CN103063795B

CN103063795B - 咪达那新的含量测定及有关物质检测方法

Info

Publication number: CN103063795B
Application number: CN201210580871.6A
Authority: CN
Inventors: 王雪根; 何凌云; 周磊; 罗晶; 何凤琴; 贾文君; 纪慧敏; 秦妮
Original assignee: NANJING NMG-ADDS Co Ltd
Current assignee: NANJING NMG-ADDS Co Ltd
Priority date: 2012-12-27
Filing date: 2012-12-27
Publication date: 2015-01-07
Anticipated expiration: 2032-12-27
Also published as: CN103063795A

Abstract

本发明公开了一种咪达那新的含量测定及有关物质检测方法，该方法主要采用高效液相色谱法对咪达那新原料药的含量，以及其有关物质进行了测定和检查。该方法方法省时省力，精密度高，含量测定结果准确，重复性和回收率良好，且该方法通过验证，可用于咪达那新原料和制剂样品的常规分析和质量控制。

Description

咪达那新的含量测定及有关物质检测方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体而言，涉及一种咪达那新原料药的质量控制方法，尤其涉及一种咪达那新的含量测定及有关物质检测方法。

背景技术

咪达那新，英文名imidafenacin，化学名为4-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-2,2-二苯丁酰胺(4-(2-methyl-1H-imidazol-1-yl)-2,2-dipheybutanamide)。咪达那新是由日本小野药品工业株式会社与杏林制药联合开发的新型二苯基丁酰胺类抗胆碱药，具有高度膀胱选择性，用于膀胱过度活动症的治疗，于2007年6月在日本上市。

膀胱过度活动症(Overactive Bladder，OAB)是一种以尿急症状为特征的征候群，常伴有尿频和夜尿症状，可伴或不伴有急迫性尿失禁。逼尿肌不稳定是引发膀胱过度活动症的重要原因之一。逼尿肌分布着M受体，因此逼尿肌的收缩受胆碱的控制。咪达那新具有二苯基丁酰胺结构，是一种新型高效抗胆碱药物，它选择性作用于M3和M1受体，阻断胆碱对逼尿肌的收缩作用，令逼尿肌松弛，每日2次，每次服用0.1mg咪达那新，可显著改善膀胱过度活动症所引起的尿急、尿频、尿禁等症状。咪达那新具有抑制膀胱平滑肌收缩和抑制乙酰胆碱游离双重作用，而且对膀胱的选择性强于唾液腺。

目前，已上市的咪达那新剂型为片剂，然而由于数据保护等原因，该原料药的含量和有关物质分析方法尚无文献报道。为了保证咪达那新制剂研发和生产的质量，需要对原料药的含量和有关物质进行控制。因此，研究获得一种咪达那新的含量测定及有关物质检测方法，这对医药生产企业来说显得尤为迫切。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明人通过大量实验摸索了咪达那新原料与制剂的质量控制方法，并严格进行方法验证，保证方法的科学严谨，满足了研发和生产的需求。因此，本发明的目的在于提供一种咪达那新的含量测定及有关物质检测方法。

本发明的目的是这样实现的：

一种测定咪达那新含量的方法，采用反相高效液相色谱法，其流动相为乙腈：15-25mmol/L磷酸氢二钠溶液＝37:63(v/v)，并以磷酸调pH＝7-8。

上述测定咪达那新含量的方法，优选流动相为乙腈：20mmol/L磷酸氢二钠溶液＝37:63(v/v)，并以磷酸调pH＝7.45。

上述测定咪达那新含量的方法，色谱柱为C18，5μm，250×4.6mm(I.D.)；流速为1.0mL/min；柱温为40℃，检测波长为220nm。

一种检测咪达那新有关物质的方法，采用反相高效液相色谱法，按以下流动相条件进行梯度洗脱：流动相A为15-25mmol/L磷酸盐溶液，用磷酸调节pH＝7-8；流动相B为甲醇或乙腈；流动相的梯度设置如下：

时间(min)	流动相A	流动相B
			0	65	35
10	65	35
			15	20	80
25	20	80
			35	65	35。

上述检测咪达那新有关物质的方法，优选流动相A为20mmol/L磷酸氢二钠溶液，用磷酸调节pH＝7.45；流动相B优选为乙腈。

上述检测咪达那新有关物质的方法，色谱柱为C18，5μm，250×4.6mm(I.D.)；流速为1.0mL/min；柱温为40℃，检测波长为220nm。

咪达纳新原料药在膀胱过度活动症的治疗上，有着重要的作用，但是原料药的含量和有关物质分析方法尚无文献报道。本发明涉及的咪达那新的含量测定及有关物质检测方法省时省力，精密度高，含量测定结果准确，重复性和回收率良好，可用于咪达那新原料和制剂样品的常规分析和质量控制。另外，经过了严格的方法验证，可以满足了研发和生产的需求，为咪达那新药物在国内的早日上市提供了必要的技术支持。

附图说明

图1为实施例1咪达那新含量测定方法的系统适应性研究色谱图。

图2为实施例2咪达那新有关物质检测方法的系统适应性研究色谱图。

具体实施方式

以下通过实施例形式，对本发明涉及的咪达那新的含量测定及有关物质检测方法作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1咪达那新含量的反相高效液相色谱法测定

色谱条件及系统适应性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters X-bridge 5μm4.6×250mm)，检测波长220nm，柱温40℃，流速1.0mL/min。流动相为乙腈：20mmol/L磷酸氢二钠(磷酸调pH至7.45)＝37:63，理论塔板应不低于3000。

取咪达那新样品适量约10mg，精密称定，置50mL量瓶中，加溶剂(乙腈：20mmol/L磷酸氢二钠溶液(磷酸调pH至7.45)体积比＝1:1)溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL至10mL容量瓶，加溶剂溶解并稀释至刻度，作为供试液；另取对照品适量，同法配制成咪达那新浓度约为0.1mg/mL，作为对照液。分别量取供试及对照溶液100μL，注入色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算并折干，即得。

对含量测定方法的以下项目进行了验证：

1、系统适应性

用咪达那新来分析此色谱条件是否符合要求。由图1可见此条件下各个杂质与主峰以及杂质之间分离度符合要求，峰纯度和单点阈值均符合要求。

2、标准曲线

配制各浓度梯度的供试液，分别精密量取100μL，注入色谱仪，记录色谱图。以浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，绘制回归曲线，计算回归系数。由结果可见，本品的含量测定于咪达那新浓度4.032-40.32μg/mL的浓度范围内有良好线性。

3、重复性

取样品6份，分别精密称定，按高效液相色谱法含量测定方法进行测定，考察测定方法的重复性。由结果可见，本品含量测定高效液相色谱法的重复性良好。

4、回收率

取本品10mg共九份于100mL容量瓶中，标示为低、中、高三个浓度梯度，分别加入8mg、10mg、12mg的对照品各三份，精密量取1mL至20mL容量瓶，照含量测定的高效液相色谱法测定，计算测得量和回收率。由结果可见，本品高效液相色谱法含量测定的回收率良好。

5、溶液稳定性

取本品(批号：ZS-1)含量测定的供试液，分别于0、2、4、6、8小时进样，考察本品含量测定液相法的溶液稳定性，由结果可见，本品含量测定的高效液相色谱法溶液于8小时内稳定。

时间	主峰峰面积
		0	12406189
2	12409285
		4	12529086
6	12560348
		8	12617533
平均值	12504488.2
		RSD％	0.75

6、中间精密度

以重复性结果为中间精密度数据组1，另行实验结果为中间精密度数据组2和数据组3。考察本品含量测定高效液相色谱法的中间精密度，由结果可见，本品含量测定高效液相色谱法的中间精密度良好。

实施例2咪达那新有关物质的反相高效液相色谱法测定

色谱条件及系统适应性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters X-bridge 5μm4.6×250mm)，检测波长220nm，柱温40℃，流速1.0mL/min。流动相为A相：20mmol/L磷酸氢二钠(磷酸调pH至7.45)，B相：乙腈，梯度程序按下表所示，理论塔板应不低于3000。按以下流动相条件进行梯度洗脱：

时间(分)	流动相A	流动相B
			0	65	35
10	65	35
			15	20	80
25	20	80
			35	65	35

对有关物质检测方法的以下项目进行了验证：

1、系统适用性实验

在上述确定的色谱条件下，再分别用咪达那新起始物料A(2-甲基咪唑)，咪达那新起始物料B(溴乙基二苯乙腈)，咪达那新中间体(4-(2-甲基-1H咪唑-1-基)-2,2-二苯丁腈)的混合物来分析此色谱条件是否符合要求。由图2可见此条件下各个杂质与主峰以及杂质之间分离度符合要求，峰纯度和单点阈值均符合要求。

2、专属性

取本品适量，分别于各苛性条件下进行破坏，考察破坏产物与主成分峰的分离情况。

酸破坏：取本品适量(约含咪达那新10mg)，精密称定，置50mL量瓶中，加1mol/L盐酸5mL，放置4小时，加1mol/L氢氧化钠溶液中和，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。再精密量取1mL至10mL容量瓶，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

碱破坏：取本品适量(约含咪达那新10mg)，精密称定，置50mL量瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液5mL，放置4小时，加1mol/L盐酸中和，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1mL至10mL容量瓶，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

氧化破坏：取本品适量(约含咪达那新10mg)，精密称定，置50mL量瓶中，加30％双氧水5mL，放置4小时，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1mL至10mL容量瓶，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

高温破坏：取本品适量(约含咪达那新10mg)，精密称定，置坩埚中，置150℃烘箱中放置4小时，转移至50mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1mL至10mL容量瓶，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

光照破坏：取本品适量(约含咪达那新10mg)，精密称定，置50mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1mL至10mL容量瓶，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。在4500±500LUX光照强度下放置24h。

取各破坏条件下的样品，照有关物质的液相条件进样，记录色谱图，结果可见，本品于各破坏条件下生成的杂质峰均能与主成分峰分离良好。本品在各破坏条件下所生成的杂质均不大，且降解的杂质峰均在检测波长220nm附近有较大吸收。

3、中间体的响应值及标准曲线

取本品合成起始物料A、起始物料B、中间体、咪达那新分别配制成梯度浓度的供试液(1)、(2)、(3)、(4)、(5)。取分别吸取各供试液100μL，注入色谱仪，记录色谱图。以浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制回归曲线，计算回归系数。由以上结果可见，本品与各步中间体在0.004～0.8μg/mL范围内均呈良好线性，各中间体与咪达那新的响应因子基本一致。

起始物料A低浓度标准曲线

咪达那新低浓度标准曲线

中间体低浓度标准曲线

起始物料B标准曲线

4、溶液稳定性

取本品有关物质测定的供试液，分别于0、2、4、6、8小时进样，考察本品含量测定液相法的溶液稳定性，由结果可见，本溶液于8小时内稳定。

5、耐用性

由于本品的色谱条件为等度洗脱，并规定了相应的色谱柱型号、柱温、流动相比例，故我们将这些条件作相应的微调，考察色谱条件的耐用性。

由图可见，Thermo色谱柱分析时出峰较快，但是主峰拖尾较大，且与后一杂质峰未分开，Agilent SB C18色谱柱分析时，主峰理论塔板数不高。温度变化在±5℃范围内，峰型没有变化，但保留时间有相应的前移和后移；乙腈比例变化对峰的分离度和出峰时间影响较大，加大乙腈比例，色谱峰前移，峰高显著提升，乙腈比例降低时，色谱峰后移，在乙腈比例在该梯度时，分离效果最佳。缓冲液pH变化时出峰时间也有明显变化。

6、定量限和检测限

取本品对照品适量，精密称定，加流动相配成咪达那新溶液后，再精密量取供试液适量，逐级稀释，进样考察，结果显示本品定量限为3.98ng/mL，检测限为1.99ng/mL。

Claims

1.一种检测咪达那新有关物质的方法，其特征在于：采用反相高效液相色谱法，按以下流动相条件进行梯度洗脱：流动相A为15-25mmol/L磷酸盐溶液，用磷酸调节pH＝7-8；流动相B为甲醇；流动相的梯度设置如下：

时间min 流动相A 流动相B 0 65 35 10 65 35 15 20 80 25 20 80 35 65 35。

2.根据权利要求1所述检测咪达那新有关物质的方法，其特征在于：流动相A为20mmol/L磷酸氢二钠溶液，用磷酸调节pH＝7.45；流动相B为甲醇。

3.根据权利要求1或2所述检测咪达那新有关物质的方法，其特征在于：色谱柱为C18，5μm，250×4.6mm I.D.；流速为1.0mL/min；柱温为40℃，检测波长为220nm。