CN103385995B - 一种治疗心律失常的中药复方合剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗心律失常的中药复方合剂及其制备方法。该中药复方合剂是由党参、半夏、黄连、鬼箭羽、川芎、丹参、赤芍、炙甘草、酸枣仁、远志组成，经水煎、浓缩、静置取上清液，并灭菌后获得。本发明中药复方合剂具有益气活血、清心化痰安神之功效，主要用于治疗心律失常。

Description

一种治疗心律失常的中药复方合剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种治疗心律失常的中药复方合剂及其制备方法。

背景技术

心律失常（cardiac arrhythmia）是由于心脏激动的起源或传导异常所致的心律或心率的改变。在心血管系统疾病中，心律失常（cardiac arrhythmia）是最为严重的病症之一，不但可加重原有心脏疾病，如加快心力衰竭的进展，而且还可导致患者突然死亡，严重威胁人类健康。常见的心律失常有窦性心动过速、窦性心动过缓、窦性心律不齐、过早搏动、阵发性心动过速、心房颤动、房室传导阻滞等。

在中医医学领域，心律失常属于中医的心悸范畴。中医认为心律失常的主动病因有：心虚胆怯、心血不足、阴虚火旺、心阳不振、水饮凌心、瘀血阻络等。

目前心律失常的治疗方法主要为药物治疗与非药物治疗。常用的抗快速心律失常药物分为四大类，包括通道阻滞剂、β受体阻滞剂。对于缓慢性心律失常，一般选用增强自律性和加速传导的药物。虽然抗心律失常药物能减少心律失常发作，但仍存在很大的局限性。中医药在治疗心律失常上显示了一定优势，首先可以通过中医药的辨证论治减轻患者心悸等症状；其次，中医药具有副作用少、费用低、依从性好、疗效明显，便于随时调整用药方案等临床优势。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗心律失常的中药复方合剂及其制备方法。

本发明治疗心律失常的中药复方合剂中各组分原料药重量配比为：党参10-30g、半夏3-9g、黄连2-15g、鬼箭羽5-15g、川芎10-30g、丹参9-30g、赤芍6-15g、白芍10-15g、炙甘草6-15g、酸枣仁10-30g、远志6-10g。

本发明优选的治疗心律失常的中药复方合剂中各组分原料药重量配比为：党参15g、半夏9g、黄连10g、鬼箭羽15g、川芎15g、丹参30g、赤芍15g、白芍15g、炙甘草10g、酸枣仁30g、远志10g。

本发明治疗心律失常的中药复方合剂的制备方法，包括如下步骤：

a.取重量配比原料药物党参、半夏、黄连、鬼箭羽、川芎、丹参、赤芍、白芍、炙甘草、酸枣仁、远志备用；

b.将上述药物水煎2-4次，每次0.5-2小时，浓缩调pH值至6-8，静置10-36小时，取上清液，灭菌后，即得。

本发明优选的治疗心律失常的中药复方合剂的制备方法，包括如下步骤：

a.取重量配比原料药物党参15g、半夏9g、黄连10g、鬼箭羽15g、川芎15g、丹参30g、赤芍15g、白芍15g、炙甘草10g、酸枣仁30g、远志10g备用；

b.将上述药物水煎3次，每次1小时，浓缩调pH值至7，静置24小时，取上清液，灭菌后，即得。

本发明治疗心律失常的中药复方合剂的制备方法中，可以将本发明组合物有效成分与适当辅料制成药剂学上任何一种制剂；本发明药物的活性组分可以加入制备不同剂型时所需的各种常规辅料，如崩解剂、润滑剂、粘合剂等以常规的中药制剂方法制备成任何一种常用剂型，如片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、散剂、胶囊剂、崩解片、软胶囊、丸剂、冲剂、口服液、颗粒剂、滴丸剂、微丸、膏剂、软膏剂、硬膏剂等。

本发明治疗心律失常的中药复方合剂的制备方法中，将步骤a中重量配比原料药物按照常规的中药制剂方法制成任何一种口服制剂。

上述口服制剂包括胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液和丸剂。

本发明治疗心律失常的中药复方合剂的原料组成以及药物制备方法中原料药和提取溶剂用量在生产时可按照相应的比例增大或减少，如大规模生产可以以公斤或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或减小，但各组成之间的生药材料重量配比比例不变。

本发明治疗心律失常的中药复方合剂中，党参能补中、益气、生津；炙甘草补脾和胃，益气复脉，二者合用增强益气之功效。半夏辛燥化痰，降逆止呕，消痞散结；黄连入脾肺二经，兼入心经，有清心燥湿之功效。鬼箭羽、川芎、丹参、赤芍四者合用增强行气活血化瘀之功效。白芍、酸枣仁、远志合用养血柔肝，宁心安神，兼有祛痰之功效。诸药合用，不但能从根本益气，还能解决痰热、瘀血等标实之证，益气活血，清心化痰作用显著。

附图说明

图1是心电遥测2小时两组单发室性期前收缩个数分布图。

图2是异丙肾灌流前后两组的动作电位。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明做进一步详细说明，但这并非是对本发明的限制。

实施例1

a.取重量配比原料药物党参10g、半夏6g、黄连5g、鬼箭羽10g、川芎20g、丹参15g、赤芍10g、白芍12g、炙甘草6g、酸枣仁20g、远志6g备用；

b.将上述药物水煎2次，每次0.5小时，浓缩调pH值至6，静置10小时，取上清液，灭菌后，即得。

实施例2

a.取重量配比原料药物党参12g、半夏8g、黄连15g、鬼箭羽12g、川芎30g、丹参20g、赤芍12g、白芍10g、炙甘草8g、酸枣仁15g、远志8g备用；

b.将上述药物水煎4次，每次2小时，浓缩调pH值至8，静置36小时，取上清液，灭菌后，即得。

实施例3

a.取重量配比原料药物党参15g、半夏9g、黄连10g、鬼箭羽15g、川芎15g、丹参30g、赤芍15g、白芍15g、炙甘草10g、酸枣仁30g、远志10g备用；

b.将上述药物水煎3次，每次1小时，浓缩调pH值至7，静置24小时，取上清液，灭菌后，即得。

以下以实施例3制备的中药复方合剂药效学及作用机制研究实验为例，借以说明本发明中药复方合剂在应用中的有益效果。

实验例1中药复方合剂抗乌头碱致心律失常实验

1.材料与方法

1.1实验动物

清洁级健康雄性SD大鼠，体重200±20g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号：SCXK（京）2012-0001。

1.2实验药物与试剂

中药复方合剂：党参、黄连、半夏、鬼箭羽、川芎、丹参、赤芍、白芍、炙甘草、酸枣仁和远志饮片购自康仁堂，由东方医院制剂室水煮浓缩，药物终浓度4.13g/ml；

乌头碱：批号MUST-11031101，购自成都曼思特生物科技有限公司，乌头碱溶液浓度10μg/ml。

1.3实验仪器

RM6240型多通道信号处理系统，成都仪器厂；

ALC-IP微量泵，上海奥尔科特生物科技有限公司；

冷光手术灯，分析天平，电子秤，电脑，无菌手术器械，烧杯，量筒，定容瓶，移液器等。

1.4实验分组

空白对照组（WT）：给予蒸馏水3.48ml/kg/d灌胃；

中药低剂量组（LOW）：给予中药复方合剂1.74ml/kg/d灌胃；

中药中剂量组（MID）：给予中药复方合剂3.48ml/kg/d灌胃；

中药高剂量组（HIGH）：给予中药复方合剂6.96ml/kg/d灌胃；

1.5检测方法及指标

给药7天，末次给药1小时后，用乌拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉，将大鼠背位固定在手术台上，记录Ⅱ导心电图，并连接心电示波器，以观察心电图的变化（纸速50mm/s）。分别由股静脉恒速泵入乌头碱溶液（0.5ml/min/kg），记录出现室性期前收缩（PVBs）、室性心动过速（VT）、室颤（VF）及心脏停搏（CA）时间，并计算出现室性期前收缩、室性心动过速、室颤及心脏停搏出现时乌头碱用量。

1.6统计方法

使用SPSS13.0统计分析软件，实验数据以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析（One-Way ANOVA），P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

本实验采用的是乌头碱致心律失常的经典模型，实验结果见表1-1、1-2。

表1-1中药复方合剂抗乌头碱致心律失常时间表

*与WT比较，P<0.05，**与WT比较，P<0.01；

^△与LOW比较，P<0.05，^△△与LOW比较，P<0.01。

表1-2中药复方合剂抗乌头碱致心律失常用量表

*与WT比较，P<0.05，**与WT比较，P<0.01；

△与LOW比较，P<0.01。

结果显示：与空白对照组比较，中药低、中、高剂量组均可明显延迟室性期前收缩、室速及室颤出现时间（P<0.05，P<0.01，P<0.01），且中药中、高剂量组还可显著延迟心脏停搏出现时间（P<0.01）；中药低、中、高剂量组可明显增加室速出现时乌头碱用量（P<0.05，P<0.01，P<0.01），且中药中、高剂量组还可以明显增加室性期前收缩、室颤及心脏停搏出现时乌头碱用量（P<0.01）。

中药不同剂量组之间比较，与中药低剂量组比较，中药中、高剂量组可显著延迟室性期前收缩、室速及室颤出现时间（P<0.01），且能明显延迟心脏停搏出现时间（P<0.05，P<0.01）；中药中、高剂量组均可显著增加室性期前收缩、室速、室颤及心脏停搏出现时乌头碱用量（P<0.01）。而中药中剂量组与中药高剂量组在室性期前收缩、室速、室颤、心脏停搏出现时间上以及乌头碱用量上无明显差异（P>0.05）。

由此可以看出，中药复方合剂可以延迟各种室性心律失常出现时间，且中药中、高剂量组疗效显著。提示中药复方合剂具有抗乌头碱致室性心律失常作用，且临床常用剂量（即中剂量组）即可疗效显著。

实验例2中药复方合剂抗氯化钙致心律失常实验

1.材料与方法

1.1实验动物

清洁级健康雄性SD大鼠，体重200±20g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号：SCXK（京）2012-0001。

1.2实验药物与试剂

中药复方合剂：党参、黄连、半夏、鬼箭羽、川芎、丹参、赤芍、白芍、炙甘草、酸枣仁和远志饮片购自康仁堂，由东方医院制剂室水煮浓缩，药物终浓度4.13g/ml；

氯化钙：购自Alfa公司，氯化钙溶液浓度35mg/ml。

1.3实验仪器

RM6240型多通道信号处理系统，成都仪器厂；

ALC-IP微量泵，上海奥尔科特生物科技有限公司；

冷光手术灯，分析天平，电子秤，电脑，无菌手术器械，烧杯，量筒，定容瓶，移液器等。

1.4实验分组

空白对照组（WT）：给予蒸馏水3.48ml/kg/d灌胃；

中药低剂量组（LOW）：给予中药复方合剂1.74ml/kg/d灌胃；

中药中剂量组（MID）：给予中药复方合剂3.48ml/kg/d灌胃；

中药高剂量组（HIGH）：给予中药复方合剂6.96ml/kg/d灌胃；

1.5检测方法及指标

给药7天，末次给药1小时后，用乌拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉，将大鼠背位固定在手术台上，记录Ⅱ导心电图，并连接心电示波器，以观察心电图的变化（纸速50mm/s）。分别由股静脉恒速泵入氯化钙溶液（1.5ml/min/kg），记录心律失常（Arrhythmia）出现时间及心脏停搏出现时间（CA），计算室性期前收缩（PVBs）、室性心动过速（VT）、室颤（VF）的发生率及出现心律失常和心脏停搏出现时氯化钙用量。

1.6统计方法

使用SPSS13.0统计分析软件，实验数据以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析（One-Way ANOVA），P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

本实验采用氯化钙致心律失常模型，实验结果见表2-1、2-2、2-3。

表2-1氯化钙致室性心律失常发生率（n=10）

经卡方检验，P>0.05，各组在室性期前收缩、室性心动过速及室颤发生率上无显著差异。

表2-2氯化钙致心律失常及心脏停搏出现时间

*表示与WT比较，P<0.01；^△表示与LOW比较，P<0.01。

表2-3氯化钙致心律失常及心脏停搏出现时氯化钙用量

*表示与WT比较，P<0.05，**表示与WT比较，P<0.01；

△表示与LOW比较，P<0.05；△△表示与LOW比较，P<0.01。

结果显示：中药低、中、高剂量组均可以降低氯化钙诱发的室性期前收缩发生率；而在室性心动过速的发生率上，中药低、中、高剂量组均未显示出其优越性；中药中剂量组与中药高剂量组可以降低室颤的发生率，但统计学上无显著差异（P>0.05）。

与空白对照组比较，中药低、中、高剂量组均可显著延迟心脏停搏出现时间（P<0.01），并且可以明显增加心脏停搏出现时氯化钙用量（P<0.05，P<0.01，P<0.01）；中药中、高剂量组还可显著延迟心律失常出现时间（P<0.01），且可显著增加心律失常出现时氯化钙用量（P<0.01）。

中药不同剂量组间比较，与中药低剂量组比较，中药中、高剂量组可以显著延迟心律失常出现时间（P<0.01），且能显著增加心律失常出现时氯化钙用量（P<0.01）；而中药中、高剂量组对心脏停搏出现时间上无明显差异（P>0.05），但中药高剂量组可以增加心脏停搏出现时氯化钙用量（P<0.05）。

中药中剂量组与中药高剂量组在心律失常出现时间以及心脏停搏出现时间上无显著差异（P>0.05），且两组在心律失常出现时以及心脏停搏出现时氯化钙用量均无显著差异（P>0.05）。

由此可以看出，中药复方合剂具有抗氯化钙致心律失常作用，且中、高剂量组作用显著。提示中药复方合剂具有抗室性心律失常作用，且临床常用剂量（中剂量组）即可作用显著。

实验例3中药复方合剂抗异丙肾致心律失常实验

1.材料与方法

1.1实验动物

清洁级健康雄性SHR大鼠，体重300±20g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号：SCXK（京）2012-0001。

1.2实验药物与试剂

中药复方合剂：党参、黄连、半夏、鬼箭羽、川芎、丹参、赤芍、白芍、炙甘草、酸枣仁和远志饮片购自康仁堂，由东方医院制剂室水煮浓缩，药物终浓度4.13g/ml；

异丙肾上腺素：购自sigma公司。

1.3实验仪器

BP-98A智能无创血压计，北京软隆科技有限责任公司；

Rodent PACK心电遥测仪，法国emka公司；

电子秤，分析天平，注射器等。

1.4SHR大鼠血压、心率的测定

取14周龄雄性自发性高血压大鼠（SHR）40只饲养3天，用BP-98A无创血压计测量鼠尾血压。测压时将大鼠置于鼠袋内加温，温度控制在37～38℃，以大鼠保持安静和尾动脉有搏动信号为度，在大鼠清醒状态下以间接法测量大鼠的尾动脉收缩压及心率，随机测量5次取平均值。

1.5实验分组

收缩压高于140mmHg即可纳入，将实验动物随机分为两组

空白对照组（WT）：给予蒸馏水3.48ml/kg/d灌胃；

中药组（CM）：给予中药复方合剂3.48ml/kg/d灌胃。

1.6检测方法及指标

给药7天，末次给药1小时后，予异丙肾上腺素（10mg/100g体质量）颈部皮下注射，心电遥测记录2小时，记录是否出现单发室性期前收缩（Single PVBs，SP），成对室性期前收缩（Paired PVBs，PP），室性心动过速（VT），并统计其发生率（SPR、PPR、VTR）、出现个数及出现时间。

1.7统计方法

使用ecg Auto软件处理数据，SPSS13.0、Origin8.0软件统计分析，实验数据以均数±标准差表示，组间比较采用t检验（t-test），P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

本实验是在大鼠清醒状态下，通过异丙肾药物诱发，采用心电遥测技术监测各种心律失常（见表3-2至3-7）。动物模型为自发性高血压大鼠（SHR），SHR大鼠体重（Weight）、心率(HR)、收缩压(SBP)、舒张压（DBP）、平均动脉压（MBP）检测结果见表3-1，且异丙肾皮下注射后，会造成急性心肌缺血，模拟了高血压与心肌缺血的病理状态。

表3-1SHR大鼠体重、血压及心率表

经过t检验，P>0.05，说明空白对照组与中药组在大鼠体重、心率、收缩压、舒张压及平均动脉压方面无显著性差异，两组具有可比性。

表3-2心电遥测1小时心律失常发生率（n=20）

经卡方检验，心电遥测1小时，中药组在单发室性期前收缩和室性心动过速发生率上低于空白对照组，但两组无统计学差异，P>0.05。

表3-3心电遥测1小时心律失常

*表示与WT比较，P<0.05。

心电遥测1小时，中药组单发室性期前收缩个数显著低于空白对照组（P<0.05），而成对室性期前收缩对数及室性心动过速出现次数，两组无统计学差异（P>0.05）。

表3-4心电遥测1小时心律失常出现时间

心电遥测1小时，中药组较空白对照组可以延迟单发室性期前收缩、成对室性期前收缩及室性心动过速出现时间，但是两组比较无统计学差异（P>0.05）。

表3-5心电遥测2小时心律失常发生率（n=20）

经卡方检验，心电遥测2小时，空白对照组与中药组在单发室性期前收缩、成对室性期前收缩及室性心动过速发生率上无显著差异，P>0.05。

表3-6心电遥测2小时心律失常

*表示与WT比较，P<0.05。

心电遥测2小时，中药组出现单发室性期前收缩个数、成对室性期前收缩对数及室速出现次数均显著低于空白对照组（P<0.05），说明中药复方合剂具有抗异丙肾诱发心律失常作用。

表3-7心电遥测2小时心律失常出现时间

*表示与WT比较，P<0.05。

心电遥测2小时，中药组较空白组在单发室性期前收缩出现时间上无显著差异（P>0.05），而中药组较空白对照组可明显延长成对室性期前收缩及室性心动过速出现时间（P<0.05）。

结果显示，心电遥测1小时，见表3-2、3-3、3-4。中药组在单发室性期前收缩和室性心动过速发生率方面低于空白对照组，但无统计学差异（P>0.05）。中药组单发室性期前收缩个数显著低于空白对照组（P<0.05），而在成对室性期前收缩对数及室性心动过速出现次数上，两组无统计学差异（P>0.05）。中药组较空白对照组可以延迟单发室性期前收缩、成对室性期前收缩及室性心动过速出现时间，但是两组比较无统计学差异（P>0.05）。

心电遥测2小时，见表3-5、3-6、3-7。中药组较空白对照组在单发室性期前收缩、成对室性期前收缩及室性心动过速发生率上无显著差异，P>0.05。中药组出现单发室性期前收缩个数、成对室性期前收缩对数及室速出现次数均明显低于空白对照组（P<0.05）。中药组与空白对照组在单发室性期前收缩出现时间上无显著差异（P>0.05），而中药组较空白对照组可显著延长成对室性期前收缩及室性心动过速出现时间（P<0.05）。

心电遥测2小时单发室性期前收缩个数分布如图1所示，空白对照组发生室性期前收缩个数组内差异比较大，有个别数值显著离群，数值达到236，在中位线以上的数值明显多于中药组，且分散度较大；而中药组室性期前收缩个数整体维持在一个较低的水平，多数数值在中位线以下。由此可以看出，中药复方合剂对异丙肾诱发大鼠清醒状态下的室性期前收缩有宏观的控制作用，从而提示中药复方合剂对心脏的保护作用。

由此可以看出，中药复方合剂具有抗异丙肾诱发室性心律失常作用。提示在病理状态下，中药复方合剂具有抗室性期前收缩作用，且长时间作用更显著。

实验例4中药复方合剂抗心律失常作用机制研究实验

1.材料

1.1实验动物

清洁级健康雄性SD大鼠，体重200±20g，购自北京华康生物科技股份有限公司，许可证编号：SCXK（京）2009-0007。

1.2实验药物

中药复方合剂：党参、黄连、半夏、鬼箭羽、川芎、丹参、赤芍、白芍、炙甘草、酸枣仁和远志饮片购自康仁堂，由东方医院制剂室水煮浓缩，药物终浓度4.13g/ml；

异丙肾上腺素（Iso）：购自美国sigma公司；

胶原酶Ⅱ型（collagenase type2）：购自美国Washington公司；

牛血清白蛋白（BSA）：购自美国Sigma公司；

氯化钠（NaCl）、氯化钾（KCl）、羟乙基哌嗪乙硫磺酸（HEPES）、葡萄糖（D-Glucose）、氢氧化钠（NaOH）、氯化钙（CaCl₂）、氢氧化钾（KOH）、氯化镁（MgCl₂）、磷酸二氢钾（KH₂PO₄）、硫酸镁（MgSO₄）、L-型谷氨酸（L-Glutamic）、牛磺酸（Taurine）、乙二醇二乙醚二胺四乙酸（EGTA）、三磷酸腺苷二钠盐（Na₂ATP）等购自美国Alfa公司；

二甲基亚砜（DMSO）：购自美国Sigma公司。

1.3主要溶液配制

无钙台氏液（Tyrode solution,mmol/L）：NaCl140.0，KCl5.4，MgCl₂1.0，HEPEs10.0，D-Glucose10.0，NaOH调至pH7.4；

有钙台式液：在无钙台式液基础上加1.8mmol/L CaCl₂；

KB液（mmol/L）：KOH80.0，KCl40.0，KH₂PO₄25.0，MgSO₄3.0，L-Glutamic50.0，Taurine20.0，EGTA1.0，D-Glucose10.0，KOH调节至pH7.2；

消化液：含60%Collagenase type2+20%BSA+50μmol/L Ca²⁺的无钙台氏液；

动作电位电极内液（mmol/L）：NaCl10.0，KCl120.0，MgCl₂5.0，HEPEs20.0，EGTA5.0，Na₂ATP3.0，KOH调节至pH7.2；

给药溶液：为有钙台式液+10μmol/L Iso；

浴槽溶液：为有钙台式液。

1.4实验仪器

渗透压仪Fiske210，美国ADVANCE公司；pH剂PB-21，德国Sartorius公司；微电极拉制仪，DMI-Universal Puller；放大器EPC10，美国HEKA公司；微操MP-225，美国SUTTERINSTRUMENT COMPANY；显微镜IX71，日本OLYMPUS公司；微电极B15014F，武汉微探科学仪器有限公司；Langendorff灌流装置；800电动离心机，苏州威尔实验用品有限公司；纯水机Elix，美国MIILIPORE公司；KQ-200KDE型高功率数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；恒温水浴锅，美国PolyScience公司；BT100-2J蠕动泵，保定兰格恒流泵有限公司；抽滤泵及滤膜，美国MILLIPORE公司；电子秤，分析天平，电脑，抽滤瓶，注射器，试管，滴管，Eppendorf管，移液器等。

1.5实验分组

SD雄性大鼠随机分为两组：

空白对照组（WT）：给予蒸馏水3.48ml/kg/d灌胃；

中药组（CM）：给予中药复方合剂3.48ml/kg/d灌胃。

给药7天，取心脏，细胞分离。

1.6心室肌细胞分离

采用胶原酶法急性分离大鼠左心室肌细胞。选用健康成年雄性SD大鼠（体重220～250g），于术前15分钟腹腔注射肝素（1000U/kg），10%水合氯醛溶液（0.35g/kg）麻醉，开胸，迅速取出带有一段主动脉的心脏，置于4℃台式液中清理和冲洗残余血液，并迅速挂于Langendorff装置上进行主动脉逆行灌注，在36.7℃，6ml/min，恒速灌流。100%氧气饱和的有钙台式液灌流约3min后切换100%氧气饱和的无钙台式液灌流5min，然后迅速切换消化液循环灌流，并持续通以100%氧气。灌流中同步监测灌注压，当灌注压恢复到略低于初始灌流压力时，终止消化，此时心脏颜色变浅，触之松软。用10ml无钙台氏液灌流冲洗残余消化液，然后于KB液中剪取左心室。

用眼科剪沿心室中部横轴剪开心脏，置入KB液中，撕碎，以吸管小心吹打，200目筛网过滤，500rpm离心约30s。弃去上清液，更换KB液一次，间隔6min再次更换KB液，KB液中保存。

1.7膜片钳实验

1.7.1电极制备

选用内径1.05mm，外径1.5mm，壁厚0.45mm的软质玻璃毛细管，置于微管电极拉制仪上，经三步拉制，剖光而成。充灌电极液后电极阻抗约为2～6MΩ。

1.7.2全细胞膜片钳电流钳记录

采用全细胞电流钳技术记录模式C-CLAMP。细胞浴槽保持恒速灌流。

1.7.3高阻抗封接

实验前先将存放于高钾KB液中的细胞逐步复钙，分别用0.6mmol/L，1.2mmol/L，1.8mmol/L含Ca²⁺台式液梯度复钙，间隔6min。静置半小时后可用于细胞动作电位的测量。取几滴细胞悬液加入细胞池（约1ml），平放于连有微操纵仪的倒置显微镜上，静置10min，待细胞充分贴壁后，用台式液灌流，流速为2ml/min。玻璃电极内充灌电极内液，电阻约2～6MΩ。选取杆状、横纹清晰、无自主收缩的心室肌细胞进行实验。电极降入细胞外液前对电极给予正压，以防止入液后电极尖端被杂质沾染。电极入液后，点击入液补偿，补偿记录电极与参考电极之间的电位差。调节微操使电极尖端逐渐向所选定的细胞靠近。当电极尖端接触到细胞膜时，施以轻微的负压，待回路电阻值迅速升至GΩ水平，表明电极与细胞膜之间的高电阻封接（gigaseal）已经形成。

1.7.4全细胞模式

高阻抗（>1GΩ）封接形成后，补偿电极电容。然后负压轻吸细胞膜并逐渐加力，直至可见原为一条直线的电流图突然出现较大的细胞电容电流，这时便形成了全细胞模式，破膜后电阻大于100MΩ。予细胞电容补偿，使图形尽量平直。

1.7.5刺激参数的设置

本实验记录的是大鼠心室肌细胞的动作电位（action potential,AP）。刺激模式为脉宽5ms，电流900pA。

1.8检测指标

用Patch Clamp记录动作电位，当在台式液中记录到动作电位后，稳定10min，转换为加有10μmol/L Iso的灌流液，灌流30min。记录Iso灌流前后的静息电位（resting potential,RP）、动作电位幅度（action potential amplitude,APA）、超射（overshoot,OS）、动作电位最大除极速率（maximum,Vmax）、动作电位时程（action potential duration,APD）、动作电位复极至25%、50%、90%的时间（action potential duration at25%、50%、90%）。

1.9统计方法

用Fit Clamp、Origin8.0、Excel2007、SPSS13.0处理并统计分析实验数据，实验数据以均数±标准差表示，组间比较采用t检验（t-test），P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

异丙肾上腺素（Iso）灌流前后两组的动作电位见图2，两组静息电位（RP）、超射（OS）、动作电位幅度（APA）及动作电位0相最大上升率（Vmax）比较见表4-1，两组动作电位时程比较见表4-2。

表4-1心室肌细胞静息电位、超射、幅度及最大上升率比较表

表4-2心室肌细胞动作电位时程比较表

*表示与WT比较，P<0.05；**表示与WT比较，P<0.01；

^△表示Iso灌流前后组内比较，P<0.05；^△△表示Iso灌流前后组内比较，P<0.01。

结果显示：中药组RP、OS、APA与空白对照组比较，无显著差异（P>0.05）；中药组Vmax与空白对照组Vmax比较，亦无显著差异（P>0.05）。

Iso灌流前，中药组APD、APD₅₀、APD₉₀较空白对照组明显延长（P<0.05）；Iso灌流后，空白对照组与中药组APD均较Iso灌流前均明显延长（P<0.01，P<0.05），且空白对照组APD₅₀与APD₉₀较Iso灌流前亦显著延长（P<0.01）。Iso可以通过兴奋β受体，使细胞内腺苷酸环化酶（adenylyl cyclase，AC）激活，细胞内cAMP升高，通过蛋白激酶A（protein kinase A，PKA），引起钙通道蛋白的磷酸化，导致L型钙通道构型的改变，使功能性钙通道的数目增加，钙窗电流亦增加，从而延长了动作电位时程。心室肌细胞APD的延长主要与Ca²⁺内流以及K⁺外流有关，此两种电流是心室肌细胞复极2期的主要电流，由此推测，APD、APD₅₀、APD₉₀的延长可能是对Ca²⁺的内流或K⁺的外流发挥了抑制作用所致。

Iso灌流后，组间比较，中药组APD、APD₅₀、APD₉₀较空白对照组显著缩短（P<0.01），提示中药有对抗Iso导致APD延长的作用，可能与抑制平台期Ca²⁺电流和复极后期K⁺电流有关。

综上所述，本发明的中药复方合剂具有明显的抗乌头碱、氯化钙和异丙肾所致大鼠心律失常的作用，且中药复方合剂可以对抗异丙肾上腺素导致大鼠心室肌细胞动作电位时程的延长，上述作用是其治疗心律失常的药理学基础，中药复方合剂可能是通过抑制平台期Ca²⁺电流和复极后期K⁺电流而起到抗心律失常作用的。

Claims (6)

1.一种治疗心律失常的中药复方合剂，其特征在于，该中药复方合剂中各组分原料药重量配比为：党参10-30g、半夏3-9g、黄连2-15g、鬼箭羽5-15g、川芎10-30g、丹参9-30g、赤芍6-15g、白芍10-15g、炙甘草6-15g、酸枣仁10-30g、远志6-10g。

2.如权利要求1所述的中药复方合剂，其特征在于，所述中药复方合剂中各组分原料药重量配比为：党参15g、半夏9g、黄连10g、鬼箭羽15g、川芎15g、丹参30g、赤芍15g、白芍15g、炙甘草10g、酸枣仁30g、远志10g。

3.一种权利要求1或2中所述中药复方合剂的制备方法，包括如下步骤：

a.取重量配比原料药物党参、半夏、黄连、鬼箭羽、川芎、丹参、赤芍、白芍、炙甘草、酸枣仁、远志备用；

b.将上述药物水煎2-4次，每次0.5-2小时，浓缩调pH值至6-8，静置10-36小时，取上清液，灭菌后，即得。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，将步骤a中所述的重量配比原料药物按照常规的中药制剂方法制成任何一种口服制剂。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述口服制剂包括胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液和丸剂。

6.一种权利要求1或2中所述中药复方合剂在制备治疗心律失常的药物中的应用。