CN103656680B - 一种microRNA let-7e在制备抗缺血性心律失常药物中的应用 - Google Patents
一种microRNA let-7e在制备抗缺血性心律失常药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103656680B CN103656680B CN201310652769.7A CN201310652769A CN103656680B CN 103656680 B CN103656680 B CN 103656680B CN 201310652769 A CN201310652769 A CN 201310652769A CN 103656680 B CN103656680 B CN 103656680B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- micrornalet
- expression
- microrna
- rat
- ischemia
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及一种microRNA？let-7e在制备抗缺血性心律失常药物中的应用。microRNA？let-7e可以抑制β1-AR的表达，具体表现为抑制乳鼠心肌细胞和大鼠心肌的β1-AR，抑制急性缺血心肌β1-AR的表达，显著对抗急性缺血心肌心律失常的发生和发展。本发明为缺血后心肌的保护及恶性心律失常的预防提供了新的思路和方式。
Description
技术领域
本发明涉及一种microRNAlet-7e在制备抗缺血性心律失常药物中的应用，属于生物医药领域。
背景技术
在我国急性心肌梗死的发病率不断增加，且日趋年轻化。心律失常是其重要的并发症之一，并可引发猝死。发现新的有效的抗心律失常和心肌缺血的药物是保护梗死后的心肌功能，预防恶性心律失常，降低死亡率的重要手段和措施。
急性心肌梗死后心脏泵血功能下降、血液供应不足。此时，交感神经兴奋，突触前膜释放大量内源性儿茶酚胺类物质，与心肌细胞膜上的β肾上腺素受体(β-AR)结合，一方面可以激活β肾上腺素受体（β-AR），另一方面可以增加心肌细胞β肾上腺素受体数目的表达。继而增强心肌收缩力，提高心率，增加心排血量。以增加心脏功能性代偿，但同时也增加了心肌耗氧量，使心肌细胞进一步缺血缺氧加重心肌缺血损伤，并诱发心律失常、休克或心力衰竭危及生命。
β受体阻断剂能够竞争性与β受体结合，拮抗β受体作用，降低心肌耗氧量，保护受损的心肌。临床上主要用于治疗高血压、冠心病、心力衰竭、心律失常、主动脉夹层、心肌病、遗传性QT延长综合征和左房室瓣脱垂。
microRNA(miRNA)是由21-25个核苷酸构成的分子，microRNA通过抑制其靶分子mRNA的翻译或者促进其降解而起到负性基因表达调控作用，随着近年研究的不断深入，人们发现微小RNA分子在细胞功能调控中有着广泛的作用。如microRNA参与了多种心脏疾病的发生和发展过程。如miR-1和miR-133通过靶向作用GJA1和KCNJ2致心律失常的发生,miR-126是一种内皮细胞特异性microRNA，在心肌梗死后维护血管的完整性。miR-21、miR-195、miR-133，miR-208参与了心肌肥厚发生发展过程，miR-21、miR-29参与了心肌纤维化的发生。
发明内容
本发明提供了一种microRNAlet-7e在制备抗缺血性心律失常药物中的应用。也包括含有microRNAlet-7e的载体或者宿主细胞在制备抗缺血性心律失常药物中的应用。
microRNAlet-7e不仅能够抑制正常心肌β1-肾上腺素受体（β1-AR）的表达，而且还能够抑制急性心肌缺血情况下心脏β1-AR的上调。另外，miRNAlet-7e能有效的抑制急性心肌缺血状态下心律失常的发生，其作用效果等同甚至优于传统的β-AR阻滞剂心得安及β1-AR阻滞剂美托洛尔。
与以往的β受体阻断剂的作用机制不同的是，microRNAlet-7e是通过抑制β1-受体蛋白的表达水平而发挥作用，并不是直接作用于受体的蛋白质。而传统的β受体抑制剂是直接作用于受体，而影响受体的功能。对于影响受体的表达而非直接作用于受体，这样可能使得对受体功能的影响更加明确。因此，microRNAlet-7e作为一种新型的β受体抑制剂，可应用于抗缺血性心律失常的预防和治疗。
附图说明
图1为microRNAlet-7e对β1-ARmRNA3’非翻译区（3’UTR）靶向作用的检测图，其中，图1A为Targetscan网站预测人类、大鼠和小鼠microRNAlet-7和β1-ARmRNA3’UTR的结合位点，图1B为荧光报告基因检测技术检测人类microRNAlet-7对β1-ARmRNA3’UTR的靶向结合作用图，图1C为荧光报告基因检测技术检测大鼠microRNAlet-7对β1-ARmRNA3’UTR的靶向结合作用图；
图2为microRNAlet-7e对乳鼠原代心肌细胞β1-AR表达的调节作用图，其中图2A为乳鼠心肌细胞分别转染let-7e拟似物、let-7e反义核苷酸（AMO-let-7e）和阴性对照序列（NC）后，心肌细胞内microRNAlet-7e的表达水平图；图2B为乳鼠心肌细胞分别转染let-7e拟似物、let-7e反义核苷酸（AMO-let-7e）和阴性对照序列后，β1-ARmRNA的表达水平图；图2C为乳鼠心肌细胞分别转染let-7e拟似物、let-7e反义核苷酸（AMO-let-7e）和阴性对照序列后，β1-AR蛋白的表达水平图；
图3为microRNAlet-7e对大鼠心脏β1-AR的表达的调控作用图，其中，图3A为大鼠心肌点注射慢病毒包装的前体let-7e、AMO-let-7e和阴性对照序列的质粒（慢病毒包装的质粒只是作为在体动物表达microRNAlet-7e、AMO-let-7e和阴性对照序列的一种方法）后，分别检测心脏注射区microRNAlet-7e的水平图；图3B为大鼠心肌点注射慢病毒包装的前体let-7e、AMO-let-7e和阴性对照序列的质粒后，分别检测心脏注射区β1-ARmRNA的水平图；图3C为大鼠心肌点注射慢病毒包装的前体let-7e、AMO-let-7e和阴性对照序列的质粒后，分别检测心脏注射区β1-AR的蛋白水平图；
图4为microRNAlet-7e调节急性缺血心脏β1-AR的表达图；
图5为图microRNAlet-7e抗大鼠缺血性心律失常作用图，其中图5A分别为检测过程中的正常（假手术对照，sham）、心肌缺血（MI）、室性早搏（PVC）、室性心动过速（VT）、室性颤动（VF）的心电图；图5B为各组大鼠心律失常评分图。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1microRNAlet-7抑制乳鼠心肌细胞和大鼠心脏β1-AR的表达
1、microRNAlet-7靶向作用于β1-ARmRNA的3’非翻译区
分别构建含有人和大鼠β1-ARmRNA3’非翻译区（3’UTR）的荧光基因报告质粒，与microRNAlet-7拟似物共转染至HEK-293细胞（购买自ATCC公司）中，转染36小时后，进行荧光检测。给予microRNAlet-7e后与正常对照组相比（#p<0.01），具有显著统计学意义，说明microRNAlet-7能够显著降低荧光强度，而当阴性对照质粒（阴性对照质粒为不含有microRNAlet-7结合位点的质粒）和microRNAlet-7拟似物共转染或将含有β1-ARmRNA3’UTR质粒与microRNAlet-7的阴性对照序列(不含有miRNA的种子序列)共转染时，荧光强度无明显改变。实验表明microRNAlet-7可以特异地靶向结合于β1-ARmRNA3’UTR，结果请见图1。
2、microRNAlet-7e抑制乳鼠心肌细胞β1-AR的表达
microRNAlet-7e对β1-AR的调节作用：培养原代乳鼠心肌细胞（该细胞由乳鼠心脏分离培养获得），将microRNAlet-7e拟似物、let-7e的反义核苷酸和let-7e的阴性对照序列（Negativecontrol，NC）,分别转染至乳鼠心肌细胞，36小时后，分别检测β1-AR信使RNA（mRNA）和蛋白质水平的表达，结果显示，心肌细胞给予microRNAlet-7e拟似物以后，β1-AR蛋白的表达水平与正常对照组相比显著降低（**p＜0.01vs正常对照组），具有显著统计学意义。microRNAlet-7e能够明显降低β1-AR蛋白的表达，而给予AMO-let-7e后，β1-AR的表达与正常对照组相比显著升高，说明AMO-let-7e通过抑制了内源性的microRNAlet-7e影响了β1-AR蛋白的表达，而给予microRNAlet-7e的阴性对照后，对于β1-AR的表达并没有影响。同时microRNAlet-7e对β1-ARmRNA表达水平没有明显的改变，说明microRNAlet-7e在转录后水平抑制了β1-ARmRNA的翻译而降低了β1-AR蛋白的表达，结果请见图2。
3、microRNAlet-7e抑制大鼠心肌β1-AR表达
将大鼠给予慢病毒载体（pLenti6.3/TO/V5-DESTvector，上海英骏生物技术有限公司）包装的前体microRNAlet-7e、AMO-let-7e和阴性对照序列，心肌多点注射后分别在心脏表达microRNAlet-7e、AMO-let-7e和阴性对照序列。实验结果表明，在大鼠心肌给予microRNAlet-7e后，大鼠心肌β1-AR表达显著降低，与正常对照组相比具有统计学意义（*p<0.05vs正常对照组），说明在大鼠心脏中的microRNAlet-7e同样能够抑制β1-AR的表达，且对β1-ARmRNA水平无改变，进一步确切说明microRNAlet-7e在转录后水平抑制β1-AR蛋白的表达，结果请见图3。
实施例2microRNAlet-7e逆转大鼠缺血心肌β1-AR表达的上调
将大鼠给予心肌点注射慢病毒载体包装的前体microRNAlet-7e、AMO-let7e和阴性对照序列的质粒(与microRNAlet-7e作为对照的一段不含有microRNAlet-7e种子序列的一段无关序列)，7天后结扎大鼠冠状动脉左前降支，6小时后，检测β1-AR的表达。在急性心肌缺血的大鼠心肌β1-AR蛋白表达与假手术对照组相比显著增高（**p<0.01vs假手术对照组），而给予急性心肌缺血大鼠给予慢病毒包装的前体microRNAlet-7e质粒后，β1-AR蛋白表达则明显降低，与心肌缺血大鼠相比具有显著统计学意义（#p<0.01vs急性心肌缺血组)，结果显示，miRMAlet-7e可以逆转缺血心脏β1-AR表达的上调，而给予阴性对照序列组的β1-AR的表达没有发生改变。说明let-7e特异性的调节缺血心脏β1-AR的表达，是缺血心肌β1-AR蛋白表达水平下调，保护心肌免受更严重的缺血缺氧，结果请见图4。
实施例3microRNAlet-7e抗心律失常作用
microRNAlet-7e可以通过抑制缺血心脏β1-AR的表达，对抗心律失常的发生与发展。
给予大鼠心肌点注射慢病毒载体包装的前体let-7e、AMO-let-7e和阴性对照序列。7天后，结扎大鼠冠状动脉左前降支，记录大鼠心电图，进行心律失常分析，给予心律失常评分。大鼠结扎建立急性心肌缺血后，心律失常评分明显增高（**p<0.05vs假手术组），说明心律失常发生的次数与持续时间明显增多。而给予microRNAlet-7e后与缺血大鼠相比心律失常评分显著降低（*p<0.05vs心肌缺血组），相比之下心肌缺血大鼠给予非选择性β-AR阻断剂普萘洛尔和选择性β1-AR阻断剂美托洛尔后，心律失常评分也有明显降低（#p<0.05vs心肌缺血组)，但microRNAlet-7e作用更为显著，说明microRNAlet-7e就有显著抗心律失常作用，而联合给予microRNAlet-7e和microRNAlet-7e的抑制剂AMO-let-7e后，let-7e的抗心律失常的作用消失，进一步明确了let-7e的抗心律失常作用。并且与非选择性β受体阻断剂和选择性β1受体阻断剂相比，microRNAlet-7e的抗心律失常作用更加显著，结果请见图5。
Claims (3)
1.microRNAlet-7e在制备抗缺血性心律失常药物中的应用。
2.一种含有microRNAlet-7e的载体在制备抗缺血性心律失常药物中的应用。
3.一种含有microRNAlet-7e的宿主细胞在制备抗缺血性心律失常药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310652769.7A CN103656680B (zh) | 2013-12-06 | 2013-12-06 | 一种microRNA let-7e在制备抗缺血性心律失常药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310652769.7A CN103656680B (zh) | 2013-12-06 | 2013-12-06 | 一种microRNA let-7e在制备抗缺血性心律失常药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103656680A CN103656680A (zh) | 2014-03-26 |
| CN103656680B true CN103656680B (zh) | 2016-04-20 |
Family
ID=50296234
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310652769.7A Active CN103656680B (zh) | 2013-12-06 | 2013-12-06 | 一种microRNA let-7e在制备抗缺血性心律失常药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103656680B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113018453B (zh) * | 2021-03-19 | 2023-04-14 | 河南省人民医院 | 一种靶向药物共递送纳米系统及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2584040A1 (en) * | 2011-10-17 | 2013-04-24 | Pharmahungary 2000 Kft. | Compounds for treatment of ischemic injury |
-
2013
- 2013-12-06 CN CN201310652769.7A patent/CN103656680B/zh active Active
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Let-7 in Cardiovascular Diseases,Heart Development and Cardiovascular Differentiation from Stem Cells;Mei-Hua Bao，et al;《Int.J.Mol.Sci》;20131121;第14卷;第23086-23102页 * |
| 缺血性心律失常相关微小RNA在大鼠心脏的表达变化;潘振伟 等;《哈尔滨医科大学学报》;20070430;第41卷(第2期);第95页摘要、右栏第4-7行，第97页附表 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103656680A (zh) | 2014-03-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pan et al. | MicroRNA-101 inhibited postinfarct cardiac fibrosis and improved left ventricular compliance via the FBJ osteosarcoma oncogene/transforming growth factor-β1 pathway | |
| Harada et al. | MicroRNA regulation and cardiac calcium signaling: role in cardiac disease and therapeutic potential | |
| Milliez et al. | Beneficial effects of delayed ivabradine treatment on cardiac anatomical and electrical remodeling in rat severe chronic heart failure | |
| US20120035243A1 (en) | Dual targeting of mir-208 and mir-499 in the treatment of cardiac disorders | |
| Gabisonia et al. | Gene therapy for heart failure: new perspectives | |
| Li et al. | let‐7e replacement yields potent anti‐arrhythmic efficacy via targeting beta 1‐adrenergic receptor in rat heart | |
| CN106978415B (zh) | 转运rna片段及其应用 | |
| JP2014503192A5 (zh) | ||
| US20190032058A1 (en) | Inhibition of oxidative stress in atrial fibrillation | |
| Liu et al. | The role of MicroRNAs in the cardiac response to exercise | |
| CN103656680B (zh) | 一种microRNA let-7e在制备抗缺血性心律失常药物中的应用 | |
| KR102552776B1 (ko) | miRNA를 포함하는 흑색종 전이 억제용 조성물 | |
| CN107881173A (zh) | 一种miRNA‑21小分子及其用途 | |
| KR101544602B1 (ko) | 인히빈 알파 siRNA를 발현하는 살모넬라 균주 및 이를 함유하는 항암제 조성물 | |
| EP2904102B1 (en) | Modulation of rna activity and vascular permeability | |
| WO2018167057A1 (en) | Microrna hsa-mir-665 in cardiac hypertrophy | |
| CN102973953B (zh) | miRNA-874及其反义核苷酸的用途 | |
| Pan et al. | The MicroRNA-210/Casp8ap2 pathway alleviates hypoxia-induced injury in myocardial cells by regulating apoptosis and autophagy | |
| Zhao et al. | Increased miR-223 expression promotes proliferation and migration of retinal endothelial cells and pathogenesis of diabetic retinopathy by targeting EIF4E3 and IGF-1R | |
| GONG et al. | Silencing miR-26a alleviates myocardial ischemia-reperfusion injury in rats | |
| CN116875603B (zh) | 一种靶向线粒体解偶联蛋白mRNA的miRNA分子及其应用 | |
| CN1247608C (zh) | 一种新型乳腺癌基因治疗药物hdm2－siRNA | |
| CN115887480B (zh) | Mxi1-0抑制剂在制备治疗低氧性肺动脉高压的制剂中的用途 | |
| CN105147714A (zh) | 小分子RNA的应用及Rho激酶抑制剂 | |
| He et al. | MicroRNA-146 inhibits epithelial-mesenchymal transition by regulating FOXM1 in lung cancer cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |