CN103063779B - 一种烟酸辛伐他汀片剂有关杂质的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种烟酸辛伐他汀片剂有关杂质的检测方法，包括烟酸有关杂质的检测和辛伐他汀有关杂质的检测。本发明的方法可以有效地分离烟酸及其杂质，还可以有效地分离辛伐他汀及其杂质，辛伐他汀和其有关杂质/降解产物不会对烟酸有关杂质/降解产物的测定产生干扰，烟酸和其有关杂质不会对辛伐他汀有关杂质/降解产物的测定产生干扰，专属性，线性，准确度和精密度，定量限，检测限等均符合要求。

Description

一种烟酸辛伐他汀片剂有关杂质的检测方法

技术领域

本发明涉及一种烟酸辛伐他汀片剂有关杂质的检测方法，属于化学药物分析领域。

背景技术

烟酸是一种水溶性的维生素B，是最早用于调脂的药物之一，有很强的增加高密度脂蛋白(HDL)作用，但降低低密度脂蛋白(LDL)作用较弱。辛伐他汀是一种羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，是当今一线调脂药物，对降低LDL具有显著效果，但对增加HDL作用较弱。两者联合使用，既可增强其降血脂作用，又能减少用药次数，临床上用于治疗高胆固醇血症(ⅡA型)、混合型高脂血症(ⅡB型)、高三酰甘油血症。特别是其在对混合型高脂血症的疗效上要比服用单方制剂更为明显。

为保证药品的质量及其安全性，需建立检测方法对烟酸辛伐他汀片剂进行控制。目前，烟酸有关杂质的检测在中国药典没有相关的检测方法。辛伐他汀有关杂质检测药典采用HPLC法，但由于辛伐他汀溶液具有不稳定性，药典方法只适合原料药而不适用于成品，且烟酸辛伐他汀峰形不好，与有关杂质分离不好。因此，必须摸索一种合理的色谱系统，制定出简便、快速、准确的检测烟酸辛伐他汀片剂有关杂质的方法，以便有效控制烟酸辛伐他汀片剂的质量。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足之处，提供一种烟酸辛伐他汀片剂有关杂质的检测方法。

本发明的烟酸辛伐他汀片剂有关杂质的检测方法，包括烟酸有关杂质的检测和辛伐他汀有关杂质的检测，

所说的烟酸有关杂质的检测方法包括以下步骤：

1)样品溶液的配制：将烟酸辛伐他汀片剂加水溶解，配制成含烟酸0.2mg/ml的溶液；

2)测定：取样品溶液，进样50μL，采用HPLC法，记录色谱图并进行分析；

所述的HPLC法的色谱条件如下：

色谱柱：L8(氨基柱)；

流动相：甲醇-水混合物，水和甲醇的体积比为(75-85):(15-25)，用冰醋酸调pH至3-4；

柱温：30-40℃；

流速：0.8～2.0ml/min；

检测波长：258nm。

所说的辛伐他汀有关杂质的检测方法包括以下步骤：

1)样品溶液的配制：将烟酸辛伐他汀片剂溶解在乙腈中制成含辛伐他汀0.4mg/mL的溶液；室温保存。

2)测定：取样品溶液，进样50μL，采用HPLC法，记录色谱图并进行分析。

所述的HPLC法的色谱条件如下：

色谱柱：C18色谱柱；

流动相：乙腈和磷酸盐缓冲液梯度混合物，乙腈和磷酸盐缓冲液体积比为(50-90)：(10-50)，用磷酸调pH值至2.5～3.5；

柱温：30-40℃；

流速：1-2mL/min；

检测波长：238nm。

优选地，

所述的烟酸有关杂质的检测方法中的HPLC法的色谱条件如下：

色谱柱：Hilic-NH₂色谱柱；

流动相：甲醇-水混合物，水和甲醇的体积比为80:20，用冰醋酸调pH至3.15±0.05；

柱温：35℃；

流速：1ml/min；

检测波长：258nm。

所述的辛伐他汀有关杂质的检测方法中的HPLC法的色谱条件如下：

色谱柱：C18色谱柱；

流动相：乙腈和磷酸盐缓冲液梯度混合物，乙腈和磷酸盐缓冲液体积比为(50-90)：(10-50)，用磷酸调pH值至3.00±0.05；

柱温：35℃；

流速：1.5mL/min；

检测波长：238nm。

本发明的烟酸辛伐他汀片剂有关杂质的检测方法，具有如下技术效果：

1)该方法可以有效地分离烟酸及其杂质，而且辛伐他汀和它的有关杂质/降解产物不会对烟酸有关杂质/降解产物的测定产生干扰，专属性，线性，准确度和精密度，定量限，检测限等均符合要求,还可以有效地分离辛伐他汀及其杂质，该方法可以简便、快速、准确地检测辛伐他汀有关杂质，而烟酸和其有关杂质不会对辛伐他汀有关杂质/降解产物的测定产生干扰，专属性，线性，准确度和精密度，定量限，检测限等均符合要求。从而可以有效地控制产品质量，避免了有害杂质未检出可能给患者临床用药安全带来的隐患。

2)通过HPLC法检验烟酸辛伐他汀缓释片中有关杂质/降解产物，采用不同的色谱条件，分别测定烟酸有关杂质和辛伐他汀有关杂质，并且互不干扰。验证方法根据国家食品药品监督管理局药品审评中心公布的“化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则”(指导原则编号：(G)GPH-5-1)。

3)本发明的流动相及pH的变化对试验结果中杂质的分离度及峰形有很大影响。烟酸有关杂质检测流动相甲醇与水的混合物体积比例为(75-85)：(15-25)，优选比例80:20，流动相用冰醋酸调节pH至3.15±0.05可以提高杂质的分离度并改善峰形。辛伐他汀有关杂质检测流动相用乙腈和磷酸盐缓冲液体积在(50-90)：(10-50)，以梯度混合效果更好，流动相用磷酸调节pH至3.00±0.05可以提高杂质的分离度并改善峰形。

附图说明

图1为按照实施例1进行烟酸有关杂质检测的色谱图；

图2为按照实施例2进行辛伐他汀有关杂质检测的色谱图。

图3为烟酸有关杂质线性关系图

图4为辛伐他汀有关杂质线性关系图

具体实施方式

实施例1烟酸辛伐他汀片剂有关杂质的检测

烟酸辛伐他汀片剂有关杂质的检测，包括烟酸有关杂质检测和辛伐他汀有关杂质检测，

烟酸有关杂质和降解产物的检测步骤如下：

1)样品溶液的配制：精密称取10个烟酸辛伐他汀片剂，加约700mL水于一个1000mL的容量瓶中，搅拌20小时，用水定容并混匀，配制成样品母液。取样品母液10mL用水定容到250mL，配制成含烟酸0.2mg/mL的样品溶液，室温下保存；

2)测定：取样品溶液，进样50μL，采用HPLC法，记录色谱图并进行分析。

HPLC色谱条件为：

仪器：Waters H-Class UPLC；

色谱柱：L8色谱柱；

检测器：UV或PDA检测器

流动相：甲醇-水混合物(体积比水：甲醇＝80:20)，用冰醋酸调pH至3.15±0.05；

柱温：35℃；

流速：1.0mL/min；

检测波长：258nm。

检测结果表明各项杂质和降解产物分离良好。色谱图见图1。

辛伐他汀有关杂质和降解产物的检测步骤如下：

1)样品溶液的配制：20mg/40mg片剂：精密称取烟酸辛伐他汀片剂，加溶剂(乙腈:0.3％冰醋酸溶液＝80:20)溶解，搅拌不小于4小时，配制成含辛伐他汀0.4mg/ml的溶液，室温下保存。

2)测定：取样品溶液，进样50μL，采用HPLC法，记录色谱图并进行分析。

HPLC色谱条件为：

仪器：Waters H-Class UPLC；

色谱柱：L1；

检测器：UV或PDA检测器

流动相：乙腈和磷酸盐缓冲液梯度混合物(体积比乙腈：磷酸盐缓冲液为(50-90)：(10-50)，用磷酸调pH至3.00±0.05；

柱温：35℃；

流速：1.5mL/min；

检测波长：238nm。

检测结果表明各项杂质和降解产物分离良好。色谱图见图2。

实施例2效果验证

1、烟酸有关杂质和降解产物的方法验证

1.1专属性试验

专属性验证包括(1)溶剂(水)和辅料的干扰，(2)选择性，(3)强制降解。1.1.1溶剂(水)和辅料的干扰：称取辅料加水溶解，搅拌20小时，定容，配制成1倍/2倍辅料溶液，用上述色谱条件检测，结果表明在溶剂和辅料溶液中，烟酸峰的位置没有任何干扰。验证结果符合要求。

1.1.2选择性：选择性验证辛伐他汀、辛伐他汀已知杂质对烟酸杂质分析的干扰。烟酸无已知杂质，选择性试验评估辛伐他丁、辛伐他汀已知杂质和烟酸的分离度。

分别称取辛伐他汀有关杂质辛伐他汀羟酸、脱水辛伐他汀、辛伐他汀二聚体及洛伐他汀，烟酸原料，辛伐他汀原料、辅料，加溶剂搅拌溶解，配制成含有约200μg/mL烟酸，8μg/mL辛伐他汀，0.04μg/mL各个辛伐他汀已知杂质的选择性溶液。检测结果显示，辛伐他汀和其已知杂质组分都在溶剂峰附近流出，未对烟酸峰产生干扰。辛伐他汀、已知杂质和烟酸峰完全分开，分离度不小于2。

1.1.3强制降解：强制降解试验是验证可能的降解产物与烟酸的分离度。分别在氧化、酸、碱、紫外光、可见光、60℃热条件下进行强降解试验，结果显示，在控制溶液和各个降解溶液中，烟酸峰纯度角小于纯度阈值(光谱均匀)。辛伐他汀，已知/未知杂质和烟酸峰的分离度不小于2。

1.2线性关系试验

烟酸无已知杂质，所以用烟酸在杂质浓度范围验证线性。验证的线性范围为0.1μg/mL～1.0μg/mL(相当于0.05％～0.5％烟酸标示量)。线性验证结果表明，在0.1μg/mL～1.0μg/mL浓度范围内，烟酸浓度与峰面积呈良好的线性关系，其线性相关系数为0.9997，如图3所示。

1.3准确度试验

因为烟酸没有已知有关杂质/降解产物，准确度(回收率)测定在有辅料和辛伐他丁存在时烟酸的回收率。准确度的验证范围在0.1μg/mL～1.0μg/mL之间。

称取辛伐他丁原料和辅料于容量瓶中，配制0.1μg/mL、0.2μg/mL、1.0μg/mL三个水平烟酸浓度试验，回收率结果符合要求。

1.4精密度试验

配制和检测3个平行样品，分别作方法精密度和中间精密度试验，结果表明，方法精密度和中间精密度验证结果符合要求。

1.5定量限值和检测限值

烟酸有关杂质定量限值(QL)为0.1μg/mL或0.05％烟酸标示量。

烟酸有关杂质检测限值(DL)为0.05μg/mL或0.025％的烟酸标示量。

2、辛伐他汀有关杂质和降解产物的方法验证

2.1专属性试验

专属性验证包括(1)溶剂(乙腈)和辅料的干扰，(2)选择性，(3)强制降解。2.1.1溶剂(乙腈)和辅料的干扰：按样品配制方法，配制成1倍/2倍辅料溶液，用上述色谱条件检测，结果表明在溶剂和辅料溶液中，辛伐他汀、辛伐他汀已知杂质的保留时间没有明显干扰。

2.1.2选择性：分别称取烟酸、辛伐他汀已知杂质、烟酸原料，辛伐他汀原料，和辅料，加乙腈搅拌溶解，配制成含有含烟酸约20mg/mL，辛伐他汀约800μg/mL，辛伐他汀已知杂质各4μg/mL的选择性溶液。用上述色谱条件检测，烟酸，辛伐他汀和已知杂质单针进样确认各组份的保留时间。结果显示，烟酸保留时间在溶剂峰附近，辛伐他汀各已知杂质和其他杂质完全分开，分离度不小于2。验证结果符合要求。

2.1.3强制降解：强制降解试验是验证可能的未知降解产物是否对辛伐他汀杂质测定有干扰。以配方比例分别称取烟酸，辛伐他汀，辅料，混合并研磨均匀制成样品粉末，分别在酸、碱、氧化、紫外光、可见光、60℃热条件下进行强降解试验，结果显示，辛伐他汀峰纯度角小于纯度阈值(光谱均匀)。验证结果说明该方法具专属性。

2.2线性关系试验

辛伐他汀线性验证范围设为0.4μg/mL至6.0μg/mL(相当于0.1％～1.5％辛伐他汀标示量)。试验结果表明，在0.4μg/mL～6.0μg/mL浓度范围内，辛伐他汀、辛伐他汀羟酸、脱水辛伐他汀、辛伐他汀二聚体与峰面积呈良好的线性关系，其线性相关系数为0.9999。

2.3准确度试验

准确度(回收率)测定在有辅料和辛伐他汀存在时，辛伐他汀羟酸，脱水辛伐他汀，辛伐他汀二聚体的回收率。回收率验证结果符合要求：

2.4精密度试验

配制和检测6份样品溶液，分别作方法精密度和中间精密度试验，结果表明，6份样品杂质的分布和数值相近，方法精密度实验和中间精密度实验所得杂质总量平均值之差为0.01％，不大于0.3％，方法精密度验证结果符合要求。

2.5定量限值和检测限值

辛伐他汀杂质的定量限值为在线性验证和回收率验证中符合可接受标准的最低浓度限。试验结果如下表。

辛伐他汀已知/未知杂质定量限值表

Claims (3)

1.一种烟酸辛伐他汀片剂有关杂质的检测方法，包括烟酸有关杂质的检测和辛伐他汀有关杂质的检测，其特征在于，

所说的烟酸有关杂质的检测方法包括以下步骤：

1)样品溶液的配制：将烟酸辛伐他汀片剂加水溶解，配制成含烟酸0.2mg/ml的溶液；

2)测定：取样品溶液，进样50μL，采用HPLC法，记录色谱图并进行分析；

其中，所述的HPLC法的色谱条件如下：

色谱柱：L8色谱柱；

流动相：甲醇-水混合物，水和甲醇的体积比为(75-85):(15-25)，用冰醋酸调pH至3-4；

柱温：30-40℃；

流速：0.8～2.0ml/min；

检测波长：258nm；

所说的辛伐他汀有关杂质的检测方法包括以下步骤：

1)样品溶液的配制：将烟酸辛伐他汀片剂溶解在乙腈中制成含辛伐他汀0.4mg/mL的溶液；室温保存；

2)测定：取样品溶液，进样50μL，采用HPLC法，记录色谱图并进行分析；

所述的HPLC法的色谱条件如下：

色谱柱：L1色谱柱；

流动相：乙腈和磷酸盐缓冲液梯度混合物，乙腈和磷酸盐缓冲液体积比为(50-90)：(10-50)，用磷酸调pH值至2.5～3.5；

柱温：30-40℃；

流速：1-2mL/min；

检测波长：238nm。

2.根据权利要求1所述的烟酸辛伐他汀片剂有关杂质的检测方法，其特征在于，所述的烟酸有关杂质的检测方法中的HPLC法的色谱条件如下：

色谱柱：L8氨基柱；

流动相：甲醇-水混合物，水和甲醇的体积比为80:20，用冰醋酸调pH至3.15±0.05；

柱温：35℃；

流速：1ml/min；

检测波长：258nm。

3.根据权利要求1所述的烟酸辛伐他汀片剂有关杂质的检测方法，其特征在于，所述的辛伐他汀有关杂质的检测方法中的HPLC法的色谱条件如下：

色谱柱：L1；

流动相：乙腈和磷酸盐缓冲液梯度混合物，乙腈和磷酸盐缓冲液体积比为(50-90)：(10-50)，用磷酸调pH值至3.00±0.05；

柱温：35℃；

流速：1.5mL/min；

检测波长：238nm。