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CN114401986B - 破坏生物膜的抗体组合物 - Google Patents

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CN114401986B CN202080061193.5A CN202080061193A CN114401986B CN 114401986 B CN114401986 B CN 114401986B CN 202080061193 A CN202080061193 A CN 202080061193A CN 114401986 B CN114401986 B CN 114401986B
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Abstract

本文提供了用于在体外和体内破坏生物膜的方法和组合物。本文还公开了包含特定重链(HC)免疫球蛋白可变域序列和/或特定轻链(LC)免疫球蛋白可变域序列的抗体。

Description

破坏生物膜的抗体组合物
相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2020年6月1日提交的美国临时申请63/033,109号以及2019年7月8日提交的美国临时申请62/871,457的利益，通过引用将每个申请的内容以其整体形式合并至本文。
政府资助声明
本发明是在国家健康研究院(NIH)的国家失聪与其它沟通障碍研究所(NIDCD)的政府资助(资助号R01 DC011818)下作出的。政府在本发明中享有特定权利。
公开领域
本公开总体涉及减轻和/或根除细菌生物膜的方法和组合物。
背景
DNABII蛋白家族天然存在于细菌细胞外部并促进生物膜形成。至少一种DNABII家族的蛋白存在于所有已知真细菌中。虽然这些蛋白质引起强烈的天然和获得性免疫响应，但宿主对象无法由于感染而天然地产生对抗家族成员的免疫保护性抗体。细菌生物膜相关的主要问题是宿主免疫系统和/或抗生素和其他抗微生物剂不能够接近被保护在生物膜内的细菌。
生物膜也存在于工业装备中。例如，生物膜牵涉到各种石油工艺问题，从油田采油到气站储存罐。在该领域，硫酸盐还原生物膜细菌产生硫化氢(酸性油)。在工艺管道中，生物膜活动逐渐形成污泥(slime)，阻塞过滤器和孔口。生物膜及生物膜生物还导致管道和石油工艺设备的侵蚀。这些问题可表现在石油或天然气生产设施各处，以至于在终产物储存罐的表面上都已发现污泥和侵蚀性生物膜生物。
生物膜也牵涉于各种水处理，包括家庭的和工业的。它们可生长于工艺设备表面，妨碍这些设备的性能，例如使传热退化或堵塞过滤器和膜。生长在冷却塔填料上的生物膜可增添足够的重量导致填料坍塌。生物膜甚至导致高度专用不锈钢的腐蚀。水处理中的生物膜可降低终产物的价值，例如纸张工艺中的生物膜污染或硅芯片上的即使单个细胞的附着。饮用水分配系统中生长的生物膜可包藏潜在的致病生物体、侵蚀性生物体或细菌，降低水的感官质量。在家庭中，生物膜可见于任何支持微生物生长的表面之中或之上，例如在下水道中，在准备食物用器皿表面上，在坐便器中，以及在游泳池和浴池中。
因此，有必要破坏生物膜的保护性屏障以处理或杀灭相关的细菌感染并将它们从各种表面和水系统中清除。
概述
在细菌细胞中，DNABII蛋白是一种DNA结合蛋白，其在结合后必要性地弯曲DNA底物。类似地，一种示例性底物是已经处于弯曲构象的DNA，因为此时不需要弯曲所需的能量。
DNABII家族是被称为类核相关蛋白(nucleoid associated proteins,NAP)的蛋白质类别的成员，它们是细菌蛋白质，部分地塑造细胞内细菌类核(Browning et al.(2010)Curr.Opin.Microbiol.13:773-780)。此外，该家族无处不在，几乎由所有真细菌表达。迄今为止，所有已被表征的家族成员都以亚基的同二聚体或异二聚体发挥作用。该家族分为两种类型，HU(组蛋白样蛋白)和IHF(整合宿主因子)，其中B.cenocepacia能够表达这两种类型(菌株J2315基因：BCAL3530,hupA；BCAL1585,hupB；BCAL1487,ihfA以及BCAL2949,ihfb)，而许多其他细菌也表达HU和IHF。这些家族成员之间的主要区别在于HU以独立于序列的方式结合DNA，而IHF结合跨属保守的共有序列(WATCAANNNNTTR，其中W是A或T，R是嘌呤，SEQ ID NO：28)(Swinger et al.(2004)Curr.Opin.Struct.Biol.14:28-35)。所有DNABII蛋白都与DNA结合并使其显著弯曲，例如，大肠杆菌IHF可以将DNA弯曲成几乎是U形回转(Rice et al.(1996)Cell 87:1295-1306)。此外，所有家族成员都偏向于预先弯曲或卷曲的DNA结构，例如Holliday连接体，它是一种十字形结构，是DNA重组的中心。事实上，DNABII蛋白作为辅助因子发挥作用，促进所有细胞内DNA功能，包括基因表达、重组、修复和复制(Swinger et al.(2004)Curr.Opin.Struct.Biol.14:28-35)。
DNABII蛋白家族位于在生物膜状态的细菌细胞的外部。申请人已表明，这些蛋白质实际上结合至在关键分支连接点(branched junction)处的细胞外DNA。
因此，本文提供一种抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变区序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变区序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变区包含SEQ ID NO:13的氨基酸(aa)25至aa 144的序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变区包含SEQ ID NO:14的aa 21至aa 132的序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。本文进一步提供一种抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变区序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变区序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变区包含选自SEQ ID NO:13、24或26的aa25至aa 144的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变区包含选自SEQ ID NO:14或25的aa 21至aa 132、SEQ ID NO:27的aa 21至aa 126的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，所述抗体或其片段结合DNABII肽(例如DNABII肽的头部区域(tip region)，包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI；和/或DNABII肽的尾部区域(tail region)，包括但不限于IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在一个实施方式中，所述抗体或其片段结合至头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI。
本文还提供一种抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变区序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变区序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变区包含选自SEQ ID NO:13或24的aa 25至aa 144的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变区包含选自SEQ ID NO:14或25的aa 21至aa 132的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，所述抗体或其片段结合DNABII肽(例如DNABII肽的头部区域，包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在一个实施方式中，所述抗体或其片段结合至头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI。
本文进一步提供一种抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变区序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变区序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变区包含选自SEQ ID NO:1-6、24或26的aa 25至aa 144的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变区包含选自SEQ ID NO:7-9或25的aa 21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，所述抗体或其片段结合DNABII肽(例如DNABII肽的头部区域，包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI；和/或DNABII肽的尾部区域，包括但不限于：IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在一个实施方式中，所述抗体或其片段结合至头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI。
本文进一步提供一种抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变区序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变区序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变区包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 473的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变区包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 239、SEQ ID NO:10-12或27的aa21至aa 233的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，所述抗体或其片段结合DNABII肽(例如DNABII肽的头部区域，包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI；和/或DNABII肽的尾部区域，包括但不限于：IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在一个实施方式中，所述抗体或其片段结合至头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI。
本文另外提供一种抗体或其抗原结合片段，其包括以下CDR序列，或实质上由其组成，或由其组成：选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26或其每个的等同体的序列的任何一个、任何两个或所有三个CDR；和/或选自SEQ ID NO:7-12、14、25或27或其每个的等同体的序列的任何一个、任何两个或所有三个CDR。在某些实施方式中，所述抗体或其片段结合DNABII肽(例如DNABII肽的头部区域，包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI；和/或DNABII肽的尾部区域，包括但不限于：IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在一个实施方式中，所述抗体或其片段结合至头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI。
抗原结合片段的非限制性例子选自Fab、F(ab’)2、Fab’、scFv或Fv。
在另一个方面，本文提供所述抗体的Fab片段，其中所述抗体特异性结合DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。本文还提供本文公开的抗体的片段。在一个实施方式中，所述片段是选自Fab、F(ab’)2、Fab’、scFv或Fv的抗原结合片段。在另一个实施方式中，所述片段特异性结合DNABII肽的头部区域。
本文还提供包含所述Fab片段的制剂。
在另一个方面，所述抗体或其片段被修饰。修饰的非限制性例子包括PEG化、PEG模拟物(PEG mimetic)、聚唾液酸化、HES化或糖基化。
所述抗体及抗原结合片段可被可检测地标记，或包括可检测标记物和/或纯化标志物。
本文还提供多肽，其包含以上公开的抗体或抗原结合片段或区的互补决定区(CDR)，或实质上由其组成，或由其组成。所述CDR可选自CDR1、CDR2或CDR3。所述CDR可被可检测地标记，或包括可检测标记物和/或纯化标志物。
本文进一步提供分离的多肽，其中所述多肽包含选自以下序列的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成：SEQ ID NO:1-14或24-27；SEQ ID NO:1-6、13、24或26的氨基酸(aa)25至aa 144；SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 132；SEQ ID NO:10-12或27的aa21至aa 126；或其每个的等同体。本文还提供分离的多肽，其包含一个或多个本文公开的抗体或其片段的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。所述多肽可被可检测地标记，和/或包括可检测标记物和/或纯化标志物。在另外的实施方式中，所述多肽进一步包含信号肽。
本文进一步提供编码本公开的抗体或其抗原结合片段、所述抗原结合片段或抗体的CDR、所述多肽、或其每个的等同体的分离的多核苷酸，所述多核苷酸任选地可操作地连接至启动子和/或增强子元件。所述多核苷酸可被可检测地标记，和/或包括可检测标记物和/或纯化标志物。所述多核苷酸可进一步包含位于抗体的免疫球蛋白可变区的上游的信号肽多核苷酸序列。它们可被包含在载体和/或宿主细胞中。因此，本文进一步提供一种载体，其包含本文公开的所述分离的多核苷酸，或实质上由其组成，或由其组成。这样的载体可以是质粒或病毒载体，任选地选自逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体和腺相关病毒载体。本文还提供包含本文公开的一种或多种多核苷酸和/或载体的宿主细胞。
本文进一步提供组合物，其包含载体和以下各项中的一种或多种：抗体或其片段、CDR、多肽、分离的多核苷酸、载体或宿主细胞，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述载体是药学上可接受的载体。此外或作为替代，所述载体是固相载体或固相支持物。在另一个实施方式中，所述载体适用于工业环境。本文还提供涂有如本文所公开的抗体或其片段的非生理表面。在一个实施方式中，该表面处于工业环境中。在某些实施方式中，该片段是抗原结合片段。
本文还提供生产所述抗体、片段、CDR或多肽的方法，所述方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：在用于表达多核苷酸的条件下培养包含编码所述抗体、抗原结合片段、多肽或CDR的多核苷酸的宿主细胞，以及任选地从所述细胞和/或培养物中分离所述抗体、片段、CDR和/或多肽。在一个实施方式中，所述宿主细胞是哺乳动物细胞。
在一个方面，本文提供一种抑制或竞争DNABII多肽或蛋白与微生物DNA结合的方法。该方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：将DANBII多肽或蛋白与本文公开的一种或多种抗体、其片段、多肽或CDR接触。在一个实施方式中，所述抗体、其片段或CDR结合DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在进一步的实施方式中，所述抗体、其片段、多肽或CDR结合头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI。在进一步的实施方式中，所述接触在体内或体外进行。
在另一个方面，本文提供一种破坏生物膜的方法。该方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：将生物膜与本文公开的一种或多种抗体、其片段、多肽或CDR接触。在一个实施方式中，所述抗体、其片段或CDR结合DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在进一步的实施方式中，所述抗体、其片段、多肽或CDR结合头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI。在进一步的实施方式中，所述接触在体内或体外进行。
本文还提供预防生物膜在表面上形成的方法或破坏表面上的生物膜的方法，该方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：使用例如本文公开的一种或多种抗体、抗原结合片段、多肽或CDR处理对生物膜敏感的或包含生物膜的表面，其中所述抗体、其片段、多肽或CDR结合DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在进一步的实施方式中，所述抗体、其片段、多肽或CDR结合头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI。在进一步的实施方式中，所述处理在体内或体外进行。
本文还提供检测表面的生物膜的方法，该方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：将所述表面(在一个方面，该表面对生物膜敏感或包含生物膜)与本文公开的一种或多种抗体、抗原结合片段、多肽或CDR接触，其中所述抗体、其片段、多肽或CDR结合DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在进一步的实施方式中，所述抗体、其片段、多肽或CDR结合头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI。在进一步的实施方式中，所述接触在体内或体外进行。
在一个方面，本文提供一种检测在对象中产生生物膜的微生物感染的方法。该方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：将从所述对象分离的怀疑包含生物膜的生物样品与本文公开的一种或多种抗体、抗原结合片段、多肽或CDR接触，并且检测样品中所述抗体、抗原结合片段、多肽或CDR与任何生物膜的结合。用量可由治疗医生或兽医确定，例如对该对象有效的量。在一个实施方式中，所述抗体、其片段、多肽或CDR结合DNABII肽的尾部区域或头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在进一步的实施方式中，所述接触在体内或体外进行。
在另一个方面，本文提供一种筛选具有生物膜的对象的方法，该方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：将从所述对象分离的包含生物膜的生物样品与本文公开的一种或多种抗体、其片段、多肽或CDR接触，并且检测样品中所述抗体、其片段、多肽或CDR与任何生物膜的结合。在一个实施方式中，所述抗体、其片段、多肽或CDR结合DNABII肽的尾部区域或头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在进一步的实施方式中，被检测有所述结合的对象被选择来施用本文公开的一种或多种抗体、其片段、多肽或CDR，和/或一种或多种编码所述抗体、其片段、多肽或CDR的多核苷酸或载体，其中所述抗体、其片段、多肽或CDR结合DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。用量可由治疗医生或兽医确定，例如对该对象有效的量。在进一步的实施方式中，所述接触在体内或体外进行。
本文提供在对象中检测生物膜的方法，通过向该对象施用本文公开的一种或多种抗体或其片段以及检测本文公开的抗体、其片段、多肽或CDR与生物膜的任何结合来进行。在一个方面，所述抗体、其片段、多肽或CDR结合DNABII肽的尾部区域或头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在另一个实施方式中，该方法进一步包括检测所述抗体、其片段、多肽或CDR与生物膜的结合。
在一个方面，本文提供在对象中预防或破坏生物膜的方法，该方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：向该对象施用本文公开的一种或多种抗体、其片段、多肽或CDR，和/或一种或多种编码所述抗体、其片段、多肽或CDR的多核苷酸或载体，其中这些结合至DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。用量可由治疗医生或兽医确定，例如对该对象有效的量。在一个实施方式中，该方法进一步包括检测生物膜：将本文公开的一种或多种抗体、其片段、多肽或CDR与怀疑含有生物膜的样品接触并检测生物膜与所述抗体、其片段、多肽或CDR的结合，其中所述抗体、其片段、多肽或CDR结合至DNABII肽的尾部区域或头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。
在另一个方面，本文提供抑制、预防或治疗在对象中产生生物膜的微生物感染的方法，所述方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：向该对象施用本文公开的一种或多种抗体、其片段、多肽或CDR，和/或一种或多种编码所述抗体、其片段、多肽或CDR的多核苷酸或载体，其中这些结合至DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。用量可由治疗医生或兽医确定，例如对该对象有效的量。在一个实施方式中，该方法进一步包括检测生物膜：将本文公开的一种或多种抗体、其片段、多肽或CDR与怀疑含有生物膜的样品接触并检测生物膜与所述抗体、其片段、多肽或CDR的结合，其中所述抗体、其片段、多肽或CDR结合至DNABII肽的尾部区域或头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。
在另一个方面，本文提供预防或治疗在对象中的以形成生物膜为特征的病症，该方法通过向该对象施用本文公开的一种或多种抗体、其片段、多肽或CDR，和/或一种或多种编码所述抗体、其片段、多肽或CDR的多核苷酸或载体来实现，其中这些结合至DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。用量可由治疗医生或兽医确定，例如对该对象有效的量。病症的非限制性例子包括慢性不愈合伤口、伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp)引起的肺部感染、静脉溃疡、糖尿病足溃疡、耳部感染、鼻窦感染、尿路感染、胃肠道疾病、医院获得性肺炎、呼吸机相关性肺炎、外科植入物相关感染、肺部感染、呼吸道感染、囊性纤维化、慢性阻塞性肺病、导管相关感染、留置设备相关感染、植入假体相关感染、骨髓炎、蜂窝组织炎、脓肿和牙周病。在一个实施方式中，该方法进一步包括检测生物膜：将本文公开的一种或多种抗体、其片段、多肽或CDR与怀疑含有生物膜的样品接触并检测生物膜与所述抗体、其片段、多肽或CDR的结合，其中所述抗体、其片段、多肽或CDR结合至DNABII肽的尾部区域或头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。
在本文公开的方法的某些实施方式中，施用一种或多种所述抗体、其片段、多肽或CDR降低对象中的一种或多种促炎细胞因子。促炎细胞因子的非限制例子包括IL-1β、IL6、IL8、IL12p70、IL17A、干扰素(IFN)和肿瘤坏死因子(TFN)。此外或替代性地，施用一种或多种所述抗体、其片段、多肽或CDR升高对象中的一种或多种抗炎细胞因子。在一个实施方式中，抗炎细胞因子包括但不限于IL10、IL 13、IL-1ra、IL-4、IL-11和转化生长因子-β(TGF-β)。
本文还提供一种在对象中赋予被动免疫的方法，所述方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：向该对象施用本文公开的一种或多种抗体、其片段、多肽或CDR，和/或一种或多种编码所述抗体、其片段、多肽或CDR的多核苷酸或载体，其中所述抗体、其片段、多肽或CDR结合至DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。用量可由治疗医生或兽医确定，例如对该对象有效的量。
在一个方面，使用本文公开的抗体、其片段、多肽或CDR，将治疗方法与诊断方法组合以检测和/或监测生物膜形成和破坏。
在某些实施方式中，所述生物膜衍生自(即产生自)革兰氏阴性或革兰氏阳性产生物膜细菌。在某些实施方式中，所述生物膜包含DNABII蛋白。在进一步的实施方式中，该生物膜包含来自大肠杆菌U93的组蛋白样蛋白(HU)或整合宿主因子(IHF)结合蛋白。在某些实施方式中，DNABII肽是IHF肽。此外或替代性地，DNABII肽是HU肽。在某些实施方式中，DNABII肽的头部区域是IHFA的头部区域和/或IHFB的头部区域。在进一步的实施方式中，DNABII肽的头部区域是与IHFB头部区域直接或间接(例如通过连接体)偶联的IHFA头部区域。在进一步的实施方式中，DNABII肽的头部区域是IhfA5-mIhfB4NTHI头部嵌合肽。在某些实施方式中，DNABII肽的尾部区域是IHFA的尾部区域和/或IHFB的尾部区域。在进一步的实施方式中，DNABII肽的尾部区域是与IHFB尾部区域直接或间接(例如通过连接体)偶联的IHFA尾部区域。在进一步的实施方式中，DNABII肽的尾部区域是IhfA3-IhfB2NTHI尾部嵌合肽。
本文进一步提供制备干扰核酸的方法，该方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：制备由约10-20个核苷酸构成的、特异性结合本文公开的抗体或其片段的特异性结合伴侣(binding partner)的核酸，以及任选地分离由该方法制备的干扰核酸。
在另一个方面，本文提供一种非生理性表面，其覆盖有本文公开的一种或多种抗体、其片段、多肽或CDR，并且任选地，其中在一个方面，该表面是处于工业环境中。
本文还提供获得有效破坏生物膜的抗血清的方法，包括用小分子免疫对象，并从该对象回收抗血清，以及任选地从该对象分离多克隆抗血清或单克隆抗体。
本文还提供试剂盒。该试剂盒包含本文公开的一种或多种抗体、其片段、多肽、CDR、多核苷酸、载体、宿主细胞或组合物，以及任选地，使用说明。
附图简述
图1提供显示DNABII蛋白(如IHF)如何结合至双链DNA以及DNABII蛋白的两个臂的图。
图2A至2D显示了为评估人源化单克隆抗体变体与相应肽的结合而进行的直接结合ELISA的结果。将头部或尾部嵌合肽以2ug/mL包被到96孔板上，并添加8点稀释系列的抗体(起始浓度为50ug/mL，1:3稀释)。抗人IgG Fc HRP偶联抗体(1:7000,JacksonImmunoResearch Laboratories,109-035-098)用作第二检测抗体。遵循标准的直接ELISA方案并使用酶标仪读取450nm处的吸光度。计算EC50值，并确定人源化变体具有相当的结合。图2A和2B中显示人源化头部嵌合肽抗体。图2C和2D中显示人源化尾部嵌合肽抗体。
图3是使用本公开的人源化头部或尾部嵌合肽单克隆抗体逆转8孔室载玻片中建立的生物膜的体外模型。
图4A至4G提供了设计用于靶向头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI的人源化单克隆抗体的重链和轻链的氨基酸同一性之间的比较(列表见图4A，详细比对见图4B至4G)。用NCBIblastp进行氨基酸比对。
图5A至5G提供了设计用于靶向尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI的人源化单克隆抗体的重链和轻链的氨基酸同一性之间的比较(列表见图5A，详细比对见图5B至5G)。用NCBIblastp进行氨基酸比对。
图6提供了使用设计用于靶向IhfA5-mIhfB4NTHI头部嵌合肽的人源化单克隆抗体的相对生物膜破坏数据。生物膜破坏：从巧克力琼脂上的过夜培养物中收集NTHI 86-028NP菌落，并悬浮在补充有2μgβ-NAD和血红素/ml培养基的脑心浸液肉汤(sBHI)中。然后将490nm处的光密度调整为0.65，将培养物在sBHI中按1:6稀释，然后在37℃和5％CO2下静置孵育3小时。接下来，将培养物在新鲜sBHI中以1:2500稀释，并将200μl悬浮液等分到8孔室载玻片的每个孔中。然后将载玻片在37℃和5％CO2下静置孵育3小时。16小时后，将200μl新鲜sBHI添加到每个孔中，并将载玻片再孵育8小时。此时，每孔吸出培养基，每孔加入5μg单克隆抗体。将生物膜再培养16小时。然后用FM1-43FX细菌细胞膜染料(Invitrogen)清洗和染色生物膜，并在4℃下在含16％多聚甲醛、2.5％戊二醛、4.0％乙酸的0.1M磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中固定过夜。吸出固定剂并在每个孔中加入200μl汉克平衡盐溶液，然后在Zeiss800Meta激光扫描共聚焦显微镜上观察生物膜。图像用Zeiss Zen Black软件编译，生物膜生物量用COMSTAT2.1软件计算。IhfA5-mIhfB4NTHI头部嵌合肽的KA(单位为1/M)为约4E+05至约2E+08。
图7提供了使用设计用于靶向IhfA3-IhfB2NTHI尾部嵌合肽的人源化单克隆抗体的相对生物膜破坏数据。生物膜破坏：从巧克力琼脂上的过夜培养物中收集NTHI 86-028NP菌落，并悬浮在补充有2μgβ-NAD和血红素/ml培养基的脑心浸液肉汤(sBHI)中。然后将490nm处的光密度调整为0.65，将培养物在sBHI中按1:6稀释，然后在37℃和5％CO2下静置孵育3小时。接下来，将培养物在新鲜sBHI中以1:2500稀释，并将200μl悬浮液等分到8孔室载玻片的每个孔中。然后将载玻片在37℃和5％CO2下静置孵育3小时。16小时后，将200μl新鲜sBHI添加到每个孔中，并将载玻片再孵育8小时。此时，每孔吸出培养基，每孔加入5μg单克隆抗体。将生物膜再培养16小时。然后用FM1-43FX细菌细胞膜染料(Invitrogen)清洗和染色生物膜，并在4℃下在含16％多聚甲醛、2.5％戊二醛、4.0％乙酸的0.1M磷酸盐缓冲液(pH7.4)中固定过夜。吸出固定剂并在每个孔中加入200μl汉克平衡盐溶液，然后在Zeiss800Meta激光扫描共聚焦显微镜上观察生物膜。图像用Zeiss Zen Black软件编译，生物膜生物量用COMSTAT2.1软件计算。IhfA3-IhfB2NTHI尾部嵌合肽的KA(单位为1/M)为约8E+06至约2E+09。
图8A至8B显示靶向β头部的鼠单克隆抗体衍生的Fab片段在体外破坏了由五种人类病原体形成的生物膜。图8A显示了细菌生物膜的代表性图像(假彩色化的白色)，揭示针对IHF的β-头部结构域的170nM完整IgG或Fab显著破坏生物膜。正交投影显示俯视图，以描绘x-y平面中生物膜的空间分布，侧视图表示z平面中的生物膜高度(箭头)。比例尺，20μm。图8B显示了由COMSTAT2软件量化的每个图像内的生物量。每个测定在不同的日期重复3次，并显示平均值±SEM。*P≤0.05，**P≤0.01，与各自的完整IgG或Fab相比(具有多重比较的单向方差分析)。
图9A至9D显示了鼠单克隆抗体β-头部Fab介导的生物膜驻留NTHI的根除和来自中耳的粘膜生物膜的分解。图9A显示了研究时间表和给予的治疗。将一剂342nM Fab递送到每个中耳。图9B显示了在治疗组中的粘膜生物膜内和粘附于中耳粘膜的NTHI的相对量。图9C显示了由六名对治疗不知情的评价者在治疗组中确定的相对粘膜生物膜评分。图9B和9C：每组6-8个中耳，显示了单个耳朵的值和组的平均值，每个图的组从左到右是同种型对照Fab、β-尾部Fab和β-头部Fab。*P≤0.05，**P≤0.01，***P≤0.001(具有多重比较的单因素方差分析)。图9D显示了来自每个群组的栗鼠中耳的代表性图像，右下角方框内指示耳朵的平均粘膜生物膜得分。TM，鼓膜；S，骨性隔膜；MEM，中耳粘膜；B，生物膜(圆圈)。在一个实施方案中，鼠单克隆抗体β-头部Fab的递送既显著降低了中耳中的细菌负荷，也根除了粘膜生物膜，而β-尾部Fab不仅未做到，而且与明显的炎症有关。
图10A至10B显示了来自用342nM鼠单克隆抗体衍生的β-尾部Fab处理的动物的中耳液中主要的促炎细胞因子。图10A显示了在NTHI激发和Fab片段治疗后栗鼠中耳液中促炎细胞因子的相对量，如通过流式细胞小球微阵列术所确定的。*P≤0.05，**P≤0.01，均与β-头部Fab相比(具有多重比较的单向ANOVA)，与同种型对照Fab相比(未配对t检验)。图10B显示三个Fab片段处理组群中抗炎细胞因子IL-10的相对平均浓度。*P≤0.05vs.β-头部Fab，++P≤0.01vs.β-尾部Fabs或同种型对照Fab(具有多重比较的单向ANOVA)。每组测试5-7个中耳液。显示平均细胞因子浓度±SD。对于任一个图(图10A或10B)，从左到右显示的是同种型对照Fab、β-尾部Fab和β-头部Fab组的细胞因子结果。在一个实施方案中，β-头部Fab的递送导致6种促炎细胞因子的浓度显著降低和抗炎细胞因子IL-10的浓度显著增加，这支持如图9D所示的相对炎症或缺乏炎症。
图11A至11D提供了来自多克隆兔IgG的头部嵌合Fab介导的生物膜驻留NTHI的清除、已建立的粘膜生物膜的根除和实验疾病的消退。图11A显示了研究时间线。将一剂342nMFab递送到每个中耳。图11B显示了在完成抗体治疗1或7天后驻留在粘膜生物膜内并粘附于中耳粘膜的相对量的NTHI。图11C显示了由六位不知道所提供的治疗的评价者确定的剩余粘膜生物膜的相对量。图11B和11C：每组6个中耳，显示了单个耳朵的值和每个组的平均值。每个绘图的从左到右的群组是初始血清Fab、尾部嵌合Fab和头部嵌合Fab。*P≤0.05，**P≤0.01，***P≤0.001(具有多重比较的单因素方差分析)。图11D显示了中耳粘膜生物膜的代表性图像；右下角方框内显示平均黏膜生物膜评分。TM，鼓膜；S，骨性隔膜；MEM，中耳粘膜；B，生物膜(圆圈)。针对头部嵌合肽的兔多克隆抗体Fab介导了生物膜驻留NTHI的快速和持久的清除，根除已建立的粘膜生物膜和消退实验性OM。针对尾部嵌合肽的兔多克隆抗体Fab未诱导生物膜驻留NTHI的清除或疾病消退，而是与显著炎症相关(图11D)，与针对β尾部的那些鼠单克隆抗体Fab的一样(见图9D)。
图12A至12B显示人源化头部嵌合肽单克隆抗体在体外破坏细菌生物膜。图12A显示了与HuTipMab或HuTailMab一起温育16小时后细菌生物膜(假彩色化的白色)的代表性图像。正交投影显示俯视视图，以描绘x-y平面中生物膜的空间分布，侧视图表示z平面中的生物膜高度(箭头)。比例尺，20μm。如本文所用，术语“HuTipMab”是指包含具有SEQ ID NO:1氨基酸序列的抗头部HC1和具有SEQ ID NO:7氨基酸序列的抗头部LC1的单克隆抗体(Mab或mAb)。图12B显示了与HuTailMab相比，暴露于HuTipMab后剩余的生物膜生物量百分比，通过COMSTAT2分析确定。显示平均值±SD。在不同的日期进行了三次实验。***P≤0.001(非配对t检验)。HuTipMab在体外显著破坏了由多种呼吸道病原体形成的生物膜。如本文所用，术语“HuTailMab”是指包含具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的抗尾部HC1和具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的抗尾部LC1的单克隆抗体(Mab或mAb)。
图13A至13D显示在实验性NTHI诱导的OM期间，针对头部嵌合肽的人源化单克隆抗体(HuTipMab)分解了中耳中预先存在的NTHI生物膜。图13A显示了研究时间表和治疗。图13B显示了中耳内NTHI的相对量。图13C显示了在用人单克隆抗体处理后保留在中耳中的NTHI粘膜生物膜的相对量。图13B和13C：每组六个中耳，显示了单个耳朵的值和组的平均值。每个图从左到右的群组是盐水、抗尾部嵌合肽的人源化单克隆抗体和抗头部嵌合肽的人源化单克隆抗体。****P≤0.0001(具有多重比较的单因素方差分析)。图13D提供了来自每个群组的中耳的代表性图像；右下角方框内显示的耳朵的平均粘膜生物膜评分。S，骨性隔膜；MEM，中耳粘膜；B，生物膜(圆圈)。HuTipMab通过分解粘膜生物膜根除NTHI，这是一种快速且持续的效果。另外要注意，人源化后，抗尾部嵌合肽的单克隆抗体不再与显著的炎症变化相关，而这正是抗β尾部的鼠单克隆抗体(参见图9D)或抗尾部嵌合肽的兔多克隆抗体Fab所一直观察到的(参见图11D)。
图14A至14B显示来自用HuTipMab处理的动物的中耳液中的促炎细胞因子显著减少。流式细胞小球微阵列术测定NTHI激发后、NTHI激发后6天用人源化单克隆抗体治疗后(图14A，治疗完成后1天)、以及NTHI激发后13天用人源化单克隆抗体治疗后(图14B，治疗完成后7天)，栗鼠中耳液中促炎和抗炎细胞因子的相对量。*P≤0·05对比生理盐水，**P≤0·01对比生理盐水，***P≤0·001对比生理盐水，****P≤0·0001对比生理盐水，+P≤0·05vs.HuTailMab，++P≤0·01vs.HuTailMab，++P≤0·001vs.HuTailMab，++++P≤0·0001vs.HuTailMab(具有多重比较的单因素方差分析)。每组测试3到5个中耳液。显示平均细胞因子浓度±SD。接受HuTailMab处理的动物中的促炎细胞因子水平现在与接受盐水处理的动物相同，这支持了与鼠单克隆抗体相比，这种现在人源化单克隆抗体的接受缺乏关联性。
图15A至15D显示了在病毒-细菌共感染模型中用头部嵌合肽进行免疫预防了实验性OM的上行(ascending)。图15A是研究时间表和递送的疫苗制剂。图15B是细菌激发一天后鼻咽灌洗液中NTHI的相对量，以确保细菌在所有组群均等地定殖。每组8份灌洗液，NS，无显著性，单向ANOVA。图15C显示了每个群组中的许多动物具有实验性OM的迹象，即炎症和/或中耳液，通过不知情实验者视频耳镜检查观察。每组8只动物，****P≤0.001对比dmlT或尾部嵌合肽，Mantel-Cox检验。图15D显示了第11天来自每个群组的鼓膜的代表性图像，在该日用头部嵌合肽免疫的群组中疾病发病率最高。TM，鼓膜。用头部嵌合肽免疫可防止发展为多微生物OM并促进观察到的有限疾病的快速消退。
详细描述
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。本文提供的所有核苷酸序列均以5'至3'方向呈现。尽管与本文描述的那些相似或等效的任何方法和材料可以用于本公开的实践或测试，但是现在描述特定的、非限制性的示例性方法、装置和材料。本文引用的所有技术和专利出版物均通过引用整体并入本文。本文中的任何内容均不应被解释为承认本公开内容无权因在先发明而早于此类公开内容。
除非另有说明，否则本公开的实践将采用本领域技术范围内的组织培养、免疫学、分子生物学、微生物学、细胞生物学和重组DNA的常规技术。参见例如Sambrook andRussell eds,(2001)Molecular Cloning:A Laboratory Manual,3rd edition；the seriesAusubel et al.eds.(2007)Current Protocols in Molecular Biology；the seriesMethods in Enzymology(Academic Press,Inc.,N.Y.)；MacPherson et al.(1991)PCR 1:A Practical Approach(IRL Press at Oxford University Press)；MacPherson et al.(1995)PCR 2:A Practical Approach；Harlow and Lane eds.(1999)Antibodies,ALaboratory Manual；Freshney(2005)Culture of Animal Cells:A Manual of BasicTechnique,5th edition；Gait ed.(1984)Oligonucleotide Synthesis；U.S.Pat.No.4,683,195；Hames and Higgins eds.(1984)Nucleic Acid Hybridization；Anderson(1999)Nucleic Acid Hybridization；Hames and Higgins eds.(1984)Transcription andTranslation；Immobilized Cells and Enzymes(IRL Press(1986))；Perbal(1984)APractical Guide to Molecular Cloning；Miller and Calos eds,(1987)Gene TransferVectors for Mammalian Cells(Cold Spring Harbor Laboratory)；Makrides ed.(2003)Gene Transfer and Expression in Mammalian Cells；Mayer and Walker eds.(1987)Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology(Academic Press,London)；以及Herzenberg et al.eds(1996)Weir's Handbook of Experimental Immunology。
所有的数字名称，例如pH值、温度、时间、浓度和分子量，包括范围，都是近似值，以1.0或0.1的增量变化(+)或(-)，视情况而定，或可选地变化+/-15％，或者10％，或者5％，或者2％。应当理解，尽管并不总是明确说明，所有数字名称前面都带有术语“约”。还应理解，尽管并不总是明确说明，本文所述的试剂仅是示例性的并且其等同体在本领域中是已知的。
如在说明书和权利要求书中使用的，单数形式包括复数指代，除非上下文另有明确规定。例如，术语“多肽”包括多个多肽，包括其混合物。
如本文所用，术语“包括”旨在表示组合物和方法包括所列举的元素，但不排除其他元素。当用于定义组合物和方法时，“实质上由...组成”是指排除对预期用途的组合具有任何基本意义的其他元素。因此，实质上由本文定义的元素组成的组合物不会从分离和纯化方法中排除痕量污染物和药学上可接受的载体，例如磷酸盐缓冲盐水、防腐剂等。“由...组成”是指排除多于痕量元素的其他成分和用于施用本文公开的组合物的主要方法步骤。由这些过渡术语中的每一个定义的实施例在本公开的范围内。
“生物膜”是指一个有组织的微生物群落(它们有时会附着在可能是有机或无机结构的表面)以及它们分泌、释放和/或由于细菌裂解而在细胞外环境中可得到的聚合物(例如DNA)。生物膜对微生物及和抗菌剂具有很强的抵抗力。它们以牙龈组织、牙齿和修复体为生，引起龋齿和牙周病，也称为牙周斑病。它们还会引起慢性中耳感染。生物膜也可以在牙科植入物、支架、导管线和隐形眼镜的表面上形成。它们在起搏器、心脏瓣膜置换体、人工关节和其他外科植入物上生长。疾病控制中心估计超过65％的医院(医院获得性)感染是由生物膜引起的。它们会导致慢性阴道感染，并导致免疫系统受损的人发生危及生命的全身感染。生物膜也与许多疾病有关。例如，囊性纤维化患者患有假单胞菌感染，通常会产生抗生素耐药性生物膜。在一个实施方案中，生物膜包含DNABII多肽或蛋白质。在进一步的实施方案中，生物膜包含IHF和/或HU。在又一个实施方案中，生物膜包含IHFA和/或IHFB。
术语“破坏”旨在减少作为微生物生物膜组成部分的DNA/蛋白质基质的形成。在某些实施方案中，破坏生物膜是指分散生物膜，从生物膜的DNA/蛋白质基质中释放微生物，以及任选地允许宿主免疫效应物和/或抗生素杀死微生物。
“DNABII多肽或蛋白质”意指由DNA结合结构域组成并因此对微生物DNA具有特异性或一般亲和力的DNA结合蛋白质或多肽。一方面，它们结合至DNA的小沟。DNABII蛋白的非限制性例子是整合宿主因子(IHF)蛋白和来自大肠杆菌菌株U93的组蛋白样蛋白(HU)。其他可能与生物膜相关的DNA结合蛋白包括DPS(Genbank登录号：CAA49169)、H-NS(Genbank登录号：CAA47740)、Hfq(Genbank登录号：ACE63256)、CbpA(Genbank登录号：BAA03950)和CbpB(Genbank登录号:NP_418813)。
“整合宿主因子”或“IHF”蛋白是一种细菌蛋白，被噬菌体用于将其DNA整合到宿主细菌中。它们还结合细胞外微生物DNA。在大肠杆菌中编码IHF蛋白亚基的基因是himA(Genbank登录号：POA6X7.1)和himD(POA6Y1.1)基因。这些基因的同源物存在于其他生物体中。在某些实施方案中，术语“IHF”是指两个IHF亚基之一或两者：整合宿主因子亚基α(IHFA或IhfA)和整合宿主因子亚基β(IHFB或IhfB)。
“HU”或“来自大肠杆菌菌株U93的组蛋白样蛋白”是指一类通常与大肠杆菌相关的异二聚体蛋白。已知HU蛋白结合DNA交接点。相关蛋白质已从其他微生物中分离出来。Laine等人报道了大肠杆菌HU的完整氨基酸序列(Laine et al.(1980)Eur.J.Biochem 103(3)447-481)。HU蛋白的抗体可从Abeam商购。在大肠杆菌中编码HU蛋白亚基的基因是hupA和hupB，分别对应于SEQ ID NO：29和30。这些基因的同源物存在于其他生物体中，对应于来自其他生物体的这些基因的肽可以在WO 2011/123396的表10中找到。
术语“表面抗原”或“表面蛋白质”是指细胞如细菌细胞表面上的蛋白质或肽。外膜蛋白的例子是例如OMP P5(Genbank登录号：YP-004139079.1)、OMP P2(Genbank登录号：ZZX87199.1)和OMP P26(Genbank登录号：YP-665091.1)，而表面抗原的例子是rsPilA或重组可溶性PilA(Genbank登录号：EFU96734.1)和IV型菌毛蛋白(Genbank登录号：Yp-003864351.1)。
术语“流感嗜血杆菌”是指可引起许多不同感染例如耳部感染、眼部感染和鼻窦炎的病原菌。已分离出许多不同的流感嗜血杆菌菌株，并具有IhfA、ihfB和hupA基因或蛋白质。不同流感嗜血杆菌菌株的一些非限制性实例包括Rd KW20、86-028NP、R2866、PittGG、PittEE、R2846和2019。
“微生物DNA”是指来自并入了生物膜中的微生物的单链或双链DNA。
“抑制、预防或破坏”生物膜是指预防性或治疗性地减少生物膜的结构。
“弯曲多核苷酸”意指在一条链上包含不与另一条链配对的小环的双链多核苷酸。在一些实施方案中，环长约1个碱基至约20个碱基，或可选地长约2个碱基至约15个碱基，或可选地长约3个碱基至约12个碱基，或可选地长约4个碱基至约10个碱基，或可选择地具有约4、5、或6、或7、或8、或9、或10个碱基。
“与DNABII结合竞争的多肽，例如在DNA结合中与IHF竞争”是指与DNABII(例如IHF)竞争结合弯曲或扭曲的DNA结构但不与DNA形成生物膜的蛋白质或肽。实例包括但不限于IHF的片段，其包括IHF的一个或多个DNA结合结构域，或其生物学等同体。
诊断或治疗的“对象”是细胞或动物，例如哺乳动物或人。接受诊断或治疗的非人类动物是那些被感染的动物或动物模型，例如猿猴、鼠科动物(如大鼠、小鼠、栗鼠)、犬科动物(如狗)、兔科动物(如兔子)、家畜、竞技动物和宠物。术语“对象”、“宿主”、“个体”和“患者”在本文中可互换使用以指代动物，通常是哺乳动物。哺乳动物的非限制性实例包括人类、非人类灵长类动物(例如猿、长臂猿、黑猩猩、猩猩、猴子、猕猴等)、家养动物(例如狗和猫)、农场动物(例如马、牛、山羊、绵羊、猪)和实验动物(例如小鼠、大鼠、兔、豚鼠)。在一些实施方案中，哺乳动物是人。哺乳动物可以是任何年龄或处于任何发育阶段(例如，成年、青少年、孩子、婴儿或子宫内的哺乳动物)。哺乳动物可以是雄性或雌性。在一些实施方案中，受试者是人。
术语“蛋白质”、“肽”和“多肽”可互换使用并且在其最广义上是指两个或更多个亚基氨基酸、氨基酸类似物或肽模拟物的复合物。亚基可以通过肽键连接。在另一个实施方案中，亚基可以通过其他键连接，例如酯、醚等。蛋白质或肽必须包含至少两个氨基酸，并且对可以构成蛋白质或肽序列的氨基酸的最大数量没有限制。如本文所用，术语“氨基酸”是指天然和/或非天然或合成氨基酸，包括甘氨酸以及D和L旋光异构体、氨基酸类似物和肽模拟物。
“C-末端多肽”意指多肽的至少10个，或至少15个，或至少20个，或至少25个C-末端氨基酸或半个多肽。在另一方面，对于含有90个氨基酸的多肽，C-末端多肽将包含第46至90个氨基酸。在一个方面，该术语意指从羧基末端开始的C-末端20个氨基酸。
DNABII多肽的“头部片段”意指以IHFalpha和IHFbeta为例形成蛋白质的两个臂(见图1)的DNABII多肽。此类的非限制性实例包括IhfA，A头部片段：NFELRDKSSRPGRNPKTGDVV，SEQ ID NO：31，和IhfB，B头部片段：SLHHRQPRLGRNPKTGDSVNL，SEQID NO：32。
DNABII多肽的“尾部片段”是指蛋白质中既暴露于本体培养基(bulk medium)又不被DNA或其他多肽遮盖的区域。
免疫显性抗原意指被识别并以高亲和力与抗体结合的蛋白质区域。
免疫保护性抗原意指蛋白质的被识别并以高亲和力与抗体结合以干扰蛋白质功能的区域；产生的针对免疫保护性抗原的抗体的特点是，由于干扰了蛋白质功能，因此针对目标适应症的效果增强或最佳——在这种情况下，清除生物膜的能力得到提高。
术语“多核苷酸”和“寡核苷酸”可互换使用，是指任何长度的核苷酸的聚合形式，无论是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。多核苷酸可以具有任何三维结构并且可以执行任何已知或未知的功能。以下是多核苷酸的非限制性实例：基因或基因片段(例如，探针、引物、EST或SAGE标签)、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转移RNA、核糖体RNA、RNAi、核酶、cDNA、重组多核苷酸、分支多核苷酸、质粒、载体、任何序列的分离的DNA、任何序列的分离的RNA、核酸探针和引物。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，例如甲基化核苷酸和核苷酸类似物。如果存在，可以在多核苷酸组装之前或之后赋予对核苷酸结构的修饰。核苷酸序列可以被非核苷酸成分打断。多核苷酸可在聚合后进一步修饰，例如通过与标记组分缀合。该术语还指双链和单链分子。除非另有说明或要求，本文公开的多核苷酸的任何实施方案既包括双链形式又包括已知或预测构成双链形式的两个互补单链形式中的每一个。
多核苷酸由四个核苷酸碱基的特定序列组成：腺嘌呤(A)；胞嘧啶(C)；鸟嘌呤(G)；胸腺嘧啶(T)；当多核苷酸是RNA时，尿嘧啶(U)代替胸腺嘧啶。因此，术语“多核苷酸序列”是多核苷酸分子的字母表示。这种字母表示可以输入到具有中央处理单元的计算机中的数据库中，并用于生物信息学应用，例如功能基因组学和同源性搜索。
如本文所用的关于核酸例如DNA或RNA的术语“分离的”或“重组的”，是指分别与存在于大分子以及多肽的天然来源中的其他DNA或RNA分离的分子。术语“分离的或重组的核酸”意在包括不作为片段天然存在且不会在天然状态下发现的核酸片段。术语“分离的”在本文中还用于指从其他细胞蛋白中分离的多核苷酸、多肽和蛋白质，并且意在包括纯化的和重组的多肽。在其他实施方案中，术语“分离的或重组的”意指与细胞和其他的成分分离，其中细胞、组织、多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、抗体或其片段通常天然地结合在一起。例如，分离的细胞是从具有不同表型或基因型的组织或细胞中分离出来的细胞。分离的多核苷酸与在其天然或自然环境中(例如，在染色体上)通常与之相连的3'和5'连续核苷酸分离。如本领域技术人员显而易见的，非天然存在的多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、抗体或其片段不需要“分离”以将其与天然存在的对应物区分开来。
在没有明确叙述的情况下并且除非另有说明，可以推断当本公开涉及多肽、蛋白质、多核苷酸或抗体时，它们的等同体或生物等同体被包括在本公开的范围内。如本文所用，术语“其生物等同体”在指代参考蛋白质、抗体、片段、多肽或核酸时意在与“其等同体”同义，意指具有最小同源性同时仍保持所需结构或功能性的那些等同体。除非本文特别提及，预期本文提及的任何多核苷酸、多肽或蛋白质也包括其等同体。在一方面，等同多核苷酸是在严格条件下与本文所述的用于所述方法的多核苷酸或多核苷酸的互补物杂交的多核苷酸。在另一个方面，等同抗体或抗原结合多肽意指相对参考抗体或抗原结合片段以至少70％、或至少75％、或至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少95％的亲和力或更高的亲和力结合。在另一个方面，其等同体在竞争性ELISA测定下与抗体或抗原结合片段竞争结合其抗原。在另一方面，等同体意指至少约80％的同源性或同一性，或者至少约85％，或至少约90％，或至少约95％、或98％的同源性或同一性，并展示与参考蛋白质、多肽或核酸基本等同的生物活性。WO 2011/123396的表9中提供了生物学等同多肽的实例，其鉴定了对所公开的氨基酸序列的保守氨基酸取代。
与另一个序列具有一定百分比(例如，80％、85％、90％或95％)的“序列同一性”的多核苷酸或多核苷酸区域(或多肽或多肽区域)意味着，当比对时，在比较两个序列时，该百分比的碱基(或氨基酸)的数量是相同的。可以使用本领域已知的软件程序来确定比对和同源性百分比或序列同一性，例如Current Protocols in Molecular Biology(Ausubel etal.,eds.1987)Supplement 30,section 7.7.18,Table 7.7.1中描述的那些软件程序。在某些实施例中，使用默认参数进行比对。非限制性示例性比对程序是BLAST，使用默认参数。具体而言，示例性程序包括BLASTN和BLASTP，使用以下默认参数：Genetic code＝standard；filter＝none；strand＝both；cutoff＝60；expect＝10；Matrix＝BLOSUM62；Descriptions＝50sequences；sort by＝HIGH SCORE；Databases＝non-redundant,GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+GenBank CDS translations+SwissProtein+SPupdate+PIR。这些程序的详细信息可在以下Internet地址找到：ncbi.nlm.nih.gov/cgi-bin/BLAST。序列同一性和同一性百分比通过将它们合并到clustalW(网址：align.genome.jp，最后访问于2011年3月7日)中来确定。
“同源性”或“同一性”或“相似性”是指两个肽之间或两个核酸分子之间的序列相似性。同源性可以通过比较每个序列中的位置来确定，该位置可以为了比较的目的而被对齐。当被比序列中的一个位置被相同的碱基或氨基酸占据时，则分子在该位置是同源的。序列之间的同源性程度是序列共享的匹配或同源位置的数量的函数。“不相关”或“非同源”序列与本公开的序列之一具有小于40％的同一性，或者小于25％的同一性。
“同源性”或“同一性”或“相似性”还可以指在严格条件下杂交的两个核酸分子。
“杂交”是指一种或多种多核苷酸反应形成复合物的反应，该复合物通过核苷酸残基的碱基之间的氢键键合而稳定。氢键可以通过Watson-Crick碱基配对、Hoogstein结合或任何其他序列特异性方式发生。复合物可包含形成双链体结构的两条链、形成多链复合物的三条或更多条链、单个自杂交链或这些的任何组合。杂交反应可以构成更广泛过程中的一个步骤，例如PCR反应的开始，或核酶对多核苷酸的酶促切割。
严格杂交条件的实例包括：约25℃至约37℃的温育温度；约6×SSC至约10×SSC的杂交缓冲液浓度；约0％至约25％的甲酰胺浓度；以及约4×SSC至约8×SSC的洗涤溶液。中等杂交条件的实例包括：约40℃至约50℃的温育温度；约9×SSC至约2×SSC的缓冲液浓度；约30％至约50％的甲酰胺浓度；和约5×SSC至约2×SSC的洗涤溶液。高严格条件的例子包括：约55℃至约68℃的孵育温度；约1×SSC至约0.1×SSC的缓冲液浓度；约55％至约75％的甲酰胺浓度；约1×SSC、0.1×SSC或去离子水的洗涤溶液。通常，杂交孵育时间为5分钟至24小时，具有1、2或更多个洗涤步骤，洗涤孵育时间为约1、2或15分钟。SSC是0.15M NaCl和15mM柠檬酸盐缓冲液。可以理解，可以采用使用其他缓冲系统的SSC等效物。
如本文所用，“表达”是指多核苷酸转录成mRNA的过程和/或转录的mRNA随后被翻译成肽、多肽或蛋白质的过程。如果多核苷酸来源于基因组DNA，表达可以包括真核细胞中mRNA的剪接。
当应用于多核苷酸时，术语“编码”是指这样的多核苷酸，即，如果在其天然状态下或当通过本领域技术人员熟知的方法操作时，该多核苷酸可以被转录和/或翻译产生多肽和/或其片段的mRNA，则称该多核苷酸编码多肽。反义链是这种核酸的互补序列，编码序列可以由此推导出来。
如本文所用，术语“治疗”在本文中用于表示获得期望的药理学和/或生理学效果。就完全或部分预防病症或其迹象或症状而言，该效果可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈病症和/或可归因于该病症的不利影响而言，该效果可以是治疗性的。如本文所用，“治疗”对象中的疾病还可以指(1)防止症状或疾病在易患或尚未表现出疾病症状的对象中发生；(2)抑制疾病或者阻止其发展；或者(3)改善或者使疾病或者疾病症状消退。如本领域所理解的，“治疗”是用于获得有益或期望结果(包括临床结果)的方法。出于本技术的目的，有益或期望的结果可以包括一种或多种但不限于一种或多种症状的减轻或改善、病症(包括疾病)程度的减轻、稳定(即，不恶化)病症(包括疾病)、病症(包括疾病)延迟或减缓、进展、改善或缓解病症(包括疾病)、状况和缓解(无论是部分还是全部)，无论是可检测的还是不可检测的。在一方面，治疗不包括预防。
预防意指在体外或体内预防易患疾病或影响的体系或对象中的疾病或影响。这样的一个例子是防止在感染了已知会产生生物膜的微生物的系统中形成生物膜。
“组合物”旨在表示活性剂和另一种化合物或惰性的(例如，可检测的试剂或标记物)或活性的成分的组合，例如佐剂、稀释剂、粘合剂、稳定剂、缓冲剂、盐、亲脂性溶剂、防腐剂、佐剂等，并且包括药学上可接受的载体。载体还包括药物赋形剂和添加剂蛋白质、肽、氨基酸、脂质和碳水化合物(例如，糖，包括单糖、二寡糖、三寡糖、四寡糖和寡糖；衍生糖，例如糖醇、醛糖酸、酯化糖等；和多糖或糖聚合物)，其可以单独或组合存在，单独或组合占1-99.99重量或体积％。示例性蛋白质赋形剂包括血清白蛋白，例如人血清白蛋白(HSA)、重组人白蛋白(rHA)、明胶、酪蛋白等。也可以在缓冲能力中起作用的代表性氨基酸/抗体组分包括丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜碱、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、阿斯巴甜等等。碳水化合物赋形剂也包括在本技术的范围内，其实例包括但不限于单糖，例如果糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖等；二糖，例如乳糖、蔗糖、海藻糖、纤维二糖等；多糖，例如棉子糖、松三糖、麦芽糖糊精、葡聚糖、淀粉等；和糖醇，例如甘露糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨糖醇(glucitol)和肌醇。
“药物组合物”旨在包括活性剂与惰性或活性载体的组合，使该组合物适用于体外、体内或离体的诊断或治疗用途。
“药学上可接受的载体”是指可用于本文公开的组合物中的任何稀释剂、赋形剂或载体。药学上可接受的载体包括离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质，例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。合适的药物载体在本领域的标准参考文本Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company中有描述。它们可以根据预期的给药形式进行选择，即口服片剂、胶囊、酏剂、糖浆等，并与常规药学实践一致。
根据本公开使用的组合物可以以剂量单位形式包装，以便于给药和剂量的均匀性。术语“单位剂量”或“剂量”是指适用于对象的物理上离散的单位，每个单位含有预定量的组合物，该预订量是根据要产生与其给药相关(即适当的途径和方案)的所需反应来计算的。根据治疗次数和单位剂量，给药量取决于所需的结果和/或保护。组合物的精确量还取决于从业者的判断并且是每个人所特有的。影响剂量的因素包括对象的身体和临床状态、给药途径、预期治疗目标(缓解症状vs治愈)以及特定组合物的效力、稳定性和毒性。在配制时，溶液以与剂量制剂相容的方式和治疗或预防有效的量施用。制剂很容易以多种剂型给药，例如本文所述的可注射溶液类型。
本文所公开的“生物活性剂”或活性剂意指一种或多种分离的或重组的多肽、分离的或重组的多核苷酸、载体、分离的宿主细胞或抗体，以及包含这些中的一种或多种的组合物。
“给药”可以在整个治疗过程中连续或间断地以一剂形式进行。确定最有效的给药方式和给药剂量的方法是本领域技术人员已知的，并且会随着用于治疗的组合物、治疗的目的、被治疗的靶细胞和被治疗的对象而变化。可以进行单次或多次给药，剂量水平和模式由治疗医师选择。合适的剂量制剂和给药方法是本领域已知的。还可以确定给药途径，并且确定最有效给药途径的方法是本领域技术人员已知的，并且将随用于治疗的组合物、治疗目的、健康状况或疾病阶段、被治疗的对象和靶细胞或组织而变化。给药途径的非限制性实例包括口服给药、鼻腔给药、注射和局部应用。
本公开的药剂可以通过任何合适的给药途径给药用于治疗。还应当理解，最佳途径将随着接受者的状况和年龄以及所治疗的疾病而变化。
如本文所用，术语“接触”是指两个或多个分子之间的直接或间接结合或相互作用。直接相互作用的一个特定示例是结合。间接相互作用的一个特定示例是一个实体作用于一个中间分子，而中间分子又作用于第二个参考实体。如本文所用的接触包括在溶液中、固相中、体外、离体、细胞中和体内进行。体内接触可称为施用或给药。
术语“有效量”是指足以达到预期效果的量。在治疗或预防应用的情况下，有效量将取决于所讨论病症的类型和严重程度以及个体对象的特征，例如一般健康状况、年龄、性别、体重和对药物组合物的耐受性。在免疫原性组合物的情况下，在一些实施方案中，有效量是足以导致针对病原体的保护性反应的量。在其他实施方案中，免疫原性组合物的有效量是足以导致针对抗原产生抗体的量。在一些实施方案中，有效量是赋予有需要的对象被动免疫所需的量。关于免疫原性组合物，在一些实施方案中，除了上述因素之外，有效量将取决于预期用途、特定抗原性化合物的免疫原性程度和对象免疫系统的健康/反应性。本领域技术人员将能够根据这些和其他因素确定合适的量。
在体外应用的情况下，在一些实施方案中，有效量将取决于该应用的大小和性质。它还取决于体外靶标的性质和敏感性以及使用的方法。本领域技术人员将能够基于这些和其他考虑确定有效量。取决于实施方案，有效量可以包括组合物的一次或多次给药。
术语“接触”是指两个或多个分子之间的直接或间接结合或相互作用。直接相互作用的一个特定示例是结合。间接相互作用的一个特定示例是一个实体作用于一个中间分子，而中间分子又作用于第二个参考实体。如本文所用的接触包括在溶液中、固相中、体外、离体、细胞中和体内进行。体内接触可称为施用或给药。
术语“缀合部分”是指可以通过与嵌合多肽的残基形成共价键而添加到分离的嵌合多肽的部分。该部分可以直接与嵌合多肽的残基结合，或者可以与接头形成共价键，接头进而与嵌合多肽的残基形成共价键。
“肽缀合物”是指一种或多种多肽通过共价或非共价键合而与另一种化学或生物化合物的缔合。在一个非限制性实例中，多肽与化合物的“缀合”导致多肽对其预期目的的稳定性或功效提高。在一个实施方案中，肽与载体缀合，其中载体是脂质体、胶束或药学上可接受的聚合物。
“脂质体”是由同心脂质双层组成的微观囊泡。在结构上，脂质体的大小和形状从长管状到球体不等，尺寸从几百埃到几分之一毫米不等。选择形成囊泡的脂质以实现最终复合物的特定程度的流动性或刚性，从而提供外层的脂质组分。这些是中性的(胆固醇)或双极性的，包括磷脂，例如磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)和鞘磷脂(SM)以及其他类型的双极性脂质，包括但不限于二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)，烃链长度在14-22范围内，饱和的或具有一个或多个C＝C双键。能够单独或与其他脂质组分组合产生稳定脂质体的脂质的实例是磷脂，例如氢化大豆磷脂酰胆碱(HSPC)、卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、脑磷脂、心磷脂、磷脂酸、脑苷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、棕榈酰磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺(POPE)和二油酰磷脂酰乙醇胺4-(N-马来酰亚胺基-三乙基)环己烷-1-羧酸酯(DOPE-mal)。可掺入脂质体的其他不含磷的脂质包括硬脂胺、十二烷基胺、十六烷基胺、肉豆蔻酸异丙酯、三乙醇胺-月桂基硫酸酯、烷基芳基硫酸酯、乙酰棕榈酸酯、甘油蓖麻酸酯、硬脂酸十六烷基酯、两性丙烯酸聚合物、聚乙氧基化脂肪酸酰胺和上述阳离子脂质(DDAB、DODAC、DMRIE、DMTAP、DOGS、DOTAP(DOTMA)、DOSPA、DPTAP、DSTAP、DC-Chol)。带负电荷的脂质包括能够形成囊泡的磷脂酸(PA)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二硫酰磷脂酰甘油和(DOPG)和二十六烷基磷酸酯。通常，脂质体可以根据它们的整体大小和层状结构的性质分为三类。根据1977年12月纽约科学院会议“Liposomes and Their Use in Biology and Medicine”，三个分类是多层囊泡(MLV)、小单层囊泡(SUV)和大单层囊泡(LUV)。可将生物活性剂封装在其中以根据本文所述的方法给药。
“胶束”是分散在液体胶体中的表面活性剂分子的聚集体。水溶液中的典型胶束形成聚集体，其中亲水“头部”区域与周围溶剂接触，将疏水尾部区域隔离在胶束中心。这种类型的胶束被称为正相胶束(水包油胶束)。反相胶束在中心具有头部，尾部向外延伸(油包水胶束)。胶束可用于连接本文所述的多核苷酸、多肽、抗体或组合物以促进有效递送至靶细胞或组织。
短语“药学上可接受的聚合物”是指可以与本文所述的一种或多种多肽缀合的一组化合物。预期聚合物与多肽的缀合能够延长多肽在体内和体外的半衰期。非限制性实例包括聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、纤维素衍生物、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、糖、多元醇及其混合物。生物活性剂可以与药学上可接受的聚合物缀合以根据本文所述的方法给药。
“基因递送载体”被定义为任何可以携带插入的多核苷酸进入宿主细胞的分子。基因递送载体的例子是脂质体、胶束生物相容性聚合物，包括天然聚合物和合成聚合物；脂蛋白；多肽；多糖；脂多糖；人工病毒包膜；金属颗粒；和细菌或病毒，例如杆状病毒、腺病毒和逆转录病毒、噬菌体、粘粒、质粒、真菌载体和本领域通常使用的被描述用于在多种真核和原核宿主中表达并且可以用于基因治疗以及简单的蛋白质表达的其他重组载体。
可以使用基因递送载体将本文公开的多核苷酸递送至细胞或组织或对象。如本文所用，“基因递送”、“基因转移”、“转导”等是指将外源多核苷酸(有时称为“转基因”)引入宿主细胞的术语，而与引入的方法无关。此类方法包括多种众所周知的技术，例如载体介导的基因转移(通过例如病毒感染/转染，或各种其他基于蛋白质或基于脂质的基因递送复合物)以及促进“裸”多核苷酸递送的技术(例如电穿孔、“基因枪”递送和用于引入多核苷酸的各种其他技术)。引入的多核苷酸可以稳定地或瞬时地维持在宿主细胞中。稳定维持通常需要引入的多核苷酸包含与宿主细胞相容的复制起点或整合到宿主细胞的复制子中，例如染色体外复制子(例如质粒)或核或线粒体染色体。如本领域已知和本文所述，已知许多载体能够介导基因向哺乳动物细胞的转移。
如本文所用，术语“eDNA”是指作为致病生物膜的组分而发现的细胞外DNA。
“质粒”是与染色体DNA分离的染色体外DNA分子，其能够独立于染色体DNA进行复制。在许多情况下，它是环状和双链的。质粒为微生物群体内的水平基因转移提供了一种机制，并且通常在给定的环境状态下提供选择性优势。质粒可能携带在竞争环境中对天然存在的抗生素产生抗性的基因，或者产生的蛋白质在类似情况下可能充当毒素。
用于基因工程的“质粒”称为“质粒载体”。商业上可获得许多用于此类用途的质粒。将要复制的基因插入到多个拷贝的含有使细胞对特定抗生素产生抗药性的基因和多克隆位点(MCS，或多接头)的质粒中，其中多克隆位点是一个包含几个常用限制性位点的短区域，允许在这个位置轻松插入DNA片段。质粒的另一个主要用途是制造大量蛋白质。在这种情况下，研究人员培养出包含具有感兴趣基因的质粒的细菌。正如细菌产生蛋白质以赋予其抗生素抗性一样，它也可以被诱导由插入的基因产生大量蛋白质。这是一种大规模生产基因或编码的蛋白质的廉价且简单的方法。
“酵母人工染色体”或“YAC”是指用于克隆大DNA片段(大于100kb，直至3000kb)的载体。它是人工构建的染色体，包含在酵母细胞中复制和保存所需的端粒、着丝粒和复制起点序列。使用初始环状质粒构建，使用限制性内切酶将它们线性化，然后DNA连接酶可以通过使用粘性末端在线性分子内添加感兴趣的序列或基因。酵母表达载体，例如YAC、YIp(酵母整合质粒)和YEp(酵母游离型质粒)非常有用，因为酵母本身就是真核细胞，因此可以获得具有翻译后修饰的真核蛋白质产物，但已发现YAC比BAC更不稳定，产生嵌合效应。
“病毒载体”定义为重组产生的病毒或病毒颗粒，其包含要在体内、离体或体外递送到宿主细胞中的多核苷酸。病毒载体的实例包括逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、甲病毒载体等。基于传染性烟草花叶病毒(TMV)的载体可用于制造蛋白质，据报道可在烟叶中表达Griffithsin(O'Keefe et al.(2009)Proc.Nat.Acad.Sci.USA 106(15):6099-6104)。甲病毒载体，例如基于Semliki Forest病毒的载体和基于Sindbis病毒的载体，也已被开发用于基因治疗和免疫治疗。参见Schlesinger&Dubensky(1999)Curr.Opin.Biotechnol.5:434-439和Ying et al.(1999)Nat.Med.5(7):823-827。在基因转移由逆转录病毒载体介导的方面，载体构建体是指包含逆转录病毒基因组或其部分以及治疗基因的多核苷酸。
如本文所用，“逆转录病毒介导的基因转移”或“逆转录病毒转导”具有相同的含义，是指通过病毒进入细胞并整合其基因组进入宿主细胞基因组，而将基因或核酸序列稳定地转移到宿主细胞中的过程。病毒可以通过其正常的感染机制进入宿主细胞，也可以通过修饰使其与不同的宿主细胞表面受体或配体结合进入细胞。如本文所用，逆转录病毒载体是指能够通过病毒或病毒样进入机制将外源核酸引入细胞的病毒颗粒。
逆转录病毒以RNA的形式携带其遗传信息；然而，一旦病毒感染细胞，RNA就会被逆转录成DNA形式，并整合到被感染细胞的基因组DNA中。整合的DNA形式称为前病毒。
在基因转移由DNA病毒载体介导的方面，例如腺病毒(Ad)或腺相关病毒(AAV)，载体构建体是指包含病毒基因组或其部分和转基因的多核苷酸。腺病毒(Ad)是一个相对充分表征的同源病毒群，包括50多种血清型。参见例如PCT国际申请公开号WO 95/27071。Ad不需要整合到宿主细胞基因组中。也已经构建了重组Ad衍生的载体，特别是那些降低重组和产生野生型病毒的可能性的载体。参见PCT国际申请公开号WO 95/00655和WO 95/11984。野生型AAV具有整合到宿主细胞基因组中的高感染性和特异性。参见Hermonat&Muzyczka(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6466-6470和Lebkowski et al.(1988)Mol.Cell.Biol.8:3988-3996。
包含启动子和可操作地连接多核苷酸的克隆位点的载体是本领域公知的。此类载体能够在体外或体内转录RNA，并且可从诸如Stratagene(La Jolla,CA)和PromegaBiotech(Madison,Wis.)等来源商购获得。为了优化表达和/或体外转录，可能需要去除、添加或改变克隆的5'和/或3'非翻译部分，以消除额外的、潜在的不适当的替代翻译起始密码子或其他可能在转录或翻译水平上干扰或减少表达的序列。或者，可以在起始密码子的5'处立即插入共有核糖体结合位点以增强表达。
基因传递载体还包括DNA/脂质体复合物、胶束和靶向病毒蛋白-DNA复合物。还包含靶向抗体或其片段的脂质体可用于本文公开的方法中。除了将多核苷酸递送至细胞或细胞群之外，将本文所述的蛋白质直接引入细胞或细胞群可以通过蛋白质转染的非限制性技术进行，或者，其他非限制性技术是在可以增强本文公开的蛋白质的表达和/或促进本文公开的蛋白质的活性的条件下进行培养。
如本文所用，术语“抗体”和“免疫球蛋白”包括完整抗体及其任何抗原结合片段或单链。因此，术语“抗体”包括包含至少一部分免疫球蛋白分子的任何含有蛋白质或肽的分子。术语“抗体”和“免疫球蛋白”还包括任何同种型的免疫球蛋白、保留与抗原特异性结合的抗体片段，包括但不限于Fab、Fab'、F(ab)2、Fv、scFv、dsFv、Fd片段、dAb、VH、VL、VhH和V-NAR结构域；小体、双体、三体、四体和κ体；以及由一种或多种分离的抗体片段形成的多特异性抗体片段。这样的例子包括但不限于重链或轻链或其配体结合部分的互补决定区(CDR)、重链或轻链可变区(其在本文中也称为可变区)、重链或轻链恒定区(其在本文中也称为恒定区)、框架(FR)区或其任何部分、结合蛋白的至少一部分、嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体，以及包含抗体的抗原结合部分和非抗体蛋白的融合蛋白。免疫球蛋白分子的重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合域。抗体(Ab)的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织的结合。例如，当在蛋白质名称之前使用术语“抗”时，例如抗DNABII、抗IHF、抗HU、抗OMP P5，是指结合特定的蛋白质和/或对特定的蛋白质具有亲和力的单克隆或多克隆抗体。例如，“抗IHF”是指与IHF蛋白结合的抗体。特异性抗体可能与它所针对的蛋白质以外的蛋白质具有亲和力或结合。例如，抗IHF，虽然是针对IHF蛋白特异性产生的，但也可能与其他因序列同源性或结构同源性相关的蛋白质结合。
互补决定区(CDR)是分别由B细胞和T细胞产生的抗体或T细胞受体的可变区的一部分，其中这些分子与其特异性抗原(也称为表位)结合。在某些实施方案中，术语“可变区”和“可变结构域”可互换使用，是指抗体轻链或重链的多肽，其氨基酸残基序列从一种抗体到另一种抗体变化很大，并且决定结合位点的构象，其赋予抗体对特定抗原的特异性。在进一步的实施方案中，可变区为约90个氨基酸长至约200个氨基酸长，包括但不限于约100个氨基酸长，或可选地约110个氨基酸长，或可选地约120个氨基酸长，或可选地约130个氨基酸长，或者可选地约140个氨基酸长，或者可选地约150个氨基酸长，或者可选地约160个氨基酸长，或者可选地约170个氨基酸长，或者可选地约180个氨基酸长，或者可选地约190个氨基酸长。在某些实施方案中，如本文所用的氨基酸序列的可变区是指氨基酸序列的前约100个氨基酸，或约110个氨基酸，或约120个氨基酸，或约130个氨基酸，或约140个氨基酸，或者约150个氨基酸(包括或不包括信号肽，如果适用)是可变区。
一组CDR构成一个互补位，也称为抗原结合位点，它是识别和结合抗原的抗体的一部分。在抗原受体如重链或轻链的可变区氨基酸序列上存在三个非连续排列的任选地从氨基末端到羧基末端的CDR(CDR1、CDR2和CDR3)。如本文所用，CDRn是指免疫球蛋白链中的或衍生自免疫球蛋白链的CDRn，其中数字n选自1-3。在一个实施方案中，CDRLn是指轻链中的或衍生自轻链的CDRn，其中数字n选自1-3；而CDRHn是指重链中的或衍生自重链的CDRHn，其中数字n选自1-3。在某些实施方案中，框架区(FR)是指可变区中不是CDR的部分。在某些实施方案中，FRn是指在重链或轻链中或衍生自重链或轻链的FR，并且其中数字n选自1-4。在某些实施方案中，可变区包含或实质上由以下组成，或进一步由以下组成(任选地按照所提供的顺序，并且进一步任选地从氨基末端到羧基末端)：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。
抗体或其片段的可变区和/或CDR可以由本领域技术人员确定，例如，使用公开或商业可得的工具。此类工具的非限制性示例包括IgBlast(可在www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/访问)、Scaligner(可从drugdesigntech在www.scaligner.com/获得)、IMGT规则和/或工具(参见，例如，www.imgt.org/IMGTScientificChart/Nomenclature/IMGT-FRCDRdefinition.html，也可在www.imgt.org/访问)，Chothia Canonical Assignment(可在www.bioinf.org.uk/abs/chothia.html访问)，Antigen receptor Numbering AndReceptor CalssificatiIon(ANARCI，可在opig.stats.ox.ac.uk/webapps/newsabdab/sabpred/anarci/访问)，Kabat编号方法/方案(例如，Kabat,E.A.,et al.,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition,U.S.Departmentof Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242)或Paratome网络服务器(可在www.ofranlab.org/paratome/访问，参见Vered Kunik,et al,Nucleic AcidsResearch,Volume 40,Issue W1,1July 2012,Pages W521–W524)。
抗体可以是多克隆的、单克隆的、多特异性的(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出所需的生物活性即可。抗体可以从任何合适的生物来源分离，例如鼠、大鼠、绵羊和犬。
如本文所用，术语“多克隆抗体”或“多克隆抗体组合物”是指衍生自不同B细胞系的抗体制剂。它们是针对特定抗原分泌的免疫球蛋白分子的混合物，每种分子识别不同的表位。
如本文所用，“单克隆抗体”是指从实质上同质的抗体群体获得的抗体。单克隆抗体具有高度特异性，因为每种单克隆抗体都针对抗原上的单个决定簇。抗体可以被可检测地标记，例如用放射性同位素、产生可检测产物的酶、荧光蛋白等。抗体可以进一步缀合至其他部分，例如特异性结合对的成员，例如生物素(生物素-抗生物素蛋白特异性结合对的成员)等。抗体也可以与固体支持物结合，包括但不限于聚苯乙烯板或珠等。
可以使用本领域已知的杂交瘤技术或重组DNA方法产生单克隆抗体。杂交瘤是在实验室中由产生抗体的淋巴细胞和不产生抗体的癌细胞(通常是骨髓瘤或淋巴瘤)融合而成的细胞。杂交瘤增殖并产生特定单克隆抗体的连续样品。用于产生或选择抗体的替代技术包括将淋巴细胞体外暴露于感兴趣的抗原，以及在细胞、噬菌体或类似系统中筛选抗体展示文库。
如本文所用，术语“人抗体”旨在包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本文公开的人抗体可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用的术语“人抗体”不旨在包括其中源自另一哺乳动物物种例如小鼠的种系的CDR序列已移植到人框架序列上的抗体。因此，如本文所用，术语“人抗体”是指这样的抗体，其中实质上每个部分的蛋白质(例如，CDR、框架、CL、CH结构域(例如，CH1、CH2、CH3)、铰链、(VL、VH))在人类中实质上是非免疫原性的，并且只有很小的序列变化或变异。类似地，指定为灵长类动物(猴子、狒狒、黑猩猩等)、啮齿动物(小鼠、大鼠、兔、豚鼠、仓鼠等)和其他哺乳动物的抗体是指此类物种、亚属、属、亚科、科特异性抗体。此外，嵌合抗体包括上述的任何组合。相对于未修饰的抗体，此类变化或改变任选地保留或降低在人或其他物种中的免疫原性。因此，人抗体不同于嵌合或人源化抗体。要指出的是，人抗体可由能够表达功能重排的人免疫球蛋白(例如，重链和/或轻链)基因的非人动物或原核或真核细胞产生。此外，当人抗体是单链抗体时，它可以包含在天然人抗体中不存在的接头肽。例如，Fv可以包含连接重链可变区和轻链可变区的连接肽，例如2至约8个甘氨酸或其他氨基酸残基。这种接头肽被认为是人类来源的。
如本文所用，如果抗体获自使用人免疫球蛋白序列的系统，例如通过免疫携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠或通过筛选人免疫球蛋白基因文库，则人抗体“源自”特定种系序列。“源自”人种系免疫球蛋白序列的人抗体可以通过将人抗体的氨基酸序列与人种系免疫球蛋白的氨基酸序列进行比较来鉴定。选定的人抗体通常在氨基酸序列上与人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列具有至少90％的同一性，并且当与其他物种的种系免疫球蛋白氨基酸序列(例如，鼠种系序列)相比时，选择的人抗体含有将人抗体鉴定为人的氨基酸残基。在某些情况下，人抗体可以在氨基酸序列上与由种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列具有至少95％，甚至至少96％、97％、98％或99％的同一性。通常，源自特定人种系序列的人抗体与人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列的差异不超过10个氨基酸。在某些情况下，人抗体可能与由种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列显示不超过5个，甚至不超过4、3、2或1个氨基酸的差异。
如本文所用，术语“人源化抗体”或“人源化免疫球蛋白”是指包含源自非人免疫球蛋白的最小序列的人/非人嵌合抗体。在大多数情况下，人源化抗体是人免疫球蛋白(受者抗体)，其中来自受者的可变区或其片段(例如，1、2、3、4、5或所有6个CDR)的残基被替换为来自非人类物种(供体抗体)(例如小鼠、大鼠、兔或非人类灵长类动物的、具有所需的特异性、亲和力和能力的可变区或其片段(例如，1、2、3、4、5或所有6个CDR)的残基。人源化抗体可包含在受者抗体或供体抗体中未发现的残基。人源化抗体还可以任选地包含免疫球蛋白(通常是人免疫球蛋白)恒定区(Fc)的至少一部分，在框架区、恒定区或CDR的一个或多个氨基酸被来自人抗体的相应位置的氨基酸取代的非人抗体。不希望受理论束缚，与相同抗体的非人源化版本相比，人源化抗体在人宿主中产生降低的免疫反应。人源化抗体可以具有对抗原结合或其他抗体功能实质上没有影响的保守氨基酸取代。保守取代分组包括：甘氨酸-丙氨酸、缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、丝氨酸-苏氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。具体而言，如本文所公开的人源化抗体以下述一项或多项的特定范围特异性结合DNABII多肽或其片段(例如头部嵌合肽或尾部嵌合肽)：EC50、Kon、Koff、KA和/或KD，并且在治疗对象时抑制或释放特定细胞因子。在另一个实施方案中，特异性结合DNABII多肽(例如头部嵌合肽)的头部区域的人源化抗体在体内和体外都破坏生物膜。此外，人源化过程虽然是一个合理的设计过程，但可能会在以下方面产生意想不到的变化(积极的或消极的)，例如结合亲和力、抗原特异性或物理特性(例如溶解性或聚集性)；因此，人源化抗体的性质不能从起始的非人抗体的性质固有地预测。
在一个实施方案中，如本文所用的抗体可以是重组抗体。如本文所用，术语“重组抗体”包括通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有抗体，例如从转染了免疫球蛋白基因的转基因或转染色体动物(例如小鼠)或从其制备的杂交瘤分离的抗体、从转化以表达抗体的宿主细胞(例如转染瘤(transfectoma))中分离的抗体、从重组的组合抗体文库中分离的抗体，以及通过任何其他涉及将免疫球蛋白(Ig)基因序列剪接到其他DNA序列的方式制备、表达、产生或分离的抗体。然而，在某些实施方案中，可对此类重组抗体进行体外诱变(或者，当使用Ig序列转基因动物时，进行体内体细胞诱变)，因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列可能是不在体内抗体种系库中天然存在的序列。本文描述了制备这些抗体的方法。
在一个实施方案中，如本文所用的抗体可以是嵌合抗体。如本文所用，嵌合抗体是其轻链和重链基因通常通过基因工程从属于不同物种的抗体可变区和恒定区基因构建的抗体。
如本文所用，术语“抗体衍生物”包括全长抗体或抗体片段，其中一个或多个氨基酸通过烷基化、聚乙二醇化、酰化、酯形成或酰胺形成等进行化学修饰，例如，以用于将抗体连接到第二个分子。这包括但不限于聚乙二醇化抗体、半胱氨酸聚乙二醇化抗体及其变体。
如本文所用，术语“标记”意指直接或间接与待检测的组合物缀合的可直接或间接检测的化合物或组分，例如N-末端组氨酸标签(N-His)、磁性活性同位素，例如，115Sn、117Sn和119Sn，非放射性同位素，如13C和15N，多核苷酸或蛋白质，如抗体，以产生“标记”组分。该术语还包括与多核苷酸缀合的序列，其将在插入序列的表达时提供信号，例如绿色荧光蛋白(GFP)等。标记本身可以是可检测的(例如，放射性同位素标记或荧光标记)，或者在酶标记的情况下，可以催化可检测的底物化合物或组分的化学变化。标记可适用于小规模检测或更适用于高通量筛选。因此，合适的标记包括但不限于磁性活性同位素、非放射性同位素、放射性同位素、荧光染料、化学发光化合物、染料和蛋白质(包括酶)。可以简单地检测标记，也可以对其进行量化。简单检测的响应通常包括其存在仅被证实的响应，而量化的响应通常包括具有可量化(例如，数字可报告)值的响应，例如强度、极化和/或其他特性。在发光或荧光测定中，可检测的响应可以直接使用与实际参与结合的测定组分相关的发光团或荧光团产生，或间接使用与另一种(例如，报道分子或指示剂)组分相关的发光团或荧光团产生。产生信号的发光标记的例子包括但不限于生物发光和化学发光。可检测的发光响应通常包括发光信号的变化或出现。用于发光标记测定组分的合适方法和发光团是本领域已知的并且例如描述于Haugland,Richard P.(1996)Handbook of Fluorescent Probes andResearch Chemicals(6th ed)。发光探针的例子包括但不限于水母发光蛋白和萤光素酶。
如本文所用，术语“免疫缀合物”包括与第二试剂联接或连接的抗体或抗体衍生物，例如细胞毒剂、可检测试剂、放射性试剂、靶向剂、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、合成抗体、半合成抗体或多特异性抗体。
合适的荧光标记的例子包括但不限于荧光素、罗丹明、四甲基罗丹明、曙红、赤藓红、香豆素、甲基香豆素、芘、孔雀石绿、芪、Lucifer Yellow、Cascade BlueTM和德克萨斯红。其他合适的光学染料描述于Haugland,Richard P.(1996)Handbook of FluorescentProbes and Research Chemicals(6th ed.)。
在另一个方面，荧光标记被功能化以促进与细胞或组织表面中或表面上存在的细胞成分(例如细胞表面标志物)的共价连接。合适的官能团包括但不限于异硫氰酸酯基团、氨基、卤代乙酰基、马来酰亚胺、琥珀酰亚胺酯和磺酰卤，所有这些都可以用于将荧光标记连接到第二分子上。荧光标记的官能团的选择将取决于与接头、试剂、标志物或第二标记试剂的连接位点。
“真核细胞”包括除了无核原虫类以外的所有生命王国。它们可以通过膜结合的细胞核轻松区分。动物、植物、真菌和原生生物是真核生物或生物体，其细胞通过内膜和细胞骨架组织成复杂结构。最具特征的膜结合结构是细胞核。除非特别说明，否则术语“宿主”包括真核宿主，包括例如酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞。真核细胞或宿主的非限制性实例包括猿、牛、猪、鼠、大鼠、鸟类、爬行类和人。
“原核细胞”通常缺乏细胞核或任何其他与膜结合的细胞器，分为两个域，细菌和古生菌。除了染色体DNA，这些细胞还可以在称为附加体的环状环中包含遗传信息。细菌细胞非常小，大约是动物线粒体的大小(直径约1-2μm，长约10μm)。原核细胞具有三种主要形状：棒状、球形和螺旋状。细菌细胞不像真核生物那样经历复杂的复制过程，而是通过二元裂变进行分裂。例子包括但不限于芽孢杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌。
“天然”抗原是从天然生物来源中分离的含有表位的多肽、蛋白质或片段，其可以特异性结合对象中的抗原受体，特别是T细胞抗原受体(TCR)。
术语“抗原”和“抗原性”是指能够被抗体识别或以其他方式充当抗体-配体对成员的分子。“特异性结合”或“结合”是指抗原与免疫球蛋白重链和轻链可变区的相互作用。抗体-抗原结合可以在体内或体外发生。本领域技术人员将理解包括蛋白质、核酸、脂肪酸、脂质、脂多糖和多糖在内的大分子具有充当抗原的潜力。本领域技术人员将进一步理解，编码具有作为抗体配体的潜力的蛋白质的核酸必然编码抗原。本领域技术人员将进一步理解，抗原不限于全长分子，还可以包括部分分子。术语“抗原”是对具有抗原特性的分子的形容词。该术语包括免疫原性物质，即免疫原，以及诱导免疫无反应性或无能的物质，即过敏原。
“改变的抗原”是具有与相应的野生型抗原不同的一级序列的抗原。改变的抗原可以通过合成或重组方法制备，包括但不限于在翻译过程中或翻译后差异修饰的抗原肽，例如通过磷酸化、糖基化、交联、酰化、蛋白水解切割、与抗体分子、膜分子或其他配体连接。(Ferguson et al.(1988)Ann.Rev.Biochem.57:285-320)。本文公开的合成或改变的抗原旨在与天然表位结合相同的TCR。
在本文中也称为天然或野生型抗原的“自身抗原”是指由于对抗原的自身耐受性而在对象中诱导很少或不诱导免疫反应的抗原肽。自身抗原的一个例子是黑色素瘤特异性抗原gp100。
“免疫反应”泛指淋巴细胞对外源物质的抗原特异性反应。术语“免疫原”和“免疫原性”是指具有引发免疫反应能力的分子。所有的免疫原都是抗原，然而，并非所有的抗原都是免疫原性的。本文公开的免疫反应可以是体液的(通过抗体活性)或细胞介导的(通过T细胞活化)。该反应可能发生在体内或体外。本领域技术人员将理解多种大分子，包括蛋白质、核酸、脂肪酸、脂质、脂多糖和多糖具有免疫原性的潜力。本领域技术人员将进一步理解编码能够引发免疫反应的分子的核酸必然编码免疫原。本领域技术人员将进一步理解免疫原不限于全长分子，而是可以包括部分分子。
术语“被动免疫”是指通过抗体转移将免疫从一个对象转移到另一个对象。被动免疫可能会自然发生，就像母体抗体转移到胎儿时一样。当抗体组合物施用于非免疫对象时，也可以人为地发生被动免疫。抗体供体和受体可以是人类或非人类对象。抗体可以是多克隆的或单克隆的，可以在体外或体内产生，并且取决于实施方案可以是纯化的、部分纯化的或未纯化的。在本文所述的一些实施方案中，通过施用特异性识别或结合特定抗原的抗体或抗原结合片段将被动免疫赋予有需要的对象。在一些实施方案中，通过施用编码特异性识别或结合特定抗原的抗体或抗原结合片段的分离的或重组的多核苷酸来赋予被动免疫。
在本公开的上下文中，“配体”是多肽。在一个方面，如本文所用的术语“配体”是指与另一分子上的特定位点结合的任何分子。换言之，配体赋予蛋白质在与免疫效应细胞或针对蛋白质的抗体或针对蛋白质的DNA的反应中的特异性。在一个方面，蛋白质内的配体位点直接与免疫效应细胞上的互补结合位点结合。
如本文所用，可互换使用的“固相支持物”或“固体支持物”不限于特定类型的支持物。相反，本领域普通技术人员已知且可得到大量的支持物。固相支持物包括硅胶、树脂、衍生塑料薄膜、玻璃珠、棉花、塑料珠、氧化铝凝胶。如本文所用，“固体支持物”还包括合成的抗原呈递基质、细胞和脂质体。可以根据所需的最终用途和对各种方案的适用性来选择合适的固相支持物。例如，对于肽合成，固相支持物可以指树脂，例如聚苯乙烯(例如，从Bachem Inc.、Peninsula Laboratories等获得的PAM-树脂)、树脂(从Aminotech,Canada获得)、聚酰胺树脂(从Peninsula Laboratories获得)、接枝有聚乙二醇的聚苯乙烯树脂(Rapp Polymere,Tubingen,Germany)或聚二甲基丙烯酰胺树脂(从Milligen/Biosearch,CA获得)。
固相支持物的例子包括玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、葡聚糖、尼龙、淀粉酶、天然和改性纤维素、聚丙烯酰胺、辉长岩和磁铁矿。载体的性质可以在一定程度上是可溶的或不溶的。支持材料实际上可以具有任何可能的结构构型，只要偶联分子能够结合多核苷酸、多肽或抗体。因此，支持结构可以是球形的，如珠状，或圆柱形的，如试管的内表面或杆的外表面。或者，表面可以是平坦的，例如片材、测试条等，或者聚苯乙烯珠。本领域技术人员将知道许多其他适合结合抗体或抗原的载体，或者将能够通过使用常规实验确定这些载体。
如本文所用，可以从对象、细胞系或培养的细胞或组织获得生物样品或样品。示例性样品包括但不限于细胞样品、组织样品、液体样品例如血液和其他生物来源的液体样品(包括但不限于眼液(房水和玻璃体液)、外周血、血清、血浆、腹水、尿液、脑脊液(CSF)、痰、唾液、骨髓、滑液、房水、羊水、耵聍、母乳、支气管肺泡灌洗液、精液、前列腺液、考珀氏液或射精前液、女性射精、汗液、眼泪、囊液、胸腹水、心包液、腹水、淋巴液、食糜、乳糜、胆汁、间质液、月经、脓液、皮脂、呕吐物、阴道分泌物/冲洗液、滑液、黏膜分泌物、粪便水、胰液、来自窦腔的灌洗液、支气管肺吸出物、胚泡腔液或脐带血。在一个实施方案中，生物样品被怀疑具有生物膜。在另一个实施方案中，生物样品包括生物膜。
如本文所用，术语“信号肽”或“信号多肽”意指通常存在于新合成的分泌或膜多肽或蛋白质的N末端的氨基酸序列。它的作用是将多肽引导至特定的细胞位置，例如穿过细胞膜、进入细胞膜或进入细胞核。在一些实施方案中，信号肽在定位后被去除。信号肽的例子是本领域众所周知的。非限制性示例是美国专利号8,853,381、5,958,736和8,795,965中描述的那些。
如本文所用，术语“嵌合体”或“嵌合肽”是指重组多肽，其包含DNABII多肽的彼此直接或间接(例如通过接头)缀合的两个或更多个片段或结构域，或实质上由其构成，或由其构成。在一个实施方案中，这些结构域是构象头部结构域和/或构象尾部结构域。此外或可选地，这两个或更多个片段或结构域源自相同或不同的DNABII多肽。在一个实施方案中，嵌合肽包含彼此直接或间接(例如通过接头)缀合的IhfA头部结构域和IhfB头部结构域，或实质上由其构成，或由其构成。在另一个实施方案中，嵌合肽包含彼此直接或间接(例如通过接头)缀合的IhfA尾部结构域和IhfB尾部结构域，或实质上由其构成，或由其构成。多肽的“构象头部结构域”是指包含一级氨基酸序列的多肽，其中该结构具有反平行β条带，该β条带具有通常由脯氨酸残基介导急弯(sharp turn)。IHF多肽的“头部”显示在WO2018/129078的图1中。
在某些实施方案中，头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI包含下述多肽序列，或实质上由其组成，或由其组成：RPGRNPX1TGDVVPVSARRVV-X-FSLHHRQPRLGRNPX1TGDSV(SEQ ID NO:38)，其中“X”是任选的氨基酸接头序列，任选地包含1至20个氨基酸(或实质上由其组成，或由其组成)；并且其中“X1”是任何氨基酸，或者“X1”选自氨基酸Q、R、K、S或T。在另一方面，“X1”是K或Q。在进一步的实施方式中，头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI包含下述多肽序列，或实质上由其组成，或由其组成：RPGRNPKTGDVVPVSARRVV-X-FSLHHRQPRLGRNPKTGDSV(SEQ ID NO:39)，其中“X”是任选的氨基酸接头序列，任选地包含1至20个氨基酸(或实质上由其组成，或由其组成)。在进一步的实施方式中，头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI包含下述多肽序列，或实质上由其组成，或由其组成：RPGRNPKTGDVVPVSARRVVGPSLFSLHHRQPRLGRNPKTGDSV(SEQ ID NO:40)。
在某些实施方案中，尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI包含下述多肽序列，或实质上由其组成，或由其组成：FLEEIRLSLESGQDVKLSGF-X-TLSAKEIENMVKDILEFISQ(SEQ ID NO:41)，其中“X”是任选的氨基酸接头序列，任选地包含1至20个氨基酸(或实质上由其组成，或由其组成)。在某些实施方案中，接头选自SEQ ID NO:42-49中的任一个或多个。在一个实施方式中，尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI包含下述多肽序列，或实质上由其组成，或由其组成：FLEEIRLSLESGQDVKLSGFGPSLTLSAKEIENMVKDILEFISQ(SEQ ID NO:50)。
如本文所用，术语“EC50”是指在特定暴露时间后诱导在基线和最大值之间的中间的反应(例如，抗体或其片段与其靶标之间的结合)的抗体或其片段的浓度。
本文使用几个参数来描述受体(R，例如抗体或其片段)和配体(L，例如抗体或其片段的靶标)分子的结合和解离反应，其形式化为：该反应以结合速率常数kon和解离速率常数koff来表征，其单位分别为M-1s-1和s-1。在平衡状态下，正向结合转变R+L→RL应被反向非结合转变RL→R+L平衡。即kon[R][L]＝koff[RL]，其中[R]、[L]和[RL]代表未结合的游离受体的浓度、未结合的游离配体的浓度和受体-配体复合物的浓度。此外，平衡解离常数“KD”可以计算为koff/kon，即[R]x[L]/[RL]，而平衡缔合常数“KA”可以计算为kon/koff，即[RL]/([R]x[L]。
如本文所用，术语“细胞因子”是指在细胞信号传导中重要的小蛋白(约5-20kDa)，包括但不限于趋化因子、干扰素、白细胞介素(IL)、淋巴因子和肿瘤坏死因子，但通常不包括激素。细胞因子是肽，不能穿过细胞的脂质双层进入细胞质。炎性细胞因子或促炎细胞因子是一种信号分子(细胞因子)，由辅助T细胞(Th)和巨噬细胞等免疫细胞以及某些其他促进炎症的细胞类型分泌。它们包括(但不限于)白细胞介素-1(IL-1)、IL-12和IL-18、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFNγ)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)并在介导先天免疫反应中发挥重要作用。炎症细胞因子主要由炎症反应的上调产生并参与其中。术语“抗炎细胞因子”包括控制促炎细胞因子反应的免疫调节分子。细胞因子与特定的细胞因子抑制剂和可溶性细胞因子受体共同作用以调节人体免疫反应。主要的抗炎细胞因子包括白细胞介素(IL)-1受体拮抗剂、IL-4、IL-6、IL-10、IL-11和IL-13。IL-1、肿瘤坏死因子-α和IL-18的特定细胞因子受体也可作为促炎细胞因子抑制剂。测量细胞因子(包括抗炎细胞因子和促炎细胞因子)水平的方法是本领域公知的。例如，可以使用市售的酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒测量血清细胞因子水平。
如本文所用，术语“抗感染药”是指能够抑制传染性生物的传播或彻底杀死传染性生物的药物。该术语包括但不限于抗生素、抗真菌剂、驱虫药、抗疟药、抗原虫药、抗结核药和抗病毒药。抗真菌剂也称为抗霉菌剂。它们杀死或灭活真菌并用于治疗真菌感染(包括酵母菌感染)。一个非限制性实例，多烯抗真菌剂在口服时不被吸收，因此用于治疗胃肠道的真菌感染，例如鹅口疮。另一个非限制性实例是唑类抗真菌剂，它是合成的具有广谱活性的抑菌剂，棘白菌素是非竞争性抑制(1,3)β-d-葡聚糖合酶并靶向真菌细胞壁的脂肽分子，黄腐霉素U/F(即灰黄霉素)、Grifulvin V(Pro)(即灰黄霉素)、Lamisil(Pro)(即特比萘芬)、Gris-PEG(Pro)(即灰黄霉素)、Ancobon(Pro)(即氟胞嘧啶)、Fuvicin P/G(即灰黄霉素)和Terbinex(Pro)(即特比萘芬)。可以在例如www.drugbank.ca/categories/DBCAT000065上找到更多抗感染药物。术语“抗病毒”是指用于治疗病毒感染的一类药物。大多数抗病毒药物针对特定病毒，而广谱抗病毒药物对多种病毒有效。与大多数抗生素不同，抗病毒药物不会破坏其目标病原体；相反，它们抑制了它们的发展。它们可能起作用的一些方式包括通过抑制病毒DNA聚合酶来防止病毒复制；与特定的细胞表面受体结合并抑制病毒渗透或脱壳；抑制病毒蛋白质合成；或阻止病毒组装的后期阶段。可以在例如www.drugbank.ca/categories/DBCAT000066找到抗病毒剂的非限制性例子。
如本文所用，术语“抗寄生虫药”是指用于治疗寄生虫病的一类药物，例如由蠕虫、变形虫、外寄生虫、寄生真菌和原生动物等引起的寄生虫病。可以在例如www.drugbank.ca/categories/DBCAT000522找到抗寄生虫的非限制性示例。
执行本公开的模式
抗体组合物
本公开提供了一种分离的抗体，其包含重链(HC)可变域序列和轻链(LC)可变域序列，其中重链和轻链免疫球蛋白可变域序列形成抗原结合位点，其结合DNABII蛋白的表位。在某些实施方案中，抗体或其片段结合DNABII肽(例如DNABII肽的头部区域，包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域，和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI；和/或DNABII肽的尾部区域，包括但不限于：IHF或HU的尾部区域，IHFA或IHFB的尾部区域，和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在一个实施方案中，抗体或其片段结合头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI。在另一个实施方案中，抗体或其片段结合尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI。
在一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 144的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 132的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 473的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含选自SEQID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 239、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 233的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含选自SEQ ID NO:7-12、14、25或27的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的氨基酸(aa)25至144的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:6-9、14或25的aa 21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一个方面，本文提供一种抗体或其抗原结合片段，其包括以下CDR序列，或实质上由其组成，或由其组成：选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26或其每个的等同体的序列的任何一个、任何两个或所有三个CDR；和/或选自SEQ ID NO:7-12、14、25或27或其每个的等同体的序列的任何一个、任何两个或所有三个CDR。
在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:13、24或26的aa 25至aa 144的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:14或25的aa 21至aa 132、SEQ ID NO:27的aa 21至aa 126的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ IDNO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 144的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
本文还提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126或其每个的等同体的任一个氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:2的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa21至aa 126或其每个的等同体的任一个氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个方面，本文还提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126或其每个的等同体的任一个氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126或其每个的等同体的任一个氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa21至aa 126或其每个的等同体的任一个氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126或其每个的等同体的任一个氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1-6、13、24或26的任一个的aa 25至aa144的氨基酸序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1-6、13、24或26的任一个的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1-6、13、24或26的任一个的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1-6、13、24或26的任一个的aa 25至aa144的氨基酸序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1-6、13、24或26的任一个的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1-6、13、24或26的任一个的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其每个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:2的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:2的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQID NO:2的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
本文还提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个方面，本文还提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个方面，本文还提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在一个实施方式中，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ IDNO:10的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一个实施方式中，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQID NO:10的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个方面，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，本文提供抗体或其抗原结合片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在一个方面，本文提供抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:24的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:25的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段结合DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域，和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在一个实施方式中，所述抗体或其片段结合至头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI。在另一个实施方式中，所述片段是抗原结合片段。在一个实施方式中，本文提供抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，本文提供抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，本文提供抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，本文提供抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:2的aa25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:2的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:2的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ IDNO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一方面，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:26的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:27的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段结合至DNABII肽的尾部区域(包括但不限于IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在一个实施方式中，所述抗体或其片段结合尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI。在另一个实施方式中，所述片段是抗原结合片段。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述片段是抗原结合片段。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ IDNO:11的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含
SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ IDNO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在一个方面，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段结合至DNABII肽的头部区域(包括但不限于IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在一个实施方式中，所述抗体或其片段结合头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI。在另一个实施方式中，所述片段是抗原结合片段。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQID NO:2的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ IDNO:8的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQID NO:9的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQID NO:7的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一个方面，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)和轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段结合至DNABII肽的尾部区域(包括但不限于IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在一个实施方式中，所述抗体或其片段结合尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI。在另一个实施方式中，所述片段是抗原结合片段。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ IDNO:5的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQID NO:5的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ IDNO:12的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQID NO:10的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一个方面，本文提供一种抗体或其片段，其包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:24的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:25的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段结合至DNABII肽的头部区域(包括但不限于IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在一个实施方式中，所述抗体或其片段结合头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI。在另一个实施方式中，所述片段是抗原结合片段。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQID NO:1的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:2的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:2的aa25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ IDNO:8的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一个方面，本文提供一种抗体或其片段，其包含重链(HC)和轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:26的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:27的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段结合至DNABII肽的尾部区域(包括但不限于IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在一个实施方式中，所述抗体或其片段结合尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI。在另一个实施方式中，所述片段是抗原结合片段。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ IDNO:5的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:6的aa25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ IDNO:10的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包含重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在一个方面，本文提供一种抗体或其片段，其包括以下CDR序列，或实质上由其组成，或由其组成：选自SEQ ID NO:1-3或24或其每个的等同体的序列的任何一个、任何两个或所有三个CDR；和/或选自SEQ ID NO:7-9或25或其每个的等同体的序列的任何一个、任何两个或所有三个CDR。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段结合DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在一个实施方式中，所述抗体或其片段结合至头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI。在另一个实施方式中，所述片段是抗原结合片段。在一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包含以下CDR序列，或实质上由其组成，或由其组成：选自SEQ ID NO:1-3或24或其每个的等同体的序列的所有三个CDR；和/或选自SEQ ID NO:7-9或25或其每个的等同体的序列的所有三个CDR。
在另一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包括以下CDR序列，或实质上由其组成，或由其组成：选自SEQ ID NO:4-6或26或其每个的等同体的序列的任何一个、任何两个或所有三个CDR；和/或选自SEQ ID NO:10-12或27或其每个的等同体的序列的任何一个、任何两个或所有三个CDR。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段结合至DNABII肽的尾部区域(包括但不限于IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在一个实施方式中，所述抗体或其片段结合尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI。在另一个实施方式中，所述片段是抗原结合片段。在一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包含以下CDR序列，或实质上由其组成，或由其组成：选自SEQ ID NO:4-6或26或其每个的等同体的序列的所有三个CDR；和/或选自SEQ ID NO:10-12或27或其每个的等同体的序列的所有三个CDR。
在某些实施方案中，本文提供的抗体或其片段还包含一个或多个信号肽。在一个实施方案中，信号肽包含SEQ ID NO:1-6、13、24或26中任一个的氨基酸(aa)1至aa 24，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方案中，信号肽包含SEQ ID NO:7-12、14、25和27中任一个的aa 1至aa 20，或实质上由其组成，或由其组成。在进一步的实施方案中，信号肽位于轻链可变区的氨基末端。另外或可选地，相同的信号肽或不同的信号肽位于重链可变区的氨基末端。
本文提供的抗体或其片段可以是单特异性的或双特异性的。在一个实施方案中，抗体或其片段是三特异性的、或四特异性的或五特异性的。另外或可选地，抗体选自IgA(例如IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM抗体。在一个实施方案中，该抗体进一步包含选自以下的恒定区：IgA恒定区(例如IgA1恒定区或IgA2恒定区)、IgD恒定区、IgE恒定区、IgG恒定区(例如IgG1恒定区、IgG2恒定区、IgG3恒定区或IgG4恒定区)或IgM恒定区。
在某些实施方案中，氨基酸序列的等同体包含以下多肽，或实质上由其组成，或由其组成：与该氨基酸序列具有至少约80％(包括约80％至100％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％)的氨基酸同一性的多肽。另外或可选地，氨基酸序列的等同体包含以下多肽，或实质上由其组成，或由其组成：由在高度严格条件下与编码该氨基酸序列的多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸编码的多肽。在进一步的实施方案中，氨基酸序列的等同体包含以下多肽，或实质上由其组成，或由其组成：与该氨基酸序列具有至少约80％(包括约80％至100％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％)的氨基酸同一性的多肽。在某些实施方式中，氨基酸序列(例如抗体或其片段，或如本文公开的SEQ IDNO:1-14和24-26的任何一个或多个或其片段，包括但不限于SEQ ID NO:13、24或26的aa 25至aa 144、SEQ ID NO:14或25的aa 21至aa 132、SEQ ID NO:27的aa 21至aa 126、SEQ IDNO:13、24或26的aa 25至aa 473、SEQ ID NO:14或25的aa 21至aa 239、SEQ ID NO:27的aa21至aa 233)的等同体包含下述多肽、或实质上由其组成、或由其组成：包含该氨基酸序列的一个或多个或所有CDR的多肽。此外或可选地，该多肽与该氨基酸序列具有至少约80％(包括约80％至100％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％)的氨基酸同一性。
在某些实施方式中，氨基酸序列(例如抗体、其片段、其互补决定区(CDR)或含CDR多肽)的等同体与该氨基酸序列在CDR中缺少氨基酸区别。但是，氨基酸序列(例如抗体、其片段、其互补决定区(CDR)或含CDR多肽)的等同体，与该氨基酸序列相比，可在非CDR区包含一个或多个氨基酸区别，例如但不限于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸区别，条件是CDR的三维排列和/或CDR被保持。在某些实施方式中，氨基酸序列(例如抗体、其片段、其互补决定区(CDR)或含CDR多肽)的等同体多肽与该氨基酸序列具有至少约80％(包括约80％至100％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％)的氨基酸同一性，条件是CDR的三维排列和/或CDR被保持。
此类非CDR区的非限制性实例包括框架区(FR)、恒定区、Fc区、pFc'区、重链(CH)恒定结构域(例如CH1、CH2、CH3或CH4)、轻链(CL)恒定结构域或铰链区。在一个实施方案中，此类氨基酸差异可以是保守氨基酸取代和/或不改变抗体、其片段、其CDR或含CDR多肽的三维排列。在另一个实施方案中，等同体可以包含在CDR边界的保守氨基酸取代，例如在CDR的氨基末端、羧基末端或两者处的一个或两个氨基酸。
在一个方面，本文提供如本文所公开的抗体或其片段的一个或多个CDR(例如任何1个、或2个、或3个、或4个、或5个、或6个CDR)。在一个实施方案中，提供了一组CDR，其包含如本文所公开的抗体或其片段的一个或多个CDR(例如任何1个、或2个、或3个、或4个、或5个、或6个CDR)，或实质上由其组成，或由其组成。在一个实施方案中，提供了一组CDR，其包含如本文所公开的可变区的CDRL1、CDRL2和CDRL3，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方案中，提供了一组CDR，其包含如本文所公开的可变区的CDRH1、CDRH2和CDRH3，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方案中，提供了一组CDR，其包含如本文所公开的一个可变区的CDRL1、CDRL2和CDRL3以及如本文所公开的另一个可变区的CDRH1、CDRH2和CDRH3，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施例中，CDR组构成互补位。另外或可选地，该组CDR特异性结合DNABII肽(例如头部区域和/或尾部区域，包括但不限于：IHF或HU的头部区域，IHFA或IHFB的头部区域，头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在另一个实施方案中，提供了一种抗体、其片段或它们各自的等同体，其包含如本文公开的任何一个或多个CDR，或实质上由其组成，或由其组成。在又一个实施方案中，提供了一种抗体、其片段或它们各自的等同体，其包含如本文所公开的CDR组，或实质上由其组成，或由其组成。
在某些实施方案中，SEQ ID NO：1-13的CDR在下表中说明。在某些实施方案中，SEQID NO:1-6、13、24或26中任一项的CDRH1分别包含SEQ ID NO:1-6、13、24或26的氨基酸(aa)50至aa 57，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方案中，SEQ ID NO：1-6、13、24或26中任一项的CDRH2分别包含SEQ ID NO:1-6、13、24或26的氨基酸(aa)75至aa 82，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方案中，SEQ ID NO:1-6、13、24或26中任一项的CDRH3分别包含SEQ ID NO:1-6、13、24或26的氨基酸(aa)121至aa 133，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方案中，SEQ ID NO:7-9、14或25中任一项的CDRL1分别包含SEQ ID NO:7-9、14或25的氨基酸(aa)47至aa 57，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方案中，SEQ ID NO:7-9、14或25中任一项的CDRL2分别包含SEQ ID NO:7-9、14或25的氨基酸(aa)75至aa 77，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方案中，SEQ ID NO:7-9、14或25中任一项的CDRL3分别包含SEQ ID NO:7-9、14或25的氨基酸(aa)114至aa 122，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方案中，SEQ ID NO:10-12或27中任一项的CDRL1分别包含SEQID NO:10-12或27的氨基酸(aa)47至aa 52，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方案中，SEQ ID NO:10-12或27中任一项的CDRL2分别包含SEQ ID NO:10-12或27的氨基酸(aa)70至aa 72，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方案中，SEQ ID NO:10-12或27中任一项的CDRL3分别包含SEQ ID NO:10-12或27的氨基酸(aa)109至aa 116，或实质上由其组成，或由其组成。
在某些实施方式中，提供了以下两个表格中的CDR。
SEQ:SEQ ID NO
SEQ:SEQ ID NO
在某些实施方案中，提供了另一种CDR，其是如本文所鉴定的CDR并在其于相应的可变区序列中的氨基末端、羧基末端或两者处进一步包含另外的1个氨基酸、或2个氨基酸、或3个氨基酸、或4个氨基酸、或5个氨基酸、或6个氨基酸、或7个氨基酸、或8个氨基酸。此外或作为选择，提供了另一种CDR，其是如本文中所确定的CDR并在其于相应的可变区序列中的氨基末端或羧基末端或两者处截短1个氨基酸、或2个氨基酸、或3个氨基酸、或4个氨基酸、或5个氨基酸、或6个氨基酸、或7个氨基酸、或8个氨基酸。例如，SEQ ID NO:1的CDR1可以为SEQ ID NO:1的氨基酸50至氨基酸57。但是，SEQ ID NO:1的CDR1也可以开始于SEQ IDNO:1的氨基酸42、或43、或44、或45、或46、或47、或48、或49、或50、或51、或52、或53、或54或55、或56、或57、或58。此外，SEQ ID NO:1的CDR1可结束于SEQ ID NO:1的氨基酸49、或50、或51、或52、或53、或54或55、或56、或57、或58、或59、或60、或61、或62、或63、或64、或65，条件是CDR1结束于其开始之后。此外或作为选择，该CDR是约1个、或约2个、或约3个、或约4个、或约5个、或约6个、或约7个、或约8个、或约9个、或约10个、或约11个、或约12个、或约13个、或约14个、或约15个氨基酸长。
在某些实施方式中，SEQ ID NO:1-6中任一个的CDR2分别包含SEQ ID NO:1-6的每个的氨基酸71至氨基酸85，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ IDNO:1-6中任一个的CDR3分别包含SEQ ID NO:1-6的每个的氨基酸121至氨基酸133，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:7-9中任一个的CDR2分别包含SEQID NO:7-9的每个的氨基酸71至氨基酸81，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:7-9中任一个的CDR3分别包含SEQ ID NO:7-9的每个的氨基酸114至氨基酸121，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:10-12中任一个的CDR2分别包含SEQ ID NO:10-12的每个的氨基酸66至氨基酸76，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:10-12中任一个的CDR3分别包含SEQ ID NO:10-12的每个的氨基酸109至氨基酸115，或实质上由其组成，或由其组成。
在某些实施方式中，SEQ ID NO:1-6中任一个的CDR1分别包含SEQ ID NO:1-6的每个的氨基酸50至氨基酸57，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ IDNO:1-6中任一个的CDR2分别包含SEQ ID NO:1-6的每个的氨基酸75至氨基酸82，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:1-6中任一个的CDR3分别包含SEQID NO:1-6的每个的氨基酸121和氨基酸122，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:7-9中任一个的CDR1分别包含SEQ ID NO:7-9的每个的氨基酸47至氨基酸57，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:7-9中任一个的CDR2分别包含SEQ ID NO:7-9的每个的氨基酸75至氨基酸77，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:7-9中任一个的CDR3分别包含SEQ ID NO:7-9的每个的氨基酸114至氨基酸120，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:10-12中任一个的CDR1分别包含SEQ ID NO:10-12的每个的氨基酸47至氨基酸52，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:10-12中任一个的CDR2分别包含SEQ IDNO:10-12的每个的氨基酸70至氨基酸72，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:10-12中任一个的CDR3分别包含SEQ ID NO:10-12的每个的氨基酸109和氨基酸110，或实质上由其组成，或由其组成。
在某些实施方式中，SEQ ID NO:1-6中任一个的CDR1分别包含SEQ ID NO:1-6的每个的氨基酸47至氨基酸59，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ IDNO:1-6中任一个的CDR2分别包含SEQ ID NO:1-6的每个的氨基酸74至氨基酸83，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:7-9中任一个的CDR1分别包含SEQID NO:7-9的每个的氨基酸44至氨基酸59，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:7-9中任一个的CDR2分别包含SEQ ID NO:7-9的每个的氨基酸74至氨基酸81，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:7-9中任一个的CDR3分别包含SEQ ID NO:7-9的每个的氨基酸114至氨基酸122，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:10-12中任一个的CDR1分别包含SEQ ID NO:10-12的每个的氨基酸44至氨基酸54，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:10-12中任一个的CDR2分别包含SEQ ID NO:10-12的每个的氨基酸79至氨基酸76，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方式中，SEQ ID NO:10-12中任一个的CDR3分别包含SEQID NO:10-12的每个的氨基酸109至氨基酸116，或实质上由其组成，或由其组成。
在一方面，提供了如本文所公开的抗体或其片段的一个或多个可变区，和/或可变区的一个或多个等同物。在进一步的实施方案中，提供了一种抗体、其片段、或它们各自的等同体，其包含以下任意一种或任意两种或更多种组分，或实质上由其组成，或由其组成：如本文所公开的可变区和/或可变区的一个或多个等同体。此外或作为替代，该一个或多个可变区特异性结合DNABII肽(例如头部区域和/或尾部区域，包括但不限于：IHF或HU的头部区域，IHFA或IHFB的头部区域，头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在某些实施方案中，可变区选自：SEQID NO：1-6、13、24和26的氨基酸(aa)25至aa 144；SEQ ID NO：7-9、14和25的aa 21至aa132；SEQ ID NO：10-12或27的aa 21至aa 126；SEQ ID NO：1-6、13、24和26的氨基酸24至氨基酸144；SEQ ID NO：7-12、14、25和27的氨基酸20至氨基酸132；SEQ ID NO：7-12、14、25和27的氨基酸20至氨基酸126。
在进一步的实施方案中，可变区或其等同体是如本文所公开的可变区并且在其于本文以SEQ ID NO提供的相应序列中的氨基末端、或羧基末端或两者处进一步包含额外的1个氨基酸、或2个氨基酸、或3个氨基酸、或4个氨基酸、或5个氨基酸、或6个氨基酸、或7个氨基酸、或8个氨基酸。此外或作为替代，可变区或其等同体是如本文所公开的可变区并且在其于本文以SEQ ID NO提供的相应序列中的氨基末端、或羧基末端或两者处截短了1个氨基酸、或2个氨基酸、或3个氨基酸、或4个氨基酸、或5个氨基酸、或6个氨基酸、或7个氨基酸、或8个氨基酸。例如，SEQ ID NO:1的可以是SEQ ID NO:1的氨基酸50至氨基酸57。但是，与由SEQ ID NO：1的氨基酸24至氨基酸144组成的可变区相关的可变区或其等同物也可以从SEQID NO:1的氨基酸16、或17、或18、或19、或20、或21、或22、或23、或24、或25、或26、或27、或28、或29、或30、或31、或32开始。进一步地，与由SEQ ID NO：1的氨基酸24至氨基酸144组成的可变区相关的可变区或其等同物也可以结束于SEQ ID NO:1的氨基酸136、或137、或138、或139、或140、或141、或142、或143、或144、或145、或146、或147、或148、或149、或150、或151、或152，条件是可变区在其开始后结束。此外或作为替代，可变区为约90个氨基酸长至约200个氨基酸长，例如约100个氨基酸长，或约110个氨基酸长，或约120个氨基酸长，或约130个氨基酸长，或约140个氨基酸长，或约150个氨基酸长，或约160个氨基酸长，或约170个氨基酸长，或约180个氨基酸长，或约190个氨基酸长，或约200个氨基酸长。
此外或作为替代，抗体或其片段的等同体与该抗体或其片段相比，在可变结构域以外的区域(本文称为非VH区)包括一个或多个(例如但不限于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25)个氨基酸差异。此类非VH区包括但不限于恒定区、Fc区、pFc'区、重链恒定(CH)结构域(例如CH1、CH2、CH3或CH4)、轻链恒定(CL)结构域或铰链区。本领域技术人员将理解，本文公开的抗体、其片段或其各自的等同体可以在非VH区中进一步修饰(例如，用于增加重链与轻链的组装，直接或间接与可检测或纯化标志物或药物缀合，增加或减少补体的活化，增强或减少抗体依赖性细胞毒性(ADCC)，或增加或减少免疫细胞的激活和招募)，从而提供进一步的等同体。
在某些实施方案中，等同体在氨基末端、或羧基末端或两者处进一步包含多达50个，或者多达30个，或者多达25个，或者多达20个，或者多达15个，或者多达10个，或者多达5个随机氨基酸。在某些实施方案中，氨基酸序列的等同体包含在氨基末端、或羧基末端或两者处截短例如1、2、3、4、5，6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20或25个氨基酸的该氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。这样的添加或截短可以不改变CDR的三维排列和/或抗体、其片段、其CDR或含有CDR的多肽的三维排列。
在某些实施方案中，抗体或其片段在VH的氨基末端和/或VL的氨基末端包含信号肽。在一个实施方案中，VH信号肽不同于VL信号肽。在另一个实施方案中，VL信号肽和VH信号肽是相同的。在另一个实施方案中，信号肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸1-24的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。在又一个实施方案中，信号肽包含SEQ ID NO:7的氨基酸1-20的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。在某些实施方案中，抗体或其片段的等同体包含的信号肽不同于该抗体的信号肽，条件是等同体的信号肽，与该抗体的信号肽一样，将VH和/或VL引导至相同的细胞位置。
在某些实施方案中，抗体或其片段的等同体保留至少50％(例如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少99％)或改善该抗体或片段的一种或多种功能活性。此类功能活性包括但不限于对DNABII肽(例如头部区域和/或尾部区域，包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)的结合特异性、结合亲和力和/或亲和性，防止在体内或体外形成生物膜，或在体内或体外破坏生物膜。实施例中说明了量化此类功能活性的方法。
在另一方面，提供了与本文公开的抗体或其片段竞争结合表位的抗体或其片段。该抗体或其片段可以是多克隆、单克隆和/或人源化抗体。
在一方面，抗体是双特异性抗体或三特异性、四特异性或五特异性抗体。在另一方面，抗体是IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗体。在另一个方面，抗体进一步包含选自IgA、IgD、IgE、IgG或IgM恒定区的恒定区。在一个具体方面，恒定区是IgG1恒定区。在另一个方面，本文提供了与本文公开的抗体竞争结合表位的抗体。这些可以使用常规技术(例如竞争性ELISA)来识别。
如本文所公开的抗体可以是多克隆的、单克隆的或人源化的。在一方面，抗体结合DNABII多肽(例如HU或IHF(例如IhfA和IhfB))的“头部”区域。在另一方面，抗体结合DNABII多肽(例如HU或IHF(例如IhfA和IhfB))的“尾部”区域。如上所述，本公开提供了抗原结合片段。抗原结合片段是Fab、F(ab')2、Fab'、scFv或Fv中的任何一种，其可以使用本领域技术人员已知的常规技术制备。在本文提供的抗体的一些方面，抗体是可溶性Fab。在另一个方面，本公开提供了如本文公开的抗体的Fab片段，其中该抗体特异性结合DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域，和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在本公开的一个方面，DNABII是IHF或HU肽。在一个具体方面，DNABII是IHF肽。
如上所述，本公开提供了抗体和抗原结合片段的等同体。等同体可包含与该多肽具有至少80％氨基酸同一性的多肽，或由在高度严格条件下与编码该多肽的多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸编码的多肽。
在本文提供的抗体的一些方面，抗体、其片段、多肽或CDR以低于500ng/mL、或者低于250ng/mL、或者低于200ng/mL、或者低于150ng/mL、或者低于100ng/mL、或者低于90ng/mL、或者低于80ng/mL、或者低于70ng/mL、或者低于65ng/mL、或者低于60ng/mL、或者低于55ng/mL、或者低于50ng/mL、或者低于45ng/mL、或者低于40ng/mL、或者低于35ng/mL、或者低于30ng/mL的半最大有效浓度(EC50)结合至DNABII蛋白(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在进一步的实施方案中，使用实施例中所示的ELISA方法测定此类EC50。
在本文提供的抗体的一些方面，抗体、其片段、多肽或CDR以低于10-4M、10-5M、10- 6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M或10-12M的平衡常数KD结合至DNABII蛋白(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在一个实施方式中，该抗体、其片段、多肽或CDR以下述KD结合DNABII蛋白：低于1000nM、或低于900nM、或低于800nM、或低于700nM、或低于600nM、或低于500nM、或低于400nM、或低于300nM、或低于200nM、或低于100nM、或低于90nM、或低于80nM、或低于70nM、或低于60nM、或低于50nM、或低于40nM、或低于30nM、或低于20nM、或低于15nM、或低于10nM、或低于9nM、或低于8nM、或低于7nM、或低于6nM、或低于5nM、或低于4nM、或低于3nM、或低于2nM、或低于1nM。在一个实施方式中，这种KD是使用实施例中所示的表面等离子共振(SPR)方法确定的。在本文提供的抗体的一些方面，抗原结合位点特异性结合DNABII蛋白。
在本文提供的抗体的一些方面，抗体、其片段、多肽或CDR以下述Koff结合至DNABII蛋白(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)：低于1.0E-02s-1、或低于9.0E-03s-1、或低于8.0E-03s-1、或低于7.0E-03s-1、或低于6.0E-03s-1、或低于5.0E-03s-1、或低于4.0E-03s-1、或低于3.0E-03s-1、或低于2.0E-03s-1、或低于1.0E-03s-1、或低于9.0E-04s-1、或低于8.0E-04s-1、或低于7.0E-04s-1、或低于6.0E-04s-1、或低于5.0E-04s-1、或低于4.0E-04s-1、或低于3.0E-04s-1、或低于2.0E-04s-1、或低于1.0E-04s-1、或低于9.0E-05s-1、或低于8.0E-05s-1、或低于7.0E-05s-1、或低于6.0E-05s-1、或低于5.0E-05s-1、或低于4.0E-05s-1、或低于3.0E-05s-1、或低于2.0E-05s-1、或低于1.0E-05s-1。在一个实施方式中，这种Koff是使用实施例中所示的表面等离子共振(SPR)方法确定的。
在本文提供的抗体的一些方面，抗体、其片段、多肽或CDR以下述Kon结合至DNABII蛋白(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)：低于9.0E-02M-1s-1、或低于8.0E-02M-1s-1、或低于7.0E-02M-1s-1、或低于6.0E-02M-1s-1、或低于5.0E-02M-1s-1、或低于4.0E-02M-1s-1、或低于3.0E-02M-1s-1、或低于2.0E-02M-1s-1、或低于1.0E-02M-1s-1、或低于9.0E-03M-1s-1、或低于8.0E-03M-1s-1、或低于7.0E-03M-1s-1、或低于6.0E-03M-1s-1、或低于5.0E-03M-1s-1、或低于4.0E-03M-1s-1、或低于3.0E-03M-1s-1、或低于2.0E-03M-1s-1、或低于1.0E-03M-1s-1、或低于9.0E-04M-1s-1、或低于8.0E-04M-1s-1、或低于7.0E-04M-1s-1、或低于6.0E-04M-1s-1、或低于5.0E-04M-1s-1、或低于4.0E-04M-1s-1、或低于3.0E-04M-1s-1、或低于2.0E-04M-1s-1、或低于1.0E-04M-1s-1、或低于9.0E-05M-1s-1、或低于8.0E-05M-1s-1、或低于7.0E-05M-1s-1、或低于6.0E-05M-1s-1、或低于5.0E-05M-1s-1、或低于4.0E-05M-1s-1、或低于3.0E-05M-1s-1、或低于2.0E-05M-1s-1、或低于1.0E-05M-1s-1。在一个实施方式中，这种Kon是使用实施例中所示的表面等离子共振(SPR)方法确定的。
在本发明的一些方面，对IhfA5-mIhfB4NTHI头部嵌合肽的缔合常数KA(1/M)是约3E+05至约2E+08。在另一方面，KA为约3E+05至约1E+08，或约2E+05至约1E+08，或约1E+05至约1E+08，或约1E+06至约1E+08，或约1E+07至约1E+08，或约1E+04至约1E+09，或约1E+05至约1E+09，或约1E+06至约1E+09，或约1E+07至约1E+09，或约1E+08至约1E+09，或约1E+04至约1E+09，或约1E+03至约1E+10。
在另一个方面，对IhfA5-mIhfB4NTHI头部嵌合肽的解离常数KD(M)为约5E-09至约3E-06，或约1E-09至约1E-06，或约1E-08至约1E-05，或约1E-07至约1E-05，或约1E-06至约1E-05，或约1E-09至约1E-08，或约1E-08至约1E-07，或约1E-9至约1E-08，或约1E-10至约1E-09，或约1E-11至约1E-10。
在一方面，对IhfA3-IhfB2NTHI尾部嵌合肽的KA(1/M)为约7E+06至约2E+09，或约1E+05至约1E+08，或约1E+06至约1E+08，或约1E+07至约1E+08，或约1E+04至约1E+09，或约1E+05至约1E+09，或约1E+06至约1E+09，或约1E+07至约1E+09，或约1E+08至约1E+09，或约1E+04至约1E+09，或约1E+03至约1E+10，或约1E+03至约1E+11，或约1E+03至约1E+12，或约1E+09至约1E+10，或约1E+10至约1E+11，或约1E+11至约1E+12。
在另一个方面，对IhfA3-IhfB2NTHI尾部嵌合肽的KD(M)为约6E-10至约2E-07，或约1E-09至约1E-06，或约1E-08至约1E-05，或约1E-07至约1E-05，或约1E-06至约1E-05，或约1E-09至约1E-08，或约1E-08至约1E-07，或约1E-9至约1E-08，或约1E-10至约1E-09，或约1E-11至约1E-10，或约1E-11至约1E-12。
在本文提供的抗体的一些方面，结合DNABII蛋白的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)的抗体、其片段、多肽或CDR在体外降低生物膜的生物量至少约10％，或至少约15％，或至少约20％，或至少约25％，或至少约30％，或至少约35％，或至少约40％，或至少约45％，或至少约50％，或至少约55％，或至少约60％，或至少约65％，或至少约70％，或至少约75％，或至少约80％，或至少约85％，或至少约90％，或至少约95％。在本文提供的抗体的一些方面，结合DNABII蛋白的尾部区域(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)的抗体、其片段、多肽或CDR在体外降低生物膜的生物量少于约1％，或少于约2％，或少于约3％，或少于约4％，或少于约5％，或少于约6％，或少于约7％，或少于约8％，或少于约9％，或少于约10％，或少于约12％，或少于约15％，或少于约20％，或少于约25％，或少于约30％，或少于约35％，或少于约40％，或少于约45％，或少于约50％。在一个实施方式中，这样的生物量的改变使用实施例3或4中所示的方法测定。
在本文提供的抗体的一些方面，结合DNABII蛋白的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)的抗体、其片段、多肽或CDR降低对象中的菌载量至少约10％，或至少约15％，或至少约20％，或至少约25％，或至少约30％，或至少约35％，或至少约40％，或至少约45％，或至少约50％，或至少约55％，或至少约60％，或至少约65％，或至少约70％，或至少约75％，或至少约80％，或至少约85％，或至少约90％，或至少约91％，或至少约92％，或至少约93％，或至少约94％，或至少约95％，或至少约96％，或至少约97％，或至少约98％，或至少约99％。在本文提供的抗体的一些方面，结合DNABII蛋白的尾部区域(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)的抗体、其片段、多肽或CDR降低对象中的菌载量少于约1％，或少于约2％，或少于约3％，或少于约4％，或少于约5％，或少于约6％，或少于约7％，或少于约8％，或少于约9％，或少于约10％，或少于约12％，或少于约15％，或少于约20％，或少于约25％，或少于约30％，或少于约35％，或少于约40％，或少于约45％，或少于约50％。在一个实施方式中，这样的菌载量的改变使用实施例中所示的方法测定。
在本文提供的抗体的一些方面，结合DNABII蛋白的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)的抗体、其片段、多肽或CDR减少患有中耳炎(OM)的对象的中耳阻塞至少约10％，或至少约15％，或至少约20％，或至少约25％，或至少约30％，或至少约35％，或至少约40％，或至少约45％，或至少约50％，或至少约55％，或至少约60％，或至少约65％，或至少约70％，或至少约75％，或至少约80％，或至少约85％，或至少约90％，或至少约91％，或至少约92％，或至少约93％，或至少约94％，或至少约95％，或至少约96％，或至少约97％，或至少约98％，或至少约99％。在本文提供的抗体的一些方面，结合DNABII蛋白的尾部区域(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)的抗体、其片段、多肽或CDR减少患有中耳炎(OM)的对象的中耳阻塞少于约1％，或少于约2％，或少于约3％，或少于约4％，或少于约5％，或少于约6％，或少于约7％，或少于约8％，或少于约9％，或少于约10％，或少于约12％，或少于约15％，或少于约20％，或少于约25％，或少于约30％，或少于约35％，或少于约40％，或少于约45％，或少于约50％。在一个实施方式中，中耳阻塞的这样的改变使用实施例中所示的方法在实验性中耳炎(OM)模型中测定。
在本文提供的抗体的一些方面，结合DNABII蛋白的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)的抗体、其片段、多肽或CDR降低具有粘膜生物膜(例如具有OM)的对象中相对粘膜生物膜评分和/或生物量评分至少约10％，或至少约15％，或至少约20％，或至少约25％，或至少约30％，或至少约35％，或至少约40％，或至少约45％，或至少约50％，或至少约55％，或至少约60％，或至少约65％，或至少约70％，或至少约75％，或至少约80％，或至少约85％，或至少约90％，或至少约91％，或至少约92％，或至少约93％，或至少约94％，或至少约95％，或至少约96％，或至少约97％，或至少约98％，或至少约99％。在一个实施方式中，结合DNABII蛋白的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)的抗体、其片段、多肽或CDR降低具有粘膜生物膜(例如具有OM)的对象中相对粘膜生物膜评分和/或生物量评分至少约0.5，或至少约1，或至少约1.5，或至少约2，或至少约2.5，或至少约3，或至少约3.5，或至少约4。在本文提供的抗体的一些方面，结合DNABII蛋白的尾部区域(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)的抗体、其片段、多肽或CDR降低具有粘膜生物膜(例如具有OM)的对象中相对粘膜生物膜评分和/或生物量评分少于约1％，或少于约2％，或少于约3％，或少于约4％，或少于约5％，或少于约6％，或少于约7％，或少于约8％，或少于约9％，或少于约10％，或少于约12％，或少于约15％，或少于约20％，或少于约25％，或少于约30％，或少于约35％，或少于约40％，或少于约45％，或少于约50％。在一个实施方式中，中耳阻塞的这样的改变使用实施例中所示的方法在实验性中耳炎(OM)模型中测定。在一个实施方式中，结合DNABII蛋白的尾部区域(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)的抗体、其片段、多肽或CDR降低具有粘膜生物膜(例如具有OM)的对象中相对粘膜生物膜评分和/或生物量评分少于约0.1，或少于约0.2，或少于约0.3，或少于约0.4，或少于约0.5，或少于约0.6，或少于约0.7，或少于约0.8，或少于约0.9，或少于约1，或少于约1.5，或少于约2，或少于约2.5。在一个实施方式中，这样的评分使用实施例中所示的方法确定。
在某些实施方案中，DNABII蛋白是HU或IHF。在进一步的实施方案中，DNABII蛋白是IhfA、IhfB或两者。在又一个实施方案中，抗体、其片段、多肽或CDR结合DNABII蛋白的头部区域或尾部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在一个实施方案中，抗体、其片段、多肽或CDR结合IhfA5-mIhfB4NTHI头部嵌合肽。在另一个实施方案中，抗体、其片段、多肽或CDR结合IhfA3-IhfB2NTHI尾部嵌合肽。
在本文提供的抗体的一些方面，抗体是可溶性Fab。
在本文提供的抗体的一些方面，HC和LC可变域序列是相同多肽链的组分。在本文提供的抗体的一些方面，HC和LC可变域序列是不同多肽链的组分。
在本文提供的抗体的一些方面，抗体是全长抗体。
在本文提供的抗体的一些方面，抗体是嵌合的或人源化的。
在本文提供的抗体的一些方面，抗体包含Fc结构域。在本文提供的抗体的一些方面，抗体是非人动物抗体，例如大鼠、绵羊、牛、犬、猫或兔抗体。在本文提供的抗体的一些方面，抗体是人抗体或人源化抗体或在人中是非免疫原性的。
在本文提供的抗体的一些方面，抗体包含人抗体框架区。可以与LC和HC序列融合的构架区的例子是本领域已知的，此类例子在SEQ ID NO:15-23中提供，或其每一个的等同体。
在其他方面，本文提供的抗体的CDR中的一个或多个氨基酸残基被另一种氨基酸取代。在同一氨基酸家族内的取代的意义上，取代可以是“保守的”。天然存在的氨基酸可分为以下四个家族，保守取代将发生在这些家族中。
1)具有碱性侧链的氨基酸：赖氨酸、精氨酸、组氨酸。
2)带酸性侧链的氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸。
3)具有不带电荷的极性侧链的氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。
4)具有非极性侧链的氨基酸：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸、半胱氨酸。
在另一个方面，一个或多个氨基酸残基被添加到抗体的一个或多个CDR中或从抗体的一个或多个CDR中缺失。此类添加或缺失发生在CDR的N或C末端或CDR内的位置。
通过氨基酸的添加、缺失或取代来改变抗体CDR的氨基酸序列，可以获得各种效果，例如增加对靶抗原的结合亲和力。
应当理解，包含这种变化的CDR序列的本公开的抗体，仍然以与所公开的抗体相似的特异性和敏感性曲线结合DNABII蛋白。这可以通过结合测定来测试，例如ELISA或SPR。
在另一个方面，抗体的特征在于同时具有免疫显性和免疫保护性，如使用适当的测定法和筛选法所确定的。
在另一方面，可以通过常规技术修饰抗体，在一方面，这可以增加抗体的半衰期，例如PEG化、PEG模拟物、聚唾液酸化、HES化或糖基化。
抗体和抗原结合片段还可包含可检测标记或纯化标记。
抗体及其衍生物
本公开内容还提供用于本文公开的方法中的结合和/或特异性识别和结合分离多肽的抗体。所述抗体可以是本文所述的各种抗体中的任何一种，这样的抗体的非限制性实例包括多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人抗体、贴面抗体(veneered antibody)、双抗体、人源化抗体、抗体衍生物、重组人源化抗体或它们各自的等同体(例如衍生物)或片段。一方面，该片段包含抗体的CDR，或者实质上由其组成，或由其组成。一方面，该抗体被可检测标记或进一步包含与其缀合的可检测标记。
本文还提供了产生本文公开的单克隆抗体的杂交瘤细胞系。本文进一步提供了包含一种或多种上述实施方案、或实质上由其组成、或由其组成的组合物。本文还提供编码所述抗体和片段的氨基酸序列的多核苷酸，以及重组或化学合成所述抗体多肽及其片段的方法。所述抗体多肽可以在真核或原核细胞中产生，或通过本领域已知和本文描述的其他方法产生。
CDR序列的实例包括但不限于以下组分、或实质上由其组成、或由其组成：抗体或其片段的重链可变区包含以下多肽，或实质上由其组成，或由其组成：由以下多核苷酸序列编码的多肽。
可以使用本领域已知的并且在文献中进行充分描述的常规技术产生抗体。存在几种生产多克隆抗体的方法。例如，多克隆抗体通常通过免疫合适的哺乳动物(例如但不限于鸡、山羊、豚鼠、仓鼠、马、小鼠、大鼠和兔)来产生。将抗原注射到哺乳动物体内，诱导B淋巴细胞产生对抗原特异的免疫球蛋白。免疫球蛋白可以从哺乳动物的血清中纯化。
该方法的变化包括改变佐剂、施用途径和部位、每个部位的注射量和每只动物的部位数量，以实现动物的最佳生产和人道处理。例如，佐剂通常用于改善或增强对抗原的免疫反应。大多数佐剂提供了注射部位抗原贮库，它允许将抗原储存释放到引流淋巴结中。其他佐剂包括促进蛋白质抗原分子在大表面积上浓缩的表面活性剂和免疫刺激分子。用于产生多克隆抗体的佐剂的非限制性例子包括弗氏佐剂、Ribi佐剂系统和Titermax。可以使用本领域已知的方法产生多克隆抗体，其中一些描述于美国专利7,279,559；7,119,179；7,060,800；6,709,659；6,656,746；6,322,788；5,686,073；和5,670,153。
可以使用本领域已知和文献中详细描述的常规杂交瘤技术产生单克隆抗体。例如，通过将合适的永生细胞系与抗体产生细胞融合来生产杂交瘤，所述永生细胞系例如是骨髓瘤细胞系，例如但不限于Sp2/0、Sp2/0-AG14、NSO、NS1、NS2、AE-1、L.5、P3X63Ag8,653、Sp2 SA3、Sp2 MAI、Sp2 SS1、Sp2 SA5、U397、MIA 144、ACT IV、MOLT4、DA-1、JURKAT、WEHI、K-562、COS、RAJI、NIH 313、HL-60、MLA 144、NAMAIWA、NEURO 2A、CHO、PerC.6、YB2/O等，或异骨髓瘤、其融合产物，或源自其的任何细胞或融合细胞，或如本领域已知的任何其他合适的细胞系(参见以下网址，例如atcc.org、lifetech.com，上次访问时间为2007年11月26日)，所述抗体产生细胞例如但不限于分离的或克隆的脾脏细胞、外周血细胞、淋巴细胞、扁桃体细胞或其他含有免疫细胞或B细胞的细胞，或任何其他表达重链或轻链恒定序列或可变序列或框架序列或CDR序列的细胞，它们是内源或异源核酸，重组或内源的、病毒的、细菌的、藻类的、原核的、两栖动物的、昆虫的、爬行动物的、鱼的、哺乳动物的、啮齿动物的、马的、绵羊的、山羊的、绵羊的、灵长类动物的、真核的、基因组DNA、cDNA、rDNA、线粒体DNA或RNA、叶绿体DNA或RNA、hnRNA、mRNA、tRNA、单链、双链或三链的、杂交的等或其任何组合。抗体产生细胞也可以从已经用目的抗原免疫然后筛选目的活性的人或其他合适动物的外周血，或，在特定实施方案中，脾或淋巴结中获得。任何其他合适的宿主细胞也可用于表达编码本公开的抗体、其特定片段或变体的异源或内源核酸。融合细胞(杂交瘤)或重组细胞可以使用选择性培养条件或其他合适的已知方法分离，并通过有限稀释或细胞分选或其他已知方法进行克隆。
可以使用产生或分离具有所需特异性的抗体的其他合适方法，包括但不限于从肽或蛋白质文库(例如但不限于噬菌体、核糖体、寡核苷酸、cDNA等展示文库)中选择重组抗体的方法；例如，可从各种商业供应商获得文库，如MorphoSys(Martinsreid/Planegg,Del.)、BioInvent(Lund,Sweden)、Affitech(Oslo,Norway)。专利文献中描述了本领域已知的方法，其中一些包括美国专利4,704,692；5,723,323；5,763,192；5,814,476；5,817,483；5,824,514；和5,976,862。替代方法依赖于转基因动物(例如SCID小鼠，Nguyen et al.(1977)Microbiol.Immunol.41:901-907(1997)；Sandhu et al.(1996)Crit,Rev.Biotechnol.16:95-118；Eren et al.(1998)Mumma 93:154-161)的免疫，该转基因动物能够产生如本领域已知的和/或如本文所述的人抗体库。此类技术包括但不限于核糖体展示(Wanes et al.(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:4937-4942；Hanes et al.(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95:14130-14135)；单细胞抗体生产技术(例如选择淋巴细胞抗体法(“SLAM”)(U.S.Pat.No.5,627,052；Wen et al.(1987)J.Immunol 17:887-892；Babcook et al.(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:7843-7848))；凝胶微滴和流式细胞术(Powell et al.(1990)Biotechnol.8:333-337；One Cell Systems,(Cambridge,Mass.)；Gray et al.(1995)J.Imm.Meth.182:155-163；和Kenny et al.(1995)Bio.Technol.13:787-790)；B细胞筛选法(Steenbakkers et al.(1994)Molec.Biol.Reports 19:125-134)。
本公开的抗体衍生物也可以通过将编码本文公开的抗体的多核苷酸递送至合适的宿主来制备，例如以提供在它们的乳液中产生此类抗体的转基因动物或哺乳动物，例如山羊、牛、马、绵羊等。这些方法在本领域中是已知的并且例如描述于美国专利5,827,690；5,849,992；4,873,316；5,849,992；5,994,616；5,565,362；和5,304,489。
术语“抗体衍生物”包括对抗体或片段的线性多肽序列的翻译后修饰。例如，美国专利6,602,684B1描述了一种产生修饰的二醇形式的抗体的方法，包括完整的抗体分子、抗体片段或融合蛋白，其包括与免疫球蛋白的Fc区相当的区域，具有增强的Fe介导的细胞毒性，和这样产生的糖蛋白。
本文公开的抗体还包括修饰的衍生物，其通过将任何类型的分子共价连接至抗体，使得共价连接不会阻止抗体产生抗独特型反应。抗体衍生物包括但不限于已通过糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知保护/封闭基团衍生化、蛋白水解切割、与细胞配体或其他蛋白质连接等修饰的抗体。另外，衍生物可以含有一种或多种非经典氨基酸。
还可以通过递送本文公开的多核苷酸来制备抗体衍生物，以提供转基因植物和培养的植物细胞(例如但不限于烟草、玉米和浮萍)，它们在植物部分或从其培养出的细胞中产生此类抗体、特定部分或变体。例如，Cramer et al.(1999)Curr.Top.Microbol.Immunol.240:95-118和其中引用的参考文献描述了使用例如诱导型启动子表达大量重组蛋白的转基因烟草叶子的生产。转基因玉米已被用于在商业生产水平上表达哺乳动物蛋白质，其生物活性与其他重组系统中生产的或从天然来源纯化的相当。参见，例如，Hood et al.(1999)Adv.Exp.Med.Biol.464:127-147和其中引用的参考文献。还从转基因植物种子中大量生产抗体衍生物，包括抗体片段，例如单链抗体(scFv's)，包括烟草种子和马铃薯块茎。参见，例如，Conrad et al.(1998)Plant Mol.Biol.38:101-109和其中引用的参考文献。因此，根据已知方法，也可以使用转基因植物产生抗体。
还可以例如通过添加外源序列以修饰免疫原性或降低、增强或修饰结合、亲和力、结合率、解离率、亲合力、特异性、半衰期或任何其他合适的特征来产生抗体衍生物。通常，部分或全部非人或人CDR序列被保留，而可变区和恒定区的非人序列被人或其他氨基酸或来自其他同种型的可变区或恒定区替换。
通常，CDR残基直接和最实质地参与影响抗原结合。抗体的人源化或工程化可以使用任何已知的方法进行，例如但不限于美国专利5,723,323；5,976,862；5,824,514；5,817,483；5,814,476；5,763,192；5,723,323；5,766,886；5,714,352；6,204,023；6,180,370；5,693,762；5,530,101；5,585,089；5,225,539；和4,816,567中描述的那些方法。
本公开的嵌合、人源化或灵长类化抗体可以基于使用标准分子生物学技术制备的参考单克隆抗体的序列来制备。编码重链和轻链免疫球蛋白的DNA可以从感兴趣的杂交瘤中获得，并使用标准分子生物学技术进行工程改造以包含非参考(例如人)免疫球蛋白序列。例如，为了产生嵌合抗体，可以使用本领域已知的方法(美国专利号4,816,567)将鼠可变区连接到人恒定区。为了产生人源化抗体，可以使用本领域已知的方法(美国专利号5,225,539和美国专利号5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)将鼠CDR区插入人框架中。类似地，为了产生灵长类化抗体，可以使用本领域已知的方法(WO 93/02108和WO 99/55369)将鼠CDR区插入灵长类框架中。
用于制备部分至完全人抗体的技术在本领域中是已知的并且可以使用任何此类技术。根据一个实施方案，在被工程化以表达人类重链和轻链抗体基因的转基因小鼠中制备完全人类抗体序列。已经制备了多种此类转基因小鼠品系，它们可以产生不同类别的抗体。可以融合来自产生所需抗体的转基因小鼠的B细胞以制备杂交瘤细胞系，以连续产生所需抗体。(参见例如,Russel et al.(2000)Infection and Immunity April 2000:1820-1826；Gallo et al.(2000)European J.of Immun.30:534-540；Green(1999)J.ofImmun.Methods 231:11-23；Yang et al.(1999A)J.of Leukocyte Biology 66:401-410；Yang(1999B)Cancer Research 59(6):1236-1243；Jakobovits(1998)Advanced DrugReviews31:33-42；Green and Jakobovits(1998)J.Exp.Med.188(3):483-495；Jakobovits(1998)Exp.Opin.Invest.Drugs 7(4):607-614；Tsuda et al.(1997)Genomics 42:413-421；Sherman-Gold(1997)Genetic Engineering News 17(14)；Mendez et al.(1997)Nature Genetics 15:146-156；Jakobovits(1996)Weir's Handbook of ExperimentalImmunology,The Integrated Immune System Vol.IV,194.1-194.7；Jakobovits(1995)Current Opinion in Biotechnology 6:561-566；Mendez et al.(1995)Genomics 26:294-307；Jakobovits(1994)Current Biology 4(8):761-763；Arbones et al.(1994)Immunity 1(4):247-260；Jakobovits(1993)Nature 362(6417):255-258；Jakobovits etal.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90(6):2551-2555；以及U.S.Pat.No.6,075,181。)
本文公开的抗体也可以被修饰以产生嵌合抗体。嵌合抗体是其中抗体重链和轻链的各个结构域由来自多个物种的DNA编码的看题。参见例如美国专利第4,816,567号。
作为选择，本文公开的抗体也可以被修饰以产生贴面抗体。贴面抗体是这样的抗体，即其中一个物种的抗体的外部氨基酸残基被第二物种的残基审慎地替换或“贴面”，这样第一物种的抗体将不会在第二物种中具有免疫原性，从而降低抗体的免疫原性。由于蛋白质的抗原性主要取决于其表面的性质，抗体的免疫原性可以通过替换与另一种哺乳动物物种中通常发现的不同的暴露残基来降低。这种对外部残基的审慎替换应该对内部结构域或域间接触处几乎没有影响或没有影响。因此，配体结合特性应该不因仅限于可变区框架残基的改变而受到影响。该过程被称为“贴面”，因为只有抗体的外表面或皮肤被改变，支持残基(supporting residues)保持不受干扰。
“贴面”程序利用了人抗体可变结构域的可用序列数据(这些数据由Kabat et al.(1987)Sequences of Proteins of Immunological interest,4th ed.,Bethesda,Md.,National Institutes of Health编制)、该数据库的更新以及其他可访问的美国和外国数据库(核酸和蛋白质)。用于产生贴面抗体的方法的非限制性例子包括EP 519596；美国专利第6,797,492号；并描述于Padlan et al.(1991)Mol.Immunol.28(4-5):489-498。
术语“抗体衍生物”还包括“双抗体”，它们是具有两个抗原结合位点的小抗体片段，其中片段包含重链可变结构域(VH)，其与同一多肽链中的轻链可变结构域(VL)连接。(参见例如，EP 404,097；WO 93/11161；和Hollinger et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448。)通过使用太短而无法在同一链上的两个结构域之间配对的接头，这些结构域被迫与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。(还参见Chen等人的美国专利6,632,926，其公开的抗体变体具有插入亲本抗体的高变区中的一个或多个氨基酸，并且对靶抗原的结合亲和力比亲本抗体对抗原的结合亲和力强至少约为2倍)。
术语“抗体衍生物”还包括工程抗体分子、片段和单域，例如scFv、dAb、纳米抗体、微型抗体、单抗体和Affibodies&Hudson(2005)Nature Biotech 23(9):1126-36；美国专利申请公开号2006/0211088；PCT国际申请公开号WO 2007/059782；美国专利第5,831,012号)。
术语“抗体衍生物”进一步包括“线性抗体”。制备线性抗体的程序是本领域已知的并且在Zapata et al.(1995)Protein Eng.8(10):1057-1062中有所描述。简而言之，这些抗体包含一对串联的Ed片段(VH-CH1-VH-CH1)，它们形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性的或单特异性的。
本文公开的抗体可以通过已知方法从重组细胞培养物中回收和纯化，包括但不限于蛋白A纯化、硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阴离子或阳离子交换层析、磷酸纤维素层析、疏水相互作用层析、亲和色谱法、羟基磷灰石色谱法和凝集素色谱法。高效液相色谱法(“HPLC”)也可用于纯化。
本公开的抗体包括天然纯化的产物、化学合成程序的产物和通过重组技术从真核宿主产生的产物，真核宿主包括例如酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞，或者从如以上所述原核宿主产生中的产物。Birch&Radner(2006)Adv.Drug Delivery Rev.58:671-685中描述了许多抗体生产系统。
如果待测抗体与蛋白质或多肽结合，则待测抗体与本发明提供的抗体是等同的。还可以通过确定所测试的抗体是否阻止本文公开的抗体结合该抗体通常与之反应的蛋白质或多肽来确定一种抗体是否具有与本文公开的抗体相同的特异性而无需过度实验。如果被测试的抗体与本文公开的抗体竞争，如本文公开的单克隆抗体的结合减少所示，那么两种抗体可能结合相同或密切相关的表位。或者，可以将本文公开的抗体与通常与之反应的蛋白质预孵育，并确定所测试的抗体结合抗原的能力是否受到抑制。如果正在测试的抗体被抑制，那么它很可能具有与本文公开的抗体相同或密切相关的表位特异性。
术语“抗体”还旨在包括所有免疫球蛋白同种型和亚类的抗体。单克隆抗体的特定同种型可以通过从初始融合中选择直接制备，或从分泌不同同种型单克隆抗体的亲本杂交瘤中通过使用sib选择技术使用Steplewski et al.(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:8653或Spira et al.(1984)J.Immunol.Methods 74:307中描述的程序分离类别转换变体而二次制备。或者，可以使用重组DNA技术。
具有本文所述单克隆抗体特异性的其他单克隆抗体的分离也可以由本领域普通技术人员通过产生抗独特型抗体来完成。Herlyn et al.(1986)Science 232:100。抗独特型抗体是识别存在于感兴趣的单克隆抗体上的独特决定簇的抗体。
在本文公开的一些方面，可检测地或治疗地标记抗体将是有用的。上文描述了合适的标记。将抗体与这些试剂结合的方法是本领域已知的。仅出于说明的目的，抗体可以用可检测部分标记，例如放射性原子、生色团、荧光团等。此类标记的抗体可用于体内或分离的测试样品中的诊断技术。
抗体与低分子量半抗原的偶联可以提高抗体在测定中的灵敏度。然后可以通过第二反应特异性地检测半抗原。例如，通常使用的半抗原是生物素(与抗生物素蛋白反应)，或可与特异性抗半抗原抗体反应的二硝基苯酚、吡哆醛和荧光素。参见上文Harlow and Lane(1988)。
本公开的抗体的可变区可以通过突变VH和/或VL CDR 1、CDR 2和/或CDR 3区内的氨基酸残基来修饰，以改善抗体的一种或多种结合特性(例如，亲和力)。可以通过定点诱变或PCR介导的诱变引入突变，并且可以在适当的体外或体内测定中评估对抗体结合或其他感兴趣的功能特性的影响。在某些实施方案中，引入保守修饰并且通常不超过一个、两个、三个、四个或五个CDR区内的残基被改变。突变可以是氨基酸取代、添加或缺失。
可以对抗体进行框架修饰以降低免疫原性，例如，通过将一个或多个框架残基“回复突变”为相应的种系序列。
此外，本文公开的抗体可经工程改造以包括在Fc区内的修饰以改变抗体的一种或多种功能特性，例如血清半衰期、补体固定、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。此类修饰包括但不限于改变铰链区中半胱氨酸残基的数量以促进轻链和重链的组装或增加或降低抗体的稳定性(美国专利号5,677,425)，以及Fc铰链区中的氨基酸突变以减少抗体的生物半衰期(美国专利号6,165,745)。
此外，本文公开的抗体可以被化学修饰。可以改变抗体的糖基化，例如，通过修饰抗体序列内的一个或多个糖基化位点以增加抗体对抗原的亲和力(美国专利号5,714,350和6,350,861)。替代性地，为了增加抗体依赖性细胞介导的细胞毒性，可以通过在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗体来获得具有减少的岩藻糖基量的低岩藻糖基化抗体或具有增加的二等分(bisecting)GlcNac结构的抗体(Shields,R.L.et al.(2002)J.Biol.Chem.277:26733-26740；Umana et al.(1999)Nat.Biotech.17:176-180)。
通过在一个或多个PEG基团与抗体或抗体片段连接的条件下，使抗体或其片段与聚乙二醇(PEG)或PEG的反应性酯或醛衍生物反应，可将本文公开的抗体聚乙二醇化以增加生物半衰期。抗体聚乙二醇化可以通过与反应性PEG分子(或类似反应性水溶性聚合物)的酰化反应或烷基化反应来进行。如本文所用，术语“聚乙二醇”旨在涵盖已用于衍生其他蛋白质的任何形式的PEG，例如单(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。待聚乙二醇化的抗体可以是非糖基化抗体。用于聚乙二醇化蛋白质的方法是本领域已知的并且可以应用于本文公开的抗体(EP 0154316和EP 0401384)。
此外，可以通过将抗体的抗原结合区与血清蛋白如人血清白蛋白缀合或融合来对抗体进行化学修饰，以增加所得分子的半衰期。这种方法描述于例如EP 0322094和EP0486525。
本公开的抗体或其片段可以与诊断剂缀合并用于诊断，例如，以监测疾病的发展或进展并确定给定治疗方案的功效。诊断剂的实例包括酶、辅基、荧光材料、发光材料、生物发光材料、放射性材料、使用各种正电子发射断层扫描的正电子发射金属和非放射性顺磁性金属离子。可检测物质可以直接与抗体或其片段偶联或缀合，或通过接头使用本领域已知的技术间接偶联或缀合。合适的酶的实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶。合适的辅基复合物的例子包括链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素。合适的荧光材料的例子包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白。发光材料的示例包括鲁米诺。生物发光材料的例子包括萤光素酶、萤光素和水母发光蛋白。合适的放射性物质的例子包括125I、131I、铟-111、镥-171、铋-212、铋-213、砹-211、铜-62、铜-64、铜-67、钇-90、碘-125、碘131、磷-32、磷-33、钪-47、银-111、镓-67、镨-142、钐-153、铽-161、镝-166、钬-166、铼-186、铼-188、铼-189、铅-212、镭-223、锕-225、铁-59、硒-75、砷-77、锶-89、钼-99、铑-1105、钯-109、镨-143、钷-149、铒169、铱194、金-198、金-199和铅211。单克隆抗体可通过使用与抗体共价连接的双功能螯合剂与放射性金属离子间接缀合。螯合剂可以通过酰氨基(amities)(Meares et al.(1984)Anal.Biochem.142:68-78)；氨基酸残基的巯基(Koyama(1994)Chem.Abstr.120:217-262)和碳水化合物基团(Rodwell et al.(1986)PNAS USA 83:2632-2636；Quadri et al.(1993)Nucl.Med.Biol.20:559-570)缀合。
此外，本公开的抗体或其片段可以缀合至治疗剂。合适的治疗剂包括紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、依米汀、丝裂霉素、依托泊苷、替诺泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙素、阿霉素、柔红霉素、二羟基蒽二酮、米托蒽醌、光神霉素、放线菌素D、1-脱氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔和嘌呤霉素、抗代谢物(如甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、氟达拉滨、5-氟尿嘧啶、地卡巴肼、羟基脲、天冬酰胺酶、吉西他宾、克拉屈滨)、烷化剂(如氯乙胺、噻虫啉、氯霉素、美法仑、卡莫司汀(BSNU)、洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素、达卡巴嗪(DTIC)、丙卡巴肼、丝裂霉素C、顺铂等铂类衍生物，如卡铂)、抗生素(如更生霉素(原放线菌素)、博来霉素、柔红霉素(原道诺霉素)、多柔比星、伊达比星、光神霉素、丝裂霉素、米托蒽醌、普卡霉素、氨茴霉素(AMC))、白喉毒素和相关分子(例如白喉A链及其活性片段和杂合分子)、蓖麻毒素(例如蓖麻毒素A或去糖基化的蓖麻毒素A链毒素)、霍乱毒素、志贺样毒素(SLT-I、SLT-II、SLT-IIV)、LT毒素、C3毒素、志贺毒素、百日咳毒素、破伤风毒素、大豆Bowman-Birk蛋白酶抑制剂、假单胞菌外毒素、alorin、皂草素、莫迪素(modeccin)、明胶、相思豆蛋白A链、莫迪素A链、α-八叠球菌素、油桐蛋白、香石竹毒蛋白、美洲商陆蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜抑制剂、麻风树毒蛋白(curcin)、巴豆毒素、肥阜草(sapaonaria officinalis)抑制剂、白树毒素(gelonin)、丝裂吉菌素(mitogellin)、局限曲菌素(restrietocin)、苯酚霉素、伊诺霉素和混合毒素。
其他合适的缀合分子包括核糖核酸酶(RNase)、DNase I、反义核酸、抑制性RNA分子如siRNA分子、免疫刺激性核酸、适体、核酶、三链体形成分子和外部引导序列。适体是长度范围为15-50个碱基的小核酸，可折叠成确定的二级和三级结构，例如茎环或G-四联体，并且可以结合小分子，例如ATP(美国专利号5,631,146)和茶碱(美国专利5,580,737)，以及大分子，例如逆转录酶(美国专利5,786,462)和凝血酶(美国专利5,543,293)。核酶是能够在分子内或分子间催化化学反应的核酸分子。核酶通常通过目标底物的识别和结合以及随后的切割来切割核酸底物。三链体形成功能核酸分子可以通过形成三链体与双链或单链核酸相互作用，其中三链DNA形成依赖于Watson-Crick和Hoogsteen碱基配对的复合物。三链分子可以以高亲和力和特异性结合靶区域。
功能性核酸分子可以充当靶分子所具有的特定活性的效应物、抑制剂、调节剂和刺激剂，或者功能性核酸分子可以具有独立于任何其他分子的全新(de novo)活性。
可以使用大量可用方法中的任何一种将治疗剂直接或间接连接至抗体。例如，可以通过二硫键形成、使用交联剂如N-琥珀酰3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)或通过抗体的Fc区的碳水化合物部分将治疗剂连接在被还原的抗体组分的铰链区(Yu etal.1994Int.J.Cancer 56:244；Upeslacis et al.,“Modification of Antibodies byChemical Methods,”in Monoclonal antibodies:principles and applications,Birchet al.(eds.),pages187-230(Wiley-Liss,Inc.1995)；Price,“Production andCharacterization of Synthetic Peptide-Derived Antibodies,”in Monoclonalantibodies:Production,engineering and clinical application,Ritter et al.(eds.),pages 60-84(Cambridge University Press 1995))。
将治疗剂与抗体结合的技术是众所周知的(Amon et al.“MonoclonalAntibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy,”in MonoclonalAntibodies And Cancer Therapy；Reisfeld et al.(eds.),pp.243-56(Alan R.Liss,Inc.1985)；Hellstrom et al.“Antibodies For Drug Delivery,”in Controlled DrugDelivery(2nd Ed.)；Robinson et al.(eds.),pp.623-53(Marcel Dekker,Inc.1987)；Thorpe“Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review,”inMonoclonal Antibodies'84:Biological And Clinical Applications,Pinchera et al.(eds.),pp.475-506(1985)；“Analysis,Results,And Future Prospective Of TheTherapeutic Use Of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy,”in MonoclonalAntibodies For Cancer Detection And Therapy,Baldwin et al.(eds.),pp.303-16(Academic Press 1985),以及Thorpe et al.“The Preparation And CytotoxicProperties Of Antibody-Toxin Conjugates,”(1982)Immunol.Rev.62:119-58)。
本文公开的抗体或其抗原结合区可连接至另一功能性分子，例如受体的另一抗体或配体，以产生与至少两个或更多个不同结合位点或靶标分子结合的双特异性或多特异性分子。可以例如通过化学偶联、遗传融合或非共价结合将抗体与一种或多种其他结合分子(例如另一种抗体、抗体片段、肽或结合模拟物)连接。除了第一和第二靶表位之外，多特异性分子还可以包括第三结合特异性。
可以使用本领域已知的方法制备双特异性和多特异性分子。例如，高特异性分子的每个结合单元可以单独产生，然后彼此缀合。当结合分子是蛋白质或肽时，可以使用多种偶联剂或交联剂进行共价偶联。交联剂的实例包括蛋白A、碳二亚胺、N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基-硫代乙酸酯(SATA)、5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、邻苯二马来酰亚胺(oPDM)、N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯(SPDP)和磺基琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-I-羧酸酯(磺基-SMCC)(Karpovsky et al.(1984)J.Exp.Med.160:1686；Liu et al.(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:8648)。当结合分子是抗体时，它们可以通过两条重链的C-末端铰链区的巯基键合来缀合。
本公开的抗体或其片段可以连接至对抗体结合的细胞有毒的部分以形成“消耗性”抗体。这些抗体在需要消耗NK细胞的应用中特别有用。
本文公开的抗体也可以附着于固体支持物，这对于免疫测定或靶抗原的纯化特别有用。此类固体支持物包括但不限于玻璃、纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。
抗体也可以与许多不同的载体结合。因此，本公开还提供了包含抗体和另一种活性或惰性物质的组合物。众所周知的载体的例子包括玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、葡聚糖、尼龙、淀粉酶、天然和改性纤维素、聚丙烯酰胺、琼脂糖和磁铁矿。对于本文公开的目的，载体的性质可以是可溶的或不溶的。本领域技术人员将知道用于结合单克隆抗体的其他合适的载体，或者将能够使用常规实验来确定。
在某些方面，本公开内容涉及特异性识别或结合DNABII蛋白或其片段的头部或尾部结构域、尾部片段或头部片段的抗体或抗原结合片段。DNABII蛋白或其片段可以是IHF或HU多肽。
使用抗体的功能性分析
本文公开的抗体可用于纯化本文公开的多肽和鉴定生物等同多肽和/或多核苷酸。它们还可用于鉴定改变本文公开的多肽功能的试剂。这些抗体包括多克隆抗血清、单克隆抗体和衍生自这些制剂的各种试剂，这些试剂是本领域技术人员熟悉的和在上文描述。
通过将此类中和抗体添加到体内和体外测试系统中，中和由已鉴定基因编码的蛋白质的活性的抗体也可用于体内和体外以证明其功能。它们也可用作调节本文公开的多肽活性的药剂。
各种抗体制剂也可用于分析方法，例如ELISA测定法或蛋白质印迹法，以证明所鉴定基因编码的蛋白质在体外或体内测试细胞中的表达。这种蛋白质在代谢过程中由蛋白酶降解产生的片段也可以通过使用适当的多克隆抗血清和来自实验样品的样品来鉴定。
本文公开的抗体可单独或与基于肽或蛋白质的疫苗或基于树突细胞的疫苗组合用于疫苗接种或加强疫苗接种。
诊断和治疗方法
本文提供了一种通过使DNABII多肽或蛋白质或微生物DNA与有效量的一种或多种如上所述的试剂(例如，本文公开的抗体或其抗原结合片段、多肽或CDR)接触来预防、抑制或竞争DNABII多肽或蛋白质与微生物DNA结合的方法，从而防止或抑制或竞争DNABII蛋白或多肽与微生物DNA的结合。DNABII多肽可以是IHF或HU肽。在一个方面，抗体或其抗原结合片段选择性地结合DNABII多肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域，和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1、2或3的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7、8或9的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述接触在体内或体外进行。
在另一个方面，用于本文公开的方法中的抗体或其抗原结合片段包含重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:13、24或26的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:14、25或27的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一方面，本文公开的DNABII多肽和/或微生物DNA和/或其抗体或其抗原结合片段和/或多肽或CDR中的一个或多个被可检测地标记，例如用放射性同位素或当彼此紧密接触时会发出信号的发光分子。接触可以在体外或体内进行。这些方法可以与诊断方法组合以检测和/或监测生物膜形成和/或破坏，例如，使用如本文公开的一种或多种DNABII多肽和/或微生物DNA和/或其抗体或其抗原结合片段和/或多肽或CDR。一方面，所述诊断方法包括使用如本文公开的抗体或抗原结合片段，其在一方面特异性结合DNABII多肽的尾部区域或片段(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域，IHFA或IHFB的尾部区域，和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在另一方面，抗体或抗原结合片段被可检测地标记。在一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:4、5或6的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:10、11或12的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在另一方面，本文提供了破坏微生物生物膜的方法，其通过使生物膜与有效量的一种或多种如上所述的试剂(例如抗体或其抗原结合片段、多肽或CDR)接触，从而破坏微生物生物膜。在一个方面，抗体或其抗原结合片段选择性地结合DNABII多肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域，和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。DNABII多肽可以是IHF或HU肽。在一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1、2或3的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7、8或9的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述接触在体内或体外进行。
在一方面，微生物生物膜由输出DNABII多肽的微生物产生。DNABII多肽可以是IHF或HU肽。在另一方面，抗体、抗体片段、DNABII多肽和微生物DNA中的一个或多个被可检测地标记，例如用放射性同位素或当它们彼此紧密接触时它们会发出信号的发光分子标记。接触可以在体外或体内进行。在一方面，所述试剂是一种或多种彼此相同或不同的抗体和/或抗原结合片段。在一些实施方案中，此类抗体或抗原结合片段单独或彼此组合施用，或与抗体以外的试剂或另外的药学有效试剂单独或与药学上可接受的载体组合施用。这些方法可以与诊断方法相结合，以检测和/或监测生物膜的形成和/或破坏。在一方面，诊断方法包括使用如本文公开的抗体或抗原结合片段，其在一方面特异性结合DNABII多肽的尾部区域或尾部片段(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在另一方面，抗体或抗原结合片段被可检测地标记。
本文还提供了防止在表面上形成生物膜或破坏表面上的生物膜的方法，该方法包括以下步骤，或实质上由以下步骤组成，或由以下步骤组成：使用有效量的一种或多种如本文所述的抗体或其抗原结合片段、多肽或CDR处理易感生物膜或含有生物膜的表面，其中所述抗体或其抗原结合片段结合DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。DNABII多肽可以是IHF或HU肽。在一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:4、5或6的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:10、11或12的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
在一方面，所述抗体或抗原结合片段包含可检测标记。这些方法可以与诊断方法相结合，以检测和/或监测生物膜的形成和/或破坏。在一方面，诊断方法包括使用如本文公开的抗体或抗原结合片段，在一方面，其特异性结合DNABII多肽的尾部区域或片段(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域，IHFA或IHFB的尾部区域，和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在另一方面，所述抗体或抗原结合片段被可检测地标记。在一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:4、5或6的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:10、11或12的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
本文进一步提供了检测对象体内生物膜的方法，包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：向对象施用有效量的本文公开的抗体或其片段、多肽或CDR中的一种或多种。在一方面，诊断方法包括使用如本文公开的抗体或抗原结合片段，其在一方面特异性结合DNABII多肽的尾部区域或片段(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域，IHFA或IHFB的尾部区域，和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。DNABII多肽可以是IHF或HU肽。在另一方面，所述抗体或抗原结合片段被可检测地标记。在一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:4、5或6的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:10、11或12的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
本文提供了预防或破坏对象中的生物膜的方法。所述方法包括以下标准，或实质上由其组成，或由其组成：向对象施用本文公开的结合DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域，IHFA或IHFB的头部区域，和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)的抗体或其片段。在一个方面，本文提供了预防或破坏对象中的生物膜的方法，该方法包括以下步骤，或由其组成，或由其组成：向对象施用有效量的一种或多种如本文公开的抗体、其片段、多肽、或CDR，和/或有效量的一种或多种编码所述抗体、其片段、多肽或CDR的多核苷酸或载体。DNABII肽可以是IHF或HU肽。在一个方面，所述抗体或其抗原结合片段选择性结合DNABII多肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域，和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1、2或3的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7、8或9的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在又一个实施方案中，接触是在体内或体外进行。所述抗体或其抗原结合片段可以被可检测地标记。这些方法可以与诊断方法相结合，以检测和/或监测生物膜的形成和/或破坏。在一方面，诊断方法包括使用如本文公开的抗体或抗原结合片段，其在一方面特异性结合DNABII多肽的尾部区域或片段(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域，IHFA或IHFB的尾部区域，和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在另一方面，所述抗体或抗原结合片段被可检测地标记。
本文提供治疗以在对象中形成生物膜为特征的病症的方法，该方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：向对象施用本文公开的结合DNABII多肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)的抗体或其片段。在一方面，本文提供预防或治疗对象中以形成生物膜为特征的病症的方法，其通过向对象施用有效量的本文公开的抗体、其片段、多肽或CDR中的一种或多种，和/或有效量的一种或多种编码所述抗体、其片段、多肽或CDR的多核苷酸或载体。在另一个方面，本文提供用于抑制、预防或治疗在对象中产生生物膜的微生物感染的方法，该方法包括以下步骤，或由以下步骤组成，或由以下步骤组成：向对象施用有效量的一种或多种如本文公开的抗体、其片段、多肽或CDR，和/或有效量的一种或多种编码该抗体、其片段、多肽或CDR的多核苷酸或载体。DNABII多肽可以是IHF或HU肽。在一个方面，抗体或其抗原结合片段选择性地结合DNABII多肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域，和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1、2或3的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ IDNO:7、8或9的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在又一个实施方案中，接触是在体内或体外进行。这些方法可以与诊断方法相结合，以检测和/或监测生物膜的形成和/或破坏。在一方面，诊断方法包括使用如本文公开的抗体或抗原结合片段，其在一方面特异性结合DNABII多肽的尾部区域或尾部片段(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域，IHFA或IHFB的尾部区域，和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在另一方面，所述抗体或抗原结合片段被可检测地标记。
在上述方法中，生物膜来源于产生革兰氏阴性或革兰氏阳性生物膜的细菌。病症的非限制性实例选自：慢性非愈合伤口，包括静脉溃疡和糖尿病足溃疡、耳部感染、鼻窦感染、尿路感染、胃肠道疾病、肺部感染、呼吸道感染、囊性纤维化、慢性阻塞性肺病、导管相关感染、留置装置相关感染、植入假体相关感染、骨髓炎、蜂窝组织炎、脓肿和牙周病。
在本文公开的方法的某些实施方案中，所述抗体、其片段、多肽或CDR中的一种或多种的施用减少对象中的一种或多种促炎细胞因子。促炎细胞因子的非限制性实例包括：IL-1β、IL6、IL8、IL12p70、IL17A、干扰素(IFN)和肿瘤坏死因子(TNF)。此外或作为选择，施用有效量的抗体、其片段、多肽或CDR中的一种或多种增加对象中的一种或多种抗炎细胞因子。在一个实施方案中，抗炎细胞因子包括但不限于IL10、IL13、IL-1ra、IL-4、IL-11和转化生长因子-β(TGF-β)。
本文还提供了用于以下一项或多项的方法：在有需要的对象中诱导促炎反应或治疗由减少的炎症反应介导的病症，该方法包括以下步骤，或者实质上由其组成，或由其组成：向对象施用有效量的结合至DNABII多肽的尾部区域(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、和/或尾嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)的抗体。DNABII多肽可以是IHF或HU肽。这些方法可以与诊断方法结合以检测和/或监测组织或对象中的细胞因子释放或水平。在一方面，诊断方法包括使用如本文公开的抗体或抗原结合片段，其在一方面特异性结合DNABII多肽的尾部区域或尾部片段(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域，IHFA或IHFB的尾部区域，和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在另一方面，所述抗体或抗原结合片段被可检测地标记。非限制性细胞因子包括，例如，IL1β、IL6、IL8、IL12p70、IL10、IL13和IFN。
本文还提供了用于在有需要的对象中抑制促炎反应或治疗由增强的炎症反应介导的病症中的一种或多种的方法，该方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：向对象施用有效量的结合至DNABII多肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)的抗体或其抗原结合片段。DNABII多肽可以是IHF或HU肽。这些方法可以与诊断方法结合以检测和/或监测组织或对象中的细胞因子释放或水平。在一方面，诊断方法包括使用如本文公开的抗体或抗原结合片段，其在一方面特异性结合DNABII多肽的尾部区域或尾部片段(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域，IHFA或IHFB的尾部区域，和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在另一方面，所述抗体或抗原结合片段被可检测地标记。非限制性细胞因子包括，例如，IL1β、IL6、IL8、IL12p70、IL10、IL13和IFN。
此外或作为选择，本文提供了检测表面上的生物膜的方法，包括以下步骤，或由其组成，或由其组成：使表面(在一方面易感生物膜或含有生物膜的表面)与有效量的一种或多种如本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽或CDR接触，其中该抗体、其片段、多肽或CDR结合DNABII肽的尾部区域或头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在一个实施方案中，接触是在体内或体外进行。在一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:4、5或6的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:10、11或12的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一方面，所述抗体或抗原结合片段被可检测地标记。
此外或作为选择，本文提供了一种用于检测在对象中产生生物膜的微生物感染的方法。该方法包括以下步骤，或由其组成，或由其组成：使有效量的本文公开的抗体、其片段、多肽或CDR中的一种或多种与从对象分离的怀疑包含生物膜的物样品并接触，并检测所述抗体、其片段、多肽或CDR与样品中任何生物膜的结合。在一个实施方案中，所述抗体、其片段、多肽或CDR结合DNABII肽的尾部或头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在进一步的实施方案中，接触是体内或体外的。在一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:4、5或6的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:10、11或12的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一方面，所述抗体或抗原结合片段被可检测地标记。
此外或作为选择，本文提供了用于筛选具有生物膜的对象的方法，该方法包括以下步骤，或由其组成，由其组成：将有效量的如本文公开的抗体、其片段、多肽或CDR中的一种或多种与从对象分离的包含生物膜的生物样品接触，并检测所述抗体、其片段、多肽或CDR与样品中任何生物膜的结合。在一个实施方案中，所述抗体、其片段、多肽或CDR结合DNABII肽的尾部或头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI、IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在进一步的实施方案中，选择检测到结合的对象用于施用有效量的一种或多种如本文公开的抗体、其片段、多肽或CDR，和/或有效量的一种或多种编码所述抗体、其片段、多肽或CDR的多核苷酸或载体，其中所述抗体、其片段、多肽或CDR结合DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域，IHFA或IHFB的头部区域，或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在又一个实施方案中，接触是在体内或体外进行。在一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:4、5或6的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:10、11或12的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一方面，所述抗体或抗原结合片段被可检测地标记。
本文进一步提供了制备干扰核酸的方法，该方法包括制备由约10-20个核苷酸组成的核酸，所述核酸将特异性结合如本文所公开的抗体或其片段的特异性结合伴侣，并且任选地分离通过该方法制备的干扰核酸。
当在体外实践时，所公开的几种方法可用于筛选或确认与本文公开的多肽、多核苷酸、抗体、宿主细胞、小分子和组合物具有相同、相似或相反能力的试剂(例如，抗体、其片段和模拟物)。或者，它们可用于确定哪种试剂最适合治疗微生物感染或治疗是否有效。例如，可以通过具有两个样品来筛选新的试剂或联合疗法，这些样品含有例如DNABII多肽和微生物DNA以及待测试的试剂。DNABII多肽可以是IHF或HU肽。第二个样品含有DNABII多肽和微生物DNA以及已知有效的试剂以用作阳性对照，例如如上所述的试剂，例如抗体或其抗原结合片段。在另一方面，本文提供了几个样品，并且将试剂以增加的稀释度添加到系统中以确定在临床环境中可能有效治疗对象的最佳剂量。如本领域技术人员显而易见的，可以提供含有DNABII多肽和微生物DNA的阴性对照。在另一方面，DNABII多肽和微生物DNA被可检测地标记，例如用发光分子标记，当它们彼此紧密接触时会发出信号。样品在相似的条件下被包含一段有效的时间，以使试剂抑制、竞争或滴定DNABII多肽与微生物DNA之间的相互作用，然后分析样品的发光分子发射的信号。如果样品发出信号，则药物不能有效抑制结合。
在另一方面，体外方法在小型化的腔室载玻片系统中实施，其中可以从人/动物中分离引起感染的微生物(例如细菌)分离物，然后培养以使其在体外生长为生物膜。将药物(例如，抗体或其抗原结合片段)或潜在试剂生物膜单独或与另一种试剂组合添加到培养物中，具有或不具有递增的潜在化合物或试剂(例如抗体或其抗原结合片段)的稀释度，以找到当递送给存在感染的对象时可能有效治疗该患者的最佳剂量。如本领域技术人员显而易见的，可以同时进行阳性和阴性对照。
在进一步的方面，该方法在高通量平台中实施，在流动池中使用如上所述的试剂，例如抗体或其抗原结合片段，和/或潜在试剂(单独或与另一种试剂组合)。如上所述的试剂，例如抗体或其抗原结合片段，或潜在试剂单独或与另一种试剂组合添加到培养物中，具有或不具有递增的潜在试剂或如上所述试剂(例如，抗体或其抗原结合片段，或其他抗体、小分子、试剂等)的稀释度，以找到当递送至存在感染的对象时可能有效治疗该患者的最佳剂量。对生物膜分离物进行超声处理以将生物膜细菌与DNABII多肽(例如与微生物DNA结合的IHF)分离。借助平台上的抗DNABII或IHF抗体分离DNABII多肽-DNA复合物。然后用例如盐洗释放微生物DNA，并用于识别添加的生物膜细菌。然后，例如通过PCR测序来鉴定释放的DNA。如果DNA未被释放，则该试剂成功执行或结合微生物DNA。如果在样品中发现DNA，则该试剂不干扰DNABII多肽与微生物DNA的结合。如本领域技术人员显而易见的，可以同时进行阳性和/或阴性对照。
上述方法也可以用作诊断测试，因为给定的细菌物种可能会相对一种试剂比另一种试剂更好地响应其生物膜的逆转，这种快速高通量测定系统可以允许本领域技术人员测定一组可能的抗DNABII或IHF样试剂，以确定该组中最有效的试剂。
这些方法的优势在于，医院中的大多数临床微生物学实验室已经具备使用在液体培养物(或浮游式(planktonically)中生长的细菌进行此类检测(即测定MIC、MBC值)的设备。如本领域技术人员显而易见的，当细菌引起疾病时，它们通常不会以浮游方式生长。相反，它们作为稳定的生物膜生长，并且这些生物膜对抗生素、抗体或其他疗法的治疗具有明显更强的抵抗力。这种抗性是大多数MIC/MBC值无法准确预测体内功效的原因。因此，通过确定什么“剂量”的药剂可以在体外逆转细菌生物膜(如上所述)，申请人的临床前测定将是临床疗效的更可靠预测指标，即使作为个性化医疗的应用。
除了临床环境外，这些方法还可用于识别导致感染的微生物和/或确认工业环境中的有效治疗和试剂。因此，这些试剂可用于处理、抑制或破坏工业环境中的生物膜。
在上述方法的另一方面，依次或同时添加已知抑制潜在感染生长的抗生素或抗微生物剂，以确定是否可以抑制感染。在添加缺失的复合物以测定生物膜抑制之前，还可以将干扰剂添加到微生物DNA或DNABII多肽中。在一方面，DNase治疗被排除在使用方法之外。
当在非人类动物如栗鼠体内实践时，该方法提供了临床前筛选以鉴定可单独使用或与其他药剂组合使用以破坏生物膜的药剂。
在另一个方面，本文提供了一种抑制、预防或破坏对象体内生物膜的方法，该方法通过向对象施用有效量的如上所述的试剂，例如抗体或其抗原结合片段，从而抑制、预防或破坏对象体内的生物膜。所述方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：向对象施用本文公开的结合DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域，IHFA或IHFB的头部区域，和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。DNABII肽可以是IHF或HU肽。抗体或其抗原结合片段可以被可检测地标记。这些方法可以与诊断方法相结合，以检测和/或监测生物膜的形成和/或破坏。在一方面，诊断方法包括使用如本文公开的抗体或抗原结合片段，其在一方面特异性结合DNABII多肽的尾部区域或片段(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域，IHFA或IHFB的尾部区域，或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在另一方面，抗体或抗原结合片段被可检测地标记。
在一方面，所述试剂是一种或多种彼此相同或不同的抗体和/或抗原结合片段。在一些实施方案中，此类抗体或抗原结合片段单独或彼此组合施用，或与抗体以外的试剂或另外的药学上有效的试剂组合施用(单独或与药学上可接受的载体一起)。此类对象的非限制性实例包括哺乳动物，例如宠物和人类患者。
本文还提供了一种用于在有需要的对象中诱导免疫反应或赋予其被动免疫的方法，该方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：向对象施用有效量的一种或多种如本文所述的结合DNABII肽(例如IHF或HU肽)的头部区域的抗体或其抗原结合片段。DNABII肽的这种头部区域包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI。在一个方面，本文提供了一种在对象中赋予被动免疫的方法，该方法包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：向对象施用有效量的一种或多种如本文公开的抗体、其片段、多肽、或CDR，和/或有效量的一种或多种编码所述抗体、其片段、多肽或CDR的多核苷酸或载体，其中所述抗体、片段、多肽或CDR结合至DNABII肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域，IHFA或IHFB的头部区域，或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)。在一个实施方式中，本文提供一种抗体或其片段，其包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。在另一个实施方式中，所述抗体或其片段包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成，所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ IDNO:1、2或3的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7、8或9的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。所述抗体或抗原结合片段被可检测地标记。这些方法可以与诊断方法相结合，以检测和/或监测生物膜的形成和/或破坏。在一方面，诊断方法包括使用如本文公开的抗体或抗原结合片段，其在一方面特异性结合DNABII多肽的尾部区域或尾部片段(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域，IHFA或IHFB的尾部区域，和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)。在另一方面，所述抗体或抗原结合片段被可检测地标记。
在一方面，所述试剂是一种或多种彼此相同或不同的抗体和/或抗原结合片段。在一些实施方案中，此类抗体或抗原结合片段单独或彼此组合施用，或与抗体以外的试剂或另外的药学有效试剂单独或与药学上可接受的载体组合施用。
在另一方面，该方法进一步包括以下步骤，或实质上由其组成，或由其组成：向对象施用有效量的一种或多种抗微生物剂、抗原肽或佐剂。
抗微生物剂的非限制性实例是另一种疫苗成分，例如表面抗原，例如OMP P5、rsPilA、OMP 26、OMP P2或IV型菌毛蛋白(参见Jurcisek and Bakaletz(2007)J.Bacteriology 189(10):3868-3875；Murphy,T.F.et al.(2009)The PediatricInfectious Disease Journal 28:S121-S126)。
本文公开的试剂和组合物可以与其他抗微生物剂和/或表面抗原同时或顺序施用。在一个特定方面，例如通过直接注射或通过吸入局部施用至感染部位。施用的其他非限制性实例包括通过包括经皮、尿道、舌下、直肠、阴道、眼部、皮下、肌内、腹膜内、鼻内、吸入或口服的一种或多种方法。
可通过本文公开的方法治疗的微生物感染和疾病包括由产生物膜的革兰氏阳性或革兰氏阴性生物体引起的感染，例如，无乳链球菌、脑膜炎奈瑟菌、龋垢密螺旋体(Treponemes denticola)、苍白密螺旋体(Treponemes pallidum)、洋葱伯克霍尔德菌或类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei)。在一方面，微生物感染是流感嗜血杆菌(不可分型)、卡他莫拉菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、铜绿假单胞菌、结核分枝杆菌中的一种或多种。这些微生物感染可能存在于上气道、中气道和下气道(中耳炎、鼻窦炎、支气管炎，但也可能出现在慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性咳嗽、囊性纤维化(CF)的并发症和/或主要原因)和社区获得性肺炎(CAP)。因此，通过实施本文公开的体内方法，也可以预防或治疗这些疾病和由这些感染引起的并发症。
感染也可能发生在口腔(龋齿、牙周炎)，由变形链球菌、牙龈卟啉单胞菌、放线聚合杆菌引起。感染也可能局限于皮肤(脓肿、“葡萄球菌”感染、脓疱病、烧伤继发感染、莱姆病)，由金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌和伯氏疏螺旋体引起。也可以治疗泌尿道感染(UTI)，通常由大肠杆菌引起。胃肠道(GI)感染(腹泻、霍乱、胆结石、胃溃疡)通常由肠道沙门氏菌血清型、霍乱弧菌和幽门螺杆菌引起。生殖道感染包括并且通常由淋病奈瑟菌引起。感染可能是由粪肠球菌引起的膀胱感染或留置装置感染。与植入的假体装置相关的感染可以通过本文公开的方法进行治疗，例如人工髋关节或膝关节置换物，或牙科植入物，或医疗装置，例如泵、导管、支架或监测系统，它们通常由多种细菌引起。这些装置可以被包覆或缀合至如本文所述的试剂。因此，通过实施本文公开的体内方法，也可以预防或治疗这些感染引起的这些疾病和并发症。
由无乳链球菌引起的感染也可以通过本文公开的方法进行治疗，它是新生儿细菌性败血症的主要原因。也可以治疗由脑膜炎奈瑟菌引起的、可引起脑膜炎的感染。
因此，适用于本文公开的方法的施用途径包括鼻内、肌肉内、尿道、气管内、皮下、皮内、透皮、局部施用、静脉内、直肠、鼻腔、口服、吸入和其他肠内和肠胃外施用途径。如果需要，可以组合给药途径，或根据药剂和/或所需效果进行调整。活性剂可以单剂量或多剂量给药。适合递送的这些方法和途径的实施方案包括全身或局部途径。一般而言，适用于本文公开的方法的给药途径包括但不限于直接注射、肠内、肠胃外或吸入途径。
吸入给药外的肠胃外给药途径包括但不限于局部、经皮、皮下、肌肉内、眶内、囊内、脊髓内、胸骨内和静脉内途径，即除通过消化道外的任何给药途径。可以进行肠胃外给药以实现抑制剂的全身或局部递送。在需要全身递送的情况下，给药通常涉及药物制剂的侵入性或全身吸收的局部或粘膜给药。
本文公开的药剂也可以通过肠内给药递送至对象。肠内给药途径包括但不限于口服和直肠(例如，使用栓剂)递送。
通过皮肤或粘膜施用活性物质的方法包括但不限于局部施用合适的药物制剂、经皮传输、经皮传输、注射和表皮施用。对于经皮传输，吸收促进剂或离子电渗疗法是合适的方法。离子电渗传输可以使用市售的“贴片”来完成，这些贴片通过电脉冲穿过完整的皮肤连续递送其产品，并持续数天或更长时间。
在本文公开的方法的各种实施方案中，干扰剂将通过吸入、注射或口服连续地每天施用，至少每天一次(QD)，在各种实施方案中，一天两次(BID)、三次(TID)，甚至一天四次。通常，治疗有效的日剂量将是至少约1mg，或至少约10mg，或至少约100mg，或约200至约500mg，并且有时取决于化合物会多达约1g至约2.5g。
可以根据本文公开的方法使用胶囊剂、片剂、口服混悬剂、用于肌肉内注射的混悬剂、用于静脉内输注的混悬剂、用于局部应用的凝胶或乳膏、或用于关节内注射的混悬剂来完成给药。
本文所述的组合物的剂量、毒性和治疗功效可以通过在细胞培养物或实验动物中的标准药学程序来确定，例如，确定LD50(致死50％的群体的剂量)和ED50(在50％群体中治疗有效的剂量)。毒性和治疗作用之间的剂量比是治疗指数，它可以表示为比值LD50/ED50。在某些实施方案中，组合物表现出高治疗指数。虽然可以使用表现出毒副作用的化合物，但应注意设计一种将此类化合物靶向受影响组织部位的递送系统，以尽量减少对未感染细胞的潜在损害，从而减少副作用。
从细胞培养试验和动物研究中获得的数据可用于制定用于人的剂量范围。此类化合物的剂量位于(在某些实施方案中)包括ED50且具有很少毒性或没有毒性的循环浓度范围内。剂量可以在此范围内变化，这取决于所使用的剂型和所使用的给药途径。对于在这些方法中使用的任何化合物，治疗有效剂量可以最初从细胞培养测定中估计。可以在动物模型中制定出剂量，以达到包括在细胞培养中确定的IC50(即，达到症状的最大抑制一半时的测试化合物的浓度)的循环血浆浓度范围。此类信息可用于更准确地确定人体中的有用剂量。血浆中的水平可通过例如高效液相色谱法测量。
在一些实施方案中，足以实现治疗或预防效果的组合物的有效量为每次给药约0.000001mg/kg体重至每次给药约10,000mg/kg体重。合适地，剂量范围为每次给药约0.0001mg/kg体重至每次给药约100mg/kg体重。给药可以作为初始剂量然后是一个或多个“加强”剂量的形式提供。可以在初始剂量后一天、两天、三天、一周、两周、三周、一、二、三、六或十二个月提供加强剂量。在一些实施方案中，在评估受试者对先前施用的反应之后施用加强剂量。
本领域技术人员将理解某些因素可能影响有效治疗对象所需的剂量和时间，包括但不限于疾病或病症的严重性、先前的治疗、对象的一般健康状况和/或年龄，以及存在的其他疾病。此外，用治疗有效量的本文所述的治疗组合物治疗对象可包括单次治疗或一系列治疗。
多肽
本文还提供了分离的多肽，其包含抗体的重链和轻链、其抗原结合片段、CDR和它们各自的等同体，另外在氨基或羧基末端(或两者处)添加至多25个、或20个、或15个、或至多10个、或至多5个随机氨基酸。
在一方面，本文提供了分离的多肽，其包含SEQ ID NO：1-14或24-27的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。多肽可以进一步包含可检测或纯化标记。
本公开内容还提供了分离的或重组的多肽，其包含所有十四个分离的多肽或片段或其每一个的等同体中的两个或更多个、或三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个，九额或更多个、十个或更多个、十一个或更多个、十二个或更多个、十三个或更多个，或实质上由其组成，或由其组成。
在任何上述实施方案中，肽接头可以添加到多肽的N末端或C末端。“接头”或“肽接头”是指与多肽序列的N末端或C末端连接的肽序列。在一方面，接头的长度为约1至约20个氨基酸残基，或者为2至约10、约3至约5个氨基酸残基。肽接头的一个例子是Gly-Pro-Ser-Leu-Lys-Leu(SEQ ID NO:33)。其他例子包括Gly-Gly-Gly；Gly-Pro-Ser-Leu(SEQ ID NO:34)；Gly-Pro-Ser；Pro-Ser-Leu-Lys(SEQ ID NO:35)；Gly-Pro-Ser-Leu-Lys(SEQ ID NO:36)和Ser-Leu-Lys-Leu(SEQ ID NO:37)。
本文公开的分离的多肽旨在包括来自原核和真核宿主细胞的重组产生的多肽和蛋白质，以及其突变蛋白、类似物和片段，此类细胞的例子如上所述。在一些实施方案中，该术语还包括如本文所述的抗体和抗独特型抗体。可以使用本领域已知的和本文简要描述的方法分离或生产此类多肽。
应当理解，野生型多肽或蛋白质的功能等同体或变体也在本公开的范围内，例如，具有氨基酸的保守氨基酸取代的多肽或蛋白质。
在另一方面，多肽缀合或连接至可检测标记或试剂以增加多肽的半衰期，例如PEG化、PEG模拟物、聚唾液酸化、HES化或糖基化。合适的标记是本领域已知的并在本文中描述。
在又一方面，具有或不具有可检测标记的多肽可以被包含或表达在原核或真核宿主细胞例如树突细胞的表面上。
蛋白质和多肽可通过本领域技术人员已知的许多方法获得，包括纯化、化学合成和重组方法。多肽可以通过诸如用抗体进行免疫沉淀的方法以及诸如凝胶过滤、离子交换、反相和亲和层析等标准技术从制备物(例如宿主细胞系统)中分离。对于这种方法，例如参见Deutscher et al.(1999)Guide To Protein Purification:Methods In Enzymology(Vol.182,Academic Press))。因此，本公开还提供了获得这些多肽的方法以及通过这些方法可获得和获得的产物。
多肽也可以通过化学合成获得，使用市售的自动化肽合成仪，例如由美国加利福尼亚州福斯特市的Perkin/Elmer/Applied Biosystems,Inc.制造的430A或431A型自动肽合成仪。可以通过例如高效液相色谱法(HPLC)使合成的多肽沉淀并进一步纯化。因此，本公开还提供了一种化学合成本文公开的蛋白质的方法，其通过提供蛋白质和试剂(例如氨基酸和酶)的序列并将氨基酸以适当的方向和线性序列连接在一起。
作为选择，蛋白质和多肽可以通过众所周知的重组方法(例如上述Sambrook etal.(1989)所述的方法)使用本文所述的宿主细胞和载体系统获得。
本申请还提供了用于诊断方法的与可检测试剂缀合的本文所述多肽。例如，可检测标记的多肽可以与柱结合并用于抗体的检测和纯化。它们也可用作产生抗体的免疫原。本文公开的多肽可用于体外测定系统以筛选调节细胞过程的试剂或药物。在另一个方面，对DNABII多肽的尾部区域(包括但不限于：IHF或HU的尾部区域、IHFA或IHFB的尾部区域、和/或尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)具有特异性的抗体在用于检测生物膜的诊断测定中特别有用，并且可以单独使用或与本文所述的一种或多种抗体组合使用。在一方面，尾部区域特异性抗体被用作对DNABII多肽的头部区域(包括但不限于：IHF或HU的头部区域、IHFA或IHFB的头部区域、和/或头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)特异的抗体的伴随诊断。DNABII多肽可以是IFH或HU多肽。
本领域技术人员众所周知，可以对本文公开的肽进行修饰以使其具有改变的特性。如本文所用，术语“氨基酸”是指天然和/或非天然或合成氨基酸，包括甘氨酸和D或L旋光异构体，以及氨基酸类似物和肽模拟物。如果肽链很短，三个或更多氨基酸的肽通常称为寡肽。如果肽链较长，则该肽通常称为多肽或蛋白质。
本文公开的肽可以被修饰以包括非天然氨基酸。因此，肽可包含D-氨基酸、L-氨基酸的组合和各种“设计”氨基酸(例如，β-甲基氨基酸、C-α-甲基氨基酸和N-α-甲基氨基酸等)以赋予肽特殊特性。此外，通过在特定的偶联步骤分配特定的氨基酸，可以生成具有α-螺旋、β折叠、β片层、γ-转角的肽和环肽。通常，认为α-螺旋二级结构或随机二级结构可能是特别有用的。
本文公开的多肽也可以与各种固相载体或液相载体组合，固相载体例如是植入物、支架、糊剂、凝胶、牙科植入物或医疗植入物，液相载体例如是珠子、无菌溶液或水溶液，药学上可接受的载体、药学上可接受的聚合物、脂质体、胶束、悬浮液和乳液。非水溶剂的例子包括丙二醇、聚乙二醇和植物油。当用于制备抗体或在体内诱导免疫反应时，载体还可以包括用于非特异性增强特异性免疫反应的佐剂。熟练的技术人员可以容易地确定是否需要佐剂并选择一种佐剂。然而，仅出于说明的目的，合适的佐剂包括但不限于弗氏完全和不完全佐剂、矿物盐和多核苷酸。其他合适的佐剂包括单磷酰脂质A(MPL)、大肠杆菌的热不稳定肠毒素的突变衍生物、霍乱毒素的突变衍生物、CPG寡核苷酸和源自角鲨烯的佐剂。
本公开内容还提供了一种药物组合物，其包含以下组分，或实质上由以下组分组成，或由以下组分组成：本文公开的任何多肽、类似物、突变体或片段，其单独或与彼此或其他试剂组合，所述其他试剂例如是抗生素和可接受的载体或固体支持物。这些组合物可用于本文所述的各种诊断和治疗方法。
多核苷酸
本公开内容还提供了编码一种或多种上述抗体、其片段、CDR、分离或重组多肽及其各自互补序列的分离或重组多核苷酸。本文进一步提供了包含分离的或重组的多核苷酸的载体，其实例是本领域已知的并在本文中简要描述。在一个方面，多于一种分离的或重组的多核苷酸在单个单元中表达时，该分离的或重组的多核苷酸可以包含在多顺反子载体中。所述多核苷酸可以是DNA、RNA、mRNA或干扰RNA，例如siRNA、miRNA或dsRNA。
在另一个方面，本公开提供干扰剂，其是干扰微生物生物膜中DNA与多肽或蛋白质结合的多核苷酸，或类似于Holliday接头的四向接头多核苷酸、类似于复制叉的三向接头多核苷酸、具有固有柔韧性的多核苷酸、或弯曲多核苷酸，其可以治疗或抑制DNABII多核苷酸(HU或IHF)与微生物DNA结合，从而治疗、预防或抑制生物膜形成以及相关的感染和疾病。本领域技术人员可以使用本文提供的信息和本领域技术人员的知识制备此类多核苷酸。参见Goodman and Kay(1999)J.Biological Chem.274(52):37004-37011和Kamashev andRouviere-Yaniv(2000)EMBO J.19(23):6527-6535。
本公开进一步提供了可操作地连接到RNA转录启动子的分离的或重组的多核苷酸，以及用于DNA或RNA的复制和/或瞬时或稳定表达的其他调节序列。如本文所用，术语“可操作地连接”是指以启动子将指导RNA从DNA分子转录的方式定位。这种启动子的例子是SP6、T4和T7。在某些实施方案中，细胞特异性启动子用于插入的多核苷酸的细胞特异性表达。包含启动子或启动子/增强子、终止密码子和可选择标记序列以及克隆位点(插入其中的DNA片段可被可操作地连接至启动子)的载体是本领域已知的并且可商购获得。对于一般方法和克隆策略，参见Gene Expression Technology(Goeddel ed.,Academic Press,Inc.(1991))和其中引用的参考文献以及Vectors:Essential Data Series(Gacesa andRamji,eds.,John Wiley&Sons,NY(1994))，其中包含各种合适载体的图谱、功能特性、商业供应商和GenEMBL登录号。
在一个实施方案中，衍生自本文公开的多核苷酸的多核苷酸编码具有如本文所述的诊断和治疗用途的多肽或蛋白质以及用于鉴定可能存在或不存在的蛋白质转录物的探针。这些核酸片段可以通过例如限制性酶消化较大的多核苷酸然后用可检测的标记物标记来制备。或者，可以使用分子的切口平移来生成随机片段。有关此类片段的制备和标记方法，请参见上述Sambrook et al.(1989)。
含有这些核酸的表达载体可用于获得宿主载体系统以产生蛋白质和多肽。暗示这些表达载体必须在宿主生物体中作为附加体或作为染色体DNA的组成部分是可复制的。合适的表达载体的非限制性例子包括质粒、酵母载体、病毒载体和脂质体。腺病毒载体特别适用于将基因引入体内组织，因为它们在体外和体内都具有高水平的表达和有效的细胞转化。当将核酸插入合适的宿主细胞，例如原核或真核细胞并且宿主细胞复制时，可以重组产生蛋白质。合适的宿主细胞将取决于载体并且可以包括使用已知方法构建的哺乳动物细胞、动物细胞、人类细胞、猿猴细胞、昆虫细胞、酵母细胞和细菌细胞。参见上述Sambrook etal.(1989)。除了使用病毒载体将外源核酸插入细胞外，还可以通过本领域已知的方法将核酸插入宿主细胞，例如细菌细胞的转化；使用磷酸钙沉淀转染哺乳动物细胞；或DEAE-葡聚糖；电穿孔；或显微注射。方法参见上述Sambrook et al.(1989)。因此，本公开内容还提供含有编码蛋白质或多肽或抗体的多核苷酸的宿主细胞，例如哺乳动物细胞、动物细胞(大鼠或小鼠)、人细胞或原核细胞(如细菌细胞)。
多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，例如甲基化核苷酸和核苷酸类似物。如果存在，可以在多核苷酸组装之前或之后赋予对核苷酸结构的修饰。核苷酸序列可以被非核苷酸成分打断。多核苷酸可在聚合后进一步修饰，例如通过与标记组分缀合。该术语还指双链和单链分子。除非另有说明或要求，本文公开的多核苷酸的任何实施方案既包括双链形式又包括已知或预测构成双链形式的两种互补单链形式中的每一种。
当载体用于本文公开的方法中作为体内或离体基因治疗时，示例性的(但非限制性的)并且可以是特别有用的载体是药学上可接受的载体，例如复制缺陷型逆转录病毒或腺病毒载体。可以进一步修饰含有本文公开的核酸的药学上可接受的载体以瞬时或稳定地表达插入的多核苷酸。如本文所用，术语“药学上可接受的载体”包括但不限于具有选择性靶向核酸并将核酸引入分裂细胞中的能力的载体或递送载体。这种载体的一个例子是“复制缺陷型”载体，其定义为不能产生病毒蛋白，从而阻止了载体在受感染的宿主细胞中的传播。复制缺陷型逆转录病毒载体的一个例子是LNL6(Miller et al.(1989)BioTechniques7:980-990)。已经建立了使用复制缺陷型逆转录病毒进行逆转录病毒介导的基因标记基因转移的方法(Bordignon(1989)PNAS USA 86:8912-8952；Culver(1991)PNAS USA 88:3155；以及Rill(1991)Blood 79(10):2694-2700)。
本公开内容还提供了含有和/或表达本文公开的多核苷酸的基因修饰细胞。可以通过插入上游调控序列如启动子或基因激活子来产生遗传修饰的细胞(参见美国专利号5,733,761)。在一个实施方案中，该修饰细胞是真核细胞或原核细胞。
多核苷酸可以缀合至可检测标记，例如用于检测细胞中核酸和/或基因表达的酶标记物或放射性同位素。本领域已知多种合适的可检测标记，包括荧光、放射性、酶或其他配体，例如抗生物素蛋白/生物素，它们能够提供可检测信号。在一个方面，人们可能希望使用荧光标记或酶标签，例如脲酶、碱性磷酸酶或过氧化物酶，而不是放射性或其他环境不希望的试剂。在酶标签的情况下，可以使用量热指示底物来提供人眼可见的方法或分光光度法，以鉴定与含有互补核酸的样品的特异性杂交。因此，本公开进一步提供了一种用于检测单链多核苷酸或其互补物的方法，通过在允许互补单链多核苷酸的杂交(任选地中等严格的杂交条件)的条件下，或任选地，在高度严格的杂交条件下，使靶单链多核苷酸与作为本文公开的多核苷酸的一部分的标记的单链多核苷酸(探针)接触。杂交的多核苷酸对与未杂交的单链多核苷酸分开。使用本领域技术人员已知的方法检测杂交的多核苷酸对，并且这些诶方法在例如上述Sambrook et al.(1989)中阐述。
本公开中具体展示的多核苷酸可以使用化学合成、重组克隆方法、PCR或其任何组合来获得。化学多核苷酸合成的方法是本领域已知的并且不需要在本文中详细描述。本领域技术人员可以使用本文提供的序列数据通过使用DNA合成仪或从商业服务订购来获得所需的多核苷酸。
本文公开的多核苷酸可以使用PCR分离或复制。PCR技术是美国专利4,683,195；4,800,159；4,754,065；和4,683,202的主题，并在PCR:The Polymerase Chain Reaction(Mullis et al.eds.,Birkhauser Press,Boston(199.4))或上述MacPherson et al.(1991)and(1995)及其引用的参考文献中描述。或者，本领域技术人员可以使用本文提供的序列和商业DNA合成仪来复制DNA。因此，本公开还提供了获得本文公开的多核苷酸的方法，通过提供多核苷酸的线性序列、核苷酸、合适的引物分子、化学试剂(如酶)和它们的复制说明，并且化学复制或以适当方向连接核苷酸，以获得多核苷酸。在一个单独的实施方案中，这些多核苷酸被进一步分离。更进一步，本领域技术人员可以将多核苷酸插入合适的复制载体中，并将载体插入合适的宿主细胞(原核或真核)中用于复制和扩增。如此扩增的DNA可以通过本领域技术人员已知的方法从细胞中分离。本文进一步提供了通过该方法获得多核苷酸的方法以及如此获得的多核苷酸。
可以通过首先将DNA多核苷酸插入合适的宿主细胞中来获得RNA。DNA可以通过任何合适的方法来递送，例如，通过使用合适的基因递送载体(例如，脂质体、质粒或载体)或通过电穿孔。当细胞复制并且DNA被转录成RNA时；然后可以使用本领域技术人员已知的方法分离RNA，例如，参见上述Sambrook et al.(1989)。例如，可以根据Sambrook等人中提出的程序，使用各种裂解酶或化学溶液分离mRNA。参见上述Sambrook et al.(1989)。或按照制造商提供的随附说明通过核酸结合树脂提取。
与本文公开的多核苷酸表现出序列互补性或同源性的多核苷酸可用作杂交探针或作为本文鉴定的特定多核苷酸的等效物。由于转录物的完整编码序列是已知的，因此该序列或同源序列的任何部分都可以用于本文公开的方法中。
本领域已知，特异性杂交不需要“完美匹配”的探针。通过取代、缺失或插入少量碱基实现的探针序列的微小变化不会影响杂交特异性。一般来说，可以容忍多达20％的碱基对错配(当最佳对齐时)。在一些实施方案中，可用于检测上述mRNA的探针与同源区至少约80％相同。在一些实施方案中，探针与同源区比对后的相应基因序列具有85％的同一性；在一些实施例中，它表现出90％的同一性。
这些探针可用于放射测定(例如，Southern和Northern印迹分析)以检测、预测、诊断或监测各种细胞或含有这些细胞的组织。探针也可以连接到固体支持物或阵列(如芯片)上，用于高通量筛选试验，以检测与本文公开的多核苷酸相对应的基因的表达。因此，本公开还提供了一种用于高通量筛选的附着于固体支持物的探针，其包含或对应于本文公开的多核苷酸，或其等同物，或其互补物，或其片段。
片段的总大小以及互补片段的大小将取决于特定核酸片段的预期用途或应用。较小的片段通常可用于杂交实施方案，其中互补区的长度可以变化，例如在至少5至10至约100个核苷酸之间，或者甚至是根据人们希望检测的互补序列的全长。
具有超过5至10个核苷酸长度的互补序列的核苷酸探针通常非常适合，以增加杂合体的稳定性和选择性，从而提高获得的特定杂合体分子的特异性。在某些实施方案中，可以设计具有10个或更多或超过50个核苷酸长度(或者在需要时甚至更长)的基因互补序列的多核苷酸。这样的片段可以很容易地制备，例如，通过化学方法直接合成片段，通过应用核酸复制技术(如美国专利4,603,102中描述的具有两个寡核苷酸引物的PCR技术)，或通过将选定的序列引入重组载体进行重组生产。在一个方面，探针的长度约为50-75个或更多个核苷酸，或者50-100个核苷酸。
本公开的多核苷酸可用作用于检测在本文所述的细胞中表达的基因或基因转录物的引物。在本文中，扩增是指使用能够以合理保真度复制靶序列的引物依赖性聚合酶的任何方法。可以通过天然或重组DNA聚合酶进行扩增，例如T7 DNA聚合酶、大肠杆菌DNA聚合酶的Klenow片段和逆转录酶。仅出于说明目的，引物的长度与为探针确定的长度相同。
一种扩增多核苷酸的方法是PCR，并且用于PCR扩增的试剂盒是可商购的。扩增后，可通过本领域已知的任何合适方法检测所得DNA片段，例如，通过琼脂糖凝胶电泳，然后用溴化乙锭染色和紫外线照射进行观察。
已经开发了用于向细胞施用有效量的基因递送载体或媒介物的方法，并且是本领域技术人员已知的并且在本文中描述。用于检测细胞中基因表达的方法是本领域已知的并且包括诸如与DNA微阵列杂交、原位杂交、PCR、RNase保护测定和Northern印迹分析的技术。此类方法可用于检测和量化细胞中基因的表达。或者，可以通过各种方法检测编码多肽的表达。特别是，制备与靶多肽特异性反应的多克隆或单克隆抗体是有用的。此类抗体可用于使用免疫组织学、ELISA和蛋白质印迹等技术观察表达多肽的细胞。这些技术可用于确定表达的多核苷酸的表达水平。
生产方法
本文还提供了产生抗体、片段、CDR或多肽的方法，所述方法包括以下步骤，或由以下步骤组成，或由以下步骤组成：在允许多核苷酸的表达的条件下培养包含编码所述抗体、抗原结合片段、多肽或CDR的多核苷酸的宿主细胞，以及任选地从细胞和/或培养物中分离所述抗体、片段、CDR和/或多肽。本文另外提供了一种宿主细胞，其包含在用于表达多核苷酸的条件下编码所述抗体、抗原结合片段、多肽或CDR的多核苷酸。在一个实施方案中，宿主细胞是真核细胞或原核细胞。在进一步的实施方案中，宿主细胞是哺乳动物细胞。
组合物
本文进一步提供了组合物。所述组合物包含载体和一种或多种本文公开的分离的多肽、本文公开的分离的多核苷酸、本文公开的载体、本文公开的分离的宿主细胞、小分子或抗体和/或本文公开的抗原结合片段。载体可以是一种或多种固体支持物或药学上可接受的载体。所述组合物还可包含佐剂或适合作为疫苗施用的其他组分。在个一方面，所述组合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂、载体和/或佐剂一起配制。此外，本公开的组合物的实施方案包括一种或多种本文公开的分离的多肽、本文公开的分离的多核苷酸、本文公开的载体、小分子、本文公开的分离的宿主细胞或本公开的抗体，并且用一种或多种药学上可接受的物质配制而成。
对于口服制剂，本文所述的分离的或重组的多肽、本文所述的分离的或重组的多核苷酸、本文所述的载体、本文所述的分离的宿主细胞、本文所述的小分子或抗体或其片段中的任何一种或多种可单独使用或用于本文公开的药物制剂中，所述药物制剂包含(或由其组成)所述化合物和合适的添加剂组合以制备片剂、粉剂、颗粒剂或胶囊剂，例如与常规添加剂组合，如乳糖、甘露醇、玉米淀粉或马铃薯淀粉；与粘合剂组合，例如结晶纤维素、纤维素衍生物、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；与崩解剂组合，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉或羧甲基纤维素钠；与润滑剂组合，例如滑石粉或硬脂酸镁；如果需要，可与稀释剂、缓冲剂、润湿剂、防腐剂和调味剂组合。
药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料可以作为组合物的一部分包括在内。片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可含有以下任何成分或类似性质的化合物：粘合剂，如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，如淀粉或乳糖；崩解剂，如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，例如胶体二氧化硅；甜味剂，例如蔗糖或糖精；或调味剂，例如薄荷、水杨酸甲酯或橙子调味剂。
适合口服给药的药物制剂和单位剂型在治疗慢性病、感染和患者自行给药的疗法中特别有用。在一个方面，该制剂是专门用于儿科给药的。
本公开内容提供了药物制剂，其中本文公开的分离的多肽、本文公开的分离的多核苷酸、本文公开的载体、本文公开的分离的宿主细胞或本文公开的抗体中的一种或多种可以被配制成注射用制剂，通过将它们溶解、悬浮或乳化在水性或非水性溶剂中，例如植物油或其他类似油、合成脂肪酸甘油酯、高级脂肪酸酯或丙二醇中；如果需要，可以使用常规添加剂，例如增溶剂、等渗剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂或其他抗微生物剂。此类的非限制性实例是抗微生物剂，例如其他疫苗成分，例如表面抗原，例如OMP P5、OMP 26、OMPP2或IV型菌毛蛋白(参见Jurcisek and Bakaletz(2007)J.of Bacteriology 189(10):3868-3875and Murphy,T F,Bakaletz,L O and Smeesters,P R(2009)The PediatricInfectious Disease Journal,28:S121-S126)和抗菌剂。对于静脉内给药，合适的载体包括生理抑菌水、Cremophor ELTM(BASF,Parsippany,N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，用于肠胃外给药的组合物必须是无菌的并且应该是流体，以达到易于注射的程度。
本公开提供的气雾剂制剂可以通过吸入给药并且可以是基于推进剂的或非推进剂的。例如，本文公开的药物制剂的实施方案包括将本文公开的化合物配制到加压的可接受的推进剂中，例如二氯二氟甲烷、丙烷、氮气等。对于吸入给药，化合物可以以气溶胶喷雾剂的形式从加压容器或分配器中递送，该容器或分配器含有合适的推进剂，例如气体(如二氧化碳)或喷雾剂。非推进剂的非限制性示例是泵喷雾，其通过机械力(即，用手指向下推活塞或通过压缩容器，例如通过施加至容器壁的压缩力，或例如通过弹性囊由容器壁本身施加的弹力)而从封闭容器中喷出。
本文公开的栓剂可以通过将本文公开的化合物与多种基质中的任一种混合来制备，所述基质例如是乳化基质或水溶性基质。本文公开的化合物的药物制剂的实施方案可以通过栓剂直肠给药。栓剂可以包括载体，例如可可脂、碳蜡和聚乙二醇，它们在体温下熔化，但在室温下固化。
可以提供用于口服或直肠给药的单位剂型，例如糖浆剂、酏剂和混悬剂，其中每个剂量单位(例如茶匙、汤匙、片剂或栓剂)含有预定量的含有一种或多种本文公开的化合物的组合物。类似地，用于注射或静脉内给药的单位剂型可以将本文公开的化合物包含在无菌水、生理盐水或另一种药学上可接受的载体中作为溶液组合物。
本文公开的药物制剂的实施方案包括这样的组合物，即其中本文公开的分离的多肽、本文公开的分离的多核苷酸、本文公开的载体、用于本公开的小分子、本文公开的分离的宿主细胞、或本文所公开的抗体或其片段中的一种或多种被配制在可注射组合物中。本文公开的可注射药物制剂制备为液体溶液或悬浮液；或作为适合在注射前溶解或悬浮在液体载体中的固体形式。根据本文公开的药物制剂的其他实施方案，制剂还可以被乳化或将活性成分包封在脂质体载体中。
在一个实施方案中，本文公开的分离的多肽、本文公开的分离的多核苷酸、本文公开的载体、本文公开的分离的宿主细胞或本文公开的抗体中的一种或多种被配制用于通过连续递送系统递送。术语“连续递送系统”在本文中与“受控递送系统”可互换使用，并且包括与导管、注射装置等组合的连续(例如，受控)递送装置(例如，泵)，本领域已知有各类这种连续递送系统。
机械或机电输液泵也可以适用于本发明。这样的装置的例子包括在例如美国专利4,692,147；4,360,019；4,487,603；4,360,019；4,725,852；5,820,589；5,643,207；6,198,966等中描述的那些装置。通常，本文公开的化合物的递送可以使用多种可再填充的泵系统中的任一种来完成。泵在长时间提供一致的、受控的释放。在一些实施方案中，本文公开的化合物在药物不可渗透的储存器中以液体制剂形式存在，并且以连续方式递送至个体。
在一个实施方案中，药物递送系统是至少部分可植入的装置。可使用本领域熟知的方法和装置将可植入装置植入在任何合适的植入部位。植入部位是在对象体内引入和定位药物输送装置的部位。植入部位包括但不一定限于皮下、肌内或对象体内的其他合适部位。在一些实施例中使用皮下植入位点，因为便于植入和移除药物递送装置。
适用于本公开的药物释放装置可以基于多种操作模式中的任何一种，聚合物例如聚(乙交酯-共-丙交酯)(PGLA)，其可从许多供应商商购获得，例如，BioDegmer和Sigma-Aldrich。例如，药物释放装置可以基于扩散系统、对流系统或可腐蚀系统(例如，基于腐蚀的系统)。例如，药物释放装置可以是电化学泵、渗透泵、电渗泵、蒸汽压泵或渗透爆裂基质，例如，其中药物被结合到聚合物(例如，PGLA)中并且聚合物提供药物制剂的释放，同时伴随药物浸渍的聚合物材料(例如，可生物降解的药物浸渍的聚合物材料)降解。在其他实施方案中，药物释放装置基于电扩散系统、电解泵、泡腾泵、压电泵、水解系统等。
基于机械或机电输液泵的药物释放装置也可以适用于本发明。这样的装置的例子包括在例如美国专利4,692,147；4,360,019；4,487,603；4,360,019；4,725,852等中描述的那些。通常，可以使用多种可再填充、不可更换的泵系统中的任何一种来完成主题治疗方法。可以使用泵和其他对流系统，因为它们通常随着时间的推移更一致、受控地释放。在一些实施例中使用渗透泵，因为它们具有更一致的受控释放和相对较小的尺寸的综合优点(参见例如PCT国际申请公开号WO 97/27840和美国专利号5,985,305和5,728,396)。适用于本公开内容的示例性渗透驱动装置包括但不一定限于美国专利3,760,984；3,845,770；3,916,899；3,923,426；3,987,790；3,995,631；3,916,899；4,016,880；4,036,228；4,111,202；4,111,203；4,203,440；4,203,442；4,210,139；4,327,725；4,627,850；4,865,845；5,057,318；5,059,423；5,112,614；5,137,727；5,234,692；5,234,693；5,728,396等中描述的那些。可适用于本公开的另一示例性装置是同步输液泵(Medtronic)。
在一些实施例中，药物输送装置是可植入装置。可以使用本领域熟知的方法和装置将药物递送装置植入任何合适的植入部位。如本文所述，植入部位是在对象体内引入和定位药物输送装置的部位。植入部位包括但不一定限于皮下、肌肉内或对象体内的其他合适部位。
适用于本文所公开的化合物的赋形剂载体是例如水、盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等，以及它们的组合。此外，如果需要，载体可以包含少量的辅助物质，例如润湿剂或乳化剂或pH缓冲剂。制备此类剂型的方法对于本领域技术人员来说是已知的，或者在考虑本公开后将是显而易见的。例如，参见Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack PublishingCompany,Easton,Pa.,17th edition,1985。待施用的组合物或制剂在任何情况下都将包含足以在正在接受治疗的对象中达到所需状态的量的化合物。
本公开的组合物包括那些包含缓释或控释基质的组合物。此外，本公开的实施方案可以与使用缓释制剂的其他治疗结合使用。如本文所用，缓释基质是由可通过酶促或酸基水解或通过溶解降解的材料，通常是聚合物制成的基质。一旦插入体内，基质就会受到酶和体液的作用。理想的缓释基质选自生物相容性材料，例如脂质体、聚乳酸、聚乙交酯(乙醇酸的聚合物)、聚丙交酯共乙交酯(乳酸和乙醇酸的共聚物)、聚酐、聚(原)酯、多肽、透明质酸、胶原蛋白、硫酸软骨素、羧酸、脂肪酸、磷脂、多糖、核酸、聚氨基酸、氨基酸(如苯胺、酪氨酸、异亮氨酸)、多核苷酸、聚乙烯丙烯、聚乙烯吡咯烷酮和硅氧烷。示例性的可生物降解基质包括聚丙交酯基质、聚乙交酯基质和聚丙交酯共乙交酯(乳酸和乙醇酸的共聚物)基质。
在另一个实施方案中，多肽、抗体或其片段(以及组合组分)在控释系统中递送。例如，本文公开的化合物可以使用静脉输注、植入式渗透泵、透皮贴剂、脂质体或其他给药方式给药。在一个实施例中，可以使用泵(Sefton(1987)CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14:201；Buchwald et al.(1980)Surgery 88:507；Saudek et al.(1989)N.Engl.J.Med.321:574)。在另一个实施例中，使用聚合材料。在又一个实施方案中，控制释放系统被放置在治疗靶点附近，即肝脏，因此仅需要全身剂量的一部分。在又一个实施方案中，控制释放系统被放置在治疗靶标附近，因此仅需要系统给药的一部分。其他控释系统讨论于综述Langer(1990)Science 249:1527-1533中。
在另一个实施方案中，本公开的组合物(以及单独或一起的组合组分)包括通过将本文所述的抑制剂浸渍到吸收性材料中形成的组合物，例如缝合线、绷带和纱布，或涂布在固相材料的表面上，例如外科缝合钉、系结物(zippers)和导管，以递送组合物。鉴于本公开内容，该类型的其他递送系统对于本领域技术人员将是显而易见的。
本公开提供了用于将一种或多种干扰剂施用于宿主(例如，人)以治疗微生物感染的方法和组合物。在各种实施方案中，本文公开的这些方法涵盖几乎任何适用于药物递送的可用方法和途径，包括体内和离体方法，以及全身和局部给药途径。
筛选试验
本公开提供了用于筛选等同试剂的方法，例如与本文所述的多克隆抗体的等同单克隆抗体和调节本文公开的活性剂和药物组合物的活性或由本文公开的多核苷酸编码的多肽或肽产物的功能的各种试剂。为了本公开的目的，“试剂”旨在包括但不限于生物或化学化合物，例如简单或复杂的有机或无机分子(本文称为小分子，例如核酸)、肽、蛋白质(例如抗体)、多核苷酸(反义)或核酶。可以合成大量的化合物，例如聚合物，如多肽和多核苷酸，以及基于各种核心结构的合成有机化合物，这些也包括在术语“试剂”中。此外，各种天然来源可以提供用于筛选的化合物，例如植物或动物提取物等。应该理解，尽管并不总是明确说明该试剂单独使用或与另一种试剂组合使用，该另一种试剂具有与本发明筛选鉴定的试剂相同或不同的生物活性。
一个实施方案是一种筛选能够与DNA-DNABII(例如IHF或HU)相互作用、结合DNA-DNABII或抑制DNA-DNABII相互作用的试剂的方法。因此，本公开允许使用虚拟设计技术，也称为计算机辅助的计算机设计或建模，以设计、选择和合成能够与DNA-DNABII(例如IHF或HU)相互作用、结合DNA-DNABII或抑制DNA-DNABII相互作用的试剂。因此，候选试剂可有效治疗如本文所述的生物膜和相关疾病或病症(医学、工业或兽医)。因此，本公开还提供了通过计算机方法识别或设计的试剂。
如果发现候选试剂与DNA和DNABII蛋白其中之一或两者之间的期望相互作用，则发现候选试剂能够结合DNA和/或DNABII蛋白。相互作用可以是定量的，例如相互作用的强度和/或相互作用位点的数量，或是定性的，例如相互作用或缺乏相互作用。因此，该方法的输出可以是定量的或定性的。因此，在一个方面，本公开还提供了一种用于鉴定不抑制相互作用或增强DNA和蛋白质之间的相互作用的试剂的方法。
可以在其实际合成和测试之前通过使用计算机建模技术分析试剂如小分子化合物的潜在抑制或结合效应(即相互作用或缔合)。如果给定化合物的理论结构表明它与生物膜中的微生物DNA和/或DNABII蛋白之间的相互作用和结合不足，则可以避免该试剂的合成和测试。然而，如果计算机建模表明存在强相互作用，则可以合成该试剂并使用各种方法(例如体外或体内实验)测试其结合或抑制相互作用的能力。本文公开了测试试剂单独或与另一种试剂一起抑制或滴定生物膜的能力的方法。以这种方式，可以避免合成无效的试剂和化合物。
本领域技术人员可以使用几种方法中的任何一种来筛选化学或生物实体或片段，以确定它们与DNABII或微生物DNA结合的能力，尤其是与特异性结合位点结合的能力。然后可以将选定的片段或化学实体以多种方向定位或对接(docked)在DNA或DNABII多肽的单个结合位点内。对接可以使用QUANTA、SYBYL等软件完成，然后使用标准分子机械力场(例如CHARMM和AMBER)进行能量最小化和分子动力学。
商业计算机程序也可用于计算机设计。例子包括但不限于GRID(OxfordUniversity,Oxford,UK)、MCSS(Molecular Simulations,Burlington,Mass.)、AUTODOCK(Scripps Research Institute,La Jolla,Calif.)、DOCK(University of California,San Francisco,Calif.)、GLIDE(Schrodinger Inc.)、FlexX(Tripos Inc.)和GOLD(Cambridge Crystallographic Data Centre)。
一旦通过上述方法设计或选择了试剂或化合物，就可以通过计算评估来测试和优化该试剂或化合物可以相互结合的效率。例如，一个有效的DNABII片段可能在其结合态和自由态之间表现出相对较小的能量差异(即，小的结合能变化)。
可以对设计或选择的化合物进行进一步的计算优化，以便在其结合状态下，它可以任选地缺乏与靶蛋白的排斥性静电相互作用。这种非互补(例如，静电)相互作用包括排斥性的电荷-电荷相互作用、偶极-偶极相互作用和电荷-偶极相互作用。具体地，当试剂或化合物与任一试剂结合时，试剂与DNABII和/或生物膜中的微生物DNA之间的所有静电相互作用的总和，任选地对结合焓产生中性或有利的贡献。
计算机软件在本领域中也可用于评估化合物变形能和静电相互作用。例子包括但不限于Gaussian 92[Gaussian,Inc.,Pittsburgh,Pa.]；AMBER[University ofCalifornia at San Francisco]；QUANTA/CHARMM[Molecular Simulations,Inc.,Burlington,MA]；和Insight II/Discover[Biosysm Technologies Inc.,San Diego,Calif.]。
如上所述，一旦粘合剂已被最佳选择或设计，然后可以在其一些原子或侧基中进行取代，以改善或改变其粘合性质。通常，初始取代是保守的，即取代基团将具有与原始基团大致相同的大小、形状、疏水性和电荷。当然，应当理解，应当避免本领域已知的改变构象的组分。然后，可以通过上面详细描述的相同计算机方法分析此类取代的化合物与生物膜中DNABII蛋白和/或微生物DNA的适配效率(efficiency of fit)。
某些实施方案涉及筛选能够与本文公开的蛋白质或多核苷酸相互作用的小分子的方法。为了本公开的目的，“小分子”是具有低分子量(MW)的分子，在一个实施方案中，其能够结合感兴趣的蛋白质从而改变蛋白质的功能。在一些实施方案中，小分子的MW不超过1,000。筛选能够改变蛋白质功能的小分子的方法是本领域已知的。例如，You et al.(1997)Chem.Biol.4:961-968讨论了一种用于检测细胞中小分子-蛋白质相互作用的小型阵列分析。
为了在体外实施筛选方法，首先提供被待处理微生物感染的合适的细胞培养物或组织。细胞在条件(温度、生长或培养基和气体(CO2))下培养适当的时间以达到指数增殖，而不受密度依赖性限制。还希望维持未感染的另外的单独细胞培养物作为对照。
如本领域技术人员显而易见的，可以在微量滴定板中培养合适的细胞，并且可以通过注意基因型变化、表型变化或微生物滴度的降低来同时测定几种试剂。
当试剂是除DNA或RNA之外的组分，例如如上所述的小分子时，试剂可以直接添加到细胞培养物中或添加到培养基中。如本领域技术人员显而易见的，必须添加可以凭经验确定的“有效”量。
当试剂是抗体或抗原结合片段时，试剂可以在进行竞争性ELISA的条件下与如本文所述的靶抗原和多克隆抗体接触或温育。这样的方法是本领域技术人员已知的。
测定也可以在对象中进行。当对象是动物(例如大鼠、栗鼠、小鼠或猿猴)时，该方法提供了一种方便的动物模型系统，该系统可以在对人类患者进行临床试验之前使用。在这个系统中，将每一种候选药物与未经治疗的具有相同感染的动物相比，如果疾病或微生物感染的症状被减轻或消除，则该候选药物就是一种潜在的药物。有一个单独的健康且未经治疗的阴性对照组的细胞或动物也是有用的，这提供了比较的基础。
试剂和组合物可用于药物制造和通过按照常规程序给药来治疗人和其他动物，例如药物组合物中的活性成分。
联合疗法
本公开的组合物和相关方法可以与其他疗法的施用组合使用。这些包括但不限于施用DNase酶、抗生素、抗微生物剂、抗感染剂、抗真菌剂、抗寄生虫剂、抗病毒剂或其他抗体。
在一些实施方案中，所述方法和组合物包括与抗DNABII抗体协同作用的脱氧核糖核酸酶(DNase)。DNase是催化DNA主链中磷酸二酯键断裂的任何酶。已知不仅靶向十字形结构而且靶向多种DNA二级结构的DNase酶的三个非限制性实例包括DNAse I、T4 EndoVII、T7Endo I、RuvABC和RusA。在某些实施方案中，当与DNase组合时，使生物膜不稳定所需的抗DNABII抗体的有效量减少。当在体外施用时，可将DNase直接添加到测定中或添加到已知可稳定酶的合适缓冲液中。DNase的有效单位剂量和测定条件可以变化，并且可以根据本领域已知的程序进行优化。
在其他实施方案中，所述方法和组合物可以与抗生素和/或抗微生物剂组合。抗微生物剂是杀死或抑制细菌、真菌或原生动物等微生物生长的物质。尽管生物膜通常对抗生素的作用具有抗性，但本文所述的组合物和方法可用于使涉及生物膜的感染对用于治疗感染的传统治疗方法敏感。在其他实施方案中，抗生素或抗微生物剂与本文描述的方法和组合物的组合使用使得能够减少抗微生物剂和/或生物膜减少剂的有效量。可用于与本公开的方法组合的抗微生物剂和抗生素的一些非限制性实例包括阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸盐、头孢地尼、阿奇霉素和磺胺甲恶唑-甲氧苄啶。抗微生物剂和/或抗生素与生物膜减少剂的组合的治疗有效剂量可以通过传统方法容易地确定。在一些实施方案中，与生物膜减少剂组合的抗微生物剂的剂量是已显示在其他细菌感染中有效的平均有效剂量，所述其他细菌感染例如是其中感染的病因学不包括生物膜的细菌感染。在其他实施方案中，剂量为所述平均有效剂量的0.1、0.15、0.2、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.8、0.85、0.9、0.95、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.5、3.0或5倍。可以在添加抗DNABII抗体之前、同时或之后添加抗生素或抗微生物剂。
在其他实施方案中，这些方法和组合物可以与治疗细菌感染的抗体组合。可用于与本文所述的方法和组合物组合的抗体的一个实例是针对不相关的外膜蛋白(即OMP P5)的抗体。单独使用这种抗体进行治疗不会在体外减小生物膜的体积。将这种抗体于生物膜减少剂联合治疗产生的效果比单独使用相同浓度的任何一种试剂所能达到的效果更大。当与生物膜减少剂或减少生物膜的方法组合时可能产生协同效应的其他抗体包括抗rsPilA抗体、抗OMP26抗体、抗OMP P2抗体和抗全OMP抗体制剂。
本文所述的组合物和方法可用于使涉及生物膜的细菌感染对在没有生物膜的情况下有效治疗细菌感染但在治疗涉及生物膜的细菌感染方面无效的常见治疗方式敏感。在其他实施方案中，本文所述的组合物和方法可与有效治疗涉及生物膜的细菌感染的治疗方式组合使用，但此类额外疗法与生物膜减少剂或方法的组合产生协同效应，使得生物膜减少剂或额外治疗剂的有效剂量可被减小。在其他情况下，此类额外疗法和生物膜减少剂或方法的组合产生协同作用，从而增强了治疗。治疗的增强可通过治疗感染所需的时间更短来证明。
额外的治疗处理可以在用于减少生物膜的方法或组合物之前、同时或之后添加，并且可以被包含在相同的制剂/组合物中或作为单独的制剂/组合物。
试剂盒
本文还要求保护包含执行本文所述的体外和体内方法所需的试剂和说明的试剂盒。因此，本公开提供了用于执行这些方法的试剂盒，其可以包括抗体、抗体片段、多肽、多核苷酸、载体或宿主细胞，以及用于执行本文公开的方法的说明，所述方法例如是收集组织，和/或执行筛选，和/或分析结果，和/或施用有效量的如本文定义的抗体、抗体片段、多肽、多核苷酸、载体或宿主细胞。这些可以单独使用或与其他合适的抗微生物剂组合使用。
例如，试剂盒可包含任何一种或多种以上鉴定的试剂(例如抗体、抗体片段、多肽、多核苷酸、载体或宿主细胞)以及使用说明，或实质上由其组成，或由其组成。该试剂盒可以进一步包含佐剂、抗原肽或抗微生物剂中的一种或多种。载体的实例包括液体载体、药学上可接受的载体、固相载体、药学上可接受的载体、药学上可接受的聚合物、脂质体、胶束、植入物、支架、糊剂、凝胶、牙科植入物或医疗植入物。
以下实施例旨在说明而非限制本文所公开的实施方式。
实验
实验1
除了两个鼠杂交瘤细胞系IHF(NTHI)头部嵌合肽克隆和IHF(NTHI)尾部嵌合肽克隆之外，还从2个IHF(NTHI)头部嵌合肽和IHF(NTHI)尾部嵌合肽产生抗体。对重链和轻链进行测序。将包含两种单独抗体的鼠可变区序列的嵌合亲本抗体融合到人IgG1恒定区的骨架上。每个克隆对各自合成肽的特异性通过ELISA得到证实。完成了完全人抗体，并且完成了针对头部嵌合肽的9个抗体变体和针对尾部嵌合肽的9个抗体变体，并且通过ELISA确认了每个克隆对其各自靶标的特异性(参见实验2)。测定每种抗体的亲合力和亲和力。
实验2
进行直接结合ELISA以评估人源化变体与相应肽的结合。将头部或尾部嵌合肽以2μg/mL包被到96孔板上，并添加8点稀释系列抗体(起始浓度为50ug/mL，1:3稀释)。抗人IgGFc HRP偶联抗体(1:7000,Jackson Immuno Research,109-035-098)用作第二检测抗体。遵循标准的直接ELISA方案并使用酶标仪读取450nm处的吸光度。计算EC50值，并确定人源化变体具有相当的结合。参见图2A至2D以及下表1和2。
表1.人源化抗头部抗体的ELISA结果
表2.人源化抗尾部抗体的ELISA结果
表面等离子共振(SPR)也用于确定人源化Mab对头部或尾部嵌合肽(即靶肽)和天然IHFNTHI的亲和力。使用Biacore 3000仪器(GE Healthcare Life Sciences)进行SPR。所有实验均在25℃下进行，10mM HEPES(pH 7.4)-150mM NaCl-3mM EDTA-0.005％表面活性剂P20(HBS-EP；GE Healthcare)作为运行缓冲液。
在一个实验环境中，表面等离子共振(SPR)按如下方案进行：CM5试剂级传感器芯片用于通过胺偶联化学将IHFNTHI头部或IHFNTHI尾部嵌合肽固定到各个流动池。每种单克隆抗体在HBS-EP缓冲液+NSB中从100nM稀释到3.1nM，并以30μl/min的流速、2分钟的注射周期、2分钟的解离周期注射穿过传感器芯片表面。还包括仅缓冲液的阴性对照注射循环以揭示非特异性结合。使用BiaEvaluation确定结合常数和解离常数。
在一个实验环境中，通过胺偶联化学并以5μl/min的流速，将人源化单克隆抗体固定在CM5传感器芯片的流动池上，以4000共振单位(RU)检测靶肽的结合或2000RU评估天然IHFNTHI的结合。接下来，将靶肽或天然IHFNTHI悬浮在HBS-EP+NSB还原剂中，并将从100nM至3.1nM的连续两倍稀释液(包括仅缓冲液样品)注入通过抗体结合表面，流速为30μl/min，注射时间为5分钟，解离时间为5分钟，使用KINJECT命令。使用BiaEvaluation软件校准传感图曲线，减去仅缓冲液注射周期并确定KD值。结果示于下表3和4中。
表3.人源化抗头部抗体的SPR结果
表4.人源化抗尾部抗体的SPR结果
在另一个实验环境中，通过胺偶联化学，以5μl/min的流速，将靶肽或天然IHFNTHI分别固定到CM5传感器芯片的流动池，分别至4000共振单位(RU)或2000RU，以测定人源化单克隆抗体的结合。接下来，将人源化单克隆抗体悬浮在HBS-EP+NSB还原剂中，并以100nM至3.1nM的连续两倍稀释液(包括仅缓冲液的样品)，以30μl/min的流速注射通过肽/IHFNTHI结合表面，5分钟注射时间，5分钟解离时间，使用KINJECT命令。使用BiaEvaluation软件校准传感图曲线，减去仅缓冲液注射周期并确定KD值。结果示于下表5和6中。
表5.人源化抗头部抗体的SPR结果
表6.人源化抗尾部抗体的SPR结果
*ND＝未测定
实验3
本实验描述了一个用于逆转在8孔室载玻片中已建立的生物膜的体外模型。本实验使用的材料有：巧克力琼脂；sBHI(含2mg血红素/mL和2mg b-NAD/mL的BHI)；8孔室载玻片(Nunc*Lab-Tek*Fisher目录#12-565-18)；无菌0.9％生理盐水；LIVE/DEAD BacLight细菌活力试剂盒(Fisher目录#NC9439023)和福尔马林。
从巧克力琼脂上的过夜培养物中收集NTHI 86-028NP菌落，并悬浮在每毫升培养基补充有2μgβ-NAD和血红素的脑心浸液肉汤(sBHI)中。然后将490nm处的光密度调整为0.65，将培养物在sBHI中按1:6稀释，然后在37℃和5％CO2下静置孵育3小时。接下来，将培养物在新鲜sBHI中以1:2500稀释，并将200μl悬浮液等分到8孔室载玻片的每个孔中。然后将载玻片在37℃和5％CO2下静置孵育3小时。16小时后，将200μl新鲜sBHI添加到每个孔中，并将载玻片再孵育8小时。此时，从每个孔中吸出培养基并添加每孔5μg的单克隆抗体。将生物膜再培养16小时。然后用FM1-43FX细菌细胞膜染料(Invitrogen)清洗和染色生物膜，并在4℃下在含16％多聚甲醛、2.5％戊二醛、4.0％乙酸的0.1M磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中固定过夜。吸出固定剂并在每个孔中加入200μl 0.9％Hank平衡盐溶液，然后在Zeiss 800Meta激光扫描共聚焦显微镜上观察生物膜。图像用Zeiss Zen Blue软件编译，生物膜生物量用COMSTAT2软件计算。见图3以及下表7-8。
表7.使用人源化抗头部抗体的体外生物膜破坏结果
↓表示生物量降低；而↑表示生物量升高。
表8.使用人源化抗尾部抗体的体外生物膜破坏结果
↓表示生物量降低；而↑表示生物量升高。
实验4
在上述实验1至3的后续研究中，描述了以下研究，显示用嵌合肽免疫原或人源化单克隆抗体靶向细菌DNABII蛋白以预防或治疗顽固性生物膜介导的感染。
研究概述
首先，作为一种治疗方法，申请人使用针对嵌合肽免疫原的完整IgG或Fab片段，该免疫原设计为靶向整合宿主因子的DNA结合头部结构域内的保护性表位，以破坏体外已建立的生物膜并介导体内现有疾病的消退。其次，申请人用嵌合肽进行预防性主动免疫以诱导抗体的形成，该抗体在病毒-细菌二重感染模型中阻断生物膜形成和疾病发展。此外，为了进行临床应用，申请人将针对嵌合肽免疫原的单克隆抗体人源化，然后表征并验证其保持治疗功效。
申请人在由流行的呼吸道病原体不可分型流感嗜血杆菌诱导的两个公认的中耳炎(一种常见的生物膜疾病)临床前模型中证明了每种方法的功效。总的来说，申请人的数据揭示了两种具有实质性功效和潜力的方法，可广泛应用于对抗具有生物膜成分的疾病。
实验4的目的是(1)测试针对DNABII导向的头部嵌合肽的单克隆抗体的IgG的抗原结合结构域(Fab片段)的临床前治疗潜力，以缓解一种已充分表征的生物膜疾病，即NTHI引起的中耳炎，和(2)测试这种相同的头部嵌合肽作为免疫原，以检测其作为补充预防策略在主动免疫方案中用作疫苗抗原时诱导可预防生物膜形成和疾病的抗体的能力。申请人首先在体外评估了针对头部嵌合肽的Fabs或完整IgG介导的细菌生物膜破坏。然后，申请人使用了一种常见的生物膜疾病(由NTHI引起的中耳炎)的两种成熟的栗鼠模型(一种基于中耳的直接细菌激发，另一种是上行OM的病毒-细菌双重感染模型)，并分别证明了申请人的DNABII导向的治疗和预防策略的临床前功效。最后，申请人人源化了一种靶向DNABII的单克隆抗体，并在临床前验证了其体外活性和治疗功效。
体外生物膜破坏试验在不同的日期重复了3次。对于体内实验，栗鼠根据体重随机分成几组；雄性和雌性动物均参与。为了检查由鼠β-头部Fab、β-尾部Fab或同种型对照Fab诱导的中耳NTHI生物膜的破坏，将3或4只动物纳入每个群组。为了测试来自兔多克隆抗头部嵌合肽血清IgG、抗尾部嵌合肽血清IgG或来自初始兔血清的IgG的Fab诱导的生物膜破坏，建立了每组六只栗鼠的群组。评估了HuTipMabs与HuTailMabs或盐水相比的功效，每组六只动物。动物和样品均未排除在研究之外。由6-8名未参与研究且对所提供的治疗不知情的个体对治疗后保留在中耳的相对粘膜生物膜进行评估。对于每个研究评估，每个中耳都被认为是独立的。
鼠单克隆抗体、多克隆兔抗体和人源化单克隆抗体
按(L.A.Novotny et al.(2016)EBioMedicine 10:33-44)所述，从细胞培养上清液中纯化针对IHFNTHI的β-头部结构域(克隆12E6.F8.D12.D5，mIhfB4NTHI)或β-尾部结构域(克隆7A4.E4.G11，IhfB2NTHI)的鼠单克隆抗体。小鼠IgG1κ同种型对照抗体(克隆P3.6.2.8.1；eBioscience cat#16-4714-82,RRID:AB_470161)用作阴性对照。然后根据说明用小鼠IgG1 Fab和F(ab')2制备试剂盒(Pierce)通过木瓜蛋白酶消化产生Fab片段。多克隆兔抗头部嵌合肽和抗尾部嵌合肽在Rockland Immunochemical,Inc.产生(L.A.Novotnyet al.(2014)Mol.Microbiol 93:1246-1258)。初始兔血清用作阴性对照。根据制造商的说明，通过rProtein A蛋白G GraviTrap柱(GE Healthcare)从每个兔血清中富集IgG。然后通过Pierce Fab制备试剂盒生成Fab片段(Fab)。用考马斯FluorTM橙色蛋白凝胶染色剂(ThermoFisher)通过SDS-PAGE确认完整的鼠或兔IgG消化为Fab。针对头部嵌合肽(HuTipMab)或尾部嵌合肽(HuTailMab)的人源化单克隆抗体在LakePharma,Inc.产生并在上文简要描述。抗原结合结构域来源于针对头部嵌合肽(克隆1F8.C3.D11.F1)或尾部嵌合肽(克隆11E7.G11.C7)的鼠单克隆抗体。人源化单克隆抗体克隆TP-21949(头部嵌合肽导向；HuTipMab)和TP-21958(尾部嵌合肽导向；HuTailMab)用于此处工作。在使用前，通过ToxinSensor Chromogenic LAL内毒素试剂盒(Genscript)，对所有抗体批次进行了细菌内毒素测试。根据制造商的说明，通过rProtein A蛋白G GraviTrap柱(GE Healthcare)从每个兔血清中富集IgG。然后通过Pierce Fab制备试剂盒生成Fab片段(Fab)。用考马斯FluorTM橙色蛋白凝胶染色剂(ThermoFisher)通过SDS-PAGE确认完整的鼠或兔IgG消化成Fab。针对头部嵌合肽(HuTipMab)或尾部嵌合肽(HuTailMab)的人源化单克隆抗体在LakePharma,Inc.产生并在上文简要描述。抗原结合结构域来源于针对头部嵌合肽(克隆1F8.C3.D11.F1)或尾部嵌合肽(克隆11E7.G11.C7)的鼠单克隆抗体。人源化单克隆抗体克隆TP-21949(头部嵌合肽导向；HuTipMab)和TP-21958(尾部嵌合肽导向；HuTailMab)用于本文的工作。在使用前，通过ToxinSensor Chromogenic LAL内毒素试剂盒(Genscript)，对所有抗体批次进行了细菌内毒素测试。
体外生物膜破坏
由NTHI菌株86-028NP(来自患有慢性OM的儿童鼻咽部的最小传代临床分离物，参见例如Bakaletz LO et al.(1988)Infect Immun 1988；56:331–5)、卡他莫拉菌菌株7169(来自患有慢性OM的儿童中耳的最小传代临床分离物，参见例如Luke NR et al(1999)Infect Immun 1999；67:681–7)、铜绿假单胞菌菌株27853、石竹伯克氏菌(B.cenocepacia)菌株K56(从患有囊性纤维化的患者的痰液中分离，参见例如Mahenthiralingam E et al(2000)J Clin Microbiol 2000；38:910–3)和金黄色葡萄球菌菌株29213形成的生物膜首次在8孔腔室盖玻片(CellVis)中建立并孵育24小时，然后与170nM完整IgG或Fab片段再孵育16小时(S.D.Goodman et al.(2011)Mucosal Immunol 4:625-637；J.A.Jurcisek etal.(2011)J Vis Exp)。在一个实施方案中，NTHI菌株86-028NP自1986年从儿童中分离出以来保持不超过第4代。此外或作为选择，Mcat菌株同样自分离以来保持在非常低的传代次数。在另一个实施方案中，伯克霍尔德菌是从囊性纤维化(CF)患者的痰液中分离出来的。在又一个实施方案中，金黄色葡萄球菌分离物来自ATCC。170nM的浓度基于先前的研究，其中将每0.2ml体积5μg完整IgG应用于体外生物膜(Goodman SD et al(2011)Mucosal Immunol2011；4:625–37；Brockson ME et al(2014)Mol Microbiol 2014；93:1246–58；Novotny LAet al(2019)NPJ Vaccines 2019；4:43；Novotny LA et al(2013)PLoS One 2013；8:e67629；和Novotny LA et al(2016)EBioMedicine 2016；10:33–44)以允许直接比较IgG与Fab介导的破坏。然后将生物膜内的细菌用FM1-43FX(ThermoFisher)染色，在含16％多聚甲醛-4％乙酸-2.5％戊二醛的0.1M磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中固定过夜，然后用10mM磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)洗涤。用Zeiss 800扫描共焦激光显微镜观察生物膜，用Zeiss Zen Pro软件呈现图像，用COMSTAT2软件测定生物量(A.Heydorn et al.(2000)Microbiology 146(pt10):2395-2407)。体外生物膜破坏试验在不同日期重复3次。
动物
栗鼠工作是根据NIH实验动物护理和使用指南以及全国儿童医院动物护理和使用委员会Abigail Wexner研究所批准的#01304AR协议进行的。幼年或成年栗鼠(Chinchillalanigera；幼年动物体重为250-499g；成年动物体重为500-850g)从Rauscher的ChinchillaRanch,LLC获得。这些远交、非特异性、无病原体的动物被安置在单独的笼子里，笼子里有高压灭菌的玉米芯垫料和自由提供的无菌水。根据体重(作为幼年或成年状态的指示)将动物随机分为几组，并使用雄性和雌性动物。实验组如下：为了检查由小鼠β-头部Fab、β-尾部Fab或同种型对照Fab诱导的中耳NTHI生物膜的破坏，每组三或四只动物(每组平均体重625克)。为了测试来自兔多克隆抗头部嵌合肽血清IgG、抗尾部嵌合肽血清IgG或来自初始兔血清的IgG的Fab诱导的生物膜破坏，建立了每组三只栗鼠的群组(每群组的平均体重505g)。HuTipMab与HuTailMab或盐水相比的功效用每组三只动物评估(每组平均体重580g)。为了评估头部嵌合肽诱导产生阻止NTHI诱导的OM进展的抗体的能力，每组使用八只幼年动物(每组平均体重430g)。
在实验性OM中破坏在栗鼠中耳形成的NTHI生物膜
通过直接注射1000CFU NTHI菌株86-028NP激发每只动物的两个中耳以诱导实验性OM。四天后，NTHI粘膜生物膜填充>50％的中耳(L.A.Novonty et al.(2011)MucosalImmunol 4:456-467)。此时，将342nM Fab或人源化单克隆抗体注射到每个中耳(每个疱(bulla)递送0.1ml)，24小时后进行相同的治疗。342nM的浓度基于先前的研究，其中将每0.1ml体积5μg完整IgG注射到栗鼠的中耳中(Goodman SD et al 92011)Mucosal Immunol2011；4:625–37；Novotny LA et al(2019)NPJ Vaccines 2019；4:43；and Novotny LA etal(2016)EBioMedicine 2016；10:33–44)11,13,21并允许直接比较IgG与Fab介导的体内破坏。为了确定治疗的直接结果，在抗体治疗完成一天后处死动物，用Zeiss SV6解剖显微镜捕获粘膜生物膜的图像，然后收集粘膜生物膜和中耳粘膜，均质化并铺在巧克力琼脂上以定量中耳内的细菌负荷(SD Goodman et al.(2011)Mucosal Immunol 4:625-637)。在本文描述的两项研究中(评估多克隆兔IgG Fab片段破坏生物膜和人源化单克隆抗体破坏粘膜生物膜的功效，以及HuMab治疗动物的细胞因子谱)，每组中有一个动物子群体被监测了额外的7天而没有额外治疗，以检查NTHI生物膜是否会在停止抗体治疗后重新形成，并确定细胞因子谱如何随时间变化。按文献描述来收集和处理粘膜生物膜(S.D.Goodman et al.(2011)Mucosal Immunol4:625-637)。
粘膜生物膜量的定量评估
作为附加评估，定性测定每个中耳中的生物膜量。每个中耳的图像被捕获、随机化并由六位不知道治疗的评审员使用已建立的评价标准进行排序，其中0＝没有可见的粘膜生物膜，1＝<25％的中耳被粘膜生物膜阻塞，2＝≥25-50％阻塞，3＝≥50-75％阻塞，4＝≥75-100％阻塞((L.A.Novotny et al.(2011)Mucosal Immunol 4:456-467)。对于细菌负荷的定量和粘膜生物膜的定性评估，每个中耳被认为是独立的。
中耳液中细胞因子的定量
为了定量中耳液(MEF)中的细胞因子，使用在动物处死时收集的液体进行BDTM细胞计数珠阵列。使用BDTM人类特异性Flex Sets，根据制造商的说明，单独检查每个MEF的IL-1β(cat#558279)、IL-6(cat#558276)、IL-8(cat#558277)、IL-10(cat#558274)、IL12-p70(cat#558283)、IL-17A(cat#560383)和TNF(cat#560112)的量。细胞因子IL-13(cat#558450)被添加到用于测定在HuMab研究中收集的MEF的平板中。分别测定来自每只动物的MEF。在BD AccuriTM C6细胞仪(BD Biosciences)上采集数据，并使用FlowJo软件(FlowJo,LLC)进行分析。使用标准曲线确定每个MEF中细胞因子的浓度，并使用GraphPad Prism软件计算。
表面等离子共振
为了确定人源化头部嵌合肽导向的单克隆抗体对头部嵌合肽和天然IHFNTHI的亲和力，使用Biacore 3000仪器(GE Healthcare Life Sciences)进行表面等离子体共振。所有实验均在25℃进行，10mM HEPES(pH 7.4)-150mM NaCl-3mM EDTA-0.005％表面活性剂P20(HBS-EP；GE Healthcare,cat#BR100188)作为运行缓冲液。通过胺偶联化学，以5μl/min的流速，将人源化头部嵌合肽特异性单克隆抗体固定到CM5传感器芯片(GE Healthcare，cat#BR100012)的流动池上，以4000个共振单位(RU)分析头部嵌合肽的结合或2000RU评估天然IHFNTHI的结合。接下来，将头部嵌合肽或天然IHFNTHI悬浮在HBS-EP+NSB还原剂(GEHealthcare，目录号BR100691)中，并将从100nM到3.1nM的连续两倍稀释液(包括仅缓冲液样品)注射通过抗体结合表面上，30μl/min的流速、5分钟的注射时间、5分钟的解离时间，使用KINJECT命令。使用BiaEvaluation软件校准传感图曲线，减去仅缓冲液注射周期并确定KD值。
实验性NTHI诱导的OM的病毒-细菌共感染模型
使用已建立的腺病毒-NTHI多微生物激发模型(K.Suzuki et al.(1994)InfectImmun 62:1710-1718)来评估头部嵌合肽作为临床前疫苗抗原递送时的功效和/或评估头部嵌合肽诱导产生阻止NTHI诱导的OM上行的抗体的能力。栗鼠被根据体重随机分成三组，每组八只动物，并通过在每个耳廓后面(耳后区域)未磨损的皮肤上摩擦疫苗制剂进行免疫(L.A.Novotny et al.(2017)Clin Vaccine Immunol 24)。制剂由10μg头部嵌合肽或10μg尾部嵌合肽组成，每一种都与10μg佐剂LT(R192G/L211A)混合，这是一种大肠杆菌耐热肠毒素的双突变体(dmLT，来自John Clements博士的慷慨赠送)(J.D.Clements et al.(2018)dmLT.mSphere 3)。作为阴性对照，一组仅接受10μg dmLT。一周后给予第二次相同剂量。接受第二剂后两天，即在该免疫方案中观察到最大免疫反应的时间(L.A.Novotny et al.(2013)Vaccine 31:3417-3426)，所有栗鼠通过被动吸入飞沫都接种了1.9x 107TCID50的腺病毒血清型1。7天后，当发生腺病毒诱导的气道损害时(K.Suzuki et al.(1994)InfectImmun 62:1710-1718)，所有动物通过被动飞沫吸入108CFU NTHI株86-028NP被激发。为了确认所有组均被NTHI(现在位于鼻咽内)等量定植，从而可用于上行至受病毒感染的咽鼓管，在细菌激发后一天进行鼻咽灌洗。鼻咽灌洗液被连续稀释并铺板到巧克力琼脂上，添加15μg氨苄青霉素/ml培养基，以限制正常栗鼠菌群的生长(LA Novotny et al.(2017)ClinVaccine Immunol 24:e00563-16。这种浓度的氨苄青霉素对NTHI菌株86-028NP生长没有影响。)。在37℃孵育24小时后计数NTHI菌落。
视频耳镜检查
使用Welch Allyn MacroViewTM耳镜和Welch Allyn Viewer软件对所有动物进行视频耳镜检查。每个鼓膜在0到4的既定等级上盲法排名，得分≥2.0的中耳被认为是OM阳性，因为炎症(红斑)和MEF可见(L.A.Novotny et al.(2006)Vaccine 24:4804-4811)。如果一只中耳评分≥2.0，但对侧耳评分<2.0，则认为该动物OM阳性。为了计算疫苗效力，首先确定20天研究期间OM的观察次数，并将其转换为相对于每个组别的总观察次数的百分比。然后从仅给予dmLT的群组计算的百分比中减去该值。视频耳镜检查由对所递送的制剂不知情的个体进行。
统计分析
图形结果和统计测试使用GraphPad Prism 8进行。体外生物膜破坏测定的生物量差异通过单因素方差分析和多重比较确定。中耳液中细胞因子数量的组间差异通过单因素方差分析和多重比较确定。细菌负荷和平均粘膜生物量评分的差异通过单因素方差分析和多重比较来确定。通过Mantel-Cox检验确定OM发作的延迟和疾病消退的时间。
结果
来自鼠单克隆抗体的β头部Fab片段在体外破坏了细菌生物膜
申请人首先进行了体外腔室盖玻片测定，其中允许由五种不同细菌种类形成的生物膜形成24小时，然后与Fab片段一起温育以验证它们的潜在活性。Fab片段源自鼠单克隆抗体，该抗体针对NTHI IHF的β-亚基的DNA结合“头部”区域内先前定义的15聚体免疫保护域(IHFNTHI，本文称为“β头部Fab”)(M.E.Brockson et al.(2014)Mol Microbiol 93:1246-1258)并将结果与使用相应的完整IgG分子诱导的结果进行比较。作为阴性对照，使用了来自针对IHF NTHI的β-亚基的DNA结合“尾部”区域内的15聚体非保护性结构域的鼠单克隆抗体的Fab片段(“β-尾部Fab”)(其不会破坏细菌生物膜(L.A.Novotny et al.(2016)EBioMedicine 10:33-44))或非特异性鼠IgG1同种型抗体(“同种型对照Fab”)。
代表性图像显示，测试的五种不同细菌物种中的每一种在24小时内形成了不同结构的生物膜(图8A)。β-尾部Fab或同种型对照Fab没有破坏性影响，与衍生出这些阴性对照片段的完整IgG的结果类似。相比之下，与β头部Fab一起孵育显著破坏了由所有测试的细菌物种形成的生物膜。生物膜生物量的定量表明，这种浓度的β头部Fabs对生物膜的破坏与等摩尔浓度的相应完整β头部IgG的破坏相当(P≤0.05；具有多重比较的单因素ANOVA)(图8B))。因此，β头部导向抗体分子的最小抗原结合结构域足以结合并隔离DNABII蛋白，然后如生成Fab片段的完整抗体一样有效地破坏生物膜。
小鼠β头部Fabs在实验性OM期间从生物膜中根除NTHI并分解(resolved)生物膜
通过体外证明β头部Fab的生物膜破坏功能，申请人解决了第一个问题：在实验性疾病的背景下，仅通过Fab结构域的抗体介导的DNABII蛋白隔离是否足以诱导生物膜塌陷并随后清除释放的细菌？为了回答这个问题，鉴于慢性和复发性疾病的主要病原体NTHI，申请人采用了成熟的OM栗鼠模型。实验性OM首先是通过直接激发中耳诱导的。四天后，NTHI生物膜充满中耳(Novotny LA et al(2011)Mucosal Immunol 2011；4:456–67)。然后将鼠单克隆抗体衍生的β-头部Fab、β-尾部Fab或同种型对照Fab注射到两个中耳中，24小时后进行第二次相同的处理(图9A)。在接受第二剂Fab后一天，处死所有动物以评估相对的即时治疗效果。
申请人首先通过平板计数来量化存在于粘膜生物膜内和/或粘附于中耳粘膜的NTHI的数量。与同种型对照Fab相比，接受β-尾部Fab的动物的细菌负荷没有差异(图9B)。相反，在从用β-头部Fab处理的动物中回收的粘膜生物膜中检测到的NTHI显著减少了4个对数，并且在该群组中的六个中耳的其中一个中，所有NTHI都已被根除(P≤0.01；单因素方差分析与多重比较)(图9B)。因此，β头部Fab的递送诱导了从栗鼠中耳中增强的NTHI根除。
为了接下来辨别三种治疗中的任何一种是否诱导已建立的NTHI生物膜的快速消退，在完成Fab片段治疗后的一天，每个中耳的图像被捕获、随机化并由六名不知情的评审员进行打分。评审员使用一个既定的评分标准，其中0分表示未观察到粘膜生物膜，4+分表示≥75％的中耳仍然充满粘膜生物膜。因此，与同种型对照Fab片段的递送相比，β-尾部Fab诱导了粘膜生物膜量的轻微但不显著的减少。重要的是，同种型对照Fab和β-尾部Fab组中≥50％的中耳仍然充满粘膜生物膜，平均生物量得分分别为3.4和2.7(图9C)。相反，β-头部Fab诱导粘膜生物膜的显著减少(P≤0.05；单因素ANOVA和多重比较)，并且后一组中的大多数(6个中的4个，67％)的中耳得分≤1.0，这表明≤25％的中耳含有任何残留的可见生物膜。因此，β-头部Fab的递送既显著降低了中耳中的细菌负荷，又能有效消除已经建立的粘膜生物膜。
来自每个群组的中耳的代表性图像在图9D中呈现，其中显示了健康的栗鼠中耳和充满NTHI生物膜的中耳作为参考。在初始动物中，中耳粘膜和全长的天然骨隔膜是可见的(得分0)。相反，在NTHI激发4天后，中耳的薄粘膜衬里和骨间隔均不可见，因为这些解剖特征现在被大的粘膜生物膜遮挡(得分4)。在该研究中，在递送β-尾部Fab或同种型对照Fab后，粘膜生物膜仍填充50％-100％的中耳，分别具有4.0或2.4的代表性分配分数(图9D)。然而，β-头部Fab在很大程度上根除了这些结构，这可由中耳粘膜衬里和骨间隔都是完全可见的(分配分数为1.0)来证明。还值得注意的是，虽然在接受β部尾部Fab的动物的中耳粘膜和鼓膜中观察到广泛的炎症(图9D，中间图像，右侧)，但在用β-头部Fab处理的动物的中耳粘膜内仅存在有限的细小毛细血管扩张(图9D，底部图像，右侧)，尽管事实上仅在2天前这些耳朵充满了由NTHI形成的生物膜。
开始理解为什么接受β尾部Fab的动物的中耳始终出现明显发炎(图9D，中间图像，右侧)，而β头部Fab处理的耳朵没有(图9D，底部图像，右侧)，申请人确定了在处死时从动物收集的中耳液中的聚焦细胞因子谱(focused cytokine profile)。通过细胞珠测定，与接受β头部Fab治疗的动物相比，接受β尾部Fab的动物的中耳中检测到一组六种促炎细胞因子中的每一种显著更多(P≤0.05)(图10A)。相反，在接受β头部Fab的动物的中耳液中检测到显著更多的抗炎细胞因子IL-10(P≤0.05；具有多重比较的单因素ANOVA)(图10B)。此外，与接受同种型对照Fab的动物相比，在来自用β头部Fab治疗的动物的中耳液中检测到显著更多的促炎细胞因子IL-1β和TNF(图10B)，这可能导致在后一组中的粘膜内持续地观察到炎症(图9D)。这些数据表明，在活跃的实验性OM的背景下，由β头部Fab诱导的生物膜塌陷和NTHI清除也介导了疾病相关炎症的消退。总的来说，并且也是原始问题的核心，到目前为止，数据显示β头部Fab在体内有效地破坏了细菌生物膜，因此不需要抗DNABII定向抗体的Fc部分来诱导生物膜塌陷。这一结果增加了对模型的支持，其中生物膜结构崩溃，伴随着驻留细菌的释放，是DNABII蛋白靶向抗体介导的平衡转变的结果，该平衡转变随后使平衡有利于宿主，现在通过多种宿主免疫效应物的参与有效地根除新释放的病原体。
针对两个IHF亚基内结构域的兔IgG Fab在体内迅速破坏生物膜
迄今为止，申请人检查了针对β-亚基(构成IHFNTHI的两个异源亚基之一)的Fab片段。虽然这种方法是有效的，但在以前的工作中，申请人证明，与单独针对任一亚基的抗体相比，针对IHFNTHIα-亚基内的头部结构域的鼠单克隆抗体加上针对β-亚基的小鼠单克隆抗体的混合物诱导显著更大的生物膜破坏，包括那些仅具有HU等位基因的细菌物种(L.A.Novotny et al.(2016)EBioMedicine 10:33-44)。虽然74.7％的氨基酸序列相似，但在IHFNTHI的每个94个氨基酸亚基内只有47.3％的同一性，因此α-亚基加β-亚基导向的抗体的混合物提供了IHF及其直系同源物HU的完整多样性的更广泛覆盖范围。利用该信息，申请人随后设计了一种表位靶向嵌合肽免疫原，以首先在兔体内同时诱导针对两个保护域的抗体。将来自IHFNTHI的α-亚基和β-亚基的DNA结合头部结构域内的稍大(例如20聚体)片段被合并，并通过4残基连接肽连接以允许这两个保护性表位之间的灵活性(L.A.Novotny etal.(2019)NPJ Vaccines 4:43)，命名为“头部嵌合肽”。作为阴性对照，还开发了一种“尾部嵌合肽”免疫原，该免疫原合并了来自IHFNTHI的α-亚基和β-亚基的尾部区域内的非保护性结构域的20聚体片段，并通过相同的4-残基接头连接。申请人先前表明，针对这种头部嵌合肽的多克隆兔IgG在体外破坏由多种细菌物种形成的生物膜，并在实验性NTHI诱导的OM期间分解栗鼠中耳内的粘膜生物膜(L.A.Novotny et al.(2019)NPJ Vaccines 4:43)。
现在，为了将嵌合肽设计策略与确定潜在的Fab片段介导的治疗性生物膜破坏相结合，在此，申请人用实验性OM测试了多克隆兔抗头部嵌合肽Fab破坏已经存在于栗鼠中耳中的NTHI生物膜的能力。申请人还评估了任何由此产生的生物膜消退的持久性，即一旦抗体治疗停止，NTHI生物膜会重新建立吗？因此，在申请人用衍生自抗1)头部嵌合肽；2)尾部嵌合肽或3)初始血清的多克隆兔IgG的Fab处理之前，NTHI被允许在栗鼠中耳中建立大的生物膜(图11A)。在第二个治疗剂量给药后一天，每个组中的一部分动物被处死以检查治疗的直接效果。其余动物在没有进一步治疗的情况下再监测7天，以评估这种治疗方法的持久性。
与两个阴性对照组中的任何一个相比，在接受两剂头部嵌合肽Fab一天后，粘膜生物膜内和/或粘附到中耳粘膜的NTHI减少了>2-log(P≤0.05；单因素ANOVA，多重比较)(图11B)。在没有进一步治疗的额外一周后，给予尾部嵌合肽Fab或初始血清Fab的动物的中耳粘膜生物膜/粘附于粘膜内的NTHI负荷仅轻微降低。相反，在后一个时间点，在给予头部嵌合肽Fab的动物中，细菌负荷降低了额外的10倍(P≤0.05；具有多重比较的单因素ANOVA)。值得注意的是，在6个中耳中的4个中(67％)，这些均质化组织的NTHI培养呈阴性。这些数据表明，通过头部嵌合肽Fab从生物膜释放的NTHI随后被宿主免疫效应物清除，无需任何额外的干预或治疗。
申请人接下来定性地评估了用这些嵌合肽导向的Fab处理是否能够根除已经存在于栗鼠中耳中的NTHI生物膜。为此，要求盲法评估者对治疗后保留在中耳内的粘膜生物膜的相对量进行0-4+等级的评分。接受尾部嵌合肽Fab处理没有效果。在接受尾嵌合肽Fab的动物中处理一天后，剩余的生物膜实际上略大于用初始血清Fab处理的动物中耳中的那些，平均生物量分数分别为3.2和2.6(图11C)。在这两个阴性对照组中，>50％的中耳仍然充满粘膜生物膜。相反，在给予头部嵌合肽Fab的群组中，所有六个中耳的评分均≤1.0，这表明仅观察到最少的剩余粘膜生物膜(P≤0.001；具有多重比较的单因素ANOVA)，平均生物量评分为0.7。因此，头部嵌合肽Fab疗法的直接结果是显著减少细菌负荷和显著破坏已建立的NTHI生物膜。
为了测定观察到的治疗效果的持久性，在没有任何进一步治疗的情况下，再过一周后，在每个群组的一个子群体中评估中耳。在给予来自初始兔血清的Fab的群组中，粘膜生物膜实际上增加了，而在那些给予尾部嵌合肽Fab的群组中，它们仅略有下降(例如，>50％的中耳仍然充满NTHI生物膜)，平均生物量得分分别为3.6和2.6(图11C)。重要的是，用头部嵌合肽Fab处理的动物继续清除NTHI生物膜，这可以通过粘膜生物膜的额外显著减少(P≤0.01；具有多重比较的单向ANOVA)和0.2的平均生物量得分来证明。值得注意的是，6个中耳中有4个(67％)没有明显的生物膜证据。这些定性评估与如图11B所示的细菌负荷数据很好地相关联。
为了展示盲法评估者在观察到的剩余黏膜生物膜方面的评分结果，图11D示出了健康中耳和具有4天NTHI生物膜的中耳的示例以及来自每个群组在第13天的中耳的代表性图像。正如预期的那样，在治疗完成一天后，大量粘膜生物膜留在接受初始血清或尾部嵌合肽Fab的动物中，这可由这些生物膜遮挡了中耳粘膜和骨间隔的可见性这一事实来证明，代表性的分配分数分别为2.8或3.2(图11D)。这些分数在治疗完成后7天没有显著降低，事实上，对于用初始血清Fab治疗的群组，这些分数显著增加，代表性分配分数分别为4.0和2.8。相反，在用头部嵌合肽Fab治疗的动物的中耳中，正常的解剖标志在治疗完成后一天完全可见并且保持如此，在随后的7天内没有生物膜再生的证据。后一组的代表性分配分数为0.8(第6天)和0(第13天)。总的来说，这些数据为提供头部嵌合肽Fab以根除中耳内现有NTHI生物膜的潜力提供了额外的有力支持，并且进一步证明这种根除可能是持久的。
头部嵌合肽单克隆抗体的人源化版本的开发和验证
有了支持使用抗头部嵌合肽Fab在体外破坏多种细菌生物膜以及在体内根除粘膜NTHI生物膜的数据，申请人现在想要在临床试验中使用这些新型治疗剂。为此，申请人生成了一组针对头部嵌合肽的人源化头部嵌合肽导向的单克隆抗体(本文称为“HuTipMAb”)，该抗体是在针对头部嵌合肽的鼠单克隆抗体之后设计的。在此，申请人提供了支持其中一种HuTipMabs的功能性体外活性的数据，作为人源化有效性的证据。作为人性化的衡量标准，申请人分别确定了重链和轻链内可变区的T20分数(S.H.Gao et al.(2013)BMCBiotechnol 13:55)。这些值对于重链可变区为82，对于轻链可变区为97，这表明每个抗体结构域的高度人性化。通过表面等离子共振测定，HuTipMab对头部嵌合肽的KD为76nM，对天然IHFNTHI的KD为10nM，因此对靶肽具有很强的亲和力，对天然蛋白质具有更高的亲和力，这对于疾病消退是需要的。在体外，HuTipMab显著破坏了由NTHI、铜绿假单胞菌或新洋葱芽孢杆菌形成的生物膜(P≤0.001；未配对t检验)(图12A)，并且与用等浓度的人源化抗尾部嵌合肽抗体(称为'HuTailMab')孵育的生物膜相比，在暴露于所选浓度的所用的人源化Mab16小时后仅残留13-26％的生物膜生物量(图12B)。因此，鼠头部嵌合肽特异性单克隆抗体的人源化产生了一种对其蛋白质靶标具有强亲和力的治疗候选物，并证明了其在体外破坏由三种人类呼吸道病原体形成的生物膜的能力。
为了接下来证实人源化单克隆也在体内起作用，申请人使用了NTHI诱导的实验性OM的栗鼠模型，其中生物膜在治疗前已经存在于中耳内。将HuTipMab、HuTailMab或等体积的无菌盐水(与人源化抗体一起使用的稀释剂)递送至两个中耳，然后在24小时后进行第二次相同的治疗(图13A)。和以前一样，在治疗完成后一天处死每组的一个亚组的动物以检查直接结果，并在不进行额外治疗的情况下再跟踪第二亚组动物一周以确定治疗效果是否持久。
治疗一天后，与HuTailMab或盐水相比，HuTipMab诱导NTHI数量显著的>3.5log的降低(P≤0.01；单因素ANOVA与多重比较)(图13B)。一周后，虽然HuTailMab或生理盐水仅导致NTHI负载的略微额外降低，但在用HuTipMab治疗的中耳中，NTHI负载又降低了7倍。值得注意的是，在用HuTipMab治疗一周后，6个中耳粘膜中的4个(67％)的匀浆是培养物阴性的(P≤0.05；单因素ANOVA与多重比较)。因此，用HuTipMab治疗诱导中耳粘膜生物膜内NTHI的快速根除。
为了定性评估治疗后中耳保留了多少粘膜生物膜，再次以0-4+的等级对中耳进行盲法评估。接受盐水或HuTailMab的动物仍然充满粘膜生物膜，占据>50％的中耳，平均生物量分数分别为2.7和3.1(图13C和图13D；代表性分数出现在图13D中每个小图右下角的框中，第一行)。相反，在用HuTipMab治疗的那些中耳中，观察到最少的剩余粘膜生物膜(<25％)，并且该组的平均生物量评分为1.0(图13C和图13D)。7天后，虽然在用盐水(平均得分，3.0)或HuTailMab(平均得分，3.5)治疗的群组中粘膜生物膜实际上增加了，但在用HuTipMab治疗的那些组中观察到最少的生物膜(平均得分，0.6)(图13C和图13D；代表性分数出现在图13D中每个小图右下角的框内，第二行)。每个群组的代表性图像显示在图13D中，与图13C中呈现的数据具有良好的相关性。
与图9D中在接受专门针对IHF亚基之一的β-头部的鼠单克隆抗体片段的动物的中耳中可见炎症不同，用HuTipMab治疗没有导致明显的炎症(参见图13D)。为了开始解释这一观察结果，申请人再次进行细胞计数珠测定以确定在处死时从这些动物收集的中耳液中的聚焦的但现在略微扩大的细胞因子谱。在完成抗体治疗一天后，在接受盐水或HuTailMab的动物的中耳液中检测到相当数量的六种促炎细胞因子，而在来自HuTipMab治疗的动物的液体中存在显著较少的量(图14A)。此外，在从接受HuTipMab的动物中回收的中耳液中检测到明显更多的两种抗炎细胞因子。在第13天(治疗完成后7天)收集的液体中保持并进一步增强了这种模式(图14B)。由于促炎细胞因子浓度在盐水和HuTailMab处理的动物之间是相似的，并且不希望受理论的束缚，申请人推测鼠单克隆抗体的人源化消除了在后一组动物中看到的炎症(参见图13D)。总之，这些数据表明，针对头部嵌合肽的鼠单克隆人源化不会降低其在体外或体内的有效性。HuTipMab诱导了在实验性OM期间快速且持久地清除NTHI诱导的中耳粘膜生物膜，从而促进疾病的消退。
HuTipMab和HuTailMab的生物膜破坏作用总结在下表中。
表9.体内生物膜破坏结果。
↓表明细菌负荷减少；而↑表明细菌负荷增加。
此外，申请人在处死时从动物收集的中耳液中确定了有限的细胞因子谱。如图14所示，在HuTipMab处理的中耳中观察到显著较少的促炎细胞因子，而在HuTipMab处理的中耳中发现显著更多的抗炎细胞因子。然而，就促炎细胞因子而言，HuTailMab处理的中耳与盐水处理的中耳相当。这表明鼠单克隆抗体的人源化消除了在单克隆抗体Fab研究中观察到的某种啮齿动物特异性炎症。这对于使用HuTailMab作为诊断工具是积极结果。
头部嵌合肽主动经皮免疫后的临床前疗效
到目前为止，申请人报告了一种有效的靶向DNABII的治疗剂的开发(例如，递送靶向两个IHF亚基的免疫保护头部区域的人源化单克隆抗体以破坏生物膜/消退正在发生的疾病)，但是通过主动免疫预防生物膜形成和疾病诱导也是一个重要目标。为此，申请人使用了实验性OM的独特的栗鼠病毒-细菌共感染模型，其中前期腺病毒感染使中耳易于受到定植在鼻咽的NTHI的侵袭，现在NTHI上行到病毒受损的咽鼓管(K.Suzuki et al.(1994)Infect Immun 62:1710-1718)。这种双重感染模型旨在模拟“我的孩子感冒了，然后一周后耳朵感染了”。因此，首先用头部或尾部嵌合肽主动免疫动物以诱导适当的免疫反应(L.A.Novotny et al.(2015)Clin Vaccine Immunol 22:867-874；L.A.Novotny et al.(2013)Vaccine 31:3417-3426；L.A.Novotny et al.(2011)Mucosal Immunol 4:456-467；L.A.Novotny et al.(2017)Clin Vaccine Immunol 24)。随后，首先用腺病毒激发栗鼠，然后在4天后用NTHI激发，然后监测它们的上行OM的相对发展。
三组初始栗鼠通过将疫苗制剂摩擦在两只耳朵后面(例如耳后区域)的皮肤上进行免疫，一周后重复该过程(图15A)。使用的制剂有：头部嵌合肽与佐剂LT(R192G/L211A)(dmLT)混合，这是大肠杆菌耐热肠毒素的双突变体(J.D.Clements et al.(2018)mSphere2018Jul-Aug；3(4):e00215-18.)；尾嵌合肽加dmLT或单独的dmLT。第二次免疫后两天，所有动物鼻内(IN)接种腺病毒，一周后通过IN用NTHI进行激发。在NTHI激发后一天进行鼻咽灌洗以确认所有动物都被同等地定殖(图15B)。这一结果确保了每只动物都有可能发展出实验性OM，唯一的区别因素是由于接受了免疫原而产生的诱导免疫。
疫苗功效的主要读数是视频耳镜检查，其中每个鼓膜(TM)都被盲法观察以确定明显的炎症和中耳液是否可见作为OM的迹象(L.A.Novotny et al.(2006)Vaccine 24:4804-4811)。在对病毒感染的栗鼠进行NTHI激发的8天内，有迹象表明NTHI已经上行到受损的咽鼓管并在仅佐剂组的16个中耳中的2个(13％)中诱导OM，峰值发生率为第13天的100％(图15C)。实验性OM在第13天后开始下降，但在第20天持续存在于16个中耳中的8个(50％)。正如预期的那样，用尾部嵌合肽免疫并没有提供益处。NTHI激发4天后，两个中耳(13％)出现OM迹象，在第12天和第13天达到100％的峰值，然后开始下降，但16个中耳中有8个(50％)在研究结束时保持OM迹象。与此形成鲜明对比的是，头部嵌合肽免疫组(P≤0.0001；Mantel-Cox检验)中OM症状的出现显著延迟到第10天。第10天至第12天OM的最大发病率仅发生在该后一个群组中的18个中耳中的4个(25％)，并且在第14天完全消退，这明显早于对照组(P≤0.0001；Mantel-Cox检验)。此外，在20天的观察期内，与其他两个动物组相比(16只耳朵；8只动物)，用头部嵌合肽免疫的动物中具有实验性OM迹象的动物比例显著降低(4只耳朵；2只动物；P≤0.0001；Mantel-Cox检验)。
图15D中所示的栗鼠TM的图像代表了在第11天通过盲法耳镜观察到的结果。健康的栗鼠TM是灰色的，而用dmLT或尾部嵌合肽免疫的动物则略微鼓胀，在TM后面可见红斑和黄色的中耳液。相反，头部嵌合肽免疫组的大多数动物(16只中的12只；75％)的TM显示出最小的炎症迹象(如果有的话)。总体而言，与任一阴性对照组相比，用头部嵌合肽免疫提供的疫苗效力为85％。总的来说，这些数据支持设计和使用头部嵌合肽作为有效的疫苗候选抗原，以防止由于NTHI导致实验性OM的发展，并支持申请人开发治疗性人源化单克隆抗体。
实验讨论
生物膜与呼吸道(L.O.Bakaletz et al.(2012)Paediatr Respir 13:154-159；J.H.Fastenberg et al.(2016)World J Otorhinolaryngol Head Neck Surg 2:219-229；J.W.Costerton(2001)Trends Microbiol 9:50-52)、口腔(W.H.Bowen et al.(2018)Trends Microbiol 26:229-242；P.E.Petersen et al.(2005)J Periodontol 76:2187-2193)、胃肠道(E.C.von Rosenvinge et al.(2013)Pathog Dis 67:25-38；S.Macfarlaneet al.(2007)J Appl Microbiol 102:1187-1196)和泌尿生殖道(A.L.Flores-Mireles etal.(2016)J Urol 196:416-421；P.Tenke et al.(2012)World J Urol 30:51-57)的大多数慢性和复发性细菌疾病有关。这些通常是多种微生物群落的形成和持续存在对这些疾病的发病机制有重大贡献，主要是由于对宿主免疫效应物和抗生素的清除具有特征性的顽固性。因此，认识到生物膜在疾病发病机制和持久性中的作用需要新的方法来防止它们的形成或根除已经存在的生物膜。
因此，许多实验室已经开发出多种缓解生物膜的方法，这些方法已成为许多优秀综述的主题(Verderosa AD et al.(2019)Front Chem 2019；7:824；Koo H et al.(2017)Nat Rev Microbiol 2017；15:740–55；Fleming D et al.(2017)Microorganisms 2017；5:15；Worthington RJ(2012)Org Biomol Chem 2012；10:7457–74；Reza A et al.(2019)Antibiotics(Basel)2019；8:229)。一个广泛的研究领域集中在通过诱导生物膜驻留细菌扩散的药剂根除生物膜，例如用酶、干扰诸如群体感应、经由环状di-GMP信号通路等过程的分子或递送小分子抑制剂或类似物处理生物膜(Verderosa AD et al.(2019)Front Chem2019；7:824；Koo H et al.(2017)Nat Rev Microbiol 2017；15:740–55；Fleming D etal.(2017)Microorganisms 2017；5:15；Worthington RJ(2012)Org Biomol Chem 2012；10:7457–74；Reza A et al.(2019)Antibiotics(Basel)2019；8:229)。或者，预防生物膜形成是一种也可以限制疾病引起的炎症的方法，与生物膜本身的存在相比，炎症通常对宿主造成更大的伤害(Vestby LK et al.(2020)Antibiotics(Basel)2020；9:59)。可植入装置的改进或在生物材料中加入抑制剂、使用抗菌肽或阻断微生物表达的粘附蛋白可限制生物膜的形成(Bazaka K et al.(2012)Appl Microbiol Biotechnol 2012；95:299–311；Qvortrup K et al(2019)Front Chem 2019；7:742；Rabin N et al(2015)Future MedChem 2015；7:647–71；Chung PY et al(2017)J Microbiol Immunol Infect 2017；50:405–10)。
在过去的10多年中，自从申请人在栗鼠中耳中鉴定了由NTHI形成的生物膜内的结构性eDNA-DNABII晶格(lattice)(S.D.Goodman et al.(2011)Mucosal Immunol 4:625-637)，该观察结果被扩展，证实这种细菌允许但宿主限制的晶格存在于由许多不同细菌物种形成的生物膜中，包括高度优先的ESKAPE病原体(A.Abu Khweek et al.(2013)FrontCell Infect Microbiol 3:18；A.Devaraj et al.(2015)Mol Microbiol 96:1119-1135；M.O.Freire et al.(2017)Mol Oral Microbiol 32:74-88；J.E.Gustave et al.(2013)JCyst Fibros 12:384-389；L.A.Novotny et al.(2013)PLoS One 8:e67629；L.A.Novotnyet al.(2016)EBioMedicine 10:33-44；C.J.Rocco et al.(2018)J Bacteriol 200；K.M.Rood et al.(2018)Sci Rep 8:8756)。总的来说，这一最初是在体外观察到的结果，随后扩展到在多个临床前模型中进行测试(Goodman SD et al(2011)Mucosal Immunol2011；4:625–37；Brockson ME et al(2014)Mol Microbiol 2014；93:1246–58；Novotny LAet al(2019)NPJ Vaccines 2019；4:43；Freire MO et al(2017)Mol Oral Microbiol2017；32:74–88；and Novotny LA et al(2016)EBioMedicine 2016；10:33–44)，它支持开发一种新的以DNABII为焦点的方法来介导生物膜疾病，该方法将针对这种看似与物种无关的“阿喀琉斯之踵”。
因此，设计并提出了一种针对细菌生物膜的双管齐下的方法，这两种方法都针对细菌生物膜的eDNA+DNABII支架。第一种方法是一种预防性主动免疫策略，其中将头部嵌合肽用作免疫原以诱导抗体形成，从而阻止NTHI在中耳形成生物膜，从而阻止实验性OM的进展。申请人设计了一种表位特异性DNABII嵌合蛋白疫苗候选抗原，以诱导抗体形成，从而防止主动免疫后生物膜的形成。第二种是治疗策略，其中针对头部嵌合肽免疫原的抗体(最终是人源化单克隆抗体)的IgG或Fab片段直接递送到中耳，以破坏已建立的NTHI生物膜并介导实验性OM的消退。申请人将针对该免疫原的鼠单克隆抗体人源化，以完整或作为Fab片段用作广泛有效的治疗剂，其中细菌从生物膜驻留释放，然后可以被宿主免疫效应物和/或抗生素杀死(尽管现在可以以大大降低的剂量使用)(M.Shigeta et al.(1997)Chemotherapy43:137-141；D.M.Lewis(2005)J Theor Biol 234:565-591；S.Singh et al.(2017)OpenMicrobiol J 11:53-62)。在这里，申请人提出了来自四项研究的有希望的临床前证据，使用了两种不同的OM模型，这些模型一致地显示了这些方法在生物膜和疾病预防方面的有效性和/或现有粘膜生物膜的明显且显著的减少以及疾病的快速消退。
申请人采用了两种高度流行的儿科疾病的临床前模型，其慢性和复发是由于中耳中的生物膜引起的，以评估申请人的DNABII靶向策略的预防和治疗效果。这些模型忠实地概括了在儿童中观察到的OM的自然病程(G.S.Giebink(1999)Microb Drug Resists 5:57-72；L.O.Bakaletz(2009)Expert Rev Vaccines 8:1063-1082；J.T.Poolman et al.(2000)Vaccine 19Suppl 1:S108-115)并准确预测了临床试验结果(L.A.Novotny et al.(2006)Vaccine 24:4804-4811；R.Prymula et al.(2006)Lancet 367:740-748)。对这里介绍的工作很重要的是，栗鼠模型对于研究单微生物和多微生物生物膜的形成、持久性和干预是一个成熟的宿主(L.O.Bakaletz(2012)Paediatr Respir Rev 13:154-159；G.D.Ehrlich etal.(2002)JAMA 287:1710-1715；M.A.Apicella(2009)J Infect Dis 199:774-775)。
申请人提供几个以前未回答的问题的答案。申请人发现Fab片段在体外和体内破坏生物膜方面与完整抗体一样有效，因此在可能需要重复给药时可用作治疗剂(由于对诱导抗抗体反应的担忧)。申请人还确定，DNABII导向抗体的Fc部分对于体外生物膜破坏或体内生物膜分解不是必需的。这一结果表明，从保护性生物膜中释放细菌将足以促进由先天宿主免疫效应物和/或抗生素造成的清除和疾病消退。申请人了解到，结合来自IHFNTHI的两种异质亚基的保护结构域确实导致功效增加。此外，用头部嵌合肽进行主动免疫诱导了抗体的形成，从而阻止了实验性OM的发展并促进了疾病的快速消退。头部嵌合肽单克隆抗体的人源化产生了一种对免疫原和天然蛋白质具有纳摩尔亲和力的非常有前景的治疗剂。
总的来说，这些数据增加了对eDNA+DNABII导向策略的理解，并高度支持头部嵌合肽免疫原和针对它的人源化单克隆抗体分别进入预防性和治疗性临床试验。鉴于申请人的DNABII靶向方法的物种独立性，并且不受理论的束缚，本文提供了一种用于改善多种疾病的临床管理的治疗产品，其中发病机制、持久的慢性病和/或周期性复发是由顽固的生物膜引起的。
实验5
许多口腔细菌(例如，伴放线放线杆菌(Aggregatibacteractinomycetemcomitans)、牙龈卟啉单胞菌)与牙周炎和种植体周围炎等炎症性疾病的发病机制有关，它们会破坏牙槽骨和牙龈。缺乏有效的动物模型阻碍了对这些细菌发病机制的研究。研究特定细菌的致病性的挑战之一是当外源性细菌被引入动物口腔时难以建立生物膜。尽管已经开发了牙周炎的动物模型，但很少从接种动物的口腔中回收到可培养的细菌。开发一种可以评估特定细菌致病性的有效动物模型将极大地帮助阐明其致病机制。
申请人建立了种植体周围炎的大鼠模型，其中细菌生物膜(例如伴放线放线杆菌、牙龈卟啉单胞菌)生长在钛螺钉种植体的头部(Freire,M.O.,(2011)J.Periodontology82(5):778-89and Freire,M.O.,(2017)Molecular Oral Microbiology 32(1):74-88)。然后将载有生物膜的螺钉通过手术植入大鼠上颌牙槽骨并进行监测。微型计算机断层扫描可用于测量螺钉周围的骨质流失，从螺钉以及螺钉周围的组织和骨骼中提取的DNA可用于qPCR或微生物组分析，以揭示存在的物种。该建立的动物模型显示螺钉种植体周围存在骨质流失，并且在植入后至少2周检测到接种的细菌病原体。
实验6
该实验提供了一种用于临床前测试治疗莱姆病的干扰剂的小鼠模型。参见Dresser et al.Pathogens 5(12)e1000680,Epub 2009Dec.4。莱姆病是美国最常见的蜱传疾病。报告的病例在1992年至2006年期间增加了一倍以上，2008年确认了大约29,000例新病例。估计莱姆病的实际病例数可能超过流行地区报告的6-12倍。根据定义，随着人口继续从城市迁移到郊区和农村地区，并且白尾鹿(携带硬蜱属蜱虫)越来越多地在这些地区游荡，这些流行性地区正在扩大。莱姆病是由微生物伯氏疏螺旋体(一种螺旋体)引起的。伯氏疏螺旋体通过硬蜱叮咬传播，随后通过血流传播到其他组织和器官。
在该动物模型中，C3H/HeN小鼠通过背侧皮下和腹腔注射或通过静脉注射注射了螺旋体。在感染后大约7天回收血液和活检样本，用于评估微生物负荷和评估组织和器官中的病理学。本文公开的方法和组合物预期开发出治疗性和预防性策略，用于减少和/或消除由伯氏疏螺旋体引起的生物膜，该生物膜是在激发后形成的并被认为有助于疾病的发病机制和慢性性质。
实验7
该实验提供了一个用于临床前测试干扰剂以治疗囊性纤维化的猪模型。参见Stoltz et al.(2010)Science Translational Medicine 2(29):29-31。囊性纤维化是一种常染色体隐性遗传疾病，由于编码CF跨膜传导调节因子(称为CFTR)阴离子通道的基因发生突变。在该模型中，经过专门培育以携带称为“CFTR”的基因缺陷的猪(称为CF猪)自发地发展出CF肺病的标志性特征，包括多种细菌造成的下呼吸道感染。可以用干扰剂免疫猪以1)用多肽或其他免疫原性剂免疫这些CF猪，从而诱导抗体的形成，该抗体将根除肺中的细菌生物膜，以通过雾化将抗体或其片段或衍生物递送至这些动物的肺，来评估疾病和相关病理症状的改善。
实验8
申请人还提供了结核病(TB)的临床前模型。参见Ordway et al.(2010)Anti.Agents and Chemotherapy 54:1820。微生物结核分枝杆菌是造成全球逐渐流行的原因。目前的数据表明，每年约有800万结核病新病例和约270万人死于结核病。除了这种微生物作为HIV感染个体的共同感染(在约4500万感染HIV的人中，估计约1/3也被结核分枝杆菌共同感染)之外，特别麻烦的是，分离株已对多种药物具有高度耐药性，25年多来没有引入结核病新药。在该动物模型中，SPF豚鼠被维持在屏障隔室(barrier colony)中并通过雾化喷雾感染以将约20cfu的结核分枝杆菌菌株Erdman K01杆菌递送到它们的肺中。在激发后第25、50、75、100、125和150天处死动物，测定细菌负荷和回收组织以进行组织病理学评估。与不会出现典型结核病症状的小鼠不同，以这种方式受到激发的豚鼠会出现组织良好的肉芽肿，并伴有中央坏死，这是人类疾病的标志。此外，与人类一样，豚鼠在引流淋巴结中出现严重的脓性肉芽肿性和坏死性淋巴结炎，这是原发性病变复合症的一部分。使用该模型将提供临床前筛选方法，以确认和识别治疗和预防策略，以减少和/或消除所产生的结核分枝杆菌生物膜，这些生物膜已被观察到在激发后形成在这些动物的肺中，并且被认为对疾病的发病机制和慢性性质都有贡献。
实验9
导管/留置装置生物膜感染的多种动物模型是已知的。参见Otto(2009)NatureReviews Microbiology 7:555。虽然微生物表皮葡萄球菌通常被认为是正常的皮肤菌群，但已成为许多人认为的关键机会性病原体，在医院感染的病原体中排名第一。首先，这种细菌是造成留置医疗设备上发生的大多数感染的原因，这些感染在设备插入过程中被这种常见的皮肤定植菌污染。虽然通常不会危及生命，但与这些生物膜感染的治疗相关的困难加上它们的发病频率，使它们成为严重的公共卫生负担。目前在美国，仅由表皮葡萄球菌引起的血管导管相关血流感染的治疗费用每年就高达20亿美元。除了表皮葡萄球菌外，粪肠球菌和金黄色葡萄球菌也是在留置医疗器械上发现的污染物。有几种与导管相关的表皮葡萄球菌感染的动物模型，包括兔子、小鼠、豚鼠和大鼠，所有这些模型都用于研究发病机制的分子机制，并有助于研究预防剂和/或治疗剂。大鼠颈静脉导管已用于评估干扰粪肠球菌、金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌生物膜形成的疗法。生物膜减少通常通过三种方式测量——(i)超声处理导管并计算CFU，(ii)切割导管切片或简单地放在板上并评分，或(iii)生物膜可以用结晶紫或其他染料染色、洗脱以及OD测量(以代表CFU)。
实验10
本文所述的方法可用于在人和动物中引发免疫反应。免疫原性组合物可以在佐剂例如但不限于铝盐和脂质体的存在下施用于人和动物受试者。本领域技术人员将理解也可以使用任何数量的药学上可接受的佐剂。免疫原性组合物可以肌肉内、皮下、鼻内或通过任何其他合适的途径施用于人或动物对象。免疫原性组合物可以以与所选给药方式一致的方式制备。免疫原性组合物可以采取多肽、核酸或其组合的形式，并且可以包含全长或部分抗原。此外或作为选择，免疫原性组合物可以采取用特定抗原脉冲(pulsed)的APC的形式，或用一种或多种编码特定抗原的多核苷酸转染的APC的形式。给药可以包括单剂量的免疫原性组合物，或初始给药，然后是一个或多个加强剂量。加强剂量可以在初始剂量后的一天、两天、三天、一周、两周、三周、一个月、两个月、三个月、六个月或十二个月或任何其他时间点提供。可以在评估对象的抗体效价后给予加强剂量。
实验11
本文所述的方法可用于赋予非免疫对象被动免疫。可以通过转移特异性识别或结合特定抗原的抗体或抗原结合片段来赋予针对给定抗原的被动免疫。抗体供体和受体可以是人类或非人类对象。此外或作为选择，抗体组合物可包含分离的或重组的多核苷酸，其编码特异性识别或结合特定抗原的抗体或抗原结合片段。
在免疫原性组合物的施用对受体对象构成风险、受体对象免疫受损或受体对象需要立即免疫的情况下，可以赋予被动免疫。免疫原性组合物可以以与所选给药方式一致的方式制备。组合物可包含完整抗体、抗原结合片段、多克隆抗体、单克隆抗体、体内产生的抗体、体外产生的抗体、纯化或部分纯化的抗体或全血清。给药可以包括单剂量的抗体组合物，或初始给药，然后是一个或多个加强剂量。加强剂量可以在初始剂量后的一天、两天、三天、一周、两周、三周、一个月、两个月、三个月、六个月或十二个月或任何其他时间点提供。可以在评估对象的抗体效价后给予加强剂量。
等同体
应当理解，虽然已经结合上述实施例描述了本公开，但是上述描述和示例旨在说明而不是限制本公开的范围。本公开范围内的其他方面、优点和修改对于本公开所属领域的技术人员将是显而易见的。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。本文提供的所有核苷酸序列均以5'至3'方向呈现。
此处示例性描述的实施例可以在没有此处未具体公开的任何元素或多个元素、限制或限制的情况下适当地实施。因此，例如，术语“包括”、“包括”、“包含”等应被广泛地理解且不受限制。此外，此处使用的术语和表达已被用作描述性术语而不是限制性术语，并且在使用这些术语和表达时无意排除所示和描述的特征或其部分的任何等同物，但它是认识到在本公开的范围内可以进行各种修改。
因此，应当理解，虽然本公开已经通过具体实施例和可选特征具体公开，但是本领域技术人员可以对本文公开的实施例进行修改、改进和变型，并且这样的修改、改进和变化被认为是在本公开的范围内。这里提供的材料、方法和示例是特定实施例的代表，是示例性的，并且不旨在限制本公开的范围。
本公开的范围已在本文中被广泛和一般性地描述。落入一般公开内容的每个较窄的种类和亚属分组也构成本公开内容的一部分。这包括带有附带条件或从中删除任何主题的负面限制的通用描述，无论此处是否具体引用了删减的材料。
此外，在根据马库什组描述本公开的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到，本公开的实施例因此也可以根据马库什组的任何个体成员或成员子组来描述。
在此提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献都明确地通过引用整体并入，其程度与每一个单独通过引用并入的程度相同。在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。
本公开的非限制性实施方式
实施方案1.一种抗体或其片段，包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:13、24或26的氨基酸(aa)25至aa 144的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，
(ii)所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:14或25的aa 21至aa132、SEQ ID NO:27的aa 21至aa 126的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案2.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述抗体包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:24的aa 25至aa 144的序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，
(ii)所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:25的aa 21至aa 132或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案3.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述抗体包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa25至aa 144的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，
(ii)所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案4.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案5.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:2的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案6.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案7.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案8.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案9.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案10.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 144的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案11.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 144的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案12.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 144的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案13.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 144的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案14.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 144的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案15.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 144的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案16.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案17.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案18.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案19.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:2的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案20.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:2的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案21.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:2的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案22.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含
SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案23.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案24.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案25.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案26.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案27.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案28.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案29.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案30.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案31.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案32.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案33.根据实施方案1的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 144的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案34.一种抗体或其片段，包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:13、24或26的氨基酸(aa)25至aa 144的序列，或实质上由其组成，或由其组成，
(ii)所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:14或25的aa 21至aa132、SEQ ID NO:27的aa 21至aa 126的序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案35.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述抗体包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:24的aa 25至aa 144的序列，或实质上由其组成，或由其组成，
(ii)所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:25的aa 21至aa 132的序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案36.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述抗体包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa25至aa 144的序列，或实质上由其组成，或由其组成，
(ii)所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa21至aa 132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案37.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案38.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:2的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案39.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案40.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案41.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案42.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa132、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案43.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 144的序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案44.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 144的序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案45.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 144的序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案46.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 144的序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案47.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 144的序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案48.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 144的序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案49.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案50.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案51.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案52.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:2的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案53.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:2的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案54.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:2的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案55.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案56.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案57.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:3的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案58.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案59根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案60.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:4的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案61.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案62.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案63.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:5的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案64.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案65.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案66.根据实施方案34的抗体或其片段，其中所述HC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:6的aa 25至aa 144的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC免疫球蛋白可变结构域序列包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 126的氨基酸序列，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案67.一种抗体或其片段，包括重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)所述HC包含选自SEQ ID NO:13、24或26的氨基酸(aa)25至aa 473的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，
(ii)所述LC包含选自SEQ ID NO:14或25的aa 21至aa 239、SEQ ID NO:27的aa 21至aa 233的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案68.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述抗体包括重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)所述HC包含SEQ ID NO:24的aa 25至aa 473的序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，
(ii)所述LC包含SEQ ID NO:25的aa 21至aa 239的序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案69.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述抗体包括重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)所述HC包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 473的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，
(ii)所述LC包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 239、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 233的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案70.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:1的aa25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 239、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案71.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:2的aa25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 239、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案72.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:3的aa25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 239、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案73.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:4的aa25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 239、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案74.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:5的aa25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 239、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案75.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:6的aa25至aa 473的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 21至aa 239、SEQ ID NO:10-12或27的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案76.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案77.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案78.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案79.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案80.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案81.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案82.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:1的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案83.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:1的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案84.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:1的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案85.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:2的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案86.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:2的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案87.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:2的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案88.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:3的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:7的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案89.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:3的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案90.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:3的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:9的aa 21至aa 239的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案91.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:4的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案92.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:4的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案93.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:4的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案94.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:5的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案95.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:5的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案96.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:5的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案97.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:6的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:10的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案98.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:6的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:11的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案99.根据实施方案67的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:6的aa25至aa 473的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或所述LC包含SEQ ID NO:12的aa 21至aa 233的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案100.一种抗体或其片段，包括重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)所述HC包含选自SEQ ID NO:13、24或26的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，
(ii)所述LC包含选自SEQ ID NO:14、25或27的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案101.根据实施方案100的抗体或其片段，所述抗体包括重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)所述HC包含SEQ ID NO:24的序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，
(ii)所述LC包含SEQ ID NO:25的序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案102.根据实施方案100的抗体或其片段，所述抗体包括重链(HC)和/或轻链(LC)，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)所述HC包含选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，
(ii)所述LC包含选自SEQ ID NO:7-12、14、25或27的序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案103.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含选自SEQID NO:7-12、14、25或27的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案104.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含选自SEQID NO:7-12、14、25或27的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案105.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含选自SEQID NO:7-12、14、25或27的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案106.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含选自SEQID NO:7-12、14、25或27的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案107.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含选自SEQID NO:7-12、14、25或27的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案108.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含选自SEQID NO:7-12、14、25或27的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案109.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含选自SEQ IDNO:1-6、13、24或26的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案110.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含选自SEQ IDNO:1-6、13、24或26的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案111.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含选自SEQ IDNO:1-6、13、24或26的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案112.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含选自SEQ IDNO:1-6、13、24或26的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案113.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含选自SEQ IDNO:1-6、13、24或26的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案114.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含选自SEQ IDNO:1-6、13、24或26的氨基酸序列或其每一个的等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案115.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:7的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案116根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:8的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案117.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:9的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案118.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:7的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案119.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:8的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案120.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:9的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案121.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:7的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案122.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:8的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案123.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:9的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案124.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:10的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案125.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:11的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案126.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:12的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案127.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:10的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案128.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:11的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案129.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:12的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案130.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:10的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案131.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:11的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案132.根据实施方案100的抗体或其片段，其中所述HC包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成，和/或其中所述LC包含SEQ IDNO:12的氨基酸序列或其等同体，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案133.一种抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFXXY(SEQ ID NO:13的氨基酸(aa)50至aa 56)、GFTFRTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa50至aa 56)或GFTFSRY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 50至aa 56)，其中X是任何氨基酸或在选自SEQ ID NO:1-6的序列的对齐aa位置处的氨基酸；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：XSXXXX(SEQ ID NO:13的氨基酸(aa)76至aa 81)、GSDRRH(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa76至aa 81)或SSGGSY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 76至aa 81)，其中X是任何氨基酸或在选自SEQ ID NO:1-6的序列的对齐aa位置处的氨基酸；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：XXXXXXXYXXFDX(SEQ ID NO:13的氨基酸(aa)121至aa 133)、VGPYDGYYGEFDY(SEQ IDNO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)或ERHGGDGYWYFDV(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 121至aa 133)，其中X是任何氨基酸或在选自SEQ ID NO:1-6的序列的对齐aa位置处的氨基酸；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QXXXXXXXXXX(SEQ ID NO:14的aa 47至aa 57)、QXXXXX(SEQ ID NO:14的aa 47至aa52)、QSLLDSDGKTF(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 47至aa 57)或QDISNY(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 47至aa 52)，其中X是任何氨基酸或在选自SEQ ID NO:7-12的序列的对齐aa位置处的氨基酸；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：XXS(SEQ ID NO:14的aa 75至aa 77)、LVS(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 75至aa 77)或YTS(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 70至aa 72)，其中X是任何氨基酸或在选自SEQ ID NO:7-12的序列的对齐aa位置处的氨基酸；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：XQGXXXXXT(SEQ ID NO:14的aa 114至aa 122)、WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)或QQGNPLRT(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 109至aa 116)，其中X是任何氨基酸或在选自SEQ ID NO:7-12的序列的对齐aa位置处的氨基酸；
任选地，其中所述抗体或其片段包含轻链和重链，或者实质上由轻链和重链组成，或由轻链和重链组成，进一步任选地，其中所述轻链与SEQ ID NO:7-12、14、25或27或任选地选自其中且序列包含所述抗体或其片段的一个或两个或三个CDR的SEQ ID NO中任何一个或多个的氨基酸序列至少约80％、或至少约85％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％相同，并且进一步任选地，其中所述重链与SEQ ID NO:7-12、14、25或27或任选地选自其中且序列包含所述抗体或其片段的一个或两个或三个CDR的SEQ IDNO中任何一个或多个的氨基酸序列至少约80％、或至少约85％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％相同。
实施方案134.一种抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFRTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 50至aa 56)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GSDRRH(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 76至aa 81)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QSLLDSDGKTF(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 47至aa 57)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：LVS(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 75至aa 77)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFP(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 120)；
任选地，其中所述抗体或其片段包含轻链和重链，或者实质上由轻链和重链组成，或由轻链和重链组成，进一步任选地，其中所述轻链与SEQ ID NO:7-12、14、25或27或任选地选自其中且序列包含所述抗体或其片段的一个或两个或三个CDR的SEQ ID NO中任何一个或多个的氨基酸序列至少约80％、或至少约85％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％相同，并且进一步任选地，其中所述重链与SEQ ID NO:7-12、14、25或27或任选地选自其中且序列包含所述抗体或其片段的一个或两个或三个CDR的SEQ IDNO中任何一个或多个的氨基酸序列至少约80％、或至少约85％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％相同。
实施方案135.根据实施方案133-134的任一个的抗体或其片段，其中CDRH1包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFRTYA(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 50至aa57)。
实施方案136.根据实施方案133-135的任一个的抗体或其片段，其中CDRH1包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：aASGFTFRTYAMS(SEQ ID NO:24的aa 47至aa 59)，其中小写字母a是A(SEQ ID NO:1或2的aa 47至aa 59)或者其中小写字母a是K(SEQ ID NO:3的aa 37至aa 59)。
实施方案137.根据实施方案133-136的任一个的抗体或其片段，其中CDRH2包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：IGSDRRHT(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 75至aa82)。
实施方案138.根据实施方案133-137的任一个的抗体或其片段，其中CDRH2包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：IGSDRRHTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 75至aa83)。
实施方案139.根据实施方案133-138的任一个的抗体或其片段，其中CDRH2包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：TIGSDRRHTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 74至aa 83)。
实施方案140.根据实施方案133-139的任一个的抗体或其片段，其中CDRH2包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WVATIGSDRRHTYYP(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa71至aa 85)。
实施方案141.根据实施方案133-140的任一个的抗体或其片段，其中CDRL1包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：rSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:25的aa 44至aa59)，其中小写字母r是R(SEQ ID NO:7或8的aa 44至aa 59)，或者其中小写字母r是K(SEQID NO:9的aa 44至aa 59)。
实施方案142.根据实施方案133-141的任一个的抗体或其片段，其中CDRL2包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：LVSKlDS(SEQ ID NO:25的aa 75至aa 81)，其中小写字母l是L(SEQ ID NO:7或9的aa 75至aa 81)，或者其中小写字母l是R(SEQ ID NO:8的aa75至aa 81)。
实施方案143.根据实施方案133-142的任一个的抗体或其片段，其中CDRL2包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YLVSKlDS(SEQ ID NO:25的aa 74至aa 81)，其中小写字母l是L(SEQ ID NO:7或9的aa 74至aa 81)，或者其中小写字母l是R(SEQ ID NO:8的aa 74至aa 81)。
实施方案144.根据实施方案133-142的任一个的抗体或其片段，其中CDRL2包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：LVSKlDSG(SEQ ID NO:25的aa 75至aa 82)，其中小写字母l是L(SEQ ID NO:7或9的aa 75至aa 82)，或者其中小写字母l是R(SEQ ID NO:8的aa 75至aa 82)。
实施方案145.根据实施方案133-144的任一个的抗体或其片段，其中CDRL2包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YLVSKlDSGV(SEQ ID NO:25的aa 74至aa 83)，其中小写字母l是L(SEQ ID NO:7或9的aa 74至aa 83)，或者其中小写字母l是R(SEQ ID NO:8的aa 74至aa 83)。
实施方案146.根据实施方案133-145的任一个的抗体或其片段，其中CDRL2包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RLIYLVSKlDSGVPD(SEQ ID NO:25的aa 71至aa85)，其中小写字母l是L(SEQ ID NO:7或9的aa 71至aa 85)，或者其中小写字母l是R(SEQID NO:8的aa 71至aa 85)。
实施方案147.根据实施方案134-146的任一个的抗体或其片段，其中CDRL3包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPY(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa121)。
实施方案148.根据实施方案133-147的任一个的抗体或其片段，其中CDRL3包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。
实施方案149.根据实施方案133或134的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFRTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 50至aa 56)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GSDRRH(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 76至aa 81)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QSLLDSDGKTF(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 47至aa 57)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：LVS(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 75至aa 77)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。
实施方案150.根据实施方案133、134和149中任一个的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFRTYA(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 50至aa 57)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：IGSDRRHT(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 75至aa 82)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QSLLDSDGKTF(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 47至aa 57)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：LVS(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 75至aa 77)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。
实施方案151.根据实施方案133、134和149中任一个的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：aASGFTFRTYAMS(SEQ ID NO:24的aa 47至aa 59)，其中小写字母a是A(SEQ ID NO:1或2的aa47至aa 59)，或者其中小写字母a是K(SEQ ID NO:3的aa 37至aa 59)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：TIGSDRRHTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 74至aa 83)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：rSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:25的aa 44至aa 59)，其中小写字母r是R(SEQ ID NO:7或8的aa 44至aa 59)，或者其中小写字母r是K(SEQ ID NO:9的aa 44至aa 59)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YLVSKlDS(SEQ ID NO:25的aa 74至aa 81)，其中小写字母l是L(SEQ ID NO:7或9的aa 74至aa 81)，或者其中小写字母l是R(SEQ ID NO:8的aa 74至aa 81)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。
实施方案152.根据实施方案133、134、149和151中任一个的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：AASGFTFRTYAMS(SEQ ID NO:1或2的aa 47至aa 59)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：TIGSDRRHTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 74至aa 83)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:7的aa 44至aa 59)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YLVSKLDS(SEQ ID NO:7的aa 74至aa 81)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。
实施方案153.根据实施方案133、134、149和151中任一个的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：AASGFTFRTYAMS(SEQ ID NO:1或2的aa 47至aa 59)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：TIGSDRRHTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 74至aa 83)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:8的aa 44至aa 59)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YLVSKRDS(SEQ ID NO:8的aa 74至aa 81)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。
实施方案154.根据实施方案133、134、149和151中任一个的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：AASGFTFRTYAMS(SEQ ID NO:1或2的aa 47至aa 59)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：TIGSDRRHTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 74至aa 83)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：KSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:9的aa 44至aa 59)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YLVSKLDS(SEQ ID NO:9的aa 74至aa 81)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。
实施方案155.根据实施方案133、134、149和151中任一个的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：KASGFTFRTYAMS(SEQ ID NO:3的aa 47至aa 59)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：TIGSDRRHTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 74至aa 83)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:7的aa 44至aa 59)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YLVSKLDS(SEQ ID NO:7的aa 74至aa 81)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。
实施方案156.根据实施方案133、134、149和151中任一个的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：KASGFTFRTYAMS(SEQ ID NO:3的aa 47至aa 59)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：TIGSDRRHTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 74至aa 83)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:8的aa 44至aa 59)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YLVSKRDS(SEQ ID NO:8的aa 74至aa 81)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。
实施方案157.根据实施方案133、134、149和151中任一个的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：KASGFTFRTYAMS(SEQ ID NO:3的aa 47至aa 59)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：TIGSDRRHTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 74至aa 83)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：KSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:9的aa 44至aa 59)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YLVSKLDS(SEQ ID NO:9的aa 74至aa 81)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。
实施方案158.根据实施方案133、134或149中任一个的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFRTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 50至aa 56)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GSDRRH(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 76至aa 81)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：rSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:25的aa 44至aa 59)，其中小写字母r是
R(SEQ ID NO:7或8的aa 44至aa 59)，或者其中小写字母r是K(SEQ ID NO:9的aa44至aa 59)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：LVSKlDS(SEQ ID NO:25的aa 75至aa 81)，其中小写字母l是L(SEQ ID NO:7或9的aa 75至aa 81)，或者其中小写字母l是R(SEQ ID NO:8的aa 75至aa 81)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。
实施方案159.根据实施方案133、134、149或158中任一个的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFRTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 50至aa 56)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GSDRRH(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 76至aa 81)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:7的aa 44至aa 59)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：LVSKLDS(SEQ ID NO:7的aa 75至aa 81)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。
实施方案160.根据实施方案133、134、149或158中任一个的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFRTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 50至aa 56)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GSDRRH(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 76至aa 81)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:8的aa 44至aa 59)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：LVSKRDS(SEQ ID NO:8的aa 75至aa 81)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。
实施方案161.根据实施方案133、134、149或158中任一个的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFRTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 50至aa 56)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GSDRRH(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 76至aa 81)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：KSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:9的aa 44至aa 59)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：LVSKLDS(SEQ ID NO:9的aa 75至aa 81)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。
实施方案162.根据实施方案133或134的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFRTYA(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 50至aa 57)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：IGSDRRHT(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 75至aa 82)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QSLLDSDGKTF(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 47至aa 57)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：LVS(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 75至aa 77)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：WQGTHFP(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 120)。
实施方案163.一种抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFSRY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 50至aa 56)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：SSGGSY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 76至aa 81)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：ER(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 121至aa 122)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QDISNY(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 47至aa 52)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YTS(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 70至aa 72)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QQ(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 109至aa 110)；
任选地，其中所述抗体或其片段包含轻链和重链，或者实质上由轻链和重链组成，或由轻链和重链组成，进一步任选地，其中所述轻链与SEQ ID NO:7-12、14、25或27或任选地选自其中且序列包含所述抗体或其片段的一个或两个或三个CDR的SEQ ID NO中任何一个或多个的氨基酸序列至少约80％、或至少约85％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％相同，并且进一步任选地，其中所述重链与SEQ ID NO:7-12、14、25或27或任选地选自其中且序列包含所述抗体或其片段的一个或两个或三个CDR的SEQ IDNO中任何一个或多个的氨基酸序列至少约80％、或至少约85％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％相同。
实施方案164.根据实施方案133或163的抗体或其片段，其中CDRH1包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFSRYG(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 50至aa 57)。
实施方案165.根据实施方案133或163-164任一项的抗体或其片段，其中CDRH1包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：aASGFTFSRYGMS(SEQ ID NO:26的aa 47至aa59)，其中小写字母a是A(SEQ ID NO:4或5的aa 47至aa 57)，或者其中小写字母a是T(SEQID NO:6的aa 47至aa 57)。
实施方案166.根据实施方案133或163-165任一项的抗体或其片段，其中
CDRH2包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：ISSGGSYT(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 75至aa 82)。
实施方案167.根据实施方案133或163-166任一项的抗体或其片段，其中CDRH2包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：TISSGGSYTY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa74至aa 83)。
实施方案168.根据实施方案133或163-167任一项的抗体或其片段，其中CDRH3包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：ERHGGDGYWYFDV(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 121至aa 133)。
实施方案169.根据实施方案133或163-168任一项的抗体或其片段，其中CDRL1包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RASQDISNYLN(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 44至aa 54)。
实施方案170.根据实施方案133或163-169任一项的抗体或其片段，其中
CDRL2包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YTSRLHS(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 70至aa 76)。
实施方案171.根据实施方案133或163-170任一项的抗体或其片段，其中
CDRL2包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YYTSRLHS(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 69至aa 76)。
实施方案172.根据实施方案133或163-171任一项的抗体或其片段，其中
CDRL3包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QQGNPLRT(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 109至aa 116)。
实施方案173.根据实施方案133或163的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFSRY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 50至aa 56)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：SSGGSY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 76至aa 81)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：ERHGGDGYWYFDV(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QDISNY(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 47至aa 52)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YTS(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 70至aa 72)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QQGNPLRT(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 109至aa 116)。
实施方案174.根据实施方案133、163或173中任一项的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFSRYG(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 50至aa 57)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：ISSGGSYT(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 75至aa 82)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：ERHGGDGYWYFDV(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QDISNY(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 47至aa 52)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YTS(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 70至aa 72)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QQGNPLRT(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 109至aa 116)。
实施方案175.根据实施方案133、163或173中任一项的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：aASGFTFSRYGMS(SEQ ID NO:26的aa 47至aa 59)，其中小写字母a是A(SEQ ID NO:4或5的aa47至aa 57)，或者其中小写字母a是T(SEQ ID NO:6的aa 47至aa 57)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：TISSGGSYTY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 74至aa 83)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：ERHGGDGYWYFDV(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RASQDISNYLN(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 44至aa 54)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YYTSRLHS(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 69至aa 76)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QQGNPLRT(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 109至aa 116)。
实施方案176.根据实施方案133、163、173或175中任一项的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：AASGFTFSRYGMS(SEQ ID NO:4或5的aa 47至aa 57)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：TISSGGSYTY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 74至aa 83)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：ERHGGDGYWYFDV(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RASQDISNYLN(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 44至aa 54)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YYTSRLHS(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 69至aa 76)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QQGNPLRT(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 109至aa 116)。
实施方案177.根据实施方案133、163、173或175中任一项的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：TASGFTFSRYGMS(SEQ ID NO:6的aa 47至aa 57)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：TISSGGSYTY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 74至aa 83)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：ERHGGDGYWYFDV(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RASQDISNYLN(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 44至aa 54)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YYTSRLHS(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 69至aa 76)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QQGNPLRT(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 109至aa 116)。
实施方案178.根据实施方案133、163或173中任一项的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFSRY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 50至aa 56)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：SSGGSY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 76至aa 81)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：ERHGGDGYWYFDV(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 121至aa 133)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RASQDISNYLN(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 44至aa 54)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YTSRLHS(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 70至aa 76)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QQGNPLRT(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 109至aa 116)。
实施方案179.根据实施方案133或163中任一项的抗体或其片段，其包含以下(i)至(vi)组分中的一个或两个或三个或四个或五个或全部六个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFSRYG(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 50至aa 56)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：ISSGGSYT(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 75至aa 82)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：ER(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 121至aa 122)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QDISNY(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 47至aa 52)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：YTS(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 70至aa 72)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：QQ(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 109至aa 110)。
实施方案180.根据实施方案1-179任一项的抗体或其片段，其中所述抗体包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)CDR 1-3，其序列选自：SEQ ID NO:1-6、13、24或26或其每一个的等同体；和/或
(ii)CDR 1-3，其序列选自：SEQ ID NO:7-12、14、25或27或其每一个的等同体。
实施方案181.根据实施方案1-180任一项的抗体或其片段，其中所述抗体包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)CDR 1-3，其序列选自：SEQ ID NO:1-6、13、24或26；和/或
(ii)CDR 1-3，其序列选自：SEQ ID NO:7-12、14、25或27。
实施方案182.一种抗体或其片段，其包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)CDR 1-3，其序列选自：SEQ ID NO:1-6、13、24或26或其每一个的等同体；和/或
(ii)CDR 1-3，其序列选自：SEQ ID NO:7-12、14、25或27或其每一个的等同体，
任选地，其中所述抗体或其片段包含轻链和重链，或者实质上由轻链和重链组成，或由轻链和重链组成，进一步任选地，其中所述轻链与SEQ ID NO:7-12、14、25或27或任选地选自其中且序列包含所述抗体或其片段的一个或两个或三个CDR的SEQ ID NO中任何一个或多个的氨基酸序列至少约80％、或至少约85％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％相同，并且进一步任选地，其中所述重链与SEQ ID NO:7-12、14、25或27或任选地选自其中且序列包含所述抗体或其片段的一个或两个或三个CDR的SEQ IDNO中任何一个或多个的氨基酸序列至少约80％、或至少约85％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％相同。
实施方案183.根据实施方案1-182任一项的抗体或其片段，其中所述抗体选自双特异性抗体、三特异性抗体、四特异性抗体或五特异性抗体。
实施方案184.根据实施方案1-183任一项的抗体或其片段，其中所述抗体选自IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗体。
实施方案185.根据实施方案1-184任一项的抗体或其片段，其中所述抗体进一步包含恒定区，所述恒定区选自IgA恒定区、IgD恒定区、IgE恒定区、IgG恒定区或IgM恒定区。
实施方案186.根据实施方案185所述的抗体或其片段，其中所述恒定区是IgG1恒定区。
实施方案187.根据实施方案1-185任一项的抗体或其片段，其中所述抗体进一步包含SEQ ID NO:1-6、13、24或26的重链(HC)恒定区和/或SEQ ID NO:7-12、14、25或27的轻链(LC)恒定区。
实施方案188.根据实施方案187所述的抗体或其片段，其中所述HC恒定区包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：SEQ ID NO:1-6、13、24或26的恒定区(任选地为选自SEQ ID NO:1-6、13、24或26的aa 145至aa 473的序列)，或者其中所述HC恒定区包含SEQID NO:15-22的任一个的恒定区，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案189.根据实施方案187或188所述的抗体或其片段，其中所述LC恒定区包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：SEQ ID NO:7-12或27的恒定区(任选地为选自SEQ ID NO:7-9、14或25的aa 133至aa 239和/或SEQ ID NO:10-12或27的aa 127至aa233的序列)，或者其中所述LC恒定区包含SEQ ID NO:23的恒定区，或实质上由其组成，或由其组成。
实施方案190.一种抗体或其片段，其与实施方案1-189任一项所述的抗体或其片段竞争结合至表位。
实施方案191.一种抗体或其片段，其与实施方案1-24、34-57、67-90、100-123、133-162和180-189任一项所述的抗体或其片段竞争结合至头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI。
实施方案192.根据实施方案191所述的抗体或其片段，其中头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RPGRNPX1TGDVVPVSARRVV-X-FSLHHRQPRLGRNPX1TGDSV(SEQ ID NO:38)，其中“X”是任选的氨基酸接头序列，所述氨基酸接头序列任选地包含1至20个氨基酸，或实质上由1至20个氨基酸组成，或由1至20个氨基酸组成，并且其中“X1”是任何氨基酸，或者“X1”选自氨基酸Q、R、K、S或T。
实施方案193.根据实施方案191或192所述的抗体或其片段，其中头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RPGRNPKTGDVVPVSARRVV-X-FSLHHRQPRLGRNPKTGDSV(SEQ ID NO:39)，其中“X”是任选的氨基酸接头序列，所述氨基酸接头序列任选地包含1至20个氨基酸，或实质上由1至20个氨基酸组成，或由1至20个氨基酸组成。
实施方案194.根据实施方案191-193任一项所述的抗体或其片段，其中头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：RPGRNPKTGDVVPVSARRVVGPSLFSLHHRQPRLGRNPKTGDSV(SEQ ID NO:40)。
实施方案195.一种抗体或其片段，其与实施方案1、3-15、25-34、36-47、58-67、69-81、91-100、102-114、124-133和163-189中任一项所述的抗体或其片段竞争结合至尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI。
实施方案196.根据实施方案195所述的抗体或其片段，其中尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：FLEEIRLSLESGQDVKLSGF-X-TLSAKEIENMVKDILEFISQ(SEQ ID NO:41)，其中“X”是任选的氨基酸接头序列，所述氨基酸接头序列任选地包含1至20个氨基酸，或实质上由1至20个氨基酸组成，或由1至20个氨基酸组成，和/或其中所述尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI包含以下序列，或实质上由其组成，或由其组成：FLEEIRLSLESGQDVKLSGFGPSLTLSAKEIENMVKDILEFISQ(SEQ ID NO:50)。
实施方案197.根据实施方案192、193或196的任一项所述的抗体或其片段，其中所述氨基酸接头选自：GGSGGS(SEQ ID NO:42)、GPSLKL(SEQ ID NO:43)、GGG(SEQ ID NO:44)、GPSL(SEQ ID NO:45)、GPS(SEQ ID NO:46)、PSLK(SEQ ID NO:47)、GPSLK(SEQ ID NO:48)或SLKL(SEQ ID NO:49)。
实施方案198.根据实施方案190-197中任一项所述的抗体或其片段，其中所述抗体是多克隆抗体、单克隆抗体或人源化抗体。
实施方案199.实施方案1-198任一项所述的抗体的抗原结合片段。
实施方案200.根据实施方案199所述的抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab、F(ab’)2、Fab’、scFv或Fv。
实施方案201.根据实施方案1-33、67-132或180-198任一项所述的抗体或其片段，或根据实施方案199或200所述的抗原结合片段，其中氨基酸序列的等同体包含与该氨基酸序列具有至少80％氨基酸同一性的多肽，和/或其中氨基酸序列的等同体包含由在高度严格条件下与编码该氨基酸序列的多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸编码的多肽。
实施方案202.根据实施方案1-33、67-132或180-198任一项所述的抗体或其片段，或根据实施方案199或200所述的抗原结合片段，其中氨基酸序列的等同体包含与该氨基酸序列具有至少90％氨基酸同一性的多肽，和/或其中氨基酸序列的等同体包含由在高度严格条件下与编码该氨基酸序列的多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸编码的多肽。
实施方案203.根据实施方案1-33、67-132或180-198任一项所述的抗体或其片段，或根据实施方案199或200所述的抗原结合片段，其中氨基酸序列的等同体包含与该氨基酸序列具有至少95％氨基酸同一性的多肽，和/或其中氨基酸序列的等同体包含由在高度严格条件下与编码该氨基酸序列的多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸编码的多肽。
实施方案204.根据实施方案1-33、67-132或180-198任一项所述的抗体或其片段，或根据实施方案199或200所述的抗原结合片段，其中氨基酸序列的等同体包含与该氨基酸序列具有至少96％氨基酸同一性的多肽，和/或其中氨基酸序列的等同体包含由在高度严格条件下与编码该氨基酸序列的多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸编码的多肽。
实施方案205.根据实施方案1-33、67-132或180-198任一项所述的抗体或其片段，或根据实施方案199或200所述的抗原结合片段，其中氨基酸序列的等同体包含与该氨基酸序列具有至少97％氨基酸同一性的多肽，和/或其中氨基酸序列的等同体包含由在高度严格条件下与编码该氨基酸序列的多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸编码的多肽。
实施方案206.根据实施方案1-33、67-132或180-198任一项所述的抗体或其片段，或根据实施方案199或200所述的抗原结合片段，其中氨基酸序列的等同体包含与该氨基酸序列具有至少98％氨基酸同一性的多肽，和/或其中氨基酸序列的等同体包含由在高度严格条件下与编码该氨基酸序列的多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸编码的多肽。
实施方案207.根据实施方案1-33、67-132或180-198任一项所述的抗体或其片段，或根据实施方案199或200所述的抗原结合片段，其中氨基酸序列的等同体包含与该氨基酸序列具有至少99％氨基酸同一性的多肽，和/或其中氨基酸序列的等同体包含由在高度严格条件下与编码该氨基酸序列的多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸编码的多肽。
实施方案208.根据实施方案1-198和201-207任一项所述的抗体或其片段，或根据实施方案199-207任一项所述的抗原结合片段，其中所述抗体或其片段被修饰，并且任选地，其中所述修饰选自PEG化、PEG模拟物、聚唾液酸化、HES化或糖基化。
实施方案209.根据实施方案1-198和201-208任一项所述的抗体或其片段，或根据实施方案199-208任一项所述的抗原结合片段，其进一步包含可检测标记物或纯化标记物。
实施方案210.实施方案1-198和201-209任一项所述的抗体或其片段的互补决定区(CDR)，或实施方案199-209任一项所述的抗原结合片段的互补决定区(CDR)。
实施方案211.根据实施方案210的CDR，其中CDR选自CDR1、CDR2或CDR3。
实施方案212.互补决定区(CDR)，其包含以下序列中的任何一个或多个，或实质上由其组成，或由其组成：
(i)互补决定区(CDR)重链互补决定区1(CDRH1)，其包含选自以下的序列，或实质上由其组成，或由其组成：GFTFXXY(SEQ ID NO:13的氨基酸(aa)50至aa 56)、GFTFRTY(SEQID NO:1或2或3或24的aa 50至aa 56)或GFTFSRY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 50至aa56)，其中X是任何氨基酸或在选自SEQ ID NO:1-6的序列的对齐aa位置处的氨基酸；GFTFRTYA(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 50至aa 57)；aASGFTFRTYAMS(SEQ ID NO:24的aa47至aa 59)，其中小写字母a是A(SEQ ID NO:1或2的aa 47至aa 59)或其中小写字母a是K(SEQ ID NO:3的aa 47至aa 59)；GFTFSRYG(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 50至aa 57)；或aASGFTFSRYGMS(SEQ ID NO:26的aa 47至aa 59)，其中小写字母a是A(SEQ ID NO:4或5的aa47至aa 57)或其中小写字母a是T(SEQ ID NO:6的aa 47至aa 57)；
(ii)重链互补决定区2(CDRH2)，其包含选自以下的序列，或实质上由其组成，或由其组成：XSXXXX(SEQ ID NO:13的氨基酸(aa)76至aa 81)、GSDRRH(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 76至aa 81)或SSGGSY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 76至aa 81)，其中X是任何氨基酸或在选自SEQ ID NO:1-6的序列的对齐aa位置处的氨基酸；IGSDRRHT(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 75至aa 82)；IGSDRRHTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 75至aa 83)；TIGSDRRHTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 74至aa 83)；WVATIGSDRRHTYYP(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 71至aa 85)；ISSGGSYT(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 75至aa 82)；TISSGGSYTY(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 74至aa 83)；
(iii)重链互补决定区3(CDRH3)，其包含选自以下的序列，或实质上由其组成，或由其组成：XXXXXXXYXXFDX(SEQ ID NO:13的氨基酸(aa)121至aa 133)、VGPYDGYYGEFDY(SEQID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)或ERHGGDGYWYFDV(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa121至aa 133)，其中X是任何氨基酸或在选自SEQ ID NO:1-6的序列的对齐aa位置处的氨基酸；VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；或ER(SEQ ID NO:4或5或6或26的aa 121至aa 122)；
(iv)轻链互补决定区1(CDRL1)，其包含选自以下的序列，或实质上由其组成，或由其组成：QXXXXXXXXXX(SEQ ID NO:14的aa 47至aa 57)、QXXXXX(SEQ ID NO:14的aa 47至aa52)、QSLLDSDGKTF(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 47至aa 57)或QDISNY(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 47至aa 52)，其中X是任何氨基酸或在选自SEQ ID NO:7-12的序列的对齐aa位置处的氨基酸；rSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:25的aa 44至aa 59)，其中小写字母r是R(SEQ ID NO:7或8的aa 44至aa 59)或其中小写字母r是K(SEQ ID NO:9的aa 44至aa 59)；或RASQDISNYLN(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 44至aa 54)；
(v)轻链互补决定区2(CDRL2)，其包含选自以下的序列，或实质上由其组成，或由其组成：XXS(SEQ ID NO:14的aa 75至aa 77)、LVS(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 75至aa77)或YTS(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 70至aa 72)，其中X是任何氨基酸或在选自SEQID NO:7-12的序列的对齐aa位置处的氨基酸；
LVSKlDS(SEQ ID NO:25的aa 75至aa 81)，其中小写字母l是L(SEQ ID NO:7或9的aa 75至aa 81)或其中小写字母l是R(SEQ ID NO:8的aa 75至aa 81)；YLVSKlDS(SEQ IDNO:25的aa 74至aa 81)，其中小写字母l是L(SEQ ID NO:7或9的aa 74至aa 81)或其中小写字母l是R(SEQ ID NO:8的aa 74至aa 81)；LVSKlDSG(SEQ ID NO:25的aa 75至aa 82)，其中小写字母l是L(SEQ ID NO:7或9的aa 75至aa 82)或其中小写字母l是R(SEQ ID NO:8的aa75至aa 82)；YLVSKlDSGV(SEQ ID NO:25的aa 74至aa 83)，其中小写字母l是L(SEQ ID NO:7或9的aa 74至aa 83)或其中小写字母l是R(SEQ ID NO:8的aa 74至aa 83)；RLIYLVSKlDSGVPD(SEQ ID NO:25的aa 71至aa 85)，其中小写字母l是L(SEQ ID NO:7或9的aa 71至aa 85)或其中小写字母l是R(SEQ ID NO:8的aa 71至aa 85)；YTSRLHS(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 70至aa 76)；或YYTSRLHS(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 69至aa76)；和
(vi)轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含选自以下的序列，或实质上由其组成，或由其组成：XQGXXXXXT(SEQ ID NO:14的aa 114至aa 122)、WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)或QQGNPLRT(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa 109至aa 116)，其中X是任何氨基酸或在选自SEQ ID NO:7-12的序列的对齐aa位置处的氨基酸；WQGTHFP(SEQ IDNO:7或8或9或25的aa 114至aa 120)；WQGTHFPY(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa121)；WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)；QQ(SEQ ID NO:10或11或12或27的aa109至aa 110)。
实施方案213.一种分离的多肽，其包含选自SEQ ID NO:1-14或24-27的氨基酸序列或其每一个的等同体。
实施方案214.根据实施方案213的分离的多肽，其中所述多肽进一步包含可检测标记物或纯化标记物。
实施方案215.一种分离的多核苷酸，其编码根据实施方案1-198和201-209任一项所述的抗体或其片段、根据实施方案199-209任一项所述的抗原结合片段、根据实施方案210-212任一项所述的CDR、根据实施方案213或214所述的分离的多肽或其每一个的等同体，并且任选地被可操作地连接至启动子和增强子元件。
实施方案216.根据实施方案215的分离的多核苷酸，其进一步包含位于所述可变区、链或CDR的上游的信号肽编码多核苷酸序列。
实施方案217.根据实施方案1-198和201-209任一项所述的抗体或其片段、根据实施方案199-209任一项所述的抗原结合片段、根据实施方案210-212任一项所述的CDR以及根据实施方案213或214所述的分离的多肽，其进一步包含位于所述可变区、链或CDR的上游的信号肽。
实施方案218.一种包含实施方案215或216的分离的多核苷酸的载体。
实施方案219.根据实施方案218所述的载体，其中所述载体是质粒载体或病毒载体。
实施方案220.根据实施方案219所述的载体，其中所述病毒载体选自逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体和腺相关病毒载体。
实施方案221.一种包含实施方案215或216的分离的多核苷酸或实施方案218-220任一项所述的载体的宿主细胞。
实施方案222.一种组合物，其包含赋形剂和以下成分中的一种或多种：根据实施方案1-198、201-209和217中任一项所述的抗体或其片段、根据实施方案199-209和217中任一项所述的抗原结合片段、根据实施方案210-212和217中任一项所述的CDR、根据实施方案213或214所述的分离的多肽、根据实施方案215或216所述的分离的多核苷酸、根据实施方案218-220任一项所述的载体或根据实施方案221所述的宿主细胞。
实施方案223.一种制备根据实施方案1-198、201-209和217中任一项所述的抗体或其片段的方法，所述方法包括在表达抗体或片段的条件下培养包含编码所述抗体或片段的多核苷酸的宿主细胞，并任选地分离所述抗体或其片段。
实施方案224.根据实施方案223所述的方法，其中宿主细胞是哺乳动物细胞。
实施方案225.一种用于抑制或竞争DNABII多肽或蛋白质与微生物DNA结合的方法，包括使DNABII多肽或蛋白质与实施方案1-24、34-57、67-90、100-123、133-162和180-198、201-209和217中任一项的抗体或其片段接触，其中所述抗体或其片段结合DNABII肽的头部区域。
实施方案226.一种破坏生物膜的方法，包括使生物膜与实施方案1-24、34-57、67-90、100-123、133-162和180-198、201-209和217中任一项的抗体或其片段接触，其中所述抗体或其片段结合DNABII肽的头部区域。
实施方案227.一种防止在表面上形成生物膜或破坏表面的生物膜的方法，包括使用实施方案1-24、34-57、67-90、100-123、133-162和180-198、201-209和217中任一项的抗体或其片段处理易受生物膜影响或含有生物膜的表面，其中所述抗体或其片段结合DNABII肽的头部区域。
实施方案228.一种预防或破坏对象体内生物膜的方法，包括向对象施用实施方案1-24、34-57、67-90、100-123、133-162和180-198、201-209和217中任一项的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段结合DNABII肽的头部区域。
实施方案229.一种用于抑制、预防或治疗在对象中产生生物膜的微生物感染的方法，包括向对象施用实施方案1-24、34-57、67-90、100-123、133-162和180-198、201-209和217中任一项的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段结合DNABII肽的头部区域。
实施方案230.一种治疗以在对象体内形成生物膜为特征的病症的方法，包括向对象施用实施方案1-24、34-57、67-90、100-123、133-162和180-198、201-209和217中任一项的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段结合DNABII肽的头部区域。
实施方案231.根据实施方案228至230任一项所述的方法，其中所述抗体或其片段在对象中降低一种或多种促炎细胞因子并升高一种或多种抗炎细胞因子。
实施方案232.根据实施方案230或231所述的方法，其中所述病症选自：慢性不愈合伤口、伯克霍尔德氏菌、静脉溃疡、糖尿病足溃疡、耳部感染、鼻窦感染、尿路感染、胃肠道疾病、肺部感染、呼吸道感染、囊性纤维化、慢性阻塞性肺病、导管相关感染、留置装置相关感染、植入假体相关感染、骨髓炎、蜂窝组织炎、脓肿和牙周病。
实施方案233.根据实施方案225至232任一项所述的方法，所述方法进一步包括通过使结合DNABII多肽的抗体或所述抗体的抗原结合片段与怀疑含有生物膜的样品接触并检测生物膜与抗体或其片段的结合来检测生物膜。
实施方案234.一种检测对象体内生物膜的方法，所述方法包括向对象施用实施方案1-198、201-209和217中任一项的抗体或其片段，并检测所述抗体或片段与生物膜的结合。
实施方案235.一种用于检测在对象中产生生物膜的微生物感染的方法，所述方法包括将实施方案1-198、201-209和217中任一项的抗体或其片段与怀疑包含所述生物膜并从所述对象分离的生物样品接触，并检测所述抗体或其片段与样品中任何生物膜的结合。
实施方案236.一种筛选具有生物膜的对象的方法，包括将实施方案1-198、201-209和217中任一项的抗体或其片段与包含生物膜并从所述对象分离的生物样品接触，并检测所述抗体或其片段与所述样品中任何生物膜的结合。
实施方案237.一种在对象中赋予被动免疫的方法，包括向对象施用实施方案1-24、34-57、67-90、100-123、133-162和180-198、201-209和217中任一项的结合DNABII肽的头部区域的抗体或其片段。
实施方案238.根据实施方案225-237中任一项所述的方法，其中所述生物膜来源于革兰氏阴性或革兰氏阳性产生物膜菌。
实施方案239.根据实施方案225-238中任一项所述的方法，其中所述生物膜包含DNABII蛋白。
实施方案240.根据实施方案239所述的方法，其中所述生物膜包含来自大肠杆菌菌株U93的组蛋白样蛋白(HU)或整合宿主因子(IHF)结合蛋白。
实施方案241.一种制备干扰核酸的方法，包括制备由约10-20个核苷酸组成的核酸，并且任选地分离所制备的干扰核酸，其中所述核酸特异性结合实施方案1-198、201-209和217中任一项的抗体或其片段的结合伴侣。
实施方案242.一种使用实施方案1-198、201-209和217中任一项的抗体或其片段包被的非生理表面；并且任选地，其中所述表面处于工业环境中。
实施方案243.一种获得有效破坏生物膜的抗血清的方法，包括用小分子免疫对象并从所述对象回收抗血清，以及任选地从对象中分离多克隆抗血清或单克隆抗体。
实施方案244.实施方案1-24、34-57、67-90、100-123、133-162和180-198、201-209和217中任一项的抗体片段，其中所述片段选自Fab、F(ab')2、Fab'、scFv或Fv，并且其中抗体片段特异性结合DNABII肽的头部区域。
实施方案245.根据实施方案244的抗体或其片段或根据实施方案225-230和70-74的任一项的方法，其中DNABII肽是IHF肽。
实施方案246.一种组合物，其包含实施方案244或245所述的抗体片段以及药学上可接受的载体。
实施方案247.一种使用实施方案244或245所述的抗体片段包被的非生理表面；并且任选地，其中所述表面处于工业环境中。
实施方案248.一种试剂盒，其包含以下成分中的一种或多种：实施方案1-198、201-209、217、244和245中任一项的抗体或其片段、实施方案199-209中任一项的抗原结合片段、实施方案210-212和217中任一项的CDR、实施方案213或214的分离多肽、实施方案215或216的多核苷酸、实施方案218-220中任一项的载体、实施方案221的宿主细胞、或实施方案222或246的组合物；并且任选地包括使用说明。
序列表
SEQ ID NO:1(H10210(1F8.F1人源化HC1))
粗体表示示例性可变区，而粗斜体且加下划线表示示例性CDR。
SEQ ID NO:2(H10211(1F8.F1人源化HC2))
粗体表示示例性可变区，而粗斜体且加下划线表示示例性CDR。
SEQ ID NO:3(H10212(1F8.F1人源化HC3))
粗体表示示例性可变区，而粗斜体且加下划线表示示例性CDR。
SEQ ID NO:4(H10213(11E7.C7人源化HC1))
粗体表示示例性可变区，而粗斜体且加下划线表示示例性CDR。
SEQ ID NO:5(H10214(11E7.C7人源化HC2))
粗体表示示例性可变区，而粗斜体且加下划线表示示例性CDR。
SEQ ID NO:6(H10215(11E7.C7人源化HC3))
粗体表示示例性可变区，而粗斜体且加下划线表示示例性CDR。
SEQ ID NO:7(L10210(1F8.F1人源化LC1))
粗体表示示例性可变区，而粗斜体且加下划线表示示例性CDR。
SEQ ID NO:8(L10211(1F8.F1人源化LC2))
粗体表示示例性可变区，而粗斜体且加下划线表示示例性CDR。
SEQ ID NO:9(L10212(1F8.F1人源化LC3))
粗体表示示例性可变区，而粗斜体且加下划线表示示例性CDR。
SEQ ID NO:10(L10213(11E7.C7人源化LC1))
粗体表示示例性可变区，而粗斜体且加下划线表示示例性CDR。
SEQ ID NO:11(L10214(11E7.C7人源化LC2))
粗体表示示例性可变区，而粗斜体且加下划线表示示例性CDR。
SEQ ID NO:12(L10215(11E7.C7人源化LC3))
粗体表示示例性可变区，而粗斜体且加下划线表示示例性CDR。
SEQ ID NO:13(重链共有序列)
MDPKGSLSWR ILLFLSLAFE LSYGEVqLVe SGgglvXPGg SlrlSCaASG 50
FTFXXYXMSW VRQAPGkgLE WVaTIXSXXX XTYYXDsvkG RfTIsRDNaK 100
NtLYlqmnSL raEDTAVYYC XXXXXXXYXX FDXWGQGTXV TVSSASTKGP 150
SVFPLAPSSK STSGGTAALG CLVKDYFPEP VTVSWNSGAL TSGVHTFPAV 200
LQSSGLYSLS SVVTVPSSSL GTQTYICNVN HKPSNTKVDK KVEPKSCDKT 250
HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV 300
KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV 350
SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SREEMTKNQV SLTCLVKGFY 400
PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF 450
SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPG**475
其中X和小写字母可以被任何氨基酸取代，或者被选自SEQ ID NO:1-6的在相应位置的氨基酸取代。在一个实施方案中，X也可以表示不存在氨基酸残基。
SEQ ID NO:14(轻链共有序列)
METDTLLLWV LLLWVPGSTG DXvMTQSPXs LsvslGXrat isCrXSQXXX 50
XXXXXXXLNW XQQkPGqaXX XLIYXXSXlX SGvPdRFSGS GSGTDXTLtI 100
SslXXEDXav YyCXQGXXXX XTFGXGTKXE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL 150
KSGTASVVCL LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL 200
SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC*240
其中X和小写字母可以被任何氨基酸取代，或者被选自SEQ ID NO:1-6的在相应位置的氨基酸取代。在一个实施方案中，X也可以表示不存在氨基酸残基。
SEQ ID NO:15人IgD恒定区,Uniprot:P01880
APTKAPDVFPIISGCRHPKDNSPVVLACLITGYHPTSVTVTWYMGTQSQPQRTFPEIQRRDSYYMTSSQLSTPLQQWRQGEYKCVVQHTASKSKKEIFRWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRSLWNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSGFSPPNILLMWLEDQREVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRVPAPPSPQPATYTCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDHGPMK
SEQ ID NO:16人IgG1恒定区,Uniprot:P01857
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:17人IgG2恒定区,Uniprot:P01859
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:18人IgG3恒定区,Uniprot:P01860
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYTCNVNHKPSNTKVDKRVELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFKWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:19人IgM恒定区,Uniprot:P01871
GSASAPTLFPLVSCENSPSDTSSVAVGCLAQDFLPDSITLSWKYKNNSDISSTRGFPSVLRGGKYAATSQVLLPSKDVMQGTDEHVVCKVQHPNGNKEKNVPLPVIAELPPKVSVFVPPRDGFFGNPRKSKLICQATGFSPRQIQVSWLREGKQVGSGVTTDQVQAEAKESGPTTYKVTSTLTIKESDWLGQSMFTCRVDHRGLTFQQNASSMCVPDQDTAIRVFAIPPSFASIFLTKSTKLTCLVTDLTTYDSVTISWTRQNGEAVKTHTNISESHPNATFSAVGEASICEDDWNSGERFTCTVTHTDLPSPLKQTISRPKGVALHRPDVYLLPPAREQLNLRESATITCLVTGFSPADVFVQWMQRGQPLSPEKYVTSAPMPEPQAPGRYFAHSILTVSEEEWNTGETYTCVAHEALPNRVTERTVDKSTGKPTLYNVSLVMSDTAGTCY
SEQ ID NO:20人IgG4恒定区,Uniprot:P01861
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:21人IgA1恒定区,Uniprot:P01876
ASPTSPKVFPLSLCSTQPDGNVVIACLVQGFFPQEPLSVTWSESGQGVTARNFPPSQDASGDLYTTSSQLTLPATQCLAGKSVTCHVKHYTNPSQDVTVPCPVPSTPPTPSPSTPPTPSPSCCHPRLSLHRPALEDLLLGSEANLTCTLTGLRDASGVTFTWTPSSGKSAVQGPPERDLCGCYSVSSVLPGCAEPWNHGKTFTCTAAYPESKTPLTATLSKSGNTFRPEVHLLPPPSEELALNELVTLTCLARGFSPKDVLVRWLQGSQELPREKYLTWASRQEPSQGTTTFAVTSILRVAAEDWKKGDTFSCMVGHEALPLAFTQKTIDRLAGKPTHVNVSVVMAEVDGTCY
SEQ ID NO:22人IgA2恒定区,Uniprot:P01877
ASPTSPKVFPLSLDSTPQDGNVVVACLVQGFFPQEPLSVTWSESGQNVTARNFPPSQDASGDLYTTSSQLTLPATQCPDGKSVTCHVKHYTNPSQDVTVPCPVPPPPPCCHPRLSLHRPALEDLLLGSEANLTCTLTGLRDASGATFTWTPSSGKSAVQGPPERDLCGCYSVSSVLPGCAQPWNHGETFTCTAAHPELKTPLTANITKSGNTFRPEVHLLPPPSEELALNELVTLTCLARGFSPKDVLVRWLQGSQELPREKYLTWASRQEPSQGTTTFAVTSILRVAAEDWKKGDTFSCMVGHEALPLAFTQKTIDRMAGKPTHVNVSVVMAEVDGTCY
SEQ ID NO:23人Igκ恒定区,Uniprot:P01834
TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE
QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:24(头部重链共有序列)
MDPKGSLSWR ILLFLSLAFE LSYGEVkLVe SGgglvqPGg SlrlSCaASG 50
FTFRTYAMSW VRQAPGkgLE WVATIGSDRR HTYYPDsvkG RfTIsRDNaK 100
NTLYlqmnSL RaEDTAVYYC VGPYDGYYGE FDYWGQGTLV TVSSASTKGP 150
SVFPLAPSSK STSGGTAALG CLVKDYFPEP VTVSWNSGAL TSGVHTFPAV 200
LQSSGLYSLS SVVTVPSSSL GTQTYICNVN HKPSNTKVDK KVEPKSCDKT 250
HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV 300
KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV 350
SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SREEMTKNQV SLTCLVKGFY 400
PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF 450
SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPG**475
其中小写字母可被选自SEQ ID NO:1-3的相应位置处的氨基酸取代。
SEQ ID NO:25(头部轻链共有序列)
METDTLLLWV LLLWVPGSTG DVVMTQSPlS LpVtLGqpAs IsCrSSQSLL 50
DSDGKTFLNW LQQrPGQsPr RLIYLVSKlD SGVPDRFSGS GSGTDFTLkI 100
SrveAEDVgV YYCWQGTHFP YTFGQGTKLE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL 150
KSGTASVVCL LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL 200
SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC**240
其中小写字母可被选自SEQ ID NO:7-9的相应位置处的氨基酸取代。
SEQ ID NO:26(尾部重链共有序列)
MDPKGSLSWR ILLFLSLAFE LSYGEVQLVE SGGGLVkPGg SLRLSCaASG 50
FTFSRYGMSW VRQAPGKGLE WVaTISSGGS YTYYTDSVKG RFTISRDNAK 100
NsLYLQMNSL raEDTAVYYC ERHGGDGYWY FDVWGQGTMV TVSSASTKGP 150
SVFPLAPSSK STSGGTAALG CLVKDYFPEP VTVSWNSGAL TSGVHTFPAV 200
LQSSGLYSLS SVVTVPSSSL GTQTYICNVN HKPSNTKVDK KVEPKSCDKT 250
HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV 300
KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV 350
SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SREEMTKNQV SLTCLVKGFY 400
PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF 450
SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPG**475
其中小写字母可被选自SEQ ID NO:4-6的相应位置处的氨基酸取代。
SEQ ID NO:27(尾部轻链共有序列)
METDTLLLWV LLLWVPGSTG DIqMTQSPss LSaSvGdRvT itCRASQDIS 50
NYLNWYQQKP GkAVkLLIYY TSRLHSGvPs RFSGSGSGTD YTLTISSLqP 100
EDFAtYfCQQ GNPLRTFGGG TKVEIKRTVA APSVFIFPPS DEQLKSGTAS 150
VVCLLNNFYP REAKVQWKVD NALQSGNSQE SVTEQDSKDS TYSLSSTLTL 200
SKADYEKHKV YACEVTHQGL SSPVTKSFNR GEC*234
其中小写字母可被选自SEQ ID NO:10-12的相应位置处的氨基酸取代。
SEQ ID NO:28(IHF所结合的共有序列)
WATCAANNNNTTR
其中W是A或T，R是嘌呤。
SEQ ID NO.29(E.coli hupA,Genbank登录号:AP_003818,最后登录时间2011年3月21日)
MNKTQLIDVIAEKAELSKTQAKAALESTLAAITESLKEGDAVQLVGFGTFKVNHRAERTGRNPQTGKEIKIAAANVPAFVSGKALKDAVK
SEQ ID NO.30(E.coli hupB,Genbank登录号:AP_001090.1,最后登录时间2011年3月21日)
MNKSQLIDKIAAGADISKAAAGRALDAIIASVTESLKEGDDVALVGFGTFAVKERAARTGRNPQTGKEITIAAAKVPSFRAGKALKDAVN
SEQ ID NO:31(IhfA,A头部片段)
NFELRDKSSRPGRNPKTGDVV
SEQ ID NO:32(IhfB,B头部片段)
SLHHRQPRLGRNPKTGDSVNL
SEQ ID NO:33(肽接头)
Gly-Pro-Ser-Leu-Lys-Leu
SEQ ID NO:34(肽接头)
Gly-Pro-Ser-Leu
SEQ ID NO:35(肽接头)
Pro-Ser-Leu-Lys
SEQ ID NO:36(肽接头)
Gly-Pro-Ser-Leu-Lys
SEQ ID NO:37(肽接头)
Ser-Leu-Lys-Leu
SEQ ID NO:38(头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)
RPGRNPX1TGDVVPVSARRVV-X-FSLHHRQPRLGRNPX1TGDSV
其中“X”是任选的氨基酸接头序列，任选地包含1至20个氨基酸，或实质上由其组成，或由其组成，其中“X1”是任何按实际，或者“X1”选自氨基酸Q、R、K、S或T。
SEQ ID NO:39(头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)
RPGRNPKTGDVVPVSARRVV-X-FSLHHRQPRLGRNPKTGDSV
其中“X”是任选的氨基酸接头序列，任选地包含1至20个氨基酸。
SEQ ID NO:40(头部嵌合肽IhfA5-mIhfB4NTHI)
RPGRNPKTGDVVPVSARRVVGPSLFSLHHRQPRLGRNPKTGDSV
SEQ ID NO:41(尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)
FLEEIRLSLESGQDVKLSGF-X-TLSAKEIENMVKDILEFISQ
SEQ ID NO.42:非限制性示例性接头:GGSGGS
SEQ ID NO.43:非限制性示例性接头:GPSLKL
SEQ ID NO.44:非限制性示例性接头:GGG
SEQ ID NO.45:非限制性示例性接头:GPSL
SEQ ID NO.46:非限制性示例性接头:GPS
SEQ ID NO.47:非限制性示例性接头:PSLK
SEQ ID NO.48:非限制性示例性接头:GPSLK
SEQ ID NO.49:非限制性示例性接头:SLKL
SEQ ID NO:50(尾部嵌合肽IhfA3-IhfB2NTHI)
FLEEIRLSLESGQDVKLSGFGPSLTLSAKEIENMVKDILEFISQ
序列表
<110> 国家儿童医院研究所
<120> 破坏生物膜的抗体组合物
<130> 106887-0860
<140> PCT/US2020/041082
<141> 2020-07-07
<150> 63/033,109
<151> 2020-06-01
<150> 62/871,457
<151> 2019-07-08
<160> 50
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 473
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 1
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly
20 25 30
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
35 40 45
Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala
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His Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
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450 455 460
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 2
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 4
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
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Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
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<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
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<223> 人工序列的描述: 合成多肽
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<223> 人工序列的描述: 合成多肽
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<220>
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 11
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp
35 40 45
Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Val
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn
100 105 110
Pro Leu Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
115 120 125
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
130 135 140
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145 150 155 160
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
165 170 175
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
195 200 205
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
210 215 220
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 12
<211> 233
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 12
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp
35 40 45
Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Val
50 55 60
Arg Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Ile Pro Ala
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn
100 105 110
Pro Leu Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
115 120 125
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
130 135 140
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145 150 155 160
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
165 170 175
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
195 200 205
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
210 215 220
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 13
<211> 473
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> 任意氨基酸, 例如Q或K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> 任意氨基酸, 例如E或Q
<220>
<221> MOD_RES
<222> (33)..(33)
<223> 任意氨基酸, 例如G或A
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> 任意氨基酸, 例如G或E
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(35)
<223> 任意氨基酸, 例如L或V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (36)..(36)
<223> 任意氨基酸, 例如V或K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (37)..(37)
<223> 任意氨基酸, 例如Q或K,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (40)..(40)
<223> 任意氨基酸, 例如R, G或A
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> 任意氨基酸, 例如L或V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (43)..(43)
<223> 任意氨基酸, 例如R或K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (44)..(44)
<223> 任意氨基酸, 例如L或V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (47)..(47)
<223> 任意氨基酸, 例如T, A或K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (54)..(54)
<223> 任意氨基酸, 例如S或R,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (55)..(55)
<223> 任意氨基酸, 例如R或T,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (57)..(57)
<223> 任意氨基酸, 例如G或A,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (67)..(67)
<223> 任意氨基酸, 例如K或Q
<220>
<221> MOD_RES
<222> (68)..(68)
<223> 任意氨基酸, 例如G或R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (73)..(73)
<223> 任意氨基酸, 例如A或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (76)..(76)
<223> 任意氨基酸, 例如S或G,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (78)..(78)
<223> 任意氨基酸, 例如G或D,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (79)..(79)
<223> 任意氨基酸, 例如G或R,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (80)..(80)
<223> 任意氨基酸, 例如S或R,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (81)..(81)
<223> 任意氨基酸, 例如Y或H,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (85)..(85)
<223> 任意氨基酸, 例如T或P,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (87)..(87)
<223> 任意氨基酸, 例如S或K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (88)..(88)
<223> 任意氨基酸, 例如V或F
<220>
<221> MOD_RES
<222> (89)..(89)
<223> 任意氨基酸, 例如K或Q
<220>
<221> MOD_RES
<222> (92)..(92)
<223> 任意氨基酸, 例如F或V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (95)..(95)
<223> 任意氨基酸, 例如S或T
<220>
<221> MOD_RES
<222> (99)..(99)
<223> 任意氨基酸, 例如A或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (102)..(102)
<223> 任意氨基酸, 例如I, S或T
<220>
<221> MOD_RES
<222> (105)..(105)
<223> 任意氨基酸, 例如L或M
<220>
<221> MOD_RES
<222> (106)..(106)
<223> 任意氨基酸, 例如Q或E
<220>
<221> MOD_RES
<222> (107)..(107)
<223> 任意氨基酸, 例如M或L
<220>
<221> MOD_RES
<222> (108)..(108)
<223> 任意氨基酸, 例如N或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (111)..(111)
<223> 任意氨基酸, 例如K或R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (112)..(112)
<223> 任意氨基酸, 例如T, A或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (121)..(121)
<223> 任意氨基酸, 例如E或V,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (122)..(122)
<223> 任意氨基酸, 例如R或G,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (123)..(123)
<223> 任意氨基酸, 例如H或P,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (124)..(124)
<223> 任意氨基酸, 例如G或Y,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (125)..(125)
<223> 任意氨基酸, 例如G或D,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (126)..(126)
<223> 任意氨基酸, 例如D或G,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (127)..(127)
<223> 任意氨基酸, 例如G或Y,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (129)..(129)
<223> 任意氨基酸, 例如W或G,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (130)..(130)
<223> 任意氨基酸, 例如Y或E,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (133)..(133)
<223> 任意氨基酸, 例如V或Y,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (139)..(139)
<223> 任意氨基酸, 例如M或L,或不存在
<400> 13
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Glu Val Xaa Leu Val Xaa Ser Gly
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Gly Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Cys Xaa Ala
35 40 45
Ser Gly Phe Thr Phe Xaa Xaa Tyr Xaa Met Ser Trp Val Arg Gln Ala
50 55 60
Pro Gly Xaa Xaa Leu Glu Trp Val Xaa Thr Ile Xaa Ser Xaa Xaa Xaa
65 70 75 80
Xaa Thr Tyr Tyr Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Gly Arg Xaa Thr Ile Xaa Arg
85 90 95
Asp Asn Xaa Lys Asn Xaa Leu Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Leu Xaa Xaa
100 105 110
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr
115 120 125
Xaa Xaa Phe Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Xaa Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
145 150 155 160
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
305 310 315 320
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
370 375 380
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
450 455 460
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
465 470
<210> 14
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (22)..(22)
<223> 任意氨基酸, 例如I或V,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (23)..(23)
<223> 任意氨基酸, 例如V或Q
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> 任意氨基酸, 例如A, S, D或L,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> 任意氨基酸, 例如T或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (32)..(32)
<223> 任意氨基酸, 例如S, A或P
<220>
<221> MOD_RES
<222> (33)..(33)
<223> 任意氨基酸, 例如L, A或V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> 任意氨基酸, 例如S或T
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(35)
<223> 任意氨基酸, 例如P, V或L
<220>
<221> MOD_RES
<222> (37)..(37)
<223> 任意氨基酸, 例如E, D或Q,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> 任意氨基酸, 例如R或P
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> 任意氨基酸, 例如A或V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (40)..(40)
<223> 任意氨基酸, 例如T或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (41)..(41)
<223> 任意氨基酸, 例如L或I
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> 任意氨基酸, 例如S, T或N
<220>
<221> MOD_RES
<222> (44)..(44)
<223> 任意氨基酸, 例如R或K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (45)..(45)
<223> 任意氨基酸, 例如A或S,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (48)..(48)
<223> 任意氨基酸, 例如D或S,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (49)..(49)
<223> 任意氨基酸, 例如I或L,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (50)..(50)
<223> 任意氨基酸, 例如L或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (51)..(51)
<223> 任意氨基酸, 例如D或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (52)..(52)
<223> 任意氨基酸, 例如S或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (53)..(53)
<223> 任意氨基酸, 例如D或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (54)..(54)
<223> 任意氨基酸, 例如G或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (55)..(55)
<223> 任意氨基酸, 例如S或K,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (56)..(56)
<223> 任意氨基酸, 例如N或T,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (57)..(57)
<223> 任意氨基酸, 例如Y或F,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (61)..(61)
<223> 任意氨基酸, 例如Y或L,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (64)..(64)
<223> 任意氨基酸, 例如K或R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (67)..(67)
<223> 任意氨基酸, 例如Q或K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (68)..(68)
<223> 任意氨基酸, 例如A, P或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (69)..(69)
<223> 任意氨基酸, 例如V或P,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (70)..(70)
<223> 任意氨基酸, 例如R或K,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (71)..(71)
<223> 任意氨基酸, 例如L或R,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (75)..(75)
<223> 任意氨基酸, 例如Y或L,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (76)..(76)
<223> 任意氨基酸, 例如T或V,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (78)..(78)
<223> 任意氨基酸, 例如R或K,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (79)..(79)
<223> 任意氨基酸, 例如L或R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (80)..(80)
<223> 任意氨基酸, 例如H或D,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (83)..(83)
<223> 任意氨基酸, 例如I或V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (85)..(85)
<223> 任意氨基酸, 例如A, S或D
<220>
<221> MOD_RES
<222> (96)..(96)
<223> 任意氨基酸, 例如Y或F,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (99)..(99)
<223> 任意氨基酸, 例如T或K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (102)..(102)
<223> 任意氨基酸, 例如S或R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (103)..(103)
<223> 任意氨基酸, 例如L或V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (104)..(104)
<223> 任意氨基酸, 例如E或Q,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (105)..(105)
<223> 任意氨基酸, 例如P或A,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (108)..(108)
<223> 任意氨基酸, 例如F或V,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (109)..(109)
<223> 任意氨基酸, 例如A或G
<220>
<221> MOD_RES
<222> (110)..(110)
<223> 任意氨基酸, 例如V或T
<220>
<221> MOD_RES
<222> (112)..(112)
<223> 任意氨基酸, 例如F或Y
<220>
<221> MOD_RES
<222> (114)..(114)
<223> 任意氨基酸, 例如Q或W,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (117)..(117)
<223> 任意氨基酸, 例如N或T,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (118)..(118)
<223> 任意氨基酸, 例如P或H,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (119)..(119)
<223> 任意氨基酸, 例如F或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (120)..(120)
<223> 任意氨基酸, 例如L或P,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (121)..(121)
<223> 任意氨基酸, 例如R或Y,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (125)..(125)
<223> 任意氨基酸, 例如G或Q,或不存在
<220>
<221> MOD_RES
<222> (129)..(129)
<223> 任意氨基酸, 例如V或L,或不存在
<400> 14
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Xaa Xaa Met Thr Gln Ser Pro Xaa Xaa Leu Xaa
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Ser Gln Xaa
35 40 45
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Asn Trp Xaa Gln Gln Xaa
50 55 60
Pro Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Ile Tyr Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa
65 70 75 80
Ser Gly Xaa Pro Xaa Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa
85 90 95
Thr Leu Xaa Ile Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Asp Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa
100 105 110
Cys Xaa Gln Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Lys
115 120 125
Xaa Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130 135 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145 150 155 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165 170 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180 185 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195 200 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210 215 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 15
<211> 384
<212> PRT
<213> 智人
<400> 15
Ala Pro Thr Lys Ala Pro Asp Val Phe Pro Ile Ile Ser Gly Cys Arg
1 5 10 15
His Pro Lys Asp Asn Ser Pro Val Val Leu Ala Cys Leu Ile Thr Gly
20 25 30
Tyr His Pro Thr Ser Val Thr Val Thr Trp Tyr Met Gly Thr Gln Ser
35 40 45
Gln Pro Gln Arg Thr Phe Pro Glu Ile Gln Arg Arg Asp Ser Tyr Tyr
50 55 60
Met Thr Ser Ser Gln Leu Ser Thr Pro Leu Gln Gln Trp Arg Gln Gly
65 70 75 80
Glu Tyr Lys Cys Val Val Gln His Thr Ala Ser Lys Ser Lys Lys Glu
85 90 95
Ile Phe Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro
100 105 110
Thr Ala Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala
115 120 125
Pro Ala Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys
130 135 140
Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu
145 150 155 160
Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala
165 170 175
Val Gln Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val
180 185 190
Val Gly Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly
195 200 205
Lys Val Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser
210 215 220
Asn Gly Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu
225 230 235 240
Trp Asn Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu
245 250 255
Pro Pro Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro
260 265 270
Val Lys Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala
275 280 285
Ala Ser Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile
290 295 300
Leu Leu Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe
305 310 315 320
Ala Pro Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala
325 330 335
Trp Ser Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr
340 345 350
Tyr Thr Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala
355 360 365
Ser Arg Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His Gly Pro Met Lys
370 375 380
<210> 16
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<400> 16
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 17
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人
<400> 17
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 18
<211> 377
<212> PRT
<213> 智人
<400> 18
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro
100 105 110
Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg
115 120 125
Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys
130 135 140
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
370 375
<210> 19
<211> 452
<212> PRT
<213> 智人
<400> 19
Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn
1 5 10 15
Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp
20 25 30
Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Leu Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser
35 40 45
Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys
50 55 60
Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln
65 70 75 80
Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn
85 90 95
Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys
100 105 110
Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg
115 120 125
Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile
130 135 140
Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr
145 150 155 160
Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr
165 170 175
Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Gly Gln
180 185 190
Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln
195 200 205
Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val
210 215 220
Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr
225 230 235 240
Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr
245 250 255
Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn
260 265 270
Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala
275 280 285
Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr
290 295 300
Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg
305 310 315 320
Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro
325 330 335
Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu
340 345 350
Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg
355 360 365
Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro
370 375 380
Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val
385 390 395 400
Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Ala His
405 410 415
Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr
420 425 430
Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala
435 440 445
Gly Thr Cys Tyr
450
<210> 20
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人
<400> 20
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 21
<211> 353
<212> PRT
<213> 智人
<400> 21
Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Cys Ser Thr
1 5 10 15
Gln Pro Asp Gly Asn Val Val Ile Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe
20 25 30
Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Gly Val
35 40 45
Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr
50 55 60
Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Leu Ala Gly
65 70 75 80
Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp
85 90 95
Val Thr Val Pro Cys Pro Val Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro
100 105 110
Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Cys Cys His Pro Arg Leu Ser
115 120 125
Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu Leu Leu Gly Ser Glu Ala Asn
130 135 140
Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly Val Thr Phe
145 150 155 160
Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly Pro Pro Glu
165 170 175
Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val Ser Ser Val Leu Pro Gly Cys
180 185 190
Ala Glu Pro Trp Asn His Gly Lys Thr Phe Thr Cys Thr Ala Ala Tyr
195 200 205
Pro Glu Ser Lys Thr Pro Leu Thr Ala Thr Leu Ser Lys Ser Gly Asn
210 215 220
Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu Glu Leu
225 230 235 240
Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly Phe Ser
245 250 255
Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu Leu Pro
260 265 270
Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser Gln Gly
275 280 285
Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala Glu Asp
290 295 300
Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu Ala Leu
305 310 315 320
Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala Gly Lys Pro
325 330 335
Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly Thr Cys
340 345 350
Tyr
<210> 22
<211> 340
<212> PRT
<213> 智人
<400> 22
Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Asp Ser Thr
1 5 10 15
Pro Gln Asp Gly Asn Val Val Val Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe
20 25 30
Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Asn Val
35 40 45
Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr
50 55 60
Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Pro Asp Gly
65 70 75 80
Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp
85 90 95
Val Thr Val Pro Cys Pro Val Pro Pro Pro Pro Pro Cys Cys His Pro
100 105 110
Arg Leu Ser Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu Leu Leu Gly Ser
115 120 125
Glu Ala Asn Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly
130 135 140
Ala Thr Phe Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly
145 150 155 160
Pro Pro Glu Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val Ser Ser Val Leu
165 170 175
Pro Gly Cys Ala Gln Pro Trp Asn His Gly Glu Thr Phe Thr Cys Thr
180 185 190
Ala Ala His Pro Glu Leu Lys Thr Pro Leu Thr Ala Asn Ile Thr Lys
195 200 205
Ser Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser
210 215 220
Glu Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg
225 230 235 240
Gly Phe Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln
245 250 255
Glu Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro
260 265 270
Ser Gln Gly Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala
275 280 285
Ala Glu Asp Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His
290 295 300
Glu Ala Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Met Ala
305 310 315 320
Gly Lys Pro Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp
325 330 335
Gly Thr Cys Tyr
340
<210> 23
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人
<400> 23
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1 5 10 15
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
35 40 45
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
85 90 95
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 24
<211> 473
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> K或Q
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Q或E
<220>
<221> MOD_RES
<222> (33)..(33)
<223> A或G
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> E或G
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(35)
<223> V或L
<220>
<221> MOD_RES
<222> (36)..(36)
<223> K或V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (37)..(37)
<223> K或Q
<220>
<221> MOD_RES
<222> (40)..(40)
<223> A或G
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> V或L
<220>
<221> MOD_RES
<222> (43)..(43)
<223> K或R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (44)..(44)
<223> V或L
<220>
<221> MOD_RES
<222> (47)..(47)
<223> K或A
<220>
<221> MOD_RES
<222> (67)..(67)
<223> Q或K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (68)..(68)
<223> R或G
<220>
<221> MOD_RES
<222> (87)..(87)
<223> K或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (88)..(88)
<223> F或V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (89)..(89)
<223> Q或K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (92)..(92)
<223> V或F
<220>
<221> MOD_RES
<222> (95)..(95)
<223> T或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (99)..(99)
<223> A或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (105)..(105)
<223> M或L
<220>
<221> MOD_RES
<222> (106)..(106)
<223> E或Q
<220>
<221> MOD_RES
<222> (107)..(107)
<223> L或M
<220>
<221> MOD_RES
<222> (108)..(108)
<223> S或N
<220>
<221> MOD_RES
<222> (112)..(112)
<223> S或A
<400> 24
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Glu Val Xaa Leu Val Xaa Ser Gly
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Gly Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Cys Xaa Ala
35 40 45
Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala
50 55 60
Pro Gly Xaa Xaa Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Gly Ser Asp Arg Arg
65 70 75 80
His Thr Tyr Tyr Pro Asp Xaa Xaa Xaa Gly Arg Xaa Thr Ile Xaa Arg
85 90 95
Asp Asn Xaa Lys Asn Thr Leu Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Leu Arg Xaa
100 105 110
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Gly Pro Tyr Asp Gly Tyr Tyr
115 120 125
Gly Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
145 150 155 160
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
305 310 315 320
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
370 375 380
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
450 455 460
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
465 470
<210> 25
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> D或L
<220>
<221> MOD_RES
<222> (32)..(32)
<223> A或P
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> S或T
<220>
<221> MOD_RES
<222> (37)..(37)
<223> E或Q
<220>
<221> MOD_RES
<222> (38)..(38)
<223> R或P
<220>
<221> MOD_RES
<222> (40)..(40)
<223> T或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> N或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (44)..(44)
<223> K或R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (64)..(64)
<223> K或R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (68)..(68)
<223> P或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (70)..(70)
<223> K或R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (79)..(79)
<223> L或R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (99)..(99)
<223> T或K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (102)..(102)
<223> S或R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (103)..(103)
<223> L或V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (104)..(104)
<223> Q或E
<220>
<221> MOD_RES
<222> (109)..(109)
<223> A或G
<400> 25
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Xaa Ser Leu Xaa
20 25 30
Val Xaa Leu Gly Xaa Xaa Ala Xaa Ile Xaa Cys Xaa Ser Ser Gln Ser
35 40 45
Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Phe Leu Asn Trp Leu Gln Gln Xaa
50 55 60
Pro Gly Gln Xaa Pro Xaa Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Xaa Asp
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85 90 95
Thr Leu Xaa Ile Ser Xaa Xaa Xaa Ala Glu Asp Val Xaa Val Tyr Tyr
100 105 110
Cys Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
115 120 125
Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130 135 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145 150 155 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165 170 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180 185 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195 200 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210 215 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 26
<211> 473
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (37)..(37)
<223> Q或K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (40)..(40)
<223> R或G
<220>
<221> MOD_RES
<222> (47)..(47)
<223> T或A
<220>
<221> MOD_RES
<222> (73)..(73)
<223> A或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (102)..(102)
<223> I或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (111)..(111)
<223> K或R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (112)..(112)
<223> T或A
<400> 26
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
20 25 30
Gly Gly Leu Val Xaa Pro Gly Xaa Ser Leu Arg Leu Ser Cys Xaa Ala
35 40 45
Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala
50 55 60
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Xaa Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
85 90 95
Asp Asn Ala Lys Asn Xaa Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Xaa Xaa
100 105 110
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Glu Arg His Gly Gly Asp Gly Tyr
115 120 125
Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
145 150 155 160
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
305 310 315 320
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
370 375 380
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
450 455 460
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
465 470
<210> 27
<211> 233
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (23)..(23)
<223> V或Q
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> A或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> T或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (33)..(33)
<223> L或A
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(35)
<223> P或V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (37)..(37)
<223> E或D
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> A或V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (41)..(41)
<223> L或I
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> S或T
<220>
<221> MOD_RES
<222> (62)..(62)
<223> Q或K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (65)..(65)
<223> R或K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (78)..(78)
<223> I或V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (80)..(80)
<223> A或S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (99)..(99)
<223> E或Q
<220>
<221> MOD_RES
<222> (105)..(105)
<223> V或T
<220>
<221> MOD_RES
<222> (107)..(107)
<223> F或Y
<400> 27
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Xaa Met Thr Gln Ser Pro Xaa Xaa Leu Ser
20 25 30
Xaa Ser Xaa Gly Xaa Arg Xaa Thr Xaa Xaa Cys Arg Ala Ser Gln Asp
35 40 45
Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Xaa Ala Val
50 55 60
Xaa Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Xaa Pro Xaa
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Xaa Pro Glu Asp Phe Ala Xaa Tyr Xaa Cys Gln Gln Gly Asn
100 105 110
Pro Leu Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
115 120 125
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
130 135 140
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145 150 155 160
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
165 170 175
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
195 200 205
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
210 215 220
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 28
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 28
Trp Ala Thr Cys Ala Ala Asn Asn Asn Asn Thr Thr Arg
1 5 10
<210> 29
<211> 90
<212> PRT
<213> 大肠杆菌
<400> 29
Met Asn Lys Thr Gln Leu Ile Asp Val Ile Ala Glu Lys Ala Glu Leu
1 5 10 15
Ser Lys Thr Gln Ala Lys Ala Ala Leu Glu Ser Thr Leu Ala Ala Ile
20 25 30
Thr Glu Ser Leu Lys Glu Gly Asp Ala Val Gln Leu Val Gly Phe Gly
35 40 45
Thr Phe Lys Val Asn His Arg Ala Glu Arg Thr Gly Arg Asn Pro Gln
50 55 60
Thr Gly Lys Glu Ile Lys Ile Ala Ala Ala Asn Val Pro Ala Phe Val
65 70 75 80
Ser Gly Lys Ala Leu Lys Asp Ala Val Lys
85 90
<210> 30
<211> 90
<212> PRT
<213> 大肠杆菌
<400> 30
Met Asn Lys Ser Gln Leu Ile Asp Lys Ile Ala Ala Gly Ala Asp Ile
1 5 10 15
Ser Lys Ala Ala Ala Gly Arg Ala Leu Asp Ala Ile Ile Ala Ser Val
20 25 30
Thr Glu Ser Leu Lys Glu Gly Asp Asp Val Ala Leu Val Gly Phe Gly
35 40 45
Thr Phe Ala Val Lys Glu Arg Ala Ala Arg Thr Gly Arg Asn Pro Gln
50 55 60
Thr Gly Lys Glu Ile Thr Ile Ala Ala Ala Lys Val Pro Ser Phe Arg
65 70 75 80
Ala Gly Lys Ala Leu Lys Asp Ala Val Asn
85 90
<210> 31
<211> 21
<212> PRT
<213> 流感嗜血杆菌
<400> 31
Asn Phe Glu Leu Arg Asp Lys Ser Ser Arg Pro Gly Arg Asn Pro Lys
1 5 10 15
Thr Gly Asp Val Val
20
<210> 32
<211> 21
<212> PRT
<213> 流感嗜血杆菌
<400> 32
Ser Leu His His Arg Gln Pro Arg Leu Gly Arg Asn Pro Lys Thr Gly
1 5 10 15
Asp Ser Val Asn Leu
20
<210> 33
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 33
Gly Pro Ser Leu Lys Leu
1 5
<210> 34
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 34
Gly Pro Ser Leu
1
<210> 35
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 35
Pro Ser Leu Lys
1
<210> 36
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 36
Gly Pro Ser Leu Lys
1 5
<210> 37
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 37
Ser Leu Lys Leu
1
<210> 38
<211> 60
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> 任意氨基酸
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(40)
<223> 任意氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)..(40)
<223> 该区域可包含1-20个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (55)..(55)
<223> 任意氨基酸
<400> 38
Arg Pro Gly Arg Asn Pro Xaa Thr Gly Asp Val Val Pro Val Ser Ala
1 5 10 15
Arg Arg Val Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Ser Leu His His Arg Gln Pro
35 40 45
Arg Leu Gly Arg Asn Pro Xaa Thr Gly Asp Ser Val
50 55 60
<210> 39
<211> 60
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(40)
<223> 任意氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)..(40)
<223> 该区域可包含1-20个残基
<400> 39
Arg Pro Gly Arg Asn Pro Lys Thr Gly Asp Val Val Pro Val Ser Ala
1 5 10 15
Arg Arg Val Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Ser Leu His His Arg Gln Pro
35 40 45
Arg Leu Gly Arg Asn Pro Lys Thr Gly Asp Ser Val
50 55 60
<210> 40
<211> 44
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 40
Arg Pro Gly Arg Asn Pro Lys Thr Gly Asp Val Val Pro Val Ser Ala
1 5 10 15
Arg Arg Val Val Gly Pro Ser Leu Phe Ser Leu His His Arg Gln Pro
20 25 30
Arg Leu Gly Arg Asn Pro Lys Thr Gly Asp Ser Val
35 40
<210> 41
<211> 60
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(40)
<223> 任意氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)..(40)
<223> 该区域可包含1-20个残基
<400> 41
Phe Leu Glu Glu Ile Arg Leu Ser Leu Glu Ser Gly Gln Asp Val Lys
1 5 10 15
Leu Ser Gly Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Leu Ser Ala Lys Glu Ile Glu
35 40 45
Asn Met Val Lys Asp Ile Leu Glu Phe Ile Ser Gln
50 55 60
<210> 42
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 42
Gly Gly Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 43
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 43
Gly Pro Ser Leu Lys Leu
1 5
<210> 44
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 44
Gly Gly Gly
1
<210> 45
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 45
Gly Pro Ser Leu
1
<210> 46
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 46
Gly Pro Ser
1
<210> 47
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 47
Pro Ser Leu Lys
1
<210> 48
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 48
Gly Pro Ser Leu Lys
1 5
<210> 49
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 49
Ser Leu Lys Leu
1
<210> 50
<211> 44
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 50
Phe Leu Glu Glu Ile Arg Leu Ser Leu Glu Ser Gly Gln Asp Val Lys
1 5 10 15
Leu Ser Gly Phe Gly Pro Ser Leu Thr Leu Ser Ala Lys Glu Ile Glu
20 25 30
Asn Met Val Lys Asp Ile Leu Glu Phe Ile Ser Gln
35 40

Claims (38)

1.一种特异性结合DNABII肽的头部区域的抗体或其抗原结合片段，包含：
(a)重链免疫球蛋白可变结构域，其包含：
i.重链互补决定区1，其由序列GFTFRTY组成；
ii.重链互补决定区2，其由序列GSDRRH组成；
iii.重链互补决定区3，其由序列VGPYDGYYGEFDY组成；以及
(b)轻链免疫球蛋白可变结构域，其包含：
i.轻链互补决定区1，其由序列QSLLDSDGKTF组成；
ii.轻链互补决定区2，其由序列LVS组成；和
iii.轻链互补决定区3，其由序列WQGTHFPYT组成。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中重链免疫球蛋白可变结构域序列包含与SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144至少90％相同的氨基酸序列，和/或其中轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含与SEQ ID NO:7的aa 21至aa 132的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中重链免疫球蛋白可变结构域序列包含与SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144至少90％相同的氨基酸序列，和/或其中轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含与SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中重链免疫球蛋白可变结构域序列包含与SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144至少90％相同的氨基酸序列，和/或其中轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含与SEQ ID NO:9的aa 21至aa 132的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含(i)重链免疫球蛋白序列，其包含SEQ ID NO:1的aa 25至aa 144的氨基酸序列；和(ii)轻链免疫球蛋白序列，其包含SEQ ID NO:8的aa 21至aa 132的氨基酸序列。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体进一步包含恒定区，所述恒定区选自：IgA恒定区、IgD恒定区、IgE恒定区、IgG恒定区或IgM恒定区。
7.根据权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述恒定区是IgG1恒定区。
8.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab、F(ab’)2、Fab’、scFv或Fv。
9.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段被选自PEG化、聚唾液酸化、HES化或糖基化的方法修饰。
10.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是单克隆抗体。
11.一种分离的多核苷酸，其编码权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
12.根据权利要求11所述的分离的多核苷酸，其中编码所述抗体或其抗原结合片段的所述分离的多核苷酸被可操作地连接至启动子和/或增强子元件。
13.一种包含权利要求11或12所述的分离的多核苷酸的载体。
14.一种宿主细胞，其包含权利要求11或12所述的分离的多核苷酸或权利要求13所述的载体。
15.一种组合物，其包含载体和一种或多种：权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求11或12所述的分离的多核苷酸、权利要求13所述的载体或权利要求14所述的宿主细胞。
16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述载体包含具有缓冲能力的组分，其包括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜碱、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、或阿斯巴甜；并且其中所述载体包括碳水化合物赋形剂，其选自单糖、二糖、多糖、和/或糖醇；其中所述单糖选自果糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖和山梨糖；所述二糖选自乳糖、蔗糖、海藻糖和纤维二糖；所述多糖选自棉子糖、松三糖、麦芽糖糊精、葡聚糖和淀粉；并且所述糖醇选自甘露糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、山梨糖醇和肌醇。
17.一种生产权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的体外方法，所述方法包括在表达抗体或其抗原结合片段的条件下培养包含编码所述抗体或其抗原结合片段的多核苷酸的宿主细胞。
18.根据权利要求17所述的体外方法，其中所述方法进一步包括分离所述抗体或其抗原结合片段。
19.一种用于抑制或竞争DNABII多肽或蛋白质与微生物DNA的结合的体外方法，包括使DNABII多肽或蛋白质与权利要求1-10中任一项的抗体或其抗原结合片段接触，其中所述抗体或其抗原结合片段结合DNABII肽的头部区域。
20.权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备破坏生物膜的药物中的应用，其中所述抗体或其抗原结合片段结合DNABII肽的头部区域。
21.权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备防止在表面上形成生物膜或破坏表面上的生物膜的药物中的应用，其中所述抗体或其抗原结合片段结合DNABII肽的头部区域。
22.权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备预防或破坏对象中的生物膜的药物中的应用，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至DNABII肽的头部区域。
23.权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备用于抑制、预防或治疗在对象中产生生物膜的微生物感染的药物中的应用，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至DNABII肽的头部区域。
24.权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗以在对象体内形成生物膜为特征的病症的药物中的应用，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至DNABII肽的头部区域。
25.根据权利要求20-24中任一项所述的应用，其中所述药物被配制用于与一种或多种抗生素一起施用。
26.权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备检测对象中的生物膜的药物中的应用，其中检测对象中的生物膜包括检测所述抗体或其抗原结合片段与所述生物膜的结合。
27.一种使用权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段包被的非生理表面。
28.根据权利要求27所述的非生理表面，其中所述非生理表面处于工业环境中。
29.一种试剂盒，其包含以下成分中的一种或多种：权利要求1-10中任一项的抗体或其抗原结合片段、权利要求11或12的多核苷酸、权利要求13的载体、权利要求14的宿主细胞或权利要求15的组合物。
30.根据权利要求29所述的试剂盒，其中所述试剂盒进一步包含使用说明。
31.一种特异性结合DNABII肽的头部区域的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：(i)重链免疫球蛋白序列，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；和(ii)轻链免疫球蛋白序列，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
32.一种组合物，其包含：
特异性结合DNABII肽的头部区域的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：(i)重链免疫球蛋白序列，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；和(ii)轻链免疫球蛋白序列，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；
缓冲液，其包含组氨酸；以及
海藻糖。
33.包含磷酸盐缓冲盐水中的特异性结合DNABII肽的头部区域的抗体的组合物在制备用于治疗有需要的对象中的肺炎的药物中的应用，所述抗体包含：(i)重链免疫球蛋白序列，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；和(ii)轻链免疫球蛋白序列，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，其中所述药物被配制用于以单剂量的有效量通过静脉输注施用于所述对象，其中所述肺炎为社区获得性肺炎或医院获得性肺炎。
34.一种组合物，其包含(i)权利要求1-10和31中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或编码权利要求1-10和31中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的分离的多核苷酸，以及(ii)一种或多种编码DNABII肽的分离的多核苷酸。
35.根据权利要求34所述的组合物，其中所述DNABII肽选自：整合宿主因子的头部区域、组蛋白样蛋白的头部区域、IHF亚基A的头部区域、IHF亚基B的头部区域和头部嵌合肽。
36.根据权利要求35所述的组合物，其中所述头部嵌合肽包含SEQ ID NO:38-40中任一个的氨基酸序列。
37.根据权利要求34所述的组合物，其中所述一种或多种编码DNABII肽的分离的多核苷酸编码SEQ ID NO:38-40中的两个或更多个的氨基酸序列。
38.根据权利要求34-37中任一项所述的组合物，其中所述分离的多核苷酸是RNA。
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