。将残余物溶于乙酸异丙酯(5.00L)，并用另外的Silicycle(SiliaMetS-硫醇，250g，1,26mmol/g，3,7eq相对于Pd)处理。将所得混合物在21℃搅拌16小时。通过硅藻土过滤去除固体，将滤饼用乙酸异丙酯(2.50L)洗涤。在减压下浓缩滤液(浴温40℃)，以给出棕色泡沫。将粗产物通过制备型SFC(Lux C4柱，50mm直径，250mm长度)(使用洗脱梯度CO2中EtOH/DEA 100/0.5(140巴流动相中，流速400mL/分钟，在40℃))纯化，以给出浅棕色固体泡沫。添加EtOAc(2.00L)并且将溶液在减压下浓缩。加入EtOAc(1.90L)和庚烷(1.90L)并将混合物在25℃下接种。将混合物在25℃下保持1小时。经2小时将庚烷(6.50L)加入搅拌的混合物中。将所得混合物在22℃搅拌18小时。通过过滤收集所得固体，将滤饼用1∶5EtOAc/庚烷(2.50L)洗涤。在氮气层下持续30分钟吸干固体，然后在真空下在40℃干燥9天，以给出呈灰白色固体的N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺(626g，77％)。1H NMR(600MHz，DMSO-d6，27℃)1.07(3Hd)1.63(2H，dquin)，2.45(2H，t)，2.72(2H，br t)，2.83(1H，br dd)，2.91-3.00(1H，m)，3.06(1H，br dd)3.42-3.55(2H，m)，3.58-3.65(2H，m)，3.92(1H，dquin)4.43(2H，dt)4.92(1H，s)，6.22(1H，d)，6.79(1H，d)6.82(1H，dd)，6.96(1H，d)，7.21(1H，d)，7.73(1H，d)，8.04(1H，s)，12.96(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+477。
使用下述程序制备起始材料(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯和(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉。
(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
一式两份进行反应并合并进行后处理：在20℃，将1-氟-3-碘-丙烷(189g，1.00mol)加入N-(氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(200g，0.96mol)和K2CO3(331g，2.40mol)于THF(1.40L)和水(0.50mol)的搅拌混合物中。将反应混合物加热至70℃，并且在70℃下搅拌1.5小时。将两种反应混合物合并，并加入水(2.5L)和EtOAc(2.0L)中。将混合物在21℃下搅拌3分钟。分离各层，并且将有机层用水(2x2.0L)和饱和氯化铵溶液(2.0L)洗涤。将有机层在减压下进行浓缩以给出粗产物。添加甲苯(400mL)并且将混合物加热至60℃。加入庚烷(1.6L)，并且允许将混合物冷却至21℃并搅拌15分钟。通过过滤收集固体并吸干，以给出呈白色固体的(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(230g，52％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.44(9H，s)，1.68-1.80(2H，m)，2.56(2H，t)，2.87(2H，s)，3.66(2H，t)，4.29(1H，s)，4.43(1H，t)，4.52(1H，t)，4.86(1H，s)。
4-溴-1-四氢吡喃-2-基-吲唑的制备
在20℃，在氮气下，向4-溴-1H-吲唑(1.50Kg，7.60mol)和3，4-二氢-2H-吡喃(0.96Kg，11.40mol)于DCM(2.40L)的浆液中添加4-甲基苯磺酸水合物(11.60g，0.06mol)。将所得浆液在20℃和29℃(少量放热)之间搅拌110分钟。将所得溶液用饱和NaHCO3水溶液(2.00L)洗涤，并且将有机层在减压下蒸发。加入热(70℃)庚烷(2.50L)，在减压下蒸发混合物，以给出结晶固体。通过从热(70℃)庚烷(7.00L)中重结晶纯化，使溶液缓慢冷却至34℃。通过过滤收集所得固体并用冷庚烷洗涤以给出呈结晶固体的4-溴-1-四氢吡喃-2-基-吲唑(1.87Kg，87％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.54-1.66(2H，m)，1.67-1.85(1H，m)，1.94-2.09(2H，m)，2.31-2.45(1H，m)，3.70-3.81(1H，m)，3.83-3.97(1H，m)，5.88(1H，dd)，7.32-7.39(1H，m)，7.40-7.44(1H，m)，7.79(1H，dt)，8.09(1H，d)m/z：ES-[M-H]-282。
N-[(1R)-1-甲基-2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-4-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯的制备
将4-溴-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(0.70Kg，2.49mol)于THF(3.50L)的溶液以10℃增量逐渐冷却至-70℃。经70分钟添加己烷中2.5M丁基锂(1.10L，2.74mol)，保持内温低于-60℃。将所得的混合物在-72℃下搅拌1小时。经2小时添加己烷中2.3M己基锂(0.054L，0.12mol)，随后添加(R)-4-甲基-1，2，3-噁噻唑烷-3-甲酸叔丁酯2，2-二氧化物(652g，2.74mol)于THF(2.80L)的溶液，确保内温不超过-58℃。将所得混合物在-60℃搅拌16小时。将混合物经1.5小时缓慢加温至-10℃。小心地加入水(2.10L)。分离各层，并且将有机层用饱和盐水(1.40L)洗涤，并且将有机层在减压下浓缩，以给出油。添加IPA(1.50L)并将混合物在减压下浓缩，以给出呈棕色油的((2R)-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.27Kg，＞100％)。将其不经进一步纯化使用。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.08(3H，dd)，1.43(9H，s)，1.63-1.69(1H，m)，1.73-1.82(2H，m)，2.07(1H，dd)，2.17(1H，dd)，2.53-2.64(1H，m)，2.95(1H，s)，3.21(1H，dt)，3.70-3.80(1H，m)，3.97-4.12(2H，m)，4.33-4.49(1H，m)，5.71(1H，ddd)，6.96(1H，dd)，7.31(1H，ddd)，7.46(1H，d)，8.13(1H，s)。m/z：ES+[M·+]359
(2R)-1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-胺二盐酸盐的制备
经20分钟，将12M HCl(1.00L，12.0mol)加入((2R)-1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.27Kg，1.76mol)于IPA(1.50L)的搅拌溶液中，保持内温低于30℃。将反应混合物加热至40℃，并且在40℃下搅拌16小时。将温度升至55℃并加入另一份12M HCl(0.20L，2.40mol)并继续搅拌7小时。添加MTBE(2.50L)，并且允许将混合物在25℃下搅拌16小时。通过过滤收集所得固体，并且将滤饼用MTBE中10％IPA(2.00L)洗涤。将所得固体在减压下在40℃干燥72小时，以给出呈灰白色固体的(2R)-1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-胺二盐酸盐(0.39Kg，89％)。
1H NMR(500MHz，DMSO，27℃)1.12(3H，d)，2.96(1H，dd)，3.39(1H，dd)，3.45-3.55(1H，m)，6.94(1H，d)，7.28(1H，dd)，7.43(1H，d)，8.23(3H，s)，8.28(1H，d)。m/z：ES+[M·+]175。
(2R)-1-(1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺的制备
在25℃，在氮气下，将2，2，2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(0.73Kg，2.94mol)于MeCN(2.00L)的溶液加入(R)-1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-胺二盐酸盐(0.77Kg，2.94mol)和K2CO3(1.26Kg，9.13mol)于MeCN(8.00L)的搅拌混合物中。将所得混合物加热至60℃，并且在60℃下搅拌18小时。加入MeCN(5.00L)，并且通过过滤除去固体。在减压下浓缩滤液，并且将所得固体溶于EtOAc(10.00L)中，用水(4.0L)和稀饱和氯化钠水溶液(4.8L)洗涤。将有机层在减压下浓缩，以给出(2R)-1-(1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺(0.73Kg，96％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.12(3H，d)，2.96(1H，dd)，3.08(1H，dd)，3.14-3.33(3H，m)，6.98(1H，d)，7.32(1H，dd)，7.37-7.41(1H，m)，8.13(1H，d)，10.86(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+257。
(6S，8R)-6-(5-溴-2-吡啶基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-3，6，8，9-四氢吡唑 并[4，3-f]异喹啉的制备
在21℃，将三氟乙酸(0.66L，8.66mol)缓慢加入5-溴吡啶甲醛(0.55Kg，2.89mol)和(R)-1-(1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺(0.83Kg，2.89mol)于甲苯(7.30L)的搅拌混合物中。将所得溶液加热至80℃，并且在80℃下搅拌18小时。将温度升至90℃并继续加热4小时。允许将混合物冷却至80℃并且添加另一部分5-溴吡啶甲醛(0.015Kg，0.081mol)，并且将溶液在80℃搅拌16小时。将混合物冷却至21℃并经20分钟加入饱和NaHCO3水溶液(6.60L)。添加EtOAc(5.00L)，并且分离各层。用饱和NaHCO3水溶液(3.30L)洗涤有机层并在减压下浓缩。加入乙醇，将混合物在减压下浓缩，以给出呈松脆固体的粗产物。将顺式异构体通过制备型SFC(SuperSep 1TM柱(用CelluCoatTM10μm填充)，50mm直径，250mm长度)(洗脱(CO2中28％EtOH，140巴流动相，流速450mL/分钟，在30℃))去除，以给出呈淡黄色固体的(6S，8R)-6-(5-溴-2-吡啶基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-3，6，8，9-四氢吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.94Kg，77％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.16(3H，d)，2.89(1H，dd)，2.99(1H，dq)，3.25-3.34(2H，m)，3.55(1H，td)，5.10(1H，s)，6.93(1H，d)，7.22(1H，d)，7.40(1H，d)，7.75(1H，dd)，8.05(1H，d)，8.56(1H，dd)，10.24(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+427。
替代途径#2至实例17：
N-[1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基]-6-[(6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)- 3，6，8，9-四氢吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基]吡啶-3-胺的制备
将1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(6.31g，37.98mmol)加入(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(15.47g，34.92mmol)于1，4-二噁烷(175mL)的溶液中。将所得溶液在真空下脱气5分钟，然后用氮气(x2)回填。添加叔丁醇钠(13.43g，139.69mmol)，随后添加BrettPhos第三代预催化剂(0.95g，1.05mmol)。将所得混合物在55℃下加热18小时。将混合物倒入EtOAc和水中。加入饱和盐水，并分离各层。用饱和氯化钠水溶液(x3)洗涤有机层，并用EtOAc萃取合并的水层。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为乙酸乙酯中0-50％甲醇)纯化。将含有希望的产物的级分合并，在减压下浓缩并且然后通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-40％EtOAc)再纯化，以提供红橙色固体。将此固体溶于DCM中10％MeOH，过滤，用DCM洗涤滤饼。将合并的滤液在减压下浓缩，以给出呈浅橙色泡沫状固体的N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺(15.28g，92％)。将反式和顺式异构体通过制备性SFC((S，S)Whelk-O1柱，30mm直径，250mm长度)(用CO2中30％(MeOH中0.2％NH4OH)洗脱，100巴流动相，流速20mL/分钟，在40℃))分离。将含有反式异构体的级分在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为EtOAc中0-30％MeOH)进一步纯化。将含有所需产物的级分在减压下浓缩，然后从MeCN(x2)浓缩，以给出呈淡黄色泡沫/固体的N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺(10.76g，74％)。1H NMR(600MHz，DMSO-d6，27℃)1.07(3H d)1.63(2H，dquin)，2.45(2H，t)，2.72(2H，br t)，2.83(1H，br dd)，2.91-3.00(1H，m)，3.06(1H，br dd)3.42-3.55(2H，m)，3.58-3.65(2H，m)，3.92(1H，dquin)4.43(2H，dt)4.92(1H，s)，6.22(1H，d)，6.79(1H，d)6.82(1H，dd)，6.96(1H，d)，7.21(1H，d)，7.73(1H，d)，8.04(1H，s)，12.96(1H，s)。m/z：ES+(M+H)+477。
将来自含有顺式异构体的SFC的级分在减压下浓缩，并且将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为EtOAc中0-30％MeOH)进一步纯化。将含有所需产物的级分在减压下浓缩，并且将所得残余物过滤，以提供呈浅黄色泡沫固体的N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6R，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺(1.13g，8％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.28(3H，d)，1.55-1.75(2H，m)，2.42-2.49(2H，m)，2.76(2H，br t)，2.80-2.92(1H，m)，3.07-3.18(1H，m)，3.18-3.28(1H，m)，3.38-3.54(2H，m)，3.59-3.70(2H，m)，3.95(1H，sxt)，4.45(2H，dt)，5.11(1H，s)，6.21(1H，d)，6.72(1H，d)，6.82(1H，dd)，7.02(1H，d)，7.19(1H，d)，7.78(1H，d)，8.06(1H，s)，12.94(1H，s)。m/z：ES+(M+H)+477。
使用下述程序制备起始材料(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉。
2，2，2-三氟-N-[(1R)-2-(1H-吲唑-4-基)-1-甲基-乙基]乙酰胺的制备
在室温下，将TEA(26.0mL，186.5mmol)经由注射器加入(R)-1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-胺二盐酸盐(15.29g，61.61mmol)和2，2，2-三氟乙酸乙酯(8.09mL，67.8mmol)于MeOH(150mL)的搅拌浆液中。将所得溶液在室温下搅拌18小时，然后在减压下浓缩。然后将所得固体溶于DCM(40mL)中，并通过加入Et2O(300mL)使残留的三乙胺盐酸盐沉淀出来。将浆液搅拌5分钟，然后过滤，并且将滤液在减压下浓缩，以给出固体。将固体溶于EtOAc和饱和氯化钠水溶液中。分离各层，并且将有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤和浓缩，以提供呈灰白色固体的(R)-N-(1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-基)-2，2，2-三氟乙酰胺(16.51g，99％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.19(3H，d)，3.03(1H，dd)，3.13(1H，dd)，4.13-4.30(1H，m)，6.89(1H，d)，7.25(1H，dd)，7.38(1H，d)，8.18(1H，t)，9.35(1H，br d)，13.01(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+272。
(2R)-1-(1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺的制备
在室温下，将THF中1M硼烷THF络合物(365mL，365.0mmol)经由插管快速逐滴加入(R)-N-(1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-基)-2，2，2-三氟乙酰胺(16.5g，60.8mmol)于THF(100mL)的搅拌溶液中(气体逸出；在添加过程中观察到少量放热)。然后将反应在60℃下加热15.5小时，并且然后允许冷却至室温。将反应放置于环境温度水浴中并缓慢逐滴添加MeOH(80mL)。在减压下浓缩反应混合物，并且将所得残余物溶于MeOH(80mL)中并在减压下浓缩。将所得残余物溶于MeOH(250mL)中并置于环境温度水浴中。加入10％钯碳(6.47g，6.08mmol)于MeOH(90mL)中的浆液，用MeOH(10mL)冲洗烧瓶(注意到一些气体逸出)。将混合物在室温下搅拌大约3分钟，然后在65℃下加热2小时。冷却至室温后，将混合物通过硅藻土过滤并在减压下浓缩。将淡黄色残余物溶于DCM中，过滤，并在减压下浓缩滤液。将所得的残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中10％-60％EtOAc的)纯化。将含有所需产物的级分在减压下浓缩，以提供呈淡黄色油的(R)-1-(1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺(14.21g，86％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)0.91(3H，d)，2.17-2.30(1H，m)，2.71(1H，dd)，2.98-3.17(2H，m)，3.22-3.38(2H，m)，6.89(1H，d)，7.24(1H，dd)，7.35(1H，d)，8.12(1H，t)，12.97(1H，br s)。m/z：ES+[M+H]+258。
(6S，8R)-6-(5-溴-2-吡啶基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-3，6，8，9-四氢吡唑 并[4，3-f]异喹啉的制备
在氮气下，将5-溴吡啶甲醛(9.80g，52.7mmol)加入(R)-1-(1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺(14.05g，51.66mmol)于甲苯(246mL)的搅拌溶液中。然后添加三氟乙酸(12.30mL)并且将反应在90℃加热4.5小时。允许将混合物冷却至室温并加入EtOAc(200mL)。将混合物冷却至5℃并通过缓慢添加饱和NaHCO3水溶液碱化混合物。将所得各层分离并且将水层用EtOAc(2x80mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和NaHCO3水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得的残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中5％-60％EtOAc的)纯化。将含有所需产物的级分在减压下浓缩，然后在50℃在真空中干燥3小时，以提供呈淡橙色固体的(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(19.29g，88％)。1H NMR分析揭示10∶1反式/顺式异构体。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.10(3H，d)，2.83-2.94(1H，m)，2.95-3.14(2H，m)，3.34-3.47(1H，m)，3.49-3.72(1H，m)，5.10(1H，s)，6.88(1H，d)，7.25(1H，d)，7.33(1H，d)，7.99(1H，dd)，8.06(1H，d)，8.56(1H，d)，13.00(1H，s)m/z：ES+[M+H]+425。
实例17的合成中使用的中间体的替代途径：
N-[(1R)-2-(3-氨基-2-甲基-苯基)-1-甲基-乙基]-2，2，2-三氟-乙酰胺的制备
在室温，在氮气下，将(R)-3-(2-氨基丙基)-2-甲基苯胺(0.51g，3.13mmol)、DIPEA(0.55mL，3.13mmol)和2，2，2-三氟乙酸乙酯(0.47mL，3.91mmol)于MeOH(9.5mL)的溶液搅拌16小时。将反应混合物在减压下进行浓缩。加入DCM和水，并分离各层。将水层用DCM(3x50mL)萃取，并且将合并的有机层干燥(Na2SO4)并过滤。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-100％EtOAc)纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供N-[(1R)-2-(3-氨基-2-甲基-苯基)-1-甲基-乙基]-2，2，2-三氟-乙酰胺(680mg，83％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.06-1.14(m，3H)，2.01(s，3H)，2.54-2.71(m，1H)，2.72-2.84(m，1H)，4.04-4.12(m，1H)，4.60-4.77(m，2H)，6.24-6.37(m，1H)，6.43-6.52(m，1H)，6.72-6.84(m，1H)，9.19-9.32(m，1H)。m/z：ES+[M+H]+261。
2-甲基-3-[(2R)-2-(2，2，2-三氟乙基氨基)丙基]苯胺的制备
将THF中的1.0M硼烷(19.4mL，19.37mmol)加入(R)-N-(1-(3-氨基-2-甲基苯基)丙-2-基)-2，2，2-三氟乙酰胺(840mg，3.23mmol)于THF(10mL)的搅拌溶液中。在65℃，在氮气下，将反应混合物加热6小时。允许将混合物冷却至室温，并小心地加入MeOH。将所得混合物在室温下搅拌30分钟，并且然后在减压下浓缩。将所得残余物溶于MeOH中并加热至65℃持续6小时。允许将混合物冷却至室温，然后在减压下浓缩，以给出粗产物，将其通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-100％EtOAc)纯化。将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供2-甲基-3-[(2R)-2-(2，2，2-三氟乙基氨基)丙基]苯胺(665mg，84％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)0.89(s，3H)，1.98(s，3H)，2.08-2.22(m，1H)，2.25-2.42(m，1H)，2.69-2.87(m，2H)，3.15-3.29(m，2H)，4.61-4.75(m，2H)，6.30-6.40(m，1H)，6.43-6.54(m，1H)，6.71-6.83(m，1H)。m/z：ES+[M+H]+247。
(2R)-1-(3-溴-2-甲基-苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺的制备
在室温，在氮气下，将DIPEA(2.99mL，17.10mm°l)加入1，4-二噁烷(25mL)中的(R)-1-(3-溴-2-甲基苯基)丙-2-胺(1.30g，5.70mm°l)和2，2，2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(DCM中0.23M，29.7mL，6.84mm°l)。将所得混合物在85℃搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化。将含有产物的级分在减压下浓缩，以提供呈油的(R)-1-(3-溴-2-甲基苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺(0.56g，32％)。1H NMR(500MHz，DMSO，27℃)0.91(3H，d)，2.26(1H，q)，2.34(3H，s)，2.78-2.86(1H，m)，2.89(1H，dd)，3.19-3.28(2H，m)，7.01-7.06(1H，m)，7.15(1H，dd)，7.43(1H，dd)。m/z：ES+[M+H]+310/312。
2-甲基-3-[(2R)-2-(2，2，2-三氟乙基氨基)丙基]苯胺的制备
将三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(0.050g，0.05mmol)和(±)-2，2′-双(二苯基膦基)-1，1′-联萘(0.067g，0.11mmol)加入(R)-1-(3-溴-2-甲基苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺(0.56g，1.81mmol)、苯甲酮亚胺(0.33mL，1.99mmol)和叔丁醇钠(0.26g，2.71mmol)于脱气的甲苯(7mL)的悬浮液中，并且将反应加热至90℃持续16小时。冷却至室温后，将混合物在减压下浓缩。将所得残余物溶于DCM(50mL)中并用水(50mL)洗涤。将水层用DCM(25mL)萃取，并且将合并的有机物浓缩至～25mL。添加2M HCl溶液(50mL)，并且将双相混合物剧烈搅拌30min。将各层分离，并且将水层用DCM洗涤。通过添加2M NaOH水溶液碱化水相。将所得混合物用DCM(2x100mL)萃取，并且将合并的有机萃取物在减压下浓缩，以给出呈油的(R)-2-甲基-3-(2-((2，2，2-三氟乙基)氨基)丙基)苯胺(0.31g，70％)。1H NMR(500MHz，DMSO，27℃)0.90(3H，d)，1.98(3H，s)，2.12-2.18(1H，m)，2.30-2.36(1H，m)，2.74-2.82(2H，m)，3.17-3.29(2H，m)，4.69(2H，s)，6.35(1H，dd)，6.48(1H，dd)，6.78(1H，t)。ES+[M+H]+247。
(1S，3R)-1-(5-溴-2-吡啶基)-3，5-二甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-3，4-二氢-1H- 异喹啉-6-胺的制备
将三氟甲烷磺酸镱(III)盐(0.17g，0.27mmol)加入(R)-2-甲基-3-(2-((2，2，2-三氟乙基)氨基)丙基)苯胺(1.35g，5.49mmol)、5-溴吡啶甲醛(1.02g，5.49mmol)和水(0.49mL，27.43mmol)于MeCN(21.5mL)的搅拌溶液中。将所得的溶液在80℃搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩并且将残余物干法装载在硅胶上并通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中10％-30％EtOAc)纯化。将含有所需产物的级分浓缩至干燥，以提供呈微黄色胶的(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-3，5-二甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(2.22g，98％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)0.88(3H，d)，1.91(3H，s)，2.37-2.46(1H，m)，2.60-2.76(1H，m)，2.76-3.00(1H，m)，3.15-3.28(1H，m)，3.34-3.63(1H，m)，4.65(2H，s)，4.85(1H，s)，6.19-6.52(2H，m)，7.10-7.31(1H，m)，7.97(1H，dd)，8.62(1H，d)。m/z：ES+[M+H]+414。
(6S，8R)-6-(5-溴-2-吡啶基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-3，6，8，9-四氢吡唑 并[4，3-f]异喹啉的制备
将丙酸(14.0mL)中的(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-3，5-二甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(2.21g，5.33mmol)冷却至-20℃。经5分钟逐滴添加亚销酸钠(0.40g，5.86mmol)于水(2.8mL)的溶液，保持浴温在-20℃和-15℃之间。将所得混合物在-20℃下搅拌持续45分钟。将冷却至-15℃的甲苯(80mL)倒入反应中，并且将反应搅拌15分钟。缓慢加入碳酸钠(12.0g，113mmol)于水(125mL)中的溶液，并且允许将混合物加温至室温。添加EtOAc(100mL)，并且分离各层。将水层用CHCl3/IPA(3∶1)(100mL)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并且在减压下浓缩，以给出粗产物，将其通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中15％-50％EtOAc)纯化。将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供呈棕色固体的(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(1.63g，72％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.10(3H，d)，2.83-2.96(1H，m)，2.96-3.14(2H，m)，3.35-3.48(1H，m)，3.49-3.73(1H，m)，5.11(1H，s)，6.87(1H，d)，7.27(1H，d)，7.35(1H，d)，7.99(1H，dd)，8.09(1H，s)，8.53-8.63(1H，m)，12.96(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+425。
(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(10.00g，58.06mmol)、1-氟-3-碘丙烷(11.13g，59.22mmol)和碳酸钾(16.05g，116.13mmol)于MeCN(200mL)中的悬浮液在室温下搅拌2天。通过过滤去除固体，并在减压下浓缩滤液。将残余物用水处理并且用DCM进行萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤和在减压下浓缩，以给出呈淡黄色固体的(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(13.40g，99％)。1HNMR(300MHz，CDCl3，27℃)1.45(9H，s)，1.61-1.92(2H，m)，2.51-2.67(2H，m)，2.85(2H，br s)，3.57-3.72(2H，m)，4.30(1H，br d)，4.36-4.63(2H，m)，4.89(1H，br d)。
(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯的替代制备
在0℃，向3-氟丙-1-醇(0.94mL，12.5mmol)于DCM(47mL)的溶液中添加三氟甲磺酸酐(2.31mL，13.75mmol)，随后添加2，6-二甲基吡啶(1.74mL，15.00mmol)，并且将反应在0℃搅拌1小时。用1N HCl洗涤该反应混合物，然后干燥有机层并小心蒸发。然后将残余物加入含有氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(1.94g，11.25mmol)和DIPEA(3.24ml，18.75mmol)于二噁烷/DCM(1∶1，40mL)的悬浮液的分离烧瓶中，并且将反应在室温下搅拌(添加三氟甲磺酸盐时放热)。将反应混合物用DCM稀释并用NH4Cl溶液洗涤。将有机层干燥并在减压下蒸发，以给出粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中0-10％1M NH3/MeOH)纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈淡紫色油的(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(2.82g，97％)，1HNMR如上。
1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺的制备
经30分钟，将三氟乙酸(39.8mL，517mmol)逐滴加入(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(20.0g，86mmol)于DCM(67.8mL)的溶液，其已浸入水浴中。18小时后，将反应在减压下浓缩，得到橙色油。将该油溶于DCM中的10％甲醇(125mL)中，并在剧烈搅拌下加入碳酸钾(71.4g，517mmol)。15min后，添加另外30g的碳酸钾。搅拌变得缓慢，加入硅藻土(约15克)。继续搅拌另外15分钟，并且将混合物用DCM洗涤液中10％甲醇过滤。将滤液在减压下在旋转蒸发器(压力：100毫巴，水浴温度：30℃)上浓缩，并且将所得橙色油通过快速硅胶色谱法(λ检测＝210nm)(洗脱梯度为DCM中0-15％(甲醇中2M氨))纯化，以提供被28wt％甲醇(基于NMR积分)污染的呈黄色油的1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(12.8g)。该材料可直接使用，储存在冰箱中供以供之后使用，或根据以下实例通过真空蒸馏进一步纯化：在真空(真空泵)条件下，将呈浅黄色油的1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(14.8g)使用配备带套水冷却的短径蒸馏装置进行蒸馏。将含有胺的烧瓶浸入油浴中，并经30分钟的时间段，将浴温逐渐升至140℃。在110℃-135℃的浴温和70℃的近头部温度下进行蒸馏，以提供呈澄清无色油的1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(12.4g，84％)。在使用前将该油储存在冰箱中。1HNMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.52-1.70(2H，m)，1.75(2H，br s)，2.38(2H，t)，2.43-2.48(2H，m)，3.27-3.39(1H，m)，3.42-3.48(2H，m)，4.43(2H，dt)。m/z：ES+[M+H]+133。
实例17A：N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三 氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺形式A(无水形式)的制 备
方法1
将4.0mg无定形N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺溶于100ulEtOAc中以形成澄清溶液。向溶液中缓慢加入约200μl庚烷，形成混浊的悬浮液。将浆液在环境条件下搅拌3天。获得形式A的结晶材料。
方法2
将1.60g无定形N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺悬浮于15ml丙酮/H2O(10∶1)混合物中。形成浆液，并且然后形成凝胶。2小时后添加10mgN-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺形式A种子，并且将悬浮液在环境温度下搅拌1天，届时凝胶变成固体块状物。将壁和底部上的固体块状物手动移入溶液中，并在搅拌1小时后得到均匀的浆液。通过过滤收集固体，用5.0ml丙酮/H2O(1∶10)洗涤两次，然后用H2O洗涤几次。在真空中干燥4小时后，得到1.45g为形式A的白色粉末(90％产率)。
方法3
将501mg无定形材料N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺溶于1.0mlEtOAc中以形成棕色溶液。向该溶液中缓慢加入1.0ml庚烷。在添加结束时，固体开始形成但随后溶解。将2-5mgN-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺-形式A加入澄清的棕色溶液中，届时固体开始沉淀。将悬浮液在环境温度下搅拌1天。通过过滤收集固体并在空气中干燥。获得345mg为形式A的灰白色粉末(产率：约69％)。
将来自方法2的形式A通过XRPD进行分析并且将结果如下列表(表1)并且在图1中示出。
表1.形式A的XRPD峰
通过热技术对形式A进行分析。DSC分析表明，形式A具有在132℃开始并且在137℃达到峰的熔点。TGA表明形式A展现出从约25℃加热至约100℃后约0.2％的质量损失。形式A的代表性DSC/TGA热谱图示于图2中。
实例17B：N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三 氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺形式B(TBME溶剂化物) 的制备
将100mgN-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺(无定形材料)部分地溶于1.0ml TBME中。在环境条件下搅拌悬浮液，届时在悬浮液中沉淀出更多的固体。将浆料搅拌2小时。当浆液直接在样品支架中称量时，将N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺-形式B针对XRPD表征进行鉴定。将固体过滤并在环境条件下干燥后，将形式B转化为形式C。
形式B通过XRPD进行分析并且结果如下进行制表(表2)并且显示于图3中。
表2.形式B的XRPD峰
角度(2θ±0.2°) 强度(％)
6.0 100.0
17.8 67.0
18.4 34.9
16.3 30.3
21.5 29.2
12.3 27.0
17.2 24.8
13.4 23.3
18.1 21.6
15.6 20.6
实例17C：N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三 氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺形式C(TBME溶剂化物) 的制备
将200mg N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺无定形材料几乎溶于1ml TBME。在环境条件下搅拌悬浮液，届时在10分钟后沉淀出更多的固体。将浆液搅拌2小时，并且然后在环境条件下蒸发。在环境条件下干燥所得固体后，得到形式C。
形式C通过XRPD进行分析并且将结果如下进行制表(表3)并且显示于图4中。
表3.形式C的XRPD峰
通过热技术对形式C进行分析。DSC分析表明形式C具有在75℃开始并且在84℃达到峰的脱溶剂的吸热事件。TGA表明形式C展现出从约25℃加热至约150℃后约7.1％的质量损失。形式C的代表性DSC/TGA热谱图示于图5中。
实例17D：N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三 氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺形式D(CPME溶剂化物) 的制备
将150mg N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺无定形材料在2.0mlCPME(环戊基甲基醚)中搅拌。搅拌1天后，通过过滤分离固体并在空气中干燥。获得约50mg的形式D的白色粉末。
将形式D通过XRPD进行分析并且将结果如下列表(表4)并且在图6中示出。
表4.形式D的XRPD峰
通过热技术对形式D进行分析。DSC分析表明形式D具有在76℃开始并且在81℃达到峰的脱溶剂的吸热事件，随后是在128℃开始并且在133℃达到峰的另一个吸热事件。TGA表明形式D展现出从约25℃加热至约150℃后约6.8％的质量损失。形式D的代表性DSC/TGA热谱图示于图7中。
实例17E：N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三 氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺形式E(无水形式)的制 备
方法1
将100mg无定形N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺加入2.0ml庚烷中以形成浆液。加入0.40ml EtOAc。搅拌2小时后，向浆液中加入额外的0.10ml EtOAc，并且将浆液在环境条件下搅拌18小时，届时通过XRPD鉴定新的结晶形式，形式E。分离固体并在环境条件下干燥后得到75mg的形式E的白色固体(产率：75％)。
方法2
将1.002g无定形N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺溶于5.0mlEtOAc中以获得澄清浅棕色溶液。加入5.0ml庚烷，并且溶液保持澄清。添加10mg N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺-形式E种子，并且将悬浮液在环境温度下搅拌。在环境条件下固体开始沉淀，并在1小时后形成湿块状物。向浆液中缓慢加入5.0ml EtOAc，并且将所得浆液在环境温度下搅拌1小时。加入另外10ml庚烷，更多固体开始沉淀。在环境条件下搅拌2小时后，将浆液加热至60℃并在60℃下搅拌2小时。将浆液冷却至环境温度并搅拌18小时。将形式E的灰白色固体通过过滤分离并用1∶4EtOAc/庚烷混合溶剂洗涤3次。空气干燥后收集0.875g淡白色粉末(产率：87％)。
将来自方法1的形式E通过XRPD进行分析并且将结果如下列表(表5)并且在图8中示出。
表5.形式E的XRPD峰
角度(2θ±0.2°) 强度(％)
17.9 100.0
14.8 67.1
20.9 60.1
23.1 55.4
16.2 49.3
20.0 35.6
18.2 32.9
12.3 30.4
22.2 19.0
13.9 18.9
通过热技术对形式E进行分析。DSC分析表明，形式E具有在126℃开始并且在133℃达到峰的熔点。TGA表明形式E展现出从约25℃加热至约100℃后约0.8％的质量损失。形式E的代表性DSC/TGA热谱图示于图9中。
实例17F：N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三 氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺形式F(庚烷溶剂化物) 的制备
将20mg无定形N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺溶于200ul丙酮。向溶液中缓慢加入1.0ml庚烷。溶液开始变浑浊，并且然后形成浆液。在环境温度下，在加入1.0ml庚烷后搅拌浆液。在浆液中观察到针样颗粒。将浆液加热至60℃并搅拌2小时，并且然后冷却至环境温度。形成针颗粒。
通过XRPD分析所得形式F的浆液，并且结果在图10中示出。在XRPD表征期间，形式F的结晶度渐减，并且XRPD的第二次运行表明在样品架中干燥后获得无定形材料。
实例17F：N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三 氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺形式G(甲基戊酮溶剂 化物)的制备
将100mg无定形N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺悬浮于200ul甲基戊酮中，并且添加2-5mg N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺-形式A，在环境条件下搅拌10分钟后形成块状物。加入200μl甲基戊酮，并且形成浆液。将浆液在环境条件下搅拌18小时。XRPD显示结晶形式N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺-形式G形成。在环境条件下分离和干燥后，形式G转化为部分无定形材料。
将形式G通过XRPD进行分析并且将结果如下列表(表6)并且在图10中示出。
表6.形式G的XRPD峰
实例18
5-氟-6-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4， 3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺
在氮气下，将[(2-二-环己基膦基-3，6-二甲氧基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯基)-2-(2′-氨基-1，1′-联苯基)]钯(II)甲磺酸盐(Brett Phos G3)(48.6mg，0.05mmol)加入1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(95mg，0.72mmol)、(6S，8R)-6-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(155mg，0.36mmol)和叔丁醇钠(206mg，2.15mmol)于1，4-二噁烷(3mL)的脱气溶液中。将所得的溶液在90℃下搅拌2小时。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释并且依次用水(50mL)和饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，过滤并蒸发以提供粗产物，将其通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱，5μ二氧化硅，50mm直径，100mm长度)(使用水(含0.1％NH3)和MeCN的极性递减混合物作为洗脱液)纯化。将含有所需化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的5-氟-6-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺(39.0mg，22％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)0.48-0.61(2H，m)，0.92-1.09(2H，m)，1.13(3H，d)，1.68-1.83(2H，m)，2.56-2.62(2H，m)，2.67(1H，dd)，2.86(1H，dd)，2.90-2.95(2H，m)，3.17(1H，dd)，3.27(1H，dd)，3.70(2H，q)，3.87(1H，td)，4.04(1H，q)，4.21(1H，d)，4.43(1H，t)，4.53(1H，t)，5.39(1H，s)，6.50(1H，dd)，6.79(1H，d)，7.12(1H，d)，7.68(1H，d)，8.03(1H，s)；m/z：ES+[M+H]+485。
如下制备5-氟-6-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺：
1-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-N-((1S，3R)-1-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-2-((1-氟环丙 基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)甲亚胺的制备
将5-溴-3-氟吡啶甲醛(1.09g，5.33mmol)加入乙酸(12mL)中的(R)-3-(2-(((1-氟环丙基)甲基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(630mg，2.67mmol)和水(0.240mL，13.33mmol)。将所得的溶液在70℃下搅拌2小时。浓缩反应混合物且用EtOAc(50mL)稀释，依次用饱和NaHCO3水溶液(50mL)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，过滤和蒸发，以提供作为粗产物的1-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-N-((1S，3R)-1-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)甲亚胺(1.53g，2.51mmol)。m/z：ES+[M+H]+607。
(1S，3R)-1-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3， 4-四氢异喹啉-6-胺的制备
将盐酸羟胺(0.174g，2.51mmol)加入MeOH(12mL)中的1-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-N-((1S，3R)-1-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)甲亚胺(1.53g，2.51mmol)和乙酸钾(0.62g，6.27mmol)。将所得的溶液在20℃下搅拌5小时。将反应混合物浓缩并用DCM(75mL)稀释，并且依次用NaOH(2M，75mL)以及饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，过滤并且蒸发，以给出粗产物，将其通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-20％EtOAc)纯化。将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供呈无色胶的(1S，3R)-1-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.672g，63％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)0.45-0.61(2H，m)，0.92-1.06(2H，m)，1.07(3H，d)，2.07(3H，s)，2.51(1H，dd)，2.59(1H，dd)，2.85(1H，dd)，3.13(1H，dd)，3.52(2H，s)，3.64-3.75(1H，m)，5.35(1H，s)，6.48(2H，s)，7.52(1H，dd)，8.36(1H，dd)；m/z：ES+[M+H]+422/424。
(6S，8R)-6-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四 氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将(1S，3R)-1-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.672g，1.59mmol)于丙酸(6.63mL)冷却至-17℃(干冰/丙酮)。逐滴添加水(1.33mL)中的亚销酸钠(0.110g，1.59mmol)，并且将反应混合物在-17℃搅拌30分钟。将反应混合物用冰冷的甲苯(30mL)稀释，在0℃搅拌15分钟，然后在室温下搅拌45分钟。将反应混合物用水(2x25mL)洗涤，将合并的水相用EtOAc(25mL)洗涤，将合并的有机物用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并且将滤液蒸发至橙色-棕色油。将粗材料通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化，以提供呈橙色固体的(6S，8R)-6-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.310g，45％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)0.50-0.59(2H，m)，1.03(2H，dd)，1.13(3H，d)，2.72(1H，dd)，2.91(1H，dd)，3.16(1H，dd)，3.27(1H，dd)，3.77-3.90(1H，m)，5.50(1H，s)，6.80(1H，d)，7.20(1H，dd)，7.56(1H，dd)，8.07(1H，d)，8.36(1H，dd)；m/z：ES+[M+H]+433。
实例19
N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异 喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺的制备
将DMF(2mL)和DIPEA(0.074mL，0.42mmol)依次加入用N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-胺(75mg，0.17mmol)填充的烧瓶中。然后添加DMF(0.1mL)中的1-氟-3-碘丙烷(31.9mg，0.17mmol)，并且继续搅拌2小时。停止反应，用饱和氯化钠水溶液稀释，并且将化合物在EtOAC(x3)中萃取。将合并的萃取物用水洗涤，并经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以提供薄膜。将此材料通过快速硅胶色谱法(用DCM中2％-10％(甲醇，含有1％氢氧化铵)洗脱)纯化，以提供N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(43mg，51％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，27℃)1.00(3H，d)，1.45-1.70(5H，m)，2.44(2H，t)，2.55-2.66(1H，m)，2.66-2.72(2H，m)，2.79(1H，dd)，2.87-3.01(1H，m)，3.10(1H，br dd)，3.38-3.53(1H，m)，3.56-3.67(2H，m)，3.77(3H，s)，3.85-3.97(1H，m)，4.43(2H，dt)，5.21(1H，s)，5.88(1H，dd)，6.00(1H，d)，6.16(1H，d)，6.35(1H，d)，6.64(1H，d)，7.17(1H，d)，8.02(1H，s)，12.92(1H，d)。m/z(ES+)，[M+H]+＝502。
根据以下程序制备起始材料N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-胺。
2，2-二氟丙基三氟甲磺酸酯的制备
在-10℃(盐/冰浴)，将三氟甲磺酸酐(3.29ml，19.5mmol)逐滴加入2，2-二氟丙-1-醇(1.7g，18mmol)于DCM(40mL)的溶液中。然后添加2，6-二甲基吡啶(2.5mL，21mmol)，并且将反应在这些条件下搅拌1小时。然后将反应用水(x2)洗涤，并且将有机层经Na2SO4干燥，过滤和在减压下浓缩(真空～200毫巴)，以提供呈红色油的2，2-二氟丙基三氟甲磺酸酯(2.1g，52％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d，27℃)4.48(2H，t)，1.73(3H，t)。
(R)-3-(2-((2，2-二氟丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺的制备
将2，2-二氟丙基三氟甲磺酸酯(1.68g，7.37mmol)加入(R)-3-(2-氨基丙基)-2-甲基苯胺(1.1g，6.7mmol)和DIPEA(1.52ml，8.71mmol)于1，4-二噁烷(20mL)的搅拌溶液中。将反应在65℃下加热3小时，之后使其冷却至室温，并在减压下蒸发。将所得残余物溶于EtOAc(30mL)中并且用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc(20mL)萃取，并且将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得红色油通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中30％-90％乙酸乙酯)纯化，以提供呈胶的(R)-3-(2-((2，2-二氟丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(1.02g，63％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6，27℃)0.90(3H，d)，1.55(3H，t)，1.75(1H，brs)，1.97(3H，s)，2.29-2.38(1H，m)，2.69-2.76(2H，m)，2.86(2H，br t)，4.69(2H，s)，6.34(1H，d)，6.47(1H，d)，6.77(1H，t)。m/z(ES+)，[M+H]+＝439。
(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-(2，2-二氟丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四 氢异喹啉-6-胺的制备
将4-溴-2-甲氧基苯甲醛(1.07g，4.95mmol)加入(R)-3-(2-((2，2-二氟丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(0.600g，2.48mmol)于AcOH(12mL)和水(0.223g，12.4mmol)的溶液中，并且将反应在80℃加热18小时。冷却后，将挥发物在减压下浓缩，并且将所得的残余物溶于EtOAc中。通过用饱和NaHCO3水溶液洗涤来中和该溶液。将有机层与HCl水溶液(1N)合并，并且将双相混合物在室温下搅拌30分钟。将各层分离，并且将有机层用HCl水溶液(1N)洗涤。将合并的水层用EtOAc萃取，并且然后通过添加固体K2CO3碱化。然后将有机层用EtOAc(x2)萃取，并且将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中10％-60％乙酸乙酯)纯化，以提供呈胶的(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-(2，2-二氟丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.576g，53％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6，27℃)0.95(3H，d)，1.54(3H，t)，1.93(3H，s)，2.27-2.43(2H，m)，2.57-2.74(1H，m)，2.76-2.98(1H，m)，3.19-3.26(1H，m)，3.84(3H，s)，4.63(2H，s)，5.12(1H，s)，6.26(1H，d)，6.38(1H，d)，6.58(1H，d)，6.94(1H，dd)，7.16(1H，d)。m/z(ES+)，[M+H]+＝439。
也分离呈胶的N-((1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-(2，2-二氟丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)乙酰胺(0.081g，7％)。
(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢- 3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
在-15℃，将亚销酸钠(0.049g，0.72mmol)于水(0.750mL)中的溶液逐滴加入(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-2-(2，2-二氟丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.30g，0.68mmol)于丙酸(2.5mL)的冷却溶液中，并且将反应在这些条件下搅拌1小时。添加冰冷的EtOAc(10mL)，随后逐份添加饱和NaHCO3(10mL)水溶液。将各层分离，并且将有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将合并的水层用EtOAc萃取，并且合并所有有机层，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中20％-70％乙酸乙酯)纯化，以提供呈胶的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.23g，75％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6，27℃)1.01(3H，d)，1.53(3H，t)，2.84(1H，dd)，2.96-3.09(1H，m)，3.14(1H，br dd)，3.36-3.48(1H，m)，3.89(3H，s)，5.32(1H，s)，6.64(2H，app t)，6.94(1H，dd)，7.16-7.27(2H，m)，8.06(1H，s)，12.99(1H，br s)。1H被DMSO遮挡。m/z(ES+)，[M+H]+＝450。
(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡 喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉和(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)- 7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异 喹啉的制备
将DCM(7mL)加入用(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.3g，0.67mmol)和4-甲基苯磺酸水合物(0.025g，0.13mmol)填充的烧瓶中。添加3，4-二氢-2H-吡喃(0.084g，1.0mmol)，并且将反应在室温下搅拌18小时。将反应用饱和碳酸氢钠水溶液进行洗涤，并且将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法(用己烷中5％-40％乙酸乙酯洗脱)纯化，以提供呈胶的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(175mg，49％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d，27℃)0.99-1.13(3H，br s)，1.48-1.88(6H，m)，2.01-2.08(1H，m)，2.08-2.18(1H，m)，2.48-2.70(2H，m)，2.82(1H，dt)，2.88-3.04(1H，m)，3.20(1H，br d)，3.55-3.67(1H，m)，3.63-3.73(1H，m)，3.88(3H，s)，3.94-3.98(1H，m)，5.42(1H，br s)，5.63(1H，dt)，6.64(1H，dd)，6.73(1H，dd)，6.86(1H，dd)，7.03(1H，t)，7.25-7.29(1H，m)，7.98(1H，d)。m/z(ES+)，[M+H]+＝534。
也分离呈胶的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(68mg，19％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d，27℃)1.02-1.07(3H，m)，1.42-1.53(3H，m)，1.59-1.81(3H，m)，2.03-2.09(1H，m)，2.18-2.25(2H，m)，2.59(1H，qd)，2.69(1H，dd)，2.86-2.98(1H，m)，3.02-3.14(1H，m)，3.46-3.57(1H，m)，3.72-3.82(1H，m)，3.87-3.90(3H，m)，4.11-4.16(1H，m)，5.31(1H，s)，5.61-5.68(1H，m)，6.60(1H，dd)，6.72(1H，dd)，6.88(1H，dt)，7.01-7.05(1H，m)，7.36(1H，d)，8.09(1H，s)。m/z(ES+)，[M+H]+＝534。
3-((4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9- 四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯制 备
将二噁烷(3.5mL)加入用Cs2CO3(213mg，0.65mmol)、3-氨基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(85mg，0.49mmol)和(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(175mg，0.33mmol)填充的烧瓶中。将反应烧瓶抽空并用氮气(x3)回填。添加BrettPhos第三代预催化剂(30mg，0.03mmol)，并且将烧瓶再次抽空并用氮气(x3)回填。将反应在100℃下加热4小时。将反应冷却至室温，过滤并在减压下浓缩。将所得粗胶通过快速硅胶色谱法(用己烷中15％-70％乙酸乙酯洗脱)纯化，以提供呈薄膜的3-((4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(152mg，74％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d，27℃)1.05(3H，d)，1.42(9H，s)，1.44-1.57(3H，m)，1.57-1.63(1H，m)，1.66-1.77(2H，m)，2.04-2.08(1H，m)，2.09-2.18(1H，m)，2.47-2.69(2H，m)，2.79(1H，dt)，2.84-2.99(1H，m)，3.16(1H，br dd)，3.48-3.61(1H，m)，3.69(3H，dt)，3.83(3H，s)，3.94-4.04(2H，m)，4.15(1H，br s)，4.20-4.29(2H，m)，5.32(1H，s)，5.63(1H，dt)，5.86(1H，dd)，6.07(1H，t)，6.55(1H，dd)，6.78(1H，dd)，7.20-7.23(1H，m)，7.98(1H，d)。m/z(+)，[M+H]+＝626。
N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异 喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-胺的制备
将甲醇(1mL)然后二噁烷中HCl(4M；1mL，4mmol)依次加入用3-((4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.22mmol)填充的烧瓶中。2小时后，将反应在减压下浓缩，并且将所得残余物使用已用甲醇预处理过的SCX-2盒纯化。首先将化合物用甲醇洗脱，并且然后用甲醇中的氨(3N)洗脱。将产物级分在减压下浓缩，以提供呈胶的N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-胺(91mg，92％)。将产物不经进一步纯化用于下一步骤中。1H NMR(400MHz，DMSO-d6，27℃)1.00(3H，d)，1.52(3H，t)，2.55-2.59(1H，m)，2.78(1H，dd)，2.85-2.99(1H，m)，3.09(1H，dd)，3.39-3.50(1H，m)，3.55-3.66(2H，m)，3.77(3H，s)，4.03-4.14(1H，m)，5.21(1H，s)，5.85(1H，dd)，6.05(1H，br d)，6.14(1H，d)，6.34(1H，d)，6.63(1H，d)，7.17(1H，d)，8.02(1H，s)，12.93(1H，br s)。未观察到3H。m/z：(ES+)，[M+H]+＝442。
实例20
N-(3-乙氧基-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡 唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺的制备
将DMF(2mL)和DIPEA(0.050mL，0.28mmol)依次加入用N-(3-乙氧基-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺(0.051g，0.11mmol)填充的烧瓶中。添加1-氟-3-碘丙烷(0.021g，0.11mmol)于DMF(0.2mL)中的溶液，并在2小时之后，将反应用饱和碳酸氢钠水溶液稀释。将混合物用乙酸乙酯(x3)萃取，并且将合并的有机层用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中2％-10％(甲醇，含有1％氢氧化铵))纯化。将产物级分合并，在减压下浓缩，并且将所得残余物通过快速硅胶色谱法使用以上条件纯化，以提供N-(3-乙氧基-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(0.023g，40％)。1HNMR(氯仿-d，27℃)0.50(2H，br d)，0.88-1.05(2H，m)，1.12(3H，br d)，1.45(3H，t)，1.75-1.87(2H，m)，2.59-2.73(3H，m)，2.87-3.04(3H，m)，3.04-3.15(1H，m)，3.41(1H，br dd)，3.73-3.90(3H，m)，3.93-4.18(4H，m)，4.52(2H，dt)，5.37(1H，br s)，5.99(1H，dd)，6.13(1H，br d)，6.80-6.89(2H，m)，7.14(1H，d)，8.06-8.08(1H，m)，10.02(1H，br s)。m/z：(ES+)，[M+H]+＝510。
使用下述程序制备N-(3-乙氧基-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺。
(1S，3R)-1-(4-溴-2-乙氧基苯基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3， 4-四氢异喹啉-6-胺的制备
将4-溴-2-乙氧基苯甲醛(0.775g，3.39mml)加入(R)-3-(2-(((1-氟环丙基)甲基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(0.400g，1.69mmol)于AcOH(9mL)和水(0.152g，8.46mmol)的溶液中。将反应在80℃下加热18小时。冷却后，将反应在减压下浓缩，并且然后将残余物溶于EtOAc中，并且用饱和NaHCO3水溶液洗涤。分离各层，将有机相与盐酸水溶液(1N)合并。将两相混合物搅拌30分钟后，分离各层。用HCl水溶液(1N)洗涤有机层，并用EtOAc(x2)萃取合并的水层。然后将合并的水层通过添加固体K2CO3进行碱化，并且用EtOAc(x2)萃取。将有机萃取物合并，经硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中10％-60％乙酸乙酯)纯化，以提供呈固体的(1S，3R)-1-(4-溴-2-乙氧基苯基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.48g，63％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，27℃)0.40-0.59(2H，m)，0.83-0.93(2H，m)，0.94(3H，d)，1.35(3H，t)，1.93-1.96(3H，m)，2.45-2.53(2H，m)，2.80-2.93(2H，m)，3.57(1H，br d)，4.14(2H，q)，4.58(2H，s)，5.15(1H，s)，6.26(1H，d)，6.35(1H，d)，6.86(1H，d)，6.95(1H，dd)，7.15(1H，d)。m/z：(ES+)，[M+H]+＝447。
(6S，8R)-6-(4-溴-2-乙氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四 氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
在-15℃，将亚销酸钠(0.039g，0.56mmol)于水(0.750mL)中的溶液逐滴加入(1S，3R)-1-(4-溴-2-乙氧基苯基)-2-((1-氟环丙基)甲基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(0.240g，0.54mmol)于丙酸(3.0mL)的冷却溶液中，并且将反应在这些条件下维持1小时。然后添加冰冷的EtOAc(10mL)，随后逐份添加饱和NaHCO3水溶液(15mL)。一旦添加完成并且气体逸出停止，则分离各层。用饱和NaHCO3水溶液(x2)洗涤有机层，并用EtOAc(x2)萃取合并的水层。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法(洗脱梯度为己烷中20％-60％乙酸乙酯)纯化，以提供呈胶的(6S，8R)-6-(4-溴-2-乙氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.145g，59％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6，27℃)0.45(1H，br s)，0.57(1H，br s)，0.83-0.98(2H，m)，1.00(3H，d)，1.37(3H，t)，2.54-2.63(1H，m)，2.87-3.00(2H，m)，3.27-3.32(1H，m)，3.74(1H，br d)，4.13-4.23(2H，m)，5.32(1H，s)，6.67(1H，d)，6.94(1H，s)，6.96-6.99(1H，m)，7.19(1H，d)，7.22(1H，d)，8.06(1H，s)，12.96(1H，s)。m/z：(ES+)，[M+H]+＝458。
(6S，8R)-6-(4-溴-2-乙氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H- 吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将DCM(3mL)和3，4-二氢-2H-吡喃(35.8mg，0.43mmol)加入用(6S，8R)-6-(4-溴-2-乙氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(130mg，0.28mmol)和4-甲基苯磺酸水合物(10.79mg，0.06mmol)填充的烧瓶中。将反应在室温下搅拌18小时。将反应用饱和碳酸氢钠水溶液进行洗涤，并且将有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得棕色胶通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中5％-40％乙酸乙酯)纯化，以提供呈干燥薄膜的(6S，8R)-6-(4-溴-2-乙氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(147mg，96％)。1H NMR(500MHz，氯仿-d，27℃)0.42-0.51(2H，m)，0.94-1.03(2H，m)，1.07-1.12(3H，m)，1.49(3H，t)，1.61-1.68(1H，m)，1.73-1.79(2H，m)，2.02-2.10(1H，m)，2.12-2.20(1H，m)，2.53-2.63(2H，m)，2.93(1H，dt)，3.10(1H，ddd)，3.38-3.46(1H，m)，3.65-3.77(1H，m)，3.83-3.92(1H，m)，4.00-4.07(1H，m)，4.12-4.19(2H，m)，5.43(1H，s)，5.66(1H，ddd)，6.81(1H，d)，6.89-6.93(1H，m)，6.95-7.00(1H，m)，7.03-7.06(1H，m)，7.25(1H，dd)，8.03(1H，s)。m/z：(ES+)，[M+H]+＝542。
3-((3-乙氧基-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃- 2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔 丁酯的制备
将二噁烷(2.7mL)加入用(6S，8R)-6-(4-溴-2-乙氧基苯基)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(140mg，0.26mmol)、Cs2CO3(168mg，0.52mmol)和3-氨基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(67mg，0.39mmol)填充的烧瓶中。将反应烧瓶抽空并用N2(x3)填充。加入BrettPhos第3代预催化剂(23mg，0.030mmol)，并且将烧瓶抽空并充入氮气(x3)。将反应在90℃加热1小时，并且然后在90℃加热44小时。将反应冷却至室温，过滤并在减压下浓缩。将所得胶通过快速色谱法(洗脱梯度为己烷中30％-100％乙酸乙酯)纯化，以提供呈胶的3-((3-乙氧基-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(86mg，53％)。1H NMR(500MHz，氯仿-d，27℃)0.39-0.49(2H，m)，0.87-0.95(2H，m)，1.06(3H，d)，1.38-1.45(12H，m)，1.57-1.62(1H，m)，1.68-1.74(2H，m)，1.98-2.06(1H，m)，2.07-2.15(1H，m)，2.49-2.63(2H，m)，2.85(1H，dt)，3.05(1H，br t)，3.29-3.35(1H，m)，3.63-3.73(3H，m)，3.75-3.83(1H，m)，3.92(1H，brd)，3.99(1H，br d)，4.05(2H，q)，4.14(1H，br dd)，4.18-4.26(2H，m)，5.33(1H，s)，5.58-5.63(1H，m)，5.90(1H，br d)，6.02-6.06(1H，m)，6.76(1H，dd)，6.80(1H，d)，7.19(1H，d)，7.97(1H，s)。m/z：(ES+)，[M+H]+＝634。
N-(3-乙氧基-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡 唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺的制备
将甲醇(0.5mL)加入用3-((3-乙氧基-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.080g，0.13mmol)填充的烧瓶中。加入二噁烷中的盐酸(4M；0.5mL，2mmol)，并继续搅拌2小时。然后将反应在减压下浓缩，并且将所得残余物使用已用甲醇预处理过的SCX-2盒纯化，首先用甲醇洗脱，然后用甲醇中的氨(3N)洗脱，以提供呈固体的N-(3-乙氧基-4-((6S，8R)-7-((1-氟环丙基)甲基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺(0.057g，99％)。1H NMR(500MHz，氯仿-d，27℃)0.44-0.55(2H，m)，0.90-1.00(2H，m)，1.12(3H，d)，1.45(3H，t)，2.61-2.71(1H，m)，2.92(1H，br dd)，3.10(1H，br dd)，3.40(1H，br dd)，3.51-3.58(2H，m)，3.83-3.90(1H，m)，3.91-4.02(2H，m)，4.03-4.16(3H，m)，4.36(1H，sxt)，5.38(1H，s)，5.98(1H，dd)，6.12(1H，br d)，6.77-6.89(2H，m)，7.13(1H，d)，8.07(1H，s)，10.09(1H，br s)。没有观察到一个H，并且可能被水峰遮挡。m/z：(ES+)，[M+H]+＝450。
实例21
N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异 喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺的制备
将二噁烷中的盐酸(4M；1.23mL，5.2mmol)逐滴加入3-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(316mg，0.52mmol)于MeOH(5mL)的搅拌溶液中。将混合物在室温下搅拌18小时。在减压下浓缩反应，并且将所得残余物溶于MeOH中。添加过量的四烷基碳酸铵大孔树脂(奥德里奇公司；18-50筛眼；2.5-3.5mmol/g N装载)，并且将混合物在室温下搅拌5分钟。将混合物过滤，并且将滤液经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩，以提供呈胶的粗N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-胺(220mg)。将此材料不经进一步纯化直接用于下一步骤。m/z：(ES+)，[M+H]+＝428。
将N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-胺(220mg，0.51mmol)、1-氟-3-碘丙烷(106mg，0.57mmol)和DIPEA(0.270mL，1.54mmol)于DMF(5mL)的混合物在室温下搅拌18小时。将反应用DCM稀释，并用饱和氯化铵水溶液洗涤。将水层用DCM萃取，并且将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将所得残余物通过制备型HPLC(Xbridge C18柱，19mm x 150mm；5μm；流速：20mL/min)(用水中40％-80％乙腈(含有0.2％氢氧化铵)洗脱)纯化。将产物级分在减压下浓缩，并且将所得残余物通过制备型SFC(2-乙基吡啶柱，19mm x 150mm，5μm；流速：75mL/min；柱温：40℃；出口压力：100巴)(用二氧化碳中15％甲醇(含有0.2％氢氧化铵)洗脱)纯化，以提供呈白色固体的N-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(82mg，两个步骤33％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.03(3H，d)，1.55-1.74(2H，m)，2.41-2.47(2H，m)，2.53-2.83(4H，m)，2.86-3.04(1H，m)，3.10(1H，brdd)，3.32-3.43(1H，m)，3.58-3.66(2H，m)，3.82(3H，s)，3.86-3.98(1H，m)，4.45(2H，dt)，5.21(1H，s)，5.89(1H，t)，5.90(1H，dd)，6.01(1H，d)，6.19(1H，d)，6.35(1H，d)，6.67(1H，d)，7.19(1H，d)，8.03(1H，s)，12.92-12.96(1H，m)。m/z：ES+[M+H]+488。
根据以下程序制备起始材料3-((4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。
(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡 喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉和(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)- 7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异 喹啉的制备
将微波小瓶用(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(986mg，2.26mmol)、4-甲基苯磺酸水合物(43mg，0.23mmol)、3，4-二氢-2H-吡喃(0.31mL，3.4mmol)和DCM填充。将反应在80℃下在微波条件(300W)下加热20分钟。然后将反应冷却并用DCM稀释，之后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。分离各层，并且将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-70％EtOAc)纯化，以提供更快洗脱的呈橙色固体的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(457mg，39％)。1H NMR(300MHz，氯仿-d，27℃)1.04-1.22(3H，m)，1.59-1.86(3H，m)，2.04-2.23(2H，m)，2.53-3.31(5H，m)，3.40-3.57(1H，m)，3.68-3.79(1H，m)，3.97(3H，s)，4.00-4.09(1H，m)，5.41(1H，br s)，5.69(1H，br s)，5.66-5.73(1H，m)，6.67(1H，dd)，6.80(1H，dd)，6.92(1H，dd)，7.06-7.12(1H，m)，7.29-7.37(1H，m)，8.03(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+612。分离较慢洗脱的呈米色粉末的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(627mg，57％)。1H NMR(300MHz，氯仿-d，27℃)1.12(3H，br d)，1.64-1.87(3H，m)，2.03-2.17(1H，m)，2.18-2.29(2H，m)，2.61-2.83(2H，m)，2.89-3.15(2H，m)，3.43(1H，br s)，3.75-3.86(1H，m)，3.95(3H，s)，4.13-4.20(1H，m)，5.32(1H，s)，5.79(1H，brt)，5.66-5.73(1H，m)，6.63-6.77(2H，m)，6.93(1H，d)，7.09(1H，d)，7.43(1H，d)，8.14(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+612。
3-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9- 四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的 制备
将微波小瓶用(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(310mg，0.60mmol)、3-氨基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(154mg，0.89mmol)、Cs2CO3(388mg，1.19mmol)和BrettPhos第三代预催化剂(54.0mg，0.06mmol)填充。将小瓶脱气并用氮气(x2)填充。将小瓶再次脱气并用1，4-二噁烷(6mL)和氮重填。将小瓶再次脱气并用氮重填。将混合物在微波条件(300W，110℃)下加热3.5小时。将反应用DCM稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中20％-60％EtOAc)纯化，以提供呈灰白色固体的3-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-2H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯基氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(322mg，88％)。1H NMR(300MHz，氯仿-d，27℃)1.08(3H，br d)，1.39-1.43(9H，m)，1.58-1.81(3H，m)，2.06(1H，br dd)，2.13-2.25(2H，m)，2.58-2.71(1H，m)，2.82-3.11(2H，m)，3.34-3.50(1H，m)，3.66-3.81(3H，m)，3.86(3H，s)，3.90-4.01(1H，m)，4.08-4.20(3H，m)，4.19-4.29(2H，m)，5.22(1H，s)，5.76(1H，t)，5.64(1H，t)，5.88(1H，br d)，6.09(1H，d)，6.59(1H，br t)，6.67(1H，d)，7.37(1H，br d)，8.08(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+612。
实例22
(6S，8R)-7-(2，2-三氟乙基)-6-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)-2- 甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将二噁烷中的HCl(4M；1.02mL，4.08mmol)逐滴加入3-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.41mmol)于MeOH(4mL)的搅拌溶液中。将混合物在室温下搅拌18小时。然后将反应在减压下浓缩，并且将所得残余物用MeOH溶解。添加过量的四烷基碳酸铵大孔树脂(奥德里奇公司(Aldrich)；18-50筛眼；2.5-3.5mmol/g N装载)，并且将混合物在室温下搅拌5分钟，之后经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩，以提供粗(6S，8R)-6-(4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(179mg)，将其不经进一步纯化直接用于下一步骤。m/z：ES+[M+H]+429。
将(6S，8R)-6-(4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(178mg，0.42mmol)、1-氟-3-碘丙烷(94mg，0.50mmol)和DIPEA(0.218mL，1.25mmol)于DMF(4mL)中的混合物在室温下搅拌18小时。然后将反应用DCM稀释，并且用饱和氯化钠水溶液洗涤。将各层分离，并且将水层用DCM萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过制备型SFC(2-乙基吡啶柱；19mm x 150mm；5μm；流速：75mL/min；柱温：40℃；出口压力：100巴)(用二氧化碳中15％(甲醇，含有0.2％氢氧化铵)洗脱)纯化，以提供呈白色固体的(6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-6-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)-2-甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(70mg，两个步骤35％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.02(3H，d)，1.61-1.84(2H，m)，2.55-2.84(3H，m)，2.90-3.13(2H，m)，3.18-3.43(4H，m)，3.87(3H，s)，3.89-4.00(2H，m)，4.45(2H，dt)，4.81(1H，quin)，5.28(1H，s)，5.74-6.16(1H，m)，6.19(1H，dd)，6.49-6.54(2H，m)，6.66(1H，d)，7.21(1H，d)，8.04(1H，s)，12.98(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+489。
使用下述程序制备起始材料3-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。
3-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9- 四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的制 备
将微波小瓶用(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(259mg，0.50mmol)、3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(259mg，1.49mmol)、碳酸铯(324mg，1.00mmol)和RockPhos第三代预催化剂(42mg，0.050mmol)填充。将小瓶抽空并用氮气(x2)重填。然后将小瓶抽空和用甲苯(3mL)重填。将小瓶抽空和用氮气重填。将混合物在110℃加热4小时。用DCM稀释该反应并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-60％EtOAc)纯化，以提供呈白色泡沫固体的3-(4-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3-甲氧基苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(220mg，72％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6，100℃)1.03-1.09(3H，m)，1.40(9H，s)，1.56-1.64(2H，m)，1.67-1.84(1H，m)，1.93-2.01(1H，m)，2.02-2.12(1H，m)，2.34-2.46(1H，m)，2.59-2.74(1H，m)，2.84(1H，dt)，2.93-3.06(1H，m)，3.13-3.23(1H，m)，3.40-3.50(1H，m)，3.65-3.74(1H，m)，3.76-3.84(2H，m)，3.84-3.91(4H，m)，4.21-4.28(2H，m)，4.97(1H，tt)，5.33(1H，s)，5.67-6.00(1H，m)，5.74(1H，dd)，6.23(1H，ddd)，6.54(1H，d)，6.66(1H，t)，6.73(1H，d)，7.35(1H，d)，8.04(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+613。
实例23和24
3-((6S，8R)-6-(2，6-二氟-4-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基氨基)苯基)-8-甲 基-8，9-二氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7(6H)-基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇的各非对映异构 体的制备
经由注射器，将THF中的四丁基氟化铵(1M；0.114mL，0.11mmol)逐滴加入N-(4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(82mg，0.08mmol)于THF(0.75mL)的搅拌溶液中。2.5小时后，加入另外的THF中的四丁基氟化铵(1M；0.08mL，0.08mmol)并将反应再搅拌18小时。将反应用DCM稀释，依次用饱和NaHCO3水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得的残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中0.5％-10％MeOH)纯化。在减压下浓缩产物级分，并且将所得残余物通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱，5μm二氧化硅，19mm直径，150mm长度)(使用(水，含有0.2％NH4OH)中45％-85％乙腈的洗脱梯度)进一步纯化。将产物级分在减压下浓缩，以提供3-((6S，8R)-6-(2，6-二氟-4-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基氨基)苯基)-8-甲基-8，9-二氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7(6H)-基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇的第一洗脱异构体1(2.7mg，7％)和第二洗脱异构体(2.1mg，5％)，呈淡黄色薄膜。
异构体1： 1H NMR(500MHz，CD2Cl2，27℃)1.13(3H，d)，1.17(3H，d)，1.66-1.78(3H，m)，2.54(2H，t)，2.69(1H，dd)，2.81-2.94(3H，m)，3.00(1H，dd)，3.31(1H，dd)，3.51-3.59(1H，m)，3.60-3.71(4H，m)，3.95-4.03(1H，m)，4.38(1H，br s)，4.46(2H，dt)，5.26(1H，s)，6.01(2H，br d)，6.84(1H，d)，7.21(1H，d)，8.03(1H，s)，10.19(1H，br s)。m/z：ES+[M+H]+520。
异构体2：1H NMR(500MHz，CD2Cl2，27℃)1.05(3H，d)，1.09(3H，d)，1.65-1.80(2H，m)，2.54(2H，t)，2.62(1H，dd)，2.83-2.88(2H，m)，2.91-3.00(1H，m)，3.13-3.24(1H，m)，3.33-3.46(2H，m)，3.48-3.58(1H，m)，3.66(2H，q)，3.96-4.04(2H，m)，4.40(1H，dt)，4.41-4.53(2H，m)，4.64(1H，br d)，5.03(1H，s)，6.06(2H，br d)，6.76(1H，d)，7.19(1H，d)，8.03(1H，s)，10.19(1H，br s)。m/z：ES+[M+H]+520。
使用下述程序制备起始材料N-(4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺。
2-氟-2-甲基-丙二酸二甲酯的制备
伴随剧烈搅拌，将氢化钠(矿物油中60％分散；2.93g，73.3mmol)加入2-氟丙二酸二甲酯(10.0g，66.6mmol)于THF(218mL)的溶液中。30分钟后，添加碘甲烷(4.56mL，73.3mmol)。将反应再搅拌3小时。将反应用水淬灭，并且然后用EtOAc(4x100mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤和在减压下浓缩，以提供呈橙色油的2-氟-2-甲基-丙二酸二甲酯(8.4g，77％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.72(3H，d)，3.77(6H，s)。
2-氟-2-甲基丙-1，3-二醇的制备
在0℃，将氢化锂铝(4.50g，112.6mmol)逐份加入2-氟-2-甲基-丙二酸二甲酯(8.40g，51.2mmol)于THF(205mL)的搅拌溶液中。将反应加温至室温，并且在这些条件下搅拌1小时。然后将反应混合物冷却至0℃并通过依次滴加水(5.85mL)、15wt％NaOH水溶液(5.85mL)和水(18mL)小心地淬灭。将所得凝胶状悬浮液快速搅拌1小时。将沉淀物通过过滤去除，并且将滤液在减压下浓缩。将所得残余物溶于CHCl3/IPA(3∶1)的混合物，经Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩，以提供呈橙色油的2-氟-2-甲基丙-1，3-二醇(3.28g，46％)。将此油不经进一步纯化用于下一步骤。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.18(3H，d)，3.42(4H，dd)，4.80(2H，t)。
3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇的制备
在0℃，将氢化钠(矿物油中60％分散；1.1g，27.5mmol)加入2-氟-2-甲基丙-1，3-二醇(2.7g，25mmol)于THF(93mL)的搅拌溶液中，并且将反应搅拌1小时。添加叔丁基氯二苯基硅烷(6.5mL，25mmol)，并且将反应再搅拌1小时。用水淬灭反应，分离各层，并且将水层用EtOAc(2x100mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下吸附到硅胶上。通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-50％EtOAc)纯化，提供呈澄清胶的3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇(4.4g，51％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.00(9H，s)，1.27(3H，d)，3.48(1H，dd)，3.53(1H，dd)，3.66(1H，d)，3.73(1H，br s)，4.93(1H，t)，7.40-7.48(6H，m)，7.59-7.66(4H，m)。m/z：ES+[M+H]+347。
3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基三氟甲磺酸酯的制备
在-10℃(盐/冰浴)，将三氟甲磺酸酐(1.3mL，7.6mmol)逐滴加入3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇(2.2g，6.35mmol)和2，6-二甲基吡啶(1.28mL，7.6mmol)于DCM(22mL)的搅拌溶液中。将反应保持在这些条件下持续1.5小时。然后将反应用DCM(100mL)稀释，并依次用HCl水溶液(1N)、饱和NaHCO3水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩，以提供呈红色油的3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基三氟甲磺酸酯(3.2g)。将此油不经进一步纯化用于下一步骤。
3-((2R)-2-((3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)氨基)丙 基)-2-甲基苯胺的韭对映异构体混合物的制备
将3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基三氟甲磺酸酯(3.04g，6.35mmol)加入(R)-3-(2-氨基丙基)-2-甲基苯胺(1.04g，6.35mmol)和二异丙基乙胺(1.65mL，9.53mmol)于1，4-二噁烷(24mL)的溶液中。将反应在85℃下加热18小时。冷却后，将反应用DCM(250mL)稀释并且用水洗涤。将水层用DCM(2x100mL)萃取，并且将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中0-25％MeOH)纯化。将产物级分在减压下浓缩，以提供呈胶的3-((2R)-2-((3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(2.10g，95％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)0.90(3H，dd)，1.01(9H，d)，1.29(3H，dd)，1.41(1H，br s)，1.97(3H，d)，2.29-2.43(1H，m)，2.65-2.91(4H，m)，3.62-3.82(2H，m)，4.67(2H，s)，6.28-6.36(1H，m)，6.47(1H，dd)，6.69-6.81(1H，m)，7.40-7.52(6H，m)，7.61-7.69(4H，m)。m/z：ES+[M+H]+494。
(1S，3R)-1-(4-溴-2，6-二氟苯基)-2-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟- 2-甲基丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺的非对映异构体混合物的制备
将4-溴-2，6-二氟苯甲醛(628mg，2.84mmol)加入3-((2R)-2-((3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(700mg，1.42mmol)和水(0.128mL，7.10mmol)于乙酸(10mL)和甲苯(4mL)的混合物中的搅拌溶液中。将反应在90℃下加热18小时，之后在回流条件下再加热4小时。允许将反应冷却，并且在减压下浓缩。将所得残余物溶于DCM中，并且用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水相用DCM(20mL)萃取，并且将合并的有机层在减压下浓缩。将残余物溶于MeOH/DCM(5∶1，18mL)的混合物中，并且然后加入盐酸羟胺(148mg，2.13mmol)和乙酸钠(233mg，2.84mmol)。将混合物在35℃搅拌5分钟并且然后在减压下浓缩。将所得残余物溶于EtOAc中，并依次用饱和NaHCO3水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤，之后经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-35％EtOAc)纯化，以提供呈淡黄色薄膜的(1S，3R)-1-(4-溴-2，6-二氟苯基)-2-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(339mg，34％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.05(9H，d)，1.19(3H，dd)，2.08(3H，s)，2.35(1H，dd)，2.47-2.67(2H，m)，2.84-3.01(1H，m)，3.02-3.14(1H，m)，3.22(1H，dd)，3.40-3.63(3H，m)，3.66-3.79(1H，m)，3.92(1H，dd)，5.15(1H，d)，6.38-6.47(2H，m)，6.83(1H，d)，6.93-7.00(1H，m)，7.38-7.49(6H，m)，7.59-7.71(4H，m)，8.69(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+695。
(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟- 2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的非对映异构体混合物的 制备
在-20℃，将亚销酸钠(33.6mg，0.49mmol)于水(0.400mL)中的溶液逐滴加入(1S，3R)-1-(4-溴-2，6-二氟苯基)-2-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(339mg，0.49mmol)于丙酸(4mL)的冷却溶液中，并且将反应在这些条件下搅拌30分钟。添加冰冷的EtOAc(20mL)，随后逐份添加饱和NaHCO3水溶液(5mL)。剧烈搅拌该两相混合物并通过缓慢添加固体Na2CO3中和。分离各相，并且将有机层用饱和NaHCO3水溶液(2x30mL)和饱和NaCl水溶液(30mL)洗涤，之后用MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-40％EtOAc)纯化，以提供呈淡黄色固体的(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(206mg，60％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)0.98(4.5H，s)，1.00(1.5H，d)，1.02(1.5H，d)，1.04(4.5H，s)，1.15(1.5H，d)，1.23(1.5H，d)，2.30-2.47(0.5H，m)，2.60(0.5H，dd)，2.81(0.5H，dd)，2.89(0.5H，dd)，3.02(0.5H，dd)，3.06-3.21(1H，m)，3.22-3.33(0.5H，m)，3.37-3.51(1H，m)，3.51-3.60(0.5H，m)，3.61-3.72(0.5H，m)，3.73-3.83(0.5H，m)，3.89(0.5H，dd)，5.22(0.5H，s)，5.27(0.5H，s)，6.70(1H，dd)，6.81(1H，br d)，6.91-7.00(1H，m)，7.14(1H，t)，7.33-7.47(6H，m)，7.55-7.67(4H，m)，8.07(1H，br d)。没有观察到吲唑NH。m/z：ES+[M+H]+706。
(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟- 2-甲基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉 的非对映异构体混合物的制备
将3，4-二氢-2H-吡喃(0.129mL，1.41mmol)和对甲苯磺酸一水合物(2.7mg，0.01mmol)加入(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(200mg，0.28mmol)于DCM(2mL)的搅拌溶液中。将反应在45℃下加热21小时。允许将反应冷却，然后用DCM稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中5％-30％EtOAc)纯化，以提供呈无色薄膜的(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(176mg，79％)。m/z：ES+[M+H]+790。
3-((4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8- 甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟 苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的非对映异构体混合物的制备
将小瓶用搅拌棒、(6S，8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(126mg，0.16mmol)、3-氨基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(41mg，0.24mmol)、Pd2dba3(9.3mg，0.01mmol)、4，5-双(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫吨(Xantphos)(16mg，0.02mmol)和碳酸铯(156mg，0.48mmol)填充。将小瓶密封，抽空并用氮气(3x)回填，之后经由注射器添加1，4-二噁烷(1mL)。将混合物在环境温度搅拌2分钟，并且然后在90℃加热16小时。允许将混合物冷却，然后用EtOAc稀释，通过硅藻土过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-40％EtOAc)纯化，以提供呈淡黄色固体的3-((4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(95mg，68％)。m/z：ES+[M+H]+883。
N-(4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8-甲 基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)氮杂环丁烷-3-胺的非 对映异构体混合物的制备
将甲酸(0.5mL，13.04mmol)加入3-((4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(53mg，0.06mmol)，并且将所得溶液在环境温度搅拌18小时。在减压下浓缩反应，并且将所得残余物溶于THF(0.5mL)中，并用NaOH水溶液(5N；0.081mL，2.40mmol)处理。将混合物在30℃搅拌20小时，并且然后在40℃保持4小时。加入另外的NaOH水溶液(5N；0.081mL，2.40mmol)，并且将反应在40℃下搅拌46小时，之后在55℃下加热5小时。允许将反应混合物冷却至环境温度。同时，在分离小瓶中，将二噁烷中的HCl(4N；0.38mL，1.5mmol)加入3-((4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(89mg，0.10mmol)于MeOH(0.5mL)的搅拌溶液中。将反应在室温下搅拌5小时，并且然后在减压下浓缩。将所得残余物与先前的反应(作为在NaOH水溶液(5N)和THF中的混合物)合并。将新混合物用DCM(5mL)进行稀释，将这些相分离并且将水层用DCM(2x5mL)进行萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤和在减压下浓缩，以提供呈淡黄色固体的N-(4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)氮杂环丁烷-3-胺(177mg)，将其不经进一步纯化用于下一步骤。m/z：ES+[M+H]+698。
N-(4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8-甲 基-6，7，8，9-四氧.-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂 环丁烷-3-胺的非对映异构体混合物的制备
将1-氟-3-碘丙烷(0.026mL，0.16mmol)加入N-(4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)氮杂环丁烷-3-胺(115mg，0.16mmol)和二异丙基乙基胺(0.058mL，0.33mmol)于NMP(075mL)的搅拌溶液中。将反应在室温下搅拌16小时，之后用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。分离各层并将水层用EtOAc萃取。将合并的有机层用饱和NaCl水溶液(2x5mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中1％-20％MeOH)纯化，以提供呈淡黄色薄膜的N-(4-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-3，5-二氟苯基)-1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(82mg，66％)。m/z：ES+[M+H]+758。
实例25
6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹 啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺的制备
将二噁烷中的HCl(4N；0.86mL，3.4mmol)逐滴加入3-((6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.20g，0.34mmol)于MeOH(2.5mL)的溶液中，并且将反应在室温下搅拌2小时。将反应在减压下浓缩，以提供呈固体的N-(氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺盐酸盐(200mg)。m/z：(ES+)，[M+H]+399。
在环境温度，依次添加DMF(0.5mL)和1-氟-3-碘丙烷(0.036mL，0.34mmol)。然后逐滴添加过量二异丙基乙基胺(1.2mL，6.80mmol)。将反应在室温下搅拌18小时，并且然后在减压下浓缩。将所得残余物通过反相快速C18色谱法(洗脱梯度为(水，含有0.2％NH4OH)中20％-75％乙腈)纯化，以提供呈固体的6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺(45mg，29％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6，27℃)1.04(3H，d)，1.60-1.75(2H，m)，2.51-2.70(3H，m)，2.79-2.96(3H，m)，3.03(1H，dd)，3.13(1H，br dd)，3.41-3.53(1H，m)，3.74(2H，brs)，3.98(1H，br d)，4.45(2H，dt)，4.86(1H，s)，5.83(1H，tt)，6.26(1H，d)，6.74(1H，d)，6.81(1H，dd)，6.96(1H，d)，7.18(1H，d)，7.76(1H，d)，8.04(1H，s)，12.95(1H，s)。m/z：(ES+)，[M+H]+459。
使用下述程序制备起始材料3-((6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。
(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-2-(2，2-二氟乙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异 喹啉-6-胺的制备
将5-溴吡啶甲醛(2.74g，14.7mmol)加入(R)-3-(2-((2，2-二氟乙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(1.6g，7.0mmol)于乙酸(34.4mL)和水(0.631mL，35.0mmol)的溶液中。将反应在80℃加热3小时，并且然后在减压下浓缩。将所得残余物溶于MeOH(40mL)中，加入乙酸钠(1.15g，14.0mmol)和盐酸羟胺(0.730g，10.5mmol)。将反应在室温下搅拌3小时，并且然后在减压下浓缩。将残余物溶于水中，用饱和NaHCO3水溶液中和并且然后用EtOAc萃取。将合并的有机层在减压下浓缩，并且将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-90％EtOAc)纯化。将产物级分在减压下浓缩，并且将所得残余物进一步通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-90％EtOAc)纯化，以提供呈胶的(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-2-(2，2-二氟乙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(1.40g，49％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)0.99(3H，d)，1.93(3H，s)，2.38-2.47(1H，m)，2.51-2.62(1H，m)，2.72(1H，dd)，2.92-3.14(1H，m)，3.23-3.29(1H，m)，4.65(2H，s)，4.79(1H，s)，5.98(1H，tt)，6.39(2H，s)，7.22(1H，d)，7.91(1H，dd)，8.55(1H，d)。m/z：ES+[M+H]+396。
(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡 唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将乙酸(541mg，9.01mmol)加入(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-2-(2，2-二氟乙基)-3，5-二甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(714mg，1.80mmol)于CHCl3(8mL)的搅拌溶液中。将反应冷却至0℃，并滴加亚硝酸异戊酯(422mg，3.60mmol)于CHCl3(1mL)的溶液。将反应在0℃下搅拌2小时，并且然后通过缓慢添加NaHCO3(1.5g，18mmol)于水(20mL)的溶液淬灭。分离各相，并且在减压下浓缩有机层。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中5％-35％EtOAc)纯化，以提供呈浅棕色固体的(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(438mg，60％)。1H NMR(300MHz，CDCl3，27℃)1.13(3H，d)，2.68-2.85(1H，m)，2.91(1H，dd)，2.98-3.17(1H，m)，3.34(1H，dd)，3.47-3.63(1H，m)，5.05(1H，s)，5.63(1H，tt)，6.87(1H，d)，7.19(1H，d)，7.28(1H，d)，7.71(1H，dd)，8.04(1H，d)，8.57(1H，dd)。没有观察到吲唑NH。m/z：ES+[M+H]+405。
(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(2，2-三氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2- 基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将3，4-二氢-2H-吡喃(0.294mL，3.23mmol)加入(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(438mg，1.08mmol)和对甲苯磺酸一水合物(21mg，0.11mmol)于DCM(4mL)的溶液中。将反应在微波条件(300W)下在100℃加热6小时。然后允许将反应冷却，然后用饱和NaHCO3水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中10％-30％EtOAc)纯化，以提供呈浅棕色胶状固体的(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(441mg，83％)。m/z：ES+[M+H]+491。
3-((6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9- 四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-基)氨基)氯杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的制备
将小瓶用搅拌棒、(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.22g，0.44mmol)、3-氨基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.151g，0.88mmol)、碳酸铯(0.29g，0.88mmol)和BrettPhos第三代预催化剂(0.040g，0.040mmol)填充。将小瓶密封，抽空并填充氮气。添加1，4-二噁烷(4mL)，并且将小瓶再次抽空并用氮气回填。将反应在110℃搅拌13小时，并且然后在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中10％-30％EtOAc)纯化，以提供呈米色固体的3-((6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-基)氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.20g，78％)。1H NMR(300MHz，CD3OD，27℃)1.10(3H，dd)，1.43(9H，s)，1.56-1.72(2H，m)，1.72-1.87(1H，m)，1.92-1.99(1H，m)，2.03-2.17(1H，m)，2.38-2.53(1H，m)，2.62-2.82(1H，m)，2.88-3.14(2H，m)，3.33-3.44(1H，m)，3.49-3.60(1H，m)，3.67-3.83(3H，m)，3.92-4.02(1H，m)，4.17-4.33(3H，m)，4.91(1H，s)，5.34-5.57(1H，m)，5.69-5.77(1H，m)，6.79(1H，d)，6.89(1H，dd)，7.05(1H，dd)，7.34(1H，d)，7.78-7.81(1H，m)，8.07(1H，s)，苯胺NH，未观察到。m/z：ES+[M+H]+583。
实例26
(6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-6-(5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)吡 啶-2-基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将二噁烷中的HCl(4N；0.97mL，3.9mmol)逐滴加入3-((6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.227g，0.39mmol)于MeOH(3mL)的溶液中，并且将反应在室温下搅拌18小时。将反应在减压下浓缩，以提供呈固体的(6S，8R)-6-(5-(氮杂环丁烷-3-基氧基)吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉盐酸盐(0.235g；未测定HCl当量数)，将其不经进一步纯化进行使用。m/z：(ES+)，[M+H]+400。
在环境温度，将1-氟-3-碘丙烷(0.041mL，0.34mmol)加入(6S，8R)-6-(5-(氮杂环丁烷-3-基氧基)吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉盐酸盐(235mg)于DMF(0.6mL)的搅拌溶液中。逐滴添加过量二异丙基乙基胺(1.36mL，7.80mmol)。将反应在室温下搅拌18消失，并且然后在减压下浓缩。将所得残余物通过反相快速C18色谱法(洗脱梯度为(水，含有0.2％NH4OH)中20％-75％乙腈)纯化。将产物级分合并和冻干，以提供呈固体的(6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-6-(5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)吡啶-2-基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(53mg，30％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6，27℃)1.05(3H，d)，1.60-1.77(2H，m)，2.54-2.70(3H，m)，2.85(1H，dd)，2.97-3.22(4H，m)，3.39-3.50(1H，m)，3.87(2H，br s)，4.45(2H，dt)，4.80-4.92(1H，m)，5.00(1H，s)，5.93(1H，tt)，6.78(1H，d)，7.19-7.26(3H，m)，8.05(1H，s)，8.06(1H，d)，12.97(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+460。
使用下述程序制备起始材料3-((6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。
3-((6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9- 四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的制备
在密封微波小瓶中，将3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(227mg，1.31mmol)、(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(215mg，0.44mmol)、RockPhos第三代预催化剂(37.1mg，0.04mmol)以及碳酸铯(285mg，0.88mmol)悬浮于甲苯(4mL)中。将反应在微波条件(300W)下在110℃加热1小时。将反应在减压下浓缩，并且将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中20％-60％EtOAc)纯化，以提供呈固体的3-((6-((6S，8R)-7-(2，2-二氟乙基)-8-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-基)氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(227mg，89％)。1H NMR(300MHz，CD3OD，27℃)1.11(3H，dd)，1.41-1.43(9H，m)，1.61-1.66(1H，m)，1.66-1.86(2H，m)，2.04-2.17(1H，m)，2.36-2.54(1H，m)，2.59-2.79(1H，m)，2.89-3.02(1H，m)，3.03-3.17(1H，m)，3.31-3.43(1H，m)，3.48-3.60(1H，m)，3.70(2H，dd)，3.88-3.95(2H，m)，4.09-4.13(1H，m)，4.27-4.39(2H，m)，4.99-5.08(2H，m)，5.64(1H，tt)，5.73(1H，dt)，6.81(1H，dd)，7.20(1H，dd)，7.27(1H，dd)，7.36(1H，d)，8.04-8.10(2H，m)。m/z：ES+[M+H]+584。
实例27
1-(3-氟丙基)-N-(4-((6R，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H- 吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺
将叔丁醇钠(2.118g，22.06mmol)和BrettPhos G3(0.166g，0.18mmol)加入1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(0.632g，4.78mmol)和(6R，8R)-6-(4-溴苯基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(1.56g，3.68mmol)于1，4-二噁烷(18.4ml)的脱气溶液中，并且将反应加温至90℃，并搅拌过夜。冷却后，将反应用EtOAc(20mL)和水(20mL)稀释，并且将各层分离。将水层用EtOAc(20mL)萃取，然后将合并的有机物干燥并且蒸发。通过HPLC(Waters CSH C18 OBD柱，5μ二氧化硅，30mm直径，100mm长度)(使用水(含有0.1％NH3)和MeCN的极性递减混合物作为洗脱液)纯化，以给出胶。将其吸收于甲醇(5mL)中，然后加入水(95mL)并将混合物在室温下打浆过夜。通过过滤收集所得固体，用水中5％甲醇洗涤并在真空烘箱中在50℃干燥过夜，以给出呈无色固体的1-(3-氟丙基)-N-(4-((6R，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺(0.935g，54％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.13(3H，d)，1.68-1.83(2H，m)，2.59(2H，t)，2.77(1H，dd)，2.86(2H，t)，2.89-2.99(1H，m)，3.04(1H，dd)，3.15-3.26(1H，m)，3.37-3.48(1H，m)，3.71-3.76(2H，m)，3.93(1H，d)，4.10(1H，q)，4.43(1H，t)，4.53(1H，t)，4.99(1H，s)，6.41-6.46(2H，m)，6.97(1H，d)，7.00(2H，d)，7.26(1H，s)，8.06(1H，d)，10.10(1H，s)；m/z：ES+[M+H]+476。
如下合成用作起始材料的(6R，8R)-6-(4-溴苯基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉：
(6R，8R)-6-(4-溴苯基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并 [4，3-f]异喹啉
将三氟乙酸(1.85mL)加入(R)-1-(1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺(2.0g，7.77mmol)和4-溴苯甲醛(7.19g，38.9mmol)于甲苯(37mL)的溶液中，并且将所得混合物在90℃搅拌30小时。允许将反应冷却，并在DCM(100mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)之间分配。将各层分离，并且在真空中浓缩有机层。通过硅胶柱色谱法(用庚烷中0-50％乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出呈泡沫且为6∶1比率的异构体的(6R，8R)-6-(4-溴苯基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(1.560g，47％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.14(3H，d)，2.80(1H，dd)，2.94(1H，dd)，3.05(1H，dd)，3.25(1H，dd)，3.33(1H，ddd)，5.04(1H，s)，6.95(1H，d)，7.08-7.12(2H，m)，7.28-7.33(1H，m)，7.37-7.40(2H，m)，8.08(1H，d)，10.12(1H，s)；m/z：ES-[M-H]-422。
实例28
1-(3-氟丙基)-N-(3-甲氧基-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8， 9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺的制备
将BrettPhos第三代预催化剂(10mg，0.01mmol)和叔丁醇钠(0.127g，1.32mmol)一次性加入1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(0.033g，0.25mmol)和(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(0.10g，0.22mmol)于1，4-二噁烷(1.10mL)的脱气溶液中。然后将橙色混合物浸入已预热至50℃的油浴中。5分钟后，将反应冷却至室温。在分离烧瓶中，将叔丁醇钠(1.81g，18.8mmol)和BrettPhos第三代预催化剂(0.17g，0.19mmol)一次性加入(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(1.71g，3.76mmol)和1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(0.597g，4.52mmol)于1，4-二噁烷(18.8mL)的脱气溶液中。将浅橙色混合物浸入已预热至50℃的油浴中。5分钟后，将反应冷却至室温。冷却后，合并两个反应，用乙酸乙酯稀释，并依次用水(x2)和饱和氯化钠水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将所得橙色油通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为DCM中0-10％甲醇)纯化，以提供呈固体的1-(3-氟丙基)-N-(3-甲氧基-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺(1.84g，92％)且约84∶16反式∶顺式混合物(基于UV HPLC谱)。将此材料使用制备型SFC(柱：Chiralpak AD，21.2x250mm，5μm；75mL/min)(用CO2中20％(甲醇，含有0.2％NH4OH)洗脱)拆分，以提供呈浅橙色固体的1-(3-氟丙基)-N-(3-甲氧基-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺(1.01g)和第二洗脱峰。将此材料进一步通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为乙酸乙酯中0-30％甲醇)纯化，以提供呈白色固体的1-(3-氟丙基)-N-(3-甲氧基-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺(0.954g)。将此材料最终通过制备型HPLC(柱：Xbridge C18，30x100mm，5μm，40mL/min)(用(水，含有0.2％NH4OH)中40％-70％乙腈洗脱)纯化。将产物级分合并，用乙酸乙酯(x3)洗涤，并且将合并的有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩，以提供呈灰白色泡沫状固体的1-(3-氟丙基)-N-(3-甲氧基-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺(551mg，27％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6，27℃)1.04(3H，d)，1.63(2H，dtt)，2.44(2H，t)，2.70(2H，dd)，2.81(1H，dd)，2.84-2.94(1H，m)，3.09(1H，dd)，3.34(1H，br s)，3.44(1H，dqd)，3.61(2H，dd)，3.77(3H，s)，3.90(1H，m)，4.43(2H，dt)，5.28(1H，s)，5.87(1H，dd)，6.02(1H，d)，6.16(1H，d)，6.32(1H，d)，6.65(1H，d)，7.18(1H，d)，8.02(1H，s)，12.95(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+506。
使用下述程序制备起始材料(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉。
(R)-N-(1-(3-氨基-2-甲基苯基)丙-2-基)-2，2，2-三氟乙酰胺的制备
将2，2，2-三氟乙酸乙酯(3.75ml，31.5mmol)加入(R)-3-(2-氨基丙基)-2-甲基苯胺(5.17g，31.5mmol)和三乙胺(4.83mL，34.6mmol)于MeOH(70.1mL)的深琥珀红溶液中。15分钟后，将反应浓缩成深琥珀色油。将油溶于乙酸乙酯中，用水洗涤，并且将水层用乙酸乙酯(x2)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得油通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-40％乙酸乙酯)纯化，以提供呈黄色-橙色油的(R)-N-(1-(3-氨基-2-甲基苯基)丙-2-基)-2，2，2-三氟乙酰胺(6.47g，79％)，其静置时结晶为浅橙色固体。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.11(3H，d)，2.01(3H，s)，2.63(1H，dd)，2.78(1H，dd)，3.93-4.05(1H，m)，4.71(2H，s)，6.36(1H，dd)，6.49(1H，dd)，6.78(1H，t)，9.25(1H，br d)。m/z：ES+[M+H]+261。
(R)-2-甲基-3-(2-((2，2，2-三氟乙基)氨基)丙基)苯胺的制备
在0℃，将THF中硼烷四氢呋喃络合物(1M；149mL，149mmol)经由注射器(6x25mL)加入(R)-N-(1-(3-氨基-2-甲基苯基)丙-2-基)-2，2，2-三氟乙酰胺(6.47g，24.9mmol)于四氢呋喃(81mL)的溶液中。移除冰浴，并且在加温时观察到气体逸出。一旦没有看到进一步的气体逸出(约20分钟)，将反应加温至65℃。4小时后，将反应冷却并在室温下保持18小时。然后将反应冷却至0℃并通过逐滴添加甲醇(22mL)淬灭。将反应加温至室温，并且在气体逸出停止后，将反应加温至65℃。14小时后，然后将反应冷却至室温并在这些条件下搅拌3.5天，之后在减压下浓缩。将所得油通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-70％乙酸乙酯)纯化，以提供呈浅黄色油的(R)-2-甲基-3-(2-((2，2，2-三氟乙基)氨基)丙基)苯胺(5.62g，92％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)0.90(3H，d)，1.98(3H，s)，2.09-2.20(1H，m)，2.25-2.40(1H，m)，2.72-2.84(2H，m)，3.17-3.29(2H，m)，4.69(2H，s)，6.36(1H，dd)，6.49(1H，dd)，6.78(1H，t)。m/z：ES+[M+H]+247
(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-3，5-二甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-1，2，3，4- 四氢异喹啉-6-胺的制备
将4-溴-2-甲氧基苯甲醛(1.83g，8.53mmol)和(R)-2-甲基-3-(2-((2，2，2-三氟乙基)氨基)丙基)苯胺(2.00g，8.12mmol)加入水(0.7mL，41mmol)和乙酸(40mL)的溶液中。将所得浅黄色溶液浸入已预热至65℃的油浴中，并在这些条件下保持18小时。然后将所得深琥珀色溶液在减压下浓缩(水浴：55℃)。将所得残余物用乙酸乙酯稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，直到使用pH条确认水层pH＝8。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物溶于甲醇(20mL)中，并加入盐酸羟胺(0.152g，2.19mmol)和过量的碳酸钾。5分钟后，将混合物用乙酸乙酯稀释，过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-50％乙酸乙酯)纯化，以提供呈深琥珀色油且反式∶顺式比率为83∶17(基于NMR积分)的(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-3，5-二甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺。将油从DCM再次浓缩，并在真空下干燥，得到浅琥珀色泡沫状固体(2.55g，71％)。将少量该材料(150mg)使用制备型SFC(柱：(S，S)Whelk-O1，21.2x250mm，5μm；75mL/min)(用CO2中15％(甲醇，含有0.2％NH4OH)洗脱)拆分，以提供呈淡黄色泡沫状固体的较慢洗脱的(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-3，5-二甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(101mg)以及更快洗脱的(1R，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-3，5-二甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(18mg)。
(1S，3R)：1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.00(3H，d)，1.95(3H，s)，2.43(1H，dd)，2.64-2.85(2H，m)，3.19-3.43(2H，m)，3.86(3H，s)，4.67(2H，s)，5.18(1H，s)，6.29(1H，d)，6.41(1H，d)，6.60(1H，d)，6.96(1H，dd)，7.18(1H，d)。m/z：ES+[M+H]+443。
(1R，3R)：1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.19(3H，d)，1.94(3H，s)，2.53-2.60(1H，m)，2.78(1H，br dd)，2.98-3.12(1H，br m)，3.16-3.36(2H，m)，3.84(3H，s)，4.61(2H，s)，5.31(1H，s)，6.20(1H，d)，6.33(1H，d)，7.03-7.13(2H，m)，7.19(1H，d)。m/z：ES+[M+H]+443。
(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢- 3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
经5分钟，将亚销酸钠(0.413g，5.98mmol)于水(3.83mL)的溶液逐滴加入(1S，3R)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-3，5-二甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-胺(2.55g，5.75mmol；83∶17反式∶顺式)于丙酸(19.2mL)的搅拌溶液中，使用由冰、固体氯化钠和饱和氯化钠水溶液组成的冷却浴维持在-15℃。20分钟后，将反应用已预冷却至-70℃的甲苯(100mL)稀释。剧烈搅拌所得浅黄色混合物，并且在5分钟后，去除冷却浴。达到室温后，将红色反应混合物在这些条件下保持1.5小时，然后用水(x2)洗涤。将合并的水层用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩至大约20％的起始体积。将该混合物用EtOAc(20mL)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。然后加入固体碳酸钾直至气体逸出停止，并使用pH条测试混合物为碱性。分离各层，并且将有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得油通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-70％乙酸乙酯)纯化，以提供呈浅橙色泡沫固体且约9∶1反式∶顺式混合物(基于NMR积分)的(6S，8R)-6-(4-溴-2-甲氧基苯基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(1.96g，75％)其。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.06(3H，d)，2.80-2.98(2H，m)，3.15(1H，br dd)，3.33-3.53(2H，m)，3.90(3H，s)，5.40(1H，s)，6.63(1H，d)，6.67(1H，d)，6.96(1H，dd)，7.20-7.27(2H，m)，8.08(1H，s)，13.00(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+454。
实例29
2-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟 乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺的制备
在室温，将叔丁醇钠(1.08g，11.3mmol)和BrettPhos第三代预催化剂(0.16g，0.18mmol)加入(6S，8R)-6-(5-溴-6-氟吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(2.00g，4.51mmol)和1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(0.90g，5.41mmol)于1，4-二噁烷(22.6mL)的脱气溶液中。将红橙色混合物浸入预热至44℃的油浴中。22分钟后，将橙色混合物从加热中取出并倒入乙酸乙酯和饱和氯化钠水溶液中，并分离各层。将水层用乙酸乙酯萃取，并且将合并的有机层用饱和的氯化钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为乙酸乙酯中0-30％甲醇)纯化，以提供呈浅黄色泡沫状固体且大约84∶16反式∶顺式混合物(基于NMR积分)的2-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺(1.58g)。将此材料通过制备型SFC(柱：Lux Cellulose-4，21.2x250mm，5μm；70mL/min)(用CO2中35％(甲醇，含有0.2％NH4OH)洗脱)拆分，以提供浅橙色泡沫状固体。将此固体通过快速硅色谱和在乙酸乙酯中的0-30％甲醇洗脱梯度进行再纯化。将产物部分在减压下进行浓缩。将所得残余物吸收于乙腈中，过滤，并且在减压下浓缩，以提供呈浅黄色泡沫状固体的2-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺(1.03g，46％)。1H NMR(600MHz，DMSO-d6，27℃)1.10(3H，d)，1.64(2H，dtt)，2.48(2H，t)，2.83(1H，dd)，2.86(2H，br d)，2.97(1H，br dq)，3.02(1H，dd)，3.45(1H，dqd)，3.54(1H，dq)，3.63(2H，br s)，3.96(1H，dquin)，4.44(2H，dt)，4.91(1H，s)，6.13(1H，br d)，6.87(1H，d)，6.92-7.01(2H，m)，7.25(1H，d)，8.06(1H，s)，13.00(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+495。
使用下述程序制备起始材料(6S，8R)-6-(5-溴-6-氟吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉。
(R)-(1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
在-78℃，经20分钟，将己烷中正丁基锂(2.5M；96mL，241mmol)加入4-溴-1H-吲唑(24.8g，126mmol)于THF(200mL)的溶液中。并且将混合物在-78℃搅拌7小时。添加(R)-4-甲基-1，2，3-噁噻唑烷-3-甲酸叔丁酯2，2-二氧化物(26g，110mmol)，并且将所得混合物在-78℃搅拌15分钟。移除冷却浴，并且将混合物在这些条件下搅拌18小时。添加柠檬酸水溶液(1N；130mL)，并且搅拌持续30分钟。将混合物用己烷萃取，并且将有机层用饱和的碳酸钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(用己烷中0-60％EtOAc洗脱)纯化，以给出呈白色固体的(R)-(1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(17.3g，57％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.02(3H，br d)，1.34(9H，s)，2.82(1H，br dd)，3.09(1H，br dd)，3.82(1H，dt)，6.82(1H，br d)，6.88(1H，d)，7.24(1H，dd)，7.35(1H，br d)，8.18(1H，s)，12.97(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+276。
(R)-1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-胺二盐酸盐的制备
在室温，经10分钟，将HCl二噁烷(4M，100mL，400mmol)加入(R)-(1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(17.3g，62.7mmol)于DCM(200mL)的悬浮液中。将所得浆液搅拌过夜，然后在减压下浓缩，以提供呈白色固体的(R)-1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-胺(15.9g，102％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.14(3H，d)，2.97(1H，dd)，3.40(1H，dd)，3.45-3.62(1H，m)，6.96(1H，d)，7.29(1H，dd)，7.45(1H，d)，7.97-8.27(3H，br s)，8.29(1H，d)。m/z：ES+[M+H]+176。
(R)-1-(1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺的制备
将碳酸钾(4.75g，34.3mmol)加入(R)-1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-二盐酸胺盐(2.13g，8.58mmol)于乙腈(25mL)的搅拌悬浮液中，然后逐滴添加DCM(12.6mL)中的2，2，2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(2.191g，9.44mmol)。将混合物在室温下搅拌1.5天。然后添加额外的DCM(0.3mL)中的2，2，2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(398mg)。将反应加温至60℃，并且在3小时后，将反应冷却至室温，并添加另一份2，2，2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(398mg)于DCM中(0.3mL)的溶液。18小时后，将反应在减压下浓缩至减少体积，并且然后用DCM稀释。将混合物用水进行洗涤，并且将有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-60％乙酸乙酯)纯化，以提供呈胶的(R)-1-(1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺(2.06g，93％)。m/z：ES+[M+H]+257。
(6S，8R)-6-(5-溴-6-氟吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四 氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉的制备
将三氟乙酸(1.7mL)加入(R)-1-(1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺(1.83g，7.11mmol)和5-溴-6-氟吡啶甲醛(1.45g，7.11mmol)在甲苯(33.8mL)中的溶液中。将反应在90℃下加热24小时，并且然后浓缩至缩小体积。然后将混合物用二氯甲烷稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液碱化。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为己烷中0-50％乙酸乙酯)纯化，以提供呈白色固体的(6S，8R)-6-(5-溴-6-氟吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(2.01g，64％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，27℃)1.11(3H，d)，2.89(1H，brdd)，2.94-3.09(2H，m)，3.31-3.42(1H，m)，3.52-3.71(1H，m)，5.07(1H，s)，6.96(1H，d)，7.24-7.36(2H，m)，8.06(1H，d)，8.23(1H，dd)，13.02(1H，s)。m/z：ES+[M+H]+443。
实例30
5-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟 乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺
将1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(435mg，3.29mmol)、(6S，8R)-6-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(730mg，1.65mmol)以及叔丁醇钠(950mg，9.88mmol)悬浮于1，4-二噁烷(18.3mL)中。将混合物脱气并且添加Brettphos 3G预催化剂(149mg，0.16mmol)。将反应加热至80℃持续1小时。将反应混合物冷却至室温并用乙酸乙酯(10mL)稀释并用水(10mL)洗涤。将有机层经硫酸镁干燥，过滤，并在真空下浓缩。将粗产物通过制备型LCMS(Waters XSelect CSH C18柱，5μ二氧化硅，50mm直径，100mm长度)(使用水(含有1％NH3)与MeCN的极性递减混合物作为洗脱液)纯化。将样品溶于MeOH中，并且使用以下色谱条件通过SFC分离：柱：Phenomonex Lux C1，30x250mm，5微米，流动相：30％MeOH+0.1％NH3/70％scCO2，以提供呈黄色固体的5-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺(396mg，49％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.15(3H，d)，1.69-1.81(2H，m)，2.60(2H，t)，2.77(1H，dd)，2.92-3.03(3H，m)，3.14-3.31(2H，m)，3.65-3.79(3H，m)，4.04(1H，q)，4.43(2H，t)，4.53(1H，t)，5.35(1H，s)，6.54(1H，dd)，6.76(1H，d)，7.00(1H，d)，7.66(1H，d)，7.93(1H，d)，11.06(1H，s)；m/z：ES+[M+H]+495。
如下合成用作起始材料的(6S，8R)-6-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉：
(6S，8R)-6-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四 氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉
将三氟乙酸(2.13mL)加入(R)-1-(1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺(1.15g，4.47mmol)和5-溴-3-氟吡啶甲醛(912mg，4.47mmol)在甲苯(42.6mL)的溶液中，并且将所得的混合物在100℃下搅拌30分钟。将反应蒸发并且将残余物在DCM(20mL)与2MNaOH(20mL)之间分配。分离各层，并在减压下浓缩有机相。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-40％EtOAc)纯化。将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的(6S，8R)-6-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(1.15g，58％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.16(3H，d)，2.86(1H，dd)，3.01(1H，dq)，3.19-3.35(2H，m)，3.68-3.78(1H，m)，5.42(1H，s)，6.80(1H，d)，7.20(1H，d)，7.59(1H，dd)，8.05(1H，d)，8.27-8.5(1H，m)。m/z：ES+[M+H]+443。
实例31
2，2-二氟-3-((6S，8R)-6-(3-氟-5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)吡 啶-2-基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇
在室温，将四丁基氟化铵(THF中1.0M，0.65mL，0.65mmol)加入6-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-5-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺(320mg，0.43mmol)于THF(2.66mL)的溶液中，并搅拌64小时。蒸发反应混合物，然后溶于DMSO中，并且将粗产物通过快速反相(Puriflash，220g，C18，30μ柱)(使用水(含有1％NH3)和MeCN的极性递减混合物作为洗脱液)纯化。将含有所需化合物的级分蒸发至干燥，以提供粗产物(143mg)。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为EtOAc中0-20％MeOH)纯化。将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供为异构体的混合物的2，2-二氟-3-((6S，8R)-6-(3-氟-5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)吡啶-2-基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇(118mg，54％)。将材料通过制备型HPLC(Waters XSelect CSH C18柱，5μ二氧化硅，30mm直径，100mm长度)(使用水(含有0.1％甲酸)与MeCN的极性递减混合物作为洗脱液)再纯化。将含有所需化合物的级分合并，并且通过离子交换色谱法(使用SCX-2柱)纯化。将所需产物使用1M NH3/MeOH从柱上洗脱，并且将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供呈无色固体的2，2-二氟-3-((6S，8R)-6-(3-氟-5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)吡啶-2-基)-8-甲基-3，6，8，9-四氢-7H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇(62.1mg，29％)。1HNMR(500MHz，DMSO，27℃)1.03(3H，dd)，1.64(2H，dq)，2.44(2H，t)，2.60-2.66(1H，m)，2.79(3H，dd)，2.97(1H，dd)，3.04-3.15(1H，m)，3.50-3.73(5H，m)，3.89-3.97(1H，m)，4.39(1H，t)，4.48(1H，t)，5.21(1H，s)，5.26(1H，t)，6.58(1H，d)，6.65-6.71(2H，m)，7.19(1H，d)，7.55(1H，dd)，8.03(1H，s)，12.94(1H，s)；m/z：ES+[M+H]+507。
如下合成用作起始材料的6-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-5-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺：
(R)-N-(1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-基)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二 氟丙-1-胺
将3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基三氟甲磺酸酯(2.59g，5.36mmol)加入(R)-1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-胺(0.94g，5.36mmol)和DIPEA(1.39ml，8.05mmol)于1，4-二噁烷(38.9mL)的溶液中，并且将反应在50℃搅拌18小时。蒸发反应混合物，然后将残余物用EtOAc稀释并用水洗涤，并且将水层进一步用EtOAc萃取。将合并的有机层用饱和盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并且蒸发至干燥。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-50％EtOAc)纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈无色胶的(R)-N-(1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-基)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙-1-胺(1.515g，52％)。1H NMR(500MHz，DMSO，27℃)0.92(3H，d)，0.97(9H，s)，1.78-1.86(1H，m)，2.73(1H，dd)，2.98-3.14(4H，m)，3.83(2H，td)，6.85(1H，d)，7.20(1H，dd)，7.34(1H，d)，7.41-7.50(6H，m)，7.58-7.64(4H，m)，8.08(1H，s)，12.98(1H，s)；m/z：ES+[M+H]+508。
(6S，8R)-6-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2- 二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉
将三氟乙酸(319μL)加入(R)-N-(1-(1H-吲唑-4-基)丙-2-基)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙-1-胺(681mg，1.34mmol)和5-溴-3-氟吡啶甲醛(287mg，1.41mmol)于甲苯(6.39mL)的溶液中，并且将所得混合物在110℃搅拌1小时。允许将反应冷却至室温，蒸发至干燥并溶于DMSO中。将粗产物通过快速反相色谱法(100g Redisep RfC18柱)(使用水(含有0.1％甲酸)和MeCN(60％-100％)的极性递减混合物作为洗脱液)纯化。将含有所需化合物的级分合并，并且通过离子交换色谱法(使用SCX-2柱)分离。将所需产物使用1M NH3/MeOH从柱上洗脱，并且将纯级分蒸发至干燥，以提供呈灰白色固体的(6S，8R)-6-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(763mg，82％)。1H NMR(500MHz，DMSO，27℃)0.99(9H，s)，1.04(3H，d)，2.74-2.89(2H，m)，2.97-3.04(1H，m)，3.31(1H，s)，3.54-3.62(1H，m)，3.78(1H，q)，3.92-4.02(1H，m)，5.36(1H，s)，6.72(1H，d)，7.23(1H，d)，7.41-7.49(6H，m)，7.57-7.61(4H，m)，8.04(1H，dd)，8.09(1H，s)，8.38(1H，d)，13.01(1H，s)；m/z：ES+[M+H]+693。
6-((6S，8R)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-6， 7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-5-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基) 吡啶-3-胺
将1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(114mg，0.86mmol)、(6S，8R)-6-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-7-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2，2-二氟丙基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(300mg，0.43mmol)以及叔丁醇钠(249mg，2.59mmol)悬浮于脱气的1，4-二噁烷(4.81mL)中。加入Brettphos第3代预催化剂(39.2mg，0.04mmol)，并且将混合物抽空并用氮气(x2)吹扫，并且然后将反应加热至80℃持续45分钟。允许将反应混合物冷却至室温并用EtOAc稀释且用水洗涤。将水层进一步用EtOAc萃取，并且将合并的有机层用饱和盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干燥，且不经进一步纯化直接使用。m/z：ES+[M+H]+745。
实例32
6-((6S，8R)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，9，8-四氢-3H-吡唑并[4，3- f]异喹啉-6-基)-N-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺
将叔丁醇钠(116mg，1.20mmol)和BrettPhos G3(9.09mg，10.04μmol)加入(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(89mg，0.20mmol)和1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(39.8mg，0.30mmol)于1，4-二噁烷(1.00mL)的脱气溶液中，并且将反应加温至90℃并搅拌6小时。冷却后，将反应用EtOAc和水稀释，并且分离各层。将水层用EtOAc萃取，然后将合并的有机物经硫酸钠干燥，并且蒸发。通过HPLC(Waters CSH C18OBD柱，5μ二氧化硅，30mm直径，100mm长度)(使用水(含有0.1％NH3)和MeCN的极性递减混合物作为洗脱液)纯化，以给出呈薄膜的产物(42.0mg，42％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.13(3H，d)，1.69-1.84(2H，m)，2.61(2H，td)，2.76(1H，dd)，2.94(3H，ddd)，3.16-3.28(2H，m)，3.45-3.54(1H，m)，3.67-3.76(2H，m)，4.09(1H，dt)，4.24(1H，d)，4.43(1H，td)，4.53(1H，td)，5.02(1H，s)，6.76(1H，dd)，6.81(1H，d)，6.89(1H，dd)，7.39(1H，d)，7.81(1H，d)，11.10(1H，s)；m/z：ES+[M+H]+495。
如下合成用作起始材料的(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉：
4-溴-3-氟-1H-吲唑
将Selectfluor(49.40g，139.6mmol)加入4-溴-1H-吲唑(25.0g，127mmol)于DMF(254mL)的溶液中，并且将反应加热至70℃过夜。冷却后，将反应混合物倒入水上。将沉淀的固体过滤并干燥，然后将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-30％EtOAc)纯化。将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供呈淡黄色固体的4-溴-3-氟-1H-吲唑(4.20g，15％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)7.24-7.28(1H，m)，7.32-7.36(2H，m)，9.20(1H，s)；m/z：ES-[M-H]-213。
(R)-(1-(3-氟-1H-吲唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在-78℃，将正丁基锂(1.6M，51.9ml，83.01mmol)加入THF(124mL)中的4-溴-3-氟-1H-吲唑(8.50g，39.5mmol)中，并且将反应搅拌15分钟，加温至-50℃持续15分钟，然后冷却回-78℃。添加THF(20mL)中的(R)-4-甲基-1，2，3-噁噻唑烷-3-甲酸叔丁酯2，2-二氧化物(10.32g，43.48mmol)，并且将反应搅拌15分钟，之后允许经30分钟加温至-10℃。添加1N柠檬酸(200mL)，并且将混合物搅拌15分钟，之后用EtOAc(x2)萃取。将合并的有机物经硫酸镁干燥，并且蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为庚烷中0-40％EtOAc)纯化。将含有产物的级分蒸发至干燥，以提供呈无色固体的(R)-(1-(3-氟-1H-吲唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(5.93g，51％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.17(3H，d)，1.35(9H，s)，3.09(2H，d)，4.00-4.09(1H，m)，4.41-4.49(1H，m)，6.97(1H，d)，7.22(1H，dd)，7.33(1H，dd)，9.36(1H，s)；m/z：ES-[M-H]-292。
(R)-1-(3-氟-1H-吲唑-4-基)丙-2-胺
将二噁烷中的4N盐酸(23.86ml，95.45mmol)加入MeOH(23.9mL)中的(R)-(1-(3-氟-1H-吲唑-4-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(5.60g，19.1mmol)中，并且将反应在室温下搅拌2小时。浓缩粗混合物，然后悬浮于EtOAc(100mL)中并用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)洗涤。将水层用EtOAc(x5)萃取，然后将合并的有机物经硫酸钠干燥和蒸发，以提供呈黄色油的(R)-1-(3-氟-1H-吲唑-4-基)丙-2-胺(3.10g，84％)，其在静置时固化。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.19(3H，d)，2.86(1H，dd)，3.09(1H，dd)，3.33(1H，dddd)，6.96(1H，d)，7.22(1H，dd)，7.33(1H，dd)，9.93(1H，s)；m/z：ES+[M+H]+194。
(R)-1-(3-氟-1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺
将DCM中的2，2，2-三氟乙基三氟甲磺酸酯0.1M溶液(25.9mL，2.59mmol)加入1，4-二噁烷(20mL)中的(R)-1-(3-氟-1H-吲唑-4-基)丙-2-胺(0.4g，2.07mmol)和DIPEA(0.541mL，3.11mmol)，并且将所得混合物在75℃搅拌过夜。将反应在真空中浓缩，并在乙酸乙酯(25mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)之间分配。分离各相，并且将水层用乙酸乙酯(25mL)萃取。将合并的有机物用饱和氯化钠水溶液(25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。将所得胶吸收于甲醇中并施加到预湿的(甲醇)SCX-2盒。将盒用甲醇洗涤，并且用甲醇中1M氨洗脱。将洗脱液在真空中浓缩，以给出呈棕色胶的(R)-1-(3-氟-1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺(0.455g，80％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.11(3H，d)，2.92(1H，dd)，3.07-3.22(4H，m)，6.96(1H，d)，7.25(1H，dd)，7.34(1H，dd)，9.50(1H，s)；m/z：ES+[M+H]+276。
(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四 氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉
将三氟乙酸(87μL)加入(R)-1-(3-氟-1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺(100mg，0.36mmol)和5-溴吡啶甲醛(67.6mg，0.36mmol)于甲苯(0.87mL)的溶液中，并且将所得混合物在90℃搅拌1小时。然后允许将反应冷却至室温，并在DCM(5mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)之间分配。将各层分离，并且在真空中浓缩有机层。通过硅胶柱色谱法(用庚烷中0-50％乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出呈白色固体的(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(89mg，55％)。1HNMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.16(3H，d)，2.92-3.00(2H，m)，3.25-3.36(2H，m)，3.46-3.52(1H，m)，5.07(1H，s)，6.98(1H，d)，7.09(1H，dd)，7.43(1H，d)，7.77(1H，dd)，8.55(1H，dd)，9.09(1H，s)；m/z：ES+[M+H]+443。
实例33
5-氟-6-((6S，8R)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并 [4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺
将叔丁醇钠(3.12g，32.52mmol)和BrettPhos G3(0.245g，0.27mmol)加入(6S，8R)-6-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(2.50g，5.42mmol)和1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-胺(1.075g，8.13mmol)于1，4-二噁烷(27.1mL)的脱气溶液中，并且将反应加温至60℃并搅拌2小时。冷却后，将反应用EtOAc和水稀释，并且分离各层。将水层用EtOAc萃取，然后将合并的有机物经硫酸钠干燥，并且蒸发。首先通过硅胶柱色谱法(用庚烷中0-100％(乙酸乙酯中10％甲醇)洗脱)纯化，然后通过反相Interchim(0.1％NH3和MeCN作为洗脱液)纯化，以给出作为异构体混合物的产物。将产物通过SFC分离；将样品溶于MeOH中并使用以下SFC条件分离：柱：Phenomonex C4，30x250mm，5微米，流动相：25％MeOH+0.1％NH3，流速：100ml/分钟，BPR 120巴，柱温：40℃，以给出
呈泡沫的5-氟-6-((6S，8R)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉-6-基)-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺(1.780g，64％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.15(3H，d)，1.67-1.81(2H，m)，2.59(2H，t)，2.81-3.03(4H，m)，3.17-3.34(2H，m)，3.70(3H，q)，4.01-4.08(1H，m)，4.20(1H，d)，4.43(1H，t)，4.53(1H，t)，5.32(1H，s)，6.54(1H，dd)，6.81(1H，d)，6.95(1H，d)，7.64-7.68(1H，m)，9.46(1H，s)；m/z：ES+[M+H]+513。
如下合成用作起始材料的(6S，8R)-6-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉：
(6S，8R)-6-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8， 9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉
将三氟乙酸(2.16mL)加入(R)-1-(3-氟-1H-吲唑-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙-2-胺(2.50g，9.08mmol)以及5-溴-3-氟吡啶甲醛(1.85g，9.08mmol)于甲苯(43.3mL)的溶液，并且将所得混合物在90℃搅拌90分钟。允许将反应冷却，并在DCM(50mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)之间分配。将各层分离，并且在真空中浓缩有机层。通过硅胶柱色谱法(用庚烷中0-50％乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出呈白色固体的(6S，8R)-6-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-1-氟-8-甲基-7-(2，2，2-三氟乙基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[4，3-f]异喹啉(2.90g，69％)。1H NMR(500MHz，CDCl3，27℃)1.15(3H，d)，2.88-3.04(2H，m)，3.24-3.35(2H，m)，3.63-3.71(1H，m)，5.39(1H，s)，6.83(1H，d)，7.08(1H，dd)，7.60(1H，dd)，8.36(1H，dd)，9.13(1H，s)；m/z：ES+[M+H]+461。
使用与上述那些类似的合成方法制备实例34至73(下表)。
说明性实施例的以上描述仅旨在使本领域其他技术人员认识申请人的说明书、其原理和其实际应用，使得本领域其他技术人员可以按其许多形式改编和应用本说明书，因为它们可能最适合特定用途的要求。本说明书和它的特定实例，尽管表明了本说明书的实施例，但是仅旨在用于说明的目的。因此本说明书并不受限于在本说明书中描述的说明性实施例，并且可以被不同地修改。此外，应理解的是，为清楚起见，还可以将在分开的实施例的上下文中描述的本说明书的不同特征进行组合，以形成单个的实施例。相反地，为简洁起见，还可以将在单个实施例的上下文中描述的本说明书的不同特征进行组合，以形成它们的子组合。

Claims (9)

1.一种具有化学式(ID)的化合物：
其中：
Q是O或NH；
R1是CH2F或CHF2；
R14选自：
和环Y选自：
或其药学上可接受的盐。
2.如权利要求1所述的具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Q是NH。
3.如权利要求1所述的具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Q是O。
4.如权利要求1-3中任一项所述的具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是CH2F。
5.如权利要求1-3中任一项所述的具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R14选自：
6.如权利要求1-3中任一项所述的具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，其中环Y选自：
7.如权利要求1所述的具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：
1-(3-氟丙基)-N-(4-((6R,8R)-8-甲基-7-(2,2,2-三氟乙基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[4,3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺；
1-(3-氟丙基)-N-(3-甲氧基-4-((6S,8R)-8-甲基-7-(2,2,2-三氟乙基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[4,3-f]异喹啉-6-基)苯基)氮杂环丁烷-3-胺；
5-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S,8R)-8-甲基-7-(2,2,2-三氟乙基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[4,3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺；
2,2-二氟-3-((6S,8R)-6-(3-氟-5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)吡啶-2-基)-8-甲基-3,6,8,9-四氢-7H-吡唑并[4,3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇；
6-((6S,8R)-1-氟-8-甲基-7-(2,2,2-三氟乙基)-6,7,9,8-四氢-3H-吡唑并[4,3-f]异喹啉-6-基)-N-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-6-((6S,8R)-6-氘-8-甲基-7-(2,2,2-三氟乙基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[4,3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺；
N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-5-甲氧基-6-((6S,8R)-8-甲基-7-(2,2,2-三氟乙基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[4,3-f]异喹啉-6-基)吡啶-3-胺；
6-((6S,8R)-7-(2,2-二氟乙基)-8-甲基-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[4,3-f]异喹啉-6-基)-5-氟-N-(1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)吡啶-3-胺；
2,2-二氟-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)吡啶-2-基)-8-甲基-3,6,8,9-四氢-7H-吡唑并[4,3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇；
2,2-二氟-3-((6S,8R)-6-(3-氟-5-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)吡啶-2-基)-8-甲基-3,6,8,9-四氢-7H-吡唑并[4,3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇；和
2,2-二氟-3-((6S,8R)-6-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-甲氧基苯基)-8-甲基-3,6,8,9-四氢-7H-吡唑并[4,3-f]异喹啉-7-基)丙-1-醇。
8.如权利要求1-7中任一项所述的具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐在制备药剂中的用途，其中所述药剂用于预防或治疗温血动物的乳腺癌。
9.一种药物组合物，该药物组合物包含如权利要求1至7中任一项所述的具有化学式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂。
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