CN1141101C - 治疗乙肝的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于治疗乙肝的纯中药药物及其制备方法，该药物中的有效成分是有来自中药胡黄连的环烯醚萜甙类化合物，且其中的主要成分为胡黄连甙-II，本发明还提供了该中药的制剂剂型，尤其是注射用冻干粉针剂。经药理药效学试验表明，本发明胡黄连提取物制成的药剂可用于治疗乙肝，并在阴转率方面优于合成西药阿昔洛韦，可以代替干扰素、转移因子等西药制剂，具有良好的开发前景。

Description

治疗乙肝的药物及其制备方法

发明领域

本发明涉及一种治疗乙型肝炎的中药药物组合物，尤其涉及以中药胡黄连中所含有的环烯醚萜甙为其药物有效成分的中药制剂，该药物对乙型肝炎的治疗有效果，本发明还提供了该药物的一种制备方法。

背景技术

肝病是危害人类健康的病症之一，特别是乙型肝炎，容易发展成癌病变，多年来始终是医学界欲重点研究和突破的课题之一。目前临床上治疗乙肝还没有特效药，多采用例如合成药阿昔洛韦(无环鸟苷)一类的抗病毒药物，欲提高用来治疗乙肝的效果需要配合使用干扰素。据报道阿昔洛韦与干扰素合用对治疗乙肝有疗效，但是干扰素价格昂贵，普通患者长期服用难以承受，同时，西药的副作用，及长期服用使体内毒菌产生抗药性，是困绕医学界的一个重要问题，也是促使制药界不间断地投入财力物力，推出新药的主要目的。

胡黄连是玄参科植物胡黄连Picrorhiza scrophu lariiflora Pennell的干燥根茎，是多年生草本植物，生长于高寒地区的岩山上及石堆中、或浅土层的向阳处，分布于四川西部、云南西北部、西藏南部。据文献记载，胡黄连中含有环烯醚萜甙类(又称胡黄连素或胡黄连总甙)、三萜甙、酚类、有机酸及胡黄连醇、胡黄连甾醇、香荚兰已酮、及钙、镁、钾等十四种金属元素。其中，胡黄连素(或胡黄连总甙)不是一个简单的化合物，而是包括胡黄连甙-I(Pricroside-I)、胡黄连甙(kutkoside)和胡黄连甙-II在内的环烯醚萜甙混合物。

据药典记载，胡黄连根的提取物有利胆、抗菌作用，可用于肝炎及尿路感染的治疗。在传统的中医疗法中，只能是水煎后服用，这种传统方法一是难以最大程度发挥药效，从另一方面讲，中药的服用不方便已是公知的。通过对中药中有效成分的药效研究，进而实现对该天然成分的提取和利用，制造出在药效上等同甚至优于合成药，而在毒性上优于合成药的纯中药制剂，特别是纯中药注射针剂，这是对传统医学的发展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可治疗乙型肝炎的中药药物组合物，其中的有效成分是来自胡黄连中药的环烯醚萜甙类化合物，亦称胡黄连总甙提取物。

本发明进一步提供了以所述胡黄连总甙提取物为活性成分、用于治疗乙肝的纯中药药物制剂和相应的药物剂型。

本发明的另一个目的在于提供用于治疗乙肝的该纯中药药物的制备方法，特别是胡黄连总甙提取物的制备方法。

本发明提供的药物组合物，其含有从胡黄连原料药得到的乙醇提取物，该提取物的组成中包括了胡黄连甙-I、胡黄连甙-II、胡黄连酚甙-II、及一些三萜甙类化合物，即胡黄连总甙提取物，其中的主要活性成分是胡黄连甙-II，从药效学角度出发，作为本发明用于治疗乙肝的药物组合物，所述胡黄连总甙提取物中的胡黄连甙-II的含量在21％以上，最好不低于55％。

在此基础上，本发明还研究提出了一种治疗乙肝的纯中药药物制剂，该中药药物以上述胡黄连总甙提取物为有效活性成分，并包括了药剂学上可接受的辅料组分。

本发明的药物制剂包括针剂和口服剂，其中口服剂包括胶囊剂、口服液、片剂、颗粒剂等，针剂，特别是注射用粉针剂则要求其有效成分中胡黄连甙-II的含有量不低于80％，尤其是不低于90％。

本发明还提供了该纯中药药物制剂的一种制备方法，其包括：以胡黄连为原料，用乙醇提取，并经纯化分离制取胡黄连总甙提取物，使该提取物中胡黄连甙-II的含量在21％以上；以该胡黄连总甙提取物为有效成分，按照药剂学方法制备成要求的药物制剂。

胡黄连原料药一般是在秋季采挖，除去须根及泥沙后晒干保存，在用于提取前应先粉碎，通常要求通过20-40目筛，以利于其中有效成分被充分提取。从生产角度考虑，本发明选用的胡黄连药材中，包括了上述各种胡黄连甙化合物的总甙含量应该不低于18％。

根据本发明的比较优选的实施方案，提取胡黄连总甙提取物的方法包括如下步骤：

(1)胡黄连原料药粉碎后加入浓度在50％以上的乙醇提取；

(2)60℃以下减压浓缩该乙醇提取液回收乙醇；

(3)将上述浓缩后的提取液加入氧化铝柱中，用70-80％的乙醇洗脱至经检测洗脱液中无胡黄连总甙成分(一般情况下以胡黄连甙-II记)；

(4)洗脱液在60℃以下减压浓缩回收乙醇至膏状。

上述提取步骤中，乙醇的浓度不能小于50％，从提高提取率的角度考虑，乙醇的浓度越高越好，从生产和成本角度考虑，优选使用约70-80％浓度的乙醇进行原料的提取，提取方法可以是渗漉、回流，或其它可行的操作方式，乙醇与原料药之间应保持比较大的比例，以保证提取的完全，可以使用原料重量的约10-20倍的乙醇溶液渗漉或直接回流(如有必要，可采取多次回流提取)，优选采用渗漉，将原料药装入渗漉器，使加入的乙醇浸没原料，渗出液从下部流出，同时不断添加溶剂保持浸没原料，将渗漉液合并进行减压浓缩，从理论上讲低温有利于提取成分的稳定，但会增加生产过程的成本，所以优选在50-60℃或更低温度下对提取液减压浓缩。在实际生产中要求尽可能地回收乙醇，将浓缩液的浓度控制到约2毫升药液相当于1克生药量，或通过测定其相对密度D_20℃为1.12-1.15来控制浓缩过程的完成。

为有利于有效成分的分离，浓缩后的提取液需要分散在适当的载体上，例如本发明的技术方案中是使用了氧化铝颗粒，通常是中性氧化铝，但不排除其它可行的载体物质，使浓缩液被其2-4倍量的氧化铝颗粒所分散，然后使用乙醇洗脱。根据本发明优选的技术方案，将事先烘干的、粒度为180-200目的氧化铝装柱，所用层析柱的规格和材质无特别要求，可根据实际生产的需要选定，并按常规操作方法装填，但装柱量应不少于柱高的2/3，最好选用直径与柱高之比在大约1∶6～1∶8范围内的柱。然后将浓缩药液加入氧化铝柱中，使用乙醇洗脱时，洗脱速度优选为约850～1500ml/分钟。

收集的洗脱液在60℃以下减压浓缩回收乙醇至流浸膏状，优选浓缩温度50-60℃，此时真空度约在400-600Mpa，所述流浸膏状，其1毫升相当于约1-2克生药量。经进一步挥发溶剂，真空干燥，粉碎，即可得到所述胡黄连总甙提取物粉末。

根据本发明的技术方案，该中药制剂剂型可以是注射针剂或口服制剂，其中口服制剂包括胶囊剂、口服液、片剂、颗粒剂等。在制备口服制剂时，选用的辅型剂可以是淀粉、糊精或环糊精、蔗糖、硬脂酸盐等常规充填剂，制剂的后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定，故在此不予详述。

本发明优选的剂型是注射剂，特别是注射用冻干粉针剂，可以按照制药学常规方法精制处理提取物制成粉针剂。作为制备方法的一个优选方案，制备过程进一步包括将已浓缩成膏状的总甙提取物用70-80％的乙醇稀释后加入氧化铝柱，用85-90％乙醇溶液梯度洗脱至洗脱液中无胡黄连甙-II，洗脱液于60℃以下减压浓缩回收乙醇至无醇味；将得到的浓缩液加入经预处理后的聚酰胺柱中，然后以90％浓度以上的乙醇再次梯度洗脱至洗脱液无无胡黄连甙-II，洗脱液在60℃以下减压浓缩回收乙醇，得到的浓缩物按常规方法处理并添加辅料制成注射用冻干粉针剂。

本发明制备方法所用聚酰胺柱可使用普通规格的聚酰胺产品装填得到，优选使用聚酰胺的粒度为60～90目，对所用层析柱的规格和材质亦无特殊要求，柱的尺寸可根据实际处理量确定，但最好选用直径与柱高之比在1∶6～1∶8范围内的层析柱，且装柱量应不超过柱高的2/3。

本发明的创造性在于通过科学可行的方法从胡黄连中药中提取分离出了胡黄连总甙提取物，并进一步将该提取物作为有效成分制备成用于治疗肝病，特别是治疗乙肝的中药制剂。如前面所述，本发明提供的药物的有效成分是包括胡黄连甙-II的胡黄连总甙提取物，为达到发明目的，对原料药中胡黄连总甙的提取率应在55％以上，同时该提取物中胡黄连甙-II的含量也应不低于21％。

为保证药物的质量，在生产过程中需要对洗脱液和最终提取物中的有效成分含量随时进行检测。用于检测所述甙类化合物的方法可以借助任何可行的检测手段和公知的方法，本发明在此提出了一套可行的检测方法。

首先，通过高效液相色谱分析，与胡黄连甙-II标准品谱图对照，证明了在总提取物中含有以胡黄连甙-II为主要成分的胡黄连总甙混合物(从谱图中计算主要成分的峰面积，胡黄连甙-II约占到50-60％左右)。从紫外吸收光谱中可看到，胡黄连甙-II标准品和胡黄连总甙提取物在265nm均有最大吸收峰，所以应该认为胡黄连甙-II同胡黄连总甙的紫外吸收图谱基本相一致，据此本发明采用了紫外一可见光分光光度法标准曲线粗略检测总甙的含量；同时，采用高效液相外标法，通过标准曲线检测和控制胡黄连总甙提取物中的胡黄连甙-II含量，经实际生产中使用证明，检测结果的重现性好。应该说明的是，该方法仅作为本发明产品的质量控制手段之一，不应排除其它任何可满足要求的方法和操作。特别是总甙混合物的提取率含量测定对于本领域的技术人员是很容易实现的，也可以如上述以胡黄连甙-II为标示通过对比提取物与原料物在265nm的吸光值得到总甙提取物中有效成分的提取率，而其中含有胡黄连甙-II的有效量则可通过HPLC外标法测得。

附图说明

附图1是胡黄连甙-II标准品的HPLC谱图。

附图2是本发明制备的胡黄连总甙提取物的HPLC谱图。

提取物中胡黄连甙-II的HPLC测定

HPLC条件：

流动相：甲醇∶水＝39∶61

检测波长：265nm

流速：1ml/分钟

1、标准曲线

准确称取胡黄连甙-II标准品9.0mg(北京九生源生物医药研究所提供)，以无水甲醇溶解转入10ml容量瓶中并定容至刻度，从中精密量取0.25ml、0.75ml、1.25ml、2.25ml，分别置于5ml容量瓶中用无水甲醇稀释至刻度定容，分别从中精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，作出谱图，如图1所示，在15.950分钟时有最大峰。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，可绘制出标准曲线：

线性范围：0.45～4.05μg

回归方程：Y＝1E+0.6X-117231

决定系数：R²＝0.9999

2、胡黄连总甙提取物中胡黄连甙-II的测定

准确称取胡黄连总甙提取物40mg，以无水甲醇溶解转入50ml容量瓶中并定容至刻度，过0.22μm微孔滤膜，作为供试品溶液。精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，求出峰面积代入回归方程算出胡黄连甙-II的含量。

发明人使用以上所述方法或实施例的胶囊药剂及注射针剂完成了以下药理和药效试验：

一、急性毒性试验

用Wistar健康小鼠，采用口服和腹腔注射两种给药方式，测定胡黄连胶囊的半致死量(LD₅₀)：口服为15.64±1.28g/kg，腹腔为8.35±0.98g/kg。口服半致死量为临床用量的约150倍(临床使用剂量为100-200mg/kg)。

二、长期毒性试验

用Wistar种大鼠180只，体重70-90克，雌雄各半，随机分成4组(对照组及三个剂量组)，对照组和大剂量组50只，中剂量组和小剂量组40只，每组雌雄各半。试验用药为实施例2的胡黄连胶囊。

各剂量组分别为临床用药量的约50倍、30倍和10倍，即大剂量组5g/kg，中剂量组3g/kg，小剂量组1g/kg，正常对照组灌等量的蒸馏水。灌胃给药每日一次，连续六个月，试验期间每天观察记录动物一般状态，每周测动物体重一次，试验结束后，各组动物分别称体重，测定各项指标(包括心电图检查、血液学检查、生化及病理学检查)。在试验的第三个月处死大剂量组和对照组动物各10只，在试验的第六个月处死大部分动物，即每组中各处死30只，保留10只停药一个月观察药物可能有的毒性影响和恢复情况，于第七个月处死。

分别对给药组和对照组动物进行各项指标的测定，大鼠灌服药囊6个月以后，三个剂量组的大鼠活动、食欲、大小便及生长发育均无显著性影响，各给药组动物的血象、肝肾功能、心电图及主要脏器指标与对照组比较均无显著性差异(经t检验结果统计，p＞0.05)，且均在正常生理范围内。病理学检查表明对照组及各给药组动物各脏器组织均为正常组织结构，未见药物中毒性病理形态改变。

三、一般药效学试验

1、胡黄连胶囊对大鼠慢性四氯化碳损伤的保肝作用

取Wistar雄性大鼠120只，随机分成空白对照组、四氯化碳模型组、联苯双酯阳性药组、胡黄连胶囊大剂量组、胡黄连胶囊中剂量组、胡黄连胶囊小剂量组，共6个组。除空白对照组外，其余各组均皮下注射40％四氯化碳油溶液3ml/kg，每周2次，连续15周，于第6周注射四氯化碳24小时后从动物尾部取血测定SGPT和SGOT，并解剖少量动物观察肝纤维化程度。自注射四氯化碳第7周开始，按联苯双酯200mg/kg、胡黄连胶囊大剂量200mg/kg、胡黄连胶囊中剂量100mg/kg、胡黄连胶囊小剂量50mg/kg、灌胃给药，每日1次，连续60天。末次给药后取血测定SGPT、SGOT，总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、白蛋白/球蛋白(A/G)比值及唾液酸，随机取部分肝脏测定羟脯氨酸含量，并取肝脏做病理组织学检查，结果如下：

1)对四氯化碳(CCl₄)致慢性肝损伤大鼠的影响

组别	动物数	SGPTS(U/L)		SGOT(U/L)
						给药前	给药后	给药前	给药后
		正常对照组	10	17.44±4.39	16.89±5.06					56.22±5.95	71.00±14.34
CCl4组	10					150.11±12.893	190.00±26.693	136.89±20.963	171.44±39.083
		联苯双酯组	10	152.44±21.543	114.22±39.846					134.89±22.983	130.43±32.74
高剂量组	10					159.11±53.193	98.29±61.225	105.88±12.223	195.57±38.134
		中剂量组	10	158.00±42.073	118.14±33.80					114.75±6.203	115.71±28.26
低剂量组	10					144.78±23.263	134.56±65.234	121.33±17.413	128.78±36.324

与正常对照组相比：³p＜0.001；

与CCl₄组相比：⁴p＜0.05，⁵p＜0.01，⁶p＜0.001

2)对四氯化碳(CCl₄)致大鼠慢性肝损伤血清蛋白的作用(x±s)

组别	动物数	TP	ALB	A/G
					(G/L)	(G/L)
		正常对照组	10				85.78±6.74	43.83±2.48	1.049±0.202
CCl4组	10			80.52±1.641	34.82±1.773	0.717±0.0383
		联苯双酯组	10				83.82±3.244	38.37±4.164	0.974±0.3564
高剂量组	10			84.52±2.466	37.40±2.034	0.808±0.0765
		中剂量组	10				84.55±3.984	37.75±3.074	0.820±0.1154
低剂量组	10			82.93±2.294	39.09±1.626	0.918±0.0906

与正常对照组相比：¹p＜0.05，²p＜0.01，³p＜0.001；

与CCl₄组相比：⁴p＜0.05，⁵p＜0.01，⁶p＜0.001

从该结果中可得出，大鼠皮下注射四氯化碳，至第6周可明显损伤肝功能，使转氨酶升高，解剖少量死亡动物可见明显肝细胞变性坏死、纤维化形成。试验结束时，损伤对照组大鼠血清SGPT和SGOT、唾液酸和肝组织羟脯氨酸水平明显升高，血清TP、ALB及A/G亦有显著的损伤性改变，病理组织学检查可见肝硬化形成，而给药组用胡黄连胶囊治疗60天，各剂量组对四氯化碳引起大鼠肝损伤的转氨酶升高有明显降低作用，对血清ALB及A/G有明显改善，且能抑制四氯化碳损伤致大鼠肝硬化的血清唾液酸的升高及肝组织羟脯氨酸的升高，病理组织学检查也显示胡黄连胶囊能明显减轻肝纤维化程度，可改善肝功能，对肝纤维化的形成有治疗作用。

2、胡黄连胶囊对大鼠的利胆作用

雄性大鼠50只，称重后分成5组。实验前12小时禁食不禁水，实验时每只鼠以戊巴比妥钠60mg/kg腹腔注射麻醉后，仰位固定于固定板上，沿腹正中线切开约2cm，打开腹腔，找到胃幽门部，翻转十二指肠，在十二指肠降部肠系膜中找到白色有韧性的胆管，在其下穿2根丝线，结扎乳头部，向肝脏方向作“V”形切口，插入塑料管，即可见有淡黄绿色胆汁流出，结扎固定塑料管，用烧杯收集胆汁。手术后用止血钳夹闭腹壁，以盐水纱布覆盖，待稳定20分钟后，先收集30分钟胆汁，然后各组大鼠分别由十二指肠给予胡黄连胶囊1ml/100g(实施例2的胶囊使用时配成10g/dl浓度)，阴性对照组注入等容量生理盐水，阳性对照组给予去氢胆酸1ml/100g。

给药后每隔30分钟收集胆汁一次，共3次，记录给药前后的胆汁，计算给药后胆汁流量增加的百分率：

结果显示，给药后1小时，小剂量组胆汁流量增加30.3％，中剂量组胆汁流量增加37.5％，大剂量组胆汁流量增加45.2％，阳性对照组的胆汁流量增加为32.3％，经t检验，与给药前相比差异显著或非常显著。

3、胡黄连胶囊对雏鸭乙肝模型鸭乙型肝炎病毒(DHBSAG)的表达和影响

取1∶10稀释的DHBSAG阳性血清200μl，腹腔接种一日龄北京雏鸭，正常饲养7天后，足静脉取血，分离血清，测定DHBSAG。

取其中成阳性的鸭53只，随机分为4组，即高、低剂量组、无环鸟苷治疗组和对照组。高、低剂量组分别给予胡黄连胶囊(50mg/lg和10mg/kg，ig，Big)，无环鸟苷治疗组(25mg/kg，ip，Bid)，对照组给予等量的生理盐水，于给药后的第10天和停药后的第3天足静脉取血，分离血清，-20℃冰箱保存待测。

用pH9.6的碳酸盐缓冲液稀释纯化鼠抗DHBSAG(解放军302医院提供)至1∶10000，加入40孔聚乙烯塑料，链霉素(ST)液洗三次，每次5分钟，每孔加入100μl包被液37℃水浴1小时，倾去包被液，以磷酸-链霉素(PB-ST)液洗三次，每次5分钟，每孔加200μl的10％牛血清(CFS)封闭，37℃水浴2小时，PB-ST洗板后，每孔加入100μl待测血清样品，同时设阳性、阴性和空白对照孔。37℃水浴1小时，PB-ST洗板，每孔加入1∶600稀释的酶标鼠抗-DHBSAG(解放军302医院提供)100μl，37℃水浴1.5小时，每孔加入100μl的邻苯二胺(OPD)底物，37℃避光放置15分钟，加1滴2M的硫酸终止反应，用DG-3022型酶联免疫检测仪测定光密度OD₄₉₀的值。

按照以下公式计算出各组动物DHBSAG表达水平(P/N)：

判定：P/N＞2.1为阳性，P/N在1.5-2.1之间为可疑，P/N＜1.5为阴性。各试验组的测定结果如下：(注：^*p＜0.01)

                  给药前       给药后         停药后3天高剂量组(50mg/kg)    0.36±0.15    0.19±0.12*    0.19±0.13*低剂量组(10mg/kg)    0.37±0.13    0.21±0.11*    0.21±0.12*无环鸟苷组(25mg/kg)  0.35±0.14    0.20±0.13*    0.20±0.13*对照组               0.36±0.13    0.37±0.12     0.38±0.14

从以上结果看出，治疗后DHBSAG表达水平呈显著下降，阳性对照物无环鸟苷治疗后DHBSAG表达水平亦呈下降，停药后3天，三组的DHBSAG表达水平与治疗后相比没有显著变化。

根据该结果可统计出阴转率：

                   高剂量组  低剂量组   无环鸟苷组   对照组给药前的阳性鸭(只)     14        13         13           12给药后的阴性鸭(只)     9         6          7            0停药后阴性鸭(只)       9         6          7            0阴转率(％)             64        46         54           0

其中，高、低剂量组在治疗前后DHBSAG的阴转率分别为64％和46％，阳性对照物无环鸟苷治疗前后DHBSAG的阴转率为54％，高剂量组与阳性对照组比较有显著的差异。三组治疗组治疗后与生理盐水组比较都有显著的统计学差异(p＜0.05或p＜0.01)。由此可以证明，本发明的胡黄连胶囊对雏鸭乙型肝炎模型病毒有明显的以致作用。

从以上研究试验可看到，本发明采用纯天然中药-胡黄连药物治疗乙型肝炎，具有抑制乙肝病毒复制，保肝、降低转氨酶的作用，同时还有利胆降脂作用，无反弹现象，可以代替干扰素、转移因子等西药制剂，成为具有良好开发前景的纯中药制剂。

具体实施方式

以下通过实施例详细说明本发明技术方案的实施，但不应以此限定本发明的实施范围。

实施例1

取干燥的胡黄连原料药粉碎过20目筛，装入渗漉器中，用15倍重量的80％乙醇渗漉，渗漉过程中保持药材始终被乙醇浸没，渗漉液的流速为850毫升/分钟，收集渗漉液于约58℃以下减压浓缩回收乙醇，直至浓缩液浓度为生药量的约2倍体积(即约2ml药液相当于1g生药)。

取药液量3倍左右的中性氧化铝颗粒，粒度为通过200目筛，装柱，使氧化铝装柱量为柱的约2/3，将上述浓缩药液倒入柱中，以80％的乙醇溶液洗脱，洗脱速度900-1000ml/分钟，收集洗脱液，随时检测，至洗脱液中不含胡黄连总甙。洗脱液合并于60℃以下减压浓缩回收乙醇至流浸膏状(1ml相当于约1克生药量)，其中胡黄连甙-II的含量24.5％。(或直接干燥粉碎，加入辅料制成口服药剂)。

上述总甙提取物用80％的乙醇稀释后加入氧化铝柱中，用90％乙醇溶液洗脱至洗脱液中无甙-II，洗脱液于60℃以下减压浓缩回收乙醇至无醇味；将得到的浓缩液加入经予处理后的聚酰胺柱中，然后以约95％浓度以上的乙醇洗脱至洗脱液无甙-II，洗脱液在60℃以下减压浓缩回收乙醇至无醇味，测定该浓缩物中胡黄连甙-II含量为92％。

浓缩物以蒸馏水稀释后，进行分装和灭菌，制成注射针剂。

或该浓缩物以注射用水稀释，稀释液用5层滤纸抽滤，滤液再经G₆垂融漏斗过滤，滤液通过超滤法用0.22μm微孔滤膜再次过滤精制，然后分装，冻干，制成注射用冻干粉针剂。

本实施例中的胡黄连总甙提取物的HPLC谱图见附图2，操作方法及胡黄连甙-II成分检测均采用前述HPLC方法，可知在15.147分钟时有最大峰。

总甙提取物的测定可以其中所含甙-II粗略标示，通过紫外分光光度法加以控制：

1、标准曲线

精密称取胡黄连甙-II(由北京九生源生物医药研究所提供)0.0031g，以无水甲醇溶解并定容至50ml，从中分别精密量取0.9ml、1.7ml、2.5ml、3.3ml、4.1ml，分别用无水甲醇稀释至50ml，使用紫外分光光度计测定其在265nm的吸光值，绘制出标准曲线。

线性范围：11.16～50.84ug/ml

回归方程：Y＝49.66X+0.035

决定系数：R＝1.000

2、总甙含量的测定

(1)原料中总甙

准确称取胡黄连原料粉末0.2g，精密加入甲醇50ml，超声提取30分钟，过滤后残渣再次加入甲醇50ml超声提取30分钟，合并滤液，60℃以下减压浓缩至干，加蒸馏水20ml溶解后用氯仿萃取3次，每次20ml，合并水层60℃以下减压浓缩至干，产物用无水甲醇溶解并定容至50ml，从中精密量取1ml，加入无水甲醇稀释至50ml，265nm比色，测定吸光值，比照甙-II的标准曲线，换算标示出总甙大约含量，约19％；

(2)提取物中总甙

准确称取胡黄连总甙提取物0.1g，用20ml蒸馏水溶解，氯仿萃取3次，每次20ml，弃去氯仿层，取水层在60℃减压回收溶剂至干，在用无水甲醇溶解并定容至50ml，从中精密量取1ml，用无水甲醇稀释至50ml，摇匀作为供试品溶液，使用紫外分光光度计测定其在265nm的吸光值，根据标准曲线标示总甙的大约含量。

实施例2

取干燥的胡黄连原料药粉碎过20目筛，装入渗漉器中，用10倍重量的70％乙醇渗漉，渗漉过程中保持药材始终被乙醇浸没，渗漉液的流速为900毫升/分钟，收集渗漉液于60℃以下减压浓缩回收乙醇，直至浓缩液浓度达到相当于生药量的2倍体积(即约2ml药液相当于1g生药)，此时相对密度D_20℃为1.12-1.15。

取药液量2倍左右的氧化铝颗粒，粒度为通过180-200目筛，装柱，使氧化铝装柱量为柱的约2/3，将上述浓缩药液倒入柱中，以70％的乙醇溶液洗脱，洗脱速度1200-1300ml/分钟，收集洗脱液，随时检测，至洗脱液中不含胡黄连总甙成分。洗脱液合并于60℃以下减压浓缩回收乙醇至流浸膏状(1ml相当于约1克生药量)，转入搪瓷盘中，加热保持60℃蒸发溶剂至稠膏状，然后置于真空干燥箱中约50-60℃真空干燥，将干燥物进行疏松，粉碎，过80目筛，得到棕黄色细粉，测定其中胡黄连甙-II的含量23％。

向得到的细粉中混入15％淀粉浆混匀制成软材，经10～20目筛制粒及40～60℃下干燥，分装入胶囊，即成为本发明的胡黄连胶囊制剂，规格为200mg/粒。

实施例3

按照实施例2的方法制备出总甙提取物粉末，然后加入物料量5～20％的干淀粉及1～5％的硬脂酸镁等，经混合，制粒，干燥，压片，即制得片剂。

实施例4

实施例2制备的总甙提取物粉末，加入蔗糖水及常规量的防腐剂、稳定剂等辅料，过滤、灭菌，分装入10ml瓶中，制成口服液。

Claims (8)

1、一种治疗乙肝的药物，其中的活性成分为用浓度在50％以上的乙醇作溶剂，从胡黄连原料药中提取得到的胡黄连总甙提取物，且所述胡黄连总甙提取物中胡黄连甙-II的含量在21％以上，该药物中还包括药剂学可接受的辅料组分。

2、权利要求1所述的治疗乙肝的药物，其药物剂型包括注射针剂和口服制剂。

3、权利要求2所述的治疗乙肝的药物，其剂型为注射用冻干粉针剂，且所述胡黄连总甙提取物中的胡黄连甙-II含量在90％以上。

4、权利要求1所述治疗乙肝的药物的制备方法，其包括：以胡黄连中药为原料，用乙醇提取，并经纯化分离制取胡黄连总甙提取物，该提取物中胡黄连甙-II的含量为21％以上；以该提取物为有效成分按照药剂学方法制备成制剂。

5、权利要求4所述的制备方法，其中，提取胡黄连总甙提取物的方法包括如下步骤：

(1)用50％浓度以上的乙醇提取胡黄连原料药；

(2)60℃以下减压浓缩该乙醇提取液；

(3)将上述浓缩后的提取液加入氧化铝柱中，用70-80％的乙醇洗脱至检测洗脱液中无胡黄连总甙；

(4)洗脱液在60℃以下减压浓缩至膏状。

6、权利要求4所述的制备方法，其中，药物制剂的制备包括按照药剂学方法制备成注射针剂和口服剂。

7、权利要求5所述的制备方法，其还包括将已浓缩成膏状的胡黄连总甙提取物经乙醇稀释后用聚酰胺柱进一步精制的过程，得到的精制产物按常规制药工艺处理并添加辅料制成注射用冻干粉针剂。

8、权利要求7所述的制备方法，其中，所述进一步精制包括：将已浓缩成膏状的总甙提取物用70-80％的乙醇稀释后加入氧化铝柱中，用85-90％乙醇溶液梯度洗脱至洗脱液中无胡黄连总甙，洗脱液于60℃以下减压浓缩回收乙醇至无醇味；将得到的浓缩液加入经予处理后的聚酰胺柱中，用90％浓度以上的乙醇洗脱至洗脱液中无胡黄连甙-II，收集洗脱液在60℃以下减压浓缩回收乙醇，得到的浓缩物按常规方法处理并添加辅料制成注射用冻干粉针剂。