CN114577936B - 一种胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种胶囊中β‑烟酰胺单核苷酸(NicotinamideMononucleotide，NMN)的分离检测方法。所述检测方法包括以下步骤：(1)溶液的配制：将胶囊的内容物溶解于稀释液中，配制得到供试品溶液；将β‑烟酰胺单核苷酸的对照品溶解于稀释液中，配制得到对照品溶液；(2)分别将供试品溶液和对照品溶液注入离子色谱仪中，使用离子色谱法对胶囊中β‑烟酰胺单核苷酸的含量进行检测。本发明离子色谱法直接采用离子交换色谱柱进行分离，流动相仅使用简单的醋酸铵和乙腈，无需添加离子对试剂，紫外检测NMN，方法快速、简易，成本低，方便推广。
Description
技术领域
本发明属于药物检测分析技术领域，具体涉及一种胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法。
背景技术
β-烟酰胺单核苷酸(NMN)是辅酶I-NAD+合成的关键中间体，存在于各种生物体内。由于NAD+广泛参与体内多种反应，对人体健康非常重要，而服用烟酰胺单核苷酸可提升体内NAD+水平，从而达到抗衰老，促进心脑健康等保健功能。
NMN的结构式如下所示：
β-烟酰胺单核苷酸(NMN)属于强极性化合物，采用液相色谱法分析时，其在常规C18色谱柱上基本无保留，很容易受到基质影响。通过在流动相中增加离子对试剂比如四丁基硫酸氢铵可以略微提高NMN在色谱柱上的保留，但一般也只是比死体积保留稍微长一些，排除干扰能力十分有限。
为了减少共存物质的干扰，提高方法的专属性，目前的研究工作中多采取液相色谱-质谱法对样品中NMN进行检测，但质谱仪动辄几百万的价格非常昂贵，对操作人员的技术水平要求很高，维护成本也十分高昂。质谱方法无疑大大提高检测难度和成本，不便于推广。
文献1(刘晓谦等.UPLC-MS/MS测定铁皮石斛及其同属近源石斛品种中烟酰胺单核苷酸和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸含量.2021，8：4034-4039)公开了一种β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，该文献采用LC-MSMS法，C18柱分离，NMN出峰时间在1min之内，时间过短极易受到样品基质的影响，且MS/MS仪器成本较高，不便于方法推广。
文献2(刘小芳等.高效液相色谱-串联质谱法测定食品原料中烟酰胺单核苷酸的含量.食品科技.2021，46(08)：251～256，262)公开了一种β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，该文献同样采用成本昂贵的LC-MSMS法，比较了C18柱、HILIC柱及WAX柱，发现前两种色谱柱上NMN均无保留，出峰时间均在2min以内，而在WAX色谱柱上NMN出峰时间在7min左右。WAX色谱柱为硅胶基质的弱阴离子交换色谱柱，其对于单价离子型化合物保留时间强，对多价离子则很难洗脱，耐受pH范围窄等原因导致柱寿命较短，方法整体检测成本很高。
CN113295779A公开了一种保健品中β-烟酰胺单核苷酸的快速测定方法，该方法同样通过LC-MSMS法进行测定，C18柱分离，且需要通过调整参数提高β-烟酰胺单核苷酸的响应值及灵敏度。同样存在色谱柱上较难保留，易受到基质影响的问题。
CN113189185A公开了一种金针菇中β-烟酰胺单核苷酸的毛细管电泳测定方法，毛细管电泳法相比传统液相色谱法的柱效一般更高，且使用试剂相对安全。但毛细管电泳方法普遍稳定性不好，其对溶液pH值和电解质用量极敏感，对于实验人员操作水平要求很高，方法重现性较差。样品中含有的电解质也会影响分离，方法普适性差，不适合于不同配方组成样品的检测，因而推广较为困难。
因此，开发一种方法快速、简易，成本低，方便推广的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种β-烟酰胺单核苷酸(Nicotinamide Mononucleotide，NMN)的分离检测方法。所述离子色谱法直接采用强阴离子交换色谱柱进行分离，无需添加离子对试剂，通过紫外检测NMN，方法快速、简易，成本低，方便推广。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供一种胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
(1)溶液的配制：将胶囊的内容物溶解于稀释液中，配制得到供试品溶液；将β-烟酰胺单核苷酸的对照品溶解于稀释液中，配制得到对照品溶液；
(2)分别将供试品溶液和对照品溶液注入离子色谱仪中，使用离子色谱法对胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的含量进行检测。
在本发明中，采用离子色谱法直接采用强离子交换色谱柱进行分离，本发明选择了合适的样品处理方式，以及合适的对照品，能快速、准确地检测胶囊的内容物中NMN的含量，且通过紫外检测NMN方法的精密度、准确度及回收率等均良好，满足样品的检测要求，因而可应用于制剂的质量评价。同时，该方法具有方法快速、简易，成本低，方便推广的优点。
优选地，步骤(1)中，所述胶囊的内容物包括：β-烟酰胺单核苷酸、米粉、羟丙甲纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅、果胶和葡聚糖。
优选地，步骤(1)中，所述稀释液包括乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为(2-4):(1-3)，例如可以是2:1、3:1、4:1、2:2、3:2、2:3、4:3等，优选为3:2。
优选地，步骤(1)中，在所述供试品溶液中，所述内容物的质量和稀释液的体积比为(0.0005-1.0)mg:1.0mL，例如可以是0.0005mg:1.0mL、0.01mg:1.0mL、0.1mg:1.0mL、0.25mg:1.0mL、0.5mg:1.0mL、0.75mg:1.0mL、1.0mg:1.0mL等，优选为0.5mg:1.0mL。
优选地，步骤(1)中，在所述对照品溶液中，所述对照品的质量和稀释液的体积比(0.0005-1.0)mg:1.0mL，例如可以是0.0005mg:1.0mL、0.01mg:1.0mL、0.1mg:1.0mL、0.25mg:1.0mL、0.5mg:1.0mL、0.75mg:1.0mL、1.0mg:1.0mL等，优选为0.5mg:1.0mL。
优选地，步骤(1)中，所述溶解在超声下进行，所述超声的时间为10-30min，例如可以是10min、12min、14min、16min、18min、20min、22min、24min、26min、28min、30min等，所述超声的功率为200-600W，例如可以是200W、250W、300W、350W、400W、450W、500W、550W、600W等。
优选地，步骤(2)中，所述检测使用的流动相A为乙腈，流动相B为醋酸铵水溶液。
优选地，所述醋酸铵水溶液的浓度为80-120mM，例如可以是80mM、85mM、90mM、95mM、100mM、105mM、110mM、115mM、120mM等，优选为100mM。
优选地，步骤(2)中，所述检测中采用等度洗脱，所述流动相A和流动相B的体积比为(35-45):(65-55)，例如可以是35:65、36:64、38:62、40:60、42:58、44:56、45:55等，优选为40:60。
优选地，步骤(2)中，所述离子色谱仪用色谱柱为Dionex IonPac AS16或DionexIonPac AS18阴离子交换色谱柱。
优选地，所述色谱柱的长度为50-300mm，例如可以是50mm、100mm、150mm、200mm、250mm、300mm等，优选为250mm；所述色谱柱的内径为2-5mm，优选为4mm。
优选地，所述色谱柱的柱温为30-60℃，例如可以是30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃等，优选为40℃。
优选地，步骤(2)中，所述检测中流动相的流速为0.8-1.2mL/min，例如可以是0.8mL/min、0.9mL/min、1.0mL/min、1.1mL/min、1.2mL/min等，优选为1.0mL/min。
优选地，步骤(2)中，所述检测中的进样量为5-50μL，例如可以是5μL、10μL、20μL、25μL、50μL等，优选为10μL。
优选地，步骤(2)中，所述检测的波长为250-280nm，例如可以是250nm、255nm、260nm、265nm、270nm、280nm等，优选为260nm。
优选地，步骤(2)中，所述检测的分析时间6-10min，例如可以是6min、7min、8min、9min、10min等，优选为8min。
作为本发明优选技术方案，所述检测方法包括以下步骤：
(1)溶液的配制：将胶囊的内容物超声10-30min溶解于稀释液中，配制得到供试品溶液，其中，内容物的质量和稀释液的体积比为(1-1.5)mg:1.0mL；
将β-烟酰胺单核苷酸的对照品超声10-30min溶解于稀释液中，配制得到对照品溶液其中，其中，对照品的质量和稀释液的体积比(0.1-1)mg:1.0mL；
(2)分别将供试品溶液和对照品溶液注入离子色谱仪中，使用离子色谱法对胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的含量进行检测；
其中，离子色谱法的色谱条件包括以下内容：
流动相A为乙腈，流动相B为80-120mM的醋酸铵水溶液，流动相A和流动相B的体积比为(35-45):(65-55)；色谱柱为Dionex IonPac AS16阴离子交换色谱柱，长度为50-300mm，内径为3-5mm，柱温为30-60℃；流动相的流速为0.8-1.2mL/min，进样量为5-50μL；检测的波长为250-280nm，分析时间6-10min。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明离子色谱法直接采用强阴离子交换色谱柱进行分离，流动相仅使用简单的醋酸铵和乙腈，无需添加离子对试剂，紫外检测NMN，方法快速、简易，成本低，方便推广。
附图说明
图1为空白溶液谱图的色谱图。
图2为对照品溶液的色谱图。
图3为NAM、NA、NMN和NR叠加图。
图4为定量限溶液谱图。
图5为检测限溶液谱图。
图6为标准曲线图。
图7为实施例1提供的供试品1的色谱图。
图8为实施例2提供的供试品2的色谱图。
图9为实施例3提供的供试品3的色谱图。
图10为实施例4和5的对比色谱图。
图11为实施例6和7的对比色谱图。
图12为实施例8和9的对比色谱图。
图13为图12的局部放大图。
图14为实施例10和11的对比色谱图。
图15为图2中实施例10的局部放大图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述实施例和对比例各组分来源如下所示：
| 名称 | 厂家 | 牌号/型号规格 |
| 离子色谱仪 | Thermo Scientific | Dionex ICS-5000 |
| Dionex IonPac AS16 | Thermo Scientific | 250mm×4mm |
| β-烟酰胺单核苷酸的对照品 | Aladdin | 纯度：98.80％ |
实施例1
本实施例提供一种胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
(1))溶液的配制：
流动相A：乙腈，超声脱气10min；
流动相B：100mM醋酸铵水溶液，超声脱气10min；
空白溶液：乙腈-水(体积比为3:2)，也作稀释液。(图1为空白溶液谱图的色谱图，如图1所示，基线平稳)；
对照品贮备液：称取约100mg NMN对照品置10mL量瓶中，加入稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀即得浓度为10mg/mL的对照品贮备液；
对照品溶液：量取0.5mL对照品贮备液置10mL量瓶中，加入稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀即得浓度为0.5mg/mL的对照品溶液(图2为对照品溶液的色谱图，如图2所示，NMN于4.563min位置出峰，预计2.330min小峰为烟酰胺)；
供试品溶液：称取胶囊内容物30mg(相当于含NMN 12.5mg)置25mL量瓶中，加入稀释液超声20min溶解并稀释至刻度，摇匀过滤即得供试品溶液，平行配制两份。
(2)分别将供试品溶液和对照品溶液注入离子色谱仪中，使用离子色谱法对胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的含量进行检测；
其中，离子色谱法的色谱条件包括以下内容：
(3)检测结果
(a)抗干扰测试：
图3为NAM、NA、NMN和NR叠加图，如图3所示，烟酰胺核糖氯化物NR、烟酸NA和烟酰胺NAM色谱峰对烟酰胺单核苷酸NMN检测无干扰。其中，烟酸NA可合成烟酰胺NAM，再合成烟酰胺核糖氯化物NR，再进而合成烟酰胺单核苷酸NMN。而烟酰胺单核苷酸NMN降解也会产生烟酰胺NAM和烟酸NA。
(b)定量限溶液：
图4为定量限溶液谱图，如图4所示，逐级稀释对照品溶液使浓度为0.5026μg/mL，连续进样6针，峰面积的RSD为5.1％，信噪比在41.0-55.9之间，不小于10。
(c)检测限溶液：
图5为检测限溶液谱图，如图5所示，逐级稀释对照品溶液使浓度为0.2010μg/mL，信噪比为18.3，不小于3。
(d)线性与测量范围(0.0005mg/mL～1.00mg/mL)：
逐级稀释对照品溶液，并分别通过离子色谱测定对应浓度的峰面积，作标准工作曲线，线性与范围如下表1所示，标准曲线图如图6所示：
表1
| 编号 | NMN浓度(mg/mL) | NMN峰面积(mAU*min) |
| LOQ | 0.0005026 | 0.0489 |
| L2 | 0.01005 | 0.9521 |
| L3 | 0.1005 | 9.5291 |
| L4 | 0.2513 | 30.8494 |
| L5 | 0.5026 | 62.0800 |
| L6 | 0.7538 | 95.2373 |
| L7 | 1.0051 | 124.8955 |
图6为标准曲线图，其中，y＝125.9103x-0.9676，r＝0.9997。
(e)供试品含量测定
图7为实施例1提供的供试品1的色谱图，如图7所示，NMN于4.560min处出峰，其峰面积为60.3530mAU*min，通过对照品峰面积外标法计算，供试品1的内容物中的NMN质量含量为39.3％。
实施例2
本实施例提供一种胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
(1))溶液的配制：
流动相A：乙腈，超声脱气10min；
流动相B：100mM醋酸铵水溶液，超声脱气10min；
空白溶液：乙腈-水(体积比为3:2)，也作稀释液。(图1为空白溶液谱图的色谱图，如图1所示，基线平稳)；
对照品贮备液：称取约100mg NMN对照品置10mL量瓶中，加入稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀即得浓度为10mg/mL的对照品贮备液；
对照品溶液：量取0.5mL对照品贮备液置10mL量瓶中，加入稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀即得浓度为0.5mg/mL的对照品溶液(图2为对照品溶液的色谱图，如图2所示，NMN于4.563min位置出峰，预计2.330min小峰为烟酰胺)；
供试品溶液：称取胶囊内容物30mg(相当于含NMN 12.5mg)置25mL量瓶中，加入稀释液超声20min溶解并稀释至刻度，摇匀过滤即得供试品溶液，平行配制两份。
(2)分别将供试品溶液和对照品溶液注入离子色谱仪中，使用离子色谱法对胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的含量进行检测；
其中，离子色谱法的色谱条件包括以下内容：
(3)检测结果
图8为实施例2提供的供试品2的色谱图，如图8所示，供试品2中同时含有β-烟酰胺单核苷酸NMN、烟酸NA、烟酰胺NAM，其中NMN峰面积为38.1928mAU*min，通过对照品峰面积外标法计算，供试品2的内容物中的NMN质量含量为24.6％。
实施例3
本实施例提供一种胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
(1))溶液的配制：
流动相A：乙腈，超声脱气10min；
流动相B：100mM醋酸铵水溶液，超声脱气10min；
空白溶液：乙腈-水(体积比为3:2)，也作稀释液。(图1为空白溶液谱图的色谱图，如图1所示，基线平稳)；
对照品贮备液：称取约100mg NMN对照品置10mL量瓶中，加入稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀即得浓度为10mg/mL的对照品贮备液；
对照品溶液：量取0.5mL对照品贮备液置10mL量瓶中，加入稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀即得浓度为0.5mg/mL的对照品溶液(图2为对照品溶液的色谱图，如图2所示，NMN于4.563min位置出峰，预计2.330min小峰为烟酰胺)；
供试品溶液：称取胶囊内容物30mg(相当于含NMN 12.5mg)置25mL量瓶中，加入稀释液超声20min溶解并稀释至刻度，摇匀过滤即得供试品溶液，平行配制两份。
(2)分别将供试品溶液和对照品溶液注入离子色谱仪中，使用离子色谱法对胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的含量进行检测；
其中，离子色谱法的色谱条件包括以下内容：
(3)检测结果
图9为实施例3提供的供试品3的色谱图，如图9所示，NMN于4.557min处出峰，其峰面积为44.8099mAU*min，通过对照品峰面积外标法计算，供试品3的内容物中的NMN质量含量为28.7％。
实施例4-5
本实施例提供两种胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，与实施例1的区别仅在于，空白溶液(稀释液)中乙腈和水的体积比不同，具体如下表2所示：
表2
图10为实施例4和5的对比图，如图10所示，稀释液中乙腈和水的体积比对NR的保留行为和峰面积影响较小，优选为3:2。
实施例6-7
本实施例提供两种胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，与实施例1的区别仅在于，流动相中乙腈和100mM醋酸铵水溶液的体积比不同，具体如下表3所示：
表3
图11为实施例6和7的对比图，如图11所示，稀释液中乙腈和水的体积比为优选为40:60；乙腈较少水较多会导致整体分析时间变长；乙腈较多水较少会导致NMN峰形变形。
实施例8-9
本实施例提供两种胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，与实施例1的区别仅在于，流动相A和流动相B的选择不同，具体如下表4所示：
表4
图12为实施例8和9的对比图，如图12所示，当流动相A为甲醇，流动相B为醋酸铵时，NMN出峰峰形明显变钝，理论塔板数仅剩40％；当流动相A为乙腈，流动相B为甲酸铵时，NMN与前面未知杂质无法分离，图13为局部放大图；本申请流动相A为乙腈，流动相B为醋酸铵水溶液才能达到很好地分离检测β-烟酰胺单核苷酸的目的。
实施例10-11
本实施例提供两种胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，与实施例1的区别仅在于，色谱柱不同，具体如下表5所示：
表5
图14为实施例10和11的对比图，如图14所示，采用AS18色谱柱得到的NMN色谱峰柱效良好，但出峰过快，与杂质的分离能力相对有限，见图15；采用AS15色谱柱得到的NMN色谱峰柱效较低，保留时间略短，分离能力差；采用本申请所述Dionex IonPac AS16可满足对β-烟酰胺单核苷酸的分离检测。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (27)
1.一种胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
(1)溶液的配制：将胶囊的内容物溶解于稀释液中，配制得到供试品溶液；将β-烟酰胺单核苷酸的对照品溶解于稀释液中，配制得到对照品溶液；
(2)分别将供试品溶液和对照品溶液注入离子色谱仪中，使用离子色谱法对胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的含量进行检测；
步骤(2)中，所述离子色谱仪用色谱柱为Dionex IonPac AS16强阴离子交换聚合物基质色谱柱；所述检测使用的流动相A为乙腈，流动相B为醋酸铵水溶液；所述检测中采用等度洗脱，所述流动相A和流动相B的体积比为(35-45):(65-55)。
2.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述胶囊的内容物包括：β-烟酰胺单核苷酸、米粉、羟丙甲纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅、果胶和葡聚糖。
3.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述稀释液包括乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为(2-4):(1-3)。
4.根据权利要求3所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述乙腈和水的体积比为3:2。
5.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，步骤(1)中，在所述供试品溶液中，所述内容物的质量和稀释液的体积比为(0.0005-1.0)mg:1.0mL。
6.根据权利要求5所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述内容物的质量和稀释液的体积比为0.5mg:1.0mL。
7.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，步骤(1)中，在所述对照品溶液中，所述对照品的质量和稀释液的体积比(0.0005-1.0)mg:1.0mL。
8.根据权利要求7所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述对照品的质量和稀释液的体积比为0.5mg:1.0mL。
9.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述溶解在超声下进行，所述超声的时间为10-30min，所述超声的功率为200-600W。
10.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述醋酸铵水溶液的浓度为80-120mM。
11.根据权利要求10所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述醋酸铵水溶液的浓度为100mM。
12.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述流动相A和流动相B的体积比为40:60。
13.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述色谱柱的长度为50-300mm。
14.根据权利要求13所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述色谱柱的长度为250mm。
15.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述色谱柱的内径为2-5mm。
16.根据权利要求15所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述色谱柱的内径为4mm。
17.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为30-60℃。
18.根据权利要求17所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为40℃。
19.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述检测中流动相的流速为0.8-1.2mL/min。
20.根据权利要求19所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述检测中流动相的流速为1.0mL/min。
21.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述检测中的进样量为5-50μL。
22.根据权利要求21所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述检测中的进样量为10μL。
23.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述检测的波长为250-280nm。
24.根据权利要求23所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述检测的波长为260nm。
25.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述检测的分析时间6-10min。
26.根据权利要求25所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述检测的分析时间为8min。
27.根据权利要求1所述的胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的分离检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
(1)溶液的配制：将胶囊的内容物超声10-30min溶解于稀释液中，配制得到供试品溶液，其中，内容物的质量和稀释液的体积比为(0.0005-1.0)mg:1.0mL；
将β-烟酰胺单核苷酸的对照品超声10-30min溶解于稀释液中，配制得到对照品溶液，其中，对照品的质量和稀释液的体积比(0.0005-1.0)mg:1.0mL；
(2)分别将供试品溶液和对照品溶液注入离子色谱仪中，使用离子色谱法对胶囊中β-烟酰胺单核苷酸的含量进行检测；
其中，离子色谱法的色谱条件包括以下内容：
流动相A为乙腈，流动相B为80-120mM的醋酸铵水溶液，流动相A和流动相B的体积比为(35-45):(65-55)；色谱柱为Dionex IonPac AS16强阴离子交换色谱柱，长度为50-300mm，内径为2-5mm，柱温为30-60℃；流动相的流速为0.8-1.2mL/min，进样量为5-50μL；检测的波长为250-280nm，分析时间6-10min。
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| Determination of niacin in fresh and dry cured pork products by ion chromatography: experimental design approach for the optimisation of nicotinic acid separation;Saccani, G等;FOOD CHEMISTRY;第92卷(第2期);373-379 * |
| Ion chromatography of nucleobases, nucleosides and nucleotides using a dual-detection system;Naikwadi, K. P.等;Journal of Chromatography;第280卷(第2期);261-269 * |
| 离子对HPLC法测定烟酰胺核糖;陈晓丽;夏思辰;王丽雅;李博;徐光富;;广东化工(第13期);260-262 * |
| 离子色谱法测定婴幼儿配方奶粉中的核苷酸;叶明立;潘广文;胡忠阳;汪琼;;色谱(第09期);898-901 * |
| 高效液相色谱法测定烟酰胺的含量;林生泽;;海峡药学(第10期);64-65 * |
| 高效离子色谱法测定骨瓜提取物注射液中核苷及核苷酸有关物质的含量;张伟等;药物分析杂志;第35卷(第11期);2006-2011 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114577936A (zh) | 2022-06-03 |
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