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CN114632045B - 一种抗衰老组合物及制备方法与应用 - Google Patents

一种抗衰老组合物及制备方法与应用 Download PDF

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CN114632045B CN202210404291.5A CN202210404291A CN114632045B CN 114632045 B CN114632045 B CN 114632045B CN 202210404291 A CN202210404291 A CN 202210404291A CN 114632045 B CN114632045 B CN 114632045B
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Abstract

本发明公开了一种抗衰老组合物及制备方法与应用，包括纳米脂质体与负载在所述纳米脂质体上的活性组分，活性组分包括二葡糖基棓酸、葡糖基橙皮苷、千日菊提取物、生物素与咖啡因，本发明还公开了抗衰老组合物在制备化妆品中的应用。本发明的抗衰老组合物可以促进人体皮肤纤维芽细胞增殖，促进胶原蛋白产生，提高抗衰老组合物的透皮吸收能力，从而改善皱纹，改善肤色，修复受损肌肤，改善皮肤干燥。

Description

一种抗衰老组合物及制备方法与应用
技术领域
本发明属于化妆品领域，涉及抗衰老组合物，尤其涉及一种抗衰老组合物及制备方法与应用。
背景技术
人体皮肤表皮层组织和细胞，不仅可通过表皮屏障保护人体免受外界的侵害，而且，还可通过阻止皮肤组织水分挥发的保水或保湿作用机制等发挥延缓皮肤组织衰老的作用。皮肤表皮组织的屏障构建和皮肤表皮组织的保湿抗衰老这两个方面的作用对于机体生存与组织保护来说都至关重要、也必不可少。皮肤组织细胞与人体其它细胞类型一样，随着时间延续和机体年龄增长也会发生结构、组方、功能等衰老和衰退，且诸多代谢废物及失活、老化细胞及亚细胞结构不能有效地被清除，生理性细胞常态和稳态不断失衡加速皮肤老化和皮肤疾病。
衰老是机体在经过性成熟时期后，细胞的自我更新和修复能力减弱，组织器官的结构和功能退化，并最终走向死亡的过程，其特征表现在压力应激能力减退，平衡状态打破和罹患疾病风险增加。随着全球人口老龄化，多种老年退行性疾病以及随之产生的巨大的医疗费用已成为越来越严重的社会问题。保持老年人群健康状态是减轻人口老龄化带来的社会负担和经济负担的关键环节。因此，探索简便易行，经济有效，安全性高并适宜推广的干预衰老及衰老相关疾病的措施和方法意义重大。
目前为止，最普遍的抗衰老方式是使用抗衰老药物。临床上使用的延缓衰老的药物大多是合成类药物，如维生素E可促进细胞分裂及抑制氧自由基生成、普鲁卡因制剂能延长细胞寿命、酰胺吡酮可延缓脑衰老等；阿司匹林通过对抗氧化应激，延缓衰老引起的机体功能下降。
皮肤老化是由自然因素或非自然因素造成的皮肤衰老现象。人出生后皮肤组织日益发达，功能逐渐活跃，当到达某种年龄就会开始退化，皮肤老化往往在人们不知不觉中慢慢进行。皮肤组织的成长期一般结束于25岁左右，一般称此期为"皮肤的弯角"，自此后生长与老化同时进行，皮肤弹力纤维渐渐变粗，40-50岁达到初老期，皮肤的老化慢慢明显，但老化程度因人而异。随着皮肤的老化，皮肤的厚度逐渐变薄伴有萎缩，皮下脂肪减少，并由于弹力纤维与胶原纤维发生变化而渐失皮肤弹性和张力，由此进一步导致皮肤松弛与皱纹产生。
在目前医疗美容抗衰领域中，除了拉皮手术和埋线提升的微整手术外，其他常采用补充肌肤中的胶原蛋白、弹性蛋白和透明质酸，或者刺激纤维芽细胞的活性，例如热玛吉等光电治疗、手针注射等美塑治疗等，是利用光、高频电波刺激细胞，促进胶原蛋白的生成，但这类刺激细胞活性，必须要轻度烧伤来刺激纤维芽细胞工作，烧伤地方恢复主要是靠纤维芽细胞，而纤维芽细胞再生医疗，是将培养好的纤维芽细胞直接注入皮肤真皮层，直接补充再生细胞，增加细胞数量，提高分裂速度，让自身肌肤持续不断的产生胶原蛋白等物质，使肌肤恢复到年轻状态，效果持久、自然，而且也可以持续培养和使用。
随着年龄增长，纤维芽细胞的数量是在减少的，从而致使这类抗衰医疗方法，需要多次在人体皮肤表面进行注射或者拉皮，或者埋线。
而目前市场上有出现用于皮肤表面的抗衰老化妆品或抗皱化妆品，但是在实际应用中存在一些缺陷和问题，例如其中的有效成分较难透过皮肤发挥其应有的生物学效应，吸收难，抗皱反应较为缓慢，效果不显著等。
因此需要一种可以促进人体皮肤纤维芽细胞增殖和胶原蛋白产生的组合物或包含该组合物的产品。
发明内容
本发明第一方面为了解决上述问题，提供了一种抗衰老组合物，该抗衰老组合物可以促进人体皮肤纤维芽细胞增殖，促进胶原蛋白产生，提高抗衰老组合物的透皮吸收能力，从而改善皱纹，改善肤色，修复受损肌肤，改善皮肤干燥。
本发明第二方面还提供了上述抗衰老组合物的制备方法。
本发明第三方面还提供了上述抗衰老组合物的应用。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明第一方面提供了一种抗衰老组合物，所述抗衰老组合物包括纳米脂质体与负载在所述纳米脂质体上的活性组分，所述活性组分包括：二葡糖基棓酸，葡糖基橙皮苷，千日菊提取物，生物素与咖啡因。
在本发明中，人体皮肤微生物层中可以生成α-葡糖苷酶，二葡糖基棓酸在α-葡糖苷酶的作用下，从而切断二葡糖基棓酸的葡萄糖键，生成三羟基苯甲酸，快速作用于目标靶点，减少黑色素的生成；三羟基苯甲酸在减少自由基、抑制络氨酸酶的活性等方面具有良好效果，同时还能抑制转化生成黑色素的酶的表达、抑制皮肤黑色素转移到皮肤表层，它可以抑制皮肤的黑色素转移，让皮肤达到减少黑色素等作用。二葡糖基棓酸能有效抑制酪氨酸酶活性，阻止黑色素转移，从而明显减少色斑，提亮肤色，提升肌肤美白度；并且，二葡糖基棓酸还表现出优异的抗自由基效果，具有抗衰老作用。
葡糖基橙皮苷：葡糖基橙皮苷是一种从柑橘皮中提取的天然生物类黄酮，是一种水溶性橙皮苷的衍生物。它能够提高血液循环，通过刺激皮肤表面循环，改善皮肤暗沉，葡糖基橙皮苷中的类黄酮化合物可以抗氧化、吸收紫外线和清除自由基，并且还能有效的强化胶原蛋白结构。
千日菊提取物可以刺激了皮肤中胶原蛋白的产生和层粘连蛋白的产生，可用于减少面部肌肉的肌肉收缩、减少和/或防止面部细纹或皱纹、减少由于重复的面部肌肉收缩导致的动态面部皱纹和前额皱纹(例如面部皱纹)、增加胶原蛋白的产生、减少基质金属蛋白酶、使皮肤紧致和/或减少松散、下垂和松弛的皮肤的外观。
生物素又称维生素H、辅酶R，是水溶性维生素，也属于维生素B族，B7。它是合成维生素C的必要物质，是脂肪和蛋白质正常代谢不可或缺的物质。是一种维持人体自然生长、发育和正常人体机能健康必要的营养素。生物素具有出色的美容作用，可保持皮肤嫩白。
咖啡因，白色粉末，特征性气味，咖啡因具有刺激细胞新陈代谢、加速局部微循环的作用。
以咖啡因、生物素、千日菊提取物、葡糖基橙皮苷以及二葡糖基棓酸复配组成的活性组分，更能被皮肤有效吸收，能够有效减少黑色素沉积，抵抗外界侵害以及自由基，并有效抑制炎症因子的活性，减少皮肤水分流失，从而有效缓解、祛除黑眼圈，延缓肌肤衰老，提高肌肤光泽。
再以纳米脂质体负载活性组分，稳定性好，温和性好，对皮肤刺激性低，避免了制备过程中对活性组分结构的破坏。
作为本发明的一种优选方案，所述抗衰老组合物按重量百分比计包括：0.011％-1.1％二葡糖基棓酸，0.01％-1.5％葡糖基橙皮苷、0.01％-0.8％千日菊提取物，0.00001％-0.0005％生物素，0.00001％-0.0005％咖啡因，0.6％-2.6％胆固醇，0.1％-1.5％山嵛醇，6％-6.5％氢化卵磷脂，余量为去离子水。
作为本发明的一种优选方案，所述抗衰老组合物按重量百分比计包括：0.011％-0.5％二葡糖基棓酸，0.01％-0.5％葡糖基橙皮苷、0.0447％-0.6％千日菊提取物，0.00001％-0.0005％生物素，0.00001％-0.0005％咖啡因，0.6％-2.6％胆固醇，0.1％-1.5％山嵛醇，6％-6.5％氢化卵磷脂，余量为去离子水。
作为本发明的一种优选方案，所述抗衰老组合物按重量百分比计包括：0.011％二葡糖基棓酸，0.5％葡糖基橙皮苷、0.0447％千日菊提取物，0.0001％生物素，0.0001％咖啡因，0.6％-2.6％胆固醇，0.1％-1.5％山嵛醇，6％-6.5％氢化卵磷脂，余量为去离子水。
作为本发明的一种优选方案，所述纳米脂质体的粒径为100-250nm。
本发明第二方面提供了上述抗衰老组合物的制备方法，包括以下步骤：
a)将活性组分与纳米脂质体溶解，得到混合溶液；
b)将步骤a)的混合溶液中的溶剂蒸发脱除，在40-60℃下，加入去离子水，超声处理15-20min，超声频率为15-35Hz；超声处理完成后过滤得到抗衰老组合物。
本发明第三方面提供了上述的抗衰老组合物在制备化妆品中的应用，所述化妆品包括柔肤水、面膜，精华液，眼霜、眼膜、护肤凝胶、护肤乳液、面霜或喷雾剂。
作为本发明的一种优选方案，所述化妆品还包括辅料，所述辅料包括溶剂、增稠剂、防腐剂、pH调节剂、保湿剂、柔润剂、螯合剂、乳化剂、精油、香精、色素中的至少一种。
作为本发明的一种优选方案，所述化妆品为眼霜，所述眼霜按重量份计包括：0.01-60份抗衰老组合物，0.1-0.8份氢化油菜籽油醇，5-10份二异硬脂醇苹果酸，5-10份1，3-丙二醇，3-12份椰油醇-辛酸酯，0.01-0.1份植物淄醇澳洲坚果油酸酯，0.01-2份视黄醇棕榈酸酯，0.01-0.5份橙皮苷甲基查尔酮与50-80份去离子水。
作为本发明的一种优选方案，所述眼霜的制备方法包括以下步骤：
1)加入氢化油菜籽油醇、二异硬脂醇苹果酸、视黄醇棕榈酸酯、椰油醇-辛酸酯、植物淄醇澳洲坚果油酸酯与橙皮苷甲基查尔酮搅拌均匀，加热至50-90℃，搅拌均匀，作为油相；
2)将抗衰老组合物，水与1，3-丙二醇混合搅拌均匀，作为水相；
3)将步骤1)得到的油相与步骤2)得到的水相进行混合，得到的混合物加入超临界设备的反应釜内，打入二氧化碳，调整超临界设备反应釜内的温度至45-65℃，设置压力为12-15Mpa，时间30-45min，泄压释放二氧化碳，冷却至室温，即得到眼霜。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1)本发明以咖啡因、生物素、千日菊提取物、葡糖基橙皮苷以及二葡糖基棓酸复配组成的活性组分，再以纳米脂质体负载活性组分，稳定性好，温和性好，对皮肤刺激性低，避免了制备过程中对活性组分结构的破坏，更能被皮肤有效吸收，能够有效减少黑色素沉积，抵抗外界侵害以及自由基，并有效抑制炎症因子的活性，减少皮肤水分流失，从而有效缓解、祛除黑眼圈，延缓肌肤衰老，提高肌肤光泽；
2)本发明的抗衰老组合物可以促进人体皮肤纤维芽细胞增殖，促进胶原蛋白产生，从而改善皱纹，改善肤色，修复受损肌肤，改善皮肤干燥。
附图说明
图1是本发明细胞增殖促进结果图。
图2是本发明胶原蛋白产生结果图。
具体实施方式
另外，为了更好地说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在另外一些实例中，对于本领域技术人员熟知的方法、手段、器材和步骤未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。
需要说明的是：本说明书中，使用“可以”或“可”表示的含义包括了进行某种处理以及不进行某种处理两方面的含义。本说明书中，使用“数值A-数值B”表示的数值范围是指包含端点数值A、B的范围。
如无特殊声明，本发明所使用的单位均为国际标准单位，并且本发明中出现的数值，数值范围，均应当理解为包含了工业生产中所允许的误差。
本发明中，所用的原料例如：二葡糖基棓酸，葡糖基橙皮苷，千日菊提取物，生物素，咖啡因，均可从市场购得。
千日菊提取物，Acmella oleracea extract，使用的千日菊提取物是水-醇提取物，其中溶剂包括水、乙醇和1,3-丙二醇的液体混合物，从所得提取液体中去除乙醇。
本发明中，化妆品中所用的辅料，可以是现有化妆品市场中常用的辅料，例如溶剂、增稠剂，防腐剂，pH调节剂，保湿剂，柔润剂，螯合剂，乳化剂，精油，香精，色素。
实施例1
本实施例提供了一种抗衰老组合物，包括纳米脂质体与负载在所述纳米脂质体上的活性组分，抗衰老组合物按重量百分比计包括：0.011％二葡糖基棓酸，0.5％葡糖基橙皮苷、0.0447％千日菊提取物，0.0001％生物素，0.0001％咖啡因，1.8％胆固醇，1.2％山嵛醇，6.3％氢化卵磷脂，余量为去离子水。
抗衰老组合物的制备方法包括以下步骤：
a)按配比将二葡糖基棓酸、葡糖基橙皮苷、千日菊提取物、生物素、咖啡因、胆固醇、山嵛醇与氢化卵磷脂溶解于无水乙醇中，得到混合溶液；
b)将步骤a)的混合溶液中的无水乙醇蒸发脱除，在40℃下，加入去离子水，超声处理15min，超声频率为15Hz；超声处理完成后过滤得到抗衰老组合物。
实施例2
本实施例提供了一种抗衰老组合物，包括纳米脂质体与负载在所述纳米脂质体上的活性组分，抗衰老组合物按重量百分比计包括：1.1％二葡糖基棓酸，1.5％葡糖基橙皮苷、0.8％千日菊提取物，0.0005％生物素，0.0005％咖啡因，2.6％胆固醇，1.5％山嵛醇，6.5％氢化卵磷脂，余量为去离子水。
抗衰老组合物的制备方法包括以下步骤：
a)按配比将二葡糖基棓酸、葡糖基橙皮苷、千日菊提取物、生物素、咖啡因、胆固醇、山嵛醇与氢化卵磷脂溶解于无水乙醇，得到混合溶液；
b)将步骤a)的混合溶液中的无水乙醇蒸发脱除，在50℃下，加入去离子水，超声处理18min，超声频率为25Hz；超声处理完成后过滤得到抗衰老组合物。
实施例3
本实施例提供了一种抗衰老组合物，包括纳米脂质体与负载在所述纳米脂质体上的活性组分，抗衰老组合物按重量百分比计包括：0.011％二葡糖基棓酸，0.01％葡糖基橙皮苷、0.01％千日菊提取物，0.00001％生物素，0.00001％咖啡因，0.6％胆固醇，0.1％山嵛醇，6％氢化卵磷脂，余量为去离子水。
抗衰老组合物的制备方法包括以下步骤：
a)按配比将二葡糖基棓酸、葡糖基橙皮苷、千日菊提取物、生物素，咖啡因、胆固醇、山嵛醇与氢化卵磷脂溶解于无水乙醇，得到混合溶液；
b)将步骤a)的混合溶液中的无水乙醇蒸发脱除，在60℃下，加入去离子水，超声处理15-20min，超声频率为15-35Hz；超声处理完成后过滤得到抗衰老组合物。
实施例4
本实施例提供了一种抗衰老组合物，包括纳米脂质体与负载在所述纳米脂质体上的活性组分，抗衰老组合物按重量百分比计包括：0.011％二葡糖基棓酸，1.2％葡糖基橙皮苷、0.6％千日菊提取物，0.0002％生物素，0.000078％咖啡因，1.8％胆固醇，0.9％山嵛醇，6.2％氢化卵磷脂，余量为去离子水。
抗衰老组合物的制备方法包括以下步骤：
a)按配比将二葡糖基棓酸、葡糖基橙皮苷、千日菊提取物、生物素、咖啡因、胆固醇、山嵛醇与氢化卵磷脂溶解于无水乙醇，得到混合溶液；
b)将步骤a)的混合溶液中的溶剂蒸发脱除，在45℃下，加入去离子水，超声处理20min，超声频率为15Hz；超声处理完成后过滤得到抗衰老组合物。
实施例5
本实施例提供了一种抗衰老组合物，包括纳米脂质体与负载在所述纳米脂质体上的活性组分，抗衰老组合物按重量百分比计包括：0.43％二葡糖基棓酸，1.12％葡糖基橙皮苷、0.0447％千日菊提取物，0.0001％生物素，0.0004％咖啡因，0.9％胆固醇，1.1％山嵛醇，6％氢化卵磷脂，余量为去离子水。
抗衰老组合物的制备方法包括以下步骤：
a)按配比将二葡糖基棓酸、葡糖基橙皮苷、千日菊提取物、生物素、咖啡因、胆固醇、山嵛醇与氢化卵磷脂溶解于无水乙醇，得到混合溶液；
b)将步骤a)的混合溶液中的无水乙醇蒸发脱除，在55℃下，加入去离子水，超声处理15min，超声频率为35Hz；超声处理完成后过滤得到抗衰老组合物。
实施例6
本实施例提供了一种抗皱眼霜，按重量份计包括：12.5份实施例1制得的抗衰老组合物，0.5份氢化油菜籽油醇，5份二异硬脂醇苹果酸，10份1，3-丙二醇，10份椰油醇-辛酸酯，0.05份植物淄醇澳洲坚果油酸酯，0.5份视黄醇棕榈酸酯，0.2份橙皮苷甲基查尔酮与80份去离子水。
该抗皱眼霜的制备方法包括：
1)加入氢化油菜籽油醇、二异硬脂醇苹果酸、视黄醇棕榈酸酯、椰油醇-辛酸酯、植物淄醇澳洲坚果油酸酯(PHYTOSTERYL MACADAMIATE，购自嶅稞新材料科技(上海)有限公司)与橙皮苷甲基查尔酮(橙皮苷甲基查尔酮是可以从多种来源商购获得的化合物(参见国际化妆品成分词典和手册，第12版，第1卷，第1146页(2008)，其通过引用并入本文)。一方面，该成分可通过使用以商品名EyelissTM销售的Sederma SAS(法国)混合物获得，该混合物是水、甘油、橙皮苷甲基查尔酮、硬脂醇聚醚-20、二肽-2(缬氨酰-色氨酸)和棕榈酰四肽-7(Pal-GQPR)的组合。)搅拌均匀，加热至50℃，搅拌均匀，作为油相；
2)将抗衰老组合物，水与1，3-丙二醇混合搅拌均匀，作为水相；
3)将步骤1)得到的油相与步骤2)得到的水相进行混合，得到的混合物加入超临界设备的反应釜内，打入二氧化碳，调整超临界设备反应釜内的温度至55℃，设置压力为12Mpa，时间30min，泄压释放二氧化碳，冷却至室温，即得到眼霜。
实施例7
本实施例提供了一种抗皱眼霜，按重量份计包括：25份实施例1制得的抗衰老组合物，0.8份氢化油菜籽油醇，10份二异硬脂醇苹果酸，5份1，3-丙二醇，3份椰油醇-辛酸酯，0.01份植物淄醇澳洲坚果油酸酯，0.01份视黄醇棕榈酸酯，0.01份橙皮苷甲基查尔酮与50份去离子水。
该抗皱眼霜的制备方法包括：
1)加入氢化油菜籽油醇、二异硬脂醇苹果酸、视黄醇棕榈酸酯、椰油醇-辛酸酯、植物淄醇澳洲坚果油酸酯与橙皮苷甲基查尔酮搅拌均匀，加热至90℃，搅拌均匀，作为油相；
2)将抗衰老组合物，水与1，3-丙二醇混合搅拌均匀，作为水相；
3)将步骤1)得到的油相与步骤2)得到的水相进行混合，得到的混合物加入超临界设备的反应釜内，打入二氧化碳，调整超临界设备反应釜内的温度至65℃，设置压力为14Mpa，时间30min，泄压释放二氧化碳，冷却至室温，即得到眼霜。
实施例8
本实施例提供了一种抗皱眼霜，按重量份计包括：50份实施例1制得的抗衰老组合物，0.1份氢化油菜籽油醇，5份二异硬脂醇苹果酸，7份1，3-丙二醇，12份椰油醇-辛酸酯，0.1份植物淄醇澳洲坚果油酸酯，2份视黄醇棕榈酸酯，0.5份橙皮苷甲基查尔酮与75份去离子水。
该抗皱眼霜的制备方法包括：
1)加入氢化油菜籽油醇、二异硬脂醇苹果酸、视黄醇棕榈酸酯、椰油醇-辛酸酯、植物淄醇澳洲坚果油酸酯与橙皮苷甲基查尔酮搅拌均匀，加热至80℃，搅拌均匀，作为油相；
2)将抗衰老组合物，水与1，3-丙二醇混合搅拌均匀，作为水相；
3)将步骤1)得到的油相与步骤2)得到的水相进行混合，得到的混合物加入超临界设备的反应釜内，打入二氧化碳，调整超临界设备反应釜内的温度至45℃，设置压力为15Mpa，时间40min，泄压释放二氧化碳，冷却至室温，即得到眼霜。
实施例9
本实施例提供了一种抗皱眼霜，按重量份计包括：100份实施例1制得的抗衰老组合物，0.1份氢化油菜籽油醇，5份二异硬脂醇苹果酸，7份1，3-丙二醇，12份椰油醇-辛酸酯，0.1份植物淄醇澳洲坚果油酸酯，2份视黄醇棕榈酸酯，0.5份橙皮苷甲基查尔酮与75份去离子水。
该抗皱眼霜的制备方法包括：
1)加入氢化油菜籽油醇、二异硬脂醇苹果酸、视黄醇棕榈酸酯、椰油醇-辛酸酯、植物淄醇澳洲坚果油酸酯与橙皮苷甲基查尔酮搅拌均匀，加热至80℃，搅拌均匀，作为油相；
2)将抗衰老组合物，水与1，3-丙二醇混合搅拌均匀，作为水相；
3)将步骤1)得到的油相与步骤2)得到的水相进行混合，得到的混合物加入超临界设备的反应釜内，打入二氧化碳，调整超临界设备反应釜内的温度至45℃，设置压力为15Mpa，时间40min，泄压释放二氧化碳，冷却至室温，即得到眼霜。
对实施例1制得的抗衰老组合物进行细胞增殖促进效果测试以及胶原蛋白产生效果测试。
空白组，不加入抗衰老组合物。
细胞使用正常人体皮肤纤维芽细胞。
细胞增殖促进效果测试方法为：
1)将增殖的细胞分散在含有FBS的Dulbecco's MEM培养基中并接种在96孔培养板中。然后，将细胞在CO2培养箱中培养(37℃条件)。
2)播种后的第二天，将培养基更换为添加了实施例1制得的抗衰老组合物(加入的质量分数分别为12.5％，25％，50％，100％)的含有FBS的Dulbecco's MEM培养基以及空白组的含有FBS的Dulbecco's MEM培养基，然后在CO2培养箱中进行培养。
3)在培养的最后一天，丢弃盘子中的培养基，并在含有FBS的Dulbecco的MEM中制备MTT溶液，添加并在CO2培养箱中培养。之后，溶解在提取物和微粒中，用速率读数器测量吸光度并用作表示细胞数的数值。测量结果为对照，转换为100，根据需要通过Student'st检验进行显着性差异检验，结果见图1。
参见图1，在25％与50％的含量下对人体皮肤纤维芽细胞的增加具有明显的促进作用。但12.5％与100％的含量下，没有明显差异。
促进胶原蛋白产生测试方法为：
1)将增殖的细胞分散在含有FBS的Dulbecco's MEM培养基中，并接种在96孔培养板中。然后，将细胞在CO2培养箱中培养(37℃条件)。
2)播种后的第二天，将培养基更换为添加了实施例1制得的抗衰老组合物(加入的质量分数分别为12.5％，25％，50％)以及空白组的含有FBS的Dulbecco's MEM培养基，然后在CO2培养箱中进行培养。
3)之后，收集上清液，通过ELISA法测定I型胶原蛋白的量。分别收集上清液后每单位蛋白质的I型胶原蛋白量，通过裂解细胞来计算，推算出并进行评估，结果见图2。
参见图2，将含有抗衰老组合物的眼霜添加到培养基中，对比空白组，每单位蛋白质的I型胶原蛋白量增加，当添加25％时观察到显着差异。
由此可见，本发明的抗衰老组合物，对正常人体皮肤纤维芽细胞具有促进增殖作用，并且具有促进胶原蛋白产生的效果，Ⅰ型胶原蛋白与肌肤的弹力和强度具有明显关系，因此将本发明的抗衰老组合物添加到产品中使用，具有改善肌肤弹性弹力，以及改善皱纹的效果。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。

Claims (5)

1.一种抗衰老组合物，其特征在于，所述抗衰老组合物包括纳米脂质体与负载在所述纳米脂质体上的活性组分，所述活性组分包括：二葡糖基棓酸，葡糖基橙皮苷，千日菊提取物，生物素与咖啡因；所述抗衰老组合物按重量百分比计包括：0.011%二葡糖基棓酸， 0.5%葡糖基橙皮苷、0.0447%千日菊提取物，0.0001%生物素，0.0001%咖啡因，0.6%-2.6%胆固醇，0.1%-1.5%山嵛醇，6%-6.5%氢化卵磷脂，余量为去离子水；
抗衰老组合物的制备方法包括以下步骤：
a）将活性组分与纳米脂质体溶解，得到混合溶液；
b）将步骤a）的混合溶液中的溶剂蒸发脱除，在40-60℃下，加入去离子水，超声处理15-20min，超声频率为15-35Hz；超声处理完成后过滤得到抗衰老组合物；所述纳米脂质体的粒径为100-250nm。
2.一种抗衰老组合物的应用，其特征在于，如权利要求1所述的抗衰老组合物在制备化妆品中的应用，所述化妆品包括柔肤水、面膜，精华液，眼霜、眼膜、护肤凝胶、护肤乳液、面霜或喷雾剂。
3.根据权利要求2所述的一种抗衰老组合物的应用，其特征在于，所述化妆品还包括辅料，所述辅料包括溶剂、增稠剂、防腐剂、pH调节剂、保湿剂、柔润剂、螯合剂、乳化剂、精油、香精、色素中的至少一种。
4.权利要求3所述的一种抗衰老组合物的应用，其特征在于，所述化妆品为眼霜，所述眼霜按重量份计包括：12.5-100份抗衰老组合物，0.1-0.8份氢化油菜籽油醇，5-10份二异硬脂醇苹果酸，5-10份1，3-丙二醇，3-12份椰油醇-辛酸酯，0.01-0.1份植物淄醇澳洲坚果油酸酯，0.01-2份视黄醇棕榈酸酯，0.01-0.5份橙皮苷甲基查尔酮与50-80份去离子水。
5.根据权利要求4所述的一种抗衰老组合物的应用，其特征在于，所述眼霜的制备方法包括以下步骤：
1）加入氢化油菜籽油醇、二异硬脂醇苹果酸、视黄醇棕榈酸酯、椰油醇-辛酸酯、植物淄醇澳洲坚果油酸酯与橙皮苷甲基查尔酮搅拌均匀，加热至50-90℃，搅拌均匀，作为油相；
2）将抗衰老组合物，水与1，3-丙二醇混合搅拌均匀，作为水相；
3）将步骤1）得到的油相与步骤2）得到的水相进行混合，得到的混合物加入超临界设备的反应釜内，打入二氧化碳，调整超临界设备反应釜内的温度至45-65℃，设置压力为12-15Mpa，时间30-45min，泄压释放二氧化碳，冷却至室温，即得到眼霜。
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Denomination of invention: An anti-aging composition, preparation method, and application

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Pledgor: Coq Biotechnology (Hangzhou) Co.,Ltd.

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