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CN114137119B - 一种丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测方法 - Google Patents

一种丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测方法 Download PDF

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CN114137119B CN202111435047.7A CN202111435047A CN114137119B CN 114137119 B CN114137119 B CN 114137119B CN 202111435047 A CN202111435047 A CN 202111435047A CN 114137119 B CN114137119 B CN 114137119B
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Abstract

本发明涉及农药残留检测技术领域，提供了丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测方法，将待测样品进行前处理，得到待测样品液；采用超高效液相色谱串联质谱法对所述待测样品液进行检测，得到丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测结果。本发明采用高效液相色谱‑串联质谱法能够同时测定丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺，实现对丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的快速定性定量分析，具有简便、快捷、灵敏度高的优点。本发明的检测方法弥补了目前针对同时检测丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺3种物质检测方法的空白，值得推广应用。

Description

一种丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测方法
技术领域
本发明涉及农药残留检测技术领域，尤其涉及一种丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测方法。
背景技术
拜耳公司于2021年新推出Delaro Complete杀菌剂(有效成分：丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺)并获得美国批准。Delaro Complete是一款具有3种“作用模式”的产品，其复配的独特化学有效成分对不同环境下的大豆和玉米病害都具有稳定的病害防治效果，使得玉米和大豆植株能够更好地抵御植物病害，确保植物健康生长和稳产。丙硫菌唑(Prothioconazole)属于三唑硫酮类杀菌剂，广泛应用于水稻、小麦、花生和大豆，主要防治由担子菌、半知菌和子囊菌引起的枯萎病、白粉病、纹枯病和锈病；其作用机理为抑制真菌中甾醇前体的去甲基化，从而干扰麦角甾醇的合成，起到杀菌的作用。肟菌酯(Trifloxystrobin)属于甲氧基丙烯酸类杀菌剂，主要用于水稻、香蕉、马铃薯、玉米和花生，对子囊菌、担子菌、半知菌和卵菌多个纲的真菌有效，可以有效防治白粉病、霜霉病、褐斑病和稻瘟病等多种病害；其作用机理为通过阻止细胞色素bc1Qo位点的电子传递来抑制线粒体的呼吸作用。氟吡菌酰胺(Fluopyram)属于吡啶乙基苯酰胺类杀菌剂，主要应用于黄瓜、香蕉、番茄、西瓜和烟草等作物，可以有效防止白粉病、叶斑病和灰霉病等多种病害和多种线虫；氟吡菌酰胺具有很强的杀线虫活性，其机理为抑制琥珀酸脱氢酶(复合物II)的活性从而阻断电子传递，进而抑制真菌孢子萌发、芽管伸长、菌丝生长和产孢。
随着丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺在谷物、蔬菜、水果等农产品中广泛使用，GB2763-2019中规定了丙硫菌唑在大豆和玉米中最大残留限量分别为1mg/kg和0.1mg/kg；肟菌酯在玉米中最大残留限量为0.02mg/kg；氟吡菌酰胺在大豆和玉米中最大残留限量分别为0.05mg/kg和0.07mg/kg。目前，有关丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的主要检测方法为：利用气相色谱法、液相色谱法、气相色谱串联质谱法和液相色谱串联质谱法对丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺分别进行检测。目前，还没有能够同时检测丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的测定方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测方法。采用本发明提供的方法能够实现对待测样品中丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的同时定性与定量检测。
本发明提供了一种丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测方法，包括以下步骤：
对待测样品进行提取，得到提取液；
将所述提取液进行分散固相萃取，得到所述待测样品液；
对所述待测样品液进行超高效液相色谱串联质谱检测，得到丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测结果；
所述超高效液相色谱串联质谱检测包括超高效液相色谱检测和质谱检测；
所述超高效液相色谱检测的条件包括：流动相体系为流动相A和流动相B，所述流动相A为乙酸铵水溶液，所述流动相B为甲醇；所述乙酸铵水溶液的浓度为2mmol/L；
洗脱方式为梯度洗脱；
所述梯度洗脱的程序为：
0.0～2.0min：所述流动相A的体积百分含量由55％匀速减少到20％；
2.0～4.0min：所述流动相A的体积百分含量由20％匀速减少到2％；
4.0～4.5min：所述流动相A的体积百分含量为2％；
4.5～4.6min：所述流动相A的体积百分含量由2％匀速增加到55％；
4.6min～6.5min：所述流动相A的体积百分含量为55％；
所述质谱检测的条件包括：离子源为热电喷雾离子源；检测方式为多反应检测扫描模式；离子源温度为550℃。
优选地，所述超高效液相色谱检测的条件还包括：采用Waters acquity
Figure BDA0003381506590000021
BEH C18柱；柱温为40℃；进样量为2.0μL；所述流动相体系的流速为300μL/min。
优选地，所述提取包括依次进行第一提取和第二提取，所述第一提取的提取剂为水；所述待测样品和第一提取的提取剂的用量比为2g：2～5mL。
优选地，所述第一提取为第一涡旋提取，所述第一涡旋提取的转速为2000～2500rpm；所述第一提取的时间为1～5min。
优选地，所述第二提取的提取剂为甲酸乙腈溶液；所述甲酸乙腈溶液的体积浓度为1％；所述待测样品和第二提取的提取剂的用量比为2g：10～20mL。
优选地，所述第二提取为第二涡旋提取，所述第二涡旋提取的转速为2000～2500rpm；所述第二提取的时间为20～30min。
优选地，所述分散固相萃取的填料为乙二胺基-N-丙基硅烷化硅胶、C18填料和无水MgSO4的混合物。
优选地，所述乙二胺基-N-丙基硅烷化硅胶和C18填料的质量比为1：1。
优选地，所述乙二胺基-N-丙基硅烷化硅胶和的无水MgSO4质量比为1：3。
优选地，所述乙二胺基-N-丙基硅烷化硅胶和所述提取液的用量比为50mg：1.5mL。
为了实现上述发明目的，本发明提供了一种丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测方法，包括以下步骤：将待测样品进行前处理，得到待测样品液；对所述待测样品液进行超高效液相色谱串联质谱检测，得到丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测结果；所述超高效液相色谱检测的条件包括：流动相体系为流动相A和流动相B，所述流动相A为乙酸铵水溶液，所述流动相B为甲醇；所述乙酸铵水溶液的浓度为2mmol/L；洗脱方式为梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序为：0.0～2.0min：所述流动相A的体积百分含量由55％匀速减少到20％；2.0～4.0min：所述流动相A的体积百分含量由20％匀速减少到2％；4.0～4.5min：所述流动相A的体积百分含量为2％；4.5～4.6min：所述流动相A的体积百分含量由2％匀速增加到55％；4.6min～6.5min：所述流动相A的体积百分含量为55％。所述质谱检测的条件包括：离子源为热电喷雾离子源；检测方式为多反应检测扫描模式；离子源温度为550℃。
本发明采用高效液相色谱-串联质谱法能够同时测定丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺，实现对丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的快速定性定量分析，具有简便、快捷、灵敏度高的优点。本发明的检测方法弥补了目前针对同时检测丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺3种物质检测方法的空白，值得推广应用。
附图说明
图1为丙硫菌唑的标准曲线图；
图2为肟菌酯的标准曲线图；
图3为氟吡菌酰胺的标准曲线图；
图4是0.01mg/L丙硫菌唑的标准溶液色谱图；
图5是0.01mg/L肟菌酯的标准溶液的色谱图；
图6是0.01mg/L氟吡菌酰胺标准溶液的色谱图；
图7是大豆样品中丙硫菌唑的的色谱图；
图8是大豆样品中肟菌酯的的色谱图；
图9是大豆样品中氟吡菌酰胺的的色谱图；
图10是玉米样品中丙硫菌唑的的色谱图；
图11是玉米样品中肟菌酯的的色谱图；
图12是玉米样品中氟吡菌酰胺的的色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测方法，包括以下步骤：
将待测样品进行前处理，得到待测样品液；
对所述待测样品液进行超高效液相色谱串联质谱检测，得到丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测结果。
在本发明中，若没有特殊说明，所采用的试剂均为本领域技术人员所熟知的市售商品。
本发明将待测样品进行前处理，得到待测样品液。
在本发明中，所述前处理优选包括以下步骤：
对待测样品进行提取，得到提取液；
将所述提取液进行分散固相萃取，得到所述待测样品液。
本发明中，所述待测样品优选包括大豆样品和玉米样品；所述待测样品的粒径优选为20～30目。
在本发明中，所述提取优选包括依次进行第一提取和第二提取。本发明中，所述第一提取的提取剂优选为水，所述待测样品和第一提取的提取剂的用量比优选为2g：2～5mL，进一步优选为1g：1mL。本发明中，所述第一提取的时间优选为1～5min，进一步优选为1min。本发明中，所述第一提取的方式优选为涡旋，所述涡旋的转速优选为2000～2500rpm。
本发明中，所述第二提取的提取剂优选为甲酸乙腈溶液；所述甲酸乙腈溶液的体积浓度为1％。本发明中，所述待测样品和第二提取的提取剂的用量比为2g：10～20mL，进一步优选为1g：5mL。本发明中，所述第二提取的时间优选为20～30min，进一步优选为25～30min。本发明中，所述第二提取的方式优选为涡旋；所述涡旋的转速优选为2000～2500rpm。
所述提取后，本发明优选将所述提取得到的提取体系与氯化钠混合，进行离心。
本发明中，所述待测样品与氯化钠的质量比优选为2：2～5，进一步优选为1：1。在本发明中，所述离心的转速优选为3000～4000rpm，进一步优选为3500～4000rpm；所述离心的时间优选为4～10min，进一步优选为5～8min。
得到提取液后，本发明将所述提取液进行分散固相萃取，得到所述待测样品液。
本发明中，所述分散固相萃取的填料优选为乙二胺基-N-丙基硅烷化硅胶、C18填料和无水MgSO4的混合物；所述乙二胺基-N-丙基硅烷化硅胶和C18填料质量比优选为1：1；所述乙二胺基-N-丙基硅烷化硅胶和的无水MgSO4质量比优选为1：3。本发明中，所述乙二胺基-N-丙基硅烷化硅胶和提取液的用量比优选为50mg：1.5mL。本发明中，所述分散固相萃取的方式优选为离心；所述离心的转速优选为7500～8500rpm，进一步优选为8000～8500rpm。
本发明优选还包括将分散固相萃取所得上清液过滤，得到待测样品液。
本发明中，所述过滤优选在0.22μm有机针式滤器中进行。
得到待测样品液后，本发明对所述待测样品液进行超高效液相色谱串联质谱检测，得到丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测结果。
在本发明中，所述超高效液相色谱串联质谱法包括超高效液相色谱检测和质谱检测。
在本发明中，所述液相色谱检测的条件包括：
流动相体系为流动相A和流动相B；所述流动相A为乙酸铵水溶液，所述流动相B为甲醇；所述乙酸铵水溶液的浓度为2mmol/L；洗脱方式为梯度洗脱。
所述梯度洗脱的程序为：
0.0～2.0min：所述流动相A的体积百分含量由55％匀速减少到20％；
2.0～4.0min：所述流动相A的体积百分含量由20％匀速减少到2％；
4.0～4.5min：所述流动相A的体积百分含量为2％；
4.5～4.6min：所述流动相A的体积百分含量由2％匀速增加到55％；
4.6min～6.5min：所述流动相A的体积百分含量为55％。
在本发明中，所述液相色谱检测的条件优选还包括：色谱柱优选为Watersacquity
Figure BDA0003381506590000062
BEH C18柱；柱温优选为40℃；进样量优选为2μL；所述流动相的流速优选为300μL/min。
在本发明中，所述质谱检测的条件包括：离子源为热电喷雾离子源；检测方式为多反应检测扫描模式；离子源温度为550℃。
在本发明中，所述质谱检测的条件优选还包括：气帘气的流速优选为35psi；喷撞气的流速优选为7psi；喷雾气的流速优选为50psi；辅助加热气的流速优选为50psi。
在本发明中，丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的定性离子对、定量离子对、碰撞能量、去簇电压如表1所示。
表1丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的质谱参数
Figure BDA0003381506590000061
Figure BDA0003381506590000071
其中，*代表定量离子。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在本发明的实施例中，具体仪器、试剂的规格如下所示：
所述仪器具体为：ABSciex液相色谱串联三重四级杆质谱联用仪(Exion LCAD-Triple QuadTM 5500，美国ABSciex公司)；BSA224S电子天平(德国赛多利斯集团)(感量分别为0.0001g)；OHAUS SPS202F型电子天平(奥克斯仪器常州有限公司，感量0.01g)；Eppendorf Centrifuge 5430R高速冷冻离心机(德国艾本德股份公司)；MX-S可调式混匀仪(北京大龙兴创实验仪器有限公司)；TL002型匀浆机：(江苏天翎仪器有限公司)；饮用纯净水(广州屈臣氏食品饮料有限公司)、有机针式滤器(0.22μm，型号为TQP-61322，天源科技公司)、注射器(2mL，常州悦康医疗器材有限公司)；
所述试剂为乙腈(色谱纯4L，默克股份两合公司)；甲醇(色谱纯4L，默克股份两合公司)；甲酸(色谱纯500mL，Anaqua Chemicals Supply公司)；乙酸铵(色谱纯500g，AnaquaChemicals Supply公司)；氯化钠(分析纯500g，上海凌峰化学试剂有限公司)；无水硫酸镁(分析纯500g，国药集团化学试剂有限公司)；C18填料(40～63μm，
Figure BDA0003381506590000072
天津博纳艾杰尔科技有限公司)、PSA(50μm，/>
Figure BDA0003381506590000073
天津博纳艾杰尔科技有限公司)、GCB(120～400目，天津博纳艾杰尔科技有限公司)
实施例1
一、样品前处理
1、提取液的制备：本部分共包含5个试验，分别包括试验1.1～试验1.5。
试验1.1：
分别称取大豆和玉米样品2.0g，分别置于50mL离心管中，加入2mL水，涡旋1min，加入10mL 1％甲酸乙腈，涡旋30min，加入2g氯化钠，涡旋5min，在4000rpm条件下离心5min，分别取上清液，作为大豆提取液和玉米提取液。
试验1.2：
分别称取大豆和玉米样品2.0g，分别置于50mL离心管中，加入10mL 1％甲酸乙腈，涡旋30min，加入2g氯化钠，涡旋5min，在4000rpm条件下离心5min，得到大豆提取液和玉米提取液。
试验1.3：
试验1.3与试验1.2区别仅仅在于将1％甲酸乙腈替换为乙腈，其余条件不变。
试验1.4：
试验1.4与试验1.2区别仅仅在于将1％甲酸乙腈替换为体积分数为90％的乙腈，其余条件不变。
试验1.5：
试验1.5与试验1.2区别仅仅在于将1％甲酸乙腈替换为体积浓度为80％乙腈，其余条件不变。
表2为试验1.1～试验1.5不同提取剂得到的大豆提取液的提取率，表3为试验1.1～试验1.5不同提取剂得到的玉米提取液的提取率。
表2试验1.1～试验1.5不同提取剂得到的大豆提取液的提取率
大豆提取液提取率 丙硫菌唑 肟菌酯 氟吡菌酰胺
试验1.1 85.2％ 102％ 90.9％
试验1.2 68.8％ 97.0％ 80.1％
试验1.3 72.9％ 92.7％ 80.0％
试验1.4 73.3％ 100％ 84.1％
试验1.5 88.0％ 105％ 87.6％
表3试验1.1～试验1.5不同提取剂得到的玉米提取液的提取率
Figure BDA0003381506590000081
Figure BDA0003381506590000091
通过上述提取率比较，同时考虑由于大豆中脂肪、蛋白含量高，直接添加80％乙腈容易结球影响实验效果的原因，因此确定水+1％甲酸乙腈提取作为丙硫菌唑、肟菌酯、氟吡菌酰胺本发明中的提取剂。
2、提取液的分散固相萃取：
本部分共包括7个试验，即试验2.1～2.7。
试验2.1：
分别移取1.5mL“试验1.1”所得大豆提取液和玉米提取液于含有50mg C18、50mgPSA和150mg无水MgSO4的2mL离心管中，涡旋1min，以8000r/min离心5min，取上清液过0.22μm有机针式滤器(型号为TQP-61322)，得到大豆待测样品液和玉米待测液。
试验2.2：
试验2.2与试验2.1的区别仅仅在于离心管中的填料为“50mg PSA和150mg无水MgSO4”。
试验2.3：
试验2.3与试验2.1的区别仅仅在于离心管中的填料为“50mg石墨化碳(GCB)+150mg无水MgSO4”。
试验2.4：
试验2.4与试验2.1的区别仅仅在于离心管中的填料为“50mg C18和150mg无水MgSO4”。
试验2.5：
试验2.5与试验2.1的区别仅仅在于离心管中的填料为“50mg PSA、50mg GCB和150mg无水MgSO4”。
试验2.6：
试验2.6与试验2.1的区别仅仅在于离心管中的填料为“50mg PSA、50mg GCB和150mg无水MgSO4”。
试验2.7：
试验2.7与试验2.1的区别仅仅在于离心管中的填料为“50mg PSA、50mgC18、50mgGCB和150mg无水MgSO4。
表4为“试验1.1”所得大豆提取液经不同填料进行分散固相萃取的回收率；表5为“试验1.1”所得玉米提取液经不同填料进行分散固相萃取的回收率。
表4试验2.1～2.7不同提取剂得到的大豆提取液的回收率
大豆提取液回收率 丙硫菌唑 肟菌酯 氟吡菌酰胺
试验2.1 75.6％ 101％、 105％
试验2.2 47.3％ 105％ 106％
试验2.3 85.0％ 99.1％ 103％
试验2.4 49.0％ 104％ 105％
试验2.5 84.6％ 92.2％ 98.6％
试验2.6 32.2％ 104％ 106％
试验2.7 60.0％ 98.2％ 101％
表5试验2.1～2.7不同提取剂得到的玉米提取液的回收率
大豆提取液回收率 丙硫菌唑 肟菌酯 氟吡菌酰胺
试验2.1 98.5％ 97.7％ 99.9％
试验2.2 67.6％ 90.1％ 94.3％
试验2.3 96.2％ 95.6％、 99.1％
试验2.4 63.7％ 88.6％ 93.7％
试验2.5 94.7％ 84.0％ 93.9％
试验2.6 68.7％ 86.7％ 93.9％
试验2.7 86.7％ 90.6％ 94.1％
大豆中油脂含量较高，玉米中含有较多糖类，PSA+C18去除效果更好。综合考虑回收率和杂质去除效果等因素，PSA 50mg+C18 50mg+MgSO4 150mg为最优净化条件。因此，本发明确定PSA 50mg+C18 50mg+MgSO4 150mg作为丙硫菌唑、肟菌酯、氟吡菌酰胺在大豆和玉米中的净化吸附剂。
二、标准曲线的制作
分别用大豆和玉米空白样品基质分别配制0.0001mg/L、0.0005mg/L、0.001mg/L、0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L的丙硫菌唑、肟菌酯、氟吡菌酰胺标准溶液，进样2μL，获得UPLC-MS/MS的响应值，以浓度-峰面积绘制标准溶液曲线，见图1～3。
图1为以大豆空白样品基质配置得到的肟菌酯标准溶液的回归方程，由图1可知，以大豆空白样品基质配置得到的丙硫菌唑标准溶液的回归方程为y＝15058552x+2303(R2＝0.9999)；以玉米空白样品基质配置得到的丙硫菌唑标准溶液的回归方程为：y＝18855329x+1260(R2＝0.9999)。
图2为以大豆空白样品基质配置得到的肟菌酯标准溶液的回归方程为y＝311175605x+64287(R2＝0.9999)；以玉米空白样品基质配置得到的肟菌酯标准溶液的回归方程为：y＝332865560x+128974(R2＝0.9994)。
图3为以大豆空白样品基质配置得到的氟吡菌酰胺标准溶液的回归方程为y＝279313085x+84444(R2＝0.9999)；以玉米空白样品基质配置得到的氟吡菌酰胺标准溶液的回归方程为：y＝309325498x+111545(R2＝0.9998)。
从图1～3可以看出，待测化合物在0.1ng/mL～50ng/mL线性关系良好。
三、检出限及定量限的测定
分别取1.5mL丙硫菌唑、肟菌酯、氟吡菌酰胺0.1ng/mL的标准样品，按照超高效液相色谱检测的条件和质谱检测的条件进行检测，以被测组分信号(S)和基线噪音(N)的比值≥3(S/N≥3)的相应浓度确定检出限。取“1mL0.01mg/L标准工作溶液”分别加入到2.0g大豆和玉米的空白基质中，按1.1和2.1过程进行前处理，处理后的待测液按照超高效液相色谱检测的条件和质谱检测的条件进行检测，以S/N≥10的最低档添加回收水平确定为方法的定量限。
结果为：丙硫菌唑、肟菌酯、氟吡菌酰胺的检出限为2×10-9mg；定量限为0.01mg/kg。
四、准确度测试
用乙腈配制0.1mg/L、1mg/L、20mg/L的丙硫菌唑、肟菌酯、氟吡菌酰胺的标准溶液。
准确称取大豆、玉米5种空白基质，每个基质精密量取15份(每份2.0g)，分3组，每组5份，分别加入0.2mL 0.1mg/L标准工作溶液、0.2mL 1mg/L、0.2mL 20mg/L标准工作溶液(丙硫菌唑、肟菌酯、氟吡菌酰胺标准溶液)，按照1.1和2.1过程进行前处理，得到梯度回收溶液，然后，根据标准曲线计算浓度，并计算添加回收率及RSD，检测结果见表6。
表6添加回收率测试数据
Figure BDA0003381506590000121
由表6可知：丙硫菌唑在大豆和玉米中添加浓度为0.01、0.1和2.0mg/kg时，平均回收率分别为83.6％和91.5％、79.0％和91.3％、88.2％和92.4％，相对标准偏差分别为3.1％和5.3％、3.1％和1.7％、3.2％和3.2％。肟菌酯在大豆和玉米中添加浓度为0.01、0.1和2.0mg/kg时，平均回收率分别为90.5％和82.3％、88.7％和80.5％、103％和89.3％，相对标准偏差分别为3.5％和3.4％、2.2％和1.7％、1.5％和2.6％。氟吡菌酰胺在大豆和玉米中添加浓度为0.01、0.1和2.0mg/kg时，平均回收率分别为98.0％和92.9％、91.0％和87.9％、102％和91.0％，相对标准偏差分别为1.0％和2.1％、1.7％和0.6％、1.8％和1.8％。
实施例2
取大豆、玉米样品适量，然后按照试验1.1和试验2.1过程进行前处理。
将所述样品待测液按照超高效液相色谱检测的条件和质谱检测的条件进行检测，检测结果见图7～12。
从图7～12可知，大豆和玉米样品中并未检测出丙硫菌唑、氟吡菌酰胺和氟吡菌酰胺。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测方法，包括以下步骤：
对待测样品进行提取，得到提取液；
所述待测样品为大豆样品和/或玉米样品；所述提取为依次进行第一提取和第二提取，所述第一提取的提取剂为水；所述第二提取的提取剂为甲酸乙腈溶液；所述甲酸乙腈溶液的体积浓度为1％；
将所述提取液进行分散固相萃取，得到待测样品液；所述分散固相萃取的填料为乙二胺基-N-丙基硅烷化硅胶、C18填料和无水MgSO4的混合物；所述填料中乙二胺基-N-丙基硅烷化硅胶和无水MgSO4质量比为1：3；所述填料中乙二胺基-N-丙基硅烷化硅胶和C18填料的质量比为1：1；所述乙二胺基-N-丙基硅烷化硅胶和所述提取液的用量比为50mg：1.5mL；
对所述待测样品液进行超高效液相色谱串联质谱检测，得到丙硫菌唑、肟菌酯和氟吡菌酰胺的检测结果；
所述超高效液相色谱串联质谱检测包括超高效液相色谱检测和质谱检测；
所述超高效液相色谱检测的条件包括：流动相体系为流动相A和流动相B，所述流动相A为乙酸铵水溶液，所述流动相B为甲醇；所述乙酸铵水溶液的浓度为2mmol/L；
洗脱方式为梯度洗脱；
所述梯度洗脱的程序为：
0.0～2.0min：所述流动相A的体积百分含量由55％匀速减少到20％；
2.0～4.0min：所述流动相A的体积百分含量由20％匀速减少到2％；
4.0～4.5min：所述流动相A的体积百分含量为2％；
4.5～4.6min：所述流动相A的体积百分含量由2％匀速增加到55％；
4.6min～6.5min：所述流动相A的体积百分含量为55％；
所述质谱检测的条件包括：离子源为电喷雾离子源；检测方式为多反应监测扫描模式；离子源温度为550℃；所述超高效液相色谱检测的色谱柱为Waters acquity
Figure FDA0004223177420000011
BEHC18柱；柱温为40℃；进样量为2.0μL；所述流动相体系的流速为300μL/min。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品和第一提取的提取剂的用量比为2g：2～5mL。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述第一提取为第一涡旋提取，所述第一涡旋提取的转速为2000～2500rpm；所述第一提取的时间为1～5min。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品和第二提取的提取剂的用量比为2g：10～20mL。
5.根据权利要求1或4所述的检测方法，其特征在于，所述第二提取为第二涡旋提取，所述第二涡旋提取的转速为2000～2500rpm；所述第二提取的时间为20～30min。
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